JP2003503308A - 遺伝子治療の送達系及び方法 - Google Patents

遺伝子治療の送達系及び方法

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Abstract

(57)【要約】 【課題】 遺伝子治療の送達系及び方法を提供すること。 【解決手段】 本発明に従うと、核酸材料と好ましくは変性ペクチンである炭化水素を含む遺伝子治療材料が提供される。本発明に従うとさらに、核酸材料、該核酸材料と組み合わせた炭化水素材料、及び該炭化水素材料の周りに配置された保護被覆を含む遺伝子治療材料が提供される。本発明に従うとさらに、腫瘍の表面上に出現した炭化水素結合部位を有する腫瘍を治療する方法であって、治療材料を提供する過程、変性ペクチン材料の内部に該治療材料を取り込んで治療組成物を生成する過程、及び該治療組成物を患者に投与する過程によって腫瘍を治療する方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、一般的には遺伝子治療に関する。より詳細には本発明は、核酸材料
と送達ビヒクルとしての炭化水素を含む遺伝子治療材料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
遺伝子治療は、治療剤として遺伝子材料を使用することを含む。より詳細には
、遺伝子治療では天然又は合成の遺伝子又はその類似物を患者の組織に導入し、
そこで遺伝子の活性化が治療効果を生じる。酵素、タンパク質、神経伝達物質及
びその他の生物学的分子の欠失又は奇形から生じる種々の代謝疾患の治療に、遺
伝子治療が将来非常に有望であることが示されている。遺伝子治療はガンのよう
な疾病を治療するのに非常に有望であることを示しており、この場合導入された
遺伝子はアポトーシス、すなわちプログラムされた細胞の死を誘導し、又は腫瘍
を収縮させるように作用する。 遺伝子治療を実際に行う場合に遭遇する最も重要な問題は、治療に有効な量の
遺伝子材料を標的組織に送達することであった。送達問題を解決するための多数
のやり方が先行技術で行われてきた。一つの方法では、治療遺伝子を含むＤＮＡ
プラスミドを患者に注入する。この裸のＤＮＡが直接腫瘍に注入される場合には
ある程度の限られた成功が達成された；しかしながら腫瘍に接近する手段を得る
こと及び治療材料を腫瘍部位に連続して送達する手段を提供することに問題が生
じている。裸のＤＮＡを静脈内に投与することが試みられた；しかしながらこの
ような試みは必ずしも成功ではなかった。他の例では、治療材料をウイルスに組
み込み、典型的にはプラスミドの形で組み込み、このウイルスを標的組織に感染
させて使用する。このやり方は成功する場合があるが、しかしながら免疫系によ
ってウイルスが不活化され、又は標的組織に感染できないことが多い。さらに、
ウイルスベクターを使用する遺伝子の送達には、有効性、効率、ウイルス感染、
毒性、及び送達に関する懸念が生じており、これによってウイルスベクターが送
達する遺伝子治療を広く使用することが制限されている。他のやり方は、免疫系
による不活化を回避し及び／又は標的組織に良好に感染するように特に適合させ
た変異ウイルスを使用することであった。他のやり方は、高分子量の合成ポリマ
ーとＤＮＡとの混合物を使用することであった。これらの材料についての成功は
限られていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
従って、遺伝子治療材料を標的組織に提供するための送達系及び方法に対する
要求が存在することが理解されるであろう。これらの系及び方法は、高度に有効
であり、実施が簡単で、コンパウンドは生体内で高度に安定で、かつ繰り返して
投与する必要が少ないことが好ましい。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明に従うと、核酸材料と炭化水素、好ましくは変性ペクチンである炭化水
素を含む遺伝子治療材料が提供される。 本発明に従うとさらに、核酸材料、核酸材料を伴う炭化水素材料、及び炭化水
素材料の周りに配置された保護被覆を含む遺伝子治療材料が提供される。 さらに本発明に従うと、炭化水素と結合する部位を腫瘍の表面に表出している
型の腫瘍を治療する方法が提供され、該方法は治療材料を提供し、治療材料を変
性したペクチン材料の内部に取り込んで治療組成物を生成し、かつ治療組成物を
患者に投与することによって行われる。
【０００５】
【発明の実施の形態】
本発明に従うと、炭化水素がＤＮＡ及び遺伝子治療で使用する他の核酸材料を
送達する非常に有効なビヒクルを提供できることが見出された。すなわち、炭化
水素と核酸材料の治療組成物の治療剤として有効な量を腫瘍を有する患者又は対
