JP2003518918A - コレステロール代謝疾患に関与する遺伝子の発現産物 - Google Patents

コレステロール代謝疾患に関与する遺伝子の発現産物

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ドウネフル，パトリス
ロジエ−モントウ，マリ−フランソワーズ
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プラデ，カトウリンヌ
クルペ，クリスチアン
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アバンテイス・フアルマ・エス・アー
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Abstract

(57)【要約】 本発明は染色体９の９ｑ３１〜３４領域でヒトゲノムに局在し、この染色体遺伝子座に遺伝的に関連する疾患、特に血漿リポタンパク質代謝疾患、より特定的にはコレステロール逆輸送に関与する可能性のある遺伝子から発現される核酸に関する。本発明は前記核酸の所定種によりコードされるポリペプチドと、診断用試薬として有用な前記ポリペプチドに対する特異抗体にも関する。本発明は更に前記核酸又はそのフラグメントを含む組換えベクター及び宿主細胞にも関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は染色体９の９ｑ３１〜３４領域でヒトゲノムに局在し、この染色体遺
伝子座に遺伝的に関連する疾患、特に血漿リポタンパク質代謝疾患、より特定的
にはコレステロール逆輸送に関与する可能性のある遺伝子から発現される核酸に
関する。
【０００２】 本発明はこれらの核酸の所定種によりコードされるポリペプチドと、診断用試
薬として有用な前記ポリペプチドに対する特異抗体にも関する。
【０００３】 本発明は更に、これらの核酸又はそのフラグメントを含む組換えベクター及び
宿主細胞にも関する。
【０００４】 リポタンパク質は脂質とタンパク質の複合体であり、脂質の血流輸送を可能に
し、一般に血漿中に存在しており、種々の寸法と組成であるが、いずれもマイク
ロエマルション形態である。
【０００５】 リポタンパク質粒子は球形であり、非極性脂質の中心コア（大部分はトリグリ
セリドとコレステロールエステル）と、極性脂質（コレステロールと主にリン脂
質）とアポリポタンパク質（ａｐｏ）と呼ばれるタンパク質の表面単層を含む。
【０００６】 表面単層のタンパク質成分の大部分はリン脂質と全く同様に両親媒性である。
従って、極性脂質とタンパク質は疎水力によりリポタンパク質に結合し、脂肪酸
鎖と非極性アミノ酸側鎖は水性媒体から排除される。
【０００７】 大半のアポリポタンパク質は両親媒性ヘリックス領域をもつ（アポリポタンパ
ク質Ａ−Ｉ、Ａ−ＩＩ、Ａ−ＩＶ、Ｃ−Ｉ、Ｃ−ＩＩ、Ｃ−ＩＩＩ及びＥ）。
【０００８】 リポタンパク質粒子の密度はその寸法に反比例し、その密度はコアに含まれる
低密度非極性脂質と存在する高密度表面タンパク質の相対量を表す。
【０００９】 寸法の大きいリポタンパク質としては、腸細胞により分泌され、ａｐｏ Ｂ−
４８を主体とするカイロミクロンと、肝細胞により分泌され、ａｐｏ Ｂ−１０
０タンパク質を含むＶＬＤＬが知られている。
【００１０】 より小寸法の類のリポタンパク質であるＬＤＬとＨＤＬはそのコアにコレステ
ロールエステルを主成分として含む。これらの粒子の成熟形態は細胞から直接分
泌されず、特に血漿中で代謝経路により生産される。
【００１１】 ＬＤＬ粒子はＶＬＤＬ粒子の代謝の最終産物である。
【００１２】 ＨＤＬ粒子の所定成分はカイロミクロンから誘導される。
【００１３】 従って、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）は血漿中を循環する４種の主要リポ
タンパク質の１種である。
【００１４】 これらのリポタンパク質は脂質運搬、胆汁酸形成、ステロイド生産、細胞増殖
等の種々の代謝経路に関与すると共に、血漿プロテイナーゼ系を妨害する。
【００１５】 ＨＤＬは遊離コレステロールの完全受容体であり、コレステロールエステル輸
送タンパク質（ＣＥＴＰ）、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）、肝リパーゼ（
ＨＬ）及びレシチン−コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）と
共働してコレステロール逆輸送即ち末梢細胞の過剰コレステロールを肝臓に輸送
し、胆汁酸として体外に排出するのに重要な役割を果たす。
【００１６】 ＨＤＬはコレステロールを末梢細胞から肝臓に輸送するだけでなく、ステロイ
ド産生細胞又は低コレステロール末梢細胞に分配する。
【００１７】 ＨＤＬの前駆物質は腸と肝臓から盤状で分泌され、コレステロールエステルの
形成により球形粒子が形成され、リポタンパク質粒子のコアに移動する。
【００１８】 新生ＨＤＬ粒子はａｐｏ Ａ−Ｉとａｐｏ Ａ−ＩＶを含むが、新生肝ＨＤＬ
粒子はａｐｏ Ａ−Ｉ、ａｐｏ Ｅ及びａｐｏ Ａ−ＩＩを多量に含む。
【００１９】 これらの粒子の脂質部分はリン脂質と少量の遊離コレステロール及びトリグリ
セリドから構成される。
【００２０】 ＨＤＬは末梢組織から肝臓へのコレステロール輸送に中心的な役割を果たすこ
とが立証されている。
【００２１】 高コレステロール末梢細胞の過剰な非エステル化コレステロールはＨＤＬによ
り捕捉され、ＬＣＡＴの作用によりエステル化される。コレステロールエステル
が増加したこれらのＨＤＬは肝細胞の表面でＨＤＬ結合タンパク質又は受容体に
より捕捉され、コレステロールエステルを放出する。
【００２２】 コレステロール逆輸送におけるＨＤＬの保護機能はこれらのＨＤＬのコレステ
ロール濃度と冠疾患出現の危険の逆関係を立証した疫学的研究又はＨＤＬが種々
の細胞型から過剰の細胞内コレステロールを有効に受容するという報告により確
認される。
【００２３】 粥腫形成リポタンパク質は末梢細胞又はマクロファージにより貪食され、リソ
ソームで分解される。コレステロールはリソソームから放出され、細胞質区画で
再エステル化される。
【００２４】 高ａｐｏ Ａ−ＩＨＤＬはマクロファージ又は末梢細胞の表面に存在するＨＤ
Ｌ結合タンパク質と相互作用し、これらの細胞から細胞外区画へのコレステロー
ル流出を刺激することが特に示されている。
【００２５】 ＨＤＬ欠損に関連する疾病として、タンジール病、ＨＤＬ欠損症及びＬＣＡＴ
欠損症等の種々の疾病が記載されている。
【００２６】 タンジール病における欠損はＨＤＬの前駆物質がリソソームで分解されるとい
う細胞コレステロール転流の細胞欠陥に結び付けられる。しかし、タンジール病
に関して欠陥の正確な性質はまだ明確に定義されていない。
【００２７】 タンジール病では、この細胞欠陥がリポタンパク質代謝不全に至る。末梢細胞
からのコレステロールを取込まずに正しく代謝することができないＨＤＬは迅速
に体外に排出される。従って、これらの患者の血漿ＨＤＬ濃度は著しく低下し、
ＨＤＬはコレステロールの肝臓返送を確保できなくなる。このコレステロールは
これらの末梢細胞に蓄積し、オレンジ色の扁桃形成等の特徴的な臨床徴候を生じ
る。更に、トリグリセリドの過剰生産やリン脂質の合成及び細胞内異化昂進等、
他のリポタンパク質異常も認められる。
【００２８】 上記症状を特徴とするタンジール病は冠疾患患者に最も多く検出される家族性
ＨＤＬ代謝関連疾患に分類される。
【００２９】 ＨＤＬコレステロール濃度の低下が冠疾患を検出するための優れた危険因子で
あることは多くの研究により示されている。
【００３０】 これに関連して、ＨＤＬ欠損症に関連する症候群は粥腫形成におけるＨＤＬの
役割の解明に役立つため、過去１０年間に関心が高まっている。
【００３１】 ａｐｏ Ａ−Ｉ遺伝子の数種の突然変異が特性決定されている。これらの突然
変異は頻度が低く、ａｐｏ Ａ−Ｉの生産が止まる場合がある。
【００３２】 リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）又はそのアクチベーターａｐｏ Ｃ−ＩＩ
をコードする遺伝子の突然変異は重度高トリグリセリド血症とＨＤＬ−ｃ濃度の
実質的低下に結び付けられている。
【００３３】 酵素レシチン−コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）をコー
ドする遺伝子の突然変異も重度ＨＤＬ欠損症に結び付けられている。
【００３４】 従って、コレステロール及び／又はリポタンパク質代謝に関与する遺伝子、特
に末梢細胞から肝臓へのコレステロール逆輸送不全に関連する遺伝子を同定する
必要が当分野で益々必要になっている。
【００３５】 最近、平均１０．３ｃＭの相互間隔でゲノム全体に分配された３４３個のマイ
クロサテライトマーカーの種々の対立遺伝子形態の分離に関する研究が行われて
いる。
【００３６】 多くのタンジール病患者を含み、５つの同族系を含む１１世代にわたって明確
に特性決定された家族で連関研究が行われている。
【００３７】 この研究の結果、統計的に疾患に関連するヒト染色体９の９ｑ３１遺伝子座に
局在する領域が同定された（Ｒｕｓｔ Ｓ．ら，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓ，Ｖｏｌ．２０，１９９８年９月，９６〜９８頁）。
【００３８】 しかし、ＲＵＳＴらの研究はその変異がタンジール病に関連する可能性のある
ゲノムの広い領域を定義するに止まっている。この９ｑ３１〜３４遺伝子座領域
がＥＳＴを含むということしか明示されておらず、遺伝子は分かっていない。
【００３９】 ヒト９ｑ３１〜３４遺伝子座に位置する約１５ｃＭの領域は一般に家族性ＨＤ
Ｌ欠損症に関係があることが今般判明した。
【００４０】 より詳細には、家族性ＨＤＬ欠損症及びタンジール病との最も強い遺伝連関を
与えるマイクロサテライトマーカーであるマイクロサテライトマーカーＤ９Ｓ１
７８４の周囲約１５ｃＭの領域でゲノムに局在する配列からメッセンジャーＲＮ
Ａ分子が発現されることが判明した。
【００４１】 更に、この９ｑ３１〜３４領域は種々の疾患、例えば −粘液性軟骨肉腫、染色体９異常に関連する精神発育遅滞（ＭＲＤ）等の骨疾
患、 −小児腎結核（ＮＰＨ２）等の腎疾患、 −肢帯筋ジストロフィー（ＬＧＭＤ２Ｈ）等の筋疾患、 −分裂病等の精神病、 −ＲＥＴ関連ヒルシュスプルング病（ＳＨＳＣＲ２）等の消化疾患の発病又は
進行に役割を果たす可能性のある遺伝子を潜在的に含む。
【００４２】 位置候補遺伝子がこの染色体区間に局在するため、本発明により単離及び特性
決定されるメッセンジャーＲＮＡ及び対応するポリペプチドは上記ヒト疾患の所
定種又は同様に染色体９のこの領域に遺伝的に関連する他の疾患に潜在的に関与
している。
【００４３】 本願出願人により単離及び特性決定されたこれらのメッセンジャーＲＮＡに含
まれる配列の所定のものについて推定オープンリーディングフレームを決定し、
対応するタンパク質配列を推定した。対応するポリペプチドはリポタンパク質代
謝、特にコレステロール逆輸送不全に関連する疾患に潜在的に関与している。
【００４４】 発明の詳細な説明 従って、本発明はその配列又は発現の変異が血漿リポタンパク質代謝不全、特
にＨＤＬ逆輸送不全に潜在的に関連するポリヌクレオチド及びポリペプチドに関
する。
【００４５】 本発明はその配列又は発現の変異が染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝
的に関連する疾患に潜在的に関連するポリヌクレオチド及びポリペプチドにも関
する。
【００４６】 一般定義 本発明において「単離」なる用語は生体材料（核酸又はタンパク質）がその原
環境（前記材料が天然に存在する環境）から取出されていることを意味する。
【００４７】 例えば、植物又は動物に天然状態で存在するポリヌクレオチドは単離されてい
ない。同一ポリヌクレオチドが植物又は動物のゲノムで天然に隣接する核酸から
分離されている場合には「単離」されているとみなす。
【００４８】 このようなポリヌクレオチドがベクターに含まれるか、及び／又はこのような
ポリヌクレオチドが組成物に含まれる場合もあるが、その場合もベクター又は組
成物はその天然環境を構成しないので単離状態にある。
【００４９】 「精製」なる用語は材料が他の化合物の存在を排除した絶対純粋形態で存在す
る必要はない。むしろ、相対的な定義である。
【００５０】 ポリヌクレオチドは出発材料又は天然材料を少なくとも１桁、好ましくは２桁
又は３桁、より好ましくは４桁又は５桁倍に精製後に「精製」状態となる。
【００５１】 本明細書において「ヌクレオチド配列」なる用語はポリヌクレオチド又は核酸
を区別せずに表すために使用することができる。「ヌクレオチド配列」なる用語
は遺伝子材料自体を含み、従ってその配列に関する情報に限定されない。
【００５２】 「核酸」、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」又は「ヌクレオチ
ド配列」なる用語は単鎖形態であるか二重構造形態であるかを問わずにＲＮＡ、
ＤＮＡもしくはｃＤＮＡ配列又は２種以上のヌクレオチドのＲＮＡ／ＤＮＡハイ
ブリッド配列を含む。
【００５３】 「ヌクレオチド」なる用語は天然ヌクレオチド（Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ）と、（１）
プリンアナログ、（２）ピリミジンアナログ、又は（３）類似糖等の少なくとも
１箇所の変異を含む変異ヌクレオチドの両者を意味し、このような変異ヌクレオ
チドの例は例えばＰＣＴ出願第ＷＯ９５／０４０６４号に記載されている。
【００５４】 本発明において、第１のヌクレオチドの各塩基が逆方向の第２のポリヌクレオ
チドの相補的塩基と対合するとき、第１のポリヌクレオチドは第２のポリヌクレ
オチドに「相補的」であるとみなす。相補的な塩基はＡとＴ（又はＡとＵ）、又
はＣとＧである。
【００５５】 本発明の核酸の「変異体」とは、基準ポリヌクレオチドに対して１個以上の塩
基が異なる核酸を意味する。変異体核酸は天然に存在する対立遺伝子変異体のよ
うに天然起源でもよいし、例えば突然変異誘発技術により得られる非天然変異体
でもよい。
【００５６】 一般に、基準核酸と変異体核酸の差は非常に小さく、基準核酸と変異体核酸の
ヌクレオチド配列は非常に似ており、多くの領域で同一である。変異体核酸に存
在するヌクレオチド変異はサイレントでもよく、即ちこのような変異体核酸によ
りコードされるアミノ酸配列が変わらないような変異でもよい。
【００５７】 他方、変異体核酸のヌクレオチド変異は基準核酸によりコードされるペプチド
に対して変異体核酸によりコードされるポリペプチドに置換、付加、欠失を生じ
るものでもよい。更に、コーディング領域のヌクレオチド変異はアミノ酸配列に
保存又は非保存置換を生じるものでもよい。
【００５８】 本発明の変異体核酸は基準核酸のポリペプチドと同一機能もしくは生体活性又
は初期核酸によりコードされるポリペプチドに対する抗体による認識能を実質的
に維持するポリペプチドをコードすることが好ましい。
【００５９】 従って、変異体核酸によってはその系統的研究により着目タンパク質の構造活
性関係を推定できるようなポリペプチドの突然変異形態をコードする。これらの
突然変異と被験疾患との関係の認識は病理の分子原因の解明につながるので重要
である。
【００６０】 本発明の基準核酸の「フラグメント」とは、基準核酸よりも長さが短く、基準
核酸と同一のヌクレオチド配列を共通部分に含むヌクレオチド配列を意味する。
【００６１】 このような本発明の核酸の「フラグメント」は場合により、より大きいポリヌ
クレオチドに含まれ、その成分を構成するものでもよい。
【００６２】 このようなフラグメントは本発明の核酸の８、１０、１２、１５、１８、２０
〜２５、３０、４０、５０、７０、８０、１００、２００、５００、１０００又
は１５００個の連続ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドを含むか、又はこのよ
うなオリゴヌクレオチドから構成される。
【００６３】 本発明のポリペプチドの「変異体」とは、そのアミノ酸配列が基準ポリペプチ
ドのアミノ酸配列に対して少なくとも１個のアミノ酸残基の置換、付加又は欠失
を１箇所以上含むポリペプチドを主に意味し、アミノ酸置換は保存置換でも非保
存置換でもよい。
【００６４】 本発明のポリペプチドの「フラグメント」とは、そのアミノ酸配列が基準ポリ
ペプチドよりも短く、これらの基準ポリペプチドとの全共通部分に同一アミノ酸
配列を含むポリペプチドを意味する。
【００６５】 このようなフラグメントは場合により、より大きいポリペプチドに含まれ、そ
の一部であってもよい。
【００６６】 本発明のポリペプチドのこのようなフラグメントは１０、１５、２０、３０〜
４０、５０、１００、２００又は３００アミノ酸長とすることができる。
【００６７】 本発明において２種のヌクレオチド又はアミノ酸配列間の「一致度百分率」は
最適に整列させた２種の配列を比較窓から比較することにより決定することがで
きる。
【００６８】 従って、比較窓内のヌクレオチド又はポリペプチド配列の部分は２種の配列の
最適整列を得るように（付加又は欠失を含まない）基準配列に対して付加又は欠
失（例えば「ギャップ」）を含むことができる。
【００６９】 百分率を計算するには、比較する２種の（核酸又はペプチド）配列で同一塩基
又は同一アミノ酸残基が検出される位置数を測定し、２種の塩基又はアミノ酸残
基が一致する位置数を比較窓内の合計位置数で割り、１００を掛けて配列一致度
百分率を得る。
【００７０】 比較に最適な配列整列はＷＩＳＣＯＮＳＩＮ ＧＥＮＥＴＩＣＳ ＳＯＦＴＷ
ＡＲＥ ＰＡＣＫＡＧＥ，ＧＥＮＥＴＩＣＳ ＣＯＭＰＯＵＴＥＲ ＧＲＯＵＰ
（ＧＣＧ），５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｏｃｔｏｒ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ
ＳＣＯＮＳＩＮのパッケージに含まれる公知アルゴリズムを使用してコンピュー
ターにより得られる。
【００７１】 例えば、配列一致度百分率はデフォルトパラメーターのみを使用してＢＬＡＳ
Ｔソフトウェア（１９９６年３月版ＢＬＡＳＴ１．４．９、１９９８年２月版Ｂ
ＬＡＳＴ２．０．４及び１９９８年９月版ＢＬＡＳＴ２．０．６の各バージョン
）により計算することができる（Ｓ．Ｆ．Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂ
ｉｏｌ．１９９０ ２１５：４０３−４１０，Ｓ．Ｆ．Ａｌｔｓｃｈｕｌら，Ｎ
ｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９７ ２５：３３８９−３４０２）
。ＢｌａｓｔはＡｌｔｓｃｈｕｌらのアルゴリズムにより基準「要求」配列に類
似／相同の配列を検索する。要求配列と使用するデータベースはペプチドでも核
酸でもよく、任意組み合わせでもよい。
【００７２】 本発明において「高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件」とは以
下の条件を意味する。 １−膜競合及びプレハイブリダイゼーション： −サケ精子ＤＮＡ４０μｌ（１０ｍｇ／ｍｌ）とヒト胎盤ＤＮＡ４０μｌ（１０
ｍｇ／ｍｌ）を混合する。 −５分間９６℃で変性させた後、混合物を氷に浸ける。 −２×ＳＳＣを捨て、膜を入れたハイブリダイゼーションチューブにホルムアミ
ド混合物４ｍｌを注入する。 −２種の変性ＤＮＡの混合物を加える。 −４２℃で５〜６時間回転下にインキュベートする。 ２−標識プローブ競合： −リピート量に応じてＣｏｔ Ｉ ＤＮＡ１０〜５０μｌを標識精製プローブに
加える。 −９５℃で７〜１０分間変性させる。 −６５℃で２〜５時間インキュベートする。 ３−ハイブリダイゼーション： −プレハイブリダイゼーション混合物を捨てる。 −サケ精子ＤＮＡ４０μｌとヒト胎盤ＤＮＡ４０μｌを混合し、５分間９６℃で
変性させた後、氷に浸ける。 −ハイブリダイゼーションチューブにホルムアミド混合物４ｍｌと、２種のＤＮ
Ａの混合物と、標識プローブ／変性Ｃｏｔ Ｉ ＤＮＡを加える。 −４２℃で１５〜２０時間回転下にインキュベートする。 ４−洗浄： −室温で２×ＳＳＣで洗浄し、濯ぐ。 −室温で２×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳ（６５℃）で５分間２回洗浄する。 −６５℃で１×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳ（６５℃）で１５分間２回洗浄する。 膜をサランラップで包み、露光する。
【００７３】 上記ハイブリダイゼーション条件は２０ヌクレオチド〜数百ヌクレオチド長の
核酸分子を高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズさせるのに適している
。
【００７４】 言うまでもないが、上記ハイブリダイゼーション条件はハイブリダイズさせた
い核酸の長さ又は選択する標識種に応じて当業者に公知の技術により適応させる
ことができる。
【００７５】 適当なハイブリダイゼーション条件は例えばＨＡＭＥＳとＨＩＧＧＩＮＳ（１
９８５）の著書又はＦ．ＡＵＳＵＢＥＬら（１９９９）の著書に記載されている
教示に従って適応させることができる。
【００７６】 本発明の核酸とポリペプチドの詳細 本発明の核酸配列とアミノ酸配列の要約は実施例の後に表Ｉとして示す。
【００７７】 ＧＳ９００２Ｓ３１遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９００２Ｓ３１と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジ
ャーＲＮＡを本発明により単離した。
【００７８】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号１の配列である。
【００７９】 配列番号１の配列は５５２ヌクレオチド長である。
【００８０】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【００８１】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号１の配列の転写産物
の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ＲＮＡを使用してこれらの分析
を実施した処、ＧＳ９００２Ｓ３１遺伝子は胎児脳、肝臓及び胎盤で発現される
ことが判明した。
【００８２】 ＧＳ９１０３３１遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１０３３１と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応する２種のメッセ
ンジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【００８３】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号２の配列である
。
【００８４】 配列番号２の配列は１２４６ヌクレオチド長である。
【００８５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号３の配列である
。
【００８６】 配列番号３の配列は３０３５ヌクレオチド長である。
【００８７】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０及びＶｅｒｓｉｏｎ
１１５）で検索した処、配列一致は認められなかった。
【００８８】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号２の配列の転写産物
の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの分
析を実施した処、ＧＳ９１０３３１遺伝子は胎児脳で発現されることが判明した
。
【００８９】 更に、夫々配列番号８２及び８３の配列をもつプローブを使用してノーザンブ
ロットにより転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から市販されて
いるブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転写産物が存在することが判明
した。
【００９０】 配列番号８２の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々肝臓と
心臓で１．６５ｋｂ、脳で１．４ｋｂであった。
【００９１】 配列番号８３の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々心臓で
１．６５ｋｂと２．４ｋｂ、肝臓で１．６５ｋｂであった。
【００９２】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【００９３】 ＧＳ９１４５５４遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１４５５４と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。
【００９４】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号４の配列である。
【００９５】 配列番号４の配列は１４７９ヌクレオチド長である。
【００９６】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【００９７】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号４の配列の転写産物
の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの分
析を実施した処、ＧＳ９１４５５４遺伝子は胎児脳、胎盤及び肝臓で発現される
ことが判明した。
【００９８】 更に、配列番号８４の配列をもつプローブを使用して実施例１に記載するプロ
トコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転
写産物が存在することが判明した。
【００９９】 配列番号８４の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々膵臓と
胎盤で１．０、１．３、１．７及び２．８ｋｂ、腎臓、骨格筋、心臓及び肝臓で
１．０、１．３及び１．７ｋｂ、脳と肺で１．７ｋｂであった。
【０１００】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０１０１】 ＧＳ９１４７３９遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１４７３９と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応する２種のメッセ
ンジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０１０２】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号５の配列である
。
【０１０３】 配列番号５の配列は５１６９ヌクレオチド長である。
【０１０４】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
番号５の配列との配列相同は認められなかった。
【０１０５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号６の配列である
。
【０１０６】 配列番号６の配列は７７２３ヌクレオチド長である。この配列は配列番号６の
配列の１２１位ヌクレオチドから１５１７位ヌクレオチドまでのオープンリーデ
ィングフレーム（ＯＲＦ）を含む。翻訳開始コドンは配列番号６の配列の１３２
位ヌクレオチドから開始する。コーディング配列は配列番号６の配列の１３２位
ヌクレオチドから開始し、１５１７位ヌクレオチドまでである。配列番号６の配
列は配列番号６の配列の７６８６位ヌクレオチドから開始する配列「ＡＴＴＡＡ
Ａ」のポリアデニル化シグナルを含む。配列「ＣＣＡ ＣＴＣ ＧＣＣ ＡＴＧ
」のコザックモチーフは配列番号６の配列の１２３位ヌクレオチドから開始する
。
【０１０７】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１５，アクセション番号Ａ
Ｆ０８８０３１）で検索した処、 −配列番号６の配列の１位ヌクレオチドから１４６位ヌクレオチドと、 −配列番号６の配列の２４３位ヌクレオチドから５７３位ヌクレオチドの２箇所
に１００％の配列相同が認められた。
【０１０８】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号５の配列の転写産物
の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの分
析を実施した処、ＧＳ９１４７３９遺伝子は胎児脳で発現されることが判明した
。
【０１０９】 更に、配列番号８５の配列をもつプローブを使用してノーザンブロットにより
転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット
（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転写産物が存在することが判明した。
【０１１０】 配列番号８５の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は心臓、肝臓
、骨格筋及び腎臓で１ｋｂであった。
【０１１１】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０１１２】 配列番号６の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号６のヌクレオチド配列のオープンリーディングフレームは配列番号１
２９の配列を構成する４６１アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０１１３】 配列番号１２９の配列のヌクレオチド領域２４０〜１４８１及び１１５１〜１
６７５には、データベースＧｅｎｐｅｐｔ１１５、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ３８、ｔ
ｒＥＭＢＬ及びＰＩＲ ｖａｃｅのアクセション番号ＡＦ０３５３６０（ヒト）
、ＡＦ１８６４６１（ラット）、ＡＦ１８６４６０（Ｍｕｓ ｓｐｒｅｔｕｓ）
、ＡＦ１９６４８１（ヒト）、ＡＦ１９６４８０（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）
、Ｔ０９４８２（ヒト）及びＴ０９０１３（マウス）（リングフィンガーＦｘｙ
）と約３０％の配列一致度が認められた。アクセション番号ＤＡ１９１Ｐ２０．
２、Ａ４９６５６及びＩ４９６４２との間にも多少の配列相同が認められた。
【０１１４】 配列番号１２９の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０１１５】 ＧＳ９１５５７４遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１５５７４と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。
