JP2003508157A - 免疫応答を減少するための方法および組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、血清由来の抗ウイルス抗体の選択的な除去によって、治療ウイルスの投与に対する既存の免疫応答を減少するための装置および方法を提供する。本発明は、このような抗体の除去のためのクロマトグラフィー材料を提供する。本発明はさらに、ウイルスコートの成分を含む免疫アフィニティークロマトグラフィー材料を提供する。本発明はさらに、この材料を含む血漿分離装置を提供する。本発明はさらに、治療処置レジメンの一部としてのこのような装置の使用のための方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の背景） 野生型ウイルスまたは組換え改変されたウイルスの治療的有用性は、当該分野
で周知である。ウイルスの治療的用途に関する初期の報告は、１９５０年代から
始まる。例えば、１９５２年に、ＳｏｕｔｈａｍおよびＭｏｏｒｅは、種々の癌
の治療のためのワクシニアウイルス、ニューカッスル病ウイルス、西ナイルウイ
ルス、イルヘウスウイルスおよびＢｕｎｙａｍｗｅｒａウイルス、ならびにＥｇ
ｙｐｔ １０１ウイルスの使用を報告した。Ｃａｎｃｅｒ ５：１０２５−１０
３４（１９５２）。１９５６年には、ＮｅｗｍａｎおよびＭｏｏｒｅは、種々の
ウイルスを用いた５７人の癌患者の処置結果を要約した。Ｃａｎｃｅｒ ７：１
０６−１１８。１９５６年には、Ｓｍｉｔｈらは、頸部癌の処置のためのアデノ
ウイルスの治療的使用を報告した。Ｃａｎｃｅｒ ９：１２１１−１２１８。Ｓ
ｏｕｔｈａｍは、１９６０年に抗新生物剤としてのウイルス効力に関してＳｌｏ
ａｎ Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅにおいて得られた臨床経験の要
約を示した。Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａ
ｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２２：６５７−６７３。より近年の報
告は、ウイルスの治療的使用における引き続いて興味あることを報告する。Ｔａ
ｙｌｏｒらは、マウスで実施された実験に基づいて、固形腫瘍および腹水腫瘍の
処置のための、ウシエンテロウイルス−１の治療的用途を示唆する結果を示す。
ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）６８：８３６−８４０（１９７１）。さらなるヒト臨床試験
が続けられ、種々の癌を処置するためのＭｕｍｐｓウイルスの使用によって示さ
れるようにこの分野における見込みを示した。Ａｓａｄａ，Ｔ．（１９７４）Ｃ
ａｎｃｅｒ ３４：１９０７−１９２８。

【０００２】 ウイルスゲノムの理解の増加および組換えＤＮＡ技術の到来は、ウイルスの操
作して特定の所望される特徴を保有することを可能にした。例えば、Ｅ１Ｂ−５
５Ｋ領域に改変を含む組換えアデノウイルスは、現在ヒトにおいてフェーズＩＩ
臨床試験中である。さらに、組換えウイルスベクターは、種々の治療物質の送達
のために使用されている。最も顕著には、組換えアデノウイルスベクターは、抗
癌治療に使用され、ここで、ウイルスゲノムは、腫瘍抑制遺伝子をコードするた
めに改変されている。特に、ｐ５３腫瘍抑制遺伝子を発現する複製欠損ウイルス
は、好首尾にフェーズＩを完了し、そして現在フェーズＩＩ／ＩＩＩ臨床開発中
である。

【０００３】 しかし、このようなベクターを用いる臨床経験は、患者に投与される治療ウイ
ルスの重要な断片が、血清中の中和抗体および網膜内皮系（ＲＥＳ）の存在によ
って無力にされることが示された。この障害は、アデノウイルスが導入遺伝子の
送達のためのビヒクルとして使用される場合、著しく急性である。なぜなら、ヒ
ト集団の有意な部分が、天然にアデノウイルスベクターに曝露され、そして既存
の免疫を保有するからである。従って、有意に過剰な組換えアデノウイルスベク
ターの投与は、既存の免疫応答を「介して投与する」ために患者への投与される
。さらに、たとえ既存の免疫応答が存在しない場合でも、治療ウイルスの投与の
後に、哺乳動物は、一般的に、このウイルスに対して免疫応答を産生する。この
「誘導された」抗ウイルス免疫応答は、環境中のウイルスへの曝露によって誘導
された既存の免疫応答に類似した様式で、治療のさらなる経路を治療ウイルスと
複雑化する。これは、すでに病気の患者に合併症をもたらし得る点で、臨床の視
点から望ましくない。さらに、商業的な視点から、大量の物質が、既存の免疫応
答を介した投与を試みる際に浪費される。従って、治療ウイルスベクターに対す
る既存の免疫応答を減少することが、当該分野で必要である。

【０００４】 種々の方法が、この問題に対応することを試みるために使用されている。１つ
の方法において、ウイルスは、ウイルスをコートするためのマスキング剤（例え
ば、ポリエチレングリコール）を用いてコートされ（いわゆる、「ベギレーショ
ン（ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ）」）、そしてウイルスの免疫原性決定基をマスクす
る。これは、ウイルスを薬剤を用いてコートすることが必要なわずらわしいプロ
セスであり、そしてペギレーションされたウイルスの長期安定性は、市販で実行
できることが未だ示されていない。他の道としては、免疫抑制剤の同時投与が挙
げられる。しかし、広範な免疫抑制剤の投与は、望ましくない。特に、抗癌治療
に対する有意な相補物が、免疫応答が治療ウイルスの抗腫瘍活性を増加するもの
であることを示唆する、増大する証拠が存在する。この現象は、しばしば観察さ
れ、そして多くの個体は、腫瘍抗原に対する免疫応答の増大が治療効果であり得
ることが示唆された。従って、癌患者の免疫系を広範に抑制することは、一般的
に望ましくない。

【０００５】 従って、治療ウイルスベクターに対する既存の体液性免疫応答を減少する必要
性が、当該分野に残っている。本発明は、この要求にむく。

【０００６】 （発明の要旨） 本発明は、抗ウイルス抗体を哺乳動物の血液から除去するための、組成物、デ
バイスおよび方法を提供する。本発明の組成物および方法は、治療ウイルスの投
与と共に実行され得る。本発明は、さらに、ウイルスコートの抗原性決定基を用
いて誘導体化されたグロマトグラフィー支持体材料を含む、免疫アフィニティー
材料を提供する。本発明は、さらに、抗ウイルス抗体を血液（特に、血漿）から
除去するための改善されたアフェレーシス装置を提供する。本発明は、さらに、
このような装置の使用を含む治療方法を提供する。

【０００７】 （発明の詳細な説明） 本発明は、抗体が免疫アフィニティー材料上に保持されるように、単離された
血漿をクロマトグラフィー支持体に連結された免疫アフィニティー材料を含む免
疫アフィニティークロマトグラフィー材料と接触することによって、血漿サンプ
ル中の抗ウイルス抗体の濃度を減少するための方法を提供する。

【０００８】 本発明は、さらに、哺乳動物生物中の抗ウイルス抗体の濃度を減少する方法を
提供し、この方法は、以下の工程を包含する： ａ）血液サンプルを哺乳動物生物から得る工程； ｂ）この血液サンプルから細胞成分由来の血漿を単離する工程； ｃ）この単離された血漿を、クロマトグラフィー支持体に連結された免疫アフ
ィニティー材料を含む免疫アフィニティークロマトグラフィー材料と接触し、そ
の結果、抗体が免疫アフィニティー材料上に保持される工程； ｄ）工程（ｂ）由来の単離された細胞成分および工程（ｃ）由来の精製血漿を
この哺乳動物に再導入する工程。

【０００９】 工程（ｄ）の手順すなわち、細胞成分および精製血漿の再導入が、同時または
いくらかの時間を隔てて生じ得ることが、当業者によって容易に理解される。し
かし、これらの手順が同時（ｃｏｎｔｅｍｐｅｒａｎｅｏｕｓｌｙ）に実行され
ることが好ましい。

【００１０】 本発明は、さらに、哺乳動物を治療ウイルスで処置する改善された方法を提供
し、ここで、この改善は、以下： ａ）血液サンプルを哺乳動物生物から得る工程； ｂ）この血液サンプルから細胞成分由来の血漿を単離する工程； ｃ）この単離された血漿を、クロマトグラフィー支持体に連結された免疫アフ
ィニティー材料を含む免疫アフィニティークロマトグラフィー材料と接触し、そ
の結果、抗体が免疫アフィニティー材料上に保持させる工程； ｄ）工程（ｂ）由来の単離された細胞成分および工程（ｃ）由来の精製血漿を
この哺乳動物に再導入する工程 によって、この治療ウイルスを投与する前に、この哺乳動物における抗ウイルス
抗体の濃度を減少する工程を包含する。

【００１１】 本発明は、さらに、ウイルスコートの成分を含む免疫アフィニティークロマト
グラフィー材料を提供する。

【００１２】 本発明は、さらに、本発明の実施に有用な装置を提供する。

【００１３】 本発明は、さらに、治療ウイルスを用いた哺乳動物の処置方法に対する改善を
提供し、ここで、前述の手順は、治療ウイルスの投与前に実行される。

【００１４】 （抗ウイルス抗体） 用語、抗ウイルス抗体は、ウイルスに結合する抗体を記載するために使用され
る。これらの抗体は、一般的に、環境的または治療的（例えば、治療ウイルスの
ワクチン接種または投与）かのいずれかでの哺乳動物のウイルスへの曝露による
、哺乳動物体液性免疫系によって産生される。抗ウイルス抗体は、中和抗体およ
び非中和抗体の両方を含む。用語、中和抗体は、感染性ウイルスの増殖を妨げる
抗体をいうためのその従来の意味で使用される。この方法が治療ウイルスの投与
と組み合わせて使用される場合、中和抗ウイルス抗体の除去は、中和抗体が投与
される治療ウイルスの不活性化を主に担う場合、非中和抗体の除去よりもより強
く関係する。

【００１５】 （血液） 用語「血液」は、哺乳動物の血液をいうためのその従来の意味で使用される。
血液サンプルは、従来の血液収集手順（例えば、静脈穿刺または動脈穿刺技術）
によって生きた哺乳動物から得られ得る。静脈収集手順と関連する比較的低い危
険性およびアクセスの簡便性は、静脈血を、本手順における使用のための好まし
い血液供給源にする。静脈血は、注射器によって収集され得るか、または本発明
の方法に従うバッチ式処理のＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）商標の血液収集
システム（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｆｒ
ａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪから市販される）のような収集容器から排出さ
れ得る。しかし、血液の量は、一般的に、生きた哺乳動物における抗ウイルス抗
体応答の減少（ｄｉｍｕｎｉｔｉｏｎ）を提供するために処理され、本発明の好
ましい実施において、この血液は、静脈カテーテルによる血漿しゃ血装置への導
入のための連続プロセスで収集される。カテーテルの近位末端は、従来の静脈穿
刺技術を用いて哺乳動物の静脈へ挿入され、そしてカテーテルの遠位末端は、血
漿しゃ血装置の入口に接続される。血漿しゃ血装置は、一般的に、ポンプ機構を
備え、血漿を細胞血液成分から単離するための手段を介して単離された血液を駆
動し、ここで、細胞に富む血液は、哺乳動物へ戻され、一方血漿は、保存または
さらなるプロセシングのために向けられる。

【００１６】 治療的ウイルス治療に供される哺乳動物の範囲は、変更され、そして特定の供
給源が、静脈血の単離に好ましい。ウシまたはヒツジにおいて、頸静脈のカテー
テル法が好ましい。ウサギにおいて、中央の耳の動脈、耳の静脈、または頸動脈
が、好ましい。ブタにおいて、耳の静脈が好ましい。非ヒト霊長類において、伏
在静脈、橈側皮静脈、および大腿静脈が、好ましい静脈血の供給源である。ネコ
において、橈側皮静脈、大腿静脈、頸静脈および伏在静脈が、好ましい。イヌに
おいて、橈側皮静脈、頸静脈および伏在静脈が、好ましい。ヒトにおいて、橈側
皮静脈および伏在静脈が、好ましい静脈血の供給源であり、橈側皮静脈が最も好
ましい。

