JP2003522184A - メラニン濃縮ホルモン類似体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ＭＣＨ受容体において活性な、先端切断ＭＣＨ類似体に関する。先端切断ＭＣＨ類似体は、哺乳動物ＭＣＨの任意に改質されたペプチド誘導体である。該類似体は、ＭＣＨ受容体に結合することができ、好ましくは、信号変換を生じることができる。ＭＣＨ類似体は、研究ツールとしての使用、治療における使用を包含する種々の用途を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本出願は、２０００年２月３日に出願された暫定米国出願第６０／１７９９６
７号の優先権を主張し、該出願を引用によりここに援用する。

【０００２】 （背景技術） 視床下部に存在する神経ペプチドは、体重調節の媒介において主要な役割を果
たしている（Ｆｌｉｅｒら、１９９８． Ｃｅｌｌ， ９２， ４３７−４４０
）。哺乳動物において産生されるメラニン濃縮ホルモン（ＭＣＨ）は、視床下部
において神経ペプチドＮＥＩおよびＮＧＥもコードする大きいプレプロホルモン
前駆物質の一部として合成される環状１９アミノ酸神経ペプチドである（Ｎａｈ
ｏｎら、１９９０． Ｍｏｌ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． ４， ６３２−６３
７；Ｖａｕｇｈａｎら、米国特許第５０４９６５５号；およびＶａｕｇｈａｎら
、１９８９． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １２５， １６６０−１６６５）
。ＭＣＨは、サケの下垂体において最初に同定され、魚において、ＭＣＨはメラ
ニン凝集に作用し、従って皮膚の色素沈着に作用する。マスおよびウナギにおい
て、ＭＣＨは、ストレスにより誘発された、またはＣＲＦにより刺激された、Ａ
ＣＴＨ放出に関与していることが示された（Ｋａｗａｕｃｈｉら、１９８３．
Ｎａｔｕｒｅ ３０５， ３２１−３２３）。

【０００３】 ヒトにおいて、脳で発現される、ＭＣＨをコードする２つの遺伝子が同定され
た（Ｂｒｅｔｏｎら、１９９３． Ｍｏｌ． Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ． １８，
２９７−３１０）。哺乳動物において、ＭＣＨは、側部（ｌａｔｅｒａｌ）視床
下部およびゾナ・イナーチア（ｚｏｎａ ｉｎｅｒｔｉａ）の核周囲部細胞体を
包む、食物摂取の調節に関係している視床下部の神経細胞体に、主として局在す
る（Ｋｎｉｇｇｅら、１９９６． Ｐｅｐｔｉｄｅｓ １７， １０６３−１０
７３）。

【０００４】 薬理学的かつ遺伝学的証拠は、ＭＣＨ作用の一次モード（ｐｒｉｍａｒｙ ｍ
ｏｄｅ）は、食物摂取の促進（食欲増進）であることを示している。ＭＣＨ ｍ
ＲＮＡは、絶食マウスおよびラット、ｏｂ／ｏｂマウス、および神経ペプチドＹ
（ＮＰＹ）の遺伝子において標的崩壊したマウスにおいて、上方調節される（Ｑ
ｕら、１９９６． Ｎａｔｕｒｅ ３８０， ２４３−２４７およびＥｒｉｃｋ
ｓｏｎら、１９９６． Ｎａｔｕｒｅ ３８１， ４１５−４１８）。ＭＣＨの
中枢神経注射（ＩＣＶ）は食物摂取を刺激し、ＭＣＨは、αメラロサイト刺激ホ
ルモン（αＭＳＨ）で見られる食欲減少作用に拮抗する（Ｑｕら、１９９６．
Ｎａｔｕｒｅ ３８０， ２４３−２４７）。ＭＣＨ欠乏マウスは、痩せており
、食欲が少なく、増加した代謝速度を有する（Ｓｈｉｍａｄａら、１９９８．
Ｎａｔｕｒｅ ３９６， ６７０−６７３）。ＭＣＨの投与は、食物摂取、食欲
または体重の増加または維持を促進させるのに有効であることが示されている（
Ｍａｒａｔｏｓ−Ｆｌｉｅｒ、米国特許第５８４９７０８号）。

【０００５】 視床下部−下垂体−軸における作用が報告されているので、ＭＣＨの作用は食
物摂取の調節に限定されない（Ｎａｈｏｎ， １９９４． Ｃｒｉｔｉｃａｌ
Ｒｅｖ． ｉｎ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ， ８， ２２１−２６２）。ＭＣＨは、
視床下部からのＣＲＦ、および下垂体からのＡＣＴＨの、ストレス誘発放出を調
節することができるので、ＭＣＨはストレスに対する身体反応に関与していると
考えられる。さらに、ＭＣＨ神経細胞系は、生殖機能または母性機能にも関与し
ていると考えられる。

【０００６】 （発明の開示） 本発明は、ＭＣＨ受容体において活性な、先端切断（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）Ｍ
ＣＨ類似体に関する。先端切断ＭＣＨ類似体は、哺乳動物ＭＣＨの、任意に修飾
されたペプチド誘導体である。該類似体はＭＣＨ受容体に結合することができ、
好ましくは、信号変換を生じる。ＭＣＨ類似体は、研究ツールとしての使用およ
び治療における使用を包含する種々の用途を有する。

【０００７】 従って、本発明の第一の局面は、先端切断ＭＣＨ類似体を開示する。先端切断
ＭＣＨ類似体は、下記の構造：

【０００８】

【化２】 ［式中、 Ｘ^１は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
タミン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^２は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
タミン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^３は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
タミン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^４は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミ
ン酸またはノルロイシンまたはそれらの誘導体であり； Ｘ^５は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
タミン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^６は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アルギニン、アラ
ニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチ
ジン、ニトロアルギニン、ノルロイシンまたはデス−アミノ−アルギニンまたは
それらの誘導体であり； Ｘ^７は、システイン、ホモシステインまたはペニシラミンまたはそれらの誘導
体であり； Ｘ^８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチ
オニンスルホキシドまたはメチオニンスルホンまたはそれらの誘導体であり； Ｘ^９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニンまたは５−
アミノペンタン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルア
ラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸
またはγ−アミノ酪酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジンまたはニトロアルギ
ニンまたはそれらの誘導体であり； Ｘ^１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニンまたはメチオニンまた
はそれらの誘導体であり； Ｘ^１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラ
ニン）、トリプトファン、（１’）−および（２’）−ナフチルアラニン、シク
ロヘキシルアラニン、または各置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ_２ 、ＮＨ_２、Ｆ、ＩおよびＢｒから成る群から独立に選択される一または多置換フ
ェニルアラニン、またはそれらの誘導体であり； Ｘ^１４は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、ノルアルギニン、または５−ア
ミノペンタン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^１５は、プロリン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニ
ン、サルコシン、または５−アミノペンタン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^１６は、システイン、ホモシステインまたはペニシラミン、またはそれらの
誘導体であり； Ｘ^１７は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリ
ン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、
メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラ
ギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグ
ルタミン酸またはそれらの誘導体であり； Ｚ^１は、任意に存在する保護基であり、存在する場合に、Ｎ末端アミノ基に共
有結合しており； Ｚ^２は、任意に存在する保護基であり、存在する場合に、Ｃ末端カルボキシ基
に共有結合している］ を有する任意に修飾されたペプチド、または該ペプチドの標識誘導体、または該
ペプチドまたは該標識誘導体の医薬的に許容される塩である。

