JP2003515145A - 癌の診断、モニタリング、ステージング、イメージングおよび処置のための新規方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、癌の検出、診断、モニタリング、ステージング、予後判定、イメージングおよび処置のための新しい方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の属する技術分野 本発明の一部は、癌、特に卵巣癌の検出、診断、モニタリング、ステージング
、予後判定、イメージングおよび処置のための新規に開発されたアッセイに関す
る。

【０００２】背景技術 女性において、婦人科の癌は悪性腫瘍の４分の１以上を占める。卵巣肉腫は極
めて多く見られる婦人科の癌である。女性のおよそ７０人に１人は、その生涯の
内に卵巣癌を発症し、１９９５年には１４，５００人が卵巣癌で死亡したと推定
されている。実際、卵巣癌は、雌性生殖系のその他の癌に比べてより多くの死を
もたらす。

【０００３】 卵巣癌は、何らの顕著な症状をもたらさないことが多い。いくつかの可能な警
告信号は、４０歳を超える女性における液体の蓄積による腹部の肥大またははっ
きりしない消化器系の不調(違和感、ガス貯留または膨満)を含む。膣からの異常
出血はまれである。 定期的な、完全な内診が卵巣癌の検出に重要である。パパニコロー検査は卵巣
癌を検出しない。４０歳を超える女性には、毎年の内診が推奨される。

【０００４】 癌の検出、診断、モニタリング、ステージングおよび予後判定のために用いら
れる手順は、患者の予後に関してきわめて重要である。早期に診断された患者の
５年生存率は、遠隔転移した癌と診断された患者の生存率より、一般的に大変大
きい。早期癌の検出に関してより高感度で特異的な新しい診断方法が明らかに必
要とされている。 癌患者は最初の治療の後、および、アジュバント療法の期間中、治療への反応
を決定し、持続性疾患または再発性疾患または転移を検出するために、緊密にモ
ニタリングされる。したがってまた、癌の再発の検出に関してより高感度で特異
的な癌マーカーが明らかに必要とされている。

【０００５】 癌の管理におけるその他の重要なステップは、患者の疾患のステージを決定す
ることである。ステージの決定は、潜在的な予後判定価値を有しており、最適な
治療の設計のために基準を提供する。一般的に、癌の病理学的ステージングは、
臨床ステージングよりも好まれるが、これは前者がより正確な予後判定を与える
からである。しかしながら、臨床ステージングは、病理学的評価のために組織を
採取する侵襲的な手順に依存しないため、もしそれが病理学的ステージングと同
程度に正確なものであれば、好ましいだろう。細胞、組織または体液において、
異なる浸潤ステージ間を差別化できる新しいマーカーを検出することにより癌の
ステージングを改善することができるだろう。

【０００６】 本明細書においてＯｖｒ１０７と呼ばれる新しいマーカーが、様々な癌、そし
て特に卵巣癌の診断、モニタリング、ステージング、イメージングおよび処置に
用いられるものとして同定された。従って、本発明は、Ｏｖｒ１０７を介した癌
の検出、診断、モニタリング、ステージング、予後判定、in vivoでのイメージ
ングおよび処置のための新たな方法に関する。Ｏｖｒ１０７は、中でも、配列番
号１のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子により発現される天然のタンパク質に
関する。本明細書で「Ｏｖｒ１０７」はまた、遺伝コードの縮重により、配列番
号１に比べて異なる核酸配列を含むが、同じタンパク質をコードしているポリヌ
クレオチドも意味する。別の側面では、本明細書で用いるＯｖｒ１０７により意
味されるものは、配列番号１を含む遺伝子によりコードされる天然のｍＲＮＡを
意味し、または、配列番号１を含む遺伝子自体、または、配列番号１のアンチセ
ンス配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることが可能なポリヌ
クレオチドのレベルに関し得る。

【０００７】 本発明のその他の目的、特徴、利点および側面は、以下の説明により当業者に
明らかになるだろう。しかしながら、以下の説明および具体例は、本発明の好ま
しい態様を示しているが、ただ説明のためにのみ与えられていると理解されるべ
きである。本開示発明の精神および範囲内の様々な変化および変更は、以下の説
明を読み、本開示の他の部分を読むことにより、当業者に容易に明らかになるだ
ろう。

【０００８】本発明の概要 これらおよびその他の目標のため、本発明の目的は、Ｏｖｒ１０７を含む癌の
診断マーカーを提供することにある。 さらに、細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７のレベルを、正常ヒト対
照の好ましくは同種の細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７のレベルと比
較した場合の変化を分析することにより癌の存在を診断するための方法が提供さ
れ、ここでは患者におけるＯｖｒ１０７レベルの正常ヒト対照に対する変化が癌
に関係している。

【０００９】 転移を有するとは知られていない癌を有する患者において、転移している癌を
有する疑いのあるヒト患者を特定し、このような患者からの細胞、組織または体
液試料をＯｖｒ１０７について分析し、このような細胞、組織または体液におけ
るＯｖｒ１０７のレベルを正常ヒト対照の好ましくは同種の細胞、組織または体
液におけるＯｖｒ１０７のレベルと比較することにより、転移性の癌を診断する
方法がさらに提供され、ここでは患者におけるＯｖｒ１０７のレベルの正常ヒト
対照に対する増加が転移した癌に関係している。

【００１０】 また本発明により、癌を有するヒトにおいて、癌を有するヒト患者を特定し、
このような患者からの細胞、組織または体液試料をＯｖｒ１０７について分析し
、このような細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７のレベルを正常ヒト対
照の好ましくは同種の細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７のレベルと比
較することにより、癌をステージングする方法も提供され、ここでは患者におけ
るＯｖｒ１０７のレベルの正常ヒト対照に対する増加が進行している癌に関係し
、そして、Ｏｖｒ１０７レベルの減少が消退しているまたは寛解期にある癌に関
係している。

