JP2003517154A - ２８７１レセプター、ｇタンパク質共役レセプターおよびその使用方法 - Google Patents

２８７１レセプター、ｇタンパク質共役レセプターおよびその使用方法

Info

Publication number
JP2003517154A
JP2003517154A JP2001545551A JP2001545551A JP2003517154A JP 2003517154 A JP2003517154 A JP 2003517154A JP 2001545551 A JP2001545551 A JP 2001545551A JP 2001545551 A JP2001545551 A JP 2001545551A JP 2003517154 A JP2003517154 A JP 2003517154A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
protein
cells
cell
agent
receptor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
JP2001545551A
Other languages
English (en)
Inventor
マリア アレクサンドラ グラックスマン，
マーティン アール． ホッジ，
ジョン ジョセフ ハンター，
ローラ ルドルフ−オーウェン，
ナディーン エス． ウェイチ，
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Millennium Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Millennium Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Millennium Pharmaceuticals Inc filed Critical Millennium Pharmaceuticals Inc
Publication of JP2003517154A publication Critical patent/JP2003517154A/ja
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/72—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
    • C07K14/723—G protein coupled receptor, e.g. TSHR-thyrotropin-receptor, LH/hCG receptor, FSH receptor

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Psychiatry (AREA)

Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規に同定されたＧタンパク質共役レセプターに関する。本発明はまた、このレセプターをコードするポリヌクレオチドに関する。本発明はさらに、レセプター媒介性障害の診断および処置のために、このレセプターポリペプチドおよびレセプターポリヌクレオチドを使用する方法に関する。本発明はさらに、診断および処置に有用なアゴニストおよびアンタゴニストを同定するために、レセプターポリペプチドおよびレセプターポリヌクレオチドを使用する方法に関する。本発明はさらに、このレセプターポリペプチドおよびレセプターポリヌクレオチドに基づくアゴニストおよびアンタゴニストを含む。本発明はさらに、組換え方法によって、レセプターポリペプチドおよびレセプターポリヌクレオチドを生成するための手順に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、Ｇタンパク質共役レセプターのスーパーファミリーの新規に同定さ
れたメンバーに関する。本発明はまた、このレセプターをコードするポリヌクレ
オチドにも関する。本発明はさらに、レセプター媒介障害における診断および処
置に適用可能な、レセプターポリペプチドおよびレセプターポリヌクレオチドを
使用する方法に関する。本発明はさらに、レセプター媒介障害における診断およ
び処置に適用可能な、アゴニストおよびアンタゴニストを同定するために、その
レセプターポリペプチドおよびレセプターポリヌクレオチドを使用する薬物スク
リーニング方法に関する。本発明はさらに、このレセプターポリペプチドおよび
レセプターポリヌクレオチドに基づく、アゴニストおよびアンタゴニストをさら
に包含する。本発明はさらに、組換え法によってこのレセプターポリペプチドお
よびレセプターポリヌクレオチドを生成するための手順に関する。
【０００２】 （発明の背景） （Ｇタンパク質共役レセプター） Ｇタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）は、細胞内でのシグナル伝達を担う
タンパク質の主要な種類を構成する。ＧＰＣＲは、７つの膜貫通ドメインを有す
る。ＧＰＣＲの細胞外部分へのリガンドの結合の際に、その細胞の生物学的特性
または生理学的特性に変化を生じるシグナルが、その細胞内で伝達される。ＧＰ
ＣＲは、Ｇタンパク質およびエフェクター（Ｇタンパク質により調節される細胞
内酵素およびチャネル）とともに、細胞外入力に細胞内メッセンジャーの状態を
関係付ける、モジュラーシグナル伝達系の構成成分である。
【０００３】 ＧＰＣＲの遺伝子および遺伝子産物は、疾患の潜在的原因因子である（Ｓｐｉ
ｅｇｅｌら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：１１１９〜１１２５（１９９
３）；ＭｃＫｕｓｉｃｋら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｇｅｎｅｔ．３０：１〜２６（１９９
３））。ロドプシン遺伝子およびＶ２バソプレシンレセプター遺伝子における特
定の欠損が、種々の形態の色素性網膜炎（Ｎａｔｈａｎｓら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ
．Ｇｅｎｅｔ．２６／４０３〜４２４（１９９２））、腎原性尿崩症（Ｈｏｌｔ
ｚｍａｎら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．２：１２０１〜１２０４（１９９３
））を生じることが示された。これらのレセプターは、中枢神経系プロセスおよ
び末梢の生理学的プロセスの両方にとって極めて重要である。進化分析によって
、これらのタンパク質の先祖が、複雑な身体プランおよび神経系と呼応してもと
もと発生したことが示唆される。
【０００４】 このＧＰＣＲタンパク質スーパーファミリーは、以下の５つのファミリーへと
分けられ得る：ファミリーＩ、ロドプシンおよびβ２−アドレナリン作用性レセ
プターにより代表され、かつ２００個を超える独特のメンバーにより現在代表さ
れる、レセプター（Ｄｏｈｌａｍａｎら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
６０：６５３〜６８８（１９９１））；ファミリーＩＩ、副甲状腺ホルモン／カ
ルシトニン／セクレチンレセプターファミリー（Ｊｕｐｐｎｅｒら、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２５４：１０２４〜１０２６（１９９１）；Ｌｉｎら、Ｓｃｅｉｎｃｅ
２５４：１０２２〜１０２４（１９９１））；ファミリーＩＩＩ、代謝生成物産
性グルタメートレセプターファミリー（Ｎａｋａｎｉｓｈｉ、Ｓｃｉｅｎｃｅ
２５８ ５９７：６０３（１９９２））；ファミリーＩＶ、Ｄ．ｄｉｓｃｏｉｄ
ｅｕ，の走化性および発生において重要な、ｃＡＭＰレセプターファミリー（Ｋ
ｌｅｉｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：１４６７〜１４７２（１９８８））；な
らびにファミリーＶ、ＳＴＥ２のような真菌接合フェロモンレセプター（Ｋｕｒ
ｊａｎ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：１０９７〜１１２９（１９
９２））。
【０００５】 ７つの推定疎水性セグメントを示しかつＧＰＣＲとは無関係であるような、少
数の他のタンパク質もまた存在するが；これれは、Ｇタンパク質に結合すること
が示されている。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａは、光レセプター特異的タンパク質（ｂ
ｒｉｄｅ ｏｆ ｓｅｖｅｎｌｅｓｓ（ｂｏｓｓ）、広範に研究されており、か
つＧＰＣＲである証拠が示されていない、７回膜貫通セグメントタンパク質）を
発現する（Ｈａｒｔら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０
：５０４７〜５０５１（１９９３））。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａにおける遺伝子Ｆ
ｒｉｚｚｌｅｄ（Ｆｚ）もまた、７回膜貫通セグメントを有するタンパク質であ
ると考えられる。ｂｏｓｓと同様に、ｆｚは、Ｇタンパク質と結合するとは示さ
れていない（Ｖｉｎｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３８：２６３〜２６４（１９８
９））。
【０００６】 Ｇタンパク質は、αサブユニット、βサブユニットおよびγサブユニットから
構成されるヘテロトリマータンパク質のファミリーを示し、グアニンヌクレオチ
ドと結合する。これらのタンパク質は、通常は、細胞表面レセプター（例えば、
７回膜貫通ドメインを含むレセプター）に結合している。ＧＰＣＲにリガンドが
結合した後、立体構造変化がＧタンパク質に伝達され、これにより、αサブユニ
ットが、ＧＴＰ分子を結合型ＧＤＰ分子に交換すること、およびβγサブユニッ
トから解離することが、生じる。ＧＴＰ結合形態のαサブユニットは、代表的に
は、エフェクター調節部分として機能し、セカンドメッセンジャーの生成（例え
ば、ｃＡＭＰ（例えば、アデニルシクラーゼの活性化による）、ジアシルグリセ
ロールまたはイノシトールホスフェート）を生じる。２０個を超える種々の型の
αサブユニットが、ヒトにおいて公知である。これらのサブユニットは、βサブ
ユニットおよびγサブユニットのより小さいプールと結合する。哺乳動物Ｇタン
パク質の例としては、Ｇｉ、Ｇｏ、Ｇｑ、ＧｓおよびＧｔが挙げられる。Ｇタン
パク質は、Ｌｏｄｉｓｈら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ（
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｄ Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙ
ｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．、１９９５）（この内容は、本明細書中で参考として援用され
る）に広範に記載されている。
【０００７】 ＧＰＣＲは、薬物作用および開発のための主要な標的である。従って、以前に
未知であったＧＰＣＲを同定および特徴付けることが、薬剤開発の分野において
価値がある。本発明は、以前に同定されていなかったヒトＧＰＣＲを提供するこ
とによって、当該技術水準を進歩させる。
【０００８】 （発明の要旨） 新規なＧＰＣＲレセプターを同定することが、本発明の目的である。
【０００９】 ＧＰＣＲ媒介障害における診断および処置に適用可能な、レセプターアッセイ
における試薬もしくは標的として有用な、新規なＧＰＣＲレセプターポリペプチ
ドを提供することが、本発明のさらなる目的である。
【００１０】 ＧＰＣＲ媒介性障害の処置および診断に適用可能なレセプターアッセイにおけ
る標的および試薬として有用であり、そして組換え方法によって新規のレセプタ
ーポリペプチドを産生するために有用である、新規のＧＰＣＲレセプターポリペ
プチドに対応するポリヌクレオチドを提供することが、本発明のさらなる目的で
ある。
【００１１】 本発明の特定の目的は、このレセプターのアゴニストおよびアンタゴニストと
して作用し、そしてこのレセプターの発現を調節する、化合物を同定することで
ある。
【００１２】 本発明のさらなる特定の目的は、ＧＰＣＲ関連障害の処置および診断のために
、このレセプターの発現を調節する化合物を提供することである。
【００１３】 従って、本発明は、新規なＧＰＣＲ（２８７１レセプターと称する）の同定に
基づく。
【００１４】 本発明は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドまたは２
０００年８月１１日にＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−２３６９として寄託されたｃＤＮＡ
（「寄託されたｃＤＮＡ」）によりコードされるアミノ酸配列を有するポリペプ
チドを含む、単離された２８７１レセプターポリペプチドを提供する。
【００１５】 本発明はまた、配列番号２に示される配列または寄託されたｃＤＮＡ中の配列
を有する、単離された２８７１レセプター核酸分子を提供する。
【００１６】 本発明はまた、配列番号１に示されるアミノ酸配列または寄託されたｃＤＮＡ
によりコードされるアミノ酸配列と、実質的に相同であるアミノ酸配列を有する
改変体ポリペプチドを提供する。
【００１７】 本発明はまた、配列番号２に示される配列または寄託されたｃＤＮＡ中の配列
と、実質的に相同である、改変体核酸分子を提供する。
【００１８】 本発明はまた、配列番号１に示されるポリペプチドのフラグメントおよび配列
番号２に示されるヌクレオチドのフラグメント、ならびにこのポリペプチドまた
は核酸の実質的に相同なフラグメントを提供する。
【００１９】 本発明はまた、このレセプター核酸分子およびポリペプチドの発現のためのベ
クターおよび宿主細胞を提供し、そして特に、組換えベクターおよび組換え宿主
細胞を提供する。
【００２０】 本発明はまた、このベクターおよび宿主細胞を作製する方法、ならびにこのレ
セプター核酸分子およびポリペプチドを生成するためにこれらを使用する方法を
提供する。
【００２１】 本発明はまた、このレセプターポリペプチドおよびフラグメントに選択的に結
合する、抗体を提供する。
【００２２】 本発明はまた、このレセプターポリペプチドの活性を調節する化合物について
スクリーニングする方法を提供する。調節は、このこのレセプターポリペプチド
のレベルでか、またはこのレセプターポリペプチドを発現する核酸の発現を制御
するレベルで、あり得る。
【００２３】 本発明はまた、レセプターポリペプチド活性を、特にこのスクリーニングされ
た化合物を使用して調節するためのプロセスを提供し、このレセプターポリペプ
チドの発現に関連する状態を処置することを含む。
【００２４】 本発明はまた、生物学的サンプル中のこのレセプターポリペプチドまたは核酸
分子の存在またはレベルを決定するための診断アッセイを提供する。
【００２５】 本発明はまた、このレセプターポリペプチドまたは核酸分子における変異の存
在を決定するための診断アッセイを提供する。
【００２６】 （発明の詳細な説明） （レセプター機能／シグナル経路） ２８７１レセプタータンパク質は、シグナル伝達経路に関与するＧＰＣＲであ
る。本明細書中で用いられる場合、「シグナル伝達経路」とは、ＧＰＣＲ（２８
７１タンパク質）に対するリガンドの結合の際の細胞機能／活性の調節（例えば
、ｔ刺激または阻害）をいう。このような機能の例としては、シグナル伝達経路
に関与する細胞内分子（例えば、ホスファチジルイノシトール、４，５−ビスホ
スフェート（ＰＩＰ２）、イノシトール１，４，５−トリホスフェート（ＩＰ３ ）もしくはアデニレートシクラーゼ）の移動；形質膜の分極化；分子の産生もし
くは分泌；細胞成分の構造の変化；細胞増殖（例えば、ＤＮＡの合成）；細胞移
動；細胞増殖；および細胞分化）が挙げられる。２８７１レセプタータンパク質
は、子宮、胎盤、前立腺、精巣、膵臓、扁桃、ＣＤ３４＋細胞、ならびに図５〜
７のように本明細書中で開示される他の細胞および組織において発現されるので
、２８７１レセプタータンパク質シグナル伝達経路に関与する細胞としては、こ
れらの組織由来の細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２７】 細胞の型に依存して、レセプタータンパク質により媒介される応答は異なる得
る。例えば、いくつかの細胞の場合、レセプタータンパク質に対するリガンドの
結合は、化合物の放出、チャネルの通門、細胞接着、細胞移動、細胞分化などの
ような活性を、ホスファチジルイノシトールまたはサイクリックＡＭＰ代謝およ
び回転を介して刺激し得るが、他の細胞においては、リガンドの結合は、異なる
結果を生じる。レセプタータンパク質により調節される細胞性活性／応答に関わ
らず、タンパク質がＧＰＣＲであり、そして種々の細胞内シグナル伝達経路（例
えば、細胞内のホスファチジルイノシトールまたはサイクリックＡＭＰ代謝およ
び回転を介して）において、Ｇタンパク質と相互作用して、１つ以上の第２シグ
ナルを生成することが一般的である。
【００２８】 本明細書中で用いられる場合、「ホスファチジルイノシトールの代謝および回
転（ターンオーバー）」とは、ホスファチジルイノシトール４，５−ビスホスフ
ェート（ＰＩＰ２）に関与する分子のこと、ならびにこれらの分子の活性のこと
をいう。ＰＩＰ２は、形質膜の細胞質ゾルリーフレット（ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ
ｌｅａｆｌｅｔ）において見出される。レセプターに対するリガンドの結合は、
いくつかの細胞において、形質膜酵素ホスホリパーゼＣ（これは、次いで、ＰＩ
Ｐ２を加水分解して、１，２−ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）およびイノシト
ール１，４，５−トリホスフェート（ＩＰ３）を生成する）を活性化する。一旦
形成されると、ＩＰ３が、小胞体表面（ここで、これはＩＰ３レセプター（例え
ば、ＩＰ３結合部位を含むカルシウムチャネルタンパク質）に結合し得る）に拡
散する。ＩＰ３結合は、チャネルの開口を誘導得、カルシウムイオンを原形質に
放出させる。ＩＰ３はまた、特定のキナーゼによりリン酸化されて、イノシトー
ル４，５−ビスホスフェート（ＩＰ４）（これは、細胞外媒質から原形質内への
カルシウムの侵入を生じ得る）を形成し得る。ＩＰ３およびＩＰ４は、次いで、
非常に迅速に、不活性物質であるイノシトール１，４−ビホスフェート（ＩＰ２ ）およびイノシトール１，３，４−トリホスフェートへとそれぞれ加水分解され
得る。これらの不活性物質は、細胞によりリサイクルされて、ＰＩＰ２を合成し
得る。ＰＩＰ２の加水分解により生成される他の第２のメッセンジャー（すなわ
ち、１，２−ジアシルグリセロール（ＤＡＧ））は、細胞膜にのこる。細胞膜で
、第２のメッセンジャーは、酵素タンパク質キナーゼＣを活性化するのに役立つ
。タンパク質キナーゼＣは、通常、細胞の原形質中に可溶性であることが見出さ
れてるが、細胞内カルシウム濃度の増加の際、この酵素は、原形質膜（ここで、
この酵素が、ＤＡＧにより活性化され得る）に移動し得る。異なる細胞における
タンパク質キナーゼＣの活性化は、グリコゲンシンターゼのリン酸化、または種
々の転写因子（例えば、ＮＦ−ｋＢ）のリン酸化のような種々の細胞性応答を生
じる。用語「ホスファチジルイノシトール活性」とは、本明細書中で用いられる
場合、ＰＩＰ２または１つ以上のその代謝物の活性をいう。
【００２９】 レセプターが関与し得る別のシグナル伝達経路は、ｃＡＭＰターンオーバー経
路である。本明細書中で用いられる場合、「サイクリックＡＭＰの代謝および回
転（ターンオーバー）」とは、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）に関与する分子
のこと、ならびにこれらの分子の活性のことをいう。サイクリックＡＭＰは、特
定のＧタンパク質共役レセプターのリガンド誘導刺激に応答して生成される第２
のメッセンジャーである。ｃＡＭＰシグナル伝達経路において、ＧＰＣＲに対す
るリガンドの結合は、酵素アデニルシクラーゼ（これは、ｃＡＭＰの合成を触媒
する）の活性化を導き得る。次いで、新規に合成されたｃＡＭＰは、ｃＡＭＰ依
存性プロテインキナーゼを活性化し得る。この活性化されたキナーゼは、電位型
カリウムチャネルタンパク質、または会合するタンパク質をリン酸化し得、そし
てカリウムチャネルが活動電位の間に開き得ないように導く。カリウムチャネル
が開き得ないことは、カリウムの外向きの流れ（これは、ニューロンの膜を正常
に再分極する）を減少し、延期された膜の脱分極を導く。
【００３０】 （薬理ゲノム学（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ）） 薬理ゲノム学は、罹患した人において変更された薬物の性質および異常な作用
に起因する、薬物への応答における臨床的に有意な遺伝性変更を扱う。例えば、
Ｅｉｃｈｅｌｂａｕｍ（１９９６）Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐ
ｈｙｓｉｏｌ，２３（１０−１１）：９８３〜９８５およびＬｉｎｄｅｒ（１９
９７）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ，４３（２）：２５４〜２６６を参照のこと。これら
のバリエーションの臨床的結果は、個体の代謝のバリエーションの結果として特
定の個体における治療的薬物の重篤な毒性または特定の個体における薬物の治療
的な失敗を引き起こす。従って、個体の遺伝子型は、治療的な化合物が身体に作
用する様式または身体が化合物を代謝する様式を決定し得る。さらに、薬物代謝
酵素の活性は、薬物作用の強度と持続時間との両方に影響する。従って、個体の
薬理ゲノムは、個体の遺伝子型に基く予防的処置または治療的処置に対する有効
な化合物の選択およびこのような化合物の有効投与量の選択を可能にする。いく
つかの薬物代謝酵素の遺伝的な多形性の発見は、何人かの患者が、何故、予期さ
れる薬物効果を得られないか、過剰な薬物効果を示すか、または標準的な薬物投
与量から重篤な毒性を経験するのかを説明してきた。多型性は、広範な代謝体の
表現型および乏しい代謝体の表現型において発現され得る。
【００３１】 （障害／細胞機能） 本発明は、免疫障害および呼吸障害、特にＴヘルパー（Ｔｈ）細胞障害および
Ｔｈ細胞様関連障害の調節、診断、および処置のための方法および組成物に関す
る。このような免疫障害としては、慢性炎症性疾患および障害（例えば、クロー
ン病、反応性関節炎（ライム病を含む）、インスリン依存性糖尿病、器官特異的
自己免疫（多発性硬化症を含む、橋本甲状腺炎およびグレーヴズ病を含む）、接
触皮膚炎、乾癬、移植片拒絶、対宿主性移植片病、サルコイドーシス、アトピー
状態（例えば、喘息およびアレルギー（アレルギー性鼻炎、胃腸アレルギー（食
物アレルギーを含む））、好酸球増加症、アレルゲン誘発（ａｌｌｅｒｇｅｎ−
ｐｒｏｖｏｋｅｄ）気道炎症、および結膜炎）、糸球体腎炎、特定の病原体感受
性（例えば、蠕虫（例えば、リーシュマニア症）、特定のウイルス感染（ＨＩＶ
を含む）、ならびに細菌感染（結核およびらい腫らいを含む）が挙げられるがこ
れらに限定されない。
【００３２】 呼吸障害としては、無呼吸、喘息、特定の気管支喘息、および関連した気道応
答性亢進、レベリリウム（ｒｅｂｅｒｉｌｌｉｍ）病、気管支拡張症、気管支炎
、気管支肺炎、嚢胞性線維症、ジフテリア、呼吸困難、気腫、慢性閉塞性肺疾患
、アレルギー性肺アスペルギルス症、肺炎、急性肺水腫、百日咳、咽頭炎、無気
肺、ヴェーゲナー肉芽腫症、レジオネラ症、胸膜炎、リウマチ熱、および静脈洞
炎が挙げられるがこれらに限定されない。
【００３３】 本発明はまた、白血球、赤血球、および血小板系統の細胞に関与する造血障害
（すなわち、赤芽球、巨核球、および完全に分化していない白血球、ならびにＣ
Ｄ３４＋幹細胞を含むがこれらに限定されない、分化細胞または未分化前駆体）
の調節、診断、および処置のための方法および組成物に関する。
【００３４】 前立腺に関する障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
炎症、良性腫脹、例えば、結節性前立腺過形成（良性前立腺肥大または肥厚）、
および癌のような腫瘍。
【００３５】 乳房の障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：発生の障
害；炎症（急性乳腺炎、管周辺炎（再発性乳輪下膿瘍、乳管の扁平上皮化生）、
乳管拡張症、脂肪組織壊死、肉芽腫性乳腺炎、およびシリコン乳房移植に関連す
る病理が挙げられるが、これらに限定されない）；線維性嚢胞変化；増殖性乳房
疾患（上皮過形成、硬化性腺疾患、および小管乳頭腫が挙げられるが、これらに
限定されない）；腫瘍（基質腫瘍（例えば、線維腺腫、葉状腫瘍、および肉腫）
、および上皮腫瘍（例えば、大管乳頭腫）が挙げられるが、これらに限定されな
い）；乳房の癌（例えば、インサイチュ（非侵襲性）癌（これはインサイチュで
腺管癌（パジェット病を含む）および上皮内小葉癌を引き起こす）が挙げられる
が、これらに限定されない）、および侵襲性（浸潤性）癌（侵襲性腺管癌、特殊
なタイプではない侵襲性小葉癌、髄様癌、コロイド（粘液性）癌、管状腺癌、お
よび侵襲性乳頭状癌が挙げられるが、これらに限定されない）、および他の悪性
新生物。
【００３６】 男性乳房における障害としては、女性化乳房および癌が挙げられるが、これら
に限定されない。
【００３７】 骨格筋に関する障害としては、横紋筋肉腫のような腫瘍が挙げられる。
【００３８】 脳に関連する障害は、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ニューロ
ンに関連する障害、およびグリアに関連する障害（例えば、星状細胞、稀突起膠
細胞、上衣細胞、および小グリア細胞）；頭蓋内圧およびヘルニア形成から生じ
る脳水腫、ならびに水頭症；奇形および発育疾患（例えば、神経管欠損、前脳奇
形、後窩奇形、および脊髄空洞症および水脊髄症）；周期性脳損傷（例えば、低
酸素症、虚血、および梗塞形成に関連する障害（低血圧症、低灌流、および低流
状態（全大脳虚血および局所大脳虚血）、局所血液供給の閉塞からの閉塞症を含
む）、頭蓋内出血（大脳内（実質内）出血、クモ膜下出血および破裂性漿果状動
脈瘤、および大動脈奇形を含む）、高血圧脳血管疾患（窩梗塞、細隙出血、およ
び高血圧性動脈硬化症を含む））；感染（例えば、急性髄膜炎（急性化膿（菌）
髄膜炎および急性無菌性（ウイルス）髄膜炎を含む）、急性化膿性感染（脳腫瘍
、硬膜下蓄膿症、および硬膜外蓄膿症を含む）、慢性細菌性髄膜脳炎（結核症お
よびミコバクテリア症を含む）、神経梅毒、および神経ボレリア症（Ｌｙｍｅ疾
患）、ウイルス髄膜脳炎（節足動物骨（Ａｒｂｏ）ウイルス脳炎、Ｈｅｒｐｅｓ
ｓｉｍｐｌｅｘウイルス１型、Ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘウイルス２型、
Ｖａｒｉｃａｌｌａ−ｚｏｓｔｅｒウイルス（Ｈｅｒｐｅｓ ｚｏｓｔｅｒ）、
サイトメガロウイルス、灰白髄炎、狂犬病、およびヒト免疫不全ウイルス１（Ｈ
ＩＶ−１髄膜脳炎（亜急性脳炎）を含む）、空胞脊髄症、ＡＩＤｓ関連脊髄症、
末梢神経障害、および小児のＡＩＤＳ、進行性多病巣性白質脳症、亜急性硬化性
汎脳炎、神経系の他の感染疾患）；伝達可能海綿状脳障害（プリオン疾患）；脱
髄疾患（多発性硬化症、多発性硬化症変異体、急性播種性脳脊髄炎および急性壊
死性出血性脳脊髄炎、および他の脱髄に伴う疾患を含む）；変性疾患（例えば、
大脳皮質に影響を与える変性疾患（アルツハイマー病およびＰｉｃｋ病を含む）
、脳幹神経節および脳幹の変性疾患（振せん麻痺、特発性パーキンソン病（振せ
ん麻痺））、進行性核上性麻痺、皮質基底変性、多発系萎縮症（線条体黒質、シ
ャイ−ドレーガー症候群、およびオリーブ橋小脳萎縮症、およびハンチントン病
を含む））；脊髄小脳変性（脊髄小脳性運動失調（フリートライヒ運動失調、お
よび毛細管拡張性運動失調を含む）、運動神経に影響を与える変性疾患（筋萎縮
側索硬化症（運動ニューロン疾患）、延髄脊髄萎縮症（ケネディ症候群）、およ
び脊髄筋萎縮症を含む））；先天性代謝異常（例えば、白質萎縮症（クラッベ病
、異染性白質萎縮症、副腎脳白質ジストロフィー、ペリツェーウス−メルツバッ
ヒャー病、およびキャナヴァン病を含む）、脳心筋炎（リー病および他の脳心筋
炎を含む））；中毒性および後天性代謝疾患（ビタミン欠乏（例えば、チアミン
（ビタミンＢ１）欠乏およびビタミンＢ１２欠乏）を含む）、代謝妨害の神経続
発症（低血糖症、高血糖症、および肝性脳障害を含む）、毒性障害（一酸化炭素
、メタノール、エタノールおよび放射線（メトトレキサートと放射線誘導障害の
組み合わせを含む））；腫瘍（例えば、神経膠腫（星状細胞腫（原線維（拡散）
星状細胞腫およびグリア芽細胞腫多形）を含む）、ピロサイト（ｐｉｌｏｃｙｔ
ｉｃ）星状細胞腫、多形性黄色星状膠細胞腫、および脳幹神経膠腫、乏突起膠腫
、および脳室上衣細胞腫および関連室傍質量損傷、神経腫瘍、未分化型新生物（
髄芽腫を含む）、他の実質性腫瘍（原始脳リンパ腫）、グリム細胞腫瘍、および
松果体実質性腫瘍、髄膜腫、転移性腫瘍、新生物随伴症候群、末梢神経鞘腫瘍（
神経鞘腫、神経線維腫、および悪性末梢神経鞘腫瘍（悪性神経鞘腫）を含む）、
および神経皮膚症候群（母斑症）（神経線維腫症（１型神経線維腫症（ＮＦ１）
およびＴＹＰＥ２神経線維腫症（ＮＦ２）を含む）を含む）、結節硬化症、およ
びＶｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ−Ｌｉｎｄａｕ病）。
【００３９】 血管に関する障害としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：損傷
に対する脈管細胞壁の応答（例えば、内皮機能不全および内皮活性化および内膜
肥大）；脈管疾患（先天性異常（例えば、動静脈瘻）、アテローム性動脈硬化症
、および高血圧性脈管疾患（例えば、高血圧）を含むがこれらに限定されない）
；炎症性疾患−−脈管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ）（例えば、巨細胞性（側
頭）動脈炎、高安動脈炎、結節性多発性動脈炎（古典的）、川崎病（皮膚粘膜リ
ンパ節症候群）、顕微的多発性血管炎（顕微的多発性動脈炎、過敏症もしくは白
血球破砕性血管炎）、ヴェーゲナー肉芽腫症、閉塞性血栓性血管炎（バーガービ
ュルガー病）、他の障害に関連する脈管炎、および感染性動脈炎）；レーノー病
；動脈瘤および解離（例えば、腹大動脈瘤、梅毒性（ｓｙｐｈｉｌｉｔｉｃ（ｌ
ｕｅｔｉｃ））動脈瘤、および大動脈解離（解離性血腫））；静脈およびリンパ
管の障害（例えば、拡張蛇行静脈、血栓性静脈炎および静脈血栓症、上大静脈の
閉塞（上大静脈症候群）、下大静脈の閉塞（下大静脈症候群）、ならびにリンパ
管炎およびリンパ水腫)；腫瘍（良性腫瘍および腫瘍性状態を含む（例えば、血
管腫、リンパ管腫、グロムス腫瘍（グロムス血管腫）、脈管拡張症、および細菌
性血管腫症状、および中間悪性度（境界低悪性度悪性）腫瘍（例えば、カポージ
肉腫および血管内皮腫）ならびに悪性腫瘍（例えば、血管肉腫および血管周囲細
胞腫））；ならびに脈管疾患における治療介入（例えば、バルーン血管形成およ
び関連技術、ならびに脈管置換（例えば、冠状動脈バイパス移植手術））の病理
。
【００４０】 精巣および精巣上体に関する障害としては、以下が挙げられるが、これらに限
定されない：先天性異常（例えば、潜伏精巣睾丸症）、後退変化（例えば、萎縮
）、炎症（例えば、非特異的精巣上体炎、および精巣炎）、肉芽腫性（自己免疫
）精巣炎、および特異的炎症（淋病、おたふくかぜ、結核、および梅毒が挙げら
れるが、これらに限定されない）、血管障害（ねじれを含む）、精巣腫瘍（生殖
細胞腫瘍を含む）（これには、セミノーマ、精母細胞セミノーマ、胎生期癌、卵
黄嚢腫瘍絨毛癌、奇形腫、および混合腫瘍が挙げられるが、これらに限定されな
い）、性索性腺支質卵巣の腫瘍（ライディヒ（介在性）細胞腫瘍およびセルトー
リ細胞腫（男性ホルモン産生細胞腫）が挙げられるが、これらに限定されない）
、および精巣リンパ腫、ならびに精巣鞘膜のその他の病変。
【００４１】 甲状腺に関する障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
甲状腺機能亢進症；甲状腺機能低下症（クレチン病および粘液水腫が挙げられる
が、これらに限定されない）；甲状腺炎（橋本甲状腺炎、亜急性（肉芽腫性）甲
状腺炎、および亜急性リンパ球（無痛性）甲状腺炎が挙げられるが、これらに限
定されない）；グレーヴズ病；びまん性および多結節性甲状腺腫（びまん性非中
毒性（単純性）甲状腺腫および多結節性甲状腺腫が挙げられるが、これらに限定
されない）；甲状腺の新生物（アデノーマ、他の良性腫瘍、および癌（これには
、乳頭状癌、濾胞状癌、髄様癌、および未分化癌が挙げられるが、これらに限定
されない）が挙げられるが、これらに限定されない）；ならびに先天性異常。
【００４２】 腎臓に関する障害としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：先天
性異常（以下を含むがこれらに限定されない：腎臓の嚢胞病（襄胞性腎形成異常
、常染色体ドミナント（成体）多発性嚢胞腎疾患、常染色体劣性（小児）多発性
襄胞腎疾患を含むがこれらに限定されない）、および腎髄質の襄胞病（髄質海綿
腎を含むがこれらに限定されない）、ならびにネフロン癆−尿毒症腎髄質襄胞症
複合体（ｎｅｐｈｒｏｎｏｐｈｔｈｉｓｉｓ−ｕｒｅｍｉｃ ｍｅｄｕｌｌａｒ