【０００９】 他に記載されていない場合、キラル中心を有するそれらのアミノ酸は、Ｌ−鏡
像異性体として提供される。「それらの誘導体」という用語は、対応するＤ−ア
ミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸およびβ−アミノ酸を意味する。

【００１０】 本発明の他の局面は、ＭＣＨ受容体に結合しうる化合物を選別する方法を開示
する。該方法は、ＭＣＨ受容体、ＭＣＨ結合部位を含む該受容体のフラグメント
、そのようなフラグメントを含むポリペプチド、または該ペプチドの誘導体に、
先端切断ＭＣＨ類似体を結合させる化合物の能力を測定するステップを含む。

【００１１】 本発明の他の局面は、対象の体重を増加させる方法を開示する。該方法は、体
重増加を生じるのに有効な量の先端切断ＭＣＨ類似体を対象に投与するステップ
を含む。

【００１２】 本発明の他の局面は、対象の食欲を増加させる方法を開示する。該方法は、食
欲増加を生じるのに有効な量の先端切断ＭＣＨ類似体を対象に投与するステップ
を含む。

【００１３】 本発明の他の局面は、対象の体重または食欲を減少させる化合物の能力を測定
する方法を開示する。該方法は、下記ステップを含む： ａ）体重増加または食欲増加を生じるのに有効な量の先端切断ＭＣＨ類似体を
、対象に投与するステップ； ｂ）化合物を対象に投与するステップ；および ｃ）対象の体重または食欲の変化を測定するステップ。

【００１４】 本発明の他の特徴および利点は、種々の実施例を含む本明細書に記載した付加
的説明から明らかである。記載した実施例は、本発明を実施するのに有効な種々
の成分および方法を示す。実施例は、本発明を限定するものではない。本明細書
の開示に基づいて、当業者は、本発明を実施するのに有効な他の成分および方法
を識別し、使用することができる。

【００１５】 （図面の簡単な説明） 図１は、ヒトＭＣＨの種々のアミノ酸残基をアラニンで置き換えたアラニン走
査の結果を示す図である。結合アッセイは、クローニングしたヒトＭＣＨ受容体
（ＣＨＯクローン）への（^１２５Ｉ−チロシン、フェニルアラニン^１３）−ＭＣ
Ｈの結合の阻害を測定することによって行った。環化部位（Ｓ−Ｓ）は、「^＊」
によって示されている。

【００１６】 （発明の詳細な説明） 先端切断ＭＣＨ類似体は、約１０〜約１７個の、アミノ酸またはアミン酸誘導
体である基を有する。本発明を使用した場合、有意なＭＣＨ受容体活性を有し、
ある場合には天然哺乳動物ＭＣＨに相当するかそれより高い活性を有する、先端
切断ＭＣＨ類似体を製造することができる。小さいサイズの先端切断ＭＣＨ類似
体は、長い鎖長のＭＣＨと比較して、合成の容易性および／または生理的緩衝液
における高溶解性のような長所を有する。

【００１７】 ＭＣＨ受容体は、ＧｉおよびＧｑに共役しうると考えられるＧタンパク質共役
受容体である。いくつかの文献は、ＭＣＨ受容体であるとことが示されている受
容体を記載している（Ｃｈａｍｂｅｒら、１９９９． Ｎａｔｕｒｅ ４００，
２６１−２６５；Ｓａｉｔｏら、１９９９． Ｎａｔｕｒｅ ４００， ２６
５−２６９；Ｂａｅｃｈｎｅｒら、１９９９． ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ４
５７：５２２−５２４；およびＳｈｉｍｏｍｕｒａら、１９９９． Ｂｉｏｃｈ
ｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍ
ｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ ２６１， ６２２−６２６。これらの文献は本発明の先
行技術とは認められない）。

【００１８】 ＭＣＨ受容体の種々の異型をコードする核酸は、配列番号１〜３によって提供
される。コードされた異型のアミノ酸配列は、配列番号４〜６によって提供され
る。異型は、Ｎ末端における付加アミノ酸の存在によって相互に異なる。これら
の異型の１つまたはそれ以上は、生理学的ＭＣＨ受容体である場合もある。

【００１９】 有意なＭＣＨ活性は、結合アッセイまたはＭＣＨ受容体活性アッセイによって
測定した場合に、哺乳動物ＭＣＨの活性の、少なくとも約５０％、少なくとも約
７５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％であるのが好ましい。
そのようなアッセイの例を下記に示す。

【００２０】 ＭＣＨ類似体は、研究ツールとしての使用および治療における使用のような、
種々の用途を有する。研究ツール用途は一般に、先端切断ＭＣＨ類似体の使用、
およびＭＣＨ受容体またはそのフラグメントの存在を含む。ＭＣＨ受容体は、哺
乳動物、全細胞および膜フラグメントのような種々の環境において存在すること
ができる。先端切断ＭＣＨ類似体の研究ツール用途の例は、ＭＣＨ受容体におけ
る化合物活性の選別、試料または標本（ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）におけるＭＣ
Ｈ受容体の存在の決定、ＭＣＨの役割または作用の試験、ＭＣＨアンタゴニスト
の役割または作用の試験を包含する。

【００２１】 先端切断ＭＣＨ類似体は、ＭＣＨアゴニストおよびＭＣＨアンタゴニストの両
方をする選別するのに使用することができる。ＭＣＨアゴニストの選別は、例え
ば、被験化合物との競合試験において先端切断ＭＣＨ類似体を使用することによ
って行うことができる。ＭＣＨアンタゴニストの選別は、例えば、先端切断ＭＣ
Ｈ類似体を使用してＭＣＨ受容体活性を生じさせ、次に、ＭＣＨ受容体活性を変
化させる化合物の能力を測定することによって行うことができる。

【００２２】 先端切断ＭＣＨ類似体は、対象に投与することができる。「対象」は、ヒト、
ラット、マウス、または家畜を包含する哺乳動物を意味する。対象は、疾患また
は障害の存在を必ずしも意味しない。対象という用語は、例えば、実験の一部と
して先端切断ＭＣＨ類似体を投与される哺乳動物、疾患または障害を緩和するの
を補助するために治療される哺乳動物、疾患または障害の開始を遅くするかまた
は予防するために予防的に措置される哺乳動物を意味する。

【００２３】 ＭＣＨアゴニストを使用して、対象において有利な作用を得ることができる。
例えば、ＭＣＨアゴニストを使用して、体重増加、体重の維持および／または食
欲増加を促進することができる。そのような作用は、体重減少を伴う、疾患また
は障害を有するかまたは治療を受けている患者に特に有効である。体重減少を伴
う疾患または障害の例は、食欲不振、ＡＩＤＳ、消耗、悪液質および老衰（ｆｒ
ａｉｌ ｅｌｄｅｒｌｙ）である。体重減少を伴う治療の例は、化学療法、放射
線療法および透析である。

【００２４】 ＭＣＨアンタゴニストを使用して、患者に有利な効果を得ることもできる。例
えば、ＭＣＨアンタゴニストを使用して、体重減少、食欲減少、体重維持、癌（
例えば、大腸癌または乳癌）治療、痛みの減少、ストレスの減少および／または
性機能不全の治療を助長することができる。