【００１１】 さらに、ヒト患者における癌を、転移の開始についてモニタリングする方法が
提供される。該方法は、転移を有するとは知られていない癌を有するヒト患者を
特定し、このような患者からの細胞、組織または体液をＯｖｒ１０７について定
期的に分析し、このような細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７のレベル
を正常ヒト対照の好ましくは同種の細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７
のレベルと比較することを含み、ここでは患者におけるＯｖｒ１０７のレベルの
正常ヒト対照に対する増加が転移した癌に関係している。

【００１２】 さらに、ヒト患者における癌のステージの変化を、該患者のＯｖｒ１０７レベ
ルを調べることによりモニタリングする方法が提供される。該方法は、癌を有す
るヒト患者を特定し、このような患者からの細胞、組織または体液をＯｖｒ１０
７について定期的に分析し、このような細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１
０７のレベルを正常ヒト対照の好ましくは同種の細胞、組織または体液における
Ｏｖｒ１０７のレベルと比較することを含み、ここで患者におけるＯｖｒ１０７
のレベルの正常ヒト対照に対する増加が進行している癌に関係し、そして、Ｏｖ
ｒ１０７のレベルの減少が消退しているまたは寛解期にある癌に関係する。

【００１３】 さらに、癌のイメージングおよび処置に用いるためのＯｖｒ１０７を標的にし
た新しい治療剤の設計方法が提供される。例えば、１つの態様では、Ｏｖｒ１０
７を標的にした抗体またはこのような抗体の断片などの治療剤は、疾患または状
態を検出または診断する目的で、患者におけるＯｖｒ１０７の局在を処置、検出
またはイメージ化するために用いることができる。この態様において、検出され
た標識抗体の量が正常組織に比べ増加している場合は、腫瘍の転移または成長の
指標となる。このような抗体は、ポリクローナル、モノクローナルまたはオムニ
クローナル（omniclonal）であることができ、または分子生物学的技術により調
整することができる。ここで、そして、本明細書を通じて用いる場合、「抗体」
という用語はまた、ＳＥＬＥＸと呼ばれる当業者によく知られたin vitroでの進
化手順(evolution protocol)により誘導されたものなどのアプタマーおよび一本
鎖オリゴヌクレオチドを含むこととする。抗体は、放射性同位体および常磁性金
属を含むがこれらに限定されない様々な検出可能な標識で標識することができる
。また、Ｏｖｒ１０７の濃度および／または活性を減少させる小分子および抗体
またはそれらの断片などの治療剤を、Ｏｖｒ１０７の過剰発現を特徴とする疾患
の処置に用いることができる。このような剤は、本明細書の教示に従い容易に同
定することができる。

【００１４】 本発明のその他の目的、特徴、利点および側面は、以下の説明により当業者に
明らかになるだろう。しかしながら、以下の説明および具体例は、本発明の好ま
しい態様を示しているが、ただ説明のためにのみ与えられていると理解されるべ
きである。本開示発明の精神および範囲内の様々な変化および変更は、以下の説
明を読み、本開示の他の部分を読むことにより、当業者に容易に明らかになるだ
ろう。

【００１５】発明の説明 本発明は、なかでも、Ｏｖｒ１０７のレベルを正常ヒト対照におけるＯｖｒ１
０７のレベルと比較することにより、癌の検出、診断、モニタリング、ステージ
ング、予後判定、in vivoでのイメージングおよび処置のための量的および質的
な診断アッセイおよび診断方法に関する。Ｏｖｒ１０７は、中でも、配列番号１
のポリヌクレオチド配列を含む遺伝子により発現される天然のタンパク質に関す
る。本明細書で「Ｏｖｒ１０７」はまた、遺伝子コーディングの縮重により、配
列番号１または２とは異なる核酸配列を含むが、同じタンパク質をコードしてい
るポリヌクレオチドも意味する。別の側面では、本明細書で用いるＯｖｒ１０７
により意味されるものは、配列番号１を含む遺伝子によりコードされる天然のｍ
ＲＮＡを意味し、または、配列番号１または２を含む遺伝子自体、または、配列
番号１のアンチセンス配列にストリンジェントな条件下でハイブリダイズするこ
とが可能なポリヌクレオチドのレベルに関し得る。このようなレベルは好ましく
は、細胞、組織および／または体液のうちの少なくとも１つにおいて測定し、正
常および異常レベルの決定を含む。したがって、例えば、正常対照の体液、細胞
または組織試料に比較したＯｖｒ１０７の過剰発現を診断するための本発明によ
る診断アッセイは、卵巣癌を含む癌の存在を診断するのに用いることができる。
Ｏｖｒ１０７は、本発明の方法においては単独で測定しても、または、より好ま
しくは、他の癌の診断マーカーと組合せて測定してもよい。したがって、本発明
の方法は、Ｏｖｒ１０７と同様に他の癌マーカーのレベルの測定と組合せて使う
ことが好ましい。本発明に有用な、Ｏｖｒ１０７以外の他の癌マーカーは、当業
者に知られており、テストする癌に依存するだろう。

【００１６】 Ｏｖｒ１０７の検出は、卵巣癌において特に有用である。しかしながら、この
マーカーはまた、他の種類の癌の診断、予後判定、ステージング、イメージング
および処置にも有用である。

【００１７】診断アッセイ 本発明は、ヒト患者からの細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７のレベ
ルの、正常ヒト対照からの好ましくは同種の細胞、組織または体液におけるＯｖ
ｒ１０７のレベルと比較した場合の変化を分析することにより、卵巣癌を含む癌
の存在を診断する方法を提供し、ここで患者におけるＯｖｒ１０７のレベルの正
常ヒト対照に対する増加が癌の存在に関係している。 本発明を限定することなく、量的診断アッセイにおいては、通常、テストした
患者が癌を有することを示す陽性結果は、細胞、組織または体液におけるＯｖｒ
１０７などの癌マーカーのレベルが、正常ヒト対照の好ましくは同じ細胞、組織
または体液におけるより、少なくとも２倍高い、最も好ましくは５倍高い結果で
ある。