【００１７】 （血漿の単離：血漿しゃ血） 血液は、細胞成分および可溶化された流体成分の複合混合物である。血液（血
漿）の流体部分は、種々の溶解された栄養分、廃棄産物および抗体のような可溶
化されたタンパク質を含む。用語「血漿しゃ血」は、アフェレーシス手順をいい
、これにより、哺乳動物から除去された血液が、血漿および細胞血液成分に分離
され、この血漿は、さらなるプロセシングのために単離される。アフェレーシス
の原理および実施は、当該分野で周知である。アフェレーシスに関する標準的な
手順が、Ｓｔｏｃｋ ＃ＰＣ９８−９７２００３として、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａ
ｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋｓ，８１０１ Ｇｌｅｎｂ
ｒｏｏｋ Ｒｏａｄ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ ２０８１４−２７４９から市販
されている、Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉ
ｃｅに記載されている。

【００１８】 血漿しゃ血は、連続的なフロー遠心分離器（密度により細胞を分離する）；フ
ラットシート（ｆｌａｔ−ｓｈｅｅｔ）および管腔内中空ファイバー膜デバイス
（ｉｎｔｒａ−ｌｕｍｅｎａｌ ｈｏｌｌｏｗ ｆｉｂｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ
ｄｅｖｉｃｅｓ）（接線フロー微細濾過により操作する）；および回転膜デバ
イス（テイラー渦を導入することにより、微細濾過フラックスを増強する）を使
用して、臨床的アレーナ（ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｒｅｎａ）において現在実施さ
れる。このようなデバイスは、市販され、そして文献において周知であり、例え
ば、Ｐｌａｓｍａｐｈｅｒｅｓｉｓ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｐｐｌｉｃａ
ｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｎｏｓｅ Ｙら，Ｒａｖ
ｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８３）；Ｋｅｓｓｌｅｒ Ｓ．Ｂ．
，Ｂｌｏｏｄ Ｐｕｒｉｆ．，１１：１５０−１５７（１９９３）を参照のこと
。また、Ｆｉｓｃｈｅｌ，米国特許第５，７８３，０８５号（１９９８年７月２
１日）；Ｋｅｓｓｌｅｒら，同第５，８４６，４２７号（１９９８年１２月８日
）；Ａｓｈ，同第５，９１９，３６９号（１９９９年７月６日）、Ｂａｌｌら．
同第５，９１４，０４２号（１９９９年６月２２日）；Ｆｉｓｃｈｅｌ，同第５
，４６４，５３４号（１９９５年１１月７日）；Ｂｅｎｓｉｎｇｅｒ，同第４，
６１４，５１３号（１９８６年９月３０日）；Ｔｅｒｍａｎら、同第４，２１５
，６８８号（１９８０年８月５日）；およびＰｏｌｌａｒｄ，Ｊｒ．，同第４，
４６４，１６５号（１９８４年８月７日）を参照のこと（これらの教示は、参考
として本明細暑中に参考として援用される）。

【００１９】 （免疫吸着剤材料／免疫親和性材料） 用語「免疫親和性材料」または「免疫吸着剤材料」は、抗体に結合する材料を
いうために本明細書中で、交換可能に使用される。種々の免疫吸着剤材料が、当
該分野で周知である（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓプロテ
インＡ，組み換えプロテインＡおよびＧ、ＫａｐｐａＬｏｃｋ^TM（Ｚｙｍｅｄ）
）。一般化された免疫吸着剤材料（例えば、プロテインＡ）またはプロテインＧ
の使用は、循環する抗体の一般的な除去を生じ、そして投与される、潜在的抗原
性の治療ウイルスと関連して、必ずしも特異的ではない。プロテインＡは、好ま
しくは、ＩｇＧクラス抗体（およびある範囲までのＩｇＡおよびＩｇＭ抗体）に
結合し、そして任意の特定の抗体型について選択的でない。これらの一般的な免
疫吸着材料は、抗体の特定の型に必ずしも特異的ではないが、それらは、それに
も関わらず、添付の図面の図６、７、および８に提示されるデータに示されるよ
うに、本発明の実施において使用され得る有用な免疫吸着剤材料である。

【００２０】 本発明の好ましい実施において、免疫吸着材料は、クロマトグラフィーの支持
体へのウイルスエピトープまたはエピトープの連結により、そのウイルスに特異
的な抗ウイルス抗体の選択的除去を達成するために使用される特定の治療ウイル
スに関して調製される。以前に議論されたように、血清抗体の広範な除去は、首
尾良い化学療法への補助に潜在的に重要である任意の循環抗腫瘍抗体を除去する
潜在能を有し、そして日和見感染に対するより高い感受性を潜在的に残す。結果
的に、使用される特定の治療ウイルスに対する抗体の選択的な除去が、好ましい
。特に、本発明は、クロマトグラフィーの支持体に結合体化されるウイルスエピ
トープを含む選択的抗ウイルス免疫除去（「ＳＡＶＩＤ」）クロマトグラフィー
材料を提供する。頭字語ＳＡＶＩＤは、選択的抗ウイルス免疫除去のための省略
表現として使用される。選択的は、使用される治療的ウイルスに対する抗体が、
血漿から選択的に除去されるプロセスの性質を増強する。方法およびデバイスが
、治療ウイルスに対して予め存在するかまたは誘導される応答を除去するために
設計されることを、抗ウイルスは、強調する。免疫除去は、免疫応答（特に、血
漿抗ウイルス抗体のレベル）が一次的に減少する点で、本発明の特徴を強調する
。免疫吸着剤材料としてのウイルスエピトープの使用を通じて、血漿由来の抗ウ
イルス抗体の選択的減少が、達成されるが、血流に存在する抗ウイルス抗体は、
ＳＡＶＩＤクロマトグラフィー材料上に保持される。このプロセスの結果として
、予め存在するかまたは誘導される治療ウイルスベクターの特異的な型に対する
体液性免疫応答が、選択的に減じられ、ウイルスベクターの所定の投薬量から増
大されたトランスダクション効率を生じる。付随して、これは、この手順の非存
在下で、等価な治療応答を達成するために、より低いウイルス投薬量を可能にす
る。

【００２１】 用語「エピトープ」は、分子の相補性の結果として、抗体またはＴ細胞レセプ
ターの組み合わせ部位と相互作用する抗原における構造をいう従来の意味で、本
明細書中に使用される。用語「ウイルスエピトープ」は、ウイルス表面タンパク
質のエピトープをいうために使用される。エピトープは、天然に存在していても
よいし、または合成模倣物でもよい。使用されるエピトープは、ウイルスコーテ
ィングタンパク質全体またはその抗原決定画分を示し得る。例えば、ウイルスエ
ピトープを提示するために、ウイルスコーティングタンパク質が、カラムに結合
体化され得る。あるいは、ウイルスコーティングタンパク質のフラグメントが、
使用され得、このフラグメントは、主要な抗体結合部位を保持する。エピトープ
はまた、合成ペプチドまたはタンパク質であり得、そしてウイルス表面タンパク
質の抗原決定基を含む天然に存在するかまたは合成ペプチドを選択的にいうため
に使用される。抗体結合に最も関係するタンパク質の領域の決定は、公知の手順
により決定され得る。例えば、Ａｒｇｏｎｅｘ，Ｉｎｃ．，２０４４ Ｉｎｄｉ
ａ Ｒｏａｄ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ ＶＡ ２２９０１により市販
されるＤＩＲＥＣＴ^TM方法論、計装および手順は、ＣＴＬ応答を刺激する個々の
ペプチドを同定するための手段を提供する。これらのペプチドは、非ペプチジル
小分子エピトープ模倣物を生成するために従来の分子モデルソフトウェアを使用
して、モデル化され得る。タンパク質の特定のエピトープを示すこれらの個々の
ペプチドまたは小分子模倣物は、ウイルス表面タンパク質全体を使用する代わり
に、クロマトグラフィー支持体に結合体化され得る。

【００２２】 本明細書中で例示されるような好ましい実施形態において、ウイルス表面抗原
部分は、アデノウイルスのウイルスコーティングタンパク質を含む。こられらは
、組み換えウイルスの産生の副産物として容易に得られ得るか、または当業者に
周知のタンパク質の産生に関する組み換えＤＮＡ技術により産生され得る。ウイ
ルスの高い力価の産生のための方法が、Ｇｉｒｏｕｘら，米国特許第５，９９４
，１３４号（１９９９年１１月３０日）において提供され、その全体の教示が、
本明細書中で参考として援用される。例えば、組み換えアデノウイルス調製物が
、Ｓｈａｂｒａｍら（米国特許第５，８３７，５２０号（１９９８年１１月１７
日）（その教示の全体が、本明細書により参考として援用される））において記
載されるように、カラムクロマトグラフィーに供された。クロマトグラフィー溶
離液は、アデノウイルスのペントン、ヘキソン、３Ａ、ファイバータンパク質の
ようなウイルスコーティングタンパク質を含む種々の夾雑物と共に生成されたア
デノウイルスを提供する。有用なエピトープを示すこれらのさらなる「夾雑物」
は、従来のクロマトグラフィー手順により、カラムの溶離液から等質に精製され
得る。これらのタンパク質の同一性は、アデノウイルスカプシドに対して特異的
な市販の抗体の使用により容易に確認され得る。このような抗体は、種々の供給
源Ｃｈｅｍｉｃｏｎ ａｎｄ Ｌｅｅ ＢｉｏＭｏｌｅｃｕｌａｒから市販され
る。あるいは、このようなタンパク質に対するモノクローナル抗体は、当業者に
周知の技術により精製され得る。

【００２３】 （連結された：） 用語「連結された」は、動力学的に安定な結合を記載するために本明細書中に
使用され、そして用語結合体化されたまたは架橋されたと交換可能に使用される
。免疫吸着剤材料とクロマトグラフィーの支持体との間の安定な相互作用が、イ
オン、親和性、共有結合性架橋、動力学的に不安定な配位共有架橋（Ｓｍｉｔｈ
ら、米国特許第４，５６９，７９４号）、またはＡｎｄｅｒｓｏｎらに記載され
るような、動力学的に不活性の配位共有架橋（米国特許第５，４３９，８２９号
（１９９５年８月８日））により達成され得る。本明細書中に例示されるような
本発明の１つの実施形態において、ウイルスエピトープが、親和性ゲル（Ａｆｆ
ｉ−Ｇｅｌ（登録商標））の表面上に、吸収される。このＡｆｆｉ−Ｇｅｌ（登
録商標）産物は、２つの異なるバージョン：Ａｆｆｉ−Ｇｅｌ（登録商標）１０
（ＢｉｏＲａｄカタログ番号１５３−６０４６）およびＡｆｆｉ−Ｇｅｌ（登録
商標）１５（ＢｉｏＲａｄカタログ番号１５３−６０５２）において利用可能で
ある。いずれかの産物（またはこの２つの混合）の適切な使用が、結合されたエ
ピトープのｐＩにより決定される。Ａｆｆｉ−Ｇｅｌカラムは、遊離アルキル基
またはアミノ基を結合する。一般に使用される緩衝液、Ｔｒｉｓは、効率的にカ
ラムにカップリングする。結果的に、Ｔｒｉｓ緩衝液の使用を避けるためにこの
ようなカラムを使用する場合、重要である。Ｔｒｉｓの使用の代わりに、細胞溶
解、洗浄、カラム充填／洗浄および溶出が、Ｔｒｉｓよりむしろ、ＭＯＰＳまた
はＨＥＰＥＳを用いて作製された緩衝液を使用して、全て実施される。マトリッ
クスに対する０．１Ｍ ＭＯＰＳ中のタンパク質のカップリングの実施に関する
詳細な指示は、製造者から利用可能である。約０．５ｍｌの（パックされた量）
のマトリックスが、約２０ｍｇのタンパク質を結合する。カップリングは、混合
し、そして４℃で約４時間進行する反応を可能にすることにより達成される。カ
ップリングの効率は、カップリング反応前および後の遊離タンパク質濃度を比較
することにより決定される。カップリング反応後、任意の未反応エステルをブロ
ックすることが好ましい。これは、１時間、４℃で、混合しがら、過剰なタンパ
ク質を除去し、かつ１ＭエタノールアミンｐＨ８．０を添加することにより容易
に達成され得る。過剰なエタノールアミンは、ＴＢＳを用いてカラムからリンス
される。このカラムは、０．２％アジ化ナトリウムを加えたＴＢＳ中に、４℃で
延長された期間、貯蔵され得る。

