JP2003525568A - 分泌蛋白およびそれらをコードするポリヌクレオチド - Google Patents

分泌蛋白およびそれらをコードするポリヌクレオチド

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JP2003525568A JP2000525533A JP2000525533A JP2003525568A JP 2003525568 A JP2003525568 A JP 2003525568A JP 2000525533 A JP2000525533 A JP 2000525533A JP 2000525533 A JP2000525533 A JP 2000525533A JP 2003525568 A JP2003525568 A JP 2003525568A
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Abstract

(57)【要約】 新規ポリヌクレオチドおよびそれらによりコードされる蛋白を開示する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】発明の分野 本発明は新規なポリヌクレオチドおよびかかるポリヌクレオチドによりコード
される蛋白、ならびにこれらのポリヌクレオチドおよび蛋白に関する治療的、診
断的および研究的有用性を提供する。
【０００２】発明の背景 蛋白性因子（例えば、リンホカイン、インターフェロン、ＣＳＦｓおよびイン
ターロイキンのごときサイトカインを含む）の発見を目的とした方法はこの１０
年間に急速に成熟した。現在では常套的なハイブリダイゼーションクローニング
および発現クローニング法は、発見された蛋白に直接関連した情報（すなわち、
ハイブリダイゼーションクローニングの場合には蛋白の部分ＤＮＡ／アミノ酸配
列；発現クローニングの場合には蛋白の活性）に依存するという意味において、
新規ポリペプチドを「直接的に」クローン化する。シグナル配列クローニング（
現在よく認識されている分泌リーダー配列モチーフの存在に基づいてＤＮＡ配列
を単離する）、ならびに種々のＰＣＲによるあるいは低い厳密性によるハイブリ
ダイゼーションクローニング法のごとき、より最近の「間接的」クローニング法
は、リーダー配列のクローニングの場合には分泌されるという性質により、ある
いはＰＣＲによる方法の場合には細胞または組織源により、生物学的活性を有す
ることが知られている蛋白に関する多数のＤＮＡ／アミノ酸配列を使用可能にす
ることによって現状を進歩させてきた。本発明はこれらの蛋白およびそれらをコ
ードするポリヌクレオチドに指向されるものである。
【０００３】発明の概要 １の具体例において、本発明は、下記のものからなる群より選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する： （ａ）配列番号：１のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号：１のヌクレオチド１７９からヌクレオチド４２８５までのヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６
０の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６
０のｃＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌク
レオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６
０の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６
０のｃＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌク
レオチド； （ｇ）配列番号：２のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド； （ｈ）生物学的活性を有する配列番号：２のアミノ酸配列のフラグメントを含
む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：２の８
個の連続したアミノ酸を含む）； （ｉ）上記（ａ）〜（ｆ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド； （ｊ）上記（ｇ）または（ｈ）の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド；および （ｋ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｈ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド。 好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号：１のヌクレオチド１７９
からヌクレオチド４２８５までのヌクレオチド配列；受託番号ＡＴＣＣ９８６２
１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６０の全長蛋白コーディング配列のヌ
クレオチド配列；または受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローン
ａｍ７２８ ６０の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の
好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ＡＴＣＣ９８６２１と
して寄託されたクローンａｍ７２８ ６０のｃＤＮＡインサートによりコードさ
れる全長または成熟蛋白をコードする。さらなる好ましい具体例において、本発
明は、生物学的活性を有する配列番号：２のアミノ酸配列のフラグメントを含む
蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：２の、好
ましくは８個、より好ましくは２０個、最も好ましくは３０個の連続したアミノ
酸を含む）、あるいは生物学的活性を有する配列番号：２のアミノ酸配列のフラ
グメントを含む蛋白をコードするポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号
：２のアミノ酸６７９からアミノ酸６８８までのアミノ酸配列を含む）を提供す
る。 他の具体例は配列番号：１のｃＤＮＡ配列に対応する遺伝子を提供する。 本発明のさらなる具体例は、単離ポリヌクレオチドの製造方法を提供し、該方
法は以下の方法からなる群から選択される： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：１（配列番号：１の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６０
のｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：１（配列番号：１の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６０
のｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること。 好ましくは、この方法により単離されるポリヌクレオチドのヌクレオチド配列
は配列番号：１のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：１の５’末端
に対応するヌクレオチド配列から配列番号：１の３’末端に対応するヌクレオチ
ド配列までの連続したものであるが、配列番号：１の３’末端のポリ（Ａ）テイ
ルは除かれる。もう１つの好ましい具体例において、該単離されたポリヌクレオ
チドのヌクレオチド配列は配列番号：１のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド１７９か
らヌクレオチド４２８５までに対応するものであり、配列番号：１のヌクレオチ
ド１７９からヌクレオチド４２８５までの該配列の５’末端に対応するヌクレオ
チド配列から、配列番号：１のヌクレオチド１７９からヌクレオチド４２８５ま
での該配列の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したものである。 他の具体例において、本発明は、蛋白を含む組成物であって、該蛋白が、 （ａ）配列番号：２のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：２のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列番
号：２の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６
０のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むものであり、他の哺乳動物蛋白を
実質的に含まないものである組成物を提供する。好ましくは、かかる蛋白は配列
番号：２のアミノ酸配列を含む。さらなる好ましい具体例において、本発明は、
生物学的活性を有する配列番号：２のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋白（
該フラグメントは配列番号：２の、好ましくは８個、より好ましくは２０個、最
も好ましくは３０個の連続したアミノ酸を含む）、あるいは生物学的活性を有す
る配列番号：２のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋白（該フラグメントは配
列番号：２のアミノ酸６７９からアミノ酸６８８までのアミノ酸配列を含む）を
提供する。
【０００４】 １の具体例において、本発明は、下記のものからなる群より選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する： （ａ）配列番号：３のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号：３のヌクレオチド１０８からヌクレオチド２５４までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号：３のヌクレオチド２２５からヌクレオチド２５４までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １
１の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １
１のｃＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌク
レオチド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １
１の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｇ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １
１のｃＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌク
レオチド； （ｈ）配列番号：４のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド； （ｉ）生物学的活性を有する配列番号：４のアミノ酸配列のフラグメントを含
む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：４の８
個の連続したアミノ酸を含む）； （ｊ）上記（ａ）〜（ｇ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド； （ｋ）上記（ｈ）または（ｉ）の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド；および （ｌ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｉ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド。 好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号：３のヌクレオチド１０８
からヌクレオチド２５４までのヌクレオチド配列；配列番号：３のヌクレオチド
２２５からヌクレオチド２５４までのヌクレオチド配列；受託番号ＡＴＣＣ９８
６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １１の全長蛋白コーディング配列
のヌクレオチド配列；または受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクロ
ーンｂｆ３７７ １１の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。
他の好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ＡＴＣＣ９８６２
１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １１のｃＤＮＡインサートによりコー
ドされる全長または成熟蛋白をコードする。さらなる好ましい具体例において、
本発明は、生物学的活性を有する配列番号：４のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：４の
、好ましくは８個、より好ましくは２０個、最も好ましくは３０個の連続したア
ミノ酸を含む）、あるいは生物学的活性を有する配列番号：４のアミノ酸配列の
フラグメントを含む蛋白をコードするポリヌクレオチド（該フラグメントは配列
番号：４のアミノ酸１９からアミノ酸２８までのアミノ酸配列を含む）を提供す
る。 他の具体例は配列番号：３のｃＤＮＡ配列に対応する遺伝子を提供する。 本発明のさらなる具体例は、単離ポリヌクレオチドの製造方法を提供し、該方
法は以下の方法からなる群から選択される： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：３（配列番号：３の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １１
のｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：３（配列番号：３の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １１
のｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること。 好ましくは、この方法により単離されるポリヌクレオチドのヌクレオチド配列
は配列番号：３のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：３の５’末端
に対応するヌクレオチド配列から配列番号：３の３’末端に対応するヌクレオチ
ド配列までの連続したものであるが、配列番号：３の３’末端のポリ（Ａ）テイ
ルは除かれる。もう１つの好ましい具体例において、該単離されたポリヌクレオ
チドのヌクレオチド配列は配列番号：３のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド１０８か
らヌクレオチド２５４までに対応するものであり、配列番号：３のヌクレオチド
１０８からヌクレオチド２５４までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド
配列から、配列番号：３のヌクレオチド１０８からヌクレオチド２５４までの該
配列の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したものである。もう１
つの好ましい具体例において、該単離されたポリヌクレオチドのヌクレオチド配
列は配列番号：３のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド２２５からヌクレオチド２５４
までに対応するものであり、配列番号：３のヌクレオチド２２５からヌクレオチ
ド２５４までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から、配列番号：
３のヌクレオチド２２５からヌクレオチド２５４までの該配列の３’末端に対応
するヌクレオチド配列までの連続したものである。 他の具体例において、本発明は、蛋白を含む組成物であって、該蛋白が、 （ａ）配列番号：４のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：４のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列番
号：４の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １
１のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むものであり、他の哺乳動物蛋白を
実質的に含まないものである組成物を提供する。好ましくは、かかる蛋白は配列
番号：４のアミノ酸配列を含む。さらなる好ましい具体例において、本発明は、
生物学的活性を有する配列番号：４のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋白（
該フラグメントは配列番号：４の、好ましくは８個、より好ましくは２０個、最
も好ましくは３０個の連続したアミノ酸を含む）、あるいは生物学的活性を有す
る配列番号：４のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋白（該フラグメントは配
列番号：４のアミノ酸１９からアミノ酸２８までのアミノ酸配列を含む）を提供
する。
【０００５】 １の具体例において、本発明は、下記のものからなる群より選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する： （ａ）配列番号：５のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号：５のヌクレオチド４２６からヌクレオチド５６９までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号：５のヌクレオチド５４６からヌクレオチド５６９までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １
の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １
のｃＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １
の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｇ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １
のｃＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド； （ｈ）配列番号：６のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド； （ｉ）生物学的活性を有する配列番号：６のアミノ酸配列のフラグメントを含
む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：６の８
個の連続したアミノ酸を含む）； （ｊ）上記（ａ）〜（ｇ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド； （ｋ）上記（ｈ）または（ｉ）の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド；および （ｌ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｉ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド。 好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号：５のヌクレオチド４２６
からヌクレオチド５６９までのヌクレオチド配列；配列番号：５のヌクレオチド
５４６からヌクレオチド５６９までのヌクレオチド配列；受託番号ＡＴＣＣ９８
６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １の全長蛋白コーディング配列の
ヌクレオチド配列；または受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクロー
ンｃｗ３５４ １の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の
好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ＡＴＣＣ９８６２１と
して寄託されたクローンｃｗ３５４ １のｃＤＮＡインサートによりコードされ
る全長または成熟蛋白をコードする。さらなる好ましい具体例において、本発明
は、生物学的活性を有する配列番号：６のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋
白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：６の、好ま
しくは８個、より好ましくは２０個、最も好ましくは３０個の連続したアミノ酸
を含む）、あるいは生物学的活性を有する配列番号：６のアミノ酸配列のフラグ
メントを含む蛋白をコードするポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：
６のアミノ酸１９からアミノ酸２８までのアミノ酸配列を含む）を提供する。 他の具体例は配列番号：５のｃＤＮＡ配列に対応する遺伝子を提供する。 本発明のさらなる具体例は、単離ポリヌクレオチドの製造方法を提供し、該方
法は以下の方法からなる群から選択される： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：５（配列番号：５の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １の
ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：５（配列番号：５の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １の
ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること。 好ましくは、この方法により単離されるポリヌクレオチドのヌクレオチド配列
は配列番号：５のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：５の５’末端
に対応するヌクレオチド配列から配列番号：５の３’末端に対応するヌクレオチ
ド配列までの連続したものであるが、配列番号：５の３’末端のポリ（Ａ）テイ
ルは除かれる。もう１つの好ましい具体例において、該単離されたポリヌクレオ
チドのヌクレオチド配列は配列番号：５のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド４２６か
らヌクレオチド５６９までに対応するものであり、配列番号：５のヌクレオチド
４２６からヌクレオチド５６９までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド
配列から、配列番号：５のヌクレオチド４２６からヌクレオチド５６９までの該
配列の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したものである。また、
好ましくは、該単離されたポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は配列番号：５
のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド５４６からヌクレオチド５６９までに対応するも
のであり、配列番号：５のヌクレオチド５４６からヌクレオチド５６９までの該
配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から、配列番号：５のヌクレオチド
５４６からヌクレオチド５６９までの該配列の３’末端に対応するヌクレオチド
配列までの連続したものである。 他の具体例において、本発明は、蛋白を含む組成物であって、該蛋白が、 （ａ）配列番号：６のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：６のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列番
号：６の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １
のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むものであり、他の哺乳動物蛋白を
実質的に含まないものである組成物を提供する。好ましくは、かかる蛋白は配列
番号：６のアミノ酸配列を含む。さらなる好ましい具体例において、本発明は、
生物学的活性を有する配列番号：６のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋白（
該フラグメントは配列番号：６の、好ましくは８個、より好ましくは２０個、最
も好ましくは３０個の連続したアミノ酸を含む）、あるいは生物学的活性を有す
る配列番号：６のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋白（該フラグメントは配
列番号：６のアミノ酸１９からアミノ酸２８までのアミノ酸配列を含む）を提供
する。
【０００６】 １の具体例において、本発明は、下記のものからなる群より選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する： （ａ）配列番号：７のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号：７のヌクレオチド１５１からヌクレオチド８９１までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号：７のヌクレオチド５９５からヌクレオチド８９１までのヌク
レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４
の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４
のｃＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４
の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｇ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４
のｃＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド； （ｈ）配列番号：８のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド； （ｉ）生物学的活性を有する配列番号：８のアミノ酸配列のフラグメントを含
む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：８の８
個の連続したアミノ酸を含む）； （ｊ）上記（ａ）〜（ｇ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド； （ｋ）上記（ｈ）または（ｉ）の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド；および （ｌ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｉ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド。 好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号：７のヌクレオチド１５１
からヌクレオチド８９１までのヌクレオチド配列；配列番号：７のヌクレオチド
５９５からヌクレオチド８９１までのヌクレオチド配列；受託番号ＡＴＣＣ９８
６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４の全長蛋白コーディング配列の
ヌクレオチド配列；または受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクロー
ンｎｍ１３４ ４の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。他の
好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ＡＴＣＣ９８６２１と
して寄託されたクローンｎｍ１３４ ４のｃＤＮＡインサートによりコードされ
る全長または成熟蛋白をコードする。さらなる他の好ましい具体例において、本
発明は、配列番号：８のアミノ酸１０４からアミノ酸１６３までのアミノ酸配列
を含む蛋白をコードするポリヌクレオチドを提供する。さらなる好ましい具体例
において、本発明は、生物学的活性を有する配列番号：８のアミノ酸配列のフラ
グメントを含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列
番号：８の、好ましくは８個、より好ましくは２０個、最も好ましくは３０個の
連続したアミノ酸を含む）、あるいは生物学的活性を有する配列番号：８のアミ
ノ酸配列のフラグメントを含む蛋白をコードするポリヌクレオチド（該フラグメ
ントは配列番号：８のアミノ酸１１８からアミノ酸１２７までのアミノ酸配列を
含む）を提供する。 他の具体例は配列番号：７のｃＤＮＡ配列に対応する遺伝子を提供する。 本発明のさらなる具体例は、単離ポリヌクレオチドの製造方法を提供し、該方
法は以下の方法からなる群から選択される： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：７（配列番号：７の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４の
ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：７（配列番号：７の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４の
ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること。 好ましくは、この方法により単離されるポリヌクレオチドのヌクレオチド配列
は配列番号：７のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：７の５’末端
に対応するヌクレオチド配列から配列番号：７の３’末端に対応するヌクレオチ
ド配列までの連続したものであるが、配列番号：７の３’末端のポリ（Ａ）テイ
ルは除かれる。もう１つの好ましい具体例において、該単離されたポリヌクレオ
チドのヌクレオチド配列は配列番号：７のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド１５１か