【００１８】 本発明はまた、まだ転移していない癌を有する患者において、転移性の卵巣癌
を含む転移性の癌を診断する方法も提供する。本発明の方法では、転移した可能
性のある（しかし、事前に転移したことが知られていない）癌を有する疑いのあ
る患者を特定する。これは、当業者に知られた様々な手段によって達成される。
例えば、卵巣癌においては、患者は通常、従来の検出方法に従って卵巣癌と診断
されている。 本発明において、細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７の存在を決定す
ることは、転移していない癌と転移した癌とを区別するのに特に有用である。既
存の技術は、転移した癌と転移していない癌とを区別することが困難である。し
かしながら、適切な処置の選択はしばしばこうした知識に依存している。

【００１９】 本発明では、ヒト患者の細胞、組織または体液において測定された癌マーカー
レベルの１つはＯｖｒ１０７である。ヒト患者におけるレベルは、正常ヒト対照
の好ましくは同種の細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７レベルと比較さ
れる。つまり、観察された癌マーカーが血清中のＯｖｒ１０７である場合、この
レベルは好ましくは正常ヒト対照の血清中のＯｖｒ１０７レベルと比較される。
ヒト患者におけるＯｖｒ１０７の正常ヒト対照に対する増加は、転移した癌と関
係している。

【００２０】 本発明を限定することなく、量的診断アッセイにおいては、通常、テストした
またはモニタリングした患者の癌が転移したことを示す陽性結果は、細胞、組織
または体液におけるＯｖｒ１０７などの癌マーカーのレベルが、正常ヒト対照の
好ましくは同じ細胞、組織または体液におけるより、少なくとも２倍高い、最も
好ましくは５倍高い結果である。 ここで用いる正常ヒト対照は、癌のないヒト患者および／または患者からの非
癌性試料を含む。転移の診断またはモニタリングの方法において、正常ヒト対照
は、転移する前の同一の患者からの試料など、転移していない卵巣癌などの癌を
有することが信頼できる方法で決定されたヒト患者からの試料を含むことが好ま
しい。

【００２１】ステージング 本発明はまた、ヒト患者において癌をステージングする方法も提供する。 該方法は、癌を有するヒト患者を特定し、このような患者の細胞、組織または
体液試料をＯｖｒ１０７について分析することを含む。測定したＯｖｒ１０７の
レベルは、次に、正常ヒト対照の好ましくは同種の細胞、組織または体液におけ
るＯｖｒ１０７レベルと比較され、ここでヒト患者におけるＯｖｒ１０７のレベ
ルの正常ヒト対照に対する増加が進行している癌に関係し、そして、Ｏｖｒ１０
７のレベルの減少が消退しているまたは寛解期にある癌に関係する。

【００２２】モニタリング さらに提供されるのは、ヒト患者における癌を、転移の開始についてモニタリ
ングする方法である。該方法は、転移を有するとは知られていない癌を有するヒ
ト患者を特定し、このような患者からの細胞、組織または体液をＯｖｒ１０７に
ついて定期的に分析し、そして、このような細胞、組織または体液におけるＯｖ
ｒ１０７のレベルを正常ヒト対照の好ましくは同種の細胞、組織または体液にお
けるＯｖｒ１０７のレベルと比較することを含み、ここで患者におけるＯｖｒ１
０７のレベルの正常ヒト対照に対する増加が転移した癌に関係する。

【００２３】 本発明によりさらに提供されるのは、癌のステージの変化をモニタリングする
方法である。該方法は、癌を有するヒト患者を特定し、このような患者からの細
胞、組織または体液をＯｖｒ１０７について定期的に分析し、そしてこのような
細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７のレベルを正常ヒト対照の好ましく
は同種の細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７のレベルと比較することを
含み、ここで患者におけるＯｖｒ１０７のレベルの正常ヒト対照に対する増加が
ステージの進行している癌に関係し、そして、Ｏｖｒ１０７のレベルの減少がス
テージの後退しているまたは寛解期にある癌に関係する。

【００２４】 このような患者を転移の開始についてモニタリングする場合は、定期的に、そ
して好ましくは年４回を基礎に行なう。しかしながら、癌、特定の患者、および
癌のステージによってはより高頻度に、または、より低頻度に行なってもよい。

【００２５】予後判定テストおよび臨床試験のモニタリング ここに記載した方法は、さらに、Ｏｖｒ１０７のレベルの増加に関係する疾患
または異常を有するかまたは進行させる危険がある対象を特定するための予後判
定アッセイに用いることができる。本発明は、テスト試料がＯｖｒ１０７が検出
されたヒト患者から得られたものである方法を提供する。正常ヒト対照に比較し
て高いレベルのＯｖｒ１０７の存在は、該ヒト患者が癌、特に卵巣癌を進行させ
る危険があるという診断である。

【００２６】 Ｏｖｒ１０７の発現または活性を減少させる治療剤の有効性はまた、臨床試験
でのヒト患者、または、ヒト細胞などにおけるin vitroのスクリーニングアッセ
イおけるＯｖｒ１０７の発現レベルを分析することによりモニタリングできる。
このように、遺伝子発現パターンは、ヒト患者、または、場合によっては細胞の
、テストされた剤への生理学的反応を示すマーカーとして利用できる。

【００２７】遺伝子の損傷または突然変異の検出 本発明の方法は、Ｏｖｒ１０７における遺伝子損傷または突然変異を検出し、
それにより遺伝子損傷を有するヒトが癌の危険を有するか、または、癌、特に卵
巣癌を有するか決定することにも用いることができる。遺伝子の損傷は、例えば
、Ｏｖｒ１０７からの１個または２個以上のヌクレオチドの欠失および／または
付加および／または置換の存在、Ｏｖｒ１０７の染色体再構成の存在、Ｏｖｒ１
０７の異常修飾（ゲノムＤＮＡのメチル化パターンなど）、Ｏｖｒ１０７のｍＲ
ＮＡ転写物の非野生型スプライシングパターンの存在、Ｏｖｒ１０７の対立遺伝
子の欠失、および／またはＯｖｒ１０７タンパク質の不適切な翻訳後修飾の存在
を確認することにより検出できる。本発明のＯｖｒ１０７におけるこのような損
傷を検出する方法は、当業者に知られている。

