JP2003525591A - 神経組織の成長の誘導および生存の増強方法 - Google Patents
神経組織の成長の誘導および生存の増強方法Info
- Publication number
- JP2003525591A JP2003525591A JP2000614954A JP2000614954A JP2003525591A JP 2003525591 A JP2003525591 A JP 2003525591A JP 2000614954 A JP2000614954 A JP 2000614954A JP 2000614954 A JP2000614954 A JP 2000614954A JP 2003525591 A JP2003525591 A JP 2003525591A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ebaf
- neural tissue
- disease
- administration
- subject
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 title claims abstract description 71
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 45
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 101100288960 Mus musculus Lefty1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 128
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 62
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims abstract description 17
- 238000011161 development Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 18
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims description 17
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 15
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 15
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 14
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 10
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 9
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 7
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 6
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 6
- 230000005684 electric field Effects 0.000 claims description 6
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 6
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 6
- 230000008733 trauma Effects 0.000 claims description 6
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 6
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 claims description 5
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 5
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 claims description 5
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 claims description 5
- 241001068295 Replication defective viruses Species 0.000 claims description 5
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 5
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 claims description 5
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 claims description 5
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 claims description 5
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 claims description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 5
- 201000011240 Frontotemporal dementia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000609 Pick Disease of the Brain Diseases 0.000 claims description 4
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 claims description 4
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 claims description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 claims description 2
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 claims description 2
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N retinoic acid group Chemical group C\C(=C/C(=O)O)\C=C\C=C(\C=C\C1=C(CCCC1(C)C)C)/C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 claims description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims 8
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 claims 4
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 claims 4
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 claims 4
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims 4
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims 3
- 206010063897 Renal ischaemia Diseases 0.000 claims 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 20
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 16
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 11
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 9
- 241000269368 Xenopus laevis Species 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 6
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 6
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 6
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 6
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 4
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 4
- 229950004398 broxuridine Drugs 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 4
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 3
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 description 3
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 3
- 102000016970 Follistatin Human genes 0.000 description 3
- 108010014612 Follistatin Proteins 0.000 description 3
- 101000879758 Homo sapiens Sjoegren syndrome nuclear autoantigen 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100037330 Sjoegren syndrome nuclear autoantigen 1 Human genes 0.000 description 3
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 3
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 3
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 3
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 210000004116 schwann cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 206010002329 Aneurysm Diseases 0.000 description 2
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 101001092197 Homo sapiens RNA binding protein fox-1 homolog 3 Proteins 0.000 description 2
- 108010004250 Inhibins Proteins 0.000 description 2