【０１１６】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号７の配列である。
【０１１７】 配列番号７の配列は１０４６ヌクレオチド長である。
【０１１８】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０１１９】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号７の配列の転写産物
の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの分
析を実施した処、ＧＳ９１５５７４遺伝子は胎児脳、子宮、脳、心臓、前立腺、
胎児肝臓、肝臓、胎盤、睾丸及び腎臓で発現されることが判明した。
【０１２０】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０１２１】 ＧＳ９３０３２１遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３０３２１と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。
【０１２２】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号８の配列である。
【０１２３】 配列番号８の配列は２８０ヌクレオチド長である。
【０１２４】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０１２５】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号８の配列の転写産物
の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの分
析を実施した処、ＧＳ９３０３２１遺伝子は胎児脳、肝臓及び心臓で発現される
ことが判明した。
【０１２６】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０１２７】 ＧＳ９３１３１１遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３１３１１と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。
【０１２８】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号９の配列である。
【０１２９】 配列番号９の配列は４７９ヌクレオチド長である。この配列は配列番号９の配
列の３位ヌクレオチドから９８位ヌクレオチドまでの部分オープンリーディング
フレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０１３０】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０１３１】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号９の配列の転写産物
の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの分
析を実施した処、ＧＳ９３１３１１遺伝子は胎児脳、肝臓、心臓、胎盤、睾丸及
び腎臓で発現されることが判明した。
【０１３２】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０１３３】 配列番号９の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号９の核酸配列の部分オープンリーディングフレームは配列番号１３０
の配列を構成する３２アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０１３４】 ＢＬＡＳＴで検索した処、データベースＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ
３６，最終更新日１９９９年５月３日）及びＰＲＯＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏ
ｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２，１９９７年１１月で得られる相同ドメイン）の
照合配列との間に有意相同は認められなかった。
【０１３５】 配列番号１３０の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０１３６】 ＧＳ９３４６６０遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３４６６０と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。
【０１３７】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号１０の配列である。
【０１３８】 配列番号１０の配列は２５９９ヌクレオチド長である。
【０１３９】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０１４０】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号１０の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９３４６６０遺伝子は胎児脳で発現されることが判明し
た。
【０１４１】 更に、配列番号８６の配列をもつプローブを使用して実施例１に記載するプロ
トコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転
写産物が存在することが判明した。
【０１４２】 配列番号８６の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々胎盤で
１ｋｂ、２ｋｂ、３ｋｂ及び７．５ｋｂ、心臓で２、３及び７．５ｋｂ、腎臓、
膵臓、骨格筋、肺及び脳で７．５ｋｂであった。
【０１４３】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０１４４】 ＧＳ９３８３１５遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３８３１５と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。
【０１４５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号１１の配列である。
【０１４６】 配列番号１１の配列は２２２ヌクレオチド長である。
【０１４７】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０１４８】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号１１の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９３８３１５遺伝子は胎児脳、肝臓、心臓及び腎臓で発
現されることが判明した。
【０１４９】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０１５０】 ＧＳ９３９５３遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３９５３と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応する２種のメッセン
ジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０１５１】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号１２の配列であ
る。
【０１５２】 配列番号１２の配列は３４２２ヌクレオチド長である。
【０１５３】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０１５４】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号１３の配列であ
る。
【０１５５】 配列番号１３の配列は５７９１ヌクレオチド長である。この配列は配列番号１
３の配列の３位ヌクレオチドから５５４位ヌクレオチドまでの部分オープンリー
ディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０１５６】 配列番号１３の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）のアクセション番号ＡＣ０１３７４０．２、ＡＣ０１３７８３．２及びＡＦ０
８６１７５．１の間には多少の相同性が認められた。
【０１５７】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号１２の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９３９５３遺伝子は胎児脳で発現されることが判明した
。
【０１５８】 更に、配列番号８７の配列をもつプローブを使用して実施例１に記載するプロ
トコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転
写産物が存在することが判明した。
【０１５９】 配列番号８７の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は心臓、脳、
胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓及び膵臓で８ｋｂであった。
【０１６０】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０１６１】 配列番号１３の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号１３の核酸配列の部分オープンリーディングフレームは配列番号１３
１の配列を構成する１８３アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０１６２】 配列番号１３１の配列の領域６〜１６２とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅ
ｒｓｉｏｎ １１５）の配列番号ｇ３８７８５７１（Ｚ４６３８１）及びｔｒＥ
ＭＢＬデータベース（１９９９年８月Ｖｅｒｓｉｏｎ）の配列番号ＥＭ：Ｑ２１
４５３ ＭＯ１Ｆ１．４ ＰＲＯＴＥＩＮの間には４５％の相同性が認められた
。
【０１６３】 配列番号１３１の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０１６４】 ＧＳ９３９８７４遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３９８７４と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応する２種のメッセ
ンジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０１６５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号１４の配列であ
る。
【０１６６】 配列番号１４の配列は２６１５ヌクレオチド長である。
【０１６７】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０１６８】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号１５の配列であ
る。
【０１６９】 配列番号１５の配列は２５５１ヌクレオチド長である。この配列は５０位ヌク
レオチドから９５８位ヌクレオチドまでのオープンリーディングフレームと、６
７位ヌクレオチドから９５８位ヌクレオチドまでのコーディング配列を含む。
【０１７０】 配列番号１５の配列の２０４４ヌクレオチドとＧｅｎＢａｎｋデータベース（
Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６）のアクセション番号ＡＫ００１３５５の配列の間には
一致度９９％の相同性が認められた。
【０１７１】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号１４の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９３９８７４遺伝子は胎児脳、子宮、脳、心臓、前立腺
、胎児肝臓、肝臓、胎盤、睾丸及び腎臓で発現されることが判明した。
【０１７２】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０１７３】 配列番号１５の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号１５の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１３２の
配列を構成する２９１アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０１７４】 ２３３アミノ酸（配列番号１３２の１４〜２４６）とＧｅｎＰｅｐｔデータベ
ース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１５）の照合配列ｇ５８３２９４５（ＡＬ１１７１９
５）の間に３５％の相同性が認められた。
【０１７５】 ２４５アミノ酸（配列番号１３２の３０〜２７４）とＧｅｎＰｅｐｔデータベ
ース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１５）の照合配列ｇ５８３２９４２（ＡＬ１１７１９
５）との間に３２％の相同が認められた。
【０１７６】 配列番号１３２の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０１７７】 ＧＳ９１１３７０遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１１３７０と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。
【０１７８】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号１６の配列である。
【０１７９】 配列番号１６の配列は７７５ヌクレオチド長である。
【０１８０】 この配列は配列番号１６の配列の１位ヌクレオチドから１４４位ヌクレオチド
までの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０１８１】 以下の配列との間にヌクレオチド相同が認められた。
【０１８２】 ・ＣｐＧ島を含むヒトゲノムＤＮＡのＭｓｅ１フラグメント（クローン９２ｅ
１０、リバースリードｃｐｇ９２ｅ１０．ｒｔ１ａ）であるＧｅｎＢａｎｋ配列
ｇｉ｜１０２２２２４｜と２２９ｂｐ（５０〜２８０ｂｐ位）で９６％相同、 ・ヒトＳｅｃ６１複合体βサブユニットｍＲＮＡであるＧｅｎＢａｎｋ配列ｇ
ｉ｜４５９８３３｜と１４５ｂｐ（１〜１４４ｂｐ位）で１００％相同。
【０１８３】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号１６の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９１１３７０遺伝子は胎児脳で発現されることが判明し
た。
【０１８４】 更に、夫々配列番号８８及び８９の配列をもつプローブを使用して実施例１に
記載するプロトコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析し
た処、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５
９−１）に転写産物が存在することが判明した。
【０１８５】 配列番号８８の配列をもつプローブと配列番号８９の配列をもつプローブで検
出された転写産物の寸法は膵臓で７．４ｋｂであった。
【０１８６】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０１８７】 配列番号１６の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号１６の核酸配列の部分オープンリーディングフレームは配列番号１３
３の配列を構成する４８アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０１８８】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： この潜在的ＯＲＦ（４８ａａ）は夫々データベースＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅ
ｒｓｉｏｎ ３６，最終更新日１９９９年５月３日）、Ｇｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎ
ｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９９年５月７日の翻訳）、非冗
長ＰＩＲ（非冗長ＰＩＲ配列，Ｖｅｒｓｉｏｎ ５７）及びＰＲＯＤＯＭ（Ｓｗ
ｉｓｓｐｒｏｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２，１９９７年１１月に検出される相
同ドメイン）に含まれる配列ｓｐ｜Ｐ３８３９１｜、ｇｂ｜ＡＡＡ１９６３９．
１｜、ＰＩＲ（非冗長ＰＩＲ配列，Ｖｅｒｓｉｏｎ ５７）｜Ｓ｜Ｓ４２４１０
及び１８６５２ ｐ３４．２（１）のヒト輸送タンパク質Ｓｅｃ６１複合体βサ
ブユニットと３３ａ（１６〜４８ａａ位）で一致する。
【０１８９】 この一致は各種タンパク質データベース（ＰＩＲ：（非冗長ＰＩＲ配列，Ｖｅ
ｒｓｉｏｎ ５７）、ＰＲＯＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３
４．２，１９９７年１１月に検出される相同ドメイン）、及びＧｅｎｂａｎｋの
翻訳であるＥＭＢＬ（ＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７
，１９９８年１１月）とＧｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１
，最終更新日１９９９年５月７日の翻訳））で認められる。
【０１９０】 推定機能： タンパク質複合体ｓｅｃ６１は小胞体における新生タンパク質の細胞転流機構
の中心成分である。従って、ＧＳ９１１３７０遺伝子はｓｅｃ６１複合体βサブ
ユニットとの相同性により、この機構の新規成分をコードする遺伝子であると考
えられる。従って、この遺伝子はタンパク質転流、従って、コレステロール流出
メカニズムに関与するタンパク質の輸送に役割を果たすと考えられるため、タン
ジール病／ＦＤＨ患者に認められる欠損の研究に有用な遺伝子である。
【０１９１】 従って、配列番号１３３の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節
、特にタンジール病又は家族性ＨＤＬ欠損症に関与している可能性がある。
【０１９２】 従って、配列番号１３３の配列をもつポリペプチドはＨＤＬによるコレステロ
ール逆輸送の重要な段階に関与している可能性がある。
【０１９３】 更に、配列番号１３３の配列をもつポリペプチドは染色体９の９ｑ３１〜３４
遺伝子座に遺伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０１９４】 ＧＳ９１３９２０遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１３９２０と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０１９５】 第１の配列を単離及び特性決定し、このｃＤＮＡの核酸配列を配列番号１７の
配列とした。
【０１９６】 配列番号１７の配列は４９１ヌクレオチド長である。
【０１９７】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０１９８】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号１７の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９１３９２０遺伝子は肝臓と心臓で発現されることが判
明した。
【０１９９】 配列番号１７の配列から夫々配列番号１０２及び１０３の配列をもつ２種のヌ
クレオチドプライマーを合成した。これらのヌクレオチドプライマーにより配列
番号１８の配列を構成するＧＳ９１３９２０のｃＤＮＡを増幅することができた
。
【０２００】 増幅反応は以下の条件下に実施したが、これらの条件は記載する特定プライマ
ーを使用して着目転写産物の配列を単離する本発明の全候補遺伝子に適用可能で
ある。
【０２０１】 各ＰＣＲ反応はその緩衝液の存在下に各ｄＮＴＰ４００μＭ、各プライマー０
．５μＭ、ＭｇＣｌ２２．５ｍＭ、ＤＮＡ５０ｎｇ又はｃＤＮＡ約２５ｎｇ及び
Ｔｈｅｒｍｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ（Ｔａｑ）ＤＮＡポリメラーゼ（Ａｍｐｌ
ｉ Ｔａｑ Ｇｏｌｄ；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）２単位を使用して実施した
。反応はサーモサイクラー９７００（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で９６ウェル
マイクロプレートで実施した。９４℃で１０分間の初期変性後に、９４℃で３０
秒間変性、６４℃（２サイクル）、６１℃（２サイクル）、５８℃（２サイクル
）及び５５℃（２８サイクル）で３０秒間アニーリング、７２℃で１分／ｋｂの
伸長からなる３０サイクルのプログラムを適用した。７２℃で７分間伸長してプ
ログラムを終了した。
【０２０２】 配列番号１８の核酸配列は２９３ヌクレオチド長である。この配列は２２７位
ヌクレオチドから２９３位ヌクレオチドまでの部分オープンリーディングフレー
ム（ＯＲＦ）をもつ。
【０２０３】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０２０４】 配列番号１８の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号１８の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１３４の
配列を構成する２２アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０２０５】 ＢＬＡＳＴで検索した処、ＧｅｎＰｅｐｔ（ＧｅｎＢａｎｋ ｖ１１５の翻訳
）、ＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，１９９９年８月Ｖｅｒｓｉｏｎ）、Ｓ
ｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３８）及びＰＩＲ：（非冗長ＰＩＲ配列，
Ｖｅｒｓｉｏｎ ６２，１９９９年９月）の各データベースの照合配列との間に
有意相同は認められなかった。
【０２０６】 配列番号１３４の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病又は家族性ＨＤＬ欠損症に関与している可能性がある。
【０２０７】 従って、配列番号１３４の配列をもつポリペプチドはＨＤＬによるコレステロ
ール逆輸送の重要な段階に関与している可能性がある。
【０２０８】 更に、配列番号１３４の配列をもつポリペプチドは染色体９の９ｑ３１〜３４
遺伝子座に遺伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０２０９】 ＧＳ９１４３７遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１４３７と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応する２種のメッセン
ジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０２１０】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号１９の配列であ
る。
【０２１１】 配列番号１９の配列は２４４２ヌクレオチド長である。
【０２１２】 この配列は配列番号１９の配列の２位ヌクレオチドから２８６位ヌクレオチド
までの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０２１３】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０２１４】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号２０の配列であ
る。
【０２１５】 配列番号２０の配列は４６０８ヌクレオチド長である。この配列は１位ヌクレ
オチドから３２７位ヌクレオチドまでの部分オープンリーディングフレーム（Ｏ
ＲＦ）を含む。
【０２１６】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６）で配列番号２０の配
列と以下の配列相同が認められた。
【０２１７】 ・ヒトｃＤＮＡ ＦＬＪ２０２８７ ｆｉｓ、クローンＨＥＰ０４３９０、長
さ＝３０４３、ＧｅｎＢａｎｋ登録日２０００年２月２２日である配列ｇ７０２
０２７９（ＡＫ０００２９４）の２８０７〜２５９５位と２１３ｂｐ（８５〜２
９７位）で１００％相同、 ・Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓクローンＸＸ−ＢＡＣ３９４、長さ＝１７０３５
１（シーケンシング中）、未配置断片である配列ｇ３８５００４８（ＡＪ００４
８２８）と２１９ｂｐ（８２〜３００位）で８８％相同。
【０２１８】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号１９の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９１４３７遺伝子は胎児脳、肝臓、心臓、前立腺、胎盤
、子宮、睾丸、腎臓及び骨格筋で発現されることが判明した。
【０２１９】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０２２０】 配列番号１９の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号１９の核酸配列の部分オープンリーディングフレームは配列番号１３
５の配列を構成する９５アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０２２１】 ＢＬＡＳＴで検索した処、データベースＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ
３６，最終更新日１９９９年５月３日）、ＰＲＯＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ
，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２及び３８に検出される相同ドメイン）、Ｇｅｎｐｅ
ｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０、１１１及び１１５の翻訳）、ＰＩＲ（非冗長
ＰＩＲ配列、Ｖｅｒｓｉｏｎ ５７）、ＰＤＢ（ＰＲＯＴＥＩＮ ＤＡＴＡ Ｂ
ＡＮＫ、１９９９年２月）及びＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉ
ｏｎ ７，１９９８年１１月）の照合配列との間に有意ＢＬＡＳＴ相同は認めら
れなかった。
【０２２２】 配列番号１３５の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０２２３】 配列番号２０の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号２０の核酸配列に含まれるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）
は配列番号１３６の配列を構成する１０８アミノ酸長のポリペプチドを潜在的に
コードする。
【０２２４】 データベースＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３６）、Ｇｅｎｐｅｐｔ
（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１５）、ＰＩＲ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ６２，１９９９年９月
）及びｔｒＥＭＢＬ（１９９９年８月Ｖｅｒｓｉｏｎ）と配列相同は認められな
かった。
【０２２５】 配列番号１３６の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０２２６】 ＧＳ９１５０７遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１５０７と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応する２種のメッセン
ジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０２２７】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号２１の配列であ
る。
【０２２８】 配列番号２１の配列は１６２７ヌクレオチド長である。
【０２２９】 この配列は配列番号２１の配列の１位ヌクレオチドから６４０位ヌクレオチド
までの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０２３０】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０２３１】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号２２の配列であ
る。
【０２３２】 配列番号２２の配列は２３３３ヌクレオチド長である。この配列は３６８位ヌ
クレオチドから１３４８位ヌクレオチドまでの完全オープンリーディングフレー
ム（ＯＲＦ）を含む。翻訳開始コドンは配列番号２２の配列の３７１位ヌクレオ
チドから開始する。コーディング配列は３７１位ヌクレオチドから開始し、１３
４８位ヌクレオチドまでである。
【０２３３】 配列番号２２の配列はＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列と以下の相同性をもつ。
【０２３４】 ・ヒトｃＤＮＡ ＦＬＪ２０３００ ｆｉｓ、クローンＨＥＰ０６４６５（２
３３１ｂｐ）であるアクセション番号ＡＫ０００３０７と２３１６ｂｐ（１１５
〜２４２０ｂｐ位）で９９％核酸一致。
