JP2003512024A5

JP2003512024A5 -

Info

Publication number: JP2003512024A5
Application number: JP2001508355A
Authority: JP
Filing date: 2000-06-27
Publication date: 2007-06-21

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号（SEQ ID NO)１７に示されたヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子またはその相補物。
【請求項２】
配列番号（SEQ ID NO)１８に示されたアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離された核酸分子またはその相補物。
【請求項３】
配列番号（SEQ ID NO)１８に示されたアミノ酸配列を含むポリペプチドの自然に発生する対立性変異体をコードする単離された核酸分子またはその相補物。
【請求項４】
配列番号（SEQ ID NO)１７に示されたヌクレオチド配列全体に対し、少なくとも５０％の相同性を持つヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子またはその相補物。
【請求項５】
配列番号（SEQ ID NO)１７に示されたヌクレオチド配列の少なくとも１５個の連続するヌクレオチドフラグメントを含む、単離された核酸分子またはその相補物。
【請求項６】
配列番号（SEQ ID NO)１８に示されたアミノ酸配列全体に対し、少なくとも５０％の相同性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離された核酸分子またはその相補物。
【請求項７】
請求項１から６のいずれかに記載の核酸分子、および異種ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子。
【請求項８】
請求項１から７のいずれかに記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項９】
発現ベクターである、請求項８に記載のベクター。
【請求項１０】
請求項９に記載の発現ベクターによりトランスフェクションされた宿主細胞。
【請求項１１】
前記細胞が微生物である請求項１０に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
前記細胞が、コリネバクテリウム属またはブレビバクテリウム属に属する請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１３】
前記核酸分子の発現により、前記細胞からのファインケミカルの製造が調節される請求項１０に記載の宿主細胞。
【請求項１４】
ファインケミカルが、有機酸、タンパク原アミノ酸および非タンパク原アミノ酸、プリンおよびピリミジン塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、脂質、飽和および不飽和の脂肪酸、ジオール、炭水化物、芳香族化合物、ビタミン、補助因子、ポリケチド、および酵素からなる群より選択される請求項１３に記載の宿主細胞。
【請求項１５】
適当な培地中で請求項１０に記載の宿主細胞を培養し、これによりポリペプチドを製造するポリペプチドの製造方法。
【請求項１６】
配列番号（SEQ ID NO)１８に示されたアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項１７】
配列番号（SEQ ID NO)１８に示されたアミノ酸配列を含むポリペプチドの、自然に発生する対立性変異体を含む単離されたポリペプチド。
【請求項１８】
配列番号（SEQ ID NO)１７に示されたヌクレオチド配列全体に対し、少なくとも５０％の相同性を持つヌクレオチド配列を含む核酸分子によりコードされた単離されたポリペプチド。
【請求項１９】
配列番号（SEQ ID NO)１８に示されたアミノ酸配列全体に対し、少なくとも５０％の相同性を持つアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド。
【請求項２０】
配列番号（SEQ ID NO)１８に示されたアミノ酸配列を含むポリペプチドフラグメントを含む単離されたポリペプチドであって、ポリペプチドフラグメントが配列番号（SEQ ID NO)１８のアミノ酸配列を含むポリペプチドの生物学的活性を維持している単離されたポリペプチド。
【請求項２１】
配列番号（SEQ ID NO)１７に示されたヌクレオチド配列を含む核酸分子によりコードされたアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド。
【請求項２２】
異種アミノ酸配列を含む、請求項１６から２１のいずれかに記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１０に記載の細胞を培養してファインケミカルを製造する、ファインケミカルの製造方法。
【請求項２４】
培養体からファインケミカルを回収する請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
細胞がコリネバクテリウム属またはブレビバクテリウム属に属する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞が、コリネバクテリウム−グルタミカム、コリネバクテリウム−ヘルキュリス、コリネバクテリウム−リリウム、コリネバクテリウム−アセトアシドフィリウム、コリネバクテリウム−アセトグルタミカム、コリネバクテリウム−アセトフィリウム、コリネバクテリウム−アンモニアゲン、コリネバクテリウム−フジオケンス、コリネバクテリウム−ニトリロフィリウス、ブレビバクテリウム−アンモニアゲン、ブレビバクテリウム−ブタニカム、ブレビバクテリウム−ジバリカツム、ブレビバクテリウム−フラビン、ブレビバクテリウム−ヘアリ、ブレビバクテリウム−ケトグルタミカム、ブレビバクテリウム−ケトソレダクタム、ブレビバクテリウム−ラクトフェルメンツム、ブレビバクテリウム−リネンス、ブレビバクテリウム−パラフィノリツカム、および表３に記載の株からなる群より選択される請求項２３に記載の方法。
【請求項２７】
前記ベクターによる核酸分子の発現により、前記ファインケミカルの製造が調節される請求項２３に記載の方法。
【請求項２８】
前記ファインケミカルが、有機酸、タンパク質原アミノ酸および非タンパク質原アミノ酸、プリンおよびピリミジン塩基、ヌクレオシド、ヌクレオチド、脂質、飽和および不飽和の脂肪酸、ジオール、炭水化物、芳香族化合物、ビタミン、補助因子、ポリケチド、および酵素からなる群より選択される請求項２３に記載の方法。
【請求項２９】
前記ファインケミカルがアミノ酸である請求項２３に記載の方法。
【請求項３０】
前記アミノ酸が、リジン、グルタミン酸、グルタミン、アラニン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、トレオニン、メチオニン、システイン、バリン、ロイシン、イソロイシン、アルギニン、プロリン、ヒスチジン、チロシン、フェニルアラニン、およびトリプトファンから成る群より選択される請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
請求項１から６のいずれかに記載の核酸分子の導入によってゲノムＤＮＡが変異した細胞を培養するファインケミカルの製造方法。
【請求項３２】
in vitroでのコリネバクテリウム−ジフテリアの存在または活性を検出する方法であって、請求項１〜６のいずれかに記載の核酸分子または請求項１６〜２１のいずれかに記載のポリペプチドのうちの１種以上の存在を検出する工程を含み、これによりコリネバクテリウム−ジフテリアの存在または活性を検出する、コリネバクテリウム−ジフテリアの存在または活性を検出する方法。
【請求項３３】
配列番号（SEQ ID NO)１７に示された核酸分子を含み、核酸分子が混乱している宿主細胞。
【請求項３４】
配列番号（SEQ ID NO)１７に示された核酸分子を含み、この核酸分子が配列番号（SEQ ID NO)１７に示された配列に対して１個以上の核酸の修飾を含む宿主細胞。
【請求項３５】
配列番号（SEQ ID NO)１７に示された核酸分子を含み、核酸分子の調節領域が、この分子の野生型の調節領域に対して修飾されている、宿主細胞。

実施例３：ＤＮＡシーケンスとコンピューターによる機能解析
実施例２に記載されたゲノムライブラリーを標準的な方法、特にＡＢＩ３７７シーケンスマシーンを用いた鎖成長停止反応法（例えばFleischman,R.D.ら(1995)'Whole-genome Random Sequencing and Assembly of Haemophilus Influenzae Rd.',Science, 269:496-512参照）によるＤＮＡシーケンスに使用した。以下のヌクレオチド配列のシーケンスプライマーが使用された：5'-GGAAACAGTATGACCATG-3'（SEQ ID NO:1157）または5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'（SEQ ID NO:1158）。