- 102000002746 Inhibins Human genes 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102100035530 RNA binding protein fox-1 homolog 3 Human genes 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- 208000032851 Subarachnoid Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 102000043168 TGF-beta family Human genes 0.000 description 2
- 108091085018 TGF-beta family Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 2
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 102000006533 chordin Human genes 0.000 description 2
- 108010008846 chordin Proteins 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 2
- 230000002357 endometrial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 201000009939 hypertensive encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 239000000893 inhibin Substances 0.000 description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 102000045246 noggin Human genes 0.000 description 2
- 108700007229 noggin Proteins 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 210000003668 pericyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 2
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 1
- 108091071247 Beta family Proteins 0.000 description 1
- 102100033779 Collagen alpha-4(IV) chain Human genes 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010010506 Congenital hydrocephalus Diseases 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010061825 Duodenal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100023227 E3 SUMO-protein ligase EGR2 Human genes 0.000 description 1
- 108010051748 Early Growth Response Protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102100036738 Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-11 Human genes 0.000 description 1
- 101000710870 Homo sapiens Collagen alpha-4(IV) chain Proteins 0.000 description 1
- 101100283445 Homo sapiens GNA11 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 1
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100026632 Mimecan Human genes 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 108050003738 Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 101800002327 Osteoinductive factor Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010009341 Protein Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000009516 Protein Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 230000005016 dendritic process Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 201000000312 duodenum cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000020339 forebrain development Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 1
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000013985 hindbrain development Effects 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 208000003906 hydrocephalus Diseases 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 1
- 210000003007 myelin sheath Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 230000001272 neurogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003961 neuronal insult Effects 0.000 description 1
- 210000002267 nissl body Anatomy 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000033667 organ regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000002856 peripheral neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 210000001202 rhombencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000007839 spinal cord development Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/495—Transforming growth factor [TGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1841—Transforming growth factor [TGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Psychology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
(57)【要約】
本発明は、神経組織を神経組織の成長を誘導しまたは生存を増強させるのに有効量のｅｂａｆと接触させることを包含する、神経組織の成長の誘導または生存の増強方法を提供する。本発明はまた、被検体の損傷または変性した神経組織を治療するのに有効量のｅｂａｆを被検体に投与することを包含する、損傷または変性した神経組織をもつ被検体の治療方法をも提供する。本発明は更に、神経変性疾患を治療するのに有効量のｅｂａｆを投与することを包含する、被検体の神経変性疾患の治療方法を提供する。本発明は更にまた、損傷または変性した神経組織の発症を阻止し、または損傷または変性した神経組織の重症度を軽減することを包含するのに有効量のｅｂａｆを被検体に投与することを包含する、被検体の損傷または変性した神経組織の発症の阻止または重症度の軽減方法を提供するにある。最後に、本発明は、ｅｂａｆの発現を誘導または増強するのに有効量のｅｂａｆ発現のモジュレ−タ−と神経組織とを接触させることを包含する神経組織の成長の誘導または生存の増強方法を提供する。
Description
【０００１】
発明の背景
ニューロン（神経細胞単位）またはグリア細胞（神経膠細胞）といった神経組
織の死亡または破壊は、種々の神経系の変性疾患に関連している。これらの疾患
には、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、および
筋萎縮性側索硬化症のような変性疾患が包含される。ニューロンの壊死または喪
失はさらに、糖尿病のような疾病状態の結果としての、中枢、末梢または運動ニ
ューロンの神経疾患にも関連している。加えて、ニューロンの損傷は、卒中によ
る虚血、外傷（例えば火傷および創傷）、腎不全、ならびに癌およびＡＩＤＳの
治療に使用される薬剤の毒性作用にも帰因し得る。さらに、ニューロンの喪失は
、加齢に関連する痴呆を導くことがある。
織の死亡または破壊は、種々の神経系の変性疾患に関連している。これらの疾患
には、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、および
筋萎縮性側索硬化症のような変性疾患が包含される。ニューロンの壊死または喪
失はさらに、糖尿病のような疾病状態の結果としての、中枢、末梢または運動ニ
ューロンの神経疾患にも関連している。加えて、ニューロンの損傷は、卒中によ
る虚血、外傷（例えば火傷および創傷）、腎不全、ならびに癌およびＡＩＤＳの
治療に使用される薬剤の毒性作用にも帰因し得る。さらに、ニューロンの喪失は
、加齢に関連する痴呆を導くことがある。
【０００２】
現在、損傷を受けまたは変性した神経組織の有効な治療は知られていない。毛
様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）のような或る種の成長因子が、アルツハイマー病
のような神経変性疾患の治療のために提起されてきた。しかしながら、ＣＮＴＦ
の使用は、臨床治験ではうまくいかなかった。したがって、現在、損傷しそして
変性した神経組織を治療するための新規な薬剤の同定に対する要請が存在する。
様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）のような或る種の成長因子が、アルツハイマー病
のような神経変性疾患の治療のために提起されてきた。しかしながら、ＣＮＴＦ
の使用は、臨床治験ではうまくいかなかった。したがって、現在、損傷しそして
変性した神経組織を治療するための新規な薬剤の同定に対する要請が存在する。
【０００３】
Kothapalli（コサパリ）等は、異常な子宮内膜出血に関連する子宮内膜出血関
連因子（「ｅｂａｆ」）蛋白質をコードしている新規なヒト遺伝子の同定を記載
している（J.Clin.Invest.、99(10)：2342-50頁、1997年）。このｅｂａｆ遺伝
子は、ヒト第一染色体のバンドｑ４２．１上に位置しており、ヌクレオチドおよ
び推定アミノ酸配列が知られている（Kothapalli等、1997年）。ｅｂａｆ蛋白質
の配列はまた、ＴＧＦ−β（トランスフォーミング増殖因子−β）スーパーファ
ミリーの成員の相同性および構造的特徴を示している（Kothapalli等、1997年）
。ｅｂａｆ遺伝子は、分泌後期および月経期のヒト子宮内膜で発現され、分泌初