【００２５】 先端切断ＭＣＨ類似体 先端切断ＭＣＨ類似体は、下記の構造：

【００２６】

【化３】 ［式中、 Ｘ^１は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
タミン酸またはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１は、存在する場合に、
アスパラギン酸またはグルタミン酸であり；より好ましくは、Ｘ^１は、存在する
場合に、アスパラギン酸であり；より好ましくは、Ｘ^１は存在せず； Ｘ^２は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
タミン酸またはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^２は、存在する場合に、
フェニルアラニンまたはチロシンであり；より好ましくは、Ｘ^２は、存在する場
合に、フェニルアラニンであり；より好ましくは、Ｘ^２は存在せず； Ｘ^３は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
タミン酸またはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^３は、存在する場合に、
アスパラギン酸またはグルタミン酸であり；より好ましくは、Ｘ^３は、存在する
場合に、アスパラギン酸であり；より好ましくは、Ｘ^３は存在せず； Ｘ^４は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミ
ン酸またはノルロイシンまたはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^４は、存
在する場合に、メチオニン、ロイシン、イソロイシン、バリンまたはノルロイシ
ンであり；より好ましくは、Ｘ^４は、存在する場合に、メチオニンであり；より
好ましくは、Ｘ^４は存在せず； Ｘ^５は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
タミン酸またはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^５は、存在する場合に、
ロイシン、メチオニン、イソロイシン、バリンまたはアラニンであり；より好ま
しくは、Ｘ^５は、存在する場合に、ロイシンであり；より好ましくは、Ｘ^５は存
在せず； Ｘ^６は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アルギニン、アラ
ニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチ
ジン、ニトロアルギニン、ノルロイシンまたはデス−アミノ−アルギニンまたは
それらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^６は、存在しないか、またはアルギニン
、Ｄ−アルギニン、Ｄ−ノルロイシン、Ｄ−プロリン、Ｄ−セリンまたはＤ−ア
スパラギンであり；より好ましくは、Ｘ^６は、アルギンまたはＤ−アルギニンで
あり； Ｘ^７は、システイン、ホモシステインまたはペニシラミンまたはそれらの誘導
体であり；好ましくは、Ｘ^７はシステインであり； Ｘ^８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチ
オニンスルホキシドまたはメチオニンスルホンまたはそれらの誘導体であり；好
ましくは、Ｘ^８は、メチオニン、ノルロイシンまたはＮ−メチルノルロイシンで
あり； Ｘ^９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニンまたは５−
アミノペンタン酸またはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^９はロイシンで
あり； Ｘ^１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルア
ラニン、５−アミノペンタン酸、γ−アミノ酪酸、アスパラギン、セリン、サル
コシンまたはイソ酪酸またはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１０は、グ
リシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、アスパラギン、セリン、Ｄ−ノル
ロリシン、Ｄ−プロリン、γ−アミノ酪酸またはサルコシンであり；より好まし
くは、Ｘ^１０は、グリシン、ロイシン、ノルロイシン、アスパラギンまたはセリ
ンであり； Ｘ^１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジンまたはニトロアルギ
ニンまたはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１１はアルギニンであり； Ｘ^１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニンまたはメチオニンまた
はそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１２はバリンであり； Ｘ^１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラ
ニン）、トリプトファン、（１’）−および（２’）−ナフチルアラニン、シク
ロヘキシルアラニン、または各置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ_２ 、ＮＨ_２、Ｆ、ＩおよびＢｒから成る群から独立に選択される一または多置換フ
ェニルアラニン、またはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１３は、フェニ
ルアラニン、（２’）ナフチルアラニン、ｐ−フルオロ−フェニルアラニン、チ
ロシンまたはソクロヘキシルアラニンであり； Ｘ^１４は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、ノルアルギニン、または５−ア
ミノペンタン酸またはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１４はアルギニン
であり； Ｘ^１５は、プロリン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニ
ン、サルコシンまたは５−アミノペンタン酸またはそれらの誘導体であり；好ま
しくは、Ｘ^１５は、プロリンまたはサルコシンであり； Ｘ^１６は、システイン、ホモシステインまたはペニシラミンまたはそれらの誘
導体であり；好ましくは、Ｘ^１６は、システインまたはＤ−システインであり； Ｘ^１７は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリ
ン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、
メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラ
ギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグ
ルタミン酸またはそれらの誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１７は、存在する場合
に、チロシンまたはトリプロファンであり；より好ましくは、Ｘ^１７は存在せず
； Ｚ^１は、任意に存在する保護基であり、存在する場合に、Ｎ末端アミノ基に共
有結合しており； Ｚ^２は、任意に存在する保護基であり、存在する場合に、Ｃ末端カルボキシ基
に共有結合している］ を有する任意に修飾されたペプチド、または該ペプチドの標識誘導体、または該
ペプチドまたは該標識誘導体の医薬的に許容される塩である。

【００２７】 本発明は、偏左右異性体、ならびにそれらのラセミ形態および分割された鏡像
異性的に純粋な形態を包含するものする。先端切断ＭＣＨ類似体は、Ｄ−アミノ
酸、Ｌ−アミノ酸またはそれらの組合せを含有することができる。好ましくは、
先端切断ＭＣＨ類似体に存在するアミノ酸はＬ−鏡像異性体である。

【００２８】 種々の実施形態において、ＭＣＨ類似体は、種々の位置の１つまたはそれ以上
に、好ましい（またはより好ましい）基を有する。より好ましい実施形態は、種
々の位置のそれぞれに、好ましい（またはより好ましい）基を有する。

【００２９】 Ｎ末端アミノ基に共有結合している保護基は、生体内条件において、アミノ末
端の反応性を減少させる。アミノ保護基は、任意に置換されている−Ｃ_１−１０ アルキル、任意に置換されている−Ｃ_２−１０アルケニル、任意に置換されてい
るアリール、−Ｃ_１−６アルキル任意置換アリール、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_{１ −６} −ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−任意置換アリー
ル、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１−６アルキル、または−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−任意置換アリ
ールを包含する。好ましくは、アミノ末端保護基は、アセチル、プロピル、スク
シニル、ベンジル、ベンゾイルオキシカルボニルまたはｔ−ブチルオキシカルボ
ニルである。

【００３０】 Ｃ末端カルボキシ基に共有結合している保護基は、生体内条件において、カル
ボキシ末端の反応性を減少させる。カルボキシ末端保護基は、好ましくは、最後
のアミノ酸のα−カルボニル基に結合している。カルボキシ末端保護基は、アミ
ド、メチルアミドおよびエチルアミドを包含する。

【００３１】 「アルキル」は、炭素−炭素単結合によって結合している炭素原子を意味する
。アルキル炭化水素基は、直鎖であるか、または１つまたはそれ以上の分岐また
は環状基を有することができる。好ましくは、アルキル基は、長さにおいて１〜
４個の炭素原子を有する。アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプ
ロピル、シクロプロピル、ブチルおよびｔ−ブチルである。アルキル置換基は、
ハロゲン（好ましくは、−Ｆまたは−Ｃｌ）、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＮＨ _２ 、−ＮＯ_２、１〜６個のハロゲン（好ましくは、−Ｆまたは−Ｃｌ、より好ま
しくは−Ｆ）で置換されている−Ｃ_１−２アルキル、−ＣＦ_３、−ＯＣＨ_３およ
び−ＯＣＦ_３から成る群から選択される。