らヌクレオチド８９１までに対応するものであり、配列番号：７のヌクレオチド
１５１からヌクレオチド８９１までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド
配列から、配列番号：７のヌクレオチド１５１からヌクレオチド８９１までの該
配列の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したものである。もう１
つの好ましい具体例において、該単離されたポリヌクレオチドのヌクレオチド配
列は配列番号：７のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド５９５からヌクレオチド８９１
までに対応するものであり、配列番号：７のヌクレオチド５９５からヌクレオチ
ド８９１までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から、配列番号：
７のヌクレオチド５９５からヌクレオチド８９１までの該配列の３’末端に対応
するヌクレオチド配列までの連続したものである。 他の具体例において、本発明は、蛋白を含む組成物であって、該蛋白が、 （ａ）配列番号：８のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：８のアミノ酸１０４からアミノ酸１６３までのアミノ酸配列
； （ｃ）配列番号：８のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列番
号：８の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４
のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むものであり、他の哺乳動物蛋白を
実質的に含まないものである組成物を提供する。好ましくは、かかる蛋白は配列
番号：８のアミノ酸配列をまたは配列番号：８のアミノ酸１０４からアミノ酸１
６３までのアミノ酸配列含む。さらなる好ましい具体例において、本発明は、生
物学的活性を有する配列番号：８のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋白（該
フラグメントは配列番号：８の、好ましくは８個、より好ましくは２０個、最も
好ましくは３０個の連続したアミノ酸を含む）、あるいは生物学的活性を有する
配列番号：８のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋白（該フラグメントは配列
番号：８のアミノ酸１１８からアミノ酸１２７までのアミノ酸配列を含む）を提
供する。
【０００７】 １の具体例において、本発明は、下記のものからなる群より選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する： （ａ）配列番号：９のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号：９のヌクレオチド１９０９からヌクレオチド２１２７までの
ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号：９のヌクレオチド２０７４からヌクレオチド２１２７までの
ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の
全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の
ｃＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の
成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｇ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の
ｃＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレオ
チド； （ｈ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド； （ｉ）生物学的活性を有する配列番号：１０のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：１０
の８個の連続したアミノ酸を含む）； （ｊ）上記（ａ）〜（ｇ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド； （ｋ）上記（ｈ）または（ｉ）の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド；および （ｌ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｉ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド。 好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号：９のヌクレオチド１９０
９からヌクレオチド２１２７までのヌクレオチド配列；配列番号：９のヌクレオ
チド２０７４からヌクレオチド２１２７までのヌクレオチド配列；受託番号ＡＴ
ＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の全長蛋白コーディング
配列のヌクレオチド配列；または受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託された
クローンｙｂ１１ １の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。
他の好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ＡＴＣＣ９８６２
１として寄託されたクローンｙｂ１１ １のｃＤＮＡインサートによりコードさ
れる全長または成熟蛋白をコードする。さらなる好ましい具体例において、本発
明は、生物学的活性を有する配列番号：１０のアミノ酸配列のフラグメントを含
む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：１０の
、好ましくは８個、より好ましくは２０個、最も好ましくは３０個の連続したア
ミノ酸を含む）、あるいは生物学的活性を有する配列番号：１０のアミノ酸配列
のフラグメントを含む蛋白をコードするポリヌクレオチド（該フラグメントは配
列番号：１０のアミノ酸３１からアミノ酸４０までのアミノ酸配列を含む）を提
供する。 他の具体例は配列番号：９のｃＤＮＡ配列に対応する遺伝子を提供する。 本発明のさらなる具体例は、単離ポリヌクレオチドの製造方法を提供し、該方
法は以下の方法からなる群から選択される： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：９（配列番号：９の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １のｃ
ＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：９（配列番号：９の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １のｃ
ＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること。 好ましくは、この方法により単離されるポリヌクレオチドのヌクレオチド配列
は配列番号：９のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：９の５’末端
に対応するヌクレオチド配列から配列番号：９の３’末端に対応するヌクレオチ
ド配列までの連続したものであるが、配列番号：９の３’末端のポリ（Ａ）テイ
ルは除かれる。もう１つの好ましい具体例において、該単離されたポリヌクレオ
チドのヌクレオチド配列は配列番号：９のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド１９０９
からヌクレオチド２１２７までに対応するものであり、配列番号：９のヌクレオ
チド１９０９からヌクレオチド２１２７までの該配列の５’末端に対応するヌク
レオチド配列から、配列番号：９のヌクレオチド１９０９からヌクレオチド２１
２７までの該配列の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したもので
ある。さらなる好ましい具体例において、該単離されたポリヌクレオチドのヌク
レオチド配列は配列番号：９のヌクレオチド２０７４からヌクレオチド２１２７
までのｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：９のヌクレオチド２０７
４からヌクレオチド２１２７までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配
列から、配列番号：９のヌクレオチド２０７４からヌクレオチド２１２７までの
該配列の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したものである。 他の具体例において、本発明は、蛋白を含む組成物であって、該蛋白が、 （ａ）配列番号：１０のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：１０のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列
番号：１０の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の
ｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むものであり、他の哺乳動物蛋白を
実質的に含まないものである組成物を提供する。さらなる好ましい具体例におい
て、本発明は、生物学的活性を有する配列番号：１０のアミノ酸配列のフラグメ
ントを含む蛋白（該フラグメントは配列番号：１０の、好ましくは８個、より好
ましくは２０個、最も好ましくは３０個の連続したアミノ酸を含む）、あるいは
生物学的活性を有する配列番号：１０のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋白
（該フラグメントは配列番号：１０のアミノ酸３１からアミノ酸４０までのアミ
ノ酸配列を含む）を提供する。
【０００８】 １の具体例において、本発明は、下記のものからなる群より選択される単離ポ
リヌクレオチドを含む組成物を提供する： （ａ）配列番号：１１のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｂ）配列番号：１１のヌクレオチド１０７７からヌクレオチド１７３３まで
のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号：１１のヌクレオチド１１５８からヌクレオチド１７３３まで
のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １の全
長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃ
ＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレオチ
ド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １の成
熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｇ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃ
ＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレオチ
ド； （ｈ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
オチド； （ｉ）生物学的活性を有する配列番号：１２のアミノ酸配列のフラグメントを
含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：１２
の８個の連続したアミノ酸を含む）； （ｊ）上記（ａ）〜（ｇ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
クレオチド； （ｋ）上記（ｈ）または（ｉ）の蛋白の種相同体をコードしているポリヌクレ
オチド；および （ｌ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｉ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド。 好ましくは、かかるポリヌクレオチドは、配列番号：１１のヌクレオチド１０
７７からヌクレオチド１７３３までのヌクレオチド配列；配列番号：１１のヌク
レオチド１１５８からヌクレオチド１７３３までのヌクレオチド配列；受託番号
ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １の全長蛋白コーディン
グ配列のヌクレオチド配列；または受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託され
たクローンｙｃ２ １の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含む。
他の好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは、受託番号ＡＴＣＣ９８６２
１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃＤＮＡインサートによりコードされ
る全長または成熟蛋白をコードする。さらなる好ましい具体例において、本発明
は、生物学的活性を有する配列番号：１２のアミノ酸配列のフラグメントを含む
蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：１２の、
好ましくは８個、より好ましくは２０個、最も好ましくは３０個の連続したアミ
ノ酸を含む）、あるいは生物学的活性を有する配列番号：１２のアミノ酸配列の
フラグメントを含む蛋白をコードするポリヌクレオチド（該フラグメントは配列
番号：１２のアミノ酸１０４からアミノ酸１１３までのアミノ酸配列を含む）を
提供する。 他の具体例は配列番号：１１のｃＤＮＡ配列に対応する遺伝子を提供する。 本発明のさらなる具体例は、単離ポリヌクレオチドの製造方法を提供し、該方
法は以下の方法からなる群から選択される： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：１１（配列番号：１１の３’末端のポリ（Ａ）テイル
を除く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃＤ
ＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：１１（配列番号：１１の３’末端のポリ（Ａ）テイル
を除く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃＤ
ＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること。 好ましくは、この方法により単離されるポリヌクレオチドのヌクレオチド配列
は配列番号：１１のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：１１の５’
末端に対応するヌクレオチド配列から配列番号：１１の３’末端に対応するヌク
レオチド配列までの連続したものであるが、配列番号：１１の３’末端のポリ（
Ａ）テイルは除かれる。もう１つの好ましい具体例において、該単離されたポリ
ヌクレオチドのヌクレオチド配列は配列番号：１１のｃＤＮＡ配列のヌクレオチ
ド１０７７からヌクレオチド１７３３までに対応するものであり、配列番号：１
１のヌクレオチド１０７７からヌクレオチド１７３３までの該配列の５’末端に
対応するヌクレオチド配列から、配列番号：１１のヌクレオチド１０７７からヌ
クレオチド１７３３までの該配列の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの
連続したものである。さらなる好ましい具体例において、該単離されたポリヌク
レオチドのヌクレオチド配列は配列番号：１１のヌクレオチド１１５８からヌク
レオチド１７３３までのｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：１１の
ヌクレオチド１１５８からヌクレオチド１７３３までの該配列の５’末端に対応
するヌクレオチド配列から、配列番号：１１のヌクレオチド１１５８からヌクレ
オチド１７３３までの該配列の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続
したものである。 他の具体例において、本発明は、蛋白を含む組成物であって、該蛋白が、 （ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：１２のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列
番号：１２の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃ
ＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むものであり、他の哺乳動物蛋白を
実質的に含まないものである組成物を提供する。好ましくは、かかる蛋白は配列
番号：１２のアミノ酸配列を含む。さらなる好ましい具体例において、本発明は
、生物学的活性を有する配列番号：１２のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋
白（該フラグメントは配列番号：１２の、好ましくは８個、より好ましくは２０
個、最も好ましくは３０個の連続したアミノ酸を含む）、あるいは生物学的活性
を有する配列番号：１２のアミノ酸配列のフラグメントを含む蛋白（該フラグメ
ントは配列番号：１２のアミノ酸１０４からアミノ酸１１３までのアミノ酸配列
を含む）を提供する。
【０００９】 ある種の好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは発現調節配列に作動可
能に連結される。本発明はまた、かかるポリヌクレオチド組成物で形質転換され
た、細菌、酵母、昆虫および哺乳動物細胞を包含する宿主細胞を提供する。また
、本明細書開示のポリヌクレオチド配列に対応する遺伝子の、促進、低下、また
は修飾された発現を有する生物が本発明により提供される。 さらに、蛋白の製造方法であって、 （ａ）かかるポリヌクレオチド組成物で形質転換された宿主細胞の培養物を適
当な培地にて増殖させ；ついで （ｂ）該培養物から蛋白を精製する ことからなる方法も提供される。かかる方法により産生される蛋白もまた、本発
明により提供されるものである。好ましい具体例として、かかる方法により製造
される蛋白が成熟形態の蛋白であるものが挙げられる。 本発明の蛋白組成物は、さらに医薬上許容される担体を含んでいてもよい。か
かる蛋白と特異的に反応する抗体を含む組成物も、本発明により提供される。 本発明の蛋白および医薬上許容される担体を含む治療上有効量の組成物を哺乳
動物対象に投与することを含む、医学的状態の予防、治療または改善のための方
法も提供される。
【００１０】詳細な説明 単離蛋白およびポリヌクレオチド 本願において開示されているクローンおよび蛋白の各々についてのヌクレオチ
ドおよびアミノ酸配列を以下に報告する。既知方法により寄託クローンの配列決
定を行うことにより各クローンの実際のヌクレオチド配列を容易に決定すること
ができる。次いで、推定アミノ酸配列（全長ならびに成熟の両方）をかかるヌク
レオチド配列から決定することができる。適当な宿主細胞中でクローンを発現さ
せ、蛋白を集め、次いで、その配列を決定することにより、個々のクローンによ
りコードされる蛋白のアミノ酸配列も決定することができる。開示されている各
蛋白について、出願人は、出願時に利用可能な配列の情報を用いて最もよく同定
できる読み枠であると決定されたものを同定した。 本明細書の用語「分泌」蛋白は、適当な宿主細胞において発現された場合、膜
を通過して輸送されるものをいい、そのアミノ酸配列中のシグナル配列の結果と
しての輸送も含まれる。「分泌」蛋白は、発現される細胞から全体的に分泌され
る蛋白（例えば、可溶性蛋白）または部分的に分泌される蛋白（例えば、受容体
）を包含するが、これらに限らない。また「分泌」蛋白は、小胞体の膜を通過し
て輸送されるものを包含するが、これに限らない。
【００１１】クローン「ａｍ７２８ ６０」 本発明ポリヌクレオチドはクローンａｍ７２８ ６０として同定されている。
ａｍ７２８ ６０は、分泌蛋白をコードしているｃＤＮＡに選択的な方法（米国
特許第５５３６６３７号参照）を用いてヒト胎児腎臓（２９３細胞系）ｃＤＮＡ
ライブラリーから単離され、あるいはコードされる蛋白のアミノ酸配列のコンピ
ューター分析に基づいて、分泌蛋白または膜貫通蛋白をコードするものと同定さ
れた。ａｍ７２８ ６０は全長クローンであり、分泌蛋白（本明細書で「ａｍ７
２８ ６０蛋白」とも称する）の全コーディング配列を含んでいる。 今回決定されたａｍ７２８ ６０のヌクレオチド配列を配列番号：１に示す。
今回出願人が、上記ヌクレオチド配列に対応したａｍ７２８ ６０蛋白の正しい
読み枠および推定アミノ酸配列であると考えるものを配列番号：２に示す。 クローンａｍ７２８ ６０を含む寄託物から得ることのできるＥｃｏＲＩ／Ｎ
ｏｔＩ制限フラグメントは約４３３３ｂｐの長さのはずである。 本明細書に開示されたａｍ７２８ ６０のヌクレオチド配列を、BLASTN/BLAST
XおよびFASTA検索プロトコールを用いてGenBankおよびGenSeqヌクレオチド配列
データベースに対して検索した。ａｍ７２８ ６０は、AA446039 (zw66a08.r1 S
oares testis NHT Homo sapiens cDNA clone 781142 5') および U73682 (Human
meningioma-expressed antigen 11 (MEA11) mRNA, partial cds)として同定さ
れた配列に対して少なくともある程度の類似性を示した。ａｍ７２８ ６０に関
する本明細書開示の推定アミノ酸配列をBLASTX検索プロトコールを用いてGenPep
tおよびGeneSeqアミノ酸配列データベースに対して検索した。推定ａｍ７２８
６０蛋白は、U67884 (melanoma inhibitory activity/condrocyte-derived reti
noic acid sensitive protein homolog [Rattus norvegicus]), U73682 (mening
ioma-expressed antigen 11 [Homo sapiens]), U94780 (MEA6 [Homo sapiens]),
および X84707 (melanoma growth regulatory protein [Homo sapiens])として
同定された配列に対して少なくともある程度の類似性を示した。配列類似性に基
づけば、ａｍ７２８ ６０蛋白および各類似蛋白またはペプチドは少なくともあ
る程度活性を共有している可能性がある。TopPredIIコンピュータープログラム
によれば、ａｍ７２８ ６０蛋白配列中、配列番号：２のアミノ酸３００、３７
０および６７０付近をそれぞれ中心とした３つの潜在的ま膜貫通ドメインが予想
される。 ＣＯＳ細胞において発現された場合、ａｍ７２８ ６０蛋白はこれらの細胞の
膜フラグメントにおいて検出され、変性ＳＤＳポリアクリルアミドゲル上で約２
００ｋＤのところに移動するバンドとして検出される。
【００１２】クローン「ｂｆ３７７ １」 本発明ポリヌクレオチドはクローンｂｆ３７７ １として同定されている。ｂ
ｆ３７７ １は、分泌蛋白をコードしているｃＤＮＡに選択的な方法（米国特許
第５５３６６３７号参照）を用いてヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリーから単離さ
れ、あるいはコードされる蛋白のアミノ酸配列のコンピューター分析に基づいて
、分泌蛋白または膜貫通蛋白をコードするものと同定された。ｂｆ３７７ １は
全長クローンであり、分泌蛋白（本明細書で「ｂｆ３７７ １蛋白」とも称する
）の全コーディング配列を含んでいる。 今回決定されたｂｆ３７７ １のヌクレオチド配列を配列番号：３に示し、こ
れはポリ（Ａ）テイルを含む。今回出願人が、上記ヌクレオチド配列に対応する
ｂｆ３７７ １蛋白の正しい読み枠および推定アミノ酸配列と考えるものを配列
番号：４に示す。配列番号：４のアミノ酸２７から３９までは推定リーダー／シ
グナル配列であり、推定成熟アミノ酸配列はアミノ酸４０から開始する。推定リ
ーダー／シグナル配列が疎水性なので、それは膜貫通ドメインとして作用するは
ずであり、推定リーダー／シグナル配列はｂｆ３７７ １蛋白の残りの部分から
分離されないであろう。 クローンｂｆ３７７ １を含む寄託物から得ることのできるＥｃｏＲＩ／Ｎｏ
ｔＩ制限フラグメントは約４５０ｂｐの長さのはずである。 本明細書に開示したｂｆ３７７ １のヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXお
よびFASTAサーチプロトコールを用いてGenBankおよびGeneSeqデータベースに対
して検索した。ｂｆ３７７ １は、AA559859 (nl48c05.s1 NCI_CGAP_Pr4 Homo s
apiens cDNA clone IMAGE 1043912), AA657838 (nu08b11.s1 NCI_CGAP_Pr2 Homo
sapiens cDNA clone IMAGE:1207389 similar to gb:M15990 PROTO-ONCOGENE TY
ROSINE-PROTEIN KINASE YES (HUMAN)), および R49353 (yg67e07.s1 Homo sapie
ns cDNA clone 38126 3' similar to contains MER22 repetitive element)とし
て同定された配列に対して少なくともある程度の類似性を示した。配列類似性に
基づけば、ｂｆ３７７ １蛋白および各類似蛋白またはペプチドは少なくともあ
る程度活性を共有している可能性がある。
【００１３】クローン「ｃｗ３５４ １」 本発明ポリヌクレオチドはクローンｃｗ３５４ １として同定されている。ｃ
ｗ３５４ １は、分泌蛋白をコードしているｃＤＮＡに選択的な方法（米国特許
第５５３６６３７号参照）を用いてヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリーから単離さ
れ、あるいはコードされる蛋白のアミノ酸配列のコンピューター分析に基づいて
、分泌蛋白または膜貫通蛋白をコードするものと同定された。ｃｗ３５４ １は
全長クローンであり、分泌蛋白（本明細書でｃｗ３５４ １蛋白とも称す）の全
コーディング配列を含んでいる。 今回決定されたｃｗ３５４ １のヌクレオチド配列を配列番号：５に示し、こ
れはポリ（Ａ）テイルを含む。上記ヌクレオチド配列に対応するｃｗ３５４ １
蛋白の正しい読み枠および推定アミノ酸配列であると出願人が考えるものを配列
番号：６に示す。配列番号：６のアミノ酸２８から４０までは推定リーダー／シ
グナル配列であり、推定成熟アミノ酸配列はアミノ酸４１から開始する。推定リ
ーダー／シグナル配列が疎水性であるため、それは膜貫通ドメインとして作用す
るはずであり、推定リーダー／シグナル配列はｃｗ３５４ １蛋白の残りの部分
から分離されないであろう。 クローンｃｗ３５４ １を含む寄託物から得ることのできるＥｃｏＲＩ／Ｎｏ
ｔＩ制限フラグメントは約１３５０ｂｐの長さのはずである。 本明細書に開示したｃｗ３５４ １のヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXお
よびFASTAサーチプロトコールを用いてGenBankおよびGeneSeqデータベースに対
して検索した。ｃｗ３５４ １は、D58859 (Human placenta cDNA 5'-end GEN-5
14B03), H07863 (yl86b05.s1 Homo sapiens cDNA clone 45017 3'), N32178 (yy
25b09.s1 Homo sapiens cDNA clone 272249 3'), R81953 (yi98e11.r1 Homo sap
iens cDNA clone 147308 5'), and W84437 (zd89d06.s1 Soares fetal heart Nb
HH19W Homo sapiens cDNA clone 356651 3')として同定された配列に対して少な
くともある程度の類似性を示した。ｃｗ３５４ １に関する本明細書開示の推定
アミノ酸配列をBLASTX検索プロトコールを用いてGenPeptおよびGeneSeqアミノ酸
配列データベースに対して検索した。推定ｃｗ３５４ １蛋白は、U39726 (aden
osinetriphosphatase [Mycoplasma genitalium])として同定された配列に対して
少なくともある程度の類似性を示した。配列類似性に基づけば、ｃｗ３５４ １
蛋白および類似性を有する各蛋白またはペプチドは少なくともある程度活性を共
有している可能性がある。
【００１４】クローン「ｎｍ１３４ ４」 本発明ポリヌクレオチドはクローンｎｍ１３４ ４として同定されている。ｎ
ｍ１３４ ４は、分泌蛋白をコードしているｃＤＮＡに選択的な方法（米国特許
第５５３６６３７号参照）を用いて成人血液（赤白血病ＴＦ−１）ｃＤＮＡライ
ブラリーから単離され、あるいはコードされる蛋白のアミノ酸配列のコンピュー
ター分析に基づいて、分泌蛋白または膜貫通蛋白をコードするものと同定された
。ｎｍ１３４ ４は全長クローンであり、分泌蛋白（本明細書で「ｎｍ１３４
４蛋白」とも称する）の全コーディング配列を含んでいる。 今回決定されたｎｍ１３４ ４のヌクレオチド配列を配列番号：７に示し、こ
れはポリ（Ａ）テイルを含む。今回出願人が、上記ヌクレオチド配列に対応する
ｎｍ１３４ ４蛋白の正しい読み枠および推定アミノ酸配列と考えるものを配列
番号：８に示す。配列番号：８のアミノ酸１３６から１４８までは推定リーダー
／シグナル配列であり、推定成熟アミノ酸配列はアミノ酸１４９から開始する。
推定リーダー／シグナル配列が疎水性であるため、それは膜貫通ドメインとして
作用するはずであり、推定リーダー／シグナル配列はｎｍ１３４ ４蛋白の残り
の部分から分離されないであろう。 クローンｎｍ１３４ ４を含む寄託物から得ることのできるＥｃｏＲＩ／Ｎｏ
ｔＩ制限フラグメントは約１５００ｂｐの長さのはずである。 本明細書に開示したｎｍ１３４ ４のヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXお
よびFASTAサーチプロトコールを用いてGenBankおよびGeneSeqデータベースに対
して検索した。ｎｍ１３４ ４は、AA205020 (zq72a12.r1 Stratagene neuroepi
thelium (#937231) Homo sapiens cDNA clone 647134 5'), AA205286 (zq72a12.