象に投与して、患者の腫瘍を減少させ及び／又は除去することによって腫瘍を治
療することが可能である。本開示との関連において、核酸材料は遺伝子、遺伝子
を含むプラスミド、他のらせん状ＤＮＡ、ＲＮＡ及び類似物を含むことを意味す
る。核酸材料を炭化水素と混合する場合、好ましくは炭化水素で封入する場合、
これらの材料は保護されかつ有効に標的組織へ送達されることが見出された。複
数の遺伝子を一度にかつ本発明の炭化水素で封入した単一のベクター又は複数の
ベクターで送達することができる。本発明の炭化水素をベースとする遺伝子治療
材料は、経口投与した場合であっても有効であることが見出されたが、これらの
材料を静脈注射により投与することもでき、又は標的組織、例えば腫瘍に直接注
入することもできる。
【０００６】 本開示との関連において、炭化水素は全てのヘキソース又はペントース構造を
意味するものとし、特に単一の炭化水素のみならず複合炭化水素も含むものとす
る。本発明で使用することができる特に好ましい炭化水素は変性柑橘類ペクチン
材料であり、例えば米国特許出願第０８／０２４，４８７号、１９９３年３月１
日出願及び米国特許出願第０８／８１９，３５６号、１９９７年３月１８日出願
、に記載されている材料であり、これを本明細書ではＧＢＣ−５９０という。変
性した柑橘類ペクチン材料は非毒性で、経口投与に対して安定で、取り込み特性
が良好で、日対時間の循環において安定で、特に腫瘍に向けられており、かつ腫
瘍細胞が有効に取り込むように包装することが可能である。変性した柑橘類ペク
チンの主鎖は以下の構造を有しており、 [-4)-α-D-GalpA-(1-4)-α-D-GalpA-(1-]n-4)-α-D-GalpA-(1-2)-β-L- Rhap-(1-[-4)-α-D-GalpA-(1-4)-α-D-Galp-(1-]
【０００７】 以下の主要でない構造上の特徴を有している (a) ラムノガラクトウロナン鎖中の割り込み領域 （立体構造及び結合の型は上記と同様） -GalA-Rha-GalA-Rha-GalA-GalA-Rha-Rha-GalA- (b) 短い側鎖 β-D-xylp-(1-3)- β-D-Galp-(1-2)-D-Xylp-(1- α-L-fucp-(1-2)-D-Xylp-(1- L-araf-(1-3)- D-Apif-(103)-D-Apif-(1-、及び (c) 延長した側鎖 -4-β-D-Galp-(1-4)-β-D-Galp-(1- α-L-Araf-(1-5)-α-L-Araf-(1- 3 ↑ 1 α-L-Araf
【０００８】 本明細書で使用する“患者”又は“対象”はヒトを含む全ての動物を意味する
。患者又は対象の例は、ヒト、げっ歯類、及び猿を含む。 当業者はガンを有する患者を容易に特定できる。例えば体内に悪性腫瘍を有す
る患者である。 “治療に有効な量”は、患者又は対象に投与した場合、患者又は対象の腫瘍を
減少させ及び／又は除去する本発明の化合物及び／又は組成物の量である。 本発明の他の態様に従うと、遺伝子治療材料を運ぶウイルスベクター、例えば
変性したか又は変性していないアデノウイルス、ウイルスタンパク質又はウイル
スの他のタンパク質を、本発明に従って炭化水素材料中に封入することができる
。このようにして、ウイルスベクターが不活化から保護され、かつより直接的に
標的組織へ送達される。
【０００９】 ベクターは公知であるか又は当業者が構成することができ、かつこれらは配列
の所望の転写を行うのに必要な全ての発現エレメントを含んでいることが必要で
ある。他の有用な性質、例えば異なる形態にある核酸を回復する機構をベクター
中に含むことも可能である。ファジミド（phagemid）はこれらの有用なベクター
の特定の例であり、これはプラスミドとしてもバクテリオファージベクターとし
ても使用できるからである。他のベクターの例には以下がある：ウイルス、例え
ばバクテリオファージ、バキュウロウイルス及びレトロウイルス、ＤＮＡウイル
ス、例えばアデノウイルス又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、コスミド、プラ
スミド、リポソーム及び他の組換えベクター。ベクターはさらに原核又は真核宿
主系のいずれかで使用するエレメントを含むこともできる。当業者にはどの宿主
系が特定のベクターと共存するかが公知である。
【００１０】 本技術分野で公知の種々の方法のうちの一つによって、本発明に従うベクター
を細胞又は組織に導入することができる。これらの方法を一般に以下の記載に見
出すことができる：Sambrook et al., Molecular Cloning; A laboratory Manua
l, Cold Springs Harbor Laboratory, New York (1989, 1992); Ausubel et al.
, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore
, Md. (1989); Chang et al., Somatic Gene Therapy, CRC Press, Ann Arbor,
Mich. (1995); Vega et al., Gene Targeting, CRC Press, Ann Arbor, Mich. (
1995); Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, Bu
tterworths, Boston, Mass. (1988); 及びGilboa et al. (1986)。さらにこれら
の方法は、例えば安定かつ一時的なトランスフェクション、リポフェクション、
エレクトロポレーション及び組換えウイルスベクターによる感染も含まれる。感
染による核酸の導入には、挙げた他の方法に対していくつかの利点がある。この
方法は感染性があることから、高い効率を得ることができる。さらに、ウイルス
は非常に特定化されかつ典型的に特定の型の細胞に感染しかつそこで増殖する。
従って、その天然の性質を使用して、ベクターを生体内又は組織内又は細胞の混
合培養物の特定の細胞の形に対して標的とすることができる。特定のリセプター
又はリガンドでウイルスベクターを変性して、リセプターが仲介する事象を通し
て標的特異性を変化させることができる。
【００１１】 ベクターに追加的な特徴を追加してその安全性を強化し及び／又はその治療効
果を増強することができる。これらの特徴は、例えば、組換えウイルスに感染し
ている細胞を否定的に選択するのに使用することができるマーカーを含む。この
ような否定的な選択マーカーの例は上記のＴＫ遺伝子であり、これは抗生物質ガ
ンシクロビルへの感受性を付与する。従って、否定的な選択は感染を制御できる
手段であり、なぜならこの手段によって抗生物質の添加を通じて死滅を誘導でき
るからである。このような保護によって、例えば変形したウイルスベクター又は
組換え配列を生成する変異が生じた場合、細胞のトランスフォーメーションが起
こらないことが確実になる。特定の細胞型に発現を制限する特徴も導入すること
ができる。これらの特徴は、例えばプロモーター及び所望の細胞型に特異的な調
節エレメントを含む。
【００１２】 さらに、所望の核酸の生体内での発現に組換えウイルスベクターは有用であり
、なぜならこれらは水平感染及び標的化の特異性を与えるからである。水平感染
は例えばレトロウイルスの生活環に固有であり、これによって感染した１個の細
胞が多くの子孫のビルロンを生成し、これが芽を出して隣接する細胞に感染する
過程である。その結果、広い領域が急激に感染を受け、それらの多くは元のウイ
ルス粒子によって最初の感染を受けない。これは垂直感染とは対照的であり、垂
直感染では感染源は娘細胞を通じてのみ広がる。垂直に広がることができないウ
イルスベクターも製造することができる。この性質は、所望の目的が特定の遺伝
子を限定した数の標的組織にのみ導入することである場合は有用である。
【００１３】 レトロウイルスベクターを、感染性の粒子として作用するように、又は感染の
最初の１回のみを行うように構成することができる。前者の場合、ウイルスのゲ
ノムを変性して全ての必要な遺伝子、新しいウイルスタンパク質を合成する調節
配列とパッケージング信号及びＲＮＡを保持するようにする。一度これらの分子
が合成されると、宿主細胞はＲＮＡを新しいウイルス粒子にパーッケージし、該
新しい粒子はさらなる感染の循環を行うことができる。ベクターのゲノムをさら
に加工して所望の組換え遺伝子をコードさせ発現させる。非感染性のウイルスベ
クターの場合、ベクターのゲノムが通常変異して、ＲＮＡをウイルス粒子に封入
するのに必要なウイルスのパッケージング信号を破壊する。この信号がないと、
形成されるいずれの粒子もゲノムを含むことがなく、従ってその後の感染の循環
を行うことができない。ベクターの特定の型は意図する使用に依存する。現実の
ベクターは公知であり、本技術分野で直ちに入手可能であるか又は周知の技術的
手段を使用して当業者が構成することができる。
【００１４】 組換えベクターをいくつかの方法で投与することができる。例えばウイルスベ
クターを使用する場合、その手順には標的の特異性という有利な点があるので、