【００３２】 「アルケニル」は、１つまたはそれ以上の炭素−炭素二重結合を有する炭化水
素基を意味する。アルケニル炭化水素基は、直鎖であるか、または１つまたはそ
れ以上の分岐または環状基を有することができる。好ましくは、アルキニル基は
、長さにおいて２〜４個の炭素原子を有する。アルケニル置換基は、ハロゲン（
好ましくは、−Ｆまたは−Ｃｌ）、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＮＨ_２、−ＮＯ _２ 、１〜５個のハロゲン（好ましくは、−Ｆまたは−Ｃｌ、より好ましくは−Ｆ
）で置換されている−Ｃ_１−２アルキル、−ＣＦ_３、−ＯＣＨ_３および−ＯＣＦ _３ から成る群から選択される。

【００３３】 「アリール」は、共役π電子系を有する少なくとも１つの環を有し、２個まで
の共役または縮合環系を有する、任意に置換されている芳香族基を意味する。ア
リールは、炭素環式アリール、複素環式アリールおよびビアリール基を包含する
。好ましくは、アリールは５または６員環、より好ましくはベンジルである。ア
リール置換基は、−Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルコキシ、ハロゲン（好まし
くは、−Ｆまたは−Ｃｌ）、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、１
〜５個のハロゲン（好ましくは、−Ｆまたは−Ｃｌ、より好ましくは−Ｆ）で置
換されている−Ｃ_１−２アルキル、−ＣＦ_３および−ＯＣＦ_３から成る群から選
択される。

【００３４】 標識誘導体は、検出可能な標識での置換基の変更を意味する。検出可能な標識
は、発光、酵素および放射性標識を包含する。好ましい放射性標識は、^１２５Ｉ
である。標識の種類および標識の位置の両方は、ＭＣＨ活性に影響しうる。標識
は、ＭＣＨ受容体において、先端切断ＭＣＨ類似体の活性を実質的に変化させな
いように選択しなければらない。ＭＣＨ活性における特定の標識の影響は、ＭＣ
Ｈ活性および／または結合を測定するアッセイを使用して決定することができる
。

【００３５】 天然の全長ＭＣＨにおいて、^１２５Ｉでの標識による１２位におけるチロシン
の変更は、ＭＣＨ活性に実質的に影響する（Ｄｒｏｚｄｚら、１９９５． ＦＥ
ＢＳ ｌｅｔｔｅｒｓ ３５９， １９９−２０２）。実質的な活性を有する哺
乳動物全長ＭＣＨの^１２５Ｉ標識類似体は、例えば、１３位のチロシンを異なる
基で置換し、次に、１９位のバリンをチロシンで置き換え、チロシンを標識する
ことによって得ることができる。そのような類似体の例は、［^１２５Ｉ］［Ｐｈ
ｅ^１３， Ｔｒｙ^１９］−ＭＣＨ、および（Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラ
ニン）^１３、チロシン^１９）−ＭＣＨである（Ｄｒｏｚｄｚら、ＦＥＢＳ ｌｅ
ｔｔｅｒｓ ３５９， １９９−２０２， １９９５；およびＤｒｏｚｄｚら、
Ｊ． Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉ． ５， ２３４−２４２， １９９９）。

【００３６】 好ましい実施形態において、任意に改質されたペプチドは、下記の構造：

【００３７】

【化４】 ［式中、種々の基および好ましい基は、先に記載した通りである］ を有する。

【００３８】 種々の実施形態において、ＭＣＨ類似体は、配列番号７、８、９または１０の
ペプチド、該ペプチドの標識誘導体、または該ペプチドまたは該標識誘導体の医
薬的に許容される塩である。配列番号７〜１２はＬ−アミノ酸で構成され、下記
の配列を有する（「^＊」は、環化（Ｓ−Ｓ）を示す）：

【００３９】

【化５】 配列番号７： 配列番号８： 配列番号９： 配列番号１０： 配列番号１２： 配列番号１３： 配列番号１４：

【００４０】 他の実施形態において、ペプチドは、配列番号、７、８、１０、１５、２４、
２５、２７、２８、３０−４９、５１、５２、５６、５７、６１、６２、６３、
６５−６７、６９−７２および７７から成る群から選択される配列を有し、該ペ
プチドの標識誘導体、または該ペプチドまたは該標識誘導体の医薬的に許容され
る塩である。好ましい配列は、０．３ｎＭ未満、好ましくは０．１ｎＭ未満のＩ
Ｃ_５０を有する配列；および／または、約９０％より大、好ましくは１００％よ
り大の、％活性化を有する配列である。好ましい配列の例は、実施例４および表
１〜７に示されている。

【００４１】 先端切断ＭＣＨ類似体は、当分野でよく知られている方法を使用して作成する
ことができる。例えば、先端切断ＭＣＨ類似体のポリペプチド領域は化学的また
は生化学的に作成することができ、所望であれば、修飾してブロックＮ末端およ
び／またはブロックＣ末端を生成することができる。ポリペプチドの化学合成法
は当分野でよく知られている（例えば、Ｖｉｎｃｅｎｔ， Ｐｅｐｔｉｄｅ ａ
ｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，
Ｎ．Ｙ．， Ｄｅｋｋｅｒ， １９９０参照）。生化学合成法の例は細胞への核
酸の導入を含み、核酸の発現は、Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌ
ｅｙ， １９８７−１９９８、およびＳａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １
９８９に記載されている。

【００４２】 ＭＣＨ受容体結合アッセイ ＭＣＨ受容体に結合する化合物の能力を測定するアッセイは、ＭＣＨ受容体、
ＭＣＨ結合部位を有する受容体フラグメント、そのようなフラグメントを有する
ポリペプチド、または該ポリペプチドの誘導体を使用する。好ましくは、該アッ
セイは、ＭＣＨ受容体またはそのフラグメントを使用する。

【００４３】 ＭＣＨに結合するＭＣＨ受容体フラグメントを有するポリペプチドは、ＭＣＨ
受容体において見られない１つまたはそれ以上のポリペプチド領域も有すること
ができる。そのようなポリペプチドの誘導体は、１つまたはそれ以上の非ペプチ
ド成分と一緒に、ＭＣＨに結合するＭＣＨ受容体フラグメントを有する。

【００４４】 ＭＣＨの結合に関与するＭＣＨ受容体のアミノ酸配列は、標識ＭＣＨまたは先
端切断ＭＣＨ類似体および種々の受容体フラグメントを使用して、容易に同定す
ることができる。種々の方法を使用して、被験フラグメントを選択して結合領域
を限定することができる。そのような方法の例は、Ｎ末端で開始する約１５個の
アミノ酸の長さの連続フラグメントの試験、およびより長いフラグメントの試験
を含む。長いフラグメントを試験する場合、ＭＣＨに結合するフラグメントを再
分して、ＭＣＨ結合領域をさらに限定することができる。結合試験に使用される
フラグメントは、組み換え核酸法を使用して生成することができる。

【００４５】 結合アッセイは、個々の化合物、または種々の数の化合物を含有する製剤を使
用して行うことができる。ＭＣＨ受容体に結合する能力を有する、種々の数の化
合物を含有する製剤は、ＭＣＨ受容体に結合する化合物を識別するために試験し
うる化合物のより小さいグループに分類することができる。本発明の実施形態に
おいて、少なくとも１０個の化合物を含有する被験製剤を、結合アッセイに使用
する。