s1 Stratagene neuroepithelium (#937231) Homo sapiens cDNA clone 647134 3
'), AA261864 (zs18h05.r1 Soares NbHTGBC Homo sapiens cDNA clone 685593 5
'), および H63680 (yr55d03.r1 Homo sapiens cDNA clone 209189 5')として同
定された配列に対して少なくともある程度の類似性を示した。配列類似性に基づ
けば、ｎｍ１３４ ４蛋白および類似性を有する各蛋白またはペプチドは少なく
ともある程度活性を共有している可能性がある。TopPredIIコンピュータープロ
グラムによれば、ｎｍ１３４ ４蛋白配列中の配列番号：８のアミノ酸１０８、
１３２、１７０、１９５および２２６付近をそれぞれ中心とした５つの潜在的な
膜貫通ドメインが予想される。
【００１５】クローン「ｙｂ１１ １」 本発明ポリヌクレオチドはクローンｙｂ１１ １として同定されている。ｙｂ
１１ １は、分泌蛋白をコードしているｃＤＮＡに選択的な方法（米国特許第５
５３６６３７号参照）を用いてヒト胎児脳ｃＤＮＡライブラリーから単離され、
あるいはコードされる蛋白のアミノ酸配列のコンピューター分析に基づいて、分
泌蛋白または膜貫通蛋白をコードするものと同定された。ｙｂ１１ １は全長ク
ローンであり、分泌蛋白（本明細書で「ｙｂ１１ １蛋白」とも称する）の全コ
ーディング配列を含んでいる。 今回決定されたｙｂ１１ １のヌクレオチド配列を配列番号：９に示し、これ
はポリ（Ａ）テイルを含む。今回出願人が、上記ヌクレオチド配列に対応するｙ
ｂ１１ １蛋白の正しい読み枠および推定アミノ酸配列と考えるものを配列番号
：１０に示す。配列番号：１０のアミノ酸４３から５５までは推定リーダー／シ
グナル配列であり、推定成熟アミノ酸配列はアミノ酸５６から開始する。推定リ
ーダー／シグナル配列が疎水性であるため、それは膜貫通ドメインとして作用す
るはずであり、推定リーダー／シグナル配列はｙｂ１１ １蛋白の残りの部分か
ら分離されないであろう。 クローンｙｂ１１ １を含む寄託物から得ることのできるＥｃｏＲＩ／Ｎｏｔ
Ｉ制限フラグメントは約２８００ｂｐの長さのはずである。 本明細書に開示したｙｂ１１ １のヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXおよ
びFASTAサーチプロトコールを用いてGenBankおよびGeneSeqデータベースに対し
て検索した。ｙｂ１１ １は、R55695 (yg88f12.s1 Homo sapiens cDNA clone 4
0397 3') and R85100 (yo43b05.s1 Homo sapiens cDNA clone 180657 3')として
同定された配列に対して少なくともある程度の類似性を示した。配列類似性に基
づけば、ｙｂ１１ １蛋白および類似性を有する各蛋白またはペプチドは少なく
ともある程度活性を共有している可能性がある。
【００１６】クローン「ｙｃ２ １」 本発明ポリヌクレオチドはクローンｙｃ２ １として同定されている。ｙｃ２ １は、分泌蛋白をコードしているｃＤＮＡに選択的な方法（米国特許第５５３
６６３７号参照）を用いてヒト胎児腎臓（２９３細胞系）ｃＤＮＡライブラリー
から単離され、あるいはコードされる蛋白のアミノ酸配列のコンピューター分析
に基づいて、分泌蛋白または膜貫通蛋白をコードするものと同定された。ｙｃ２
１は全長クローンであり、分泌蛋白（本明細書で「ｙｃ２ １蛋白」とも称す
る）の全コーディング配列を含んでいる。 今回決定されたｙｃ２ １のヌクレオチド配列を配列番号：１１に示し、これ
はポリ（Ａ）テイルを含む。今回出願人が、上記ヌクレオチド配列に対応するｙ
ｃ２ １蛋白の正しい読み枠および推定アミノ酸配列と考えるものを配列番号：
１２に示す。配列番号：１２のアミノ酸１５から２７までは推定リーダー／シグ
ナル配列であり、推定アミノ酸配列はアミノ酸２８から開始する。推定リーダー
／シグナル配列が疎水性であるため、それは膜貫通ドメインとして作用するはず
であり、推定リーダー／シグナル配列はｙｃ２ １蛋白の残りの部分から分離さ
れないであろう。 クローンｙｃ２ １を含む寄託物から得ることのできるＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩ
制限フラグメントは約２９００ｂｐの長さのはずである。 本明細書に開示したｙｃ２ １のヌクレオチド配列を、BLASTA/BLASTXおよびF
ASTAサーチプロトコールを用いてGenBankおよびGeneSeqデータベースに対して検
索した。ｙｃ２ １は、AA618531 (np38a03.s1 NCI_CGAP_Lu1 Homo sapiens cDN
A clone IMAGE:1118572 similar to contains Alu repetitive element) and AA
626937 (af84h07.s1 Soares testis NHT Homo sapiens cDNA clone 1048765 3')
として同定された配列に対して少なくともある程度の類似性を示した。配列類似
性に基づけば、ｙｃ２ １蛋白および類似性を有する各蛋白またはペプチドは少
なくともある程度活性を共有している可能性がある。ｙｃ２ １のヌクレオチド
配列は、それが１またはそれ以上のＡｌｕ反復エレメントを含む可能性を示す。
【００１７】 クローンの寄託 クローンａｍ７２８ ６０、ｂｆ３７７ １、ｃｗ３５４ １、ｎｍ１３４
４、ｙｂ１１ １およびｙｃ２ １は、ブダペスト条約に基づいて１９９７年１
２月１９日にAmerican Type Culture Collection（10801 University Boulevard
, Manassas, Virginia 20110-2209 U.S.A.）に原寄託物として寄託され、受託番
号ＡＴＣＣ９８６２１が付与され、そこから該クローンが入手可能である。寄託
材料の公衆の利用に対するすべての制限は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８０８（ｂ
）の規定を除き、特許付与により解除されるであろうし、寄託期間は３７Ｃ．Ｆ
．Ｒ．§１．８０６に従うであろう。 各クローンはこの複合体寄託物として別々の細菌細胞（E. coli）中にトラン
スフェクションされた。ＥｃｏＲＩ／ＮｏｔＩ消化（５’部位、ＥｃｏＲＩ；３
’部位、ＮｏｔＩ）を行い、かかるクローンについて適当な大きさのフラグメン
トを得ることにより各クローンを寄託されているベクターから取ることができる
。各クローンを、図１Ａおよび１Ｂに示すｐＥＤ６またはｐＮＯＴｓベクターの
いずれかに入れて寄託した。ｃＤＮＡクローニングを容易にする新たなポリリン
カーを挿入することによりｐＥＤ６ｄｐｃ２ベクター（ｐＥＤ６）をｐＥＤ６ｄ
ｐｃ１から誘導した（Kaufman et al. (1991). NAR 19: 4485-4490）。ＤＨＦＲ
を欠失させ、新たなポリリンカーを挿入し、Ｍ１３複製開始点をＣｌａＩ部位に
挿入することによりｐＮＯＴｓベクターをｐＭＴ２（Kaufman et al. 1989. Mol
. Cell. Biol. 9: 1741-1750）から誘導した。いくつかの場合、寄託クローンは
寄託単離物中で「フリップ」した（すなわち、逆方向となった）。このような場
合であってもやはり、ＥｃｏＲＩおよびＮｏｔＩ消化によりｃＤＮＡインサート
を単離できる。しかしながら、その場合、適当なベクター中での発現のために正
しい方向でｃＤＮＡを配置するために、ＮｏｔＩは５’部位を生成し、ＥｃｏＲ
Ｉは３’部位を生成するであろう。ｃＤＮＡが寄託されているベクターからｃＤ
ＮＡを発現させてもよい。 個々のクローンを含む細菌細胞を、複合体寄託物から次のようにして得ること
ができる： 個々のクローンに関して知られた配列に対するものになるよう、オリゴヌクレ
オチドプローブまたはプローブを設計すべきである。この配列は本明細書中の配
列、またはそれらの配列の組み合わせから誘導することができる。各全長クロー
ンを単離するために使用されたオリゴヌクレオチドプローブ配列を以下に示すが
、それらは目的クローンの単離において最も信頼できるはずである。
【００１８】クローン プローブ配列 ａｍ７２８ ２０ 配列番号：１３ ｃｗ３５４ １ 配列番号：１４ ｎｍ１３４ ４ 配列番号：１５ ｙｂ１１ １ 配列番号：１６ ｙｃ２ １ 配列番号：１７ 上に挙げた配列は位置２においてＮを含み、その位置は好ましいプローブ／プ
ライマーにおいてヌクレオチドというよりはむしろビオチン化ホスホラミダイト
残基（例え（ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：１２のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列
番号：１２の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃ
ＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列ば、ビオチンホスホラミダイ
ト（１−ジメトキシトリチルオキシ−２−（Ｎ−ビオチニル−４−アミノブチル
）−プロピル−３−Ｏ−（２−シアノエチル）−（Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピル）
−ホスホラミダイト（Glen Researchカタログ番号10-1953））の使用により得ら
れる）により占められる。 好ましくは、オリゴヌクレオチドプローブの設計はこれらのパラメーターに従
うべきである： （ａ）もしあったとしても、不明確な塩基（Ｎ）が最少である配列の領域とな
るように設計すべきである； （ｂ）Ｔｍが約８０℃（ＡまたはＴについては２℃、ＧまたはＣについては４
℃と仮定）となるように設計すべきである。 好ましくは、オリゴヌクレオチド標識に広く用いられる方法を用い、Ｔ４ポリ
ヌクレオチドキナーゼを用いてオリゴヌクレオチドをγ−32Ｐ−ＡＴＰ（比活性
６０００Ｃｉ／ｍｍｏｌｅ）で標識すべきである。他の標識方法を用いることも
できる。好ましくは、取り込まれなかった標識をゲル濾過または他の確立されて
いる方法により除去すべきである。プローブ中に取り込まれた放射活性量をシン
チレーションカウンターで測定することにより定量すべきである。好ましくは、
得られたプローブの比活性は約４ｅ＋６ ｄｐｍ／ｐｍｏｌｅとなるべきである
。 好ましくは、全長クローンのプールを含む細菌培養物を融解し、１００μｌの
ストックを１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを含有する２５ｍｌの滅菌Ｌブロス
を入れた滅菌培養フラスコへの接種に用いるべきである。好ましくは、培養物を
３７℃で増殖させて飽和状態とすべきであり、好ましくは、飽和培養物を新鮮Ｌ
ブロスで希釈すべきである。好ましくは、これらの希釈物の一部をプレーティン
グして、１５０ｍｍのペトリ皿中の１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび１．
５％の寒天を含有するＬブロスを含む固体細菌用培地上で３７℃で一晩増殖させ
た場合５０００個の明確な、しかもよく分離したコロニーが生じる希釈率および
体積を決定すべきである。明確な、しかもよく分離したコロニーを得るための他
の既知方法を用いることもできる。 次いで、標準的なコロニーハイブリダイゼーション法を用いてコロニーをニト
ロセルロースフィルタ−に移し、溶解、変性、次いで、焼き付けを行うべきであ
る。 次いで、好ましくは、０．５％ ＳＤＳ、１００μｇ／ｍｌの酵母ＲＮＡ、お
よび１０ｍＭ ＥＤＴＡを含有する６Ｘ ＳＳＣ（２０Ｘストックは１７５．３ｇ ＮａＣｌ／リットル、８８．２ｇ クエン酸ナトリウム、ＮａＯＨでｐＨ７．０
とする）（１５０ｍｍフィルター１枚あたり約１０ｍｌ）中で穏やかに撹拌しな
がら６５℃で１時間インキュベーションする。次いで、好ましくはプローブをハ
イブリダイゼーションミックスに添加して濃度が１ｅ＋６ ｄｐｍ／ｍｌより大
またはこれと等しくなるようにする。次いで、好ましくはフィルターを室温にお
いて撹拌せずに５００ｍｌの２Ｘ ＳＳＣ／０．５％ ＳＤＳで洗浄し、好ましく
はその後、室温においておだやかに振盪しながら５００ｍｌの２Ｘ ＳＳＣ／０
．１％ ＳＤＳで洗浄する。６５℃、３０分ないし１時間、０．１Ｘ ＳＳＣ／０
．５％ ＳＤＳでの３回目の洗浄が最適である。次いで、好ましくはフィルター
を乾燥し、十分時間オートラジオグラフィーに供してＸ線フィルム上に陽性物を
可視化させる。他の既知ハイブリダイゼーション方法を用いることもできる。 陽性コロニーを拾い、培地中で増殖させ、次いで、標準的手順を用いてプラス
ミドＤＮＡを単離する。次いで、制限分析、ハイブリダイゼーション分析または
ＤＮＡ配列決定によりクローンを証明することができる。
【００１９】 生物学的活性を示すことのできる本発明蛋白のフラグメントも本発明に含まれ
る。蛋白のフラグメントは直鎖状であってもよく、あるいは例えばH.U.Saragovi
, et al., Bio/Technology 10, 773-778 (1992)およびR.S.McDowell, et al., J
. Amer. Chem. Soc. 114, 9245-9253 (1992)（参照により両文献を本明細書に記
載されているものとみなす）に記載されたような既知方法を用いて環化させても
よい。多くの目的（蛋白結合部位の結合手を増加させることを包含）のために、
かかるフラグメントを免疫グロブリンのごとキャリヤ分子に融合させてもよい。
例えば、蛋白のフラグメントを「リンカー」を介して免疫グロブリンのＦｃ部分
に融合させてもよい。２価形態の蛋白については、かかる融合をＩｇＧ分子のＦ
ｃ部分に対して行うことができる。他の免疫グロブリンイソタイプを用いてかか
る融合物を得てもよい。例えば、蛋白−ＩｇＭ融合物は、１０価形態の本発明蛋
白を生じるであろう。 また本発明は全長および成熟形態の開示蛋白を提供する。かかる蛋白の全長形
態は、開示クローンのヌクレオチド配列の翻訳により配列表において同定されて
いる。かかる蛋白の成熟形態を、適当な哺乳動物細胞または他の宿主細胞におい
て開示の全長ポリヌクレオチド（好ましくは、ＡＴＣＣに寄託されたもの）を発
現させることにより得てもよい。蛋白の成熟形態の配列を全長形態のアミノ酸配
列から決定してもよい。
【００２０】 また本発明は、本明細書開示のｃＤＮＡ配列に対応する遺伝子を提供する。「
対応する遺伝子」は、転写されてｍＲＮＡを生じるゲノムの領域であり、そのｍ
ＲＮＡからｃＤＮＡが誘導され、かかる遺伝子の調節された発現に必要なゲノム
の隣接領域（コーディング配列、５’および３’非翻訳領域を含む）、あるいは
スプライシングされたエキソン、イントロン、プロモーター、エンハンサー、な
らびにサイレンサーまたはサプレッサーエレメントも包含する。本明細書開示の
配列の情報を用いて対応遺伝子を単離することができる。本明細書開示の配列の
情報を用いて対応遺伝子を単離することができる。かかる方法は、開示された配
列の情報からプローブまたはプライマーを調製して適当なゲノムライブラリーま
たは他のゲノム材料源中の遺伝子の同定および／または増幅を行うことを包含す
る。「単離遺伝子」とは、その遺伝子が単離された生物のゲノム中に存在する隣
接コーディング配列（存在する場合には）から分離された遺伝子である。 本明細書開示のポリヌクレオチド配列に対応する染色体位置を、例えば、適当
に標識された本発明ポリヌクレオチドをin situにて染色体にハイブリダイゼー
ションさせることにより決定してもよい。すでに特定染色体位置にマッピングさ
れている発現配列タグ（ＥＳＴｓ）のごとき公のデータベース中の有意に類似し
たヌクレオチド配列を同定することにより、開示ポリヌクレオチドの対応染色体
位置を決定してもよい。本明細書に開示した少なくともいくつかのポリヌクレオ
チド配列に関して、本発明ポリヌクレオチドに対して少なくともある程度の類似
性を有する公のデータベース配列はデータベース受託番号によりリストされてい
る。重複配列のUniGene clustersを同定するための、これらの公のデータベース
配列のGenBank受託番号を用いる検索は、National Center for Biotechnology I
nformationにより提供されるインターネットサイトにおいて行うことができ、そ
のアドレスはhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/UniGene/である。そのようにして同
定される多くのUniGene clustersは、すでに特定染色体位置にマッピングされて
いる。
【００２１】 本明細書開示のポリヌクレオチド配列に対応する遺伝子の増強、低下、あるい
は改変された発現を有する生物が提供される。アンチセンスポリヌクレオチドを
用いることにより、あるいは遺伝子から転写されたｍＲＮＡを結合および／また
は開裂させるリボザイムを用いることにより、遺伝子発現の望ましい変化が成し
遂げられる（Albert and Morris, 1994, Trends Pharmacol. Sci. 15(7): 250-2
54; Lavarosky et al., 1997, Biochem. Mol. Med. 62(1): 11-22; and Hampel,
1998, Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 58: 1-39；これらすべてを参照に
より本明細書に記載されているものとみなす）。本明細書開示のポリヌクレオチ
ドに対応する多コピー遺伝子を有するトランスジェニック動物、好ましくは形質
転換細胞およびそれらの子孫中で安定に維持される遺伝学的構築物を用いて細胞
を形質転換することにより得られるトランスジェニック動物が提供される。遺伝
子発現レベルを上昇または低下させる、あるいは遺伝子発現の時間的または空間
的パターンを変化させる改変された遺伝学的制御領域を有するトランスジェニッ
ク動物も提供される（European Patent No. 0 649 464 B1参照；これらすべてを
参照により本明細書に記載されているものとみなす）。さらに、外部配列の挿入
により、あるいは対応遺伝子の全部または一部の欠失により、本明細書開示のポ
リヌクレオチド配列に対応する遺伝子が不完全または完全に不活性化された生物
が提供される。挿入により、好ましくは、転置可能エレメントの不正確な切除後
の挿入により（Plasterk, 1992, Bioessays 14(9): 629-633; Zwaal et al., 19
93, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(16): 7431-7435; Clark et al., 1994, Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA 91(2): 719-722; これらすべてを参照により本明細
書に記載されているものとみなす）、あるいは相同組み換えにより、好ましくは
陽性／陰性遺伝学的選択法により検出される相同組み換えにより（Mansour et a
l., 1988, Nature 336: 348-352; U.S. Patent Nos. 5,464,764; 5,487,992; 5,
627,059; 5,631,153; 5,614, 396; 5,616,491; and 5,679,523; これらすべてを
参照により本明細書に記載されているものとみなす）、不完全または完全な遺伝
子不活性化を行うことができる。変化した遺伝子発現を有するこれらの生物は、
好ましくは真核生物であり、より好ましくは哺乳動物である。かかる生物は、対
応遺伝子に関連した疾患の研究のための非ヒトモデルの開発に、さらには対応遺
伝子からの蛋白産物と相互作用する分子の同定のためのアッセイ系の開発に有用
である。 本発明蛋白が膜結合（例えば、受容体）である場合、本発明はかかる蛋白の可
溶性形態も提供する。かかる形態において、蛋白の細胞内および膜貫通ドメイン
の一部または全体を取り外して、蛋白が発現された宿主から十分に分泌されるよ
うにする。本発明蛋白の細胞内および膜貫通ドメインを、配列の情報からかかる
ドメインを決定するための既知手法により同定することができる。例えば、TopP
redIIコンピュータープログラムを用いてアミノ酸配列中の膜貫通ドメインの位
置を予想でき、それらのドメインは膜貫通ドメインの中心位置により記載され、
記載された中心残基の両側の少なくとも１０個の膜貫通アミノ酸を伴う。 本発明蛋白および蛋白フラグメントは、開示蛋白のアミノ酸配列の少なくとも
２５％（より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％）
の長さのアミノ酸配列を有し、開示蛋白に対して少なくとも６０％の配列同一性
（より好ましくは少なくとも７５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９０％
または９５％の同一性）を有する蛋白を包含する。配列同一性は、配列のギャッ
プを最小にしつつ、重複および同一性を最大にするように配列を並置した場合に
蛋白のアミノ酸配列を比較することにより決定される。いずれの開示蛋白のセグ
メントに対しても少なくとも７５％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも
８５％の同一性、最も好ましくは少なくとも９５％の同一性）を有する、好まし
くは８個またはそれ以上（より好ましくは２０個またはそれ以上、最も好ましく
は３０個またはそれ以上）の連続したアミノ酸を含むセグメントを含有する蛋白
または蛋白フラグメントも本発明に包含される。
【００２２】 詳細には、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ（Washington University BLAST）バージョン２
．０ソフトウェアを用いて配列同一性を決定してもよく、該ソフトウェアは、公
に制限なく使用できるＮＣＢＩ−ＢＬＡＳＴバージョン１．４を基礎としたＷＵ
−ＢＬＡＳＴに基づいて構築されている（Altschul and Gish, 1996, Local ali
gnment statistics, Doolittle ed., Methods in Enzymology 266: 460-480; Al
tschul et al., 1990, Basic local alignment search tool, Journal of Molec
ular Biology 215: 403-410; Gish and States, 1993, Identification of prot
ein coding regions by database similarity search, Nature Genetics 3: 266
-272; Karlin and Altschul, 1993, Applications and statistics for multipl
e high-scoring segments in molecular sequences, Proc. Natl. Acad. Sci. U
SA 90: 5873-5877（参照によりこれらすべての文献を本明細書に記載されている
ものとみなす））。いくつかのＵＮＩＸプラットフォーム用のＷＵ−ＢＬＡＳＴ
バージョン２．０実行可能プログラムをftp://blast.wustl.edu/blast/executab
lesからダウンロードすることができる。いくつかのサポートプログラムのほか
に、検索プログラムの完全な組（ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ、
ＴＢＬＡＳＴＮおよびＴＢＬＡＳＴＸ）がこのサイトにおいて提供される。ＷＵ
−ＢＬＡＳＴ ２．０には著作権が設定されており、著者の許諾なしにいかなる
形態であっても販売または再頒布してはならないが、業としての使用でない場合
、あるいは研究用途の場合は自由に使用できる。組（ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴ
Ｎ、ＢＬＡＳＴＸ、ＴＢＬＡＳＴＮおよびＴＢＬＡＳＴＸ）に属するすべての検
索プログラムにおいて、ギャップドアラインメントルーチン（gapped alignment
routines）がデータベースサーチ自体に統合されており、そのため、高感度か
つ高選択性であり、解釈容易な結果が得られる。最適には、これらすべてのプロ
グラムにおいてギャッピングをオフにすることができる。長さのギャップに関す