ｙ ｃｙｓｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｍｐｌｅｘ）、後天性（透析関連）襄
胞病（例えば、単純襄胞）；糸球体疾患（糸球体損傷の病理（インサイチュ免疫
複合体沈着（抗ＧＢＭ腎炎、エイマン腎炎、および移植（ｐｌａｎｔｅｄ）抗原
に対する抗体を含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない）
、循環免疫複合体腎炎、糸球体細胞に対する抗体、糸球体腎炎における細胞媒介
性免疫、代替的補体経路の活性化、上皮細胞損傷、および糸球体損傷の媒介物質
（細胞性媒介物質および可溶性媒介物質を含む）に関する病理、急性糸球体腎炎
（例えば、急性増殖性（溶連菌感染後性、感染後）糸球体腎炎（溶連菌感染後性
糸球体腎炎および非溶連菌性急性糸球体腎炎、急速進行性（半月体形成性）糸球
体腎炎、ネフローゼ症候群、膜性糸球体腎炎（膜性ネフロパシー）、微小変化疾
患（リポイドネフローゼ）、巣状分節状糸球体硬化症、膜性増殖性糸球体腎炎、
ＩｇＡ腎症（バージャー病）、巣状増殖性壊死性糸球体腎炎（巣状糸球体腎炎）
、遺伝性腎炎（アルポート症候群および薄膜疾患（良性家族性血尿）を含むがこ
れらに限定されない）、慢性糸球体腎炎、全身性疾患（全身性エリテマトーデス
、ヘーノホ−シェーンライン紫斑病、細菌性心内膜炎、糖尿病性糸球体硬化症、
アミロイドーシス、線維性およびイムノタコイド（ｉｍｍｕｎｏｔａｃｔｏｉｄ
）糸球体腎炎、ならびに他の全身性障害を含むがこれらに限定されない）に随伴
する糸球体損傷；尿細管および間質に影響する疾患（急性尿細管壊死および尿細
管間質性腎炎（腎盂腎炎および尿路感染、急性腎盂腎炎、慢性腎盂腎炎および逆
流性腎症を含むがこれらに限定されない）、ならびに薬物および毒素により誘導
される尿細管間質性腎炎（鎮痛薬性腎症、非ステロイド性抗炎症薬に随伴する腎
症、ならびに他の尿細管間質性疾患（尿酸腎症、高カルシウム血症および腎石灰
症、および多発性骨髄腫を含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定
されない）；血管の疾患（良性腎硬化症、悪性高血圧および加速性腎硬化症、腎
動脈狭窄症、および血栓性細小血管症（古典的（小児）溶血性尿毒症症候群、成
人溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、特発性ＨＵＳ／ＴＴＰ、お
よび他の脈管疾患（アテローム性動脈硬化症虚血性腎疾患、アテローム塞栓症腎
疾患、鎌状赤血球疾患腎症、びまん性皮質壊死、および腎梗塞を含むがこれらに
限定されない）；尿路閉塞（閉塞性尿路疾患）；尿石症（腎結石（ｃａｌｃｕｌ
ｉ、ｓｔｏｎｅ）；ならびに腎臓の腫瘍（良性腫瘍（例えば、腎乳頭腺腫、腎線
維腫または過誤腫（腎髄質（ｒｅｎｏｍｅｄｕｌｌａｒｙ）間質性細胞腫瘍）、
血管筋脂肪腫、および膨大細胞腫）、ならびに悪性腫瘍（腎細胞癌（副腎腫、腎
臓の腺癌を含む）（腎盤の尿路上皮癌を含む）を含むがこれらに限定されない）
。
【００４３】 膵臓に関する障害としては、以下が挙げられる：外分泌膵臓の障害（例えば、
先天性異常（異所性膵臓が挙げられるが、これに限定されない）；膵臓炎（急性
膵臓炎が挙げられるが、これに限定されない）；嚢腫（偽嚢胞が挙げられるが、
これに限定されない）；腫瘍（嚢腫瘍および膵臓の癌が挙げられるが、これらに
限定されない）；ならびに内分泌膵臓の障害（例えば、糖尿病）；島細胞腫瘍（
インスリノーマ、ガストリノーマ、および他の希な島細胞腫瘍）。
【００４４】 胸腺に関する障害としては、以下が挙げられる：発生障害（例えば、胸腺発育
不全（ｈｙｐｏｐｌａｓｉａまたはａｐｌａｓｉａ）を伴うディ・ジョージ症候
群；胸腺嚢胞；胸腺発育不全（胸腺内のリンパ小胞の出現を含み、胸腺小胞増殖
を生じる）；ならびに胸腺腫（生殖細胞腫瘍、リンパ腫、ホジキン病およびカル
チノイドを含む）。胸腺腫は、良性胸腺腫または被包性胸腺腫、悪性胸腺腫Ｉ型
（侵襲性胸腺腫）もしくはＩＩ型（胸腺癌と呼ばれる）を含み得る。
【００４５】 脾臓に関連する障害としては、巨脾腫症（非特異的急性脾臓炎、うっ血性巨脾
症、および脾臓梗塞を含む）；新生物、先天的奇形、および破裂が挙げられるが
、これらに限定されない。巨脾腫症に関連する障害としては、以下が挙げられる
：感染（例えば、非特異的脾臓炎、感染性単核細胞症、結核、腸チフス、ブルセ
ラ症、サイトメガロウイルス、梅毒、マラリア、ヒストプラスマ症、トキソプラ
スマ症、カラアザール、トリパノソーマ症、住血吸虫症、リーシュマニア症、お
よびエキノコックス症）；部分的な高血圧に関連するうっ血性状態（例えば、肝
硬変、門脈または脾静脈の血栓症、および心不全）；リンパ造血障害（例えば、
ホジキン病、非ホジキンリンパ腫／白血病、多発性骨髄腫、骨髄増殖性障害、溶
血性貧血、および特発性血小板減少性紫斑病）；免疫学的炎症状態（例えば、慢
性関節リウマチ、および全身性エリテマトーデス）；蓄積症（例えば、ゴーシェ
病、ニーマン−ピック病、およびムコ多糖体症）；ならびに他の状態（例えば、
アミロイド症、一次性新生物および嚢腫、ならびに二次性新生物）。
【００４６】 心臓に関与する疾患としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：心
不全、（心肥大、左心不全および右心不全が挙げられるがこれらに限定されない
）；虚血性心臓病（狭心症、心筋梗塞、慢性虚血性心臓病および心臓突然死を含
むがこれらに限定されない）；高血圧性心臓病（全身性（左）高血圧性心臓病お
よび肺（右）高血圧性心臓病を含むがこれらに限定されない）；弁心臓病（石灰
化により生じる弁変性（例えば、石灰化大動脈狭窄症、先天的二尖大動弁の石灰
化、および僧帽弁輪状石灰化、および僧帽弁のミクソイド変性（僧帽弁逸脱症）
、リウマチ熱およびリウマチ性心疾患、感染性心内膜炎、および非感染疣贅形成
（例えば、非細菌性血栓性心内膜炎および全身性エリテマトーデスの心内膜炎（
リブマン・ザックス病）、カルチノイド心臓病、および人工弁の合併症）を含む
がこれらに限定されない）；心筋疾患（拡張型心筋症、肥大型心筋症、拘束型心
筋症、および心筋炎を含むがこれらに限定されない）；心膜疾患（心内膜液浸出
および心膜血腫ならびに心膜炎（急性心膜炎および治癒型心膜炎を含む）、なら
びにリウマチ様心臓病を含むがこれらに限定されない）；新生物性心臓病（原発
性心臓腫瘍（例えば、粘液腫、脂肪腫、乳頭状弾力線維腫、横紋筋腫、および肉
腫）、ならびに非心臓新生物の心臓効果を含むがこれらに限定されない）；先天
性心臓病（左右短絡−−遅発性チアノーゼ（例えば、心房中隔欠損症、心室中隔
欠損症、動脈管および房室中隔欠損症）、右左短絡−−早発性チアノーゼ（例え
ば、ファロー四徴症、大動脈転位症、総動脈幹、三尖弁閉鎖症、および総肺静脈
還流異常症）、閉塞性先天性異常（例えば、大動脈の縮窄症、肺動脈弁狭窄症お
よび肺動脈弁閉鎖症、ならびに大動脈弁狭窄症および大動脈弁閉鎖症）、ならび
に心臓移植に関する障害を含むがこれらに限定されない）。
【００４７】 肝臓に関連する障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
肝性損傷；黄疸および胆汁うっ滞（例えば、ビリルビンおよび胆汁形成）；肝不
全および肝硬変（例えば、肝硬変症、門脈圧亢進症（腹水、門脈体静脈吻合、お
よび巨脾腫））；感染障害（例えば、ウイルス性肝炎（Ａ〜Ｅ型肝炎および他の
肝炎ウイルスによる感染）、臨床病理症候群（例えば、キャリア状態、無症候性
感染、急性肝炎ウイルス、慢性肝炎ウイルス、および劇症肝炎））；自己免疫肝
炎；薬物誘導肝臓疾患および毒素誘導肝臓疾患（例えば、アルコール性肝臓疾患
）；先天性代謝異常および小児の肝臓疾患（例えば、ヘモクロマトーシス、ウィ
ルソン疾患、α１−アンチトリプシン欠損症、および新生児肝炎）；肝臓内胆管
疾患（例えば、二次性胆汁性肝硬変、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎
、および胆管の奇形）；循環疾患（例えば、肝臓への血流の障害（肝動脈欠損な
らびに門脈閉塞および血栓症を含む）、肝臓を通る血流の障害（受動性うっ血お
よび小葉中心壊死および肝臓紫斑病を含む）、肝静脈流出閉塞（肝静脈血栓症（
バッド−チアーリ症候群）および静脈閉塞疾患を含む））；妊娠と関連する肝臓
疾患（例えば、子かん前症および小かん、妊娠の急性脂肪肝、および妊娠の肝臓
内胆汁うっ滞）；器官または骨髄移植の肝臓合併症（例えば、骨髄移植後の薬物
毒性、対宿主性移植片病および肝臓拒絶、および肝臓同種移植片に対する非免疫
学的損傷）；腫瘍および腫瘍状態（例えば、結節過形成、腺腫、および悪性腫瘍
（肝臓の原発癌および転移性腫瘍を含む））。
【００４８】 Ｔ細胞に関与する障害としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない
：細胞媒介性過敏症（例えば、遅延型過敏症）およびＴ細胞媒介性細胞傷害、お
よび移植片拒絶；自己免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、シェーグレ
ン病、全身性硬化、炎症性ミオパシー、混合結合組織病、ならびに結節性多発性
動脈炎ならびに他の脈管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ））；免疫不全症候群（
原発性免疫不全（例えば、胸腺発育不全、重症複合型免疫不全、およびＡＩＤＳ
）を含むが、これらに限定されない）；白血球減少症；白血球の反応性（炎症性
）増殖（白血球増加症、急性非特異的リンパ節炎、および慢性非特異的リンパ節
炎を含むが、これらに限定されない）；白血球の新生物性増殖（リンパ球性新生
物（例えば、前駆体Ｔ細胞新生物（例えば、急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫
）、末梢Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞の新生物（末梢Ｔ細胞リンパ腫、不
特定の（ｕｎｓｐｅｃｉｆｉｅｄ）成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、菌状息肉腫お
よびセザリー症候群を含む）ならびにホジキン病）を含むが、これらに限定され
ない）。
【００４９】 Ｂ細胞に関する障害としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：前
駆体Ｂ細胞新生物（例えば、リンパ芽球性白血病／リンパ芽球性リンパ腫）。末
梢Ｂ細胞新生物としては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：慢性リン
パ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ
腫、バーキットリンパ腫、プラスマ細胞新生物、多発性骨髄腫、および関連する
もの、リンパプラスマ細胞リンパ腫（ヴァルデンストレームマクログロブリン血
症）、外套細胞リンパ腫、辺縁層リンパ腫（ＭＡＬＴｏｍａ）、およびヘアリー
セル白血病。
【００５０】 正常な骨髄において、骨髄球系（多形核細胞）は、細胞要素の約６０％を構成
し、そして赤血球系は、２０〜３０％を構成する。リンパ球、単球、細網細胞、
プラスマ細胞および巨核球はともに、１０〜２０％を構成する。リンパ球は、正
常な成体骨髄の５〜１５％を構成する。骨髄において、細胞型は、赤血球の前駆
体（赤芽球）、マクロファージの前駆体（単芽球）、血小板の前駆体（巨核球）
、多形核白血球の前駆体（骨髄芽球）およびリンパ球の前駆体（リンパ芽球）が
、１つの顕微鏡視野において可視であり得るように、添加混合される。さらに、
異なる細胞系列について幹細胞が存在し、ならびに異なる系列の方向付けられた
前駆細胞についての前駆幹細胞が存在する。各々の種々の型の細胞および段階は
、当業者に公知であり、そして例えば、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｉｍｍｕｎｏｐ
ａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、第５版、Ｓｅｌｌら、Ｓｉｍｏ
ｎおよびＳｃｈｕｓｔｅｒ（１９９６）（骨髄において見出される細胞型の教示
について、参考として援用される）の４２頁（図２〜８）に見出される。従って
、本発明は、これらの細胞から生じる障害に関する。これらの障害としては、以
下が挙げられるが、これらに限定されない；造血幹細胞に関する障害；方向付け
られたリンパ系前駆細胞に関する疾患；リンパ系細胞（Ｂ細胞およびＴ細胞を含
む）に関する疾患；方向付けられた骨髄性前駆細胞（単球、顆粒球、および巨核
球を含む）に関する疾患；ならびに方向付けられた赤血球系前駆細胞に関する疾
患。これらとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：以下を含む
白血病：Ｂリンパ性白血病、Ｔリンパ性白血病、未分化白血病；赤白血病、巨核
球性白血病、単球性白血病；［分化を伴う白血病および分化を伴わない白血病が
包含される］；慢性および急性のリンパ芽球性白血病、慢性および急性のリンパ
性白血病、慢性および急性の骨髄性白血病、リンパ腫、脊髄形成異常（ｍｙｅｌ
ｏ ｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ）症候群、慢性および急性の骨髄性白血病、骨髄単球
性白血病；慢性および急性の骨髄芽球性白血病、慢性および急性の骨髄性白血病
、慢性および急性の前骨髄球性白血病、慢性および急性の骨髄性白血病、単球−
マクロファージ系統の血液学的悪性疾患（例えば、若年性慢性骨髄性白血病）；
続発性ＡＭＬ、前駆体の血液学的障害；不応性貧血；再生不良性貧血；反応性皮
膚血管内皮細胞腫症；樹状細胞における変化した発現に関する線維化障害、全身
性硬化症を含む障害、Ｅ‐Ｍ症候群、流行性有毒油（ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｔｏｘ
ｉｃ ｏｉｌ）症候群、好酸球性筋膜炎、限局性形態の強皮症、ケロイド、およ
び線維化結腸疾患；血管腫様悪性線維性組織球腫；癌腫（原発性の頭頸部の扁平
上皮癌を含む）；肉腫（カポージ肉腫を含む）；線維腺腫（ｆｉｂｒｏａｄａｎ
ｏｍａ）および葉状腫瘍（乳腺線維腺腫を含む）；間質性腫瘍；葉状腫瘍（組織
球腫を含む）；赤芽球症；神経線維腫症；脈管内皮の疾患；（特に、古い損傷に
おける）脱髄疾患；神経膠症、血管原性水腫、脈管疾患、アルツハイマー病およ
びパーキンソン病；Ｔ細胞リンパ腫；Ｂ細胞リンパ腫。
【００５１】 減少した血小板数に関連する障害である、血小板減少症としては、以下が挙げ
られる：特発性血小板減少性紫斑病（急性特発性血小板減少性紫斑病、薬剤誘発
性血小板減少症、ＨＩＶ関連血小板減少症、および血栓性細小血管症を含む）：
血栓性血小板減少性紫斑病、および溶血性尿毒症症候群。
【００５２】 前駆Ｔ細胞新生物に関する障害としては、前駆Ｔリンパ芽球性白血病／リンパ
腫が挙げられる。末梢Ｔ細胞に関する障害およびナチュラルキラー新生物として
は、以下が挙げられる：Ｔ細胞慢性リンパ球性白血病、大顆粒状リンパ性白血病
、菌状息肉腫およびセザリー症候群、末梢Ｔ細胞リンパ腫、特定されていない、
血管免疫芽細胞性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心（ａｎｇｉｏｃｅｎｔｒｉｃ）リン
パ腫（ＮＫ／Ｔ細胞リンパ腫４ａ）、腸管Ｔ細胞リンパ腫、成体Ｔ細胞白血病／
リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫。
【００５３】 この遺伝子は、本発明者らによって分析されたすべての血球前駆体において顕
著なレベルで発現される。これは、骨髄（ＣＤ３４＋）、Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血
（骨髄に由来する循環前駆体を含む）において高度に発現され、そしてＣＤ３４ ＋ 成体骨髄およびＣＤ３４＋臍帯血細胞において中程度に発現される。これはま
た、巨核球およびＣＤ４１＋（ＣＤ１４−）骨髄細胞において高度に発現される
。Ｇ−ＣＳＦ動員末梢血は、骨髄に由来する循環前駆体を含む。従って、この遺
伝子の発現は、分化および／または成熟した血球の形成に関連した障害を処置す
るために関連付けられる。これに関して、特に関連する障害としては、貧血、好
中球減少症、および血小板減少症が挙げられる。
【００５４】 さらに、２８７１タンパク質は、細胞の増殖障害および／または分化障害を含
む種々の障害を媒介する。細胞の増殖障害および／または分化障害の例としては
、癌、例えば、癌腫、肉腫、転移性障害または造血腫瘍性障害（例えば、白血病
）が挙げられる。転移性腫瘍は、多数の原発性腫瘍型（前立腺起源、結腸起源、
肺起源、乳房起源、卵巣起源、および肝臓起源が挙げられるが、これらに限定さ
れない）から生じ得る。
【００５５】 本明細書中で使用される場合、用語「癌」、「過増殖性」、および「腫瘍性」
は、自律性増殖の能力を有する細胞、すなわち、急速に増殖する細胞増殖によっ
て特徴付けられる異常な状態または状況をいう。過増殖性および腫瘍性疾患状態
は、病理学的（すなわち、疾患状態を特徴付けるかまたは構成する）として分類
され得るか、または非病理学的（すなわち、正常からは逸脱するが、疾患状態と
は関連付けられない）として分類され得る。この用語は、侵襲性の組織病理学的
な型または段階とは無関係に、すべての型の癌性増殖または腫瘍性プロセス、転
移性組織、または悪性にトランスフォームされた細胞、組織もしくは器官を含む
ことを意味する。「病理学的過増殖性」細胞は、悪性腫瘍増殖によって特徴付け
られる疾患状態において生じる。非病理学的過増殖性細胞の例としては、創傷治
癒に関連付けられる細胞の増殖が挙げられる。
【００５６】 用語「癌」または「新生物」は、種々の器官系の悪性疾患（例えば、肺、乳房
、甲状腺、リンパ系、胃腸、卵巣および尿生殖器管に罹患する悪性疾患）、およ
び悪性疾患を含む腺癌（例えば、大半の結腸癌、腎細胞癌、前立腺癌、および／
または精巣腫瘍、肺の非小細胞癌、小腸の癌および食道の癌）が挙げられる。
【００５７】 用語「癌腫」は当該分野で認識されており、そして呼吸器系の癌腫、胃腸系の
癌腫、泌尿生殖器系の癌腫、および黒色腫を含む、上皮組織または内分泌組織の
悪性疾患をいう。例示的な癌腫としては、頸部、肺、前立腺、乳房、頭頸部、結
腸、および卵巣の組織から形成される癌腫が挙げられる。この用語はまた、癌肉
腫（例えば、癌性および肉腫性の組織から構成される悪性腫瘍を含むもの）を含
む。「腺癌」は、腺組織に由来する癌腫、または腫瘍細胞が、認識可能な腺状構
造を形成する癌腫をいう。
【００５８】 用語「肉腫」は当該分野で認識されており、そして間葉誘導物の悪性腫瘍をい
う。
【００５９】 ２８７１遺伝子は、乳房腫瘍細胞、グリア（ｇｌｉｏ）細胞、結腸腫瘍細胞、
肺腫瘍細胞、卵巣細胞、胎盤、大脳皮質、膵臓、大動脈、および皮膚細胞におい
て、上昇したレベルで発現される。２８７１の発現は、ｐ５３の存在下において
ダウンレギュレートされる。ｐ５３は、遺伝子をアップレギュレートまたはダウ
ンレギュレートするように作用し得る腫瘍抑制遺伝子である。ｐ５３の存在下に
おいてダウンレギュレートまたは抑制される遺伝子は、腫瘍形成に関与し得るの
で、２８７１は、腫瘍形成、特に脳、結腸、肺および卵巣の癌に関与し得る。
【００６０】 本明細書中で交換可能に使用されるように、「２８７１活性」、「２８７１の
生物学的活性」または「２８７１の機能的活性」は、標準的な技術に従ってイン
ビボまたはインビトロで決定される場合に、２８７１応答性の細胞に対して、２
８７１タンパク質、ポリペプチドまたは核酸分子によって発揮される活性をいう
。１つの実施形態では、２８７１活性は、直接的な活性、例えば、標的タンパク
質（好ましくは、２８７１標的分子（例えば、Ｇタンパク質αサブユニットまた
は２８７１リガンド））との会合（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）である。別の実施
形態では、２８７１活性は、間接的な活性、例えば、第二タンパク質（例えば、
シグナル伝達経路のタンパク質）の合成または活性の阻害である。好ましい実施
形態では、２８７１活性は、以下の少なくとも１以上の活性である：（ｉ）形質
膜中の２８７１タンパク質と、２８７１タンパク質分子を発現する同一細胞から
分泌されるタンパク質または他の生物学的分子（すなわち、２８７１リガンド）
との相互作用；（ｉｉ）形質膜中の２８７１タンパク質と、２８７１タンパク質
分子を含む細胞とは異なる細胞から分泌されるタンパク質または他の生物学的分
子（例えば、２８７１リガンド）との相互作用；（ｉｉｉ）２８７１タンパク質
と、分泌されたペプチド、ポリペプチドまたは低分子との間の複合体形成；（ｉ
ｖ）２８７１タンパク質と、細胞外環境中の標的分子（例えば、可溶性標的分子
）との相互作用；（ｖ）２８７１タンパク質と、細胞内標的分子との相互作用（
例えば、インターナライズされたリガンドまたはエンドサイトーシスされたリガ
ンドとの相互作用）；および（ｖｉ）１つ、２つ、またはそれより多い細胞内標
的分子との複合体形成。
【００６１】 さらに別の好ましい実施形態では、２８７１活性は、以下の少なくとも１以上
の活性である：（１）シグナル伝達経路（例えば、２８７１依存性経路）の調節
（例えば、アゴナイズまたはアンタゴナイズ）；（２）サイトカインの産生およ
び／または分泌（例えば、炎症誘発性（ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）サイ
トカインの産生および／または分泌）の調節；（３）リンホカインの産生および
／または分泌の調節；（４）脳機能の調節；（５）接着分子の産生および／また
は細胞接着の調節；（６）核転写因子の発現または活性の調節；（７）ＩＬ−４
、ＩＬ−５またはＴ細胞機能に関与した他のサイトカインの発現の調節；（８）
細胞の増殖、発生、または分化（例えば、Ｔｈ２細胞に対するＴｈ１細胞へのヘ
ルパーＴ細胞の分化）の調節；（９）骨髄および／または巨核球前駆細胞の細胞
増殖、発生、または分化の調節；（１０）細胞性免疫応答の調節；（１１）サイ
トカイン媒介性炎症誘発性作用の調節（例えば、肝細胞による急性期タンパク質
合成、熱、および／またはプロスタグランジン合成（例えば、ＰＧＥ２合成）の
阻害）；（１２）創傷治癒の促進および／または増強；ならびに（１３）細胞性
増殖の調節。
【００６２】 さらに別の好ましい実施形態では、２８７１活性はまた、白血球、血小板およ
び赤血球系列における細胞の分化、発生、増殖、そして一般的に産生の調節であ
る。これらは、３つすべての系列の細胞を生じさせ、そしてこれらの完全に分化
した細胞型を生じる発生経路において以後に産生される前駆細胞を生じさせるＣ
Ｄ３４＋幹細胞を含む。
【００６３】 （一般的方法） 本発明は、このレセプター発現が関与する、細胞、組織、ならびにこれらの細
胞および組織の障害に適用される、方法、使用、ならびに方法および使用に適用
可能な試薬に関する。このレセプターは、図５〜７に示されるような種々の組織
において発現される。従って、本明細書中の上記および下記においてより詳細に
開示される本発明の方法および使用は、これらの組織、これらの組織に関与する
障害、そして特に、これらの図面において示されそして本明細書中に開示される
ような、この遺伝子発現が関連する障害に適用する。従って、本明細書中におい
てより詳細に開示された方法、使用、および試薬は、特に、胸腺、脳、ＣＤ３４ ＋ 細胞、前立腺、精巣、胎盤、膵臓、血球細胞、およびそれらの前駆体、白血球
（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、単球、または顆粒球）およびそれらの前駆体、なら
びに血小板およびそれらの前駆体（例えば、巨核球）に適用する。さらに、より
低いが陽性である発現が、いくつかの他の組織および細胞において観察された。
従って、本明細書中に開示された使用、試薬および方法はまた、これらの組織、
細胞型、ならびにこれらの組織および細胞型に関与する障害に適用する。
【００６４】 （ポリペプチド） 本発明は、新規のＧ共役タンパク質レセプターの発見に基く。詳細には、発現
配列タグ（ＥＳＴ）をＧタンパク質共役レセプター配列との相同性に基いて選択
した。このＥＳＴを用いて、Ｇタンパク質共役レセプター配列が含む配列に基く
プライマーを設計し、そしてこれを用いて前立腺ｃＤＮＡライブラリーからｃＤ
ＮＡを同定した。ポジティブクローンを配列決定し、そして重複フラグメントを
アセンブルした。アセンブルされた配列の分析は、クローニングしたｃＤＮＡ分
子がＧタンパク質共役レセプターをコードすることを明らかにした。
【００６５】 従って、本発明は、図１（配列番号１）に示される推定アミノ酸配列を有する
か、もしくは寄託されたｃＤＮＡ（ＡＴＣＣ番号ＰＴＡ−２３６９、２０００年
８月１１日）によりコードされるアミノ酸配列を有する新規のＧＰＣＲに関する
。
【００６６】 この寄託物は、微生物の寄託の国際的承認に関するブダペスト条約の規約の下
に維持される。この寄託物は、当業者の利便性のために提供され、そして米国特
許法第１１２条の下に寄託が求められる承認ではない。寄託された配列およびこ
の配列によりコードされるポリペプチドは、本明細書中で参考として援用され、
そして本願においての説明とのいかなる矛盾（例えば、配列決定のエラー）をも
制御する。
【００６７】 「２８７１レセプターポリペプチド」または「２８７１レセプタータンパク質
」は、配列番号１におけるポリペプチドまたは寄託されたｃＤＮＡによってコー
ドされるポリペプチドをいう。しかし、用語「レセプタータンパク質」または「
レセプターポリペプチド」はさらに、本明細書中に記載される多数の改変体、な
らびに全長２８７１ポリペプチドおよび改変体由来のフラグメントを含む。
【００６８】 従って、本発明は、単離または精製された２８７１レセプターポリペプチドな
らびにその改変体およびフラグメントを提供する。
【００６９】 ２８７１ポリペプチドは、３つの主な構造ドメインを示す、３５９残基のタン
パク質である。細胞外ドメインは、配列番号１の残基１〜約４２以内に存在する
と同定されている。膜貫通ドメインは、配列番号１の約４３〜約３１８の残基内
に存在すると同定されている。細胞内ドメインは、配列番号１の約３１９〜約３
５９の残基内に存在すると同定されている。膜貫通ドメインは、ＧＰＣＲシグナ
ル伝達のサインであるＤＲＹを残基１３８〜１４０に含む。
【００７０】 本明細書中で用いられる場合、ポリペプチドは、組換え細胞および非組換え細
胞から単離した場合、細胞物質を実質的に含まないとき、または化学的に合成さ
れた場合、化学前駆体も他の化学物質も含まないとき、「単離された」または「
精製された」といわれる。しかし、ポリペプチドは、細胞中で通常結合していな
い別のポリペプチドと連結され得、これはなお「単離された」または「精製され
た」と見なされる。
【００７１】 このレセプターポリペプチドは、均質になるまで精製され得る。しかし、この
ポリペプチドが均質になるまで精製されていない調製物が有用であり、単離され
た形態のこのポリペプチドを含むとみなされることが理解される。重要な特徴は
、かなりの量の他の成分が存在する場合でさえも、調製物はこのポリペプチドの
所望の機能を可能にすることである。したがって、本発明は種々の程度の純度を
包含する。
【００７２】 １つの実施形態において、用語「細胞物質を実質的に含まない」は、約３０％
（乾燥重量で）未満の他のタンパク質（すなわち、夾雑タンパク質）、約２０％
未満の他のタンパク質、約１０％未満の他のタンパク質、または約５％未満の他
のタンパク質を有するこのレセプターポリペプチドの調製物を包含する。このレ
セプターポリペプチドが組換え的に産生される場合、これはまた、培養培地（す
なわち、タンパク質調製物量の約２０％未満、約１０％未満、または約５％未満
に相当する培養培地）を実質的に含まなくともよい。
【００７３】 用語「化学前駆体も他の化学物質も実質的に含まない」は、その合成に関与す
る化学前駆体または他の化学物質から分離されているこのレセプターポリペプチ
ドの調製物を包含する。１つの実施形態において、用語「化学前駆体も他の化合
物も実質的に含まない」は、約３０％（乾燥重量で）未満の化学前駆体または他
の化学物質、約２０％未満の化学前駆体もしくは他の化学物質、約１０％未満の
化学前駆体もしくは他の化学物質、または約５％未満の化学物質前駆体もしくは
他の化学物質を有する、ポリペプチドの調製物を含む。
【００７４】 １つの実施形態において、このレセプターポリペプチドは、配列番号１に示さ
れるアミノ酸配列を含む。しかし、本発明はまた、配列改変体を含む。改変体は
、生物体において同一遺伝子座によりコードされる実質的に相同なタンパク質（
すなわち、対立遺伝子改変体）を含む。改変体はまた、生物体の他の遺伝子座由
来であるが配列番号１の２８７１レセプタータンパク質に対して実質的な相同性
を有するタンパク質を含む。改変体はまた、２８７１レセプタータンパク質と実
質的に相同であるが別の生物体由来であるタンパク質（すなわちオルソログ）を
含む。改変体はまた、化学合成により生成される２８７１レセプタータンパク質
と実質的に相同であるタンパク質を含む。改変体はまた、組換え方法によって産
生される２８７１レセプタータンパク質と実質的に相同なタンパク質を含む。
【００７５】 本明細書中で使用される場合、２つのタンパク質（または、それらのタンパク
質の領域）は、アミノ酸配列が少なくとも約５５〜６０％、代表的には少なくと
も約７０〜７５％、より代表的には少なくとも約８０〜８５％、そして最も代表
的には少なくとも約９０〜９５％以上相同である場合に、実質的に相同である。
本発明に従う、実質的に相同なアミノ酸配列は、配列番号２に示される配列の核
酸配列またはその部分に、以下でより十分に記載されるようなストリンジェント
な条件下でハイブリダイズする核酸配列によりコードされる。
【００７６】 ２つのアミノ酸配列または２つの核酸配列の同一性のパーセントを決定するた
めに、これらの配列を最適な比較目的のために整列させる（例えば、他方のタン
パク質または核酸との最適な整列のために、一方のタンパク質または核酸に、ギ
ャップが導入され得、そして非相同配列は、比較目的のために無視される）。次
いで、対応するアミノ酸位置または対応するヌクレオチド位置でアミノ酸残基ま
たはヌクレオチドが比較される。一方の配列中のある位置が、他方の配列中の対
応する位置と同一のアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占められるならば
、その分子はその位置で相同である。本明細書中で使用される場合、アミノ酸ま
たは核酸の「相同性」は、アミノ酸または核酸の「同一性」と等価である。この
２つの配列間の相同性のパーセントは、この配列によって共有される同一位置の
数の関数である（すなわち、相同性のパーセントは、同一位置の数／位置の合計
数×１００に等しい）。
【００７７】 本発明はまた、より低い程度の同一性を有するが、２８７１ポリペプチドによ
って果たされる同じ機能のうちの１以上を行うに十分な類似性を有するポリペプ
チドを包含する。類似性は、保存されたアミノ酸置換によって決定される。この
ような置換は、同様な特徴を有する別のアミノ酸によってポリペプチド内の所定
のアミノ酸を置換するものである。保存的置換は、表現型的にサイレントである
ようである。代表的には、保存的置換として見られるのは、脂肪族アミノ酸Ａｌ
ａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの間の互いの置換；ヒドロキシル残基Ｓｅｒ
とＴｈｒとの交換、酸性残基のＡｓｐとＧｌｕとの交換、アミド残基ＡｓｎとＧ
ｌｎとの間の置換、塩基性残基ＬｙｓとＡｒｇとの交換、ならびに芳香族残基Ｐ
ｈｅ、Ｔｙｒの間の置換である。どのアミノ酸変化が表現型的にサイレントであ
るようであるかに関する指針は、Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３
０６〜１３１０（１９９０）に見出される。
【００７８】
【表１】 同一性および類似性は両方とも、容易に算出され得る（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏ
ｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編，Ｏｘｆ
ｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂ
ｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐ
ｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅ
ｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．およびＧｒ
ｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，
１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
，１９８７；ならびにＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇ
ｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．およびＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．編，Ｍ Ｓｔｏｃｋｔｏｎ
Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１）。
【００７９】 ２つの配列間の同一性および類似性を決定するための好ましいコンピュータプ