【００２４】 遊離アミノ基を介した連結の代わりに、また、遊離システイン残基を介してカ
ラムマトリックスにエピトープを連結し得る。例えば、システイン残基は、Ｅｐ
ｏｘｙ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）−６Ｂ（Ｐｈａｒｍａｃｉａから市販
される）への安定なチオエーテル結合を提供し得る。これは、Ｃ末端システイン
残基の添加により、エピトープのＣ末端を連結するために使用され得る。カップ
リング反応は、３７℃、２４時間で一定に混合しながら、少ない反応量で、０．
１Ｍ ＮａＨＣＯ₃ｐＨ９．０で、１．０ｍｌの予め増加した（ｓｗｏｌｌｅｎ
）Ｅｐｏｘｙ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ−６Ｂ（登録商標）へのエピトープの添加に
より、達成され得る。５０ｍｌの０．１Ｍ ＮａＨＣＯ₃ ｐＨ９．０を用いて
洗浄し、次いで、穏やかに攪拌して、５．０ｍｌの０．１Ｍ ２メルカプトエタ
ノールにおいて１．０ｍｌの樹脂をインキュベートすることにより、マトリック
ス上で未反応基をブロックする。

【００２５】 （クロマトグラフィーの支持体） 用語「クロマトグラフィーの支持体」が、親和性クロマトグラフィーマトリッ
クスの塩基性エレメントとしてその一般に受け入れられている定義において使用
される。免疫親和性クロマトグラフィーの原理は、当該分野で周知である。例え
ば、Ｍｏｈｒら（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ：Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＩＳＢ
Ｎ＃ ３０５５０１３５０６を参照のこと。一般的なクロマトグラフィーの支持
体としては、膜、ビーズ（微粒子）、樹脂、または管の形態で、天然ポリマーま
たは合成ポリマーが挙げられる。一般的な材料としては、アガロース（Ｄ−ガラ
クトースおよび３，６−無水−Ｌ−ガラクトース）、ポリスチレン、ポリエチレ
ンなどが挙げられ、そして当業者に周知である。本発明の好ましい実施において
、クロマトグラフィーの支持体は、架橋され、活性化されたアガロースゲル（例
えば、Ｂｉｏ−Ｒａｄから市販されるＡｆｆｉ−Ｇｅｌ（登録商標）１０または
Ａｆｆｉ−Ｇｅｌ（登録商標）１５の支持体）である。

【００２６】 （接触） 単離される血清は、種々の関連における免疫親和性クロマトグラフィー材料と
接触させられ得る。免疫親和性クロマトグラフィー材料は、１回分の調製物にお
いて使用され得、これにより、血液が、多量の物質に暴露されるが、一般に、従
来の血漿しゃ血装置を用いた使用のために、カラムに形成される。カラムは、顆
粒形態で固定相を含むパックされたベッドカラムであり得、その上、パックされ
、その結果同種の（ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ）ベッドを形成し、ここで固定相が完
全にカラムを満たす。あるいは、毛細管カラムが使用され得、ここで、ウイルス
エピトープを含む固定相は、カラム壁上に、そして移動相の通過を可能にするた
めに中央通路を有する、薄いフィルムまたは層として置かれる。このような場合
、複数の小さい直径の管状材料が、移動相に対するウイルスエピトープの暴露を
最大にするために使用される。

【００２７】 あるいは、免疫親和性クロマトグラフィー材料は、液体の形態であり得るが、
血液産物より大きいかまたは小さい密度を有し得、その結果、血液産物は、クロ
マトグラフィー材料に暴露され得、そして容易に分離され得る。例えば、カプシ
ドタンパク質は、密度が例えば、１．３５である液体ポリマーに結合体化された
高密度な材料に結合され得る。材料は、単離された血液産物と共に、１回分の様
式で混合され得る。次いで、材料に結合した血液成分は、遠心分離により分離さ
れ得る。あるいは、相の分離を可能にする免疫親和性クロマトグラフィー材料が
、血液と混合され、そして遠心分配クロマトグラフィーデバイスに分離され得る
。遠心向流クロマトグラフィーデバイスおよび手順は、当該分野で公知である。
免疫親和性クロマトグラフィー材料または血液または血漿が、このような手順に
おいて、移動相として使用され得る。

【００２８】 免疫親和性クロマトグラフィー支持体上に保持された抗体は、繰り返される使
用のためにカラムを再生するため、除去され得る。しかし、免疫親和性クロマト
グラフィー材料は、好ましくは廃棄材料から作製され、ならびに、効果的でない
洗浄手順による、１人の患者から単離され、かつカラム上に保持された材料は、
カラムから採取されないで、そして第２の患者の血流に導入されないことを保証
するための次の使用が解決される。

【００２９】 免疫吸着剤材料に対する通過の前に産生される血漿が、後の使用のために貯蔵
され得ることは、当業者に容易に明らかである。しかし、本発明の好ましい実施
において、精製された血漿が、精製プロセスと同時に、被験体の循環系に再導入
される。用語「同時に」は、一般的に、約３時間未満を意味し、好ましくは、１
時間未満を意味する。生きた哺乳動物における血液量の損失と関連する合併症を
避けるための本発明の最も好ましい実施において、前述のプロセスが、添付の図
面の図９において、模式的に提示される装置のような装置を使用して、連続様式
で行われる。

【００３０】 本方法が、抗ウイルス抗体を中和する血清の減少に有用であることを示すため
に、ヒトアデノウイルスに暴露されたマウスの血清が、プロテインＡカラムおよ
びＫａｐｐａＬｏｃｋ^TMセファロースカラム（カタログ番号１０−１８４１とし
てＺｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆ
ｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡから市販される）（これは、ＩｇＧ、ＩｇＭ、およびＩ
ｇＡクラス免疫グロブリンを主に保持する）における精製に供され、そして抗Ａ
ｄ抗体を中和するためにアッセイされた。特に、予め存在する抗アデノウイルス
抗体を保有するマウスの血液が単離され、この血清が分離され、そしてプロテイ
ンＡクロマトグラフィー樹脂に暴露された。この手順の前と後に、抗アデノウイ
ルス抗体を中和する血清レベルが、本明細書中の実施例３の教示に実質的に従っ
て、決定された。さらに、中和抗体は、ビーズｒＡｄ親和性カラムに連結された
ｒＡｄタンパク質からなるカラムを用いて、効率的に減少し得る。この実験にお
いて、プロテインＡカラムまたはＫａｐｐａＬｏｃｋ^TM−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカ
ラム上で精製された血清は、抗体力価を中和する血清において減少を示した。

【００３１】 ＳＡＶＩＤ免疫吸着剤材料の有用性が、インビボマウスの受動的免疫モデルに
おいてさらに示された。従来の血漿しゃ血手順は、マウスに適さず、そしてマウ
スは、抗ヒトアデノウイルス抗体を先天的に保有しないので、「受動免疫」手順
が、抗アデノウイルス抗体の血漿しゃ血除去を模倣するモデル系を作製するため
に使用された。受動免疫は、１個体目の動物の血清が、２個体の目の動物に導入
される手順をいう。この場合、ＢＡＬＢ／ｃマウスの群は、抗ｈＡｄ抗体を開発
するために、組み換えヒトアデノウイルス（ｈＡｄ）を注射された。これらのマ
ウスが、屠殺され、そして血清が回収された。次いで、この血清が、相乗（ｓｙ
ｎｅｒｇｅｎｉｃ）ＢＡＬＢ／ｃマウスの第２の群の腹腔内に注射された。この
受動免疫手順は、第２の群の腹腔内に注射されたマウスの血清に抗ｈＡｄ抗体を
移すことが有効であることを保証するために、予備研究が、腹腔内に注射された
、ｒＡｄカラムから溶出される１０μｇの抗アデノウイルス抗体または等量の血
清（５００μｌの総量において）を、ナイーブＢＡＬＢ／Ｃマウスの血清中に検
出し得ることを示すために実施され得る。これらの実験の結果は、添付の図面の
図３において示される。これらの実験の結果は、添付の図面の図３において提示
された。提示されたデータから見られ得るように、抗ｈＡｄ抗体は、ＩＰ投与３
時間後すぐに血清中に存在し、そしてＩＰ注射７２時間後にまだ検出され得た。
血清（５００μｌ）が、マウス中の正常血清量まで希釈され、次いで、少なくと
も７２時間安定なままであった。これらの結果は、抗アデノウイルス抗体を含む
血清を腹腔内に注射されたマウスが、体液性免疫（すなわち、アデノウイルスに
対する抗体を中和する）を効率的に伝えることを示し、そして本発明の有効性を
示すための有効なモデル系を提供する。

【００３２】 組み換えアデノウイルス（ＺＺＣＢ）が、後の評価のために「予め存在する」
免疫応答を生成するために組み換えヒトアデノウイルスを用いてマウスをプライ
ムするために使用された。ＺＺＣＢおよびＢＧＣＧベクターの調製の方法が、Ｇ
ｒｅｇｏｒｙら（前出）に記載され、そしてその参考文献で、それぞれ、Ａ／Ｃ
およびＡ／Ｃ／β−ｇａｌウイルスといわれる。ＢＡＬＢ／ｃマウスは、５×１
０¹⁰個のＺＺＣＢを注射された。次いで、このマウスは、１回目の注射の２８日
後、５×１０¹⁰個の粒子のブースター注射が与えられた。マウスは、２回目の注
射１４日後に屠殺され、そして血清が単離されてそしてプールされた。架橋アガ
ロースカラムが、エピト−プの供給源としてカラムに架橋された複数のヒトアデ
ノウイルスカプシドタンパク質を使用して、本明細所中の実施例１の教示に実質
的に従って調製された。プールされた血清の１つの画分が、カラム材料と平衡化
され、そして溶出され（以降「精製された血清」といわれる）、そしてプールさ
れた血清の残った画分は、コントロールとして維持された（以降、「精製さてい
ない血清」といわれる） ５個体のマウスは、それぞれ、腹腔内に、ｒＡＤタンパク質カラムから溶出さ
れた４０μｇの抗ｈＡｄ抗体、８０μｇのｒＡｄタンパク質カラムから溶出され
た抗ｈＡｄ抗体、カラム除去（ｄｅｐｌｅｔｅｄ）血清、プライムされた動物由
来の未処置血清およびｖＰＢＳ（２ｍＭ ＭｇＣｌ₂、３％ショ糖をさらに含む
リン酸緩衝生理食塩水）を注射された動物由来の血清を注射し、そして血液のサ
ンプルが、受動免疫１時間後に得られ（標準として使用）、そして一晩静止させ
る。次の日（受動免疫後約１２時間）、マウスは、５×１０¹⁰個の粒子のＢＧＣ
Ｇ組換えヒトアデノウイルスを尾部静脈を介して注射された。血清を、注射後２
時間で回収し、そして血清が、抗アデノウイルス抗体を中和した血清の存在につ
いて分析された。マウスは、ＢＧＣＧの注射後３日で屠殺され、そして血清が、
抗アデノウイルス中和抗体を中和する血清の存在について分析され、そして肝臓
組織が、Ｂ−ｇａｌ発現について分析された。これらの実験の結果が、添付の図
４において見出され得る。未精製の血清あるいはこのカラムから溶出された４０
μｇまたは８０μｇの抗ｈＡｄ抗体を用いて受動免役を受けた動物は、ＩＰ注射
１時間後に、血清中和抗ｈＡｄ抗体の高い力価を示した。しかし、カラム除去血
清で受動的に免役されたそれらの動物は、注射１時間後に、検出可能な血清中和
抗体を有さなかった。ＢＧＣＧ注射後３日の、マウスの５群全てにおける中和抗
体の存在は、ＢＧＣＧに対する１次体液性応答に起因する。結果として、精製さ
れた血清を用いて受動免疫されたそれらの動物における血清抗ｈＡｄ中和抗体の
レベルは、未精製の血清を受容するそれらの動物と比較して、実質的に減じられ
、抗ウイルス抗体の除去は、このようなウイルスに対して予め存在する免疫応答
を最小化するためにインビボで有用であることを示す。ＳＡＶＩＤカラムに対し
て精製された血清は、インビボでのプロテインＡおよびＫａｐｐａＬｏｃｋ^TM
Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラムに対する血清中和抗ｈＡｄ抗体における改善された減
少を示した。また、ＢＧＣＧの静脈内注射は、血清における中和抗体のさらなる
減少を生じることが、図４におけるデータから明らかであった（ウイルス２時間
後の未除去血清を参照のこと）。さらに、カラムから溶出されたｒＡｄ抗体を受
容する群において、実質的に、全ての中和抗体が、静脈内経路によるＢＧＣＧの
注射後、血清から枯渇された。従って、ｒＡｄの全身性投与が、血清中和抗体を
除去し、そして高い親和性抗体が、非常に効率的に除去されることを示唆する。
従って、ｒＡｄの注射後１時間または１日後の再投与は、さらに、再投与（ｒｅ
ｄｏｓｅ）を促進し得る。