【００２８】アッセイ技術 ヒト由来の試料において、本発明のＯｖｒ１０７などの遺伝子発現レベル(タ
ンパク質レベルを含む)を決定するのに用いることができるアッセイ技術は当業
者によく知られている。このようなアッセイ方法は、ラジオイムノアッセイ、逆
転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ‐ＰＣＲ）アッセイ、免疫組織化学アッセイ、in situハ
イブリダイゼーションアッセイ、結合蛋白競合アッセイ、ウェスタンブロット分
析、ＥＬＩＳＡアッセイおよびプロテオミクスアプローチ（proteomic approach
e）、２次元ゲル電気泳動(２Ｄ電気泳動)および質量分析またはタンパク質相互
作用プロファイリングなどのゲルに基づかないアプローチを含む。これらの中で
、ＥＬＩＳＡが、生物学的液体における遺伝子の発現タンパク質の診断に好まれ
ることが多い。

【００２９】 もし商業的に容易に入手できない場合、ＥＬＩＳＡ分析は、最初に、Ｏｖｒ１
０７に特異的な抗体、好ましくはモノクローナル抗体の調整を含む。さらに、一
般的に、Ｏｖｒ１０７に特異的に結合するレポーター抗体が調整される。レポー
ター抗体は、放射性試薬、蛍光試薬または例えば西洋ワサビペルオキシダーゼ酵
素またはアルカリホスファターゼなどの酵素試薬などの検出可能な試薬に付着し
ている。

【００３０】 ＥＬＩＳＡを行なう場合、Ｏｖｒ１０７に特異的な抗体は、例えばポリスチレ
ンディッシュなどの、抗体を結合する固形支持体上でインキュベートされる。次
に、ディッシュ上の任意の遊離タンパク質結合部位（free protein binding sit
es）は、ウシ血清アルブミンなどの非特異的タンパク質とインキュベートするこ
とにより被覆される。次に、分析される試料は、Ｏｖｒ１０７がポリスチレンデ
ィッシュに付着した特異抗体に結合する時間中、ディッシュ内でインキュベート
される。非結合試料はバッファーで洗い流される。Ｏｖｒ１０７を特異的に指向
し、西洋ワサビペルオキシダーゼなどの検出可能な試薬を連結したレポーター抗
体がディッシュ内に設置され、該レポーター抗体がＯｖｒ１０７に結合した任意
のモノクローナル抗体に結合する。次に非付着レポーター抗体が洗い流される。
比色基質を含むペルオキシダーゼ活性のための試薬が、次にディッシュに加えら
れる。Ｏｖｒ１０７抗体に連結した、固定化したペルオキシダーゼが着色反応産
物を産生する。所定の時間内に発生した色素の量は、試料中のＯｖｒ１０７タン
パク質の量に比例している。量的な結果は、通常標準曲線を参照して得られる。

【００３１】 競合アッセイもまた用いることができ、そこでは、Ｏｖｒ１０７の特異抗体が
固形支持体に付着しており、標識したＯｖｒ１０７および患者またはヒト対照に
由来する試料が固形支持体上を通過する。固形支持体に付着した検出標識量を試
料中のＯｖｒ１０７の量に相関させることができる。

【００３２】 本発明のＯｖｒ１０７の核酸配列の全てまたは一部をハイブリダイゼーション
プローブとして用いた核酸法（nucleic acid method）もまた、卵巣癌を含む癌
のマーカーとしてのＯｖｒ１０７のｍＲＮＡを検出するのに用いることができる
。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、およびリガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）および
核酸配列をもとにした増幅（ＮＡＳＡＢＡ）などのその他の核酸法を、様々な悪
性腫瘍を診断およびモニタリングするための悪性細胞の検出に用いることができ
る。例えば、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ‐ＰＣＲ）は、特定のｍＲＮＡ集団の存在
を、何千ものその他のｍＲＮＡ種の複雑な混合物の中で検出するために用いるこ
とができる強力な技術である。ＲＴ‐ＰＣＲにおいては、１種類のｍＲＮＡが、
酵素である逆転写酵素を用いて最初に相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に逆転写され、次
に該ｃＤＮＡが標準的なＰＣＲ反応と同様に増幅される。このように、ＲＴ‐Ｐ
ＣＲは、増幅により、単一種のｍＲＮＡの存在を明らかにすることができる。し
たがって、該ｍＲＮＡがそれを産生する細胞に高度に特異的である場合、ＲＴ‐
ＰＣＲは、特定の種類の細胞の存在を同定するのに用いることができる。

【００３３】 固形支持体に配列（つまりグリッド化（gridding））されたクローンまたはオ
リゴヌクレオチドへのハイブリダイゼーションは、その遺伝子の発現の検出およ
び発現レベルの定量の両方に用いることができる。この手法では、Ｏｖｒ１０７
遺伝子をコードするｃＤＮＡが基材に固定される。基材は、ガラス、ニトロセル
ロース、ナイロンまたはプラスチックを含むがこれらに限定されない任意の好適
な種類であってもよい。Ｏｖｒ１０７遺伝子をコードするＤＮＡの少なくとも一
部を基材に付着させ、次に、当該組織から単離したＲＮＡまたはＲＮＡのコピー
である相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）であってもよい検体とインキュベートする。基材
に結合したＤＮＡと検体とのハイブリダイゼーションは、検体またはハイブリッ
ド検出用の二次分子を放射性標識または蛍光標識することを含むがこれらに限定
されないいくつかの手段で検出し定量することができる。遺伝子の発現レベルの
定量は、検体からの信号の強度を、既知の標準から決定したレベルと比較するこ
とによってなされる。標準は、標的遺伝子のin vitroでの転写、収量の定量化、
そして、この材料を用いて標準曲線を作成することにより得ることができる。