期および分泌中期の子宮内膜には存在せず（Tabibzadeh等、Mol.Hum.Reprod.、4
(6):595-602頁、1998年）、さらに、結腸、十二指腸、および卵巣癌種を包含す
る、粘液性分化を示す或る種の腺癌でも発現される（Tabibzadeh等、Front.Bios
ci.、15(2):18-25、1997年）。
連因子（「ｅｂａｆ」）蛋白質をコードしている新規なヒト遺伝子の同定を記載
している（J.Clin.Invest.、99(10)：2342-50頁、1997年）。このｅｂａｆ遺伝
子は、ヒト第一染色体のバンドｑ４２．１上に位置しており、ヌクレオチドおよ
び推定アミノ酸配列が知られている（Kothapalli等、1997年）。ｅｂａｆ蛋白質
の配列はまた、ＴＧＦ−β（トランスフォーミング増殖因子−β）スーパーファ
ミリーの成員の相同性および構造的特徴を示している（Kothapalli等、1997年）
。ｅｂａｆ遺伝子は、分泌後期および月経期のヒト子宮内膜で発現され、分泌初
期および分泌中期の子宮内膜には存在せず（Tabibzadeh等、Mol.Hum.Reprod.、4
(6):595-602頁、1998年）、さらに、結腸、十二指腸、および卵巣癌種を包含す
る、粘液性分化を示す或る種の腺癌でも発現される（Tabibzadeh等、Front.Bios
ci.、15(2):18-25、1997年）。
【０００４】
Meno（メノ）等は、Ｌｅｆｔｙ−１およびＬｅｆｔｙ−２と呼ばれるマウスの
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの二つの成員を記載している。これらはマウスの
胚で左右非対称に発現され、マウス染色体１Ｈ２上で約３０ｋｂ（キロベース）
で分離された（Meno等、Genes Cells、2(8):513-24頁、1997年）。Meno等はさら
に、Ｌｅｆｔｙ−１は中胚葉誘導の不在下にＮＣＡＭ−１（神経マーカー)を誘
導することを報告し、ノギンおよびコーディン（chordin）といったようなＢＭ
Ｐアンタゴニストと同様にＬｅｆｔｙ−１の活性を直接無力化することにより、
マウス胚の左側に位置する組織中でＢＭＰ（骨形成蛋白質）仲介シグナルに拮抗
するかも知れないとの仮説を立てた。
ＴＧＦ−βスーパーファミリーの二つの成員を記載している。これらはマウスの
胚で左右非対称に発現され、マウス染色体１Ｈ２上で約３０ｋｂ（キロベース）
で分離された（Meno等、Genes Cells、2(8):513-24頁、1997年）。Meno等はさら
に、Ｌｅｆｔｙ−１は中胚葉誘導の不在下にＮＣＡＭ−１（神経マーカー)を誘
導することを報告し、ノギンおよびコーディン（chordin）といったようなＢＭ
Ｐアンタゴニストと同様にＬｅｆｔｙ−１の活性を直接無力化することにより、
マウス胚の左側に位置する組織中でＢＭＰ（骨形成蛋白質）仲介シグナルに拮抗
するかも知れないとの仮説を立てた。
【０００５】
近年、Kosaki（コサキ）等は、染色体１ｑ４２上でおよそ５０ｋｂで分離され
たＬｅｆｔｙ−ＡおよびＬｅｆｔｙ−Ｂと呼ばれる二つのヒトのｌｅｆｔｙ遺伝
子の同定を記載している（Am.J.Hum.Genet.、64(3):712-21頁、1999年）。Ｌｅ
ｆｔｙ−Ａは、ｅｂａｆと同一であると記載された。ヒトのＬｅｆｔｙ−Ａおよ
びＬｅｆｔｙ−ＢならびにマウスのＬｅｆｔｙ−１およびＬｅｆｔｙ−２は似か
よってはいるが、Kosaki等は、ヒトのＬｅｆｔｙ−ＡおよびＬｅｆｔｙ−Ｂはマ
ウスのＬｅｆｔｙ−１およびＬｅｆｔｙ−２に類似しているよりも、Ｌｅｆｔｙ
−ＡおよびＬｅｆｔｙ−Ｂ互い同士がより類似していると記載している。この点
において、Kosaki等は、Ｌｅｆｔｙ−ＡおよびＬｅｆｔｙ−Ｂは、９６％相同的
であり、そしてマウスのＬｅｆｔｙ−１およびＬｅｆｔｙ−２は、９０％相同的
であるが、一方、それらヒトとマウスとの種間の相同性は８１−８２％でしかな
いことを記載している。このようにKosaki等は、配列分析だけでは、特異的オー
ソローガス関係（即ち、Ｌｅｆｔｙ−ＡがＬｅｆｔｙ−１の機能的等価物質であ
るかどうか）の決定はできないことを示唆した。
たＬｅｆｔｙ−ＡおよびＬｅｆｔｙ−Ｂと呼ばれる二つのヒトのｌｅｆｔｙ遺伝
子の同定を記載している（Am.J.Hum.Genet.、64(3):712-21頁、1999年）。Ｌｅ
ｆｔｙ−Ａは、ｅｂａｆと同一であると記載された。ヒトのＬｅｆｔｙ−Ａおよ
びＬｅｆｔｙ−ＢならびにマウスのＬｅｆｔｙ−１およびＬｅｆｔｙ−２は似か
よってはいるが、Kosaki等は、ヒトのＬｅｆｔｙ−ＡおよびＬｅｆｔｙ−Ｂはマ
ウスのＬｅｆｔｙ−１およびＬｅｆｔｙ−２に類似しているよりも、Ｌｅｆｔｙ
−ＡおよびＬｅｆｔｙ−Ｂ互い同士がより類似していると記載している。この点
において、Kosaki等は、Ｌｅｆｔｙ−ＡおよびＬｅｆｔｙ−Ｂは、９６％相同的
であり、そしてマウスのＬｅｆｔｙ−１およびＬｅｆｔｙ−２は、９０％相同的
であるが、一方、それらヒトとマウスとの種間の相同性は８１−８２％でしかな
いことを記載している。このようにKosaki等は、配列分析だけでは、特異的オー
ソローガス関係（即ち、Ｌｅｆｔｙ−ＡがＬｅｆｔｙ−１の機能的等価物質であ
るかどうか）の決定はできないことを示唆した。
【０００６】
発明の要旨
本発明は、ｅｂａｆが神経組織の発生および成長に関係していることを知見し
たことに基づくものである。この知見に基づき、本発明は、神経組織を、その神
経組織の成長を誘導しまたは生存を増強するのに有効量のｅｂａｆと接触させる
ことを包含する、神経組織の成長の誘導または生存の増強方法を提供するもので
ある。本発明はさらに、損傷または変性した神経組織を治療するのに有効量のｅ
ｂａｆを被検体に投与することを包含する、損傷または変性した神経組織をもつ
当該被検体の治療方法を提供するものである。
たことに基づくものである。この知見に基づき、本発明は、神経組織を、その神
経組織の成長を誘導しまたは生存を増強するのに有効量のｅｂａｆと接触させる
ことを包含する、神経組織の成長の誘導または生存の増強方法を提供するもので
ある。本発明はさらに、損傷または変性した神経組織を治療するのに有効量のｅ
ｂａｆを被検体に投与することを包含する、損傷または変性した神経組織をもつ
当該被検体の治療方法を提供するものである。
【０００７】
本発明は更に、神経変性疾患を治療するのに有効量のｅｂａｆを投与すること
を包含する、被検体の神経変性疾患の治療方法を提供する。本発明は更にまた、
損傷または変性した神経組織の発症を阻止し、または損傷または変性した神経組
織の損傷または変性の重症度を軽減する有効量のｅｂａｆを投与することを包含
する、被検体の損傷または変性した神経組織の発症を阻止し、または損傷または
変性した神経組織の損傷または変性の重症度の軽減方法を提供する。
を包含する、被検体の神経変性疾患の治療方法を提供する。本発明は更にまた、
損傷または変性した神経組織の発症を阻止し、または損傷または変性した神経組
織の損傷または変性の重症度を軽減する有効量のｅｂａｆを投与することを包含
する、被検体の損傷または変性した神経組織の発症を阻止し、または損傷または
変性した神経組織の損傷または変性の重症度の軽減方法を提供する。
【０００８】
最後に本発明は、神経組織を、ｅｂａｆの発現を誘導または増強し、且つ当該
神経組織の成長を誘導しまたは生存を増強するのに有効量の、ｅｂａｆ発現のモ
ジュレーターと接触させることを包含する、神経組織の成長の誘導または生存の
増強方法を提供するものである。本発明のさらなる目的は、以下の記載に鑑みて
明らかであろう。
神経組織の成長を誘導しまたは生存を増強するのに有効量の、ｅｂａｆ発現のモ
ジュレーターと接触させることを包含する、神経組織の成長の誘導または生存の
増強方法を提供するものである。本発明のさらなる目的は、以下の記載に鑑みて
明らかであろう。
【０００９】
図１A−１Kは、Xenopus laevis（アフリカツメガエル）の胚盤胞中の種々の組
織マーカーの発生における、遺伝子転写に及ぼすｅｂａｆの効果を証明している
。ｅｂａｆ ＲＮＡを、インビトロ（試験管内）で転写によって調製し、実施例
に記載されるように、二つの細胞期のXenopus laevis（アフリカツメガエル）の
胚盤胞中に注入した。動物のキャップ（頭部）を２４時間で除去し、このＲＮＡ
を逆転写し、次いでｃＤＮＡを、表示のようなXenopus laevis（アフリカツメガ
エル） mＲＮＡに対するプライマーを用いてＰＣＲに付した。図１Ａ＝アクチン
（中胚葉マーカー）；図１Ｂ＝ＸＡＧ１（粘着（セメント）腺マーカー）；図１
Ｃ＝Ｈ８（内胚葉マーカー）；図１Ｄ＝サイトケラチン（上皮マーカー）；図１
Ｅ＝グロビン（腹側中胚葉）；図１Ｆ＝Ｘ１ｈｂｏｘ９（脊髄マーカー）；図１
Ｇ＝ＮＲＰ−１（一般マーカー）；図１Ｈ＝ＥＮ２（中−後脳マーカー）；図１
Ｉ＝ＯＴＸＡ（前脳マーカー）；図１J＝ＫＲＯＸ２０（後脳マーカー）；図１
Ｋ＝ＥＦ１α（ハウスキーピング遺伝子）。
織マーカーの発生における、遺伝子転写に及ぼすｅｂａｆの効果を証明している
。ｅｂａｆ ＲＮＡを、インビトロ（試験管内）で転写によって調製し、実施例
に記載されるように、二つの細胞期のXenopus laevis（アフリカツメガエル）の
胚盤胞中に注入した。動物のキャップ（頭部）を２４時間で除去し、このＲＮＡ
を逆転写し、次いでｃＤＮＡを、表示のようなXenopus laevis（アフリカツメガ
エル） mＲＮＡに対するプライマーを用いてＰＣＲに付した。図１Ａ＝アクチン
（中胚葉マーカー）；図１Ｂ＝ＸＡＧ１（粘着（セメント）腺マーカー）；図１
Ｃ＝Ｈ８（内胚葉マーカー）；図１Ｄ＝サイトケラチン（上皮マーカー）；図１
Ｅ＝グロビン（腹側中胚葉）；図１Ｆ＝Ｘ１ｈｂｏｘ９（脊髄マーカー）；図１
Ｇ＝ＮＲＰ−１（一般マーカー）；図１Ｈ＝ＥＮ２（中−後脳マーカー）；図１
Ｉ＝ＯＴＸＡ（前脳マーカー）；図１J＝ＫＲＯＸ２０（後脳マーカー）；図１
Ｋ＝ＥＦ１α（ハウスキーピング遺伝子）。
【００１０】
図１Ａ−１Ｄ：第１列：対照として使用した全胚ＲＮＡ。第２列：ｅｂａｆ
ＲＮＡを注入せず。第３列：ｅｂａｆ ＲＮＡ ２０ｐｇ（ピコグラム）を注入。
第４列：ｅｂａｆ ＲＮＡ ２００ｐｇを注入。第５列：ｅｂａｆ ＲＮＡ ２ｎｇ
（ナノグラム）を注入。図１Ｅ−１Ｋ：第１列：対照として使用した全胚ＲＮＡ
。第２列：ＲＴ（ポリメラーゼ連鎖）反応から逆転写酵素を除いたＲＴ−ＰＣＲ
対照。第３列：ｅｂａｆ ＲＮＡを注入せず。第４列：ｅｂａｆ ＲＮＡ ２０ｐ
ｇを注入。第５列：ｅｂａｆ ＲＮＡ ２００ｐｇを注入。第６列：ｅｂａｆ Ｒ
ＮＡ ２ｎｇを注入。
ＲＮＡを注入せず。第３列：ｅｂａｆ ＲＮＡ ２０ｐｇ（ピコグラム）を注入。
第４列：ｅｂａｆ ＲＮＡ ２００ｐｇを注入。第５列：ｅｂａｆ ＲＮＡ ２ｎｇ
（ナノグラム）を注入。図１Ｅ−１Ｋ：第１列：対照として使用した全胚ＲＮＡ
。第２列：ＲＴ（ポリメラーゼ連鎖）反応から逆転写酵素を除いたＲＴ−ＰＣＲ
対照。第３列：ｅｂａｆ ＲＮＡを注入せず。第４列：ｅｂａｆ ＲＮＡ ２０ｐ
ｇを注入。第５列：ｅｂａｆ ＲＮＡ ２００ｐｇを注入。第６列：ｅｂａｆ Ｒ
ＮＡ ２ｎｇを注入。
【００１１】
図２は、ｅｂａｆのヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列を示してい
る。
る。
【００１２】
図３は、ラット胚の前脳細胞の増殖に及ぼすｅｂａｆの効果を示している。１
６日齢（Ｅ１６）のラット胚前脳細胞の培養を、ｅｂａｆを産生している細胞の
上清と共にインキュベートし、そして対照培養は、１日だけＢｒｄＵの存在下に
ＤＭＥＭ培地のみを与えられ、その後ＢｒｄＵについて染色した。棒グラフは、
平均ＢｒｄＵ陽性細胞数±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を表している。
６日齢（Ｅ１６）のラット胚前脳細胞の培養を、ｅｂａｆを産生している細胞の
上清と共にインキュベートし、そして対照培養は、１日だけＢｒｄＵの存在下に
ＤＭＥＭ培地のみを与えられ、その後ＢｒｄＵについて染色した。棒グラフは、
平均ＢｒｄＵ陽性細胞数±平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を表している。
【００１３】
図４は、ＴＧ−２陽性のラット胚前脳細胞の数に及ぼすｅｂａｆの効果を示し
ている。１６日齢（Ｅ１６）のラット胚前脳細胞の培養を、ｅｂａｆを産生して
