JP2003502376A - 性機能障害および血管収縮に関する疾患の予防および治療におけるイカリンの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 性機能障害および血管収縮に関する疾患を予防および治療するための薬剤の調製におけるイカリンの使用。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野および従来の技術】

本発明はイカリン（icariin）を有効成分として含有する性機能障害および血
管系疾患を予防および治療する用途に関するものである。 男性の性機能は性的欲求、陰茎の勃起、射精および極致感からなっているが、
これは神経系、内分泌系および血管系の複合的生理反応によって決定され、この
うち一つでも異状があれば性機能障害、すなわちインポテンツの原因となり得る
。これら性機能障害としては性欲減退、勃起不全、早漏症、射精障害、勃起解消
障害、オルガスムス障害などがあって、これら障害原因は単独にあるいは相互に
伴って現れる。

【０００２】 統計によると、成人男性の約30~60％が性機能障害を訴え、年齢の増加につれ
発病率も増加する趨勢を示している。このような性機能障害は、最近10年ほど前
は大部分心因性原因と考えられてきたが、現代医学の発達によって性機能障害患
者の50％以上でインポテンツは血管系、神経系および内分泌系疾患、糖尿病、高
血圧、薬物服用などの基質的原因によることが明らかになっている。

【０００３】 男性の性機能は主として種々の刺激を受け、神経―内分泌系の調節下で、血管
系の複雑的生理反応が生じ、陰茎が勃起することである。陰茎の勃起は陰茎海綿
体の平滑筋の弛緩および陰茎小動脈の拡張し、陰茎海綿体洞が膨張して陰茎内へ
の血流量が一層増加し、海綿体内圧が上昇することによって割合硬い白膜と小孔
の間に存在する白膜下静脈が小孔の膨張によって押さえられて静脈血の漏出が塞
がれることによって、陰茎内圧が増加する。こうして膣内挿入に十分な陰茎勃起
を起こし、オルガスムスおよび射精に到達するまで勃起を維持する。

【０００４】 このような陰茎勃起に際して陰茎海綿体平滑筋の弛緩は基本的働きを起こし、
平滑筋を弛緩させる作用を有するものであり、そしてその過程は神経内分泌系に
調節されるものである。動物試験によると、種々の局所因子は陰茎勃起に影響を
与えるものであり、例えば、ノルアドレナリン（NA）、神経ぺプチド（NPY）、
アセチルコリン（Ach）、プロスタブランジン（PGE）、セロトニン（5−HT）な
どである。

【０００５】 近年の研究は一酸化窒素にフォカスしている。これに関わって、酸化窒素が陰
茎勃起に重要な役割を果たすことが動物実験によって明らかになった。性的刺激
下に陰茎の副交感神経、非アドレナリン非コリン性（NANC）神経末梢よりまた血
管内皮細胞より分泌される酸化窒素の生成が増加される。酸化窒素はグアニレー
トサイクラーゼ（guanylate cyclase）を活性化し、グアノシントリホスフェー
ト（GPT）をサイクリックグアノシンモノホスフェート（cGMP）に変換が増加す
る。cGMPは海綿体の平滑筋および陰茎大動脈の弛緩を発生させる信号を提供する
。cGMPの濃度はサイクリックヌクレアーゼホスホジエステラーゼ5型（PDE V）ア
イソザイムで加水分解速度とグアニレートサイクラーゼの合成速度間のバランス
を調整する。したがって、cGMP加水分解抑制剤はcGMP信号を増加させることがで
き、さらに陰茎海綿体の平滑筋の弛緩を増加させることによって、陰茎勃起反応
を促進する。

【０００６】 陰茎勃起の生理現象が次第に明らかになるにつれ、陰茎海綿体の弛緩作用に影
響を及ぼす薬物に対する研究がなされ、これを勃起不全の診断と治療に使用され
ている。たとえばパパベリン（papaverine）、ペントールアミン（phentolamine
）およびプロスタグランジンE₁（prostaglandin E₁）などが海綿体注射療法にお
いて臨床的に広く使用されている。パパベリンは阿片アルカロイドであって、尿
管および血管の平滑筋を弛緩させる。ペントールアミンはアドレナリン性抑制剤
である。しかしながら、これら薬剤は患者治療において疼痛、勃起持続症および
陰茎海綿体繊維化などの副作用によって制限性を有する。経口薬剤としてはトラ
ゾドン（trazodone）、ヨヒンビン（yohimbin）などが知られているが、薬剤の
治療メカニズムが明らかではなく、治療効果が高くなく、副作用が多い。