【０２３５】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号２１の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９１５０７遺伝子は胎児脳で発現されることが判明した
。
【０２３６】 更に、配列番号９０の配列をもつプローブを使用して実施例１に記載するプロ
トコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転
写産物が存在することが判明した。
【０２３７】 配列番号９０の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々膵臓、
腎臓、骨格筋、肺、胎盤及び脳で２ｋｂ及び７．５ｋｂであった。
【０２３８】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０２３９】 配列番号２１の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号２１の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１３７の
配列を構成する２１３アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０２４０】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： この２１３ａａ潜在的ＯＲＦは以下のような種々のタンパク質とモチーフ型相
同性をもつドメインをもつ。
【０２４１】 ・染色体ＩＩに局在する仮想タンパク質（３９ＫＤ）Ｔ２８Ｄ９．３のドメイ
ンであるＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３６、最終更新日１９９９年５
月３日）の配列ｓｐ｜Ｑ１００２２｜及びＰＲＯＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ，
Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２，１９９７年１１月に検出される相同ドメイン）の配
列２８７０５ ｐ３４．２（１）ＹＳＸ３＿ＣＡＥＥＬと１５５ａａ（４〜１５
８ａａ位）で２９％相同、 ・過酸化水素により誘導されるタンパク質（マウス配列のフラグメント）であ
る非冗長ＰＩＲ（非冗長ＰＩＲ配列、Ｖｅｒｓｉｏｎ ５７）の配列｜Ｓ｜Ｓ６
６６６８と１２７ａａ（６〜１３２ａａ位）で２５％相同。
【０２４２】 更に、ＧｅｎＢａｎｋとＥＭＢＬの翻訳コーディング配列（ＴｒＥＭＢＬ（Ｓ
Ｐ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８年１１月）、Ｇｅｎｐｅｐｔ
（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９９年５月７日の翻訳
））と相同であるならば、「ホスファチジン酸ホスファターゼ」型潜在タンパク
質のアノテーションが加えられる。
【０２４３】 ・小胞体のトランスメンブレンタンパク質であるＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−
ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８年１１月）の配列ｓｐ｜Ｐ９７５
４４｜Ｐ９７５４４と２００ａａ（６〜２０５ａａ位）で３４％相同、 ・２型βホスファチジン酸ホスファターゼ、ホスファチジン酸ホスホヒドロラ
ーゼ、ヒトリン脂質ホスファターゼであるＧｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ
１１０及び１１１，最終更新日１９９９年５月７日の翻訳）の配列ｇｉ｜４１０
５１３９｜、ヒトホスファチジン酸ホスホヒドロラーゼ相同体であるＧｅｎｐｅ
ｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９９年５月７日の
翻訳）の配列ｇｉ｜３０４７１７３｜及びホスファチジン酸ホスファターゼ２ｂ
であるｇｉ｜２４６７３００｜と２０４ａａ（６〜２０９ａａ位）で３３％相同
、 ・マウスホスファチジン酸ホスファターゼであるＧｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａ
ｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９９年５月７日の翻訳）の配列ｇｉ
｜１４８７８７３｜と２０３ａａ（６〜２０８ａａ位）で３１％相同、 ・ホスファチジン酸ホスファターゼ２ＡであるＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−Ｔ
ｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８年１１月）の配列ｓｐ｜Ｑ６１４６
９｜Ｑ６１４６９｜と２０３ａａ（６〜２０８ａａ位）で３１％相同。
【０２４４】 配列番号２２の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号２２の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１３８の
配列を構成する３２５アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０２４５】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： ＧｅｎＢａｎｋ（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６）とＥＭＢＬの翻訳コーディング配
列（ＴｒＥＭＢＬ（１９９９年８月Ｖｅｒｓｉｏｎ）、Ｇｅｎｐｅｐｔ（Ｖｅｒ
ｓｉｏｎ １１５））と相同であるならば、「ホスファチジン酸ホスファターゼ
」型潜在タンパク質のアノテーションが加えられる。
【０２４６】 ・小胞体のトランスメンブレンタンパク質であるＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ：ｓｐ｜
Ｐ９７５４４｜Ｐ９７５４４と３１６ａａ（２〜３１７ａａ位）で３０％相同、 ・２型βホスファチジン酸ホスファターゼ、ホスファチジン酸ホスホヒドロラ
ーゼ、リン脂質ホスファターゼ（ヒト）であるＧｅｎｐｅｐｔ １１６ ｇｉ｜
４１０５１３９｜ＡＦ０４３３２９、ホスファチジン酸ホスホヒドロラーゼ相同
体（ヒト）であるＧｅｎｐｅｐｔ １１６ ｇｉ｜３０４７１７３｜ＡＦ０１７
８６及びホスファチジン酸ホスファターゼ２ｂであるｇｉ｜２４６７３００｜Ａ
Ｂ０００８８９と３２０ａａ（２〜３２１ａａ位）で３０％相同、 ・長さ＝３１２ａａのトランスメンブレンタンパク質（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒ
ｖｅｇｉｃｕｓ）であるＧｅｎｐｅｐｔ １１６ ｇｉ １６８４７４５ Ｙ０
７７８３と３１６ａａ（２〜３１７ａａ位）で３０％相同、 ・長さ＝３１１ａａのホスファチジン酸ホスファターゼ２ＢであるＳＰ−Ｔｒ
ＥＭＢＬ ＥＭ：Ｏ１４４９５と３２０ａａ（２〜３１７ａａ位）で３０％相同
。
【０２４７】 配列番号１３７及び１３８の配列をもつポリペプチドの推定機能： ＧＳ９１５０７遺伝子は位置候補であると同時に、ＨＤＬ粒子により媒介され
る細胞内コレステロールの流出に関連する細胞内シグナル伝達カスケードに役割
を果たすという推定機能をもち、タンジール病と家族性ＨＤＬ欠損症（ＦＨＤ）
に関与する新規タンパク質（ホスファチジン酸ホスファターゼ）をコードする遺
伝子であるという点でタンジール病とＦＤＨの機能研究に有用である。
【０２４８】 配列番号１３７及び１３８の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調
節、特にタンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺
伝子座に遺伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０２４９】 ＧＳ９１５２３１遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１５２３１と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応する２種のメッセ
ンジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０２５０】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号２３の配列であ
る。
【０２５１】 配列番号２３の配列は２７６４ヌクレオチド長である。
【０２５２】 この配列は配列番号２３の配列の３位ヌクレオチドから１２２０位ヌクレオチ
ドまでの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０２５３】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０２５４】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号２４の配列であ
る。
【０２５５】 配列番号２４の配列は３２２８ヌクレオチド長である。この配列は３７位ヌク
レオチドから１３０４位ヌクレオチドまでのオープンリーディングフレーム（Ｏ
ＲＦ）を含む。コーディング配列は配列番号２４の配列の４９位ヌクレオチドか
ら開始し、１３０４位ヌクレオチドまでである。翻訳開始コドンは４９位ヌクレ
オチドから開始する。配列番号２４の配列の３１４２位ヌクレオチドからポリア
デニル化シグナルが開始している。
【０２５６】 配列番号２４の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の下記照合配列の間に配列相同性が認められた。
【０２５７】 ・ヒトｍＲＮＡ；ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ５８６Ｈ０５１（クローンＤＫＦＺｐ
５８６Ｈ０５１由来）、長さ＝１７９５、登録日２０００年２月１８日、原登録
日１９９９年５月１５日（ＭＩＰＳ，Ａｍ Ｋｌｏｐｆｅｒｓｐｉｔｚ １８ａ
，Ｄ−８２１５２，Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ、ドイツ）である配列ｇ４８８４３
３７（ＡＬ０５０１３０）の１〜２１７位と２１７ｂｐ（２７０４〜２９２０位
）で１００％相同、 ・ヒトクローンＲＰ１１−３０７Ｐ９（シーケンシング中）、未配置３６断片
、長さ＝２０３４５６である配列ｇ６５３９４０２（ＡＣ０１６９０４）と３９
３ｂｐ（２７７３〜３１６５）で１００％、１５３ｂｐ（９１３〜１０６５）で
１００％、１１１ｂｐ（１０８３〜１１９３）で１００％、８４ｂｐ（２３４１
〜２４２４）で８４％の４個の相同フラグメント、 ・Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ転写因子ＲｅｌＢ（ｒｅｌｂ）ｍＲＮＡ、完全
化合物、長さ＝２８５１である配列ｇ５３０５２２７（ＡＦ０２９２６０）と２
５８ｂｐ（５２９〜７８６）で８３％、６６ｂｐ（１１９５〜１２６０）で８９
％、１８５ｂｐ（９１〜２７５）で８０％の各相同フラグメント。
【０２５８】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号２３の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９１５２３１遺伝子は胎児脳で発現されることが判明し
た。
【０２５９】 更に、配列番号９１の配列をもつプローブを使用して実施例１に記載するプロ
トコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転
写産物が存在することが判明した。
【０２６０】 配列番号９１の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々心臓と
骨格筋で１．３ｋｂ、２ｋｂ、４ｋｂ、４．４ｋｂ及び７．５ｋｂ、肝臓と腎臓
で１．３ｋｂ、２ｋｂ、４ｋｂ及び４．４ｋｂ、脳で１．３ｋｂ、２ｋｂ、４．
４ｋｂ及び７．５ｋｂ、膵臓で１．３ｋｂ、２ｋｂ及び４．４ｋｂであった。
【０２６１】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０２６２】 配列番号２３の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号２３の核酸配列の部分オープンリーディングフレームは配列番号１３
９の配列を構成する４０６アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０２６３】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： ・Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのアルコールデヒドロゲナーゼ／リビトールデヒドロゲ
ナーゼに類似の配列ｇｂ｜ＡＡＢ９３４５６．１｜（Ｕ２８７３９）のタンパク
質翻訳であるＧｅｎｐｅｐｔ（ＧｅｎＢａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新
日１９９９年５月７日の翻訳）配列ｇｉ：２７３１３７７及びＳＰ−ＴｒＥＭＢ
Ｌ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８年１１月）配列Ｑ０９
９７９と４０１ａａ（１〜４０１ａａ）で５１％相同、 ・夫々Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ配列であるタンパク質１ＡＨＩ｜
Ａ（Ｎａｄｈ及び７−オキソグリコケノデオキシコール酸複合化Ａ鎖７α−ヒド
ロキシステロイドデヒドロゲナーゼ）に対応するｇｉ｜１８２７７１３｜、タン
パク質１ＡＨＩ｜Ｂ（Ｎａｄｈ及び７−オキソグリコケノデオキシコール酸複合
化Ｂ鎖７α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ）に対応するｇｉ｜１８２
７７１４｜、タンパク質１ＡＨＨ｜Ａ（Ｎａｄ＋複合化Ａ鎖７α−ヒドロキシス
テロイドデヒドロゲナーゼ）に対応するｇｉ｜１８２７７１５｜、タンパク質１
ＡＨＨ｜Ｂ（Ｎａｄ＋複合化Ｂ鎖７α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ
）に対応するｇｉ｜１８２７７１６｜、タンパク質１ＦＭＣ｜Ａ（Ｎａｄｈ及び
７−オキソグリコケノデオキシコール酸複合化Ａ鎖７α−ヒドロキシステロイド
デヒドロゲナーゼ）に対応するｇｉ｜１９４３５３３｜、及びタンパク質１ＦＭ
Ｃ｜Ｂ（Ｎａｄｈ及び７−オキソグリコケノデオキシコール酸複合化Ｂ鎖７α−
ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ）に対応するｇｉ｜１９４３５３４｜と
１６４ａａ（４７〜２０５ａａ位）で３０％相同、 ・Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種Ｌｂ４００のタンパク質シスビフェニル−２，３
−ジヒドロジオール−２，３−デヒドロゲナーゼに対応するＰｒｏｔｅｉｎ Ｄ
ａｔａ Ｂａｎｋ配列ｇ｜２６２４４９７｜と１３１ａａ（５３〜１８３ａａ位
）で２９％相同、 ・Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓのタンパク質３−オキソアシル（アシ
ルキャリヤータンパク質）レダクターゼホモログｙｏｘＤに対応するＰＩＲデー
タベース（非冗長ＰＩＲ配列，Ｖｅｒｓｉｏｎ ５７）：ＰＩＲ：（非冗長ＰＩ
Ｒ配列，Ｖｅｒｓｉｏｎ ５７）配列｜Ｄ６９９３０｜及びタンパク質ＹＯＸＤ
＿ＢＡＣＳＵ（ＲＴＰ−ＰＥＬＢ領域（ＯＲＦ２３８）に存在する仮想オキシド
レダクターゼ）に対応するＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３６，最終更
新日１９９９年５月３日）配列ｓｐ｜Ｐ１４８０２｜と１９４ａａ（３〜１９６
ａａ位）で２７％相同、 ・脂質運搬ステロールキャリヤーＳＣＰ−２非特異的前駆物質エストラジオー
ルβ−デヒドロゲナーゼ１７β−ヒドロキシステロイドタンパク質に対応するＰ
ＲＯＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２，１９９７年１１
月に検出される相同ドメイン）（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３６，
最終更新日１９９９年５月３日）に検出される相同ドメイン）配列２６７５ ｐ
３４．２（１１）ＮＬＴＰ（５）ＤＨＢ４（３）ＰＸ１８（２）と４４ａａ（３
５３〜３９６ａａ位）で５２％相同、 ・タンパク質ＤＨＢ４ヒトエストラジオール１７β−デヒドロゲナーゼ４（Ｅ
Ｃ１．１．１．６２）（１７−β−ＨＳＤ４）（１７β−ヒドロキシステロイド
デヒドロゲナーゼ４）に対応するＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３６，
最終更新日１９９９年５月３日）配列ｓｐ｜Ｐ５１６５９｜と１６７ａａ（２３
３〜３９９ａａ位）で２７％相同。
【０２６４】 配列番号２４の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号２４の核酸配列のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）は配列番
号１４０の配列を構成する４２２アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードす
る。
【０２６５】 以下の配列相同が認められた。
【０２６６】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： ・Ｇｅｎｐｅｐｔ：ｇｉ：２７３１３７７及びＳＰ−ｔｒＥＭＢＬ：Ｑ０９９
７９と４１６ａａ（１１〜４１７ａａ位）で５１％相同。Ｇｅｎｐｅｐｔ：ｇｉ
：２７３１３７７はＣ．ｅｌｅｇａｎｓのアルコールデヒドロゲナーゼ／リビト
ールデヒドロゲナーゼに類似の配列ｇｂ｜ＡＡＢ９３４５６．１｜（Ｕ２８７３
９）のタンパク質翻訳である。
【０２６７】 ・夫々Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ配列であるタンパク質１ＡＨＩ｜
Ａ（Ｎａｄｈ及び７−オキソグリコケノデオキシコール酸複合化Ａ鎖７α−ヒド
ロキシステロイドデヒドロゲナーゼ）に対応するｇｉ｜１８２７７１３｜、タン
パク質１ＡＨＩ｜Ｂ（Ｎａｄｈ及び７−オキソグリコケノデオキシコール酸複合
化Ｂ鎖７α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ）に対応するｇｉ｜１８２
７７１４｜、タンパク質１ＡＨＨ｜Ａ（Ｎａｄ＋複合化Ａ鎖７α−ヒドロキシス
テロイドデヒドロゲナーゼ）に対応するｇｉ｜１８２７７１５｜、タンパク質１
ＡＨＨ｜Ｂ（Ｎａｄ＋複合化Ｂ鎖７α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ
）に対応するｇｉ｜１８２７７１６｜、タンパク質１ＦＭＣ｜Ａ（Ｎａｄｈ及び
７−オキソグリコケノデオキシコール酸複合化Ａ鎖７α−ヒドロキシステロイド
デヒドロゲナーゼ）に対応するｇｉ｜１９４３５３３｜、及びタンパク質１ＦＭ
Ｃ｜Ｂ（Ｎａｄｈ及び７−オキソグリコケノデオキシコール酸複合化Ｂ鎖７α−
ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ）に対応するｇｉ｜１９４３５３４｜と
１６４ａａ（４７〜２０５ａａ位）で３０％相同、 ・Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種Ｌｂ４００のタンパク質シスビフェニル−２，３
−ジヒドロジオール−２，３−デヒドロゲナーゼに対応するＰｒｏｔｅｉｎ Ｄ
ａｔａ Ｂａｎｋ配列ｇ｜２６２４４９７｜と１３１ａａ（５３〜１８３ａａ位
）で２９％相同、 ・Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓのタンパク質３−オキソアシル（アシ
ルキャリヤータンパク質）レダクターゼホモログｙｏｘＤに対応する非冗長ＰＩ
Ｒ：ｐｉｒ｜Ｄ６９９３０｜及びタンパク質ＹＯＸＤ＿ＢＡＣＳＵ（ＲＴＰ−Ｐ
ＥＬＢ領域（ＥＣ １．−．−．−）（ＯＲＦ２３８）に存在する仮想オキシド
レダクターゼ）に対応するＳｗｉｓｓｐｒｏｔ：ｓｐ｜Ｐ１４８０２｜と２０２
ａａ（６〜２１２ａａ位）で２７％相同、 ・脂質運搬ステロールキャリヤーＳＣＰ−２非特異的前駆物質エストラジオー
ルβ−デヒドロゲナーゼ１７β−ヒドロキシステロイドタンパク質に対応するＰ
ｒｏｄｏｍ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔに検出される相同ドメイン）２６７５ ｐ３４
．２（１１）ＮＬＴＰ（５）ＤＨＢ４（３）ＰＸ１８（２）と４４ａａ（３５３
〜３９６ａａ位）で５２％相同、 ・タンパク質ＤＨＢ４ヒトエストラジオール１７β−デヒドロゲナーゼ４（Ｅ
Ｃ１．１．１．６２）（１７−β−ＨＳＤ４）（１７β−ヒドロキシステロイド
デヒドロゲナーゼ４）に対応するＳｗｉｓｓｐｒｏｔ：ｓｐ｜Ｐ５１６５９｜と
１８３ａａ（２４９〜４１５ａａ位）で２７％相同、 ・長さ＝２８２の仮想タンパク質Ｒｖ３２２４（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）に対応する配列ｇ２０７２６６１（Ｚ９５１２０
）と２７２ａａ（１２〜２８０ａａ位）で４４％相同、 ・非特異的脂質運搬タンパク質前駆物質（ＮＳＬ−ＴＰ）として長さ＝１２１
のウシ非特異的脂質運搬タンパク質（ステロールキャリヤータンパク質２）（Ｓ
ＣＰ−２）に対応する配列ＳＰ：ＮＬＴＰと１０６ａａ（３１８〜４１７）で３
５％及び長さ＝５４７のラット非特異的脂質運搬タンパク質前駆物質（ＮＳＬ−
ＴＰ）（ステロールキャリヤータンパク質２）（ＳＣＰ−２）（ステロールキャ
リヤータンパク質Ｘ）（ＳＣＰ−Ｘ）（ＳＣＰＸ）に対応する配列ＳＰ：ＮＬＴ
Ｐと１３３ａａ（２９４〜４１７）で３０％相同。
【０２６８】 推定機能： ４２２アミノ酸のＯＲＦはヒト、マウス、大腸菌、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ等の数種の生物からのステロールの脱水素メカニズムに関
与する種々の推定酵素タンパク質と相同性をもつ。更に、本発明者らは細胞内脂
質輸送に関与するＳＣＰ−２タンパク質の配列との相同性も立証することができ
た。従って、ＧＳ１５２３１遺伝子はＦＤＨ／タンジール病患者における細胞内
コレステロール輸送障害に関与すると考えられる有用なタンパク質をコードし、
従って、ＧＳ１５２３１遺伝子は研究に有用である。更に、ＧＳ１５２３１遺伝
子はその局在により、タンジール病又は家族性ＨＤＬ欠損症に認められる遺伝子
欠損の研究と特性決定に有用な候補位置遺伝子である。
【０２６９】 配列番号１３９及び１４０の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調
節、特にタンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺
伝子座に遺伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０２７０】 ＧＳ９１５５２８遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１５５２８と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応する２種のメッセ
ンジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０２７１】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号２５の配列であ
る。
【０２７２】 配列番号２５の配列は３１０６ヌクレオチド長である。
【０２７３】 この配列は配列番号２５の配列の１位ヌクレオチドから１２７２位ヌクレオチ
ドまでの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０２７４】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０２７５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号２６の配列であ
る。
【０２７６】 配列番号２６の配列は３３１３ヌクレオチド長である。この配列はコーディン
グ配列にも対応する３位ヌクレオチドから１３７０位ヌクレオチドまでの部分オ
ープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。配列番号２６の配列の３２８０
位ヌクレオチドからポリアデニル化シグナルが開始している。
【０２７７】 配列番号２６の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列の間には以下の相同性が認められた。
【０２７８】 ・長さ＝２９７０のヒトｃＤＮＡ ＦＬＪ２０３００ ｆｉｓ、クローンＫＡ
ＩＡ２３２９と２７５５ｂｐ（１１９〜２８７３ｂｐ位）で９９％核酸一致、 ・ヒトクローンＲＰ１１−１Ｂ９（作業ドラフト配列、未配置１０断片）であ
るシーケンシング中のＢＡＣｇ６５１４００７ ＡＣ０１３５６８と９９％核酸
一致。
【０２７９】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号２５の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９１５５２８遺伝子は胎児脳、肝臓、前立腺、心臓、胎
盤、子宮、睾丸及び脳で発現されることが判明した。
【０２８０】 更に、配列番号９２の配列をもつプローブを使用して実施例１に記載するプロ
トコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転
写産物が存在することが判明した。
【０２８１】 配列番号９２の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々膵臓で
１．９ｋｂ、３．２ｋｂ及び３．８ｋｂ、心臓で１ｋｂ、１．９ｋｂ及び３．８
ｋｂ、肝臓で１ｋｂ、１．９ｋｂ及び３．２ｋｂ、腎臓で１ｋｂ及び１．９ｋｂ
、ｋｂ、骨格筋と脳で１．９ｋｂであった。
【０２８２】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０２８３】 配列番号２５の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号２５の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１４１の
配列を構成する４２４アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０２８４】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： この４２４ａａ潜在的ＯＲＦは以下のような各種タンパク質データベースの種
々のチロシンホスファターゼタンパク質の保存ドメインとモチーフ型相同性をも
つドメインをもつ。
【０２８５】 ・Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのｃＤＮＡ ＹＫ６５Ｅ９．３によりコードされるＳＰ
−ＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８年１１月
）配列ｓｐ｜Ｐ９１４３３｜Ｐ９１４３３と、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓで４．１バン
ド、エズリン、モイシン、ラジキシン及びタリンに存在するドメインを含むＧｅ
ｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９９年５月
７日の翻訳）配列ｇｉ｜１７０８７６７｜とに３６４ａａ（３〜３６６ａａ位）
で４９％相同、 ・タンパク質４．１−Ｇに対応するＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ
，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８年１１月）配列ｓｐ｜Ｏ４３９１｜Ｏ４３９１
と３３２ａａ（１〜３２２ａａ位）で４４％相同、 ・膜編成に関与するタンパク質モイシン、バンドＰ８１、ビリン−２、エズリ
ン、ラジキシンのチロシンホスファターゼタンパク質ドメインに対応するＰＲＯ
ＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２，１９９７年１１月に
検出される相同ドメイン）配列８９４ｐ３４．２（２９）ＭＯＥＳ（４）ＲＡＤ
Ｉ（４）ＥＺＲＩ（４）と２２７ａａ（７〜２３３ａａ位）で４３％相同、 ・ヒトチロシンホスファターゼタンパク質ＭＥＧ１（ＥＣ３．１．３．４８）
に対応するＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３６，最終更新日１９９９年
５月３日）配列ｓｐ｜Ｐ２９０７４｜ＰＴＮ４＿ＨＵＭＡＮと３１３ａａ（９〜
３２１ａａ位）で４２％相同、 ・マウスチロシンホスファターゼタンパク質のスーパーファミリーに属するタ
ンパク質バンド４．１に対応する非冗長ＰＩＲ（非冗長ＰＩＲ配列，Ｖｅｒｓｉ
ｏｎ ５７）配列：ＰＩＲ（非冗長ＰＩＲ配列，Ｖｅｒｓｉｏｎ ５７）｜Ｓ｜
ＪＵ０１８８、マウスタンパク質ＮＢＬ４に対応するＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅ
ｒｓｉｏｎ ３６，最終更新日１９９９年５月３日）配列ｓｐ｜Ｐ５２９６３｜
ＮＢＬ４、タンパク質バンド４．１に類似のタンパク質に対応するＳＰ−ＴｒＥ
ＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８年１１月）配列ｓ
ｐ｜Ｏ５７４５７｜、及びｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓのＮＢＬ４タンパク質に対
応するＧｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９
９９年５月７日の翻訳）配列ｇｉ｜４６６５４８｜と３２０ａａ（７〜３２６ａ
ａ位）で４１％相同、 ・ヒトタンパク質４．１（バンド４．１）（Ｐ４．１）に対応するＳｗｉｓｓ
ｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３６，最終更新日１９９９年５月３日）配列ｓｐ｜
Ｐ１１１７１｜４１と３１４ａａ（９〜３２２ａａ位）で４１％相同。
【０２８６】 配列番号２６の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号２６の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１４２の