いる細胞の上清、組換えｅｂａｆ（５ｎｇ／ｍＬ）およびＤＭＥＭ培地のみと共
にインキュベートした。９日間の培養の後、これらをＴＧ−２抗体で染色した。
棒グラフは、平均ＴＧ２陽性細胞±反復測定時の平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を
表している。
ている。１６日齢（Ｅ１６）のラット胚前脳細胞の培養を、ｅｂａｆを産生して
いる細胞の上清、組換えｅｂａｆ（５ｎｇ／ｍＬ）およびＤＭＥＭ培地のみと共
にインキュベートした。９日間の培養の後、これらをＴＧ−２抗体で染色した。
棒グラフは、平均ＴＧ２陽性細胞±反復測定時の平均値の標準誤差（ＳＥＭ）を
表している。
【００１４】
図５は、ＥＬＩＳＡ（固定酵素免疫検定法）により測定したニューロンの数に
及ぼすｅｂａｆの効果を示している。前脳細胞を本明細書に記載のように培養し
、ＴＧ−２およびＮｅｕＮ２について染色した細胞に関してＯＤ（吸光度）を測
定した。示された結果は２個の試料の平均である。
及ぼすｅｂａｆの効果を示している。前脳細胞を本明細書に記載のように培養し
、ＴＧ−２およびＮｅｕＮ２について染色した細胞に関してＯＤ（吸光度）を測
定した。示された結果は２個の試料の平均である。
【００１５】
発明の詳細な説明
本発明は、神経組織を、その神経組織の成長の誘導または生存の増強に有効な
量のｅｂａｆと接触させることを含む、神経組織の成長の誘導または生存の増強
方法を提供するものである。本発明の方法は、神経組織のインビトロ（試験管内
）での培養に使用することができ、さらに、インビボ（生体内）で神経組織の成
長を誘導しそして生存を増強するために使用することができる。
量のｅｂａｆと接触させることを含む、神経組織の成長の誘導または生存の増強
方法を提供するものである。本発明の方法は、神経組織のインビトロ（試験管内
）での培養に使用することができ、さらに、インビボ（生体内）で神経組織の成
長を誘導しそして生存を増強するために使用することができる。
【００１６】
本明細書中使用する「神経組織」とは、ニューロンおよび神経膠を包含する。
「ニューロン」とは、典型的には、核およびこれを取り巻く細胞質を内包する細
胞体（核周体）、幾つかの短い放射状の突起（樹状突起）、および、末端が小枝
様枝（終末分枝）になり、その経路に沿って突出する枝（側副枝）を有し得る、
１本の長い突起（軸索）、から構成される、神経系の任意の伝達または神経細胞
である。「神経膠」とは、神経組織の支持構造を形作る神経膠細胞またはグリア
細胞である。「神経組織」は、中枢神経系および末梢神経系の両者に存在する神
経組織を包含する。
「ニューロン」とは、典型的には、核およびこれを取り巻く細胞質を内包する細
胞体（核周体）、幾つかの短い放射状の突起（樹状突起）、および、末端が小枝
様枝（終末分枝）になり、その経路に沿って突出する枝（側副枝）を有し得る、
１本の長い突起（軸索）、から構成される、神経系の任意の伝達または神経細胞
である。「神経膠」とは、神経組織の支持構造を形作る神経膠細胞またはグリア
細胞である。「神経組織」は、中枢神経系および末梢神経系の両者に存在する神
経組織を包含する。
【００１７】
本明細書中使用する「成長」とは、核周体、神経細繊維、ニッスル小体、軸索
、樹状突起、終末分枝、ミエリン鞘、神経腺維鞘、シュワン細胞、および／また
は神経膠もしくはグリア細胞を包含する（但しこれらに限定される訳ではない）
神経組織の１つ以上の構成成分の厚さ、直径、長さ、質量および／または数の増
加であって、神経組織の１つ以上の構成成分の産生または再生を包含する。神経
組織の「生存を増強する」とは、神経組織をさらなる死、変性、損傷または傷害
から完全にまたは部分的に防護することである。
、樹状突起、終末分枝、ミエリン鞘、神経腺維鞘、シュワン細胞、および／また
は神経膠もしくはグリア細胞を包含する（但しこれらに限定される訳ではない）
神経組織の１つ以上の構成成分の厚さ、直径、長さ、質量および／または数の増
加であって、神経組織の１つ以上の構成成分の産生または再生を包含する。神経
組織の「生存を増強する」とは、神経組織をさらなる死、変性、損傷または傷害
から完全にまたは部分的に防護することである。
【００１８】
神経組織のインビトロ（試験管内）での培養に関しては、ｅｂａｆが神経組織
の成長を誘導しまたは生存を増強する能力は、ｅｂａｆを、神経組織のインビト
ロでの培養にとりわけ有用にすると考えられる。これに関連して、ｅｂａｆ蛋白
質を直接培養基に添加することにより、またはｅｂａｆをコードしている核酸を
、神経組織の成長を誘導しまたは生存を増強するのに充分な量で、ｅｂａｆを発
現できるように、神経組織またはその他の細胞へと導入することにより、ｅｂａ
ｆは培養基中に導入することができる。神経組織のインビトロでの培養は、移植
、診断、薬物スクリーニングなどのための神経組織を調製するために望ましいで
あろう。
の成長を誘導しまたは生存を増強する能力は、ｅｂａｆを、神経組織のインビト
ロでの培養にとりわけ有用にすると考えられる。これに関連して、ｅｂａｆ蛋白
質を直接培養基に添加することにより、またはｅｂａｆをコードしている核酸を
、神経組織の成長を誘導しまたは生存を増強するのに充分な量で、ｅｂａｆを発
現できるように、神経組織またはその他の細胞へと導入することにより、ｅｂａ
ｆは培養基中に導入することができる。神経組織のインビトロでの培養は、移植
、診断、薬物スクリーニングなどのための神経組織を調製するために望ましいで
あろう。
【００１９】
インビボ（生体内）治療に関しては、ｅｂａｆが神経組織の成長を誘導しまた
は生存を増強する能力は、ｅｂａｆを、被検体における損傷または変性した神経
組織の治療にとってとりわけ有用なものとなす。被検体は、好ましくは哺乳動物
（例えば、ヒト、家畜、商業的動物）であり、最も好ましくはヒトである。損傷
しまたは変性した神経組織は、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキ
ンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症、またはピック病
、先天性水頭症等に関連し得る。損傷しまたは変性した神経組織が、外傷に関連
する傷害（trauma）、脳出血、動脈瘤、高血圧性脳症、クモ膜下出血、糖尿病、
腎不全、虚血、化学療法剤および抗ウイルス剤のような治療剤、ならびに損傷ま
たは変性した神経組織を惹起し易い他の疾病または状態から引き起こされ得ると
いうこともまた、本発明の範囲内のものである。
は生存を増強する能力は、ｅｂａｆを、被検体における損傷または変性した神経
組織の治療にとってとりわけ有用なものとなす。被検体は、好ましくは哺乳動物
（例えば、ヒト、家畜、商業的動物）であり、最も好ましくはヒトである。損傷
しまたは変性した神経組織は、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキ
ンソン病、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症、またはピック病
、先天性水頭症等に関連し得る。損傷しまたは変性した神経組織が、外傷に関連
する傷害（trauma）、脳出血、動脈瘤、高血圧性脳症、クモ膜下出血、糖尿病、
腎不全、虚血、化学療法剤および抗ウイルス剤のような治療剤、ならびに損傷ま
たは変性した神経組織を惹起し易い他の疾病または状態から引き起こされ得ると
いうこともまた、本発明の範囲内のものである。
【００２０】
したがって、損傷または変性した神経組織を治療することにより、ｅｂａｆは
神経変性疾患の治療に有用であると考えられる。同様に、外傷に関連する傷害、
脳出血、動脈瘤、高血圧性脳症、クモ膜下出血、糖尿病、腎不全、虚血、化学療
法剤および抗ウイルス剤のような治療剤、ならびに損傷または変性した神経組織
を惹起し易い他の疾病または状態から引き起こされる、損傷または変性した神経
組織を治療することにより、ｅｂａｆが、単独で、またはこれらの疾病、状態ま
たは障害の治療に使用される治療薬との組み合わせで有効であろうということが
考えられる。
神経変性疾患の治療に有用であると考えられる。同様に、外傷に関連する傷害、
脳出血、動脈瘤、高血圧性脳症、クモ膜下出血、糖尿病、腎不全、虚血、化学療
法剤および抗ウイルス剤のような治療剤、ならびに損傷または変性した神経組織
を惹起し易い他の疾病または状態から引き起こされる、損傷または変性した神経
組織を治療することにより、ｅｂａｆが、単独で、またはこれらの疾病、状態ま
たは障害の治療に使用される治療薬との組み合わせで有効であろうということが
考えられる。
【００２１】
さらに、ｅｂａｆが神経組織の成長を誘導し、または生存を増強する能力は、
ｅｂａｆを、損傷または変性した神経組織の発症を阻止し、または損傷または変
性の重症度を軽減するのに有用とならしめる。例えば、最近、神経変性疾患であ
ると診断された被検体、または家族履歴に基づいて神経変性疾患に罹患する素因
があるとされる被検体は、ｅｂａｆ治療のための候補者であると考えることがで
きる。同様に、ｅｂａｆは、糖尿病、癌またはＡＩＤＳの患者を治療する際に使
用して、当該疾病またはこれらの疾病もしくは状態の治療に使用される薬物が引
き起こす、損傷または変性した神経組織の発症を阻止し、またはその損傷または
変性の重症度を軽減させることができると思われる。
ｅｂａｆを、損傷または変性した神経組織の発症を阻止し、または損傷または変
性の重症度を軽減するのに有用とならしめる。例えば、最近、神経変性疾患であ
ると診断された被検体、または家族履歴に基づいて神経変性疾患に罹患する素因
があるとされる被検体は、ｅｂａｆ治療のための候補者であると考えることがで
きる。同様に、ｅｂａｆは、糖尿病、癌またはＡＩＤＳの患者を治療する際に使
用して、当該疾病またはこれらの疾病もしくは状態の治療に使用される薬物が引
き起こす、損傷または変性した神経組織の発症を阻止し、またはその損傷または
変性の重症度を軽減させることができると思われる。
【００２２】
加えて、ｅｂａｆは、神経組織の成長を誘導または生存を増強するため、創傷
治癒、臓器再生、臓器移植（例えば、心臓、腎臓、肺、および肝臓）、人工的臓
器の移植、および移植片の受容（例えば、皮膚、付属器等）の増強にとって有用
となり得る。
治癒、臓器再生、臓器移植（例えば、心臓、腎臓、肺、および肝臓）、人工的臓
器の移植、および移植片の受容（例えば、皮膚、付属器等）の増強にとって有用
となり得る。
【００２３】
本発明方法によれば、ｅｂａｆとの接触または投与は、ｅｂａｆ蛋白質それ自
身の導入または投与により、あるいは、ｅｂａｆをコードしている核酸をｅｂａ
ｆ蛋白質の発現ができるように、導入または投与することによって行うことがで
きる。ｅｂａｆ蛋白質は、合成により、もしくは組換えにより生成させることが
でき、または、天然の細胞から単離することができるが、好ましくはｅｂａｆを
コードしているｃＤＮＡ（図２に開示の通り）および常套的技術を用いて組換え
により生成させる。本明細書中使用するｅｂａｆ蛋白質は、図２に開示するアミ
ノ酸配列を有する。しかしながら、この蛋白質が、好ましくは９０％以上の相同
性を有するその機能的変異体（即ち、ｅｂａｆ蛋白質活性を有する蛋白質）を包
含するということは、本発明の範囲内にある。加えて、本発明はさらに、生物活
性を有するｅｂａｆ蛋白質のフラグメント（即ち、ニューロンの成長を誘導およ
び／または生存を増強するペプチドフラグメント）、および、同様の生物活性を
及ぼすそれらの関連ペプチド類似体をも包含する。ｅｂａｆ蛋白質は、例えば注
射または輸注のような既知の蛋白質投与技法によって、組織または被検体に投与
することができる。損傷または変性した神経組織が、例えば脳のような身体の特
定の部分に局在する場合、この蛋白質を、注入または他の何らかの手段により、
神経組織へと直接投与することが望ましいであろう（例えば、ｅｂａｆを脳脊髄
液または血液中に導入する）。ｅｂａｆ蛋白質の量は、神経組織の成長を促進し
または生存を増強するのに有効な量であり、当業者にとっては容易に決定できる
。
身の導入または投与により、あるいは、ｅｂａｆをコードしている核酸をｅｂａ
ｆ蛋白質の発現ができるように、導入または投与することによって行うことがで
きる。ｅｂａｆ蛋白質は、合成により、もしくは組換えにより生成させることが
でき、または、天然の細胞から単離することができるが、好ましくはｅｂａｆを