【００３４】 プロテオミクスアプローチでは、２次元電気泳動が当業者によく知られた技術
である。血清などの試料からの個別のタンパク質の単離は、通常ポリアクリルア
ミドゲル上での、タンパク質の異なる特性による配列決定的な分離（sequential
separation）を用いて達成される。最初に、タンパク質は電流を用いて大きさ
により分離される。電流は全てのタンパク質に均等に作用し、それにより、小さ
いタンパク質は大きいタンパク質よりもゲル上で早く移動する。第２次元では、
第１次元に対して直角に電流をかけ、タンパク質を大きさに基づいてではなく、
各タンパク質が有する特定の電荷に基づいて分離する。異なる配列の２つのタン
パク質で大きさおよび電荷の両方に関して同一なものは存在しないため、２次元
分離の結果は、各タンパク質が固有のスポットを占有する正方形のゲルとなる。
該スポットの化学的プローブまたは抗体プローブによる分析、またはそれに引き
続くタンパク質のマイクロシーケンスにより、所定のタンパク質の相対的な存在
度を明らかにし、試料中のタンパク質の同定をすることができる。

【００３５】 上記のテストは、組織生検材料および検死解剖材料を含む患者から得られた様
々な細胞、体液および／または組織抽出物（ホモジネートまたは可溶化した組織
）に由来する試料について行なうことができる。本発明に有用な体液は、血液、
尿、唾液または任意のその他の体分泌物またはそれらの派生物を含む。血液は、
全血、血漿、血清、または任意の血液の派生物を含む。

【００３６】Ｏｖｒ１０７の in vivoでのターゲティング／癌治療 Ｏｖｒ１０７の同定はまた、癌、そして特に卵巣癌のイメージングおよび処置
のための新しい治療法の合理的な設計にとって有用である。例えば、１つの態様
では、Ｏｖｒ１０７に特異的に結合する抗体を作製し、癌を患っている疑いのあ
る患者にin vivoで用いることができる。Ｏｖｒ１０７に特異的に結合する抗体
は、癌を有する疑いのある患者に、診断および／または治療の目的で、注射する
ことができる。in vivoでの診断のための抗体の調整および使用は当該分野でよ
く知られている。たとえば、インジウム−１１１で標識した抗体−キレーターが
、癌胎児性抗原を発現している腫瘍のラジオイムノシンチグラフィーによるイメ
ージングでの使用に関して記述されている（Sumerdon et al. Nucl. Med. Biol.
1990 17:247-254）。特にこれらの抗体‐キレーターは、再発性の結腸直腸癌を
有する疑いのある患者において腫瘍を検出するのに用いられた（Griffin et al.
J. Clin. Onc. 1991 9:631-640）。磁気共鳴イメージングで用いる標識として
の常磁性イオンを有する抗体もまた記述されている（Lauffer, R.B. Magnetic R
esonance in Medicine 1991 22:339-342）。Ｏｖｒ１０７に対する抗体も同様に
用いることができる。Ｏｖｒ１０７に特異的に結合する標識された抗体を、癌を
有する疑いのある患者に、該患者の疾患の状態の診断またはステージングの目的
で注射することができる。用いる標識は、用いるイメージングの様式に応じて選
択できる。例えば、インジウム‐１１１、テクネチウム‐９９ｍまたはヨウ素‐
１３１などの放射性標識は、平面スキャンまたはシングルフォトン断層撮影に用
いることができる。フッ素‐１８（Ｆｌｕｏｒｉｎｅ−１８）などのポジトロン
放出標識をポジトロン断層撮影に用いることができる。ガドリニウム（ＩＩＩ）
またはマンガン（ＩＩ）などの常磁性イオンを磁気共鳴イメージングに用いるこ
とができる。標識の局在性は、癌の播種の決定を可能にする。また、器官または
組織内の標識の量により、その器官または組織における癌の存在または欠如を決
定することができる。

【００３７】 癌、そして特に卵巣癌と診断された患者にとって、Ｏｖｒ１０７に特異的に結
合する抗体の注射もまた、治療上有益なことがある。抗体は単独でその治療効果
を発揮するかもしれない。あるいは、該抗体を薬剤、毒素または放射性核種など
の細胞毒性剤と結合させ、その治療効果を増強することができる。モノクローナ
ル抗体薬剤は、当該分野において、例えばGarnett and Baldwin, Cancer Resear
ch 1986 46:2407-2412により記載されている。また、様々な癌の治療のために毒
素を結合したモノクローナル抗体を使用することは、Pastan et al. Cell 1986
47:641-648により記載されている。イットリウム−９０標識モノクローナル抗体
が、正常組織への毒性を制限しながら腫瘍に送達される用量を最大化することが
記載されている(Goodwin and Meares Cancer Supplement 1997 80:2675-2680)。
銅−６７、ヨウ素−１３１およびレニウム−１８６を含むがそれらに限定されな
いその他の細胞毒性放射性核種もまた、Ｏｖｒ１０７に対する抗体の標識に用い
ることができる。

【００３８】 in vivoでの方法に用いることができる抗体は、ポリクローナル、モノクロー
ナルおよびオムニクローナル抗体、および分子生物学的技術により調整した抗体
を含む。ＳＥＬＥＸと呼ばれる、当業者によく知られた進化手順に由来するもの
などの抗体断片およびアプタマーおよび一本鎖オリゴヌクレオチドもまた用いる
ことができる。

【００３９】スクリーニングアッセイ 本発明はまた、Ｏｖｒ１０７タンパク質に結合する調節物質、または、Ｏｖｒ
１０７タンパク質の発現または活性に関して調節効果を有する調節物質を同定す
る方法も提供する。Ｏｖｒ１０７タンパク質の発現または活性を減少させる調節
物質は、癌の処置に有用と思われる。このようなスクリーニングアッセイは、当
業者に知られており、細胞に基づくアッセイおよび細胞を用いないアッセイを含
むが、これらに限定されない。