【００４６】 結合アッセイは、種々の環境に存在する、組み換え作成ＭＣＨ受容体ポリペプ
チドを使用して行うことができる。そのような環境は、例えば、組み換え核酸ま
たは天然核酸から発現されたＭＣＨ受容体ポリペプチドを含有する細胞抽出物お
よび精製細胞抽出物を包含し；および、例えば、種々の環境に導入された、組み
換え手段によるかまたは天然核酸から生成された精製ＭＣＨ受容体ポリペプチド
の使用も包含する。

【００４７】 ＭＣＨ受容体活性化合物の選別 ＭＣＨ活性化合物の選別は、組み換え発現ＭＣＨ受容体を使用して、容易に行
うことができる。組み換え発現ＭＣＨ受容体ポリペプチドの使用は、特定された
細胞系において受容体を発現する能力のようないくつかの利点を有し、それによ
って、ＭＣＨ受容体活性化合物への反応を、他の受容体への反応から、容易に区
別することができる。例えば、ＭＣＨ受容体は、ＨＥＫ ２９３、ＣＯＳ ７の
ような細胞系において発現することができ、ＣＨＯは発現ベクターによって受容
体を一般に発現せず、発現ベクターを有さないこの同じ細胞系は、対照としての
役割を果たすことができる。

【００４８】 ＭＣＨ受容体活性化合物の選別は、先端切断ＭＣＨ類似体をアッセイに使用す
ることによって促進される。選別アッセイにおける先端切断ＭＣＨ類似体の使用
は、ＭＣＨ受容体活性を提供する。そのような活性における被験化合物の作用を
測定して、例えば、アロステリックモジュレーターおよびアンタゴニストを識別
することができる。さらに、そのようなアッセイを使用して、アゴニストを識別
することもできる。

【００４９】 ＭＣＨ受容体活性は、ＭＣＨ受容体の細胞内配置の変化、ＧｉまたはＧｑ活性
、および／または細胞内メッセンジャーの検出のような、種々の方法を使用して
測定することができる。Ｇｉ活性は、当分野でよく知られている方法、例えば、
黒色素胞アッセイ、ｃＡＭＰ産生、ｃＡＭＰ堆積の阻害、および^３５Ｓ−ＧＴＰ
の結合を測定するアッセイによって、測定することができる。ｃＡＭＰは、種々
の方法、例えば、ラジオイムノアッセイ、および間接的にｃＡＭＰ反応性遺伝子
リポータータンパク質によって、測定することができる。

【００５０】 Ｇｑ活性は、細胞内Ｃａ^２＋を測定するような方法を使用して、測定すること
ができる。Ｃａ^２＋を測定するのに使用しうる当分野でよく知られている方法の
例は、Ｆｕｒａ−２のような色素の使用、エクオリンのようなＣａ^２＋−生物発
光感受性リポータータンパク質の使用である。Ｇタンパク質活性を測定するため
にエクオリンを使用する細胞系の例は、ＨＥＫ２９３／ａｅｑ１７である（Ｂｕ
ｔｔｏｎら、１９９３． Ｃｅｌｌ Ｃａｌｃｉｕｍ １４， ６６３−６７１
、およびＦｅｉｇｈｎｅｒら、１９９９． Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８４， ２１８
４−２１８８、両方とも引用によりここに取込む）。

【００５１】 Ｇタンパク質に機能的に共役したＭＣＨ結合領域を有するキメラ受容体を使用
して、ＭＣＨ受容体活性を測定することもできる。キメラＭＣＨ受容体は、Ｎ末
端細胞外ドメイン；トランスメンブラン領域、細胞外ループ領域および細胞内ル
ープ領域から構成されるトランスメンブランドメイン；および細胞内カルボキシ
末端、を有する。キメラ受容体を作製し、Ｇタンパク質共役反応を測定する方法
は、例えば、国際出願第ＷＯ９７／０５２５２号および米国特許第５２６４５６
５号に記載されており、それらの両方を引用によりここに取込む。

【００５２】 体重および食欲の変化 先端切断ＭＣＨ類似体は、対象において、体重および／または食欲を増加させ
るかまたは維持する方法に使用することができる。そのような方法は、例えば、
ＭＣＨアンタゴニストの作用を試験する実験プロトコルの一部として使用して、
対象において有利な作用を得るか、および／またはＭＣＨの生理学的作用を試験
することができる。

【００５３】 ＭＣＨアンタゴニストの作用を試験する実験プロトコルは、例えば、対象にお
ける体重または食欲の増加を生じるのに充分な量の先端切断ＭＣＨ類似体を使用
し、次に、被験化合物の作用を試験することによって、行うことができる。体重
および食欲の変化は、当分野でよく知られている方法を使用して測定することが
できる。

【００５４】 体重または食欲の増加は、体重不足の対象において、体重を維持するか、また
は体重または食欲の増加を得るのに有効である。さらに、例えば、ブタ、ウシお
よびニワトリのような家畜動物を処置して体重を増加させることもできる。

【００５５】 体重不足の対象は、「正常な」体重範囲またはＢｏｄｙ Ｍａｓｓ Ｉｎｄｅ
ｘ（ＢＭＩ）の下限より約１０％またはそれ以下、２０％またはそれ以下、また
は３０％またはそれ以下の体重を有する対象を包含する。「正常な」体重範囲は
当分野においてよく知られており、患者の年齢、身長および体型のような要因を
考慮する。

【００５６】 ＭＢＩは、身長／体重の比率を測定する。それは、身長の二乗（メートル）で
割った体重（ｋｇ）を算出することによって求められる。ＢＭＩ「正常」範囲は
１９〜２２である。

【００５７】 投与 本明細書に記載されている指示、および当分野でよく知られている方法に従っ
て、先端切断ＭＣＨ類似体を処方し、対象に投与することができる。好ましい投
与経路は、有効量の化合物を目標に到達させることを確実にする。医薬投与に関
するガイドラインは一般に、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１８版、発行人Ｇｅｎｎａｒｏ、Ｍａｃｋ
Ｐｕｐｌｉｓｈｉｎｇ， １９９０、およびＭｏｄｅｒｎ Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃｓ 第２版、発行人ＢａｎｋｅｒおよびＲｈｏｄｅｓ、Ｍａｒｃｅｌ
Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， １９９０に記載されており、それらの両方を引用
によりここに取込む。

【００５８】 先端切断ＭＣＨ類似体は、酸性塩または塩基性塩として製造することができる
。医薬的に許容される塩（水−または油−溶解性または分散性の生成物）は、例
えば無機または有機酸または塩基から生成される、一般的な非毒性塩または第四
級アンモニウム塩を包含する。そのような塩の例は、酸付加塩、例えば、酢酸塩
、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスル
ホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、シク
ロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン
酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロ燐酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタ
ン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、沃化水素酸塩、２−ヒドロキシ
エタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタ
レンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、蓚酸塩、パモエート、ペクチン酸塩、過硫酸
塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩
、琥珀酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシレートおよびウンデカン酸塩；お
よび塩基塩、例えば、アンモニウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩のような
アルカリ金属塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属
塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンのような有機塩基
との塩、およびアルギニンおよびリシンのようなアミノ酸との塩である。