ログラム方法は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊら、Ｎｕ
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２（１）：３８７（１９８４））、ＢＬＡ
ＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ
ｅｃ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０））を包含するがこれらに限定され
ない。
【００８０】 改変体ポリペプチドは、１以上の置換、欠失、挿入、反転、融合および短縮化
、またはこれらのいずれかの組み合わせによって、アミノ酸配列において異なり
得る。
【００８１】 改変体ポリペプチドは、完全に機能的であり得るか、または１以上の活性にお
いて機能を欠失し得る。従って、本発明の場合において、改変体は、例えば、リ
ガンド結合、膜貫通会合、Ｇタンパク質共役およびシグナル伝達に対応する領域
の１つ以上の機能を果たし得る。
【００８２】 完全に機能的な改変体は、代表的に、保存的バリエーションまたは重要でない
残基もしくは重要でない領域におけるバリエーションのみを含む。機能的改変体
はまた、類似のアミノ酸の置換を含み得、この置換は、機能における変化を生じ
ないか、または重要ではない変化を生じる。あるいは、このような置換は、ある
程度まで、ポジティブまたはネガティブに機能を果たし得る。
【００８３】 非機能的改変体は、代表的に、１以上の非保存的なアミノ酸の置換、欠失、挿
入、反転もしくは短縮化、または重要な残基または重要な領域での置換、挿入、
反転もしくは欠失を含む。
【００８４】 示されるように、改変体は、天然に存在し得るか、または有用な特性および新
規な特性をこのレセプターポリペプチドに提供するように組換え手段もしくは化
学合成によって作製され得る。これは、タンパク質凝集を妨げることにより、薬
学的処方物からの免疫原性を妨げることを含む。
【００８５】 有用な改変体は、さらに、リガンド結合特徴の変更を含む。例えば、１つの実
施形態は、結合を生じるがリガンドの放出は生じない、この結合部位でのバリエ
ーションを含む。同じ部位でのさらに有用なバリエーションは、リガンドに対す
るおり高い親和性を生じ得る。有用なバリエーションはまた、別のリガンドに対
する親和性を提供する変化を含む。別の有用なバリエーションは、リガンドとの
結合を可能にするが、リガンドによる活性化を妨げるバリエーションを含む。別
の有用なバリエーションは、膜貫通Ｇタンパク質共役／シグナル伝達ドメインに
おける、適切なＧタンパク質による減少もしくは増加した結合、またはこのレセ
プターが通常会合するＧタンパク質とは異なるＧタンパク質による結合を提供す
るバリエーションを含む。別の有用なバリエーションは、１以上のドメインが、
別のＧタンパク質共役レセプター由来の１以上のドメインに作動可能に融合され
ている融合タンパク質を提供する。
【００８６】 機能に必須のアミノ酸は、当該分野で公知の方法（例えば、部位特異的変異誘
発またはアラニンスキャニング変異誘発（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２４４：１０８１−１０８５（１９８５））によって同定され得る。後者
の手順は、分子中のあらゆる残基に１個のアラニン変異を導入する。次いで、得
られた変異体分子を、生物学的活性（例えば、レセプター結合もしくはインビト
ロでの増殖活性）について試験する。リガンド−レセプター結合について重要な
部位はまた、結晶化、核磁気共鳴または光親和性標識（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）；ｄｅ Ｖｏｓら、Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２５５：３０６−３１２（１９９２））のような構造分析によって決
定され得る。
【００８７】 本発明はまた、この２８７１レセプタータンパク質のポリペプチドフラグメン
トを含む。フラグメントは、配列番号１に示されるアミノ酸配列から誘導され得
る。しかし、本発明はまた、本明細書中に記載される２８７１レセプタータンパ
ク質の改変体のフラグメントを包含する。
【００８８】 本明細書中で使用される場合、フラグメントは、少なくとも１２個連続したア
ミノ酸を含む。そのタンパク質の１以上の生物学的活性（例えば、Ｇタンパク質
またはリガンドに結合する能力）を保持するフラグメント、ならびにレセプター
抗体を生じる免疫原として使用され得るフラグメント。
【００８９】 生物学的に活性なフラグメント（例えば、１２、１５、２０、３０、３５、３
６、３７、３８、３９、４０、５０、１００またはそれより多くのアミノ酸長で
あるペプチド）は、周知の方法を使用するポリペプチド配列の分析により同定さ
れた、ドメインまたはモチーフ（例えば、細胞外ドメイン、１つ以上の膜貫通ド
メイン、Ｇタンパク質共役ドメイン、またはＧＰＣＲサイン）を含み得る。
【００９０】 可能なフラグメントとしては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：１
）配列番号１のほぼアミノ酸１〜ほぼアミノ酸４２の細胞外ドメイン全体を含む
可溶性ペプチド；２）配列番号１のほぼアミノ酸３１９〜ほぼアミノ酸３５９の
細胞内ドメインを含むペプチド；３）ほぼアミノ酸４３〜アミノ酸３１８の膜貫
通ドメイン全体を含むペプチド。
【００９１】 本発明はまた、免疫原性特性を有するフラグメントを提供する。これらは、２
８７１レセプタータンパク質および改変体のエピトープ保有部分を含む。これら
のエピトープ保有ペプチドは、レセプターのポリペプチドあるいは領域またはフ
ラグメントに特異的に結合する抗体を惹起するために有用である。これらのペプ
チドは、少なくとも１２、少なくとも１４、または少なくとも約１５〜約３０の
間のアミノ酸を含み得る。
【００９２】 抗体を生成するために使用され得る抗原性ポリペプチドの非限定的な例として
は、細胞外ドメイン由来のペプチドが挙げられる。
【００９３】 エピトープ保有レセプターおよびポリペプチドは、任意の従来の手段（Ｈｏｕ
ｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ８２：５１３１−５１３５）によって産生され得る。同時の複数のペプチ
ド合成は、米国特許第４，６３１，２１１号に記載される。
【００９４】 フラグメントは、別個（他のアミノ酸またはポリペプチドに融合されていない
）であり得るか、または大きいポリペプチド内にあり得る。さらに、いくつかの
フラグメントは、単一の大きいポリペプチド内に含まれ得る。１つの実施形態に
おいて、宿主における発現のために設計されたフラグメントは、このレセプター
フラグメントのアミノ末端に融合された異種プレポリペプチド領域およびプロポ
リペプチド領域、ならびにそのフラグメントのカルボキシル末端に融合されるさ
らなる領域を有し得る。
【００９５】 従って、本発明は、キメラタンパク質または融合タンパク質を提供する。これ
らは、レセプタータンパク質に実質的に相同でないアミノ酸配列を有する異種ペ
プチドに作動可能に連結されたレセプタータンパク質を含む。「作動可能に連結
された」とは、このレセプタータンパク質および異種タンパク質が、インフレー
ムで融合されていることを示す。異種タンパク質は、レセプタータンパク質のＮ
末端またはＣ末端に融合され得る。
【００９６】 １つの実施形態において、融合タンパク質は、それ自体で、レセプター機能に
影響しない。例えば、融合タンパク質は、ＧＳＴ融合タンパク質であり得、ここ
で、このレセプター配列は、ＧＳＴ配列のＣ末端に融合されている。他の型の融
合タンパク質としては、酵素融合タンパク質（例えば、β−ガラクトシダーゼ融
合体）、酵母ツーハイブリッドＧＡＬ融合体、ポリＨｉｓ融合体およびＩｇ融合
体が挙げられるが、これらに限定されない。このような融合タンパク質（特に、
ポリＨｉｓ融合体）は、組換えレセプタータンパク質の精製を容易にし得る。特
定の宿主細胞（例えば、哺乳動物宿主細胞）において、タンパク質の発現および
／または分泌は、異種シグナル配列を使用して増加され得る。従って、別の実施
形態において、融合タンパク質は、そのＮ末端に異種シグナル配列を含む。
【００９７】 ＥＰ−Ａ−Ｏ ４６４ ５３３は、免疫グロブリン定常領域の種々の部分を含
む融合タンパク質を開示する。Ｆｃは、治療および診断において有用であり、従
って、例えば、薬物動態学的特性の改良を生じる（ＥＰ−Ａ ０２３２ ２６２
）。例えば、薬物発見において、ヒトタンパク質は、アンタゴニストを同定する
ための高処理能力スクリーニングアッセイの目的でＦｃ部分と融合された（Ｂｅ
ｎｎｅｔｔら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ
ｉｏｎ ８：５２〜５８（１９９５）およびＪｏｈａｎｓｏｎら，Ｔｈｅ Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２７０，１６
：９４５９〜９４７１（１９９５））。従って、本発明はまた、レセプターポリ
ペプチドおよび種々のサブクラスの免疫グロブリン（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、
ＩｇＥ）の重鎖または軽鎖の定常領域の種々の部分を含有する可溶性融合タンパ
ク質を含む。融合がヒンジ領域で生じる場合の、ヒトＩｇＧ（特にＩｇＧ１）の
重鎖の定常部分が、免疫グロブリンとして好ましい。いくつかの使用について、
融合タンパク質がその意図された目的のために使用された後に（例えば、融合タ
ンパク質が免疫化のための抗原として使用される場合に）、取り除かれることが
望ましい。特定の実施形態では、Ｆｃ部分は、切断配列（これも、組み込まれそ
して因子Ｘａで切断され得る）による単純な方法で取り除かれ得る。
【００９８】 キメラタンパク質または融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ技術により
生成され得る。例えば、異なるタンパク質配列についてコードするＤＮＡフラグ
メントは、従来技術に従ってインフレームで一緒に連結される。別の実施形態で
は、融合遺伝子は、自動ＤＮＡ合成機を含む従来技術により合成され得る。ある
いは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増幅が、アンカープライマーを使用して行わ
れ得、アンカープライマーは、２つの連続した遺伝子フラグメント間に相補突出
を生じさせ、この遺伝子フラグメントは、引き続きアニーリングおよび再増幅さ
れてキメラ遺伝子配列を生成し得る（Ａｕｓｕｂｅｌら（１９９２）Ｃｕｒｒｅ
ｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙを参照
のこと）。さらに、既に融合部分（例えば、ＧＳＴ部分）をコードする多くの発
現ベクターが市販されている。レセプタータンパク質をコードしている核酸は、
融合部分がレセプタータンパク質にインフレームで連結されるように、このよう
な発現ベクターへクローン化され得る。
【００９９】 融合タンパク質の別の形態は、レセプター機能に直接的に影響する形態である
。従って、レセプターポリペプチドは、本発明により包含され、ここでは、１以
上のレセプタードメインは、別のＧタンパク質共役レセプターまたは他の型のレ
セプター由来の相同ドメインにより置換されている。従って、種々の順列が可能
である。細胞外ドメインまたはそのサブ領域（例えば、リガンド結合）は、別の
リガンド結合レセプタータンパク質由来のドメインまたはそのサブ領域で置換さ
れ得る。あるいは、膜貫通領域（例えば、Ｇタンパク質共役／シグナル伝達）が
、置換され得る。最後に、細胞内ドメインが、置換され得る。従って、キメラレ
セプターが形成され得、ここでは、１以上のネイティブなドメインまたはサブド
メインが置換されている。
【０１００】 単離されたレセプタータンパク質は、このレセプタータンパク質を天然に発現
する細胞から（例えば、前立腺、胎盤、子宮、精巣、膵臓、扁桃、胸腺、脳、Ｃ
Ｄ３４＋細胞（マクロファージを含む）、図５〜７に示されるような細胞から）
精製され得るか、改変されてこのレセプタータンパク質を発現する細胞（組換え
）から精製され得るか、または公知のタンパク質合成法を使用して合成され得る
。
【０１０１】 １つの実施形態では、このタンパク質は、組換えＤＮＡ技術により生成される
。例えば、レセプターポリペプチドをコードする核酸分子は、発現ベクターへク
ローン化され、この発現ベクターが、宿主細胞へ導入され、そしてタンパク質が
その宿主細胞中で発現される。次いで、このタンパク質は、標準的なタンパク質
精製技術を使用する適切な精製スキームにより細胞から単離され得る。
【０１０２】 ポリペプチドは、しばしば、２０個の天然に存在するアミノ酸と通常いわれる
２０個のアミノ酸以外のアミノ酸を含む。さらに、多くのアミノ酸（末端のアミ
ノ酸を含む）は、天然のプロセス（例えば、プロセシングおよび他の翻訳後修飾
）によるか、または当該分野で周知の化学的改変技術により改変され得る。ポリ
ペプチドにおいて天然に生じる通常の改変は、基本書、詳細な論文および研究文
献に記載され、そしてこれらは、当業者に周知である。
【０１０３】 従って、このポリペプチドはまた、置換されたアミノ酸残基が遺伝コードによ
りコードされるアミノ酸ではないか、置換基が含まれるか、成熟ポリペプチドが
別の化合物（例えば、ポリペプチドの半減期を増加させる化合物（例えば、ポリ
エチレングリコール））と融合されるか、またはさらなるアミノ酸（例えば、リ
ーダー配列もしくは分泌配列または成熟ポリペプチドもしくはプロプロテイン配
列の精製のための配列）が成熟ポリペプチドに融合される、誘導体またはアナロ
グを包含する。
【０１０４】 公知の改変としては、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化
、フラビンの共有結合的付加、ヘム部分の共有結合的付加、ヌクレオチドまたは
ヌクレオチド誘導体の共有結合的付加、脂質または脂質誘導体の共有結合的付加
、ホスファチジルイノシトールの共有結合的付加、架橋、環化、ジスルフィド結
合形成、ジメチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタメー
トの形成、ホルミル化、γカルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成
、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分
解プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノン化（ｓｅｌｅｎｏ
ｙｌａｔｉｏｎ）、硫酸化、タンパク質へのアミノ酸の転移ＲＮＡ媒介性付加（
例えば、アルギン化（ａｒｇｉｎｙｌａｔｉｏｎ））およびユビキチン化が挙げ
られるが、これらに限定されない。
【０１０５】 このような改変は、当業者に周知であり、そして科学文献に非常に詳細に記載
されている。例えば、いくつかの特定の通常の改変（グリコシル化、脂質付加、
硫酸化、グルタミン酸残基のγ−カルボキシル化、ヒドロキシル化およびＡＤＰ
−リボシル化）は、ほとんどの基本書（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｓｔｒｕｃ
ｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，第２版，Ｔ．
Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９３））に記載される。この目的についての多くの詳細
な概説が、例えば、Ｗｏｌｄ，Ｆ．，Ｐｏｓｔｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｃ
ｏｖａｌｅｎｔ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｂ．Ｃ
．Ｊｏｈｎｓｏｎ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １〜
１２（１９８３）；Ｓｅｉｆｔｅｒら（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．
１８２：６２６〜６４６、およびＲａｔｔａｎら（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６３：４８〜６２により利用可能である。
【０１０６】 また周知であるように、ポリペプチドは常に全体的に直線状ではない。例えば
、ポリペプチドは、ユビキチン化の結果として分枝され得、そしてポリペプチド
は、概して翻訳後の事象（天然のプロセシング事象および天然には存在しないヒ
トの操作により行われる事象を含む）の結果として分枝を有するかまたは有さな
い環状であり得る。環状ポリペプチド、分枝ポリペプチド、および分枝環状ポリ
ペプチドは、非翻訳の天然プロセスにより、および合成法により合成され得る。
【０１０７】 改変は、ポリペプチドのどこにおいても生じ得、これらとしては、ペプチド骨
格、アミノ酸側鎖およびアミノ末端もしくはカルボキシル末端が挙げられる。共
有結合改変による、ポリペプチド中のアミノ基もしくはカルボキシル基またはそ
の両方の妨害は、天然に存在するポリペプチドおよび合成ポリペプチドにおいて
共通である。例えば、タンパク質分解プロセシングの前にＥ．ｃｏｌｉ中で作製
されるポリペプチドのアミノ末端残基は、ほとんどいつもＮ−ホルミルメチオニ
ンである。
【０１０８】 改変は、タンパク質が作製される方法と相関関係であり得る。例えば、組換え
ポリペプチドについて、改変は、宿主細胞の翻訳後修飾能力およびポリペプチド
のアミノ酸配列の改変シグナルにより決定される。従って、グリコシル化が所望
される場合、ポリペプチドは、グリコシル化宿主（一般に、真核生物細胞）中で
発現されるべきである。昆虫細胞はしばしば、哺乳動物細胞と同じ翻訳後グリコ
シル化を行い、この理由から、昆虫細胞発現系は、グリコシル化のネイティブな
パターンを有する哺乳動物タンパク質を効果的に発現するように開発されてきた
。同様の考察が、他の改変に当てはまる。
【０１０９】 同じ型の改変が、所定のポリペプチド中のいくつかの部位において、同じ程度
または種々の程度で存在し得る。また、所定のポリペプチドは、１を超える型の
改変を含み得る。
【０１１０】 （ポリペプチドの使用） レセプターポリペプチドは、２８７１レセプタータンパク質、領域、またはフ
ラグメントに特異的な抗体の産生するのに有用である。
【０１１１】 レセプターポリペプチドはまた、細胞ベースの系または無細胞系での薬物スク
リーニングアッセイにおいて有用である。細胞ベースの系は、ネイティブな細胞
（すなわち、生検としてこのレセプタータンパク質を通常発現するかまたは細胞
培養物において増殖される細胞）（例えば、本明細書中に開示される細胞中）で
あり得る。しかし、１つの実施形態において、細胞ベースのアッセイは、このレ
セプタータンパク質を発現する組換え宿主細胞を含む。
【０１１２】 このポリペプチドは、レセプター活性を調節する化合物を同定するために使用
され得る。２８７１タンパク質ならびに適切な改変体およびフラグメントの両方
は、レセプターに結合する能力に関して候補化合物をアッセイするための高スル
ープットスクリーニングに使用され得る。これらの化合物は、レセプター活性に
対するこれらの化合物の効果を決定するために、機能レセプターに対してさらに
スクリーニングされ得る。所望の程度までレセプターを活性化（アゴニスト）ま
たは不活性化（アンタゴニスト）する化合物が、同定され得る。
【０１１３】 レセプターポリペプチドは、レセプタータンパク質と標的分子（これは、この
レセプタータンパク質と通常相互作用する）との間の相互作用を刺激または阻害
する能力に関して化合物をスクリーニングするために使用され得る。この標的は
、このレセプタータンパク質が通常相互作用する、リガンドまたはシグナル伝達
の成分（例えば、ｃＡＭＰもしくはホスファチジルイノシトール代謝回転および
／またはアデニル酸シクラーゼ、もしくはホスホリパーゼＣ活性化に関与する、
Ｇタンパク質または他の相互作用因子）であり得る。このアッセイは、レセプタ
ータンパク質もしくはフラグメントが標的分子と相互作用し、そしてこのタンパ
ク質と標的との間の複合体形成を検出するかまたはレセプタータンパク質と標的
との相互作用の生物学的な結果（例えば、Ｇタンパク質リン酸化、サイクリック
ＡＭＰもしくはホスファチジルイノシトール代謝回転、およびアデニル酸シクラ
ーゼもしくはホスホリパーゼＣ活性化のような、関連するシグナル伝達効果のう
ちのいずれか）を検出することを可能にする条件下で、レセプタータンパク質を
候補化合物と合わせる工程を包含する。
【０１１４】 候補化合物としては、例えば、以下が挙げられる：１）Ｉｇテール化融合ペプ
チド、そしてランダムペプチドライブラリー（例えば、Ｌａｍら（１９９１）Ｎ
ａｔｕｒｅ ３５４：８２〜８４；Ｈｏｕｇｈｔｅｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒ
ｅ ３５４：８４〜８６を参照のこと）、ならびにＤ−配位アミノ酸および／ま
たはＬ配位アミノ酸から作製されたコンビナトリアルケミストリー由来分子ライ
ブラリーのメンバーを含む、可溶性ペプチドなどのペプチド；２）リンペプチド
（例えば、ランダムおよび部分的に変性した、指向性ホスホペプチドライブラリ
ーのメンバー、例えば、Ｓｏｎｇｙａｎｇら（１９９３）Ｃｅｌｌ ７２：７６
７〜７７８、を参照のこと）；３）抗体（例えば、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体、ヒト化抗体、抗イディオタイプ抗体、キメラ抗体、および単鎖抗
体、ならびにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ発現ライブラリーフラグメント、
および抗体のエピトープ結合フラグメント）；ならびに４）有機低分子および無
機低分子（例えば、コンビナトリアルライブラリーおよび天然産物ライブラリー
から得た分子）。
【０１１５】 １つの候補化合物は、リガンド結合に関して競合する、可溶性全長レセプター
またはフラグメントである。他の候補化合物としては、レセプター機能に影響を
与え故にリガンドを競合する変異を含む、変異体レセプターまたは適切なフラグ
メントが挙げられる。従って、リガンドを競合する（例えば、高い親和性で）フ
ラグメントまたはリガンドに結合するが放出を可能にしないフラグメントが、本
発明に含まれる。
【０１１６】 本発明は、レセプター活性を調節（刺激または阻害）する化合物を同定するた
めの他の終点（エンドポイント）を提供する。このアッセイは代表的に、レセプ
ター活性を示すシグナル伝達経路における事象のアッセイを包含する。従って、
レセプタータンパク質依存性シグナルカスケードに応答してアップレギュレート
またはダウンレギュレートされる遺伝子の発現がアッセイされ得る。１つの実施
形態において、このような遺伝子の調節領域は、容易に検出可能なマーカー（例
えば、ルシフェラーゼ）に、作動可能に連結され得る。あるいは、レセプタータ
ンパク質のリン酸化またはレセプタータンパク質標的がまた、測定され得る。
【０１１７】 結合化合物および／または活性化化合物はまた、細胞外ドメイン、膜貫通ドメ
インまたは小領域、および細胞内ドメインが、非相同性ドメインによって置換さ
れ得るキメラレセプタータンパク質によってスクリーニングされ得る。例えば、
異なるＧタンパク質と相互作用し、次いで、ネイティブのレセプターによって認
識されるＧタンパク質共役領域が使用され得る。従って、シグナル変換成分の異
なるセットは、活性化についての終点アッセイとして利用可能である。あるいは
、膜貫通部分は、細胞外ドメインおよび／またはＧタンパク質共役領域が誘導さ
れる宿主細胞とは異なる宿主細胞に対して特異的な膜貫通部分と弛緩され得る。
これによって、アッセイは、レセプターが誘導される特定の宿主細胞以外で行わ
れ得る。あるいは、細胞外ドメインは、異なるリガンドに結合するドメインによ
って置換され得、従って、非相同細胞外ドメインと相互作用し、さらにシグナル
伝達を引き起こす試験化合物についてのアッセイを可能にする。最後に、活性化
は、ネイティブのシグナル伝達経路の一部である転写調節配列に作動可能に連結
された容易に検出可能なコード領域を含むレポーター遺伝子によって検出され得
る。
【０１１８】 レセプターポリペプチドはまた、レセプターと相互作用する化合物を発見する
ために設計された方法における競合結合アッセイにおいて有用である。従って、
化合物は、この化合物がこのポリペプチドに結合するかまたはそうでなければこ
のポリペプチドと相互作用する条件下で、レセプターポリペプチドに暴露される
。可溶性レセプターポリペプチドはまた、混合物に添加される。試験化合物が、
この可溶性レセプターポリペプチドと相互作用する場合、これは形成された複合
体の料またはレセプター標的からの活性を減少する。このタイプのアッセイは、
レセプターの特定の領域と相互作用レセプターを探求する場合に特に有用である
。従って、標的レセプター領域と競合する可溶性ポリペプチドは、目的の領域に
対応するペプチド配列を含むように設計される。
【０１１９】 無細胞薬物スクリーニングアッセイを行なうために、タンパク質の一方または
両方の非複合体化形態由来の複合体の分離を容易にするために、レセプタータン
パク質、もしくはフラグメント、またはその標的分子のいずれかを固定すること
およびアッセイの自動化に適応することが所望である。
【０１２０】 マトリックス上のタンパク質を固定するための技術は、薬物スクリーニングア
ッセイにおいて使用され得る。１つの実施形態において、タンパク質がマトリッ
クスに結合されるのを可能にするドメインを加える融合タンパク質が提供され得
る。例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ／レセプタータンパク質融
合タンパク質は、グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）またはグルタチオン誘導体化マイクロタイター
プレート（これらは次いで、細胞溶解物（例えば、３５Ｓ標識された）および候
補化合物と組み合わせられる）および複合体形成を助長する条件下で（例えば、
塩およびｐＨについての生理学的条件で）インキュベートされた混合物に吸着さ
れ得る。インキュベーション後、このビーズを洗浄して未結合標識を除去し、マ
トリックスを固定し、そして放射性標識を直接決定したか、または複合体が解離
した後に上清中で行なう。あるいは、これらの複合体はマトリックスから解離さ
れ得、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離され得、そして標準的な電気泳動技術を使
用してゲルから定量されたビーズ画分中で、レセプタータンパク質結合タンパク
質のレベルが検出され得る。ポリペプチドまたはその標的分子のいずれかは、例
えば、当該分野で周知の技術を使用して、ビオチンおよびストレプトアビジンの
結合体を利用して固定され得る。あるいは、タンパク質と反応性であるが、タン
パク質のその標的分子への結合に干渉しない抗体が、プレートのウェルに誘導体
化され得、そして、タンパク質は、抗体結合体によってウェル中で補足される。
レセプタータンパク質結合標的成分（例えば、ペプチドまたは亜鉛成分）および
候補化合物の調製物は、レセプタータンパク質提示ウェル中でインキュベートさ
れ、そして、ウェル中で補足された複合体の量が定量され得る。ＧＳＴ固定複合
体について上記に記載された方法に加えて、このような複合体を検出するための
方法としては、レセプタータンパク質標的分子と反応するか、またはレセプター
タンパク質と反応性であり標的分子と競合する抗体を使用する複合体の免疫検出
；および標的分子に関連した酵素活性を検出することに依存する酵素結合アッセ
イが挙げられる。
【０１２１】 これらの薬物スクリーニングアッセイにより同定されるレセプタータンパク質
活性のモジュレーターを使用して、レセプター経路により媒介される障害（例え
ば、本明細書中で開示される障害、特に、好中球減少症、貧血および血小板減少
症）を有する被験体を処置し得る。これらの処置方法は、本明細書に記載された
薬学的組成物中のタンパク質活性のモジュレーターを、このような処置を必要と
する被験体に投与する工程を包含する。
【０１２２】 レセプターポリペプチドはまた、疾患を診断するための標識、またはレセプタ
ータンパク質によって媒介される疾患に対する素因を提供するために有用であり
、この疾患としては、本明細書中に記載される疾患、特に、好中球減少症、貧血
および血小板減少症が挙げられるが、これらに限定されない。従って、細胞、ま
たは組織または期間におけるレセプタータンパク質の存在またはレベルを検出す
るための方法が提供される。この方法は、相互作用が検出されるように、レセプ
タータンパク質と相互作用し得る化合物と生物学的サンプルを接触させる工程を
包含する。
【０１２３】 レセプターポリペプチドを検出するための１つの薬剤は、レセプタータンパク
質に選択的に結合し得る抗体である。生物学的サンプルは、被験体から単離され
た組織、細胞および生物学的流体、ならびに被験体に存在する組織、細胞および
流体を含む。
【０１２４】 レセプタータンパク質はまた、種々のレセプタータンパク質を有する患者にお
いて、活性疾患、または疾患に対する素因を診断するための標的を提供する。従
って、レセプタータンパク質は、生物学的サンプルから単離され得、そして異常
なタンパク質を生じる遺伝的変異の存在についてアッセイされ得る。これは、ア
ミノ酸置換、欠失、挿入、再配置（異常なスプライシング事象の結果として）、
および不適切な翻訳後改変を含む。分析方法は、変更された電気泳動易動度、変
更されたトリプシンペプチド消化、細胞ベースのアッセイまたは細胞のないアッ
セイにおける変更されたレセプタータンパク質活性、ペプチド結合または分解に
おける変更、亜鉛結合または抗体結合パターン、変更された等電点、直接的なア
ミノ酸配列決定、および一般にタンパク質または特にレセプタータンパク質の変
異を検出するために有用な公知のアッセイの技術の任意の他のものを含む。
【０１２５】 レセプタータンパク質の検出のインビトロ技術は、酵素結合イムノソルベント
検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光を含む。
あるいは、このタンパク質は、被験体に標識された抗レセプタータンパク質抗体
を導入することによって、被験体において、インビボで検出され得る。例えば、
この抗体は、放射活性マーカーを用いて標識され得、被験体におけるその存在お
よび位置が、標準的な画像化技術によって検出され得る。被験体において発現さ
れる対立遺伝子改変体を検出する方法、およびサンプルにおいてレセプタータン
パク質のフラグメントを検出する方法が特に有用である。
【０１２６】 レセプターポリペプチドはまた、薬理ゲノム学（ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍ
ｉｃ）分析において、有用である。従って、リガンドベースの処置において、多
型は、リガンド結合においてより大きいかまたは小さい活性であり、レセプター
活性である細胞外ドメインを生じる。従って、リガンド投薬量は、この多型を含
む所定の集団内で治療効果を最大にするように、必要に応じて改変され得る。遺
伝子型決定の代替として、特定の多型ポリペプチドが、同定され得る。
【０１２７】 レセプターポリペプチドはまた、臨床試験および他の処置の間の治療的効果を
モニターするために有用である。従って、遺伝子発現、タンパク質レベルまたは
レセプター活性を増加または減少するように設計された薬剤の治療的有効性は、
終点標的としてレセプターポリペプチドを使用して、処置の経過にわたってモニ
ターされ得る。
【０１２８】 レセプターポリペプチドはまた、レセプター関連障害（例えば、本明細書痛に
開示される障害）を処置するために有用である。従って、処置方法は、可溶性レ
セプターまたはリガンド結合と競合するレセプタータンパク質のフラグメントの
使用を包含する。これらのレセプターまたはフラグメントは、有効な競合を提供
するようにリガンドに対して高度な親和性を有し得る。
【０１２９】 （抗体） 本発明はまた、２８７１レセプタータンパク質およびその改変体およびフラグ
メントに選択的に結合する抗体を提供する。抗体は、それがレセプタータンパク
質と実質的に相同ではない他のタンパク質に結合するとしても、選択的に結合す
ると考えられる。これらの他のタンパク質は、レセプタータンパク質のフラグメ
ントまたはドメインとの相同性を共有する。特定の領域におけるこの保存は、相
同配列のために両方のタンパク質に結合する抗体を生じる。この場合、レセプタ
ータンパク質に結合する抗体がなおも選択的であることが理解される。
【０１３０】 抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得る。インタク
トな抗体、またはそのフラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａｂ’））が使
用され得る。
【０１３１】 検出可能な物質に抗体を結合すること（すなわち、物理的結合）により、検出
は容易になり得る。検出可能な物質の例としては、種々の酵素、補欠分子団、蛍
光物質、発光物質、生物発光物質、および放射活性物質が挙げられる。適切な酵
素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−
ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；適切な補欠