配列を構成する４５５アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０２８７】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： この４５５ａａ潜在的ＯＲＦは以下のような各種タンパク質データベースの種
々のチロシンホスファターゼタンパク質の保存ドメインとモチーフ型相同性をも
つドメインをもつ。
【０２８８】 ・Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ ｃＤＮＡ ＹＫ６５Ｅ９．３によりコードされるＳＰ
−ＴｒＥＭＢＬ：ｓｐ｜Ｐ９１４３３｜Ｐ９１４３３と、Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓで
４．１バンド、エズリン、モイシン、ラジキシン及びタリンに存在するドメイン
を含むＧｅｎｐｅｐｔ１１５：ｇｉ｜１７０８７６７｜Ｕ８０９５５とに３７４
ａａ（２４〜３９７ａａ位）で５０％相同、 ・タンパク質４．１−Ｇに対応するＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ：ｓｐ｜０４３９１｜
０４３９１と３３３ａａ（２１〜３５３ａａ位）で４５％相同、 ・膜編成タンパク質モイシン、バンドＰ８１、ビリン−２、エズリン、ラジキ
シンのチロシンホスファターゼタンパク質に対応するＰｒｏｄｏｍ：８９４ｐ３
４．２（２９）ＭＯＥＳ（４）ＲＡＤＩ（３）ＥＺＲＩ（３）と２２７ａａ（７
〜２３３ａａ位）で４３％相同、 ・ヒトチロシンホスファターゼタンパク質ＭＥＧ１（ＥＺ３．１．３．４８）
（ＰＴＰＡＳＥ−ＭＥＧ１）（ＭＥＧ）に対応するＳｗｉｓｓｐｒｏｔ３８：ｓ
ｐ｜Ｐ２９０７４｜ＰＴＮ４と３２９ａａ（２４〜３５２ａａ位）で４２％相同
、 ・マウスチロシンホスファターゼスーパーファミリーメンバータンパク質バン
ド４．１に対応する非冗長ＰＩＲ：ｐｉｒ｜Ｓ｜ＪＵ０１８８、マウスＮＢＬ４
タンパク質に対応するＳｗｉｓｓｐｒｏｔ：ｓｐ｜Ｐ５２９６３｜ＮＢＬ４、バ
ンド４．１類似タンパク質４に対応するＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ：ｓｐ｜Ｏ５７４５
７｜、及びｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓタンパク質に対応するＧｅｎｐｅｐｔ：ｇ
ｉ｜４６６５４８｜ＮＢＬ４と３３５ａａ（２３〜３５７ａａ位）で４２％相同
、 ・ヒトタンパク質４．１（バンド４．１）（Ｐ４．１）に対応するＳｗｉｓｓ
ｐｒｏｔ：ｓｐ｜Ｐ１１１７１｜４１と３３２ａａ（２２〜３５３ａａ位）で４
１％相同。
【０２８９】 推定機能： ＧＳ９１５５２８遺伝子は位置候補であると同時に、ＨＤＬ粒子により媒介さ
れる細胞内コレステロールの流出に関連する細胞内シグナル伝達カスケードに役
割を果たすという推定機能をもち、タンジール病と家族性ＨＤＬ欠損症（ＦＨＤ
）に関与する新規タンパク質（チロシンホスファターゼ）をコードする遺伝子で
あるという点でタンジール病とＦＤＨの機能研究に有用である。
【０２９０】 配列番号１４１及び１４２の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調
節、特にタンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺
伝子座に遺伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０２９１】 ＧＳ９９８１７遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９９８１７と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応する２種のメッセン
ジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０２９２】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号２７の配列であ
る。
【０２９３】 配列番号２７の配列は１５３９ヌクレオチド長である。
【０２９４】 この配列は配列番号２７の配列の３位ヌクレオチドから６９８位ヌクレオチド
までの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０２９５】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０２９６】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号２８の配列であ
る。
【０２９７】 配列番号２８の配列は３４０４ヌクレオチド長である。この配列は配列番号２
８の１位ヌクレオチドから７９２位ヌクレオチドまでの部分オープンリーディン
グフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０２９８】 配列番号２８の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列の間には以下の相同性が認められた。
【０２９９】 ・ＢＡＣ ＥＮＤ ＣＩＴ−ＨＳＰ−２１６６Ｇ６．ＴＲ ＣＩＴ−ＨＳＰヒ
トゲノムクローン２１６６Ｇ６、ゲノム調査配列、長さ＝３８０であるｇｉ｜２
９７５３３７｜ｇｂ｜Ｂ９３０００．１｜Ｂ９３０００［２９７５３３７］と３
８０ｂｐで９７％一致、 ・ＢＡＣ ＥＮＤ ＨＳ＿２１６６＿Ａ２＿Ｄ０３＿ＭＲ ＣＩＴ認可ヒトゲ
ノム精子ライブラリーＤヒトゲノムクローン、プレート＝２１６６、列＝６、行
＝Ｇ、ゲノム調査配列、長さ＝３１６であるｇｉ｜３４８０２７１｜ｇｂ｜ＡＱ
１０４９１５．１｜ＡＱ１０４９１５［３４８０２７１］と３８０ｂｐで９７％
一致。
【０３００】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号２７の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９９８１７遺伝子は胎児脳で発現されることが判明した
。
【０３０１】 更に、配列番号９３の配列をもつプローブを使用して実施例１に記載するプロ
トコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転
写産物が存在することが判明した。
【０３０２】 配列番号９３の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々心臓と
脳で１．５ｋｂ、２ｋｂ及び４．４ｋｂ、膵臓で２ｋｂ及び４．４ｋｂ、腎臓と
骨格筋で１．５ｋｂ及び４．４ｋｂであった。
【０３０３】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０３０４】 配列番号２７の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号２７の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１４３の
配列を構成する２３２アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０３０５】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： ・線虫コスミドＦ３５Ｃ１１．４（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇ
ａｎｓ）の配列の翻訳に対応するＧｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及
び１１１，最終更新日１９９９年５月７日の翻訳）配列ｇｉ｜３８７６７３０｜
及びＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８年１１
月）配列ｓｐ｜Ｑ２００２１｜と２１１ａａ（１１〜２２１ａａ位）で２７％相
同。
【０３０６】 配列番号２８の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号２８の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１４４の
配列を構成する２６３アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０３０７】 配列番号１４４の配列と以下の配列の間に相同が認められた。
【０３０８】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： ・線虫コスミドＦ３５Ｃ１１．４（Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇ
ａｎｓ）の配列の翻訳に対応するＧｅｎｐｅｐｔ配列ｇｉ｜３８７６７３０｜及
びＴｒＥＭＢＬ配列ｓｐ｜Ｑ２００２１｜と２５５ａａ（１〜２５５ａａ位）で
２８％相同。
【０３０９】 推定機能： この遺伝子はその染色体局在によりＦＨＤ／タンジール病研究の候補である。
【０３１０】 配列番号１４３及び１４４の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調
節、特にタンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺
伝子座に遺伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０３１１】 ＧＳ９１６２２９遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１６２２９と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。
【０３１２】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号２９の配列である。
【０３１３】 配列番号２９の配列は７９２ヌクレオチド長である。
【０３１４】 この配列は配列番号２９の配列の１位ヌクレオチドから２０３位ヌクレオチド
までのオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０３１５】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０３１６】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号２９の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９１６２２９遺伝子は胎児脳、肝臓、脳、心臓、前立腺
、胎盤、胎児肝臓、子宮、睾丸及び腎臓で発現されることが判明した。
【０３１７】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０３１８】 配列番号２９の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号２９の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１４５の
配列を構成する６８アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０３１９】 ＢＬＡＳＴで検索した処、データベースＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ
３６，最終更新日１９９９年５月３日）及びＰＲＯＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏ
ｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２，１９９７年１１月で検出される相同ドメイン）
の照合配列との間に有意相同は認められなかった。
【０３２０】 配列番号１４５の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０３２１】 ＧＳ９２５４４遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９２５４４と呼ぶ遺伝子の１種の長い転写産物と２種の短い転
写産物に夫々対応する３種のメッセンジャーＲＮＡを本発明により単離した。
【０３２２】 長い転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号３０の配列である。
【０３２３】 配列番号３０の配列は２７３３ヌクレオチド長である。
【０３２４】 この配列は配列番号３０の配列の１位ヌクレオチドから２１６０位ヌクレオチ
ドまでの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０３２５】 短い転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号３１の配列であ
る。
【０３２６】 配列番号３１の配列は２６９４ヌクレオチド長である。
【０３２７】 この配列は配列番号３１の配列の１位ヌクレオチドから２１２１位ヌクレオチ
ドまでの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０３２８】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０３２９】 第２の短い転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号３２の配
列である。
【０３３０】 配列番号３２の配列は２７６５ヌクレオチド長である。この配列は配列番号３
２の配列の５６位ヌクレオチドから２２８７位ヌクレオチドまでの完全オープン
リーディングフレームを含む。コーディング配列は配列番号３２の配列の４１０
位ヌクレオチドから開始し、２１６０位ヌクレオチドまでである。翻訳開始コド
ンは配列番号３２の配列の４１０位ヌクレオチドから開始する。
【０３３１】 配列番号３２の配列はＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の下記照合配列と相同性をもつ。
【０３３２】 ・ヒトｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ７６１Ｅ１８２４（クローンＤＫＦＺ
ｐ７６１Ｅ１８２４由来）、部分化合物、長さ＝２４３８ｂｐ、登録日２０００
年２月１８日、染色体９、「ＣＲ２受容体に類似」のアノテーションをもつ配列
ｇ６８０７９９０（ＡＬ１３７４３２）の１〜２４１９位と２４１９ｂｐ（４８
５〜２９０３位）で１００％相同、 ・ＨＳ＿３２２８＿Ｂ２＿Ｈ１１＿Ｔ７ ＣＩＴ認可ヒトゲノム精子ライブラ
リーＤヒトゲノムクローン、プレート＝３２２８、列＝２２、行＝Ｐ、ゲノム調
査配列、長さ＝５１３であるｇ３５９０６９６（ＡＱ１９２０７４）の４３１〜
２７７位と１５７ｂｐ（１２７１〜１４２７位）で９７％相同、 ・ヒト染色体９クローンＲＰ１１−４Ｏ１マップｑ３１．３−３３．１（シー
ケンシング中）未配置４１断片である配列ｇｉ｜６９８２６１３｜｜ＡＬ１３８
７５６と一致度９９％〜１００％の数個のフラグメント、 ・ヒトクローンＲＰ１１−５Ａ２３（シーケンシング中）未配置３２断片、長
さ＝１６２０１０である配列ｇ７２３００２６（ＡＣ０１０８２４）と一致度１
００％の数個のフラグメント。
【０３３３】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより長い転写産物と短い転写産物
の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの分
析を実施した処、ＧＳ９２５４４遺伝子は胎児脳で発現されることが判明した。
【０３３４】 更に、配列番号９４の配列をもつプローブを使用してノーザンブロットにより
転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット
（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転写産物が存在することが判明した。
【０３３５】 配列番号９４の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は胎盤で夫々
４ｋｂ及び６ｋｂであった。
【０３３６】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０３３７】 配列番号３０及び３１の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号３０の核酸配列（長い転写産物）のオープンリーディングフレームは
配列番号１４６の配列を構成する７２０アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコ
ードする。
【０３３８】 配列番号３１の核酸配列（短い転写産物）のオープンリーディングフレームは
配列番号１４７の配列を構成する７０７アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコ
ードする。
【０３３９】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： この配列はＰｆａｍデータベース（ＨＭＭＥＲ ２．０，１９９８年６月）の
保存ドメインｓｕｓｈｉ．ＨＭＭと１３９〜１９４ａａ／１９９〜２５４ａａ位
に有意相同性がある。
【０３４０】 このＯＲＦはＧｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更
新日１９９９年５月７日の翻訳）とＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒ
ｓｉｏｎ ７，１９９８年１１月）に以下のような多数の配列のＢｌａｓｔＸ翻
訳のアノテーションをもつ。
【０３４１】 ・Ｇｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９
９年５月７日の翻訳）の配列ｇｉ｜３４０１６４｜（ヒトウロモジュリン前駆物
質）及びｇｉ｜３４０１６６｜（ウロモジュリン（ヒト））と１１５ａａ（２〜
１１６ａａ位）で４２％相同、 ・ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８
年１１月）配列ｓｐ｜Ｐ８７３６３｜Ｐ８７３６３（フィブリリン−１のフラグ
メント）と１４１ａａ（２〜１４２ａａ位）で３７％相同、 ・Ｇｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９
９年５月７日の翻訳）配列ｇｉ｜３０６７４６｜及びｇｉ｜１３３５０６４｜（
ヒトフィブリリン）と２３４ａａ（７〜２４０ａａ位）で３０％相同、 ・ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８
年１１月）配列ｓｐ｜Ｏ３５８０６｜Ｏ３５８０６（潜在ＴＧＦβ結合タンパク
質２様タンパク質）と１９４ａａ（８〜２０１ａａ位）で３０％相同。
【０３４２】 配列番号３２の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号３２の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１４８の
配列を構成する７１３アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０３４３】 配列番号１４８の配列とデータベース照合配列との間には以下の相同性が認め
られた。
【０３４４】 ・Ｇｅｎｐｅｐｔ：ｇｉ｜３４０１６４｜（ウロモジュリン前駆物質（ヒト）
）及びＧｅｎｐｅｐｔ：ｇｉ｜３４０１６６｜（ウロモジュリン（ヒト））と相
同、 ・ＳＰ−ｔｒＥＭＢＬ：ｓｐ｜Ｐ８７３６３｜Ｐ８７３６３（フィブリリン１
（フラグメント））と相同、 ・Ｇｅｎｐｅｐｔ：ｇｉ｜３０６７４６｜及びｇｉ｜１３３５０６４｜（フィ
ブリリン（ヒト））と相同、 ・ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ：ｓｐ｜Ｏ３５８０６｜Ｏ３５８０６（潜在ＴＧＦβ結
合タンパク質２様タンパク質）と相同、 ・ｇ７８４９９４（Ｘ８１４７９）ＥＭＲ１（ヒト）、長さ＝８８６と相同、 ・ｇ４３７９０６９（Ｘ９４６３０）７スパントランスメンブレンタンパク質
（ヒト）と相同、 ・その他、ＥＭＲ１、ＣＤ９７、フィビューリン、補体受容体等のタンパク質
と相同。
【０３４５】 配列番号１４８の配列は２個のカルシウム結合ドメインを含む３個のＥＧＦド
メイン、チロシンホスファターゼ部位、Ｎ末端疎水性ドメイン、多数のグリコシ
ル化部位、２個のリン酸化部位、２個のＡｓｐ水酸化部位等の特徴的モチーフを
もつ。
【０３４６】 推定機能： ウロモジュリンとの相同性により、ＧＳ９２５４４遺伝子の産物はグリコシル
ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）により結合されるタンパク質であるウロ
モジュリン等の膜に結合したタンパク質であると推定される。部分的アミノ酸配
列相同性試験に基づくこれらの結果から、ＧＳ９２５４４遺伝子の産物は膜脂質
との結合により膜と結合し、従って、ＦＨＤ又はタンジール病患者に認められる
細胞コレステロール流出欠損に関係があると予想される。
【０３４７】 配列番号１４６、１４７及び１４８の配列をもつポリペプチドはコレステロー
ル流の調節、特にタンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１
〜３４遺伝子座に遺伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０３４８】 ＧＳ９３０８２４遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３０８２４と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応する２種のメッセ
ンジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０３４９】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号３３の配列であ
る。
【０３５０】 配列番号３３の配列は４７４５ヌクレオチド長である。
【０３５１】 この配列は配列番号３３の配列の２位ヌクレオチドから５１４位ヌクレオチド
までの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０３５２】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： Ｇｅｎｂａｎｋ：ＡＦ１１５４３５（ラットシンタキシン１７）と５１０ｂｐ
（２２〜５３１ｂｐ位）で９０％相同。
【０３５３】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号３４の配列であ
る。
【０３５４】 配列番号３４の配列は５２４１ヌクレオチド長である。この配列は配列番号３
４の配列の５７位ヌクレオチドから１０１３位ヌクレオチドまでの完全オープン
リーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。コーディング配列は配列番号３４の配
列の１０５位ヌクレオチドから開始し、１０１３位ヌクレオチドまでである。翻
訳開始コドンは配列番号３４の配列の１０５位ヌクレオチドから開始する。
【０３５５】 配列番号３４の配列はＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列と以下の相同性をもつ。
【０３５６】 ・Ｇｅｎｂａｎｋ：ＡＦ１１５４３５（ラットシンタキシン１７）と５１０ｂ
ｐ（２２〜５３１ｂｐ位）で９０％相同、 ・ラットシンタキシン１７ｍＲＮＡ、完全化合物、長さ＝１６７８である配列
ｇ４２０６１６０（ＡＦ１１５４３５）と４７５ｂｐ（５４０〜１０３６位）で
９２％及び４０６ｂｐ（１０２〜５０７位）で８４％相同、 ・ＣＩＴＢＩ−Ｅ１−２５８８１９．ＴＦ ＣＩＴＢＩ−Ｅ１ヒトゲノムクロ
ーン２５８８１９、ゲノム調査配列、長さ＝５２５である配列ｇ４６５２６７７
（ＡＱ４７４４１６）と４３１ｂｐ（１８９９〜２３２９位）で９８％及び６２
ｂｐ（１８１９〜１８８０位）で９１％相同、 ・ＲＰＣＩ１１−３０Ｎ２０．ＴＰ ＲＰＣＩ−１１ヒトゲノムクローンＲＰ
ＣＩ−１１−３０Ｎ２０、ゲノム調査配列、長さ＝４２５である配列ｇ２９２９
０４３（Ｂ８７９１１）と３３１ｂｐ（６３９４〜６７２４位）で９９％相同、 ・ヒトｃＤＮＡ ＦＬＪ２０６５１ ｆｉｓ、クローンＫＡＴ０１８１４、長
さ＝２６７８、ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ／ＧｅｎＢａｎｋデータベース登録日２００
０年 ２月１５日、ＮＥＤＯ ｐｒｏｊｅｃｔである配列ｇ７０２０８９２（Ａ
Ｋ０００６５８）と２６６２ｂｐ（２０〜２６８１位）で９９％相同。
【０３５７】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号３３の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９３０８２４遺伝子は胎児脳、肝臓、脳、心臓、前立腺
、胎盤、胎児肝臓、子宮、睾丸、腎臓及び骨格筋で発現されることが判明した。
【０３５８】 更に、配列番号９５及び９６の配列をもつプローブを夫々使用して実施例１に
記載するプロトコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析し
た処、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５
９−１）に転写産物が存在することが判明した。
【０３５９】 配列番号９５の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々膵臓、
腎臓、骨格筋、肝臓、脳及び心臓で１．１ｋｂ、１．６ｋｂ、２．６ｋｂ、４．
９ｋｂ及び７ｋｂ、肺と胎盤で１．６ｋｂ、２．６ｋｂ、４．９ｋｂ及び７ｋｂ
であった。
【０３６０】 配列番号９６の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々胎盤で
１．３５ｋｂ、２．４ｋｂ、３．５ｋｂ及び１０ｋｂ、膵臓、腎臓及び肝臓で１
．３５ｋｂ及び２．４ｋｂ、肺で１．３５ｋｂ、骨格筋、脳及び心臓で２．４ｋ
ｂであった。
【０３６１】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０３６２】 配列番号３３の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号３３の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１４９の
配列を構成する１７０アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０３６３】 ＢＬＡＳＴで検索した処、データベースＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ
３６，最終更新日１９９９年５月３日）及びＰＲＯＤＯＭ：（Ｓｗｉｓｓｐｒ
ｏｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２に検出される相同ドメイン）の照合配列との間
に有意相同は認められなかった。
【０３６４】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： ラットシンタキシン１７をコードする遺伝子のタンパク質翻訳産物であるＧｅ
ｎｐｅｐｔ配列（ＧｅｎＢａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９９年
５月７日の翻訳）ｇｉ４２０６１６１と１７０アミノ酸（１〜１７０ａａ位）で
７２％相同。
【０３６５】 配列番号３４の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号３４の核酸配列の部分オープンリーディングフレームは配列番号１５
０の配列を構成する３１８アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０３６６】 以下の相同性が認められた： ・ラットシンタキシン１７をコードする遺伝子のタンパク質翻訳産物であるＧ
ｅｎｐｅｐｔ：ｇｉ４２０６１６１と１７０アミノ酸（１〜１７０ａａ位）で７
２％相同。
【０３６７】 Ｇｅｎｐｅｐｔ１１５、Ｔｒｅｍｂｌ及びＰＩＲで検出されたタンパク質相同
性： ・シンタキシン１７（ラット）、長さ＝３０１である翻訳配列ｇ４２０６１６
１（ＡＦ１１５４３５）の全長と３０２ａａ（１０５〜１０１０位）で７５％相
同。
【０３６８】 配列番号１５０の配列をもつポリペプチドはオープンリーディングフレームの
１〜２４３位ヌクレオチド間にシンタキシンの特徴的モチーフをもつ。
【０３６９】 推定機能： 従って、配列番号１４９及び１５０の配列をもつポリペプチドは細胞内小胞輸
送に関与するシンタキシンファミリーのタンパク質に属する。これらのタンパク
質により媒介される特異的輸送に基づくこのメカニズムは受容ＨＣＬ粒子への細
胞内コレステロールプールの輸送及び転流メカニズムの障害により説明されるタ
ンジール病／ＦＨＤに関して重要である。従って、配列番号１４９及び１５０の
配列をもつポリペプチドはＨＤＬによるコレステロール逆輸送の重要な段階に関
与している可能性がある。
【０３７０】 更に、配列番号１４９及び１５０の配列をもつポリペプチドは染色体９の９ｑ
３１〜３４遺伝子座に遺伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０３７１】 ＧＳ９３３８２遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３３８２と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャー
ＲＮＡを本発明により単離した。
【０３７２】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号３５の配列である。
【０３７３】 配列番号３５の配列は３０１４ヌクレオチド長である。
【０３７４】 この配列は配列番号３５の配列の３位ヌクレオチドから３７１位ヌクレオチド
までの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０３７５】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０３７６】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号３５の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９３３８２遺伝子は胎児脳で発現されることが判明した
。
【０３７７】 更に、配列番号９７の配列をもつプローブを使用して実施例１に記載するプロ
トコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析した処、Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に転