所望の部位に局所的に投与する必要はない。しかしながら、局所投与は迅速かつ
より有効な処置を提供することができ、例えば対象に静脈内又は皮下投与を行う
こともできる。特に神経変形疾患の場合は、投与形態としてウイルスベクターの
髄液への注入も使用することができる。注入に引き続き、注入の適切な標的特異
性を有する宿主細胞を認識するまで、ウイルスベクターは循環する。
【００１５】 本発明の遺伝子治療材料を投与するほかの形態は、疾病又は症状の部位におけ
る局所的な直接接種又は腫瘍に栄養を供給する血管系への接種である。希釈作用
がないので局所投与は有利であり、そのため大多数の標的細胞において発現を達
成するのに必要な投与量は少ない。さらに、局所接種は他の投与形態が必要とす
る標的要件を緩和することができ、それは接種した領域の全ての細胞に感染する
ベクターを使用することができるからである。接種した領域内の特定部分の細胞
にのみ発現することを所望する場合、プロモーターと所望部分に特異的な調節エ
レメントを使用してこの目的を達成することができる。標的のないベクターは、
例えばウイルスベクター、ウイルスゲノム、プラスミド、ファジミド及び類似物
であることができる。リポソームのようなトランスフェクションビヒクルも、接
種した領域内の受容細胞に上記の非ウイルス性ベクターを導入するのに使用する
ことができる。このようなトランスフェクションビヒクルは当業者に公知である
。
【００１６】 本発明に従うと、核酸材料を炭化水素と混合して軽く超音波処理する。この組
合せにおいてある程度の結合が生じると考えられるが、結合は本発明に必須では
ないと考えられる。特に好ましい態様では、核酸材料は炭化水素の被覆によって
封入され、最も好ましくは炭化水素−核酸の組合せが相対的に小さいミセルとし
て構成される。いくつかの例では、ミセルはさらに被覆材料で保護され、特に好
ましい被覆にはキチン又はキトサンが含まれ、キチン又はキトサンは相対的に短
鎖のオリゴマー材料の形態にあることができる。
【００１７】 本発明は種々の異なる遺伝子治療及び／又は特定の遺伝子と共に使用すること
ができる一方、特定の態様はガン治療に特別な有用性を有している。チロシンキ
ナーゼ遺伝子（ＣＨＫ）は種々のガンに有効な遺伝子治療材料であることが見出
されている。ＣＨＫの発現は多くのヒトの１次腫瘍で観察されており、これらに
は卵巣ガン、胸部ガン、星状細胞腫、膠芽腫、膵臓ガン、肺ガン、肝ガン、及び
腎臓ガンが含まれる。ＣＨＫ遺伝子は多くのガンで上向き調節を受けており、腫
瘍の発達を抑制することができる。いくつかの例では、この遺伝子はアポトーシ
スを誘導するように見える。胸部ガンで、Src及びErbB−2チロシンキナーゼが仲
介する成長促進信号をこの遺伝子が拮抗することが見出されている。本出願人は
さらに、多くの腫瘍細胞はその上に炭化水素が積極的に結合する部位を有してい
ること、及びＣＨＫ遺伝子が、そのチロシンキナーゼの生産を刺激することを介
して、ガン細胞の表面上に炭化水素が出現するのを増強することを見出した。こ
れらの発見に基づくと、本発明のＣＨＫ遺伝子と炭化水素材料は有利に相互反応
して、種々のガンの遺伝子治療材料を提供することができる、ということができ
る。本発明で使用できる他の遺伝子はp53を含む腫瘍抑制遺伝子、アンジオスタ
チンp60−hangio又はエンドスタチンp60−hendoを含むアンジオスタチン遺伝子
、Bcl及びBaxを含むアポトーシス遺伝子、及び／又はこれらの混合物を含む。
【００１８】 本発明の化合物を患者に単独で又は薬剤組成物の一部として投与することがで
きる。組成物を患者に、経口で、直腸経由で、非経口的に（静脈内、筋肉内又は
皮下）、槽内で、膣内で、腹腔内で、膀胱内で、局所で（粉末、軟膏又はドロッ
プ）、又は口腔又は鼻腔スプレーで投与することができる。 非経口注入に適する組成物は、生理学的に受容可能な殺菌水性又は非水性溶液
、分散物、懸濁物又はエマルション、及び殺菌した注射可能な溶液又は分散物に
再構成可能な殺菌粉末を含むことができる。適切な水性及び非水性担体、希釈剤
、溶媒又はビヒクルの例は、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコー
ル、ポリエチレングリコール、グリセリン、及び類似物）、これらの適切な混合