分子団の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチン
が挙げられ；適切な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン
、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニラミン
（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）、フルオレセイン、ダンシ
ルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられ；発光物質の例としては、ルミノ
ールが挙げられ；生物発光物質としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、およ
びエクオリンが挙げられ、そして適切な放射活性物質の例としては、１２５Ｉ、 １３１ Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。
【０１３２】 抗体を産生するために、単離されたレセプターポリペプチドを、ポリクローナ
ル抗体およびモノクローナル抗体の調製のための標準的な技術を使用して、抗体
を産生するための免疫源として使用する。全長タンパク質または抗原性ペプチド
フラグメントが使用され得る。抗原性フラグメントは、典型的に、少なくとも１
２の連続したアミノ酸残基を含む。しかし、この抗原性ペプチドは、巣ＵＫ無く
とも１４のアミノ酸残基、少なくとも１５のアミノ酸残基、少なくとも２０のア
ミノ酸残基、または少なくとも３０のアミノ酸残基を含み得る。一実施形態にお
いて、フラグメントは、タンパク質の表面（例えば、親水性領域）に負荷された
領域に対応する。
【０１３３】 適切な免疫原性調製物は、ネイティブな、組換え的に発現された、または化学
的に合成されたペプチド由来であり得る。
【０１３４】 （抗体の使用） 抗体を使用して、標準的な技術（例えば、アフィニティークロマトグラフィー
または免疫沈降）によって、レセプタータンパク質を単離し得る。抗体は、細胞
からの天然のレセプタータンパク質の精製、および宿主細胞内で発現された組換
え産生されたレセプタータンパク質の精製を促進し得る。
【０１３５】 抗体は、細胞内または組織内でのレセプタータンパク質の存在を検出して、器
官内での、そして正常な発生の時間経過にわたる、種々の組織内でのレセプター
タンパク質の発現のパターンを決定することにおいて有用である。
【０１３６】 レセプタータンパク質の豊富さ、および発現パターンを評価するために、抗体
を使用して、インサイチュで、インビトロで、または細胞溶解物内で、もしくは
上清内でレセプタータンパク質を検出し得る。
【０１３７】 抗体を使用して、異常な組織分布または発生の間の異常な発現を評価し得る。
【０１３８】 全長レセプタータンパク質の循環しているフラグメントの抗体検出を行って、
レセプターの代謝回転を同定し得る。
【０１３９】 さらに、抗体を使用して、疾患状態（例えば、疾患の活性化状態）におけるレ
セプタータンパク質の発現、またはレセプタータンパク質機能に関連した疾患に
向かう素因を有する患者におけるレセプタータンパク質の発現を評価し得る。障
害が、不適切な組織分布、発生における不適切な発現、またはレセプタータンパ
ク質タンパク質の不適切な発現レベルによって生じる場合、抗体を正常なレセプ
タータンパク質タンパク質に対して調製し得る。障害が、レセプタータンパク質
における特定の変異によって特徴付けられる場合、その変異タンパク質に対して
特異的な抗体を使用して、特定の変異レセプタータンパク質の存在についてアッ
セイし得る。
【０１４０】 この抗体を使用して、器官における種々の組織内での、細胞の正常な細胞内局
在および異常な細胞内局在もまた、評価し得る。抗体をレセプタータンパク質全
体またはレセプタータンパク質の部分（例えば、細胞外ドメインの部分）に対し
て惹起し得る。
【０１４１】 診断的使用を、遺伝子試験のみにおいてではなく、処置の様式をモニターする
ためにもまた適用し得る。従って、処置が、レセプタータンパク質の発現レベル
、あるいは異常なレセプタータンパク質の存在および異常な組織分布もしくは発
生での発現を矯正することを最終的な目的とする場合、レセプタータンパク質ま
たは関連するフラグメントに対して指向する抗体を使用して、治療効果をモニタ
ーし得る。
【０１４２】 さらに、抗体は、薬理学的分析において有用である。従って、多型性のレセプ
タータンパク質に対して調製された抗体を使用して、改変された処置様式を必要
とする個体を同定し得る。
【０１４３】 抗体はまた、電気泳動移動度、等電点、トリプシンペプチド消化、および他の
公知の物理学的アッセイによって分析された異常なレセプタータンパク質につい
ての免疫学的マーカーとしての診断ツールとしてもまた、有用である。
【０１４４】 抗体はまた、組織のタイピングのためにも有用である。従って、特定のレセプ
タータンパク質が、特定の組織における発現と関連する場合、そのレセプタータ
ンパク質に対して特異的な抗体を使用して、組織型を同定し得る。
【０１４５】 抗体はまた、法医学的同定においても有用である。従って、個体が、特定の多
型タンパク質を生じる特定の遺伝子多型と関連付けられる場合、その多型タンパ
ク質に対して特異的な抗体を、同定のための補助として使用し得る。
【０１４６】 抗体はまた、レセプター機能を阻害するため（例えば、リガンド結合を遮断す
るため）に有用である。
【０１４７】 これらの使用はまた、処置がレセプター機能を阻害する工程を包含する治療的
内容で適用され得る。抗体は、例えば、リガンド結合を遮断するために使用され
得る。抗体は、機能に必要とされる部位を含む特定のフラグメントに対して、ま
たは細胞と関連するインタクトなレセプターに対して調製され得る。本発明はま
た、生物学的サンプル中のレセプタータンパク質の存在を検出するために抗体を
使用するためのキットを含む。キットは、標識された抗体または標識可能な抗体
のような抗体および生物学的サンプル中のレセプタータンパク質を検出するため
の化合物または薬剤；サンプル中のレセプタータンパク質の量を検出するための
手段；ならびにサンプル中のレセプタータンパク質の量を標準と比較するための
手段を含み得る。この化合物または薬剤は、適切な容器にパッケージされ得る。
キットはさらに、レセプタータンパク質を検出するためのキットを使用するため
の指示書を備え得る。
【０１４８】 （ポリヌクレオチド） 配列番号２のヌクレオチド配列を、寄託されたヒトｃＤＮＡを配列決定するこ
とによって得た。従って、寄託されたクローンの配列は、２つの間のいかなる矛
盾をも支配し、そして配列番号２の配列に対するいかなる参照も、寄託されたｃ
ＤＮＡの配列の参照を含む。
【０１４９】 具体的に開示されたｃＤＮＡは、コード領域、５’および３’の非翻訳配列（
配列番号２）を含む。１つの実施形態において、レセプター核酸は、コード領域
のみを含む。
【０１５０】 ヒト２８７１レセプターｃＤＮＡは、約１４８９のヌクレオチドの長さであり
、約３５９のアミノ酸残基の長さである全長タンパク質をコードする。核酸は、
限定しないが、図５〜７に示されるような、本明細書中、上に開示されるものを
含む細胞および組織において発現される。配列番号１のアミノ酸配列の構造的分
析は、図３のヒドロパシープロットで提供される。図は、７回膜貫通ドメイン、
細胞外ドメインおよび細胞内ドメインの推定構造を示す。本明細書中で使用され
る場合、用語「膜貫通ドメイン」とは、原形質膜にわたる疎水性ヘリックスを含
む構造的アミノ酸モチーフをいう。
【０１５１】 本発明は、２８７１レセプタータンパク質をコードする単離されたポリヌクレ
オチドを提供する。用語「２８７１ポリヌクレオチドペプチド」または「２８７
１核酸」とは、配列番号２に示される配列または寄託されたｃＤＮＡに示される
配列をいう。用語「レセプターポリヌクレオチド」または「レセプター核酸」は
さらに、２８７１ポリヌクレオチドの改変体およびフラグメントを含む。
【０１５２】 「単離された」レセプター核酸は、レセプター核酸の天然の供給源中に存在す
る他の核酸から分離された核酸である。好ましくは、「単離された」核酸は、そ
の核酸が由来する生物のゲノムＤＮＡ中で、天然において隣接する配列（すなわ
ち、核酸の５’および３’末端に存在する配列）を含まない。しかし、例えば、
約５ＫＢまでのいくつかの隣接するヌクレオチド配列が存在し得る。重要な点は
、この核酸が隣接するは配列から単離され、その結果、本明細書において記載さ
れる特定の操作（例えば、組換え発現、プローブおよびプライマーの調製、なら
びにレセプター核酸配列に特異的な他の使用）に供され得るということである。
【０１５３】 さらに、「単離された」核酸分子（例えば、ｃＤＮＡ分子）は、他の細胞内物
質も、組換え技術によって産生される場合他の培地も、化学的に合成される場合
他の化学前駆体も化学物質も実質的に含まない状態であり得る。しかし、核酸分
子を、他のコード配列または調節配列と融合してもなお、単離されたと考えられ
得る。
【０１５４】 例えば、ベクター中に含まれる組換えＤＮＡ分子は、単離されたと考えられる
。単離されたＤＮＡ分子のさらなる例としては、異種宿主細胞内に維持された組
換えＤＮＡ分子または溶液中の（部分的または実質的に）精製されたＤＮＡ分子
が挙げられる。単離されたＲＮＡ分子としては、本発明の単離されたＤＮＡ分子
のインビボまたはインビトロのＲＮＡ転写物が挙げられる。本発明に従う単離さ
れた核酸分子はさらに、合成的に生成されたような分子を含む。
【０１５５】 レセプターポリヌクレオチドは、成熟タンパク質にさらなるアミノ末端アミノ
酸またはカルボキシル末端アミノ酸を付加したタンパク質、あるいは成熟ポリペ
プチドの内部のアミノ酸（例えば、成熟形態が、１つより多いポリヌクレオチド
鎖を有する場合）を付加したタンパク質をコードし得る。そのような配列は、と
りわけ、前駆体から成熟形態へのタンパク質のプロセシングにおいて役割を担い
得、タンパク質の輸送を促進し得、タンパク質の半減期を延長し得るかまたは短
縮し得、あるいはアッセイのため、または産生のためにタンパク質の操作を容易
にし得る。インサイチュの場合は一般的に、さらなるアミノ酸は細胞性酵素によ
ってプロセスされて成熟タンパク質から取り除かれ得る。
【０１５６】 レセプターポリヌクレオチドとしては、成熟ポリペプチドのみ、成熟ポリペプ
チドおよびさらなるコード配列（例えば、リーダー配列または分泌配列（例えば
、プレ−プロ配列もしくはプロ−タンパク質配列））をコードする配列、非コー
ド配列（例えば、イントロンおよび非コーディング５’および３’配列（例えば
、転写されるが翻訳されずに、転写、ｍＲＮＡプロセシング（スプライシングシ
グナルおよびポリアデニル化シグナルを含む）、リボゾーム結合およびｍＲＮＡ
の安定化に役割を担う配列））を有する成熟ポリペプチドをコードする配列（さ
らなるコード配列を有する、もしくは有さない）が挙げられるがこれらに限定さ
れない。さらに、ポリヌクレオチドは、例えば、精製を促進するペプチドをコー
ドするマーカー配列と融合され得る。
【０１５７】 レセプターポリヌクレオチドは、クローニングによって得られたか、または化
学合成技術によって産生されたか、またはその組換えによって産生された、ＲＮ
Ａの形態（例えば、ｍＲＮＡ）またはＤＮＡの形態（ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮ
Ａを含む）であり得る。核酸（特にＤＮＡ）は、二本鎖であっても、一本鎖であ
ってもよい。一本鎖核酸は、コード鎖（センス鎖）であっても非コード鎖（アン
チセンス鎖）であってもよい。
【０１５８】 １つのレセプター核酸は、配列番号２に示すヌクレオチド配列（ヒト前立腺ｃ
ＤＮＡに対応する）を含む。
【０１５９】 本発明はさらに、遺伝子コードの縮重に起因して配列番号２に示されるヌクレ
オチド配列とは異なり、そのため配列番号２に示されるヌクレオチド配列によっ
てコードされるタンパク質と同一のタンパク質をコードする、改変体レセプター
ポリヌクレオチド、そのフラグメントを提供する。
【０１６０】 本発明はまた、本発明に記載される改変体ポリペプチドをコードするレセプタ
ー核酸分子を提供する。そのようなポリヌクレオチドは、天然に生じ得る（例え
ば、対立遺伝子改変体（同一の遺伝子座）、ホモログ（異なる遺伝子座）および
オルソログ（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）（異なる生物））か、または組換えＤＮＡ法も
しくは化学合成によって構築され得る。そのような非天然に生じる改変体は、変
異誘発技術（ポリヌクレオチド、細胞または生物に適用される技術を含む）によ
ってなされ得る。従って、上記に考察したように、改変体は、ヌクレオチドの置
換、欠失、逆位、および挿入を含み得る。
【０１６１】 変異は、コード領域および非コード領域のいずれかまたは両方に生じ得る。変
異は、保存的アミノ酸置換および非保存的アミノ酸置換の両方を生じ得る。
【０１６２】 オルソログ、ホモログ、および対立遺伝子改変体は、当該分野において周知の
方法を使用して同定され得る。これらの改変体は、配列番号２またはこの配列の
フラグメントに示されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも約５５％、代表
的には少なくとも約７０〜７５％、より代表的には、少なくとも約８０〜８５％
、そして最も代表的には少なくとも約９０〜９５％、あるいはそれよりも相同で
ある、レセプターをコードするヌクレオチド配列を含む。そのような核酸分子は
、ストリンジェントな条件下で、配列番号２に示すヌクレオチド配列またはその
フラグメントに対してハイブリダイズし得るとして容易に同定され得る。ストリ
ンジェントなハイブリダイゼーションが一般的な相同性（例えば、ポリＡ配列、
あるいは全てまたはほとんどの、タンパク質、全てのＧＰＣＲまたは全てのファ
ミリーＩ ＧＰＣＲに共通な配列）に起因する場合、ストリンジェントなハイブ
リダイゼーションは、実質的相同性を示さないことが理解される。
【０１６３】 本明細書中で使用される場合、用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズする」は、その下で、互いに少なくとも５５％相同のレセプターをコードす
るヌクレオチド配列が、代表的には互いにハイブリダイズされたままである、ハ
イブリダイゼーションおよび洗浄についての条件を記載することを意図する。こ
の条件では、互いに、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約
７５％以上相同な配列が互いにハイブリダイズしたままであるような条件であり
得る。このようなストリンジェントな条件は、当業者に公知であり、そしてＣｕ
ｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ
，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９）、６．３．１−
６．３．６（参照として援用される）に見出され得る。ストリンジェントなハイ
ブリダイゼーション条件の１例は、約４５℃で６×塩化ナトリウム／クエン酸ナ
トリウム（ＳＳＣ）中で、その後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５０〜
６５℃での１回以上の洗浄である。１つの実施形態において、配列番号２の配列
にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、単離された核酸分子は、天
然に存在する核酸分子に対応する。本明細書中で使用される場合、「天然に存在
する」核酸分子とは、天然に存在する（例えば、天然のタンパク質をコードする
）ヌクレオチド配列を有する、ＲＮＡまたはＤＮＡ分子をいう。
【０１６４】 さらに、本発明は、全長のレセプターポリヌクレオチドのフラグメントを含む
ポリヌクレオチドを提供する。このフラグメントは、一本鎖でもまたは二本鎖で
もよく、そしてＤＮＡまたはＲＮＡを含み得る。このフラグメントは、コード配
列または非コード配列のいずれかから誘導され得る。
【０１６５】 １つの実施形態において、単離されたレセプター核酸は、少なくとも３６ヌク
レオチドの長さであり、そして配列番号２のヌクレオチド配列を含む核酸分子に
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする。他の実施形態において、核酸
は、少なくとも４０、５０、１００、２５０または５００ヌクレオチドの長さで
ある。
【０１６６】 しかし、レセプターフラグメントは、遺伝子全体を含まない任意の核酸配列を
含むことが理解される。
【０１６７】 レセプター核酸フラグメントとしては、アミノ酸残基１〜４２を含む細胞外ド
メイン、膜貫通ドメインを含むポリペプチド（アミノ酸残基約４３〜約３１８）
、細胞内ドメインを含むポリペプチド（アミノ酸残基約３１８〜約３５９）、お
よびＧタンパク質レセプターサイン（ＤＲＹまたは周囲のアミノ酸残基約１２７
〜約１４３）を含むポリペプチドをコードする核酸分子を含む。ドメインの位置
はコンピュータ分析によって予想された場合、当業者は、これらの領域を構成す
るアミノ酸残基が、この領域を規定するために用いた基準に依存して変化し得る
ことを認識する。
【０１６８】 本発明はまた、本明細書に記載されるレセプタータンパク質のエピトープ保有
領域をコードする、レセプター核酸フラグメントを提供する。
【０１６９】 単離されたレセプターポリヌクレオチド配列、および特にフラグメントは、Ｄ
ＮＡプローブおよびプライマーとして有用である。
【０１７０】 例えば、レセプター遺伝子のコード領域は、オリゴヌクレオチドプローブを合
成するための公知のヌクレオチド配列を使用して単離され得る。次いで、標識さ
れたプローブは、ｃＤＮＡライブラリー、ゲノムＤＮＡライブラリー、またはｍ
ＲＮＡをスクリーニングするために使用されて、コード領域に対応する核酸を単
離し得る。さらに、プライマーは、レセプター遺伝子の特定の領域をクローン化
するためにＰＣＲ反応において使用され得る。
【０１７１】 プローブ／プライマーは、実質的に純粋なオリゴヌクレオチドを含む。このオ
リゴヌクレオチドは、代表的に、ストリンジェントな条件下で、配列番号２セン
ス鎖またはアンチセンス鎖あるいは他のレセプターポリヌクレオチドの少なくと
も約１２、代表的には約２５、より代表的には約４０、５０または７５の連続し
たヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド配列の領域を含む。プローブ
はさらに、標識（例えば、放射性同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素補因子
）を含む。
【０１７２】 （ポリヌクレオチドの使用） レセプターポリヌクレオチドは、全長ｃＤＮＡおよび配列番号１に記載される
ポリヌクレオチドをコードするゲノムクローンを単離するために、そして配列番
号１に示される同じポリペプチドを産生する改変体または本明細書中に記載され
る他の改変体に対応するゲノムクローンを単離するためにｃＤＮＡおよびゲノム
ＤＮＡに対するハイブリダイゼーションプローブとして有用である。改変体は、
配列番号１に示されるポリペプチドが単離された同じ組織および生物から単離さ
れ得るか、同じ生物の異なる組織から単離され得るか、または異なる生物から単
離され得る。この方法は、発生的に制御され、従って、生物の発生において異な
る時点で同じ組織で発現される遺伝子およびｃＤＮＡを単離するために有用であ
る。
【０１７３】 このプローブは、レセプターをコードする遺伝子の全長にそった任意の配列に
対応し得る。従って、このプローブは、５’非コード領域、コード領域、および
３’コード領域に由来し得る。
【０１７４】 この核酸プローブは、例えば、配列番号１の全長ｃＤＮＡ、またはそのフラグ
メント（例えば、少なくとも１２、１５、３０、５０、１００、２５０、または
５００ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチド）であり得、そしてｍＲＮＡまたは
ＤＮＡに対してストリンジェントな条件下で特異的にハイブリダイズするのに十
分であり得る。
【０１７５】 本明細書に記載されるポリヌクレオチドのフラグメントはまた、本明細書に記
載される、より大きいフラグメントまたは全長ポリヌクレオチドを合成するのに
有用である。例えば、フラグメントは、ｍＲＮＡの任意の部分にハイブリダイズ
し得、そしてより大きいまたは全長のｃＤＮＡが生成され得る。
【０１７６】 このフラグメントはまた、所望の長さおよび配列のアンチセンス分子を合成す
るために有用である。
【０１７７】 レセプターポリヌクレオチドはまた、レセプターポリヌクレオチドの任意の所
定の領域を増幅するためのＰＣＲのプライマーとして有用である。
【０１７８】 レセプターポリヌクレオチドはまた、組換えベクターを構築するために有用で
ある。このようなベクターとしては、レセプターポリペプチドの一部、または全
てを発現する、発現ベクターが挙げられる。ベクターとしてはまた、レセプター
遺伝子および遺伝子産物のインサイチュ発現を変更するための挿入ベクター（別
のポリヌクレオチド配列（例えば、細胞ゲノム）に組み込むために用いる）が挙
げられる。例えば、内因性レセプターコード配列は、１つ以上の特異的に導入さ
れた変異を含むコード領域全体または一部と、相同組換えによって置換され得る
。
【０１７９】 このレセプターポリヌクレオチドはまた、インサイチュハイブリダイゼーショ
ン法によって、レセプターポリヌクレオチドの染色体位置を確認するためのプロ
ーブとして有用である。
【０１８０】 レセプターポリヌクレオチドプローブはまた、レセプターをコードする遺伝子
および組織分布に関するそれらの改変体の存在のパターン（例えば、遺伝子複製
が、生じるか否か、およびその複製が組織の全てでまたはサブセットでのみ生じ
るか否か）を決定するために有用である。この遺伝子は、天然に存在するかまた
は、外因性に、細胞、組織、または生物体に導入されていてもよい。このレセプ
ターポリヌクレオチドはまた、本明細書に記載されるポリヌクレオチドをコード
する遺伝子から生成されたｍＲＮＡの全てまたは一部に対応するリボザイムを設
計するために有用である。
【０１８１】 レセプターポリヌクレオチドはまた、レセプターポリヌクレオチドおよびポリ
ペプチドの一部または全てを発現する宿主細胞を構築するために有用である。
【０１８２】 レセプターポリヌクレオチドはまた、レセプターポリヌクレオチドおよびポリ
ペプチドの全てまたは一部を発現するトランスジェニック動物を構築するために
有用である。
【０１８３】 レセプターポリヌクレオチドはまた、レセプターポリペプチドの一部または全
てを発現するベクターを作成するために有用である。
【０１８４】 レセプターポリヌクレオチドはまた、レセプター核酸発現のレベルを決定する
ためのハイブリダイゼーションプローブとして有用である。従って、このプロー
ブは、細胞、組織および生物体におけるレセプター核酸の存在を検出するため、
またはレベルを検出するために有用であり得る。レベルが決定される核酸は、Ｄ
ＮＡであってもＲＮＡであってもよい。従って、本明細書に記載されるポリペプ
チドに対応するプローブは、所定の細胞、組織、または生物体における遺伝子コ
ピー数を評価するために用いられ得る。これは、レセプター遺伝子の増幅が存在
する場合に特に関連する。
【０１８５】 あるいは、このプローブは、例えば、染色体外エレメント上の場合、または染
色体へ組み込まれた場合（ここにはレセプター遺伝子は正常では見いだされない
）、均一に染色する領域として、レセプター遺伝子の余分なコピーの位置を評価
するため、インサイチュハイブリダイゼーションの状況で用いられ得る。
【０１８６】 これらの用途は、正常に対するレセプター発現の増大または減少に関連する障
害の診断に関する。
【０１８７】 ｍＲＮＡの検出のためのインビトロ技術としては、ノーザンハイブリダイゼー
ションおよびインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。ＤＮＡ検出の
ためのインビトロ技術としては、サザンハイブリダイゼーションおよびインサイ
チュハイブリダイゼーションが挙げられる。
【０１８８】 プローブは、例えば、被験体由来の細胞のサンプルにおけるレセプターコード
核酸（例えば、ｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡ）のレベルを測定することによって
、レセプターを発現する細胞または組織を同定するか、またはレセプター遺伝子
が変異しているか否かを決定するための、診断用試験キットの一部として用いら
れ得る。
【０１８９】 核酸発現アッセイは、レセプター核酸発現を調節する化合物を同定するための
薬物スクリーニングに有用である。
【０１９０】 従って、本発明は、レセプター遺伝子の核酸発現と関連する障害を処置するた
めに用いられ得る化合物を同定するための方法を提供する。この方法は、代表的
には、この化合物がレセプター核酸の発現を調節する能力をアッセイし、従って
、所望でないレセプター核酸発現により特徴付けられる障害を処置するために用
いられ得る化合物を同定する工程を包含する。
【０１９１】 このアッセイは、細胞ベースの系または無細胞系において行われ得る。細胞ベ
ースのアッセイは、レセプター核酸を天然に発現する細胞または特定の核酸配列
を発現するように遺伝子操作された組換え細胞を含む。
【０１９２】 あるいは、候補化合物は、患者またはトランスジェニック動物においてインビ
ボでアッセイされ得る。
【０１９３】 レセプター核酸発現のためのアッセイは、核酸レベル（例えば、ｍＲＮＡレベ
ル）または付随化合物（例えば、ペプチド加水分解物）の直接アッセイを含み得
る。さらに、レセプター活性に応答してアップレギュレートまたはダウンレギュ
レートされる遺伝子の発現もまたアッセイされ得る。この実施形態において、こ
れらの遺伝子の調節領域は、レポーター遺伝子（例えば、ルシフェラーゼ）に作
動可能に連結され得る。従って、レセプター遺伝子発現のモジュレーターは、細
胞を候補化合物と接触させ、そしてｍＲＮＡの発現を決定する方法において同定
され得る。候補化合物の存在下でのレセプターｍＲＮＡの発現のレベルは、候補
化合物の非存在下でのレセプターｍＲＮＡの発現のレベルと比較され得る。次い
で、この候補化合物は、この比較に基づいて、核酸発現のモジュレーターとして
同定され得、そして例えば、異常な核酸発現により特徴付けられる障害を処置す
るために用いられ得る。ｍＲＮＡの発現が、候補化合物の非存在下より、その存
在下において統計学的に有意により大きい場合、この候補化合物は核酸発現の刺
激因子として同定される。核酸発現が、候補化合物の非存在下より、その存在下
において統計学的に有意により小さい場合、この候補化合物は核酸発現のインヒ
ビターとして同定される。
【０１９４】 従って、本発明は、レセプター核酸発現を調節する遺伝子モジュレーターとし
ての薬物スクリーニングを介して同定された化合物を用いて、核酸を標的とした
処置の方法を提供する。調節は、核酸活性に対するアップレギュレーション（す
なわち、活性化もしくはアゴナイズ（ａｇｏｎｉｚａｔｉｏｎ））またはダウン
レギュレーション（抑制もしくはアンタゴナイズ）または核酸発現の両方を含む
。
【０１９５】 あるいは、レセプター核酸発現のモジュレーターは、薬物または低分子がレセ
プター核酸発現を阻害する限り、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイを
用いて同定される低分子または薬剤であり得る。
【０１９６】 レセプターポリヌクレオチドはまた、治験または処置レジメンにおいてレセプ
ター遺伝子の発現または活性に対する調節化合物の有効性をモニターするために
有用である。従って、この遺伝子発現パターンは、化合物、特に患者に耐性を発
生させる化合物での処置の連続する有効性についてのバロメーターとして働き得
る。この遺伝子発現パターンはまた、化合物に対する罹患した細胞の病理学的応
答を示すマーカーとして働き得る。従って、このようなモニタリングは、化合物
の投与または患者が耐性にならない代替的化合物の投与のいずれかを増やすこと
を可能にする。同様に、核酸発現のレベルが所望のレベル未満に落ちた場合、化
合物の投与は比例して減少され得る。
【０１９７】 レセプターポリヌクレオチドはまた、レセプター核酸における定性的変化、特
に病状を導く定性的変化についての診断アッセイにおいて有用である。このポリ
ヌクレオチドは、レセプター遺伝子および遺伝子発現産物（例えば、ｍＲＮＡ）
における変異を検出するために用いられ得る。このポリヌクレオチドは、レセプ
ター遺伝子において天然に存在する遺伝子変異を検出するためのハイブリダイゼ
ーションプローブとして用いられ得、それにより、この変異を有する被験体が変
異により引き起こされる障害の危険性があるか否かを決定し得る。変異としては
、遺伝子における１以上のヌクレオチドの欠失、付加、または置換、染色体再配
置（例えば、逆位もしくは転移）、ゲノムＤＮＡの修飾（例えば、異常なメチル
化パターン）または遺伝子コピー数の変化（例えば、増幅）が挙げられる。機能
不全と関連するレセプター遺伝子の変異形態の検出は、疾患が、レセプターの過
剰発現、過小発現または変化した発現から生じる場合に、活動性疾患または疾患
に対する感受性についての診断ツールを提供する。
【０１９８】 レセプター遺伝子における変異を有する個体は、種々の技術により核酸レベル
で検出され得る。ゲノムＤＮＡは、直接分析され得るか、または分析前にＰＣＲ
を用いて増幅され得る。ＲＮＡまたはｃＤＮＡは、同様に用いられ得る。
【０１９９】 特定の実施形態において、変異の検出は、アンカーＰＣＲまたはＲＡＣＥ Ｐ
ＣＲのようなポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）（例えば、米国特許第４，６８３
，１９５号および同第４，６８３，２０２号を参照のこと）において、あるいは
連結鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌａｎｄｅｇｒａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２４１：１０７７−１０８０；およびＮａｋａｚａｗａら（１９９４）Ｐ
ＮＡＳ ９１：３６０−３６４を参照のこと）においてプローブ／プライマーの
使用を含む。このうち後者は、遺伝子における点変異を検出するために特に有用
であり得る（Ａｂｒａｖａｙａら（１９９５）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒ
ｅｓ．２３：６７５−６８２を参照のこと）。この方法は、患者から細胞サンプ
ルを回収する工程、サンプル細胞から核酸（例えば、ゲノム、ｍＲＮＡまたはそ
の両方）を単離する工程、この核酸サンプルを、遺伝子のハイブリダイゼーショ
ンおよび増幅が生じる（存在する場合は）条件下で遺伝子に特異的にハイブリダ
イズする１以上のプライマーと接触させる工程、および増幅産物の存在または非
存在を検出する工程、または増幅産物のサイズを検出し、そしてコントロールサ
ンプルの長さと比較するする工程を包含し得る。欠失および挿入は、通常の遺伝
子型と比較した増幅産物のサイズの変化により検出され得る。点変異は、増幅し
たＤＮＡを、正常なＲＮＡもしくはアンチセンスＤＮＡ配列にハイブリダイズさ
せることにより同定され得る。
【０２００】 あるいは、レセプター遺伝子における変異は、例えば、ゲル電気泳動により決
定された制限酵素消化パターンにおける変化により直接同定され得る。
【０２０１】 さらに、配列特異的リボザイム（例えば、米国特許第５，４９８，５３１号を
参照のこと）が使用されて、リボザイム切断部位の発達または損失により特定の
変異の存在について計数され得る。
【０２０２】 完全にマッチした配列は、ヌクレアーゼ切断消化アッセイまたは融解点の差異
によってミスマッチした配列とは区別され得る。
【０２０３】 特定の位置の配列変化はまた、ＲＮａｓｅおよびＳＩ保護のようなヌクレアー
ゼ保護アッセイまたは化学的切断方法により評価され得る。
【０２０４】 さらに、変異レセプター遺伝子と野生型遺伝子との間の配列差異は、直接ＤＮ
Ａ配列決定法により決定され得る。診断アッセイを行う場合、種々の自動化配列
決定手順（（１９９５）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９：４４８）（質量分
析（例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９４／１６１０１；Ｃｏｈｅｎら（１９９
６）Ａｄｖ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．３６：１２７−１６２；およびＧｒｉｆｆ
ｉｎら（１９９３）Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３８：
１４７−１５９を参照のこと）による配列決定を含む）が利用され得る。
【０２０５】 遺伝子における変異を検出するための他の方法としては、切断薬剤からの保護
がＲＮＡ／ＲＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖におけるミスマッチ塩基を検出す
るために使用される方法（Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：
１２４２；Ｃｏｔｔｏｎら（１９８８）ＰＮＡＳ ８５：４３９７；Ｓｅｌｅｅ
ｂａら（１９９２）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２１７：２８６−２９５）が挙