【００５９】 先端切断ＭＣＨ類似体は、経口、経鼻、注射、経皮および経粘膜を包含する種
々の経路によって投与することができる。懸濁剤として経口投与される有効成分
は、医薬製剤の分野でよく知られている方法によって製造することができ、嵩を
与える微晶質セルロース、懸濁化剤としてのアルギン酸またはアルギン酸ナトリ
ウム、粘度上昇剤としてのメチルセルロース、および甘味剤／香味剤を含有する
ことができる。即時放出錠剤として、これらの組成物は、微晶質セルロース、燐
酸二石灰、澱粉、ステアリン酸マグネシウムおよびラクトース、および／または
他の賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、稀釈剤および潤滑剤を含有することがで
きる。

【００６０】 先端切断ＭＣＨ類似体は、静脈投与（ボーラスおよび注入の両方）、腹膜投与
、皮下投与、閉塞を伴うかまたは伴わない局所投与、または筋肉投与形態で投与
することもできる。注射によって投与する場合、注射可能液剤または懸濁剤を、
好適な非毒性の非経口的に許容される稀釈剤または溶媒、例えばリンゲル液また
は等張性塩化ナトリウム溶液、または好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤
、例えば、合成モノ−またはジグリセリドを包含する滅菌、無刺激性の固定油、
およびオレイン酸を包含する脂肪酸を使用して処方することができる。

【００６１】 好適な投与計画は、投与される対象のタイプ；対象の年齢、体重、性および健
康状態；投与経路；対象の腎臓および肝臓機能；所望される効果；および使用さ
れる特定の化合物；を包含する当分野でよく知られている要因を考慮して決める
のが好ましい。

【００６２】 毒性を伴わずに効果を生じる範囲の薬剤濃度を確実に得るためには、目標部位
への薬剤の利用性の動態に基づく投与計画を必要とする。これは、薬剤の分布、
平衡および排泄を考慮することを含む。対象についての一日用量は、０．０１〜
約１０００ｍｇ／対象／日であると考えられる。

【００６３】 先端切断ＭＣＨ類似体は、キットにおいて提供することができる。そのような
キットは一般に、投与形態の活性化合物を含有する。投与形態は、１日かまたは
それ以上の日数にわたって１〜６回／日のような規則的間隔を開けて対象に投与
した場合に、体重または食欲の増加が得られるような、充分な量の活性化合物を
含有する。好ましくは、キットは、体重または食欲増加のための投与形態の使用
、および所定期間にわたって摂取すべき投与形態の量を示す説明書を含む。

【００６４】 （実施例） 本発明の種々の特徴をさらに説明するために、下記に実施例を示す。実施例は
、本発明を実施するのに有効な方法も説明する。これらの実施例は、本発明を限
定するものではない。

【００６５】 実施例１： ＭＣＨ類似体の合成 下記の手順を使用し、アミノ酸基のステップ的付加を変化させて、ＭＣＨ類似
体を作成した。ペプチドを作成し、修飾する他の手順は、当分野でよく知られて
いる。

【００６６】 ４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノ
キシ樹脂におけるペプチド鎖の延長、およびペプチドのＮ末端アミノ基のアセチ
ル化は、４３１Ａ ＡＢＩペプチド合成装置で行った。製造会社提供のプロトコ
ルを、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）におけるアミノ酸のヒドロキシベンゾト
リアゾールエステルのカップリングに適用した。フルオロメチルオキシカルボニ
ル（Ｆｍｏｃ）基を、半永久的α−アミノ保護基として使用し、側鎖保護基は、
アスパラギン酸およびチロシンについてはｔｅｒｔ−ブチル、アルギニンについ
ては２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル
（Ｐｂｆ）、およびシステインについてはトリチルであった。

【００６７】 ５％のアニソールを含有するＴＦＡを使用して、ペプチドを樹脂から分離した
。２時間後、樹脂を室温で濾過し、ＴＦＡで洗浄し、合わした濾液を真空におい
て蒸発乾個した。残渣をエーテルでトリチュレーションし、形成した沈殿物を濾
過によって除去し、エーテルで洗浄し、乾燥した。

【００６８】 粗ペプチドを水中５％の酢酸に溶解し、稀釈水酸化アンモニウムを使用して溶
液のｐＨを約８．２に調節した。反応混合物が約５分間にわたって黄色を維持す
るまで、水中のフェリシアン化カリウム（Ｋ_３Ｆｅ（ＣＮ）_６）の０．０５％の
溶液を滴下しながら、反応混合物を勢いよく撹拌した。さらに２０分後、約１ｍ
Ｌの酢酸を使用して酸化を停止し、反応混合物を凍結乾燥した。

【００６９】 自動Ｗｉｓｐ ７１２インゼクターおよび９９１ Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ Ａ
ｒｒａｙ検出器を有するＷａｔｅｒｓ ６００Ｅシステムに取り付けたＣ１８
Ｖｙｄａｃカラムでの分析的逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰ ＨＰＬＣ
）によって、凍結乾燥した粗ペプチドを分析した。３０分間で０〜１００％の緩
衝剤Ｂの標準勾配系を分析に使用した：緩衝剤Ａは水中０．１％のトリフルオロ
酢酸であり、緩衝剤Ｂはアセトニトリル中０．１％のトリフルオロ酢酸であった
。ＨＰＬＣプロフィールを２１０ｎｍおよび２８０ｎｍにおいて記録した。セミ
プレパラティブ（ｓｅｍｉｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ）Ｃ１８ ＲＰ Ｗａｔｅｒ
ｓカラムを有するＷａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａ Ｐｒｅｐ ４０００システムで、
プレパラティブ（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ）分離を行った。６０分間で２０〜８
０％の緩衝剤Ｂの勾配において、前記の水およびアセトニトリルの溶媒系を、分
離に使用した。クロマトグラフィー的に均質な化合物を、エレクトロスプレー（
ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ）マススペクトロメトリーによって分析した。

【００７０】 実施例２： エクオリン生物発光機能アッセイ エクオリン生物発光アッセイは、ＧｑおよびＧ１１から成るＧαタンパク質サ
ブユニットファミリーを介して結合するＧタンパク質共役受容体の活性を測定す
る信頼しうる試験であり、ホスホリパーゼＣの活性化、細胞内カルシウムの移動
、およびタンパク質キナーゼＣの活性化を生じる。

【００７１】 エクオリンを発現する安定なリポーター細胞系２９３−ＡＥＱ１７（Ｂｕｔｔ
ｏｎら、Ｃｅｌｌ Ｃａｌｃｉｕｍ １４：６６３−６７１， １９９３）にお
けるＭＣＨ受容体活性の測定を、Ｌｕｍｉｎｏｓｋａｎ ＲＴ光度計（Ｌａｂｓ
ｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ， ＭＤ）を使用して行
った。２９３−ＡＥＱ１７細胞（Ｔ７５フラスコにおけるトランスフェクション
の前に、１８時間にわたって培養した８ｘ１０^５の細胞胞）を、リポフェクタミ
ン２６４μｇを使用して、ヒトＭＣＨ受容体プラスミド２２μｇでトランスフェ
クションした。哺乳動物発現ベクターｐｃＤＮＡ−３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，
Ｃａｒｌｓｂａｄ， ＣＡ）に挿入されたヒトＭＣＨ受容体をコードする読み
取り枠ｃＤＮＡ（配列番号１）を、発現試験に使用した。約４０時間の発現後に
、ＥＣＢ緩衝剤（１４０ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＫＣｌ、２０ｍＭ ＨＥＰ
ＥＳ−ＮａＯＨ（ｐＨ＝７．４）、５ｍＭ グルコース、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、
１ｍＭ ＣａＣｌ_２、０．１ｍｇ／ｍＬ ウシ血清アルブミン）中、還元条件（
３００μＭの還元グルタチオン）下に、コエレンテラジン（１０μＭ）を、細胞
中のアポ−エクオリンに４時間にわたって負荷した。