【００３３】 商業的観点および臨床家にとっておそらくより重要なことは、既存または誘導
された体液性免疫応答は、治療導入遺伝子発現の同一のレベルを達成するために
、より低い用量のウイルスの使用を可能にする。このことは、以前の実験由来の
動物を使用して、肝臓におけるβ−ガラクトシダーゼ発現を調査することによっ
て実証された。以前の実験から、全身投与された複製欠損アデノウイルスの発現
の大部分は、肝臓の細胞の形質転換を生じた。結果として、以前の実験に由来す
る動物の屠殺の際、肝臓を取り出し、そして、ＢＧＣＧ形質転換効率の指標とし
て、β−ガラクトシダーゼ活性についてアッセイした。結果を添付の図面の図５
の顕微鏡写真に示す。これらのデータは、ｖＰＢＳを使用する動物試験由来のｒ
Ａｄタンパク質カラム血清から溶出されたカラム除去血清、非除去血清、抗ｈＡ
ｄ抗体の受動的免疫化を受容する動物由来の肝臓におけるβ−ガラクトシダーゼ
発現の相対的なレベルの証拠を提供する。このデータは、カラム除去血清を受容
するマウスにおけるβ−ガラクトシダーゼ発現の発現レベルが、非除去血清を受
容するマウスよりも有意に大きいことを実証する。ウイルスの投薬を使用して、
受動的に免疫化されたこれらのマウスに挑戦することは、ウイルスの形質転換が
、Ａｄ未吸着血清で受動的に免疫化したマウスの肝臓において検出可能ではない
が、ウイルスの形質転換がＡｄプレ吸着血清で受動的に免疫化したマウスの肝臓
において容易に検出可能であることを示した。結果として、これらの実験結果は
、本発明が、既存の血清中和抗体を保有する哺乳動物系における組換えアデノウ
イルスベクターから形質転換効率を増加するのにインビボにおいて有用であるこ
とを示す。特に、これらのデータは、抗アデノウイルス抗体の効果的な免疫除去
が、標的組織における導入遺伝子発現の同等なレベルを達成するための形質転換
のためのウイルス投与の投薬を減少し得ることを示す。

【００３４】 ヒト集団におけるこの手順の効果を決定するために、抗アデノウイルス抗体を
含むヒト血液を使用して、一連の実験を行なった。正常なドナー由来のヒト血清
は、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｂｌｏｏｄ Ｂａｎｋから入手した。それぞれのサン
プルの中和能力を、本明細書中の実施例３に記載されるＧＦＰアッセイによって
決定した。血清を高いまたは低い中和抗体能力を有するとして特徴付けた。低い
中和能力を、１：３２０またはそれ未満の力価として定義した。高い中和能力を
１：２５００またはそれを超える力価として定義した。「高い」または「低い」
中和能力のいずれかを示す血清サンプルをプールし、そして、プロテインＧカラ
ム（Ｚｙｍｅｄより市販されている）およびＳＡＶＩＤアデノウイルスキャプシ
ドカラム（本明細書中の実施例２の教示に基本的に従って調製される）上のカラ
ムクロマトグラフィーに供した。この結果を添付の図面の図６、７および８に示
す。この結果は、ＳＡＶＩＤカラム上の通過後に、血清中和能力の有意な減少を
示す。さらに、この結果は、プロテインＧカラムから溶出された抗体が、キャプ
シドカラムから除去された抗体の力価と同一であることを示し、プロテインＧカ
ラムおよびキャプシドカラムの効率が、抗アデノウイルス抗体を除去する際、類
似していることを示す。

【００３５】 上記免疫吸着材料の組み合わせもまた使用され得ることが、当業者に容易に明
らかである。このような材料は、異種混合物中で共に使用されるか、または、続
いて血清由来の抗体における減少の改善を達成するかもしくは単一の血漿分離法
手順における種々の型の抗体を除去する。

【００３６】 （装置） 本発明は、このような装置の血漿ろ過エレメントがウイルスエピトープ結合体
化クロマトグラフィー支持体を含む免疫アフィニティークロマトグラフィー材料
を含む、血漿分離装置をさらに提供する。このような装置の血漿ろ過エレメント
は、血液血漿から抗ウイルス抗体を除去するために使用されるカラムフォーマッ
トにおける免疫アフィニティークロマトグラフィー材料を取り込むように改変さ
れている。このような装置は、添付の図面の図９に概略形態として提供される。

【００３７】 クロマトグラフィー支持体に連結された免疫吸着材料は、一般的にその材料の
適切な使用のための説明書が同封されたクロマトグラフィー支持体に連結される
免疫吸着材料を含むキットの一部で提供され得る。好ましい実施形態では、クロ
マトグラフィー支持体に連結された免疫吸着材料は、ガラスまたはプラスチック
（例えば、ポリカーボネートプラスチック）などの滅菌可能に構築された無菌血
管に含まれる。好ましくは、この血管は、頂部表面および底部表面を規定する基
本的に円柱形であり、頂部および底部のそれぞれは、血管を介して血漿の通過を
可能にするアフェレーシス手順において慣例的に使用される可撓性チュービング
に付着のための中央に位置する継ぎ手を提供される。この血管は、必要に応じて
、血漿の自由な流れを可能にするのに十分であるが、免疫吸着材料の通過を可能
にするのに不十分な直径の細孔の膜エレメントを含む。免疫吸着クロマトグラフ
ィー材料を含む血管は、一般的に、使用のすぐ前にその滅菌を容易にする滅菌パ
ッケージング材料内に提供される。このキットの部分は、必要に応じて、血管を
支持体に付着させ、そして、その使用の間実質上垂直な位置に維持する方法を含
む。このような付着方法の例は、Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃより市販
されているカタログ番号０５７６９の調整可能な３−突起物クランプのように当
業者に周知である。キットの一部は、必要に応じて、慣例的なアフェレーシス装
置への連結を容易にする可撓性滅菌チュービングを含み得る。このキットの一部
は、必要に応じて、基本的に閉鎖されたループ装置から不要な材料の排出を容易
にする滅菌ヘパリン処理したルアーロック３方向弁を含み得る。このキットの一
部は、微小凝集体の除去を容易にするために、必要に応じて、白血球ろ過（例え
ば、Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，２０００ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｏｕ
ｌｅｖａｒｄ，Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ １１５４８から市販されているＰ
ａｌｌ ＰＬ１００（登録商標）ろ過）を含み得る。このキットの一部は、必要
に応じて、患者の静脈供給へ戻る線へ空気を導入するのを避けるために、ドリッ
プチャンバーを含み得る。

【００３８】 （適用） 以前に記載されたように、本発明の方法および装置は、哺乳動物への治療ウイ
ルスの投与と組み合わせて使用され得る。哺乳動物において、被験体から抗ウイ
ルス性抗体を除去するためのプロセスは、治療ウイルスの投与の前に行なわれる
。本発明は、既存の抗ウイルス抗体（すなわち、治療ウイルスに供されていない
未処置の患者における抗体）または治療ウイルスへの以前の曝露を介して誘導さ
れた抗ウイルス性抗体を除去するために使用され得ることが理解されるべきであ
る。本発明の方法および提供された材料は、臨床環境においての使用、特に操作
された治療ウイルスを含む治療産物の投与と組み合わせての使用に適している。

【００３９】 個体が所定のウイルスに対する既存の中和抗体を保有し得るか否かは、慣例的
なアッセイ手順によって簡単に決定され得る。本明細書中の実施例２は、臨床環
境で容易に使用され得るこのようなアッセイの例を提供する。科学文献で公知で
ある他の抗ウイルス抗体の検出に関する同様のアッセイは、容易に使用され得る
。

【００４０】 被験体は、所定の治療ウイルスに対する抗体を所有し得ないが、このようなウ
イルスの最初の用量の投与後に、哺乳動物の免疫系は、ベクターに対する免疫応
答を増加する。結果として、本発明の方法は、ウイルスの複数用量が延長した期
間にわたって患者に投与される場合、文脈中で特に有用である。本発明が所定の
治療ウイルスを使用して個体の投薬を容易にするという事実は、特に有用である
。

【００４１】 アフェレーシス手順は、臨床環境において一般的に行なわれ得、そして、個々
の患者のための以下の一般的な手順に対する調整は、当業者の臨床家に容易に明
らかである。慣例的な無菌性技術は、この手順の間中使用され得る。アフェレー
シス手順の実施において一般的に評価される特定の注意が、守られるべきである
。例えば、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）インヒビター医薬品を受容する
患者は、アフェレーシス手順の開始前の約７２時間、このような医薬品を使用す
べきではない。さらに、有意な血管内または頭蓋内の疾患（ここで、微量な流体
または圧力変化は、有害な影響を生じる）を示す患者、損なわれた腎機能を有す
る患者、重篤な貧血または全身感染は、アフェレーシス手順ためのこれらの適合
性について、臨床家によって、注意深く評価されなければならない。

【００４２】 代表的なヒトの血液容量は、ヒト男性について体重の６９ｍｌ／ｋｇであり、
ヒト女性について６５ｍｇ／ｋｇである。この容量の３９ｍｌ／ｋｇ（男性）お
よび４０ｍｌ／ｋｇ（女性）は、血漿容量に起因する。結果として、体重７５ｋ
ｇの代表的な男性ヒト患者は、約３リットルの血漿容量を保有する。患者の全体
の血漿容量が単離され、そして、既存の免疫性における治療学的に有意な減少を
達成するために、カラム手順に供される。約１ログ（ｌｏｇ）の血清中和力価の
減少は、組換えアデノウイルス構築物の形質転換効率の有意な増加を生じる。約
２ログの力価の減少がより好ましい。血清中和力価におけるさらなる減少が好ま
しいが、臨床的に必要であると考えられていない。しかし、血漿容量の有意な画
分（１リットルまたはそれを超える）が処置のために単離されることが好ましい
。この血清の容量は、日常的に慣例的なアフェレーシス技術によって単離される
。

【００４３】 ヒト血清は、その画分のみが中和活性に関する種々の抗体を含む。例えば、ヒ
ト血漿は、約１０ｍｇ／ｍｌのＩｇＧを含み、その画分のみが、中和抗アデノウ
イルス活性と関連する。結果的として、この免疫アフィニティークロマトグラフ
ィーカラムは、好ましくは、処置される血漿の１リットル毎に、クロマトグラフ
ィー支持体に結合された約１００〜５００ｍｇのアデノウイルスキャプシドタン
パク質またはプロテインＧ（より好ましくは２００〜４００ｍｇ）を含む。アデ
ノウイルスキャプシドタンパク質は、公知の手順に従ってアデノウイルスの培養
によって獲得され得る。架橋プロテインＧを含む免疫吸着カラム支持体は、Ｚｙ
ｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，４５８ Ｃａｒｌｔｏｎ Ｃｏ
ｕｒｔ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ ９４０８０などから
市販されている。

【００４４】 臨床使用の前に、免疫アフィニティークロマトグラフィー材料は、カラムを介
して臨床用滅菌リン酸緩衝化生理食塩水の約３ベッド容量を通過させることによ
って、完全に洗浄されるべきである。洗浄手順後、１ベッド容量の硫酸ヘパリン
（容量５００ｍｌにおいて約５０００ユニット）が、カラムに導入されるべきで
ある。次いでこのカラムを垂直にし、撹拌しないようにするかまたは空気がカラ
ムベッドもしくは供給ラインに侵入しないようにする。本発明の方法の実施にお
いて使用される装置の慣例的な配置を添付の図面の図９に概略的に示す。

【００４５】 患者への静脈アクセスを確立し、そして、静脈の全血液がアフェレーシス装置
に侵入し、ここで、血漿成分が他の非血漿成分から単離される。非血漿成分は、
患者の血流へ戻される。血漿成分は、免疫アフィニティークロマトグラフィーカ
ラムに指向する。この単離された血清は、約５ｍｌ／分〜約２５ｍｌ／分の流速
で、免疫アフィニティークロマトグラフィーカラムを通過されるべきである。さ
らに好ましくは、１０〜２０ｍｌ／分の流速が手順の経過中維持される。少なく
ともヘパリン容量に等価な最初の容量は、患者へのヘパリンの導入を避けるため
に除去されるべきである。残りのカラム精製血清は、処理された血漿を受容する
ための血管に指向する。患者への再導入の前に、処置された血漿成分は、微小凝
集物を除去するために、白血球ろ過（例えば、Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏ
ｎ，２２００ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｅａｓｔ Ｈｉｌｌｓ
，ＮＹ １１５４８から市販されているＰａｌｌ ＰＬ１００（登録商標）ろ過
）を通過され得ることが好ましい。さらに、患者の静脈供給へ戻る線へ空気が侵
入するのを避けるために、ドリップチャンバーが使用されるべきである。

