JP2003519665A

JP2003519665A - 細菌感染の治療処置における、細菌ファージに関連した溶菌酵素の非経口使用

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Publication number: JP2003519665A
Application number: JP2001551496A
Authority: JP
Inventors: フィスケッティ，ヴィンセント; ルーミス，ローレンス
Original assignee: ニュー・ホライズンズ・ダイアグノスティックス・コーポレイション
Priority date: 2000-01-14
Filing date: 2001-01-12
Publication date: 2003-06-24
Also published as: IN2002CH01071A; AU2783401A; KR20020075783A; MXPA02006887A; DE60104815D1; ATE273019T1; US20020127215A1; EP1246641B1; WO2001051073A2; WO2001051073A3; RU2002121653A; WO2001051073A9; US20040105852A1; CA2397386A1; IL150675A0; CN1418108A; EP1246641A2

Abstract

(57)【要約】本発明は、細菌に特異的なバクテリオファージに感染した前記細菌により産生される有効量の少なくとも１つの溶菌酵素を含む、治療剤の非経口的な導入による、細菌感染の処置のための方法および組成物を開示し、ここでの溶菌酵素は、溶菌酵素、および修飾溶菌酵素、例えばシャッフルド溶菌酵素、キメラ溶菌酵素、およびその組合せからなる群から選択され、ここでの前記溶菌酵素は、溶菌酵素を患者に送達するのに適した担体中にある。治療剤はさらに、ホリン酵素を含み得、これはシャッフルドホリン酵素またはキメラホリン酵素であり得る。注射は、筋肉内、皮下または静脈内に行なうことができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】［発明の背景］１．発明の分野本発明は、適切な担体と混合した、溶菌酵素、ホリン溶菌酵素、シャッフルド
溶菌酵素および／またはキメラ溶菌酵素を患者に非経口的に導入することによる
、細菌感染を処置するための方法および組成物を開示する。注射は、筋肉内、皮
下または静脈内投与できる。

【０００２】２．従来技術の記載過去に、種々の感染を処置するのに抗生物質が使用されている。ストレプトミ
セスの導入および産生におけるセルマン・ワックスマンの研究、およびフレミン
グ博士のペニシリンの発見、並びに、抗生物質の分野における数多くのその他の
研究者の研究は公知である。長年におよび、「基本的」抗生物質をより強力にす
るために、または、これらの抗生物質に対しアレルギーを生じる人を処置するた
めに、「基本的」抗生物質に付加および化学的修飾がなされてきた。

【０００３】これらの抗生物質の新規用途を見出した者もあった。米国特許第５，２６０，
２９２号（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら）は、アミノペニシリンによる、ざ瘡の局所的処
置を開示する。ざ瘡およびざ瘡状の皮膚疾患を局所的に処置するための方法およ
び組成物は、アンピシリン、アモキシシリン、他のアミノペニシリン、およびセ
ファロスポリン、およびその誘導体および類似体からなる群から選択された、ざ
瘡およびざ瘡状皮膚疾患の処置に有効な量の抗生物質を適用することを含む。米
国特許第５，４０９，９１７号（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら）は、セファロスポリンに
よる、ざ瘡の局所的処置を開示する。

【０００４】しかし、より多くの抗生物質が、多種多様な病気に、さらに増加しつつある頻
度で処方または使用されるにつれ、ますます多くの細菌が抗生物質に対する耐性
を発達させた。より強力でより多くの投与量の抗生物質が、現在、さらにより耐
性の細菌株に使用されている。結果として、複数の抗生物質に耐性な細菌が発達
した。より多くの抗生物質の使用および耐性を示す細菌の数により、抗生物質を
使用する期間は増えた。広域で非特異的な抗生物質（そのいくつかは、患者に対
して有害な作用を示す）が、現在、より頻繁に使用されている。さらに、抗生物
質に対してアレルギー反応を示す人の数は、増加しつつあるようである。

【０００５】結果として、最初に細菌を同定し、その後殺滅する他の努力が探索されている
。

【０００６】バクテリオファージを用いて、細菌性疾患を処置する試みがなされている。米
国特許第５，６８８，５０１号（Ｍｅｒｒｉｌら）は、特定の細菌に特異的な溶
菌性または非溶菌性バクテリオファージを用いて、動物において、細菌により引
き起こされる感染症を処置する方法を開示する。

【０００７】米国特許第４，９５７，６８６号（Ｎｏｒｒｉｓ）は、唾液皮膜に容易に付着
する特性を有する、細菌に寄生したバクテリオファージを口腔に導入する、改良
された歯科衛生手順を開示する。

【０００８】バクテリオファージを直接動物に導入して、疾病を予防または攻撃することに
は、ある欠点があることを注記する。特に、ファージが付着するためには、細菌
が正しい増殖期になければならない。細菌およびファージは両方共、正しくかつ
同期化した増殖サイクルになければならない。さらに、細菌に付着するファージ
の数が正しくなくてはならない。ファージはまた、十分に活性でなければならな
い。ファージはまた、攻撃する予定の生物由来の細菌片を含む多くの物質により
阻害される。細菌感染を処置するためにバクテリオファージを直接使用するのを
さらに複雑化させているのは、ファージを非機能的とする、免疫反応が生じる可
能性である。別の問題は、バクテリオファージの付着を妨げる細菌表面上の受容
体の変異である。

【０００９】結果として、他の研究者は、細菌感染を処置および予防するために、他のより
安全かつより効果的な手段の使用を探索した。

【００１０】より効果的な処置が十分に探索された１つの細菌はストレプトコッカスである
。ストレプトコッカス属は、ヒト、ウマ、ブタ、およびウシを含む多種多様の宿
主を阻害することが認められる、多種多様な病原性および共生の両方のグラム陽
性細菌からなる。宿主内で、ストレプトコッカスは、口腔、外鼻腔および咽頭の
粘液表面にコロニー形成することがしばしば認められる。しかし、ある環境では
、それらはまた、皮膚、心臓または筋肉組織にも生息し得る。