げられ、変異型核酸および野生型核酸の電気泳動易動度が比較され（Ｏｒｉｔａ
ら（１９８９）ＰＮＡＳ ８６：２７６６；Ｃｏｔｔｏｎら（１９９３）Ｍｕｔ
ａｔ．Ｒｅｓ．２８５：１２５−１４４；およびＨａｙａｓｈｉら（１９９２）
Ｇｅｎｅｔ．Ａｎａｌ．Ｔｅｃｈ Ａｐｐｌ．９：７３−７９）、そして変性剤
の勾配を含むポリアクリルアミドゲル中での変異型フラグメントまたは野生型フ
ラグメントの移動は、変性剤勾配ゲル電気泳動を用いてアッセイされる（Ｍｙｅ
ｒｓら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１３：４９５）。アッセイの感度は、（Ｄ
ＮＡよりはむしろ）ＲＮＡを用いることによって増強され得、ここで二次構造は
、配列における変化に対してより感受性である。１つの実施態様において、本方
法は、ヘテロ二重鎖分析を利用して、電気泳動移動度における変化に基づいて二
本鎖ヘテロ二重鎖分子を分離する（Ｋｅｅｎら、（１９９１）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇ
ｅｎｅｔ．７：５）。点変異を検出するための他の技術の例としては、選択的オ
リゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、選択的増幅、または選択的プライマ
ー伸長が挙げられる。
【０２０６】 レセプターポリヌクレオチドはまた、必ずしも疾患を引き起こすわけではない
が、にもかかわらず処置の様相に影響を及ぼす遺伝子型について個体を試験する
ために有用である。従って、このポリヌクレオチドは、個体の遺伝子型と処置の
ために用いられる化合物に対するその個体の応答との間の関係（薬理ゲノム学的
関係）を研究するために用いられ得る。この場合において、例えば、亜鉛化合物
またはペプチド基質に対する変化した親和性を生じるレセプター遺伝子における
変異は、この亜鉛化合物またはペプチド基質の標準的な濃度に対して過剰なまた
は減少した効果を生じ得る。従って、本明細書中に記載のレセプターポリヌクレ
オチドは、適切な化合物または処置のための投薬量レジメンを選択するために、
個体における遺伝子の変異含有量を評価するために用いられ得る。
【０２０７】 従って、処置に影響を及ぼす遺伝的バリエーションを示すポリヌクレオチドは
、個体における処置を詳細に仕立てる（ｔａｉｌｏｒ）ために用いられ得る診断
標的を提供する。従って、これらの多型を含む組換え細胞および動物の生成は、
処置化合物および投薬量レジメンの有効な臨床的設計を可能にする。
【０２０８】 レセプターポリヌクレオチドはまた、この配列が、個々の染色体とともに同定
され、そしてこの染色体上の特定の位置に対して同定される場合の染色体同定の
ために有用である。最初に、このＤＮＡ配列は、インサイチュまたは他の染色体
特異的ハイブリダイゼーションにより染色体に適合される。配列はまた、所望の
種由来の個々の染色体を含む体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのため
に用いられ得るＰＣＲプライマーを調製することにより、特定の染色体と相関さ
れ得る。このプライマーに相同な遺伝子を含む染色体を含むハイブリッドのみが
、増幅したフラグメントを産生する。準局在（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ
）は、染色体フラグメントを用いて達成され得る。他のストラテジーとしては、
標識したフローソート化染色体でのプレスクリーニングおよび染色体特異的ライ
ブラリーへのハイブリダイゼーションによるプレ選択が挙げられる。さらなるマ
ッピング戦略としては、従来用いられていたものより短いプローブでのハイブリ
ダイゼーションを可能にする、蛍光インサイチュハイブリダイゼーションが挙げ
られる。染色体マッピングのための試薬は、単一の染色体またはその染色体上の
単一の部位をマーキングするために個々に用いられ得る。または試薬のパネルは
、複数の部位および／または複数の染色体をマーキングするために用いられ得る
。この遺伝子の非コード領域に対応する試薬は、マッピングの目的のため実際に
好ましい。コード配列は、遺伝子ファミリー内で保存される確率がより高く、こ
れにより染色体マッピングの間の交差ハイブリダイゼーションの機会を増加する
。
【０２０９】 このレセプターポリヌクレオチドはまた、わずかな生物学的サンプルから個体
を同定するために用いられ得る。これは、例えば、個体を同定するために制限フ
ラグメント長多型性（ＲＦＬＰ）を用いて行われ得る。従って、本明細書中に記
載のポリヌクレオチドは、ＲＦＬＰ（米国特許第５，２７２，０５７号を参照の
こと）のためのＤＮＡマーカーとして有用である。
【０２１０】 さらにこのレセプター配列は、個体のゲノムにおいて選択されたフラグメント
の実際のＤＮＡ配列を決定する別の技術を提供するために用いられ得る。従って
、本明細書中に記載のレセプター配列は、配列の５’末端および３’末端から２
つのＰＣＲプライマーを調製するために用いられ得る。次いで、これらのプライ
マーは、引き続く配列決定のために個体からＤＮＡを増幅するために用いられ得
る。
【０２１１】 この様式で調製された個体由来の対応するＤＮＡ配列のパネルは、各個体が、
このようなＤＮＡ配列の独特なセットを有するので、独特の個々の同定を提供し
得る。ヒトにおける対立遺伝子バリエーションは、各５００塩基ごとに約１つの
頻度で生じると推定される。対立遺伝子バリエーションは、これらの配列のコー
ド領域においてある程度まで、そして非コード領域においてより大きな程度まで
生じる。このレセプター配列は、個体および組織からこのような同定配列を得る
ために用いられ得る。この配列は、ヒトゲノムの独特なフラグメントを示す。本
明細書中に記載の配列の各々は、ある程度まで、標準として用いられ得、この標
準に対して、個体由来のＤＮＡが同定目的で比較され得る。
【０２１２】 この配列から試薬のパネルが用いられて、個体についての独特の同定データベ
ースを生成する場合、それらの同じ試薬が、その個体から組織を同定するために
、その後用いられ得る。独特の同定データベースを用いると、個体の陽性の同定
（生存または死亡）は、非常に小さな組織サンプルからなされ得る。
【０２１３】 レセプターポリヌクレオチドはまた、法医学的同定手順において用いられ得る
。ＰＣＲ技術は、非常にわずかな生物学的サンプル（例えば、１つの毛包、体液
（例えば、血液、唾液、または精液））から採取されたＤＮＡ配列を増幅するた
めに用いられ得る。次いで、この増幅された配列は、サンプルの起源の同定を可
能にする標準物質に対して比較され得る。
【０２１４】 従って、このレセプターポリヌクレオチドは、ヒトゲノム中の特定の遺伝子座
に標的化される、ポリヌクレオチド試薬（例えば、ＰＣＲプライマー）を提供す
るために用いられ得、これは例えば、別の「同定マーカー」（すなわち、特定の
個体に特有の別のＤＮＡ配列）を提供することによりＤＮＡに基づく法医同定の
信頼性を増強し得る。上記のように、実際の塩基配列情報は、制限酵素が生成し
たフラグメントにより形成されたパターンに対する正確な代替物として同定のた
めに用いられ得る。非コード領域に対して標的化された配列は、この非コード領
域でより多数の多型が生じるので、この技術を用いて個体をより容易に区別する
ことを可能にするために特に有用である。
【０２１５】 レセプターポリヌクレオチドは、さらにポリヌクレオチド試薬、例えば、標識
プローブまたは標識可能プローブ（これは、例えば、インサイチュハイブリダイ
ゼーション技術において、特定の組織を同定するために用いられ得る）を提供す
るために用いられ得る。これは、法医病理学者が未知の起源の組織を提示される
場合に有用である。レセプタープローブのパネルは、種の型および／または器官
の型により組織を同定するために用いられ得る。類似の様式で、これらのプライ
マーおよびプローブは、混入物について組織培養物をスクリーニング（すなわち
、培地中の異なる型の細胞の混合物の存在についてスクリーニング）するために
用いられ得る。同様の様式で、このポリヌクレオチドはまた、腫瘍細胞の存在を
決定するために組織サンプルをスクリーニングするために用いられ得る。したが
って、アッセイは、癌（特に、２８７１遺伝子の高度な発現が腫瘍細胞を示す癌
）を有する個体の存在または傾向を決定するために開発され得る。
【０２１６】 あるいは、レセプターポリヌクレオチドは、アンチセンスまたはリボザイム構
築物によってレセプター遺伝子発現の転写または翻訳をブロックするために直接
用いられ得る。従って、異常に高いかまたは所望でないレセプター遺伝子発現に
より特徴付けられる障害において、処置のために核酸が直接用いられ得る。
【０２１７】 従って、このレセプターポリヌクレオチドは、細胞、組織および器官における
レセプター遺伝子発現を制御するためのアンチセンス構築物として有用である。
ＤＮＡのアンチセンスポリヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子の領域に相補
的であるように設計され、レセプタータンパク質の転写、従ってその生成を防止
する。アンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡポリヌクレオチドは、ｍＲＮＡにハイブ
リダイズし、従って、レセプタータンパク質へのｍＲＮＡの翻訳をブロックする
。
【０２１８】 核酸発現を阻害するために有用なアンチセンス分子の例としては、開始コドン
を含む配列番号２の５’非翻訳領域のフラグメントに相補的なアンチセンス分子
および配列番号２の３’非翻訳領域のフラグメントに相補的なアンチセンス分子
が挙げられる。
【０２１９】 あるいは、アンチセンス分子のクラスは、レセプター核酸の発現を減少させる
ために、ｍＲＮＡ不活化するために用いられ得る。従って、これらの分子は、異
常なまたは所望でないレセプター核酸発現により特徴付けられる障害を処置し得
る。この技術は、ｍＲＮＡにおける１以上の領域に相補的なヌクレオチド配列を
含むリボザイムによる切断を含み、このリボザイムは、ｍＲＮＡが翻訳される能
力を減少させる。あり得る領域としては、コード領域、特にレセプタータンパク
質の触媒活性および他の機能的活性に対応するコード領域が挙げられる。
【０２２０】 レセプターポリヌクレオチドはまた、レセプター遺伝子発現において異常な細
胞を含有する患者の遺伝子治療のためのベクターを提供する。従って、組換え細
胞（これは、エキソビボで操作されそして患者に戻される患者の細胞を含む）を
、個体に導入し、ここで、この細胞は、所望のレセプタータンパク質を産生し、
この個体を処置する。
【０２２１】 本発明はまた、生物学的サンプル中のレセプター核酸の存在を検出するための
キットを包含する。例えば、このキットは、試薬（例えば、標識された核酸また
は標識可能な核酸、あるいは生物学的サンプル中のレセプター核酸を検出し得る
薬剤）；このサンプル中のレセプター核酸の量を決定するための手段；およびこ
のサンプル中のレセプター核酸の量を標準と比較するための手段を備え得る。化
合物または薬剤は、適切な容器にパッケージされ得る。このキットはさらに、レ
セプターのｍＲＮＡまたはＤＮＡを検出するためにこのキットを使用するための
指示書を備え得る。
【０２２２】 （ベクター／宿主細胞） 本発明はまた、レセプターポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。用語
「ベクター」とは、レセプターポリヌクレオチドを輸送し得るビヒクル（好まし
くは、核酸分子）をいう。このベクターが核酸分子である場合、レセプターポリ
ヌクレオチドが、このベクター核酸に共有結合される。本発明のこの局面におい
て、このベクターとしては、プラスミド、一本鎖または二本鎖のファージ、一本
鎖または二本鎖のＲＮＡウイルスベクターもしくはＤＮＡウイルスベクター、あ
るいは人工染色体（例えば、ＢＡＣ、ＰＡＣ、ＹＡＣ、またはＭＡＣ）が挙げら
れる。
【０２２３】 ベクターは、染色体外エレメントとして宿主細胞中で維持され、そこでこれは
レセプターポリヌクレオチドのさらなるコピーを複製しそして生成する。あるい
は、そのベクターは、宿主細胞ゲノム中に組み込み得、そして宿主細胞が複製す
る場合に、レセプターポリヌクレオチドのさらなるコピーを生成し得る。
【０２２４】 本発明は、レセプターポリヌクレオチドの維持のためのベクター（クローニン
グベクター）または発現のためのベクター（発現ベクター）を提供する。このベ
クターは、原核生物細胞もしくは真核生物細胞において、あるいはその両方にお
いて（シャトルベクター）機能し得る。
【０２２５】 発現ベクターは、そのベクター中でレセプターポリヌクレオチドに作動可能に
連結されたシス作用性調節領域を、そのポリヌクレオチドの転写が宿主細胞中で
可能であるように、含む。このポリヌクレオチドは、転写に影響し得る別のポリ
ヌクレオチドとともに、宿主細胞中に導入され得る。従って、第２のポリヌクレ
オチドは、そのベクターからのレセプターポリヌクレオチドの転写を可能にする
ように、シス調節制御領域と相互作用するトランス作用性因子を提供し得る。あ
るいは、トランス作用性因子は、その宿主細胞によって供給され得る。最終的に
、トランス作用性因子は、ベクター自体から生成され得る。
【０２２６】 しかし、いくつかの実施形態において、レセプターポリヌクレオチドの転写お
よび／または翻訳が、無細胞系において生じ得ることが理解される。
【０２２７】 本明細書中に記載されるポリヌクレオチドが作動可能に連結され得る調節配列
としては、ｍＲＮＡ転写を検出するためのプロモーターが挙げられる。これらと
しては、バクテリオファージλ由来のｌｅｆｔプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ由来
のｌａｃプロモーター、ＴＲＰプロモーター、およびＴＡＣプロモーター、ＳＶ
４０由来の初期プロモーターおよび後期プロモーター、ＣＭＶ前初期プロモータ
ー、アデノウイルス初期プロモーターおよび後期プロモーター、ならびにレトロ
ウイルス長末端反復が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２８】 転写を促進する制御領域に加えて、発現ベクターはまた、転写を調節する領域
（例えば、リプレッサー結合部位およびエンハンサー）を含み得る。例としては
、ＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイウス前初期エンハンサー、ポリオー
マエンハンサー、アデノウイルスエンハンサー、およびレトロウイルスＬＴＰエ
ンハンサーが挙げられる。
【０２２９】 転写の開始および制御のための部位を含むことに加えて、発現ベクターはまた
、転写終結に必要な配列を含み得、そして転写領域において、翻訳のためのリボ
ソーム結合部位を含み得る。発現のための他の調節制御エレメントとしては、開
始コドンおよび終結コドン、ならびにポリアデニル化シグナルが挙げられる。当
業者は、発現ベクター中で有用である多数の調節配列を認識する。このような調
節配列は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ
：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ２ｎｄ．ｅｄ．、Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９８９）に記載される。
【０２３０】 種々の発現ベクターが、レセプターポリヌクレオチドを発現するために使用さ
れ得る。このようなベクターとしては、染色体ベクター、エピソーム性ベクター
、およびウイルス由来ベクター（例えば、細菌プラスミド由来のベクター、バク
テリオファージ由来のベクター、酵母エピソーム由来のベクター、酵母染色体エ
レメント（酵母人工染色体を含む）由来のベクター、ウイルス（例えば、バキュ
ロウイルス、パポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）、ワクシニアウイルス、アデ
ノウイルス、ポックスウイルス、仮性狂犬病ウイルス、およびレトロウイルス）
由来のベクターが挙げられる。ベクターはまた、これらの供給源の組み合わせに
由来し得、例えば、プラスミド由来およびバクテリオファージ遺伝子エレメント
（例えば、コスミドおよびファージミド）に由来するベクターである。原核生物
宿主および真核生物宿主に適切なクローニングおよび発現ベクターは、Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ ２ｎｄ．ｅｄ．、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ
Ｙ、（１９８９）に記載される。
【０２３１】 この調節配列は、１つ以上の宿主細胞において構成的発現を提供してもよい（
すなわち、組織特異的）し、または１つ以上の細胞型において誘導性発現（例え
ば、温度、栄養添加物、または外因性因子（例えば、ホルモンまたは他のリガン
ド））を提供してもよい。原核生物宿主および真核生物宿主における構成的発現
および誘導性発現を提供する種々のベクターが、当業者に周知である。
【０２３２】 このレセプターポリヌクレオチドは、周知の方法によってベクター核酸に挿入
され得る。一般的には、最終的に発現されるＤＮＡ配列が、そのＤＮＡ配列およ
び発現ベクターを１つ以上の制限酵素で切断し、次いでそれらのフラグメントを
ともに連結することによって、発現ベクターに連結される。制限酵素消化および
連結のための手順は、当業者に周知である。
【０２３３】 適切なポリヌクレオチドを含むベクターは、周知の技術を使用して、増殖また
は発現のため適切な宿主細胞中に導入され得る。細菌細胞としては、Ｅ．ｃｏｌ
ｉ、ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓおよびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒ
ｉｕｍが挙げられるが、これらに限定されない。真核生物細胞としては、酵母、
昆虫細胞（例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）、動物細胞（例えば、ＣＯＳ細胞お
よびＣＨＯ細胞）、ならびに植物細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２３４】 本明細書中で記載されたように、融合タンパク質としてポリペプチドを発現さ
せることが所望され得る。従って、本発明は、レセプターポリペプチドの産生を
可能にする融合ベクターを提供する。融合ベクターは、組換えタンパク質の発現
を増加させ得、組換えタンパク質の可溶性を増加させ得、そして例えば、アフィ
ニティ精製のためのリガンドとして作用することによってタンパク質の精製を補
助し得る。タンパク質分解性切断部位が、融合部分の連結部位に導入され得、そ
の結果、所望されるポリペプチドは、最終的に、融合部分から分離され得る。タ
ンパク質分解性酵素としては、第Ｘａ因子、トロンビン、およびエンテロキナー
ゼが挙げられるが、これらに限定されない。代表的な融合発現ベクターとしては
、ｐＧＥＸ（Ｓｍｉｔｈら（１９８８）、Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０）、ｐＭ
ＡＬ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ）、お
よびｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）が挙げら
れ、これらはそれぞれ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マル
トースＥ結合タンパク質、またはプロテインＡを標的組換えタンパク質に融合す
る。適切な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例としては、ｐＴｒｃ（Ａ
ｍａｎｎら、Ｇｅｎｅ ６９：３０１−３１５（１９８８））およびｐＥＴ １
１ｄ（Ｓｔｕｄｉｅｒら、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５：６０−８９（１
９９０））が挙げられる。
【０２３５】 組換えタンパク質発現は、宿主細胞が、組換えタンパク質をタンパク質分解的
に切断する能力を欠損させた遺伝的背景を提供することによって、宿主細菌にお
いて最大化され得る（Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，Ｓ．、Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ
１８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒ
ｎｉａ（１９９０）１１９−１２８）。あるいは、目的のポリヌクレオチドの配
列は、特定の宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）の優先的なコドンの使用を提供
するために改変され得る（Ｗａｄａら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．
：２０：２１１１−２１１８（１９９２））。
【０２３６】 レセプターポリヌクレオチドはまた、酵母において作動可能である発現ベクタ
ーによって発現され得る。酵母（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）における
発現のためのベクターの例としては、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、Ｅ
ＭＢＯ Ｊ．６：２２９−２３４（１９８７））、ｐＭＦａ（Ｋｕｒｊａｎら、
Ｃｅｌｌ ３０：９３３−９４３（１９８２））、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔ
ｚら、Ｇｅｎｅ ５４：１１３−１２３（１９８７））、およびｐＹＥＳ２（Ｉ
ｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）が
挙げられる。
【０２３７】 レセプターポリヌクレオチドはまた、例えば、バキュロウイルス発現ベクター
を使用して、昆虫細胞において発現され得る。培養された昆虫細胞（例えば、Ｓ
ｆ９細胞）におけるタンパク質発現に利用可能なバキュロウイルスベクターとし
ては、ｐＡｃ系列（Ｓｍｉｔｈら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３：２１５６
−２１６５（１９８３））およびｐＶＬ系列（Ｌｕｃｋｌｏｗら、Ｖｉｒｏｌｏ
ｇｙ １７０：３１−３９（１９８９））が挙げられる。
【０２３８】 本発明の特定の実施形態では、本明細書中に記載されるポリヌクレオチドは、
哺乳動物発現ベクターを使用して、哺乳動物細胞中において発現される。哺乳動
物発現ベクターの例としては、ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ，Ｂ．、Ｎａｔｕｒｅ ３
２９：８４０（１９８７））およびｐＭＴ２ＰＣ（Ｋａｕｆｍａｎら、ＥＭＢＯ
Ｊ．６：１８７−１９５（１９８７））が挙げられる。
【０２３９】 本明細書中に列挙された発現ベクターは、レセプターポリヌクレオチドを発現
するために有用である、当業者に利用可能な周知のベクターの例示のみとして提
供される。当業者は、本明細書中に記載のポリヌクレオチドの維持増殖または発
現のために適切な他のベクターを知っている。これらは、例えば、Ｓａｍｂｒｏ
ｏｋ、Ｊ．、Ｆｒｉｔｓｈ、Ｅ．Ｆ．、およびＭａｎｉａｔｉｓ、Ｔ．、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第
２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、１９８９において見出される。
【０２４０】 本発明はまた、本明細書中に記載の核酸配列が、逆方向でベクター中にクロー
ン化されているが、アンチセンスＲＮＡの転写を可能にする調節配列に作動可能
に連結されているベクターを包含する。従って、アンチセンス転写物は、本明細
書中に記載のポリヌクレオチド配列（コード領域および非コード領域の両方を含
む）の全体または一部に対して産生され得る。このアンチセンスＲＮＡの発現は
、センスＲＮＡの発現と関連して上記の各パラメーターに供される（調節配列、
構成性発現または誘導性発現、組織特異的発現）。
【０２４１】 本発明はまた、本明細書中に記載のベクターを含む組換え宿主細胞に関する。
従って、宿主細胞としては、原核生物細胞、下等真核生物細胞（例えば、酵母）
、他の真核生物細胞（例えば、昆虫細胞）、および高等真核生物細胞（例えば、
哺乳動物細胞）が挙げられる。
【０２４２】 組換え宿主細胞は、当業者に容易に利用可能な技術によって、これらの細胞中
に本明細書中に記載のベクター構築物を導入することによって調製される。これ
らの技術としては、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキス
トラン媒介性トランスフェクション、カチオン性脂質媒介性トランスフェクショ
ン、エレクトロポレーション、形質導入、感染、リポフェクション、および他の
技術（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、
ＮＹ、１９８９）において見出される技術）が挙げられるが、これらに限定され
ない。
【０２４３】 宿主細胞は、１より多くのベクターを含み得る。従って、異なるヌクレオチド
配列が、同一細胞の異なるベクターに導入され得る。同様に、レセプターポリヌ
クレオチドは、単独でか、または発現ベクターにトランス作用性因子を提供する
もののような、レセプターポリヌクレオチドとは無関係の他のポリヌクレオチド
と共に、のいずれかで導入され得る。１より多くのベクターが細胞中に導入され
る場合、ベクターは、レセプターポリヌクレオチドベクターとは独立して導入さ
れ得るか、レセプターポリヌクレオチドベクターと同時に導入され得るか、また
はレセプターポリヌクレオチドベクターに連結され得る。
【０２４４】 バクテリオファージおよびウイルスベクターの場合、これらは、感染および形
質導入についての標準的手順によって、パッケージングされたウイルスまたはキ
ャプシド形成ウイルスとして、細胞中に導入され得る。ウイルスベクターは、複
製能を有しても複製欠損性でもよい。ウイルス複製が欠損性である場合、複製は
、その欠損を補完する機能を提供する宿主細胞において生じる。
【０２４５】 ベクターは、一般的に、組換えベクター構築物を含む細胞の亜集団の選択を可
能にする選択可能マーカーを含む。マーカーは、本明細書中に記載のポリヌクレ
オチドを含む同じベクター中に含まれても、別のベクター上にあってもよい。マ
ーカーとしては、原核生物宿主細胞については、テトラサイクリンまたはアンピ
シリン耐性遺伝子、そして真核生物宿主細胞については、ジヒドロ葉酸レダクタ
ーゼまたはネオマイシン耐性が挙げられる。しかし、表現型的の特性について選
択を与えるいずれのマーカーも有効である。
【０２４６】 成熟タンパク質が、適切な調節配列の制御下で、細菌細胞、酵母細胞、哺乳動
物細胞、および他の細胞中において産生され得るが、無細胞転写および翻訳系も
また、本明細書中に記載のＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを用いてこれらのタンパク
質を産生するために使用され得る。
【０２４７】 ポリペプチドの分泌が所望される場合、適切な分泌シグナルが、ベクター中に
組み込まれる。シグナル配列は、レセプターポリペプチドに対して内因性であっ
ても、これらのポリペプチドに対して異種であってもよい。
【０２４８】 ポリペプチドが、培地中に分泌されない場合、タンパク質は、標準的な破壊手
順（凍結融解、超音波処理、機械的破壊、溶解剤の使用などを含む）によって、
宿主細胞から単離され得る。次いで、このポリペプチドは、周知の精製方法（硫
安沈殿、酸抽出、陽イオン交換クロマトグラフィーもしくは陰イオン交換クロマ
トグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマト
グラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマト
グラフィー、レクチンクロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフィー
を含む）によって、回収および精製され得る。
【０２４９】 本明細書中に記載のポリペプチドの組換え産生における宿主細胞に依存して、
ポリペプチドが、細胞に依存して種々のグリコシル化パターンを有し得るか、ま
たは細菌において産生される場合のように、グリコシル化され得ないこともまた
理解される。さらに、ポリペプチドは、宿主媒介性プロセスの結果として、いく
つかの場合において、改変された開始メチオニンを含み得る。
【０２５０】 （ベクターおよび宿主細胞の使用） 本明細書中に記載のポリペプチドを発現する宿主細胞、そして特に組換え宿主
細胞は、種々の用途を有する。第１に、これらの細胞は、レセプタータンパク質
またはポリペプチドを産生するために有用であり、これらのタンパク質またはポ
リペプチドは、所望される量のレセプタータンパク質またはフラグメントを産生
するためにさらに精製され得る。従って、発現ベクターを含む宿主細胞は、ポリ
ペプチド産生のために有用である。
【０２５１】 宿主細胞はまた、レセプターまたはレセプターフラグメントに関する細胞ベー
スのアッセイを実施するために有用である。従って、ネイティブなレセプターを
発現する組換え宿主細胞は、レセプター機能を刺激または阻害する化合物につい
てのアッセイするために有用である。この機能として、リガンド結合、転写レベ
ルまたは翻訳レベルでの遺伝子発現、Ｇタンパク質相互作用、およびシグナル伝
達経路の構成要素が、挙げられる。
【０２５２】 宿主細胞はまた、これらの機能が影響を及ぼされたレセプター変異体を同定す
るために有用である。変異体が、天然で病原体に対して生じ、惹起される場合、
この変異を含む宿主細胞は、変異体レセプターに対して所望の効果（例えば、機
能を刺激するか、または阻害する）を有する化合物をアッセイするために有用で
あり、これらは、ネイティブなレセプターに対するその効果によっては示され得
ない。
【０２５３】 組換え宿主細胞はまた、本明細書中に記載のキメラポリペプチドを発現させて
、異種細胞外ドメインによって活性化させるか、または活性を抑制する化合物を
評価するために有用である。あるいは、異種膜貫通ドメインが用いられ、任意の
所定の宿主細胞における所望の細胞外ドメインの効果が評価され得る。この実施
形態において、特定の宿主細胞に適合性である膜貫通ドメインが用いられ、キメ
ラベクターが作製される。あるいは、異種細胞内（例えば、シグナル伝達）ドメ
インが、宿主細胞に導入され得る。
【０２５４】 さらに、変異体レセプターは、種々の機能のうちの１以上（すなわち、リガン
ド結合またはＧタンパク質共役）が、増加または減少され、そして個体中におけ
るレセプタータンパク質を増強または置換するために使用されるように操作され
るように設計され得る。従って、宿主細胞は、異常なレセプターを置換すること
によってか、または治療的結果を与える異常なレセプターを提供することによっ
て、治療的利益を提供し得る。１つの実施形態では、細胞は、異常に活性なレセ
プターを提供する。
【０２５５】 別の実施形態では、細胞は、異常に不活性なレセプターを提供する。これらの
レセプターは、その個体における内因性レセプターと競合し得る。別の実施形態
では、活性化され得ないレセプターを発現する細胞を、個体中に導入して、リガ
ンドに対する内因性レセプターと競合させる。例えば、過剰なリガンドが、処置
的様相の一部である場合には、処置の特定の時点で、そのリガンドを効率的に不
活性化することが必要となり得る。そのリガンドと競合するが、レセプター活性
化によって影響され得ない細胞を提供することが有益である。
【０２５６】 宿主細胞ゲノム中の内因性レセプターポリヌクレオチド配列のインサイチュ改
変を可能にする相同的な組換え宿主細胞もまた、産生され得る。これらの技術は
、ＷＯ９３／０９２２２、ＷＯ９１／１２６５０、およびＵ．Ｓ．５，６４１，
６７０において、より完全に記載されている。簡潔には、レセプターポリヌクレ
オチドまたはレセプター遺伝子に対して近位もしくは遠位の配列に対応する特定
のポリヌクレオチド配列を、相同組換えによって宿主細胞ゲノム中に組み込ませ
、ここで、遺伝子の発現に影響を及ぼし得る。１つの実施形態では、内因性配列
の発現を増加させるかまたは減少させるかのいずれかである調節配列が導入され
る。従って、レセプタータンパク質は、それを通常は発現しない細胞中において
産生され得る。あるいは、レセプタータンパク質の発現増加は、特定のレベルで
タンパク質を通常産生する細胞中にもたらされ得る。あるいは、遺伝子全体が欠
失され得る。なおさらに、特定の変異が、変異体レセプタータンパク質を産生す
るために、遺伝子の任意の所望の領域中に導入され得る。このような変異は、例
えば、特定の機能的領域（例えば、リガンド結合部位またはＧタンパク質共役部
位）に導入され得る。
【０２５７】 １つの実施形態において、宿主細胞は、変更されたレセプター遺伝子を含むト
ランスジェニック動物を作製するために使用され得る受精卵母細胞または胚性幹
細胞であり得る。あるいは、この宿主細胞は、幹細胞、または特定のサブセット
の細胞を生じる他の初期組織前駆体であり得、そして、動物におけるトランスジ
ェニック組織を生成するために使用され得る。相同組換えベクターの説明につい
ては、例えば、Ｔｈｏｍａｓら、Ｃｅｌｌ ５１：５０３（１９８７）もまた参
照のこと。このベクターは、胚性幹細胞株に導入され得（例えば、エレクトロポ