コードしているｃＤＮＡ（図２に開示の通り）および常套的技術を用いて組換え
により生成させる。本明細書中使用するｅｂａｆ蛋白質は、図２に開示するアミ
ノ酸配列を有する。しかしながら、この蛋白質が、好ましくは９０％以上の相同
性を有するその機能的変異体（即ち、ｅｂａｆ蛋白質活性を有する蛋白質）を包
含するということは、本発明の範囲内にある。加えて、本発明はさらに、生物活
性を有するｅｂａｆ蛋白質のフラグメント（即ち、ニューロンの成長を誘導およ
び／または生存を増強するペプチドフラグメント）、および、同様の生物活性を
及ぼすそれらの関連ペプチド類似体をも包含する。ｅｂａｆ蛋白質は、例えば注
射または輸注のような既知の蛋白質投与技法によって、組織または被検体に投与
することができる。損傷または変性した神経組織が、例えば脳のような身体の特
定の部分に局在する場合、この蛋白質を、注入または他の何らかの手段により、
神経組織へと直接投与することが望ましいであろう（例えば、ｅｂａｆを脳脊髄
液または血液中に導入する）。ｅｂａｆ蛋白質の量は、神経組織の成長を促進し
または生存を増強するのに有効な量であり、当業者にとっては容易に決定できる
。
【００２４】
ｅｂａｆはまた、損傷または変性した神経組織を治療するのに充分な量で、ｅ
ｂａｆの発現を可能にするように、ｅｂａｆをコードしている核酸を、神経組織
の充分な数の細胞（例えば、ニューロン、グリア細胞またはシュワン細胞）の内
部に導入することによって投与することができる。当該核酸は、電気穿孔、ＤＥ
ＡＥデキストラン、モノカチオン性リポソーム融合、ポリカチオン性リポソーム
融合、プロトプラスト融合、ＤＮＡ被覆ミクロ抛射体のボンバードメント（DNA
coated microprojectile bombardment）、インビボ（生体内）電場の創出（crea
tion of an in vivo electrical field）、組換え複製欠陥ウイルスを用いた注
入、相同的組換え、裸のＤＮＡ転移、遺伝子療法、ウイルスベクター、発現ベク
ター、またはこれらの組み合わせを包含する、当分野で既知の常套的手法を用い
て導入することができるが、これらに限定される訳ではない。遺伝子療法に好適
な組換えウイルスベクターは、ＨＳＶ（単純ヘルペスウイルス）、アデノウイル
ス、アデノ随伴ウイルス、セムリキ森林熱ウイルス、サイトメガロウイルスおよ
びワクシニアウイルスといったようなウイルスゲノムから誘導されるベクターを
包含するが、これらに限定される訳ではない。ｅｂａｆをコードしている核酸は
、常法を用いて適当な細胞中に（例えば、シュワン細胞またはグリア細胞）イン
ビトロ（試験管内）で導入できるということもまた本発明の範囲内にある。次い
で、ｅｂａｆを発現している細胞を、被検体に投与されて、損傷または変性した
神経組織を治療することができる。拒絶反応を低減させるため、患者から細胞を
取出し、ｅｂａｆをコードしている核酸を組み入れるＤＮＡ技術に付し、次いで
患者に再度導入することが好ましい。
ｂａｆの発現を可能にするように、ｅｂａｆをコードしている核酸を、神経組織
の充分な数の細胞（例えば、ニューロン、グリア細胞またはシュワン細胞）の内
部に導入することによって投与することができる。当該核酸は、電気穿孔、ＤＥ
ＡＥデキストラン、モノカチオン性リポソーム融合、ポリカチオン性リポソーム
融合、プロトプラスト融合、ＤＮＡ被覆ミクロ抛射体のボンバードメント（DNA
coated microprojectile bombardment）、インビボ（生体内）電場の創出（crea
tion of an in vivo electrical field）、組換え複製欠陥ウイルスを用いた注
入、相同的組換え、裸のＤＮＡ転移、遺伝子療法、ウイルスベクター、発現ベク
ター、またはこれらの組み合わせを包含する、当分野で既知の常套的手法を用い
て導入することができるが、これらに限定される訳ではない。遺伝子療法に好適
な組換えウイルスベクターは、ＨＳＶ（単純ヘルペスウイルス）、アデノウイル
ス、アデノ随伴ウイルス、セムリキ森林熱ウイルス、サイトメガロウイルスおよ
びワクシニアウイルスといったようなウイルスゲノムから誘導されるベクターを
包含するが、これらに限定される訳ではない。ｅｂａｆをコードしている核酸は
、常法を用いて適当な細胞中に（例えば、シュワン細胞またはグリア細胞）イン
ビトロ（試験管内）で導入できるということもまた本発明の範囲内にある。次い
で、ｅｂａｆを発現している細胞を、被検体に投与されて、損傷または変性した
神経組織を治療することができる。拒絶反応を低減させるため、患者から細胞を
取出し、ｅｂａｆをコードしている核酸を組み入れるＤＮＡ技術に付し、次いで
患者に再度導入することが好ましい。
【００２５】
ｅｂａｆの所望の使用に応じて、ｅｂａｆは、単独で、または１つ以上の治療
剤、例えば成長因子と組合わせて、損傷または変性した神経組織の治療に使用す
ることができるという事が本発明の範囲内にある。加えて、ｅｂａｆは、化学療
法剤または抗ウイルス剤といった他の治療剤と組合わせて使用することができる
。
剤、例えば成長因子と組合わせて、損傷または変性した神経組織の治療に使用す
ることができるという事が本発明の範囲内にある。加えて、ｅｂａｆは、化学療
法剤または抗ウイルス剤といった他の治療剤と組合わせて使用することができる
。
【００２６】
最後に、本発明は、神経組織を、ｅｂａｆの発現を誘導または増強し、且つ神
経組織の成長を誘導または生存を増強するのに有効量の、ｅｂａｆ発現のモジュ
レーターと接触させることを含む、神経組織の成長の誘導または生存の増強方法
を提供するものである。ｅｂａｆ発現のモジュレーターの例は、レチノイン酸、
エストロゲンまたはプロゲステロンを包含するが、これらに限定される訳ではな
い。ｅｂａｆ発現のモジュレーターは、例えば、損傷または変性した神経組織の
治療、神経変性疾患の治療、損傷または変性した神経組織の発症の阻止、または
損傷または変性の重症度の軽減などを包含する、上に述べた適用のために、イン
ビトロ（試験管内）およびインビボ（生体内）の両方で使用することができると
いうこともまた、本発明の範囲内にある。
経組織の成長を誘導または生存を増強するのに有効量の、ｅｂａｆ発現のモジュ
レーターと接触させることを含む、神経組織の成長の誘導または生存の増強方法
を提供するものである。ｅｂａｆ発現のモジュレーターの例は、レチノイン酸、
エストロゲンまたはプロゲステロンを包含するが、これらに限定される訳ではな
い。ｅｂａｆ発現のモジュレーターは、例えば、損傷または変性した神経組織の
治療、神経変性疾患の治療、損傷または変性した神経組織の発症の阻止、または
損傷または変性の重症度の軽減などを包含する、上に述べた適用のために、イン
ビトロ（試験管内）およびインビボ（生体内）の両方で使用することができると
いうこともまた、本発明の範囲内にある。
【００２７】
本発明の理解を助けるために、以下の実施例を挙げて本発明を説明するが、こ
れは、特許請求の範囲に定義される本発明の範囲を、いかなるやり方によっても
限定するものではないことを理解されたい。
れは、特許請求の範囲に定義される本発明の範囲を、いかなるやり方によっても
限定するものではないことを理解されたい。
【００２８】
実施例１
ｅｂａｆ ＲＮＡを、アフリカツメガエル（Xenopus laevis）の二つの細胞期
の胚盤胞に注入した。このＲＮＡを投与応答効果を示すために種々の用量で注入
した。この胚盤胞をインビトロ（試験管内）で数時間成長させ、次いで、動物の
キャップ（頭部）を切断し、取出されるまでさらにインビトロで維持した。ｅｂ
ａｆ ＲＮＡを投与されなかった胚盤胞および胚全体を対照として用いた。上記
注入した動物キャップ（頭部）、非注入動物キャップ（頭部）および陽性の対照
として使用した胚全体から、ＲＮＡを抽出した。これらのＲＮＡをｃＤＮＡに逆
転写し、次に、異なる組織のマーカーに対する様々なプライマーの組を使用して
ＰＣＲにより増幅した。ｅｂａｆは内胚葉および中胚葉層の発生には何の効果も
示さなかったが、ｅｂａｆは表皮形成を阻害し、ニューロンのマーカーの発生を
増強した（図１を参照されたい）との知見が示された。ｅｂａｆはまた、神経マ
ーカーＮＣＡＭ（神経細胞接着因子）を誘導した（図示せず）。これらの試験は
また、ｅｂａｆが脊髄または後脳の発生を増強せず、その効果はむしろ前脳の発
生に厳密に限定されていることを証明している（図１）。加えて、形態学的には
、ｅｂａｆの誘導が行われたカエルの脳は対照より大きかった（図示せず）。
の胚盤胞に注入した。このＲＮＡを投与応答効果を示すために種々の用量で注入
した。この胚盤胞をインビトロ（試験管内）で数時間成長させ、次いで、動物の
キャップ（頭部）を切断し、取出されるまでさらにインビトロで維持した。ｅｂ
ａｆ ＲＮＡを投与されなかった胚盤胞および胚全体を対照として用いた。上記
注入した動物キャップ（頭部）、非注入動物キャップ（頭部）および陽性の対照
として使用した胚全体から、ＲＮＡを抽出した。これらのＲＮＡをｃＤＮＡに逆
転写し、次に、異なる組織のマーカーに対する様々なプライマーの組を使用して
ＰＣＲにより増幅した。ｅｂａｆは内胚葉および中胚葉層の発生には何の効果も
示さなかったが、ｅｂａｆは表皮形成を阻害し、ニューロンのマーカーの発生を
増強した（図１を参照されたい）との知見が示された。ｅｂａｆはまた、神経マ
ーカーＮＣＡＭ（神経細胞接着因子）を誘導した（図示せず）。これらの試験は
また、ｅｂａｆが脊髄または後脳の発生を増強せず、その効果はむしろ前脳の発
生に厳密に限定されていることを証明している（図１）。加えて、形態学的には
、ｅｂａｆの誘導が行われたカエルの脳は対照より大きかった（図示せず）。
【００２９】
ｅｂａｆの活性は、ノギン、コーディンおよびフォリスタチンといったＢＭＰ
（骨誘導因子）アンタゴニストにより引出される活性と顕著に類似している［We
instein D.（ワインシュタイン ディ）等、インヒビン、アクチビンおよびフォ
リスタチンにおいて、カエルXenopus laevisにおける神経誘導（Neural inducti
on in the frog Xenopus laevis. In: Inhibin, activin and follistatin）。
セロノ・シンポジウム、米国、マサチゥーセツト、ノーウエル（Serono Symposi
a USA、Norwell、MA.）：アオノＴ、スギモトＨおよびベイル、ダブリューダブ
リュウ（Aono T、Sugino H、およびVale WW.）著、セロノ・シンポジウム、米国
刊行物（A Serono Symposia SA Publication）、シュプリンガー出版（Springer
Verlag）、ニューヨーク（New York） 214-219頁 1097年］。これらの蛋白質は
リガンドに直接結合し、それら蛋白質とレセプターとの結合をブロックする。Ｔ
ＧＦ−βファミリーの成員の二量体化に必要とされるシステイン残基が無いため
（Kothapalli等、1997）、ｅｂａｆは二量体を形成しないで、リガンドではなく
恐らくＴＧＦ−βファミリーの成員のレセプターに結合することができる。この
結合によって、ｅｂａｆは、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの一つまたは幾つか
の成員の活性を阻害することができる。
（骨誘導因子）アンタゴニストにより引出される活性と顕著に類似している［We
instein D.（ワインシュタイン ディ）等、インヒビン、アクチビンおよびフォ
リスタチンにおいて、カエルXenopus laevisにおける神経誘導（Neural inducti
on in the frog Xenopus laevis. In: Inhibin, activin and follistatin）。
セロノ・シンポジウム、米国、マサチゥーセツト、ノーウエル（Serono Symposi
a USA、Norwell、MA.）：アオノＴ、スギモトＨおよびベイル、ダブリューダブ
リュウ（Aono T、Sugino H、およびVale WW.）著、セロノ・シンポジウム、米国
刊行物（A Serono Symposia SA Publication）、シュプリンガー出版（Springer
Verlag）、ニューヨーク（New York） 214-219頁 1097年］。これらの蛋白質は
リガンドに直接結合し、それら蛋白質とレセプターとの結合をブロックする。Ｔ
