JP2003529361A - ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様分子およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドおよびこれをコードする核酸分子を提供する。本発明はまた、ベクター、宿主細胞、アゴニストおよびアンタゴニスト（選択的結合因子（例えば、抗体）を含む）ならびにＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドを産生するための方法を提供する。本発明はさらに、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドに関連する疾患を処置、診断、改善、および／または予防するための方法もまた提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （関連出願） 本願は、２０００年１１月２７日に出願された米国特許出願第０９／７２３，
２５８号の一部継続であり、この出願は、２０００年３月３０日に出願された仮
出願第６０／１９３，７２８号の優先権を主張する。両方の出願は本明細書中で
参考として援用されている。

【０００２】 （発明の分野） 本発明は、新規なＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドおよびこれをコ
ードする核酸分子に関する。本発明はまた、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリ
ペプチドを産生するための、ベクター、宿主細胞、選択的結合因子および方法に
関する。ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドと関連する疾患の診断およ
び処置のための方法もまた提供される。

【０００３】 （発明の背景） 核酸分子の同定、クローニング、発現、および操作における技術的進歩は、ヒ
トゲノムの解読に基づいた新規の治療剤の発見を大きく加速した。現在では、高
速の核酸配列決定技術により、前例のない速度で配列情報が作製され得、そして
コンピュータ分析と結合されて、ゲノム全体へと重複する配列を集合させること
が可能であり、そしてポリペプチドコード領域の同定が可能である。既知アミノ
酸配列のデータベース編集物に対する推定アミノ酸配列の比較は、以前に同定さ
れた配列および／または構造の目印に対する相同性の程度を決定することを可能
にし得る。核酸分子のポリペプチドコード領域のクローニングおよび発現は、構
造分析および機能分析のためのポリペプチド産物を提供する。改変体およびその
誘導体を作製するための核酸分子およびコードされるポリペプチドの操作は、治
療剤として使用するために有利な特性を産物に付与し得る。

【０００４】 過去１０年間にわたるゲノム研究における著しい技術的進歩にも関わらず、ヒ
トゲノムに基づいた新規の治療剤の開発に対する可能性は、未だ広範には実現さ
れていない。潜在的に有利なポリペプチド治療剤をコードする多くの遺伝子また
はこれらがコードするポリペプチド（これらは、治療的分子に対して「標的」と
して機能し得る）は、依然として同定されていない。さらに、多くのヒト遺伝子
由来のポリペプチド産物の構造分析および機能分析が、未だ行われていない。

【０００５】 従って、診断的または治療的な利点を有する、新規なポリペプチドおよびこれ
らをコードする核酸分子を同定することが、本発明の目的である。

【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、新規のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様核酸分子およびコードされる
ポリペプチド関する。

【０００７】 本発明は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む単離された
核酸分子を提供する： （ａ）配列番号（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：）１または３のいずれかに記載のヌク
レオチド配列； （ｂ）配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプチドをコード
するヌクレオチド配列； （ｃ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で、（ａ）または（ｂ）
の相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列であって、ここでコードされる
ポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプチド
の活性を有する、ヌクレオチド配列；ならびに （ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかに対して相補的なヌクレオチド配列。

【０００８】 本発明はまた、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む単離さ
れた核酸分子を提供する： （ａ）配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプチドに対して
、少なくとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または
９９％同一であるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここで
このポリペプチドは、ＧＡＰ，ＢＬＡＳＴＰ，ＢＬＡＳＴＮ，ＦＡＳＴＡ，ＢＬ
ＡＳＴＡ，ＢＬＡＳＴＸ，ＢｅｓｔＦｉｔ，およびＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａ
ｎアルゴリズムからなる群から選択されるコンピュータープログラムを使用して
決定される場合に、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のコードされ
るポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｂ）配列番号１または３のいずれかに記載のヌクレオチド配列の対立遺伝子
改変体またはスプライス改変体をコードするヌクレオチド配列であって、ここで
コードされるポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載の
ポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基のポリペプチドフラグメントをコードす
る、配列番号１もしくは配列番号３、（ａ）または（ｂ）のヌクレオチド配列で
あって、ここでこのポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに
記載のポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｄ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む、配列番号１もし
くは配列番号３、または（ａ）〜（ｄ）のヌクレオチド配列； （ｅ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で、（ａ）〜（ｄ）のい
ずれかの相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列であって、ここでコード
されるポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペ
プチドの活性を有する、ヌクレオチド配列；ならびに （ｆ）（ａ）〜（ｅ）のいずれかに対して相補的なヌクレオチド配列。

【０００９】 本発明はさらに、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む単離
された核酸分子を提供する： （ａ）少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する、配列番号２または配列
番号４に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここでコ
ードされるポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポ
リペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する、配列番号２または配列番号４
に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここでコードさ
れるポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプ
チドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する、配列番号２または配列番号４
に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここでコードさ
れるポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプ
チドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｄ）Ｃ末端および／またはＮ末端の切断（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎ）を有する
、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列であって、ここでコードされるポリペプチドは、配列番号２また
は配列番号４のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配
列； （ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端切断およびＮ末端
切断からなる群から選択される少なくとも１つの改変を有する、配列番号２また
は配列番号４に記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、こ
こでこのポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のコー
ドされるポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｆ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む、（ａ）〜（ｅ）
のヌクレオチド配列； （ｇ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で、（ａ）〜（ｆ）のい
ずれかの相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列であって、ここでコード
されるポリペプチドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペ
プチドの活性を有する、ヌクレオチド配列；ならびに （ｈ）（ａ）〜（ｅ）のいずれかに対して相補的なヌクレオチド配列。

【００１０】 本発明はまた、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離された
ポリペプチドを提供する： （ａ）配列番号２または配列番号４のいずれかのオルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏ
ｇ）についてのアミノ酸配列であって、ここでこのポリペプチドは、配列番号２
または配列番号４に記載のポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｂ）配列番号２または配列番号４のいずれかのアミノ酸配列に対して、少な
くとも約７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８または９９％
同一であるアミノ酸配列であって、ここでこのポリペプチドは、ＧＡＰ，ＢＬＡ
ＳＴＰ，ＢＬＡＳＴＮ，ＦＡＳＴＡ，ＢＬＡＳＴＡ，ＢＬＡＳＴＸ，ＢｅｓｔＦ
ｉｔ，およびＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムからなる群から選択さ
れるコンピュータープログラムを使用して決定される場合に、配列番号２または
配列番号４のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基を含む、配列番号２または配列番号４の
いずれかに記載のアミノ酸配列のフラグメントであって、ここでこのポリペプチ
ドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有
する、アミノ酸配列のフラグメント； （ｄ）配列番号２もしくは配列番号４のいずれかに記載のアミノ酸配列、また
は（ａ）〜（ｂ）のうちの少なくとも１つのいずれかの対立遺伝子改変体または
スプライス改変体についてのアミノ酸配列であって、ここでこのポリペプチドは
、配列番号２または配列番号４に記載のポリペプチドの活性を有する、アミノ酸
配列。

【００１１】 本発明はさらに、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離され
たポリペプチドを提供する： （ａ）少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する、配列番号２または配列
番号４のいずれかに記載のアミノ酸配列であって、ここでこのポリペプチドは、
配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有する、
アミノ酸配列； （ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する、配列番号２または配列番号４
のいずれかに記載のアミノ酸配列であって、ここでこのポリペプチドは、配列番
号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有する、アミノ
酸配列； （ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する、配列番号２または配列番号４
のいずれかに記載のアミノ酸配列であって、ここでこのポリペプチドは、配列番
号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有する、アミノ
酸配列； （ｄ）Ｃ末端および／またはＮ末端の切断を有する、配列番号２または配列番
号４のいずれかに記載のアミノ酸配列であって、ここでこのポリペプチドは、配
列番号２または配列番号４に記載のポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列
；ならびに （ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端切断およびＮ末端
切断からなる群から選択される少なくとも１つの改変を有する、配列番号２また
は配列番号４のいずれかに記載のアミノ酸配列であって、ここでこのポリペプチ
ドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のポリペプチドの活性を有
する、アミノ酸配列。

【００１２】 また、前述の段落の上記（ａ）〜（ｅ）のポリペプチド配列を含む融合ポリペ
プチドも提供される。

【００１３】 本発明はまた、本明細書中に記載の単離された核酸分子を含む発現ベクター、
本明細書中に記載の組換え核酸分子を含む組換え宿主細胞、およびこの宿主細胞
を培養する工程ならびに必要に応じてそのようにして産生されたポリペプチドを
単離する工程を包含する、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドを産生す
る方法を提供する。

【００１４】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドをコードする核酸分子を含むトラ
ンスジェニック非ヒト動物もまた、本発明によって包含される。ＣＤ２０／Ｉｇ
Ｅレセプター様核酸分子は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの発現
およびレベルの増加（これは、循環レベルの増加を含み得る）を可能にする様式
で、動物中に導入される。トランスジェニック非ヒト動物は、好ましくは哺乳動
物である。

【００１５】 また、本発明のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの誘導体が提供さ
れる。

【００１６】 本発明において提供されるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアナ
ログは、配列番号２または４のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの保
存的および／非保存的アミノ酸置換から生じる。このようなアナログとして、例
えば、配列番号２または４の８６位のアミノ酸がグリシン、プロリン、またはア
ラニンであるか、配列番号２または４の９５位のアミノ酸が、フェニルアラニン
、ロイシン、バリン、イソロイシン、アラニン、またはチロシンであるか、配列
番号２または４の１２１位のアミノ酸がアスパラギンまたはグルタミンであるか
、配列番号２または４の１２８位のアミノ酸がアラニン、バリン、イソロイシン
、またはロイシンであるか、配列番号２または４の１０３位のアミノ酸が、イソ
ロイシン、ロイシン、バリン、メチオニン、アラニン、フェニルアラニン、また
はノルロイシンである、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドが挙げられ
る。

【００１７】 さらに、本発明のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドを特異的に結合
し得る選択的結合因子（例えば、抗体およびペプチド）が提供される。このよう
な抗体、ポリペプチド、ペプチドおよび低分子は、アゴニスト性またはアンタゴ
ニスト性であり得る。

【００１８】 さらに、本発明のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドを特異的に結合
し得る選択的結合因子（例えば、抗体およびペプチド）が提供される。このよう
な抗体、ポリペプチド、ペプチドおよび低分子は、アゴニスト性またはアンタゴ
ニスト性であり得る。

【００１９】 本発明のヌクレオチド、ポリペプチドまたは選択的結合因子、および１以上の
薬学的に受容可能な処方剤を含む薬学的組成物もまた、本発明によって包含され
る。この薬学的組成物は、本発明のヌクレオチドまたはポリペプチドの治療的有
効量を提供するように使用される。本発明はまた、このポリペプチド、核酸分子
、および選択的結合因子を使用する方法に関する。

【００２０】 本発明のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドおよび核酸分子を使用し
て、本明細書中に列挙された疾患および障害を含む疾患および障害を処置、予防
、改善、診断、および／または検出し得る。

【００２１】 本発明は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの異常なレベルによっ
て引き起こされるかまたは異常なレベルから生じる、被験体における病理学的状
態または病理学的状態に対する感受性の診断を包含し、これは、サンプル中のＣ
Ｄ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの発現の存在または量を検出する工程
；および、正常な被験体またはより以前の時期の被験体のいずれかに由来する生
物学的サンプル、組織サンプル、または細胞サンプルにおけるこのポリペプチド
のレベルを比較する工程を包含し、ここで病理学的状態に対する感受性は、この
ポリペプチドの発現の存在または量に基づく。

【００２２】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの発現を調節する方法およびレベ
ルを調整（すなわち、増加または減少）する方法もまた、本発明によって包含さ
れる。１つの方法は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドをコードする
核酸分子を動物に投与する工程を包含する。別の方法では、ＣＤ２０／ＩｇＥレ
セプター様ポリペプチドの発現を調節または調整するエレメントを含む核酸分子
が投与され得る。これらの方法の例としては、本明細書中にさらに記載されるよ
うな、遺伝子治療、細胞療法、およびアンチセンス療法が挙げられる。

【００２３】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドは、そのリガンドを同定するため
に用いられ得る。種々の形態の「発現クローニング」が、レセプターに対するリ
ガンドをクローニングするために用いられている。例えば、Ｄａｖｉｓ ｅｔ
ａｌ．，Ｃｅｌｌ，８７：１１６１−１１６９（１９９６）を参照のこと。これ
らおよび他のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様リガンドクローニング実験は、本明
細書中でより詳細に記載される。ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様リガンドの単離
は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様シグナル伝達経路の新規のアゴニストおよび
／またはアンタゴニストの同定または開発を可能にする。

【００２４】 本発明はさらに、生物学的サンプル、組織サンプル、または細胞サンプル中の
ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様核酸の存在を決定する方法を包含する。これらの
方法は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様核酸を含むと疑われる生物学的サンプル
を提供する工程；生物学的サンプルと本発明の診断試薬を、診断試薬がこの生物
学的サンプル中のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様核酸とハイブリダイズする条件
下で接触させる工程；生物学的サンプル中のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様核酸
と診断試薬との間のハイブリダイゼーションを検出する工程；および生物学的サ
ンプルと診断試薬との間のハイブリダイゼーションのレベルと、既知の濃度のＣ
Ｄ２０／ＩｇＥレセプター様核酸と診断試薬との間のハイブリダイゼーションの
レベルとを比較する工程を包含する。これらの方法により検出されるポリヌクレ
オチドは、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ＤＮＡまたは／およびＣＤ２０／Ｉｇ
Ｅレセプター様ＲＮＡであり得る。

【００２５】 本発明は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様生物学的活性のアゴニストまたはア
ンタゴニストを同定する方法を提供し、この方法は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプタ
ー様ポリペプチドと低分子化合物を接触させる工程、およびこれらの低分子の存
在および非存在下でＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様生物学的活性を測定する工程
を包含する。これらの低分子は、天然に存在する医薬化合物であり得るか、また
はコンビナトリアル化学ライブラリーに由来し得る。特定の実施形態において、
ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドアゴニストまたはアンタゴニストは
、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドと相互作用してその活性を調節す
るタンパク質、ペプチド、糖類、脂質、または低分子であり得る。

【００２６】 アゴニストまたはアンタゴニストとして、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリ
ペプチドに対するリガンド、可溶性ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド
、抗ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様選択的結合因子（例えば、抗体およびその誘
導体）、低分子、ペプチドおよびＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドに
結合し得るその誘導体、もしくはアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる
がこれらに限定されない（これらの中の任意のものが、１つ以上の疾患または障
害（本明細書中に開示されるものを含む）を処置するために用いられ得る）。

【００２７】 本発明はまた、患者での移植に適した膜；およびをその膜にカプセル化された
細胞を備えるデバイスを提供する（ここで、この細胞は、本発明のＣＤ２０／Ｉ
ｇＥレセプター様ポリペプチドを分泌し、この膜は、タンパク質産物に対して浸
透性であり、この細胞に有害な物質に対して不浸透性である）。本発明はさらに
、患者での移植に適した膜およびをその膜にカプセル化されたＣＤ２０／ＩｇＥ
レセプター様ポリペプチドを備えるデバイスを提供する（この膜はこのペプチド
に対して浸透性である）。

【００２８】 本発明は、固体支持体に取り付けられたＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリヌ
クレオチドを提供する。本発明はまた、少なくとも１つのＣＤ２０／ＩｇＥレセ
プター様ポリヌクレオチドを含むアレイを提供する。

【００２９】 （発明の詳細な説明） 本明細書中で使用される節の見出しは、構成上の目的のためのみであり、そし
てそこに記載される内容を限定するように解釈されるべきではない。本願におい
て列挙される全ての参考文献が、明確に、本明細書中に参考として援用される。

【００３０】 （定義） 用語「ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様遺伝子」または「ＣＤ２０／ＩＧＥレセ
プター様核酸分子」また「ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリヌクレオチド」と
は、配列番号１または配列番号３のいずれかに示されるヌクレオチド配列、配列
番号２または配列番号４のいずれかに示されるポリペプチドをコードするヌクレ
オチド配列、ＡＴＣＣ受託番号ＰＴＡ−１７４０（アメリカンタイプカルチャー
コレクション（ＡＴＣＣ）１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｌｖｄ．Ｍａ
ｎａｓｓａｓ ＶＡに２０００年４月１９日に寄託された）におけるＤＮＡイン
サートのヌクレオチド配列、および本明細書中で定義される核酸分子を含むかま
たはこれらからなる、核酸分子をいう。

【００３１】 用語「ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチド」とは、配列番号２または
配列番号４のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドおよび関連ポリペプチ
ドをいう。関連ポリペプチドとしては、以下が挙げられる：ＣＤ２０／ＩＧＥレ
セプター様ポリペプチド対立遺伝子改変体、ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリ
ペプチドオルソログ、ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチドスプライス改
変体、ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチド改変体、およびＣＤ２０／Ｉ
ＧＥレセプター様ポリペプチド誘導体であって。ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様
ポリペプチドは、本明細書中に定義されるように、成熟ポリペプチドであり得、
そして調製方法によっては、アミノ末端メチオニン残基を有しても有さなくても
よい。

【００３２】 用語「ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチド対立遺伝子改変体」とは、
生物または生物の集団の染色体上の所定の遺伝子座を占める遺伝子の、天然に存
在する可能ないくつかの代替形態のうちの１つをいう。

【００３３】 用語「ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチド誘導体」とは、化学的に改
変された、本明細書中に定義されるような、配列番号２または配列番号４のいず
れかに示されるポリペプチド、ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチド対立
遺伝子改変体、ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチドオルソログ、ＣＤ２
０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチドスプライス改変体またはＣＤ２０／ＩＧＥ
レセプター様ポリペプチド改変体をいう。

【００３４】 用語「ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドフラグメント」は、アミノ
末端での短縮（リーダー配列を有しても有しなくてもよい）および／または配列
番号２または４に示されるポリペプチド、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペ
プチド対立遺伝子改変体、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドオルソロ
グ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドスプライ
ス改変体、および／または配列番号２または４のいずれかに示されるＣＤ２０／
ＩｇＥレセプター様ポリペプチドアミノ酸配列と比較して１つ以上のアミノ酸付
加または置換もしくは内部欠失（ここで、得られるポリペプチドは、少なくとも
６個以上のアミノ酸長である）を含むＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチ
ド改変体のカルボキシ末端での短縮を含むポリペプチドをいう。ＣＤ２０／Ｉｇ
Ｅレセプター様ポリペプチドフラグメントは、オルタナティブＲＮＡスプライシ
ングまたはインビボプロテアーゼ活性から生じ得る。ＣＤ２０／ＩｇＥレセプタ
ー様ポリペプチドの膜貫通形態または膜結合形態について、好ましいフラグメン
トとして、膜貫通または膜結合ドメインを欠くような可溶性形態が挙げられる。
好ましい実施形態において、短縮は、約１０アミノ酸または約２０アミノ酸、ま
たは約５０アミノ酸、または約７５アミノ酸、または約１００アミノ酸、または
約１００より多いアミノ酸が挙げられる。このように生成されたポリペプチドフ
ラグメントは、約２５連続するアミノ酸、または約５０アミノ酸、または約７５
アミノ酸、または約１００アミノ酸、または約１５０アミノ酸、または約２００
アミノ酸を含む。このようなＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドフラグ
メントは、必要に応じてアミノ末端メチオニン残基を含み得る。このようなフラ
グメントは、例えば、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドに対する抗体
を作製するために用いられ得ることが理解される。

【００３５】 用語「ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様融合ポリペプチド」とは、本明細書中に
定義されるような、配列番号２または配列番号４のいずれかに示されるポリペプ
チド、ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチドフラグメント、ＣＤ２０／Ｉ
ＧＥレセプター様ポリペプチドオルソログ、ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリ
ペプチド改変体、またはＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチド誘導体の、
アミノ末端またはカルボキシル末端での１つ以上のアミノ酸（例えば、異種タン
パク質または異種ペプチド）の融合体をいう。用語「ＣＤ２０／ＩＧＥレセプタ
ー様融合ポリペプチド」とはまた、本明細書中に定義されるような、ＣＤ２０／
ＩＧＥレセプター様ポリペプチド対立遺伝子改変体またはＣＤ２０／ＩＧＥレセ
プター様ポリペプチドスプライス改変体によってコードされるポリペプチドのア
ミノ末端またはカルボキシル末端での、１つ以上のアミノ酸の融合体をいう。

【００３６】 用語「ＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチドオルソログ」とは、配列番
号２または配列番号４のいずれかに示されるＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリ
ペプチドアミノ酸配列に対応する、別の種由来のポリペプチドをいう。例えば、
マウスおよびヒトのＣＤ２０／ＩＧＥレセプター様ポリペプチドは、互いにオル
ソログであるとみなされる。

【００３７】 用語「ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドスプライス改変体」とは
、配列番号２または配列番号４のいずれかに示されるＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプ
ター様ポリペプチドアミノ酸配列のＲＮＡ転写物中のイントロン配列の選択的プ
ロセシングによって生成される、核酸分子（通常はＲＮＡ）をいう。

【００３８】 用語「ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド改変体」は、配列番号２
または配列番号４（リーダー配列を有するかまたは有さない）のいずれかに示さ
れるＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドアミノ酸配列と比較して、１
つ以上のアミノ酸配列の置換、欠失（例えば、内部欠失および／またはＣＤ２０
／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドフラグメント）、および／または付加（例
えば、内部付加および／またはＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様融合ポリペプチ
ド）を有するアミノ酸配列を含むＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド
をいう。改変体は、天然に存在する（例えば、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様
ポリペプチド対立遺伝子改変体、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド
オルソログ、およびＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドスプライス改
変体）か、または、人工的に構築され得る。このようなＣＤ２０／ＩｇＥ−レセ
プター様ポリペプチド改変体は、配列番号１または配列番号３のいずれかに示さ
れるＤＮＡ配列から変化するＤＮＡ配列を有する、対応する核酸分子から調製さ
れ得る。好ましい実施形態において、この改変体は、１〜３、または１〜５、ま
たは１〜１０、または１〜１５、または１〜２０、または１〜２５、または１〜
５０、または１〜７５、または１〜１００、または１００より多くのアミノ酸の
置換、挿入、付加、および／または欠失を有し、ここで、この置換は、保存的、
または非保存的、あるいはその任意の組み合わせであり得る。

【００３９】 用語「抗原」とは、選択的結合因子（例えば、抗体）により結合され得、そし
てさらに動物において使用されて、その抗原のエピトープに結合し得る抗体を産
生じ得る分子または分子の一部をいう。抗原は、１つ以上のエピトープを有し得
る。上記の特異的結合反応は、抗原が、高度に選択的な様式で、その対応する抗
体と反応し、そして他の抗原によって惹起され得る多数の他の抗体と反応しない
ことを示すことを意味する。

【００４０】 用語「生物学的に活性なＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド」とは
、配列番号２または配列番号４のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドに
特徴的な少なくとも１つの活性を有するＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペ
プチドをいう。一般に、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド、そのフ
ラグメント、改変体、および誘導体は、配列番号２または配列番号４に示される
ようなＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドに特徴的な少なくとも１つ
の活性を有する。さらに、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドは、免
疫原として活性であり得る；すなわち、このポリペプチドは、抗体が惹起され得
る少なくとも１つのエピトープを含む。

【００４１】 用語「有効量」および「治療有効量」は、各々、本明細書中に示されるＣＤ２
０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの１つ以上の生物学的活性の観察可能な
レベルを支持するために使用されるＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチ
ドまたはＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様核酸分子の量をいう。

【００４２】 用語「発現ベクター」は、宿主細胞における使用に適切であり、そして異種核
酸配列の発現を、指示および／または制御する核酸配列を含むベクターをいう。
発現としては、転写、翻訳、およびＲＮＡスプライシング（イントロンが存在す
る場合）のようなプロセスが挙げられるがこれらに限定されない。

【００４３】 用語「宿主細胞」を用いて、核酸配列で形質転換されたか、または形質転換さ
れ得、次いで目的の選択された遺伝子を発現し得る細胞をいう。この用語は、選
択された遺伝子が存在する限り、子孫が形態学または遺伝子構造において本来の
親と同一であろうとなかろうと、親細胞の子孫を含む。

【００４４】 用語「同一性」とは、当該分野で公知のように、配列の比較によって決定され
る、２つ以上のポリペプチド分子または２つ以上の核酸分子の配列間の関係をい
う。当該分野において、「同一性」はまた、場合に応じて、２つ以上のヌクレオ
チドまたは２つ以上のアミノ酸配列間の一致によって決定されるように、核酸分
子またはポリペプチド間の配列関連性の程度を意味する。「同一性」は、２つ以
上の配列のうち小さなものと、特定の数理的モデルまたはコンピュータープログ
ラム（すなわち、「アルゴリズム」）により取り扱われたギャップ整列（存在す
る場合）との間の一致の同一パーセントを評価する。

【００４５】 用語「類似性」は、概念に関するが、「同一性」とは対照的に、同一的一致お
よび保存的置換の一致の両方を含む類似性の基準をいう。２つのポリペプチド配
列が、例えば１０／２０個同一のアミノ酸を有し、そして残りが全て非保存的置
換である場合、パーセント同一性および類似性は、どちらも５０％である。同じ
例において、保存的置換であるさらに５つの位置が存在する場合、パーセント同
一性は５０％のままであるが、パーセント類似性は７５％（１５／２０）である
。したがって、保存的置換が存在する場合、２つのポリペプチド間の類似性の程
度は、これらの２つのポリペプチド間のパーセント同一性よりも高い。

【００４６】 用語「単離された核酸分子」とは、（１）総ＤＮＡが供給源細胞から単離され
る場合に、これが天然で一緒に見出されるタンパク質、脂質、炭水化物、または
他の物質の少なくとも約５０パーセントから分離された本発明の核酸分子、（２
）「単離された核酸分子」が天然で連結しているポリヌクレオチドの全てまたは
一部に連結していない本発明の核酸分子、（３）天然では連結しないポリヌクレ
オチドに作動可能に連結した本発明の核酸分子、または（４）より大きなポリヌ
クレオチド配列の一部として天然には存在しない本発明の核酸分子、をいう。好
ましくは、本発明の単離された核酸分子は、それが天然に関連する少なくとも１
つの混入核酸分子を実質的に含まない。好ましくは、本発明の単離された核酸分
子は、任意の他の混入核酸分子、または天然の環境において見出される他の混入
物（これらは、ポリペプチド産生におけるその使用、またはその治療的使用、診
断的使用、予防的使用、または研究的使用を妨げる）を実質的に含まない。

【００４７】 用語「単離されたポリペプチド」とは、（１）供給源細胞から単離される場合
に、天然で一緒に見出されるポリヌクレオチド、脂質、炭水化物、または他の物
質の少なくとも約５０％から単離された本発明のポリペプチド、（２）「単離さ
れたポリペプチド」が天然で連結するポリペプチドの全てまたは一部に連結しな
い（共有結合的または非共有結合的相互作用によって）、本発明のポリペプチド
、（３）天然には連結しないポリペプチドに作動可能に連結（共有結合的または
非共有結合的相互作用によって）する、本発明のポリペプチド、または（４）天
然には存在しない本発明のポリペプチドをいう。好ましくは、この単離されたポ
リペプチドは、任意の他の混入ポリペプチドまたは天然の環境において見出され
る他の混入物を実質的に含まない。好ましくは、単離されたポリペプチドは、そ
の治療的用途、診断用途、予防用途または研究用途と干渉する、その天然の環境
において見出される任意の他の混入ポリペプチドまたは他の混入物が、実質的に
ない。

【００４８】 用語「成熟ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド」は、リーダー配列
を欠失したＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドをいう。成熟ＣＤ２０
／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドはまた、他の改変（例えば、アミノ末端（
リーダー配列を有するかまたは有さない）および／またはカルボキシル末端のタ
ンパク質分解性プロセシング、より大きな前駆体からのより小さなポリペプチド
の切断、Ｎ結合型および／またはＯ結合型グリコシル化など）を含み得る。

【００４９】 用語「核酸配列」または「核酸分子」は、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列をいう。こ
の用語は、ＤＮＡおよびＲＮＡの公知の塩基アナログのいずれかから形成される
分子を含み、例えば、以下であるがこれらに限定されない：４−アセチルシトシ
ン、８−ヒドロキシ−Ｎ６−メチルアデノシン、アジリジニル−シトシン、プソ
イドイソシトシン（ｐｓｅｕｄｏｉｓｏｃｙｔｏｓｉｎｅ）、５−（カルボキシ
ヒドロキシルメチル）ウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、
５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル、５−カルボキシメチル
アミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、イノシン、Ｎ６−イソ−ペンテニル
アデニン、１−メチルアデニン、１−メチルプソイドウラシル、１−メチルグア
ニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、
２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−メチル
アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキ
シアミノ−メチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン（β−
Ｄ−ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’−メトキシカルボニル−メチル
ウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデ
ニン、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、
オキシブトキソシン、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、５
−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチ
ルウラシル、Ｎ−ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オ
キシ酢酸、プソイドウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、および２，６
−ジアミノプリン。

【００５０】 用語「天然に存在する」または「ネイティブの」は、核酸分子、ポリペプチド
、宿主細胞などのような生物学的物質と関連して使用される場合、天然において
見出され、そしてヒトによって操作されていない物質をいう。同様に、「天然に
存在しない」または「ネイティブではない」は、本明細書中で使用される場合、
天然で見出されないか、またはヒトによって構造的に改変もしくは合成された物
質をいう。

【００５１】 用語「作動可能に連結された」を用いて、本明細書中では、隣接配列の配置を
いい、ここで、このように記載される隣接配列は、その通常の機能を行うように
構成または構築される。従って、コード配列に作動可能に連結した隣接配列は、
このコード配列の複製、転写および／または翻訳を行うことが可能であり得る。
例えば、コード配列は、このプロモーターがコード配列の転写を指示し得る場合
に、プロモーターに作動可能に連結されている。隣接配列は、これが正確に機能
する限り、コード配列と連続する必要はない。したがって、例えば、介在する非
翻訳性であるが転写される配列が、プロモーター配列とコード配列との間に存在
し得、そしてこのプロモーター配列は、なおこのコード配列に「作動可能に連結
」されているとみなされ得る。

【００５２】 用語「薬学的に受容可能なキャリア」または「生理学的に受容可能なキャリア
」は、本明細書中で使用される場合、薬学的組成物としてのＣＤ２０／ＩｇＥ−
レセプター様ポリペプチド、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様核酸分子、または
ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様選択的結合因子の送達の達成または増強に適切
な１つ以上の処方物質をいう。