るデフォールトペナルティー（default penalty）（Ｑ）は、ＢＬＡＳＴＰにつ
いてはＱ＝９であり、ＢＬＡＳＴＮについてはＱ＝１０であるが、ゼロを含めて
、１ないし８、９、１０、１１、１２ないし２０、２１ないし５０、５１ないし
１００等のいずれの整数値に変更してもよい。ギャップを拡張するための残基１
個あたりのデフォールトペナルティー（Ｒ）は、蛋白およびＢＬＡＳＴＰについ
てはＲ＝２であり、ＢＬＡＳＴＮについてはＲ＝１０であるが、０、１、２、３
、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２ないし２０、２１ないし５０、５
１ないし１００等の整数値に変更してもよい。配列を並置比較して重複および同
一性を最大とし、配列のギャップを最小とするために、ＱおよびＲのいずれの組
み合わせを使用してもよい。デフォールトアミノ酸比較マトリックスはＢＬＯＳ
ＵＭ６２であるが、ＰＡＭのごとき他のアミノ酸比較マトリックスを使用するこ
ともできる。
【００２３】 開示ポリヌクレオチドおよび蛋白の種相同体も、本発明により提供される。本
明細書の用語「種相同体」は、蛋白またはポリヌクレオチドの起源とは異なる種
に関する蛋白またはポリヌクレオチドであるが、当業者により決定された場合、
有意な配列類似性を有するものをいう。好ましくは、ポリヌクレオチド種相同体
は、特定のポリヌクレオチドに対して少なくとも６０％（より好ましくは少なく
とも７５％、最も好ましくは少なくとも９０％）の配列同一性を有し、蛋白種相
同体は、特定の蛋白に対して少なくとも３０％（より好ましくは少なくとも４５
％、最も好ましくは少なくとも６０％）の配列同一性を有する。ここに配列同一
性は、重複および同一性が最大となり、配列のギャップが最小となるように並置
されたポリヌクレオチドのヌクレオチド配列または蛋白のアミノ酸配列を比較す
ることにより決定される。本明細書に示す配列から適当なプローブまたはプライ
マーを作成し、次いで、所望種由来の適当な核酸源をスクリーニングすることに
より種相同体を単離し同定してもよい。好ましくは、種相同体は哺乳動物種から
単離されたものである。最も好ましくは、種相同体は、例えば、Pan troglodyte
s、Gorilla gorilla、Pongo pygmaeus、Hylobates concolor、Macaca mulatta、
Papio papio、Papio hamadryas、Cercopithecus aethiops、Cebus capucinus、A
otus trivirgatus、Sanguinus oedipus、Microcebus murinus、Mus musculus、R
attus norvegicus、Cricetulus griseus、Felis catus、Mustela vison、Canis
familiaris、Oryctolagus cuniculus、Bos taurus、Ovis aries、Sus scrofaお
よびEquus caballusのごとき特定の哺乳動物から単離されたものであって、その
遺伝学的地図が作成されていて、１の種における遺伝子のゲノム組織化と別の種
における関連遺伝子のゲノム組織化との間の遺伝子配列順序の関連性の同定が可
能なものである（O'Brien and Seuanez, 1988, Ann. Rev. Genet. 22: 323-351;
O'Brien et al., 1993, Nature Genetics 3: 103-112; Johansson et al., 199
5, Genomics 25: 682-690; Lyons et al., 1997, Nature Genetics 15: 47-56;
O'Brien et al., 1997, Trends in Genetics 13(10): 393-399; Carver and Stu
bbs, 1997, Genome Research 7: 1123-1137（これらすべてを参照により本明細
書に記載されているものとみなす））。
【００２４】 また本発明は、開示ポリヌクレオチドの対立遺伝子変種、すなわち、開示ポリ
ヌクレオチドによりコードされている蛋白と同一、相同的またはこれに関連した
蛋白をコードする単離ポリヌクレオチドの自然発生的別形態を包含する。好まし
くは、対立遺伝子変種は、特定のポリヌクレオチドに対して少なくとも６０％（
より好ましくは少なくとも７５％、最も好ましくは少なくとも９０％）の同一性
を有し、ここに配列同一性は、重複および同一性が最大となり、配列のギャップ
が最小となるように並置されたポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を比較する
ことにより決定される。本明細書記載の配列から適当なプローブまたはプライマ
ーを作成し、適当な種の個体から得られる適当な核酸源をスクリーニングするこ
とにより対立遺伝子変種を単離し、同定してもよい。 また本発明は、本明細書開示ポリヌクレオチドの配列に相捕的な配列を有する
ポリヌクレオチドも包含する。
【００２５】 また本発明は、厳密さを減じた条件下で、より好ましくは厳密な条件下で、最
も好ましくは非常に厳密な条件下で、本明細書記載のポリヌクレオチドにハイブ
リダイゼーションしうるポリヌクレオチドも包含する。厳密さの条件の例を下表
に示す。非常に厳密な条件は、例えば、少なくとも条件Ａ〜Ｆと同程度に厳密で
あり、厳密な条件は、例えば、少なくとも条件Ｇ〜Ｌと同程度に厳密であり、厳
密さを減じた条件は、例えば、少なくとも条件Ｍ〜Ｒと同程度に厳密である。
【表１】 ａ） ：ハイブリッド長さは、ハイブリダイゼーションしているポリヌクレオチ
ドのハイブリッドしている領域（複数も可）に関して予想される長さである。ポ
リヌクレオチドを未知配列の標的ポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションさ
せる場合、ハイブリッド長さは、ハイブリダイゼーションするポリヌクレオチド
の長さと仮定する。既知配列のポリヌクレオチドがハイブリダイゼーションする
場合、ポリヌクレオチド配列を並置し、最適な配列相補性の領域（複数も可）を
同定することによりハイブリッド長さを決定することができる。 ｂ） ：ハイブリダイゼーションおよび洗浄バッファーにおいてＳＳＰＥ（１Ｘ
ＳＳＰＥは０.１５Ｍ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＮａＨ2ＰＯ4、および１.２５ｍＭ
ＥＤＴＡ，ｐＨ７.４である）をＳＳＣ（１ＸＳＳＣは０.１５Ｍ ＮａＣｌおよ
び１５ｍＭクエン酸ナトリウムである）に置き換えることができる。ハイブリダ
イゼーション完了後、洗浄を１５分間行う。 *ＴB−ＴR：長さ５０塩基対よりも短いと予想されるハイブリッドについてのハ
イブリダイゼーション温度は、ハイブリッドの融解温度（Ｔm）よりも５〜１０
℃低くすべきである。下記等式によりＴmが決定される。長さ１８塩基対未満の
ハイブリッドについては、Tm(℃) = 2(A + T塩基の数) + 4(G + C塩基の数)。長
さ１８ないし４９塩基対のハイブリッドについては、 Tm(℃) = 81.5 + 16.6(log10[Na+]) + 0.41(%G+C) - (600/N)であり、Ｎはハイ
ブリッドの塩基数であり、ハイブリダイゼーションバッファー中のナトリウムイ
オン濃度である（１ＸＳＳＣについての［Ｎａ+］＝０.１６５Ｍ）。 ポリヌクレオチドハイブリダイゼーションのための厳密さの条件のさらなる例
はSambrook, J., E.F. Fritsch, and T. Maniatis, 1989, Molecular Cloning:
A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Ha
rbor, NY, chapters 9 and 11, and Current Protocols in Molecular Biology,
1995, F.M. Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., sections 2.10
and 6.3-6.4に記載されており、参照により本明細書に記載されているものとみ
なす。 好ましくは、かかるハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドのそれぞれ
が、ハイブリダイゼーションすべき本発明ポリヌクレオチドの少なくとも２５％
（より好ましくは、少なくとも５０％、最も好ましくは、少なくとも７５％）の
長さを有し、ハイブリダイゼーションすべき本発明ポリヌクレオチドに対して少
なくとも６０％の配列同一性（より好ましくは、少なくとも７５％の同一性、最
も好ましくは、少なくとも９０％または９５％の同一性）を有する。配列同一性
は、配列のギャップを最小にしつつ、重複および同一性を最大にするように配列
を並置した場合に蛋白のアミノ酸配列を比較することにより決定される。
【００２６】 本発明蛋白をコードしている単離ポリヌクレオチドを、Kaufman et al., Nucl
eic Acids Res. 19, 4485-4490 (1991)に開示のｐＭＴ２またはｐＥＤ発現ベク
ターのごとき発現制御配列に作動可能に連結して、蛋白を組み換え的に製造して
もよい。多くの適当な発現制御配列が当該分野において知られている。多くの適
当な発現制御配列が当該分野において知られている。組み換え蛋白発現のための
一般的方法も知られており、R. Kaufman, Methods in Enzymology 185, 537-566
(1990)が典型例である。ここで定義する「作動可能に連結」とは、本発明単離
ポリヌクレオチドおよび発現制御配列がベクターまたは細胞中に置かれ、連結さ
れたポリヌクレオチド／発現制御配列で形質転換（トランスフェクション）され
た宿主細胞により発現されるようになっていることを意味する。 多くのタイプの細胞は本発明蛋白の発現に適した宿主細胞として作用しうる。
哺乳動物細胞は、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣 （ＣＨＯ）細胞、ヒト腎臓２９３細胞、ヒト表皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２
０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の形質転換された霊長類細胞系、正常
２倍体細胞、一次組織のインビトロ培養から得られる細胞株、一次エクスプラン
ト、ＨｅＬａ細胞、マウス細胞、ＢＨＫ、ＨＬ−６０、Ｕ９３７ＨａＫまたはJu
rkat細胞を包含する。 別法として、酵母のごとき下等真核細胞または細菌のごとき原核細胞において
蛋白を製造することが可能である。潜在的に適当な酵母株は、Saccharomyces ce
revisiae、Schizosaccharomyces pombe、Kluyveromyces株、Candida、または異
種蛋白を発現可能な酵母株を包含する。潜在的に適当な細菌株は、Escherichia
coli、Bacillus subtilis、Salmonella typhimurium、または異種蛋白を発現可
能な細菌株を包含する。蛋白が酵母または細菌において生成される場合、その中
で生成された蛋白を、例えば適当部位のリン酸化またはグリコシレーションによ
り修飾して機能的蛋白を得る必要があるかもしれない。既知化学的または酵素的
方法を用いてかかる共有結合を行ってもよい。 本発明単離ポリヌクレオチドを１種またはそれ以上の昆虫発現ベクター中の適
当な制御配列に作動可能に連結し、昆虫発現系を用いることにより蛋白を得ても
よい。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系のための材料および方法は、例えばIn
vitrogen, San Diego, California, USAからのキット形態（MaxBacRキット）で
市販されており、かかる方法は当該分野においてよく知られており、Summersお
よびSmith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1555 (1987
)（参照により本明細書に記載されているものとみなす）に記載のようなものが
ある。本明細書で用いるように、本発明ポリヌクレオチドを発現可能な昆虫細胞
は「形質転換」されている。 組み換え蛋白の発現に適した培養条件下で形質転換宿主細胞を培養することに
より本発明蛋白を製造してもよい。次いで、得られた発現蛋白を、ゲル濾過およ
びイオン交換クロマトグラフィーのごとき既知精製プロセスを用いてかかる培養
物（すなわち、培地または細胞抽出物）から精製してもよい。また、蛋白の精製
は、蛋白に結合するであろう作用剤を含有するアフィニティーカラム；コンカナ
バリンＡ−アガロース、ヘパリン−トヨパールRまたはCibacrom blue 3GAセファ
ロースRのごときアフィニティーカラムによる１またはそれ以上のカラム工程；
フェニルエーテル、ブチルエーテル、またはプロピルエーテルのごとき樹脂を用
いる疎水性相互作用クロマトグラフィーを用いる１またはそれ以上の工程；ある
いは免疫アフィニティークロマトグラフィーを包含する。 別法として、本発明蛋白を精製容易形態として発現させてもよい。例えば、マ
ルトース結合蛋白（ＭＢＰ）、グルタチオン−Ｓ−トンスフェラーゼ（ＧＳＴ）
またはチオレドキシン（ＴＲＸ）との融合蛋白のごとき融合蛋白として発現させ
てもよい。かかる融合蛋白の発現および精製のためのキットは、それぞれNew En
glan BioLab (Beverly, MA)、Pharmacia (Piscataway, NJ)およびInVitrogenか
ら市販されている。蛋白にエピトープでタグを付し、次いで、かかるエピトープ
に指向された特異的抗体を用いることにより精製することもできる。１のかかる
エピトープ（「フラッグ」）はKodak (New Haeven, CT)から市販されている。 最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体、例えば懸垂メチルまたは他の脂肪族基を
有するシリカゲルを用いる１またはそれ以上の逆相高品質液体クロマトグラフィ
ー（ＲＰ−ＰＬＣ）工程を用いてさらに蛋白を精製することができる。いくつか
またはすべての上記精製工程を種々組み合わせて用いて実質的に均一な単離組み
換え蛋白を得ることもできる。かくして精製された蛋白は他の哺乳動物蛋白を実
質的に含まず、本発明において「単離蛋白」と定義される。 本発明蛋白をトランスジェニック動物の生産物として、例えば、蛋白をコード
しているヌクレオチド配列を含む体細胞または生殖細胞により特徴づけられるト
ランスジェニックウシ、ヤギ、ブタ、またはヒツジの乳の成分として発現させて
もよい。 既知の慣用的化学合成により蛋白を製造してもよい。合成的手段による本発明
蛋白の構築方法は当業者に知られている。合成的に構築された蛋白配列は、一次
、二次または三次構造および／またはコンホーメーション特性を共有することに
よって、蛋白活性をはじめとする共通の生物学的特性を有する可能性がある。よ
って、それらを、治療化合物のスクリーニングおよび抗体の生成のための免疫学
的プロセスにおいて、天然の精製蛋白の生物学的活性または免疫学的置換物とし
て使用してもよい。
【００２７】 本明細書に示す蛋白は、精製蛋白のアミノ酸配列に類似したアミノ酸配列によ
り特徴づけられるが、その中に自然にあるいは誘導体化によって修飾されていて
もよい。例えば、ペプチドまたはＤＮＡ配列の修飾は既知方法を用いて当業者に
より行われうる。蛋白配列中の目的とされる修飾は、コーディング配列中の選択
アミノ酸残基の変化、置換、交換、挿入または欠失を包含する。例えば、１個ま
たはそれ以上のシステイン残基を欠失させ、あるいは別のアミノ酸と交換して分
子のコンホーメーションを変化させてもよい。かかる変化、置換、交換、挿入ま
たは欠失のための方法は当業者によく知られている（例えば、米国特許第４１５
８５８４号参照）。好ましくは、かかる変化、置換、交換、挿入または欠失は蛋
白の所望活性を保持するものである。 全体的または部分的に蛋白活性を保持すると期待され、かくしてスクリーニン
グまたは他の免疫学的方法に有用でありうる蛋白配列の他のフラグメントおよび
誘導体も、本明細書の開示から当業者により作成されうる。かかる修飾は本発明
により包含されると確信される。
【００２８】用途および生物学的活性 本発明ポリヌクレオチドおよび蛋白は、下記の１またはそれ以上の用途または
生物学的活性（本明細書に引用されたアッセイに関連するものも含む）を示すと
考えられる。本発明蛋白に関して説明された用途または活性は、かかる蛋白の投
与または使用により、あるいはかかる蛋白をコードしているポリヌクレオチドの
投与または使用（例えば、遺伝子治療またはＤＮＡ導入に適したベクターのごと
き）により提供されうる。
【００２９】研究用途および有用性 本発明により提供されるポリヌクレオチドは、研究集団によって種々の目的に
使用されうる。分析用に、特徴づけまたは治療用途に、対応蛋白が優先的に発現
される（構成的に、または組織分化もしくは発達の特定段階において、または疾
病状態において発現される）組織のマーカーとして、さらにはサザンゲルの分子
量マーカーとして、染色体の同定または関連遺伝子位置のマッピングのための染
色体マーカーまたはタグとして（標識された場合）、患者の内在性ＤＮＡと比較
して潜在的な遺伝病の同定を行うために、ハイブリダイゼーションするプローブ
として用いて新規な関連ＤＮＡ配列を発見するために、遺伝学的フィンガープリ
ンティングのためのＰＣＲプライマーを得るための情報源として、他の新規ポリ
ヌクレオチドを発見するプロセスにおいて既知配列を差し引くためのプローブと
して、「遺伝子チップ」または他の支持体に結合させるためにオリゴマーを選択
し作成するために、発現パターンの試験のために、ＤＮＡ免疫法を用いて抗蛋白
抗体を生成させるために、ならびに抗ＤＮＡ抗体を生成させ、あるいはさらなる
免疫応答を誘導するための抗原として、ポリヌクレオチドを使用することができ
る。別の蛋白に結合または潜在的に結合（例えば、受容体−リガンド相互作用に
おけるように）する蛋白をコードしている場合、結合する他の蛋白を同定し、あ
るいは、または結合相互作用の阻害剤を同定するための相互作用トラップアッセ
イ（例えば、Gyuris et al., Cell 75: 791-803 (1993)に記載されたような）に
おいてポリヌクレオチドを使用することができる。 本発明により提供される蛋白は、高処理量スクリーニングのための一群の多数
の蛋白を含む、生物学的活性を決定するためのアッセイに；抗体の生成または他
の免疫応答を誘導するために；生物学的液体中の蛋白（またはその受容体）のレ
ベルを定量的に決定するために設計されたアッセイにおける試薬（標識試薬を包
含）として；対応蛋白が優先的に発現される（構成的に、または組織分化もしく
は発達の特定段階において、または疾病状態において発現される）組織のマーカ
ーとして；ならびに、もちろん関連受容体またはリガンドを単離するために用い
てもよい。蛋白がもう１つの蛋白に結合または潜在的に結合する場合、結合する
他の蛋白を同定し、あるいは、または結合相互作用の阻害剤を同定するために蛋
白を使用することができる。これらの結合相互作用に関与する蛋白を用いて、結
合相互作用に関するペプチドまたは小型分子状阻害剤またはアゴニストのスクリ
ーニングを行うこともできる。 これらの研究用途のいずれかまたはすべては、研究用製品として商品化するた
めに試薬グレードまたはキットのフォーマットへと発展させることができる。 上記使用を実行するための方法は当業者によく知られている。かかる方法を開
示する文献は、"Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 2nd ed., Cold Sp
ring Harbor Laboratory Press, Sambrook, J., E.F. Fritsch and T. Maniatis
eds., 1989,および"Methods in Enzymology: Guide to Molecular Cloning Tec
hniques", Academic Press, Berger, S.L. and A.R. Kimmel eds., 1987を包含
するが、これらに限らない。
【００３０】 栄養としての用途 本発明ポリヌクレオチドおよび蛋白を栄養源または添加物として使用すること
ができる。かかる用途は、蛋白またはアミノ酸添加物としての用途、炭素源とし
ての用途、窒素源としての用途および炭水化物源としての用途を包含するが、こ
れらに限らない。かかる場合、本発明蛋白またはポリヌクレオチドを特定の生物
のエサとして添加してもよく、あるいは粉末、ピル、溶液、懸濁液またはカプセ
ルの形態のごとき別個の固体液体調合物として投与することもできる。微生物の
場合、微生物が培養される培地に本発明蛋白またはポリヌクレオチドを添加する
ことができる。
【００３１】 サイトカインおよび細胞増殖／分化活性 本発明蛋白はサイトカイン活性、細胞増殖活性（誘導もしくは阻害）または細
胞分化活性（誘導もしくは阻害）を示しうるか、またはある種の細胞集団におい
て他のサイトカインの産生を誘導しうる。今日まで見いだされてきた多くの蛋白
性因子（すべての既知サイトカインを包含）は、１またはそれ以上の因子依存的
細胞増殖アッセイにおいて活性を示しており、よって、アッセイはサイトカイン
活性の便利な確認法として役立つ。本発明蛋白の活性は、細胞系（３２Ｄ、ＤＡ
２、ＤＡ１Ｇ、Ｔ１０、Ｂ９、Ｂ９／１１、ＢａＦ３、ＭＣ９／Ｇ、Ｍ＋（ｐｒ
ｅＢ Ｍ＋）、２Ｅ８、ＲＢ５、ＤＡ１、１２３、Ｔ１１６５、ＨＴ２、ＣＴＬ
Ｌ２、ＴＦ−１、Ｍｏ７ｅおよびＣＭＫを包含するが、これらに限らない）のた
めの多くの常套的な因子依存的細胞増殖アッセイのいずれかにより確認される。 本発明蛋白の活性を、とりわけ、下記方法により測定してもよい： Ｔ細胞または胸腺細胞の増殖についてのアッセイは、Current Protocols in I
mmunology, Ed by J. E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. She
vach, W Strober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscienc
e (Chapter 3, In Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19; Ch
apter 7, Immunologic studies in Humans); Takai et al., J. Immunol. 137:3
494-3500, 1986; Bertagnolli et al., J. Immunol. 145:1706-1712, 1990; Ber
tagnolli et al., Cellular Immunology 133:327-341, 1991; Bertagnolli, et
al., J. Immunol. 149:3778-3783, 1992; Bowman et al., J. Immunol. 152: 17
56-1761, 1994 に記載されたものを包含するが、これらに限らない。 脾臓細胞、リンパ節細胞または胸腺細胞のサイトカイン生成および／または増
殖に関するアッセイは、Polyclonal T cell stimulation, Kruisbeek, A.M. an
d Shevach, E.M. In Current Protocols in Immunology. J.E.e.a. Coligan eds
. Vol 1 pp. 3.12.1-3.12.14, John Wiley and Sons, Toronto. 1994; and Meas
urement of mouse and human Interferon g, Schreiber, R.D. In Current Pro
tocols in Immunology. J.E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.8.1-6.8.8, John
Wiley and Sons, Toronto. 1994に記載されたものを包含するが、これらに限ら
ない。 造血およびリンパ生成細胞の増殖および分化についてのアッセイは、 Measurement of Human and Murine Interleukin 2 and Interleukin 4, Bottoml
y, K., Davis, L.S. and Lipsky, P.E. In Current Protocols in Immunology.
