JP2003526342A

JP2003526342A - 乳癌の診断、モニタニング、ステージング、イメージングおよび処置の新規方法

Info

Publication number: JP2003526342A
Application number: JP2001539396A
Authority: JP
Inventors: サルセダ，スサーナ; カッファーキー，ロバート; レシポン，ハーヴ; スン，ヨンミン
Original assignee: ディアデクサスインコーポレーテッド
Priority date: 1999-11-23
Filing date: 2000-11-22
Publication date: 2003-09-09
Also published as: WO2001037779A3; WO2001037779A2; EP1267934A4; CA2390802A1; EP1267934A2

Abstract

(57)【要約】本発明は、乳癌の検出、診断、モニタリング、ステージング、予後判定、イメージングおよび処置のための新規マーカーおよび方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】［発明の分野］本発明は一つには、新たに同定した乳癌特異的遺伝子および癌、特に乳癌を検
出、診断、モニタリング、ステージング、予後判定、イメージングおよび処置す
るためのアッセイに関する。

【０００２】［発明の背景］アメリカでは９人の女性のうち１人は、８５歳の寿命を基準とした生涯のある
時期に乳癌を発症するであろうと予測されている。毎年、アメリカ合衆国の１８
０，０００人を超える女性が乳癌と診断され、約４６，０００人がこの病気によ
り亡くなっている。あらゆる女性が乳癌の危険にさらされている。しかしながら
、女性の乳癌を発症する可能性は年を取るにつれ増加し、すべての癌の８０パー
セントが、５０歳を超える女性に見られる。女性の乳癌を発症する可能性を増加
させ得る幾つかの危険要因もまた存在する。これらは、乳癌の家族歴、子供がい
ないことまたは３０歳を過ぎてから第１子を持つこと、および月経の早期開始を
含む。しかしながら、乳癌を発症する女性の７０％以上は、危険要因がわかって
いない。１０パーセント未満の乳癌の症例は、１９９４年に発見されたＢＲＣＡ
１遺伝子に関連すると思われる。研究者は現在では、この婦人科系の癌の発症に
おける栄養、アルコール、運動、喫煙、および経口避妊薬等の他の要因の働きを
研究している。乳房撮影または胸部の特殊Ｘ線は、すべての癌の９０％以上を検
出することができる。

【０００３】乳癌の検出、診断、モニタリング、ステージング、および予後判定に用いられ
る方法は、患者の予後にとって決定的に重要である。早期に診断された患者は、
一般的に、遠隔転移性乳癌と診断された患者の５年生存率と比較して、ずっと高
い５年生存率を有する。乳癌を早期に検出するための、より感受性が高くて特異
的な新たな診断方法が明らかに必要である。

【０００４】初期治療後およびアジュバント療法中に、乳癌患者を綿密にモニタリングして
、治療に対する応答を測定し、持続性もしくは再発性の疾患または転移を検出す
る。したがって、乳癌再発を検出する際に、より感受性が高く特異的な癌マーカ
ーもまた明らかに必要である。

【０００５】乳癌を管理する際の別の重要な工程は、患者の疾患のステージを決定すること
である。ステージの決定は、潜在的な予後判定価値を有し、最適治療を設計する
ための基準を提供する。一般に、癌の病理学的ステージングは、より正確な予後
を与えるため、臨床的ステージングよりも好ましい。しかしながら、臨床的ステ
ージングは、病理学的評価用組織を得るための侵襲的方法によらないので、少な
くとも病理学的ステージングと同程度に正確である場合には好ましいであろう。
癌のステージングは、異なる浸潤のステージを識別することができる、細胞、組
織または体液における新規マーカーを検出することにより改良されるであろう。

【０００６】癌、特に乳癌の診断、モニタリング、ステージング、イメージングおよび処置
における使用のために、新規乳癌特異的遺伝子（本明細書中では「ＢＣＳＧ」と
称する）を今回同定した。したがって、本発明は、ＢＣＳＧを介した、癌の検出
、診断、モニタリング、ステージング、予後判定、in vivoイメージングおよび
処置のための新規方法に関する。ＢＣＳＧは、特に、ＢＣＳＧ−１または遺伝子
ＩＤ３３２３６９（配列番号１）、ＢＣＳＧ−２または遺伝子ＩＤ４８０４８９
（配列番号２または１８）、ＢＣＳＧ−３または遺伝子ＩＤ２７４７３１（配列
番号３または２０）、ＢＣＳＧ−４または遺伝子ＩＤ１７３３８８（配列番号４
）、あるいはＢＣＳＧ−５またはクローンＩＤ３０４０２３２、遺伝子ＩＤ４１
１１５２（配列番号５）のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子によって発現され
る未変性タンパク質を指す。遺伝子ＢＣＳＧ−２およびＢＣＳＧ−３によって発
現される代表的なタンパク質を、本明細書中では、配列番号１９および配列番号
２１と表す。「ＢＣＳＧ」は、本明細書中ではまた、遺伝子コードにおける縮重
に起因して、配列番号１、２、３、４、５、１８または２０と比較してのヌクレ
オチド配列における変異を含むが、同じタンパク質をなおコードする変異体ポリ
ヌクレオチドをも意味する。あるいは、本明細書で使用するＢＣＳＧが意味する
ものは、ＢＣＳＧ−１または遺伝子ＩＤ３３２３６９（配列番号１）、ＢＣＳＧ
−２または遺伝子ＩＤ４８０４８９（配列番号２または１８）、ＢＣＳＧ−３ま
たは遺伝子ＩＤ２７４７３１（配列番号３または２０）、ＢＣＳＧ−４または遺
伝子ＩＤ１７３３８８（配列番号４）あるいはＢＣＳＧ−５またはクローンＩＤ
３０４０２３２、遺伝子ＩＤ４１１１５２（配列番号５）を含む遺伝子によって
コードされる天然ｍＲＮＡを指すか、あるいはそれは、ＢＣＳＧ−１または遺伝
子ＩＤ３３２３６９（配列番号１）、ＢＣＳＧ−２または遺伝子ＩＤ４８０４８
９（配列番号２または１８）、ＢＣＳＧ−３または遺伝子ＩＤ２７４７３１（配
列番号３または２０）、ＢＣＳＧ−４または遺伝子ＩＤ１７３３８８（配列番号
４）あるいはＢＣＳＧ−５またはクローンＩＤ３０４０２３２、遺伝子ＩＤ４１
１１５２（配列番号５）を含む遺伝子自体、または配列番号１、２、３、４、５
、１８または２０のアンチセンス配列にストリンジェントな条件下にてハイブリ
ダイスすることが可能なポリヌクレオチドレベルを指し得る。

【０００７】本発明の他の目的、特徴、利点および側面は、下記の説明から当業者に明らか
となるであろう。しかしながら、下記の説明および具体例は、本発明の好ましい
態様を示すが、単なる説明のために与えられていることは理解されるべきである
。開示した本発明の精神および範囲内での様々な変更および修正は、下記の説明
を読み、および発明の開示の他の部分を読むと、当業者には容易に明らかとなる
であろう。

【０００８】発明の概要これらの目的および他の目的のために、本発明の目的は、配列番号１、２、３
、４、５、１８もしくは２０のポリヌクレオチド配列またはそれらの変異体、配
列番号１、２、３、４、５、１８もしくは２０のポリヌクレオチドまたはそれら
の変異体によって発現されるタンパク質、あるいは配列番号１、２、３、４、５
、１８または２０のアンチセンス配列に、ストリンジェントな条件下にてハイブ
リダイズすることが可能なポリヌクレオチドを含むＢＣＳＧを提供することであ
る。

【０００９】さらに、細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレベルの変化を、ヒト正常対
照の好ましくは同じ種類の細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレベルと比較
した際の変化を分析することにより、乳癌の存在を診断する方法であって、正常
ヒト対照に対する患者におけるＢＣＳＧレベルの変化が、乳癌に関連する方法を
提供する。