【００４６】 この手順から生じる血清中和能力の減少は、少なくとも５日間持続する血清中
和能力の減少を生じる。結果として、上記手順の治療の利点を最小にするために
、ウイルスの投与が、手順後のこの期間内に発生することが好ましい。抗ウイル
ス抗体の除去は、血漿分離法手順後比較的すぐに観察され、そして、免疫系はす
ぐにこの応答を再現しようと試みるので、この血漿分離法手順は、治療ウイルス
の投与の比較的すぐ前に（好ましくは何時間か前）に行なわれることが好ましい
。さらに、治療ウイルスの注射は、さらに血清中和抗体の除去を生じるので、ウ
イルスのさらなる投与（連続注射）は、この２次抗体除去の最大の効果を与える
最初の投与後、約１時間から約１日までに行なわれ得る。血漿分離法手順は、ヒ
ト患者によって十分に耐えられるが、最大の効果を達成するためのこの手順の日
常的な実施に対する技術的制限は存在しない。しかし、以前に述べられたように
、産生された効果は、プロセスの日常的な反復が一般的に必要とされない十分な
期間の効果である。

【００４７】 有益な効果を提供するために、循環から抗ウイルス抗体を完全に除去すること
は必ずしも必須ではないことが理解されるべきである。結果として、個々の全体
の血漿容量が、このクロマトグラフィー手順に供されることは必要ではない。治
療ウイルスに対して免疫応答を最小限にすることに対する手順の影響は、抗ウイ
ルス抗体のレベルの減少の増加で強化されるが、抗ウイルス抗体の濃度における
比較的中程度の減少でさえ、有意な治療効果を提供する。本発明の好ましい実施
においては、慣例的なアフェレーシス手順に従って、約１リットルの血清が、単
一手順で免疫アフィニティーカラム上の精製のために単離される。抗ウイルス抗
体のより大きい減少が必要な場合、手順は、より大きい容量で処理するために拡
大され得るかまたは反復して行なわれ得る。

【００４８】 用語「治療ウイルス」および「治療ウイルスベクター」は、本明細書中に交換
可能に使用され、治療薬剤（例えば、野生型ウイルス、弱毒化ウイルス）、ワク
チンベクターまたは治療効果を増強するためにゲノムに改変を含む組換えウイル
スとして使用されるウイルスについていう。治療薬剤としてのウイルスまたは「
ウイルスベクター」の使用は、以前に考察されるように当該分野で周知である。
さらに、多数のウイルスは、外因性遺伝子の送達のためのベクターとして一般的
に使用される。一般的に使用されるベクターとしては、組換え的に改変されたエ
ンベロープまたは非エンベロープＤＮＡおよびＲＮＡウイルスが挙げられ、好ま
しくは、バキュロウイルス科、パルボウイルス科、ピルコナウイルス科、ヘルペ
スウイルス科、ポックスウイルス科、アデノウイルス科、またはピコルナウイル
ス科から選択される。親ベクター性質のそれぞれの有利なエレメントを利用する
キメラベクターもまた、使用される（例えば、Ｆｅｎｇら（１９９７）Ｎａｔｕ
ｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １５：８６６−８７０）。このようなウイ
ルスベクターは、野生型であってもよいし、または複製欠損、条件的に複製する
かまたは複製競合となるように組換えＤＮＡ技術によって改変されてもよい。

【００４９】 治療ウイルスは、現在、種々の経路の投与（局所投与（例えば、腫瘍内注射）
、領域性投与（例えば、腹腔内、膀胱内、または肝臓内）および全身投与（例え
ば、筋内および静脈内）を含む）によって哺乳動物被験体に投与される。

【００５０】 好ましいベクターは、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、およびレトロウ
イルスゲノムに由来する。本発明の最も好ましい実施では、ベクターはヒトアデ
ノウイルスゲノムに由来する。特に好ましいベクターは、ヒトアデノウイルス血
清型２または５に由来する。このようなベクターの複製能力は、Ｅ１ａおよび／
またはＥ１ｂコード領域における改変または欠損によって弱められ得る（「複製
欠損」と考えられる地点まで）。特定のウイルス発現特徴を達成するためかまた
は反復投与を可能とするためかまたは免疫応答を低下させるためのウイルスゲノ
ムへの他の改変が好ましい。ｐ５３腫瘍抑制遺伝子をコードするＤＮＡ配列を含
むヒトアデノウイルス５型ベクターが最も好ましい。本明細書中に例示されるよ
うな本発明の最も好ましい実施において、このベクターは、Ｇｒｅｇｏｒｙら、
米国特許第５，９３２，２１０号、１９９９年８月３日公開（この全体の教示が
本明細書中に参考として援用される）に記載されるように、このベクターは、ｐ
５３腫瘍抑制遺伝子Ａ／Ｃ／Ｎ５３をコードする複製欠損ベクターアデノウイル
スベクターである。

【００５１】 あるいは、ウイルスベクターは、条件的に複製するかまたは複製競合であり得
る。条件的に複製するウイルスベクターは、厄介な広範な感染を避ける間、特定
の細胞型における選択的な発現を達成するために使用される。条件的に複製する
ベクターの例は、Ｐｅｎｎｉｓｉ，Ｅ．（１９９６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７４：
３４２−３４３；ＲｕｓｓｅｌｌおよびＳ．Ｊ．（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．ｏｆ
Ｃａｎｃｅｒ ３０Ａ（８）：１１６５−１１７１に記載される。選択的に複
製するベクターのさらなる例は、ウイルスの複製に必須の遺伝子が特定の細胞型
または細胞状態においてのみ活性であるプロモーターの制御下にある、これらの
ベクターを含み、その結果このようなの遺伝子の発現の非存在下でウイルスは複
製しない。このようなベクターの例は、Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎら、米国特許第５，
６９８，４４３号、１９９７年１２月１６日公開およびＨｅｎｄｅｒｓｏｎら、
米国特許第５，８７１，７２６号、１９９９年２月１６日公開（これらの全体が
本明細書中に参考として援用される）に開示される。

【００５２】 さらに、ウイルスゲノムは、特定の条件下のみで、複製または発現を達成する
誘導性プロモーターを含むように改変され得る。誘導可能なプロモーターの例は
、科学文献において公知である（例えば、ＹｏｓｈｉｄａおよびＨａｍａｄａ（
１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２３０：４２
６−４３０；Ｉｉｄａら（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０（９）：６０５４−
６０５９；Ｈｗａｎｇら（１９９７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ ７１（９）：７１２８−
７１３１；Ｌｅｅら（１９９７）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１７（９）：５
０９７−５１０５；およびＤｒｅｈｅｒら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
２７２（４６）；２９３６４−２９３７１を参照のこと）。

【００５３】 ウイルスはまた、選択的に複製するウイルスであるように設計される。特に好
ましい選択的に複製するウイルスは、Ｒａｍａｃｈａｎｄｒａら、ＰＣＴ国際公
開番号ＷＯ００／２２１３７、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９９／２１４５２、２
０００年４月２０日公開およびＨｏｗｅ，Ｊ．、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ００２
２１３６、国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９９／２１４５１、２０００年４月２０日
公開において記載される。特に好ましい選択的に複製する組換えアデノウイルス
は、Ｈｏｗｅ，Ｊ．においてより十分に記載されるように、ウイルスｄ１０１／
０７／３０９である。

【００５４】 複製について弱毒化されたウイルスはまた、治療領域において有用であること
が実証されている。例えば、Ｅ１ｂ５５Ｋ遺伝子（ＢａｒｋｅｒおよびＢｅｒｋ
（１９８７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １５６：１０７）における特異的な欠損を含む
アデノウイルスｄｌ１５２０は、ヒトにおける治療的効果を使用される。このよ
うなベクターはまた、ＭｃＣｏｒｍｉｃｋ（米国特許第５，６７７，１７８号、
１９９７年１０月１４日公開）およびＭｃＣｏｒｍｉｃｋ（米国特許第５，８４
６，９４５号、１９９８年１２月８日公開）に記載される。本発明の方法はまた
、このようなベクターに対する既存かまたは誘導された体液性免疫応答を最小に
するために、このようなベクターの投与と組み合わせて使用され得る。

【００５５】 さらに、治療ウイルスは、感染細胞における発現のための治療導入遺伝子を取
り込み得る。用語「治療導入遺伝子」は、標的細胞におけるその発現が治療効果
を生成する、ヌクレオチド配列をいう。用語治療導入遺伝子は、腫瘍抑制遺伝子
、抗原遺伝子、細胞障害性遺伝子、細胞分裂停止遺伝子、プロドラッグ活性化遺
伝子、アポトーシス遺伝子、薬学的遺伝子または抗脈管形成遺伝子を含むが、こ
れらに限定されない。本発明のベクターは、ＩＲＥＳエレメントの使用を介して
直列かまたは独立して調節されるプロモーターを介してのどちらかで、１つ以上
の治療導入遺伝子を産生するために使用され得る。

【００５６】 用語「腫瘍抑制遺伝子」は、その標的細胞における発現が、新生物表現型を抑
制し得るそして／またはアポトーシスを誘導し得る、ヌクレオチド配列をいう。
本発明の実施において有用な腫瘍抑制遺伝子の例としては、ｐ５３遺伝子、ＡＰ
Ｃ遺伝子、ＤＰＣ−４遺伝子、ＢＲＣＡ−１遺伝子、ＢＲＣＡ−２遺伝子、ＷＴ
−１遺伝子、網膜芽細胞腫遺伝子（Ｌｅｅら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２９
：６４２）、ＭＭＡＣ−１遺伝子、腺腫様ｃｏｌｉタンパク質（Ａｌｂｅｒｓｅ
ｎら、米国特許第５，７８３，６６６号、１９９８年７月２１日公開）、大腸癌
（ＤＣＣ）遺伝子における除去、ＭＭＳＣ−２遺伝子、ＮＦ−１遺伝子、染色体
３ｐ２１．３．に位置する咽頭癌腫瘍抑制遺伝子（Ｃｈｅｎｇら、１９９８、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９５：３０４２−３０４７）、ＭＴＳＩ遺
伝子、ＣＤＫ４遺伝子、ＮＦ−１遺伝子、ＮＦ−２遺伝子、およびＶＨＬ遺伝子
が挙げられる。治療用途のための特に好ましいアデノウイルスは、Ｇｒｅｇｏｒ
ｙら、米国特許第５，９３２，２１０号、１９９９年８月３日公開（その全体の
教示が本明細書中に参考として援用される）により十分に記載されるｐ５３腫瘍
抑制遺伝子をコードするＡＣＮ５３ベクターである。

【００５７】 用語「抗原性遺伝子」とは、標的細胞における発現が免疫系による認識が可能
な細胞表面抗原性タンパク質の産生を引き起こすヌクレオチド配列をいう。抗原
性遺伝子の例としては、（１９９４年２月３日に出願された、Ｌｅｖｉｎｅ，Ａ
．ＰＣＴ国際出願番号ＷＯ９４／０２１６７に記載されるような）癌胚抗原（Ｃ
ＥＡ）であるｐ５３が挙げられる。免疫認識を容易にするために、抗原性遺伝子
は、ＭＨＣクラスＩ抗原に融合され得る。

【００５８】 用語「細胞傷害性遺伝子」とは、細胞における発現が毒性効果を生み出すヌク
レオチド配列をいう。このような細胞傷害性遺伝子の例としては、シュードモナ
ス属体外毒素、リシン毒素、ジフテリア（ｄｉｐｔｈｅｒｉａ）毒素などをコー
ドするヌクレオチド配列が挙げられる。

【００５９】 用語「細胞増殖抑制遺伝子」とは、細胞での発現が細胞周期における停止を引
き起こすヌクレオチド配列をいう。このような細胞増殖抑制遺伝子の例としては
、ｐ２１、網膜芽腫遺伝子、Ｅ２Ｆ−Ｒｂ遺伝子、Ｐ１６、ｐ１５、ｐ１８およ
びｐ１９のようなサイクリン依存性キナーゼインヒビターをコードする遺伝子、
Ｂｒａｎｅｌｌｅｃら（１９９７年５月９日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９７／
１６４５９および１９９６年１０月３日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９６／３０
３８５）に記載されるような増殖停止特異的ホメオボックス（ＧＡＸ）遺伝子が
挙げられる。