レーションによって）、そして導入された遺伝子が内因性レセプター遺伝子と相
同的に組換えされた細胞が、選択される（例えば、Ｌｉ，Ｅ．ら、Ｃｅｌｌ ６
９：９１５（１９９２）を参照のこと）。次いで、これらの選択された細胞は、
動物（例えば、マウス）の胚盤胞に注入されて凝集キメラを形成する（例えば、
Ｂｒａｄｌｅｙ、Ａ．、Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒ
ｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃ
ｈ、Ｅ．Ｊ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編（ＩＲＬ、Ｏｘｆｏｒｓ、１９８７）１１３
−１５２頁を参照のこと）。次いで、キメラ胚は、適切な偽受精雌性養母（ｆｏ
ｓｔｅｒ）動物に移植され、そしてこの胚は一定期間おかれる。それらの胚細胞
中で相同組換えＤＮＡを有する子孫は、その動物のすべての細胞が導入遺伝子の
生殖系列伝達によって相同的に組換えられたＤＮＡを含む動物を繁殖するために
使用され得る。相同組換えベクターおよび相同組換え動物を構築するための方法
は、Ｂｒａｄｌｅｒｙ、Ａ．（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎｓ
ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２：８２３−８２９およびＰＣＴ国際公開
番号ＷＯ９０／１１３５４；ＷＯ９１／０１１４０；およびＷＯ９３／０４１６
９においてさらに記載される。
【０２５８】 遺伝的に操作された宿主細胞は、非ヒトトランスジェニック動物を作製するた
めに使用され得る。トランスジェニック動物は、好ましくは、その動物の１つ以
上の細胞が導入遺伝子を含む哺乳動物（例えば、ラットまたはマウスのようなげ
っ歯類）である。導入遺伝子は、トランスジェニック動物が発生する細胞のゲノ
ム中に組み込まれ、そしてそのトランスジェニック動物の１つ以上の細胞型また
は組織において成熟動物のゲノム中に維持される外因性ＤＮＡである。これらの
動物は、レセプタータンパク質の機能を研究するために有用であり、そしてレセ
プタータンパク質活性のモジュレーターを同定および評価するために有用である
。
【０２５９】 トランスジェニック動物の他の例としては、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウ
シ、ヤギ、ニワトリ、および両生類が挙げられる。
【０２６０】 １つの実施形態において、宿主細胞は、レセプターポリヌクレオチド配列が導
入された、受精卵母細胞または胚性幹細胞である。
【０２６１】 トランスジェニック動物は、例えば、マイクロインジェクション、レトロウイ
ルス感染によって授精卵母細胞の雌性前核中に核酸を導入すること、および偽妊
娠雌性養母（ｆｅｍａｌｅ ｆｏｓｔｅｒ）動物においてその卵母細胞を発生さ
せることによって、作製され得る。任意のレセプターヌクレオチド配列は、非ヒ
ト動物（例えば、マウス）のゲノム中に導入遺伝子として導入され得る。
【０２６２】 任意の調節または発現ベクターに有用な他の配列が、トランスジェニック配列
の一部を形成し得る。これは、既に含まれていない場合、イントロン配列および
ポリアデニル化シグナルを含む。組織特異的調節配列が、特定の細胞にレセプタ
ータンパク質の発現を指向させるように、その導入遺伝子に作動可能に連結され
得る。
【０２６３】 胚操作およびマイクロインジェクションを介してトランスジェニック動物（特
に、マウスのような動物）を作製するための方法は、当該分野で慣習的になって
おり、そして例えば、米国特許第４，７３６，８６６号および同第４，８７０，
００９号（共に、Ｌｅｄｅｒら）、米国特許第４，８７３，１９１号（Ｗａｇｎ
ｅｒら）、ならびにＨｏｇａｎ，Ｂ．、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍ
ｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、
１９８６）に記載される。同様の方法は、他のトランスジェニック動物の作製の
ために使用される。トランスジェニック創始（ｆｏｕｎｄｅｒ）動物は、そのゲ
ノムにおける導入遺伝子の存在および／あるいはその動物の組織または細胞にお
けるトランスジェニックｍＲＮＡの発現に基づいて同定され得る。次いで、トラ
ンスジェニック創始動物は、その導入遺伝子を保有するさらなる動物を繁殖させ
るために使用され得る。さらに、その導入遺伝子を保有するトランスジェニック
動物が、さらに、他の導入遺伝子を保有する他のトランスジェニック動物と交配
され得る。トランスジェニック動物はまた、動物全体または動物中の組織が本明
細書中に記載した相同組換え宿主細胞を用いて産生された動物を含む。
【０２６４】 別の実施態様では、トランスジェニック非ヒト動物が産生されて、この動物は
導入遺伝子の調節された発現を可能にする選択された系を含む。このような系の
１つの例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系であ
る。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の記載については、例えば、Ｌａｋｓｏ
ら、（１９９２）ＰＮＡＳ、８９：６２３２−６２３６を参照のこと。リコンビ
ナーゼ系の別の例は、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコンビナーゼ系であ
る（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３５１−１３５５、１９
９１）。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系が、導入遺伝子の発現を調節するた
めに用いられる場合、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび選択されたタンパク質の両方
をコードする導入遺伝子を含む動物が、必要とされる。このような動物は、例え
ば、２つのトランスジェニック動物（一方は、選択されるタンパク質をコードす
る導入遺伝子を含み、そして他方は、リコンビナーゼをコードする導入遺伝子を
含む）を交配することによる「二重」導入遺伝子動物の構築を通じて提供され得
る。
【０２６５】 本明細書中に記載される非ヒトトランスジェニック動物のクローンはまた、Ｗ
ｉｌｍｕｔら、Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８１０−８１３（１９９７）およびＰＣ
Ｔ公報番号ＷＯ ９７／０７６６８およびＷＯ ９７／０７６６９に記載される
方法に従って産生され得る。簡潔にいうと、トランスジェニック動物由来の細胞
（例えば、体細胞）は、単離され得、そして増殖周期を出で、そしてＧ０期に入
るように誘導され得る。次いで、静止細胞は、例えば、電気的パルスの使用によ
って、融合され得、その静止細胞が単離された同じ種の動物から卵母細胞が摘出
され得る。次いで、再構築された卵母細胞は、桑実胚または胚盤胞まで発生する
ように培養され、そして偽妊娠の雌性養母（ｆｏｓｔｅｒ）動物に移される。こ
の雌性乳動物から生まれた子孫は、細胞（例えば、体細胞）が単離された動物の
クローンである。
【０２６６】 本明細書中に記載のポリペプチドを発現する組換え細胞を含むトランスジェニ
ック動物は、本明細書中に記載されるアッセイおよびインビボ状況でのアッセイ
を行うのに有用である。従って、インビボで存在し、そしてリガンド結合、レセ
プター活性化および情報伝達に影響を及ぼし得る種々の生理学的因子は、インビ
トロの細胞遊離アッセイまたは細胞ベースのアッセイから明白であり得る。従っ
て、インビボでのレセプター機能（リガンド相互作用、レセプター機能およびリ
ガンド相互作用に対する特定の変異レセプターの影響、およびキメラレセプター
の影響を含む）をアッセイするために非ヒトトランスジェニック動物を提供する
ことは有用である。１以上のレセプター機能を実質的にまたは完全に排除する変
異である無発現変異の影響を評価することはまた可能である。
【０２６７】 （薬学的組成物） レセプター核酸分子、タンパク質（特に、細胞外ドメインのようなフラグメン
ト）、このようなタンパク質の調節因子および抗体（本明細書中で「活性化合物
」ともいわれる）は、患者（例えば、ヒト）への投与に適切な薬学的組成物中に
取り込まれる。このような組成物は、代表的には、核酸分子、タンパク質、調節
因子または抗体および薬学的に受容可能なキャリアを含む。 本明細書中で使用される場合、言語「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的
投与に適合性の任意および全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤および
抗真菌剤、等張剤ならびに吸収遅延剤などを含むことが意図される。薬学的に活
性な物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野において周知で
ある。任意の従来の媒体または薬剤がこの活性化合物と非適合性である限り、こ
の組成物においてこのような培地が使用され得る。補助的な活性化合物はまた、
この組成物中に取り込まれ得る。本発明の薬学的組成物は、投与のその意図され
た経路と適合性であるように処方される。投与の経路の例には、非経口投与（例
えば、静脈内投与）、皮内投与、皮下投与、経口投与（例えば、吸入投与）、経
皮投与（局所投与）、経粘膜投与、および直腸投与が挙げられる。非経口適用、
皮内適用または皮下適用に使用される溶液および懸濁液には、以下の成分が挙げ
られ得る：滅菌希釈剤（例えば、注射用水、生理食塩水溶液、不揮発油、ポリエ
チレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒）；
抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；抗酸化剤（例え
ば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム）；キレート剤（例えば、エチ
レンジアミン四酢酸）；緩衝液（例えば、アセテート、シトレート、またはホス
フェート）、および張度を調整するための薬剤（例えば、塩化ナトリウムまたは
デキストロース）。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウ
ム）で調節され得る。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチックから作製され
るアンプル、使い捨てシリンジ、または複数容量のバイアル中に含まれ得る。
【０２６８】 注射用の使用に適切な薬学的組成物は、滅菌注射溶液または分散液の即時調製
物のための滅菌水溶液（ここでは水溶性）または分散液、および滅菌粉末を含む
。静脈内注射については、適切なキャリアには、生理学的な生理食塩水、静菌水
、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、ＮＪ）ま
たはリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合では、この組
成物は、滅菌されなければならず、そして容易なシリンジ能力（ｓｙｒｉｎｇａ
ｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度にまで流動的にされるべきである。これは製造お
よび貯蔵の条件下で安定でなければならず、そして微生物（例えば、細菌および
真菌）の汚染作用に対して保存されなければならない。キャリアは、溶媒または
分散培地（例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロ
ピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなどを含む）、ならびに
それらの適切な混合物であり得る。適切な流動性は、例えば、コーティングの使
用（例えば、レシチン）によって、分散の場合に必要とされる粒子サイズの維持
によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。微生物の作用の予防
は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェ
ノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって達成され得る。多くの場
合、等張剤（例えば、糖、ポリアルコール（例えば、マンニトール）、ソルビト
ール、塩化ナトリウム）をこの組成物中に含むことが好ましい。注射用組成物の
延長した吸収は、吸収を遅延させる薬剤（例えば、モノステアリン酸アルミニウ
ムおよびゼラチン）をこの組成物中に含むことによって、もたらされ得る。
【０２６９】 滅菌注射用溶液は、活性化合物（例えば、レセプタータンパク質または抗レセ
プター抗体）を、上記で列挙した成分の１つまたはそれらの組合せで、必要とさ
れる量において適切な溶媒中に取り込ませ、必要とされる場合、続いて濾過滅菌
することによって調製され得る。一般に、分散剤は、活性化合物を、基本的な分
散媒体および上記に列挙された成分のうちの必要とされる他の成分を含む滅菌ビ
ヒクル中に取り込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅
菌粉末の場合、調製の好ましい方法は、減圧乾燥および凍結乾燥であり、これら
は、活性成分の粉末およびその以前に滅菌濾過された溶液からの任意のさらなる
所望の成分を生じる。
【０２７０】 経口組成物は、一般に、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。これらは、
ゼラチンカプセルに封入され得るか、または錠剤に加圧され得る。経口投与のた
めに、この薬剤は、胃で残存するために腸溶性形態で含まれ得るか、あるいは公
知の方法によってさらにコーティングされるか、またはＧＩ管の特定の領域で放
出されるように混合され得る。経口治療投与の目的で、この活性化合物は、賦形
剤と共に組み込まれ、そして錠剤、トローチ、またはカプセルの形態で使用され
る。経口組成物はまた、うがい薬としての使用のための流体キャリアを使用して
調製され得、ここで、流体キャリア中の化合物は、経口的に適用され、そして音
を立てられ（ｓｗｉｓｈ）、そして吐き出されるかまたは飲み込まれる。薬学的
に適合性の結合剤、および／またはアジュバント材料が、この組成物の一部とし
て含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などが、以下の成分のいず
れかまたは同様の性質を有する化合物を含み得る：結合剤（例えば、微結晶セル
ロース、ガムトラガントまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンまたはラ
クトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸）、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはコーン
スターチ；滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓ
）；グライダント（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘
味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；あるいは矯味矯臭剤（例えば、
ペパーミント、サリチル酸メチル、またはオレンジフレーバー）。
【０２７１】 吸入による投与について、この化合物は、適切な噴霧剤（例えば、二酸化炭素
のような気体）を含む圧縮容器またはディスペンサー、あるいは噴霧器から、エ
アロゾルスプレーの形態で送達される。
【０２７２】 全身的投与はまた、経粘膜手段または経皮手段により得る。経粘膜投与または
経皮投与について、浸透されるバリアに対して適切な浸透剤が、処方において使
用される。このような浸透剤は、一般的に、当該分野で公知であり、そして、例
えば、経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体
が挙げられる。経粘膜投与は、鼻スプレーまたは坐剤の使用によって達成され得
る。経皮投与については、この活性化合物は、当該分野で一般的に公知である軟
膏剤、軟膏、ゲル、またはクリーム剤へ処方される。
【０２７３】 この化合物はまた、直腸送達のための坐剤（例えば、ココアバターおよび他の
グリセリドのような従来の坐剤ベースと共に）または保持浣腸の形態で調製され
得る。
【０２７４】 １つの実施形態において、この活性化合物は、身体からの迅速な排出に対して
この化合物を保護するキャリアを用いて調製され（例えば、放出制御処方物）、
これには、移植片の送達系およびマイクロカプセル化された送達系が挙げられる
。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオル
トエステル、およびポリ乳酸のような、生分解性、生体適合性ポリマーが使用さ
れ得る。このような処方物の調製のための方法は、当該業者には明らかである。
これらの材料はまた、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｎｏｖａ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手可能である。リポ
ソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を有する感染させた細
胞へ標的化されるリポソームを含む）がまた、薬学的に受容可能なキャリアとし
て使用され得る。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載さ
れるような、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
【０２７５】 投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で、経口組成物ま
たは非経口組成物を処方することが、特に有益である。本明細書で使用される場
合、投薬単位形態は、処置される被験体のための単位投薬量として適切な、物理
的に個々の単位をいい；各単位は、必要とされる薬学的キャリアと関連して、所
望の治療的効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。本発明の
投薬単位形態についての詳細は、この活性化合物の固有の特性、および達成され
る特定の治療効果、ならびに個体の処置のためのこのような活性化合物を調合す
る当該分野に固有の制限によって決定され、これらに直接依存する。
【０２７６】 本発明の核酸分子は、ベクターに挿入され得、そして遺伝子治療ベクターとし
て使用され得る。遺伝子治療ベクターは、例えば、静脈内注射、局所投与（米国
特許第５，３２８，４７０号）または定位注射（例えば、Ｃｈｅｎら（１９９４
）ＰＮＡＳ ９１：３０５４−３０５７を参照のこと）によって被験体へ送達さ
れ得る。遺伝子治療ベクターの薬学的調製物は、受容可能な希釈剤中の遺伝子治
療ベクターを含み得るか、または遺伝子送達ビヒクルが組み込まれる徐放性マト
リックスを含み得る。あるいは、完全な遺伝子送達ベクターが、組換え細胞から
インタクトで産生され得（例えば、レトロウイルスベクター）、この薬学的調製
物は、遺伝子送達系を生成する１以上の細胞を含み得る。
【０２７７】 この薬学的組成物は、投与のための使用説明書と共に、容器、包装、またはデ
ィスペンサーに含まれ得る。
【０２７８】 この薬学的組成物は、２８７１−応答性障害の処置において有用である。「処
置」は、本明細書中で、疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を、治療（ｃ
ｕｒｅ）、治癒、緩和、軽減、変更、治療（ｒｅｍｅｄｙ）、回復、改善または
影響する目的で、疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を有する患者への治
療剤の適用または投与として定義されるか、または、患者由来の単離された組織
または細胞株への治療剤の適用または投与として定義される。「治療剤」として
は、低分子、ペプチド、抗体、リボザイムおよびアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドが挙げられるがこれらに限定されない。
【０２７９】 本発明は、多数の異なった形態で具体化され得、そして、本明細書中に開示さ
れる実施形態に制限されるとして解釈されるべきではない；むしろ、これらの実
施形態は、この開示が発明を当業者に完全に伝えるように提供される。本発明の
多数の改変および他の実施形態が当業者に思い浮かび、これに対して、本発明は
関連し、教示の利点が前述の記載において示されている。特定の用語が使用され
るが、他に示されない限り、当該分野におけるように使用される。
【０２８０】 （実施例） （ＴａｑＭａｎ定量的ポリメラーゼ連鎖反応による遺伝子発現研究） 種々の組織由来の総ＲＮＡを、製造業者の指示（ＲＮＡ ＳＴＡＴ−６０ Ｔ
ｅｌＴｅｓｔ，Ｉｎｃ）に従って、単一工程方法を使用して抽出した。各ＲＮＡ
調製物を３７℃で１時間、ＤＮａｓｅＩ（Ａｍｂｉｏｎ）で処理した。フェノー
ル抽出後、サンプルを、製造業者の指示（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）に従って、Ｓｕｐ
ｅｒｓｃｒｉｐｔキットを使用する逆転写に供した。ＲＮＡを含むが逆転写酵素
を含まないネガティブコントロールサンプルを同時に実施した。逆転写酵素の非
存在下で生成された偽の逆転写サンプルをＤＮａｓｅＩ処理が完全であることを
確かめるために、各ＲＮＡ／ｃＤＮＡサンプルについて電気泳動した：ＤＮａｓ
ｅＩ処理後のＲＮＡサンプルの完全性をアガロースゲル電気泳動および臭化エチ
ジウム染色によってチェックした。内部参照アンプリコンβ−２ミクログロブリ
ンを使用して閾値の蛍光レベルに達するために、少なくとも３８増幅サイクルが
必要である場合、サンプルが完全なＤＮａｓｅＩ処理を有することが決定された
。
【０２８１】 コンセンサス配列を使用するＰＥ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓからのＰｒｉｍｅｒ
Ｅｘｐｒｅｓｓソフトウェアによって、プローブは設計される。遺伝子２８７１
のＲＮＡ発現分析のためのプライマーおよびプローブ配列は、以下の通りである
。
【０２８２】
【表２】 標的プローブ遺伝子２８７１を６−カルボキシフルオレセイン（ＦＡＭ）を使
用して標識化した。β２−ミクログロブリンに対する内部参照アンプリコンをＶ
ＩＣを使用して標識化した。この方法において、標的遺伝子および内部参照遺伝
子のレベルを多重ＰＣＲによって同じチューブ内で測定し得る。内部参照遺伝子
および標的遺伝子の両方に対する順方向および逆方向プライマーならびにプロー
ブを、ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｐ
Ｅ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）に添加する。プライマーおよびプ
ローブの最終濃度は、それらが、所定の実験と内部的に一致することを変化し得
る。代表的な実験は、β２ミクログロブリンに対する２００ｎＭの順方向および
逆方向プライマーおよび１００ｎＭのプローブならびに標的遺伝子に対する６０
０ｎＭの順方向および逆方向プライマーおよび２００ｎＭのプローブを含む。Ｔ
ａｑＭａｎマトリクス実験を、ＡＢＩ ＰＲＰＳＭ ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃ
ｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＰＥ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓ
ｔｅｍｓ）上で実施する。熱サイクル条件は以下の通りである：５０℃で２分お
よび９５℃で１０分保持、次いで９５℃で１５秒間溶解そして６０℃ １分でア
ニール／伸長で４０サイクルする２段階ＰＣＲ。
【０２８３】 種々の組織細胞型由来のＲＮＡを精製し、そして逆転写酵素を使用してｃＤＮ
Ａに変えた。２８７１を分析するために使用される細胞および組織は、以下を含
む：種々の器官（リンパ節、脾臓、胸腺、心臓、脳、肝臓、胎児肝臓、および線
維症肝臓を含む）；Ｔ細胞レセプターのＣＤ３サブユニットに対する抗体で０ま
たは２４時間刺激されたインビトロで分化したヘルパーＴ細胞集団（＿ＣＤ３刺
激）；末梢血由来の休止および＿ＣＤ３刺激されエキソビボ精製されたＣＤ３
Ｔ細胞；末梢血から精製された他の細胞（顆粒球、ＣＤ４およびＣＤ８陽性細胞
、抗ＣＤ１９抗体で精製されかつＬＰＳで２４時間刺激されたＢ細胞、末梢血単
核細胞（ＰＢＭＳ）、休止または植物性血球凝集素で刺激された細胞を含む）。
本実験において分析する他の細胞として、ＣＤ３４陽性および陰性（ＣＤ３４＋ およびＣＤ３４−）細胞、またはＧ−ＣＳＦで処置された患者の末梢血（ｍＰＢ
）もしくは骨髄（ｍＢＭ）から精製された白血球が挙げられる。ＣＤ３４＋およ
びＣＤ３４−細胞をまた、正常な成体の骨髄（ＡＢＭ）または臍帯血（ＣＢ）か
ら精製した。Ｇ−ＣＳＦで処置した患者の巨核球末梢血（ｍＰＢ）または骨髄（
ｍＢＭ）もまた試験した。正常な骨髄由来の赤芽球もまた試験した。トランスフ
ォームされた細胞株として、赤白血病細胞Ｋ５６２および急性前骨髄球性白血病
細胞株ＨＬ６０および通常または減少した酸素圧力において培養したＨｅｐ３Ｂ
肝細胞肝臓癌細胞が挙げられる。
【０２８４】 比較Ｃｔ方法を、比遺伝子発現量について使用する。閾値サイクルまたはＣｔ
値は、ΔＲｎにおける統計的に重要な増加を検出するサイクルである。低いＣｔ
値は、標的プローブ配列に対応する遺伝子に対するｍＲＮＡのより高い濃度を示
す。標的遺伝子に対するＣｔ値を、内部参照遺伝子Ｃｔ値に比例して基準化して
、以下の式：ΔＣｔ＝Ｃｔｔａｒｇｅｔ−Ｃｔｒｅｆｅｒｅｎｃｅを使用してΔ
Ｃｔ値を生じる。相対発現に対する値を生じるため、マトリクスにおいて相対的
に低い発現レベルを有するｃＤＮＡサンプルを、標準物質サンプルとして選択す
る。次いで標準物質組織に対するＣｔ値を、以下の式：ΔΔＣｔ＝ΔＣｔ−ｓａ ｍｐｌｅ −ΔＣｔ−ｃａｌｉｂｒａｔｏｒに従ってそれぞれのΔＣｔから減算す
る。相対発現に対して使用される値を、２−ΔΔＣｔで与えられる算術式を使用
して計算する。次いで、この値を使用して、本研究における複数の組織での標的
遺伝子の相対発現をグラフ化する。
【０２８５】 （ＮＣＩ−Ｈ１２５細胞においてｐ５３調節される遺伝子に対する転写プロフ
ィール） ＮＣＩ−Ｈ１２５細胞は、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子の発現をしない肺腺扁平上皮
癌細胞株である。これらの細胞におけるｐ５３発現の再導入は、ごくわずかな量
のｐ５３タンパク質有している場合でさえプログラムされた細胞死を生じる。ｐ
５３によって転写的に抑圧されるできる限りの癌遺伝子を同定するために、本発
明者は、ｐ５３を発現するレトロウイルス構築物で一時的に感染されたＨ１２５
細胞をプロフィールし、それらをベクター単独で感染させた細胞と比較した。本
発明者の焦点は、ｐ５３発現細胞を有意に減少するベクターコントロール細胞に
存在する転写物を有する遺伝子であった。本実験において同定した遺伝子の１つ
は、ＭＩＤ２８７１（推定Ｇタンパク質共役レセプター）であった。２８７１を
、ｐ５３を発現するＨ１２５細胞において下流調節し、そして臨床肺腫瘍サンプ
ルにおいて正常な肺と比較して増加した発現を示した。
【０２８６】
【表３】
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１Ａ〜１Ｄは、この２８７１ヌクレオチド配列（配列番号２）および２８７
１推定アミノ酸配列（配列番号１）を示す。アミノ酸１〜４２が細胞外ドメイン
を構成し、アミノ酸４３〜３１８が膜貫通ドメインを構成し、そしてアミノ酸３
１９〜３５９が細胞内ドメインを構成することが、予測される。
【図２】 図２は、タンパク質パターンのＰｒｏｓｉｔｅデータベースに対するこの２８
７１レセプターの比較を示し、特に、７回膜貫通ドメインロドプシンファミリ０
に対して高いスコアを支援す。下線領域は、ＧＰＣＲサインを示す。最も共通に
保存された細胞内配列は、ＴＭ３に隣接するアスパラギン酸、アルギニン、チロ
シン（ＤＲＹ）の３つ組である。アルギニンは不変である。アスパラギン酸は、
７つのＧＰＣＲにおいて保存的に配置されている。ＤＲＹは、シグナル伝達に関
係する。
【図３】 図３は、この２９７１アミノ酸配列の分析を示す：α領域、β領域、ターン領
域およびコイル領域；親水性領域；両親媒性領域；可撓性領域；抗原性指数；お
よび表面確率。
【図４】 図４は、２８７１レセプター疎水性プロットを示す。このアミノ酸は４３〜３
１８に対応し、そして７つの膜貫通セグメントを示す。
【図５】 図５は、種々の組織における２８７１ ＲＮＡ発現を示す。
【図６】 図６は、種々の正常なヒト組織における２８７１ ＲＮＡ発現を示す。
【図７】 図７は、種々の造血細胞における２８７１ ＲＮＡ発現を示す。ｍＰＢ：動員
された末梢血；ＡＢＭ：成体骨髄；Ｍｅｇ：巨核球；ＢＭ：骨髄。
【図８】 図８は、グリア（Ｇｌｉｏ）細胞および皮膚細胞における遺伝子２８７１の発
現、ならびに乳房腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、結腸転移細胞、および肺腫瘍細胞に
おける、各正常乳房細胞、正常結腸細胞および正常肺細胞と比較して上昇した発
現を示す。
【図９】 図９は、種々の組織における２８７１ ｍＲＮＡの発現レベルを支援す。正常
な卵巣サンプルおよび肺サンプルと比較して、２８７１ ｍＲＮＡの上昇した発
現が、卵巣腫瘍および肺腫瘍において見出された。この２８７１ ｍＲＮＡの有
意な発現レベルが、脳皮質、上皮細胞、膵臓および大動脈においても観察された
。このβ２ ｍＲＮＡの発現レベルは、各組織サンプルにおいてモニターされ、
そして２８７１ ｍＲＮＡの発現レベルをサンプル間で比較することを可能にす
るためにコントロールとして使用された。
【図１０】 図１０は、２８７１遺伝子が、ｐ５３の存在下でダウンレギュレートされるこ
とを示す。Ｈ１２５は、ｐ５３の発現を排除するように変異された、肺腫瘍細胞
株である。Ｈ１２５ベクターは、コントロールレトロウイルスベクターに感染し
た肺腫瘍細胞株における２８７１の発現を示す。Ｈ１２５ ｐ５３は、ｐ５３を
発現するレトロウイルスベクターに感染した肺腫瘍細胞株における２８７１の発
現を示す。
【手続補正書】
【提出日】平成１４年６月２６日（２００２．６．２６）
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図８】
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図９】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 7/00 Ａ６１Ｐ 7/00 9/10 9/10 11/00 11/00 11/06 11/06 13/12 13/12 17/02 17/02 17/06 17/06 19/02 19/02 25/28 25/28 29/00 29/00 31/04 31/04 31/12 31/12 33/02 33/02 35/00 35/00 37/00 37/00 37/08 37/08 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 33/53 33/53 Ｄ 33/566 33/566 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ホッジ， マーティン アール． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02474， アーリントン， クロフォード ストリート 39 (72)発明者 ハンター， ジョン ジョセフ アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02143， サマービル， ハーバード ス トリート 35 (72)発明者 ルドルフ−オーウェン， ローラ アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02130， ジャマイカ プレイン， アー バー ウェイ ナンバー１ 186 (72)発明者 ウェイチ， ナディーン エス． アメリカ合衆国 マサチューセッツ 02446， ブルックライン， パーク ス トリート 70， アパートメント 53 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA29 AA40 CB01 CB17 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 FB02 FB03 FB07 4C084 AA06 AA07 AA17 NA14 ZA012 ZA022 ZA152 ZA162 ZA362 ZA452 ZA512 ZA592 ZA662 ZA752 ZA812 ZA892 ZA962 ZB072 ZB112 ZB132 ZB262 ZB332 ZB352 ZB372 ZC352 ZC782