ＧＦ−βファミリーの成員の二量体化に必要とされるシステイン残基が無いため
（Kothapalli等、1997）、ｅｂａｆは二量体を形成しないで、リガンドではなく
恐らくＴＧＦ−βファミリーの成員のレセプターに結合することができる。この
結合によって、ｅｂａｆは、ＴＧＦ−βスーパーファミリーの一つまたは幾つか
の成員の活性を阻害することができる。
【００３０】
ＴＧＦ−βファミリーの成員の生物学的効果は、I型およびII型レセプターと
呼ばれる二つのクラスの分子を介してシグナル伝達される。これらは、互いに相
同性を有してはいるが、別個の特徴を有する貫膜セリン−トレオニンキナーゼで
ある。二量体化したリガンドは、最初にII型レセプターに結合し、引き続きＩ型
レセプターが加わってヘテロメリックな複合体の形成を導く。この複合体内部で
は、構成的に活性なII型レセプターが、ＧＳ（グリシン−セリンに富む）ドメイ
ンにあるＩ型レセプターを燐酸化する。ＢＭＰおよびアクチビンの場合、リガン
ドはまずＩ型レセプターに結合する（パジェット（Padgett）等、バイオアッセ
イ（Bioessays）、20(5):382-90頁、1998年）。ｅｂａｆモノマーは、ＴＧＦ−
βファミリーの成員のレセプターに結合し、それらの活性を妨げることができる
。
呼ばれる二つのクラスの分子を介してシグナル伝達される。これらは、互いに相
同性を有してはいるが、別個の特徴を有する貫膜セリン−トレオニンキナーゼで
ある。二量体化したリガンドは、最初にII型レセプターに結合し、引き続きＩ型
レセプターが加わってヘテロメリックな複合体の形成を導く。この複合体内部で
は、構成的に活性なII型レセプターが、ＧＳ（グリシン−セリンに富む）ドメイ
ンにあるＩ型レセプターを燐酸化する。ＢＭＰおよびアクチビンの場合、リガン
ドはまずＩ型レセプターに結合する（パジェット（Padgett）等、バイオアッセ
イ（Bioessays）、20(5):382-90頁、1998年）。ｅｂａｆモノマーは、ＴＧＦ−
βファミリーの成員のレセプターに結合し、それらの活性を妨げることができる
。
【００３１】
実施例２
以下の実験は、ｅｂａｆの神経性の潜在的可能性を評価するためにインビトロ
（試験管内）で実施した。最初に、ラット胚の前脳から分離した細胞に及ぼす細
胞分裂促進性（マイトジェン）ｅｂａｆの効果を測定した。次に、ｅｂａｆがこ
のような培養においてニューロンの数を増加させるか否かを測定した。下に提示
した知見に基づき、ｅｂａｆは前脳細胞の増殖を増加させ、ニューロン細胞への
それらの成熟を増強することが結論付けられた。
（試験管内）で実施した。最初に、ラット胚の前脳から分離した細胞に及ぼす細
胞分裂促進性（マイトジェン）ｅｂａｆの効果を測定した。次に、ｅｂａｆがこ
のような培養においてニューロンの数を増加させるか否かを測定した。下に提示
した知見に基づき、ｅｂａｆは前脳細胞の増殖を増加させ、ニューロン細胞への
それらの成熟を増強することが結論付けられた。
【００３２】 培養におけるラット胚の前脳細胞の増殖に及ぼすｅｂａｆの効果。
分離した１６日齢（Ｅ１６）の胚性ラット前脳の培養を、２４ウェル組織培養
皿に同数（２５０ｘ１０3／ウェル）の細胞を設置した。これらを化学的に規定
された培地中に一夜維持した。翌朝、この実験培養ウェルに、ＤＭＥＭ培地中に
集めた集密的ｅｂａｆトランスフェクト（形質移入）細胞の一夜培養上清を加え
た。対照培養ウェルには、ＤＭＥＭ培地のみを加えた。ブロモデオキシウリジン
（ＢｒｄＵ）を全ての培養容器に添加した（１ｍＬ当たり１ｍＭ溶液の１μｌ）
。翌日、これらの培養をＢｒｄＵについて染色した。この実験は３ずつ実施した
。結果を図３に示す。
皿に同数（２５０ｘ１０3／ウェル）の細胞を設置した。これらを化学的に規定
された培地中に一夜維持した。翌朝、この実験培養ウェルに、ＤＭＥＭ培地中に
集めた集密的ｅｂａｆトランスフェクト（形質移入）細胞の一夜培養上清を加え
た。対照培養ウェルには、ＤＭＥＭ培地のみを加えた。ブロモデオキシウリジン
（ＢｒｄＵ）を全ての培養容器に添加した（１ｍＬ当たり１ｍＭ溶液の１μｌ）
。翌日、これらの培養をＢｒｄＵについて染色した。この実験は３ずつ実施した
。結果を図３に示す。
【００３３】 ラット胚の前脳細胞培養のニューロン数に及ぼすｅｂａｆの効果。
分離した１６日齢（Ｅ１６）の胚性ラット前脳の培養を、２４ウェル組織培養
皿に同数（２５０ｘ１０3／ウェル）の細胞を設置した。これらを化学的に規定
された培地に一夜維持した。翌朝、この実験培養に、ＤＭＥＭ培地中に集めた集
密的ｅｂａｆトランスフェクト細胞の一夜培養上清を加えた。別の培養には、組
換え大腸菌ｅｂａｆ（２６ｋＤ）を５ｎｇ／ｍＬ加えた。対照培養ウェルには、
ＤＭＥＭ培地のみを加えた。これらを培地を変えずに９日間インキュベートした
。９日間の培養の後、ニューロンを識別明示するＴＧ−２抗体で細胞を染色した
（ＴＧ−２：ホーナー（Honer）等、Psychol.Med.、26:1919-195頁、1996年）。
ＴＧ−２陽性細胞を、各々の培養皿で２００ｘの倍率の顕微鏡の下で算定した。
この実験は２ずつ実施した。結果を図４に示す。
皿に同数（２５０ｘ１０3／ウェル）の細胞を設置した。これらを化学的に規定
された培地に一夜維持した。翌朝、この実験培養に、ＤＭＥＭ培地中に集めた集
密的ｅｂａｆトランスフェクト細胞の一夜培養上清を加えた。別の培養には、組
換え大腸菌ｅｂａｆ（２６ｋＤ）を５ｎｇ／ｍＬ加えた。対照培養ウェルには、
ＤＭＥＭ培地のみを加えた。これらを培地を変えずに９日間インキュベートした
。９日間の培養の後、ニューロンを識別明示するＴＧ−２抗体で細胞を染色した
（ＴＧ−２：ホーナー（Honer）等、Psychol.Med.、26:1919-195頁、1996年）。
ＴＧ−２陽性細胞を、各々の培養皿で２００ｘの倍率の顕微鏡の下で算定した。
この実験は２ずつ実施した。結果を図４に示す。
【００３４】 ラット胚の前脳細胞培養中のニューロンマーカーに及ぼすｅｂａｆの効果。
分離した１６日齢（Ｅ１６）の胚性ラット前脳の培養を、２４ウェル組織培養
皿に同数（２５０ｘ１０3／ウェル）の細胞を設置した。これらを化学的に規定
された培地に一夜維持した。翌朝、実験および対照ウェルのそれぞれに、集密的
ｅｂａｆトランスフェクト細胞からの培養上清（２５倍に希釈）およびＤＭＥＭ
培地のみを加えた。これらを培養中で９日間インキュベートした。培地は５日目
に交換した。９日目に、いずれもニューロン細胞を識別明示するＴＧ−２および
ＮｅｕＮ抗体でこのウェルを染色した（ＴＧ−２：ホーナー（Honer）等、Psych
ol.Med.、26:1919-195頁、1996年；NeuN：ミューレン（Mullen）等、Developmen
t、116:201-211頁、1992年）。反応生成物は、ｏ−フェニレンジアミンニ塩酸塩
（ＯＰＤ）の存在下に溶液中で生成させた。この溶液を９６ウェルのプレートに
移し、４９０ｎｍで吸光度を読み取った。この実験は２ずつ実施した。結果を図
５に示す。
皿に同数（２５０ｘ１０3／ウェル）の細胞を設置した。これらを化学的に規定
された培地に一夜維持した。翌朝、実験および対照ウェルのそれぞれに、集密的
ｅｂａｆトランスフェクト細胞からの培養上清（２５倍に希釈）およびＤＭＥＭ
培地のみを加えた。これらを培養中で９日間インキュベートした。培地は５日目
に交換した。９日目に、いずれもニューロン細胞を識別明示するＴＧ−２および
ＮｅｕＮ抗体でこのウェルを染色した（ＴＧ−２：ホーナー（Honer）等、Psych
ol.Med.、26:1919-195頁、1996年；NeuN：ミューレン（Mullen）等、Developmen
t、116:201-211頁、1992年）。反応生成物は、ｏ−フェニレンジアミンニ塩酸塩
（ＯＰＤ）の存在下に溶液中で生成させた。この溶液を９６ウェルのプレートに
移し、４９０ｎｍで吸光度を読み取った。この実験は２ずつ実施した。結果を図
５に示す。
【００３５】
本明細書で上に述べた全ての刊行物は、それらの全体を本明細書に援用する。
本発明は、明確性および理解の目的のため幾分詳細に記載してきたが、当業者に
は、この開示を読むことによって、付記した特許請求の範囲における本発明の真
正な範囲から逸脱することなく、形態および細部において種々の変更がなし得る
ことを理解し得よう。。
本発明は、明確性および理解の目的のため幾分詳細に記載してきたが、当業者に
は、この開示を読むことによって、付記した特許請求の範囲における本発明の真
正な範囲から逸脱することなく、形態および細部において種々の変更がなし得る
ことを理解し得よう。。
【図１】
図１の１Ａ−１Ｋは、アフリカツメガエル（Xenopus laevis）の胚盤胞におけ
る様々な組織マーカーの発生における、遺伝子転写に及ぼすｅｂａｆの効果を説
明する図である。
る様々な組織マーカーの発生における、遺伝子転写に及ぼすｅｂａｆの効果を説
明する図である。
【図２】
図２は、ｅｂａｆのヌクレオチド配列および対応するアミノ酸配列を示してい
る。
る。
【図３】
図３は、ラット胚の前脳細胞の増殖に及ぼすｅｂａｆの効果を示している。
【図４】
図４は、ＴＧ−２陽性のラット胚前脳細胞の数に及ぼすｅｂａｆの効果を示し
ている。
ている。
【図５】
図５は、ＥＬＩＳＡにより測定したニューロンの数に及ぼすｅｂａｆの効果を
示している。
示している。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｋ 48/00 ４Ｃ０９１
45/00 Ａ６１Ｐ 25/14 ４Ｃ２０６
48/00 25/16
Ａ６１Ｐ 25/14 25/28
25/16 Ｃ０７Ｊ 9/00
25/28 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
Ｃ１２Ｎ 5/10 5/00 Ｂ
// Ｃ０７Ｊ 9/00 Ａ６１Ｋ 37/02
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ
，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，
ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ
Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ
)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，
ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，
ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ
Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ
，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，
ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ
Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ
，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，
ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ
Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ
，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
(72)発明者 タビブザデー、シアマック
アメリカ合衆国、ニューヨーク州、アルバ
ートソン、パークヴュー・ドライブ 71
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA21 CA04 DA02 EA04
GA11 HA03 HA17
4B065 AA90X AA91X AA99Y AB01
AC20 BA02 CA24 CA44
4C084 AA02 AA13 AA17 BA44 NA14
ZA022 ZA152 ZA162
4C086 AA01 AA02 DA10 MA01 MA04
NA14 ZA02 ZA15 ZA16