【００５３】 用語「選択的結合因子」とは、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド
に特異性を有する分子（単数または複数）をいう。選択的結合因子としては、公
知の技術（酵素切断、ペプチド合成または組換え技術を含むが、これらに限定さ
れない）によって提供されるポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ
）、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、可溶性形態または結合形態で標識され得る抗
体に対する抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体のような抗体、ならびにそのフラグ
メント、領域、または誘導体が挙げられる。本発明のＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプ
ター様選択的結合因子は、例えば、ＣＤ２０／ＩｇＥ様レセプターの一部を結合
し得る。

【００５４】 本明細書中で使用される場合、用語「特異的」および「特異性」とは、選択的
結合因子の、ヒトＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドに結合し、かつ
ヒトの非ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドに結合しない能力をいう
。しかし、選択的結合因子がまた、配列番号２または配列番号４のいずれかに記
載されるようなポリペプチドのオルソログ（すなわち、その種間変形（例えば、
マウスポリペプチドおよびラットポリペプチド））に結合し得ることが、理解さ
れる。

【００５５】 ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド、フラグメント、改変体、およ
び誘導体を使用して、当該分野で公知の方法を用いてＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプ
ター様選択的結合因子を調製し得る。従って、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様
ポリペプチドを結合する抗体および抗体フラグメントは、本発明の範囲内である
。抗体フラグメントは、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドのエピト
ープに結合する抗体のこれらの部分を含む。このようなフラグメントの例として
は、全長抗体の酵素切断によって産生されたＦａｂおよびＦ（ａｂ’）フラグメ
ントが挙げられる。他の結合フラグメントとしては、組換えＤＮＡ技術（例えば
、抗体可変領域をコードする核酸配列を含む組換えプラスミドの発現）によって
産生されるフラグメントが挙げられる。これらの抗体は、例えば、ポリクローナ
ル単一特異的抗体、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、組換え抗体、キ
メラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、単鎖抗体、および/または二重特異的抗体で
あり得る。

【００５６】 用語「形質導入」は、１つの細菌から別のものへの（通常、ファージによる）
遺伝子の移入をいうために使用される。「形質導入」はまた、レトロウイルスに
よる真核生物細胞の配列の獲得および移入をいう。

【００５７】 用語「トランスフェクション」は、細胞による外来ＤＮＡまたは外因性ＤＮＡ
の取り込みをいうために使用される。そして、細胞は、その外因性ＤＮＡが細胞
膜の内側に導入されている場合、「トランスフェクト」されている。多数のトラ
ンスフェクション技術が、当該分野で周知であり、そして、本明細書中に開示さ
れる。例えば、Ｇｒａｈａｍら、１９７３，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ５２：４５６（
１９７３）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９）；Ｄａｖｉｓら、
Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｅ
ｌｓｅｖｉｅｒ，１９８６）；およびＣｈｕら、Ｇｅｎｅ １３：１９７（１９
８１）を参照のこと。このような技術は、１つ以上の外因性ＤＮＡ部分を適切な
宿主細胞に導入するために使用され得る。

【００５８】 用語「形質転換」は、本明細書中に使用される場合、細胞の遺伝特徴における
変化をいい、そして細胞は、新しいＤＮＡを含むように改変されている場合、形
質転換されている。例えば、細胞は、そのネイティブな状態から遺伝的に改変さ
れた場合、形質転換されている。トランスフェクションおよび形質導入に続いて
、その形質転換ＤＮＡは、細胞の染色体へ物理的に組み込むことによってその細
胞のＤＮＡと組み換わり得るか、複製されないエピソームエレメントとして一過
性に維持され得るか、またはプラスミドとして独立して複製し得る。細胞は、そ
のＤＮＡが細胞の分裂と共に複製される場合、安定に形質転換されているとみな
される。

【００５９】 用語「ベクター」は、宿主細胞にコード情報を移すために使用される任意の分
子（例えば、核酸、プラスミド、またはウイルス）をいうために使用される。

【００６０】 （核酸分子および／またはポリペプチドの関連性） 関連した核酸分子が、配列番号１または配列番号３のいずれかの核酸分子の対
立遺伝子改変体またはスプライス改変体を包含すること、および上記のヌクレオ
チド配列のいずれかに相補的である配列を包含することが理解される。関連した
核酸分子はまた、配列番号２または配列番号４のいずれかにおけるポリペプチド
と比較して１以上のアミノ酸残基の置換、改変、付加および／もしくは欠失を含
むかまたは本質的にこれからなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を
包含する。

【００６１】 フラグメントは、配列番号２または配列番号４のいずれかのポリペプチドの少
なくとも約２５個連続したアミノ酸、または少なくとも約５０個のアミノ酸、ま
たは少なくとも約７５個のアミノ酸、または少なくとも約１００個のアミノ酸、
または少なくとも約１００個のアミノ酸のポリペプチドをコードする分子を包含
する。

【００６２】 さらに、関連したＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様核酸分子はまた、本明細書
中で定義したとおりの中程度または高度にストリンジェントな条件下で、配列番
号１、もしくは配列番号３のいずれかの核酸分子またはポリペプチドをコードす
る分子の十分に相補的な配列とハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む分子
を包含し、このポリペプチドは、配列番号２もしくは配列番号４、または本明細
書中に定義したとおりの核酸フラグメント、または本明細書中に定義したとおり
のポリペプチドをコードする核酸フラグメントのいずれかに示されるアミノ酸配
列を含む。ハイブリダイゼーションプローブは、本明細書中に提供されるＣＤ２
０／ＩｇＥ−レセプター様配列を用いてｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリーま
たは合成ＤＮＡライブラリーを関連した配列についてスクリーニングして調製さ
れ得る。ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドのＤＮＡ配列および／ま
たはアミノ酸配列のうちの、既知配列に対して顕著な同一性を示す領域は、本明
細書中に記載されるとおりの配列アラインメントアルゴリズムを用いて容易に決
定され、そしてこれらの領域を用いて、スクリーニングのためのプローブを設計
し得る。

【００６３】 用語「高度にストリンジェントな条件」とは、配列が非常に相補的であるＤＮ
Ａ鎖のハイブリダイゼーションを許容し、かつ顕著に不一致のＤＮＡのハイブリ
ダイゼーションを排除するように設計された条件をいう。ハイブリダイゼーショ
ンのストリンジェンシーは、温度、イオン強度および変性剤（例えば、ホルムア
ミド）の濃度によって主に決定される。ハイブリダイゼーションおよび洗浄につ
いての「高度にストリンジェントな条件」の例は、６５〜６８℃での０．０１５
Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウムまたは４２℃での０．０
１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウムおよび５０％ホルム
アミドである。Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ，Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
（第２版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．１９８９）；Ａｎｄｅｒｓｏｎ
ら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｓａｔｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔ
ｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ 第４章（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（
Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ））を参照のこと。

【００６４】 よりストリンジェントな条件（例えば、より高い温度、より低いイオン強度、
より高いホルムアミドまたは他の変性剤）もまた用いられ得るが、ハイブリダイ
ゼーションの割合が影響される。他の薬剤は、非特異的および／またはバックグ
ラウンドのハイブリダイゼーションを減少させる目的のために、ハイブリダイゼ
ーションおよび洗浄の緩衝液中に含まれ得る。例は、０．１％ウシ血清アルブミ
ン、０．１％ポリビニルピロリドン、０．１％ピロリン酸ナトリウム、０．１％
ドデシル硫酸ナトリウム（ＮａＤｏｄＳＯ_４またはＳＤＳ）、ｆｉｃｏｌｌ、デ
ンハルト溶液、超音波処理サケ精子ＤＮＡ（または別の非相補的ＤＮＡ）および
硫酸デキストランであるが、他の適切な薬剤もまた用いられ得る。これらの添加
剤の濃度および種類は、ハイブリダイゼーション条件のストリンジェンシーに実
質的に影響を与えることなく変更され得る。ハイブリダイゼーション実験は通常
、ｐＨ６．８〜７．４で実施される；しかし、代表的なイオン強度の条件では、
ハイブリダイゼーションの割合は、ｐＨからほぼ独立する。Ａｎｄｅｒｓｏｎら
，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｓａｔｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉ
ｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ 第４章（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ（Ｏ
ｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ））を参照のこと。

【００６５】 ＤＮＡ二重鎖の安定性に影響を与える因子としては、塩基組成、長さおよび塩
基対の不一致程度が挙げられる。ハイブリダイゼーション条件は、これらの変動
要因を適応させ、そして異なる配列関連性のＤＮＡがハイブリッドを形成するの
を可能にするために当業者によって調整され得る。完全に一致したＤＮＡ二重鎖
の融解温度は、以下の方程式によって評価され得る： Ｔ_ｍ（℃）＝８１．５＋１６．６（ｌｏｇ［Ｎａ＋］）＋０．４１（Ｇ＋Ｃ％
）−６００／Ｎ−０．７２（ホルムアミド％） ここで、Ｎは、形成される二重鎖の長さであり、［Ｎａ＋］は、ハイブリダイゼ
ーション溶液または洗浄溶液中でのナトリウムイオンのモル濃度であり、Ｇ＋Ｃ
％は、ハイブリッド中での（グアニン＋シトシン）塩基の百分率である。不完全
に一致したハイブリッドについては、融解温度は、１％の不一致毎に約１℃下げ
られる。

【００６６】 用語「中程度にストリンジェントな条件」とは、「高度にストリンジェントな
条件」下で生じ得るよりも高い程度の塩基対不一致を有するＤＮＡ二重鎖が形成
され得る条件をいう。代表的な「中程度にストリンジェントな条件」の例は、５
０〜６５℃での０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン酸ナトリウ
ムまたは３７〜５０℃での０．０１５Ｍ塩化ナトリウム、０．００１５Ｍクエン
酸ナトリウムおよび２０％ホルムアミドである。例示として、０．０１５Ｍナト
リウムイオン中での５０℃という「中程度にストリンジェントな条件」は、約２
１％の不一致を可能にする。

【００６７】 「高度に」ストリンジェントな条件と「中程度に」ストリンジェントな条件と
の間に絶対的な区別が存在しないことが当業者によって認識される。例えば、０
．０１５Ｍナトリウムイオン（ホルムアミドなし）では、完全に一致した長さの
ＤＮＡの融解温度は、約７１℃である。６５℃で（同じイオン強度で）の洗浄を
用いると、このことは、約６％の不一致を可能にする。より遠く関連した配列を
捕獲するために、当業者は、単純に、温度を低くし得るかまたはイオン強度を高
くし得る。

【００６８】 約２０ｎｔまでのオリゴヌクレオチドプローブについての１Ｍ ＮａＣｌ^＊中
での融解温度の良好な推定は、以下によって与えられる： Ｔｍ＝Ａ−Ｔ塩基対あたり２℃ ＋ Ｇ−Ｃ塩基対あたり４℃^＊ ６×クエン酸ナトリウム塩（ＳＳＣ）中でのナトリウムイオン濃度は、１Ｍで
ある。Ｓｕｇｇｓら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｕｓｉｎ
ｇ Ｐｕｒｉｆｉｅｄ Ｇｅｎｅｓ ６８３頁（ＢｒｏｗｎおよびＦｏｘ編，１
９８１）を参照のこと。

【００６９】 オリゴヌクレオチドについての高度ストリンジェンシー洗浄条件は通常、６×
ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳ中でのそのオリゴヌクレオチドのＴｍよりも０℃〜５
℃低い温度においてである。

【００７０】 別の実施形態では、関連した核酸分子は、配列番号１もしくは配列番号３のい
ずれかに示されるとおりのヌクレオチド配列に対して約７０パーセント同一であ
るヌクレオチド配列を含むかもしくはこれからなるか、または配列番号２もしく
は配列番号４のいずれかに示すとおりのポリペプチドに対して約７０パーセント
同一であるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むかもしくは本質的
にこれからなる。好ましい実施形態では、ヌクレオチド配列は、配列番号１もし
くは配列番号３のいずれかに示されるとおりのヌクレオチド配列に対して約７５
パーセント、もしくは約８０パーセント、もしくは約８５パーセント、もしくは
約９０パーセント、もしくは約９５、９６、９７、９８、もしくは９９パーセン
ト同一であるか、またはヌクレオチド配列は、配列番号２、もしくは配列番号４
のいずれかに示されるとおりのポリペプチド配列に対して約７５パーセント、も
しくは約８０パーセント、もしくは約８５パーセント、もしくは約９０パーセン
ト、もしくは約９５、９６、９７、９８、もしくは９９パーセント同一であるポ
リペプチドをコードする。

【００７１】 核酸配列における相違は、配列番号２または配列番号４のいずれかのアミノ酸
配列と比較して、アミノ酸配列の保存的および／または非保存的改変をもたらし
得る。

【００７２】 配列番号２または配列番号４のいずれかのアミノ酸配列に対する保存的改変（
およびコードするヌクレオチドに対する、対応する改変）は、天然に存在するＣ
Ｄ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの機能的特徴および化学的特徴と類
似の機能的特徴および化学的特徴を有するＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリ
ペプチドを生じる。対照的に、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの
機能的特徴および／または化学的特徴における実質的な改変は、以下を維持する
ことに対するその影響が顕著に異なる、配列番号２または配列番号４のいずれか
のアミノ酸配列における置換を選択することによって達成され得る：（ａ）例え
ば、シートコンホメーションもしくはヘリックスコンホメーションのような、置
換領域における分子骨格の構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性
、または（ｃ）側鎖のかさ。

【００７３】 例えば、「保存的アミノ酸置換」は、その位置でのアミノ酸残基の極性にも電
荷にもほとんど影響がないかまたは全く影響がないような、非ネイティブ残基に
よるネイティブなアミノ酸残基の置換を含み得る。さらに、ポリペプチド中の任
意のネイティブな残基はまた、「アラニンスキャニング変異誘発」について以前
に記載されたように、アラニンによって置換され得る。

【００７４】 保存的アミノ酸置換はまた、生物学的系における合成によるよりむしろ、化学
的なペプチド合成によって代表的に組み込まれる、天然には存在しないアミノ酸
残基を含む。これらとしては、ペプチド模倣物、およびアミノ酸部分の他の逆転
形態または反転形態が挙げられる。本明細書中に記載される核酸分子およびポリ
ヌクレオチド分子は、化学的に合成され得、そして組換え手段によって産生され
得ることが当業者によって理解される。

【００７５】 天然に存在する残基は、共通の側鎖の特性に基づいてグループに分けられ得る
： １）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ； ２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ； ３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ； ４）塩基性：Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ； ５）鎖の方向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および ６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

【００７６】 例えば、非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーの、別のク
ラス由来のメンバーへの交換を含み得る。このような置換された残基は、非ヒト
ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドオルソログと相同性であるヒトＣＤ
２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの領域、またはこの分子の非相同性領域
に導入され得る。

【００７７】 このような変更を作製する場合、アミノ酸の疎水性親水性指標（ｈｙｄｒｏｐ
ａｔｈｉｃ ｉｎｄｅｘ）が、考慮され得る。各アミノ酸は、その疎水性特徴お
よび荷電特徴に基づいて疎水性親水性指標が割り当てられる。これらは、イソロ
イシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルア
ラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．
９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）
；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；
プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；
グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．
５）；リジン（−３．９）およびアルギニン（−４．５）である。

【００７８】 タンパク質に相互作用的な生物学的機能を与える疎水性親水性アミノ酸指標の
重要性は、当該分野で理解される。Ｋｙｔｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５
７：１０５−１３１，１９８２。特定のアミノ酸が、類似した疎水性親水性の指
標またはスコアを有する他のアミノ酸に置換され得、そしてなお、類似した生物
学的活性を保持するということは公知である。疎水性親水性指標に基づいて変更
を作製する際、疎水性親水性指標が±２内であるアミノ酸の置換が好ましく、疎
水性親水性指標が±１内であるアミノ酸の置換が特に好ましく、そして疎水性親
水性指標が±０．５内であるアミノ酸置換がなおより特に好ましい。

【００７９】 このようなアミノ酸の置換が親水性に基づいて効果的になされ得ること、特に
、それによって作製される生物学的に機能的に等価なタンパク質またはペプチド
が本発明における場合と同様に免疫学的な実施形態において使用されることが意
図される場合になされることもまた、当該分野で理解される。タンパク質の最も
大きな局所平均親水性は、隣接アミノ酸の親水性によって支配される場合、その
免疫原性および抗原性（すなわち、そのタンパク質の生物学的特性）と相関する
。

【００８０】 以下の親水性値は、これらのアミノ酸残基に対して割りあてられる：アルギニ
ン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グル
タミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；
グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン
（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイ
ン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−
１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニ
ン（−２．５）；トリプトファン（−３．４）。類似した親水性値に基づいて変
更を作製する際、親水性値が±２内であるアミノ酸の置換が好ましく、親水性値
が±１内であるアミノ酸の置換が特に好ましく、そして親水性値が±０．５内で
あるアミノ酸置換がなおより特に好ましい。当業者はまた、親水性に基づいて、
一次アミノ酸配列からエピトープを同定し得る。これらの領域はまた、「エピト
ープコア領域」ともいわれる。

【００８１】 所望のアミノ酸置換（保存的または非保存的にかかわらず）は、そのような置
換が所望されるときに当業者によって決定され得る。例えば、アミノ酸置換は、
ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの重要な残基を決定するために使用
され得るか、または本明細書中に記載されるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリ
ペプチドの親和性を増加もしくは減少させるために使用され得る。

【００８２】 例示的なアミノ酸置換を、表Ｉに示す。

【００８３】

【表１】 当業者は、周知技術を用いて配列番号２または配列番号４のいずれかに示され
るポリペプチドの適切な改変体を決定し得る。例えば、生物学的活性を崩壊させ
ることなく変化され得る分子の適切な領域を予想し得る。当業者はまた、たとえ
比較的保存された領域においても、活性を維持しながら天然に存在する残基を化
学的に類似したアミノ酸で代用し得る（保存的アミノ酸残基置換）ことを理解す
る。従って、生物学的活性または構造に対して重要であり得る領域でさえ、生物
学的活性を崩壊させることなく、またはポリペプチド構造に逆の影響を与えるこ
となく、保存的アミノ酸置換に供され得る。

【００８４】 例えば、同じ種由来または他の種由来の、類似した活性を有する類似したポリ
ペプチドが既知の場合、当業者は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド
のアミノ酸配列をそのような類似したポリペプチドと比較し得る。そのような比
較を用いて、当業者は、類似したポリペプチドの間で保存されているその分子の
残基および部分を同定し得る。そのような類似したポリペプチドに対して保存さ
れていないＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの領域における変化は、
ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの生物学的活性および／または構造
に逆の影響をおそらくほとんど与えないことが理解される。当業者はまた、たと
え比較的保存された領域においても、活性を維持しながら天然に存在する残基を
化学的に類似したアミノ酸で代用し得る（保存的アミノ酸残基置換）ことを理解
する。従って、生物学的活性または構造に対して重要であり得る領域でさえ、生
物学的活性を崩壊させることなく、またはポリペプチド構造に逆の影響を与える
ことなく、保存的アミノ酸置換に供され得る。

【００８５】 活性を破壊することなく変化され得る分子の適切な領域を予測するために、当
業者は、活性に重要であると考えられる領域を標的とし得る。例えば、同じ種ま
たは他の種由来の類似の活性を有する類似のポリペプチドが公知である場合、当
業者は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアミノ酸配列をそのよう
な類似のポリペプチドと比較し得る。このような比較を行った後、当業者は、類
似のポリペプチド間で保存される分子の残基および部分を決定し得る。当業者は
、保存されないＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様分子の領域での変化が生物学的活
性および／または構造に不利に影響しそうにないことを知っている。当業者はま
た、比較的保存された領域においてさえ、活性を保持するしつつ、天然に存在す
る残基に代わって化学的に類似するアミノ酸でおそらく置換し得る（例えば、保
存的アミノ酸残基置換）。

【００８６】 さらに、活性または構造に重要である類似したポリペプチドにおける残基を同
定する、構造−機能研究を当業者は、再検討し得る。そのような比較を考慮して
、当業者は、類似したポリペプチドにおいて活性もしくは構造に重要であるアミ
ノ酸残基に対応する、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドにおけるアミ
ノ酸残基の重要性を予測し得る。当業者は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリ
ペプチドのそのような予測された重要なアミノ酸残基に関して、化学的に類似し
たアミノ酸置換を選択し得る。

【００８７】 当業者はまた、類似したポリペプチドにおける三次元構造に関連して、三次元
構造およびアミノ酸配列を分析し得る。そのような情報を考慮して、当業者は、
三次元構造についてＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアミノ酸残基
のアラインメントを推測し得る。当業者は、タンパク質の表面上であると推測さ
れるアミノ酸残基に対して急激な変更を作製しないように選択し得る。なぜなら
、そのような残基は、他の分子との重要な相互作用に関与し得るからである。さ
らに、当業者は、各所望のアミノ酸残基において単一アミノ酸置換を含む試験改
変体を作製し得る。次いで、この改変体は、当業者に公知の活性アッセイを用い
てスクリーニングされ得る。そのような改変体を使用して、適切な改変体に関す
る情報を集め得る。例えば、当業者は、特定のアミノ酸残基に対する変更が、崩
壊された活性、不適当に減少された活性、または不適切な活性を生じることを発
見した場合、そのような変更を有する改変体は、回避される。言い換えると、そ
のような慣用的な実験から集められた情報に基づいて、当業者は、さらなる置換
が単独または他の変異と組み合わせてかのいずれかで回避されるべきであるアミ
ノ酸を、容易に決定し得る。

【００８８】 多数の科学刊行物が、二次構造の推測に向けられている。Ｍｏｕｌｔ Ｊ．、
Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．、７（４）：４２２−４２７、１９９
６、Ｃｈｏｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１３（２）：２２２−２４５、１
９７４；Ｃｈｏｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１１３（２）：２１１−２２
２、１９７４；Ｃｈｏｕら、Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ
Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４７：４５−１４８，１９７８；Ｃｈｏｕら、Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、４７：２５１−２７６およびＣｈｏｕら、Ｂｉｏｐ
ｈｙｓ．Ｊ．、２６：３６７−３８４、１９７９を参照のこと）。さらに、コン
ピュータープログラムが、現在利用可能であり、タンパク質の抗原部位およびエ
ピトープの中心領域の予測によって補助する。例として、Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏ
ｌｆｅ分析に基づくプログラム（Ｊａｍｅｓｏｎら、Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．
Ｂｉｏｓｃｉ．、４（１）：１８１−１８６（１９８８）およびＷｏｌｆｅら、
Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．、４（１）：１８７−１９１（１９８
８）、ＰｅｐＰｌｏｔ（登録商標）プログラム（Ｂｒｕｔｌａｇら、ＣＡＢＳ
６：２３７−２４５（１９９０）、およびＷｅｉｎｂｅｒｇｅｒら、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２２８：７４０−７４２（１９８５）、およびタンパク質の３次構造の予
測のための他の新しいプログラム（Ｆｅｔｒｏｗら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ、１１：４７９−４８３）が含まれる。

【００８９】 さらに、コンピュータープログラムが、現在利用可能であり、二次構造の予測
によって補助する。二次構造を推測する１つの方法は、相同性モデリングに基づ
く。例えば、３０％よりも大きい配列同一性、または４０％よりも大きい配列類
似性を有する２つのポリペプチドまたはタンパク質は、しばしば、類似した構造
トポロジーを有する。タンパク質構造データベース（ＰＤＢ）の近年の成長によ
り、二次構造の推測可能性（ポリペプチド構造またはタンパク質構造内の潜在的
な折り畳みの数を含む）の促進がもたらされた。Ｈｏｌｍら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉ
ｄ．Ｒｅｓ．、２７（１）：２４４−２４７，１９９９を参照のこと。所定のポ
リペプチドもしくはタンパク質における限定された数の折り畳みが存在すること
、および一旦構造の臨界の数が決定されると、構造予測が劇的により正確になる
こと、が示唆されている（Ｂｒｅｎｎｅｒら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．
Ｂｉｏｌ．、７（３）３６９−３７６、１９９７）。

【００９０】 二次構造を予測するさらなる方法としては、「スレッディング（ｔｈｒｅａｄ
ｉｎｇ）」（Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ
．、７（３）：３７７−８７、１９９７；Ｓｉｐｐｌら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、
４（１）：１５−９、１９９６）、「プロフィール分析」（Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ．２５３：１６４−１７０、１９９１；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら、Ｍｅｔ
ｈ．Ｅｎｚｙｍ．、１８３：１４６−１５９、１９９０；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら、
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８４（１３）４３５５−４３５８、１
９８７）、および「進化的連鎖（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ｌｉｎｋａｇｅ）
」（Ｈｏｍｅ、前出、およびＢｒｅｎｎｅｒ、前出を参照のこと）が、挙げられ
る。

【００９１】 本発明のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドアナログは、ＣＤ２０／
ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアミノ酸配列を関連ファミリーのメンバーと
比較することにより決定され得る。例示的ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペ
プチド関連ファミリーのメンバーとしては、ヒトＴＭ_４、ヒトＩｇＥＲｂ、ＨＵ
Ｒｐ４、ＩｇＥＲβ、ＨＴＰＥＦ８６、ヒトＣＤ２０、ＨＴＭ４ＳＦ５およびＨ
ＴＡＬ６が挙げられる。この比較は、Ｐｉｌｅｕｐ整列（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ
ＧＣＧ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｐａｃｋａｇｅ）を使用すること、または保存領域お
よび非保存領域内での複数のファミリーメンバーとの等価（重複）比較を使用す
ることによって、達成され得る。

【００９２】 図３に示されるように、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの推定ア
ミノ酸配列（配列番号２および４）は、既知のヒトＣＤ２０／ＩｇＥレセプター
ファミリーメンバーと整列される。他のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプ
チドアナログは、これらの方法もしくは当業者に公知の他の方法を使用して決定
され得る。これらの重複配列は、さらなるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様アナロ
グを生じる保存的アミノ酸置換および非保存的アミノ酸置換についての指針を提
供する。これらのアミノ酸置換は、天然に存在するアミノ酸からなってもよいし
、もしくは天然に存在しないアミノ酸からなってもよいことが、理解される。例
えば、可能性のあるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様アナログは、配列番号２また
は４の位置８６におけるＧｌｙ残基がＰｒｏまたはＡｌａ残基に置換され、配列
番号２または４の位置９５におけるＰｈｅ残基がＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｌ
ａ、またはＴｙｒ残基に置換され、そして／または配列番号２または４の位置１
０３におけるＩｌｅ残基がＬｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｐｈｅまたはノル
ロイシンに置換されていてもよい。さらに可能性のあるＣＤ２０／ＩｇＥレセプ
ター様アナログは、配列番号２または４の位置１２１におけるＡｓｎ残基がＧｌ
ｎ残基に置換され、そして／または配列番号２または４の位置１２８におけるＡ
ｌａ残基がＶａｌに置換されていてもよい。ＬｅｕまたはＩｌｅは、残基である
。

【００９３】 好ましいＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド改変体としては、グリコ
シル化部位の数および／または型が配列番号２、または配列番号４のいずれかに
記載のアミノ酸配列と比較して変化している、グリコシル化改変体が挙げられる
。１つの実施形態において、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド改変体
は、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のアミノ酸配列より多いかま
たはより少ない数のＮ連結グリコシル化部位を含む。Ｎ連結グリコシル化部位は
、配列Ａｓｎ−Ｘ−ＳｅｒまたはＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒによって特徴付けられ、こ
こで、Ｘと印されるアミノ酸残基は、プロリン以外の任意のアミノ酸残基であり
得る。この配列を作製するためのアミノ酸残基の置換は、Ｎ連結炭水化物鎖の付
加のための潜在的な新たな部位を提供する。あるいは、この配列を排除する置換
は、存在するＮ連結炭水化物鎖を除去する。１つ以上のＮ連結グリコシル化部位
（代表的に、天然に存在するグリコシル化部位）が排除され、そして１つ以上の
新たなＮ連結部位が作製される、Ｎ連結炭水化物鎖の再配列もまた、提供される
。さらなる好ましいＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様改変体としては、１つ以上の
システイン残基が、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のアミノ酸配
列と比較して欠失しているか、または別のアミノ酸（例えば、セリン）で置換さ
れている、システイン改変体が挙げられる。システイン改変体は、ＣＤ２０／Ｉ
ｇＥレセプター様ポリペプチドが、例えば不溶性の封入体の単離の後に、生物学
的に活性な配置にリフォールディングされなければならない場合に、有用である
。システイン改変体は、一般に、ネイティブタンパク質より少ないシステイン残
基を有し、そして代表的には同数のシステイン残基を有し、対合していないシス
テインから生じる相互作用を最小にする。

【００９４】 さらに、配列番号２または配列番号４、あるいは他のＣＤ２０／ＩｇＥレセプ
ター様ポリペプチドのいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドは、同種ポリ
ペプチドに融合してホモダイマーを形成し得るか、あるいは異種ポリペプチドに
融合してヘテロダイマーを形成し得る。異種のペプチドおよびポリペプチドとし
ては、以下が挙げられるが、それらに限定されない：ＣＤ２０／ＩｇＥレセプタ
ー様融合ポリペプチドの検出および／または単離を可能にするエピトープ；膜貫
通レセプタータンパク質またはその部分（例えば、細胞外ドメインまたは膜貫通
ドメインおよび細胞内ドメイン）；膜貫通レセプタータンパク質に結合する、リ
ガンドまたはその部分；触媒的に活性である、酵素またはその部分；オリゴマー
化を促進するポリペプチドまたはペプチド（例えば、ロイシンジッパードメイン
）；安定性を増加させるポリペプチドまたはペプチド（例えば、免疫グロブリン
定常領域）；ならびに配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のアミノ酸
配列を含むポリペプチド、あるいは別のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプ
チドとは異なる治療活性を有するポリペプチド。

【００９５】 融合は、配列番号２または配列番号４のいずれかに記載のアミノ酸配列を含む
ポリペプチド、あるいは他のＩＬ１ｒａ−Ｒポリペプチドの、アミノ末端または
カルボキシル末端のいずれかにおいて、なされ得る。融合は、リンカーもアダプ
ター分子も用いずに直接であっても、リンカーもしくはアダプター分子を介して
であってもよい。リンカーまたはアダプター分子は、１つ以上のアミノ酸残基で
あり得、代表的に、約２０〜約５０アミノ酸残基である。リンカーまたはアダプ
ター分子はまた、ＤＮＡ制限エンドヌクレアーゼまたはプロテアーゼに対する切
断部位を有して設計されて、融合した部分の分離を可能にし得る。一旦構築され
ると、融合ポリペプチドは、本明細書中に記載の方法に従って誘導体化され得る
ことが、理解される。