Claims (43)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 宿主細胞における、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有す
    るポリペプチドの存在を検出する方法であって、該方法は、該宿主細胞を、該宿
    主細胞における該ポリペプチドの存在の検出を特異的に可能にする薬剤と接触さ
    せる工程、次いで、該ポリペプチドの存在を検出する工程を包含し；ここで、該
    宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮膚細胞、乳房腫瘍
    細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、および卵巣腫瘍細胞から選択される、方法。
  2. 【請求項２】 前記薬剤が、前記ポリペプチドと選択的に物理的会合をし得
    る、請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 前記薬剤が前記ポリペプチドに結合する、請求項２に記載の
    方法。
  4. 【請求項４】 前記薬剤が抗体である、請求項３に記載の方法。
  5. 【請求項５】 前記薬剤が、ヌクレオチド三リン酸アナログである、請求項
    ３に記載の方法。
  6. 【請求項６】 請求項１に記載の方法に使用される試薬を備えたキットであ
    って、該試薬が、前記ポリペプチドに特異的に結合する薬剤を含む、キット。
  7. 【請求項７】 宿主細胞において、配列番号１に記載のアミノ酸配列を有す
    るポリペプチドと相互作用する薬剤を同定する方法であって、該方法は、該ポリ
    ペプチドが該薬剤と相互作用し得るように、該ポリペプチドと該薬剤との間の相
    互作用を可能にし得る宿主細胞と該薬剤を接触させる工程、および該相互作用を
    測定する工程を包含し；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細胞、膵臓細
    胞、精巣細胞、皮膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、および卵
    巣腫瘍細胞から選択される、方法。
  8. 【請求項８】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質を結合する薬剤
    を同定する方法であって、以下： ａ）結合のために適切な条件下で、試験される薬剤を、配列番号１に記載のア
    ミノ酸配列を有するヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質を発現する宿主
    細胞と合わせる工程；および ｂ）該薬剤と該ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質との間の複合体の
    形成を検出する工程であって；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細胞、
    膵臓細胞、精巣細胞、皮膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、お
    よび卵巣腫瘍細胞からなる群から選択される、工程 を包含する、方法。
  9. 【請求項９】 前記方法が競合アッセイであり、ここで結合は、前記Ｇタン
    パク質共役レセプタータンパク質を結合する少なくとも１つのリガンドの存在下
    において決定される、請求項８に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 前記ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質が、細胞
    性シグナル伝達または細胞性応答を媒介し得、そして複合体の形成が、該複合体
    の形成に応答した該Ｇタンパク質共役レセプタータンパク質のシグナル伝達活性
    または細胞性応答を検出することによってモニターされる、請求項８に記載の方
    法。
  11. 【請求項１１】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質への薬剤の結
    合を阻害する化合物を同定する方法であって、以下： ａ）該ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質への該薬剤の結合のために
    適切な条件下で、試験される化合物および該薬剤を、配列番号１に記載のアミノ
    酸配列を有するヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質を発現する宿主細胞
    と合わせる工程；ならびに ｂ）該タンパク質と該薬剤との間の複合体の形成を検出する工程であって、こ
    れにより該化合物による複合体形成の阻害は、該化合物が、該タンパク質への該
    薬剤の結合を阻害することを示し；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細
    胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞
    、および卵巣腫瘍細胞からなる群から選択される、工程 を包含する、方法。
  12. 【請求項１２】 前記ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質が、細胞
    性シグナル伝達または細胞性応答を媒介し得、そして複合体の形成が、該複合体
    の形成に応答した該Ｇタンパク質共役レセプタータンパク質のシグナル伝達活性
    または細胞性応答を検出することによってモニターされる、請求項１１に記載の
    方法。
  13. 【請求項１３】 前記化合物が、抗体または抗体フラグメントである、請求
    項１１に記載の方法。
  14. 【請求項１４】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質のインヒビタ
    ーを同定する方法であって、以下： ａ）２８７１活性を検出するために適切な条件下で、試験される薬剤を、配列
    番号１に記載のアミノ酸配列を有するヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク
    質を発現する宿主細胞と合わせる工程；および ｂ）該薬剤が該２８７１活性を阻害する能力を評価する工程であって、これに
    より該薬剤による該２８７１活性の阻害は、該薬剤がインヒビターであることを
    示し；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮
    膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、および卵巣腫瘍細胞からな
    る群から選択される、工程 を包含する、方法。
  15. 【請求項１５】 前記２８７１活性が、シグナル伝達活性または細胞性応答
    である、請求項１４に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 請求項１４に記載の方法によって同定されるヒトＧタンパ
    ク質共役レセプタータンパク質のインヒビターであって、該インヒビターがアン
    タゴニストである、インヒビター。
  17. 【請求項１７】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質を結合する薬
    剤を同定する方法であって、以下： ａ）結合のために適切な条件下で、試験される薬剤を、ヒトＧタンパク質共役
    レセプタータンパク質を発現する宿主細胞と合わせる工程であって、ここで該タ
    ンパク質が、配列番号２によってコードされるアミノ酸配列を有する、工程；お
    よび ｂ）該薬剤と該ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質との間の複合体の
    形成を検出する工程であって；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細胞、
    膵臓細胞、精巣細胞、皮膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、お
    よび卵巣腫瘍細胞からなる群から選択される、工程 を包含する、方法。
  18. 【請求項１８】 前記方法が競合アッセイであり、ここで結合は、前記Ｇタ
    ンパク質共役レセプタータンパク質を結合する少なくとも１つのリガンドの存在
    下において決定される、請求項１７に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 前記ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質が、細胞
    性シグナル伝達または細胞性応答を媒介し得、そして複合体の形成が、該複合体
    の形成に応答した該Ｇタンパク質共役レセプタータンパク質のシグナル伝達活性
    または細胞性応答を検出することによってモニターされる、請求項１７に記載の
    方法。
  20. 【請求項２０】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質への薬剤の結
    合を阻害する化合物を同定する方法であって、以下： ａ）該ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質への該薬剤の結合のために
    適切な条件下で、試験される化合物および該薬剤を、ヒトＧタンパク質共役レセ
    プタータンパク質を発現する宿主細胞と合わせる工程であって、ここで該タンパ
    ク質が、配列番号２によってコードされるアミノ酸配列を有する、工程；ならび
    に ｂ）該タンパク質と該薬剤との間の複合体の形成を検出する工程であって、こ
    れにより該化合物による複合体形成の阻害は、該化合物が、該タンパク質への該
    薬剤の結合を阻害することを示し；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細
    胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞
    、および卵巣腫瘍細胞からなる群から選択される、工程 を包含する、方法。
  21. 【請求項２１】 前記ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質が、細胞
    性シグナル伝達または細胞性応答を媒介し得、そして複合体の形成が、該複合体
    の形成に応答した該Ｇタンパク質共役レセプタータンパク質のシグナル伝達活性
    または細胞性応答を検出することによってモニターされる、請求項２０に記載の
    方法。
  22. 【請求項２２】 前記化合物が、抗体または抗体フラグメントである、請求
    項２０に記載の方法。
  23. 【請求項２３】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質のインヒビタ
    ーを同定する方法であって、以下： ａ）２８７１活性を検出するために適切な条件下で、試験される薬剤を、ヒト
    Ｇタンパク質共役レセプタータンパク質を発現する宿主細胞と合わせる工程であ
    って、ここで該タンパク質が、配列番号２によってコードされるアミノ酸配列を
    有する、工程；および ｂ）該薬剤が該２８７１活性を阻害する能力を評価する工程であって、これに
    より該薬剤による該２８７１活性の阻害は、該薬剤がインヒビターであることを
    示し；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮
    膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、および卵巣腫瘍細胞からな
    る群から選択される、工程 を包含する、方法。
  24. 【請求項２４】 前記２８７１活性が、シグナル伝達活性または細胞性応答
    である、請求項２３に記載の方法。
  25. 【請求項２５】 請求項２３に記載の方法によって同定されるヒトＧタンパ
    ク質共役レセプタータンパク質のインヒビターであって、該インヒビターがアン
    タゴニストである、インヒビター。
  26. 【請求項２６】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質を結合する薬
    剤を同定する方法であって、以下： ａ）配列番号１を含む融合タンパク質への該薬剤の結合のために適切な条件下
    で、試験される薬剤を、配列番号１を含む融合タンパク質を発現する宿主細胞と
    合わせる工程；および ｂ）該薬剤と該融合タンパク質との間の複合体の形成を検出する工程であって
    ；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮膚細
    胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、および卵巣腫瘍細胞からなる群
    から選択される、工程 を包含する、方法。
  27. 【請求項２７】 前記方法が競合アッセイであり、ここで結合は、前記Ｇタ
    ンパク質共役レセプタータンパク質を結合する少なくとも１つのリガンドの存在
    下において決定される、請求項２６に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 前記融合タンパク質が、細胞性シグナル伝達または細胞性
    応答を媒介し得、そして複合体の形成が、該複合体の形成に応答した該融合タン
    パク質のシグナル伝達活性または細胞性応答を検出することによってモニターさ
    れる、請求項２６に記載の方法。
  29. 【請求項２９】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質への薬剤の結
    合を阻害する化合物を同定する方法であって、以下： ａ）配列番号１を含む融合タンパク質への該薬剤の結合のために適切な条件下
    で、試験される化合物および該薬剤を、配列番号１を含む融合タンパク質を発現
    する宿主細胞と合わせる工程；ならびに ｂ）該融合タンパク質と該薬剤との間の複合体の形成を検出する工程であって
    、これにより該化合物による複合体形成の阻害は、該化合物が、該融合タンパク
    質への該薬剤の結合を阻害することを示し；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞
    、子宮細胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸
    腫瘍細胞、および卵巣腫瘍細胞からなる群から選択される、工程 を包含する、方法。
  30. 【請求項３０】 前記化合物が、抗体または抗体フラグメントである、請求
    項２９に記載の方法。
  31. 【請求項３１】 前記融合タンパク質が、細胞性シグナル伝達または細胞性
    応答を媒介し得、そして複合体の形成が、該複合体の形成に応答した該融合タン
    パク質のシグナル伝達活性または細胞性応答を検出することによってモニターさ
    れる、請求項２９に記載の方法。
  32. 【請求項３２】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質のインヒビタ
    ーを同定する方法であって、以下： ａ）２８７１活性を検出するために適切な条件下で、試験される薬剤を、配列
    番号１を含む融合タンパク質を発現する宿主細胞と合わせる工程；および ｂ）該薬剤が該２８７１活性を阻害する能力を評価する工程であって、これに
    より該薬剤による該２８７１活性の阻害は、該薬剤がインヒビターであることを
    示し；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮
    膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、および卵巣腫瘍細胞からな
    る群から選択される、工程 を包含する、方法。
  33. 【請求項３３】 前記活性が、シグナル伝達活性または細胞性応答である、
    請求項３２に記載の方法。
  34. 【請求項３４】 請求項３２に記載の方法によって同定されるヒトＧタンパ
    ク質共役レセプタータンパク質のインヒビターであって、該インヒビターがアン
    タゴニストである、インヒビター。
  35. 【請求項３５】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質を結合する薬
    剤を同定する方法であって、以下： ａ）ヒト２８７１タンパク質を含む融合タンパク質への該薬剤の結合のために
    適切な条件下で、試験される薬剤を、ヒト２８７１タンパク質を含む融合タンパ
    ク質を発現する宿主細胞と合わせる工程であって、ここで該タンパク質が配列番
    号２によってコードされる、工程；および ｂ）該薬剤と該融合タンパク質との間の複合体の形成を検出する工程であって
    ；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮膚細
    胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、および卵巣腫瘍細胞からなる群
    から選択される、工程 を包含する、方法。
  36. 【請求項３６】 前記方法が競合アッセイであり、ここで結合は、前記Ｇタ
    ンパク質共役レセプタータンパク質を結合する少なくとも１つのリガンドの存在
    下において決定される、請求項３５に記載の方法。
  37. 【請求項３７】 前記融合タンパク質が、細胞性シグナル伝達または細胞性
    応答を媒介し得、そして複合体の形成が、該複合体の形成に応答した該融合タン
    パク質のシグナル伝達活性または細胞性応答を検出することによってモニターさ
    れる、請求項３５に記載の方法。
  38. 【請求項３８】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質への薬剤の結
    合を阻害する化合物を同定する方法であって、以下： ａ）ヒト２８７１タンパク質を含む融合タンパク質への該薬剤の結合のために
    適切な条件下で、試験される化合物および該薬剤を、ヒト２８７１タンパク質を
    含む融合タンパク質を発現する宿主細胞と合わせる工程であって、ここで該タン
    パク質が配列番号２によってコードされる、工程；ならびに ｂ）該融合タンパク質と該薬剤との間の複合体の形成を検出する工程であって
    、これにより該化合物による複合体形成の阻害は、該化合物が、該融合タンパク
    質への該薬剤の結合を阻害することを示し；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞
    、子宮細胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸
    腫瘍細胞、および卵巣腫瘍細胞からなる群から選択される、工程 を包含する、方法。
  39. 【請求項３９】 前記化合物が、抗体または抗体フラグメントである、請求
    項３８に記載の方法。
  40. 【請求項４０】 前記融合タンパク質が、細胞性シグナル伝達または細胞性
    応答を媒介し得、そして複合体の形成が、該複合体の形成に応答した該融合タン
    パク質のシグナル伝達活性または細胞性応答を検出することによってモニターさ
    れる、請求項３８に記載の方法。
  41. 【請求項４１】 ヒトＧタンパク質共役レセプタータンパク質のインヒビタ
    ーを同定する方法であって、以下： ａ）２８７１活性を検出するために適切な条件下で、試験される薬剤を、ヒト
    ２８７１タンパク質を含む融合タンパク質を発現する宿主細胞と合わせる工程で
    あって、ここで該タンパク質が配列番号２によってコードされる、工程；および ｂ）該薬剤が該２８７１活性を阻害する能力を評価する工程であって、これに
    より該薬剤による該２８７１活性の阻害は、該薬剤がインヒビターであることを
    示し；ここで、該宿主細胞が、前立腺細胞、子宮細胞、膵臓細胞、精巣細胞、皮
    膚細胞、乳房腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、および卵巣腫瘍細胞からな
    る群から選択される、工程 を包含する、方法。
  42. 【請求項４２】 前記２８７１活性が、シグナル伝達活性または細胞性応答
    である、請求項４１に記載の方法。
  43. 【請求項４３】 請求項４１に記載の方法によって同定されるヒトＧタンパ
    ク質共役レセプタータンパク質のインヒビターであって、該インヒビターがアン
    タゴニストである、インヒビター。
JP2001545551A 1999-12-16 2000-12-18 ２８７１レセプター、ｇタンパク質共役レセプターおよびその使用方法 Withdrawn JP2003517154A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US46468599A 1999-12-16 1999-12-16
US09/464,685 1999-12-16
PCT/US2000/035004 WO2001044474A1 (en) 1999-12-16 2000-12-18 2871 receptor, a g-protein coupled receptor and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2003517154A true JP2003517154A (ja) 2003-05-20