【００４０】 コンピューターイメージングによりＯｖｒ１０７の領域に特異的に結合すると
予測された小分子もまた、癌のイメージングおよび処置に用いるために設計し、
合成し、そしてテストすることができる。さらに、分子のＯｖｒ１０７への結合
能力を調査することにより潜在的な抗癌剤について、分子ライブラリーをスクリ
ーニングすることができる。ライブラリーにおいて、Ｏｖｒ１０７に結合できる
と同定された分子は、癌の処置に用いるためのさらなる評価への重要な候補であ
る。好ましい態様では、これらの分子は、細胞におけるＯｖｒ１０７の発現およ
び／または活性を下方調節することができる。

【００４１】養子免疫療法およびワクチン 癌の養子免疫療法は、抗腫瘍反応性を有する免疫細胞を腫瘍保有宿主に投与し
、該細胞が直接または間接に、定着した腫瘍の消退を誘導することを目的とする
治療的手法に関する。リンパ球、特にＴリンパ球の移入はこの部類に該当し、国
立癌研究所（National Cancer Institute）（ＮＣＩ）の研究者は、いくつかの
ヒトの癌の処置に、末梢血リンパ球または、皮下リンパ節の生検からのＴ細胞を
培養した腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の自家輸血を用いた（Rosenberg, S. A.,
米国特許第４，６９０，９１４号、１９８７年９月１日発行；Rosenberg, S. A.
, et al., 1988, N. England J. Med. 319:1676-1680）。

【００４２】 本発明は、ヒトにおける癌の予防および／または処置のための、熱ショックタ
ンパク質（ｈｓｐ）の非共有複合体（non-covalent complexes）を含むまたは含
まない抗原性のＯｖｒ１０７タンパク質に対して感作したマクロファージを用い
た養子免疫療法の組成物および方法に関する。Ｏｖｒ１０７の抗原性または免疫
原性は、Ｏｖｒ１０７タンパク質またはその断片の、抗体を産生し、または、ナ
イーブなエフェクター細胞を感作し、次いで抗原（またはエピトープ）を発現す
る標的細胞を溶解する能力により容易に確認された。

【００４３】 癌細胞は、その定義から、異常であり、正常な組織に存在しないために免疫系
が外来性と認識するタンパク質を含んでいる。しかしながら、免疫系はしばしば
この異常を無視するようであり、腫瘍の攻撃に失敗する。癌細胞により産生され
た外来性のＯｖｒ１０７タンパク質は、それらの存在を明らかにするのに用いる
ことができる。Ｏｖｒ１０７は腫瘍抗原と呼ばれる短い断片に崩壊し、細胞表面
に現れる。これらの腫瘍抗原は、クラスＩおよびＩＩの２つの種類があるＭＨＣ
と呼ばれる分子により細胞表面に支持または提示される。ＭＨＣクラスＩ分子に
関する腫瘍抗原は細胞傷害性Ｔ細胞に認識されるが、抗原‐ＭＨＣクラスＩＩ複
合体は、ヘルパー細胞と呼ばれるＴ細胞の２番目のサブセットにより認識される
。これらの細胞は、腫瘍の成長を遅延または停止させるサイトカインを分泌し、
他の種類の白血球であるＢ細胞が、腫瘍細胞に対する抗体を産生するのを補助す
る。

【００４４】 養子免疫療法では、Ｔ細胞またはその他の抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、体の外
（ex vivo）で、腫瘍特異的Ｏｖｒ１０７抗原を用いて刺激される。刺激された
細胞は、次に患者へ自家輸血され、そこで癌細胞を攻撃する。研究により、細胞
傷害性Ｔ細胞とヘルパーＴ細胞の両方を用いた方が、どちらか一方のサブセット
だけを用いるのに比べはるかに有効であることが示された。さらに、米国特許第
５，９８５，２７０号に記載されているように、ＡＰＣを刺激するためにＯｖｒ
１０７抗原は熱ショックタンパク質と複合体化してもよい。

【００４５】 ＡＰＣは、マクロファージ、樹状細胞、Ｂリンパ球およびこれらの組合せを含
むがこれらに限定されない、当業者に知られたこれらの抗原提示細胞の中から選
択することができ、好ましくはマクロファージである。好ましい使用においては
、細胞はその個体の自家細胞であり、リンパ球、マクロファージまたはその他の
ＡＰＣなどの自家免疫細胞が、養子移植のための免疫細胞のドナーとして誰を選
択するかという問題を回避するために用いられる。自家免疫細胞の使用によって
回避できるその他の問題は、移植片対宿主病であり、これは処置に失敗すると致
命的となることがある。

【００４６】 遺伝子治療を伴う養子免疫療法では、従来の遺伝子治療と同様にＯｖｒ１０７
のＤＮＡをエフェクター細胞に導入することができる。これにより、エフェクタ
ー細胞の腫瘍細胞に対する細胞傷害性を、それらを抗原性タンパク質を産生する
ように操作しているために向上することができ、それにより養子免疫療法の改善
がもたらされる。 この発明のＯｖｒ１０７抗原は、癌ワクチンの成分としてもまた有用である。
ワクチンは、免疫刺激量（immunogenically stimulatory amount）のＯｖｒ１０
７抗原を含む。免疫刺激量とは、レシピエントに、癌の改善または処置のために
所望する免疫反応を惹起することが可能な抗原の量のことをいう。有効な量は、
当業者によく知られた標準的な手順により経験的に決定してもよい。

【００４７】 Ｏｖｒ１０７抗原は、例えば抗体および／または細胞媒介性の所望する種類の
免疫反応を誘導するための多くの任意のワクチン製剤に提供されてもよい。この
ような製剤は当該分野に知られており、米国特許第５，５８５，１０３号に記載
されているような製剤を含むが、それらに限定されない。免疫反応を刺激するの
に用いられる本発明のワクチン製剤はまた、薬学的に許容し得るアジュバントを
含むことができる。

【００４８】例 本発明を、以下の例でさらに説明する。当該例は、特定の態様の参照により単
に本発明を説明するためだけに提供される。この例示は、本発明のある特定の側
面を説明するが、該開示発明の限定を記述するものでも、また、その範囲を制限
するものでもない。 本明細書に記載された実験は、詳細に記載されている場合を除き、当業者によ
く知られ、定法となっている標準的な技術を用いて行なった。定法による分子生
物学的技術は、Sambrook et al., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2
nd Ed.; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1
989)などの標準的な実験手引書に記載されている通りに行なった。