【００１１】ヒトの病原性ストレプトコッカスは、化膿連鎖球菌、肺炎双球菌およびＳ．フ
ェーカリスを含む。Ａ群のストレプトコッカスは、喉または皮膚上に存在し得、
疾病の症状を全く引き起こさないが、それらは、軽度から重度、さらには生命に
危険を及ぼす範囲の感染を引き起こし得る。病原性溶血性ストレプトコッカス、
化膿連鎖球菌、またはＡ群ストレプトコッカスは、急性咽頭炎（「連鎖球菌性咽
頭炎」）、膿か疹、リウマチ熱、しょう紅熱、糸球体腎炎、および浸潤性筋膜炎
の病因として関与している。壊死性筋膜炎（メディアにより時に「ヒト食い細菌
」と記載される）は、筋肉および脂肪組織の破壊的感染である。浸潤的なＡ群の
ストレプトコッカス感染は、細菌が、感染したヒトの防御を通過した場合に発生
する。毎年、米国で、約１０，０００から１５，０００の症例の浸潤性ＧＡＳ疾
患が発生し、その結果２，０００人以上が死亡する。ＣＤＣは、毎年、米国で、
５００から１，５００の症例の壊死性筋膜炎および２，０００から３，０００症
例のストレプトコッカス毒性ショック症候群が発生していると推定する。壊死性
筋膜炎の患者の約２０％が死亡し、ストレプトコッカス毒性ショック症候群の患
者の６０％が死亡する。他の形の浸潤性のＡ群のストレプトコッカス疾患の患者
の約１０から１５％が死亡する。

【００１２】さらに、Ｃ群ストレプトコッカスは、皮膚亀裂から蜂窩織炎を引き起こし得る
が、蜂窩織炎は通常、黄色ブドウ球菌に関連する。特に高齢の個体またはすでに
弱体化した個体において蜂窩織炎により死亡し得る。

【００１３】報告は、Ｃ１（Ｍａｘｔｅｄ，Ｗ．Ｒ．「ストレプトコッカスのＮａｓｃｅｎ
ｔＰａｇｅＬｙｗｓｉｓにおける活性物質」、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏ．第
１６巻、５８５〜５９５頁、１９５７、Ｋｒａｕｓｅ，Ｒ．Ｍ．「溶血性ストレ
プトコッカスのバクテリオファージに関する研究」、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ、第１
０８巻、８０３〜８２１頁、１９５８）およびＦｉｓｃｈｅｔｔｉ、（Ｆｉｓｃ
ｈｅｔｔｉ，Ｖ．Ａ．ら「Ｃ群のストレプトコッカスファージに関連したライシ
ン（Ｌｙｓｉｎ）の精製および物理的特徴」Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．第１３３巻、
１１０５〜１１１７頁、１９７１）として同定された特定のバクテリオファージ
に感染した後に、Ｃ群のストレプトコッカス生物により産生される酵素の特徴を
記載した。酵素をライシンと名付け、Ａ群、Ｃ群、およびＥ群のストレプトコッ
カスの細胞壁を特異的に切断することが判明した。これらの研究者は、Ａ群のス
トレプトコッカスの溶解および細胞壁炭水化物の放出に関する、この酵素の特徴
および活性についての情報を提供した。

【００１４】米国特許第５，６０４，１０９号（Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉら）は、半精製Ｃ群ス
トレプトコッカスファージに関連したライシン酵素による酵素的消化を通じた、
臨床標本におけるＡ群のストレプトコッカスの迅速な検出に関する。本発明は、
特異的ファージに感染した細菌に特異的なファージ溶菌酵素は、問題の細菌の細
胞壁を効果的かつ効率的に破壊できるという発見に基づく。同時に、酵素の基質
は、哺乳動物組織には存在せず、それ故、細菌細胞壁の消化中に、存在する場合
には、哺乳動物タンパク質および組織には破壊的ではない。

【００１５】米国特許第５，９８５，２７１号（Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉら）、米国特許第５，
９９７，８６２号（Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉら）、および米国特許第６，０１７，５
２８号（Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉら）は、一般的に連鎖球菌性咽頭炎として知られる
、ストレプトコッカスＡ咽頭感染の予防および治療処置のための、Ｃ１バクテリ
オファージに感染したＣ群ストレプトコッカス細菌により産生されるライシン酵
素を含む、キャンディー、チューインガム、ロゼンジ、トローチ、錠剤、散剤、
エアゾール、液剤または液状スプレーなどの、経口送達型式の組成物および使用
を開示する。これは、米国特許第５，６０４，１０９号のライシン酵素である。

【００１６】米国特許第５，６０４，１０９号においてライシン酵素を産生および精製する
のに使用される同じ一般的な技術を使用して、その細菌に特異的なバクテリオフ
ァージに感染した細菌により産生される他の溶菌酵素を製造し得る。細菌に応じ
て、増殖培地および条件は変化し得る。

【００１７】細菌特異的ファージによる細菌の感染により産生されるファージに関連した溶
菌酵素の使用は、疾病の処置において多くの利点を有する。溶菌酵素は、両方共
、特異的細菌に標的化され、選択した場合に、どちらも正常な細菌叢の機能を妨
害しない点で、その補助的ファージとして類似した特徴を有する。また、溶菌フ
ァージは主に、プラスミドの多様性により影響されない細胞壁構造を攻撃する。
溶菌酵素の作用は迅速で、細菌増殖に依存しない。さらに、溶菌酵素は、粘膜層
に指向でき、そこに生息し、コロニー形成した細菌を殺滅できる。

【００１８】米国特許第６，０５６，９５４号（Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉら）は、細菌に特異的
なバクテリオファージに感染した細菌により産生された、有効量の少なくとも１
つの溶菌酵素を、感染部位に投与することを含む、細菌感染の予防的または治療
的処置のための方法および組成物を開示する。溶菌酵素は好ましくは、溶菌酵素
を感染部位に送達するのに適した担体を含む。この方法および処置は、上気道感
染、局所感染、膣感染、眼感染、耳感染の処置に、非経口的処置に、および大半
の他の細菌感染に使用し得る。

【００１９】米国特許第６，０５６，９５５号（Ｆｉｓｃｈｅｔｔｉら）は、ストレプトコ
ッカス関連の局所的処置を開示する。

【００２０】細菌特異的ファージによる細菌の感染により産生されるファージに関連した溶
菌酵素の使用は、疾患の処置に多くの利点を有する。ファージを特異的細菌に標
的化した場合、溶菌酵素は正常な叢は妨害しない。また、溶菌ファージは、主に
、プラスミドの多様性により影響されない、細胞壁構造を攻撃する。溶菌酵素の
作用は速く、細菌増殖に依存しない。

【００２１】しかし、時に、細菌感染は、処置される時までに、より重度の病気に発達して
いることがある。例えば、黄色ブドウ球菌および肺炎双球菌などの皮膚感染は、
蜂窩織炎へと発達し得、これは検査しなければ、結合組織の破壊、敗血症、およ
びおそらくは死に至り得る。他の細菌感染はまた、深組織感染に発達し得る。必
ずしも皮膚学的性質のものではない、他の細菌による、他の感染は、生体の特定
の組織に感染および局在化し得、感染の処置を困難とする。