【００６０】 用語「サイトカイン遺伝子」とは、細胞における発現がサイトカインを産生す
るヌクレオチド配列をいう。このようなサイトカインの例としては、ＧＭ−ＣＳ
Ｆ、インターロイキン（特に、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、Ｉ
Ｌ−１０、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０）、インターフェロンのα、γおよびβサブ
タイプ、コンセンサスインターフェロン、ならびに、特に、インターフェロンα
−２ｂおよびインターフェロンα−２α−１のような融合体が挙げられる。

【００６１】 用語「ケモカイン遺伝子」とは、細胞における発現がサイトカインを産生する
ヌクレオチド配列をいう。用語ケモカインとは、細胞によって分泌される、構造
的に関連する低分子量サイトカイン因子の群をいい、これは、マイトジェン活性
、走化性活性および炎症性活性を有する。それらは、主に４つの保存されたシス
テインを共有する７０〜１００個のアミノ酸残基の陽イオン性タンパク質である
。これらのタンパク質は、２つのアミノ末端システインの空間配置に基づく２つ
の群に分別され得る。第１の群において、２つのシステインは単一の残基によっ
て分離され（Ｃ−ｘ−Ｃ）、一方、第２の群において、２つのシステインは隣接
する（Ｃ−Ｃ）。「Ｃ−ｘ−Ｃ」ケモカインのメンバーの例としては、以下が挙
げられるが、これらに限定されない：血小板第４因子（ＰＦ４）、血小板塩基性
タンパク質（ＰＢＰ）、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、黒色腫増殖刺激活
性タンパク質（ＭＧＳＡ）、マクロファージ炎症性タンパク質２（ＭＩＰ−２）
、マウスＭｉｇ（ｍ１１９）、ニワトリ９Ｅ３（またはｐＣＥＦ−４）、ブタ肺
胞マクロファージ走化性因子ＩおよびＩＩ（ＡＭＣＦ−ＩおよびＡＭＣＦ−ＩＩ
）、プレＢ細胞増殖刺激因子（ＰＢＳＦ）およびＩＰ１０。「Ｃ−Ｃ」群のメン
バーの例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：単核細胞走化
性タンパク質１（ＭＣＰ−１）、単核細胞走化性タンパク質２（ＭＣＰ−２）、
単核細胞走化性タンパク質３（ＭＣＰ−３）、単核細胞走化性タンパク質４（Ｍ
ＣＰ−４）、マクロファージ炎症性タンパク質１α（ＭＩＰ−１−α）、マクロ
ファージ炎症性タンパク質１β（ＭＩＰ−１−β）、マクロファージ炎症性タン
パク質１γ（ＭＩＰ−１−γ）、マクロファージ炎症性タンパク質３α（ＭＩＰ
−３−α）、マクロファージ炎症性タンパク質３β（ＭＩＰ−３−β）、ケモカ
イン（ＥＬＣ）、マクロファージ炎症性タンパク質４（ＭＩＰ−４）、マクロフ
ァージ炎症性タンパク質５（ＭＩＰ−５）、ＬＤ７８β、ＲＡＮＴＥＳ、ＳＩＳ
−イプシロン（ｐ５００）、胸腺および活性化調節ケモカイン（ＴＡＲＣ）、ｅ
ｏｔａｘｉｎ、Ｉ−３０９、ヒトタンパク質ＨＣＣ−１／ＮＣＣ−２、ヒトタン
パク質ＨＣＣ−３、マウスタンパク質Ｃ１０。

【００６２】 用語「薬学的なタンパク質遺伝子」とは、標的細胞において薬学的に効果を有
するタンパク質を産生させるヌクレオチド配列をいう。このような薬学的な遺伝
子の例としては、プロインスリン遺伝子およびアナログ（ＰＣＴ国際特許出願番
号ＷＯ９８／３１３９７に記載される）、成長ホルモン遺伝子、ドパミン、セロ
トニン、上皮増殖因子、ＧＡＢＡ、ＡＣＴＨ、ＮＧＦ、ＶＥＧＦ（標的組織に血
液灌流を増加させるため（新脈管形成も含む）、１９９８年７月３０日に公開さ
れたＰＣＴ公開ＷＯ９８／ ３２８５９）およびトロンボスポンジンなどが挙げ
られる。

【００６３】 用語「プロアポトーシス遺伝子」とは、その発現が細胞のプログラムされた細
胞死経路の誘発を引き起こすヌクレオチド配列をいう。プロアポトーシス遺伝子
の例としては、ｐ５３、アデノウイルスＥ３−１１．６Ｋ（１０．５Ｋ）、アデ
ノウイルスＥ４ｏｒｆ４遺伝子、ｐ５３経路遺伝子、およびカスパーゼをコード
する遺伝子が挙げられる。

【００６４】 用語「プロドラッグ活性化遺伝子」とは、発現すると非治療的化合物を治療的
化合物に変換し得るタンパク質の産生を引き起こすヌクレオチド配列をいう。こ
れは、外部因子による殺傷を受容し得る細胞を与えるか、または細胞における毒
性条件を引き起こす。プロドラッグ活性化遺伝子の例としては、シトシンデアミ
ダーゼ遺伝子が挙げられる。シトシンデアミダーゼは、５−フロオロシトシンを
５フルオロウラシル（強力な抗腫瘍因子）に変換する。腫瘍細胞の溶解は、シト
シンデアミダーゼの局在化されたバーストを提供し、これは、多くの周りの腫瘍
細胞の殺傷を引き起こす腫瘍の局在化された点において、５ＦＣを５ＦＵに変換
し得る。これは、アデノウイルスでこれらの細胞を感染する必要なしに、多くの
腫瘍細胞の殺傷を引き起こす（いわゆる「バイスタンダー効果」）。さらに、チ
ミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子産物を発現する細胞がガンシクロビルの投与によ
る選択的殺傷を受容可能な、ＴＫ遺伝子（例えば、１９９７年５月２０日に発行
されたＷｏｏら、米国特許第５，６３１，２３６号および１９９７年２月１１日
に発行されたＦｒｅｅｍａｎら、米国特許第５，６０１，８１８号を参照のこと
）が利用され得る。 用語「抗脈管新生性」遺伝子とは、発現すると抗脈管新生因子の細胞外分泌を引
き起こすヌクレオチド配列をいう。抗脈管新生因子としては、アンジオスタチン
、Ｔｉｅ２のような血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）のインヒビター（ＰＮＡＳ（
ＵＳＡ）（１９９８）９５：８７９５−８８００に記載される）、エンドスタチ
ンが挙げられる。

【００６５】 野生型タンパク質の機能的サブフラグメントをコードするために、上記で参照
された遺伝子に対して改変および／または欠失が、本発明の実施における使用に
容易に適用され得ることは、当業者に容易に明らかである。例えば、ｐ５３遺伝
子の参照は、野生型タンパク質だけでなく改変ｐ５３タンパク質も含む。このよ
うな改変ｐ５３タンパク質の例としては、核貯留を増やすためのｐ５３に対する
改変、カルパインコンセンサス切断部位を排除するためのΔ１３−１９アミノ酸
のような欠失（ＫｕｂｂｕｔａｔおよびＶｏｕｓｄｅｎ（１９９７）Ｍｏｌ．Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１７：４６０−４６８）、オリゴマー形成ドメインに対する
改変（Ｂｒａｃｃｏら ＰＣＴ公開された出願ＷＯ９７／０４９２または米国特
許第５，５７３，９５２号などに記載される）が挙げられる。

【００６６】 上記の治療的遺伝子は、単一ペプチドまたは核局在化シグナル（ＮＬＳ）のよ
うな標的部分を包含することによって、培地中に分泌され得るか、または、特定
の細胞内位置に局在化され得ることが、当業者にとって容易に明らかである。治
療的導入遺伝子と単純ヘルペスウイルスＩ型（ＨＳＶ−１）構造タンパク質（Ｖ
Ｐ２２）との融合タンパク質はまた、治療的導入遺伝子の決定に含まれる。ＶＰ
２２シグナルを含む融合タンパク質は、感染細胞において合成される場合、感染
細胞の外に運び出され、そして約１６個の細胞の幅の直径の周りの未感染細胞に
効果的に入る。この系は、融合タンパク質が周りの細胞の核に効果的に送達され
る場合、転写的に活性なタンパク質（例えば、ｐ５３）と結合する際、特に有用
である。例えば、Ｅｌｌｉｏｔｔ，Ｇ．およびＯ’Ｈａｒｅ，Ｐ．Ｃｅｌｌ．８
８：２２３−２３３：１９９７；Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ａ．およびＣａｓｔｅｌｌ
ｉｎｏ，Ａ．Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｎｅｗｓ Ｂｒｉｅｆｓ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１５：２０５：１９９７；Ｏ’Ｈａｒｅら、１９９７
年２月１３日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９７／０５２６５を参照のこと。ＨＩ
Ｖ Ｔａｔタンパク質由来の類似の標的部分はまた、Ｖｉｖｅｓら（１９９７）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１６０１０−１６０１７に記載される。

【００６７】 いくつかの場合、特定の細胞型における外因性導入遺伝子の導入を達成するた
めにベクターを利用または設計することは、価値があり得る。特定のベクターは
、特定の組織型に対して天然の属性を示す。例えば、ヘルプスウイルス（ｈｅｒ
ｐｅｓｖｉｒｉｄｉａｅ）属から誘導されたベクターは、神経細胞に優先的に感
染することが示された。組換え的に改変されたヘルプスウイルスベクターの例は
、１９９４年７月１２日に発行された米国特許第５，３２８，６８８号において
開示される。細胞型特異性または細胞型標的化はまた、ウイルスエンベロープタ
ンパク質の改変による特徴的に広い感染性を有するウイルスに由来するベクター
において達成され得る。例えば、細胞標的化は、独特の細胞表面レセプターとの
特異的相互作用を有する、改変された瘤およびファイバードメインの発現を達成
するために、アデノウイルスを用いるウイルスゲノム瘤およびファイバーのコー
ド配列の選択的改変によって達成された。このような改変の例は、Ｗｉｃｋｈａ
ｍら（１９９７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ ７１（１１）：８２２１−８２２９（ＲＧＤ
ペプチドのアデノウイルスファイバータンパク質への取り込み）；Ａｒｎｂｅｒ
ｇら（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２２７：２３９−２４４（目および生殖管
への屈性を達成するためのアデノウイルスファイバー遺伝子の改変）；Ｈａｒｒ
ｉｓおよびＬｅｍｏｉｎｅ（１９９６）ＴＩＧ １２（１０）：４００−４０５
；Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら（１９９７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１（６）：４７８２−
４７９０；Ｍｉｃｈａｅｌら（１９９５）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２：６６
０−６６８（ガストリン放出ペプチドフラグメントのアデノウイルスファイバー
タンパク質への取り込み）；およびＯｈｎｏら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉ
ｂｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １５：７６３−７６７（タンパク質Ａ−ＩｇＧ結合
ドメインのシンドビスウイルスへの取り込み）に記載される。細胞特異的標的化
の他の方法は、エンベロープタンパク質への抗体または抗体フラグメントの結合
によって達成された（例えば、Ｍｉｃｈａｅｌら（１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ ２６８：６８６６−６８６９、Ｗａｔｋｉｎｓら（１９９７）Ｇｅｎｅ
Ｔｈｅｒａｐｙ ４：１００４−１０１２；Ｄｏｕｇｌａｓら（１９９６）Ｎ
ａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：１５７４−１５７８を参照の
こと）。あるいは、特定の部分は、標的化を達成するためにウイルス表面に結合
し得る（例えば、Ｎｉｌｓｏｎら（１９９６）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：
２８０−２８６（ＥＧＦのレトロウイルスタンパク質への接合）を参照のこと）
。さらに、ウイルスによってコードされた治療的導入遺伝子はまた、特定の細胞
型において優先的に導入遺伝子の発現を可能にする組織特異的プロモーター領域
の制御下にある。

【００６８】 本発明の好ましい実施において、この手順は、ヒトの癌の処置のための組換え
アデノウイルス治療と組み合わせて適用される。従来の腫瘍学の実施に従って、
患者は、最大耐容量の治療的薬剤で投薬される。臨床的治験の過程において、１
．５×１０¹³の組換えアデノウイルス粒子の用量は、ヒト被検体において十分耐
容され得る。ｐ５３を発現する複製欠損組換えアデノウイルスでの臨床的治験は
、３週間の間、毎週繰り返された、５日間にわたる約１×１０¹³の組換えウイル
ス粒子の注入という治療過程は、ヒトの卵巣癌の処置において効果的であること
が示された。本発明において好ましい治療的処置レジメンは、この治療過程に続
く上記のプラスマフェレーシス技術を用いる抗ウイルス抗体の除去を含む。さら
に、このような量での組換えアデノウイルスの注入は、抗体をさらに枯渇し得、
従って、引き続いて起こる形質転換を増強し得る。