写産物が存在することが判明した。
【０３７８】 配列番号９７の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々脳で２
ｋｂ及び７．５ｋｂ、膵臓、腎臓、骨格筋、肝臓及び心臓で２ｋｂであった。
【０３７９】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０３８０】 配列番号３５の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号３５の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１５１の
配列を構成する１２３アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０３８１】 ＢＬＡＳＴで検索した処、データベースＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ
３６，最終更新日１９９９年５月３日）、ＰＲＯＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ
，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２，１９９７年１１月に検出される相同ドメイン）、
Ｇｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９７年
５月７日の翻訳）、Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３６，最終更新日１
９９９年５月３日）、ＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７
，１９９８年１１月）、ＰＩＲ（非冗長ＰＩＲ配列，Ｖｅｒｓｉｏｎ ５７）及
びＰＤＢ（ＰＲＯＴＥＩＮ ＤＡＴＡ ＢＡＮＫ、１９９９年２月）の照合配列
との間に有意相同は認められなかった。
【０３８２】 配列番号１５１の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０３８３】 ＧＳ９４６３００遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９４６３００と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。
【０３８４】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号３６の配列である。
【０３８５】 配列番号３６の配列は１５７５ヌクレオチド長である。
【０３８６】 この配列は配列番号３６の配列の３位ヌクレオチドから１７６位ヌクレオチド
までの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０３８７】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０３８８】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号３６の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９４６３００遺伝子は胎児脳、肝臓、脳、心臓、前立腺
、胎盤、胎児肝臓、子宮、睾丸及び腎臓で発現されることが判明した。
【０３８９】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０３９０】 配列番号３６の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号３６の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１５２の
配列を構成する５８アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０３９１】 ＢＬＡＳＴで検索した処、データベースＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ
３６，最終更新日１９９９年５月３日）及びＰＲＯＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏ
ｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２，１９９７年１１月に検出される相同ドメイン）
の照合配列との間に有意相同は認められなかった。
【０３９２】 配列番号１５２の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病又は家族性ＨＤＬ欠損症に関与している可能性がある。
【０３９３】 従って、配列番号１５２の配列をもつポリペプチドはＨＤＬによるコレステロ
ール逆輸送の重要な段階に関与している可能性がある。
【０３９４】 ＧＳ９３７３４５遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３７３４５と呼ぶ遺伝子の長い転写産物と短い転写産物に夫
々対応する２種のメッセンジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０３９５】 長い転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号３７の配列であ
る。
【０３９６】 配列番号３７の配列は１６０７ヌクレオチド長である。
【０３９７】 この配列は配列番号３７の配列の２位ヌクレオチドから１０９位ヌクレオチド
までの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０３９８】 配列番号３７の配列から夫々配列番号１０４及び１０５の配列をもつ２種のプ
ライマーを合成し、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から市販されている各種ヒト組織のｐｏ
ｌｙＡ＋ ｍＲＮＡライブラリーからｃＤＮＡを増幅した。
【０３９９】 配列番号１０４及び１０５の配列をもつプライマーにより増幅したｃＤＮＡは
配列番号３８の配列を構成する。この配列番号３８の配列は１１６１ヌクレオチ
ド長である。
【０４００】 配列番号３８の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列の間には以下の相同性が認められた。
【０４０１】 ・ヒトＨＳＰＣ２９１ｍＲＮＡ、部分化合物、長さ＝１１０２（未公開）であ
る配列ｇｉ｜６８４１２３１｜ｇｂ｜ＡＦ１６１４０９．１｜ＡＦ１６１４０９
［６８４１２３１］の８〜１１０２位と１０９６ｂｐ（１〜１０９３１位）で９
９％相同、 ・ヒトＨＳＰＣ２９３ｍＲＮＡ、部分化合物、長さ＝１０４５（未公開）であ
る配列ｇｉ｜６８４１２３５｜ｇｂ｜ＡＦ１６１４１１．１｜ＡＦ１６１４１１
［６８４１２３５］の８〜１０３０位と１０２５ｂｐ（１１９〜１１４８位）で
９９％相同、 ・ヒトｃＤＮＡ ＦＬＪ２０６３０ ｆｉｓ、クローンＫＡＴ０３８７４、長
さ＝１５３８、登録日２０００年 ２月２２日、ＮＥＤＯ ｐｒｏｊｅｃｔ（未
公開）である配列ｇｉ｜７０２０８６１｜ｄｂｊ｜ＡＫ０００６３７．１｜ＡＫ
０００６３７［７０２０８６１］の４３〜１２０２位と１１６１ｂｐ（１〜１１
６１位）で９９％相同、 ・ヒトクローンＲＰ１１−２１Ｈ２２（作業ドラフト配列、未配置１９断片）
、長さ＝１７５１４３である配列ｇｂ｜ＡＣ０２１２８６．２｜ＡＣ０２１２８
６［６８９９７６６］と１００３ｂｐ（１〜１０４３位）で９２％及び３８ｂｐ
（１０４８〜１０８５位）で９４％。
【０４０２】 短い転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号３９の配列である。
【０４０３】 配列番号３９の配列は１３３２ヌクレオチド長である。
【０４０４】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、長い
転写産物と短い転写産物の夫々の配列に配列一致は認められなかった。
【０４０５】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０４０６】 配列番号３７の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号３７の核酸配列の長い転写産物の部分オープンリーディングフレーム
は配列番号１５３の配列を構成する３６アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコ
ードする。
【０４０７】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： Ｓｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３６，最終更新日１９９９年５月３日
）配列ｓｐ｜Ｐ２３５９６｜ＰＲＴＤ＿ＥＲＷＣＨプロテアーゼ分泌ＡＴＰ結合
タンパク質ＰＲＴＤと２２ａａ（６〜２９ａａ位）で４１％一致。
【０４０８】 この遺伝子は染色体局在によりタンジール病／ＦＨＤの研究の候補である。
【０４０９】 ＧＳ９９５５６遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９９５５６と呼ぶ遺伝子の長い転写産物と短い転写産物に夫々
対応する２種のメッセンジャーＲＮＡ配列を本発明により単離した。
【０４１０】 長い転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号４０の配列である。
【０４１１】 配列番号４０の配列は１０４１９ヌクレオチド長である。
【０４１２】 この配列は配列番号４０の配列の２位ヌクレオチドから１９５４位ヌクレオチ
ドまでの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０４１３】 開始コドン（ＡＴＧ）は配列番号４０の配列をもつ長い転写産物の２９位ヌク
レオチドから開始する。
【０４１４】 短い転写産物に対応するｃＤＮＡの核酸配列は配列番号４１の配列である。
【０４１５】 配列番号４１の配列は１８１３ヌクレオチド長である。
【０４１６】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０４１７】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号４０の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９９５５６遺伝子は胎児脳、肝臓、脳、心臓、前立腺、
胎盤及び胎児肝臓で発現されることが判明した。
【０４１８】 更に、配列番号９８及び９９の配列をもつプローブを使用して実施例１に記載
するプロトコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析した処
、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−
１）に転写産物が存在することが判明した。
【０４１９】 配列番号９８の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々脳で２
．６ｋｂ、４．２ｋｂ、５ｋｂ及び１０ｋｂ、肝臓、肺、胎盤及び心臓で２．６
ｋｂ及び５ｋｂ、腎臓で２．６ｋｂ及び５ｋｂ、骨格筋で２．６ｋｂ、膵臓で５
ｋｂであった。
【０４２０】 配列番号９９の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々肝臓で
２．２ｋｂ、心臓で２．４ｋｂ及び４．４ｋｂ、脳、胎盤、腎臓、膵臓及び肺で
９ｋｂであった。
【０４２１】 配列番号１００の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は夫々胎盤
と心臓で５ｋｂ及び７ｋｂ、脳、腎臓及び膵臓で５ｋｂであった。
【０４２２】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０４２３】 配列番号４０の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号４０の核酸配列の部分オープンリーディングフレームは配列番号１５
４の配列を構成する６５１アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０４２４】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性： このＯＲＦはＧｅｎｐｅｐｔ（ＧｅｎＢａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更
新日１９９９年５月７日の翻訳）及びＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅ
ｒｓｉｏｎ ７，１９９８年１１月）の配列（下記配列のＢｌａｘｔＸ翻訳）と
相同性をもつ。
【０４２５】 ・Ｇｅｎｐｅｐｔ（ＧｅｎＢａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９
９年５月７日の翻訳）ｇｉ｜４５２９８９０｜ＮＧ２２（ヒト）と４０３ａａで
３２％相同、 ・Ｇｅｎｐｅｐｔ（ＧｅｎＢａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９
９年５月７日の翻訳）ｇｉ｜３９８６７７０｜ＮＧ２２（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌ
ｕｓ）と６９３ａａで２５％相同、 ・Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのｃＤＮＡ ＣＥＥＳＢ８２Ｆに対応するＧｅｎｐｅｐ
ｔ（ＧｅｎＢａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更新日１９９９年５月７日の翻
訳）ｇｉ｜１０７２１８７｜と６８３ａａで２４％相同、 ・Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓのｃＤＮＡ ＣＥＥＳＢ８２ＦによりコードされるＴｒ
ＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ７，１９９８年１１月）ｓｐ
｜Ｑ２００２６｜と６８３ａａで２４％相同。
【０４２６】 推定機能： この遺伝子は染色体局在によりタンジール病／ＦＨＤの研究の候補である。
【０４２７】 配列番号１５４の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０４２８】 ＧＳ９６６６３遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９６６６３と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャー
ＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の６種の代表的核酸配列を決定し
た。
【０４２９】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の部分核酸配列は配列番号４２の配列
である。
【０４３０】 配列番号４２の配列は１３７７ヌクレオチド長である。
【０４３１】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の部分核酸配列は配列番号４３の配列
である。
【０４３２】 配列番号４３の配列は４５２ヌクレオチド長である。
【０４３３】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の部分核酸配列は配列番号４４の配列
である。
【０４３４】 配列番号４４の配列は５６２ヌクレオチド長である。
【０４３５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第４の部分核酸配列は配列番号４５の配列
である。
【０４３６】 配列番号４５の配列は１７６６ヌクレオチド長である。
【０４３７】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０４３８】 配列番号４２の配列から夫々配列番号１０６及び１０７の配列をもつ２種のヌ
クレオチドプライマーを合成した。
【０４３９】 配列番号４３の配列から配列番号１０８の配列をもつヌクレオチドプライマー
を合成した。
【０４４０】 配列番号４５の配列から夫々配列番号１０９及び１１０の配列をもつ２種のヌ
クレオチドプライマーを合成した。
【０４４１】 これらのヌクレオチドプライマーによりＧＳ９６６６３遺伝子の転写産物の第
５及び第６の代表的ヌクレオチド配列を増幅することができた。
【０４４２】 ＧＳ９６６６３遺伝子の転写産物に対応する第５の核酸配列は配列番号４６の
配列である。配列番号４６の核酸配列は６０１ヌクレオチド長である。
【０４４３】 ＧＳ９６６６３遺伝子の転写産物に対応する第６の核酸配列は配列番号４７の
配列である。配列番号４７の核酸配列は３７０６ヌクレオチド長である。この配
列は配列番号４７の配列の１位ヌクレオチドから３２０２位ヌクレオチドまでの
部分オープンリーディングフレームを含む。
【０４４４】 配列番号４７の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列の間には以下の相同性が認められた。
【０４４５】 ・ヒトｍＲＮＡ全長インサートｃＤＮＡクローンＥＵＲＯＩＭＡＧＥ ２４８
１１４、長さ＝２４５０、染色体＝“９”、マップ＝“Ｄ９Ｓ１７６−Ｄ９Ｓ２
７９” 、登録日１９９９年６月１４日（未公開）である配列ｇｉ｜５１０２５
８５｜ｅｍｂ｜ＡＬ０７９２７９．１｜ＨＳＴ０００００９［５１０２５８５］
の１〜２４１９位と２４２３ｂｐ（１０３０〜３４５１位）で９９％相同、 ・米国特許第５６９１１４７号の配列１（長さ＝１６３８ｂｐＤ、登録日１９
９８年４月３日、著者Ｄｒａｅｔｔａ，Ｇ．とＧｙｕｒｉｓ，Ｊ．、表題「ＣＤ
Ｋ４結合アッセイ」、刊行物１９９７年１１月２５日発行米国特許５６９１１４
７Ａ１）である配列ｇ３０１２３５１（Ｉ７６１９７）の１６〜１６３８位と１
６２３ｂｐ（１９４６〜３５５９位）で９８％、 ・ヒト染色体９クローンＲＰ１１−４２７Ｌ１１、マップｑ３１．２−３２（
シーケンシング中、未配置３７断片、登録日２０００年３月８日）である配列ｇ
ｉ｜７２２８０１６｜ｅｍｂ｜ＡＬ１５８１５８．３｜ＡＬ１５８１５８［７２
２８０１６］と２３７２ｂｐ（１〜２３７２位）で９９％〜１００％及び１１６
０ｂｐ（２５４７〜３７０６位）で９７％〜１００％の種々の相同フラグメント
。
【０４４６】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号４２〜４７の配列の
転写産物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこ
れらの分析を実施した処、ＧＳ９６６６３遺伝子は胎児脳、肝臓、脳、心臓、前
立腺、胎盤、胎児肝臓、子宮、睾丸、腎臓及び骨格筋で発現されることが判明し
た。
【０４４７】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０４４８】 配列番号４７の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号４７の核酸配列の部分オープンリーディングフレームは配列番号１５
５の配列を構成する１０６６アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０４４９】 配列番号１５５の配列とデータベースの照合配列の間には以下の相同性が認め
られた。
【０４５０】 ・「補体受容体」ＣＲ１（ｇ３０１８６、ｇ８０９０１９、ｇ４５１３０３、
ｇ３０６６８０）及びＣＲ２（ｇ１８１９２、ｇ１８１９４０、ｇ５９９７７６
）型配列と１０６８ａａで２７％相同、 ・「補体因子Ｈ」配列である因子Ｈ（ヒト）の配列ｇｉ｜３１９６５｜ｅｍｂ
｜ＣＡＡ６８７０４．１｜［３１９６５］（Ｙ００７１６）、ＰＩＲ：ＮＢＨＵ
Ｈ及びＰＩＲ：ＮＢＭＳＨ、ＥＭ：Ｑ１４００６及びＥＭ：Ｑ６１４０８と１０
００ａａで２４％相同、 ・Ｐセレクチン及びＥセレクチン配列であるヒトｅセレクチン前駆物質（内皮
白血球接着分子１）（ｅｌａｍ−１）（白血球−内皮細胞接着分子２）（ｌｅｃ
ａｍ２）（ｃｄ６２ｅ）に対応する配列ｓｐ｜ｐ１６５８１｜ｌｅｍ２、ヒトｐ
セレクチン前駆物質（顆粒膜タンパク質１４０）（ｇｍｐ−１４０）（ｐａｄｇ
ｅｍ）（ｃｄ６２ｐ）（白血球−内皮細胞接着分子３）（ｌｅｃａｍ）に対応す
る配列ｓｐ｜ｐ１６１０９｜ｌｅｍ３及びｐセレクチン前駆物質（ヒト）に対応
する非冗長ｐｉｒ：ｐｉｒ｜ｓ｜ａ３０３５９と９００ａａで２５％相同、 ・顆粒膜タンパク質１４０（ＧＭＰ−１４０）前駆物質（ヒト）、長さ＝８３
０である配列ｇ１８３３９１（Ｍ２５３２２）と６３７ａａで２４％相同、 ・「細胞接着分子」ｔｒＥＭＢＬ：ｓｐ｜Ｑ２８２９０｜Ｑ２８２９０細胞接
着分子前駆物質（フラグメント）と相同、 ・「ヒトアポリポタンパク質Ｈ前駆物質」配列ＰＩＲ：ＮＨＢＵ（長さ＝３４
５、ヒトアポリポタンパク質Ｈ前駆物質）と２５％〜２９％の種々の相同フラグ
メント（うち、２５６ａａで２９％相同）、 ・「膜補因子タンパク質補因子」（ＰＩＲ：Ｓ０１８９６、ＰＩＲ：Ｉ５４４
７９、ＰＩＲ：Ａ５７２７８及びＥＭ：Ｐ７９１３８、ＥＭ：Ｑ９Ｚ０Ｍ４、Ｅ
Ｍ：Ｏ１９１２１）及びＥＭ：Ｏ６２８３７（膜補因子タンパク質ＣＤ４６）と
相同、 ・Ｇｅｎｐｅｐｔ（ｇ１２５５８８９（Ｕ５３３４４））に認められるＣａｅ
ｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓの仮想タンパク質Ｔ０７Ｈ６．５であ
る配列ＰＩＲ：Ｔ１６８３３と２５％〜２７％の種々の相同フラグメント（４０
０〜５００ａａ）。
【０４５１】 推定機能： ＧＳ９６６６３遺伝子はヒトＰセレクチン及びＥセレクチンの前駆物質とのア
ミノ酸相同性により、膜タンパク質の類に属する。この遺伝子は位置クローニン
グにより決定される遺伝子区間に局在するので、膜タンパク質に媒介される細胞
内コレステロールの流出に役割を果たすのではないかと思われる。
【０４５２】 配列番号１５５の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０４５３】 ＧＳ９４１６７５遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９４１６７５と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の２種の代表的核酸配列を以下
に説明する。
【０４５４】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号４８の配列であ
る。
【０４５５】 配列番号４８の配列は３７３ヌクレオチド長である。
【０４５６】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号４９の配列であ
る。
【０４５７】 配列番号４９の配列は４５９ヌクレオチド長である。
【０４５８】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０４５９】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列は配列番号５０の配列であ
る。
【０４６０】 配列番号５０の配列は２５７５ヌクレオチド長である。
【０４６１】 配列番号５０の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列の間には以下の相同性が認められた。
【０４６２】 ・ＨＳ＿３１４３＿Ａ１＿Ｇ０１＿Ｔ７Ｃ ＣＩＴ認可ヒトゲノム精子ライブ
ラリー、長さ＝８４８ｂｐであるＢＡＣ ＥＮＤ ｇ６３４８７６１ ＡＱ８９
２５７１と７２０ｂｐで９８％一致。
【０４６３】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０４６４】 ＧＳ９２９３４１遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９２９３４１と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の２種の代表的核酸配列を決定
した。
【０４６５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号５１の配列であ
る。
【０４６６】 配列番号５１の配列は２３１ヌクレオチド長である。
【０４６７】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号５２の配列であ
る。
【０４６８】 配列番号５２の配列は３４４ヌクレオチド長である。この配列は配列番号５２
の配列の３位ヌクレオチドから１３１位ヌクレオチドまでの部分オープンリーデ
ィングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０４６９】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
番号５１及び５２の配列との一致は認められなかった。
【０４７０】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列は配列番号５３の配列であ
る。
【０４７１】 配列番号５３の配列は４０２ヌクレオチド長である。この配列は配列番号５３
の配列の１位ヌクレオチドから１８８位ヌクレオチドまでの部分オープンリーデ
ィングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０４７２】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６）で検索した処、配列
番号５１〜５３の配列との一致は認められなかった。
【０４７３】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号５１及び５２の配列
の転写産物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用して
これらの分析を実施した処、ＧＳ９２９３４１遺伝子は胎児脳、肝臓、脳、心臓
、前立腺、胎盤、胎児肝臓、子宮、睾丸、腎臓、骨格筋及び肺で発現されること
が判明した。
【０４７４】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０４７５】 配列番号５２の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号５２の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１５６の
配列を構成する４３アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０４７６】 ＢＬＡＳＴで検索した処、データベースＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ
３６，最終更新日１９９９年５月３日）及びＰＲＯＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐｒｏ
ｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２に検出される相同ドメイン）の照合配列との間に
有意相同は認められなかった。
【０４７７】 配列番号５３の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号５３の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１５７の
配列を構成する６１アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０４７８】 ＢＬＡＳＴで検索した処、データベースＳｗｉｓｓｐｒｏｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ
３８）、ＰＩＲ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ６２，１９９９年９月）、ＴｒＥＭＢＬ（
１９９９年８月Ｖｅｒｓｉｏｎ）、及びＧｅｎＰｅｐｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１
５）の照合配列との間に有意相同は認められなかった。
【０４７９】 配列番号１５６及び１５７の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調
節、特にタンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺
伝子座に遺伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０４８０】 ＧＳ９１５７４２遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１５７４２と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の３種の代表的核酸配列を決定
した。
【０４８１】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号５４の配列であ
る。
【０４８２】 配列番号５４の配列は２２８ヌクレオチド長である。
【０４８３】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号５５の配列であ
る。
【０４８４】 配列番号５５の配列は２７０ヌクレオチド長である。
【０４８５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列は配列番号５６の配列であ
る。
【０４８６】 配列番号５６の配列は１１３０ヌクレオチド長である。
【０４８７】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０及び１１６）で検索し
た処、配列一致は認められなかった。
【０４８８】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号５４及び５５の配列
の転写産物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用して
これらの分析を実施した処、ＧＳ９１５７４２遺伝子は胎児脳、肝臓、胎盤、胎
児及び腎臓で発現されることが判明した。
【０４８９】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０４９０】 ＧＳ９１３０１８遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１３０１８と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の２種の代表的核酸配列を以下
に説明する。