【００２２】米国特許出願番号第０９／４８２，９９２号は、細菌に特異的なバクテリオフ
ァージに感染した細菌により産生された、少なくとも１つの溶菌酵素、および、
患者に溶菌酵素を送達するに適切な担体の非経口的な導入による、細菌感染の処
置のための方法および組成物を開示する。注射は、筋肉内、皮下または静脈内に
実施できる。

【００２３】［発明の要約］本発明は、細菌感染により引き起こされる多種多様の病気の処置の効力を増加
するための、溶菌酵素に加えて、多種多様なバクテリオファージに関連した溶菌
酵素、ホリン溶菌酵素、キメラ溶菌酵素、およびシャッフルド溶菌酵素の抽出お
よび非経口的使用を開示する。溶菌酵素は、静脈内、皮下、皮膚下、または筋肉
内に投与し得る。

【００２４】バクテリオファージに感染した細菌により産生される溶菌酵素を獲得および精
製する方法は、当分野で公知である。いくつかの近年の証拠により、ストレプト
コッカス生物を溶菌するファージ酵素は、実際は、細胞壁およびファージの作成
に使用する細菌酵素であり得ることが示唆される。細菌中で複製する間、ファー
ジ遺伝子産物は、バクテリオファージを放出するために、細菌酵素のアップレギ
ュレーションまたは脱抑制を引き起し得る。これらの細菌酵素は細菌細胞により
強固に調節され、細胞壁の産生および会合のために細菌に使用される。

【００２５】しかし、細菌症の予防および治療処置におけるこれらの溶菌酵素の使用は、本
発明の本発明者ら以外によっては発見されていない。細菌ファージにより産生さ
れる溶菌酵素は、特異的および効果的に選択した細菌を殺滅できる。

【００２６】処置用の設計薬物の決定を補助するために、部分的に微生物をゲノムシークエ
ンスすることは、バイオテクノロジーにおける現在のトレンドである。このタイ
プのモデリングは時間と費用がかかり、新規な薬物が発見されない場合もある。
本発明の見事さは、ファージ誘導溶菌酵素が、選択した細菌の極めて効果的かつ
標的化された殺滅剤へ発展したという事実に存する。精製酵素の一次構造および
シークエンスを鋳型として用い、多種多様の化学的手順（例えばシャッフリング
）を実施することで、酵素の効力を最適化できる。

【００２７】これらのファージ誘導溶菌酵素は、他の用途の中でもとりわけ、ストレプトコ
ッカス、シュードモナス等の古典的な臨床疾患、および、バチラスおよびエルシ
ニア（それぞれ炭疽菌およびプラークを引き起こす）などの生物兵器剤に関与す
るものを含む、多種多様の細菌病原体を殺滅するのに有用である。

【００２８】本発明（米国特許第５，６０４，１０９号のその全体を参考として取込む）は
、すでに感染により病気になったヒトの治療処置として、特定のバクテリオファ
ージに感染した細菌生物により産生された酵素を使用する。本発明は、特異的フ
ァージに感染した細菌に特異的なファージ溶菌酵素は、問題の細菌の細胞壁を効
果的かつ効率的に破壊できるという発見に基づく。同時に、半精製酵素は、タン
パク質溶解酵素活性を欠失しており、それ故、細菌細胞壁の消化中に存在する場
合、哺乳動物タンパク質および組織に対して非破壊的である。

【００２９】キメラ、シャッフルド、溶菌、およびホリン酵素の産生、精製および単離は、
当業者に公知である。特に、米国特許第６，１３２，９７０号（Ｓｔｅｍｍｅｒ
）（本明細書に参考として取込む）は、これらの酵素の産生のための、多くの新
規技術、およびより確立された手順の修飾を開示する。提案された本発明はこれ
らの技術を利用し、それらを特に記述したファージ関連溶菌酵素の増強に適用す
る。米国特許第６，０５６，９５４号（これも本明細書に参考として取込む）に
見られるライシン酵素を単離する技術は、他のファージ関連溶菌酵素にも適用し
得る。同様に、他の先端技術を使用して、溶菌酵素を単離してもよい。

【００３０】定義の目的のために、シャッフルド酵素とは、通常２つ以上の特定の酵素の２
つ以上の配列を１つ以上の位置で切断し、特定または無作為な順で再構築するこ
とで、その活性または特異性を増加させた酵素である。

【００３１】キメラ酵素は、同じまたは異なる分子上でキメラ酵素が独立的に作用できるよ
うな２つ以上の活性部位を有する２つ以上の酵素の組合せである酵素である。こ
れにより、２つ以上の異なる細菌感染を同時に処置する可能性がもたらされる。

【００３２】ホリン酵素は、細胞膜に穴を作成する。より特定すると、ホリン酵素は、呼吸
を終結する致命的な膜の損傷を形成する。溶菌酵素のように、ホリン酵素は、フ
ァージゲノムにコードされ、ファージゲノムにより保有される。事実、ホリン酵
素の遺伝子コードが、ファージ中の溶菌酵素のコードの近くにまたはコード内に
見出されることは極めて一般的である。大半のホリン配列は短く、全体的に疎水
性であり、高度に親水性のカルボキシ末端ドメインを有する。多くの場合、推定
ホリン酵素は、ファージの酵素的に活性なドメイン内の異なるリーディングフレ
ーム上にコードされている。他の場合では、ホリン酵素はファージをコードする
ＤＮＡの隣またはＤＮＡの近くにコードされている。ホリン酵素はファージ感染
の後期段階中で頻繁に合成され、また膜の損傷を引き起こす細胞質膜中に見出さ
れる。

【００３３】ホリン酵素は、一次構造解析に基づいて、２つの一般的なクラスに分類できる
。クラスＩホリンは、通常、９５残基またはそれ以上であり、３つの潜在的な膜
貫通ドメインを有し得る。クラスＩＩホリンは通常より小さく、約６５〜９５残
基であり、荷電および疎水性残基の分布は２つのＴＭドメインを示す（Ｙｏｕｎ
ｇら、ＴｒｅｎｄｓｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第８巻、第４号、２０
００年３月）。しかし、少なくともグラム陽性宿主のファージでは、二成分溶菌
系は普遍的ではないであろう。ホリンの存在は数個のファージで示されるか、ま
たは示唆されているが、全ファージの推定ホリンをコードする遺伝子は依然とし
て判明していない。ホリンは、とりわけ、ラクトコッカスバクテリオファージＴ
ｕｃ２００９、ラクトコッカスＮＬＣ３、ニューモコッカスバクテリオファージ
ＥＪ−１、ラクトバチラス・ガセリバクテリオファージＮａｄｈ、黄色ブドウ球
菌バクテリオファージＴｗｏｒｔ、リステリア・モノサイトゲネスバクテリオフ
ァージ、ニューモコッカスファージＣｐ−１、バチラス・スブチリスファージＭ
２９、ラクトバチラス・デルブルエッキバクテリオファージＬＬ−Ｈライシン、
および、黄色ブドウ球菌のバクテリオファージＮ１１を提示または示唆すること
が示された（Ｌｏｅｓｓｎｅｒら、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ、１９９９年８月、４４５２〜４４６０頁）。