【００９６】 本発明のさらなる実施形態において、配列番号２または配列番号４のいずれか
のアミノ酸配列を含むポリペプチド、あるいは他のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター
様ポリペプチドは、ヒトＩｇＧのＦｃ領域の１つ以上のドメインに融合する。抗
体は、以下の２つの機能的に独立した部分を含む；抗原を結合する「Ｆａｂ」と
して公知の可変ドメイン、ならびに相補的活性化および食作用細胞による攻撃の
ようなエフェクター機能に関与する、「Ｆｃ」として公知の定常ドメイン。Ｆｃ
は、長い血清半減期を有し、一方でＦａｂは、短寿命である。Ｃａｐｏｎら、１
９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３３７：５２５−３１。治療タンパク質と一緒に構築さ
れる場合には、Ｆｃドメインは、より長い半減期を提供し得るか、またはＦｃレ
セプター結合、プロテインＡ結合、補体結合、および恐らく、胎盤移入さえもの
ような機能を組み込み得る。同書。表ＩＩは、当該分野において公知の特定のＦ
ｃ融合物の使用を要約する（融合ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド産
性に適用可能な材料および方法を含む）。

【００９７】

【表２】 一例において、ヒトＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域は、
当業者に公知の方法を使用して、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの
アミノ末端またはカルボキシル末端のいずれかにおいて、融合し得る。別の例に
おいて、ヒトＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２領域、およびＣＨ３領域は、ＣＤ２０
／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドフラグメント（例えば、ＣＤ２０／ＩｇＥレ
セプター様ポリペプチドの推定細胞外部分）のアミノ末端またはカルボキシル末
端のいずれかにおいて、融合し得る。得られるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様融
合ポリペプチドは、プロテインＡアフィニティーカラムの使用によって、精製さ
れ得る。Ｆｃ領域に融合したペプチドおよびタンパク質は、融合していない対応
物より実質的に長いインビボでの半減期を示すことが見出された。また、Ｆｃ領
域への融合は、融合ポリペプチドの二量化／多量体化を可能にする。Ｆｃ領域は
、天然に存在するＦｃ領域であり得るか、または治療品質、循環時間、もしくは
減少した凝集のような特定の品質を改善するよう変更され得る。

【００９８】 関連する核酸分子およびポリペプチドの同一性および類似性は、公知の方法に
よって容易に計算され得る。このような方法としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎ
ａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａ．Ｍ．Ｌｅｓｋ編、Ｏｘｆｏｒ
ｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ １９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎ
ｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｄ．
Ｗ．Ｓｍｉｔｈ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９３）；Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ（Ｐａｒｔ １，
Ａ．Ｍ．ＧｒｉｆｆｉｎおよびＨ．Ｇ．Ｇｒｉｆｆｉｎ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒ
ｅｓｓ １９９４）；Ｇ．ｖｏｎ Ｈｅｉｎｌｅ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ １９８７）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ（
Ｍ．ＧｒｉｂｓｋｏｖおよびＪ．Ｄｅｖｅｒｅｕｘ編、Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ
Ｐｒｅｓｓ １９９１）；ならびにＣａｒｉｌｌｏら、１９８８，ＳＩＡＭ Ｊ
．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．，４８：１０７３に記載されるものが挙げられる
が、これらに限定されない。

【００９９】 同一性および／または類似性を決定するための好ましい方法は、試験される配
列間での最大の適合を与えるために、設計される。同一性および類似性を決定す
るための方法は、公共に利用可能なコンピュータプログラムにおいて記載されて
いる。２つの配列間の同一性および類似性を決定するための、好ましいコンピュ
ータプログラム方法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ（ＧＡＰ（Ｄｅｖｅ
ｒｅｕｘら、１９８４，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：３８７；
Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏ
ｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴ
Ｎ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．２１５：４０３−１０）を含む）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｂ
ＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）および他の供給源（
Ａｌｔｓｃｈｕｌら、ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ（ＮＣＢ ＮＬＭ ＮＩＨ，Ｂ
ｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ２０８９４）；Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０、前出）か
ら公共に利用可能である。周知のＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも
また、同一性を決定するために使用され得る。

【０１００】 ２つのアミノ酸配列を整列させるための特定のアライメントスキームは、これ
ら２つの配列の短い領域のみの適合を生じ得、そしてこの小さな整列領域は、２
つの全長配列間に有意な関連がない場合でさえも、非常に高い配列同一性を有し
得る。従って、好ましい実施形態において、選択された整列方法（ＧＡＰプログ
ラム）は、特許請求されるポリペプチドの少なくとも５０の連続するアミノ酸に
わたる整列を生じる。

【０１０１】 例えば、コンピュータアルゴリズムＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔ
ｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄ
ｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して、配列同一性の百分率が決定されるべき２つのポリ
ペプチドが、それらのそれぞれのアミノ酸の最適な適合（アルゴリズムによって
決定される「適合したスパン」）のために、整列される。ギャップオープニング
ペナルティー（ｇａｐ ｏｐｅｎｉｎｇ ｐｅｎａｌｔｙ）（これは、平均対角
の３倍として計算される：「平均対角」とは、使用される比較行列（ｃｏｍｐａ
ｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘ）の対角の平均である；「対角」とは、特定の比較行
列によって各完全なアミノ酸適合に対して割り当てられたスコアまたは数である
）およびギャップエクステンションペナルティー（ｇａｐ ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ
ｐｅｎａｌｔｙ）（これは通常、キャップオープニングペナルティーの０．１
倍である）、ならびにＰＡＭ ２５０またはＢＬＯＳＵＭ ６２のような比較行
列が、このアルゴリズムと組み合わせて使用される。標準的な比較行列もまた、
このアルゴリズムによって使用される（Ｄａｙｈｏｆｆら、５ Ａｔｌａｓ ｏ
ｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（補遺３ １９７８）（ＰＡＭ２５０比較行列）；Ｈｅｎｉｋｏｆｆら、１９９２，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：１０９１５−１９（ＢＬＯ
ＳＵＭ ６２比較行列）を参照のこと）。

【０１０２】 ポリペプチド配列比較のための好ましいパラメータは、以下を含む： Ａｌｇｏｒｉｔｈｍ：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ，１９７０
，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−５３； Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｍａｔｒｉｘ：ＢＬＯＳＵＭ ６２（Ｈｅｎｉｋｏｆ
ｆら、前出）； Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ：１２ Ｇａｐ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｅｎａｌｔｙ：４ Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ ｏｆ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ：０ このＧＡＰプログラムは、上記パラメータを用いて有用である。上記パラメータ
は、ＧＡＰアルゴリズムを用いるポリペプチド比較（末端ギャップに対してはペ
ナルティーがないこととともに）のためのデフォルトパラメータである。

【０１０３】 核酸分子配列比較についての好ましいパラメーターとしては、以下が挙げられ
る： アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，４８：４４
３−４５３（１９７０）； 比較マトリクス：一致＝＋１０、不一致＝０ ギャップペナルティー：５０ ギャップレングスペナルティー：３。

【０１０４】 ＧＡＰプログラムはまた、上記パラメーターを用いて有用である。上記パラメ
ーターは、核酸分子比較についてのデフォルトパラメーターである。

【０１０５】 他の例示的なアルゴリズム、ギャップオープニングペナルティー、ギャップエ
クステンションペナルティー、比較マトリクス、同一性の閾値などが使用され得
、これには、Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ，Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａ
ｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ９，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，１９９７に記載されるものを
含む。なされる特定の選択は、当業者に明らかであり、なされる特定の比較（例
えば、ＤＮＡ−ＤＮＡ、タンパク質−タンパク質、タンパク質−ＤＮＡ）；さら
に、比較が所定の配列対の間である（この場合、ＧＡＰまたはＢｅｓｔＦｉｔが
一般的に好ましい）か、一つの配列と配列の大きなデータベースとの間（この場
合、ＦＡＳＴＡまたはＢＬＡＳＴＡが好ましい）であるか）に依存する。

【０１０６】 （合成） 本明細書中に記載される核酸およびポリペプチド分子が組換え手段および他の手
段によって産生され得ることは、当業者によって認識される。

【０１０７】 （核酸分子） 核酸分子は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアミノ酸配列を含
むポリペプチドをコードし、種々の方法（化学合成、ｃＤＮＡまたはゲノムライ
ブラリースクリーニング、発現ライブラリースクリーニングおよび／またはｃＤ
ＮＡのＰＣＲ増幅を含むが、これらに限定されない）で容易に獲得され得る。

【０１０８】 本明細書中で使用される組換えＤＮＡ方法は、一般的に、Ｓａｍｂｒｏｏｋら
（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕ
ａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅ
ｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９））および／
またはＡｕｓｕｂｅｌら編（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ
．ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，ＮＹ（１９９４））に記載される方
法である。本発明は、本明細書中に記載される核酸分子およびこのような分子を
得るための方法を提供する。

【０１０９】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドまたはそのフラグメントをコード
する遺伝子またはｃＤＮＡは、ゲノムライブラリーのハイブリダイゼーションス
クリーニングによってか、またはＰＣＲ増幅によって獲得され得る。ＣＤ２０／
ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子が一つの種
から同定された場合、その遺伝子の全てまたは一部は、同じ種からのオルソログ
（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）遺伝子または関連遺伝子を同定するためのプローブとして
使用され得る。プローブまたはプライマーは、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポ
リペプチドを発現すると考えられる種々の組織供給源からのｃＤＮＡライブラリ
ーをスクリーニングするために使用され得る。さらに、配列番号１または配列番
号３のいずれかに記載される配列を有する核酸分子の一部または全てを使用して
ゲノムライブラリーをスクリーニングし、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペ
プチドのアミノ酸配列をコードする遺伝子を同定および単離し得る。代表的には
、中程度または高いストリンジェンシーの条件がスクリーニングのために使用さ
れて、スクリーニングから得られる偽陽性の数を最小にする。

【０１１０】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸
分子はまた、発現クローニング（これは、発現されたタンパク質の性質に基づく
陽性クローンの検出を使用する）によって同定され得る。代表的には、核酸ライ
ブラリーは、宿主細胞表面において発現されそして提示されるクローン化タンパ
ク質への抗体または他の結合パートナー（例えば、レセプターまたはリガンド）
の結合によってスクリーニングされる。抗体または結合パートナーは、検出可能
な標識を用いて修飾されて所望のクローンを発現する細胞を同定する。

【０１１１】 以下に記載される説明に従って行われる組換え発現技術に従って、これらのポ
リヌクレオチドを作製し、そしてコードされるポリペプチドを発現させ得る。例
えば、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする
核酸配列を適切なベクターに挿入することによって、当業者は、大量の所望のヌ
クレオチド配列を容易に作製し得る。次いで、この配列を使用して検出プローブ
または増幅プライマーを作製し得る。あるいは、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様
ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを発現ベクターに挿
入し得る。発現ベクターを適切な宿主に導入することによって、コードされるＣ
Ｄ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドは、大量に産生され得る。

【０１１２】 適切な核酸配列を得るための別の方法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）で
ある。この方法において、ｃＤＮＡは、酵素逆転写酵素を使用して、ｐｏｌｙ（
Ａ）＋ＲＮＡまたは全ＲＮＡから調製される。次いで、２つのプライマー（代表
的には、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードす
るｃＤＮＡ（オリゴヌクレオチド）の２つの別個の領域に対して相補的である）
が、ＴａｑポリメラーゼのようなポリメラーゼとともにこのｃＤＮＡに付加され
、そしてこのポリメラーゼが、これら２つのプライマー間のｃＤＮＡの領域を増
幅する。

【０１１３】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸
分子（フラグメントまたは改変体を含む）を調製する別の手段は、Ｅｎｇｅｌｓ
ら、１９８９，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．２８：７１６−７３４
によって記載されるもののような、当業者に周知の方法を使用する、化学合成で
ある。これらの方法としては、とりわけ、核酸合成のためのリン酸トリエステル
、ホスホルアミダイト、およびＨ−ホスホネート方法が挙げられる。このような
化学合成のために好ましい方法は、標準的なホスホルアミダイト化学を使用する
、ポリマーにより支持される合成である。代表的に、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプタ
ー様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするＤＮＡは、数百ヌクレオチド長で
ある。約１００ヌクレオチドより長い核酸は、これらの方法を使用して、いくつ
かのフラグメントとして合成され得る。次いで、これらのフラグメントが一緒に
連結されて、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの全長ヌクレオチド配
列を形成し得る。通常、このポリペプチドのアミノ末端をコードするＤＮＡフラ
グメントは、ＡＴＧを有し、これは、メチオニン残基をコードする。このメチオ
ニンは、宿主細胞において産生されたポリペプチドがその細胞から分泌されるよ
う設計されるか否かに依存して、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの
成熟形態で存在してもそうでなくてもよい。当業者に公知の他の方法が、同様に
使用され得る。

【０１１４】 いくつかの場合において、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド改変体
をコードする核酸分子を調製することが所望であり得る。改変体をコードする核
酸分子は、プライマー（単数または複数）が所望の点変異を有する部位指向型変
異誘発、ＰＣＲ増幅、または他の適切な方法を使用して生成され得る（変異誘発
技術の記載に関しては、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、前出、およびＡｕｓｕｂｅｌら、
前出を参照のこと）。Ｅｎｇｅｌｓら、前出によって記載される方法を使用する
化学合成もまた、このような改変体を調製するために使用され得る。当業者に公
知の他の方法が、同様に使用され得る。

【０１１５】 特定の実施形態において、核酸改変体は、所定の宿主細胞におけるＣＤ２０／
ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの最適な発現のために変更されたコドンを含む
。特定のコドン変更は、発現のために選択されるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様
ポリペプチドおよび宿主細胞に依存する。このような「コドン最適化」は、種々
の方法によって（例えば、所定の宿主細胞において高度に発現される遺伝子にお
ける使用に好ましいコドンを選択することによって）実施され得る。高度に発現
された細菌遺伝子のコドン優先度に関する「Ｅｃｏｈｉｇｈ．ｃｏｄ」のような
コドン頻度表を組み込むコンピューターアルゴリズムが使用され得、そしてＵｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ Ｖｅｒｓｉｏ
ｎ ９．０（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏ
ｎ，ＷＩ）によって提供される。他の有用なコドン頻度表としては、「Ｃｅｌｅ
ｇａｎｓ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｃｅｌｅｇａｎｓ＿ｌｏｗ．ｃｏｄ」、「Ｄ
ｒｏｓｏｐｈｉｌａ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、「Ｈｕｍａｎ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」
、「Ｍａｉｚｅ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ」、および「Ｙｅａｓｔ＿ｈｉｇｈ．ｃｏｄ
．」が挙げられる。

【０１１６】 他の実施形態において、核酸分子は、本明細書中に記載されるような保存的ア
ミノ酸置換を有するＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様改変体、１つ以上のＮ連結ま
たはＯ連結グリコシル化部位の付加および／または欠失を含むＣＤ２０／ＩｇＥ
レセプター様改変体、１つ以上のシステイン残基の欠失および／または置換を有
するＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様改変体、あるいは本明細書中に記載されるよ
うなＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドフラグメントをコードする。さ
らに、核酸分子は、本明細書中に記載されるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様改変
体、フラグメント、および融合ポリペプチドの任意の組合せをコードし得る。

【０１１７】 （ベクターおよび宿主細胞） ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸
分子を、標準的な連結技術を使用して適切な発現ベクターに挿入し得る。ベクタ
ーは、代表的に、使用される特定の宿主細胞において機能的であるように選択さ
れる（すなわち、ベクターは、遺伝子の増幅および／または遺伝子の発現が生じ
得るように、宿主細胞機構と適合性である）。ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポ
リペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子は、原核生物宿主細胞、酵母宿
主細胞、昆虫（バキュロウイルス系）宿主細胞および／または真核生物宿主細胞
において増幅／発現され得る。宿主細胞の選択は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター
様ポリペプチドが翻訳後修飾（例えば、グリコシル化および／またはリン酸化）
されるか否かに一部依存する。そうである場合、酵母宿主細胞、昆虫宿主細胞、
または哺乳動物宿主細胞が好ましい。発現ベクターの総説について、Ｍｅｔｈ．
Ｅｎｚ．，１８５巻、Ｄ．Ｖ．Ｇｏｅｄｄｅｌ，編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅ
ｓｓ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ（１９９０）を参照のこと。

【０１１８】 代表的に、任意の宿主細胞に使用される発現ベクターは、プラスミド維持のた
めならびに外来性ヌクレオチド配列のクローニングおよび発現のための配列を含
む。このような配列（集合的に、「隣接配列」と呼ばれる）は、特定の実施形態
において、代表的に、以下のヌクレオチド配列の１つ以上を含む：プロモーター
、１つ以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナーおよびアクセ
プタースプライス部位を含む完全なイントロン配列、ポリペプチド分泌のための
リーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発
現されるポリペプチドをコードする核酸を挿入するためのポリリンカー領域、な
らびに選択マーカーエレメント。これらの配列のそれぞれが、以下に議論される
。

【０１１９】 必要に応じて、ベクターは、「タグ」コード配列（すなわち、ＣＤ２０／Ｉｇ
Ｅレセプター様ポリペプチドコード配列の５’末端または３’末端に配置される
オリゴヌクレオチド分子）を含み得；オリゴヌクレオチド配列は、ｐｏｌｙＨｉ
ｓ（例えば、ｈｅｘａＨｉｓ）、別の「タグ」（例えば、ＦＬＡＧ、ＨＡ（赤血
球凝集素インフルエンザウイルス）またはｍｙｃ）（これらに対して市販の抗体
が存在する）をコードする。このタグは、代表的には、ポリペプチドの発現の際
にポリペプチドに融合され、宿主細胞からの、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポ
リペプチドのアフィニティー精製のための手段として役立ち得る。アフィニティ
ー精製は、例えば、アフィニティーマトリクスとしてタグに対する抗体を使用す
るカラムクロマトグラフィーによって達成され得る。必要に応じて、タグは、続
いて、切断のために特定のペプチダーゼを使用するような種々の手段によって、
精製されたＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドから除去され得る。

【０１２０】 隣接配列は、同種（すなわち、宿主細胞と同じ種および／または系統由来）で
あり得るか、異種（すなわち、宿主細胞種または宿主細胞系統以外の種由来）で
あり得るか、ハイブリッド（すなわち、１つより多くの供給源由来の隣接配列の
組み合わせ）であり得るか、または合成であり得るか、あるいは隣接配列は、Ｃ
Ｄ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド発現を調節するために正常に機能する
ネイティブな配列であり得る。このように、隣接配列の供給源は、任意の原核生
物または真核生物、任意の脊椎生物または無脊椎生物、あるいは任意の植物であ
り得、但し、隣接配列は、宿主細胞の機構において機能的であり、そして宿主細
胞の機構によって活性化され得る。

【０１２１】 本発明のベクターに有用な隣接配列は、当該分野において周知である任意のい
くつかの方法によって得られ得る。代表的には、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様
遺伝子隣接配列以外の、本明細書中で有用な隣接配列は、マッピングおよび／ま
たは制限エンドヌクレアーゼ消化によって以前に同定されており、従って、適切
な制限エンドヌクレアーゼを使用して、適切な組織供給源から単離され得る。い
くつかの場合において、隣接配列の全長ヌクレオチド配列は公知であり得る。こ
こで、隣接配列は、核酸合成またはクローニングのために本明細書中で記載され
る方法を使用して合成され得る。

【０１２２】 隣接配列の全てまたは一部のみが公知である場合、ＰＣＲを使用して、そして
／あるいは適切なオリゴヌクレオチドならびに／または同じもしくは別の種由来
の隣接配列フラグメントを用いてゲノムライブラリーをスクリーニングすること
によって、隣接配列は得られ得る。隣接配列が公知でない場合、隣接配列を含む
ＤＮＡのフラグメントは、例えば、コード配列または別の遺伝子（単数または複
数）を含み得る大きなＤＮＡ断片から単離され得る。単離は、適切なＤＮＡフラ
グメントを生成するための制限エンドヌクレアーゼ消化、続くアガロースゲル精
製でさえも使用する単離、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）カラムクロマトグラフィー
（Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）、または当業者に公知の他の方法によって達成
され得る。この目的を達成するための適切な酵素の選択は、当業者に容易に明ら
かである。

【０１２３】 複製起点は、代表的に、市販で購入した原核生物発現ベクターの一部であり、
この起点は、宿主細胞においてベクターの増幅に役立つ。特定のコピー数へのベ
クターの増幅は、いくつかの場合において、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリ
ペプチドの最適な発現に重要であり得る。選択されたベクターが複製起点部位を
含まない場合、複製起点部位は、公知の配列に基づいて化学的に合成され得、そ
してベクターに連結され得る。例えば、プラスミドｐＢＲ３２２（製品番号３０
３−３ｓ、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）
からの複製起点は、大部分のグラム陰性細菌に適切であり、そして種々の起点（
例えば、ＳＶ４０、ポリオーマ、アデノウイルス、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳ
Ｖ）、またはＨＰＶもしくはＢＰＶのようなパピローマウイルス）は、哺乳動物
細胞におけるクローニングベクターに有用である。一般的に、複製起点の成分は
、哺乳動物発現ベクターに必要とされない（例えば、ＳＶ４０起点は、ただそれ
が初期プロモーターを含むので、しばしば、使用される）。

【０１２４】 転写終結配列は、代表的にポリペプチドコード領域の末端の３’側に配置され
、そして転写を終結させるのに役立つ。通常、原核生物細胞における転写終結配
列は、Ｇ−Ｃリッチフラグメント、続いてポリ−Ｔ配列である。この配列はライ
ブラリーから容易にクローン化されるか、またはなおベクターの一部として市販
で購入されるが、これはまた、本明細書中に記載されるような核酸合成のための
方法を使用して容易に合成され得る。

【０１２５】 選択マーカー遺伝子エレメントは、選択培養培地において増殖される宿主細胞
の生存および増殖に必要なタンパク質をコードする。代表的な選択マーカー遺伝
子は、（ａ）原核生物宿主細胞に対して、抗生物質または他の毒素（例えば、ア
ンピシリン、テトラサイクリン、またはカナマイシン）に対する耐性を与えるか
；（ｂ）細胞の栄養要求性の欠損を補うか；あるいは（ｃ）複合培地から入手可
能でない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。好ましい選択マーカ
ーは、カナマイシン耐性遺伝子、アンピシリン耐性遺伝子、およびテトラサイク
リン耐性遺伝子である。ネオマイシン耐性遺伝子もまた、原核生物宿主細胞およ
び真核生物宿主細胞における選択のために使用され得る。

【０１２６】 他の選択遺伝子は、発現される遺伝子を増幅するために使用され得る。増幅は
、増殖に重要なタンパク質の産生により大きく要求される遺伝子が、組換え細胞
の染色体の連続的な生成の内にタンデムに反復されるプロセスである。哺乳動物
細胞に対する適切な選択マーカーの例としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（Ｄ
ＨＦＲ）およびチミジンキナーゼが挙げられる。哺乳動物細胞形質転換体は、選
択圧下に置かれ、ここで、形質転換体のみが、ベクターに存在する選択遺伝子に
よって生存するように独特に適合される。選択圧は、培地中の選択因子の濃度が
連続的に変化し、それによって選択遺伝子とＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリ
ペプチドをコードするＤＮＡとの両方の増幅を導く条件下で、形質転換された細
胞を培養することによって課される。結果として、増加した量のＣＤ２０／Ｉｇ
Ｅレセプター様ポリペプチドが、増幅されたＤＮＡから合成される。

【０１２７】 リボソーム結合部位は、通常、ｍＲＮＡの翻訳開始に必要であり、そしてシャ
イン・ダルガルノ配列（原核性物）またはコザック配列（真核生物）によって特
徴付けられる。このエレメントは、代表的に、発現されるＣＤ２０／ＩｇＥレセ
プター様ポリペプチドのプロモーターの３’側およびコード配列の５’側に配置
される。シャイン・ダルガルノ配列は、可変であるが、代表的には、ポリプリン
（すなわち、高いＡ−Ｇ含有量を有する）である。多くのシャイン・ダルガルノ
配列は、同定されており、それぞれが、本明細書中に記載の方法を使用して、原
核生物ベクターを使用して容易に合成され得る。

【０１２８】 リーダー配列、またはシグナル配列は、宿主細胞からＣＤ２０／ＩｇＥレセプ
ター様ポリペプチドを指向させるために使用され得る。代表的には、シグナル配
列をコードするヌクレオチド配列は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様核酸分子の
コード領域に位置するか、または直接ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチ
ドコード領域の５’末端に位置する。多くのシグナル配列が同定されており、選
択された宿主細胞において機能性である任意のシグナル配列が、ＣＤ２０／Ｉｇ
Ｅレセプター様核酸分子と組み合わせて使用され得る。従って、シグナル配列は
、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子またはｃＤＮＡ核酸分子に対して同種（
天然）または異種であり得る。さらに、シグナル配列は、本明細書中に記載され
る方法を使用して化学的に合成され得る。大部分において、シグナルペプチドの
存在による宿主細胞からのＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの分泌は
、分泌されたＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドからのシグナルペプチ
ドの除去を生じる。シグナル配列は、ベクターの成分であり得るか、またはベク
ターに挿入されたＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様核酸分子の一部であり得る。

【０１２９】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドコード領域に結合されたネイティ
ブなＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドシグナル配列をコードするヌク
レオチド配列またはＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドコード領域に結
合された異種シグナル配列をコードするヌクレオチド配列のいずれかの使用が本
発明の範囲内に含まれる。選択された異種シグナル配列は、宿主細胞によって認
識され、プロセスされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される
）ものであるべきである。ネイティブなＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプ
チドシグナル配列を認識せず、プロセスしない原核生物宿主細胞について、シグ
ナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、または熱安定
エンテロトキシンＩＩリーダーのグループから選択される原核生物シグナル配列
によって置換される。酵母分泌について、ネイティブなＣＤ２０／ＩｇＥレセプ
ター様ポリペプチドシグナル配列は、酵母インベルターゼ、α因子、または酸ホ
スファターゼリーダーによって置換され得る。哺乳動物細胞発現において、ネイ
ティブなシグナル配列が十分であるが、他の哺乳動物シグナル配列が適切であり
得る。

【０１３０】 グリコシル化が真核生物宿主細胞発現系において望ましいような、いくつかの
場合において、グリコシル化または収量を改善するために種々のプレ配列（ｐｒ
ｅｓｅｑｕｅｎｃｅ）が操作され得る。例えば、特定のシグナルペプチドのペプ
チダーゼ切断部位を変更し得るかまたはプレ配列を加え得、これはまた、グリコ
シル化に影響し得る。最終タンパク質産物は、−１位に（成熟タンパク質の最初
のアミノ酸に対して）、発現に付随して１つ以上のさらなるアミノ酸を有し得、
これは、完全に除去されないかもしれない。例えば、最終タンパク質産物は、Ｎ
末端に結合される、ペプチダーゼ切断部位において見出される１つまたは２つの
アミノ酸残基を有し得る。あるいは、いくつかの酵素切断部位の使用は、酵素が
成熟ポリペプチド内のこのような領域を切断する場合、所望のＣＤ２０／ＩｇＥ
レセプター様ポリペプチドの少し短縮した形態を生じ得る。

【０１３１】 多くの場合において、核酸分子の転写は、ベクター内の１つ以上のイントロン
の存在によって増加する；これは、ポリペプチドが真核生物宿主細胞（特に、哺
乳動物宿主細胞）において産生される場合、特に当てはまる。使用されるイント
ロンは、特に使用される遺伝子が全長ゲノム配列またはそのフラグメントである
場合、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子内に天然に存在し得る。イントロン
が遺伝子内に天然に存在しない（大部分のｃＤＮＡについて）場合、イントロン
は、別の供給源から得られ得る。隣接配列およびＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様
遺伝子に関してイントロンの位置は、イントロンが効果的に転写されなければな
らないので、一般的に重要である。従って、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様 ｃ
ＤＮＡ分子が転写される場合、イントロンの好ましい位置は、転写開始部位の３
’側で、ポリ−Ａ転写終結配列の５’側である。好ましくは、イントロン（単数
または複数）は、コード配列を妨害しないように、ｃＤＮＡの１つの側または他
の側（すなわち、５’側または３’側）に配置される。任意の供給源（任意のウ
イルス、原核生物および真核生物（植物または動物）を含む）由来の任意のイン
トロンを使用して本発明を実行し得るが、但し、このイントロンは、挿入される
宿主細胞に適合性である。合成イントロンもまた本明細書中に含まれる。必要に
応じて、１つより多くのイントロンがベクター内で使用され得る。

【０１３２】 本発明の発現ベクターおよびクローニングベクターは、代表的には各々、宿主
生物によって認識され、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドをコードす
る分子に作動可能に連結されたプロモーターを含む。プロモーターは、構造遺伝
子の転写を制御する構造遺伝子の開始コドンに対して上流（すなわち、５’側）
（一般的に、約１００〜１０００ｂｐ内）に配置される非転写配列である。プロ
モーターは、通常、２つのクラス（誘導プロモーターおよび構成プロモーター）
の１つにグループ化される。誘導プロモーターは、培養条件におけるいくらかの
変化（例えば、栄養の存在または非存在、あるいは温度の変化）に応答してそれ
らの制御下で、ＤＮＡからの増加したレベルの転写を開始する。他方、構成プロ
モーターは、連続的な遺伝子産物の産生を開始する；すなわち、遺伝子発現に対
してほとんど制御しないかまたは制御しない。多数のプロモーター（種々の潜在
的な宿主細胞によって認識される）が周知である。適切なプロモーターは、供給
源のＤＮＡからプロモーターを制限酵素消化によって取り出し、そして所望のプ
ロモーター配列をベクターに挿入することによって、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプタ
ー様ポリペプチドをコードするＤＮＡに作動可能に連結される。ネイティブなＣ
Ｄ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子プロモーター配列は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセ
プター様核酸分子の増幅および／または発現に指向させるために使用され得る。
しかし、ネイティブなプロモーターと比較して大きい転写および発現タンパク質
のより高い産生が可能であり、そして使用のために選択された宿主細胞系と適合
性である場合、異種プロモーターが好ましい。