【０４９１】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号５７の配列であ
る。
【０４９２】 配列番号５７の配列は４６３ヌクレオチド長である。
【０４９３】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号５８の配列であ
る。
【０４９４】 配列番号５８の配列は２８９ヌクレオチド長である。
【０４９５】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
番号５７及び５８の配列との配列一致は認められなかった。
【０４９６】 配列番号５７の配列から夫々配列番号１１１及び１１２の配列をもつ２種のヌ
クレオチドプライマーを合成した。
【０４９７】 配列番号５８の配列から夫々配列番号１１３及び１１４の配列をもつ２種のヌ
クレオチドプライマーを合成した。
【０４９８】 配列番号１１３及び１１４の配列をもつプライマーによりＣｌｏｎｔｅｃｈ社
から市販されている各種ヒト組織のｐｏｌｙＡ＋ ｍＲＮＡライブラリーからＧ
Ｓ９１３０１８遺伝子の転写産物に対応するｃＤＮＡの第３核酸配列であるｃＤ
ＮＡを増幅することができた。
【０４９９】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列は配列番号５９の配列であ
る。
【０５００】 配列番号５９の配列は１５４２ヌクレオチド長である。
【０５０１】 配列番号５９の配列には相同性が認められ、特に配列番号５９の配列の７３５
〜１２６８位、１〜３５７位、５５９〜７１０位及び３７３〜５０１位にはＧｅ
ｎＢａｎｋ（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６）の照合配列ｇ６５６３６１６（ＡＣ０１
３７４０）（ヒトクローンＲＰ１１−１１５Ｊ２２、作業ドラフト配列、未配置
１５断片、長さ＝１８０７１１）と種々の一致フラグメントが認められた。
【０５０２】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号５７及び５８の配列
の転写産物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用して
これらの分析を実施した処、ＧＳ９１３０１８遺伝子は胎児脳、肝臓、脳、心臓
、前立腺、胎盤、胎児肝臓、子宮、睾丸及び腎臓で発現されることが判明した。
【０５０３】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０５０４】 ＧＳ９１１７４２遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１１７４２と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の３種の代表的核酸配列を決定
した。
【０５０５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号６０の配列であ
る。
【０５０６】 配列番号６０の配列は１４１７ヌクレオチド長である。
【０５０７】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号６１の配列であ
る。
【０５０８】 配列番号６１の配列は６９６ヌクレオチド長である。
【０５０９】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
番号６０及び６１の配列との配列一致は認められなかった。
【０５１０】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列は配列番号６２の配列であ
る。
【０５１１】 配列番号６２の配列は２７０２ヌクレオチド長である。この配列は配列番号６
２の配列の１位ヌクレオチドから７９２位ヌクレオチドまでの部分オープンリー
ディングフレームを含む。潜在コーディング配列は配列番号６２の配列の４９位
ヌクレオチドから開始し、７９２位ヌクレオチドまでである。翻訳開始コドンは
配列番号６２の配列の４９位ヌクレオチドから開始する。この配列は配列番号６
２の配列の４１位ヌクレオチドから開始する配列「ＧＣ ＣＧＣ ＧＣＣ ＡＴ
Ｇ Ｃ」をもつコザックモチーフを含む。
【０５１２】 配列番号６２の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列の間には以下の相同性が認められた。
【０５１３】 ・配列ｇｉ｜５９１２０９５｜ｅｍｂ｜ＡＬ１１７５５７．１｜ＨＳＭ８０１
０８３［５９１２０９５］ヒトｍＲＮＡ；ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ５６４Ｄ１７７
（クローンＤＫＦＺｐ５６４Ｄ１７７由来）、部分化合物、長さ＝１７９５、登
録日２０００年２月１８日、原登録日１９９９年９月１５日（ＭＩＰＳ，Ａｍ
Ｋｌｏｐｆｅｒｓｐｉｔｚ １８ａ，Ｄ−８２１５２，Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ
、ドイツ，Ｂｌｏｅｃｋｅｒ，Ｈ．，Ｂｏｅｃｈｅｒ，Ｍ．，Ｂｒａｎｄｔ，Ｐ
．，Ｗｉｅｍａｎｎ，Ｓ）と１４１０ｂｐ（４〜１４１３位）で９８％相同、 ・配列ｇｉ｜６８４１２４７｜ｇｂ｜ＡＦ１６１４１７．１｜ＡＦ１６１４１
７［６８４１２４７］ヒトＨＳＰＣ２９９ ｍＲＮＡ、部分化合物、長さ＝１６
５９、登録日２０００年２月１日、原登録日１９９９年５月１４日（Ｓｈａｎｇ
ｈａｉ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ
Ｓｅｃｏｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｒｕｉ−Ｊｉｎ Ｈ
ｏｓｐｉｔａｌ，１９７ Ｒｕｉ−Ｊｉｎ Ｒｏａｄ ＩＩ）と１０１３９ｂｐ
（１〜１０３９）で９７％、３８０ｂｐ（１０８２〜１４５８）で９７％及び５
１ｂｐ（１５０６〜１５５６）で９０％相同、 ・配列ｇ５９１２０９５（ＡＬ１１７５５７）ヒトｍＲＮＡ；ｃＤＮＡ ＤＫ
ＦＺｐ５６４Ｄ１７７（クローンＤＫＦＺｐ５６４Ｄ１７７由来）、部分化合物
、長さ＝１４３１、登録日２０００年２月１８日、原登録日１９９９年９月１５
日（ＭＩＰＳ，Ａｍ Ｋｌｏｐｆｅｒｓｐｉｔｚ １８ａ，Ｄ−８２１５２，Ｍ
ａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ，ドイツ、Ｂｌｏｅｃｋｅｒ，Ｈ．，Ｂｏｅｃｈｅｒ，Ｍ
．，Ｂｒａｎｄｔ，Ｐ．，Ｍｅｗｅｓ，Ｈ．Ｗ．，Ｇａｓｓｅｎｈｕｂｅｒ，Ｊ
．及びＷｉｅｍａｎｎ，Ｓ）と１４１０ｂｐ（４〜１４１３位）で９８％相同、 ・配列ｇｉ｜７０２３８３２｜ｄｂｊ｜ＡＫ００２１３７．１｜ＡＫ００２１
３７［７０２３８３２］ヒトｃＤＮＡ ＦＬＪ１１２７５ ｆｉｓ、クローンＰ
ＬＡＣＥ１００９３７５、長さ＝１５６４、登録日２０００年２月２２日、ＮＥ
ＤＯ ｈｕｍａｎ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｐｒｏｊｅｃｔ（未公開
）と９１１ｂｐ（１〜９１１位）で９３６％、１７９ｂｐ（１３９５〜１５７３
位）で９３％及び１３１ｂｐ（９９２〜１１２２位）で８１％相同、 ・配列ｇ５９３２６１６（ＡＣ００９５９４）ヒト染色体４クローン３６３＿
Ｇ＿０１マップ４（シーケンシング中）、未配置９断片、長さ＝１５０１０８と
種々の相同（９０％〜１００％）フラグメント。
【０５１４】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号６０及び６１の配列
の転写産物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用して
これらの分析を実施した処、ＧＳ９１１７４２遺伝子は胎児脳、肝臓、心臓及び
胎盤で発現されることが判明した。
【０５１５】 更に、配列番号１０１の配列をもつプローブを使用して実施例１に記載するプ
ロトコールに従ってノーザンブロットにより転写産物の発現を分析した処、Ｃｌ
ｏｎｔｅｃｈ社から市販されているブロット（Ｒｅｆ．Ｎｏ．７７５９−１）に
転写産物が存在することが判明した。
【０５１６】 配列番号１０１の配列をもつプローブで検出された転写産物の寸法は膵臓、腎
臓、骨格筋、肺及び胎盤で１．９ｋｂであった。
【０５１７】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０５１８】 配列番号６２の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号６２の核酸配列の部分オープンリーディングフレームは配列番号１５
８の配列を構成する２６３アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０５１９】 ６段階で翻訳されたタンパク質配列のレベルで認められた相同性： ・配列ｇ５９１２０９６（ＡＬ１１７５５７）仮想タンパク質（ヒト）、長さ
＝２６３、注釈＝「ＮＩＰＳＮＡＰ１に類似」、登録日２０００年２月１８日、
原登録日１９９９年９月１５日（ＭＩＰＳ，Ａｍ Ｋｌｏｐｆｅｒｓｐｉｔｚ
１８ａ，Ｄ−８２１５２，Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ，ドイツ、Ｂｌｏｅｃｋｅｒ
，Ｈ．，Ｂｏｅｃｈｅｒ，Ｍ．，Ｂｒａｎｄｔ，Ｐ．，Ｍｅｗｅｓ，Ｈ．Ｗ．，
Ｇａｓｓｅｎｈｕｂｅｒ，Ｊ．及びＷｉｅｍａｎｎ，Ｓ）と２６２ａａ（４〜７
８９位）で９９％相同、 ・ＮＩＳＮＡＰ２及びＮＩＳＮＡＰ１配列との相同性： 配列ｇ２７６９２５４（ＡＪ００１２５９）ＮＩＰＳＮＡＰ２タンパク質（ヒ
ト、）長さ＝２８５と１７９ａａで２７％相同及び配列ｇ２７６９２４９（ＡＪ
００１２５８）ＮＩＰＳＮＡＰ１タンパク質（ヒト）、長さ＝２８４と２１１ａ
ａで２４％相同、 ・配列ｇ３４０３１６７（ＡＦ０２９７８６）ＧＢＡＳ（ヒト）、長さ＝２８
６と１７９ａａで２７％相同。ＧＢＡＳ：グアニンヌクレオチド結合タンパク質
αサブユニット（アデニル酸シクラーゼ刺激Ｇαタンパク質）。このタンパク質
はリン酸化部位とトランスメンブレン領域をもつと記載されている。「グアニン
ヌクレオチド結合タンパク質」は種々のトランスメンブレンシグナル伝達系でモ
ジュレーター又はトランスデューサーの役割をもつ。
【０５２０】 ・ＳＮＡＰ２５タンパク質及び４−ニトロフェニルホスファターゼと類似性を
もつタンパク質ＹＭＱ１＿ＣＡＥＥＬ（Ｐｒｏｄｏｍデータベース、バージョン
不明）と２１％一致。
【０５２１】 配列番号１５８の配列をもつポリペプチドはグリコシル化部位、リン酸化部位
（例えばタンパク質キナーゼ及びＩＩ型カゼインキナーゼのｃＡＭＰ及びｃＧＭ
Ｐ依存性リン酸化部位）を含む。
【０５２２】 推定機能： 従って、配列番号１５８の配列のポリペプチドはＰＲＯＤＯＭ（Ｓｗｉｓｓｐ
ｒｏｔ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３４．２，１９９７年１１月に検出される相同ドメイ
ン）のＰＤ０１３９８１ドメインにモチーフが認められることから、細胞内小胞
輸送に関与すると推定されるタンパク質に属する。これらのタンパク質により媒
介される特異的輸送に基づくこのメカニズムは受容ＨＣＬ粒子への細胞内コレス
テロールプールの輸送及び転流メカニズムの障害により説明されるタンジール病
／ＦＨＤに関して重要である。従って、配列番号１５８の配列をもつポリペプチ
ドはＨＤＬによるコレステロール逆輸送の重要な段階に関与している可能性があ
る。
【０５２３】 配列番号１５８の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０５２４】 ＧＳ９８６０１遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９９８６０１と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の３種の代表的核酸配列を決定
した。
【０５２５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号６３の配列であ
る。
【０５２６】 配列番号６３の配列は３３５ヌクレオチド長である。
【０５２７】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０５２８】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号６４の配列であ
る。
【０５２９】 配列番号６４の配列は４４７ヌクレオチド長である。
【０５３０】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０５３１】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列は配列番号６５の配列であ
る。
【０５３２】 配列番号６５の配列は２３２４ヌクレオチド長である。
【０５３３】 この配列は配列番号６５の配列の３位ヌクレオチドから６１１位ヌクレオチド
までの部分オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む。
【０５３４】 ヌクレオチド配列のレベルで認められた相同性（３０７）： ・完全配列であるｃＤＮＡ（ヒト）のクローンＺＢ９５Ｆ０２に対応するＧｅ
ｎＢａｎｋ配列ｇｉ｜３４８３５２０｜と５１４ｂｐ（１５０８〜２０２１ｂｐ
位）で９９％相同、 ・ＧｅｎＢａｎｋ配列ｇｉ｜１１８４６７１｜（ニューカッスル病ウイルスの
誘導タンパク質をコードするｍＲＮＡの部分３’ＵＴＲ領域）と１７０ｂｐ（８
６２〜１０３１ｂｐ位）で９８％相同。
【０５３５】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号６５の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９８６０１遺伝子は脳、胎盤及び子宮で発現されること
が判明した。
【０５３６】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０５３７】 配列番号６５の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号６５の第３の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１
５９の配列を構成する２０３アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０５３８】 タンパク質配列のレベルで認められた相同性（３０７）： 酵母Ｙｓｙ６タンパク質（ＰＩＲ（非冗長ＰＩＲ配列、Ｖｅｒｓｉｏｎ ５７
）アクセション番号ＪＱ０９１２）（ｃＤＮＡ ＥＭＢＬ：Ｄ３２３１８のＥＳ
Ｔはこの遺伝子に由来し、ｃＤＮＡ ＥＭＢＬ：Ｄ３３６８８のＥＳＴはこの遺
伝子に由来し、ｃＤＮＡ ＥＭＢＬ：Ｄ３４６６４のＥＳＴはこの遺伝子に由来
し、ｃＤＮＡ ＥＭＢＬ：Ｄ３６５７４のＥＳＴはこの遺伝子に由来する）に弱
い類似性をもつＧｅｎｐｅｐｔ（Ｇｅｎｂａｎｋ ｖ１１０及び１１１，最終更
新日１９９９年５月７日の翻訳）配列ｇｉ｜３８７８５７１｜ｇｎｌ｜ＰＩＤ｜
ｅ１３４８１０３（Ｚ４６８３１）及びＣ．ｅｌｅｇａｎｓ Ｍ０１Ｆ１．４タ
ンパク質に対応するＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ（ＳＰ−ＴｒＥＭＢＬ，Ｖｅｒｓｉｏｎ
７，１９９８年１１月）ｓｐ｜Ｑ２１４５３｜と１８０ａａ（３〜１８２ａａ
位）で３４％相同。
【０５３９】 配列番号１５９の配列をもつポリペプチドはコレステロール流の調節、特にタ
ンジール病、家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺
伝的に関連する疾病に関与している可能性がある。
【０５４０】 推定機能： この遺伝子はその染色体局在によりＦＨＤ／タンジール病研究の候補である。
【０５４１】 ＧＳ９４８５２遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９４８５２と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャー
ＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の３種の代表的核酸配列を決定し
た。
【０５４２】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号６６の配列であ
る。
【０５４３】 配列番号６６の配列は４４７ヌクレオチド長である。
【０５４４】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号６７の配列であ
る。
【０５４５】 配列番号６７の配列は５６４ヌクレオチド長である。
【０５４６】 配列番号６６の配列から夫々配列番号１１５及び１１６の配列をもつ２種のヌ
クレオチドプライマーを合成した。
【０５４７】 配列番号６７の配列から夫々配列番号１１７及び１１８の配列をもつ２種のヌ
クレオチドプライマーを合成した。
【０５４８】 配列番号１１５〜１１８の配列をもつプライマーによりＣｌｏｎｔｅｃｈ社か
ら市販されている各種ヒト組織のｐｏｌｙＡ＋ ｍＲＮＡライブラリーからＧＳ
９４５８２遺伝子の転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列であるｃＤＮ
Ａを増幅することができた。
【０５４９】 ＧＳ９４５８２遺伝子の転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列は配列
番号６８の配列である。
【０５５０】 配列番号６８の配列は６０４ヌクレオチド長である。
【０５５１】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０及び１１６）で検索し
た処、配列番号６６〜６８の配列との配列一致は認められなかった。
【０５５２】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号６７の配列の転写産
物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用してこれらの
分析を実施した処、ＧＳ９４５８２遺伝子は肝臓と心臓で発現されることが判明
した。
【０５５３】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０５５４】 ＧＳ９３５１３５遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３５１３５と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の３種の代表的核酸配列を決定
した。
【０５５５】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号６９の配列であ
る。
【０５５６】 配列番号６９の配列は４８２ヌクレオチド長である。
【０５５７】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号７０の配列であ
る。
【０５５８】 配列番号７０の配列は４０２ヌクレオチド長である。
【０５５９】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
番号６９及び７０の配列との配列一致は認められなかった。
【０５６０】 配列番号６９の配列から配列番号１１９の配列をもつ第１のヌクレオチドプラ
イマーを合成し、配列番号７０の配列から配列番号１２０の配列をもつ第２のヌ
クレオチドプライマーを合成した。これらのプライマーにより配列番号７１の配
列を構成するＧＳ９３５１３５遺伝子の転写産物の第３の代表的核酸配列を増幅
することができた。
【０５６１】 配列番号７１の核酸配列は７５８ヌクレオチド長である。
【０５６２】 ＧｅｎＢａｎｋ（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６）の照合配列との間に以下の相同性
が認められた。
【０５６３】 ・マレイン酸デヒドロゲナーゼ偽遺伝子とＳＴＳを含む染色体Ｘ上のＰＡＣ
４９Ｃ２３からのヒトＤＮＡ配列、長さ＝１５３０７８である配列ｇ２１６８１
４１（ｇｉ｜２１６８１４１｜ｅｍｂ｜Ｚ９３０１９．１｜ＨＳ４９Ｃ２３［２
１６８１４１］と３フラグメント（１５６＋１９７＋９３ｂｐ）で８０〜８５％
相同、 ・ヒト染色体９ｑ３４、クローン７０Ｃ１１、完全配列、長さ〜４６３０５で
ある配列ｇ２８２８７８２（ｇｉ｜２８２８７８２｜ｇｂ｜ＡＣ００２３１９．
１｜ＡＣ００２３１９［２８２８７８２］と４フラグメント（１４４＋８６＋１
９７＋１３７ｂｐ）で８１％〜９０％相同。
【０５６４】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号６９又は７０の配列
の転写産物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用して
これらの分析を実施した処、ＧＳ９３５１３５遺伝子は胎児脳、肝臓、脳、前立
腺、胎盤、胎児肝臓、子宮、睾丸及び腎臓で発現されることが判明した。
【０５６５】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０５６６】 ＧＳ９１４６６９遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１４６６９と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の３種の代表的核酸配列を決定
した。
【０５６７】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号７２の配列であ
る。
【０５６８】 配列番号７２の配列は６７３ヌクレオチド長である。
【０５６９】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号７３の配列であ
る。
【０５７０】 配列番号７３の配列は５５４ヌクレオチド長である。
【０５７１】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
番号７２及び７３の配列との配列一致は認められなかった。
【０５７２】 配列番号７２の配列から夫々配列番号１２１及び１２２の配列をもつ２種のヌ
クレオチドプライマーを合成した。
【０５７３】 配列番号７３の配列から夫々配列番号１２３及び１２４の配列をもつ２種のヌ
クレオチドプライマーを合成した。
【０５７４】 配列番号１２１〜１２４の配列をもつプライマーによりＣｌｏｎｔｅｃｈ社か
ら市販されている各種ヒト組織のｐｏｌｙＡ＋ ｍＲＮＡライブラリーからＧＳ
９１４６６９遺伝子の転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列であるｃＤ
ＮＡを増幅することができた。この配列は配列番号７４の配列である。配列番号
７４の配列は１７９４ヌクレオチド長である。この配列は配列番号７４の配列の
１位ヌクレオチドから２５８位ヌクレオチドまでのオープンリーディングフレー
ムと、同一位置のコーディング配列を含む。この配列は配列番号７４の配列の１
７５１位ヌクレオチドから開始するポリアデニル化部位を含む。
【０５７５】 配列番号７４の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列の間には以下の相同性が認められた。
【０５７６】 ・ヒトｍＲＮＡ；ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ７６１Ａ１６２３（クローンＤＫＦＺ
ｐ７６１Ａ１６２３由来）、部分化合物、長さ＝１０００である配列ｇ６８０７
９７７ ＡＬ１３７４２２と１０００ｂｐ（７９２〜１７９３ｂｐ）で９９％一
致、 ・ヒト染色体９クローンＲＰ１１−４０３Ａ２２マップｑ３４．１３−３４．
３（シーケンシング中）、未配置１９断片、長さ＝１８４８１４である配列決定
中のＢＡＣ ＡＬ１３７０２３ ｇ６９８２０８６と一致。
【０５７７】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号７２又は７３の配列
の転写産物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用して
これらの分析を実施した処、ＧＳ９１４６６９遺伝子は胎児脳と心臓で発現され
ることが判明した。
【０５７８】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０５７９】 配列番号７４の配列をもつ核酸によりコードされるポリペプチド 配列番号７４の核酸配列のオープンリーディングフレームは配列番号１６０の
配列を構成する８５アミノ酸長のポリペプチドを潜在的にコードする。
【０５８０】 データベースＧｅｎＰｅｐｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１５）、Ｓｗｉｓｓｐｒｏ
ｔ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ３８）、ｔｒＥＭＢＬ（１９９９年８月Ｖｅｒｓｉｏｎ）
及びＰＩＲ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ６２，１９９９年９月）の照合配列との間に配列
相同は認められなかった。
【０５８１】 ＧＳ９１３８３９遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１３８３９と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の３種の代表的核酸配列を決定
した。
【０５８２】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号７５の配列であ
る。
【０５８３】 配列番号７５の配列は５０７ヌクレオチド長である。
【０５８４】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号７６の配列であ
る。
【０５８５】 配列番号７６の配列は４１５ヌクレオチド長である。
【０５８６】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
番号７５及び７６の配列との配列一致は認められなかった。
【０５８７】 配列番号７５の配列から配列番号１２５の配列をもつヌクレオチドプライマー
を合成した。
【０５８８】 配列番号７６の配列から配列番号１２６の配列をもつヌクレオチドプライマー
を合成した。
【０５８９】 配列番号１２５及び１２６の配列をもつプライマーによりＣｌｏｎｔｅｃｈ社
から市販されている各種ヒト組織のｐｏｌｙＡ＋ ｍＲＮＡライブラリーからＧ
Ｓ９４８５２遺伝子の転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列であるｃＤ
ＮＡを増幅することができた。この配列は配列番号７７の配列である。
【０５９０】 配列番号７７の配列は１３１８ヌクレオチド長である。
【０５９１】 配列番号７７の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列の間には以下の相同性が認められた。
【０５９２】 ・ヒトクローン２＿Ｄ＿２１（シーケンシング中）、未配置１５断片、長さ＝
１３５１３０である配列ｇ６００６２４３（ＡＣ０１１０９６）と１３２０ｂｐ
（１〜１３１８）で９９％相同、 ・ヒト染色体９クローンＲＰ１１−７０Ｋ１０（シーケンシング中）、未配置
４５断片、長さ＝１００５６２である配列ｇ７２６３５２０（ＡＬ１６１６３１
）と１３２０ｂｐ（１〜１３１８）で９９％相同。
【０５９３】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号７５又は７６の配列
の転写産物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用して
これらの分析を実施した処、ＧＳ９１３８３９遺伝子は胎児脳と肝臓で発現され
ることが判明した。
【０５９４】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０５９５】 ＧＳ９１２６３９遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９１２６３９と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の３種の代表的核酸配列を決定
した。
【０５９６】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第１の核酸配列は配列番号７８の配列であ
る。
【０５９７】 配列番号７８の配列は５３０ヌクレオチド長である。
【０５９８】 この転写産物に対応するｃＤＮＡの第２の核酸配列は配列番号７９の配列であ
る。
【０５９９】 配列番号７９の配列は４９５ヌクレオチド長である。
【０６００】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１０）で検索した処、配列
番号７８及び７９の配列との配列一致は認められなかった。
【０６０１】 配列番号７８の配列から配列番号１２７の配列をもつヌクレオチドプライマー
を合成した。
【０６０２】 配列番号７９の配列から配列番号１２８の配列をもつヌクレオチドプライマー
を合成した。
【０６０３】 配列番号１２７及び１２８の配列をもつプライマーによりＣｌｏｎｔｅｃｈ社
から市販されている各種ヒト組織のｐｏｌｙＡ＋ ｍＲＮＡライブラリーからＧ
Ｓ９１２６３９遺伝子の転写産物に対応するｃＤＮＡの第３の核酸配列であるｃ
ＤＮＡを増幅することができた。この配列は配列番号８０の配列である。
【０６０４】 配列番号８０の配列は５９４ヌクレオチド長である。
【０６０５】 配列番号８０の配列とＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１６
）の照合配列の間には以下の相同性が認められた。
【０６０６】 ・ＣＩＴ９７８ＳＫ−９５Ｋ１５．ＴＶ ＣＩＴ９７８ＳＫヒトゲノムクロー
ン９５Ｋ１５、ゲノム調査配列、長さ＝５２４である配列ｇ２６０３４１５（ｇ
ｉ｜２６０３４１５｜ｇｂ｜Ｂ５１１７８．１｜Ｂ５１１７８［２６０３４１５
］）と５２２ｂｐ（２０４〜７２５位）で９９％相同、 ・ＣＩＴ９７８ＳＫ−９５Ｋ１５．ＴＶ ＣＩＴ９７８ＳＫヒトゲノムクロー
ン９５Ｋ１５、ゲノム調査配列、長さ＝５２９である配列ｇ２８６６３７８（ｇ
ｉ｜２８６６３７８｜ｇｂ｜Ｂ７９３５５．１｜Ｂ７９３５５［２８６６３７８
］）と５０１ｂｐ（２０４〜７０４位）で９９％相同、 ・ＣＩＴ９７８ＳＫ−９５Ｆ１５．ＴＶ ＣＩＴ９７８ＳＫヒトゲノムクロー
ン９６Ｆ５、ゲノム調査配列、長さ＝３０９である配列ｇ２６０２４４２（ｉ｜
２６０２４４２｜ｇｂ｜Ｂ５０２０５．１｜Ｂ５０２０５［２６０２４４２］）
と３０９ｂｐ（２０５〜５１３位）で９４％相同。
【０６０７】 実施例１に記載するように、ＲＴ ＰＣＲにより配列番号７８又は７９の配列
の転写産物の発現分析を実施した。各種組織のｐｏｌｙＡ＋ ＲＮＡを使用して
これらの分析を実施した処、ＧＳ９１２６３９遺伝子は肝臓で発現されることが
判明した。
【０６０８】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０６０９】 ＧＳ９３３６３０遺伝子 核酸 本明細書でＧＳ９３３６３０と呼ぶ遺伝子の転写産物に対応するメッセンジャ