【００１０】さらに、転移した乳癌を有する疑いのあるヒト患者を同定し、ＢＣＳＧに関し
てかかる患者由来の細胞、組織または体液の試料を分析し、かかる細胞、組織ま
たは体液におけるＢＣＳＧレベルを正常ヒト対照の好ましくは同じ種類の細胞、
組織または体液におけるＢＣＳＧレベルと比較することにより、転移したことが
わかっていない乳癌を有する患者における転移性乳癌を診断する方法であって、
正常ヒト対照に対する患者のＢＣＳＧレベルの増加が、転移した乳癌に関連する
方法を提供する。

【００１１】また、乳癌を有するヒト患者を同定し、ＢＣＳＧに関してかかる患者由来の細
胞、組織または体液の試料を分析し、かかる細胞、組織または体液におけるＢＣ
ＳＧのレベルを正常ヒト対照の好ましくは同じ種類の細胞、組織または体液にお
けるＢＣＳＧレベルと比較することにより、ヒトにおける乳癌をステージングす
る方法であって、正常ヒト対照に対する患者のＢＣＳＧレベルの増加が、進行し
ている癌に関連し、ＢＣＳＧレベルの減少が、消退または寛解している癌に関連
する方法を提供する。

【００１２】さらに、転移の開始に関するヒト患者における乳癌をモニタリングする方法を
提供する。この方法は、転移したことがわかっていない乳癌を有するヒト患者を
同定することと、ＢＣＳＧに関してかかる患者由来の細胞、組織または体液を定
期的に分析することと、かかる細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレベルを
正常ヒト対照の好ましくは同じ種類の細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレ
ベルと比較することを含み、ここで正常ヒト対照に対する患者におけるＢＣＳＧ
レベルの増加は、転移した癌に関連する。

【００１３】さらに、ヒト患者におけるＢＣＳＧレベルを検査することにより、乳癌を有す
るヒト患者における癌のステージの変化をモニタリングする方法を提供する。こ
の方法は、乳癌を有するヒト患者を同定することと、ＢＣＳＧに関してかかる患
者由来の細胞、組織または体液を定期的に分析することと、かかる細胞、組織ま
たは体液におけるＢＣＳＧレベルを正常ヒト対照の好ましくは同じ種類の細胞、
組織または体液におけるＢＣＳＧレベルと比較することを含み、ここで正常ヒト
対照に対する患者におけるＢＳＣＧレベルの増加は、進行している乳癌に関連し
、ＢＣＳＧレベルの減少は、消退または寛解している乳癌に関連する。

【００１４】さらに、癌のイメージングおよび治療における使用のためのＢＣＳＧを標的と
した新規治療剤を設計する方法を提供する。例えば、１つの態様では、ＢＣＳＧ
を標的とした抗体またはかかる抗体の断片のような治療剤は、疾患もしくは状態
を検出または診断する目的で、患者におけるＢＣＳＧの局在化を処置、検出また
はイメージングするために使用することができる。この態様では、正常組織と比
較して、検出される標識抗体の量の増加が、腫瘍の転移または成長を示すであろ
う。かかる抗体は、ポリクローナル、モノクローナルまたはオムニクローナル(o
mniclonal)であり得るか、または分子生物学的手法により調製され得る。ここで
、および本明細書全体にわたって用いる「抗体」という用語はまた、ＳＥＬＥＸ
と呼ばれる当業者に周知のin vitro進化プロトコルから得られるもののようなア
プタマーおよび一本鎖オリゴヌクレオチドを含むことを意味する。抗体は、放射
性同位体および常磁性金属を含むが、これらに限定されない様々な検出可能な標
識を用いて標識することができる。ＢＣＳＧの濃度および／または活性を減少さ
せる、低分子および抗体またはその断片のような治療剤もまた、ＢＣＳＧの過剰
発現を特徴とする疾患の処置に用いることができる。これらの用途では、抗体は
、放射性同位体、酵素、毒素、薬剤またはプロドラッグのような細胞傷害剤への
誘導体化を伴なわずに、または伴って使用することができる。

【００１５】本発明の他の目的、特徴、利点および側面は、下記の説明から当業者に明らか
になるであろう。しかしながら、下記の説明および具体例は、本発明の好ましい
態様を示すが、単なる説明のために与えらていることは理解されるべきである。
開示した本発明の精神および範囲内での様々な変更および修正は、下記の説明を
読み、および発明の開示の他の部分を読むと、当業者には容易に明らかとなるで
あろう。

【００１６】発明の説明本発明は、乳癌特異的遺伝子（ＢＣＳＧ）レベルを正常ヒト対照のＢＣＳＧレ
ベルと比較することにより、乳癌を検出、診断、モニタリング、ステージング、
予後判定、in vivoイメージングおよび処置するための定量的かつ定性的な診断
アッセイおよび方法に関する。ＢＣＳＧは、特にＢＣＳＧ−１または遺伝子ＩＤ
３３２３６９（配列番号１）、ＢＣＳＧ−２または遺伝子ＩＤ４８０４８９（配
列番号２または１８）、ＢＣＳＧ−３または遺伝子ＩＤ２７４７３１（配列番号
３または２０）、ＢＣＳＧ−４または遺伝子ＩＤ１７３３８８（配列番号４）あ
るいはＢＣＳＧ−５またはクローンＩＤ３０４０２３２、遺伝子ＩＤ４１１１５
２（配列番号５）のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子により発現される未変性
タンパク質を指す。遺伝子ＢＣＳＧ−２およびＢＣＳＧ−３により発現される代
表的なタンパク質を、本明細書中では、配列番号１９および配列番号２１と表す
。これらのタンパク質をコードする遺伝子（配列番号１８および２０）はタンパ
ク質（配列番号１９および２０）とともに、アクセッション番号ＡＦ０１６４９
２．１（配列番号１８）、ＡＡＣ２７８９１．１（配列番号１９）、ＡＦ１８３
８１９（配列番号２０）、およびＡＡＦ２３６１４．１（配列番号２１）として
、遺伝子バンクに開示されている。「ＢＣＳＧ」は、本明細書中ではまた、遺伝
子コードにおける縮重に起因して、配列番号１、２、３、４、５、１８または２
０と比較してヌクレオチド配列における変異を含むが、同じタンパク質をなおコ
ードする変異体ポリヌクレオチドをも意味する。検出される未変性タンパク質は
、全体、分解生成物、分子の複合体であるか、または化学的に修飾されていても
よい。あるいは、本明細書で使用するＢＣＳＧが意味するものは、ＢＣＳＧ−１
または遺伝子ＩＤ３３２３６９（配列番号１）、ＢＣＳＧ−２または遺伝子ＩＤ
４８０４８９（配列番号２または１８）、ＢＣＳＧ−３または遺伝子ＩＤ２７４
７３１(配列番号３または２０）、ＢＣＳＧ−４または遺伝子ＩＤ１７３３８８
（配列番号４）あるいはＢＣＳＧ−５またはクローンＩＤ３０４０２３２、遺伝
子ＩＤ４１１１５２（配列番号５）を含む遺伝子によってコードされる天然ｍＲ
ＮＡを指すか、あるいはそれは、ＢＣＳＧ−１または遺伝子ＩＤ３３２３６９（
配列番号１）、ＢＣＳＧ−２または遺伝子ＩＤ４８０４８９（配列番号２または
１８）、ＢＣＳＧ−３または遺伝子ＩＤ２７４７３１（配列番号３または２０）
、ＢＣＳＧ−４または遺伝子ＩＤ１７３３８８（配列番号４）あるいはＢＣＳＧ
−５またはクローンＩＤ３０４０２３２、遺伝子ＩＤ４１１１５２（配列番号５
）を含む遺伝子自体、または配列番号１、２、３、４、５、１８または２０のア
ンチセンス配列にストリンジェントな条件下にてハイブリダイスすることが可能
なポリヌクレオチドレベルを指し得る。かかるレベルは、好ましくは、細胞、組
織および／または体液の少なくとも１つにて測定され、正常および異常レベルの
決定を含む。したがって、例えば、正常な対照体液、細胞または組織試料と比較
して、ＢＣＳＧタンパク質の過剰発現を診断するための本発明による診断アッセ
イを用いて、癌、特に乳癌の存在を診断することができる。ＢＣＳＧは、本発明
の方法にて単独で、またはより好ましくは本明細書中に記載の他のＢＣＳＧを含
む他の乳癌用診断マーカーと組み合わせて測定されてもよい。ＢＣＳＧの他に、
本発明にて有用な他の乳癌マーカーは、当業者に既知である。