【０００７】 最近、ホスホジエステラーゼV（phosphodiesterase V）抑制剤であるシルデナ
フィル（sildenafil）が性機能障害の治療において大きな関心を集めているが、
こうした治療法は化学薬品を用いて一時的な勃起を誘発する方法のため、価格が
高く、頭痛、血圧増加、心臓問題などの副作用が多い。特に心臓病を加重して死
亡することが報告されている。したがって、これら薬剤の使用は臨床的に制限さ
れている。

【０００８】 したがって、人体の本能的な勃起機能を増強させる安全且つ有効な性機能障害
治療剤を開発しなければならない実情にあり、最近の趨勢は陰茎海綿体平滑筋細
胞の酸化窒素（nitric oxide（NO））およびcGMPの生成および活性を増加して海
綿体に強い弛緩作用のある性機能障害治療剤を研究開発することに関心が集めら
れている。

【０００９】 伝統医学において滋養強壮剤として使用され、性機能障害を治療するための生
薬複合剤処方が多く紹介されているが、実際に治療メカニズムに対する医学的な
実験研究はなされていない実情である。それぞれ生薬の単一成分を分離して薬学
組成物に製剤化しているが、性機能障害治療についての薬理学的研究および臨床
効果に対する研究はまだ不十分な実情である。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】

したがって、本発明者は入手可能な関連先行技術文献を広範囲に調べ、性機能
障害問題を解決するための研究と実験を積重ねた結果、特定の生薬淫羊霍（Epim
edii herba）より分離した有効成分であるイカリンを薬剤学的組成物に剤型化す
れば性機能障害および血管系疾患を効果的にしかも安全に予防および治療できる
ことを科学的な動物実験および臨床試験を通じて明らかにした。本発明はこのよ
うな発見に基づいて完成されている。

【００１１】

【課題を解決するための手段】

本発明は有効成分としてイカリンを治療学的に有効量含有する性機能障害およ
び血管疾患の予防および治療用薬剤学的組成物に関するものである。

【００１２】 イカリン（C₃₃H₄₀O₁₅、分子量676.67、融点２２５−２３０℃）は伝統的によ
く滋養強壮剤として使用されている淫羊霍より分離したフラボノイド（flavonoi
d）である。イカリンは淫羊霍の主要な有効成分であると考えられる。少量の他
の成分、たとえばマグノフロリン（magnoflorine）、クエレクチン（querectin
）、エピメジン（epimedin）A、BおよびCもまた淫羊霍よりHPLCを通じて最近検
出された。イカリンは標準試験薬剤として主に使用されている。疲労回復、免疫
機能増進、老化防止、肝機能向上に関するイカリンの一部薬理学的研究が最近報
告されているが、性機能改善のためのイカリンの具体的な治療メカニズムおよび
作用効果については今まで研究がなされていない実情である。

【００１３】 本発明者は淫羊霍成分のうち、イカリンが陰茎海綿体平滑筋において強い弛緩
作用を有して性機能を向上させるのみならず、平滑筋および動脈血管においても
弛緩作用を有し、その作用機転は酸化窒素の生成および活性化を増強させ、PDE
V型酵素に対する抑制作用によって平滑筋細胞のcGMP濃度を増加させて陰茎勃起
を促進し、さらに性機能障害治療の際、副作用が殆どなく、糖尿病、高血圧を伴
う患者も安全且つ有効に使用できることを見出した。

【００１４】 本発明による薬剤学的組成物は有効成分としてイカリンを通常用いられる薬剤
学的担体または賦形剤（たとえば、澱粉、乳糖、有機溶媒など）と結合し、公知
の方法によって製剤化して単位投与量形態にしても良い。医薬組成物の単位容量
形態に形成する時には、イカリン成分を1錠当たり10〜500mg含有させるのが好ま
しい。この範囲を脱すると製剤化および薬効に影響を及ぼすことがあり得る。

【００１５】 本発明の医薬的組成物は錠剤、丸剤、丹剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、軟膏
剤、ドリンク剤および注射剤形態に剤型化することができる。さらに本発明の医
薬組成物の投与形態には経口、筋肉および皮下注射、皮膚粘膜、直腸、尿道、陰
道、静脈などが含まれるが、他の便利な投与方法も使用することができる。イカ
リン化合物は1日1〜4回投与するのが有利である。 以下、本発明を実施例に基づき詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれら
実施例に何ら制限されるものではない。