【０１３３】 原核生物宿主との使用に適切なプロモーターとしては、β−ラクタマーゼおよ
びラクトースプロモーター系；アルカリホスファターゼ、トリプトファン（ｔｒ
ｐ）プロモーター系；およびハイブリッドプロモーター（例えば、ｔａｃプロモ
ーター）が挙げられる。他の公知の細菌プロモーターもまた、適切である。これ
らの配列は、公開されており、それによって、当業者は、任意の有用な制限部位
を供給するのに必要とされるリンカーまたはアダプターを使用して、所望のＤＮ
Ａ配列にそれらを連結し得る。

【０１３４】 酵母宿主との使用に適切なプロモーターはまた、当該分野において周知である
。酵母エンハンサーは、酵母プロモーターと有利に使用される。哺乳動物宿主細
胞との使用に適切なプロモーターは周知であり、限定しないが、ポリオーマウイ
ルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えば、Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ２）、ウ
シパピローマウイルス、鳥類肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、
レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよび最も好ましいシミアンウイルス４０（
ＳＶ４０）のようなウイルスのゲノムから得られるプロモーターが挙げられる。
他の適切な哺乳動物プロモーターとしては、異種哺乳動物プロモーター（例えば
、熱ショックプロモーターおよびアクチンプロモーター）が挙げられる。

【０１３５】 ＣＤ２０／ＩＧＥ−レセプター様遺伝子転写を制御する際に目的となり得るさ
らなるプロモーターとしては、限定しないが、以下が挙げられる：ＳＶ４０初期
プロモータ領域（ＢｅｒｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ，１９８１，Ｎａｔｕ
ｒｅ ２９０：３０４−１０）；ＣＭＶプロモーター；ラウス肉腫ウイルスの３
’側の長末端反復に含まれるプロモーター（Ｙａｍａｍｏｔｏら，１９８０，Ｃ
ｅｌｌ ２２ ：７８７−９７）；ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター（Ｗ
ａｇｎｅｒら，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ
．７８：１４４−１４４５）；メタロチオネイン遺伝子の調節配列（Ｂｒｉｎｓ
ｔｅｒら，１９８２，Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９−４２）；β−ラクタマーゼ
プロモーターのような原核生物発現ベクター（Ｖｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆら
，１９７８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，７５：３
７２７−３１）；またはｔａｃプロモーター（ＤｅＢｏｅｒら，１９８３，Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８０：２１−２５）。組織
特異性を示し、そしてトランスジェニック動物において利用されている、以下の
動物転写制御領域もまた関心が高い：膵臓腺房細胞において活性なエラスターゼ
Ｉ遺伝子制御領域（Ｓｗｉｆｔら，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６３９−４６；
Ｏｒｎｉｔｚら，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎ
ｔ．Ｂｉｏｌ．５０：３９９−４０９（１９８６）；ＭａｃＤｏｎａｌｄ，１９
８７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ７：４２５−５１５）；膵臓β細胞において活性
なインシュリン遺伝子制御領域（Ｈａｎａｈａｎ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３
１５：１１５−２２）；リンパ系細胞において活性な免疫グロブリン遺伝子制御
領域（Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら，１９８４，Ｃｅｌｌ ３８：６４７−５８；Ａ
ｄａｍｅｓら，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１８：５３３−３８；Ａｌｅｘａｎ
ｄｅｒら，１９８７，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：１４３６−４４）；
精巣細胞、乳房細胞、リンパ系細胞、および肥満細胞において活性なマウス哺乳
動物腫瘍ウイルス制御領域（Ｌｅｄｅｒら，１９８６，Ｃｅｌｌ ４５：４８５
−９５）；肝臓において活性なアルブミン遺伝子制御領域（Ｐｉｎｋｅｒｔら，
１９８７，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：２６８−７６）；肝臓におい
て活性なα−フェトプロテイン質遺伝子制御領域（Ｋｒｕｍｌａｕｆら，１９８
５，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：１６３９−４８；Ｈａｍｍｅｒら，１
９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３５：５３−５８）；肝臓において活性なα１−抗
トリプシン遺伝子制御領域（Ｋｅｌｓｅｙら，１９８７，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ
Ｄｅｖｅｌ．１：１６１−７１）；骨髄性細胞において活性なβ−グロビン遺伝
子制御領域（Ｍｏｇｒａｍら，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１５：３３８−４０
；Ｋｏｌｌｉａｓら，１９８６，Ｃｅｌｌ ４６：８９−９４）；脳の稀突起神
経膠細胞において活性なミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（Ｒｅａｄｈ
ｅａｄら，１９８７，Ｃｅｌｌ ４８：７０３−１２）；骨格筋において活性な
ミオシン軽鎖−２遺伝子制御領域（Ｓａｎｉ，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４
：２８３−８６）；ならびに視床下部において活性なゴナドトロピン放出ホルモ
ン遺伝子制御領域（Ｍａｓｏｎら，１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４：１３７
２−７８）。

【０１３６】 エンハンサー配列は、より高等な真核生物によって本発明のＣＤ２０／ＩＧＥ
−レセプター様ポリペプチドをコードするＤＮＡの転写を増加するように、ベク
ターに挿入され得る。エンハンサーは、転写を増加させるためにプロモーターに
作用する、通常約１０〜３００ｂｐの長さのＤＮＡのシス作用性エレメントであ
る。エンハンサーは、比較的方向および位置に非依存性である。これらは、転写
ユニットに対して５’側および３’側に見出された。哺乳動物遺伝子から入手可
能ないくつかのエンハンサー配列が公知である（例えば、グロビン、エラスター
ゼ、アルブミン、α−フェトタンパク質およびインシュリン）。しかし、代表的
には、ウイルス由来のエンハンサーが、使用される。ＳＶ４０エンハンサー、サ
イトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、ポリオーマエンハンサー、
およびアデノウイルスエンハンサーは、真核生物プロモーターの活性化のための
例示的な増強エレメントである。エンハンサーは、ＣＤ２０／ＩＧＥ−レセプタ
ー様核酸分子に対して５’位または３’位でベクターにスプライシングされ得る
が、代表的には、プロモーターから５’側に配置される。

【０１３７】 本発明の発現ベクターは、市販のベクターのような開始ベクターから構築され
得る。このようなベクターは、全ての所望な隣接配列を含んでも良いし、含まな
くても良い。所望される隣接配列の１つ以上が予めベクター内に存在しない場合
、これらは、個々に得られ得、ベクターに連結され得る。隣接配列のそれぞれを
得るために使用される方法は、当業者に周知である。

【０１３８】 本発明を実行するために好ましいベクターは、細菌宿主細胞、昆虫宿主細胞、
および哺乳動物宿主細胞と適合性のベクターである。このようなベクターとして
は、特に、ｐＣＲＩＩ、ｐＣＲ３、およびｐｃＤＮＡ３．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇ
ｅｎ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ｐＢＳＩＩ（Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）、ｐＥＴ１５（Ｎｏｖａｇｅｎ、Ｍａｄｉ
ｓｏｎ、ＷＩ）、ｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａ
ｔａｗａｙ、ＮＪ）、ｐＥＧＦＰ−Ｎ２（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔ
ｏ、ＣＡ）、ｐＥＴＬ（ＢｌｕｅＢａｃＩＩ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＤＳ
Ｒ−α（ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９０／１４３６３）ならびにｐＦａｓｔＢａｃＤ
ｕａｌ（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ）が挙げられる
。

【０１３９】 さらなる適切なベクターとしては、限定しないが、コスミド、プラスミド、ま
たは改変ウイルスが挙げられるが、これらのベクター系は、選択された宿主細胞
と適合性でなければならないことが理解される。このようなベクターとしては、
限定しないが、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（登録商標）プラスミド誘導体（高コピー
数ＣｏｌＥｌ−ベースのファージミド、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ
Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ ＣＡ）、Ｔａｑ増幅ＰＣＲ産物をクロー
ニングするために設計されたＰＣＲクローニングプラスミド（例えば、ＴＯＰＯ^ＴＭ ＴＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ（登録商標）Ｋｉｔ、ＰＣＲ２．１（登録商標）プ
ラスミド誘導体、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ならびに
哺乳動物ベクター、酵母ベクターまたはバキュロウイルス発現系のようなウイル
スベクター（ｐＢａｃＰＡＫプラスミド誘導体、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ
Ａｌｔｏ、ＣＡ）が挙げられる。これらの組換え分子は、形質転換、トランスフ
ェクション、感染、エレクトロポレーションまたは他の公知の技術を介して宿主
細胞に導入され得る。

【０１４０】 ベクターが構築され、そしてＣＤ２０／ＩＧＥ−レセプター様ポリペプチドを
コードする核酸分子がベクターの適切な部位に挿入された後に、完全なベクター
が増幅および／またはポリペプチド発現に適切な宿主細胞に挿入され得る。ＣＤ
２０／ＩＧＥ−レセプター様ポリペプチドについての発現ベクターの選択された
宿主細胞への形質転換は、トランスフェクション、感染、塩化カルシウム、エレ
クトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、ＤＥＡＥ
−デキストラン法、または他の公知の技術のような方法を含む周知の方法によっ
て達成され得る。選択される方法は、使用される宿主細胞の種類にいくぶん関連
する。これらの方法および他の適切な方法は、当業者に周知であり、例えば、Ｓ
ａｍｂｒｏｏｋら（前出）、上記に記載される。

【０１４１】 宿主細胞は、原核生物宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）または真核生物宿主
細胞（例えば、酵母細胞、昆虫細胞、または脊椎動物細胞）であり得る。宿主細
胞は、適切な条件下で培養される場合にＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペ
プチドを合成し、これは、続いて、培養培地から（宿主細胞がそのポリペプチド
を培地に分泌する場合）収集され得るか、または直接そのポリペプチドを産生す
る宿主細胞から収集される（そのポリペプチドが分泌されない場合）。適切な宿
主細胞の選択は、所望の発現レベル、活性に望ましいかまたは必要なポリペプチ
ド修飾（例えば、グリコシル化またはリン酸化）、および生物学的に活性な分子
へと折り畳まれる容易さなどの種々の因子に依存する。

【０１４２】 多くの適切な宿主細胞が当該分野において公知であり、多くが、Ａｍｅｒｉｃ
ａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），１０８
０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡか
ら入手可能である。例としては、限定しないが、チャイニーズハムスター卵巣細
胞（ＣＨＯ）（ＡＴＣＣ受託番号ＣＣＬ６１）、ＣＨＯ ＤＨＦＲ−細胞（Ｕｒ
ｌａｕｂら，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．
９７：４２１６−２０）、ヒト胚性腎臓（ＨＥＫ）２９３または２９３Ｔ細胞（
ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ１５７３）、あるいは３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ受託番号Ｃ
ＣＬ９２）のような哺乳動物細胞が挙げられる。適切な哺乳動物宿主細胞の選択
および形質転換、培養、増幅、スクリーニング、産物生成、および精製のための
方法が当該分野において公知である。他の適切な哺乳動物細胞株は、サルのＣＯ
Ｓ−１（ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ１６５０）およびＣＯＳ−７（ＡＴＣＣ受託番
号ＣＲＬ１６５１）細胞株、およびＣＶ−１（ＡＴＣＣ受託番号ＣＣＬ７０）細
胞株である。さらなる例示的な哺乳動物宿主細胞としては、霊長動物細胞株およ
びげっ歯類細胞株（形質転換細胞株を含む）が挙げられる。正常な二倍体細胞、
初代組織のインビトロ培養物から誘導される細胞株、ならびに初代外植片もまた
適切である。候補細胞は、選択遺伝子を遺伝子型的に欠失し得るか、または優性
に作用する選択遺伝子を含み得る。他の適切な哺乳動物細胞株としては、限定し
ないが、マウス神経芽細胞腫Ｎ２Ａ細胞、ＨｅＬａ、マウスＬ−９２９細胞、Ｓ
ｗｉｓｓから誘導された３Ｔ３株、Ｂａｌｂ−ｃまたはＮＩＨマウス、ＢＨＫま
たはＨａｋハムスター細胞株が挙げられ、ＡＴＣＣより入手可能である。これら
の細胞株のそれぞれは、タンパク質発現に関する分野の当業者にとって公知であ
り入手可能である。

【０１４３】 同様に、本発明に適切な宿主細胞として有用なのは細菌細胞である。例えば、
Ｅ．ｃｏｌｉ（例えば、ＨＢ１０１、（ＡＴＣＣ受託番号３３６９４）ＤＨ５α
、ＤＨ１０、およびＭＣ１０６１（ＡＴＣＣ受託番号５３３３８））の種々の菌
株は、生物工学の分野において宿主細胞として周知である。Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉ
ｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｐ．、他のＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ．などの種々の菌株もまた、本方法において使
用され得る。

【０１４４】 当業者に公知の酵母細胞の多くの菌株はまた、本発明のポリペプチドの発現の
ための宿主細胞として利用可能である。好ましい酵母細胞としては、例えば、Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｉｖｉｓａｅおよびＰｉｃｈｉａ ｐａｓｔ
ｏｒｉｓが挙げられる。

【０１４５】 さらに、望ましい場合には、昆虫細胞系が、本発明の方法において利用され得
る。このような系は、例えば、Ｋｉｔｔｓら，１９９３，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ，１４：８１０−１７；Ｌｕｃｋｌｏｗ，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ
．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４：５６４−７２；およびＬｕｃｋｌｏｗら，１９９
３，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６７：４５６６−７９に記載される。好ましい昆虫細胞
は、Ｓｆ−９およびＨｉ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）
である。

【０１４６】 グリコシル化ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドを発現するために
、トランスジェニック動物がまた使用され得る。例えば、トランスジェニック乳
汁産生動物（例えば、雌ウシまたはヤギ）を使用し、本発明のグルコシル化ポリ
ペプチドを動物の乳汁中に得ることができる。ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様
ポリペプチドを産生するために、植物もまた使用し得るが、一般的に、植物にお
いて生じるグリコシル化は、哺乳動物細胞において産生されるものとは異なり、
ヒト治療の用途に適切ではないグリコシル化産物を生じ得る。

【０１４７】 （ポリペプチド産生） ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド発現ベクターを含む宿主細胞は
、当業者に周知の標準的な培地を使用して培養され得る。この培地は通常、細胞
の増殖および生存に必要な全ての栄養素を含む。Ｅ．ｃｏｌｉ細胞を培養するた
めの適切な培地としては、例えば、Ｌｕｒｉａ Ｂｒｏｔｈ（ＬＢ）および／ま
たはＴｅｒｒｉｆｉｃ Ｂｒｏｔｈ（ＴＢ）が挙げられる。真核生物細胞を培養
するための適切な培地としては、Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｍｅｄｉｕｍ １６４０（ＲＰＭＩ １６４０）、Ｍｉ
ｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）および／またはＤｕ
ｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）
が挙げられ、これらの全ては、培養される特定の細胞株に必要とされるように血
清および／または増殖因子を補充され得る。昆虫培養物についての適切な培地は
、必要に応じて、イーストレート（ｙｅａｓｔｏｌａｔｅ）、ラクトアルブミン
加水分解産物、および／または胎仔ウシ血清を補充したグレース培地である。

【０１４８】 代表的に、形質転換された細胞の選択的な増殖に有用な抗生物質または他の化
合物が、培地に補充物質として添加される。使用される化合物は、宿主細胞が形
質転換されるプラスミドに存在する選択マーカーエレメントによって指示される
。例えば、選択マーカーエレメントがカナマイシン耐性である場合、培養倍地に
加えられる化合物は、カナマイシンである。選択的増殖のための他の化合物とし
ては、アンピシリン、テトラサイクリン、およびネオマイシンが挙げられる。

【０１４９】 宿主細胞によって産生されるＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの
量は、当該分野において公知の標準的な方法を使用して評価され得る。このよう
な方法としては、限定しないが、ウェスタンブロット分析、ＳＤＳ−ポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動、非変性ゲル電気泳動、高速液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）分離、免疫沈降、および／またはＤＮＡ結合ゲルシフトアッセイのよう
な活性アッセイが挙げられる。

【０１５０】 ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドが宿主細胞から分泌されるよう
に設計される場合、ポリペプチドの大部分は、細胞培養培地中で見出され得る。
しかし、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドが宿主細胞から分泌され
ない場合、細胞質および／または核（真核宿主細胞について）に、あるいは、細
胞質ゾル（細菌宿主細胞について）に存在する。

【０１５１】 宿主細胞の細胞質ゾルおよび／または核（真核生物宿主細胞について）あるい
は細胞質ゾル（細菌宿主細胞について）に位置するＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプタ
ー様ポリペプチドについて、宿主細胞は、代表的に、機械的にか、または細胞内
内容物を緩衝溶液中へ放出するための界面活性剤を用いて破砕される。次いで、
ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドは、この溶液から単離される。

【０１５２】 ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドが細胞内で産生される場合、細
胞内物質（グラム陰性細菌に対する封入体を含む）は、当業者に公知の標準的技
術のいずれかを用いて宿主細胞から抽出され得る。例えば、宿主細胞は、フレン
チプレス、均質化、および／または超音波破砕次いで遠心分離によって破砕され
ペリプラズム／細胞質の内容物を放出し得る。

【０１５３】 ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドが細胞質ゾル内に封入体を形成
した場合、この封入体は、しばしば、細胞内膜および／または細胞外膜に結合さ
れ得、従って、主に、遠心分離後のペレット物質において見出される。次いで、
ペレット物質は、極端なｐＨで、あるいはジチオトレイトールのような還元剤の
存在下アルカリ性のｐＨで、またはトリスカルボキシエチルホスフィンの存在下
酸性のｐＨで、界面活性剤、グアニジン、グアニジン誘導体、尿素、または尿素
誘導体のようなカオトロピック剤で処理されて、封入体を放出させ、分断させ、
そして溶解させ得る。次いで、溶解されたＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリ
ペプチドは、ゲル電気泳動、免疫沈降などを使用して分析され得る。ＣＤ２０／
ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドを単離することが望ましい場合、単離は、本
明細書中およびＭａｒｓｔｏｎら，１９９０，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１８２：２
６４−７５に記載される方法のような標準的な方法を使用して達成され得る。

【０１５４】 いくつかの場合、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドは、単離の際
に生物学的に活性でなくても良い。ポリペプチドをその三次構造に「再折り畳み
」または変換し、そしてジスルフィド結合を生成するための種々の方法を使用し
て、生物学的活性を回複し得る。このような方法は、溶解されたポリペプチドを
、一定のｐＨ（通常は、７より上）および特定の濃度のカオトロピック剤（ｃｈ
ａｏｔｒｏｐｅ）の存在に曝露する工程を包含する。カオトロピック剤の選択は
、封入体溶解に使用される選択肢に非常に類似するが、通常、カオトロピック剤
はより低い濃度で使用され、溶解に使用されるカオトロピック剤と必ずしも同一
ではない。多くの場合、再折り畳み／酸化溶液はまた、還元剤、または特定の比
の還元剤およびその酸化形態を含んで、特定の酸化還元電位を生成し、タンパク
質のシステイン架橋の形成を生じるジスルフィドシャフリングを可能にする。通
常使用される酸化還元対のいくつかとしては、システイン／シスタミン、グルタ
チオン（ＧＳＨ）／ジチオビスＧＳＨ、塩化第二銅、ジチオトレイトール（ＤＴ
Ｔ）／ジチアンＤＴＴ、および２−２−メルカプトエタノール（ｂＭＥ）／ジチ
オ−ｂ（ＭＥ）が挙げられる。多くの場合において、共溶媒が、再折り畳みの効
率を増加するのに使用され得、この目的のために使用されるより一般的な試薬と
しては、グリセロール、種々の分子量のポリエチレングリコール、アルギニンな
どが挙げられる。

【０１５５】 封入体がＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの発現において有意な
程度まで形成されない場合、ポリペプチドは、主に、細胞ホモジネートの遠心分
離後の上清中に見出される。ポリペプチドは、さらに、本明細書中に記載される
ような方法を使用して上清から単離され得る。

【０１５６】 溶液からのＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの精製は、種々の技
術を使用して達成され得る。ポリペプチドが、ヘキサヒスチジン（ＣＤ２０／Ｉ
ｇＥ−レセプター様ポリペプチド／ヘキサＨｉｓ）のようなタグまたは他の小さ
なペプチド（例えば、ＦＬＡＧ（Ｅａｓｔｍａｎ Ｋｏｄａｋ Ｃｏ．，Ｎｅｗ
Ｈａｖｅｎ，ＣＴ）またはｍｙｃ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ
，ＣＡ））をそのカルボキシル末端またはアミノ末端のいずれかにおいて含むよ
うに合成された場合、カラムマトリクスがタグに対して高い親和性を有するアフ
ィニティーカラムに溶液を通すことによって一工程で精製され得る。

【０１５７】 例えば、ポリヒスチジンは、ニッケルに対して大きな親和性および特異性を有
して結合する。従って、ニッケルのアフィニティーカラム（例えば、Ｑｉａｇｅ
ｎ（登録商標）ニッケルカラム）は、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプ
チド／ポリＨｉｓの精製のために使用され得る。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ § １０．１１
．８（Ａｕｓｕｂｅｌら編，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ（１９９３））を参照のこと。

【０１５８】 さらに、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドは、ＣＤ２０／ＩｇＥ
−レセプター様ポリペプチドを特異的に認識し得、そして結合し得るモノクロー
ナル抗体の使用によって精製され得る。

【０１５９】 精製のための他の適切な手段はとしては、限定しないが、アフィニティークロ
マトグラフィー、免疫親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィ
ー、モレキュラーシーブクロマトグラフィー（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｉｅｖｅ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
、電気泳動（ネイティブゲル電気泳動を含む）、続くゲル溶出、および分取用等
電点電気泳動（「Ｉｓｏｐｒｉｍｅ」ｍａｃｈｉｎｅ／ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，Ｈ
ｏｅｆｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）が挙
げられる。いくつかの場合において、２つ以上の精製技術を、増加した純度を達
成するために組み合わせ得る。

【０１６０】 ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド（そのフラグメント、改変体、
および／または誘導体を含む）はまた、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら，１９６３，Ｊ
．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９；Ｈｏｕｇｈｔｅｎら，１９８５，
Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３２；ならびに、
ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．Ｒｏｃｋｆｏｒ
ｄ、ＩＬ （１９８４））に記載されるような当該分野で公知の技術を使用する
、化学合成法（例えば、固相ペプチド合成）によって調製され得る。このような
ポリペプチドは、アミノ末端にメチオニンを有するかまたは有さずに合成され得
る。化学的に合成されたＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドは、これ
らの参考文献に記載される方法を使用して酸化されて、ジスルフィド結合を形成
し得る。化学的に合成されたＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドは、
組換え的に産生されるかまたは天然の供給源から精製された対応のＣＤ２０／Ｉ
ｇＥ−レセプター様ポリペプチドに匹敵する生物学的活性を有すると期待され、
従って、組換えまたは天然のＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドと相
互交換可能に使用され得る。

【０１６１】 ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドを得る別の手段は、ＣＤ２０／
ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドが天然に見出される供給源の組織および／ま
たは流体のような生物学的サンプルからの精製による。このような精製は、本明
細書中に記載されるようなタンパク質精製のための方法を使用して行われ得る。
精製の間、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの存在が、例えば、組
換え的に産生されたＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドまたはそのペ
プチドフラグメントに対して調製された抗体を使用してモニターされ得る。

【０１６２】 核酸およびポリペプチドを産生するための多くのさらなる方法は、当該分野に
おいて公知であり、この方法は、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド
に対して特異性を有するポリペプチドを産生するために使用され得る。例えば、
Ｒｏｂｅｒｔｓら，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９４：
１２２９７−３０３を参照のこと。これは、ｍＲＮＡとそのコードされるペプチ
ドとの間の融合タンパク質の産生を記載する。Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９９，Ｃｕ
ｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ． ３：２６８−７３もまた参照のこと。
さらに、米国特許第５，８２４，４６９号は、特定の生物学的機能を実行し得る
オリゴヌクレオチドを得るための方法を記載する。この手順は、異種プールのオ
リゴヌクレオチドを生成する工程を包含し、この異種プールのオリゴヌクレオチ
ドはそれぞれが、５’ランダム化配列、中央部の予備選択配列、および３’ラン
ダム化配列を有する。得られる異種プールは、所望の生物学的機能を示さない細
胞の集団に導入される。次いで、細胞の亜集団を、予め決定された生物学的機能
を示すものについてスクリーニングする。その亜集団から、所望の生物学的機能
を実行し得るオリゴヌクレオチドが単離される。

【０１６３】 米国特許第５，７６３，１９２号；同第５，８１４，４７６号；同第５，７２
３，３２３号；および同第５，８１７，４８３号は、ペプチドまたはポリペプチ
ドを産生するためのプロセスを記載する。これは、確率論的な遺伝子またはその
フラグメントを産生し、次いで、その確率論的な遺伝子によってコードされた１
以上のタンパク質を産生する宿主細胞にこれらの遺伝子を導入することによって
達成される。次いで、この宿主は、所望の活性を有するペプチドまたはポリペプ
チドを産生する、これらのクローンを同定するためにスクリーニングされる。

【０１６４】 ペプチドまたはポリペプチドの産生するための別の方法は、Ａｔｈｅｒｓｙｓ
，Ｉｎｃ．によって出願されたＰＣＴ／ＵＳ９８／２００９４（ＷＯ９９／１５
６５０に記載される。これは、「Ｒａｎｄｏｍ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｆｏｒ Ｇｅｎｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」（
ＲＡＧＥ−ＧＤ）として知られており、このプロセスは、インサイチュ組換え方
法によって、内因性遺伝子の発現または遺伝子の過剰発現の活性化を含む。例え
ば、内因性遺伝子の発現は、非相同組換えまたは非正統的（ｉｌｌｅｇｉｔｉｍ
ａｔｅ）組換えによって、遺伝子の発現を活性化し得る標的細胞中に、調節配列
を組み込むことによって、活性化または増加される。この標的ＤＮＡは、まず、
照射に供せられ、そして遺伝子プロモーターが挿入される。このプロモーターは
、遺伝子の前方に最終的に配置され、遺伝子の転写を開始する。これは、所望の
ペプチドまたはポリペプチドの発現を引き起こす。

【０１６５】 これらの方法はまた、包括的なＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド
発現ライブラリーを作製するために使用され得、これは、続いて、種々のアッセ
イ（例えば、生化学的アッセイ、細胞アッセイおよび生物全体のアッセイ（例え
ば、植物、マウスなど））において、ハイスループット表現型スクリーニングの
ために使用され得ることが理解される。

【０１６６】 （化学的誘導体） ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの化学的に改変された誘導体は
、本明細書中に記載された開示を考慮して、当業者によって調製され得る。ＣＤ
２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド誘導体は、このポリペプチドに天然に
結合した分子の型または位置のいずれかにおいて異なる様式で改変される。誘導
体は、１以上の天然に結合した化学的な基の欠失によって形成される分子を含み
得る。配列番号２もしくは配列番号４またはＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポ
リペプチド改変体のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチドは、１以上のポ
リマーの共有結合によって改変され得る。例えば、選択されたポリマーは、代表
的に水溶性であり、その結果、それが結合するタンパク質は、水性環境（例えば
、生理学的な環境）下で沈殿しない。ポリマーの混合物が、適切なポリマーの範
囲内に含まれる。好ましくは、最終産物の調製物の治療学的用途のために、この
ポリマーは、薬学的に受容可能である。

【０１６７】 このポリマーの各々は、任意の分子量を有し得、そして分枝または非分枝であ
り得る。このポリマーの各々は、代表的に、約２ｋＤａと約１００ｋＤａとの間
の平均分子量を有する（この用語「約（およそ）」は、水溶性ポリマーの調製の
際に、いくつかの分子が示された分子量より多く、いくつかは少ない分子量を有
することを示す）。各ポリマーの平均分子量は、好ましくは、約５ｋＤａと約５
０ｋＤａの間、より好ましくは、約１２ｋＤａと約４０ｋＤａとの間、そして最
も好ましくは、約２０ｋＤａと約３５Ｄａとの間である。

【０１６８】 適切な水溶性ポリマーまたはその混合物としては、以下が挙げられるが、これ
らに限定されない：Ｎ−結合型またはＯ−結合型炭水化物、糖、ホスフェート、
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）（これは、モノ−（Ｃ_１−Ｃ_１０）、アルコ
キシ−、またはアリールオキシ−ポリエチレングリコールを含むタンパク質を誘
導体化するために使用されたＰＥＧの形態を含む）、モノメトキシ−ポリエチレ
ングリコール、デキストラン（例えば、約６ｋＤの低分子量デキストラン）、セ
ルロース、または他の炭水化物ベースのポリマー、ポリ−（Ｎ−ビニルピロリド
ン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピ
レンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（
例えば、グリセロール）、およびポリビニルアルコール。共有結合した配列番号
２または配列番号４のいずれかのアミノ酸配列を含むポリペプチド、またはＣＤ
２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド改変体のマルチマーを調製するために使
用され得る、二官能性架橋分子もまた、本発明に包括される。

【０１６９】 一般に、化学的誘導体化は、タンパク質と活性化ポリマー分子とを反応させる
ために用いられる適切な条件下で実施され得る。ポリペプチドの化学的誘導体を
調製するための方法は、一般に、（ａ）ポリペプチドと活性化ポリマー分子（例
えば、反応性エステルまたはポリマー分子のアルデヒド誘導体）とを反応させる
工程であって、この反応性が、配列番号２または配列番号４のいずれかのアミノ
酸配列を含むポリペプチド、あるいはＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチ
ド改変体が、１つ以上のポリマー分子との結合を生じる条件下で行われる、工程
、および（ｂ）反応産物を得る工程、を包含する。最適反応条件は、公知のパラ
メーターおよび所望の結果に基づいて決定される。例えば、ポリマー分子：タン
パク質の比がより大きくなればなるほど、ポリマー分子との結合の割合がより多
くなる。１つの実施形態において、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド
誘導体は、アミノ末端に単一のポリマー分子の部分を有し得る。例えば、米国特
許第５，２３４，７８４号を参照のこと。