【００１７】診断アッセイ本発明は、ヒト患者由来の細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレベルを、
正常ヒト対照由来の好ましくは同じ種類の細胞、組織または体液におけるＢＣＳ
Ｇレベルと比較した際の変化を分析することにより、癌、特に乳癌の存在を診断
する方法であって、正常ヒト対照に対する患者のＢＣＳＧレベルの増加が、癌の
存在に関連する方法を提供する。

【００１８】本発明を限定することなく、定量的診断アッセイに関して、試験した患者が乳
癌を有することを示す陽性の結果は、典型的にはＢＣＳＧのような癌マーカーの
細胞、組織または体液レベルが、正常ヒト対照の好ましくは同じ細胞、組織また
は体液におけるレベルよりも少なくとも２倍高く、最も好ましくは少なくとも５
倍高いものである。

【００１９】本発明はまた、まだ転移していない乳癌を有する患者において、転移性癌、特
に転移性乳癌を診断する方法を提供する。本発明の方法では、転移した乳癌を有
する疑いのある（しかし、転移したことはまだわかっていない）ヒト癌患者を同
定する。これは、当業者に既知の様々な手段により達成される。

【００２０】本発明にて、細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧの存在を決定することは
、転移していなかった癌と転移した癌を識別するのに特に有用である。現存の技
法では、転移した乳癌と転移していない乳癌を識別するのが難しい。しかしなが
ら、適切な処置の選択は多くの場合、かかる認識に依存する。

【００２１】本発明にて、ヒト患者の細胞、組織または体液にて測定される癌マーカーレベ
ルの１つは、ＢＣＳＧである。ヒト患者におけるレベルは、正常ヒト対照の好ま
しくは同じ種類の細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレベルと比較される。
すなわち、観察される癌マーカーが血清中のＢＣＳＧである場合には、このレベ
ルは、好ましくは正常ヒト対照の血清中のＢＣＳＧレベルと比較される。正常ヒ
ト対照に対するヒト患者におけるＢＣＳＧの増加は、転移した癌に関連する。

【００２２】本発明を限定することなく、定量的診断アッセイに関して、試験した患者また
はモニターした患者における癌が転移したものであることを示す陽性の結果は、
典型的にはＢＣＳＧのような癌マーカーの細胞、組織または体液レベルが、正常
ヒト対照の好ましくは同じ細胞、組織または体液におけるレベルよりも少なくと
も２倍高く、最も好ましくは５倍高いものである。

【００２３】本明細書中で用いる正常ヒト対照は、癌を有さないヒト患者および／または患
者由来の非癌試料を含み、転移を診断またはモニターする方法では、正常ヒト対
照は、好ましくは、転移する前の同じ患者由来の試料のような、信頼できる方法
により転移していない乳癌を有することが決定されているヒト患者由来の試料を
含む。

【００２４】ステージング本発明はまた、ヒト患者における癌のステージングの方法を提供する。

【００２５】この方法は、乳癌を有するヒト患者を同定することと、ＢＣＳＧに関してかか
る患者由来の細胞、組織または体液の試料を分析することを含む。次に、測定し
たＢＣＳＧレベルを、正常ヒト対照の好ましくは同じ種類の細胞、組織または体
液におけるＢＣＳＧレベルと比較し、ここで正常ヒト対照に対するヒト患者にお
けるＢＣＳＧレベルの増加は、進行している乳癌に関連し、ＢＣＳＧレベルの減
少は、消退または寛解している乳癌に関連する。

【００２６】モニタリングさらに、転移の開始に関してヒト患者における乳癌をモニタリングする方法を
提供する。この方法は、転移したことがわかっていない乳癌を有するヒト患者を
同定することと、ＢＣＳＧに関してかかる患者由来の細胞、組織または体液を定
期的に分析することと、かかる細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレベルを
正常ヒト対照の好ましくは同じ種類の細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレ
ベルと比較することとを含み、ここで正常ヒト対照に対する患者のＢＣＳＧレベ
ルの増加は、転移した乳癌に関連する。

【００２７】さらに、本発明は、乳癌のステージの変化をモニタリングする方法を提供する
。この方法は、乳癌を有するヒト患者を同定することと、ＢＣＳＧに関してかか
る患者由来の細胞、組織または体液を定期的に分析することと、かかる細胞、組
織または体液におけるＢＣＳＧレベルを正常ヒト対照の好ましくは同じ種類の細
胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレベルと比較することとを含み、ここで正
常ヒト対照に対する患者におけるＢＣＳＧレベルの増加は、病期が進行している
乳癌に関連し、ＢＣＳＧレベルの減少は、病期が後退または寛解している乳癌に
関連する。

【００２８】転移の開始に関するかかる患者のモニタリングは、定期的であり、好ましくは
年４回を基準に行われる。しかしながら、これは、癌、特定の患者および癌のス
テージに依存して、より多い頻度で、またはより少ない頻度で実施されてもよい
。

【００２９】予後判定試験および臨床試験モニタリング本明細書に記載の方法はさらに、ＢＣＳＧの増加したレベルに関連する疾患ま
たは障害を有する対象あるいは発症する危険にさらされている対象を同定するた
めの予後判定アッセイとして利用され得る。本発明は、試験試料がヒト患者から
得られ、ＢＣＳＧが検出される方法を提供する。正常ヒト対照と比較してより高
いＢＣＳＧレベルの存在は、ヒト患者が癌、特に乳癌を発症する危険にさらされ
ているという診断となる。

【００３０】本発明のＢＣＳＧの発現または活性を減少させる治療剤の有効性もまた、ヒト
細胞でのような臨床試験またはin vitroのスクリーニングアッセイにて、ヒト患
者におけるＢＣＳＧの発現レベルを分析することによりモニタリングされ得る。
この方法では、遺伝子発現パターンは、試験される薬剤に対して、ヒト患者、場
合によっては細胞の生理学的応答を示すマーカーとしての役割を果たすことがで
きる。

【００３１】遺伝子の損傷または突然変異の検出本発明の方法はまた、ＢＣＳＧにおける遺伝子の損傷または突然変異を検出す
るのに使用することができ、それにより遺伝子の損傷を有するヒトが、乳癌の危
険にさらされているか、または乳癌を有するかを決定する。遺伝子の損傷は、例
えば本発明のＢＣＳＧ由来の１つもしくは２つ以上のヌクレオチドの欠失および
／または付加および／または置換の存在、ＢＣＳＧの染色体再配列、ＢＣＳＧの
異常修飾（ゲノムＤＮＡのメチル化パターンのような）、ＢＣＳＧのｍＲＮＡ転
写物の非野生型スプライシングパターンの存在、ＢＣＳＧの対立遺伝子欠損、お
よび／またはＢＣＳＧタンパク質の不適切な翻訳後修飾の存在を確認することに
より検出することができる。本発明のＢＣＳＧにおけるかかる損傷を検出する方
法は、当業者に既知である。

【００３２】アッセイ技法ヒト由来の試料中の、本発明のＢＣＳＧのような遺伝子発現レベルを測定する
のに用いられ得るアッセイ技法は、当業者に周知である。かかるアッセイ方法と
しては、ラジオイムノアッセイ、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ、
免疫組織化学アッセイ、in situ ハイブリダイゼーションアッセイ、競合結合ア
ッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイおよびプロテオーム(pro
teomic)アプローチ、二次元ゲル電気泳動（２Ｄ電気泳動）および質量分析また
はタンパク質相互作用プロファイリングのような非ゲル系アプローチが挙げられ
る。これらのうち、ＥＬＩＳＡは、生物学的液体において遺伝子発現したタンパ
ク質を診断するのにしばしば好ましい。