Family

ID=23844872

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001545551A Withdrawn JP2003517154A (ja) 1999-12-16 2000-12-18 ２８７１レセプター、ｇタンパク質共役レセプターおよびその使用方法

Country Status (4)

Country Link
EP (1) EP1248842A1 (ja)
JP (1) JP2003517154A (ja)
AU (1) AU2288801A (ja)
WO (1) WO2001044474A1 (ja)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1326076A3 (en) * 2001-10-26 2004-01-28 Millenium Pharmaceuticals, Inc. Methods for indentification of ligands or modulators of 2871 receptor, a g-protein coupled receptor
WO2004082572A2 (en) * 2003-03-18 2004-09-30 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with g protein-coupled receptor 87 (gpr87)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6063596A (en) * 1997-12-11 2000-05-16 Incyte Pharmaceuticals, Inc. G-protein coupled receptors associated with immune response
CA2328891A1 (en) * 1998-06-02 1999-12-09 Millennium Pharmaceuticals, Inc. G-protein coupled receptor, named 2871 receptor
WO2000008133A1 (en) * 1998-08-06 2000-02-17 Merck & Co., Inc. NOVEL G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR cDNA SEQUENCE

Also Published As

Publication number Publication date
EP1248842A1 (en) 2002-10-16
WO2001044474A1 (en) 2001-06-21
AU2288801A (en) 2001-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20030129644A1 (en) 14274 receptor, a novel G-protein coupled receptor related to the EDG receptor family
US20060099687A1 (en) 14926 Receptor, a novel G-protein coupled receptor
JP2004500013A (ja) 新規ｇタンパク質共役受容体
JP2002501083A (ja) リガンド受容体およびそれらの使用
JP2002522011A (ja) Ｇタンパク質共役型受容体１４２７３レセプター
JP2002517195A (ja) ２８７１レセプターと名付けられたｇタンパク質共役型レセプター
EP1127126B1 (en) G-protein coupled receptors, homologous to ebv-induced gpcr 2 (ebi-2). methods to seek for ligands thereof
JP2002536997A (ja) 新規なｇ蛋白質結合受容体の１４２７３受容体
JP2003532369A (ja) Ｇタンパク質結合受容体である１４４００受容体
JP2003517154A (ja) ２８７１レセプター、ｇタンパク質共役レセプターおよびその使用方法
JP2003521894A (ja) 新規のヒトｇ−タンパク質共役型受容体
US20030113789A1 (en) Isolated human G-protein coupled receptors, nucleic acid molecules encoding human GPCR proteins, and uses thereof
US20030017539A1 (en) Novel nucleic acid sequences encoding G-protein coupled receptors
US20030162172A1 (en) 2871 receptor, a novel G-protein coupled receptor
JP2003528634A (ja) 単離ヒトｇタンパク質共役受容体、ヒトｇｐｃｒタンパク質をコード化している核酸分子、及びそれらの使用
JP2003504023A (ja) 新規ｇタンパク質共役受容体である１６４０５受容体
US20020115150A1 (en) 14275 receptor, a novel G-protein coupled receptor related to the EDGreceptor family
US20020042058A1 (en) 18057 protein, a novel seven transmembrane protein
JP2005511024A (ja) １５６２５レセプター、新規ｇタンパク質共役レセプター
US20030162247A1 (en) 32164 protein, a novel seven transmembrane protein
JP2003530834A (ja) 単離した癌原遺伝子サブファミリーに属するヒトｇタンパク質共役受容体、ヒトｇｐｃｒタンパク質をコード化している核酸分子、及びそれらの使用
JP2005508132A (ja) 単離ヒトデヒドロゲナーゼ、これらのヒトデヒドロゲナーゼをコードする核酸分子及びその使用方法
JP2005519637A (ja) 新規なｇタンパク質共役レセプターである、ｍｉｄ２４１レセプター
US20030064434A1 (en) Novel G Protein-coupled receptor, GAVE1
JP2005500036A (ja) 新規のｇタンパク質共役受容体、ｇａｖｅ３

Legal Events

Date Code Title Description
A300 Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300

Effective date: 20080304