【０１７０】 ポリペプチドのペグ化は、特に、例えば、以下の参考文献に記載されるような
、当該分野で公知のペグ化反応のいずれかによって実施され得る：Ｆｒａｎｃｉ
ｓら，Ｆｏｃｕｓ ｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ，３：４−１０（１９
９２）；ＥＰ ０１５４３１６；ＥＰ ０４０１３８４および米国特許第４，１
７９，３３７号。例えば、ペグ化は、本明細書において記載されるように、反応
性ポリエチレングリコール分子（または、アナログ反応水溶性ポリマー）とのア
シル化反応またはアルキル化反応を介して実施され得る。アシル化反応について
、選択されたポリマーは、単一反応性エステル基を有するべきである。還元的ア
ルキル化について、選択されたポリマーは、単一反応性アルデヒド基を有するべ
きである。反応性アルデヒドは、例えば、ポリエチレングリコールプロピオンア
ルデヒド（これは、水溶性である）であるか、またはモノＣ_１−Ｃ_１０アルコキ
シもしくはそのアリールオキシ誘導体である（米国特許第５，２５２，７１４号
を参照のこと）。

【０１７１】 別の実施形態において、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドは、ビオ
チンと化学的に結合し得、次いで、結合されたビオチン／ＣＤ２０／ＩｇＥレセ
プター様ポリペプチド分子は、アビジンへの結合が可能となり、その結果、四価
のアビジン／ビオチン／ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド分子を生じ
る。ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドはまた、ジニトロフェノール（
ＤＮＰ）またはトリニトロフェノール（ＴＮＰ）に共有結合し得、そして得られ
た結合体は、抗ＤＮＰまたは抗ＴＮＰ−ＩｇＭとともに沈澱して１０の結合価の
十量体の結合体を形成し得る。

【０１７２】 一般に、本発明のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド誘導体の投与に
よって緩和され得るかまたは調節され得る状態は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター
様ポリペプチドについて本明細書において記載される状態を含む。しかし、本明
細書において開示されるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド誘導体は、
誘導体化されていない分子と比較した場合、さらなる活性、増強した生物学的活
性もしくは減少した生物学的活性、または他の特性（例えば、増加した半減期も
しくは減少した半減期）を有し得る。

【０１７３】 （遺伝的に操作された非ヒト動物） 非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、または他のげっ歯類、ウサギ、ヤギ、
もしくはヒツジ、または他の家畜）は、本発明の範囲内にさらに含まれ、ここで
、ネイティブＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドをコードする遺伝子は
、崩壊されており（「ノックアウト」）、その結果、この遺伝子の発現レベルは
、有意に減少するかまたは完全に消失する。このような動物は、米国特許第５，
５５７，０３２号に記載されるような技術および方法を用いて調製され得る。

【０１７４】 本発明はさらに、非ヒト動物（例えば、マウス、ラット、または他のげっ歯類
、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、または他の家畜）を含み、ここで、この動物について
のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子のネイティブな形態または異種ＣＤ２０
／ＩｇＥレセプター遺伝子のいずれかは、この動物によって過剰に発現され、こ
れによって、「トランスジェニック」動物を作製する。このようなトランスジェ
ニック動物は、米国特許第５，４８９，７４３号およびＰＣＴ出願番号ＷＯ９４
／２８１２２に記載されるような、周知の方法を用いて調製され得る。

【０１７５】 本発明はさらに、非哺乳動物を含み、ここで、本発明の１つ以上のＣＤ２０／
ＩｇＥレセプター様ポリペプチドについてのプロモーターは、１つ以上のネイテ
ィブＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの発現のレベルを変更するため
に、（例えば、相同組換え方法を用いることによって）活性化させるかまたは不
活性化させるかのいずれかである。

【０１７６】 これらの非ヒト動物は、薬物候補スクリーニングのために用いられ得る。この
ようなスクリーニングにおいて、動物に対する薬物候補の影響が測定され得る。
例えば、薬物候補は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子の発現を減少または
増加させ得る。特定の実施形態において、産生されるＣＤ２０／ＩｇＥレセプタ
ー様ポリペプチドの量は、薬物候補への動物の曝露後、測定され得る。さらに、
特定の実施形態において、動物に対する薬物候補の実際の影響を検出し得る。例
えば、特定の遺伝子の過剰発現は、疾患または病的状態を、生じる得るか、また
は付随し得る。このような場合、遺伝子の発現を減少させる薬物候補の能力また
は病的状態を予防または抑制する薬物候補の能力を試験し得る。他の例において
、特に代謝産物（例えば、ポリペプチドのフラグメント）の産生は、疾患または
病的状態を、生じ得るか、または付随し得る。このような場合、このような代謝
産物の産生を減少させる薬物候補の能力または病的状態を予防するかまたは抑制
する薬物候補の能力を試験し得る。

【０１７７】 （マイクロアレイ） ＤＮＡマイクロアレイ技術は、本発明に従って利用され得ることが理解される
。ＤＮＡマイクロアレイは、固体支持体（例えば、ガラス）上に配置される核酸
の小型かつ高密度アレイである。アレイ内の各セルまたはエレメントは、その同
種ｍＲＮＡについてのハイブリダイゼーションのための標的として働くＤＮＡの
単一種の多数のコピーを有する。ＤＮＡマイクロアレイ技術を用いた発現プロフ
ァイリングにおいて、ｍＲＮＡはまず、細胞または組織サンプルから抽出され、
次いで、蛍光標識されたｃＤＮＡに酵素的に変換される。この物質は、このマイ
クロアレイにハイブリダイズされ、そして未結合のｃＤＮＡが洗浄によって除去
される。次いで、このアレイ上に示された個々の遺伝子の発現は、各標的ＤＮＡ
に特異的に結合する標識されたｃＤＮＡの量を定量化することによって可視化さ
れる。このように、幾千もの遺伝子の発現が、生物学的材料の単一サンプルから
、ハイスループットかつ並列様式で定量化され得る。

【０１７８】 このハイスループット発現プロファイリングは、以下を含むが、これらに限定
されない本発明のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様分子に関して、広い範囲の適用
を有する：治療のための標的としてＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様疾患関連遺伝
子の同定および検証；ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様分子およびそのインヒビタ
ーの分子毒物学；治験のための代理マーカーの集団および世代の階層化；ならび
に、ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）における選択的化合物の同定に
役立つことによって向上するＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様関連低分子薬物開発
。

【０１７９】 （選択的結合因子） 本明細書で使用される場合、用語「選択的結合因子」とは、１つ以上のＣＤ２
０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドに対して特異性を有する分子をいう。適切
な選択的結合因子としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：抗体
およびその誘導体、ポリペプチド、ならびに低分子。適切な選択的結合因子は、
当該分野で公知の方法を用いて調製され得る。本発明の例示的なＣＤ２０／Ｉｇ
Ｅレセプター様ポリペプチド選択的結合因子は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様
ポリペプチドの特定の部分に結合し得、これによってＣＤ２０／ＩｇＥレセプタ
ー様ポリペプチドレセプターへのこのポリペプチドの結合を阻害する。

【０１８０】 選択的結合因子（例えば、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドに結合
する抗体および抗体フラグメント）は、本発明の範囲内にある。抗体は、単一特
異性ポリクローナルを含むポリクローナル、モノクローナル（ＭＡｂｓ）、組換
え、キメラ、ヒト化（例えば、ＣＤＲ移植片化）、ヒト、単鎖および／または二
重特異性、ならびにそれらのフラグメント、改変体または誘導体であり得る。抗
体フラグメントは、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド上のエピトープ
に結合する抗体のそれらの部分を含む。このようなフラグメントの例としては、
全長の抗体の酵素的切断によって生じるＦａｂおよびＦ（ａｂ’）フラグメント
が挙げられる。他の結合フラグメントとしては、組換えＤＮＡ技術（例えば、抗
体可変領域をコードする核酸配列を含む組換えプラスミドの発現）によって生じ
るものが挙げられる。

【０１８１】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドに指向するポリクローナル抗体は
、動物（例えば、ウサギまたはマウス）において、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター
様ポリペプチドおよびアジュバントの複数回の皮下注射または腹腔内注射によっ
て産生される。ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドが、免疫させるため
にその種において免疫原性であるキャリアタンパク質（例えば、キーホールリン
ペットヘモシアニン、血清、アルブミン、ウシサイログロブリン、または大豆ト
リプシンインヒビター）と結合するのに有用であり得る。また、凝集剤（例えば
、ミョウバン）は、免疫応答を増強するために用いられる。免疫後、これらの動
物は、飼育され、そしてこの血清を抗ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチ
ド抗体力価についてアッセイする。

【０１８２】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドに指向するモノクローナル抗体は
、培養中の継代細胞株による抗体分子の産生を提供する任意の方法を用いて産生
される。モノクローナル抗体を調製するための適切な方法の例としては、Ｋｏｈ
ｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７（１９７５）のハイブリドー
マ法、およびヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．，１３３：３００１（１９８４））；Ｂｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａ
ｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ
，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）が挙げられる。ＣＤ２０／ＩｇＥレ
セプター様ポリペプチドと反応するモノクローナル抗体を産生するハイブリドー
マ細胞株もまた、本発明によって提供される。

【０１８３】 本発明のモノクローナル抗体は、治療剤としての使用のために改変され得る。
１つの実施形態は、特定の種由来の抗体あるいは特定の抗体のクラスまたはサブ
クラスに属する抗体において、重鎖および／または軽鎖の一部分が対応する配列
と同一であるか、または相同であるが、その鎖の残部は、別の種由来の抗体また
は別の抗体のクラスまたはサブクラスに属する抗体において、対応する配列と同
一であるかまたは相同である、「キメラ」抗体である。このような抗体のフラグ
メントもまた、これらのフラグメントが所望の生物学的活性を示す限り、含まれ
る。米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８１：６８５１−６８５５（１９８５）を参照のこと
。

【０１８４】 別の実施形態において、本発明のモノクローナル抗体は、「ヒト化」抗体であ
る。非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該分野で周知である。米国特許第
５，５８５，０８９号および同第５，６９３，７６２号を参照のこと。一般に、
ヒト化抗体は、非ヒトである供給源由来の抗体に導入された１つ以上のアミノ酸
残基を有する。ヒト化は、例えば、当該分野で所望の方法を用いて、実施され得
る。（米国特許第５，５８５，０８９号および同第５，６９３，７６２号を参照
のこと）。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源由来の抗体に導入された
１つ以上のアミノ酸残基を有する。ヒト化は、例えば、当該分野で公知の方法（
Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃ
ｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈ
ｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４−１５３６（１９８８））を
用いて、ヒト抗体の対応する領域についてのげっ歯類相補性決定領域（ＣＤＲ）
の少なくとも一部分を置換することによって実施され得る。

【０１８５】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドに結合するヒト抗体はまた、本発
明に包含される。内因性免疫グロブリン産生の非存在下で、ヒト抗体のレパート
リーを産生し得るトランスジェニック動物（例えば、マウス）を用いて、このよ
うな抗体は、必要に応じてキャリアと結合体化される、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプ
ター様抗原（すなわち、連続した少なくとも６アミノ酸を有する）での免疫によ
って産生される。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．，９０：２５５１−２５５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔ
ｓら，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍ
ａｎｎら，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．，７：３３（１９９３）を参照のこ
と。１つの方法において、このようなトランスジェニック動物は、この動物にお
けるの免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖をコードする内因性遺伝子
座を無能力化し、かつそのゲノム中に、ヒト重鎖および軽鎖のタンパク質をコー
ドする遺伝子座を挿入することによって生成される。次いで、部分的に改変され
た動物（すなわち、全てよりも少ない数の改変）を交雑育種して、所望の免疫系
の改変を全て有する動物を得る。免疫原を投与された場合、これらのトランスジ
ェニック動物は、これらの抗原に対して免疫特異性である、ヒト領域を含む可変
領域を含む、（例えば、マウスよりもむしろ）ヒトのアミノ酸配列を含む、ヒト
可変領域を有する抗体を産生する。ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９２
８およびＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９３／０６９２６を参照のこと。さらなる
方法は、米国特許第５，５４５，８０７号、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９１／
２４５およびＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ８９／０１２０７、ならびにＥＰ ５
４６０７３Ｂ１およびＥＰ ５４６０７３Ａ１に記載される。ヒト抗体はまた、
本明細書中に記載されるように、宿主細胞における組換えＤＮＡの発現によって
か、またはハイブリドーマ細胞における発現によって産生され得る。

【０１８６】 代替の実施形態において、ヒト抗体は、ファージ提示ライブラリーから産生さ
れ得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１（１
９９１）；Ｍａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１（１９９１）
）。これらは、糸状バクテイオファージの表面上の抗体レパートリーの提示を介
した模倣免疫選択、および選りぬきの抗原に対するそれらの結合によるファージ
の次の選択をプロセスする。１つのこのような技術は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／
ＵＳ９８／１７３６４に記載されており、これは、このようなアプローチを用い
た、ＭＰＬ−レセプターおよびｍｓｋ−レセプターに対する高親和性かつ機能的
アゴニストの抗体の単離を記載している。

【０１８７】 キメラ抗体、ＣＤＲ移植片化抗体、およびヒト化抗体は、組換え方法によって
代表的に産生される。抗体をコードする核酸は、宿主細胞中に導入され、そして
本明細書に記載される材料および手順を用いて発現される。好ましい実施形態に
おいて、抗体は、哺乳動物の宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）において産生され
る。モノクローナル（例えば、ヒト）抗体は、本明細書において記載されるよう
に、宿主細胞において組換えＤＮＡの発現によってかまたはハイブリドーマ細胞
における発現によって産生され得る。

【０１８８】 本発明の抗ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様抗体は、以下の任意の公知のアッセ
イ方法において用いられ得る：例えば、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプ
チドの検出および定量のための、競合結合アッセイ、直接的および間接的サンド
イッチアッセイ、ならびに免疫沈降アッセイ（Ｓｏｌａ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，ｐ
ｐ．１４７−１５８（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７））。これらの
抗体は、用いられるアッセイ方法に適切な親和性を有するＣＤ２０／ＩｇＥレセ
プター様ポリペプチドに結合する。

【０１８９】 診断適用について、特定の実施形態において、抗ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター
様抗体は、検出可能な部分で標識され得る。検出可能な部分は、直接的または間
接的のいずれかで検出可能なシグナルを産生し得るもののいずれかであり得る。
例えば、検出可能な部分は、放射性同位体（例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^３２Ｐ、^{３ ５} Ｓ、もしくは^１２５Ｉ）、蛍光化合物もしくは化学発光化合物（例えば、フル
オロセインイソチオシアネート、ローダミン、もしくはルシフェリン）、または
酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、もしくは西洋
ワサビペルオキシダーゼ（Ｂａｙｅｒら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．，１８４：１３８
−１６３（１９９０）））であり得る。

【０１９０】 競合的結合アッセイは、限られた量での抗ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様抗体
と結合するために、試験サンプルの分析物（ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリ
ペプチド）と競合する標識された標準物（例えば、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター
様ポリペプチド、またはその免疫学的反応性部分）の能力に依存する。試験サン
プル中のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの量は、抗体に結合する標
準的な量に反比例する。結合する標準物の量を決定するのを容易にするため、こ
れらの抗体は、競合の前か後に代表的に不溶化され、その結果、これらの抗体に
結合された標準物および分析物は、結合されていないままの標準物および分析物
から、慣用的に分離され得る。

【０１９１】 サンドイッチアッセイは、代表的に、検出および／または定量されるタンパク
質の２つの抗体（異なる免疫原性部分、またはエピトープにそれぞれ結合し得る
）の使用を含む。サンドイッチアッセイにおいて、試験サンプルの分析物は、代
表的に、固体支持体上に固定化される第１抗体に結合し、その後、第２の抗体が
この分析物に結合し、したがって、不溶性の３つの部分の複合体を形成する。例
えば、米国特許第４，３７６，１１０号を参照のこと。第２の抗体は、それ自体
に検出可能な部分を標識してもよいし（直接的サンドイッチアッセイ）、検出可
能な部分で標識された抗免疫グロブリン抗体を用いて測定してもよい（間接的サ
ンドイッチアッセイ）。例えば、サンドイッチアッセイの１つの型は、固相酵素
免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）であり、この場合、検出可能な部分は、酵素である
。

【０１９２】 選択的結合因子（抗ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様抗体を含む）はまた、イン
ビボでのイメージングに有用である。検出可能な部分で標識された抗体は、動物
に、好ましくは、血流中に投与され得、そして宿主における標識された抗体の存
在および位置が、アッセイされる。抗体は、核磁気共鳴、放射線学、または当該
分野で公知の他の検出手段のいずれかによって、動物において検出可能な任意の
部分で標識され得る。

【０１９３】 本発明の選択的結合因子（抗体を含む）は、治療剤として用いられ得る。これ
らの治療剤は、一般に、以下の点において、アゴニストまたはアンタゴニストで
ある：これらのいずれかが、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの少な
くとも１つの生物学的活性を、それぞれ、増強するかまたは減少させる。１つの
実施形態において、本発明のアンタゴニスト抗体は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプタ
ー様ポリペプチドに特異的に結合し得、そして、インビボまたはインビトロにお
いてＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの機能的活性を阻害または排除
し得る、抗体またはその結合フラグメントである。好ましい実施形態において、
選択的結合因子（例えば、アンタゴニスト抗体）は、少なくとも約５０％まで、
そして好ましくは、少なくとも約８０％まで、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポ
リペプチドの機能的活性を阻害する。別の実施形態において、選択的結合因子は
、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様結合パートナー（リガンドまたはレセプター）
と相互作用し得、これによって、インビボまたはインビトロにおいてＣＤ２０／
ＩｇＥレセプター様活性を阻害または排除する抗体であり得る。選択的結合因子
（アゴニストおよびアンタゴニスト抗ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様抗体を含む
）は、当該分野で周知のスクリーニングアッセイによって同定される。

【０１９４】 本発明はまた、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様選択的結合因子（例えば、抗体
）および生物学的サンプルにおいてＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド
のレベルを検出するのに有用な他の試薬を備えるキットに関する。このような試
薬は、検出可能な標識、ブロッキング血清、ポジティブおよびネガティブコント
ロールサンプル、ならびに検出試薬を含み得る。

【０１９５】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドは、「発現クローニング」ストラ
テジーを用いてＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様リガンドをクローニングするため
に使用され得る。放射線標識（１２５−ヨウ素）ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様
ポリペプチドまたは「親和性／活性−タグ化」ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポ
リペプチド（例えば、Ｆｃ融合またはアルカリホスファターゼ融合）を結合アッ
セイに用いて、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様リガンドを発現する細胞型または
細胞株または組織を同定し得る。次いで、このような細胞または組織から単離さ
れたＲＮＡは、ｃＤＮＡに変換され、そして哺乳動物細胞（例えば、ＣＯＳ、ま
たは２９３）中にトランスフェクトされて、発現ライブラリーを生成し得る。次
いで、放射線標識されたかまたはタグ化されたＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポ
リペプチドを親和性試薬として用いて、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様リガンド
を発現するこのライブラリーにおける細胞のサブセットを同定し、そして単離し
得る。次いで、ＤＮＡは、これらの細胞から単離され、哺乳細胞中にトランスフ
ェクトされて、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様リガンドを発現する細胞の画分が
、もとのライブラリーにおける発現よりも何倍も高い２次発現ライブラリーを生
成する。この富化プロセスは、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様リガンドを含む単
一組換えクローンが単離されるまで、何度も反復され得る。ＣＤ２０／ＩｇＥレ
セプター様リガンドの単離は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様シグナル伝達経路
の新規のアゴニストおよびアンタゴニストを同定または開発するのに有用である
。このようなアゴニストおよびアンタゴニストとしては、ＣＤ２０／ＩｇＥレセ
プター様リガンド、抗ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様リガンド抗体、低分子、ま
たはアンチセンスオリゴヌクレオチドが挙げられる。

【０１９６】 （ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド活性の他のモジュレーターにつ
いてのアッセイ） いくつかの状況において、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの活性
のモジュレーターである分子（すなわち、アゴニストまたはアンタゴニスト）を
同定することが所望され得る。ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドを調
節する天然の分子または合成分子は、１つ以上のスクリーニングアッセイ（例え
ば、本明細書において記載されるアッセイ）を用いて同定され得る。このような
分子はまた、エキソビボ様式、または注射によるインビボ様式、または経口送達
、移植装置などのいずれかによって投与され得る。

【０１９７】 「試験分子」とは、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの活性を調節
（すなわち、増加または減少）する能力についての評価下にある分子をいう。通
常、試験分子は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドと直接相互作用す
る。しかし、試験分子はまた、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド活性
を（例えば、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子発現に影響することによって
か、またはＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様結合パートナー（例えば、レセプター
またはリガンド）に結合することによって）間接的に調節し得ることも考慮され
る。１つの実施形態において、試験分子は、少なくとも約１０^−６Ｍ、好ましく
は約１０^−８Ｍ、より好ましくは約１０^−９Ｍ、そしてなおより好ましくは約１
０^−１０Ｍの親和性定数で、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドと結合
する。

【０１９８】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドと相互作用する化合物を同定する
ための方法は、本発明によって包含される、特定の実施形態において、ＣＤ２０
／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドは、試験分子とＣＤ２０／ＩｇＥレセプター
様ポリペプチドとの相互作用を可能にする条件下で試験分子とともにインキュベ
ートされ、そして相互作用の程度が測定され得る。試験分子は、実質的に精製さ
れた形態においてかまたは粗混合物においてスクリーニングされ得る。

【０１９９】 特定の実施形態において、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドアゴニ
ストまたはアンタゴニストは、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド、ま
たはそのリガンドと相互作用し、その活性を調節するタンパク質、ペプチド、炭
水化物、脂質、または低分子量の分子であり得る。ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター
様ポリペプチド発現を調節する分子は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプ
チドをコードする核酸に相補的であるか、またはＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様
ポリペプチドの発現を指向するかまたは制御する核酸配列に相補的である核酸を
含み、そしてこれらの核酸は、発現のアンチセンス調節因子として作用する。

【０２００】 一旦、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドと相互作用する場合に、試験
化合物が、同定されると、この分子は、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチ
ド活性を増加または減少させる能力についてさらに評価され得る。試験分子とＣ
Ｄ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドとの相互作用の測定は、いくつかの形態
で実施され得、これには、細胞ベースの結合アッセイ、膜結合アッセイ、液相ア
ッセイ、および免疫アッセイが挙げられる。一般に、試験分子は、特定の期間、
ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドと共にインキュベートされ、そしてＣ
Ｄ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド活性が、生物学的活性を測定するために
１以上のアッセイによって決定される。

【０２０１】 試験分子とＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドとの相互作用はまた、免
疫アッセイにおいて、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を使用して直接
的にアッセイされ得る。あるいは、本明細書中に記載されるようなエピトープタ
グを含むＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの改変形態は、溶液および免
疫アッセイ中で使用され得る。

【０２０２】 ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドが、結合パートナー（例えば、レセ
プターまたはリガンド）との相互作用を介して、生物学的活性を示す場合におい
て、種々のインビトロアッセイが、対応する結合パートナー（選択的結合因子、
レセプター、またはリガンド）へのＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの
結合を測定するために使用され得る。これらのアッセイは、結合パートナーに対
するＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの結合の速度および／または程度
を増加または減少させるために、試験分子をスクリーニングするために使用され
得る。１アッセイにおいて、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドは、マイ
クロタイタープレートのウェル中に免疫化される。次いで、放射標識したＣＤ／
ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド結合パートナー（例えば、ヨウ素化したＣＤ
／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド結合パートナー）および試験化合物は、こ
のウェルに、一時に一方を（いずれかの順序で）または同時に添加され得る。イ
ンキュベーション後に、この壁を洗浄し、そしてシンチレーション計数器を使用
して、放射活性を計数し、結合パートナーがＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペ
プチドに結合する範囲を決定する。代表的に、分子は、濃度範囲にわたって試験
され、そして試験アッセイの１以上を欠く一連のコントロールウェルは、結果の
評価の正確性のために使用され得る。この方法の代わりは、タンパク質の「位置
」を逆にする工程（すなわち、マイクロタイタープレートウェルに対してＣＤ／
ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド結合パートナーを免疫化し、試験分子および
放射標識したＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドをインキュベートし、そ
してＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド結合の範囲を決定する工程）を包
含する。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第１８章（Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌ
ｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．ならびにＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ１９９５）を参照の
こと。

【０２０３】 放射性標識に対する代替として、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドま
たはその結合パートナーは、ビオチンと結合体化され得、そしてビオチン化され
たタンパク質の存在が、次いで、酵素（例えば、わさびペルオキシダーゼ（ＨＲ
Ｐ）またはアルカリホスファターゼ（ＡＰ））（これらは、比色定量的に検出さ
れる）に結合したストレプトアビジンを使用して検出され得るか、またはストレ
プトアビジンの蛍光タグ化によって検出され得る。ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様
ポリペプチドまたはＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド結合パートナー（
これらは、ビオチンに結合されている）に対する抗体はまた、ＡＰまたはＨＲＰ
に連結した酵素連結ストレプトアビジンとの複合体のインキュベーションに続い
て、検出の目的のために使用され得る。

【０２０４】 ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドまたはＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様
ポリペプチド結合パートナーは、アガロースビーズ、アクリルビーズ、または他
の型のこのような不活性な固体相基材への付着によって固定化され得る。基材−
タンパク質複合体は、相補タンパク質および試験化合物を含む溶液内に配置され
得る。インキュベーション後、これらのビーズは、遠心分離によって沈澱され得
、そしてＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドとその結合パートナーとの間
の結合の量が、本明細書中に記載の方法を使用して評価され得る。あるいは、基
材−タンパク質複合体は、カラムを通過する、試験分子および相補タンパク質を
用いてカラム内に固定化され得る。ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドト
その結合パートナーとの間の複合体の形成が、次いで、本明細書中に記載の技術
（例えば、放射性標識または抗体結合）のいずれかを使用して評価され得る。

【０２０５】 ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド結合タンパク質とＣＤ／ＩｇＥ−レ
セプター様ポリペプチド結合パートナーとの間の複合体の形成を増加または減少
させる試験分子を同定するために有用な別のインビトロアッセイは、表面プラズ
モン共鳴検出器システム（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイシステム（Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ））である。ＢＩＡｃｏｒｅシステム
は、製造業者によって特定されるように利用される。このアッセイは、本質的に
、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドまたはＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様
ポリペプチド結合パートナーのいずれかの、デキストランでコートされたセンサ
ーチップ（これは、検出器に存在する）への共有結合を含む。次いで、この試験
化合物および他の相補タンパク質が、同時にかまたは連続的にかのいずれかで、
センサーチップを含むチャンバーに注入され得る。結合する相補タンパク質の量
は、センサーチップのデキストランコート側面に物理的に関係する分子の質量の
変化に基づいて評価され得、この分子の質量の変化は、検出器システムによって
測定される。

【０２０６】 いくつかの場合において、２つ以上の試験化合物を一緒に、ＣＤ／ＩｇＥ−レ
セプター様ポリペプチドとＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド結合パート
ナーとの間の複合体の形成を増加または減少させるそれらの能力について評価す
ることが所望され得る。これらの場合において、本明細書中に記載のアッセイは
、第一の試験化合物と同時にか、またはそれに続いてのいずれかで、このような
さらなる試験化合物を添加することによって容易に改変され得る。このアッセイ
における工程の残りは、本明細書中に記載される。

【０２０７】 インビトロアッセイ（例えば、本明細書中に記載されるもの）は、ＣＤ／Ｉｇ
Ｅ−レセプター様ポリペプチドとＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド結合
パートナーとの間の複合体の形成に対する効果について、多数の化合物をスクリ
ーニングするために、有利に使用され得る。これらのアッセイは、ファージディ
スプレイ、合成ペプチド、および化学合成ライブラリーにおいて生成された化合
物をスクリーニングするために、自動化され得る。

【０２０８】 ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドとＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリ
ペプチド結合パートナーとの間の複合体の形成を増加または減少される化合物は
また、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドまたはＣＤ／ＩｇＥ−レセプタ
ー様ポリペプチド結合パートナーＦのいずれかを発現する細胞および細胞系統を
使用して、細胞培養物においてスクリーニングされ得る。細胞および細胞系統は
、任意の哺乳動物から得られ得るが、好ましくは、ヒト、または他の霊長類、イ
ヌ類またはげっ歯類の供給源由来である。ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプ
チドの、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド結合パートナーを発現する細
胞への、その表面での結合は、試験化合物の存在または非存在下で評価され、そ
して結合の程度が、例えば、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド結合パー
トナーに対するビオチン化抗体を使用するフローサイトメトリーによって決定さ
れ得る。細胞培養アッセイは、本明細書中に記載されるタンパク質結合アッセイ
において、陽性であるとスコア付けされる化合物をさらに評価するために有利に
使用され得る。

【０２０９】 細胞培養物はまた、薬物候補の影響をスクリーニングするために使用され得る
。例えば、薬物候補は、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様遺伝子の発現を減少または
増加させ得る。特定の実施形態において、生成されるＣＤ／ＩｇＥ−レセプター
様ポリペプチドまたはＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドフラグメントの
量は、細胞培養物の薬物候補への曝露の後に測定され得る。特定の実施形態にお
いて、細胞培養物への薬物候補の実際の影響が検出され得る。例えば、特定の遺
伝子の過剰発現は、細胞培養物への特定の影響を有し得る。このような場合に、
遺伝子の発現を増加または減少させる薬物候補の能力、または細胞培養物に対す
る特定の影響を予防または阻害するその能力が試験され得る。他の例において、
特定の代謝産物（例えば、ポリペプチドのフラグメントなど）の生成が、疾患ま
たは病的状態を生じ得るか、またはそれらと関連し得る。このような場合、細胞
培養物におけるこのような代謝産物の生成を減少する薬物候補の能力が試験され
得る。

【０２１０】 酵母２ハイブリッド系（Ｃｈｉｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ、８８：９５７８〜９５８３（１９９１）を使用して、ＣＤ／ＩｇＥ
−レセプター様ポリペプチドに結合するかまたは相互作用する、新規なポリペプ
チドを同定し得る。例として、酵母ＧＡＬ４−ＤＮＡ結合ドメインと融合するＣ
Ｄ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの細胞質ドメインをコードするＤＮＡを
含むハイブリッド構築物は、２ハイブリッドおとり（ｂａｉｄ）プラスミドとし
て使用され得る。スクリーニングから出現する陽性クローンは特徴付けられ、さ
らに相互作用タンパク質を同定し得る。