【００３３】ＥＬＩＳＡアッセイは初めに、市販用供給源から容易に入手可能でない場合、
ＢＣＳＧに特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体を調製することを含む
。さらに、一般的に、ＢＣＳＧに特異的に結合するレポーター抗体が、調製され
る。レポーター抗体は、放射性、蛍光または酵素試薬、例えばホースラディッシ
ュペルオキシダーゼ酵素またはアルカリホスファターゼのような検出可能な試薬
に結合される。

【００３４】ＥＬＩＳＡを実行するために、ＢＣＳＧに特異的な抗体を、抗体を結合する固
体支持体、例えばポリスチレンディッシュ上にてインキュベートする。次に、デ
ィッシュ上のいかなる自由なタンパク質結合部位をも、ウシ血清アルブミンのよ
うな非特異的タンパク質とともにインキュベートすることにより被覆する。次に
分析されるべき試料をディッシュにてインキュベートし、その間にＢＣＳＧは、
ポリスチレンディッシュに結合した特異的抗体に結合する。非結合試料を緩衝液
で洗い流す。ＢＣＳＧに対して特異的であり、ホースラディッシュペルオキシダ
ーゼのような検出可能試薬に結合したレポーター抗体をディッシュに入れ、その
結果ＢＣＳＧに結合した任意のモノクローナル抗体へのレポーター抗体の結合が
起こる。次に非結合レポーター抗体を洗い流す。次に、比色基質を含むペルオキ
シダーゼ活性用試薬をディッシュに添加する。ＢＣＳＧ抗体に結合した固定化ペ
ルオキシダーゼは、着色反応生成物を生産する。所定の時間に発色した色彩量は
、試料中に存在するＢＣＳＧタンパク質量に比例する。定量結果は典型的に、標
準曲線を参照することにより得られる。

【００３５】ＢＣＳＧに特異的な抗体が、固体支持体に結合され、この固体支持体に標識Ｂ
ＣＳＧおよび患者またはヒト対照から得られる試料を通過させる競合アッセイも
また、使用可能である。固体支持体に結合した検出標識の量は、試料中のＢＣＳ
Ｇの量に相関する。

【００３６】またハイブリダイゼーションプローブとして本発明のＢＣＳＧの核酸配列のす
べてまたは一部を使用する核酸方法を用いて、癌、特に乳癌用マーカーとしてＢ
ＣＳＧｍＲＮＡを検出することができる。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）なら
びにリガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）および核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＡＢＡ）
のような他の核酸方法を用いて、様々な悪性腫瘍の診断およびモニタリングを行
うために悪性細胞を検出することができる。例えば、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−
ＰＣＲ）は有力な手法であり、数千もの他のｍＲＮＡ種の複合混合物における特
異的ｍＲＮＡ集団の存在を検出することができる。ＲＴ−ＰＣＲにて、ｍＲＮＡ
種は、まず酵素逆転写酵素を用いて相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に逆転写され、次に
、標準的なＰＣＲ反応におけるように、ｃＤＮＡを増幅する。したがって、ＲＴ
−ＰＣＲは、増幅により、ｍＲＮＡの単一種の存在を明らかにする。したがって
、ｍＲＮＡがそれを生産する細胞に関して非常に特異的である場合、ＲＴ−ＰＣ
Ｒは、特定の種類の細胞の存在を同定するのに使用することができる。

【００３７】固体支持体上に配列された（すなわち、グリッディング）クローンまたはオリ
ゴヌクレオチドへのハイブリダイゼーションを用いて、該遺伝子の発現を検出、
かつ該遺伝子の発現レベルを定量することができる。このアプローチでは、ＢＣ
ＳＧ遺伝子をコードするｃＤＮＡは、基材に固定される。基材は、ガラス、ニト
ロセルロース、ナイロンまたはプラスチックを含むいかなる好適な型であっても
よいが、これらに限定されない。ＢＣＳＧ遺伝子をコードするＤＮＡの少なくと
も一部を基材に結合し、次に当該組織から単離されるＲＮＡまたはＲＮＡの相補
ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）コピーであり得る検体とともにインキュベートする。検体の
放射性標識または蛍光標識あるいはハイブリッドを検出するように設計される第
２の分子を含むが、これらに限定されない幾つかの手段により、基材結合ＤＮＡ
と検体間のハイブリダイゼーションを検出および定量することができる。遺伝子
発現レベルの定量は、既知の標準物質から決定されるシグナル強度に対する検体
由来のシグナル強度の比較によりなされる。標準物質は、標的遺伝子のin vitro
での転写により得られ、収量を定量し、続いて該物質を用いて標準曲線を作成す
る。

【００３８】プロテオームアプローチのうち、２Ｄ電気泳動は、当業者に周知の手法である
。血清などの試料からの個々のタンパク質の分離は、通常ポリアクリルアミドゲ
ル上での異なる特徴によるタンパク質の系列的分離を用いて成し遂げられる。第
１に、電流を用いて大きさでタンパク質を分離する。電流はすべてのタンパク質
に一様に作用し、従って小さなタンパク質は大きなタンパク質よりもゲル上をよ
り遠くへ移動する。第２の次元は、第１に対して垂直に電流を適用し、大きさに
基づかないが、各タンパク質が有する特異的な電荷に基づいてタンパク質を分離
する。異なる配列を有する２つのタンパク質は、大きさおよび電荷の両方に基づ
いて一致しないので、２Ｄ分離の結果は、正方形ゲルであり、各タンパク質が固
有のスポットを占有する。化学物質または抗体プローブを用いたスポットの分析
、またはそれに続くタンパク質マイクロシークエンシングは、試料中の所定のタ
ンパク質の相対存在量を明らかにし、タンパクを同定することができる。

【００３９】上記試験は、組織生検および剖検材料を含む、患者から得られる様々な細胞、
体液および／または組織抽出物（ホモジネートまたは可溶化組織）由来の試料に
実施され得る。本発明において有用な体液としては、血液、尿、唾液または任意
の他の身体分泌物、あるいはそれらの派生物が挙げられる。血液としては、全血
、血漿、血清または血液の任意の派生物を挙げることができる。

【００４０】ＢＣＳＧのin vivoターゲティング／乳癌治療ＢＣＳＧの同定はまた、癌、特に乳癌をイメージングおよび治療するための新
規治療薬の合理的設計において有用である。例えば、１つの態様では、癌を患っ
ている疑いのある患者において、ＢＣＳＧに特異的に結合する抗体を作製し、in
vivoで用いることができる。診断および／または治療目的で、ＢＣＳＧを特異
的に結合する抗体を、癌を有する疑いのある患者に注射することができる。in v
ivo診断用抗体の調製および使用は、当該技術にて公知である。例えば、インジ
ウム１１１で標識された抗体−キレート化剤は、癌胎児抗原発現腫瘍のラジオイ
ムノシンチグラフィーイメージングにおける使用について記載されている(Sumer
don et al. Nucl. Med. Biol. 1990 17: 247-254)。特に、これらの抗体−キレ
ート化剤は、再発性結腸直腸癌を有する疑いのある患者における腫瘍の検出に使
用された。(Griffin et al.J. Clin. Onc. 1991 9:631-640)。磁気共鳴イメージ
ングにおける使用のための標識としての常磁性イオンを伴う抗体もまた記載され
ている(Lauffer, R.B. Magnetic Resonance in Medicine 1991 22:339-342)。Ｂ
ＣＳＧに対する抗体は、類似の様式で使用することができる。ＢＣＳＧを特異的
に結合する標識抗体は、患者の病状を診断またはステージングする目的で、乳癌
を有する疑いのある患者に注射することができる。用いる標識は、使用されるべ
きイメージング形式に従って選択されるであろう。例えば、インジウム１１１、
テクネチウム９９ｍまたはヨウ素１３１などの放射性標識は、平面スキャンまた
は単一光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）用に使用することがで
きる。フッ素１９のようなポジトロン放出標識は、ポジトロン断層撮影法にて用
いることができる。ガドリニウム（ＩＩＩ）またはマンガン（ＩＩ）のような常
磁性イオンは、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）にて使用することができる。標
識の局在化により、癌の播種を決定することが可能である。器官または組織内の
標識量によってもまた、該器官または組織における癌の存在または非存在を決定
することができる。