ーＲＮＡを本発明により単離した。この転写産物の代表的核酸配列を決定した。
【０６１０】 この転写産物に対応するｃＤＮＡのこの核酸配列は配列番号８１の配列である
。
【０６１１】 配列番号８１の配列は５８２ヌクレオチド長である。
【０６１２】 ＧｅｎＢａｎｋデータベース（Ｖｅｒｓｉｏｎ １１９）で検索した処、配列
一致は認められなかった。
【０６１３】 この遺伝子はコレステロール逆輸送不全に起因する疾病、特にタンジール病も
しくは家族性ＨＤＬ欠損症、又は染色体９の９ｑ３１〜３４遺伝子座に遺伝的に
関連する疾病の原因位置候補である。
【０６１４】 発明の特徴 従って、本発明は配列番号１２９〜配列番号１６０のアミノ酸配列から構成さ
れる群から選択されるアミノ酸配列をもつタンパク質をコードする核酸、又はそ
のペプチドフラグメントもしくは変異体、又は相補的配列をもつ核酸に関する。
【０６１５】 一般に、本発明の核酸は単離又は精製形態である。
【０６１６】 本発明は配列番号１〜配列番号８１及び配列番号８２〜配列番号１０１のヌク
レオチド配列から構成される群から選択されるポリヌクレオチドの少なくとも８
個の連続ヌクレオチドを含む核酸、又は相補的配列をもつ核酸にも関する。
【０６１７】 本発明は更に、配列番号１〜配列番号８１及び配列番号８２〜配列番号１０１
のヌクレオチド配列から構成される群から選択されるポリヌクレオチドの少なく
とも２０、３０、４０、５０、１００又は１５０個の連続ヌクレオチドを含む核
酸、又は相補的配列をもつ核酸にも関する。
【０６１８】 別の側面によると、本発明は配列番号１〜配列番号８１及び配列番号８２〜配
列番号１０１のヌクレオチド配列から構成される群から選択される核酸に対して
少なくとも９０％のヌクレオチド一致度、有利には配列番号１〜配列番号８１及
び配列番号８２〜配列番号１０１のヌクレオチド配列から構成される群から選択
される核酸に対して８０％、好ましくは９５％、９９％、９９．５％、最も好ま
しくは９９．８％のヌクレオチド一致度をもつ核酸、又は相補的配列をもつ核酸
にも関する。
【０６１９】 別の側面によると、本発明は上記核酸、特に配列番号１〜配列番号８１及び配
列番号８２〜配列番号１０１のヌクレオチド配列から構成される群から選択され
る核酸と高ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズ
する核酸、又は相補的配列をもつ核酸にも関する。
【０６２０】 上述のように、配列番号１〜配列番号８１のヌクレオチド配列の各々はリポタ
ンパク質代謝不全、特にコレステロール逆輸送に関連する疾患に潜在的に関与す
る遺伝子の転写産物に認められる。
【０６２１】 これらの核酸の一部について、そのアミノ酸配列又は発現の変異がこれらの疾
患の１種に潜在的に関連するようなポリペプチドをコードするオープンリーディ
ングフレームを決定した処、このオープンリーディングフレームを含むヌクレオ
チド配列は潜在的に治療上有用な核酸を構成することが分かった。
【０６２２】 従って、本発明は更に上記に定義したような完全又は部分オープンリーディン
グフレームを含むか又はこのようなオープンリーディングフレームから構成され
るポリヌクレオチドに対して少なくとも８０％のヌクレオチド一致度をもつ核酸
にも関する。
【０６２３】 配列番号１〜配列番号８０の配列の転写産物のコーディング領域を完全又は部
分的に含む上記核酸は、これらの核酸を適当な発現シグナルの制御下においた場
合に所望宿主細胞で発現させることができる。
【０６２４】 このような発現シグナルは対応する各遺伝子の調節領域に含まれる発現シグナ
ルでもよいし、外来調節核酸配列から構成してもよい。
【０６２５】 このような核酸を所望宿主細胞で機能的な調節配列の制御下におき、ベクター
に挿入して発現させてもよい。
【０６２６】 ヌクレオチドプローブ及びプライマー 配列番号１〜配列番号８１のヌクレオチド配列の任意１種から誘導される核酸
フラグメントはサンプル中の配列番号１〜配列番号８１の配列から選択されるヌ
クレオチド配列又はそのフラグメントもしくは変異体の少なくとも１コピーの存
在を検出するために有用である。
【０６２７】 本発明のヌクレオチドプローブ又はプライマーは配列番号１〜配列番号８１の
配列から構成される群から選択される核酸、又は相補的配列をもつ核酸の少なく
とも８個の連続ヌクレオチドを含む。
【０６２８】 本発明のヌクレオチドプローブ又はプライマーは本発明の核酸、特に配列番号
１〜配列番号８１の配列から選択されるヌクレオチド配列をもつ核酸、又は相補
的配列をもつ核酸の１０、１２、１５、１８又は２０〜２５、３５、４０、５０
、７０、８０、１００、２００、５００、１０００、１５００個の連続ヌクレオ
チド長をもつことが好ましい。
【０６２９】 あるいは、本発明のヌクレオチドプローブ又はプライマーは本発明の核酸、特
に配列番号１〜配列番号８１の配列から選択される核酸、又は相補的配列をもつ
核酸の１２、１５、１８、２０、２５、３５、４０、５０、１００、２００、５
００、１０００、１５００個の連続ヌクレオチド長をもつフラグメントから構成
されるか及び／又は含む。
【０６３０】 従って、本発明のヌクレオチドプローブ及びプライマーの定義は配列番号１〜
配列番号８１の配列から選択される核酸又はその相補的配列と上記高ストリンジ
ェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズするオリゴヌクレオチ
ドを含む。
【０６３１】 本発明の好適プローブ及びプライマーは配列番号８２〜１０１のヌクレオチド
配列もしくは相補的配列をもつ核酸、又は配列番号１０２〜１２８のヌクレオチ
ド配列もしくは相補的配列をもつ核酸から選択されるポリヌクレオチドの全部又
は一部を含む。
【０６３２】 本発明のヌクレオチドプライマー又はプローブは当業者に周知の適切な任意方
法により作製することができ、例えばクローニングと制限酵素作用、又はＮＡＲ
ＡＮＧら（１９７９）もしくはＢＲＯＷＮら（１９７９）によるホスホジエステ
ル法、ＢＥＡＵＣＡＧＥら（１９８０）によるジエチルホスホラミダイト法等の
直接化学合成、又はＥＵ特許第ＥＰ０，７０７，５９２号に記載の固体担体法が
挙げられる。
【０６３３】 上記オリゴヌクレオチドプローブ及びプライマーを含む本発明の各核酸は所望
により分光分析、光化学、生化学、免疫化学又は化学手段により検出可能なマー
カーを組込んで標識してもよい。
【０６３４】 例えば、このようなマーカーは放射性同位体（３２Ｐ、３３Ｐ、３Ｈ、３５Ｓ
）、蛍光分子（５−ブロモデオキシウリジン、フルオレセイン、アセチルアミノ
フルオレン、ジゴキシゲニン）又はリガンド（例えばビオチン）から構成するこ
とができる。
【０６３５】 プローブの標識はプライマー伸長又は５’もしくは３’末端への付加により標
識分子をポリヌクレオチドに組込んで実施することが好ましい。
【０６３６】 核酸フラグメントの非放射性標識の例は特に仏国特許第ＦＲ７８１０９７５号
又はＵＲＤＥＡら（１９８８）もしくはＳＡＮＣＨＥＺ−ＰＥＳＣＡＤＯＲら（
１９８８）の論文に記載されている。
【０６３７】 本発明のプローブはＵＲＤＥＡら（１９９１）又はヨーロッパ特許第ＥＰ−０
，２２５，８０７号（ＣＨＩＲＯＮ）に記載されているプローブのようにシグナ
ルを増幅できるような構造特徴をもつようにすると有利である。
【０６３８】 本発明のオリゴヌクレオチドプローブは特にゲノムＤＮＡとのサザン型ハイブ
リダイゼーション又は対応する転写産物の発現がサンプルで必要な場合には対応
するメッセンジャーＲＮＡとのハイブリダイゼーションに使用することができる
。
【０６３９】 本発明のプローブはＰＣＲ増幅産物の検出又はミスマッチの検出に使用するこ
ともできる。
【０６４０】 本発明のヌクレオチドプローブ又はプライマーは固体担体に固定してもよい。
このような固体担体は当業者に周知であり、マイクロタイタープレートウェルの
表面、ポリスチレンベッド、磁気ベッド、ニトロセルロースバンド又は微粒子（
例えばラテックス粒子）等が挙げられる。
【０６４１】 従って、本発明はサンプル中の上記核酸の存在の検出方法として、 ａ）本発明の１種以上のヌクレオチドプローブを被験サンプルと接触させる段
階と、 ｂ）プローブとサンプル中に存在する核酸の間に複合体が形成された場合には
これを検出する段階を含む方法にも関する。
【０６４２】 本発明の検出方法の特定実施態様によると、オリゴヌクレオチドプローブは担
体に固定されている。
【０６４３】 別の側面によると、オリゴヌクレオチドプローブは検出可能なマーカーを含む
。
【０６４４】 本発明は更にサンプル中の本発明の核酸の存在の検出用キットとして、 ａ）１種以上の上記ヌクレオチドプローブと、 ｂ）場合により、ハイブリダイゼーション反応に必要な試薬を含むキットにも
関する。
【０６４５】 第１の側面によると、検出用キットはプローブが担体に固定されていることを
特徴とする。
【０６４６】 第２の側面によると、検出用キットはオリゴヌクレオチドプローブが検出可能
なマーカーを含むことを特徴とする。
【０６４７】 上記検出用キットの特定実施態様によると、このようなキットは本発明の核酸
、特に配列番号１〜配列番号８１の配列をもつ核酸又は相補的配列をもつ核酸の
コーディング領域もしくは非コーディング領域で着目標的配列を検出するため又
は突然変異を検出するために使用可能な複数の本発明のオリゴヌクレオチドを含
む。
【０６４８】 好適プローブは配列番号８２〜配列番号１０１の配列をもつポリヌクレオチド
の全部又は一部を含む。
【０６４９】 従って、担体に固定した本発明のプローブは「ＤＮＡチップ」のようにマトリ
ックス状に配置してもよい。このような配置マトリックスは特に米国特許第５，
１４３，８５４号、ＰＣＴ出願第ＷＯ９０／１５０７０号及び９２／１００９２
号に記載されている。
【０６５０】 オリゴヌクレオチドプローブを高密度に固定した担体マトリックスは例えば米
国特許第５，４１２，０８７号及びＰＣＴ出願第ＷＯ９５／１１９９５号に記載
されている。
【０６５１】 本発明のヌクレオチドプライマーは本発明の任意核酸、特に配列番号１〜配列
番号８１の配列をもつ核酸又はその変異体の全部又は一部を増幅するために使用
することができる。
【０６５２】 本発明はサンプルに含まれる本発明の核酸、特に配列番号１〜配列番号８１の
配列をもつ核酸又はそのフラグメントもしくは変異体の増幅方法として、 ａ）標的核酸の存在が疑われるサンプルを増幅反応に必要な試薬の存在下に増
幅しようとする標的核酸の領域の５’側と３’側に夫々配置されたハイブリダイ
ゼーション位置をもつ１対のヌクレオチドプライマーと接触させる段階と、 ｂ）増幅した核酸を検出する段階を含む方法にも関する。
【０６５３】 上記増幅方法を実施するためには、上記ヌクレオチドプライマーのいずれかを
使用すると有利である。
【０６５４】 本発明は更に、本発明の核酸、特に配列番号１〜配列番号８１の配列をもつ核
酸の全部又は一部の増幅用キットとして、 ａ）増幅しようとする標的核酸の５’側と３’側に夫々配置されたハイブリダ
イゼーション位置をもつ１対の本発明のヌクレオチドプライマーと、 ｂ）場合により、増幅反応に必要な試薬を含むキットにも関する。
【０６５５】 このような増幅用キットは少なくとも１対の上記ヌクレオチドプライマーを含
むものが有利である。
【０６５６】 組換えベクター 本発明は本発明の核酸を含む組換えベクターにも関する。
【０６５７】 このような組換えベクターは、 ａ）配列番号１２９〜配列番号１６０の配列から構成される群から選択される
アミノ酸配列をもつタンパク質をコードする核酸又はそのペプチドフラグメント
もしくは変異体、 ｂ）配列番号１〜配列番号８１の配列から構成される群から選択されるポリヌ
クレオチドを含む核酸又はそのフラグメントもしくは変異体、 ｃ）配列番号１〜配列番号８１の配列から構成される群から選択される核酸に
対して少なくとも８０％のヌクレオチド一致度をもつ核酸又はそのフラグメント
もしくは変異体、 ｄ）配列番号１〜配列番号８１の配列をもつ核酸と高ストリンジェンシーハイ
ブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸又はそのフラグメントもし
くは変異体から選択される核酸を含むものが有利である。
【０６５８】 本発明において「ベクター」とは１本鎖又は２本鎖形態の環状又は直鎖ＤＮＡ
又はＲＮＡ分子を意味する。
【０６５９】 第１の実施態様によると、本発明の組換えベクターは所望細胞宿主の形質転換
又はトランスフェクション後に挿入される核酸を増幅するために使用される。
【０６６０】 第２の実施態様によると、本発明の核酸に加え、その転写及び／又は翻訳を誘
導するための調節配列を含む発現ベクターから構成される。
【０６６１】 有利な実施態様によると、本発明の組換えベクターは特に、 （１）プロモーターやエンハンサーのように、挿入する核酸の発現を調節する
ためのエレメントと、 （２）このようなベクターに挿入する本発明の核酸に含まれ、（１）に記載の
調節シグナルとインフレームに配置されたコーディング配列と、 （３）適当な転写開始及び終結配列を含む。
【０６６２】 更に、本発明の組換えベクターはその増幅又はその発現を実施したい細胞宿主
での１個以上の複製起点、マーカー又は選択マーカーを含むことができる。
【０６６３】 例えば、細菌プロモーターとしてはＬａｃＩ及びＬａｃＺプロモーター、バク
テリオファージＴ３又はＴ７のＲＮＡポリメラーゼプロモーター、λファージの
ＰＲ又はＰＬプロモーターが挙げられる。
【０６６４】 真核細胞用プロモーターとしてはＨＳＶウイルスチミジンキナーゼプロモータ
ー又はマウスメタロチオネインＬプロモーターが挙げられる。
【０６６５】 一般に、適切なプロモーターの選択については、当業者は上記ＳＡＭＢＲＯＯ
Ｋら（１９８９）によるマニュアル又はＦＵＬＬＥＲら（１９９６）により記載
されている方法を参照すると有利である。
【０６６６】 本発明の好適細菌ベクターは例えばベクターｐＢＲ３２２（ＡＴＣＣ３７０１
７）又はｐＡＡ２２３−３（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデ
ン）及びｐＧＥＭ１（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ
，米国）等のベクターである。
【０６６７】 他の市販ベクターとして、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０、ｐＱＥ９（Ｑｉａｇｅｎ
）、ｐｓｉＸ１７４、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＡ、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６
Ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ、ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４
、ｐＸＴＩ、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）等のベクターも挙げられる。
【０６６８】 Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａに由来するＳｆ９系（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１７１１）の細胞をトランスフェクトするために使用されるベク
ターｐＶＬ１３９２／１３９３（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）等のバキュロウイルス
型ベクターでもよい。
【０６６９】 ２又は５型ヒトアデノウイルス等のアデノウイルスベクターでもよい。
【０６７０】 本発明の組換えベクターはレトロウイルスベクター又はアデノ随伴ベクター（
ＡＡＶ）でもよい。このようなアデノ随伴ベクターは例えばＦＬＯＴＴＥら（１
９９２）、ＳＡＭＵＬＳＫＩら（１９８９）又はＭｃＬＡＵＧＨＬＩＮ ＢＡら
（１９９６）により記載されている。
【０６７１】 組換え宿主細胞 本発明は本発明の核酸、特に配列番号１〜配列番号８１の配列をもつ核酸又は
そのコーディング領域の全部もしくは一部を含む核酸を含む組換え宿主にも関す
る。
【０６７２】 別の側面によると、本発明は上記組換えベクターを含む組換え宿主細胞にも関
する。
【０６７３】 本発明の好適宿主細胞は例えば、 ａ）大腸菌株（ＤＨ５α株）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ株、Ｓａ
ｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ株、又はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ及びＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ等の種の株等の原
核宿主細胞、 ｂ）ＨｅＬａ細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ２）、Ｃｖ１細胞（ＡＴＣＣ Ｎ
ｏ．ＣＣＬ７０）、ＣＯＳ細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１６５０）、Ｓｆ９細
胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ１７１１）、ＣＨＯ細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ
−６１）又は３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−６３６１）等の真核宿主細
胞である。
【０６７４】 別の側面によると、本発明は配列番号１２９〜配列番号１６０の配列をもつペ
プチドから構成される群から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、又は
そのペプチドフラグメントもしくは変異体に関する。
【０６７５】 本発明は配列番号１２９〜配列番号１６０の配列をもつペプチドから構成され
る群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも１５個の連続アミノ酸を含むポリ
ペプチド、又はそのペプチドフラグメントもしくは変異体にも関する。
【０６７６】 本発明は配列番号１２９〜配列番号１６０の配列をもつペプチドから構成され
る群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８０％のアミノ酸一致度を
もつアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はそのペプチドフラグメントもしくは
変異体にも関する。
【０６７７】 本発明によると、配列番号１２９〜配列番号１６０の配列をもつペプチドから
構成される群から選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、９０％、
９５％又は９９％のアミノ酸一致度をもつポリペプチド、又はそのペプチドフラ
グメントもしくは変異体が有利である。
【０６７８】 本発明のポリペプチドは本発明の核酸、特に配列番号１２９〜配列番号１６０
の配列から選択されるアミノ酸配列をもつポリペプチドの１５、１８又は２０〜
２５、３５、４０、５０、７０、８０、１００又は２００個の連続アミノ酸長で
あることが好ましい。
【０６７９】 あるいは、本発明のポリペプチドは本発明のポリペプチド、特に配列番号１２
９〜配列番号１６０の配列から選択されるポリペプチドの１５、１８、２０、２
５、３５、４０、５０、１００又は２００個の連続アミノ酸長のフラグメントか
ら構成されるか及び／又はこのようなフラグメントを含む。
【０６８０】 一般に、本発明のポリペプチドは単離又は精製形態である。
【０６８１】 本発明は更に配列番号１２９〜配列番号１６０の配列をもつポリペプチドのア
ミノ酸配列に対して１、２、３、４、５、１０〜２０箇所のアミノ酸置換、付加
又は欠失のアミノ酸変異を含むポリペプチド、又はそのフラグメントもしくは変
異体にも関する。
【０６８２】 本発明は更に配列番号１２９〜配列番号１６０の配列をもつポリペプチドの１
種又はそのペプチドフラグメントもしくは変異体の生産方法として、 ａ）前記ポリペプチドをコードする核酸を適当なベクターに挿入する段階と、 ｂ）段階ａ）の組換えベクターで予め形質転換するか又は前記ベクターをトラ
ンスフェクトしておいた宿主細胞を適当な培地で培養する段階と、 ｃ）条件付け培地を回収するか又は例えば音波処理もしくは浸透圧ショック法
により宿主細胞を溶解させる段階と、 ｄ）ｃ）で得られた前記培地又は細胞溶解液から前記ポリペプチドを分離精製
する段階と、 ｅ）場合により、生産された組換えポリペプチドを特性決定する段階を含む方
法にも関する。
【０６８３】 本発明のペプチドはこのポリペプチド又はそのフラグメントもしくは変異体に
対する抗体を予め固定しておいたイムノアフィニティークロマトグラフィーカラ
ムへの結合により特性決定することができる。
【０６８４】 別の側面によると、本発明の組換えポリペプチドは例えばＦ．Ａｕｓｕｂｅｌ
ら（１９９９）に記載されている当業者に公知の方法に従って適当なクロマトグ
ラフィーカラム系に通すことにより精製することができる。
【０６８５】 本発明のポリペプチドは慣用均質溶液又は固相化学合成法により製造すること
もできる。
【０６８６】 例えば、本発明のポリペプチドはＨＯＵＢＥＮＷＥＹＬ（１９７４）により記
載されている均質溶液又はＭＥＲＲＩＦＩＥＬＤ（１９６５ａ；１９６５ｂ）に
より記載されている固相合成法により製造することができる。
【０６８７】 配列番号１２９〜配列番号１６０のアミノ酸配列をもつポリペプチドの任意１
種に「相同な」ポリペプチド、又はそのフラグメントもしくは変異体も本発明を
構成する。
【０６８８】 このような相同ポリペプチドは基準ポリペプチドに対して所定アミノ酸を等価
アミノ酸で１箇所以上置換したアミノ酸配列をもつ。
【０６８９】 等価アミノ酸とは、本発明によると、例えば当業者に周知の方法によりＬ形残
基をＤ形残基で置換するか又はグルタミン酸（Ｅ）をピログルタミン酸で置換し
たものを意味する。例えば、少なくとも１個のＤ形残基を含むペプチドの合成は
ＫＯＣＨ（１９７７）により記載されている。
【０６９０】 別の側面によると、同一類に属する２種のアミノ酸即ち２種の酸性、塩基性、
非極性又は非帯電極性アミノ酸も等価アミノ酸とみなす。
【０６９１】 レトロインバーソ結合（ＮＨＣＯ）、カルバ結合（ＣＨ２ＣＨ２）又はケトメ
チレン結合（ＣＯ−ＣＨ２）等の少なくとも１個の非ペプチド結合を含むポリペ
プチドも本発明を構成する。
【０６９２】 少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失又は置換を１箇所以上含む本発明のポ
リペプチドは非変異ポリペプチドに対する抗体による認識能を維持することが好
ましい。
【０６９３】 抗体 本発明のポリペプチド、特に配列番号１２９〜配列番号１６０のアミノ酸配列
をもつポリペプチド又はそのフラグメント及び変異体並びに相同ペプチドは抗体
作製に使用することができる。
【０６９４】 本発明において「抗体」とは、特にポリクローナルもしくはモノクローナル抗
体又はフラグメント（例えばＦ（ａｂ）’２及びＦａｂフラグメント）、あるい
は本発明のポリペプチド又は標的ポリペプチドフラグメントを認識する初期抗体
のドメインを含む任意ポリペプチドを意味する。
【０６９５】 モノクローナル抗体はＫＯＨＬＥＲとＭＩＬＳＴＥＩＮ（１９７５）に記載の
方法によりハイブリドーマから作製することができる。
【０６９６】 本発明はトリオーマ法又はＫＯＺＢＯＲら（１９８３）に記載のハイブリドー
マ法で生産されるような上記ポリペプチド又はそのフラグメントもしくは変異体
に対する抗体にも関する。
【０６９７】 本発明は更に米国特許第４，９４６，７７８号又はＭＡＲＴＩＮＥＡＵら（１
９９８）に記載されているような単鎖抗体フラグメントＦｖ（ＳｃＦｖ）にも関
する。
【０６９８】 本発明の抗体は更にファージライブラリーから得られる抗体フラグメント（Ｒ
ＩＤＤＥＲら（１９９５））又はヒト化抗体（ＲＥＩＭＡＮＮら（１９９７）；
ＬＥＧＥＲら（１９９７））も含む。
【０６９９】 本発明の抗体製剤はサンプル中に存在する抗原の存在及び／又は量を認識する
ことを目的とする免疫検出試験で有用である。
【０７００】 本発明の抗体は更に検出可能な同位体又は非同位体（例えば蛍光）マーカーを
加えてもよいし、当業者に周知の方法によりビオチン等の分子に結合してもよい
。
【０７０１】 従って、本発明はサンプル中の本発明のポリペプチドの存在の検出方法として
、 ａ）被験サンプルを上記抗体と接触させる段階と、 ｂ）形成された抗原／抗体複合体を検出する段階を含む方法にも関する。
【０７０２】 本発明は更に、サンプル中の本発明のポリペプチドの存在の診断又は検出用キ
ットとして、 ａ）上記抗体と、 ｂ）形成された抗原／抗体複合体を検出するための試薬を含むキットにも関す
る。
【０７０３】 本発明のポリペプチドに結合する分子又は物質のスクリーニング方法 本発明のポリペプチドはこのポリペプチドに結合する分子をスクリーニングす
るために使用することができる。
【０７０４】 ポリペプチドと分子又は物質の結合は前記ポリペプチドの活性を活性化（アゴ
ニスト分子）又は阻害する（アンタゴニスト分子）。
【０７０５】 本発明のポリペプチドの任意１種と結合することが可能なこのような分子とし
ては抗体、オリゴヌクレオチド、他のタンパク質及び一般に任意種の小分子が挙
げられる。
【０７０６】 このようなスクリーニング試験では、２種のパートナーの一方を検出可能な化
合物（着目ポリペプチド又は候補分子）で標識し、次いで特異的に結合しなかっ
た候補分子を除去した後に検出可能なマーカーを検出してポリペプチド／候補分
子複合体を可視化することにより、候補分子とポリペプチドの結合を簡単に検出
することができる。
【０７０７】 例えば、本発明のポリペプチドに結合することが可能な候補分子のスクリーニ
ング試験の１例では、着目ポリペプチド又は候補分子を担体に固定する第１段階
と、先に担体に固定しておいた第１の化合物に第２のパートナー（候補分子又は
着目ポリペプチド）を暴露する第２段階と、特異的に結合しなかった化合物を除
去するのに適した条件下で１回以上洗浄する第３段階と、最後に着目ポリペプチ
ドと固定分子の間に複合体が形成された場合にはこれを検出する第４段階を含む
と有利である。
【０７０８】 候補分子を予め担体に固定した後に本発明の着目ポリペプチドに暴露する実施
態様のスクリーニング試験では、候補分子と本発明の着目ポリペプチドにより形
成された複合体の検出は上記抗体を用いて実施すると有利である。
【０７０９】 本発明の着目ポリペプチドを予め担体に固定する別の実施態様のスクリーニン
グ試験では、固定した着目ポリペプチドと接触させる前に候補分子を検出可能な
マーカーで標識すると有利である。
【０７１０】 このような検出可能なマーカーは放射性でも非放射性（例えば蛍光）でもよい
し、検出に使用する第３のパートナーのリガンド（例えばビオチン分子）に対応
するものでもよい。
【０７１１】 従って、本発明は本発明のポリペプチドと相互作用する候補分子又は物質のス
クリーニング方法として、 ａ）本発明のポリペプチドを被験候補物質又は分子と接触させる段階と、 ｂ）前記ポリペプチドと前記候補物質又は分子の間に複合体が形成された場合
にはこれを検出する段階を含む方法にも関する。
【０７１２】 本発明は更に、本発明のポリペプチドと相互作用する候補分子又は物質のスク
リーニング用キットとして、 ａ）本発明のポリペプチドと、 ｂ）場合により、前記ポリペプチドと候補分子又は物質の間に形成された複合
体を検出するために必要な手段を含むキットにも関する。
【０７１３】 以下、実施例により本発明を更に説明するが、以下の実施例により本発明を制
限するものではない。
【０７１４】 実施例 実施例１：本発明の転写産物の組織分布 特にＳａｍｂｒｏｏｋら，（ＣＳＨ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．，Ｆｒｉｔｓｃ
ｈ，Ｅ．Ｆ．及びＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．（１９８９）：“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，”第２版，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ．参照）により記載されているノーザ
ンブロット及びＰＣＲによる逆転写分析プロトコールに従って本発明のポリヌク
レオチドの発現プロフィルを決定した。
【０７１５】 例えば、逆転写による分析の場合には、配列番号１〜配列番号８１のヌクレオ
チド配列の転写産物の任意１種から合成した１対のプライマーを使用して対応す
るｃＤＮＡを検出した。
【０７１６】 逆転写ｐｏｌｙＡ＋ｍＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に対応するｃＤＮＡ鋳型で
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施した。ｃＤＮＡへの逆転写は酵素ＳＵＰ
ＥＲＳＣＲＩＰＴ ＩＩ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ，Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉ
ｅｓ）を用いて製造業者により記載されている条件に従って実施した。
【０７１７】 ポリメラーゼ連鎖反応は標準条件に従ってｃＤＮＡ調製物２５ｎｇを含む反応
混合物２０μｌ中で実施した。反応混合物は各ｄＮＴＰ４００μＭ、Ｔｈｅｒｍ
ｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ（Ｔａｑ）ＤＮＡポリメラーゼ（Ａｍｐｌｉ Ｔａｑ
Ｃｏｌｄ；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）２単位、各プライマー０．５μＭ、Ｍ
ｇＣｌ２２．５ｍＭ及びＰＣＲバッファーから構成した。Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍ
ｅｒ ９７００サーモサイクラーで９４℃１０分間の初期変性段階後に３４ＰＣ
Ｒサイクル（９４℃で３０秒間変性、３４サイクルを６４℃２サイクル、６１℃
２サイクル、５８℃２サイクル及び５５℃２８サイクルに分割した３０秒間アニ
ーリング、７２℃で１分／ｋｂの伸長）を実施した。ＰＣＲ反応産物はアガロー
スゲル電気泳動により可視化した。得られたｃＤＮＡフラグメントはノーザンブ
ロット分析用プローブとしても使用できるし、ポリヌクレオチド配列の正確な決
定にも使用できる。
【０７１８】 ノーザンブロット分析の場合には、上記のように作製したｃＤＮＡプローブを
Ｈｉｇｈ Ｐｒｉｍｅ ＤＮＡ標識システム（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）で製造業
者の指示に従って３２Ｐ標識した。標識後にプローブをＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５
０マイクロカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）で製造業者の指示に従って精製した。