物、植物油（例えばオリーブ油）及びエチルオレエートのような注射可能な有機
エステルを含む。適切な流動性を、例えばレシチンのような被覆を使用すること
により、分散物の場合は所要の粒径を維持することにより、及び界面活性剤を使
用することにより、維持することができる。 これらの組成物は添加物、例えば保存剤、保湿剤、乳化剤、及び分散剤をさら
に含むことができる。微生物の作用の阻止を、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例え
ばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、及び類似物によって
行うことができる。組成物はさらに等張化剤、例えば糖、塩化ナトリウム、及び
類似物を含むことが望ましい。注射可能な薬物形態の吸収の長期化を、吸収遅延
剤、例えばアルミニウムモノステアレート及びゼラチンを使用することによって
行うことができる。
【００１９】 経口投与のための固形投与形態は、カプセル、錠剤、丸剤、粉末剤、及び顆粒
剤を含む。これらの固形投与形態において、活性化合物を少なくとも一つの以下
のものと混合する：不活性な常用の添加剤（又は担体）、例えばクエン酸ナトリ
ウム又はリン酸ジカルシウム又は（ａ）フィラー又は増量剤、例えばデンプン、
ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸、（ｂ）バイ
ンダー、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビ
ニルピロリドン、スクロース、及びアカシア、（ｃ）湿潤剤、例えばグリセリン
、（ｄ）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ又はタピオカデンプ
ン、アルギン酸、複合シリケート、及び炭酸ナトリウム、（ｅ）液状加硫遅延剤
、例えばパラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば４級アンモニウム化合物、（ｇ
）保湿剤、例えばセチルアルコール、及びグリセロールモノステアレート、（ｈ
）吸収剤、例えばカオリン及びベントナイト、及び（ｊ）滑剤、例えばタルク、
カルシウムステアレート、マグネシウムステアレート、固形ポリエチレンゴリコ
ール、ナトリウムラウリルスルフェート、又はこれらの混合物。カプセル剤、錠
剤、及び丸剤の場合、投与形態は緩衝剤も含む。
【００２０】 類似の型の固形組成物を、ラクトース又はミルクシュガー及び高分子量ポリエ
チレングリコールのような添加物を使用して、軟質又は硬質充填ゼラチンカプセ
ル中の充填物として使用することができる。 錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、及び顆粒剤のような固形投与形態を、被覆
及び外被、例えば腸溶性被覆及び本技術分野で周知のその他の被覆で製造するこ
とができる。これらは不透明化剤を含むことができ、かつ一又は複数の活性化合
物を消化管の一部で遅延して放出する組成物であることができる。使用すること
ができる埋め込み組成物の例は、ポリマー物質及びワックスである。適切な場合
は活性化合物を上記の一又は複数の添加物と共にマイクロカプセルの形態にする
ことができる。
【００２１】 経口投与のための液状投与形態は薬剤として受容可能な乳剤、液剤、懸濁剤、
シロップ剤、及びエリキシル剤を含む。活性化合物に加えて、液状投与形態は、
本技術分野で常用の不活性希釈剤、例えば水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤
、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、エ
チルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエ
ート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムア
ミド、油、特に綿実油、グランドナッツ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、
ヒマシ油、ゴマ油、グリセリン、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチ
レングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル又はこれらの物質の混合物、及
び類似物を含むことができる。 これらの不活性な希釈剤の他に、本組成物は添加物、例えば湿潤剤、乳化剤及
び懸濁化剤、甘味料、賦香剤及び芳香剤も含むことができる。 懸濁剤は活性化合物に加えて懸濁化剤、例えばエトキシル化イソステアリルア
ルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶性
セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天及びトラガカ
ント、又はこれらの物質の混合物、及び類似物を含むことができる。
【００２２】 直腸投与用の組成物は好ましくは座薬であり、これを本発明の化合物と適切な
非刺激性添加物又は担体と混合することによって製造することができ、添加物は
例えばココアバター、ポリエチレングリコール又は座薬用ワックスであり、これ
らは常温では固形であるが体温では液状であり、従って直腸又は膣内で溶解して
活性化合物を放出する。 本発明の化合物を局所適用するための投与形態は、軟膏剤、粉末剤、スプレー
剤及び吸入剤を含む。殺菌条件下に活性化合物を生理学的に受容可能な担体及び
いずれかの保存剤、緩衝剤、又は必要があれば噴射剤と混合する。眼科用配合剤
、眼科用軟膏剤、粉末剤、及び溶液剤も本発明の範囲内にあることが意図されて
いる。
【００２３】 本発明の化合物を患者に１日当たり、約１．９mg／m2〜約４０mg／m2の炭化水
素を約１．９μg／m2〜約４mg／m2の核酸と組み合わせた範囲の投与量で投与す
ることができる。正常な成人の体重は約７０kgであり、投与量は約０．０５〜１
．０６mg／kg／日の炭化水素を約０．００００５〜０．１０６mg／kg／日と組み
合わせた範囲の投与量が好ましい。すなわち、炭化水素の量の核酸材料の量に対
する一般的な比率は患者又は対象に投与する組成物中で約１０：１である。しか
しながら使用する特定の投与量の比率は変化することができる。例えば投与量は
患者の要件、治療する症状の厳しさ、及び使用する化合物の薬剤活性を含む多数
の因子に依存する可能性がある。特定の患者に対する最適投与量の決定は当業者
に周知である。 以下に示す実施例は本発明の特定の態様を示すことを意図したものであり、い
ずれにしろ特許請求の範囲を含む明細書の範囲を制限する意図はない。
【００２４】
【実施例】実験データ 実施例１ 予測のための一連の実験において、ＣＨＫ遺伝子を取り込んだプラスミドの形
態にあるＤＮＡを含む材料を製造する。このＤＮＡ材料を上記の型の変性ペクチ
ンと混合し、超音波処理してミセル構造を形成する。これらのミセルをキトサン
で被覆する。膵臓腫瘍を前もって確立したヌードマウスにこの材料を経口投与す
る。この材料の経口投与によりマウスに腫瘍の完全な軽快が生じることが分かる
。経口投与した材料に対する腫瘍の応答は、腫瘍に直接注入した材料に対する応
答と少なくとも同程度に良好であると考えられる。経口投与した材料は使用が容
易で、より長期間持続しかつ広範囲な送達を提供する。炭化水素を有しないＤＮ
Ａ材料単独の経口投与は有効ではない。
【００２５】実施例２ ガン治療におけるＣＨＫ複合体を使用する遺伝子治療研究を行った。ガン細胞
（MCF−7及びMCF−7／neoヒト胸部ガンセルライン）をヌードマウスに移植して
腫瘍を形成した。マウスの体重及び腫瘍の表面積を測定した。腫瘍が形成された
後、マウスをＣＨＫ ＤＮＡの尾部血管注射により１週間処置し、次いで６０日
間観察した。対照群は全く処置しなかった。観察期間の終わりに、処置した１群
３０匹のうち２４匹のマウス及び他の処置をした１群３０匹のうち２３匹のマウ
スは、表１に示すように完全にガンが消失していた。
【００２６】実施例３ ヌードマウスにおけるＰＡＮＣ−１腫瘍細胞の生長に対するＧＢＣ−５９０／
ＣＨＫの作用を決定するために実験を行った。本実験ではヒトＰＡＮＣ−１ガン
細胞をヌードマウスに移植した。最初の移植後１週間で腫瘍が形成され、次いで
個々の群に異なる処置を行った。処置の群は、非処置（対照）群、ＣＨＫ遺伝子
のみの処置群、ＧＢＣ−５９０のみの処理群、及びＧＢＣ−５９０をＣＨＫ遺伝