【００４１】癌、特に乳癌と診断された患者に関して、ＢＣＳＧを特異的に結合する抗体の
注射はまた、治療的有益性を有することができる。抗体は、単独でその治療効果
を発揮してもよい。あるいは、抗体は、薬剤、毒素または放射性核種などの細胞
傷害剤に結合して、その治療効果を高めることができる。薬剤モノクローナル抗
体は、例えばGarnett and Baldwin, Cancer Research 1986 46:2407-2412によっ
て、当該技術にて記載されている。様々な癌治療のためのモノクローナル抗体に
結合させた毒素の使用もまた、Pastan et al., Cell 1986 47:641-648によって
記載されている。イットリウム９０標識モノクローナル抗体は、正常組織に対す
る毒性を制限しながら腫瘍に送達される用量の最大化について記載されている(G
oodwin and Meares Cancer Supplement 1997 80:2675-2680)。銅６７、ヨウ素１
３１およびレニウム１８６を含むが、これらに限定されない他の細胞傷害性放射
性核種もまた、ＢＣＳＧに対する抗体の標識に使用することができる。

【００４２】これらのin vivoでの方法において用いることができる抗体としては、ポリク
ローナル、モノクローナルおよびオムニクローナル抗体、ならびに分子生物学的
手法により調製された抗体が挙げられる。ＳＥＬＥＸと呼ばれる、当業者に公知
のin vitro進化プロトコルから得られるもののような抗体断片およびアプタマー
および一本鎖オリゴヌクレオチドもまた使用することができる。

【００４３】スクリーニングアッセイ本発明はまた、ＢＣＳＧタンパク質に結合するか、またはＢＣＳＧタンパク質
の発現もしくは活性に調節的影響を及ぼす調節因子を同定する方法を提供する。
ＢＣＳＧタンパク質の発現または活性を減少させる調節因子は、乳癌の治療に有
用であると考えられる。かかるスクリーニングアッセイは、当業者に既知であり
、細胞系アッセイおよび無細胞アッセイを含むが、これらに限定されない。

【００４４】ＢＣＳＧ領域に特異的に結合するための、コンピュータイメージングを介して
予測される小分子はまた、乳癌のイメージングおよび処置における使用のために
、設計、合成および試験され得る。さらに、分子の本明細書中で同定されるＢＣ
ＳＧに結合する能力を評価することにより、潜在的抗癌剤に関して、分子ライブ
ラリーをスクリーニングすることができる。ＢＣＳＧに結合することが可能であ
るとライブラリー中で同定された分子は、乳癌の治療における使用のためのさら
なる評価のための重要な候補物である。好ましい態様では、これらの分子は、細
胞においてＢＣＳＧの発現および／または活性を下方制御するであろう。

【００４５】養子免疫療法およびワクチン癌の養子免疫療法は、抗腫瘍活性を有する免疫細胞を該細胞が直接的または間
接的に定着した腫瘍の消退を誘導する目的で、腫瘍保有宿主に投与する治療アプ
ローチを指す。リンパ球、特にＴリンパ球の輸血は、このカテゴリーに分類され
、米国国立癌研究所（ＮＣＩ）の研究者は、末梢血液リンパ球または腫瘍浸潤リ
ンパ球（ＴＩＬ）、皮下リンパ小節の生検由来のＴ細胞培養液の自己輸血を用い
て、幾つかのヒトの癌を治療した（１９８７年９月１日に発行された米国特許第
４，６９０，９１４号(Rosenberg, S. A.)、Rosenberg, S. A., et al., 1988,
N. England J. Med. 319:1676-1680)。

【００４６】本発明は、熱ショックタンパク質（ｈｓｐ）の非共有性複合体を用いて、また
は用いずに、抗原性ＢＣＳＧ分子に対して感作したマクロファージを用いた、ヒ
トにおける原発性および転移性乳癌の予防および／または処置のための養子免疫
療法の組成物および方法に関する。ＢＣＳＧの抗原性または免疫原性は、ＢＣＳ
Ｇタンパク質またはその断片の、抗体を産生させるか、またはナイーブなエフェ
クター細胞を感作して、その結果、抗原（またはエピトープ）を発現する標的細
胞を溶解させる能力により容易に確認される。

【００４７】癌細胞は、定義により異常であり、正常組織に存在しないために、免疫系によ
り異物として認識されるべきタンパク質を含有する。しかしながら、免疫系は多
くの場合、この異常性を無視するようであり、腫瘍を攻撃することに失敗する。
癌細胞によって産生される異物ＢＣＳＧタンパク質は、それらの存在を示すのに
使用することができる。ＢＣＳＧは、腫瘍抗原と呼ばれる短い断片になり、細胞
表面に表示される。これらの腫瘍抗原は、ＭＨＣと呼ばれる分子（それらには２
つの型、すなわちクラスＩおよびクラスＩＩが存在する）により細胞表面に保持
または提示される。ＭＨＣクラスＩ分子に関連する腫瘍抗原は、細胞傷害性Ｔ細
胞により認識され、一方、抗原−ＭＨＣクラスＩＩ複合体は、ヘルパー細胞と呼
ばれるＴ細胞の第２のサブセットにより認識される。これらの細胞は、サイトカ
インを分泌し、腫瘍の成長を遅くし、または停止させ、別の型の白血球細胞であ
るＢ細胞が腫瘍細胞に対する抗体を製造するのを助ける。

【００４８】養子免疫療法では、腫瘍特異的ＢＣＳＧ抗原を用いて、Ｔ細胞または他の抗原
提示細胞（ＡＰＣ）を体外(ex vivo)で刺激する。次に、刺激した細胞を、患者
に自己輸血し、それらは癌性細胞を攻撃する。研究により、細胞傷害性およびヘ
ルパーＴ細胞の両方を用いることは、各サブセットを単独で用いるよりもはるか
に効果的であることがわかった。さらに、ＢＣＳＧ抗原は、米国特許第５，９８
５，２７０号に記載されるように、熱ショックタンパク質と複合体を形成して、
ＡＰＣを刺激してもよい。

【００４９】ＡＰＣは、マクロファージ、樹状細胞、Ｂリンパ球、およびそれらの組合せを
含むが、それらに限定されない既知の抗原提示細胞の中から選択することができ
、好ましくはマクロファージである。細胞が個体に対して自系である好ましい用
途では、リンパ球、マクロファージまたは他のＡＰＣのような自己免疫細胞を用
いて、養子移植の免疫細胞のドナーとして誰が選択されるべきという問題を避け
る。自家免疫細胞の使用により避けられる別の問題は、処置が成功しなかった場
合に、致命的であり得る移植片対宿主病である。

【００５０】遺伝子治療を用いた養子免疫療法では、従来の遺伝子治療における場合と同様
に、ＢＣＳＧのＤＮＡをエフェクター細胞に導入することができる。これは、エ
フェクター細胞が操作されて、タンパク質抗原を産生するので、腫瘍細胞に対す
るエフェクター細胞の細胞傷害性を高めることができ、養子免疫療法を改善する
結果となる。

【００５１】本発明のＢＣＳＧ抗原はまた、乳癌ワクチンの成分として有用である。ワクチ
ンは、免疫刺激量のＢＣＳＧ抗原を含む。免疫刺激量とは、乳癌の改善または処
置のためのレシピエントにおける所望の免疫応答を誘起することができる抗原量
を指す。有効量は、当業者に既知の標準的手法により経験的に決定されてもよい
。