標識及び精製したプローブをその後、各種組織におけるｍＲＮＡ発現の検出に使
用した。
【０７１９】 各種ヒト組織からのＲＮＡサンプルを含むノーザンブロット（（Ｍｕｌｔｉｐ
ｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ，ＭＴＮ，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）Ｂｌｏｔ
２，リファレンス７７７５９−１）を標識プローブとハイブリダイズさせた。
【０７２０】 ハイブリダイゼーションと洗浄に採用するプロトコールは製造業者の記載通り
（使用マニュアルＰＴ１２００−１）でもよいし、例えばＦ．ＡＵＳＵＢＥＬら
（１９９９）に記載されている当業者に公知の方法を使用してこのプロトコール
を改変してもよい。
【０７２１】 例えばホルムアミドの存在下にプレハイブリダイゼーション温度とハイブリダ
イゼーション温度を変動させてもよい。
【０７２２】 例えば、以下のプロトコールを使用することができる。 １−膜競合及びプレハイブリダイゼーション： −サケ精子ＤＮＡ４０μｌ（１０ｍｇ／ｍｌ）とヒト胎盤ＤＮＡ４０μｌ（１０
ｍｇ／ｍｌ）を混合する。 −５分間９６℃で変性させた後、混合物を氷に浸ける。 −２×ＳＳＣを捨て、膜を入れたハイブリダイゼーションチューブにホルムアミ
ド混合物４ｍｌを注入する。 −２種の変性ＤＮＡの混合物を加える。 −４２℃で５〜６時間回転下にインキュベートする。 ２−標識プローブ競合： −リピート量に応じてＣｏｔ Ｉ ＤＮＡ１０〜５０μｌを標識精製プローブに
加える。 −９５℃で７〜１０分間変性させる。 −６５℃で２〜５時間インキュベートする。 ３−ハイブリダイゼーション： −プレハイブリダイゼーション混合物を捨てる。 −サケ精子ＤＮＡ４０μｌとヒト胎盤ＤＮＡ４０μｌを混合し、５分間９６℃で
変性させた後、氷に浸ける。 −ハイブリダイゼーションチューブにホルムアミド混合物４ｍｌと、２種のＤＮ
Ａの混合物と、標識プローブ／変性Ｃｏｔ Ｉ ＤＮＡを加える。 −４２℃で１５〜２０時間回転下にインキュベートする。 ４−洗浄： −室温で２×ＳＳＣで洗浄し、濯ぐ。 −室温で２×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳ（６５℃）で５分間２回洗浄する。 −６５℃で１×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳ（６５℃）で１５分間２回洗浄する。
【０７２３】 ハイブリダイゼーション及び洗浄後、燐光スクリーンと接触させて一晩露光後
にＳｔｏｒｍ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，
ＣＡ）で検出してブロットを分析した。
【０７２４】 実施例２：本発明の転写産物に対応する完全ｃＤＮＡフラグメントの獲得 配列番号１〜配列番号８１の配列の特定クローンの１種に対応するｃＤＮＡを
単離するには各種アプローチを使用することができる。
【０７２５】 例えば、着目遺伝子の配列に特異的なポリヌクレオチドプローブを使用してｃ
ＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによりハイブリダイゼーションに
より完全クローンを直接単離することができる。
【０７２６】 特に、選択した配列に従って商標名Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ／Ｐ
ｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒの合成器を使用することにより３０〜４０ヌクレオチド
の特異的プローブを合成した。
【０７２７】 得られたオリゴヌクレオチドを例えばＴ４ポリヌクレオチドキナーゼを使用し
て３２Ｐ−γ−ＡＴＰで放射性標識し、常法（例えばＭａｎｉａｔｉｓら，Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
，ＮＹ １９８２又はＦ．Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ
Ｓｏｎｓ編，１９９９）に従って精製した。
【０７２８】 上記常法（Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌら）に従い、適当な抗生物質を加えた培地（１
．５％寒天）をペトリ皿に入れ、スクリーニングしようとするｃＤＮＡを含むク
ローンライブラリーを播種した。こうしてインキュベーション後に形成されたコ
ロニーをニトロセルロースフィルターに移し、放射性標識ヌクレオチドプローブ
を使用して常法に従ってスクリーニングし、プローブにハイブリダイズするコロ
ニーを単離し、サブクローニングした。
【０７２９】 こうして同定したクローンのｃＤＮＡを調製し、シーケンシングにより分析し
た。完全ｃＤＮＡに対応するフラグメントを含むクローンを精製し、例えばＦ．
Ａｕｓｕｂｅｌら（１９９９）に記載されている当業者に公知のプロトコールに
従ってベクターｐｃＤＮＡ３に再クローニングした。
【０７３０】 本明細書に記載する遺伝子に対応するｃＤＮＡの５’及び３’末端の同定方法
は各種の方法が公知である。これらの方法の非限定的な例としては、ハイブリダ
イゼーションクローニング、当業者に周知の５’又は３’ＲＡＣＥ−ＰＣＲ（Ｒ
ａｐｉｄ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃＤＮＡ Ｅｎｄ（ｃＤＮＡ末
端の迅速増幅）−ＰＣＲ）に類似又は同一のプロトコールを使用するクローニン
グ等が挙げられる。
【０７３１】 例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社から市販されているキット（Ｍａｒａｔｈｏｎ
Ｒｅａｄｙ（登録商標）ｃＤＮＡキット、プロトコールリファレンスＰＴ１１５
６−１）を使用してもよいし、あるいは５’ＲＡＣＥに類似の方法を使用してｃ
ＤＮＡの欠失５’末端を特性決定するしてもよい（Ｆｒｏｍｏｎｔ−Ｒａｃｉｎ
ｅら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．２１（７）：１６８３−１６８４（
１９９３））。要約すると、ＲＮＡオリゴヌクレオチドをｍＲＮＡ集団の５’末
端に連結する。ｃＤＮＡに逆転写後、着目遺伝子の５’末端に連結されたアダプ
ターと３’末端に配置された配列に夫々特異的な一組のプライマーをＰＣＲで使
用し、所望ｃＤＮＡの５’部分を増幅する。その後、増幅フラグメントを使用し
て完全ｃＤＮＡを再構成する。
【０７３２】 実施例３：タンジール病の遺伝子発現プロフィルの分析 タンジール病罹患又は非罹患被験者の繊維芽細胞からのｍＲＮＡに対応するプ
ローブとこれらの配列のハイブリダイゼーションにより、タンジール細胞表現型
を誘導する候補遺伝子の発現低下度を以下の方法に従って試験することができる
。
【０７３３】 １．全ＲＮＡ、ｐｏｌｙ（Ａ）＋ｍＲＮＡ及びｃＤＮＡプローブの作製 全ＲＮＡはグアニジンイソチオシアネート法（ＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉとＳａ
ｃｃｈｉ，１９８７）により正常被験者又はタンジール病被験者からの繊維芽細
胞の細胞培養液から得られる。ｐｏｌｙ（Ａ）＋ｍＲＮＡはオリゴ（ｄＴ）−セ
ルロースカラムでアフィニティークロマトグラフィーにより得られ（Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋら，１９８９）、プローブとして使用するｃＤＮＡは蛍光製品（Ａｍｅｒ
ｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ；ＣｙＤｙｅ（登録商標））で
標識したオリゴヌクレオチドを使用してＲＴ−ＰＣＲ（ＤｅＲｉｓｉら，１９９
７）により得られる。
【０７３４】 ２．ハイブリダイゼーションと発現レベルの検出 タンジール遺伝子に対応する本願明細書に記載する配列を含むガラス膜を繊維
芽細胞から得られたｃＤＮＡプローブとハイブリダイズさせる（Ｉｙｅｒら，１
９９９）。Ａｍｅｒｓｈａｍ／Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ（Ａｖａ
ｌａｎｃｈｅ Ｍｉｃｒｏｓｃａｎｎｅｒ（登録商標））システムを使用すると
、健康又は罹患細胞型における配列産物発現を定量することができる。
【０７３５】 実施例４：哺乳動物細胞発現用ベクターの構築 着目遺伝子は哺乳動物細胞で発現させることができる。典型的な真核発現ベク
ターはｍＲＮＡの転写開始を可能にするプロモーターと、タンパク質をコードす
る配列と、転写終結と転写産物のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。更に
、エンハンサー、コザック配列及びｍＲＮＡのスプライシングに必要な配列等の
付加シグナルも含む。ＳＶ４０ウイルスプロモーターの初期及び後期エレメント
、レトロウイルスＬＴＲ又はＣＭＶウイルス初期プロモーターを使用すると効率
的な転写が得られる。他方、アクチンプロモーター等の細胞エレメントも使用で
きる。本発明を実施するには、ベクターｐｃＤＮＡ３を始めとする多数の発現ベ
クターを使用することができる。
【０７３６】 実施例５：ポリペプチドの生産 ＧＳ遺伝子番号ＸＸの部分転写産物又は実施例２に記載した完全ｃＤＮＡ（完
全ｃＤＮＡのクローニング）に対応するポリペプチドはバキュロウイルスベクタ
ーを使用して昆虫細胞もしくは細菌発現系で又はワクシニアウイルスベクターを
使用するか使用せずに哺乳動物細胞で簡単に生産することができる。全方法は現
在広く記載されており、当業者に公知である。詳細な説明については例えばＡｕ
ｓｕｂｅｌら（１９９９）を参照されたい。
【０７３７】 実施例６：ポリペプチドから誘導される抗体の生産 本発明の抗体は各種方法で作製することができる（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ １，
Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒｏｇｅｒ Ｂｒｅｎｔ，Ｒｏｂｅ
ｒｔ Ｅ．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｄａｖｉｄ Ｄ．Ｍｏｏｒｅ，Ｊ．Ｇ．Ｓｅｉｄ
ｍａｎ，Ｊｏｈｎ Ａ．Ｓｍｉｔｈ，Ｋｅｖｉｎ Ｓｔｒｕｈｌ編，Ｍａｓｓａ
ｃｈｕｓｅｔｔｓ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｈａｒｖａｒｄ Ｍｅ
ｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ，第１１章）。例えば、本発明のポリペプチドを発現
する細胞を動物に注入し、抗体を含む血清の生産を誘導する。記載されている方
法の１例では、タンパク質を調製し、汚染を避けるように精製する。より高活性
のポリクローナル抗血清を生産する目的でこのような調製物を動物に導入する。
【０７３８】 好適方法では、本発明の抗体はモノクローナル抗体である。このようなモノク
ローナル抗体はハイブリドーマ法（Ｋｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４
９５（１９７５）；Ｋｏｈｌｅｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１
（１９７６）；Ｋｏｈｌｅｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２９２（１
９７６）；Ｈａｍｍｅｌｉｎｇら，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏ
ｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，
Ｎ．Ｙ．，５６３〜６８１頁，５１９８１）を使用して作製することができる。
一般に、このような方法はポリペプチド又は好ましくはポリペプチドを発現する
細胞で動物（好ましくはマウス）を免疫する。これらの細胞は適当な組織培地で
培養できる。但し、１０％ウシ胎児血清（５６℃で不活化）と非必須アミノ酸約
１０ｇ／ｌ、ペニシリン１０００Ｕ／ｍｌ及びストレプトマイシン約１００μｇ
／ｍｌを加えたイーグル培地（改変Ｅａｒｌｅ）で細胞を培養することが好まし
い。
【０７３９】 これらのマウスからの脾細胞を摘出し、適当なミエローマ細胞系と融合する。
但し、ＡＴＣＣで入手可能な親ミエローマ細胞系（ＳＰ２Ｏ）を使用することが
好ましい。融合後、得られたハイブリドーマ細胞をＨＡＴ培地で選択的に保存し
た後、Ｗａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２５−２３
２（１９８１））に記載されているように制限希釈法によりクローニングする。
このような選択後に得られたハイブリドーマ細胞を試験し、ポリペプチドに結合
することが可能な抗体を分泌するクローンを同定する。
【０７４０】 更に、抗イディオタイプ抗体を使用する２段階法によりポリペプチドに結合す
ることが可能な他の抗体を生産することができ、このような方法は抗体自体が抗
原であるため、別の抗体を認識する抗体を得ることができるという事実に基づく
。この方法によると、タンパク質に特異的な抗体を使用して動物、好ましくはマ
ウスを免疫する。次に、この動物からの脾細胞を使用してハイブリドーマ細胞を
生産し、ハイブリドーマ細胞をスクリーニングし、タンパク質−特異的抗体複合
体との結合能をポリペプチドにより阻止することが可能な抗体を生産するクロー
ンを同定する。これらの抗体を使用して動物を免疫すると、タンパク質に特異的
な抗体の大量形成を誘導することができる。
【０７４１】 本明細書に記載する方法により本発明の抗体のＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２並び
に他のフラグメントを使用できるならば有利であろう。このようなフラグメント
は一般にパパイン（Ｆａｂフラグメント生産）又はペプシン（Ｆ（ａｂ’）生産
）等の酵素を使用してタンパク分解により生産される。あるいは、組換えＤＮＡ
又は合成化学技術を適用することによりタンパク質を認識する分泌フラグメント
を生産することができる。
【０７４２】 抗体をヒトでｉｎ ｖｉｖｏ使用するには、「ヒト化」キメラモノクローナル
抗体を使用することが好ましいと思われる。このような抗体は上記モノクローナ
ル抗体を生産するハイブリドーマ細胞から誘導される遺伝子構築物を使用して生
産することができる。キメラ抗体の生産方法は当業者に公知である。（例えばＭ
ｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら，（
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ４：２１４（１９８６）；Ｃａｂｉｌｌｙら，米国
特許第４，８１６，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら，ＥＰ１７１４９６；Ｍｏ
ｒｒｉｓｏｎら，ＥＰ１７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，ＷＯ８６０１５５
３；Ｒｏｂｉｎｓｏｎら，ＷＯ８７０２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら，Ｎａｔ
ｕｒｅ ３１２：６４３（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ
３１４：２６８（１９８５）参照）。
【０７４３】 実施例７：タンジール病の細胞表現型の補正 タンジール病は高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）粒子の異化作用促進とコレス
テロールの組織蓄積を特徴とする。特に、タンジール病患者の皮膚の繊維芽細胞
は主要ＨＤＬタンパク質であるアポリポタンパク質Ａ−Ｉ（ａｐｏＡ−Ｉ）によ
り提供されるコレステロール流出プロセスによりそのコレステロール含有分を排
出する能力が低下している（Ｆｒａｎｃｉｓら，１９９５）。機能低下に対応す
るこの特徴は家族性ＨＤＬ欠損症患者からの他の繊維芽細胞にも認められる（Ｍ
ａｒｃｉｌら，１９９９）。
【０７４４】 提示配列に対応する完全ｃＤＮＡをタンジール繊維芽細胞にトランスフェクト
することによりタンジール繊維芽細胞の表現型を補正できる。ｃＤＮＡを発現ベ
クターに挿入した後、ベクターを以下の方法によりトランスフェクトした。
【０７４５】 １．正常被験者とタンジール病被験者の繊維芽細胞培養液の調製 前腕からの皮膚生検を培養することによりヒト皮膚一次繊維芽細胞を得た。こ
れらの生検は「ホモ接合体」の臨床及び生化学特徴（即ちオレンジ色扁桃、血漿
ａｐｏＡ−Ｉ濃度及び５％未満のＨＤＬコレステロール）をもつタンジール病患
者で実施した。正常繊維芽細胞系はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒ
ｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から得た。１０％ウシ
胎児血清、２ｍＭグルタミン、１００ＩＵ／ｍｌペニシリン及び１００μｇ／ｍ
ｌストレプトマイシンを加えたＥＭＭＥＭ培地（イーグルの改変最少必須培地；
ＧＩＢＣＯ）（ＥＭＭＥＭ１０培地）で繊維芽細胞を培養した。コレステロール
流出試験を実施するために、ウシ血清を加えずに２ｍｇ／ｍｌウシアルブミン（
ＢＳＡ、フラクションＶ）を加えた上記培地で５０μｇ／ｍｌコレステロールと
共に２４時間インキュベートすることによりこれらの細胞にコレステロールをプ
レロードした。
【０７４６】 ２．コレステロール流出試験 ２４ウェルプレートでコレステロールをコンフルエントまでプレロードした繊
維芽細胞を、１，２−３Ｈ−コレステロール１μＣｉ／ｍｌ（５０Ｃｉ／ｍｍｏ
ｌ；Ｄｕｐｏｎｔ；Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）を加えたＥＭＭＥＭ１０培地
で４８時間インキュベートした。約１００，０００ｃｐｍ／ウェル又は１０００
ｃｐｍ／μｇ細胞タンパク質が得られた。細胞をＥＭＭＥＭ／ＢＳＡ培地で３回
洗浄し、この培地と共に２４時間インキュベートした後、着目遺伝子をトランス
フェクトし、ＥＭＭＥ／ＢＳＡ培地にａｐｏＡ−Ｉを含むプロテオリポソーム１
０μｇ／ｍｌを加えることにより流出を開始した。これらのプロテオリポソーム
はホスファチジルコリンと精製ヒトａｐｏＡ−Ｉの音波処理により調製した（Ｊ
ｏｎａｓ，１９８６）。細胞トランスフェクションはリン酸カルシウム沈殿法（
Ｓａｍｂｒｏｏｋら，１９８９）により実施した。一般に２０時間の流出時間後
に培地を集め、遠心分離し（１０００ｇ，５分）、液体シンチレーション計数に
より放射能を測定した。イソプロパノールで脂質を抽出後に細胞の残留放射能も
一晩測定した。上清で測定された放射能を上清と細胞抽出液で測定された放射能
の和で割ることにより流出百分率を計算した。マーカー遺伝子をトランスフェク
トし、ａｐｏＡ−Ｉを含むプロテオリポソームの不在下にＥＭＭＥＭ／ＢＳＡ培
地と共に２４時間インキュベートすることにより内部標準を作製した。対照遺伝
子をトランスフェクトした正常繊維芽細胞からの細胞コレステロール流出は６±
２％に対応し、この対照遺伝子をトランスフェクトしたタンジール病患者繊維芽
細胞から得た細胞コレステロール流出は１％未満であった。他方、本明細書に提
示する遺伝子に対応するプラスミドをタンジール病患者繊維芽細胞にトランスフ
ェクトすると、これらの細胞が正常繊維芽細胞に対応するレベルまでその過剰コ
レステロールを排出する能力を復元できると思われる。
【０７４７】 実施例８：ポリヌクレオチドに対応するゲノムクローンの単離 転写産物に対応するゲノムクローンの単離は実施例１に記載した方法により本
発明の配列番号１〜配列番号８１の転写産物の配列に対応するｃＤＮＡ配列に特
異的なプライマーを使用してＰＣＲによりヒトゲノムＤＮＡ ＢＡＣライブラリ
ー（例えばＭｅｌ Ｓｉｍｏｎ，ＣａｌＴｅｃｈ．により提供されるライブラリ
ー、Ｋｉｍら，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ（１９９６），３４：２１３−２１８参照）を
スクリーニングすることにより実施した。
【０７４８】 実施例９：本発明の転写産物に対応する遺伝子の１種の多型性／突然変異の決
定 転写産物の配列における多型性又は突然変異の検出は各種プロトコールに従っ
て実施することができる。選択方法は直接シーケンシングである。
【０７４９】 対応する遺伝子の構造が全く又は部分的にしか分かっていない転写産物の場合
には、そのイントロン−エキソン構造と対応する遺伝子のゲノム配列を厳密に決
定することが必要である。従って、第１段階で実施例８に記載した方法により被
験転写産物に対応するゲノムＤＮＡ ＢＡＣクローンを単離し、対応するクロー
ンのインサートを配列決定し、ｃＤＮＡ配列を得られたゲノムＤＮＡの配列と比
較することによりイントロン−エキソン構造を決定する。
【０７５０】 直接シーケンシングによる突然変異検出法は少なくとも８個体（被験疾病に罹
患した４個体と罹患していない４個体）から得た配列番号１〜配列番号８１のｃ
ＤＮＡに対応する遺伝子のゲノム配列を比較する。配列ダイバージェンシーが多
型性を構成する。野生型タンパク質のアミノ酸配列と異なる全突然変異は前記タ
ンパク質の機能に影響する可能性のある突然変異であり、特に実施例８に記載し
た患者／対照組合せ試験で検討すると有利である。
【０７５１】 実施例１０：原因突然変異又は転写変異による原因遺伝子の同定 実施例９に記載した方法により同定される突然変異のうち、疾病表現型に関連
する全突然変異は原因となる可能性がある。これらの結果の確認は全罹患個体と
（そのＤＮＡを入手可能な）その親族の遺伝子を配列決定することにより実施し
た。
【０７５２】 更に、罹患個体と非罹患個体の特異的ＲＮＡを使用して実施例１に記載した方
法によりノーザンブロット又はＲＴ−ＰＣＲを実施すると、被験遺伝子の発現レ
ベルの著変、特に遺伝子転写の不在を検出することができる。
【０７５３】
【表１】
【０７５４】
【表２】
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 1/21 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 5/10 Ｍ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｎ Ｇ０１Ｎ 33/53 33/566 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 5/00 Ａ 33/566 15/00 Ｆ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ， ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，Ｋ Ｇ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ， ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ， ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 アルヌウ−レギーニユ，イザベル フランス国、エフ−94430・シエヌビエー ル・シユール・マルヌ、リユ・ドウ・ブ リ、112、 (72)発明者 プラデ，カトウリンヌ フランス国、エフ−94320・テイエ、アベ ニユ・ドユ・ジエネラル・ドウ・ゴール、 30 (72)発明者 クルペ，クリスチアン フランス国、エフ−75013・パリ、リユ・ シヤルル・フルニエ、８ Ｆターム(参考） 4B024 AA11 BA44 BA65 CA04 CA09 DA02 DA03 DA06 EA04 GA03 GA11 HA14 HA15 HA19 4B063 QA01 QA12 QA19 QQ08 QQ42 QR32 QR38 QR55 QR56 QR82 QS24 QS25 QS34 QX02 4B065 AA26X AA90X AA91X AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA46 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA40 DA76 DA86 EA50 FA74

Claims (29)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 配列番号１２９〜配列番号１６０のアミノ酸配列から構成さ
    れる群から選択されるアミノ酸配列をもつタンパク質又はそのペプチドフラグメ
    ントもしくは変異体をコードする核酸、又は相補的配列をもつ核酸。
  2. 【請求項２】 配列番号１〜配列番号８１のヌクレオチド配列から構成され
    る群から選択されるポリヌクレオチドの少なくとも８個の連続ヌクレオチドを含
    む核酸、又は相補的配列をもつ核酸。
  3. 【請求項３】 配列番号１〜配列番号８１のヌクレオチド配列から構成され
    る群から選択されるポリヌクレオチドの少なくとも２０個の連続ヌクレオチドを
    含む請求項２に記載の核酸、又は相補的配列をもつ核酸。
  4. 【請求項４】 請求項１から３のいずれか一項に記載の核酸に対して少なく
    とも８０％のヌクレオチド一致度をもつ核酸、又は相補的配列をもつ核酸。
  5. 【請求項５】 請求項１から４のいずれか一項に記載の核酸と高ストリンジ
    ェンシーハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする核酸、又は相補的
    配列をもつ核酸。
  6. 【請求項６】 請求項１から５のいずれか一項に記載の核酸の少なくとも８
    個の連続ヌクレオチドを含むヌクレオチドプローブ又はプライマー。
  7. 【請求項７】 １５〜３００ヌクレオチド長をもつ請求項６に記載のヌクレ
    オチドプローブ又はプライマー。
  8. 【請求項８】 ２０〜２００ヌクレオチド長をもつ請求項６に記載のヌクレ
    オチドプローブ又はプライマー。
  9. 【請求項９】 配列番号８２〜１０１及び１０２〜１２８の配列から選択さ
    れるポリヌクレオチドの少なくとも８個の連続ヌクレオチドを含むヌクレオチド
    プローブ又はプライマー。
  10. 【請求項１０】 サンプルに含まれる請求項１から５のいずれか一項に記載
    の核酸の増幅方法であって、 ａ）標的核酸の存在が疑われるサンプルを増幅反応に必要な試薬の存在下に増
    幅しようとする標的核酸の領域の５’側と３’側に夫々配置されたハイブリダイ
    ゼーション位置をもつ１対のヌクレオチドプライマーと接触させる段階と、 ｂ）増幅した核酸を検出する段階を含む前記方法。
  11. 【請求項１１】 ヌクレオチドプライマーが請求項６から９のいずれか一項
    に記載のプライマーから選択されることを特徴とする請求項１０に記載の増幅方
    法。
  12. 【請求項１２】 請求項１から５のいずれか一項に記載の核酸の増幅用キッ
    トであって、 ａ）増幅しようとする標的核酸の５’側と３’側に夫々配置されたハイブリダ
    イゼーション位置をもつ１対のヌクレオチドプライマーと、 ｂ）場合により、増幅反応に必要な試薬を含む前記キット。
  13. 【請求項１３】 ヌクレオチドプライマーが請求項６から９のいずれか一項
    に記載のプライマーから構成される群から選択されることを特徴とする請求項１
    ２に記載の増幅用キット。
  14. 【請求項１４】 その存在を検出可能なマーカー化合物を含むことを特徴と
    する請求項６から９のいずれか一項に記載のヌクレオチドプローブ。
  15. 【請求項１５】 サンプル中の請求項１から５のいずれか一項に記載の核酸
    の存在の検出方法であって、 ａ）請求項６から９及び１４のいずれか一項に記載の１種以上のヌクレオチド
    プローブを被験サンプルと接触させる段階と、 ｂ）プローブとサンプル中に存在する核酸の間に複合体が形成された場合には
    これを検出する段階を含む前記方法。
  16. 【請求項１６】 プローブが担体に固定されていることを特徴とする請求項
    １５に記載の検出方法。
  17. 【請求項１７】 サンプル中の請求項１から５のいずれか一項に記載の核酸
    の存在の検出用キットであって、 ａ）請求項６から９及び１４のいずれか一項に記載の１種以上のヌクレオチド
    プローブと、 ｂ）場合により、ハイブリダイゼーション反応に必要な試薬を含む前記キット
    。
  18. 【請求項１８】 プローブが担体に固定されていることを特徴とする請求項
    １７に記載の検出用キット。
  19. 【請求項１９】 請求項１から５のいずれか一項に記載の核酸を含む組換え
    ベクター。
  20. 【請求項２０】 請求項１から５のいずれか一項に記載の核酸を含む組換え
    宿主細胞。
  21. 【請求項２１】 請求項１８に記載の組換えベクターを含む組換え宿主細胞
    。
  22. 【請求項２２】 ａ）配列番号１２９〜配列番号１６０の配列をもつペプチ
    ドから構成される群から選択される少なくとも１５アミノ酸の配列を含むポリペ
    プチド、又はそのペプチドフラグメントもしくは変異体、 ｂ）ａ）に記載のポリペプチドに対して少なくとも８０％のアミノ酸一致度を
    もつポリペプチドから構成される群から選択されるポリペプチド。
  23. 【請求項２３】 請求項２１に記載のポリペプチドのアミノ酸配列に対して
    １、２、３、４、５、１０〜２０箇所のアミノ酸置換、付加又は欠失のアミノ酸
    変異を含むポリペプチド。
  24. 【請求項２４】 請求項２１又は２２に記載のポリペプチドに対する抗体。
  25. 【請求項２５】 検出可能な化合物を含むことを特徴とする請求項２３に記
    載の抗体。
  26. 【請求項２６】 サンプル中の請求項２１又は２２に記載のポリペプチドの
    存在の検出方法であって、 ａ）サンプルを請求項２３又は２４に記載の抗体と接触させる段階と、 ｂ）形成された抗原／抗体複合体を検出する段階を含む前記方法。
  27. 【請求項２７】 サンプル中の請求項２１又は２２に記載のポリペプチドの
    存在を検出するための診断用キットであって、 ａ）請求項２３又は２４に記載の抗体と、 ｂ）形成された抗原／抗体複合体を検出するための試薬を含む前記キット。
  28. 【請求項２８】 請求項２１又は２２に記載のポリペプチドと相互作用する
    候補分子又は物質のスクリーニング方法であって、 ａ）請求項２１又は２２に記載のポリペプチドを候補物質又は分子と接触させ
    る段階と、 ｂ）前記ポリペプチドと前記候補物質の間に複合体が形成された場合にはこれ
    を検出する段階を含む前記方法。
  29. 【請求項２９】 請求項２１又は２２に記載のポリペプチドと相互作用する
    候補分子又は物質のスクリーニング用キットであって、 ａ）請求項２１又は２２に記載のポリペプチドと、 ｂ）場合により、前記ポリペプチドと候補分子又は物質の間に形成された複合
    体を検出するために必要な手段を含む前記キット。
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