【００３４】溶菌系は、細菌細胞壁を破壊できる、ホリンおよび少なくとも１つのペプチド
グリカンヒドロラーゼ、すなわち「ライシン」からなる。ライシンは、糖部分に
作用するエンド−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼまたはＮ−アセチルムラミダ
ーゼ（リゾチーム）、ペプチド架橋に作用するエンドペプチダーゼ、より一般的
には、糖とペプチド部分を接続したアミド結合を加水分解するＮ−アセチルムラ
モイル−Ｌ−アラニンアミダーゼであり得る。典型的には、ホリンは、細胞膜中
の孔を形成するファージ感染の後期段階で発現され、これによりライシン（群）
が細胞壁ペプチドグリカンに接近し、前駆ファージが放出される。重要には、外
的に加えたライシンは細菌細胞の細胞壁を溶菌でき、「外因性溶菌」として知ら
れる現象を生じる。しかし、外膜を含むグラム陰性細菌の場合では、溶菌酵素と
組合わせた外的に加えたホリンの存在により、溶菌酵素は、ペプチドグリカンに
より効率的に接近できるようになり、より良好な溶解が可能となる。

【００３５】より特定すると、精製した場合の酵素の配列は、慣用的な技術により決定でき
、一次構造の再編成は、シャッフリングなどの先端技術により行なうことができ
、酵素（群）の活性および安定性を増加できる。シャッフリングによりまた、組
合せ酵素（「キメラ酵素」）が２つ以上の活性を有することが可能となる。

【００３６】細菌特異的ファージによる細菌の感染により産生されるファージ関連溶菌酵素
の使用は、疾患の処置に多くの利点を有する。ファージを特異的な細菌に標的化
した場合、溶菌酵素は正常な叢（ｆｌｏｒａ）を妨害しない。また、溶菌ファー
ジは主に、プラスミド多様性により影響されない細胞壁構造を攻撃する。溶菌酵
素の作用は速く、細菌増殖に依存しない。

【００３７】本発明の目的は、少なくとも１つのファージ関連溶菌酵素、少なくとも１つの
キメラ溶菌酵素、少なくとも１つのシャッフルド溶菌酵素、少なくとも１つのホ
リン酵素、またはその組合せを、静脈内に適用し、敗血症、全身感染、および深
組織感染を処置することである。

【００３８】本発明の目的はまた、少なくとも１つのファージ関連溶菌酵素、少なくとも１
つのキメラ溶菌酵素、少なくとも１つのシャッフルド溶菌酵素、少なくとも１つ
のホリン酵素、またはその組合せを、生物の組織に注射し、深組織感染を処置す
ることである。

【００３９】本発明の１つの実施形態において、ストレプトコッカス・ファシアエおよび黄
色ブドウ球菌により引き起こされる多種多様の病気の処置を開示する。

【００４０】本発明のさらに別の実施形態において、リソスフタフィン（黄色ブドウ球菌を
溶菌する酵素）を治療剤に含めることができる。

【００４１】本発明のさらなる実施形態において、慣用的な抗生物質を、溶菌酵素と共に、
リソスタフィンの存在を含みまたは含まずに、治療剤に含め得る。

【００４２】本発明の別の実施形態において、少なくとも１つの溶菌酵素、少なくとも１つ
のキメラ溶菌酵素、少なくとも１つのシャッフルド溶菌酵素、少なくとも１つの
ホリン酵素、その組合せも、治療剤に含め得る。

【００４３】治療剤は、筋肉内、皮内または皮下注射により非経口的に投与しても、薬剤は
静脈内投与してもよい。

【００４４】本発明の別の目的は、少なくとも１つのファージ関連溶菌酵素、少なくとも１
つのキメラ溶菌酵素、少なくとも１つのシャッフルド溶菌酵素、少なくとも１つ
のホリン酵素、または組合せを静脈内に適用して、敗血症および全身感染を処置
することである。

【００４５】本発明の目的はまた、ファージ関連溶菌酵素を、生物の組織に注射して、深組
織感染を処置することである。

【００４６】本発明の１つの実施形態において、肺炎双球菌、ストレプトコッカス・ファシ
アエ、および黄色ブドウ球菌により引き起こされる多種多様の病気の処置を開示
する。

【００４７】本発明のさらに別の実施形態において、リソスタフィン（黄色ブドウ球菌を溶
菌する酵素）を治療剤に含めることができる。

【００４８】本発明のさらなる実施形態において、慣用的な抗生物質を、溶菌酵素と共に、
リソスタフィンの存在を含みまたは含まずに、治療剤に含め得る。

【００４９】本発明の別の実施形態において、２つ以上の溶菌酵素も、治療剤に含め得る。

【００５０】本発明の好ましい実施形態において、少なくとも１つの溶菌酵素、少なくとも
１つのキメラ溶菌酵素、少なくとも１つのシャッフルド溶菌酵素、少なくとも１
つのホリン酵素、または組合せを使用して、細菌感染を処置し、これにより、細
菌を殺滅する速度および効力を増加する。

【００５１】キメラ酵素も使用して、２つ以上の位置で細胞壁を切断することにより１つの
細菌感染を処置し得る。

【００５２】多くのキメラ溶菌酵素が産生および研究されている。バクテリオファージｐｈ
ｉＸ１７４およびＭＳ２溶菌タンパク質ＥおよびＬから作成したキメラライシン
である遺伝子Ｅ−Ｌを、内部欠失して、溶菌または殺滅特性の変化した、一連の
新規Ｅ−Ｌクローンを創造した。親遺伝子Ｅ、Ｌ、Ｅ−Ｌ、およびＥ−Ｌの内部
切断短縮形の溶菌活性をこの研究で調べ、異なる膜を横切るドメインの構築の差
異に基づいて、異なる溶菌機序を特徴づけた。電子顕微鏡および細胞質および細
胞質周辺空間のマーカー酵素の放出により、２つの異なる溶菌機序を、大腸菌の
内膜または内および外膜のタンパク質の貫通に応じて識別できる。ＦＥＭＳＭ
ｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．１９９８年７月１日、１６４（１）；１５９〜６
７。