【００５２】ＢＣＳＧ抗原は、所望の型の免疫応答（例えば抗体および／または細胞媒介性
）を誘発するよう設計される多数のワクチン配合物のいずれに提供されてもよい
。かかる配合物は、当該技術で既知であり、米国特許第５，５８５，１０３号に
記載されるような配合物が挙げられるが、これに限定されない。免疫応答を刺激
するために用いられる本発明のワクチン配合物はまた、薬学的に許容し得るアジ
ュバントを含むことができる。

【００５３】例本発明は、下記の例によりさらに説明される。これらの例は、具体例を参照す
ることにより、本発明を単に説明するために提供される。これらの例は、本発明
のある特定の側面を説明するが、限定を表すものでも、開示する本発明の範囲を
制限するものでもない。

【００５４】例１：ＣＬＡＳＰによるＢＣＳＧの同定 diaDexus LLC, Santa Clara CAにより開発されたデータマイニング癌リード自
動サーチパッケージ(Cancer Leads Automatic Search Package)（ＣＬＡＳＰ）
を用いた、Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, CAから入手可能なＬＩＦＥＳ
ＥＱＧｏｌｄ（ＬＳＧｏｌｄ）データベースにおけるデータの系統的分析によ
り、ＢＣＳＧ（乳癌特異的遺伝子）の同定を行った。

【００５５】ＣＬＡＳＰは、下記工程：（１）他のすべての器官に対する標的器官における対応するＥＳＴの存在量レベ
ルに基づく高発現器官特異的遺伝子の選択、（２）正常、腫瘍組織、疾患組織、および腫瘍または疾患に関連した組織ライブ
ラリーにおける各高発現器官特異的遺伝子の発現レベルの分析、（３）コンポーネントＥＳＴが、腫瘍ライブラリーにて独占的に、またはより頻
繁に見出される候補物の選択、を実行する。

【００５６】ＣＬＡＳＰは、高発現器官および癌特異的遺伝子を同定することが可能である
。次に、深度評価における最終マニュアルを実行して、器官癌特異的遺伝子（Ｏ
ＣＳＧ）の選択を完結する。表１は、ＣＬＡＳＰを用いて同定した、本発明のＢ
ＣＳＧを提供する。

【００５７】

【表１】

【００５８】例２：ＢＣＳＧ−５のｍＲＮＡ発現の測定リアルタイム定量ＰＣＲを用いて、種々の組織における、ＢＣＳＧ、ＢＣＳＧ
−５（配列番号５、クローンＩＤ３０４０２３２、遺伝子ＩＤ４１１１５２）（
またＭＡＭ００９とも称する）のｍＲＮＡ発現レベルを分析した。ＢＣＳＧ−５
に関して本明細書に示した結果は、癌診断マーカーを同定するためのツールとし
てのＣＬＡＳＰの使用を支持する。

【００５９】別に詳述した場合を除いて、当業者に周知のルーチンな標準的手法を用いて、
これらの実験を行った。ルーチンな分子生物学的手法は、Sambrook et al., MOL
ECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laborat
ory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989)のような標準的実験室マニュア
ルに記載されてあるように行った。

【００６０】蛍光Ｔａｑｍａｎプローブを用いたリアルタイム定量ＰＣＲは、ＴａｑＤＮＡ
ポリメラーゼの５’−３’ヌクレアーゼ活性を利用した定量的検出システムであ
る。この方法は、５’レポーター色素および下流の３’クエンチャー色素で標識
した内部蛍光オリゴヌクレオチドプローブ（Ｔａｑｍａｎ）を使用する。ＰＣＲ
中に、ＴａｑＤＮＡポリメラーゼの５’−３’ヌクレアーゼ活性はレポーターを
放出させ、続いてＭｏｄｅｌ７７００配列検出システム(PE Applied Biosystems
, Foster City, CA, USA)のレーザー検出器により、レポーターの蛍光を検出す
ることができる。

【００６１】内因性対照の増幅を用いて、反応に添加した試料ＲＮＡ量を標準化し、逆転写
酵素（ＲＴ）効率を規格化する。シクロフィリン、グリセルアルデヒド−３−リ
ン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）または１８ＳリボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ
）のいずれかを、この内因性対照として用いた。すべての調査試料間の相対定量
を計算するために、１つの試料に関する標的ＲＮＡレベルを、比較結果基準（キ
ャリブレータ）として用いた。標準曲線法または比較法（User Bulletin #2：Ａ
ＢＩＰＲＩＳＭ７７００配列検出システム)を用いて、「キャリブレータ」
に対する相対的定量を得ることできる。

【００６２】正常および癌組織において、あらゆる試料に関して標的遺伝子の組織分布およ
びレベルを測定した。正常組織、癌組織、ならびに癌とその対応隣接組織から全
ＲＮＡを抽出した。次に、逆転写酵素を用いて、第１の鎖ｃＤＮＡを調製し、各
標的遺伝子に特異的なプライマーおよびＴａｑｍａｎプローブを用いて、ポリメ
ラーゼ連鎖反応を行った。ＡＢＩＰＲＩＳＭ７７００配列検出器を用いて、
結果を分析した。無名数は、キャリブレータ組織と比較した特定組織における標
的遺伝子の発現の相対レベルである。

【００６３】発現分析に用いるプライマーは、下記：ＢＣＳＧ−５正方向：ＡＣＣＣＣＡＴＴＴＡＧＣＣＴＧＣＣＡＴ（配列番号６）ＢＣＳＧ−５逆方向：ＡＴＧＧＧＡＧＴＡＴＣＴＣＡＴＣＴＧＣＴＣＴＣＡ（配列番号７）Ｑ−ＰＣＲプローブ：ＴＧＴＴＴＧＴＴＣＡＴＴＣＴＴＣＡＡＴＴＣＣＡＡＧＧＣＴＴＴ（配列番号８
）を含む。

【００６４】表２に表す無名数は、１２の正常な異なる組織におけるＢＣＳＧ−５の発現の
相対レベルである。すべての値は、正常精巣（キャリブレータ）と比較してある
。これらのＲＮＡ試料は、異なる個体由来の特定組織試料をプールすることによ
り得られる市販のプールである。

【００６５】

【表２】

【００６６】表２における発現の相対レベルは、ＢＣＳＧ−５ｍＲＮＡ発現は正常乳腺のプ
ールおよび精巣で検出されるが、分析した他の１０の正常組織プールでは検出さ
れないことを示す。乳腺における発現レベルは、精巣における発現レベルよりも
１００倍以上高い。これらの結果は、ＢＣＳＧ−５ｍＲＮＡ発現が乳腺組織に非
常に特異的であり、また精巣中でも見出されることを実証する。男性特異的組織
における発現は、女性特異的組織における癌の検出には関係がない。

【００６７】表２における無名数は、異なる個体由来の特定組織試料のプールを分析するこ
とにより得られた。それらは、表３における単一個体の組織試料から得られるＲ
ＮＡ由来の無名数と比較することはできない。

【００６８】表３に表す無名数は、７８対の対応試料におけるＢＣＳＧ−５の発現の相対レ
ベルである。すべての値は、正常精巣（キャリブレータ）と比較してある。対応
対は、特定組織に関する癌試料由来のｍＲＮＡ、および同じ個体由来の同じ組織
に関する正常隣接試料由来のｍＲＮＡにより形成される。さらに、２つの非対応
癌試料（卵巣由来）および２つの非対応正常試料（卵巣由来）も試験した。

【００６９】

【表３】

【００７０】

【表４】

【００７１】

【表５】 0.00＝陰性

【００７２】１７種の異なる組織を代表する表３における１６０個の試料のうち、有意な発
現は、乳腺組織においてのみ見られた。これらの結果は、表２に示す正常試料を
用いて得られた組織特異性の結果を確証する。表２および表３は合わせて、合計
２１種のヒト組織における１７２個の試料を表す。乳腺を除く２０の異なる種類
の組織を代表する１２０個の試料は、検出可能なレベルのＢＣＳＧ−５ｍＲＮＡ
を有さなかった。乳腺以外にＢＣＳＧ−５は、１種類の組織（精巣）においての
み検出され、それはまたプール組織試料においてのみ検出され（表２）、対応精
巣癌試料においては検出されなかった（表３、精巣１および２）。