【０２１１】 （内部移行タンパク質） ｔａｔタンパク質配列（ＨＩＶ由来）が、タンパク質を細胞内に内部移行させ
るために、使用され得る。例えば、Ｆａｌｗｅｌｌら、１９９４、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：６６４−６８を参照のこと。例
えば、ＨＩＶ ｔａｔタンパク質の１１アミノ酸の配列（ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲ
Ｒ；配列番号２４）（「タンパク質形質導入ドメイン」、またはＴＡＴ ＰＤＴ
と称される）は、細胞の細胞質膜および核膜を横切る送達を媒介するとして記載
されている。Ｓｃｈｗａｒｚｅら，１９９９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８５：１５６
９−７２；およびＮａｇａｈａｒａら，１９９８，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．４：１４４
９−５２を参照のこと。これらの手順において、ＦＩＴＣ構築物（ＦＩＴＣ−Ｇ
ＧＧＧＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号２５）（これは、腹腔内投与に続いて
組織を貫通する）が調製され、そしてこのような構築物の細胞への結合が、蛍光
細胞分析分離（ＦＡＣＳ）分析によって検出される。ｔａｔ−β−ｇａｌ融合タ
ンパク質で処置された細胞は、β−ｇａｌ活性を示す。注入に続いて、このよう
な構築物の発現が、多くの組織（肝臓、腎臓、肺、心臓および脳組織）において
検出され得る。このような構築物は、細胞に入るためにある程度の変性を受け、
そしてそれ自体、細胞内への移入に続いて、再折り畳みを必要とし得ると考えら
れる。

【０２１２】 従って、ｔａｔタンパク質配列は、所望のポリペプチドを細胞に内部移入させ
るために使用され得ることが理解される。例えば、ｔａｔタンパク質配列を使用
して、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様アンタゴニスト（例えば、抗ＣＤ／ＩｇＥ−
レセプター様選択的結合因子、低分子、可溶性レセプター、またはアンチセンス
オリゴヌクレオチド）は、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様分子の活性を阻害するた
めに、細胞内投与され得る。本明細書中で使用される場合、用語「ＣＤ／ＩｇＥ
−レセプター様分子」は、本明細書中に記載されるような、ＣＤ／ＩｇＥ−レセ
プター様核酸分子およびＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの両方をいう
。所望ならば、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様タンパク質自体はまた、これらの手
順を使用して、細胞に内部投与され得る。Ｓｔｒａｕｓ，１９９９，Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２８５：１４６６−６７をまた参照のこと。

【０２１３】 （ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドを使用する細胞供給源の同定） 本発明の特定の実施形態に従って、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド
と関連する特定の細胞型の供給源を決定することを可能することが有用であり得
る。例えば、適切な治療を選択する際の補助として疾患または病的状態の起源を
決定することが有用であり得る。特定に実施形態において、ＣＤ／ＩｇＥ−レセ
プター様ポリペプチドをコードする核酸は、プローブとして使用されて、このよ
うなプローブを用いて細胞の核酸をスクリーニングすることによって、本明細書
中に記載の細胞を同定し得る。他の実施形態において、抗ＣＤ／ＩｇＥ−レセプ
ター様ポリペプチド抗体を使用して、細胞におけるＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様
ポリペプチドの存在について試験し得、従って、このような細胞が本明細書中に
記載される型の細胞か否かを決定し得る。

【０２１４】 （治療的使用） 本発明のＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様核酸、ポリペプチド、ならびにアゴニス
トおよびアンタゴニストで処置、診断、寛解または予防され得る、急性および慢
性疾患の非排他的なリストには、以下が挙げられる： ・癌（肺癌。脳癌、乳癌、造血系の癌、前立腺癌、卵巣癌、および精巣癌が挙
げられるがこれらに限定されない）。他の癌もまた、本発明の範囲内に含まれる
。

【０２１５】 ・異常な細胞増殖に関する疾患（動脈硬化症および血管再狭窄が挙げられるが
、これらに限定されない）。細胞の不適切な増殖によって影響される他の疾患も
また、本発明の範囲内に含まれる。

【０２１６】 ・アレルゲンに対する不適切な応答から生じる病理。このような疾患の例とし
ては、アレルギー、喘息、皮膚炎、およびアナフィラキシーショックが挙げられ
るが、これらに限定されない。アレルギー応答の機能不全によって影響される他
の疾患は、本発明の範囲内に含まれる。

【０２１７】 ・免疫系の機能不全に関連する疾患および状態（慢性関節リウマチ、乾癬性関
節炎、炎症性関節炎、変形性関節症、炎症性関節疾患、自己免疫疾患、多発性硬
化症、狼瘡、糖尿病、炎症性腸疾患、移植片拒絶、および対宿主性移植片病が挙
げられるが、これらに限定されない）。免疫系の機能不全によって影響される他
の疾患は、本発明の範囲内に含まれる。

【０２１８】 ・生殖性疾患および障害（不妊、流産、早期分娩（ｌａｂｏｒ）および出産（
ｄｅｌｉｖｅｒｙ）、ならびに子宮内膜症が挙げられるがこれらに限定されない
）。生殖系の他の疾患は、本発明の範囲内に含まれる。

【０２１９】 提示されるＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの望ましくないレベルに
関係する他の疾患は、本発明の範囲内に含まれる。望ましくないレベルにはこれ
らのポリペプチドの、過剰なレベルおよび／または正常以下のレベルが挙げられ
る。

【０２２０】 （ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド組成物および投与） 治療組成物は、本発明の範囲内である。このようなＣＤ／ＩｇＥ−レセプター
様ポリペプチド薬学的組成物は、治療有効量のＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリ
ペプチドまたはＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様核酸分子を、投与の様式と適合する
ように選択された薬学的にまたは生理学的に受容可能な処方薬剤との混合物中に
、含み得る。薬学的組成物は、治療有効量の１以上のＣＤ／ＩｇＥ−レセプター
様ポリペプチド選択的結合因子を、投与の様式と適合するように選択された薬学
的にまたは生理学的に受容可能な処方薬剤との混合物中に、含み得る。

【０２２１】 受容可能な処方物材料は、好ましくは、使用される投薬量および濃度で、レシ
ピエントに対して非毒性である。

【０２２２】 薬学的組成物は、例えば、組成物のｐＨ、浸透圧、粘度、清澄性、色、等張性
、におい、無菌性、安定性、解離もしくは放出の速度、吸着、または透過を改変
、維持または保存するための処方物材料を含み得る。適切な処方物材料としては
、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アミノ酸（例えば、グリシン、
グルタミン、アスパラギン、アルギニン、またはリジン）、抗菌剤、抗酸化剤（
例えば、アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム、または亜硫酸水素ナトリウム（ｓ
ｏｄｉｕｍ ｈｙｄｒｏｇｅｎ−ｓｕｌｆｉｔｅ））、緩衝液（例えば、ホウ酸
塩、炭酸水素塩、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩、または他の有機酸
）、バルク剤（例えば、マンニトールまたはグリシン）、キレート化剤（例えば
、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））、複合体化剤（例えば、カフェイン、
ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリン、またはヒドロキシプロピル−
β−シクロデキストリン）、増量剤、単糖類、二糖類、および他の炭水化物（例
えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン）、タンパク質（例えば、血
清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）、着色剤、芳香剤および希釈
剤、乳化剤、親水性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）、低分子量ポリ
ペプチド、塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）、保存剤（例えば、塩化ベン
ズアルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール
、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸、または
過酸化水素）、溶媒（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、またはポリ
エチレングリコール）、糖アルコール（例えば、マンニトールまたはソルビトー
ル）、懸濁剤、界面活性剤または湿潤剤（例えば、プルロニック（ｐｌｕｒｏｎ
ｉｃ）；ＰＥＧ；ソルビタンエステル；ポリソルベート（例えば、ポリソルベー
ト２０またはポリソルベート８０）；トリトン；トロメタミン；レシチン；コレ
ステロールまたはチロキサポール（ｔｙｌｏｘａｐａｌ））、安定性増強剤（例
えば、スクロースまたはソルビトール）、張度増強剤（例えば、ハロゲン化アル
カリ金属（好ましくは塩化ナトリウムまたは塩化カリウム）、またはマンニトー
ル、ソルビトール）、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤および／または薬学的なア
ジュバント。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ 第１８版，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈ
ｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９０を参照のこと。

【０２２３】 最適な薬学的組成物は、当業者によって、例えば、意図される投与経路、送達
形式、および所望の投薬量に依存して決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前出を参照のこと。
このような組成物は、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様分子の、物理的な状態、安定
性、インビボ放出の速度、およびインビボクリアランスの速度に影響し得る。

【０２２４】 薬学的組成物における主要なビヒクルまたはキャリアは、自然状態では、水性
または非水性のいずれかであり得る。例えば、注入のための適切なビヒクルまた
はキャリアは、水、生理食塩水溶液、または人工脳脊髄液であり得、非経口投与
のための組成物において一般的な他の材料で補充され得る。中性の緩衝化生理食
塩水または血清アルブミンと混合された生理食塩水は、さらなる例示的なビヒク
ルである。他の例示的な薬学的組成物は、約ｐＨ７．０〜８．５のＴｒｉｓ緩衝
液または約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸塩緩衝液を含み、これはさらに、ソルビト
ールまたは適切な置換物を含み得る。本発明の１つの実施形態において、ＣＤ／
ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド組成物は、所望の程度の純度を有する選択さ
れた組成物を、任意の処方薬剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕ
ｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，前出）と混合することによって、凍結乾燥ケー
クまたは水溶液の形態で、保存のために調製され得る。さらに、ＣＤ／ＩｇＥ−
レセプター様ポリペプチド産物は、スクロースのような適切な賦形剤を使用して
凍結乾燥物として処方され得る。

【０２２５】 このＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの薬学的組成物は、非経口送達
のために選択され得る。あるいは、これらの組成物は、吸入または消化管を介す
る送達（例えば、経口）のために、選択され得る。このような薬学的に受容可能
な組成物の調製は、当該分野の技術の範囲内にある。

【０２２６】 処方成分が、投与の部位に受容可能な濃度で存在する。例えば、緩衝液は、生
理学的ｐＨまたはわずかにより低いｐＨ（典型的に、約５〜約８のｐＨ範囲内）
にこの組成物を維持するために使用される。

【０２２７】 非経口投与が意図される場合、本発明における使用のための治療組成物は、薬
学的に受容可能なビヒクルに所望のＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様分子を含む、発
熱物質を含まない非経口的に受容可能な水溶液の形態であり得る。非経口注入の
ために特に適切なビヒクルは、滅菌蒸留水であり、ここで、ＣＤ／ＩｇＥ−レセ
プター様分子は、滅菌の等張溶液として処方され、適切に保存される。なお別の
調製は、所望の分子と、薬剤（例えば、注入可能なミクロスフェア、生体内腐食
可能（ｂｉｏ−ｅｒｏｄｉｂｌｅ）粒子、ポリマー化合物（例えば、ポリ乳酸ま
たはポリグリコール酸）、ビーズまたはリポソーム）との処方物に関し得、これ
は、次いで蓄積注射を介して送達され得る産物の制御放出または持続放出を提供
する。ヒアルロン酸もまた使用され得、そしてこれは、循環における持続時間を
促進する効果を有し得る。所望の分子の導入のための他の適切な手段は、移植可
能な薬物送達デバイスを含む。

【０２２８】 １つの実施形態において、薬学的組成物は、吸入のために処方され得る。例え
ば、ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドは、吸入のための乾燥粉末として
処方され得る。ＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドまたは核酸分子の吸入
溶液はまた、エアロゾル送達のための噴霧剤と共に処方され得る。なお別の実施
形態において、溶液は、噴霧され得る。肺投与が、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９４／２
００６９にさらに記載され、これは化学的に改変されたタンパク質の肺送達を記
載する。

【０２２９】 特定の処方物が、経口投与され得ることもまた意図される。本発明の１つの実
施形態において、このよう様式で投与されるＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペ
プチドが、固体投薬形態（例えば、錠剤またはカプセル）の調合において慣用的
に使用されるキャリアを伴うか、または伴わず処方され得る。例えば、カプセル
は、バイオアベイラビリティーが最大化され、そして前全身的分解（ｐｒｅ−ｓ
ｙｓｔｅｍｉｃ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ）が最小化される場合に胃腸管内の時
点で処方物の活性部分を放出するように設計され得る。さらなる薬剤が、ＣＤ／
ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの吸収を容易にするために含まれ得る。希釈
剤、芳香剤、低融点ワックス、植物油、潤滑剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤、および結
合剤もまた使用され得る。

【０２３０】 別の薬学的組成物は、錠剤の製造に適切な非毒性賦形剤との混合物中に、有効
量のＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドを含み得る。錠剤を滅菌水または
別の適切なビヒクルに溶解することによって、溶液が、単位用量形態で調製され
得る。適切な賦形剤は以下を含むが、これらに限定されない：不活性な希釈剤（
例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸水素ナトリウム、ラクトー
ス、あるいはリン酸カルシウム）；または結合剤（例えば、デンプン、ゼラチン
またはアカシア）；あるいは潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステ
アリン酸またはタルク）。

【０２３１】 さらなるＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの薬学的組成物は、当業者
に明らかであり、持続送達処方物または制御送達処方物中にＣＤ／ＩｇＥ−レセ
プター様ポリペプチドを含む処方物を含む。種々の他の持続送達手段または制御
送達手段（例えば、リポソームキャリア、生体内腐食可能な微粒子あるいは多孔
性ビーズおよび蓄積注射）を処方するための技術はまた、当業者に公知である。
例えば、ＰＣＴ／ＵＳ９３／００８２９（これは、薬学的組成物の送達のための
多孔性ポリマー性微粒子の制御放出を記載する）を参照のこと。徐放性調製物の
さらなる例としては、成形された物品の形態（例えば、フィルム、またはマイク
ロカプセル）の半透過性ポリマーマトリクスを含む。徐放性マトリクスとしては
、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号
および欧州特許第０５８４８１号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタ
メートとのコポリマー（Ｓｉｄｍａｎら，１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ
２２：５４７−５６）、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）（Ｌａ
ｎｇｅｒら，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７
−２７７およびＬａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１
０５）、エチレンビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒら，前出）またはポリ−Ｄ（
−）−３−ヒドロキシ酪酸（欧州特許第１３３９８８号）が挙げられ得る。徐放
性組成物はまた、リポソームを含み得、これは、当該分野で公知のいくつかの方
法のいずれかによって調製され得る。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎら，１９８５，
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８−９２；およ
び欧州特許第０３６６７６号、同第０８８０４６号、および同第１４３９４９号
を参照のこと。

【０２３２】 インビボ投与のために使用されるＣＤ／ＩｇＥ−レセプター様の薬学的組成物
は、代表的に無菌でなければならない。このことは、滅菌濾過膜を介する濾過に
よって達成され得る。組成物が、凍結乾燥される場合、この方法を使用する滅菌
は、凍結乾燥および再構築の前または後のいずれかで実施され得る。非経口投与
のための組成物は、凍結乾燥された形態または溶液で保存され得る。さらに、非
経口組成物は、一般に、滅菌アクセスポートを有する容器（例えば、静脈内溶液
バッグまたは皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアル）内に
配置される。

【０２３３】 一旦、薬学的組成物が処方されると、それは、滅菌バイアル中に溶液、懸濁液
、ゲル、エマルジョン、固体、または脱水和粉末または凍結乾燥粉末として保存
され得る。このような処方物は、すぐに使用できる形態または投与の前に再構成
を必要とする形態（凍結乾燥された形態）のいずれかで保存され得る。

【０２３４】 特定の実施形態において、本発明は、単一用量投与単位を生成するためのキッ
トに関する。このキットは、各々、乾燥タンパク質を有する第一の容器および水
性処方物を有する第二の容器の両方を含み得る。また、本発明の範囲内には、単
一および多チャンバーの予め充填されたシリンジ（例えば、液体シリンジおよび
分散シリンジ（ｌｙｏｓｙｒｉｎｇｅ））を含むキットが含まれる。

【０２３５】 治療的に使用されるＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様の薬学的組成物の有効量
は、例えば、治療の内容および目的に依存する。当業者は、処置のための適切な
投薬レベルが、従って、送達される分子、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様分子
が使用されている指標、投与の経路、および患者のサイズ（体重、体表面、また
は器官の大きさ）および状態（年齢および一般的な健康）に、部分的に依存して
変化することを理解する。従って、臨床家は、最適な治療効果を得るために、投
薬量を力価決定し（ｔｉｔｅｒ）、投与経路を改変し得る。代表的な投薬量は、
上記の因子に依存して、約０．１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ以上までの範
囲であり得る。他の実施形態において、投薬量は、０．１μｇ／ｋｇ〜約１００
ｍｇ／ｋｇまで；または１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまで；または５μｇ
／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまでの範囲であり得る。

【０２３６】 投薬の頻度は、使用される処方物中でのＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様分子
の薬物動態学のパラメーターに依存する。典型的に、臨床家は、所望の効果を達
成する投薬量に達するまで組成物を投与する。組成物は、従って、組成物は、経
時的な単一用量として、２以上の用量（これは、同量の所望の分子を含んでも、
含まなくてもよい）として、あるいは移植デバイスまたはカテーテルを介する連
続的な注入として、投与され得る。適切な投薬量のさらなる改良は、当業者によ
って慣用的になされ、そしてそれらによって慣用的に実施される課題の範囲内で
ある。適切な投薬量は、適切な用量−応答データの使用を介して確認され得る。

【０２３７】 薬学的組成物の投与の経路は、以下のような公知の方法と一致する：経口的に
；静脈内、腹腔内、脳内（実質内の）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内
、または病巣内の経路による注入を介して；徐放性系によって；または移植デバ
イスによって。所望される場合、これらの組成物は、ボーラス注射によって投与
され得るか、または注入によって連続的に投与され得るか、または移植デバイス
によって投与され得る。

【０２３８】 あるいはまたはさらに、組成物は、その上に所望の分子が吸収されるかまたは
カプセル化される膜、スポンジ、または他の適切な材料の移植を介して局所的に
投与され得る。移植デバイスが使用される場合、このデバイスは、任意の適切な
組織または器官に移植され得、そして所望の分子の送達は、拡散、時限放出ボー
ラスまたは連続的な投与を介し得る。

【０２３９】 いくつかの場合において、エキソビボ様式において、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセ
プター様薬学的組成物を使用することが所望され得る。このような例において、
患者から除去された細胞、組織、または器官は、これらの細胞、組織、および／
または器官が引き続いて患者に移植し戻された後にＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプタ
ー様薬学的組成物に曝露される。

【０２４０】 他の場合において、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドは、本明細
書中に記載されるような方法を使用して、遺伝的に操作されて、ＣＤ２０／Ｉｇ
Ｅ−レセプター様ポリペプチドを発現および分泌する特定の細胞を移植すること
によって送達され得る。このような細胞は、動物細胞またはヒト細胞であり得、
そして自己、異種、または外因性の細胞であり得る。必要に応じて、細胞は、不
死化され得る。免疫学的応答の機会を減少するために、細胞は、周囲の組織の浸
潤を回避するために、カプセル化され得る。カプセル化材料は、典型的に、生体
適合性の半浸透性ポリマー性包囲物または膜であり、これらは、タンパク質産物
の放出を可能にするが、患者の免疫系または周囲の組織からの他の有害な因子に
よって細胞の破壊を防止する。

【０２４１】 本発明のさらなる実施形態は、治療ポリペプチドのインビトロ産生と、遺伝子
治療または細胞治療による治療ポリペプチドの産生および送達との両方のための
、細胞および方法（例えば、相同組換えおよび／または他の組換え産生方法）に
関する。相同組換えおよび他の組換えの方法を使用して、通常は転写に対してサ
イレントなＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様遺伝子（すなわち、過少発現される
遺伝子）を含む細胞を改変し得、これによって、治療有効量のＣＤ２０／ＩｇＥ
−レセプター様ポリペプチドを発現する細胞を産生し得る。

【０２４２】 相同組換えは、もともとは、遺伝子を標的化して転写活性な遺伝子における変
異を誘導するか、または修正するために開発された技術である。Ｋｕｃｈｅｒｌ
ａｐａｔｉ，１９８９，Ｐｒｏｇ．ｉｎ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．＆ Ｍ
ｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６：３０１。基本的な技術が、特定の変異を哺乳動物ゲノム
の特定の領域に導入するため（Ｔｈｏｍａｓら、１９８６，Ｃｅｌｌ ４４：４
１９−２８；ＴｈｏｍａｓおよびＣａｐｅｃｃｈｉ，１９８７，Ｃｅｌｌ ５１
：５０３−５１２；Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎら、１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：８５８３−８７）、または欠損遺伝子における特定の
変異を修正するため（Ｄｏｅｔｓｃｈｍａｎら、１９８７，Ｎａｔｕｒｅ ３３
０：５７６−５７８）の方法として、開発された。例示的な相同組換え技術は、
米国特許第５，２７２，０７１号（欧州特許第９１９３０５１号、同第５０５５
００号；ＰＣＴ／ＵＳ９０／０７６４２、ＰＣＴ公開番号ＷＯ ９１／０９９５
５）に記載されている。

【０２４３】 相同組換えによって、ゲノムに挿入されるべきＤＮＡ配列は、それを標的ＤＮ
Ａに付着させることによって、目的の遺伝子の特定の領域に指向され得る。この
標的ＤＮＡは、ゲノムＤＮＡの領域に相補的（相同）であるヌクレオチド配列で
ある。ゲノムの特定の領域に対して相補的な標的ＤＮＡの小さな断片は、ＤＮＡ
複製プロセスの間に、親鎖と接触される。これは、細胞に挿入されてハイブリダ
イズしたＤＮＡの一般的な特性であり、そして従って、共有される相同領域を介
して、内因性ＤＮＡの他の断片と組み換わる。この相補鎖が、変異または異なる
配列またはさらなるヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドに付着される場合に
は、これはまた、この組換えの結果として新たに合成された鎖に組み込まれる。
プルーフリーディング機能の結果として、ＤＮＡの新たな配列がテンプレートと
して働くことが可能である。従って、移入されたＤＮＡは、ゲノムに組み込まれ
る。

【０２４４】 ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドと相互作用し得るかまたはその
発現を制御し得るＤＮＡの領域（例えば、隣接配列）が、標的ＤＮＡのこれらの
断片に付着する。例えば、プロモーター／エンハンサーエレメント、サプレッサ
、または外因性転写調節エレメントが、意図される宿主細胞のゲノムに、所望の
ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドをコードするＤＮＡの近位に、こ
のＤＮＡの転写に影響を与えるに十分な配向で、挿入される。制御エレメントは
、この宿主細胞ゲノムに存在するＤＮＡの部分を制御する。従って、所望のＣＤ
２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの発現は、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプ
ター様遺伝子自体をコードするＤＮＡのトランスフェクションによってではなく
、むしろ、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの転写のための認識可
能なシグナルを有する内因性遺伝子配列を提供するＤＮＡ調節セグメントと結合
した標的ＤＮＡ（目的の内因性遺伝子と相同の領域を含む）の使用によって、達
成され得る。

【０２４５】 例示的な方法において、細胞における所望の標的遺伝子（すなわち、所望の内
因性細胞遺伝子）の発現は、予め選択された部位における細胞ゲノムへの相同組
換えを介して、少なくとも調節配列、エキソン、およびスプライスドナー部位を
含むＤＮＡの導入によって、変更される。これらの構成成分は、新たな転写ユニ
ットの産生を実際に生じるような様式で、染色体（ゲノム）ＤＮＡに導入される
（ここで、ＤＮＡ構築物に存在する調節配列、エキソン、およびスプライスドナ
ー部位は、内因性遺伝子に作動可能に連結する）。染色体ＤＮＡへのこれらの構
成成分の導入の結果として、所望の内因性遺伝子の発現が変化する。

【０２４６】 本明細書中で記載されるように、変化された遺伝子発現は、通常は得られたま
まの細胞においてサイレントな（発現されていない）遺伝子の活性化（または発
現させる）、ならびに得られたままの細胞において生理学的に有意なレベルでは
発現されない遺伝子の発現の増加を包含する。この実施形態はさらに、調節また
は誘導のパターンを変化させる工程を包含し、その結果、これは、得られたまま
の細胞において生じる調節または誘導のパターンとは異なり、そして得られたま
まの細胞において発現される遺伝子の発現を減少（排除を含む）させる。

【０２４７】 細胞の内在性ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様遺伝子からのＣＤ２０／ＩｇＥ
−レセプター様ポリペプチドの産生を増加するかまたはこれを引き起こすために
相同定組換えが使用され得る１つの方法は、最初に、相同性組換えを使用して、
部位特異的組換え系由来の組換え配列（例えば、Ｃｒｅ／ｌｏｘＰ、ＦＬＰ／Ｆ
ＲＴ）（Ｓａｕｅｒ，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ．Ｏｐｉｎｉｏｎ．Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ．，５：５２１−５２７；Ｓａｕｅｒ，１９９３，Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ．，２２５：８９０−９００）を、細胞の内在性ｇ
ゲノムＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドコード領域の上流（すなわ
ち、５’）に配置する工程を包含する。ゲノムＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様
ポリペプチドコード領域のすぐ上流に配置された部位に対して相同性の組換え部
位を含むプラスミドは、適切なリコンビナーゼ酵素と共に、改変された細胞株に
導入される。このリコンビナーゼによって、プラスミドは、このプラスミドの組
換え部位を介して、この細胞株のゲノムＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペ
プチドコード領域のすぐ上流に位置する組換え部位に組込み得る（Ｂａｕｂｏｎ
ｉｓおよびＳａｕｅｒ、１９９３，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２１
：２０２５−２０２９；Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら、１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５
１：１３５１−１３５５）。転写を増加させることが知られている任意の側方配
列（例えば、エンハンサー／プロモーター、イントロン、翻訳エンハンサー）は
、このプラスミド中に適切に配置される場合、細胞の内在性ＣＤ２０／ＩｇＥ−
レセプター様遺伝子からの新たなまたは増加したＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター
様ポリペプチド産生を生じる新たなまたは改変された転写単位を作製するような
様式で一体化する。

【０２４８】 部位特異的組換え配列が細胞の内在性ゲノムＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様
ポリペプチドコード領域のすぐ上流に配置された細胞株を使用するさらなる方法
は、細胞株のゲノムの他の位置に第２の組換え部位を導入するために相同性組換
えを使用することである。適切な組換え酵素は、次いで、二組換え部位細胞株に
導入され、組換え現象（欠失、転化、および転移）を生じ（Ｓａｕｅｒ，１９９
４，Ｃｕｒｒｅｎｔ．Ｏｐｉｎｉｏｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．，；Ｓａ
ｕｅｒ，１９９３，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｘｙｍｏｌｏｇｙ．，）、これは、細
胞の内在性ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様遺伝子からの新規なまたは増加した
ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド産生を生じる新しいかまたは改変
された転写ユニットを作製する。

【０２４９】 細胞の内在性ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様遺伝子からのＣＤ２０／ＩｇＥ
−レセプター様ポリペプチドの発現を増加するため、または引き起こすためのさ
らなるアプローチは、細胞の内在性ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様遺伝子から
の新たなまたは増加したＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの産生を
生じる様式で、遺伝子（単数または複数）（例えば、転写因子）の発現を増加す
るかまたは引き起こし、そして／または遺伝子（単数または複数）（例えば、転
写リプレッサ）の発現を減少する工程を包含する。この方法は、天然に存在しな
いポリペプチド（例えば、転写因子ドメインに融合した部位特異的ＤＮＡ結合ド
メインを含むポリペプチド）を、細胞の内在性ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様
遺伝子からの新たなまたは増加したＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチ
ドの産生が起こるように、細胞に導入する工程を包含する。

【０２５０】 本発明はさらに、標的遺伝子の発現を変化させる方法において有用なＤＮＡ構
築物に関する。特定の実施形態において、代表的なＤＮＡ構築物は、以下を含む
：（ａ）１つ以上の標的配列、（ｂ）制御配列、（ｃ）エキソン、および（ｄ）
不対スプライスドナー部位。ＤＮＡ構築物中の標的配列は、エレメント（ａ）〜
（ｄ）の細胞中の標的遺伝子への組込みを指向し、その結果、これらのエレメン
ト（ｂ）〜（ｄ）は、内在性標的遺伝子の配列に作動可能に連結される。別の実
施形態において、ＤＮＡ構築物は、以下を含む：（ａ）１つ以上の標的配列、（
ｂ）制御配列、（ｃ）エキソン、（ｄ）スプライスドナー部位、（ｅ）イントロ
ン、および（ｆ）スプライスアクセプター部位。ここで、標的配列は、エレメン
ト（ａ）〜（ｆ）の組込みを指向し、その結果、これらのエレメント（ｂ）〜（
ｆ）は、内在性遺伝子に作動可能に連結される。標的配列は、相同性組換えが生
じる細胞染色体ＤＮＡの予め選択された部位に対して相同性である。この構築物
において、エキソンは、一般的に、制御配列の３’であり、そしてスプライスド
ナー部位は、このエキソンの３’である。

【０２５１】 特定の遺伝子の配列（例えば、本明細書中で記載されるＣＤ２０／ＩｇＥ−レ
セプター様ポリペプチドの核酸配列）が公知である場合、遺伝子の選択された領
域に対して相補的なＤＮＡの部分は、合成されるか、またはそうでなければ、例
えば、目的の領域に結合している特定の認識部位におけるネイティブのＤＮＡの
適切な制限等によって得られ得る。この部分は、細胞に挿入された際に、標的配
列として働き、そしてそのゲノム内の相同性領域にハイブリダイズする。このハ
イブリダイゼーションが、ＤＮＡ複製の間に生じる場合、このＤＮＡの部分、お
よびそれに結合した任意のさらなる配列は、Ｏｋａｚａｋｉフラグメントとして
作用し、そしてＤＮＡの新たに合成された娘鎖に組み込まれる。従って、本発明
は、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドをコードするヌクレオチドを
含み、このヌクレオチドは、標的配列として使用され得る。

【０２５２】 ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド細胞治療（例えば、ＣＤ２０／
ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドを産生する細胞の移植）もまた企図される。
この実施形態は、生物学的に活性な形態のＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリ
ペプチドを合成および分泌し得る細胞を移植する工程を包含する。このようなＣ
Ｄ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド産生細胞は、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レ
セプター様ポリペプチドの天然産物である細胞であり得るか、または組換え細胞
であって、そのＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドを産生する能力が
、所望のＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドをコードする遺伝子また
はＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの発現を増大する遺伝子で形質
転換することによって増大された、組換え細胞であり得る。このような改変は、
遺伝子を送達し、その発現および分泌を促進するために適切なベクターによって
達成され得る。ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドを投与されている
患者における強力な免疫学的反応を最小化するために、異種のポリペプチドの投
与と共に生じる場合、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドを産生する
天然の細胞が、ヒト起源であり、そしてヒトＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポ
リペプチドを産生することが好ましい。同様に、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター
様ポリペプチドを産生する組換え細胞が、ヒトＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様
ポリペプチドをコードする遺伝子を含む発現ベクターで形質転換されることが好
ましい。