【００１６】 実施例1 イカリンの調製 抽出方法（１） 淫羊霍地上部分の乾燥物500gにメタノール10リットルを入れて3日間ずつ3回で加熱 抽出した。抽出物を濾過してから、溶媒を減圧下で濃縮し、抽出物エキスを得た
。メタノール抽出物エキスを水に懸濁し、同量のヘキサンで4回抽出し、水層を1
/3量まで濃縮した。この水層に5％クエン酸を入れて懸濁し（pH＝５．５）、同
量のCHCl₃で抽出して、更に適当量のアンモニア水で懸濁し（ｐＨ＝１０）、同
量のCHCl_３で抽出した。抽出過程を3回繰返し、最終のアルカリ性の水層を同量
のブタノールで3回で抽出し、イカリン分画（icariin rich fraction、IRF）を
得た（HPLCで測定し、イカリンの含有量は8％である）。

【００１７】 抽出方法（２） 淫羊霍地上部分の乾燥物500gにエタノール１０リットルにて80℃で1時間ずつ3
回で回流抽出した。抽出液を濾過し、減圧下でエタノールを回収し、スラリー状
の抽出物を得た。抽出物に4倍量の蒸留水で懸濁し、3時間放置したクロロフィル
又はワックスなどを除いてから、ブタノールで4回抽出し、濾液を濾過して濃縮
し、４０〜６０メッシュのポリアミドカラムに吸着させて、30％エタノールで無
色まで溶出し、溶出液を減圧下で濃縮し、さらに70％エタノール（１：２０）を
20倍量加えた。混合物を8時間放置して濾過し、粗イカリントータルグリコサイ
ドを得た。この粗イカリントータルグリコサイドを無水エタノール（１：１５）
で繰返再結晶し、粗イカリントータルグリコサイドを得た（イカリン含量52％）
。

【００１８】 イカリンの単離 上記抽出工程で得られたイカリン分画（icariin rich fractionあるいは粗イ
カリントータルグリコサイド）をメタノールに溶解し、シリカゲルに吸着乾燥し
た。次いでにシリカゲルカラム（８×６０ｃｍ）にてカラムクロマトグラフィー
してイカリンを分離した。得られた物質をシリカゲルカラム（８×６０ｃｍ）に
加え、CHCl₃/ MeOH =5：1、4：1、3：1および2：1の順で溶出し、それぞれの溶
出分画を濃縮してメタノール／水の混合液に入れて黄色結晶を析出した。

【００１９】 この結晶はUVで発色し、パウリ（Pauly）試薬に陽性であって、TLCでRf値が0.
6である淡黄色結晶であった。融点は239℃であるこれは純粋なイカリンであるこ
とが確認された（ＨＰＬＣで測定し、その純度は99．8％である）。

【００２０】 実験１ 安全性試験 イカリンの急性毒性を調べるためにイカリンをSD系ラットに各群当たり、雌雄
各５匹を一群にし４組にし、第１組経口投与群３ｇ/ｋｇ、第２組２ｇ/ｋｇ、第
３組１ｇ/ｋｇ、第４組０．５ｇ/ｋｇ試験薬物を投与し、７日間観察した結果よ
りLD_５０は雄１．８８ｇ/ｋｇ、雌１．９５ｇ/ｋｇと観察された。