子と本発明に従って種々の濃度で組み合わせて処置した群を含んでいた。種々の
処置を尾部の血管を通して１週間マウスに注射し、次いでその後６０日間観察を
行った。結果は表２に示すように、ＧＢＣ−５９０とＣＨＫ遺伝子を本発明に従
って組み合わせたものが腫瘍の成長を劇的に阻害した。
【００２７】実施例４ 以下の実験によって、ヌードマウスにおけるＰＡＮＣ−１腫瘍の成長に対する
キトサン／ＣＨＫの作用を決定した。本実験では、ヒトＰＡＮＣ−１ガン細胞を
ヌードマウスに移植した。最初の移植後１週間で腫瘍が形成され、次いで異なる
処置の処方を実施した。処置の群は、非処置（対照）群、ＣＨＫ遺伝子のみの処
置群、キトサンのみの処置群、及びキトサンとＣＨＫ遺伝子を種々の濃度で処置
した群を含んでいた。１週間マウスに尾部の血管を通して異なる処置を注射する
か又は腫瘍部位に直接注射し、次いで２４日間観察を行った。結果は表３に示す
ように、静脈注射により投与した場合にＣＨＫを伴うキトサンが劇的に腫瘍の成
長を阻害した。 上記の実験が示すように、本発明は遺伝子治療材料を組織部位に送達する系を
提供する。本発明はガン治療に使用することができ、又は細胞に他の遺伝子材料
を送達するのに使用することができる。 本明細書に明らかにした教示を考慮すると、本発明の他の態様は当業者にとっ
て直ちに明らかであろう。以下のクレームは、全ての均等物を含み、本発明の範
囲を規定するものである。
【００２８】
【表１】
【００２９】
【表２】
【００３０】
【表３】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 35/74 Ａ６１Ｋ 35/74 Ｚ 35/76 35/76 47/06 47/06 47/36 47/36 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C076 AA53 AA60 BB11 CC27 DD34 FF32 FF68 4C084 AA13 MA55 NA13 NA20 ZB26 4C086 AA01 AA02 EA16 MA05 MA37 NA13 NA20 ZB26 4C087 AA01 AA02 BC83 MA37 MA55 NA13 NA20 ZB26

Claims (45)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 変性ペクチンを含む炭化水素と核酸材料を含む遺伝子治療材
    料。
  2. 【請求項２】 核酸材料がＤＮＡを含む、請求項１に記載の遺伝子治療材料
    。
  3. 【請求項３】 核酸材料がＲＮＡを含む、請求項１に記載の遺伝子治療材料
    。
  4. 【請求項４】 核酸材料が少なくとも一つのベクターに配置されている、請
    求項１に記載の遺伝子治療材料。
  5. 【請求項５】 ベクターがプラスミドを含む、請求項４に記載の遺伝子治療
    材料。
  6. 【請求項６】 ベクターがファジミドを含む、請求項４に記載の遺伝子治療
    材料。
  7. 【請求項７】 ベクターがバクテリオファージを含む、請求項４に記載の遺
    伝子治療材料。
  8. 【請求項８】 ベクターがコスミドを含む、請求項４に記載の遺伝子治療材
    料。
  9. 【請求項９】 ベクターがリポソームを含む、請求項４に記載の遺伝子治療
    材料。
  10. 【請求項１０】 ベクターがウイルスを含む、請求項４に記載の遺伝子治療
    材料。
  11. 【請求項１１】 ウイルスがＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、バキュロウ
    イルス、又はレトロウイルスを含む、請求項１０に記載の遺伝子治療材料。
  12. 【請求項１２】 ＤＮＡウイルスがアデノウイルス又はアデノ随伴ウイルス
    （ＡＡＶ）である、請求項１１に記載の遺伝子治療材料。
  13. 【請求項１３】 変性ペクチンが核酸材料を封入する、請求項１に記載の遺
    伝子治療材料。
  14. 【請求項１４】 変性ペクチンの周囲を取り囲む保護被覆をさらに含む、請
    求項１３に記載の遺伝子治療材料。
  15. 【請求項１５】 保護材料がキチン又はキトサンを含む、請求項１５に記載
    の遺伝子治療材料。