【０２５３】 移植細胞は、周辺組織の浸透を回避するようにカプセル化され得る。ヒトまた
は非ヒト動物細胞は、生体適合性の半透性ポリマー封入物または膜（これは、Ｃ
Ｄ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドの放出を可能にするが、患者の免疫
系または周辺組織からの他の有害な因子による細胞の崩壊を防止する）の形態で
患者に移植され得る。あるいは、ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチド
をエキソビボで産生するように形質転換された患者自身の細胞が、このようなカ
プセル化なしで、患者に直接移植され得る。

【０２５４】 生きた細胞をカプセル化するための技術は当該分野で公知であり、そしてカプ
セル化された細胞の調製およびそれらの患者への移植は、慣用的に達成され得る
。例えば、Ｂａｅｔｇｅら（ＷＯ９５／０５４５２およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０
９２９９）は、生物学的に活性な分子の効果的な送達のために遺伝子操作された
細胞を含む膜カプセルを記載する。このカプセルは、生体適合性であり、そして
容易に取り出し可能である。このカプセルは、哺乳動物宿主に移植された際に、
インビボで下方制御に供されないプロモーターに作動可能に連結された生物学的
に活性な分子をコードするＤＮＡ配列を含む組換えＤＮＡ分子でトランスフェク
トされた細胞をカプセル化する。このデバイスは、生きた細胞由来の分子のレシ
ピエント内の特定の部位への送達を提供する。さらに、米国特許第４，８９２，
５３８号；同第５，０１１，４７２号；および同第５，１０６，６２７号を参照
のこと。生きた細胞をカプセル化するためのシステムは、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０
０１５７（Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら）に記載される。ＰＣＴ公開番号９１／００１
５５（Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら）；Ｗｉｎｎら、１９９１，Ｅｘｐｅｒ．Ｎｅｕｒ
ｏｌ．１１３：３２２−３２９；Ａｅｂｉｓｃｈｅｒら、１９９１，Ｅｘｐｅｒ
．Ｎｅｕｒｏｌ．１１１：２６９−２７５；およびＴｒｅｓｃｏら、１９９２，
ＡＳＡＩＯ ３８：１７−２３もまた参照のこと。

【０２５５】 ＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリペプチドのインビボおよびインビトロの
遺伝子治療送達もまた想定される。遺伝子治療技術の一例は、構成的または誘発
性プロモーターに作動可能に連結され得るＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様ポリ
ペプチドをコードするＣＤ２０／ＩｇＥ−レセプター様遺伝子（ゲノムＤＮＡ、
ｃＤＮＡおよび／または合成ＤＮＡのいずれか）を使用して、「遺伝子治療ＤＮ
Ａ構築物」を形成することである。このプロモーターは、内在性ＣＤ２０／Ｉｇ
Ｅ−レセプター様遺伝子に対してホモ接合性またはヘテロ接合性であり得るが、
ただし、これは、構築物が挿入される細胞または組織型において活性である。遺
伝子治療ＤＮＡ構築物の他の成分は、必要に応じて、部位特異的組込みのために
設計されるＤＮＡ分子（例えば、相同性組換えのために有用な内在性配列）、組
織特異的プロモーター、エンハンサーまたはサイレンサー、親細胞を越える選択
的優性を提供し得るＤＮＡ分子、形質転換された細胞を同定するための標識とし
て有用なＤＮＡ分子、ネガティブ選択系、細胞特異的結合因子（例えば、細胞標
的化について）、細胞特異的内部移行、ベクターからの発現を増大する転写因子
、およびベクターの産生を可能にする因子を含む。

【０２５６】 遺伝子治療ＤＮＡ構築物は、次いで、ウイルスベクターまたは非ウイルスベク
ターを使用して細胞に導入され得る（エキソビボまたはインビボノいずれか）。
遺伝子治療ＤＮＡ構築物を導入するための１つの方法は、本明細書中に記載され
るようなウイルスベクターの使用による。特定のベクター（例えば、レトロウイ
ルスベクター）は、ＤＮＡ構築物を細胞の染色体ＤＮＡに送達し、そしてこの遺
伝子は、染色体ＤＮＡに組み込まれ得る。他のベクターは、エピソームとして機
能し、そして遺伝子治療ＤＮＡ構築物は、細胞質に残る。

【０２５７】 さらに他の実施形態において、制御エレメントが、標的細胞におけるＣＤ２０
／ＩｇＥ−レセプター様遺伝子の制御された発現のために含められ得る。このよ
うなエレメントは、適切なエフェクターに応答して刺激される。このようにして
、治療的ポリペプチドは、所望の場合に発現され得る。１つの従来の制御手段は
、低分子結合ドメインおよび生物学的プロセスを開始し得るドメインを含むキメ
ラタンパク質（例えば、ＤＮＡ結合タンパク質または転写活性タンパク質）を二
量化する低分子二量化剤またはラパログ（ｒａｐａｌｏｇ）の使用を包含する（
ＷＯ９６４１８６５（ＰＣＴ／ＵＳ９７／０９９４８６）、ＷＯ９７／３１８９
８（ＰＣＴ／ＵＳ９６／０３１３７）およびＷＯ９７／３１８９９（ＰＣＴ／Ｕ
Ｓ９５／０３１５７）を参照のこと）。タンパク質の二量化は、導入遺伝子の転
写を開始するために使用され得る。

【０２５８】 代替の調節技術は、目的の遺伝子から発現されたタンパク質を、凝集体または
クラスターとして細胞の内側に貯蔵する方法を使用する。目的の遺伝子は、内在
性小網における凝集タンパク質の保持を生じる、条件的凝集ドメインを含む融合
タンパク質として発現される。貯蔵されたタンパク質は安定であり、そして細胞
の内側で不活性である。しかし、このタンパク質は、条件的凝集ドメインを除去
する薬物（例えば、低分子リガンド）を投与することによって放出され得、それ
により、凝集体またはクラスターを破壊し、その結果、このタンパク質は細胞か
ら分泌され得る。Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：８１６−８１７および２８７：８２
６−８３０（２０００）を参照のこと。

【０２５９】 他の適切な制御手段または遺伝子スイッチとしては、本明細書中で記載される
系が挙げられるが、これらに限定されない。Ｍｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ（ＲＵ４
８６）は、プロゲステロンアンタゴニストとして使用される。改変されたプロゲ
ステロンレセプターリガンド結合ドメインのプロゲステロンアンタゴニストへの
結合は、２つの転写因子のダイマーを形成することによって、転写を活性化し、
次いで、核に至り、ＤＮＡに結合する。このリガンド結合ドメインは、天然のリ
ガンドに結合するレセプターの能力を排除するように改変される。改変されたス
テロイドホルモンレセプター系はさらに、米国特許第５，３６４，７９１号、な
らびにＷＯ９６４０９１１およびＷＯ９７１０３３７に記載される。

【０２６０】 さらに別の制御系は、エクジソンレセプター（細胞質レセプター）に結合し、
そしてこれを活性化するエクジソン（ショウジョウバエステロイドホルモン）を
使用する。次いで、このレセプターは核に転移し、特定のＤＮＡ応答エレメント
（エクジソン応答性遺伝子由来のプロモーター）に結合する。エクジソンレセプ
ターは、トランス活性化ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、およびリガンド結合ド
メインを含み、転写を開始する。エクジソン系はさらに、米国特許第５，５１４
，５７８、およびＰＣＴ公開ＷＯ９７／３８１１７、ＷＯ９６／３７６０９、お
よびＷＯ９３／０３１６２に記載される。

【０２６１】 別の制御手段は、陽性テトラシクリン制御可能トランス活性化因子を使用する
。この系は、転写を活性化するポリペプチドに連結された変異したｔｅｔレプレ
ッサタンパク質ＤＮＡ結合ドメイン（逆テトラサイクリン制御トランス活性化因
子タンパク質を生じた変異したｔｅｔＲ−４アミノ酸の変化、すなわち、これは
、テトラサイクリンの存在下でｔｅｔオペレーターに結合する）を含む。このよ
うな系は、米国特許第５，４６４，７５８号、同第５，６５０，２９８号、およ
び同第５，６５４，１６８号に記載される。

【０２６２】 さらなる発現制御系および核酸構築物は、米国特許第５，７４１，６７９号お
よび同第５，８３４，１８６号（Ｉｎｎｏｖｉｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
Ｉｎｃ．）に記載される。

【０２６３】 インビボの遺伝子治療は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドをコー
ドする遺伝子を、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様核酸分子の局所的な注射を介し
て、または他の適切なウイルスもしくは非ウイルス送達ベクターによって、細胞
に導入することによって達成され得る。Ｈｅｆｔｉ、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ
、２５：１４１８−１４３５（１９９４）。例えば、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプタ
ー様ポリペプチドをコードする核酸分子は、標的細胞への送達のためのアデノ随
伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター中に含まれ得る（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ、国際
公開番号ＷＯ９５／３４６７０；国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９５／０７１７８）
。組換えＡＡＶゲノムは、代表的には、機能的プロモーターおよびポリアデニル
化配列に作動可能に連結したＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドをコー
ドするＤＮＡ配列に隣接する、ＡＡＶ逆方向末端反復を含む。

【０２６４】 代替の適切なウイルスベクターとしては、レトロウイルス、アデノウイルス、
単純疱疹ウイルス、レンチウイルス、肝炎ウイルス、パルボウイルス、パポバウ
イルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、コロナウイルス、ラブドウイル
ス、パラミクソウイルス、およびパピローマウイルスのベクターが挙げられるが
、これらに限定されない。米国特許第５，６７２，３４４号は、組換え神経栄養
性ＨＳＶ−１ベクターを含むインビトロのウイルス媒介遺伝子移入系を記載する
。米国特許第５，３９９，３４６号は、治療的タンパク質をコードするＤＮＡセ
グメントを挿入するためにインビトロで処理されたヒト細胞の送達によって、治
療的タンパク質を患者に提供するためのプロセスの例を提供する。遺伝子治療技
術の実行のためのさらなる方法および材料は、アデノウイルスベクターに関する
米国特許第５，６３１，２３６号；レトロウイルスベクターに関する米国特許第
５，６７２，５１０号；およびサイトカインを発現するレトロウイルスベクター
に関する米国特許第５，６３５，３９９号に記載される。

【０２６５】 非ウイルス送達方法は、リポソーム媒介移入、裸のＤＮＡの送達（直接注射）
、レセプター媒介移入（リガンド−ＤＮＡ複合体）、エレクトロポレーション、
リン酸カルシウム沈降、および微粒子ボンバードメント（例えば、遺伝子銃）が
挙げられるが、これらに限定されない。遺伝子治療の材料および方法としてはま
た、誘導性プロモーター、組織特異的エンハンサー−プロモーター、部位特異的
組み込みのために設計されたＤＮＡ配列、親細胞を超えて選択的利点を提供し得
るＤＮＡ配列、形質転換された細胞を同定するための標識、ネガティブ選択系お
よび発現制御系（安全な測定）、細胞特異的結合剤（細胞標的化のための）、細
胞特異的内在化因子、ならびにベクターによる発現を増強する転写因子の使用、
そしてベクター製造のための方法が挙げられ得る。遺伝子治療技術の実行のため
のこのようなさらなる方法および材料は、エレクトロポレーション技術に関する
米国特許第４，９７０，１５４号；核リガンドに関するＷＯ９６／４０９５８；
遺伝子送達のためのリポタンパク質含有系を記載する米国特許第５，６７９，５
５９号；リポソームキャリアに関する米国特許第５，６７９，９５４号；リン酸
カルシウムトランスフェクションのための方法に関する米国特許第５，５９３，
８７５号；および米国特許第４，９４５，０５０号（ここで、生物学的に活性な
粒子が、ある速度で細胞に噴射され、それによってこの粒子は細胞の表面を貫通
し、そして細胞内部に取り込まれる）に記載される。

【０２６６】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子治療または細胞治療はさらに、同じ細胞
または異なる細胞において１以上のさらなるポリペプチドの送達を含み得ること
がまた、意図される。このような細胞は、患者に別々に導入され得るか、または
これらの細胞は、単一の移植可能なデバイス（例えば、上記のようなカプセル化
膜）中に含まれ得るか、またはこれらの細胞は、ウイルスベクターによって別々
に改変され得る。

【０２６７】 遺伝子治療を介して、細胞における内在性のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポ
リペプチド発現を増大させる手段は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチ
ドプロモーター中に１以上のエンハンサーエレメントを挿入することであり、こ
こで、このエンハンサーエレメントは、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子の
転写活性を増大するように作用し得る。使用されるエンハンサーエレメントは、
遺伝子を活性化することが所望される組織に基づいて選択される；この組織にお
いてプロモーターの活性化を与えることが公知のエンハンサーエレメントが、選
択される。例えば、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドをコードする遺
伝子が、Ｔ細胞において「オンにされる」場合、ｌｃｋプロモーターエンハンサ
ーエレメントが使用され得る。ここで、添加されるべき転写エレメントの機能的
部分は、標準的なクローニング技術を使用して、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様
ポリペプチドプロモーターを含むＤＮＡのフラグメント中に挿入され得る（そし
て必要に応じて、ベクターならびに／または５’隣接配列および／もしくは３’
隣接配列などの中に挿入される）。次いで、「相同組換え構築物」として公知の
この構築物は、エキソビボまたはインビボのいずれかで所望の細胞に導入され得
る。

【０２６８】 遺伝子治療はまた、内在性プロモーターのヌクレオチド配列を改変することに
よってＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの発現を減少させるために使
用され得る。このような改変は、代表的には、相同組換え方法を介して達成され
る。例えば、不活化のために選択されたＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子の
プロモーターの全てまたは一部を含むＤＮＡ分子は、転写を調節するプロモータ
ーの断片を除去および／または置換するように操作され得る。例えば、ＴＡＴＡ
ボックスおよび／またはプロモーターの転写活性化因子の結合部位は、標準的な
分子生物学的技術を使用して欠失され得る；このような欠失は、プロモーターの
活性を阻害し得、それによって対応するＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子の
転写を抑制する。ＴＡＴＡボックスまたはプロモーターの転写活性化因子結合部
位の欠失は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドプロモーター（調節さ
れるべきＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子と同種または関連の種由来の）の
全てまたは関連部分を含むＤＮＡ構築物を生成することによって達成され得、こ
こで、ＴＡＴＡボックスおよび／または転写活性化因子結合部位のヌクレオチド
の１以上は、１以上のヌクレオチドの置換、欠失および／または挿入を介して変
異される。結果として、ＴＡＴＡボックスおよび／または活性化因子結合部位は
、活性を減少させるかまたは完全に不活化される。この構築物は、代表的には、
改変されたプロモーターセグメントに隣接するネイティブな（内在性の）５’お
よび３’ＤＮＡ配列に対応するＤＮＡの少なくとも約５００塩基を含む。この構
築物は、適切な細胞中に（エキソビボまたはインビボのいずれかで）、直接また
は本明細書中に記載のウイルスベクターを介してかのいずれかで導入され得る。
代表的には、細胞のゲノムＤＮＡへの構築物の組み込みは、相同組換えを介して
であり、ここで、プロモーター構築物の５’および３’ＤＮＡ配列は、内在性の
染色体ＤＮＡに対するハイブリダイゼーションを介して改変されたプロモーター
領域を組み込む際の補助として役立ち得る。

【０２６９】 （ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様核酸およびポリペプチドのさらなる使用） 本発明の核酸分子（それ自体は生物学的に活性なポリペプチドをコードしない
核酸分子を含む）は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子および関連する遺伝
子の染色体上の位置をマッピングするために使用され得る。マッピングは、当該
分野で公知の技術（例えば、ＰＣＲ増幅およびインサイチュハイブリダイゼーシ
ョン）によってなされ得る。

【０２７０】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様核酸分子（それ自体は生物学的に活性なポリペ
プチドをコードしない核酸分子を含む）は、定量的または定性的にのいずれかで
、哺乳動物の組織または体液サンプルにおけるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様Ｄ
ＮＡまたは対応するＲＮＡの存在について試験するための診断アッセイにおける
ハイブリダイゼーションプローブとして有用であり得る。

【０２７１】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドは、（同時にまたは引き続いて）
サイトカイン、増殖因子、抗体、抗炎症剤、および／または化学療法剤（処置さ
れる兆候に適切な場合）の１つ以上と組み合わせて使用され得る。

【０２７２】 １以上のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの活性を阻害することが
所望される場合、他の方法もまた使用され得る。このような阻害は、発現制御配
列（三重らせん形成）またはＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ｍＲＮＡに相補的で
ありかつハイブリダイズする核酸分子によってもたらされ得る。例えば、選択さ
れたＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様遺伝子の少なくとも一部に対して相補的な配
列を有するアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡ分子は、細胞に導入され得る。アン
チセンスプローブは、本明細書中に開示されるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポ
リペプチドの配列を使用する利用可能な技術によって設計され得る。代表的には
、このようなアンチセンス分子の各々は、各々の選択されたＣＤ２０／ＩｇＥレ
セプター様遺伝子の開始部位（５’末端）に相補的である。次いで、このアンチ
センス分子が、対応するＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ｍＲＮＡにハイブリダイ
ズする場合、このｍＲＮＡの翻訳は阻止されるかまたは減少される。アンチセン
スインヒビターは、細胞または生物体におけるＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポ
リペプチドの減少または非存在に関する情報を提供する。

【０２７３】 あるいは、遺伝子治療は、１以上のＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチ
ドのドミナントネガティブなインヒビターを作製するために使用され得る。この
状況において、各々の選択されたＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの
変異体ポリペプチドをコードするＤＮＡが調製され得、本明細書中に記載のウイ
ルスまたは非ウイルス方法のいずれかを使用して患者の細胞に導入され得る。こ
のような変異体の各々は、代表的には、その生物学的な役割において内在性のポ
リペプチドと競合するように設計される。

【０２７４】 さらに、生物学的に活性か否かにかかわらず、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様
ポリペプチドは、免疫原、すなわち、抗体を惹起し得る少なくとも１つのエピト
ープ含むポリペプチドとして使用され得る。ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリ
ペプチド（本明細書中に記載のような）に結合する選択的結合剤は、インビボお
よびインビトロの診断目的のために使用され得、体液または細胞サンプル中でＣ
Ｄ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの存在を検出するための標識形態での
使用を含むが、これに限定されない。これらの抗体はまた、本明細書中で列挙し
たものを含む多くの疾患および障害を予防、処置、または診断するために使用さ
れ得る。これらの抗体は、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドに特徴的
な活性の少なくとも１つを減少させるかまたはブロックするように、ＣＤ２０／
ＩｇＥレセプター様ポリペプチドに結合し得るか、あるいは、ＣＤ２０／ＩｇＥ
レセプター様ポリペプチドに特徴的な活性の少なくとも１つを増大するために（
ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの薬物動態を増大させることによる
ものを含む）ポリペプチドに結合し得る。

【０２７５】 以下の実施例は、本発明の性質をさらに代表するために役立つが、添付の特許
請求の範囲によってのみ規定される本発明の範囲を限定するものであると解釈さ
れるべきではない。

【０２７６】 （実施例１） （ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ｃＤＮＡ（ＡＧＰ−６９４０６−ａ１）のク
ローニング） ａｇｐ−６９４０６−ａ１（ＣＤ２０ＲＰ１）を、Ａｍｇｅｎで単離したマウ
ス遺伝子（ａｇｐ−６５２２０−ａ１）に対する相同性に基づいて同定した。公
共のデータベースの、相同性ベースのＢＬＡＳＴ検索は、翻訳に際してヒトＩｇ
ＥＲ／ＥＣ_δＲＩに対する相同性を示す４２８ｎｔのＤＮＡフラグメント（ｓｍ
ｂｒ７−０００４４−ｂ９−ａ）を同定した。この相同性に基づき、ｓｍｂｒ７
−０００４４−ｂ９挿入物の全体を配列決定した。ｓｍｂｒ７ライブラリーを、
以下のように構築した：総ＲＮＡを、オステオプロテゲリン（ｏｓｔｅｏｐｒｏ
ｔｅｇｅｒｉｎ）（ＰＯＧ）ノックアウトマウス由来の破砕した大腿骨および脛
骨から、標準的なＲＮＡ抽出手順を使用して抽出し、そしてポリ−Ａ^＋ＲＮＡを
、当業者に公知の標準的な手順を使用して、この総ＲＮＡから選択した。ランダ
ムプライムされたかまたはオリゴ（ｄＴ）プライムされたｃＤＮＡを、このポリ
−Ａ^＋ＲＮＡから、ｃＤＮＡ合成のためのＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ Ｐｌａｓｍ
ｉｄ Ｓｙｓｔｅｍの手引き書中の手順およびＰｌａｓｍｉｄ Ｃｌｏｎｉｎｇ
キット（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を使用し
て、または当業者に公知の他の適切な手順を使用して、合成した。得られたｃＤ
ＮＡを、適切な制限酵素で消化して、クローニングベクターへの連結を補助する
粘着末端を生成した。この消化されたｃＤＮＡを、適切な制限酵素を用いて予め
消化したｐＳＰＯＲＴ１クローニングベクターまたは当業者に公知の別の適切な
クローニングベクター中に連結した。この連結産物を、当該分野で公知の標準的
な技術を使用してＥ．ｃｏｌｉ中に形質転換し、そして形質転換体を、使用され
る特定のクローニングベクターに依存して、アンピシリン、テトラサイクリン、
カナマイシンまたはクロラムフェニコールのいずれかを含む細菌培地プレート上
で選択した。ｃＤＮＡライブラリーは、これらの形質転換体の全てまたは下位集
団からなる。ｓｍｂｒ７−０００４４−ｂ９配列を使用するＡｍｇｅｎｅｓｉｓ
および公開データベースの相同性ベースの検索は、事実上の連続配列ａｈｇｉ１
−０３０８５３−ｃｙａを構築することが可能ないくつかの関連ヒトＤＮＡフラ
グメントを同定した。この配列に基づくコード領域を単離するための試みは、複
数のバンドを得、そして５’および３’ＲＡＣＥを使用して、実際のコード領域
を単離した。両方のＲＡＣＥ反応のために、ヒト骨格筋Ｍａｒａｔｈｏｎ ｃＤ
ＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ）をテンプレートとして使
用した。５’ＲＡＣＥについて、第一回の反応は、プライマー２２７７−６９（
５’−ＣＡＧ ＣＣＣ ＧＴＴ ＣＴＧ ＣＡＧ ＧＴＡ ＡＴＣ ＴＴＣ−３
’、配列番号５）およびＡＰ１（５’−ＣＣＡ ＴＣＣ ＴＡＡ ＴＡＣ ＧＡ
Ｃ ＴＣＡ ＣＴＡ ＴＡＧ ＧＧＣ−３’、配列番号６、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）
を、２５μｌの反応容積中の０．２ｎｇのテンプレートＤＮＡ、０．２μＭの最
終各プライマー、０．２ｍＭの最終濃度のヌクレオチド、および０．５μｌのＡ
ｄｖａｎｔａｇｅ ｃＤＮＡポリメラーゼ混合物（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）と共に使
用した。ＰＣＲ後、この第一回の反応物を、１：５０に希釈し、そして５μｌを
５０μｌの最終反応容積中で使用した。この反応物は、ヌクレオチドの最終濃度
０．２ｍＭ、最終各プライマー０．２μＭおよびＡｄｖｅｎｔａｇｅ ｃＤＮＡ
ポリメラーゼ混合物１μｌを有した。第二回の反応に使用したプライマーは、２
２７７−７０（５’−ＡＴＧ ＴＧＴ ＣＣＡ ＧＧＴ ＴＴＣ ＴＣＴ ＣＴ
Ｔ ＴＧＡ Ｇ−３’、配列番号７）およびＡＰ２（５’−ＡＣＴ ＣＡＣ Ｔ
ＡＴ ＡＧＧ ＧＣＴ ＣＧＡ ＧＣＧ ＧＣ−３’、配列番号８、Ｃｌｏｎｔ
ｅｃｈ）であった。３’ＲＡＣＥは、同じ反応条件を使用して、第一回の反応の
ために、異なるプライマーセット２２７７−７２（５’−ＴＴＡ ＣＴＧ ＣＡ
Ｇ ＧＡＧ ＣＡＧ ＧＣＣ ＴＣＴ ＴＣ−３’、配列番号９）およびＡＰ１
を用い、一方、第二回の反応においてはプライマーセット２２７７−７３（５’
−ＣＡＧ ＣＡＴ ＧＧＴ ＡＧＣ ＣＣＴ ＧＡＧ ＧＡＣ ＴＧ−３’、配
列番号１０）およびＡＰ２プライマーを使用した。両方の第一回の反応のための
ＰＣＲ条件は、９４℃で２分、次いで５サイクル（９４℃で１０秒、７２℃で２
分）、次いで５サイクル（９４℃で１０秒、７０℃で２分）、次いでさらなる２
５サイクル（９４℃で１０秒、６８℃で２分）からなる。両方の第二回の反応の
ためのＰＣＲ条件は、第二回においては最後のサイクル条件が２５サイクルの代
わりに１５サイクルで実施されたという点を除いて、第一回の条件と同じであっ
た。ＲＡＣＥ産物の配列決定後、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）全体
を増幅するためにプライマーを設計することが可能である。プライマーセット２
２８９−２８（５’−ＣＡＡ ＣＡＣ ＧＴＣ ＧＡＣ ＣＣＡ ＣＣＡ ＴＧ
Ｃ ＴＡＴ ＴＡＣ ＡＡＴ ＣＣＣ ＡＡＡ ＣＣＡ ＴＧＧ Ｇ−３’、配
列番号１１）および２２８９−２９（５’−ＣＡＡ ＣＡＡ ＧＣＧ ＧＣＣ
ＧＣＡ ＧＴＴ ＧＣＴ ＴＴＴ ＣＣＴ ＴＣＣ ＴＣＴ ＧＡＧ ＧＣ−３
’、配列番号１２）を、ヒト骨格筋ｍａｒａｔｈｏｎ ｃＤＮＡ上で使用して、
上記のＲＡＣＥの第一回について記載された条件と同じＰＣＲ条件を使用してＯ
ＲＦ全体を増幅した。増幅ＰＣＲ産物を、適切な制限酵素で消化して、ｐＳＰＯ
ＲＴプラスミド（Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）中にサブ
クローニングした。

【０２７７】 （実施例２） （ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ｃＤＮＡ（ＡＧＰ−９６６１４−ａ１）のク
ローニング） ａｇｐ−９６６１４−ａ１（ＣＤ２０ＲＰ２）を、Ａｍｇｅｎで単離された４
０１ｎｔのマウス配列（ｙｍｍｎ１−００７７５−ｈ７−ａ）で開始するコンピ
ューター分析によって作成されたコンティグに対する相同性に基づいて最初に同
定した。このｙｍｍｎ１ライブラリーを、以下のように構築した：総ＲＮＡを、
標準的なＲＮＡ抽出手順を使用して複数のマウス組織から抽出してプールし、そ
して当業者に公知の標準的な手順を使用して、ポリ−Ａ^＋ＲＮＡをこの総ＲＮＡ
から選択した。ランダムプライムまたはオリゴ（ｄＴ）プライムされたｃＤＮＡ
を、このポリ−Ａ^＋ＲＮＡから、ｃＤＮＡ合成のためのＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ
Ｐｌａｓｍｉｄ Ｓｙｓｔｅｍの手引き書中の手順およびＰｌａｓｍｉｄ Ｃ
ｌｏｎｉｎｇキット（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍ
Ｄ）を使用して、または当業者に公知の他の適切な手順を使用して、合成した。
得られたｃＤＮＡを、適切な制限酵素で消化して、クローニングベクターへの連
結を補助する粘着末端を生成した。この消化されたｃＤＮＡを、適切な制限酵素
によって予め消化したｐＳＰＯＲＴ１クローニングベクターまたは当業者に公知
の別の適切なクローニングベクター中に連結した。この連結産物を、当該分野で
公知の標準的な技術を使用してＥ．ｃｏｌｉ中に形質転換し、そして形質転換体
を使用される特定のクローニングベクターに依存して、アンピシリン、テトラサ
イクリン、カナマイシンまたはクロラムフェニコールのいずれかを含む細菌培地
プレート上で選択した。ｃＤＮＡライブラリーは、これらの形質転換体の全てま
たは下位集団からなる。公開データベースの相同性ベースのＢＬＡＳＴ検索は、
翻訳に際してヒトＩｇＥＲ／ＦＣ_δＲＩに対する相同性を示す６９１ｎｔのＤＮ
Ａフラグメント（ａｈｇｉ−０９８６９６−ｃｙａ１）を同定した。このフラグ
メントは、コード領域全体を含んだようであったが、５’および３’ＲＡＣＥを
使用して、実際の正確なＯＲＦを同定した。両方のＲＡＣＥ反応について、ヒト
精巣Ｍａｒａｔｈｏｎ ｃＤＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、Ｃ
Ａ）を、テンプレートとして使用した。５’ＲＡＣＥのために、第一回の反応は
、プライマー２２７７−１９（ＧＧＡ ＡＧＡ ＴＡＡ ＣＴＣ ＣＡＡ ＡＡ
Ｇ ＡＡＡ ＡＧＧ ＴＣ−３’、配列番号１３）およびＡＰ１（上記を参照の
こと）を、２５μｌの反応容積中の０．２ｎｇのテンプレートＤＮＡ、０．２μ
Ｍの最終各プライマー、０．２ｍＭの最終濃度のヌクレオチド、および０．５μ
ｌのＡｄｖａｎｔａｇｅ ｃＤＮＡポリメラーゼ混合物（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）と
共に使用した。ＰＣＲ後、この第一回の反応物を、１：５０に希釈し、そして５
μｌを５０μｌの最終反応容積中で使用した。この反応物は、ヌクレオチドの最
終濃度０．２ｍＭ、最終各プライマー０．２μＭおよびＡｄｖｅｎｔａｇｅ ｃ
ＤＮＡポリメラーゼ混合物１μｌを含んだ。第二回の反応に使用したプライマー
は、２２７７−２０（５’−ＡＡＡ ＣＡＧ ＧＡＴ ＣＴＧ ＧＡＴ ＡＧＴ
ＣＣＣ ＴＡＡ Ｇ−３’、配列番号１４）およびＡＰ２（上記を参照のこと
）であった。３’ＲＡＣＥは、同じ反応条件を使用して、第一回の反応のために
、異なるプライマーセット２２７７−２２（５’−ＣＣＴ ＣＡＣ ＡＴＴ Ｔ
ＧＧ ＴＴＴ ＣＡＴ ＣＣＴ ＡＧＡ ＴＣ−３’、配列番号１５）およびＡ
Ｐ１を用い、一方、第二回の反応においてはプライマーセット２２７７−２３（
５’−ＧＴＣ ＡＧＴ ＧＴＡ ＡＧＧ ＣＴＧ ＴＴＡ ＣＴＧ ＴＣＣ−３
’、配列番号１６）およびＡＰ２プライマーを使用した。両方の第一回の反応の
ためのＰＣＲ条件は、９４℃で２分、次いで５サイクル（９４℃で１０秒、７２
℃で２分）、次いで５サイクル（９４℃で１０秒、７０℃で２分）、次いでさら
なる２５サイクル（９４℃で１０秒、６８℃で２分）からなる。両方の第二回の
反応のためのＰＣＲ条件は、第二回においては最後のサイクル条件が２５サイク
ルの代わりに１５サイクルで実施されたという点を除いて、第一回の条件と同じ
であった。ＲＡＣＥ産物の配列決定後、ＯＲＦ全体を増幅するためにプライマー
を設計することが可能である。プライマーセット２２８９−２６（５’−ＣＡＡ
ＣＡＣ ＧＴＣ ＧＡＣ ＣＣＡ ＣＣＡ ＴＧＧ ＡＴＴ ＣＡＡ ＧＣＡ
ＣＣＧ ＣＡＣ ＡＣＡ ＧＴ−３’、配列番号１７）および２２８９−２７
（５’−ＣＡＡ ＣＡＡ ＧＣＧ ＧＣＣ ＧＣＴ ＴＡＡ ＣＡＣ ＡＴＣ
ＴＴＴ ＡＴＴ ＣＴＣ ＡＣＡ ＧＴＧ ＣＴ−３’、配列番号１８）を、ヒ
ト精巣ｍａｒａｔｈｏｎ ｃＤＮＡ上で使用して、上記のＲＡＣＥの第一回につ
いて記載された条件と同じＰＣＲ条件を使用してＯＲＦ全体を増幅した。増幅Ｐ
ＣＲ産物を、適切な制限酵素で消化して、ｐＳＰＯＲＴプラスミド（Ｌｉｆｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）中にサブクローニングした。