【００５３】別の実験では、活性キメラ細胞壁溶菌酵素（ＴＳＬ）は、ラクトコッカスファ
ージＴｕｃ２００９ライシンのＮ末端の半分をコードする領域と、主要なニュー
モコッカス自己溶菌酵素のＣ末端ドメインをコードする領域を融合することによ
り作成した。キメラ酵素は、コリン含有ニューモコッカス細胞壁を加水分解でき
るグリコシダーゼ活性を示した。

【００５４】本発明の好ましい実施形態は、同時に２つの細菌感染を処置するための、また
は２つの異なる位置の細菌の細胞壁を切断するための、キメラ溶菌酵素の使用を
開示する。

【００５５】本発明の別の実施形態において、ホリン酵素は、細菌が死滅する速度および効
率を加速するために、溶菌酵素と共に使用する。ホリン酵素はまた、キメラおよ
び／またはシャッフルド酵素の形であり得る。ホリン酵素はまた、細菌感染の処
置に単独で使用し得る。

【００５６】本発明の別の実施形態において、ホリン酵素は、溶菌酵素と組合せて、または
溶菌酵素とは独立的に、シャッフルドホリン酵素またはキメラホリン酵素である
。

【００５７】［発明の詳細な説明］全身または組織細菌感染を処置する方法は、細菌に特異的なバクテリオファー
ジに感染した細菌により産生される、有効量の少なくとも１つの溶菌酵素、少な
くとも１つのキメラ溶菌酵素、少なくとも１つのシャッフルド溶菌酵素、または
その組合せ、並びに、適切な担体を含む、治療剤で感染を非経口的に処置するこ
とを含む。本発明の好ましい実施形態において、ホリン溶菌酵素はまた、単独で
、または好ましくは、細胞壁を溶菌する他の溶菌酵素の１つと組合せて使用し得
る。

【００５８】細菌感染の処置法は、細菌に特異的なバクテリオファージに感染した細菌によ
り産生される、有効量の修飾形の少なくとも１つの溶菌酵素を含む、治療剤で感
染を処置することを含み、ここでの修飾形の１つの溶菌酵素は、溶菌酵素、シャ
ッフルド溶菌酵素、キメラ溶菌酵素、およびその組合せからなる群から選択する
。溶菌酵素は好ましくは、前記溶菌酵素の活性を可能とするｐＨを有する環境に
ある。ホリン酵素は、単独で、または修飾溶菌酵素の投与と組合せて使用し得る
。ホリン酵素はその「天然」状態にあり得、シャッフルドホリン酵素でも、キメ
ラ溶菌酵素でもよい。

【００５９】シャッフルドおよびキメラ溶菌酵素は、酵素的に、または組換えＤＮＡ手段に
より作成し得る。任意の方法を使用して、これらの酵素を作成し得る。シャッフ
ルドおよびキメラ溶菌酵素は、修飾または工学操作した溶菌酵素と称し得る。

【００６０】溶解酵素は、ヘモフィルス・インフルエンザ、シュードモナス、肺炎双球菌、
ストレプトコッカス・ファシアエ、Ｂ群ストレプトコッカス、リステリア、サル
モネラ、大腸菌、カンピロバクター、および他の細菌、およびその組合せの処置
または予防に使用できる。この溶菌酵素は、キメラおよび／またはシャッフルド
溶菌酵素により補充し得るか、または、それ自体、キメラおよび／またはシャッ
フルド溶菌酵素であり得る。同様に、ホリン酵素も含め得、これもキメラおよび
／またはシャッフルド溶菌酵素であり得る。

【００６１】多くの異なる細菌を処置し得る。深組織、より特定すると結合組織を感染する
ことの最も多い細菌には、Ａ群ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、シュ
ードモナス、およびクロストリジウムがある。２つ以上の溶菌酵素、ホリン溶菌
酵素、シャッフルド溶菌酵素、キメラ溶菌酵素、またはその組合せを、一度に、
感染した生体に導入し得る。

【００６２】多くの異なる方法を使用して、溶菌酵素（群）を導入し得る。これらの方法は
、修飾溶菌酵素を、静脈内、筋肉内、皮下または皮膚下に導入することを含む。

【００６３】本発明の１つの実施形態において、深組織感染は、患者の感染組織に、適切な
ホリン溶菌酵素、キメラ溶菌酵素、シャッフルド溶菌酵素（群）、溶解酵素、ま
たはその組合せ、並びに、酵素の担体を含む、治療剤を注射することにより処置
し得る。使用する溶菌酵素は、キメラおよび／またはシャッフルド溶菌酵素によ
り補充し得るか、または、それ自体、キメラおよび／またはシャッフルド溶菌酵
素であり得る。同様に、ホリン酵素も含め得、これもキメラおよび／またはシャ
ッフルド溶菌酵素であり得る。担体は、蒸留水、食塩水溶液、アルブミン、血清
、またはその任意の組合せからなり得る。より特定すると、点滴または注射用溶
液は、慣用的な方法で、例えば、ｐ−ヒドロキシベンゾエートなどの保存剤また
はエチレンジアミンテトラ酢酸などの安定化剤を加えて調製し得、これはその後
、点滴容器、注射バイアルまたはアンプルに移し得る。別法として、注射用化合
物は、他の成分の存在下または非存在下で凍結乾燥し得、緩衝溶液または蒸留水
中に、適宜、使用時に可溶化し得る。非水性ベヒクル、例えば不揮発性油および
オレイン酸エチルも本明細書では有用である。筋肉内注射が選択した投与形態で
ある場合、等張製剤を好ましくは使用する。一般に、等張添加剤は、塩化ナトリ
ウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトールおよびラクトースを含み得
る。いくつかの場合において、リン酸緩衝食塩水などの等張溶液が好ましい。安
定化剤はゼラチンおよびアルブミンを含む。いくつかの実施形態において、血管
収縮剤を製剤に加える。本発明に記載の医薬調製物は、無菌および発熱性物質非
含有で提供される。