【００６９】 以下は、卵巣癌の処置のためのｐ５３ ＡＣＮ５３をコードする複製欠損組換
えアデノウイルスの投与と組み合わせたこの手順の従来の適用についての、手順
およびパラメーターの記載である。この薬剤での治療の典型的な過程は、５日間
にわたる毎日の１．５×１０¹³のウイルス粒子の投与を含む。ＦＤＡフェーズＩ
ＩＩで承認された、ＡＣＮ５３ウイルス細胞（ｃａｌｌ）を用いる卵巣癌の処置
のための臨床的プロトコルは、化学療法剤であるシスプラチンおよびパクリタキ
セルと組み合わせた、上記の典型的な５日の治療過程を含む。患者は、安静期間
が介在する３つの治療過程を受ける。アデノウイルス以外の治療ウイルスについ
てのこの手順に対する改変は、当業者に容易に明らかである。

【００７０】 治療ウイルスを用いる処置の開始に先立って、患者は、必要に応じて、当該分
野で周知の標準的アッセイ手順に従って、予め存在する抗ウイルス抗体の存在に
ついてアッセイされ得る。抗アデノウイルス抗体の決定についてのアッセイは、
本明細書中で実施例３において提供される。以前の治療過程において治療ウイル
スに以前に曝されていた患者は、通常、このような抗体をプロセスすることが想
定され得るので、このプレスクリーニングは、投薬を受けたことのない患者にお
いてより必要であり得る。患者が、予め存在するかまたは誘発された中和抗体を
保有している場合は、３００ｍｌ容量の容器のカラム形態に２５０ｍｇのアデノ
ウイルスカプシドタンパク質を含む免疫親和性クロマトグラフィー材料は、本明
細書中の実施例２の教示に実質的に従って調製され、そして使用のために滅菌さ
れる。クロマトグラフィー材料を含む容器は、直立様式で支持体に添付される。
上記のような装置は、添付される図面の図９の概略図に実質的に従って調製され
、そして準備される。カラムは、３倍のベッド容量の滅菌したリン酸緩衝化生理
的食塩水で洗浄される。５００ｍｌのヘパリンが容器に導入され、そして過剰分
は廃棄される。アフェレーシス装置への静脈血供給は、頭側皮静脈の特徴付けに
よって確立される。アフェレーシス装置の血漿出口ポートは、クロマトグラフィ
ー材料を含む容器の底面入口ポートへの可撓性の管材料を介して接続される。血
漿はクロマトグラフィー材料を含む容器に入れられ得る。血漿の流れは、最初は
、約１０ｍｌ／分で確立されるべきである。カラムの上部から出る血漿の最初の
４００ｍｌは、ヘパリンで実質的に汚染されているので、処分されるべきである
。残りの容量は、患者への再導入のために保持容器に注がれる。可能ならば、血
漿の流れは、約１５〜２０ｍｌ／分に増加されるべきである。約１〜１．５リッ
トルの血清の処置に引き続いて、手順は中断されるべきである。さらなる容量が
処置されるならば、新しいクロマトグラフィー樹脂が利用されるべきである。

【００７１】 （ウイルスエピトープの使用） 本発明は、治療ウイルスで哺乳動物被験体を処置するための改善された方法を
さらに提供し、この方法は、この哺乳動物にウイルスエピトープまたはウイルス
エピトープ模倣物（ｍｉｍｅｔｉｃ）を投与し、引き続いて、治療的有効量の治
療ウイルスを投与する工程を包含する。抗体を除去するための上記のプラスマフ
ェレーシス手順の代わりに、処置されるべき哺乳動物の血流に、多量の抗ウイル
スエピトープもまた投与し得る。いくつかの場合、これらのウイルスコートタン
パク質は毒性で（アデノウイルスヘキソンおよびファイバータンパク質など）、
この場合、多量のエピトープ模倣物（ペプチジルまたは低分子有機化合物のいず
れか）を投与することが好ましい。次いで、これらの因子は、循環系に予め存在
する抗ウイルス抗体に結合し得る。上記のように、ｒＡｄベクターの注入はまた
、血清から中和抗体を枯渇し、従って、インビボでの抗体の枯渇および再投薬に
ついて有用である。図４に示されるデータは、高親和性抗体がウイルスの投与に
よって実質的に完全に枯渇されることをさらに示す。これは、ウイルスでの個体
の前処理は、予め存在するかまたは誘発された、この型のウイルスに対する免疫
応答を枯渇することを示す。従って、ウイルスまたはその免疫学的サブフラグメ
ントの投与は、予め存在するかまたは誘発された、治療ウイルスに対する免疫応
答を減少し得る。次いで、この手順に引き続いて、治療ウイルスが投与され得る
。以前のデータから示されるように、免疫枯渇の持続期間は限定される。以前の
データから示されるように、免疫枯渇の継続期間は限定される。従って、ウイル
ス送達の効果を最大にするために、治療ウイルスに先立って比較的すぐに(数時
間以内に)、このエピトープまたはエピトープ模倣物を投与することが好ましい
。

【００７２】 （実施例） 以下の実施例は、本発明の模範的なハイブリッドベクターの構築を示す実験の
方法論および結果を提供する。本発明の精神または実質的な特徴から逸脱するこ
となく、本発明がこれらの実施例に特に開示される形態以外の形態で具体化され
得ることは、本発明の関与する当業者には明らかである。従って、以下に記載さ
れる本発明の特定の実施例は、本発明の範囲の例示とみなされ、そして限定とみ
なされない。以下の実施例において、「ｇ」はグラムを意味し、「ｍｌ」はミリ
リットルを意味し、「℃」は摂氏温度を意味し、「ｍｉｎ．」は分を意味し、「
ＦＢＳ」はウシ胎仔血清を意味する。

【００７３】 （実施例１．インビボでの中和抗体の誘導のためのプライミング動物） １５匹のＢＡＬＢ／Ｃマウスに５×１０¹⁰のＺＺＣＢ粒子を皮下注射した。２
８日後、マウスを５×１０¹⁰の粒子の皮下注射を用いてブーストした。２回目の
注射の２週間後に、マウスを屠殺し、そして血清を単離した。１５匹全てのマウ
スからの血清（Ａｄ未枯渇血清という）を引き続く実験のためにプールした。デ
ータを添付される図面の図１に示す。この血清は、アデノウイルスで一度投薬さ
れた動物由来の血清よりはるかに高い力価を有することが示された。これらのマ
ウスにアデノウイルスを二度注射し、強い抗体応答を誘発させ、そしてウイルス
に予め曝され、そしてアデノウイルスでさらなる治療を受けるヒトのシナリオを
模倣した。

【００７４】 （実施例２．アデノウイルスカプシドタンパク質カラムの調整） プールされた血清から抗体を精製するために、アデノウイルスカプシドタンパ
ク質をＡｆｆｉ−Ｇｅｌ（登録商標）１５（カタログ番号１５３６０５１として
ＢｉｏＲａｄから市販）に結合させたクロマトグラフィーカラムを調製した。前
出のＳｈａｂｒａｍらの教示に従って、アデノウイルスカプシドタンパク質（ヘ
キソン、ペントン、ファイバーおよび３Ａ）をクロマトグラフィーで精製し、そ
して使用する均質性にまで精製した。既知量のヘキソン（２１０μｇ）、ペント
ン（５２２μｇ）、ファイバー（１４６μｇ）および３Ａ（１０５μｇ）を、製
造者によって提供された説明書に実質的に従って、Ａｆｆｉ−Ｇｅｌ（登録商標
）１５に結合した。Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイによって、結合効率を約７１％（
使用者によって決められた場合）と決定した。Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイは、ア
ミノ酸の側鎖にある遊離アミノ基（特にリジン）に結合する青色染料（Ｃｏｏｍ
ａｓｓｉｅ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ）に基づき、そしてＢｉｏ−Ｒａｄ
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｂｉｏ−Ｒａｄから市販）を用いて、
製造者の説明書に実質的に従ってＢｒａｄｆｏｒｄアッセイを行った。

【００７５】 （実施例３．プライムされた動物の血清由来の抗アデノウイルス抗体の精製） 上記の実施例１の教示に実質的に従って調製された、ＺＺＣＢでプライムされ
た動物から得られた、２００〜１５００μｌの血清を、実施例２で調製されたカ
ラムに導入した。４℃で２〜４時間ゆっくり回転させながら、血清をアデノウイ
ルスカプシドタンパク質カラムに結合させた。１０００μｌ未満の血清をカラム
に使用する場合、血清をＰＢＳで１０００μｌまで希釈した。

【００７６】 Ａｄ−カラムに吸着された血清（カラムで枯渇された血清という）をカラムか
ら収集し、そして抗アデノウイルスカプシド抗体（Ａｄ−Ａｂという）を０．２
Ｍのグリシン（ｐＨ２）でカラムから溶出させた。カラムから得られた抗体を、
１／３容量の１Ｍのトリス（ｐＨ８）中で中和し、引き続いて、ＰＢＳ中で透析
し、そして貯蔵した。血清から枯渇された抗体の濃度を、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッ
セイを用いて定量した。

【００７７】 インビトロでの中和アッセイを行い、抗アデノウイルス抗体の除去が血清の中
和活性を減少させることを示した（図２）。中和アッセイを、９６ウェルの形態
で、目的の血清の連続希釈によって実施した（１：２０の希釈で開始し、そして
２の増大で増加した（すなわち、１：４０，１：８０など））。適切に希釈され
た血清を、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現する組換えアデノウイルス（Ｇ
ＦＣＢ）と共に、最終濃度４×１０⁸粒子／ｍｌで３７℃で１時間インキュベー
トさせる。この血清（ウイルス混合物）を９６ウェルの形態に９×１０³／ウェ
ルでプレートしたＨｅｌａ細胞上に移し、そしてウイルスを一晩細胞に感染させ
た。約１２時間後に、中和力をアッセイするために、ＧＦＰについての蛍光読み
取りを蛍光測定器を用いて評価した。

【００７８】 （実施例４．中和抗体の非存在下での遺伝子導入） 抗アデノウイルス抗体の除去がウイルスの形質導入効率を増加したか否かを試
験するための実験的手順について、６匹のマウスを、ｒＡｄタンパク質カラムか
ら溶出された抗アデノウイルス抗体４０μｇか、または同量のカラム枯渇血清も
しくはカラム未枯渇血清のいずれかで受動免疫した。さらなる５匹のマウスを、
ｖＰＢＳと共に注入された血清で受動免疫し、そしてさらに２匹のマウスを、ｒ
Ａｄタンパク質カラムから溶出された抗アデノウイルス抗体８０μｇで受動免疫
した。ＩＰ投与の１〜３時間後に、少量の血清を各マウスから個々に収集し、そ
れぞれの特定のマウスに対して受動免疫が効果的か否かを決定した。マウスを一
晩安静にさせた。

【００７９】 翌日、５×１０¹⁰粒子のウイルス（ＢＧＣＧ）をマウスに尾静脈注射した。肝
臓におけるβ−ゲル活性についての染色によってウイルスの導入効率をモニター
し得るように、ＢＧＣＧを用いた。ウイルス注射の２時間後に、マウスから２度
目の採血をし、血清を収集し、中和抗体レベルを観察した。ウイルス注射の３日
後にマウスを屠殺し、そして血清と肝臓の両方をそれぞれのマウスから単離した
。中和活性について血清を分析し（図４）、そして首尾良くウイルスが形質導入
した指標として、β−ｇａｌ活性について肝臓をアッセイした（図５）。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、アデノウイルスの皮下注射後の、抗アデノウイルス中和抗体のＩＤ５
０値を示す棒グラフである。第１のカラム（実線の黒）は、単一アデノウイルス
注射後、７〜１０日に観察された抗体力価を示す。第２のカラム（白）は、単一
アデノウイルス注射後、１４日に観察された抗体力価を示す。第３のカラム（灰
色）は、組換えアデノウイルスの２回の皮下注射後、７０日での抗体力価を示す
。パネルＡは、未精製血清の抗体力価を示す。パネルＢは、アデノウイルスカプ
シドエピトープを含むカラム上で精製された血清の抗体力価を示す。パネルＣは
、ｖＰＢＳコントロールを示す。示されるデータから見出され得るように、抗体
力価は、再投与の後に有意に高かった（注射、７０日）。