【００２１】 実験２ 薬効又は薬理的作用のメカニズム 実験原理 男性の性機能は主として種々の刺激を受け、神経―内分泌茎の調節下で、血管
系の複雑的生理反応が生じ、陰茎が勃起することである。陰茎の勃起は陰茎海綿
体の平滑筋の弛緩および陰茎小動脈の拡張し、陰茎海綿体洞が膨張して陰茎内へ
の血流量が一層増加し、海綿体内圧が上昇することによって割合硬い白膜と小孔
の間に存在する白膜下静脈が小孔の膨張によって押さえられて静脈血の漏出が塞
がれることによって、陰茎内圧が増加する。こうような陰茎勃起に際してして陰
茎海綿体平滑筋の弛緩は基本的働きを起き、平滑筋の弛緩させる作用が有する薬
物は陰茎勃起に作用が有することが考えられる。陰茎海綿体平滑筋の弛緩も非ア
ドレナリン非アセチルコリン性（NANC）神経また内皮細胞弛緩因子（EDRF）に調
節させるものである。このEDRF中では、一酸化窒素（NO）重要な働きを有するも
のである。NO又はNOを含有する物質は平滑筋細胞内に拡散し、グアニレートサイ
クラーゼ（guanylate cyclase）を活性化し、グアノシントリホスフェート（GPT
）をサイクリックグアノシンモノホスフェート（cGMP）への変換が増加する。cG
MPは海綿体の平滑筋の弛緩を発生させる、。cGMPの濃度はサイクリックヌクレア
ーゼホスホジエステラーゼ5型（PDE V）アイソザイムで加水分解速度とグアニレ
ートサイクラーゼの合成速度間のバランスを調整する。したがって、cGMP加水分
解抑制剤はcGMP信号を増加させることができ、さらに陰茎海綿体の平滑筋の弛緩
を増加させることによって、陰茎勃起反応を促進する。

【００２２】 本発明者は淫羊霍成分のうち、イカリンが陰茎海綿体平滑筋において強い弛緩
作用を有して性機能を向上させるのみならず、平滑筋および動脈血管においても
弛緩作用を有し、その作用機転は酸化窒素の生成および活性化を増強させ、PDE
V型酵素に対する抑制作用によって平滑筋細胞のcGMP濃度を増加させて陰茎勃起
を促進し、さらに性機能障害治療の際、副作用が殆どなく、糖尿病、高血圧を伴
う患者も安全且つ有効に使用できることを見出した。

【００２３】2．１：イカリンの陰茎海綿体平滑筋および腹部大動脈血管の弛緩作用 雄ウサギの陰茎海綿体平滑筋を分離し、インビトロでイカリン分画（icariin
rich fraction）と純粋なイカリンに対する陰茎海綿体平滑筋弛緩作用を評価す
るため、NANA性神経遮断薬としてアトロピン、プロスタグランジンE１抑制剤イ
ンドメタシン、NOの生合成又はその活性を抑制する試薬N^ω―nitric−L−アルギ
ニン（L−NNA）など、グアニレートサイクラーゼ活性抑制剤メチレンブルーなど
の影響をしらべ、併せてウサギ大動脈を用いてイカリンが動脈運動に及ぼす影響
を評価した。

【００２４】 実験方法 実験動物は生後3〜5ヵ月程度の雄ニュージーランド白兎（New Zealand white
rabbit） 60匹（体重：2.5〜3.0kg）を使用した。ウサギ耳殻静脈を通じてソジ
ウムペントバルビタル（sodium pentobarbital）（30〜50mg/kg）で麻酔した。
ウサギの陰茎全体と腹部大動脈を切除した後、混合ガス（95％ O₂＋5％ CO₂）が
持続的に供給されるタイロード（Tyrode）溶液入り容器にて解剖用顕微鏡下に陰
茎海綿体を分離し、2×2×6mm大きさの切片を作製し、4mm幅の腹部大動脈環形切
片を作製して実験に用いた。

【００２５】 分離された陰茎海綿体切片はタイロード溶液入りの10ml オルガン槽（organ b
ath）に固定し、force displacement transducer（TSD105、Biopac systems、 S
anta barbara、CA、USA）に連結し、腹部大動脈環形切片は二つのステンレスス
チールフック（stainless steel hook）を用いて同じ方法によってオルガン槽に
連結した。オルガン槽の二重壁の間を保温水で続けて循環し、槽内の溶液温度を
37℃に保持し、95％の酸素と5％の炭酸ガスの混合気体を持続的に供給し、陰茎
海綿体と腹部大動脈の緊張度を測定してコンピューターによるポリグラフ（MP10
0WS；Biopac systems、Santa Barbara、CA、USA）で記録した。

【００２６】 実験結果、イカリン分画とイカリン単一成分は陰茎海綿体と腹部大動脈で濃度依
存的な弛緩効果があり、イカリン分画の陰茎海綿体および腹部大動脈におけるEC ₅₀ （half effective concentration）はそれぞれ4.08mg/ml、22.40mg/mlであり
、イカリンの実際含量（8％）で換算する場合、EC₅₀はそれぞれイカリンとして0
.33mg/ml（4.87×10⁻⁴M）、1.79mg/ml（2.64×10⁻³M）であった。この結果は
イカリン単一成分の陰茎海綿体および腹部大動脈における弛緩効果のEC₅₀；4.67
×10⁻⁴M（0.32mg/ml）、2.71×10⁻³M（1.83mg/ml）に近似したため、淫羊霍の
平滑筋弛緩効果はイカリンが主に作用をする成分であることを確認することがで
きる。