【００６４】担体は適切には、少量の添加剤、例えば等張性および化学的安定性を増強する
物質を含む。前記物質は、使用する投与量および濃度ではレシピエントに無毒性
であり、緩衝液（リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、酢酸、および他の有機酸
またはその塩など）、抗酸化剤（アスコルビン酸等）、低分子量（約１０残基未
満）のポリペプチド（例えばポリアルギニンまたはトリペプチド）、タンパク質
（例えば血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン）、親水性ポリマー（
例えばポリビニルピロリドン）、グリシン、アミノ酸（例えばグルタミン酸、ア
スパラギン酸、ヒスチジンまたはアルギニン）、単糖、二糖、および他の炭水化
物（セルロースまたはその誘導体、グルコース、マンノース、トレハロースまた
はデキストリンを含む）、キレート剤（例えばＥＤＴＡ）、糖アルコール（例え
ばマンニトールまたはソルビトール）、対イオン（例えばナトリウム）、非イオ
ン性界面活性剤（例えばポリソルベート、ポリオキサマー、またはポリエチレン
グリコール（ＰＥＧ））、および／または中性塩（例えばＮａＣｌ、ＫＣｌ、Ｍ
ｇＣｌ₂、ＣａＣｌ₂等）を含む。医薬使用のためのグリセリンまたはグリセロー
ル（１，２，３−プロパントリオール）は市販で入手できる。それは注射用滅菌
水、または塩化ナトリウム注射液、または他の医薬的に許容される注射水溶液に
希釈し得、０．１から１００％（ｖ／ｖ）、好ましくは１．０から５０％、より
好ましくは約２０％の濃度で使用し得る。ＤＭＳＯは非プロトン性溶媒であり、
多くの局所適用薬物の浸透を増強する顕著な能力を有する。ＤＭＳＯは、注射用
滅菌水、または塩化ナトリウム注射液、または他の医薬的に許容される注射水溶
液に希釈し得、０．１から１００％（ｖ／ｖ）の濃度で使用し得る。

【００６５】担体ベヒクルはまた、静脈内用溶液を調製する場合、リンガー液、緩衝溶液、
およびデキストロース溶液も含み得る。

【００６６】修飾溶菌酵素を含む、溶菌酵素（群）を、担体系または経口送達形態に置く前
またはその時に、ｐＨ範囲を約４．０ないし約９．０、より好ましくは約５．５
ないし約７．５、最も好ましくは約６．１に維持する安定化緩衝液環境に、酵素
があることが好ましい。これは、ストレプトコッカス用のライシン酵素に最も適
したｐＨ範囲である。

【００６７】安定化緩衝液により、修飾溶菌酵素の最適活性が可能となるべきである。緩衝
液は、ジチオトレイトールなどの還元剤であり得る。安定化剤はまた、エチレン
ジアミンテトラ酢酸二ナトリウム塩などの金属キレート剤であり得るか、または
それを含み得るか、或いは、それは、リン酸またはクエン酸−リン酸緩衝液を含
み得る。担体に見られる緩衝液は、修飾溶菌酵素の環境を安定化するように作用
できる。

【００６８】感染を処置するための修飾溶菌酵素の有効投与速度または量、および、処置期
間は、感染の重度、感染細菌へのレシピエントの曝露期間、感染した皮膚または
組織の平方ｃｍ、感染の深度、感染の重度、および、数多くの他の変数に一部依
存する。組成物は、１日に１回から数回、どこにでも適用し得、短期間または長
期間適用し得る。使用は、数日間または数週間持続し得る。使用した任意の投与
形が、最小の時間で、最小数の単位を提供すべきである。有効な量または投与量
の酵素を提供すると考えられる酵素の活性単位の濃度は、組成物１ｍｌあたり、
約１００単位から約５００，０００単位の範囲、好ましくは約１０００単位から
約１００，０００単位の範囲、最も好ましくは約１０，０００から１００，００
０単位の範囲であり得る。１ｍｌあたりの活性単位の量および曝露期間は、感染
の性質、および、担体によって修飾溶菌酵素（群）が接触できる量に依存する。
修飾溶菌酵素（群）は、液体環境で最善に作用することに注意する必要がある。
従って、修飾溶菌酵素（群）の効力は、一部、担体により捕獲される湿気の量に
関連した。敗血症の処置では、治療剤を血流に連続的に静脈内に流すべきである
。敗血症の処置における修飾溶菌酵素（群）の濃度は、感染の重度に依存する。

【００６９】感染処置を加速するために、治療剤はさらに、修飾溶菌酵素（群）の殺菌活性
を増強できる少なくとも１つの補助剤を含み得る。補助剤は、修飾溶菌酵素（群
）の治療効果を相乗的に増強するのに効果的である量の、ペニシリン、合成ペニ
シリン、バシトラシン、メチシリン、セファロスポリン、ポリミキシン、セファ
クロル、セファドロキシル、セファマンドールナファート（ｃｅｆａｍａｎｄｏ
ｌｅｎａｆａｔｅ）、セファゾリン、セフィキシム、セフメタゾール、セホニ
シド、セホペラゾン、セホラニド、セホタンメ（ｃｅｆｏｔａｎｍｅ）、セホタ
キシム、セホテタン、セフォキシチン、セフポドキシムプロキセチル、セフタジ
ジム、セフチゾキシム、セフトリアクソン、セフリアクソンマクソラクタム、セ
フロキシム、セファレキシン、セファロスポリンＣ、セファロスポリンＣナトリ
ウム塩、セファロチン、セファロチンナトリウム塩、セファピリン、セフラジン
、セフロキシムアクセチル、セファロチン二水和物、マクソラクタム、ロラカル
ベフ、マフェート、キレート剤およびその任意の組合せであり得る。