【００４９】遺伝子発現の相対定量 蛍光Ｔａｑｍａｎプローブによるリアルタイム定量ＰＣＲは、Ｔａｑ ＤＮＡ
ポリメラーゼの５’−３’ヌクレアーゼ活性を用いた定量検出システムである。
この方法は、５’レポーター色素および下流側の３’消光色素でラベルされた内
部蛍光オリゴヌクレオチドプローブ（internal fluorescent oligonucleotide p
robe）（Ｔａｑｍａｎ）を用いる。ＰＣＲ中、Ｔａｑ ＤＮＡポリメラーゼの５
’−３’ヌクレアーゼ活性はレポーターを放出し、その蛍光はModel 7700 Seque
nce Detection System（PE Applied Biosystems, Foster City, CA, USA）のレ
ーザー検出器で検出できる。

【００５０】 反応に加えたＲＮＡ試料の量を標準化し、逆転写酵素の効率を正規化するのに
内在性対照の増幅を用いる。シクロフィリン、グリセルアルデヒド−３−リン酸
デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）または１８ＳリボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）の
いずれかをこの内在性対照として用いる。調査した全試料間の相対定量を計算す
るために、１つの試料の標的ＲＮＡレベルを比較結果（キャリブレータ）の基礎
として用いた。「キャリブレータ」に関する定量は、標準曲線法または比較法を
用いて得ることができる（User Bulletin #2: ABI PRISM 7700 Sequence Detect
ion System）。

【００５１】 正常および癌組織の各例について標的遺伝子の組織分布およびレベルを評価し
た。全ＲＮＡを、正常組織、癌組織、および癌とその対応する隣接組織から抽出
した。次に、逆転写酵素により第一鎖ｃＤＮＡを調整し、各標的遺伝子に特異的
なプライマーおよびＴａｑｍａｎプローブを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行っ
た。結果をABI PRISM 7700 Sequence Detectorで分析した。無名数は、キャリブ
レータ組織と比較した特定の組織における標的遺伝子の相対発現レベルである。 発現分析に用いたプライマーは、 リバース：5'-CCCAATAGCGGAAGTCGATCT-3'（配列番号２） フォワード：5'-CACTCCCAGCCAGTCCAGAT-3'（配列番号３） Ｏｖｒ１０７プローブ：5'-AATCTGCTCCGGCCCTGGTCTT-3'(配列番号４)を含む。

【００５２】 表１に示した無名数は、１２の異なる正常組織におけるＯｖｒ１０７（クロー
ンID 817834；遺伝子ID 403869とも呼ばれる）の相対発現レベルである。すべて
の数値は正常膵臓（キャリブレータ）と比較してある。これらのＲＮＡ試料は、
異なる個体からの特定組織のプール試料に由来する、商業的に入手可能なプール
である。

【００５３】

【表１】

【００５４】 表１の発現の相対レベルによると、Ｏｖｒ１０７が分析した全ての正常組織で
発現していることが分かる。胃が３８．５９と最も高い相対発現レベルを示し、
肝臓が０．０８で最も低い発現値を示した。 表１の無名数は、異なる個体からの特定組織の試料プールを分析して得た。こ
れらを単一の個体の組織試料から得たＲＮＡに由来する表２の無名数と比較する
ことはできない。

【００５５】 表２に示した無名数は、４７組の対応試料におけるＯｖｒ１０７の相対発現レ
ベルを示している。すべての数値は正常膵臓（キャリブレータ）と比較してある
。対応ペアは、特定組織の癌試料からのｍＲＮＡと、同一個体のその同一組織に
ついての正常隣接組織からのｍＲＮＡにより形成した。さらに、１２の対応して
いない癌試料(卵巣由来)および１４の対応していない正常試料(卵巣由来)もテス
トした。

【００５６】

【表２】

【００５７】

【表３】

【００５８】

【表４】

【００５９】 表１および表２は合わせて、合計１５の異なる種類の組織からの１３２の試料
を示している。 表２に示すように、分析した１４の異なる組織からの１２０の試料全てがＯｖ
ｒ１０７の発現を示していた(発現値＞０．００)。

【００６０】 さらに、ｍＲＮＡの発現レベルを、対応していない卵巣試料を除き、癌試料と
同一個体からの同系の正常隣接組織とで比較した。この比較は、癌の特異性につ
いての指標を提供する（例えば、正常隣接組織に比較した、癌試料におけるｍＲ
ＮＡの高い発現レベル）。表２は、分析した４７の対応試料のうち３５(卵巣１
、膵臓、前立腺、小腸１および２、精巣、子宮１、２および４、膀胱、子宮内膜
１、４、５、６、７および１０、腎臓２、３および４、肝臓２、肺２、３、４お
よび５、乳腺１、２、３および４、結腸１、２、４および５、および、胃３、４
および５)(７４％)でＯｖｒ１０７が過剰発現していることを示している。

【００６１】 対応していない卵巣試料については、１３の癌試料のうち１１(８５％)が、対
応していない正常卵巣試料の中央値(１．８２)よりも高いＯｖｒ１０７の発現値
を示し、１３のうち１０(７７％)が正常卵巣で見られた最高値よりも高い発現値
を示した。 つまり、広範な組織分布に加え、大半の癌試料において正常試料に比べｍＲＮ
Ａが過剰発現していることは、Ｏｖｒ１０７が卵巣癌だけでなく、癌一般のマー
カーであることを示すものである。

【配列表】

【手続補正書】

【提出日】平成１４年６月４日（２００２．６．４）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００６１