4C087 AA01 AA02 BC83 CA12 NA14
ZA02 ZA15 ZA16
4C091 AA01 BB05 CC01 DD01 EE07
FF01 GG01 HH01 JJ03 KK01
LL01 MM03 NN01 PB02 QQ01
4C206 AA01 AA02 CA17 DA12 MA01
MA04 NA14 ZA02 ZA15 ZA16
Claims (27)
- 【請求項１】 神経組織を、神経組織の成長を誘導または生存を増強するの
に有効量のｅｂａｆと接触させることを包含する、神経組織の成長の誘導または
生存の増強方法。 - 【請求項２】 前記神経組織をｅｂａｆ蛋白質と接触させることにより前記
神経組織をｅｂａｆと接触させる、請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 前記神経組織をｅｂａｆをコードしている核酸と接触させて
、前記神経組織にｅｂａｆを導入することによりｅｂａｆを発現させる、請求項
１記載の方法。 - 【請求項４】 前記核酸が、電気穿孔、ＤＥＡＥデキストラントランスフェ
クション、燐酸カルシウムトランスフェクション、カチオン性リポソーム融合、
プロトプラスト融合により、インビボ（生体内）電場の創出、ＤＮＡ被覆ミクロ
抛射体のボンバードメント、組換え複製欠陥ウイルスを用いた注入、相同的組換
え、遺伝子療法、ウイルスベクター、または裸のＤＮＡ転移によって導入される
、請求項３記載の方法。 - 【請求項５】 前記接触を、インビトロ（試験管内）で行う、請求項１記載
の方法。 - 【請求項６】 前記接触を、インビボ（生体内）で行う、請求項１記載の方
法。 - 【請求項７】 前記損傷または変性した神経組織を治療するのに有効量ｅｂ
ａｆを被検体に投与することを包含する、損傷または変性した神経組織をもつ被
検体の治療方法。 - 【請求項８】 前記被検体が、神経変性疾患をもつ、請求項７記載の治療方
法。 - 【請求項９】 前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病、
ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症、またはピック病である、請
求項８記載の治療方法。 - 【請求項１０】前記損傷または変性したニューロンが、外傷に関連する傷害
、糖尿病、腎不全、虚血、または治療剤の治療に関連する損傷から生ずる、請求
項７記載の治療方法。 - 【請求項１１】 前記ｅｂａｆの投与が、ｅｂａｆ蛋白質の投与により行わ
れる、請求項７記載の治療方法。 - 【請求項１２】 前記ｅｂａｆの投与が、ｅｂａｆをコードしている核酸の
投与によりｅｂａｆを発現させることにより行われる、請求項７記載の治療方法
。 - 【請求項１３】 前記核酸が、電気穿孔、ＤＥＡＥデキストラントランスフ
ェクション、燐酸カルシウムトランスフェクション、カチオン性リポソーム融合
、プロトプラスト融合により、インビボ（生体内）電場の創出、ＤＮＡ被覆ミク
ロ抛射体のボンバードメント、組換え複製欠陥ウイルスを用いた注入、相同的組
換え、遺伝子療法、ウイルスベクター、または裸のＤＮＡ転移によって投与され
る、請求項１２記載の治療方法。 - 【請求項１４】 神経変性疾患を治療するのに有効量のｅｂａｆを被検体に
投与することを包含する、被検体の神経変性疾患の治療方法。 - 【請求項１５】 前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病
、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症、またはピック病である、
請求項１４記載の治療方法。 - 【請求項１６】 前記ｅｂａｆの投与が、ｅｂａｆ蛋白質の投与により行わ
れる、請求項１４記載の治療方法。 - 【請求項１７】 前記ｅｂａｆの投与が、ｅｂａｆをコードしている核酸の
投与によりｅｂａｆを発現させることにより行われる、請求項１４記載の治療方
法。 - 【請求項１８】 前記核酸が、電気穿孔、ＤＥＡＥデキストラントランスフ
ェクション、燐酸カルシウムトランスフェクション、カチオン性リポソーム融合
、プロトプラスト融合により、インビボ（生体内）電場の創出、ＤＮＡ被覆ミク
ロ抛射体のボンバードメント、組換え複製欠陥ウイルスを用いた注入、相同的組
換え、遺伝子療法、ウイルスベクター、または裸のＤＮＡ転移によって投与され
る、請求項１７記載の治療方法。 - 【請求項１９】 損傷または変性した神経組織の発症を阻止するか損傷また
は変性の重症度を軽減するのに有効量のｅｂａｆを投与することを包含する、被
検体の損傷または変性した神経組織の発症の阻止、或は損傷または変性の重症度
の軽減方法。 - 【請求項２０】 前記被検体が、神経変性疾患を既にもっているか、または
神経変性疾患に罹患する素因のある、請求項１９記載の方法。 - 【請求項２１】 前記神経変性疾患が、アルツハイマー病、パーキンソン病
、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症、痴呆症、またはピック病である、
請求項２０記載の方法。 - 【請求項２２】前記損傷または変性したニューロンが、外傷に関連する傷害
、糖尿病、腎不全、虚血、または治療剤の治療に関連する損傷から生ずる、請求
項１９記載の方法。 - 【請求項２３】 前記ｅｂａｆの投与が、ｅｂａｆ蛋白質の投与により行わ
れる、請求項１９記載の方法。 - 【請求項２４】 前記ｅｂａｆの投与が、ｅｂａｆをコードしている核酸の
投与によりｅｂａｆを発現させることにより行われる、請求項１９記載の方法。 - 【請求項２５】 前記核酸が、電気穿孔、ＤＥＡＥデキストラントランスフ
ェクション、燐酸カルシウムトランスフェクション、カチオン性リポソーム融合
、プロトプラスト融合により、インビボ（生体内）電場の創出、ＤＮＡ被覆ミク
ロ抛射体のボンバードメント、組換え複製欠陥ウイルスを用いた注入、相同的組
換え、遺伝子療法、ウイルスベクター、または裸のＤＮＡ転移によって投与され
る、請求項２４記載の方法。 - 【請求項２６】 ｅｂａｆの発現を誘導または増強し且つ神経組織の成長の
誘導または生存を増強するのに有効量のｅｂａｆ発現のモジュレーターと神経組
織とを接触させることを包含する、神経組織の成長の誘導または生存の増強方法
。 - 【請求項２７】 前記モジュレーターが、レチノイン酸、エストロゲンまた
はプロゲステロンである、請求項２６記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US30209499A | 1999-04-29 | 1999-04-29 | |
| US09/302,094 | 1999-04-29 | ||
| PCT/US2000/011623 WO2000066068A2 (en) | 1999-04-29 | 2000-04-28 | Method for inducing growth and enhancing survival of nervous tissue |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003525591A true JP2003525591A (ja) | 2003-09-02 |
Family
ID=23166230
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000614954A Withdrawn JP2003525591A (ja) | 1999-04-29 | 2000-04-28 | 神経組織の成長の誘導および生存の増強方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6747004B1 (ja) |
| EP (1) | EP1436013A2 (ja) |
| JP (1) | JP2003525591A (ja) |
| AU (1) | AU5124400A (ja) |
| CA (1) | CA2335966A1 (ja) |
| WO (1) | WO2000066068A2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015190959A (ja) * | 2014-03-28 | 2015-11-02 | 学校法人北里研究所 | 卵巣明細胞腺癌細胞の検出方法、卵巣明細胞腺癌診断薬、卵巣明細胞腺癌診断用プライマー、卵巣明細胞腺癌診断用キット、及び卵巣明細胞腺癌診断用プローブ |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7211644B1 (en) * | 1996-08-27 | 2007-05-01 | University Of South Florida | Diagnostic markers of human female infertility |
| US6683156B1 (en) | 1996-08-27 | 2004-01-27 | University Of South Florida | Method for diagnosing selected adenocarcinomas |
| US6294662B1 (en) | 1996-08-27 | 2001-09-25 | University Of South Florida | Nucleic acids encoding an endometrial bleeding associated factor (ebaf) |
| US8106001B2 (en) * | 1996-08-27 | 2012-01-31 | University Of South Florida | Diagnostic markers of human female infertility |
| US7465566B2 (en) | 2000-02-23 | 2008-12-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regulation of genes via application of specific and selective electrical and electromagnetic signals |
| US7465546B2 (en) * | 2000-02-23 | 2008-12-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regulation of transforming growth factor-beta (TGF-β) gene expression in living cells via the application of specific and selective electric and electromagnetic fields |
| US8313908B2 (en) | 2000-02-23 | 2012-11-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regulation of stem cell gene production with specific and selective electric and electromagnetic fields |
| US7374916B2 (en) | 2000-02-23 | 2008-05-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regulation of aggrecan gene expression using specific and selective electrical and electromagnetic signals |
| US7022506B2 (en) * | 2000-02-23 | 2006-04-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method and device for treating osteoarthritis, cartilage disease, defects and injuries in the human knee |