J.E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp. 6.3.1-6.3.12, John Wiley and Sons, Toron
to. 1991; deVries et al., J. Exp. Med. 173:1205-1211, 1991; Moreau et al
., Nature 336:690-692, 1988; Greenberger et al., Proc. Natl. Acad. Sci.
U.S.A. 80:2931-2938, 1983; Measurement of mouse and human interleukin 6
- Nordan, R. In Current Protocols in Immunology. J.E.e.a. Coligan eds. V
ol 1 pp. 6.6.1-6.6.5, John Wiley and Sons, Toronto. 1991; Smith et al.,
Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83:1857-1861, 1986; Measurement of human I
nterleukin 11 - Bennett, F., Giannotti, J., Clark, S.C. and Turner, K. J
. In Current Protocols in Immunology. J.E.e.a. Coligan eds. Vol 1 pp.
6.15.1 John Wiley and Sons, Toronto. 1991; Measurement of mouse and hum
an Interleukin 9 - Ciarletta, A., Giannotti, J., Clark, S.C. and Turner,
K.J. In Current Protocols in Immunology. J.E.e.a. Coligan eds. Vol 1 p
p. 6.13.1, John Wiley and Sons, Toronto. 1991に記載されたものを包含する
が、これらに限らない。 抗原に対するＴ細胞クローンの応答についてのアッセイ（特に、増殖およびサ
イトカイン産生を測定することによりＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用ならびに直接的な
Ｔ細胞の効果を同定する）は、Current Protocols in Immunology, Ed by J. E.
Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W Strober, Pub.
Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter 3, In Vitro
assays for Mouse Lymphocyte Function; Chapter 6, Cytokines and their ce
llular receptors; Chapter 7, Immunologic studies in Humans); Weinberger
et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:6091-6095, 1980; Weinberger et al.
, Eur. J. Immun. 11:405-411, 1981; Takai et al., J. Immunol. 137:3494-35
00, 1986; Takai et al., J. Immunol. 140:508-512, 1988に記載されたものを
包含するが、これらに限らない。
【００３２】 免疫刺激または抑制活性 また本発明蛋白は、本明細書記載のアッセイにおける活性（これらに限らない
）を包含する免疫刺激または免疫抑制活性を示すものであってもよい。蛋白は、
種々の欠乏症および障害（重症の免疫欠乏合併症（ＳＣＩＤ）を包含）において
有用である可能性があり、例えば、Ｔおよび／またはＢリンパ球の増殖をアップ
レギュレーションまたはダウンレギュレーションすることにおいて、ならびにＮ
Ｋ細胞および他の細胞集団の細胞溶解活性を有効ならしめることにおいて有用で
ありうる。これらの免疫欠乏症は遺伝的なものであってもよく、またウイルス（
例えば、ＨＩＶ）ならびに細菌または真菌感染により引き起こされるものであっ
てもよく、あるいは自己免疫疾患により引き起こされるものであってもよい。よ
り詳細には、ウイルス、細菌、真菌または他の感染物質により引き起こされる感
染性疾患、例えば、ＨＩＶ、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、ミコバクテリア
、レシュマニア、マラリアおよびカンジダ種のごとき種々の真菌感染症を、本発
明蛋白を用いて治療可能である。もちろん、この点において、免疫系に対するブ
ーストが必要な場合、すなわち、癌の治療において、本発明蛋白を用いてよい。 本発明蛋白を用いて治療してもよい自己免疫疾患は、例えば、多発性硬化症、
全身性の深在性エリトマーデス、リューマチ性関節炎、自己免疫性肺炎、 Guillain-Barre症候群、自己免疫性甲状腺炎、インスリン依存性糖尿病、重症筋
無力症、対宿主移植片疾患および自己免疫性の炎症性の目の疾患を包含する。本
発明のかかる蛋白を、喘息または他の呼吸器系の疾患のごときアレルギー性反応
および症状の治療に用いてもよい。免疫抑制が望まれる他の症状（例えば、喘息
（特にアレルギー性喘息）および関連呼吸器系の問題を包含）を本発明蛋白を用
いて治療してもよい。免疫抑制が望まれる他の状態（例えば、器官移植を包含）
を、本発明蛋白を用いて治療してもよい。 本発明蛋白を用いて、多くのやり方で免疫応答を可能にすることもできる。ダ
ウンレギュレーションは、すでに進行中の免疫応答を阻害またはブロックする形
態のものであってもよく、あるいは免疫応答の誘導を妨害することを含むもので
あってもよい。Ｔ細胞応答を抑制することにより、あるいはＴ細胞中に特異的な
耐性を誘導することにより、あるいはその両方により活性化Ｔ細胞の機能を阻害
してもよい。一般的には、Ｔ細胞応答の免疫抑制は活性のある、非抗原特異的な
プロセスであり、Ｔ細胞を抑制剤に連続的に曝露することを必要とする。耐性と
は、Ｔ細胞における非応答性またはアネルギーを意味し、一般的には抗原特異的
であり耐性化剤への曝露を止めた後も持続するという点で免疫抑制とは異なる。
操作上は、耐性化剤の不存在下で特異的抗原に曝露した際のＴ細胞応答の欠如に
より耐性が示されうる。 １またはそれ以上の抗原機能（Ｂリンパ球抗原機能（例えばＢ７のごとき）を
包含するが、これに限らない）をダウンレギュレーションすることまたは妨害す
ること、例えば、活性化Ｔ細胞による高レベルのリンホカイン合成の妨害は、組
織、皮膚および器官の移植および対宿主移植片疾患（ＧＶＨＤ）において有用で
あろう。例えば、Ｔ細胞機能のブロックは組織移植における組織破壊を減少させ
るはずである。典型的には、組織移植において、移植片の拒絶反応は、組織片が
Ｔ細胞により外来のものと認識されることにより開始され、次いで、移植片を破
壊する免疫反応が起こる。免疫細胞上でのＢ７リンパ球抗原とその本来的なリガ
ンドとの相互作用を阻害またはブロックする分子（別のＢリンパ球抗原（例えば
、Ｂ７−１、Ｂ７−３）の活性を有するモノマー形態のペプチドと混合された、
あるいは単独の、Ｂ７−２活性を有する可溶性でモノマー形態のペプチド）の移
植前の投与は、応答的な同時刺激シグナルを伝達することなく免疫細胞上の本来
のリガンドへの分子の結合を誘導する可能性がある。この点においてＢリンパ球
抗原機能をブロックすることは、Ｔ細胞のごとき免疫細胞によるサイトカイン合
成を妨害し、かくして、免疫抑制剤として作用する。そのうえ、同時刺激の欠如
はＴ細胞の反応を失わせるのに十分でありうる。Ｂリンパ球抗原ブロッキング試
薬による長期の耐性の誘導により、これらのブロッキング試薬の繰り返し投与の
必要性が回避されうる。対象において十分な免疫抑制または耐性を達成するため
には、Ｂリンパ球抗原の組み合わせの機能をブロックすることも必要かもしれな
い。 器官移植拒絶反応またはＧＶＨＤを妨害することにおける個々のブロッキング
試薬の有効性を、ヒトにおける有効性を推定しうる動物モデルを用いて評価する
ことができる。使用可能な適当な系の例は、ラットにおける同種心臓移植片およ
びマウスにおける異種膵臓島細胞移植片を包含し、それらは両方ともインビボで
のＣＴＬＡ４Ｉｇ融合蛋白の免疫抑制効果を試験するために使用された（Lensch
ow et al., Science 257:789-792 (1992)およびTurka et al., Proc Natl. Acad
. Sci. USA, 89:11102-11105 (1992)に記載されている）。さらに、ＧＶＨＤの
ネズミモデル（Paul ed., Fundamental Immunology, Ravan Press, New York, 1
989, pp.846-847参照）を用いて、インビボでの当該疾患の進行に対するＢリン
パ球抗原機能のブロッキング効果を決定することができる。 また、抗原機能をブロックすることは自己免疫疾患の治療にとり治療的に有用
でありうる。多くの自己免疫疾患は、自己組織に対して反応性があり、疾病の病
理に関与するサイトカインおよび自己抗体の産生を促進するＴ細胞の不適当な活
性化の結果である。自己反応性Ｔ細胞の活性化を妨害することは疾病の徴候を減
少または除去しうる。Ｂリンパ球抗原の受容体：リガンド相互作用を破壊するこ
とによりＴ細胞の同時刺激をブロックする試薬の投与を用いてＴ細胞活性化を阻
害し、疾病プロセスに関与しうる自己抗体またはＴ細胞由来のサイトカインの産
生を妨害することができる。さらに、ブロッキング試薬は、疾病の長期の寛解を
導く可能性のある自己反応性Ｔ細胞の抗原特異的耐性を誘導しうる。自己免疫疾
患の予防または改善におけるブロッキング試薬の有効性を、ヒトの自己免疫疾患
についての十分に特徴づけられた多くの動物モデルを用いて決定することができ
る。例は、ネズミの実験的自己免疫脳炎、ＭＲＬｌｐｒ／ｌｐｒマウスまたはＮ
ＺＢハイブリッドマウスにおける全身性深在性エリトマトーデス、ネズミ自己免
疫コラーゲン関節炎、ＮＯＤマウスおよびＢＢラットにおける糖尿病、およびネ
ズミの実験的重症筋無力症（Paul ed., Fundamental Immunology, Raven Press,
New York, 1989, pp.840-856）を包含する。 免疫応答をアップレギュレーションするための手段としての抗原機能（好まし
くは、Ｂリンパ球抗原機能）のアップレギュレーションは治療に有用でもある。
免疫応答のアップレギュレーションは存在している免疫応答を促進する形態また
は最初の免疫応答を除去する形態であってよい。例えば、Ｂリンパ球抗原機能を
刺激することによる免疫応答の促進は、ウイルス感染の場合に有用でありうる。
さらに、インフルエンザ、通常のかぜ、および脳炎のごとき全身的なウイルス性
疾患を、刺激性形態のＢリンパ球抗原を全身投与することにより改善してもよい
。 別法として、Ｔ細胞を患者から取り、本発明ペプチドを発現するＡＣＰｓを付
加したウイルス抗原とともにインビトロにおいてＴ細胞を同時刺激するか、また
は刺激性形態の本発明可溶性ペプチドと一緒にし、次いで、インビトロで活性化
されたＴ細胞を患者体内に再導入することにより、感染患者における抗ウイルス
免疫応答を促進してもよい。抗ウイルス免疫応答を促進するもう１つの方法は、
感染細胞を患者から取り、本明細書記載の本発明蛋白をコードする核酸をそれら
にトランスフェクションして細胞がその表面に蛋白全体または一部を発現するよ
うにし、次いで、トランスフェクション細胞を患者体内に再導入することであろ
う。すると、感染細胞はインビボにおいて同時刺激シグナルをＴ細胞に伝えるこ
とができ、そのことによりＴ細胞を活性化することができよう。 もう１つの適用例において、抗原機能（好ましくは、Ｂリンパ球抗原機能）の
アップレギュレーションまたは促進は腫瘍免疫性の誘導において有用でありうる
。本発明の少なくとも１種のペプチドをコードする核酸でトランスフェクション
された腫瘍細胞（例えば、肉腫、黒色腫、リンパ腫、白血病、神経芽細胞腫、癌
腫）を対象に投与して対象中の腫瘍特異的耐性を克服することができる。所望な
らば、腫瘍細胞をトランスフェクションしてペプチドの組み合わせを発現させる
ことができる。例えば、患者から得た腫瘍細胞を、Ｂ７−２様活性を有するペプ
チドのみ、またはＢ７−１様活性および／またはＢ７−３様活性を有するペプチ
ドと組み合わせて発現することを指令する発現ベクターで、エクスビボにおいて
トランスフェクションすることができる。トランスフェクションされた腫瘍細胞
を患者に戻して、トランスフェクションされた細胞の表面上にペプチドを発現さ
せる。別法として、遺伝子治療法を用いてインビボでのトランスフェクションの
ために腫瘍細胞を標的化することができる。 腫瘍細胞表面上におけるＢリンパ球抗原の活性を有する本発明ペプチドの存在
は、Ｔ細胞に必要な同時刺激シグナルを提供して、Ｔ細胞により媒介されるトラ
ンスフェクションされた腫瘍細胞に対する免疫応答を誘導する。さらに、ＭＨＣ
クラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ分子を欠く腫瘍細胞、あるいは十分量のＭＨＣ
クラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩ分子を再発現できない腫瘍細胞を、ＭＨＣクラ
スＩα鎖蛋白およびβ2マイクログロブリン蛋白またはＭＨＣクラスＩＩα鎖お
よびＭＨＣクラスＩＩβ鎖蛋白の全体または一部（例えば、末端切断蛋白の細胞
質ドメイン）をコードしている核酸でトランスフェクションして、そのことによ
りクラスＩまたはクラスＩＩＭＨＣ蛋白を細胞表面上に発現させることができる
。Ｂリンパ球抗原（例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−３）の活性を有するペ
プチドと組み合わせた適当なクラスＩまたはクラスＩＩ ＨＭＣの発現は、Ｔ細
胞により媒介されるトランスフェクションされた腫瘍細胞に対する免疫応答を誘
導する。所望により、不変鎖のごとき、ＭＨＣクラスＩＩ結合蛋白の発現をブロ
ックするアンチセンス構築物をコードしている遺伝子を、Ｂリンパ球抗原の活性
を有するペプチドをコードしているＤＮＡとともに同時トランスフェクションし
て腫瘍関連抗原の提示を促進し、腫瘍特異的免疫性を誘導こともできる。よって
、ヒト対象におけるＴ細胞により媒介される免疫応答の誘導は、対象における腫
瘍特異的耐性を克服するに十分でありうる。
【００３３】 本発明蛋白の活性を、特に、下記方法により測定してもよい： 胸腺細胞または脾臓細胞の細胞毒性に適したアッセイは、Current Protocols
in Immunology, Ed by J. E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M.
Shevach, W Strober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Intersc
ience (Chapter 3, In Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19
; Chapter 7, Immunologic studies in Humans); Herrmann et al., Proc. Natl
. Acad. Sci. USA 78: 2488-2492, 1981; Herrmann et al., J. Immunol. 128:
1968-1974, 1982; Handa et al., J. Immunol. 135: 1564-1572, 1985; Takai e
t al., J. Immunol. 137: 3494-3500, 1986; Takai et al., J. Immunol. 140:
508-512, 1988; Herrmann et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78: 2488-2492
, 1981; Herrmann et al., J. Immunol. 128: 1968-1974, 1982; Handa et al.,
J. Immunol. 135: 1564-1572, 1985; Takai et al., J. Immunol. 137: 3494-3
500, 1986; Bowmanet al., J. Virology 61: 1992-1998; Takai et al., J. Imm
unol. 140: 508-512, 1988; Bertagnolli et al., Cellular Immunology 133: 3
27-341, 1991; Brown et al., J. Immunol. 153: 3079-3092, 1994に記載された
アッセイを包含するが、これらに限らない。 Ｔ細胞依存性免疫グロブリン応答およびイソタイプスイッチングのためのアッ
セイ（特に、Ｔ細胞依存性抗体応答を転調させ、Ｔｈ１／Ｔｈ２プロフィールに
影響する蛋白を同定する）は、Maliazewski,J.Immunol.144:3028-3033,1990に記
載されているアッセイを包含するが、これに限らず、さらにＢ細胞の機能のアッ
セイは、In vitro antibody production,Mond,J.J.and Brunswick,M.In Current
Protocols in Immunology J.E.Coligan eds.Val 1 pp.3.8.1-3.8.16,John Wile
y and Sons,Tronto 1994に記載のアッセイを包含する。 混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（特に、主としてＴｈ１およひＣＴＬ応
答を発生させる蛋白を同定する）は、Current Protocols in Immunology, Ed by
J. E. Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W Strober,
Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter 3, In
Vitro assays for Mouse Lymphocyte Function 3.1-3.19; Chapter 7, Immunol
ogic studies in Humans); Takai et al., J. Immunol. 137: 3494-3500, 1986;
Takai et al., J. Immunol. 140: 508-512, 1988; Bertagnolli et al., J. Im
munol. 149: 3778-3783, 1992に記載されたアッセイを包含するが、これらに限
らない。 樹枝状細胞依存的アッセイ（特に、無処理のＴ細胞を活性化する樹枝状細胞に
より発現される蛋白を同定する）は、Guery et al., J. Immunol. 134: 536-544
, 1995; Inaba et al., Journal of Experimental Medicine 173: 549-559, 199
1; Macatonia et al., Journal of Immunology 154: 5071-5079, 1995; Porgado
r et al., Journal of Experimental Medicine 182: 255-260, 1995; Nair et a
l., Journal of Virology 67: 4062-4069, 1993; Huang et al., Science 264:
961-965, 1994; Macatonia et al., Journal of Experimental Medicine 169:
1255-1264, 1989; Bhardwaj et al., Journal of Clinical Investigation 94:
797-807, 1994; and Inaba et al., Journal of Experimental Medicine 172:
631-640, 1990 に記載されたアッセイを包含するが、これらに限らない。 リンパ球生存／アポトーシスのアッセイ（特に、超抗体誘導後のアポトーシス
を防止する蛋白、ならびにリンパ球のホメオスタシスを調節する蛋白を同定する
）は、Darzynkiewicz et al., Cytometry 13: 795-808, 1992; Gorczyca et al.