【００７２】 細胞を採収し、ＥＣＢ媒体で１回洗浄し、再懸濁して５００，０００細胞／ｍ
Ｌとした。次に、１００μＬの細胞懸濁液（５ｘ１０^４細胞に相当する）を、Ｍ
ＣＨまたはＭＣＨ類似体を含有する試験プレートに注入し、累積発光を０．５秒
単位で３０秒間記録した。次に、２０μＬの溶解緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１００最終濃度）を注入し、累積発光を、０．５秒単位で１０秒間記録
した。初期負荷に対する累積応答と、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００溶解応答を包含
する合計累積発光との比率を求めることによって、各ウエルについての「画分応
答」（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ）値を計算した。

【００７３】 実施例３： 放射性標識ＭＣＨ−Ｒ結合アッセイ ヒトＭＣＨ受容体を安定して発現する細胞から調製した膜への［^１２５Ｉ］−
ヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ^１３、Ｔｙｒ^１９置換）の結合を阻害する類似体の能力を測
定することによって、先端切断ＭＣＨ類似体の活性を検定した。アッセイに使用
したヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ^１３、Ｔｙｒ^１９置換）は、^１９Ｔｙｒにおいて^１２５ Ｉで約２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌの比活性に放射性標識した（ＮＥＮ Ｌｉｆｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｂｏｓｔｏｎ， ＭＡ）。

【００７４】 細胞膜を氷の上に準備した。各Ｔ−７５フラスコを１０ｍＬのＥｎｚｙｍｅ−
ｆｒｅｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｓｐｅｃｉａ
ｌｔｙ Ｍｅｄｉａ， Ｌａｖａｌｌｅｔｔｅ， ＮＪ）で２回洗浄し、さらに
１０ｍＬのＥｎｚｙｍｅ−ｆｒｅｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｂ
ｕｆｆｅｒ中、室温で１０分間培養することによって、細胞単層を分離した。分
離した細胞を遠心分離し（５００ｘｇ、４℃で１０分間）、５ｍＬの均一化緩衝
液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、ｐＨ７．４、０．０１ｍＭ Ｐｅｆａｂｌｏ
ｃ、１０μＭ ホスホラミドン、４０μｇ／ｍＬ バシトラシン）に再懸濁し、
次に、ガラスホモジェナイザー（１０〜１５ストローク）を使用して均一化した
。ホモジェネートを１０分間遠心分離した（１，０００ｘｇ、４℃）。次に、得
られた上澄みを、４℃で１５分間にわたって３８，７００ｘｇで遠心分離した。
ペレット化した膜を再懸濁し（２５ゲージの針に５回通した）、液体窒素でスナ
ップ凍結し（ｓｎａｐ−ｆｒｏｚｅｎ）、使用するまで−８０℃で保存した。

【００７５】 安定なＣＨＯまたはＭＣＨ受容体を発現するＨＥＫ−２９３細胞系からの細胞
膜を使用して、９６穴フィルターアッセイ、またはＳｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ
Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ Ａｓｓａｙ（ＳＰＡ）に基づくフォーマットにおいて、
結合を行った。フィルターアッセイについては、０．０５ｍＬの膜懸濁液（約３
μｇタンパク質）、０．０２ｍＬの［^１２５Ｉ］−ヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ^１３、Ｔ
ｙｒ^１９置換：３０ｐＭ）、０．０１ｍＬの競合物質および０．１２ｍＬの結合
緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２
ｍＭ ＥＤＴＡ、２００μｇ／ｍＬ バシトラシン、１μＭ ホスホラミドン）
を含有する０．２ｍＬの合計容量において、２０℃で１時間にわたって反応を行
った。

【００７６】 １％のポリエチレンイミンで１時間にわたって前処理したＧＦ／Ｃフィルター
を使用して、迅速真空濾過（Ｐａｃｋａｒｄ Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ ９６穴細
胞採収器）によって、結合した放射性リガンドを分離した。膜懸濁液をフィルタ
ーに適用した後、各３ｍＬの氷冷５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１
０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０４％ Ｔｗｅｅｎ ２０でフィ
ルターを３回洗浄し、フィルター上の結合放射能を、シンチレーション計数（Ｔ
ｏｐＣｏｕｎｔ装置）によって定量した。特異的結合（＞合計の８０％）は、１
００ｎＭの非標識ヒトＭＣＨの存在下に行われた全結合と非特異的結合との差と
して定義される。

【００７７】 ＳＰＡに基づくアッセイについては、ＷＧＡ−ＰＶＴビーズ（ＮＥＮ Ｌｉｆ
ｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）を、カルシウムおよびマグネシウム
を含有するＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳに再懸濁した（４ｍＬのＰＢＳ中に５００
ｍｇのビーズ）。各９６穴アッセイプレートについて、０．２ｍＬのＭＣＨ受容
体ＣＨＯ細胞膜（約０．２〜４ｍｇのタンパク質）および１．５ｍＬのＳＰＡア
ッセイ緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ _２ 、２ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ ＢＳＡ、１２％グリセロール）と混合するこ
とによって、０．１８ｍＬのビーズをＭＣＨ受容体で予備被覆した。懸濁液を２
０分間にわたって穏やかに混合し、１２．３ｍＬのアッセイ緩衝液およびプロテ
アーゼ阻害剤を添加した（最終濃度を与えた）：２μｇ／ｍＬ ロイペプチン、
１０μＭ ホスホラミドン、４０μｇ／ｍＬ バシトラシン、５μｇ／ｍＬ ア
プロチニン、０．１ｍＭ Ｐｅｆａｂｌｏｃ。

【００７８】 被覆ビーズを使用するまで氷の上に維持した。各穴について、０．１４５ｍＬ
のビーズをＯｐｔｉｐｌａｔｅアッセイプレート（Ｐａｃｋａｒｄ ６００５１
９０）に添加し、次に、０．００２〜０．００４ｍＬの競合物質および０．０５
ｍＬの［^１２５Ｉ］−ヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ^１３、Ｔｙｒ^１９置換；３０ｐＭ）を
添加した。結合反応を室温で３時間にわたって進めた。シンチレーション計数（
ＴｏｐＣｏｕｎｄ装置）によって定量を行った。

【００７９】 実施例４： ＭＣＨ活性 種々のＭＣＨ類似体の活性を、前記の実施例２および３に記載した手順を使用
して測定した。表１〜７は、種々の先端切断ＭＣＨ類似体および哺乳動物ＭＣＨ
（配列番号１１）の活性を示す。図１は、哺乳動物ＭＣＨの種々のアミノ酸をア
ラニンで置き換えた結果を示す。本明細書に記載した説明に基づいて、ＭＣＨ受
容体に活性な追加のＭＣＨ類似体を得ることができる。