  16. 【請求項１６】 核酸材料がシトシンデアミナーゼ（ＣＨＫ）遺伝子を含む
    、請求項１に記載の遺伝子治療材料。
  17. 【請求項１７】 腫瘍抑制遺伝子、拮抗性遺伝子、アポトーシス遺伝子又は
    これらの混合物から成る群から核酸材料を選択する、請求項１に記載の遺伝子治
    療材料。
  18. 【請求項１８】 細胞がその表面上に出現した炭化水素結合部位を有する型
    の細胞である、患者又は対象の細胞に遺伝子を送達する方法であって、該方法が
    以下の過程を含む方法： 治療材料を提供する過程；かつ 該治療材料を変性ペクチン材料の内部に取り込んで治療組成物を生成する過程
    ；及び 該治療組成物の治療に有効な量を患者に投与する過程。
  19. 【請求項１９】 治療材料が核酸を含む、請求項１８に記載の方法。
  20. 【請求項２０】 核酸がＤＮＡを含む、請求項１９に記載の方法。
  21. 【請求項２１】 核酸がＲＮＡを含む、請求項１９に記載の方法。
  22. 【請求項２２】 核酸材料が少なくとも一つのベクターに配置されている、
    請求項１８に記載の方法。
  23. 【請求項２３】 ベクターがプラスミドを含む、請求項２２に記載の方法。
  24. 【請求項２４】 ベクターがファジミドを含む、請求項２２に記載の方法。
  25. 【請求項２５】 ベクターがバクテリオファージを含む、請求項２２に記載
    の方法。
  26. 【請求項２６】 ベクターがコスミドを含む、請求項２２に記載の方法。
  27. 【請求項２７】 ベクターがリポソームを含む、請求項２２に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 ベクターがウイルスを含む、請求項２２に記載の方法。
  29. 【請求項２９】 ウイルスがＤＮＡウイルス、ＲＮＡウイルス、バキュロウ
    イルス、又はレトロウイルスを含む、請求項２８に記載の方法。
  30. 【請求項３０】 ＤＮＡウイルスがアデノウイルス又はアデノ随伴ウイルス
    （ＡＡＶ）である、請求項２９に記載の方法。
  31. 【請求項３１】 投与過程が治療組成物を患者に非経口的に投与する過程を
    含む、請求項１８に記載の方法。
  32. 【請求項３２】 非経口投与過程がさらに治療組成物を患者に注射する過程
    を含む、請求項１８に記載の方法。
  33. 【請求項３３】 治療組成物を腫瘍に直接注入する、請求項３１に記載の方
    法。
  34. 【請求項３４】 投与過程がさらに治療組成物を患者に経口投与する過程を
    含む、請求項１８に記載の方法。
  35. 【請求項３５】 変性ペクチンが核酸材料を封入する、請求項２２に記載の
    方法。
  36. 【請求項３６】 変性ペクチン封入体の周囲を取り囲む保護被覆をさらに含
    む、請求項３５に記載の方法。
  37. 【請求項３７】 保護材料がキチン又はキトサンである、請求項３６に記載
    の方法。
  38. 【請求項３８】 核酸材料がシトシンデアミナーゼ（ＣＨＫ）遺伝子を含む
    、請求項２２に記載の方法。
  39. 【請求項３９】 腫瘍抑制遺伝子、拮抗性遺伝子、アポトーシス遺伝子、又
    はこれらの混合物から成る群から核酸材料を選択する、請求項２２に記載の方法
    。
  40. 【請求項４０】 細胞が腫瘍細胞又は新生細胞である、請求項１８に記載の
    方法。
  41. 【請求項４１】 以下を含む遺伝子治療材料： 核酸材料； 該核酸材料を実質的に封入する炭化水素材料；及び 該炭化水素の周囲を取り囲む保護被覆。
  42. 【請求項４２】 保護材料がキチン又はキトサンを含む、請求項４１に記載
    の遺伝子治療材料。
  43. 【請求項４３】 核酸材料がシトシンデアミナーゼ（ＣＨＫ）遺伝子を含む
    、請求項４１に記載の遺伝子治療材料。
  44. 【請求項４４】 腫瘍抑制遺伝子、拮抗性遺伝子、アポトーシス遺伝子、又
    はこれらの混合物から成る群から核酸材料を選択する、請求項４１に記載の遺伝
    子治療材料
  45. 【請求項４５】 炭化水素が変性ペクチンを含む、請求項４１に記載の遺伝
    子治療材料。
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