【００７０】さらに、治療剤は、さらに、任意の黄色ブドウ球菌細菌の処置のための酵素リ
ソスタフィンを含み得る。粘液溶解ペプチド、例えばリソスタフィンは、ヒトの
黄色ブドウ球菌感染（Ｓｃｈａｆｆｎｅｒら、ＹａｌｅＪ．Ｂｉｏｌ．＆Ｍｅ
ｄ．３９：２３０（１９６７））および黄色ブドウ球菌により引き起こされるウ
シ乳腺炎（Ｓｅａｒｓら、Ｊ．ＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ、７１（補刊１）：
２４４（１９８８））の処置に効果的であると示唆されている。スタフィロコッ
カス・シムランスの遺伝子産物であるリソスタフィンは、細胞壁のポリグリシン
架橋を酵素的に分解することにより、黄色ブドウ球菌に対して静菌および殺菌効
果を奏効する（Ｂｒｏｗｄｅｒら、Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９：３９３〜４００（
１９６５））。米国特許第３，２７８，３７８号は、後にＳ．シムランスと再度
命名した、Ｓ．スタフィロリティカスの培養培地からリソスタフィンを産生する
発酵法を記載する。リソスタフィンを産生する他の方法は、さらに、米国特許第
３，３９８，０５６号および第３，５９４，２８４号に記載する。リソスタフィ
ンの遺伝子は、続いて、クローニングおよびシークエンスされた（Ｒｅｃｓｅｉ
ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４：１１２７〜１１３
１（１９８７））。組換え粘液溶解殺菌タンパク質、例えばｒ−リソスタフィン
は、その標的特異性、低毒性および生物学的に活性な残基の還元の可能性から、
現在の抗生物質療法に関連した問題を回避できる可能性がある。さらに、リソス
タフィンはまた、非分裂細胞に対しても活性であり、一方、大半の抗生物質は、
細胞を活発に分裂して、その効果を媒介することを必要とする（Ｄｉｘｏｎら、
ＹａｌｅＪ．ＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｄｉｃｉｎｅ、４１：６２〜６８
（１９６８））。リソスタフィンは、修飾溶菌酵素（群）と組合せて、列挙した
抗生物質の存在下または非存在下で使用できる。同じ治療剤に、リソスタフィン
およびライシン酵素の両方を使用する点で、さらなる重要度がある。頻繁には、
生体が細菌感染を有する場合、１つの属の細菌による感染は生体を弱体化するか
、または、生体の細菌叢を変化させ、他の病原性の可能性のある細菌が生体を感
染することを可能とする。生体を時に重複感染する細菌の１つは、黄色ブドウ球
菌である。黄色ブドウ球菌の多くの株は、ペニシリナーゼを産生し、よって、ス
タフィロコッカス、ストレプトコッカス、および他のグラム陽性細菌株は、標準
的な抗生物質により死滅しないだろう。結果として、修飾溶菌酵素（群）および
リソスタフィンの、おそらく抗生物質と組合わせた使用は、大半の迅速で効果的
な細菌感染の処置として使用できる。さらに別の好ましい実施形態において、本
発明は、ムタノリシンおよびリゾチームを含み得る。

【００７１】ホリン溶菌酵素、キメラ溶菌酵素、シャッフルド溶菌酵素、およびその組合せ
を含むがこれに限定されない、溶菌酵素の使用は、迅速に細菌細胞を溶解する。
図１の薄切片の電子顕微鏡写真は、ライシンで１５秒間処理したＡ群ストレプト
コッカス１の結果を示す。顕微鏡写真（２５，０００倍率）は、ライシン酵素に
より、細胞壁４に創造された穴３を通じて突き出した細胞内容物２を示す。

【００７２】上記したように、ホリン溶解酵素、キメラ溶菌酵素、およびシャッフルド溶菌
酵素の使用は、米国特許第６，１３２，９７０号に引用した方法により、または
、類似の最先端技術の方法により修飾しておいた、「天然」溶菌酵素の使用によ
り行ない得る。

【００７３】本発明の多くの修飾および変形が、上記の教義に照らして可能である。それ故
、添付の特許請求の範囲内で、本発明は、具体的に記載した以外のようにも保護
され得ることを理解する。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、ライシンで処理したＡ群ストレプトコッカスの電子顕微鏡写真であり
、細胞質膜の突出および細胞内容物の漏出を引き起こす、細胞壁での穴の形成を
示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 47/14 Ａ６１Ｋ 47/18 47/18 47/20 47/20 47/26 47/26 47/36 47/36 47/42 47/42 Ａ６１Ｐ 31/00 Ａ６１Ｐ 31/00 Ａ６１Ｋ 37/54 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4C076 AA12 BB13 BB15 BB16 BB22 BB25 CC31 CC32 CC33 DD22 DD26 DD38 DD43 DD45 DD51 DD55 DD65 DD67 EE38 EE41 EE42 FF63 4C084 AA02 CA04 DC02 MA17 MA55 MA57 MA59 MA66 NA05 NA06 ZB32 ZB35 4C086 AA01 CC01 CC09 MA02 ZB32 ZC75