【０２７８】 （実施例３） （異なる組織におけるｍＲＮＡの存在および分布） ＭＴＥブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＣＡ）のノーザンブロット分析は、ａｇ
ｐ−６９４０６−ａ１が、ヒト成体および胎児の脾臓、成体および胎児の肺、胎
盤、ならびに胎児の肝臓において主に発現することを示した。細胞株由来のＲＮ
Ａのノーザンブロット分析はまた、ＴＨＰ−１（急性単球性白血病）における約
３．５ｋＢの転写物を検出した。ＰＣＲ分析は、ヒト脳、腎臓、脾臓、胸腺、成
体および胎児の肝臓、筋肉、精巣、胎盤、膵臓、卵巣、前立腺、末梢血白血球、
ならびに骨髄においてａｇｐ−６９４０６−ａ１を検出した。

【０２７９】 ＭＴＥブロット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、ＣＡ）のノーザンブロット分析は、ａｇ
ｐ−９６６１４−ａ１が、ヒトの精巣において主に発現することを示した。ＰＣ
Ｒ分析は、ヒトの精巣、膵臓、結腸腺腫細胞株（ＣＸ−１）および卵巣癌腫細胞
株（ＧＩ−１０２）においてａｇｐ−９６６１４−ａ１を検出した。方法の詳細
は、以下に含まれる。

【０２８０】 （ＲＴ ＰＣＲ） ａｇｐ−６９４０６−ａ１およびａｇｐ−９６６１４−ａ１の発現を試験する
ために、ＲＴ ＰＣＲを、テンプレートとして複数組織のｃＤＮＡパネル（ＭＴ
Ｃ）を、およびＡｄｖａｎｔａｇｅ ｃＤＮＡポリメラーゼ混合物（Ｃｌｏｎｔ
ｅｃｈ）を使用して実行した。ＰＣＲは、５０μｌの反応容積中の約１ｎｇのテ
ンプレートＤＮＡ、０．２ｍＭの最終濃度のヌクレオチド、およびＡｄｖａｎｔ
ａｇｅ ｃＤＮＡポリメラーゼ混合物の１μと共に、ａｇｐ−６９４０６−ａ１
についてプライマー２３２３−６４（５’−ＡＧＣ ＡＧＧ ＣＣＴ ＣＴＴ
ＣＣＴ ＣＣＴ ＴＧＣ ＴＧＡ−３’、配列番号１９）および２３２３−６３
（５’−ＴＧＡ ＡＣＴ ＣＣＣ ＡＧＧ ＧＴＴ ＧＴＴ ＧＧＡ ＧＴ−３
’、配列番号２０）を、ａｇｐ−９６６１４−ａ１については２３２３−６９（
５’−ＣＴＧ ＧＡＧ ＣＣＴ ＴＣＣＣ ＴＡＡ ＴＴＧ ＣＡＧ ＴＧＡ−
３’、配列番号２１）、２３２３−７０（５’−ＣＡＡ ＴＣＡ ＣＡＡ ＴＣ
Ｃ ＴＣＴ ＧＡＧ ＴＧＧ ＣＡ−３’、配列番号２２）を最終濃度０．４μ
Ｍで使用した。サイクル条件は、９４℃で３０秒、（９４℃で３０秒、６８℃で
２分）反復３０回、６８℃で５分であった。

【０２８１】 （ＭＴＥアレイブロット） （プローブ調製） ａｇｐ−６９４０６−ａ１のためのプローブを、ＰＣＲおよびゲル精製２回に
よって調製した。大きさが３３１塩基対のＰＣＲ産物を、Ｐｈａｒｍａｃｉａ
ＰＣＲビーズを、２３２３−６４（５’−ＡＧＣ ＡＧＧ ＣＣＴ ＣＴＴ Ｃ
ＣＴ ＣＣＴ ＴＧＣ ＴＧＡ−３’、配列番号１９）、２３２３−６１（５’
−ＣＣＡ ＡＧＡ ＣＣＧ ＴＧＡ ＡＧＡ ＡＣＴ ＣＴ−３’、配列番号２
３）を、最終濃度０．４μＭで、およびテンプレートとして約２ｎｇの全長ａｇ
ｐ−６９４０６ ＤＮＡを使用して増幅した。サイクル条件は、９４℃で１分、
（９４℃で３０秒、７０℃で１分３０秒）反復３０回、７２℃で１０分であった
。２９５塩基対のＰＣＲ産物を、プライマー２３２３−６９（５’−ＣＴＧ Ｇ
ＡＧ ＣＣＴ ＴＣＣ ＣＴＡ ＡＴＴ ＧＣＡ ＧＴＧ Ａ−３’、配列番号
２１）、２３２３−７０（５’−ＣＡＡ ＴＣＡ ＣＡＡ ＴＣＣ ＴＣＴ Ｇ
ＡＧ ＴＧＧ ＣＡ−３’、配列番号２２）およびテンプレートとして全長ａｇ
ｐ−９６６１４ ＤＮＡを使用して増幅したことを除いて、ａｇｐ−９６６１４
−ａ１のためのプローブを上記と同様に調製した。

【０２８２】 （ハイブリダイゼーション） プローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅ^ＴＭＩＩ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃａｔａｌｏｇ ＃ＲＰＮ−１６３３）を使用して［
α−^３２Ｐ］ｄＣＴＰ（１０ｍＣｉ／ｍｌ Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｃａｔａｌｏｇ ＃ＡＡ０００５）で標識し、Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ Ｇ−５０カラム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｃａｔ
ａｌｏｇ ＃１２７３９６５）で精製し、次いで、２，５００ｒｐｍで５分間遠
心した。７６のヒト組織のｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡを含む複数組織発現アレイ（
Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｃａｔａｌｏｇ ＃７７７５−１）を、変性剪断サケ精巣Ｄ
ＮＡ（Ｓｉｇｍａ Ｄ７６５６）１．５ｍｇを含むＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂ（Ｃｌ
ｏｎｔｅｃｈ Ｃａｔａｌｏｇ ＃Ｓ０９１０）１０ｍｌ中で６５℃で連続攪拌
しながら２時間プレハイブリダイズさせた。プローブを、５×１０^６ｃｐｍの標
識プローブ、３０μｇのＣｏｔ−１ ＤＮＡ、２５０μｌの６×ＳＳＣ中の１５
０μｇの変性剪断サケ精巣ＤＮＡを含む、６×ＳＳＣの２５０μｌ中で変性させ
てプレハイブリダイゼーション混合物に添加し、そして６５℃で１８時間インキ
ュベートした。遊離プローブを、２×ＳＳＣ；１％ＳＤＳで２０分間、連続攪拌
しながら６５℃で各々５回洗浄して除去した。５５℃で連続攪拌しながら、溶液
２（０．１×ＳＳＣ；０．５％ＳＤＳ）中でのさらに２回の２０分間の洗浄を実
行した。ハイブリダイゼーションを、増感スクリーンを用いて−７０℃でＸ線フ
ィルムに曝露することによって検出した。

【０２８３】 ノーザンブロットを、Ａｍｇｅｎで１９のヒト造血細胞株から抽出した１０μ
ｇの総ＲＮＡと共にノーザンＭＡＸ−Ｇｌｙキット（Ａｍｂｉｏｎ）を使用して
作製した。ハイブリダイゼーションのために、膜を、１００μｇ／ｍｌの変性剪
断サケ精子ＤＮＡと共にＥｘｐｒｅｓｓハイブリダイゼーション溶液（Ｃｌｏｎ
ｔｅｃｈ）１０ｍｌ中で、６５℃で３時間プレハイブリダイズさせた。次いで、
ｒｅａｄｉｐｒｉｍｅキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用してＰ^３２で標識した
プローブ（ＭＴＥアレイブロットにおいて使用した様式と同じ様式で調製した）
を、１×１０^６ｃｐｍ／ｍｌで添加し、そして６５℃で１６時間おいた。この膜
を、２×ＳＳＣ、０．０５％ＳＤＳで１０分間、６５℃で４回洗浄し、そして１
×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳで２０分間、６５℃で２回洗浄した。次いで、この膜
を、−８０℃で一晩Ｘ線フィルムに曝露させた。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、第１のヒトＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド（「ａｇｐ−
９６６１４−ａｌ」と呼ばれる）の核酸配列（配列番号１）およびアミノ酸配列
（配列番号２）を示す。

【図２】 図２は、第２のヒトＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド（「ａｇｐ−
６９４０６−ａｌ」と呼ばれる）の核酸配列（配列番号３）およびアミノ酸配列
（配列番号４）を示す。

【図３】 本発明のヒトＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド（ａｇｐ−９６６１
４−ａｌおよびａｇｐ−６９４０６−ａｌ）と公知のＣＤ２０／ＩｇＥレセプタ
ーファミリーのメンバーとのアミノ酸の相同性を示す。図３において、ａｇｐ−
６９４０６−ａｌおよびａｇｐ−９６６１４−ａｌは、それぞれ、「６９４０６
」および「９６６１４」と省略される。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｐ 3/10 ４Ｂ０６５ 48/00 11/06 ４Ｃ０８４ Ａ６１Ｐ 1/04 15/04 ４Ｃ０８５ 3/10 15/06 ４Ｃ０８７ 11/06 15/08 ４Ｈ０４５ 15/04 17/00 15/06 17/06 15/08 19/02 17/00 25/00 17/06 29/00 19/02 １０１ 25/00 35/00 29/00 37/06 １０１ 37/08 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 37/06 16/28 37/08 Ｃ１２Ｍ 1/00 Ａ Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/28 1/19 Ｃ１２Ｍ 1/00 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/02 1/21 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｐ 21/02 33/50 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 33/53 Ｄ 1/68 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/50 5/00 Ａ 33/53 15/00 Ｆ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA36 FB03 4B024 AA01 AA11 BA63 CA01 GA11 HA20 4B029 AA23 BB15 BB20 CC03 FA01 FA12 4B063 QA05 QA18 QQ79 QQ91 QQ96 QR48 QR77 QS24 QS39 QX01 4B064 AG20 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA01 AA06 AA07 AA13 BA01 BA08 BA22 BA23 BA37 ZA02 ZA59 ZA66 ZA81 ZA89 ZA96 ZB02 ZB11 ZB13 ZB15 ZB26 ZC35 4C085 AA13 AA14 BB31 CC21 EE06 4C087 AA01 BC83 CA12 ZA02 ZA59 ZA66 ZA81 ZA89 ZA96 ZB02 ZB11 ZB13 ZB15 ZB26 ZC35 4H045 AA10 AA11 BA41 CA40 DA50 EA20 EA50 FA74

Claims (71)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号１または配列番号３のいずれかに示すヌクレオチド配列； （ｂ）配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドをコードす
   るヌクレオチド配列； （ｃ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で（ａ）または（ｂ）の
   相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列であって、コードされるポリペプ
   チドは、配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有
   する、ヌクレオチド配列；および （ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
2. 【請求項２】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドに少なくと
   も約７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または９９パー
   セント同一のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、該ポリペプ
   チドが、ＧＡＰ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＡ、Ｂ
   ＬＡＳＴＸ、ＢｅｓｔＦｉｔまたはＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム
   のようなコンピュータープログラムを使用して決定されるように、配列番号２ま
   たは配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配
   列； （ｂ）配列番号１または配列番号３のいずれかに示すヌクレオチド配列の対立
   遺伝子改変体またはスプライス改変体をコードするヌクレオチド配列であって、
   コードされるポリペプチドが、配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポ
   リペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基のポリペプチドフラグメントをコードす
   る、配列番号１；配列番号３；（ａ）；または（ｂ）のいずれかのヌクレオチド
   配列であって、該ポリペプチドが、配列番号２または配列番号４のいずれかに示
   すポリペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｄ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む、配列番号１もし
   くは配列番号３、または（ａ）〜（ｃ）のいずれかのヌクレオチド配列； （ｅ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で（ａ）〜（ｄ）のいず
   れかの相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列であって、ポリペプチドが
   、配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、
   ヌクレオチド配列；および （ｆ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
3. 【請求項３】 単離された核酸分子であって、以下： （ａ）少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する配列番号２または配列番
   号４のいずれかに示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、該
   ポリペプチドが、配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの
   活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２または配列番号４の
   いずれかに示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、該ポリペ
   プチドが、配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を
   有する、ヌクレオチド配列； （ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２または配列番号４の
   いずれかに示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、該ポリペ
   プチドが、配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を
   有する、ヌクレオチド配列； （ｄ）Ｃ末端短縮化および／またはＮ末端短縮化を有する配列番号２または配
   列番号４のいずれかに示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって
   、該ポリペプチドが、配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチ
   ドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短縮化およびＮ末
   端短縮化からなる群より選択される少なくとも１つの改変を有する配列番号２ま
   たは配列番号４のいずれかに示すポリペプチドをコードするヌクレオチド配列で
   あって、該ポリペプチドが、配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリ
   ペプチドの活性を有する、ヌクレオチド配列； （ｆ）少なくとも約１６ヌクレオチドのフラグメントを含む、（ａ）〜（ｅ）
   のヌクレオチド配列； （ｇ）中程度または高度にストリンジェントな条件下で（ａ）〜（ｆ）のいず
   れかの相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列であって、ポリペプチドが
   、配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、
   ヌクレオチド配列；および （ｈ）（ａ）〜（ｅ）のいずれかに相補的なヌクレオチド配列、 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
4. 【請求項４】 請求項１、２または３に記載の核酸分子を含む、ベクター。
5. 【請求項５】 請求項４に記載のベクターを含む、宿主細胞。
6. 【請求項６】 真核生物細胞である、請求項５に記載の宿主細胞。
7. 【請求項７】 原核生物細胞である、請求項５に記載の宿主細胞。
8. 【請求項８】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドを産生するプロ
   セスであって、請求項５に記載の宿主細胞を、該ポリペプチドを発現するために
   適切な条件下で培養する工程、および必要に応じて、該ポリペプチドを該培養物
   から単離する工程を包含する、プロセス。
9. 【請求項９】 請求項８に記載のプロセスによって産生される、ポリペプチ
   ド。
10. 【請求項１０】 前記核酸分子が、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプ
    チドをコードするＤＮＡに作動可能に連結された、ネイティブなＣＤ２０／Ｉｇ
    Ｅレセプター様ポリペプチドについてのプロモーターＤＮＡ以外のプロモーター
    ＤＮＡを含む、請求項８に記載のプロセス。
11. 【請求項１１】 前記パーセント同一性が、ＧＡＰ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡ
    ＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＸ、ＢｅｓｔＦｉｔおよびＳｍ
    ｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムからなる群より選択されるコンピュータ
    ープログラムを使用して決定される、請求項２に記載の単離された核酸分子。
12. 【請求項１２】 化合物が、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド活
    性またはＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド産生を阻害するか否かを決
    定するためのプロセスであって、請求項５、６または７に記載の細胞を、該化合
    物に曝露する工程、および該細胞中でのＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプ
    チド活性またはＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド産生を測定する工程
    を包含する、プロセス。
13. 【請求項１３】 配列番号２または配列番号４のいずれかに示すアミノ酸配
    列を含む、単離されたポリペプチド。
14. 【請求項１４】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）配列番号２または配列番号４のいずれかのオルソログについてのアミノ
    酸配列であって、該コードされるポリペプチドが、配列番号２または配列番号４
    のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｂ）配列番号２または配列番号４のいずれかのアミノ酸配列に少なくとも約
    ７０、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント同一
    のアミノ酸配列であって、ポリペプチドが、ＧＡＰ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴ
    Ｎ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＸ、ＢｅｓｔＦｉｔまたはＳｍｉｔ
    ｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムのようなコンピュータープログラムを使用し
    て決定されるように、配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチ
    ドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｃ）少なくとも約２５アミノ酸残基を含む配列番号２または配列番号４のい
    ずれかに示すアミノ酸配列のフラグメントであって、該ポリペプチドが、配列番
    号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、フラグメ
    ント； （ｄ）配列番号２もしくは配列番号４のいずれかに示すアミノ酸配列または（
    ａ）〜（ｂ）の少なくとも１つのいずれかの対立遺伝子改変体またはスプライス
    改変体のアミノ酸配列であって、該ポリペプチドが、配列番号２または配列番号
    ４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
15. 【請求項１５】 単離されたポリペプチドであって、以下： （ａ）少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する配列番号２または配列番
    号４のいずれかに示すアミノ酸配列であって、該ポリペプチドが、配列番号２ま
    たは配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｂ）少なくとも１つのアミノ酸挿入を有する配列番号２または配列番号４の
    いずれかに示すアミノ酸配列であって、該ポリペプチドが、配列番号２または配
    列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｃ）少なくとも１つのアミノ酸欠失を有する配列番号２または配列番号４の
    いずれかに示すアミノ酸配列であって、該ポリペプチドが、配列番号２または配
    列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配列； （ｄ）Ｃ末端短縮化および／またはＮ末端短縮化を有する配列番号２または配
    列番号４のいずれかに示すアミノ酸配列であって、該ポリペプチドが、配列番号
    ２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、アミノ酸配
    列；ならびに （ｅ）アミノ酸置換、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失、Ｃ末端短縮化およびＮ末
    端短縮化からなる群より選択される少なくとも１つの改変を有する、配列番号２
    または配列番号４のいずれかに示すアミノ酸配列であって、該ポリペプチドが、
    配列番号２または配列番号４のいずれかに示すポリペプチドの活性を有する、ア
    ミノ酸配列、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
16. 【請求項１６】 請求項１、２、または３の核酸分子によってコードされる
    、単離されたポリペプチド。
17. 【請求項１７】 請求項１４に記載の単離されたポリペプチドであって、パ
    ーセント同一性が、ＧＡＰ、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡ
    ＳＴＡ、ＢＬＡＳＴＸ、ＢｅｓｔＦｉｔおよびＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎア
    ルゴリズムからなる群より選択されるコンピュータープログラムを使用して決定
    される、単離されたポリペプチド。
18. 【請求項１８】 配列番号２または配列番号４の８６位のアミノ酸が、グリ
    シン、プロリン、またはアラニンである、請求項１４、１５または１６に記載の
    ポリペプチド。
19. 【請求項１９】 配列番号２または配列番号４の９５位のアミノ酸が、ロイ
    シン、バリン、イソロイシン、アラニン、チロシンまたはフェニルアラニンであ
    る、請求項１４、１５または１６に記載のポリペプチド。
20. 【請求項２０】 配列番号２または配列番号４の１０３位のアミノ酸が、イ
    ソロイシン、ロイシン、バリン、メチオニン、アラニン、フェニルアラニンまた
    はノルロイシンである、請求項１４、１５または１６に記載のポリペプチド。
21. 【請求項２１】 配列番号２または配列番号４の１２１位のアミノ酸が、ア
    スパラギンまたはグルタミンである、請求項１４、１５または１６に記載のポリ
    ペプチド。
22. 【請求項２２】 配列番号２または配列番号４の１２８位のアミノ酸が、ア
    ラニン、バリン、ロイシンまたはイソロイシンである、請求項１４、１５または
    １６に記載のポリペプチド。
23. 【請求項２３】 配列番号２または配列番号４のいずれかのアミノ酸配列を
    含むペプチドで動物を免疫することによって産生される、抗体。
24. 【請求項２４】 請求項１３、１４または１５に記載のポリペプチドを特異
    的に結合する、抗体またはそのフラグメント。
25. 【請求項２５】 モノクローナル抗体である、請求項１９に記載の抗体。
26. 【請求項２６】 配列番号２または配列番号４のいずれかのアミノ酸配列を
    含むペプチドに結合するモノクローナル抗体を産生する、ハイブリドーマ。
27. 【請求項２７】 請求項２３または２５に記載の抗ＣＤ２０／ＩｇＥレセプ
    ター様抗体またはフラグメントを使用して、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリ
    ペプチドの量を検出または定量する、方法。
28. 【請求項２８】 少なくとも１つのポリペプチドを特異的に結合する選択的
    結合因子またはそのフラグメントであって、該ポリペプチドが、以下： （ａ）配列番号２または配列番号４のいずれかに示すアミノ酸配列； （ｂ）配列番号２または配列番号４のいずれかの少なくとも１つに示すアミノ
    酸配列のフラグメント；ならびに （ｃ）（ａ）または（ｂ）の天然に存在する改変体、 からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、選択的結合因子またはそのフラ
    グメント。
29. 【請求項２９】 抗体またはそのフラグメントである、請求項２８に記載の
    選択的結合因子。
30. 【請求項３０】 ヒト化抗体である、請求項２８に記載の選択的結合因子。
31. 【請求項３１】 ヒト抗体またはそのフラグメントである、請求項２８に記
    載の選択的結合因子。
32. 【請求項３２】 ポリクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求
    項２８に記載の選択的結合因子。
33. 【請求項３３】 モノクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求
    項２８に記載の選択的結合因子。
34. 【請求項３４】 キメラ抗体またはそのフラグメントである、請求項２８に
    記載の選択的結合因子。
35. 【請求項３５】 ＣＤＲグラフト化抗体またはそのフラグメントである、請
    求項２８に記載の選択的結合因子。
36. 【請求項３６】 抗イディオタイプ抗体またはそのフラグメントである、請
    求項２８に記載の選択的結合因子。
37. 【請求項３７】 可変領域フラグメントである、請求項２８に記載の選択的
    結合因子。
38. 【請求項３８】 ＦａｂまたはＦａｂ’フラグメントである、請求項３７に
    記載の可変領域フラグメント。
39. 【請求項３９】 選択的結合因子またはそのフラグメントであって、配列番
    号２または配列番号４のいずれかのアミノ酸配列を有するポリペプチドについて
    の特異性を有する少なくとも１つの相補性決定領域を含む、選択的結合因子また
    はそのフラグメント。
40. 【請求項４０】 検出可能な標識に結合している、請求項２８に記載の選択
    的結合因子。
41. 【請求項４１】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの生物学的活
    性を拮抗する、請求項２８に記載の選択的結合因子。
42. 【請求項４２】 疾患、状態または障害を処置、予防または改善するための
    方法であって、患者に、請求項２８に記載の有効量の選択的結合因子を投与する
    工程を包含する、方法。
43. 【請求項４３】 動物を、配列番号２または配列番号４のいずれかからなる
    群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドで免疫することによって産生
    される、選択的結合因子。
44. 【請求項４４】 請求項１、２または３に記載のポリペプチドを結合し得る
    選択的結合因子を産生する、ハイブリドーマ。
45. 【請求項４５】 請求項１３、１４または１５に記載のポリペプチドおよび
    薬学的に受容可能な処方剤を含む、組成物。
46. 【請求項４６】 前記薬学的に受容可能な処方剤が、キャリア、アジュバン
    ト、可溶化剤、安定剤または抗酸化剤である、請求項４５に記載の組成物。
47. 【請求項４７】 前記ポリペプチドが、配列番号２または配列番号４のいず
    れかに示すアミノ酸配列を含む、請求項４６に記載の組成物。
48. 【請求項４８】 請求項１３、１４または１５に記載のポリペプチドの誘導
    体を含む、ポリペプチド。
49. 【請求項４９】 水溶性ポリマーを用いて共有結合的に改変されている、請
    求項４９に記載のポリペプチド。
50. 【請求項５０】 前記水溶性ポリマーが、ポリエチレングリコール、モノメ
    トキシ−ポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、ポリ−（Ｎ−ビ
    ニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー
    、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化
    ポリオールおよびポリビニルアルコールからなる群より選択される、請求項４９
    に記載のポリペプチド。
51. 【請求項５１】 請求項１、２または３に記載の核酸分子および薬学的に受
    容可能な処方剤を含む、組成物。
52. 【請求項５２】 前記核酸分子が、ウイルスベクターに含まれる、請求項５
    １に記載の組成物。
53. 【請求項５３】 請求項１、２または３に記載の核酸分子を含む、ウイルス
    ベクター。
54. 【請求項５４】 異種アミノ酸配列に融合された請求項１３、１４または１
    ５に記載のポリペプチドを含む、融合ポリペプチド。
55. 【請求項５５】 前記異種アミノ酸配列が、ＩｇＧ定常ドメインまたはその
    フラグメントである、請求項５４に記載の融合ポリペプチド。
56. 【請求項５６】 医学的状態を処置、予防または改善するための方法であっ
    て、請求項１３、１４もしくは１５に記載のポリペプチドを、または請求項１、
    ２もしくは３に記載の核酸によってコードされるポリペプチドを患者に投与する
    工程を包含する、方法
57. 【請求項５７】 被験体における病理学的状態または病理学的状態に対する
    感受性を診断する方法であって、以下： （ａ）請求項１３、１４もしくは１５に記載のポリペプチドまたは請求項１、
    ２または３に記載の核酸分子によってコードされるポリペプチドの発現の、サン
    プル中での存在または量を決定する工程；および （ｂ）該ポリペプチドの発現の存在または量に基づいて、病理学的状態または
    病理学的状態に対する感受性を診断する工程、 を包含する、方法。
58. 【請求項５８】 デバイスであって、以下： （ａ）移植に適切な膜；および （ｂ）該膜内にカプセル化された細胞 を備え、該細胞が、請求項１３、１４または１５に記載のタンパク質を分泌し、
    そして該膜が、該タンパク質に対して透過性であり、そして該細胞に対して有害
    な物質に対して不透過性である、デバイス。
59. 【請求項５９】 デバイスであって、以下： （ａ）移植に適切な膜；および （ｂ）請求項１３、１４または１５に記載の該膜内にカプセル化されたＣＤ２０
    ／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド を備え、該膜が、該ポリペプチドに対して透過性である、デバイス。
60. 【請求項６０】 ポリペプチドに結合する化合物を同定する方法であって、
    以下： （ａ）請求項１３、１４または１５に記載のポリペプチドを化合物と接触させ
    る工程；および （ｂ）該化合物に対する該ポリペプチドの結合の程度を決定する工程、 を包含する、方法。
61. 【請求項６１】 動物におけるポリペプチドのレベルを調節する方法であっ
    て、請求項１、２または３に記載の核酸分子を該動物に投与する工程を包含する
    、方法。
62. 【請求項６２】 請求項１、２または３に記載の核酸分子を含む、トランス
    ジェニック非ヒト哺乳動物。
63. 【請求項６３】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの発現が減少
    する、請求項１、２または３に記載の核酸分子の破壊を含む、トランスジェニッ
    ク非ヒト哺乳動物。
64. 【請求項６４】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの生物学的活
    性のアンタゴニストを同定する方法であって、以下の工程： （ａ）化合物とＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドとを接触させる工
    程； （ｂ）該化合物の存在下で、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの生
    物学的活性を検出する工程；および （ｃ）該化合物の存在下および非存在下で、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポ
    リペプチドの生物学的活性のレベルを比較する工程、 を包含する、方法。
65. 【請求項６５】 前記化合物が、低分子、ペプチド、タンパク質、炭水化物
    、または抗体である、請求項６４に記載の方法。
66. 【請求項６６】 請求項１、２、または３に記載の核酸分子を動物に投与す
    る工程を包含する、動物におけるポリペプチドのレベルを調節する方法。
67. 【請求項６７】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド活性のアンタ
    ゴニストであって、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドについての特異
    性を有する、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様選択的結合因子、低分子、アンチセ
    ンスオリゴヌクレオチドおよびペプチドまたはそれらの誘導体からなる群より選
    択される、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチド活性のアンタゴニスト。
68. 【請求項６８】 ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ポリペプチドの細胞産生を
    減少させる方法であって、請求項６７に記載のアンタゴニストをコードする核酸
    で細胞を形質転換またはトランスフェクトする工程を包含する、方法。
69. 【請求項６９】 請求項６８に記載の方法であって、前記アンタゴニストが
    アンチセンス試薬であって、該試薬が、ＣＤ２０／ＩｇＥレセプター様ｍＲＮＡ
    に結合し得る一本鎖核酸配列を含むオリゴヌクレオチドを含む、方法。
70. 【請求項７０】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の、固体支持体に付着
    されたポリヌクレオチド。
71. 【請求項７１】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の少なくとも１つのポ
    リペプチドを含むポリヌクレオチドのアレイ。