, Leukemia 7: 659-670, 1993; Gorczyca et al., Cancer Research 53: 1945-1
951, 1993; Itoh et al., Cell 66: 233-243, 1991; Zacharchuk, Journal of I
mmunology 145: 4037-4045, 1990; Zamai et al., Cytometry 14: 891-897, 199
3; Gorczyca et al., International Journal of Oncology 1: 639-648, 1992に
記載のアッセイを包含するが、これらに限らない。 初期段階のＴ細胞のコミットメント（commitment）および発達のアッセイは、
Antica et al.,Blood 84: 111-117,1994; Fine et al.,Cellular Immunology 15
5: 111-122, 1994; Galy et al.,Blood 85: 2770-2778, 1995; Toki et al., Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 7548-7551, 1991に記載のアッセイを包含するが
、これらに限らない。
【００３４】 造血調節活性 本発明蛋白は、造血の調節において有用であり、それゆえ、骨髄およびリンパ
球欠乏症の治療において有用である。コロニー形成細胞または因子依存性細胞系
を支持する最低限の生物学的活性でさえも、造血の調節への関与を示している。
例えば、赤血球系前駆細胞のみの増殖を支持すること、あるいは他のサイトカイ
ンと組み合わされて、例えば種々の貧血の治療に有用性を示すこと、あるいは放
射線療法／化学療法と組み合わされて赤芽前駆細胞および／または赤芽細胞の産
生を刺激すること；顆粒球のごとき骨髄細胞および単球／マクロファージの増殖
を支持すること（すなわち、伝統的なＣＳＦ活性）、例えば、化学療法と組み合
わされて、引き続き起こる骨髄抑制を防止することに有用であり；巨核細胞の増
殖、次いで、血小板の増殖を支持すること、またそれにより血小板減少症のごと
き種々の血小板疾患を予防または治療することに有用であり、また一般的には血
小板輸液の代わりにあるいはそれと相補的に使用され；さらに／あるいは造血幹
細胞（成熟して上記のすべての造血細胞となり、それゆえ、種々の幹細胞疾患（
通常には、移植により治療される疾患であり、例えば、再生不良性貧血および発
作性の夜間ヘモグロビン尿症）において有用性がわかる）の増殖を支持すること
に有用であり、さらにはインビボまたはエクスビボでの放射線／化学療法後（す
なわち、骨髄移植と組み合わされる）、あるいは遺伝子治療のために遺伝子操作
された後の幹細胞コンパートメントの正常細胞としての再増殖においても有用で
ある。 本発明蛋白の活性を、特に、下記方法測定してもよい。 種々の造血細胞系の増殖および分化に適したアッセイはすでに引用されている
。 胚の幹細胞の分化のアッセイ（特に、胚の分化造血に影響する蛋白を同定する
）は、Johansson et al. Cellular Biology 15: 141-151, 1995; Keller et al.
, Molecular and Cellular Biology 13: 473-486, 1993; McClanahan et al., B
lood 81: 2903-2915, 1993に記載のアッセイを包含するが、これらに限らない。 幹細胞生存および分化のアッセイ（特に、リンパ−造血を調節する蛋白を同定
する）は、Methylcellulose colony forming assays, Freshney, M.G. In Cultu
re of Hematopoietic Cells. R.I. Freshney, et al. eds. Vol pp. 265-268,
Wiley-Liss, Inc., New York, NY. 1994; Hirayama et al., Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 89: 5907-5911, 1992; Primitive hematopoietic colony forming ce
lls with high proliferative potential, McNiece, I.K. and Briddell, R.A.
In Culture of Hematopoietic Cells. R.I. Freshney, et al. eds. Vol pp. 2
3-39, Wiley-Liss, Inc., New York, NY. 1994; Neben et al., Experimental H
ematology 22: 353-359, 1994; Cobblestone area forming cell assay, Ploema
cher, R.E. In Culture of Hematopoietic Cells. R.I. Freshney, et al. eds.
Vol pp. 1-21, Wiley-Liss, Inc.., New York, NY. 1994; Long term bone ma
rrow cultures in the presence of stromal cells, Spooncer, E., Dexter, M.
and Allen, T. In Culture of Hematopoietic Cells. R.I. Freshney, et al.
eds. Vol pp. 163-179, Wiley-Liss, Inc., New York, NY. 1994; Long term c
ulture initiating cell assay, Sutherland, H.J. In Culture of Hematopoiet
ic Cells. R.I. Freshney, et al. eds. Vol pp. 139-162, Wiley-Liss, Inc.,
New York, NY. 1994に記載されたアッセイを包含するが、これらに限らない。
【００３５】 組織増殖活性 本発明蛋白は、骨、軟骨、鍵、靭帯および／または神経組織の成長または再生
、ならびに傷の治癒および組織修復に用いる組成物において、さらに熱傷、裂傷
および潰瘍の治療において有用性を有する。 骨が正常に形成されない環境において軟骨および／または骨の成長誘導する本
発明蛋白は、ヒトおよび他の動物における骨折および軟骨損傷または欠損の治癒
における用途がある。本発明蛋白を用いるかかる調合物は、閉鎖性骨折ならびに
解放性骨折の軽減に有用であり、また人工関節の固定の改善にも有用である。骨
形成剤により誘導されるデノボ骨形成は、先天性の、外傷による、あるいは腫瘍
学的切除により誘発される脳顔面頭蓋の欠損の修復に貢献し、さらに美容整形外
科手術においても有用である。 本発明蛋白を歯周病の治療および他の歯の修復プロセスに用いてもよい。かか
る作用剤は、骨形成細胞を誘引する環境を提供し、骨形成細胞の増殖を刺激し、
あるいは骨形成細胞前駆体の分化を誘導しうる。本発明蛋白は、例えば、骨およ
び／または軟骨修復の刺激により、あるいは炎症または炎症プロセスにより媒介
される組織破壊のプロセス（コラゲナーゼ活性、破骨細胞活性等）をブロックす
ることにより、骨粗鬆症または骨関節炎の治療においても有用でありうる。 本発明蛋白によるものとしてもよい組織発生活性のもう１つのカテゴリーは鍵
／靭帯の形成である。鍵／靭帯様組織または他の組織が正常に形成されない環境
におけるかかる組織の形成を誘導する本発明蛋白は、ヒトおよび他の動物におけ
る鍵または靭帯の裂傷、変形および他の鍵または靭帯の欠損の治癒、に適用され
る。鍵／靭帯様組織誘導蛋白を用いるかかる調合物は、鍵または靭帯組織に対す
るダメージの予防ならびに鍵または靭帯の骨または他の組織への固定の改善に用
いてもよい。本発明組成物により誘導されるデノボ鍵／靭帯様組織形成は、先天
性の、外傷による、あるいは腫瘍学的切除により誘発される脳顔面頭蓋の欠損の
修復に貢献し、さらに鍵または靭帯の付着または修復のための美容整形外科手術
においても有用である。本発明組成物は、鍵−または靭帯−形成細胞を誘引する
ための環境を提供し、鍵−または靭帯−形成細胞の増殖を刺激し、鍵−または靭
帯−形成細胞の前駆体の分化を誘導し、あるいはインビボに戻した場合に組織修
復を行うようにエクスビボでの鍵／靭帯細胞または前駆体の増殖を誘導しうる。
本発明組成物は、鍵炎、手根骨トンネル症候群および他の鍵または靭帯の欠損に
も有用である。本発明組成物は、適当なマトリックスおよび／または当該分野で
よく知られた担体のごとき隔離剤を含んでいてもよい。 本発明蛋白は、神経細胞の増殖ならびに神経および脳組織の再生に、すなわち
、中枢および末梢神経系疾患およびニューロパシーならびに機械的疾患および外
傷性疾患（神経細胞または神経組織に対する変性、死もしくは外傷を包含）の治
療にも有用でありうる。より詳細には、末梢神経傷害、末梢ニューロパシーおよ
び局在化ニューロパシーのごとき末梢神経系の疾病、ならびにアルツハイマー病
、パーキンソン病、ハンチントン病、筋委縮性外側脊髄硬化症およびShy-Drager
症候群のごとき中枢神経系の疾病の治療に蛋白を使用してもよい。本発明により
治療してもよいさらなる症状は、脊髄疾患のごとき機械的疾患および外傷性疾患
、頭部外傷ならびに卒中のごとき脳血管系の疾患を包含する。化学療法または他
の医学的療法により引き起こされる末梢ニューロパシーは、本発明蛋白を用いて
治療可能である。 また本発明蛋白は、圧迫性潰瘍、血管機能不全に関連した潰瘍、外科的および
外傷による創傷等（これらに限らない）を包含する非治癒性創傷のより好ましく
迅速な閉口の促進にも有用でありうる。 また本発明蛋白は、器官（例えば、膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内皮を包含
）、筋肉（平滑筋、骨格筋または心筋）、および血管（血管内皮を包含）組織の
ごとき他の組織の発生、あるいはかかる組織を構成している細胞の増殖促進のた
めの活性を示しうる。望ましい効果の一部は、線維症性瘢痕を抑制することによ
る正常組織の再生であってもよい。本発明蛋白は脈管形成活性も示しうる。 本発明蛋白は、腸の保護または再生、および肺または肝臓の線維症、種々の組
織の再灌流傷害、および全身的なサイトカインのダメージにより生じる症状の治
療にも有用でありうる。 本発明蛋白は、前駆体組織または細胞からの上記組織の分化促進または抑制；
あるいは上記組織の増殖抑制にも有用でありうる。 本発明蛋白の活性は、とりわけ、以下の方法により測定してもよい： 組織再生活性のアッセイは、国際公開ＷＯ９５／１６０３５（骨、軟骨、鍵）
；国際公開ＷＯ９５／０５８４６（神経、ニューロン）；国際公開ＷＯ９１／０
７４９１（皮膚、内皮）に記載されたアッセイを包含するが、これらに限らない
。 創傷治癒活性のアッセイは、Winter, Epidermal Wound Healing, pps. 71-112
(Maibach, HI and Rovee, DT, eds.), Year Book Medical Publishers, Inc.,
Chicago（Eaglstein and Mertz, J. Invest. Dermatol 71: 382-384 (1978)によ
り修飾されている）に記載されたものを包含するが、これらに限らない。
【００３６】 アクチビン／インヒビン活性 また、本発明蛋白はアクチビン−またはインヒビン−関連活性を示しうる。イ
ンヒビン類は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出抑制能により特徴づけられ、
アクチビン類は、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出刺激能により特徴づけられ
る。よって、本発明蛋白は、単独であるいはインヒビンαファミリーのメンバー
とのヘテロダイマーの形態で、メスの哺乳動物の繁殖力を減少させ、オスの哺乳
動物の精子形成減少させるインヒビンの能力に基づく不妊薬として有用でありう
る。十分な量の他のインヒビンの投与により、これらの哺乳動物において不妊を
誘導することができる。別法として、本発明蛋白は、ホモダイマーとしてあるい
はインヒビン−βグループの他の蛋白のサブユニットとのヘテロダイマーとして
、下垂体前葉細胞からのＦＳＨ放出の刺激におけるアクチビン分子の能力に基づ
いて、繁殖力を誘導する治療薬として有用でありうる。例えば、米国特許第４７
９８８８５号参照。また本発明蛋白は、性的に未成熟な哺乳動物における繁殖の
向上に有用である可能性があり、その結果、ウシ、ヒツジおよびブタのごとき家
畜の生存期間中の繁殖力が増大する。 本発明蛋白の活性は、とりわけ、下記方法により測定してもよい： アクチビン／インヒビン活性のアッセイは、Vale et al., Endocrinology 91:
562-572, 1972; Ling et al., Nature 321: 779-782, 1986; Vale et al., Nat
ure 321: 776-779, 1986; Mason et al., Nature 318: 659-663,1985; Forage e
t al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 3091-3095,1986に記載のアッセイを包
含するが、これらに限らない。
【００３７】 化学走性／ケモキネシス活性 本発明蛋白は、哺乳動物細胞、例えば単球、好中球、Ｔ細胞、肥満細胞、好酸
球および／または内皮細胞の化学走性またはケモキネシス活性（例えば、ケモカ
インとして作用）を有する可能性がある。化学走性およびケモキネシス蛋白を用
いて所望細胞集団を所望作用部位に動員または誘引することができる。化学走性
またはケモキネシス蛋白は、組織に対する傷害および他の外傷の治療ならびに局
所的な感染の治療に特に有利である。例えば、リンパ球、単球または好中球の腫
瘍または感染部位への誘引は、腫瘍または感染因子に対する免疫応答を改善しう
る。 特定の蛋白またはペプチドは特定の細胞集団に対して化学走性活性を有してお
り、刺激可能な場合には、直接的または間接的にかかる細胞集団の方向または運
動を指令する。好ましくは、蛋白またはペプチドは、細胞の方向づけられた運動
を直接的に刺激する能力を有する。特定の蛋白が細胞集団に対する化学走性活性
を有するかどうかを、かかる蛋白またはペプチドを細胞化学走性の既知アッセイ
に用いることにより容易に決定することができる。 本発明蛋白の活性は、とりわけ、下記方法により測定してもよい： 化学走性活性のアッセイ（化学走性を誘導または妨害する蛋白を同定するアッ
セイ）は、細胞の膜を越えた移動を誘導する蛋白の能力ならびに１の細胞集団の
他の細胞集団への付着を誘導する蛋白の能力を測定するアッセイを含む。移動お
よび付着に適したアッセイは、Current Protocols in Immunology, Ed by J.E.
Coligan, A.M. Kruisbeek, D.H. Margulies, E.M. Shevach, W.Strober, Pub. G
reene Publishing Associates and Wiley-Interscience (Chapter 6.12, Measur
ement of alpha and beta Chemokines 6.12.1-6.12.28; Taub et al. J. Clin.
Invest. 95: 1370-1376, 1995; Lind et al. APMIS 103: 140-146, 1995; Mulle
r et al Eur. J. Immunol. 25: 1744-1748; Gruber et al. J. of Immunol. 152
: 5860-5867, 1994; Johnston et al. J. of Immunol. 153: 1762-1768, 1994に
記載のアッセイを包含するが、これらに限らない。
【００３８】 止血および血栓溶解活性 また、本発明蛋白は、止血または血栓溶解活性を示す可能性がある。結果とし
て、かかる蛋白は、種々の凝血疾患（血友病のごとき遺伝性疾患を包含）の治療
に有用であり、あるいは外傷、手術または他の原因により生じた傷害の治療にお
ける凝血および他の止血を促進しうる。本発明蛋白は、血栓の溶解または血栓形
成阻害ならびにそれらにより生じる症状（例えば、心筋梗塞および中枢神経系血
管の梗塞（例えば、卒中）のごとき）の治療および予防に有用でありうる。 本発明蛋白の活性を、とりわけ、下記方法により測定してもよい： 止血および血栓溶解活性のアッセイは、Linet et al., J. Clin. Pharmacol.
26: 131-140,1986; Burdick et al., Thrombosis Res. 45: 413-419, 1987; Hum
phrey et al., Fibrinolysis 5: 71-79 (1991); Schaub, Prostaglandins 35: 4
67-474, 1988に記載のアッセイを包含するが、これらに限らない。
【００３９】 受容体／リガンド活性 また、本発明蛋白は、受容体、受容体リガンドまたは受容体／リガンド相互作
用の阻害剤もしくはアゴニストとしての活性を示しうる。かかる受容体およびリ
ガンドの例は、サイトカイン受容体およびそれらのリガンド、受容体キナーゼお
よびそれらのリガンド、受容体ホスファターゼおよびそれらのリガンド、細胞−
細胞相互作用に関与する受容体およびそれらのリガンド（細胞付着分子（セレク
チン、インテグリンおよびそれらのリガンドのごとき）ならびに抗原提示、抗原
認識、細胞性および体液性免疫応答の発生に関与する受容体／リガンド対などを
包含）を包含するがこれらに限らない。受容体およびリガンドは、関連する受容
体／リガンド相互作用に対する潜在的なペプチドまたは小型分子阻害剤のスクリ
ーニングにも有用である。本発明蛋白（受容体およびリガンドのフラグメントを
包含するが、これらに限らない）は、それ自体、受容体／リガンド相互作用の阻
害剤として有用でありうる。 本発明蛋白の活性を、とりわけ、下記方法により測定してもよい： 受容体−リガンド活性の適当なアッセイは、Current Protocols in Immunolog
y, Ed by J. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach,
W. Strober, Pub. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience (C
hapter 7.28, Measurement of Cellular Adhesion under static conditions 7.
28.1-7.28.22), Takai et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 6864-6868, 1
987; Bierer et al., J. Exp. Med. 168: 1145-1156, 1988; Rosenstein et al.