【００７３】乳癌試料および同じ個体由来の正常隣接組織におけるｍＲＮＡの発現レベルの
比較を表３に示す。ＢＣＳＧ−５は、２５個のうち１２個（４８％）の癌試料（
乳腺１、２、８、１０、１２、１３、１７、１９、２１、２２、２３および２５
）において、正常隣接組織と比較してより高レベルで発現されていた。

【００７４】概して、高レベルの組織特異性に加え、試験した乳腺対応試料の４８％におけ
るｍＲＮＡ過剰発現は、ＢＣＳＧ−５、より一般的にはＣＬＡＳＰにより選択さ
れるＢＣＳＧが、乳癌の優れた診断マーカーであることを示す。

【００７５】例３：ＢＣＳＧ−１のｍＲＮＡ発現の測定例２に記載の方法に従って、ＢＣＳＧ、ＢＣＳＧ−１（配列番号１、遺伝子Ｉ
Ｄ３３２３６９）（またＭＡＭ０１４とも称する）のｍＲＮＡ発現レベルもまた
測定した。

【００７６】下記のプライマー：ＢＣＳＧ−１正方向：５’ＧＣＣＣＡＴＴＡＧＣＡＣＣＣＡＧＡＴＡＡＴ３’（配列番号９）ＢＣＳＧ−２逆方向：５’ＧＣＣＡＡＣＣＣＴＴＣＡＣＣＴＡＡＧＡＡＡ３’（配列番号１０）Ｑ−ＰＣＲプローブ：５’ＣＴＴＣＣＣＡＣＴＧＴＡＣＡＡＡＧＡＴＴＴＴＣＣＡＧＧＡＴＧ３’（配
列番号１１）を用いて、リアルタイム定量ＰＣＲを行った。

【００７７】表４に表す無名数は、２５種の異なる組織由来の３７個の正常試料におけるＢ
ＣＳＧ−１の発現の相対レベルである。すべての値は、正常腎臓（キャリブレー
タ）と比較してある。これらのＲＮＡ試料は、異なる個体由来の特定組織試料を
プールすることにより得られる市販のプールであるが、但し血液試料に関しては
、（これらのＲＮＡ試料は）単一個体由来の正常組織である。

【００７８】

【表６】

【００７９】表４における発現の相対レベルは、ＢＣＳＧ−１ｍＲＮＡ発現は正常乳腺のプ
ールならびに分析した他の正常組織で検出されることを示す。

【００８０】表５における無名数は、血液試料を除いて、異なる個体由来の特定組織試料の
プールを分析することにより得られた。それらは、表５における単一個体の組織
試料から得られるＲＮＡ由来の無名数と比較することはできない。

【００８１】表５に表す無名数は、７７対の対応試料におけるＢＣＳＧ−１の発現の相対レ
ベルである。すべての値は、正常腎臓（キャリブレータ）と比較してある。対応
対は、特定組織に関する癌試料由来のｍＲＮＡ、および同じ個体由来の同じ組織
に関する正常隣接組織由来のｍＲＮＡにより形成される。さらに、３つの非対応
癌試料（卵巣由来）および３つの非対応正常試料（卵巣由来）も試験した。

【００８２】

【表７】

【００８３】

【表８】

【００８４】

【表９】

【００８５】

【表１０】

【００８６】表５は、１７種の異なる組織における１６０個の試料を示す。表４および表５
は合わせて、合計２７種のヒト組織における１９７個の試料を表す。乳癌試料お
よび同じ個体由来の正常隣接組織におけるｍＲＮＡの発現レベルの比較を表５に
示す。ＢＣＳＧ−１は、３０個のうち２７個（９０％）の癌試料（乳腺１〜７、
９〜２０、２２〜２５、２７〜２９、および３１）において、正常隣接組織と比
較してより高レベルで発現されている。

【００８７】例４：ＢＣＳＧ−２のｍＲＮＡ発現の測定例２に記載の方法に従って、ＢＣＳＧ、ＢＣＳＧ−２（配列番号２または１８
、遺伝子ＩＤ４８０４８９）（またＭＡＭ０１３とも称する）のｍＲＮＡ発現レ
ベルもまた測定した。

【００８８】下記のプライマー：ＢＣＳＧ−２正方向：５’ＣＣＴＧＧＡＧＴＴＴＴＣＡＡＴＴＴＣＣＴＣＡ３’（配列番号１２）ＢＣＳＧ−２逆方向：５’ＣＣＣＣＡＧＡＧＡＡＡＡＣＡＣＣＡＣＡＡ３’（配列番号１３）Ｑ−ＰＣＲプローブ：５’ＡＣＴＣＣＴＣＣＡＴＴＴＣＣＴＴＡＧＧＴＡＧＧＧＧＴＴＴＧ３’（配列
番号１４）を用いて、リアルタイム定量ＰＣＲを行った。

【００８９】表６に表す無名数は、２５種の異なる組織由来の３７個の正常試料におけるＢ
ＣＳＧ−２の発現の相対レベルである。すべての値は、正常肝臓（キャリブレー
タ）と比較してある。これらのＲＮＡ試料は、異なる個体由来の特定組織試料を
プールすることにより得られる市販のプールであるが、但し血液試料に関しては
、（これらのＲＮＡ試料は）単一個体由来の正常組織である。

【００９０】

【表１１】

【００９１】表６における発現の相対レベルは、ＢＣＳＧ−２ｍＲＮＡ発現が正常乳腺のプ
ールで検出されることを示す。発現レベルは、２つの血液試料を除く他の組織に
おいてより高い。

【００９２】表６における無名数は、血液試料を除いて、異なる個体由来の特定組織試料の
プールを分析することにより得られた。それらは、表７における単一個体の組織
試料から得られるＲＮＡ由来の無名数と比較することはできない。

【００９３】表７に表す無名数は、７６対の対応試料におけるＢＣＳＧ−２の発現の相対レ
ベルである。すべての値は、正常肝臓（キャリブレータ）と比較してある。対応
対は、特定組織に関する癌試料由来のｍＲＮＡ、および同じ個体由来の同じ組織
に関する正常隣接試料由来のｍＲＮＡにより形成される。さらに、３つの非対応
癌試料（卵巣由来）および３つの非対応正常試料（卵巣由来）も試験した。

【００９４】

【表１２】

【００９５】

【表１３】

【００９６】

【表１４】

【００９７】

【表１５】

【００９８】表７は、１７種の異なる組織における１５８個の試料を示す。表６および表７
は合わせて、合計２５種のヒト組織における１９５個の試料を表す。乳癌試料お
よび同じ個体由来の正常隣接組織におけるｍＲＮＡの発現レベルの比較を表７に
示す。ＢＣＳＧ−２は、３０個のうち１１個（３７％）の癌試料（乳腺２〜４、
８、１０、１１、１３、１４、２１、２７、２８）において、正常隣接組織と比
較してより高レベルで発現されている。

【００９９】例５：ＢＣＳＧ−３のｍＲＮＡ発現の測定例２に記載の方法に従って、ＢＣＳＧ、ＢＣＳＧ−３（配列番号３または２０
、遺伝子ＩＤ２７４７３１）（またＭＡＭ０１７とも称する）のｍＲＮＡ発現レ
ベルもまた測定した。

【０１００】下記のプライマー：ＢＣＳＧ−３正方向：５’ＧＡＧＣＡＣＴＴＣＣＴＴＴＴＧＧＴＴＴＴＴＣ３’（配列番号１５）ＢＣＳＧ−３逆方向：５’ＧＣＣＣＴＡＧＣＡＴＡＴＴＣＣＡＧＡＡＧＴＴＣ３’（配列番号１６）Ｑ−ＰＣＲプローブ：５’ＴＡＧＡＣＡＧＴＧＧＧＣＴＣＡＣＡＴＧＴＴＣＣＴＧＡＴＡＧＴＧ３’（
配列番号１７）を用いて、リアルタイム定量ＰＣＲを行った。