【図２】 図２は、抗アデノウイルス抗体の除去がインビトロでアデノウイルスの増加し
た形質導入効率を引き起こすことを示すデータのグラフ表示である。縦軸は、形
質導入されていないコントロールＨｅＬａ細胞と比較した、ｒＡｄ／ＧＦＰを用
いた形質導入効率の測定である。黒丸は、ｒＡｄプライムされた動物由来の血清
を示す。三角は、ｖＰＢＳ注射された動物由来の血清と混同されたウイルスの形
質導入効率を示す。白丸は、抗Ａｄ抗体が枯渇されたｒＡｄプライム動物由来の
血清を示し、そして四角は、抗Ａｄ抗体と混合されたウイルスの形質導入効率を
示し、これは、ｒＡｄプライム動物から抗Ａｄ抗体を枯渇するために使用される
カラムから溶出された。

【図３】 図３は、受動免疫手順がレシピエント宿主動物中で血清中和抗体を生じること
を示す折れ線グラフである。縦軸は、抗体の力価を示す。横軸は、受動免疫後の
時間（時間）を示す。示されるデータから見出され得るように、血清中和抗体の
存在は、受動免疫の３時間内に観察され、そして少なくとも７２時間の期間にわ
たって安定なままである。注射材料（０．５ｍｌ）が、マウスの正常な血液容積
に必ず希釈され、次いで少なくとも７２時間安定なままであることに注意する。

【図４】 図４は、受動免疫および引き続くβ−ガラクトシダーゼ（ＢＧＣＧ）を発現す
るアデノウイルスの投与後の、血清中和抗体能力（ＩＤ−５０）をグラフで示す
。縦軸は抗体力価を示し、そして横軸は、ウイルスの投与後時間を時間で示す。
各パネルは、受動免疫に使用された材料（すなわち、ｖＰＢＳコントロール、Ａ
ｄ−抗体未枯渇血清、Ａｄ−Ａｂ枯渇血清：Ａｄ−Ａｂ）を示す。黒いバーは、
受動免疫後１時間での中和力価を示す。灰色のバーは、受動免疫後、ウイルス投
与後２時間での中和抗体力価を示す。斜線のカラムは、受動免疫後、ウイルス投
与後３日での中和抗体力価を示す。白いバーは、受動免疫に対して使用された材
料の中和抗体力価を反映する。このデータは、宿主による抗体反応が、３日以内
に上昇することを示す。さらに、このデータは、静脈内経路によるｒＡｄの注射
が、２時間以内に血清から中和抗体をさらに枯渇することを示す。このデータは
また、主要なコートタンパク質におけるほとんど全ての高い親和性抗体が、静脈
内経路によるｒＡｄの注射後に枯渇され、カラムから溶出されることを示唆する
（４０μｌでのＡｄ抗体に関するデータを参照のこと）。

【図５】 図５は、１×１０¹⁰ＰＮのＢＧＣＧを用いた投与後のＢＡＬＢ／ｃマウスのｘ
−ｇａｌ染色された肝臓断面の写真である。ｖＰＢＳコントロール（Ａ）で見出
され得るように、マウス中に既存の免疫応答がないことに起因して、肝臓の実質
的な染色が存在する。パネルＢは、Ａｄカプシドタンパク質カラムを通過させる
ことによって抗体が枯渇した血清の受動免疫を受ける動物のｘ−ｇａｌ肝臓染色
を示す。パネルＣは、未精製Ａｄプライム血清の受動免疫を受けるマウスのβ−
ガラクトシダーゼ染色を示す。示されるデータから見出され得るように、β−ガ
ラクトシダーゼ発現における実質的な増加（増加した形質導入効率を示す）が、
未精製血清を受けた動物（Ｃ）に比較して、精製血清の受動免疫を受けた動物（
Ｂ）において観察された。

【図６】 図６は、アデノウイルス中和抗体を除去する際の異なるカラムの効率を比較す
るために実施された実験の結果をグラフで示し、この抗体は、高い中和抗アデノ
ウイルス力価（ＩＤ５０＞１２８０）を示すプールされたヒト血清の曝露から得
られた。縦軸は、中和能力のパーセンテージと逆比例に相関するパーセント形質
導入である。横軸は、中和抗血清力価を示す。黒四角は、プライムされた血清を
示し；陰つきの丸は、Ｐｒｏｓｏｒｂａ（登録商標）プロテインＡカラムに対し
て枯渇された血清を示し；菱形は、アデノウイルスカプシドＳＡＶＩＤカラムに
対して枯渇された血清を示し；黒三角は、Ｐｒｏｓｏｒｂａ（登録商標）カラム
から溶出された結合抗体を示し；白丸は、抗血清の非存在下での、緑色蛍光タン
パク質をコードする組換えアデノウイルス（ｒＡｄ−ＧＦＰ）を用いて形質導入
されたｈｅｌａ細胞を示し；白四角は、カプシドＳＡＶＩＤカラムから溶出され
た抗体を示し；そして白三角は、バックグラウンドコントロールとしてのＨｅＬ
ａ細胞を示す（ウイルスなし、抗体なし）。

【図７】 図７は、アデノウイルス中和抗体を除去する際の異なるカラムの効率を比較す
るために実施された実験の結果をグラフで示し、この抗体は、低い中和抗アデノ
ウイルス力価（ＩＤ５０＜３２０）を示すプールされたヒト血清の曝露から得ら
れた。縦軸は、中和能力のパーセンテージと逆比例に相関するパーセント形質導
入である。横軸は、中和抗血清力価を示す。陰つきの四角は、プライムされた血
清を示し；陰つきの丸は、Ｐｒｏｓｏｒｂａ（登録商標）プロテインＡカラムに
対して枯渇された血清を示し；陰つきの菱形は、アデノウイルスカプシドＳＡＶ
ＩＤカラムに対して枯渇された血清を示し；陰つきの三角は、Ｐｒｏｓｏｒｂａ
（登録商標）カラムから溶出された結合抗体を示し；白丸は、抗血清の非存在下
での、ｒＡｄ−ＧＦＰを用いて形質導入されたＨｅＬａ細胞を示し；白四角は、
ＳＡＶＩＤアデノウイルスカプシドカラムから溶出された結合抗体を示し；そし
て白三角は、バックグラウンドコントロールとしてのＨｅＬａ細胞を示す（ｒＡ
ｄ−ＧＦＰウイルスなし、抗体なし）。

【図８】 図８は、アデノウイルス中和抗体を除去する際の、カプシドＳＡＶＩＤカラム
に比較した、プロテインＧカラムの効率を比較するために実施された実験の結果
をグラフで示し、この抗体は、高い中和抗アデノウイルス力価（ＩＤ５０＞１２
８０）または低い中和抗体力価（ＩＤ５０＜３２０）を示すプールされたヒト血
清の曝露から得られた。縦軸は、パーセント形質導入である。横軸は、中和力価
を示す。陰つきの四角は、高力価血清を用いたアデノウイルスカプシドＳＡＶＩ
Ｄカラムから溶出された抗体を示し；陰つきの丸は、低力価血清を用いたアデノ
ウイルスカプシドＳＡＶＩＤカラムから溶出された抗体を示し；陰つきの三角は
、高力価抗血清を用いたプロテインＧカラムから溶出された抗体を示し；陰つき
の菱形は、低力価抗血清を用いたプロテインＧカラムから溶出された抗体を示し
；白丸は、抗血清の非存在下での、ｒＡｄ−ＧＦＰを用いて形質導入されたＨｅ
Ｌａ細胞を示し；白四角は、抗血清の存在下での、ｒＡｄ−ＧＦＰを用いて形質
導入されたＨｅＬａ細胞を示し、そして白三角は、通常の血清を用いたＨｅＬａ
のバックグラウンドコントロールを示し；そして白菱形は、血清無しでのＨｅＬ
ａのバックグラウンドコントロールを示す。

【図９】 図９は、本発明の実施に使用される装置の１つの位置付けの模式図である。矢
印は、この装置を介した血液材料の流れの向きを示す。項目１は、血漿しゃ血装
置を示す。項目２は、カラム形式での免疫アフィニティークロマトグラフィー材
料を示す。項目３は、３様式のバルブを示す。項目４は、精製血漿のための保存
容器を示す。項目５は、再導入の前に微小凝集物を精製血漿から除去するための
フィルター装置を示す。項目６は、ドリップチャンバを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ， ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，Ｌ Ｃ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ， ＲＯ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，Ｔ Ｍ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者 シャブラム， ポール ダブリュー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 92024， オリベンハイン， ペッパーツリー レ ーン 149 (72)発明者 ツァイ， ヴァン ティー． アメリカ合衆国 カリフォルニア 92130， サン ディエゴ， ラルストン サーク ル 12892 Ｆターム(参考） 4C077 AA12 BB10 EE01 HH03 HH12 JJ03 JJ12 MM03 MM06 NN03 NN15 4C087 AA01 AA02 AA05 BB33 BB35 MA05 MA16 MA66 NA06 ZB33

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 抗ウイルス抗体が該免疫アフィニティー材料上に保持される
   ように、単離された血漿を、クロマトグラフィー支持体に連結された免疫アフィ
   ニティー材料を含む免疫アフィニティークロマトグラフィー材料と接触させるこ
   とによって、該血漿のサンプル中の該抗体の濃度を減少するための方法。
2. 【請求項２】 前記免疫アフィニティー材料がウイルスコートタンパク質で
   ある、請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】 前記免疫アフィニティー材料が、ヘキソン、ペントン、タン
   パク質ＩＸ、タンパク質ＩＩＩＡファイバー、ノブおよびペントンベースからな
   る群から選択されるアデノウイルスのウイルスコートタンパク質である、請求項
   ２に記載の方法。
4. 【請求項４】 哺乳動物生物における抗ウイルス抗体の濃度を減少する方法
   であって、該方法は、以下の工程： ａ）該哺乳動物生物から血液サンプルを獲得する工程； ｂ）該血液サンプル由来の細胞成分から血漿を単離する工程； ｃ）該単離された血漿を、クロマトグラフィー支持体に連結された免疫アフィニ
   ティー材料を含む、免疫アフィニティークロマトグラフィー材料と接触させ、そ
   の結果抗体が免疫アフィニティー材料上に保持される工程； ｄ）工程（ｂ）から単離された該細胞成分および工程（ｃ）からの精製された血
   漿を該哺乳動物に再導入する工程、 を包含する、方法。
5. 【請求項５】 前記免疫アフィニティー材料が、プロテインＡ、プロテイン
   質Ｇおよびウイルスコートタンパク質からなる群から選択される、請求項４に記
   載の方法。
6. 【請求項６】 前記免疫アフィニティー材料が、ヘキソン、ペントン、タン
   パク質ＩＸ、タンパク質ＩＩＩＡファイバー、ノブおよびペントンベースからな
   る群から選択されるアデノウイルスのウイルスコートタンパク質である、請求項
   ５に記載の方法。
7. 【請求項７】 哺乳動物を治療ウイルスで処置する改善された方法であって
   、該改善が、該治療ウイルスの投与の前にかまたはこの投与と組み合わせて、以
   下の工程： ａ）該哺乳動物生物から血液サンプルを獲得する工程； ｂ）該血液サンプル由来の該細胞成分から血漿を単離する工程； ｃ）該単離された血漿を、クロマトグラフィー支持体に連結された免疫アフィニ
   ティー材料を含む免疫アフィニティークロマトグラフィー材料と接触させ、その
   結果抗体が該免疫アフィニティー材料上に保持される工程； ｄ）工程（ｂ）から単離された該細胞成分および工程（ｃ）からの該精製された
   血漿を該哺乳動物に再導入する工程、 によって該哺乳動物における抗ウイルス抗体の濃度を減少させる工程、 を包含する、方法。
8. 【請求項８】 前記治療ウイルスがアデノウイルスである、請求項７に記載
   の方法。
9. 【請求項９】 ＳＡＶＩＤ免疫アフィニティークロマトグラフィー材料を含
   む、組成物。
10. 【請求項１０】 前記ＳＡＶＩＤ材料が、クロマトグラフィー支持体に連結
    されたウイルスコートタンパク質を含む、請求項９に記載の組成物。
11. 【請求項１１】 前記ウイルスコートタンパク質が、アデノウイルスのウイ
    ルスコートタンパク質である、請求項１０に記載の組成物。
12. 【請求項１２】 前記ウイルスコートタンパク質が、ヘキソン、ペントン、
    タンパク質ＩＸ、タンパク質ＩＩＩＡファイバー、ノブおよびペントンベースか
    らなる群から選択されるアデノウイルスのウイルスコートタンパク質である、請
    求項１１に記載の組成物。