【００８０】

【表１】

【００８１】 表２は、種々のＤ−アミノ酸の影響を示す。

【００８２】

【表２】

【００８３】 表３は、種々のＮ−メチル−アミノ酸の影響を示す。

【００８４】

【表３】

【００８５】 表４は、配列番号７のＭＣＨ類似体の６位における種々の変化の影響を示す。

【００８６】

【表４】

【００８７】 表５は、配列番号７のＭＣＨ類似体の１０位における種々の変化の影響を示す
。

【００８８】

【表５】

【００８９】 表６は、配列番号７のＭＣＨ類似体の１３位における種々の変化の影響を示す
。

【００９０】

【表６】

【００９１】 表７は、配列番号７のＭＣＨ類似体の、いくつかの変化の組合せおよび８位に
おけるいくつかの変化の影響を示す。

【００９２】

【表７】

【００９３】 他の実施形態も本発明に含まれるものとする。いくつかの実施形態を示し、説
明したが、本発明の意図および範囲を逸脱せず、種々の変更を加え得よう。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒトＭＣＨの種々のアミノ酸残基をアラニンで置き換えたアラニン走査の結果
を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｇ０１Ｎ 33/566 33/566 Ａ６１Ｋ 37/24 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA36 FB08 4C084 AA02 AA07 BA01 BA08 BA17 BA18 BA23 BA26 CA62 DB01 ZA69 4H045 AA10 BA16 BA17 EA27 FA33 GA21

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 構造： 【化１】 ［式中、 Ｘ^１は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
   、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
   チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
   ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
   タミン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^２は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
   、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
   チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
   ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
   タミン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^３は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
   、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
   チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
   ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
   タミン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^４は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
   、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
   チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
   ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミ
   ン酸またはノルロイシンまたはそれらの誘導体であり； Ｘ^５は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリン
   、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メ
   チオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギ
   ン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグル
   タミン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^６は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アルギニン、アラ
   ニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチ
   ジン、ニトロアルギニン、ノルロイシンまたはデス−アミノ−アルギニンまたは
   それらの誘導体であり； Ｘ^７は、システイン、ホモシステインまたはペニシラミンまたはそれらの誘導
   体であり； Ｘ^８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチ
   オニンスルホキシドまたはメチオニンスルホンまたはそれらの誘導体であり； Ｘ^９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニンまたは５−
   アミノペンタン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルア
   ラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸
   またはγ−アミノ酪酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジンまたはニトロアルギ
   ニンまたはそれらの誘導体であり； Ｘ^１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニンまたはメチオニンまた
   はそれらの誘導体であり； Ｘ^１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラ
   ニン）、トリプトファン、（１’）−および（２’）−ナフチルアラニン、シク
   ロヘキシルアラニン、または各置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ_２ 、ＮＨ_２、Ｆ、ＩおよびＢｒから成る群から独立に選択される一または多置換フ
   ェニルアラニン、またはそれらの誘導体であり； Ｘ^１４は、アルギニン、リシン、ヒスチジン、ノルアルギニン、または５−ア
   ミノペンタン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^１５は、プロリン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、メチオニ
   ン、サルコシン、または５−アミノペンタン酸またはそれらの誘導体であり； Ｘ^１６は、システイン、ホモシステインまたはペニシラミン、またはそれらの
   誘導体であり； Ｘ^１７は、任意に存在するアミノ酸であり、存在する場合に、アラニン、バリ
   ン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、
   メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラ
   ギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸またはグ
   ルタミン酸またはそれらの誘導体であり； Ｚ^１は、任意に存在する保護基であり、存在する場合に、Ｎ末端アミノ基に共
   有結合しており； Ｚ^２は、任意に存在する保護基であり、存在する場合に、Ｃ末端カルボキシ基
   に共有結合している］ を有する任意に置換されたペプチド、または該ペプチドの標識誘導体、または該
   ペプチドまたは該標識誘導体の医薬的に許容される塩。
2. 【請求項２】 Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４およびＸ^５が存在せず、Ｘ^６がアル
   ギニンであり、あり、Ｘ^１７がチロシンまたはトリプロファンである請求項１に
   記載のペプチド。
3. 【請求項３】 Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４、Ｘ^５およびＸ^１７が存在せず、Ｘ ^６ がアルギニンである請求項１に記載のペプチド。
4. 【請求項４】 Ｚ^１が−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、Ｚ^２が−ＮＨ_２である請求
   項３に記載のペプチド。
5. 【請求項５】 該ペプチドが、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列
   番号１０、または医薬的に許容されるそれの塩である請求項１に記載のペプチド
   。
6. 【請求項６】 該ペプチドが、配列番号７、配列番号８、または医薬的に許
   容されるそれの塩である請求項１に記載のペプチド。
7. 【請求項７】 Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４、Ｘ^５およびＸ^１７が存在せず； Ｘ^６が、アルギニン、Ｄ−アルギニン、Ｄ−ノルロイシン、Ｄ−プロリン、Ｄ
   −セリンまたはＤ−アスパラギンであり； Ｘ^７が、システインであり； Ｘ^８が、メチオニン、ロルロイシン、またはＮ−メチルノルロイシンであり； Ｘ^９が、ロイシンであり； Ｘ^１０が、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、アスパラギン、セ
   リン、Ｄ−ノルロイシン、Ｄ−プロリン、γ−アミノ酪酸またはサルコシンであ
   り； Ｘ^１１が、アルギニンであり、 Ｘ^１２が、バリンであり、 Ｘ^１３が、フェニルアラニン、（２’）ナフチルアラニン、ｐ−フルオロ−フ
   ェニルアラニン、チロシンまたはシクロヘキシルアラニンであり； Ｘ^１４が、アルギニンであり； Ｘ^１５が、プロリンまたはサルコシンであり； Ｘ^１６が、システインまたはＤ−システインである； 請求項１に記載のペプチド。
8. 【請求項８】 該ペプチドが、７、８、１０、１５、２４、２５、２７、２
   ８、３０〜４９、５１、５２、５６、５７、６１、６２、６３、６５〜６７、６
   ９〜７２、および７７から成る群から選択される配列から成る請求項１に記載の
   ペプチド。
9. 【請求項９】 ＭＣＨ受容体に結合できる化合物を選別する方法であって、
   該受容体、ＭＣＨ結合部位を有する該受容体のフラグメント、該フラグメントを
   有するポリペプチドまたは該ポリペプチドの誘導体への、請求項１〜８のいずれ
   か一項に記載のペプチドの結合を行う該化合物の能力を測定するステップを含む
   方法。
10. 【請求項１０】 該方法が、該受容体または該フラグメントに結合する該ペ
    プチドの能力を測定する請求項９に記載の方法。
11. 【請求項１１】 該ペプチドを放射性標識する請求項１０に記載の方法。
12. 【請求項１２】 該ペプチドが、配列番号８の放射性標識誘導体、または医
    薬的に許容されるそれの塩である請求項９に記載の方法。
13. 【請求項１３】 対象の体重を増加させる方法であって、体重増加を生じる
    のに有効な量の請求項１〜８のいずれか一項に記載のペプチドを、該対象に投与
    するステップを含む方法。
14. 【請求項１４】 対象の食欲を増加させる方法であって、食欲増加を生じる
    のに有効な量の請求項１〜８のいずれか一項に記載のペプチドを、該対象に投与
    するステップを含む方法。
15. 【請求項１５】 対象の体重または食欲を減少させる化合物の能力を測定す
    る方法であって、 ａ） 体重増加または食欲増加を生じるのに有効な量の請求項１〜８のいずれ
    か一項に記載のペプチドを該対象に投与するステップ； ｂ） 該化合物を該対象に投与するステップ、および ｃ） 該対象の体重または食欲の変化を測定するステップ； を含む方法。
16. 【請求項１６】 該対象がラットまたはマウスである請求項１５に記載の方
    法。