【補正方法】変更

【補正の内容】

【００６１】 対応していない卵巣試料については、１２の癌試料のうち１１(９２％)が、対
応していない正常卵巣試料の中央値(１．８２)よりも高いＯｖｒ１０７の発現値
を示し、１２のうち１０(８３％)が正常卵巣で見られた最高値よりも高い発現値
を示した。 つまり、広範な組織分布に加え、大半の癌試料において正常試料に比べｍＲＮ
Ａが過剰発現していることは、Ｏｖｒ１０７が卵巣癌だけでなく、癌一般のマー
カーであることを示すものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 33/50 33/50 Ｚ (72)発明者 ルー，シン チーアン アメリカ合衆国 カリフォルニア州 94041、マウンテン ビュー、＃３、チキ ータ アベニュー 465 (72)発明者 レシポン，ハーヴ アメリカ合衆国 カリフォルニア州 94115、サン フランシスコ、フォーチュ ナ アベニュー 85 (72)発明者 スン，ヨンミン アメリカ合衆国 カリフォルニア州 95128、サン ホセ、エス．ウィンチェス ター ブルバード 869、アパートメント 260 Ｆターム(参考） 2G045 AA26 AA40 CA25 CA26 CB01 CB02 CB03 CB07 DA12 DA13 DA14 DA36 DA78 FB02 FB03 FB08 FB12 4C084 AA17 NA14 ZB262 4C085 AA03 AA13 AA14 AA26 BB11 HH03 HH07 KA03 KA28 KA29 KB07 KB09 KB18 LL12 LL18

Claims (16)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｏｖｒ１０７を含む、癌用診断マーカー。
2. 【請求項２】 Ｏｖｒ１０７が配列番号１を含む、請求項１に記載の診断マ
   ーカー。
3. 【請求項３】 患者における癌の存在を診断する方法であって、 （ａ）患者の細胞、組織または体液におけるＯｖｒ１０７のレベルを決定するこ
   と、および （ｂ）決定したＯｖｒ１０７のレベルと、正常ヒト対照からの細胞、組織または
   体液におけるＯｖｒ１０７のレベルとを比較することを含み、該患者における決
   定したＯｖｒ１０７レベルの正常ヒト対照に対する変化が癌の存在に関係してい
   る、前記方法。
4. 【請求項４】 患者における癌の転移を診断する方法であって、 （ａ）転移したことが知られていない癌を有する患者を特定すること、 （ｂ）該患者からの細胞、組織または体液の試料におけるＯｖｒ１０７のレベル
   を決定すること、および （ｃ）決定したＯｖｒ１０７レベルと、正常ヒト対照の細胞、組織または体液に
   おけるＯｖｒ１０７のレベルとを比較することを含み、患者における決定したＯ
   ｖｒ１０７レベルの正常ヒト対照に対する増加が転移した癌に関係している、前
   記方法。
5. 【請求項５】 癌を有する患者における癌のステージングの方法であって、
   （ａ）癌を有する患者を特定すること、 （ｂ）該患者からの細胞、組織または体液の試料におけるＯｖｒ１０７のレベル
   を決定すること、および （ｃ）決定したＯｖｒ１０７レベルと、正常ヒト対照の細胞、組織または体液に
   おけるＯｖｒ１０７のレベルとを比較することを含み、該患者における決定した
   Ｏｖｒ１０７レベルの正常ヒト対照に対する増加が進行している癌に、そして決
   定したＯｖｒ１０７レベルの低下が消退している癌または寛解期の癌に関係して
   いる、前記方法。
6. 【請求項６】 患者において、転移の開始について癌をモニタリングする方
   法であって、 （ａ）転移したことが知られていない癌を有する患者を特定すること、 （ｂ）該患者からの細胞、組織または体液の試料におけるＯｖｒ１０７のレベル
   を定期的に決定すること、および （ｃ）定期的に決定したＯｖｒ１０７レベルと、正常ヒト対照の細胞、組織また
   は体液におけるＯｖｒ１０７のレベルとを比較することを含み、患者における任
   意の定期的に決定したＯｖｒ１０７レベルの正常ヒト対照に対する増加が転移し
   た癌に関係している、前記方法。
7. 【請求項７】 患者における癌のステージの変化をモニタリングする方法で
   あって、 （ａ）癌を有する患者を特定すること、 （ｂ）該患者からの細胞、組織または体液の試料におけるＯｖｒ１０７のレベル
   を定期的に決定すること、および （ｃ）定期的に決定したＯｖｒ１０７レベルと、正常ヒト対照の細胞、組織また
   は体液におけるＯｖｒ１０７のレベルとを比較することを含み、該患者における
   任意の定期的に決定したＯｖｒ１０７レベルの正常ヒト対照に対する増加がステ
   ージの進行している癌に、そして低下がステージの後退している癌または寛解期
   の癌に関係している、前記方法。
8. 【請求項８】 癌のイメージングおよび処置に用いる潜在的な治療剤を特定
   する方法であって、Ｏｖｒ１０７への結合能力を減少させる能力について分子を
   スクリーニングすることを含み、分子のＯｖｒ１０７への結合能力を減少させる
   能力が、当該分子の癌のイメージングおよび処置における有用性を示す、前記方
   法。
9. 【請求項９】 Ｏｖｒ１０７に特異的に結合する抗体。
10. 【請求項１０】 患者に請求項９に記載の抗体を投与することを含む、患者
    において癌をイメージングする方法。
11. 【請求項１１】 抗体が常磁性イオンまたは放射性同位体で標識されている
    、請求項１０に記載の方法。
12. 【請求項１２】 患者に請求項９に記載の抗体を投与することを含む、患者
    において癌を処置する方法。
13. 【請求項１３】 抗体が細胞毒性剤と結合している、請求項１２に記載の方
    法。
14. 【請求項１４】 患者にＯｖｒ１０７の発現または活性を下方調節する分子
    を投与することを含む、患者において癌を処置する方法。
15. 【請求項１５】 ヒト患者に免疫刺激量のＯｖｒ１０７タンパク質を、標的
    細胞に対して免疫反応が起こるように送達することを含む、Ｏｖｒ１０７を発現
    している標的細胞に対して免疫反応を誘導する方法。
16. 【請求項１６】 Ｏｖｒ１０７を含む、癌を処置するためのワクチン。