| US7981611B2 (en) * | 2000-02-23 | 2011-07-19 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regulation of fibroblastic growth factor-2 (FGF-2) gene expression in living cells with the application of specific and selective electric and electromagnetic fields |
| US7429471B2 (en) * | 2000-02-23 | 2008-09-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regulation of matrix metalloproteinase gene expression using specific and selective electrical and electromagnetic signals |
| EP1309614A2 (en) * | 2000-08-11 | 2003-05-14 | Eli Lilly And Company | Novel secreted proteins and their uses |
| US20060099576A1 (en) * | 2000-12-14 | 2006-05-11 | Siamak Tabibzadeh | Method for diagnosing a pre-neoplastic or neoplastic lesion in transitional epithelial cells |
| US20090062885A1 (en) * | 2003-11-14 | 2009-03-05 | Brighton Carl T | Method and device for treating osteoarthritis and cartilage disease, defects, and injuries in the human hip |
| CA2553199C (en) * | 2004-01-12 | 2014-03-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | System for up-regulating bone morphogenetic protein (bmp) gene expression in bone cells via the application of fields generated by specific electric and electromagnetic signals |
| WO2005113585A2 (en) * | 2004-05-20 | 2005-12-01 | Acceleron Pharma Inc. | Modified tgf-beta superfamily polypeptides |
| EP1899369A2 (en) * | 2005-07-01 | 2008-03-19 | Acceleron Pharma Inc. | Lefty, lefty derivatives and uses therof |
| WO2008014426A2 (en) * | 2006-07-28 | 2008-01-31 | Children's Memorial Hospital | Methods of inhibiting tumor cell aggressiveness using the microenvironment of human embryonic stem cells |
| US8106004B2 (en) * | 2006-07-28 | 2012-01-31 | Children's Memorial Hospital | Methods of inhibiting tumor cell aggressiveness using the microenvironment of human embryonic stem cells |
| CN108841865A (zh) * | 2018-06-14 | 2018-11-20 | 新乡医学院 | 一种小鼠脊髓体外电转基因方法、小鼠脊髓电转组织切片培养模型建立方法及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6027917A (en) * | 1997-12-10 | 2000-02-22 | Genetics Institute, Inc. | Bone morphogenetic protein (BMP)-17 and BMP-18 compositions |
-
2000
- 2000-04-28 JP JP2000614954A patent/JP2003525591A/ja not_active Withdrawn
- 2000-04-28 EP EP00935844A patent/EP1436013A2/en not_active Withdrawn
- 2000-04-28 US US09/561,861 patent/US6747004B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-04-28 CA CA002335966A patent/CA2335966A1/en not_active Abandoned
- 2000-04-28 AU AU51244/00A patent/AU5124400A/en not_active Abandoned
- 2000-04-28 WO PCT/US2000/011623 patent/WO2000066068A2/en not_active Application Discontinuation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015190959A (ja) * | 2014-03-28 | 2015-11-02 | 学校法人北里研究所 | 卵巣明細胞腺癌細胞の検出方法、卵巣明細胞腺癌診断薬、卵巣明細胞腺癌診断用プライマー、卵巣明細胞腺癌診断用キット、及び卵巣明細胞腺癌診断用プローブ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2000066068A3 (en) | 2004-05-21 |
| EP1436013A2 (en) | 2004-07-14 |
| WO2000066068A2 (en) | 2000-11-09 |
| AU5124400A (en) | 2000-11-17 |
| CA2335966A1 (en) | 2000-11-09 |
| US6747004B1 (en) | 2004-06-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2003525591A (ja) | 神経組織の成長の誘導および生存の増強方法 | |
| Wu et al. | Astrocytic YAP protects the optic nerve and retina in an experimental autoimmune encephalomyelitis model through TGF-β signaling | |
| Kosik | The molecular and cellular biology of tau | |
| JP2002506044A (ja) | Ｇｄｆ−８およびｂｍｐ−１１をモジュレーションするためのフォリスタチンの使用 | |
| JP2000295997A (ja) | トランスフェクトされた上皮基底細胞の神経原細胞（ｎｅｕｒａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌ）、ニューロン細胞および／またはグリア細胞への分化転換 | |
| JPH11509831A (ja) | 眼の障害を処置する方法 | |
| EP0784488A1 (en) | Use of neuregulins as modulators of cellular communication | |
| US6511823B1 (en) | Heparin binding neurotrophic factor gene sequence | |
| US9028810B2 (en) | Composition for inducing migration of neural stem cells containing periostin as effective ingredient | |
| CN113433324A (zh) | Nck1蛋白作为标志物在诊断脊髓损伤中的应用 | |
| Wang et al. | BDNF and NT-3 expression by using glucocorticoid-induced bicistronic expression vector pGC-BDNF-IRES-NT3 protects apoptotic cells in a cellular injury model | |
| Dungan et al. | Expression and biological effect of urodele fibroblast growth factor 1: relationship to limb regeneration | |
| AU749530B2 (en) | CNS neuroregenerative compositions and methods of use | |
| Shinozaki et al. | Changes in pre-mRNA splicing factors during neural differentiation in P19 embryonal carcinoma cells | |
| JP2001523942A (ja) | 運動ニューロン栄養性因子の単離および使用 | |
| Wu et al. | Motor neurons transplantation alleviates neurofibrogenesis during chronic degeneration by reversibly regulating Schwann cells epithelial-mesenchymal transition | |
| Schweigerer | Basic fibroblast growth factor and its relation to angiogenesis in normal and neoplastic tissue | |
| US7595295B2 (en) | Use of pleiotrophin to promote neurogeneration | |
| Yamada et al. | Axonal regrowth downregulates the synthesis of glial cell line-derived neurotrophic factor in the lesioned rat sciatic nerve | |
| US6569423B2 (en) | Methods of inducing nervous tissue regeneration | |
| Wang et al. | Upregulation of heparin-binding growth-associated molecule after spinal cord injury in adult rats | |
| KR100404812B1 (ko) | 신규한뇌내피세포단백질 | |
| Rhyner et al. | Isolation of cDNAs from a mouse astroglial cell line by a subtracted cDNA library | |
| WO2021172510A1 (en) | Production method of retinal pigment epithelial cell | |
| US20040102375A1 (en) | Methods to overcome inhibition of growth cone translocation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20070703 |