, J. Exp. Med. 169: 149-160 1989; Stoltenborg et al., J. Immunol. Metho
ds 175: 59-68, 1994; Stitt et al., Cell 80: 661-670, 1995に記載のアッセ
イを包含するが、これらに限らない。
【００４０】 抗炎症活性 本発明蛋白は抗炎症活性を示しうる。抗炎症活性は、刺激応答に関与している
細胞に刺激を与えることにより、細胞−細胞相互作用（例えば、付着のごとき）
を阻害または促進することにより、炎症プロセスに関与している細胞の化学走性
を阻害または促進することにより、細胞溢出を阻害または促進することにより、
あるいは炎症応答をより直接的に阻害または促進する他の因子の産生を刺激また
は抑制することにより発揮される。かかる活性を示す蛋白を用いて炎症の症状（
慢性もしくは急性症状を包含、感染に関連した炎症（敗血性ショック、敗血症も
しくは全身性炎症応答症候群（ＳＩＲＳ）のごとき）、虚血−再潅流傷害、エン
ドトキシンによる致命的傷害、関節炎、補体により媒介される超急性拒否反応、
腎炎、サイトカインもしくはケモカインにより誘導される肺の傷害、炎症性腸疾
患、クローン病またはＴＮＦもしくはＩＬ−１のごときサイトカインの過剰産生
から生じる疾病を包含するがこれらに限らない）を治療することができる。本発
明蛋白は、アナフィラキシーおよび抗原性物質もしくは材料に対する過敏症の治
療にも有用でありうる。
【００４１】 カドヘリン／腫瘍侵入抑制活性 カドヘリン（cadherin）はカルシウム依存性付着分子であり、発達中において
、詳細には特定の細胞タイプを決定することにおいて主要な役割を果たしている
と思われる。正常なカドヘリン発現の損失または変化は、腫瘍増殖および転移に
関連した細胞付着特性への変化を誘導しうる。カドヘリンの機能失調は、尋常性
天疱瘡および落葉状天疱瘡（自己免疫性の皮膚水泡疾患）、クローン病、および
いくつかの発達異常のごときヒトの他の疾病にも関与している。 カドヘリンスーパーファミリーは４０余りのメンバーを包含し、それぞれが異
なる発現パターンを有している。当該スーパーファミリーのすべてのメンバーは
、共通の保存された細胞外リピート（カドヘリンドメイン）を有するが、分子の
他の部分において構造の相違が見られる。カドヘリンドメインはカルシウムに結
合してそれらの三次構造を形成するので、カルシウムはそれらの付着に必要であ
る。第１のカドヘリンドメインにおける少数のアミノ酸は同種親和性付着のため
の基礎を提供するので、この認識部位の修飾はカドヘリンの特異性を変化させる
可能性があり、その結果、自分自身だけを認識するのではなく、変異分子も異な
るカドヘリンに結合できるようになる。さらに、いくつかのカドヘリンは他のカ
ドヘリンとの異種親和性付着にも関与している。 カドヘリンスーパーファミリーのメンバーの１つであるＥ−カドヘリンは上皮
細胞タイプにおいて発現される。病理学的には、Ｅ−カドヘリン発現が腫瘍にお
いて失われる場合、悪性細胞は侵入性となり、癌が転移する。Ｅ−カドヘドリン
を発現するポリヌクレオチドを癌細胞系にトランスフェクションすることは、変
化した細胞形態を元に戻し、細胞相互および他の基質への付着性を回復させ、細
胞増殖速度を低下させ、足場依存性細胞の増殖を劇的に減少させることにより、
癌に関連した変化を回復させた。よって、Ｅ−カドヘドリン発現を再導入するこ
とは、癌腫をより進行していない段階に戻す。他のカドヘドリンも、他の組織タ
イプ由来の癌腫において同じ侵入抑制的役割を有している可能性がある。それゆ
え、カドヘドリン活性を有する本発明蛋白、およびかかる蛋白をコードする本発
明ポリヌクレオチドを用いて癌を治療することができる。かかる蛋白またはポリ
ヌクレオチドを癌細胞に導入することは、正常なカドヘドリン発現を提供するこ
とにより、これらの細胞において観察される癌性の変化を減少または除去しうる
。 癌細胞は、本来のものとは異なる組織タイプのカドヘリンを発現することも知
られており、それゆえこれらの癌細胞は異なる組織に侵入でき、転移できる。カ
ドヘリン活性を有する本発明蛋白、およびかかる蛋白をコードする本発明ポリヌ
クレオチドは、これらの細胞において不適切に発現されたカドヘドリンと置換し
、正常な細胞付着特性を回復させ、細胞の転移傾向を減少させ、あるいは除去し
うる。 さらに、カドヘリン活性を有する本発明蛋白、およびかかる蛋白をコードする
本発明ポリヌクレオチドを用いてカドヘリンを認識しこれに結合するする抗体を
得ることもできる。かかる抗体を用いて不適切に発現された腫瘍細胞カドヘドリ
ンの付着をブロックし、細胞が他の場所で腫瘍を形成しないようにすることもで
きる。かかる抗−カドヘドリン抗体を、癌の等級、病理学的タイプ、および予後
のためのマーカーとして使用できる。すなわち、癌が進行すると、カドヘドリン
発現は低下し、カドヘドリン結合抗体を用いることによりこのカドヘドリン発現
の低下を検出することができる。 カドヘドリン活性を有する本発明蛋白のフラグメント、好ましくはカドヘドリ
ン認識部位のデカペプチド、およびかかる蛋白フラグメントをコードする本発明
ポリヌクレオチドを用いて、カドヘリンに結合させ、望ましくない効果を生じる
カドヘリンの結合を妨げることにより、カドヘリン機能をブロックすることもで
きる。さらに、カドヘリン活性を有する本発明蛋白のフラグメント、好ましくは
癌患者の循環系において安定であることがわかっている末端切断された可溶性カ
ドヘドリンフラグメント、およびかかる蛋白フラグメントをコードするポリヌク
レオチドを用いて正しい細胞−細胞付着を混乱させることもできる。 カドヘドリンの付着および侵入抑制活性のアッセイは、Hortsch et al. J Bio
l Chem 270 (32): 18809-18817, 1995; Miyaki et al. Oncogene 11: 2547-2552
, 1995; Ozawa et al. Cell 63: 1033-1038, 1990.に記載されたものを包含する
が、これらに限らない。
【００４２】 腫瘍阻害活性 腫瘍の免疫学的治療または予防に関する上記活性のほかに、本発明蛋白は他の
抗腫瘍活性を示しうる。ある蛋白は腫瘍増殖を直接的または間接的に（例えば、
ＡＤＣＣを介して）阻害しうる。ある蛋白は、腫瘍組織または腫瘍前駆体組織に
作用して、腫瘍増殖を支持するに必要な組織の形成を阻害し（例えば、脈管形成
を阻害することにより）、腫瘍増殖を阻害する他の因子、作用剤または細胞タイ
プの産生を引き起こすことにより、あるいは腫瘍増殖を促進する因子、作用剤ま
たは細胞タイプを除去または阻害することにより腫瘍阻害活性を示しうる。
【００４３】 他の活性 本発明蛋白は、下記のさらなる活性または効果の１つまたはそれ以上を示しう
る：細菌、ウイルス、真菌および他の寄生虫（これらに限らず）を包含する感染
性因子の殺傷；身長、体重、体毛の色、目の色、皮膚または他の組織の色素沈着
、または器官または身体部分のサイズまたは形態（例えば、豊胸またはその逆）
を包含する身体特性への影響（抑制または促進）；摂食した脂肪、蛋白または炭
水化物の消化への影響；食欲、性欲、ストレス、認識（認識の疾患を包含）、鬱
（鬱病性疾患を包含）および暴力的行為（これらに限らず）を包含する行動特性
への影響；鎮痛効果または他の痛み軽減効果の提供；造血系以外の系統における
胚の幹細胞の分化および増殖の促進；ホルモンまたは内分泌活性；酵素の場合、
酵素欠乏の修正および関連疾患の治療；過剰増殖性疾患（例えば、乾癬のごとき
）の治療；免疫グロブリン様活性（例えば、抗体または補体に結合する能力）；
ならびにワクチン組成物において抗原として作用してかかる蛋白またはかかる蛋
白と交差反応する他の物質もしくは存在に対する免疫応答を生じさせる能力。
【００４４】投与および用量 本発明蛋白（どのような源からであってもよく、組み換え法および非組み換え
法によるものを包含するが、これらに限らない）を、医薬上許容される担体と混
合して医薬組成物中に用いてもよい。かかる組成物は（蛋白および担体のほかに
）、希釈剤、充填剤、塩類、バッファー、安定化剤、可溶化剤、および当該分野
でよく知られた他の物質を含有していてもよい。用語「医薬上許容される」は、
有効成分の生物学的活性の有効性を妨害しない無毒の物質を意味する。担体の特
性は投与経路に依存する。本発明医薬組成物は、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｔ
ＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−
７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、
ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＦＮ、ＴＮＦ０、ＴＮＦ１、ＴＮＦ２、Ｇ−ＣＳＦ
、Ｍｅｇ−ＣＳＦ、スロンボポイエチン、幹細胞因子、およびエリスロポイエチ
ンのごときサイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子を含有していても
よい。医薬組成物はさらに、蛋白活性を増強し、あるいは治療においてその活性
または有用性を補う他の作用剤を含有していてもよい。かかるさらなる因子およ
び／または作用剤を医薬組成物に含有させて、本発明蛋白との相乗効果を発揮さ
せ、あるいは副作用を最小化してもよい。逆に、特定のサイトカイン、リンホカ
イン、他の造血因子、血栓溶解因子または抗血栓因子、または抗炎症剤の処方に
本発明蛋白を含有させて、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶
解因子または抗血栓因子、または抗炎症剤の副作用を最小化してもよい。 本発明蛋白は、多量体（例えば、ヘテロダイマーまたはホモダイマー）または
それ自体もしくは他の蛋白との複合体となって活性でありうる。結果的に、本発
明医薬組成物は、かかる多量体または複合体形態の本発明蛋白を含むものであっ
てもよい。 本発明医薬組成物は、本発明蛋白と蛋白もしくはペプチド抗原との複合体の形
態であってもよい。蛋白および／またはペプチド抗原は、Ｂリンパ球ならびにＴ
リンパ球に対して刺激シグナルを送達するであろう。Ｂリンパ球はその表面免疫
グロブリン受容体を通して抗原に応答するであろう。Ｔリンパ球は、ＭＨＣ蛋白
による抗原提示後、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を通して抗原に応答するであろう。
ＭＨＣならびに宿主細胞のクラスＩおよびクラスＩＩのＭＨＣ遺伝子によりコー
ドされたものを包含する構造上関連した蛋白は、Ｔリンパ球に対するペプチド抗
原の提示に役立つであろう。抗原成分は、精製ＭＨＣ−ペプチド複合体のみとし
て、または直接Ｔ細胞にシグナルを送ることのできる同時刺激分子とともに供給
されうる。あるいはまた、Ｂ細胞上の表面免疫グロブリンならびにＴ細胞上のＴ
ＣＲおよび他の分子に結合しうる抗体を、本発明医薬組成物と混合することもで
きる。 本発明医薬組成物はリポソーム形態であってもよく、その中で本発明蛋白はさ
らに他の医薬上許容される担体、脂質のごとき両親媒性作用剤（水溶液中でミセ
ルのような凝集体形態、不溶性単層、液状結晶またはラメラ層として存在）と混
合されている。リポソーム処方に適する脂質は、モノグリセリド、ジグリセリド
、スルファチジド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸等を包含するが
、これらに限らない。かかるリポソーム処方の製造は当業者のレベルの範囲内で
あり、例えば、米国特許第４２３５８７１、４５０１７２８、４８３７０２８、
および４７３７３２３号（参照によりそれらすべてを本明細書に記載されている
ものとみなす）に記載されたようなものである。
【００４５】 本明細書の用語「治療上有効量」とは、有意な患者の利益、例えば、かかる症
状の徴候の改善、治癒、治癒速度の増大を示すに十分な医薬組成物または方法の
各有効成分の合計量を意味する。単独で投与される個々の有効成分について用い
る場合、該用語は当該成分のみをいう。有効成分の組み合わせに用いる場合、逐
次投与あるいは同時投与にかかわらず治療効果を生じる有効成分量の合計量をい
う。 本発明の治療方法の実施において、治療上有効量の本発明蛋白を治療すべき症
状を有する哺乳動物に投与する。本発明方法に従って、単独またはサイトカイン
、リンホカインもしくは他の造血因子のごとき他の治療薬とともに本発明蛋白を
投与してもよい。１種またはそれ以上のサイトカイン、リンホカインまたは他の
造血因子と共投与する場合、本発明蛋白をサイトカイン、リンホカイン、他の造
血因子、血栓溶解因子もしくは抗血栓因子と同時または逐次投与してもよい。逐
次投与する場合、担当医師は、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血
栓溶解因子もしくは抗血栓因子と本発明蛋白との組み合わせにおける適切な投与
順序を決定するであろう。 本発明医薬組成物中または本発明の実施に用いる本発明蛋白の投与を種々の慣
用的方法、例えば、経口的摂食、吸入、または皮内、皮下、または静脈注射で行
うことができる。患者への静脈注射が好ましい。 治療上有効量の本発明蛋白を経口投与する場合、本発明蛋白は錠剤、カプセル
、粉末、溶液またはエリキシルの形態であろう。錠剤形態で投与する場合、本発
明医薬組成物はゼラチンのごとき固体担体またはアジュバントをさらに含有して
いてもよい。錠剤、カプセル、および粉末は、約５ないし９５％の本発明蛋白、
好ましくは約２５ないし９０％の本発明蛋白を含有する。液体形態で投与する場
合、水、ペトロレウム、動物または植物起源の油脂、例えばピーナッツ油、鉱油
、大豆油、またはゴマ油、または合成油脂を添加してもよい。液体形態の医薬組
成物は、生理食塩溶液、デキストロースまたは他の糖類溶液、またはグリコール
類（例えばエチレングリコール、プロピレングリコールもしくはポリエチレング
リコール）をさらに含有していてもよい。液体形態で投与する場合、医薬組成物
は、約０．５ないし９０重量％の本発明蛋白、好ましくは約１ないし５０％の本
発明蛋白を含有する。 治療上有効量の本発明蛋白を静脈、皮内または皮下注射により投与する場合、
本発明蛋白はパイロジェン不含で、非経口的に許容される水溶液の形態であろう
。適切なｐＨ、等張性、安定性を有するかかる非経口的に許容される蛋白溶液の
調製は、当業者の範囲内である。静脈、皮内、または皮下注射用の好ましい医薬
組成物は、本発明蛋白のほかに、注射用塩化ナトリウム、リンゲル溶液、注射用
デキストロース、注射用デキストロースおよび塩化ナトリウム溶液、注射用乳酸
含有リンゲル溶液、または当該分野で知られている他の担体を含有すべきである
。本発明医薬組成物は、安定化剤、保存料、バッファー、抗酸化剤、または当業
者に知られた他の添加物を含んでいてもよい。 本発明医薬組成物中の本発明蛋白の量は、治療すべき症状の性質および重さ、
ならびに患者がすでに受けていた治療の性質による。最終的には、担当医師が、
各患者を治療すべき本発明蛋白量を決定するであろう。まず、担当医師は、低用
量の本発明蛋白を投与し、患者の応答を観察する。最適治療効果が得られるまで
、より高用量の本発明蛋白を投与してもよく、最適治療効果が得られた時点で用
量をさらに増加させない。本発明方法を実施するための種々の医薬組成物は、体
重１ｋｇあたり約０．０１μｇないし約１００ｍｇの本発明蛋白（好ましくは、
体重１ｋｇあたり約０．１μｇないし約１０ｍｇ、より好ましくは体重１ｋｇあ
たり０．１μｇないし約１ｍｇの本発明蛋白を含有すべきである。 本発明組成物を用いる静脈投与による治療の期間は、治療すべき疾病の重さな
らびに各患者の状態および応答により変化させられるであろう。本発明蛋白の各
適用期間は、連続静脈投与の場合１２ないし２４時間の範囲であると考えられる
。最終的には、担当医師が、本発明医薬組成物を用いる静脈投与による治療の期
間を決定するであろう。
【００４６】 本発明蛋白を用いて動物を免役して、本発明蛋白と特異的に反応するポリクロ
ーナルおよびモノクローナル抗体を得てもよい。蛋白全体またはそのフラグメン
トを免疫原として用いてかかる抗体を得てもよい。ペプチド免疫源はカルボキシ
末端にシステイン残基をさらに含んでいてもよく、キーホールリムペット・ヘモ
シアニン（ＫＬＨ）のごときハプテンに結合する。かかるペプチドを合成する方
法は当該分野において知られており、例えば、R. P. Merrifield, J. Amer. Che
m. Soc. 85, 2149-2154 (1963)；J. L. Krstenansky, et. al., FEBS Lett. 211
, 10 (1987)に記載のごときものがある。本発明蛋白に結合するモノクローナル
抗体は、本発明蛋白の免疫検出用の有用な診断薬でありうる。本発明蛋白に結合
する中和抗体は、本発明蛋白に関連した症状の治療薬として有用でありうるし、
さらに本発明蛋白の異常発現が関与しているいくつかの形態の癌の治療における
ある種の腫瘍の治療において有用でありうる。癌細胞または白血球細胞の場合、
本発明蛋白に対する中和モノクローナル抗体は、本発明蛋白により媒介されうる
癌細胞の転移蔓延の検出および予防に有用でありうる。 骨、軟骨、腱または靭帯の再生に有用な本発明組成物に関して、治療方法は、
組成物を局所的、全身的、またはインプラントもしくはデバイスのごとく局部的
に投与することを包含する。投与する場合、本発明に使用する治療組成物は、も
ちろん、パイロジェン不含の生理学的に許容される形態である。さらに、望まし
くは、組成物をカプセル封入するかまたは粘性形態として注射して骨、軟骨また
は組織ダメージ部位に送達してもよい。局所投与は傷の治癒および組織修復に適
する。上記組成物中に含有されていてもよい本発明蛋白以外の治療上有用な作用
剤を、代替的または付加的に、本発明方法における組成物と同時または逐次投与
してもよい。好ましくは、骨および／または軟骨形成のためには、組成物は、蛋
白含有組成物を骨および／または軟骨ダメージ部位に送達し、骨および軟骨の発
生のための構造を提供し、さらに最適には体内に吸収されうるマトリックスを含
有するであろう。かかるマトリックスは、他の移植される医学的器具に現在使用
されている材料からできていてもよい。 マトリックス材料の選択は、生体適合性、生分解性、機械的特性、美容上の外
観および界面特性に基づく。組成物の特別な適用により適当な処方が決定されよ
う。組成物用として可能なマトリックスは生分解性で、化学的に知られた硫酸カ
ルシウム、リン酸三カルシウム、ヒドロキシアパタイト、ポリ乳酸、ポリグリコ
ール酸およびポリ無水物であってもよい。他の使用可能な材料は生分解性で、生
物学的によく知られたもの、例えば、骨または皮膚のコラーゲンである。さらに
マトリックスは純粋な蛋白または細胞外マトリックス成分を含んでいてもよい。
他の可能なマトリックスは、焼結ヒドロキシアパタイト、バイオガラス、アルミ
ネート、または他のセラミックスのごとき生分解性でなく、化学的に知られたも
のである。マトリックスは上記タイプの材料の組み合わせ、例えばポリ乳酸およ
びヒドロキシアパタイトあるいはコラーゲンおよびリン酸三カルシウムを含んで
いてもよい。バイオセラミックスを、組成物中、例えばカルシウム−アルミネー
ト−ホスフェート中において変更してもよく、加工して孔サイズ、粒子サイズ、
粒子形状および生分解性を変化させてもよい。 １５０ないし８００ミクロンの範囲の直径を有する多孔性粒子形態の乳酸およ
びグリコール酸の５０：５０（モル重量）のコポリマーが現在のところ好ましい
。いくつかの適用例においては、カルボキシメチルセルロースまたは自己由来の
血餅のごとき隔離剤を用いてマトリックスからの蛋白組成物の解離を防止するこ
とが有用であろう。 隔離剤の好ましいファミリーは、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒド
ロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピル
メチルセルロース、およびカルボキシメチルセルロースを包含するアルキルセル
ロース（ヒドロキシアルキルセルロースを包含）のごときセルロース性材料であ
り、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）のカチオン性の塩が最も好ましい。
他の好ましい隔離剤は、ヒアルロン酸、アルギン酸ナトリウム、ポリ（エチレン
グリコール）、ポリオキシエチレンオキシド、カルボキシビニルポリマーおよび
ポリ（ビニルアルコール）を包含する。本発明に有用な隔離剤の量は、全処方重
量に対して０．５〜２０重量％、好ましくは１〜１０重量％であり、この量は、
ポリマーマトリックスからの蛋白の脱離を防止し、組成物の適切な取り扱いを可
能にする量であるが、前駆細胞がマトリックスから浸潤し、そのことにより前駆
細胞の骨形成活性を促進する機会を蛋白に付与するようにするには、あまり多く
ないようにする。
【００４７】 さらなる組成物において、本発明蛋白が骨および／または軟骨の欠損、傷、ま
たは組織の治療に有益な他の作用剤と混合されていてもよい。これらの作用剤は
、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、形質転換増殖因
子（ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β）、およびインスリン様増殖因子（ＩＧＦ）を
包含する。 また、目下のところ、治療組成物は獣医学的用途にも価値がある。詳細には、
ヒトのほかに、家畜およびサラブレッドのウマが本発明蛋白を用いるかかる治療
に望ましい患者である。 組織の再生に使用される蛋白含有医薬組成物の投与規則は、蛋白の作用を変化
させる種々の要因、例えば形成が望まれる組織重量、ダメージ部位、ダメージを
受けた組織の状態、傷のサイズ、必要な組織のタイプ（例えば、骨）、患者の年
齢、性別、および食事、感染の重さ、投与期間、ならびに他の臨床的要因を考慮
して医師が決定するであろう。用量は、復元に使用するマトリックスのタイプお
よび医薬組成物中の他の蛋白の含有に応じて変更されてもよい。例えば、ＩＧＦ
Ｉ（インスリン様増殖因子Ｉ）のごとき他の既知増殖因子の最終組成物への添
加も用量に影響しうる。組織／骨の増殖および／または修復を、例えばＸ線、組
織形態学的調査およびテトラサイクリン標識により定期的に評価することにより
経過をモニターすることができる。 本発明ポリヌクレオチドを遺伝子治療に用いることもできる。かかるポリヌク
レオチドをインビボまたはエクスビボで細胞に導入して哺乳動物対象中で発現さ
せることができる。核酸を細胞または生物に導入するための他の知られた方法に
より本発明ポリヌクレオチドを投与してもよい（ウイルスベクターに入れて、あ
るいは裸のＤＮＡの形態として等があるが、これらに限らない）。 本発明蛋白存在下で細胞をエクスビボにおいて培養して増殖させ、あるいはか
かる細胞に対する所望効果を生じさせ、あるいはかかる細胞中に所望活性を生じ
させてもよい。次いで、処理された細胞を、治療目的で、インビボにおいて導入
することができる。 本明細書に引用した特許および文献を、参照により全体が本明細書に記載され
ているものとみなす。
【００４８】
【図面の簡単な説明】
【図１Ａおよび１Ｂ】 本明細書開示のクローンの寄託に使用した、ｐＥＤ
６およびｐＮＯＴｓベクターをそれぞれ図式的に示したものである。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 17/02 Ａ６１Ｐ 25/00 17/04 29/00 19/00 35/04 25/00 43/00 １０５ 29/00 １１１ 35/04 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 43/00 １０５ Ａ６１Ｋ 37/02 １１１ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ジョン・エム・マッコイ アメリカ合衆国01867マサチューセッツ州 リーディング、ハワード・ストリート56番 (72)発明者 エドワード・アール・ラバリー アメリカ合衆国01451マサチューセッツ州 ハーバード、アン・リー・ロード113番 (72)発明者 リサ・エイ・コリンズ−レイシー アメリカ合衆国01720マサチューセッツ州 アクトン、スクール・ストリート124番 (72)発明者 チェリル・エバンズ アメリカ合衆国01915マサチューセッツ州 ビバリー、ブロートン・ドライブ307番 (72)発明者 デイビッド・マーバーグ アメリカ合衆国01720マサチューセッツ州 アクトン、オーチャード・ドライブ２番 (72)発明者 モーリス・トレーシー アメリカ合衆国02167マサチューセッツ州 チェスナット・ヒル、ウォルコット・ロー ド93番 (72)発明者 マイケル・ジェイ・アゴスティノ アメリカ合衆国01810マサチューセッツ州 アンドーバー、ウォルコット・アベニュー 26番 (72)発明者 ロバート・ジェイ・スタイニンガー・ザ・ セカンド アメリカ合衆国02140マサチューセッツ州 ケンブリッジ、リード・ストリート100番 (72)発明者 ゴードン・ジー・ウォン アメリカ合衆国02146マサチューセッツ州 ブルックライン、クラーク・ロード239番 (72)発明者 ヒラリー・エフ・クラーク アメリカ合衆国02141マサチューセッツ州 ケンブリッジ、ウェブスター・アベニュ ー・ナンバー２、146番 (72)発明者 キム・フェチテル アメリカ合衆国02174マサチューセッツ州 アーリントン、マリオン・ロード46番 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 DA02 EA04 GA11 4B065 AA90X AA93Y AB01 AC14 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA07 BA01 BA08 BA22 BA23 CA18 CA25 CA56 DA01 NA14 ZA022 ZA082 ZA532 ZA542 ZA592 ZA942 ZA962 ZB012 ZB072 ZB082 ZB092 ZB112 ZB132 ZB152 ZB262 ZB352 ZB372 ZC022 ZC332 ZC352 4H045 AA10 BA10 BA19 BA21 CA40 EA20 EA50 FA72 FA74

Claims (29)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 （ａ）配列番号：１のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオ
    チド； （ｂ）配列番号：１のヌクレオチド１７９からヌクレオチド４２８５までのヌ
    クレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６
    ０の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６
    ０のｃＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌク
    レオチド； （ｅ）配列番号：２のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレオ
    チド； （ｆ）生物学的活性を有する配列番号：２のアミノ酸配列のフラグメントを含
    む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：２の８
    個の連続したアミノ酸を含む）； （ｇ）上記（ａ）〜（ｆ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
    クレオチド；および （ｈ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｆ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
    にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド からなる群より選択される単離ポリヌクレオチド。
  2. 【請求項２】 少なくとも１つの発現制御配列に作動可能に連結されている
    請求項１のポリヌクレオチド。
  3. 【請求項３】 請求項２のポリヌクレオチドで形質転換された宿主細胞。
  4. 【請求項４】 哺乳動物細胞である請求項３の宿主細胞。
  5. 【請求項５】 （ａ）請求項３の宿主細胞の培養物を適当な培地中で増殖さ
    せ；ついで （ｂ）培養物から蛋白を精製する ことを含む、請求項２のポリヌクレオチドによりコードされる蛋白の製造方法。
  6. 【請求項６】 請求項５の方法により製造される蛋白。
  7. 【請求項７】 請求項６の蛋白をコードする単離ポリヌクレオチド。
  8. 【請求項８】 ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８
    ６のｃＤＮＡインサートを含む、請求項７のポリヌクレオチド。
  9. 【請求項９】 （ａ）配列番号：２のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：２のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列番
    号：２の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６
    ０のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白
    を実質的に含まない蛋白。
  10. 【請求項１０】 該蛋白が配列番号：２のアミノ酸配列を含む請求項９の蛋
    白。
  11. 【請求項１１】 請求項９の蛋白および医薬上許容される担体を含有する組
    成物。
  12. 【請求項１２】 単離ポリヌクレオチドの製造方法であって、以下の方法： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：１（配列番号：１の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
    く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６０
    のｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
    せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
    単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：１（配列番号：１の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
    く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンａｍ７２８ ６０
    のｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
    させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること からなる群から選択され、単離ポリヌクレオチドが以下のもの： （ｖ）配列番号：１のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：１の５
    ’末端に対応するヌクレオチド配列から配列番号：１の３’末端に対応するヌク
    レオチド配列までの連続したものであるが、配列番号：１の３’末端のポリ（Ａ
    ）テイルは除かれるものであるヌクレオチド配列 （ｗ）配列番号：１のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド１７９からヌクレオチド４
    ２８５までに対応するものであり、配列番号：１のヌクレオチド１７９からヌク
    レオチド４２８５までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から、配