【０１０１】表８に表す無名数は、２５種の異なる組織由来の３６個の正常試料におけるＢ
ＣＳＧ−３の発現の相対レベルである。すべての値は、正常前立腺（キャリブレ
ータ）と比較してある。これらのＲＮＡ試料は、異なる個体由来の特定組織試料
をプールすることにより得られる市販のプールであるが、但し血液試料に関して
は、（これらのＲＮＡ試料は）単一個体由来の正常組織である。

【０１０２】

【表１６】

【０１０３】表８における発現の相対レベルは、ＢＣＳＧ−３ｍＲＮＡの発現が正常乳腺の
プールにて最も高い発現値で検出されることを示す。

【０１０４】表８における無名数は、血液試料を除いて、異なる個体由来の特定組織試料の
プールを分析することにより得られた。それらは、表９における単一個体の組織
試料から得られるＲＮＡ由来の無名数と比較することはできない。

【０１０５】表９に表す無名数は、６８対の対応試料におけるＢＣＳＧ−３の発現の相対レ
ベルである。すべての値は、正常前立腺（キャリブレータ）と比較してある。対
応対は、特定組織に関する癌試料由来のｍＲＮＡ、および同じ個体由来の同じ組
織に関する正常隣接組織由来のｍＲＮＡにより形成される。さらに、１つの非対
応癌試料（卵巣由来）および１つの非対応正常試料（卵巣由来）も試験した。

【０１０６】

【表１７】

【０１０７】

【表１８】

【０１０８】

【表１９】

【０１０９】

【表２０】

【０１１０】表９は、１７種の異なる組織における１３８個の試料を示す。表８および表９
は合わせて、合計２６種類のヒト組織における１７４個の試料を表す。

【０１１１】乳癌試料および同じ個体由来の正常隣接組織におけるｍＲＮＡの発現レベルの
比較を表８に示す。ＢＣＳＧ−３は、２１個のうち１７個（８１％）の癌試料（
乳腺１、３〜６、７〜９、１１〜１６、１９〜２１）において、正常隣接組織と
比較してより高レベルで発現されている。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 16/18 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＺＣ１２Ｑ 1/68 Ｇ０６Ｆ 17/60 １２６ＧＧ０６Ｆ 17/60 １２６Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者レシポン，ハーヴアメリカ合衆国カリフォルニア州 94115、サンフランシスコ、フォーチュナアベニュー 85 (72)発明者スン，ヨンミンアメリカ合衆国カリフォルニア州 95128、サンホセ、エス．ウィンチェスターブルバード 869、アパートメント 260 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA12 BA36 CA02 CA12 HA11 HA17 4B063 QA07 QA19 QQ08 QQ43 QQ53 QR32 QR36 QR55 QR62 QR77 QS25 QS34 QX02 4C084 AA17 NA14 ZB262 4C085 AA14 BB01 CC03 DD23 GG01 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA41 DA75 DA86 EA28 EA51 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（ａ）配列番号１、２、３、４、５、１８または２０のポリ
ヌクレオチドまたはそれらの変異体、（ｂ）配列番号１、２、３、４、５、１８または２０のポリヌクレオチドまたは
それらの変異体により発現されるタンパク質、あるいは（ｃ）配列番号１、２、３、４、５、１８または２０のアンチセンス配列に、ス
トリンジェントな条件下にてハイブリダイズすることが可能なポリヌクレオチド
を含むＢＣＳＧ。
【請求項２】配列番号１９または２１のタンパク質を含む、請求項１に記
載のＢＣＳＧ。
【請求項３】（ａ）患者の細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレベル
を測定することと、（ｂ）測定したＢＣＳＧレベルを正常ヒト対照由来の細胞、組織または体液にお
けるとＢＣＳＧレベルと比較することとを含む、患者における乳癌の存在を診断する方法であって、正常ヒト対照に対
する該患者における測定ＢＣＳＧレベルの変化が、乳癌の存在に関連する、前記
方法。
【請求項４】（ａ）転移したことがわかっていない乳癌を有する患者を同
定することと、（ｂ）該患者由来の細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレベルを測定するこ
とと、（ｃ）測定したＢＣＳＧレベルを正常ヒト対照の細胞、組織または体液における
ＢＣＳＧレベルと比較することとを含む、患者における乳癌の転移を診断する方法であって、正常ヒト対照に対
する患者における測定ＢＣＳＧレベルの増加が、転移した乳癌に関連する、前記
方法。
【請求項５】（ａ）乳癌を有する患者を同定することと、（ｂ）該患者由来の細胞、組織または体液の試料中のＢＣＳＧレベルを測定する
ことと、（ｃ）測定したＢＣＳＧレベルを正常ヒト対照の細胞、組織または体液における
ＢＣＳＧレベルと比較することとを含む、乳癌を有する患者における乳癌のステージング方法であって、正常ヒ
ト対照に対する該患者における測定ＢＣＳＧレベルの増加が、進行している乳癌
に関連し、測定ＢＣＳＧレベルの減少が、消退または寛解している乳癌に関連す
る、前記方法。
【請求項６】（ａ）転移したことがわかっていない乳癌を有する患者を同
定することと、（ｂ）該患者由来の細胞、組織または体液の試料中のＢＣＳＧレベルを定期的に
測定することと、（ｃ）定期的に測定したＢＣＳＧレベルを正常ヒト対照の細胞、組織または体液
におけるＢＣＳＧレベルと比較することとを含む、転移の開始に関して、患者における乳癌をモニタリングする方法であ
って、正常ヒト対照に対する患者の定期的測定ＢＣＳＧレベルのいずれか１つの
増加が、転移した乳癌に関連する、前記方法。
【請求項７】（ａ）乳癌を有する患者を同定することと、（ｂ）該患者由来の細胞、組織または体液におけるＢＣＳＧレベルを定期的に測
定することと、（ｃ）定期的に測定したＢＣＳＧレベルを正常ヒト対照の細胞、組織または体液
におけるＢＣＳＧレベルと比較することとを含む、患者における乳癌のステージの変化をモニタリングする方法であって
、正常ヒト対照に対する患者における定期的測定ＢＣＳＧレベルのいずれか１つ
の増加が、ステージの進行している乳癌に関連し、減少が、ステージの後退して
いるまたは寛解している乳癌に関連する、前記方法。
【請求項８】ＢＣＳＧに結合する能力に関して、分子をスクリーニングす
ることを含む、乳癌のイメージングおよび処置における使用のための潜在的治療
薬を同定する方法であって、ＢＣＳＧに結合する分子の能力が、分子が乳癌のイ
メージングおよび処置に有用であることを示す、前記方法。
【請求項９】ＢＣＳＧを特異的に結合する抗体。
【請求項１０】ＢＣＳＧが、配列番号１、２、３、４、５、１８、１９、
２０または２１を含む、請求項９に記載の抗体。
【請求項１１】請求項９に記載の抗体を患者に投与することを含む、患者
における乳癌のイメージング方法。
【請求項１２】抗体が、常磁性イオンまたは放射性同位体で標識されてい
る、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】請求項９に記載の抗体を患者に投与することを含む、患者
における乳癌の処置方法。
【請求項１４】抗体が、細胞傷害剤に結合されている、請求項１３に記載
の方法。
【請求項１５】ＢＣＳＧの発現または活性を下方制御する分子を患者に投
与することを含む、患者における乳癌の処置方法。
【請求項１６】ＢＣＳＧを発現している標的細胞に対する免疫応答を誘発
する方法であって、免疫応答が標的細胞に対して起こるように、免疫刺激量のＢ
ＣＳＧタンパク質をヒト患者に送達することを含む、前記方法。
【請求項１７】ＢＣＳＧを含む乳癌処置用ワクチン。