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】非経口的に有効な量の治療剤を投与することを含む、細菌感
染の処置法であって、前記治療剤は、細菌に特異的なバクテリオファージに感染
した前記細菌により産生される少なくとも１つの酵素、ここでの前記少なくとも
１つの酵素は、溶菌酵素、修飾溶菌酵素、およびその組合せからなる群から選択
する；および感染部位に前記溶菌酵素を送達するための担体を含む、前記処置法。
【請求項２】前記修飾溶菌酵素は、キメラ溶菌酵素、シャッフルド溶菌酵
素、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】少なくとも１つのホリン酵素をさらに含む、請求項１に記載
の方法。
【請求項４】前記少なくとも１つのホリン酵素はシャッフルド酵素である
、請求項３に記載の方法。
【請求項５】前記少なくとも１つのホリン酵素はキメラ酵素である、請求
項３に記載の方法。
【請求項６】前記少なくとも１つの酵素はシュードモナス処置用である、
請求項１に記載の方法。
【請求項７】前記少なくとも１つの酵素はストレプトコッカス処置用であ
る、請求項１に記載の方法。
【請求項８】前記少なくとも１つの酵素はスタフィロコッカス処置用であ
る、請求項１に記載の方法。
【請求項９】前記少なくとも１つの酵素はクロストリジウム処置用である
、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】前記組成物は、前記組成物のｐＨを約４．０ないし約９．
０の範囲に維持する緩衝液をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】前記緩衝液は、前記組成物のｐＨを約５．５ないし約７．
５の範囲に維持する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】前記緩衝液は還元剤を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】前記還元剤はジチオトレイトールである、請求項１２に記
載の方法。
【請求項１４】前記緩衝液は金属キレート剤を含む、請求項１０に記載の
方法。
【請求項１５】前記金属キレート剤はエチレンジアミンテトラ酢酸二ナト
リウム塩である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】前記緩衝液はクエン酸−リン酸緩衝液である、請求項１０
に記載の方法。
【請求項１７】殺菌剤または静菌剤を保存剤としてさらに含む、請求項１
に記載の方法。
【請求項１８】前記少なくとも１つの溶菌酵素は凍結乾燥されている、請
求項１に記載の方法。
【請求項１９】鼻腔または口腔路の湿った環境に、液体１ｍｌあたり、約
１００から約５００，０００単位の濃度の活性酵素を投与することをさらに含む
、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】鼻腔または口腔路の湿った環境に、液体１ｍｌあたり、約
１００から約１０，０００単位の濃度の活性酵素を投与することをさらに含む、
請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】前記治療剤は静脈内投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】前記治療剤は筋肉内投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】前記治療剤は皮下投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】前記治療剤はさらに、溶菌酵素の殺菌活性を増強する少な
くとも１つの補助剤をライシン酵素の治療効果を相乗的に増強するに有効な量で
含み、前記補助剤は、ペニシリン、合成ペニシリン、バシトラシン、メチシリン
、セファロスポリン、ポリミキシン、セファクロル、セファドロキシル、セファ
マンドールナファート、セファゾリン、セフィキシム、セフメタゾール、セホニ
シド、セホペラゾン、セホラニド、セホタンメ（ｃｅｆｏｔａｎｍｅ）、セホタ
キシム、セホテタン、セフォキシチン、セフポドキシムプロキセチル、セフタジ
ジム、セフチゾキシム、セフトリアクソン、セフリアクソンマクソラクタム、セ
フロキシム、セファレキシン、セファロスポリンＣ、セファロスポリンＣナトリ
ウム塩、セファロチン、セファロチンナトリウム塩、セファピリン、セフラジン
、セフロキシムアクセチル、セファロチン二水和物、マクソラクタム、ロラカル
ベフ、マフェート（ｍａｆａｔｅ）およびキレート剤から選択される、請求項１
に記載の方法。
【請求項２５】前記担体は、蒸留水、食塩水溶液、アルブミン、血清およ
びその任意の組合せを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】前記担体はさらに保存剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】前記保存剤はｐ−ヒドロキシベンゾエートを含む、請求項
２６に記載の方法。
【請求項２８】前記担体は注射用の等張溶液を含み、該等張溶液は、塩化
ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、リン
酸緩衝食塩水、ゼラチン、アルブミン、血管収縮剤および組合せからなる群から
選択した化合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】前記のさらなる担体はさらにＤＭＳＯを含む、請求項２８
に記載の方法。
【請求項３０】前記方法は、感染の予防処置用である、請求項１に記載の
方法。
【請求項３１】前記方法は、感染の治療処置用である、請求項１に記載の
方法。
【請求項３２】少なくとも１つのシャッフルド溶菌酵素、少なくとも１つ
のキメラ溶菌酵素、および少なくとも１つのホリン溶菌酵素からなる群から選択
されない、少なくとも１つの酵素をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】細菌に特異的なバクテリオファージに感染した前記細菌に
より産生される、有効量の少なくとも１つの酵素、および、感染部位に前記溶菌
酵素を非経口的に送達するための担体を含む治療剤、ここでの前記少なくとも１
つの酵素は、溶菌酵素、シャッフルド溶菌酵素、キメラ溶菌酵素、およびその組
合せからなる群から選択される；および感染部位に前記溶菌酵素を非経口的に送達するための担体を含む、細菌感染処
置用の組成物。
【請求項３４】少なくとも１つのホリン酵素をさらに含む、請求項３３に
記載の組成物。
【請求項３５】前記少なくとも１つのホリン酵素はキメラ酵素である、請
求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】前記少なくとも１つのホリン酵素はシャッフルド酵素であ
る、請求項３４に記載の組成物。
【請求項３７】前記少なくとも１つの酵素はシュードモナス処置用である
、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３８】前記少なくとも１つの酵素はストレプトコッカス処置用で
ある、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３９】前記少なくとも１つの酵素はスタフィロコッカス処置用で
ある、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４０】前記少なくとも１つの酵素はクロストリジウム処置用であ
る、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４１】前記組成物は、組成物のｐＨを約４．０ないし約９．０の
範囲に維持する緩衝液をさらに含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項４２】前記緩衝液は、組成物のｐＨを約５．５ないし約７．５の
範囲に維持する、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】前記緩衝液は還元剤を含む、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】前記還元剤はジチオトレイトールである、請求項４３に記
載の組成物。
【請求項４５】前記緩衝液は金属キレート剤を含む、請求項４１に記載の
組成物。
【請求項４６】前記金属キレート剤はエチレンジアミンテトラ酢酸二ナト
リウム塩である、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】前記緩衝液はクエン酸−リン酸緩衝液である、請求項４１
に記載の組成物。
【請求項４８】殺菌剤または静菌剤を保存剤としてさらに含む、請求項３
３に記載の組成物。
【請求項４９】少なくとも１つの前記酵素は凍結乾燥されている、請求項
３３に記載の組成物。
【請求項５０】鼻腔または口腔路の湿った環境に、液体１ｍｌあたり、約
１００から約５００，０００単位の濃度の活性酵素を投与することをさらに含む
、請求項３３に記載の組成物。
【請求項５１】鼻腔または口腔路の湿った環境に、液体１ｍｌあたり、約
１０００から約１００，０００単位の濃度の活性酵素を投与することをさらに含
む、請求項５０に記載の組成物。
【請求項５２】前記治療剤は静脈内投与する、請求項３３に記載の組成物
。
【請求項５３】前記治療剤は筋肉内投与する、請求項３３に記載の組成物
。
【請求項５４】前記治療剤は皮下投与する、請求項３４に記載の方法。
【請求項５５】治療剤はさらに、酵素の殺菌活性を増強する少なくとも１
つの補助剤をライシン酵素の治療効果を相乗的に増強するに有効な量で含み、前
記補助剤は、ペニシリン、合成ペニシリン、バシトラシン、メチシリン、セファ
ロスポリン、ポリミキシン、セファクロル、セファドロキシル、セファマンドー
ルナファート、セファゾリン、セフィキシム、セフメタゾール、セホニシド、セ
ホペラゾン、セホラニド、セホタンメ（ｃｅｆｏｔａｎｍｅ）、セホタキシム、
セホテタン、セフォキシチン、セフポドキシムプロキセチル、セフタジジム、セ
フチゾキシム、セフトリアクソン、セフリアクソンマクソラクタム、セフロキシ
ム、セファレキシン、セファロスポリンＣ、セファロスポリンＣナトリウム塩、
セファロチン、セファロチンナトリウム塩、セファピリン、セフラジン、セフロ
キシムアクセチル、セファロチン二水和物、マクソラクタム、ロラカルベフ、マ
フェート（ｍａｆａｔｅ）およびキレート剤から選択される、請求項３３に記載
の組成物。
【請求項５６】前記担体は、蒸留水、食塩水溶液、アルブミン、血清、お
よびその任意の組み合わせを含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項５７】前記担体はさらに保存剤を含む、請求項３３に記載の組成
物。
【請求項５８】前記保存剤はｐ−ヒドロキシベンゾエートを含む、請求項
５７に記載の組成物。
【請求項５９】前記担体は注射用の等張溶液を含み、該等張溶液は、塩化
ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、リン
酸緩衝食塩水、ゼラチン、アルブミン、血管収縮剤および組合せからなる群から
選択した化合物を含む、請求項３３に記載の組成物。
【請求項６０】前記担体はさらにＤＭＳＯを含む、請求項３３に記載の組
成物。
【請求項６１】前記治療剤は感染の治療処置用である、請求項３３に記載
の方法。
【請求項６２】前記治療剤は感染の予防処置用である、請求項３３に記載
の方法。