    列番号：１のヌクレオチド１７９からヌクレオチド４２８５までの該配列の３’
    末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレオチド配列 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含むものである方法。
  13. 【請求項１３】 請求項１２の方法により製造される単離ポリヌクレオチド
    。
  14. 【請求項１４】 請求項１３のポリヌクレオチドを含む単離ポリヌクレオチ
    ド。
  15. 【請求項１５】 （ａ）配列番号：３のヌクレオチド配列を含むポリヌクレ
    オチド； （ｂ）配列番号：３のヌクレオチド１０８からヌクレオチド２５４までのヌク
    レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号：３のヌクレオチド２２５からヌクレオチド２５４までのヌク
    レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １
    １の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １
    １のｃＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌク
    レオチド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １
    １の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｇ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １
    １のｃＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌク
    レオチド； （ｈ）配列番号：４のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレオ
    チド； （ｉ）生物学的活性を有する配列番号：４のアミノ酸配列のフラグメントを含
    む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：４の８
    個の連続したアミノ酸を含む）； （ｊ）上記（ａ）〜（ｇ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
    クレオチド；および （ｋ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｉ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
    にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド からなる群より選択される単離ポリヌクレオチド。
  16. 【請求項１６】 （ａ）配列番号：４のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：４のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列番
    号：４の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １
    １のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白
    を実質的に含まない蛋白。
  17. 【請求項１７】 単離ポリヌクレオチドの製造方法であって、以下の方法： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：３（配列番号：３の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
    く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １の
    ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
    せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
    単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：３（配列番号：３の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
    く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｂｆ３７７ １の
    ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
    させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること からなる群から選択され、単離されるポリヌクレオチドが以下のもの： （ｖ）配列番号：３のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：３の５
    ’末端に対応するヌクレオチド配列から配列番号：３の３’末端に対応するヌク
    レオチド配列までの連続したものであるが、配列番号：３の３’末端のポリ（Ａ
    ）テイルは除かれるものであるヌクレオチド配列 （ｗ）配列番号：３のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド１０８からヌクレオチド２
    ５４までに対応するものであり、配列番号：３のヌクレオチド１０８からヌクレ
    オチド２５４までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から、配列番
    号：３のヌクレオチド１０８からヌクレオチド２５４までの該配列の３’末端に
    対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレオチド配列 （ｘ）配列番号：３のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド２２５からヌクレオチド２
    ５４までに対応するものであり、配列番号：３のヌクレオチド２２５からヌクレ
    オチド２５４までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から、配列番
    号：３のヌクレオチド２２５からヌクレオチド２５４までの該配列の３’末端に
    対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレオチド配列 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含むものである方法。
  18. 【請求項１８】 （ａ）配列番号：５のヌクレオチド配列を含むポリヌクレ
    オチド； （ｂ）配列番号：５のヌクレオチド４２６からヌクレオチド５６９までのヌク
    レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号：５のヌクレオチド５４６からヌクレオチド５６９までのヌク
    レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １
    の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １
    のｃＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレ
    オチド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １
    の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｇ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １
    のｃＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレ
    オチド； （ｈ）配列番号：６のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレオ
    チド； （ｉ）生物学的活性を有する配列番号：６のアミノ酸配列のフラグメントを含
    む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：６の８
    個の連続したアミノ酸を含む）； （ｊ）上記（ａ）〜（ｇ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
    クレオチド；および （ｋ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｉ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
    にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド からなる群より選択される単離ポリヌクレオチド。
  19. 【請求項１９】 （ａ）配列番号：６のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：６のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列番
    号：６の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １
    のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白
    を実質的に含まない蛋白。
  20. 【請求項２０】 単離ポリヌクレオチドの製造方法であって、以下の方法： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：５（配列番号：５の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
    く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １の
    ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
    せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
    単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：５（配列番号：５の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
    く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｃｗ３５４ １の
    ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
    させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること からなる群から選択され、単離ポリヌクレオチドが以下のもの： （ｖ）配列番号：５のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：５の５
    ’末端に対応するヌクレオチド配列から配列番号：５の３’末端に対応するヌク
    レオチド配列までの連続したものであるが、配列番号：５の３’末端のポリ（Ａ
    ）テイルは除かれるものであるヌクレオチド配列 （ｗ）配列番号：５のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド４２６からヌクレオチド５
    ６９までに対応するものであり、配列番号：５のヌクレオチド４２６からヌクレ
    オチド５６９までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から、配列番
    号：５のヌクレオチド４２６からヌクレオチド５６９までの該配列の３’末端に
    対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレオチド配列 （ｘ）配列番号：５のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド５４６からヌクレオチド５
    ６９までに対応するものであり、配列番号：５のヌクレオチド５４６からヌクレ
    オチド５６９までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から、配列番
    号：５のヌクレオチド５４６からヌクレオチド５６９までの該配列の３’末端に
    対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレオチド配列 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含むものである方法。
  21. 【請求項２１】 （ａ）配列番号：７のヌクレオチド配列を含むポリヌクレ
    オチド； （ｂ）配列番号：７のヌクレオチド１５１からヌクレオチド８９１までのヌク
    レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号：７のヌクレオチド５９５からヌクレオチド８９１までのヌク
    レオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４
    の全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４
    のｃＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレ
    オチド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４
    の成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｇ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４
    のｃＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレ
    オチド； （ｈ）配列番号：８のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレオ
    チド； （ｉ）生物学的活性を有する配列番号：８のアミノ酸配列のフラグメントを含
    む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：８の８
    個の連続したアミノ酸を含む）； （ｊ）上記（ａ）〜（ｇ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
    クレオチド；および （ｋ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｉ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
    にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド からなる群より選択される単離ポリヌクレオチド。
  22. 【請求項２２】 （ａ）配列番号：８のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：８のアミノ酸１０４からアミノ酸１６３までのアミノ酸配列
    ； （ｃ）配列番号：８のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列番
    号：８の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４
    のｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白
    を実質的に含まない蛋白。
  23. 【請求項２３】 単離ポリヌクレオチドの製造方法であって、以下の方法： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：７（配列番号：７の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
    く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４の
    ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
    せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
    単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：７（配列番号：７の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
    く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｎｍ１３４ ４の
    ｃＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
    させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること からなる群から選択され、単離ポリヌクレオチドが以下のもの： （ｖ）配列番号：７のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：７の５
    ’末端に対応するヌクレオチド配列から配列番号：７の３’末端に対応するヌク
    レオチド配列までの連続したものであるが、配列番号：７の３’末端のポリ（Ａ
    ）テイルは除かれるものであるヌクレオチド配列。 （ｗ）配列番号：７のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド１５１からヌクレオチド８
    ９１までに対応するものであり、配列番号：７のヌクレオチド１５１からヌクレ
    オチド８９１までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から、配列番
    号：７のヌクレオチド１５１からヌクレオチド８９１までの該配列の３’末端に
    対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレオチド配列 （ｘ）配列番号：７のヌクレオチド５９５からヌクレオチド８９１までのｃＤ
    ＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：７のヌクレオチド５９５からヌクレ
    オチド８９１までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から、配列番
    号：７のヌクレオチド５９５からヌクレオチド８９１までの該配列の３’末端に
    対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレオチド配列 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含むものである方法。
  24. 【請求項２４】 （ａ）配列番号：９のヌクレオチド配列を含むポリヌクレ
    オチド； （ｂ）配列番号：９のヌクレオチド１９０９からヌクレオチド２１２７までの
    ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号：９のヌクレオチド２０７４からヌクレオチド２１２７までの
    ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の
    全長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の
    ｃＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレオ
    チド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の
    成熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｇ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の
    ｃＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレオ
    チド； （ｈ）配列番号：１０のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
    オチド； （ｉ）生物学的活性を有する配列番号：１０のアミノ酸配列のフラグメントを
    含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：１０
    の８個の連続したアミノ酸を含む）； （ｊ）上記（ａ）〜（ｇ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
    クレオチド；および （ｋ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｉ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
    にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド からなる群より選択される単離ポリヌクレオチド。
  25. 【請求項２５】 （ａ）配列番号：１０のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：１０のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列
    番号：１０の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １の
    ｃＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白
    を実質的に含まない蛋白。
  26. 【請求項２６】 単離ポリヌクレオチドの製造方法であって、以下の方法： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：９（配列番号：９の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
    く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １のｃ
    ＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
    せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
    単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：９（配列番号：９の３’末端のポリ（Ａ）テイルを除
    く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｂ１１ １のｃ
    ＤＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
    させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること からなる群から選択され、単離ポリヌクレオチドが以下のもの： （ｖ）配列番号：９のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：９の５
    ’末端に対応するヌクレオチド配列から配列番号：９の３’末端に対応するヌク
    レオチド配列までの連続したものであるが、配列番号：９の３’末端のポリ（Ａ
    ）テイルは除かれるものであるヌクレオチド配列 （ｗ）配列番号：９のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド１９０９からヌクレオチド
    ２１２７までに対応するものであり、配列番号：９のヌクレオチド１９０９から
    ヌクレオチド２１２７までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から
    、配列番号：９のヌクレオチド１９０９からヌクレオチド２１２７までの該配列
    の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレオチド
    配列 （ｘ）配列番号：９のヌクレオチド２０７４からヌクレオチド２１２７までの
    ｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：９のヌクレオチド２０７４から
    ヌクレオチド２１２７までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列から
    、配列番号：９のヌクレオチド２０７４からヌクレオチド２１２７までの該配列
    の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレオチド
    配列 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含むものである方法。
  27. 【請求項２７】 （ａ）配列番号：１１のヌクレオチド配列を含むポリヌク
    レオチド； （ｂ）配列番号：１１のヌクレオチド１０７７からヌクレオチド１７３３まで
    のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｃ）配列番号：１１のヌクレオチド１１５８からヌクレオチド１７３３まで
    のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｄ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １の全
    長蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｅ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃ
    ＤＮＡインサートによりコードされる全長蛋白をコードしているポリヌクレオチ
    ド； （ｆ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １の成
    熟蛋白コーディング配列のヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド； （ｇ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃ
    ＤＮＡインサートによりコードされる成熟蛋白をコードしているポリヌクレオチ
    ド； （ｈ）配列番号：１２のアミノ酸配列を含む蛋白をコードしているポリヌクレ
    オチド； （ｉ）生物学的活性を有する配列番号：１２のアミノ酸配列のフラグメントを
    含む蛋白をコードしているポリヌクレオチド（該フラグメントは配列番号：１２
    の８個の連続したアミノ酸を含む）； （ｊ）上記（ａ）〜（ｇ）のポリヌクレオチドの対立遺伝子変種であるポリヌ
    クレオチド；および （ｋ）厳密な条件下で（ａ）〜（ｉ）に示すポリヌクレオチドのいずれか１つ
    にハイブリダイゼーションしうるポリヌクレオチド からなる群より選択される単離ポリヌクレオチド。
  28. 【請求項２８】 （ａ）配列番号：１２のアミノ酸配列； （ｂ）配列番号：１２のアミノ酸配列のフラグメント（各フラグメントは配列
    番号：１２の８個の連続したアミノ酸を含む）；および （ｃ）受託番号ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃ
    ＤＮＡインサートによりコードされるアミノ酸配列 からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む蛋白であって、他の哺乳動物蛋白
    を実質的に含まない蛋白。
  29. 【請求項２９】 単離ポリヌクレオチドの製造方法であって、以下の方法： （ａ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプローブを調製すること； （ａａ）配列番号：１１（配列番号：１１の３’末端のポリ（Ａ）テイル
    を除く）；および （ａｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃＤ
    ＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プローブ（複数も可）をハイブリダイゼーションさ
    せること；次いで （ｉｉｉ）該プローブ（複数も可）で検出されたＤＮＡポリヌクレオチドを
    単離すること； ならびに （ｂ）下記工程を含む方法： （ｉ）６Ｘ ＳＳＣ中、６５℃にて下記のものからなる群より選択されるヌ
    クレオチド配列にハイブリダイゼーションする１またはそれ以上のポリヌクレオ
    チドプライマーを調製すること； （ｂａ）配列番号：１１（配列番号：１１の３’末端のポリ（Ａ）テイル
    を除く）；および （ｂｂ）ＡＴＣＣ９８６２１として寄託されたクローンｙｃ２ １のｃＤ
    ＮＡインサートのヌクレオチド配列 （ｉｉ）ヒトＤＮＡに該プライマー（複数も可）をハイブリダイゼーション
    させること； （ｉｉｉ）ヒトＤＮＡ配列を増幅すること；次いで （ｉｖ）工程（ｂ）（ｉｉｉ）のポリヌクレオチド生成物を単離すること からなる群から選択され、単離ポリヌクレオチドが以下のもの： （ｖ）配列番号：１１のｃＤＮＡ配列に対応するものであり、配列番号：１１
    の５’末端に対応するヌクレオチド配列から配列番号：１１の３’末端に対応す
    るヌクレオチド配列までの連続したものであるが、配列番号：１１の３’末端の
    ポリ（Ａ）テイルは除かれるものであるヌクレオチド配列 （ｗ）配列番号：１１のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド１０７７からヌクレオチ
    ド１７３３までに対応するものであり、配列番号：１１のヌクレオチド１０７７
    からヌクレオチド１７３３までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列
    から、配列番号：１１のヌクレオチド１０７７からヌクレオチド１７３３までの
    該配列の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレ
    オチド配列 （ｘ）配列番号：１１のｃＤＮＡ配列のヌクレオチド１１５８からヌクレオチ
    ド１７３３までに対応するものであり、配列番号：１１のヌクレオチド１１５８
    からヌクレオチド１７３３までの該配列の５’末端に対応するヌクレオチド配列
    から、配列番号：１１のヌクレオチド１１５８からヌクレオチド１７３３までの
    該配列の３’末端に対応するヌクレオチド配列までの連続したものであるヌクレ
    オチド配列。 からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含むものである方法。
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