【００２７】 したがって、イカリン分画とイカリン単一成分の陰茎海綿体におけるEC₅₀は腹
部大動脈においてのEC₅₀に比べて有意に低く、陰茎海綿体における弛緩作用は腹
部大動脈に比べてそれぞれ5.49、5.72倍強かったが、人体の臓器は組織別に神経
伝達物質あるいは薬物に対する反応が相異し得ることがあって、淫羊霍が陰茎海
綿体において腹部大動脈に比べて強く作用することを確認することができ、イカ
リンは陰茎勃起に増進作用のあることが立証された。

【００２８】 ａ．イカリンのウサギ陰茎海綿体平滑筋に対する反応 試験動物組織の準備 陰茎海綿体平滑筋の初期緊張度は2mgで固定し、組織を1.5〜2時間平行化して
澄張性収縮を誘導した。フェニルエトリン（PHE；5×10⁻⁶M）に対する最大収縮
反応を観察した。次いで組織をタイロード溶液で30分間繰返洗浄し、ベースライ
ンテンションに戻した。澄張性収縮は収縮の幅が以前の3個の連続収縮の10％以
内である時に測定した。各組織切片に対する毎回試験はタイロード溶液で3回洗
浄し、30分間平衡させた後、さらに行なった。

【００２９】 オルガン槽実験 海綿体のベース状態でイカリンの効果を評価するため、ベース平行状態で筋肉
切片を処理した後、相互増加する時、10⁻¹⁰Mでイカリンの澄張性テンション変
化を記録した。PHE（5×10⁻⁶M）で収縮を誘発した後、筋肉切片を安定化した時
、海綿体に対するイカリンの弛緩効果を評価するため、10⁻¹⁰Mで濃度を増加さ
せながらイカリンを投与し、等張性テンション変化を記録した。

【００３０】 海綿体に対するイカリンの弛緩作用メカニズムを調べるため、イカリンの反応
は海綿体の内皮細胞筋肉切片で研究し、酸化窒素スキャベンジャー（scavenger
）N^ω−ニトリック−L−アルギニン（L−NNA）（10⁻⁴M）、グアニルテサイクラ
ーゼ拮抗剤メチレンブルー（10⁻⁴M）、グアニラーレサイクリック抑制剤ピロガ
ロール（10⁻⁴M）、および可溶性グアニラーレサイクリック抑制剤H−[1,2,4]オ
キサジアゾロ[ODQ]（10⁻⁴M）で前処理した後、イカリンの弛緩効果に及ぼす影
響を観察した。海綿体に対するイカリンの弛緩効果はプロスタグランジン抑制剤
インドメタシン（10⁻⁴M）およびムスカリン水溶体拮抗剤アトロピン（10⁻⁶M）
で前処理に及ぼす影響も観察した。

【００３１】 内皮細胞の破壊は親指と人差し指で乾燥ペーパータオルにて海綿体を約10分間
擦ることによって行われた。内皮細胞の除去はアセチルコリン（10⁻⁵M）に対す
る海綿体切片の弛緩反応がない時または調節状態の10％範囲内に弛緩した時に確
認された。L−NNA、メチレンブルー、H−[1,2,4]オキサジアゾロ[4,3−a]キノキ
サリン−1−オン（ODQ）、インドメタシンおよびアトロピンなど試製はPHE（10
⁻⁶M）で海綿体平滑筋の収縮を誘発した後、上記試製をそれぞれ投与して20分経
過した後、イカリンの弛緩作用に及ぼす影響を観察した。ピロガロール（10⁻⁴M
）をPHE（10⁻⁶M）で収縮を誘発した後、イカリンの弛緩作用に及ぼす影響を観
察した。

【００３２】 試験物質および溶媒 フェニルエフリンハイドロクロライド、アセチルコリンクロライド、アトロピ
ンスルフェート、ピロガロール、N^ω−ニトリック−L−アルギニン、インドメタ
シンおよび1H−[1,2,4]オキサジアゾロ[4,3−a]キノキサリン−1−オンをシグマ
ケミカルカンパニー（St. Louis, MO, USA）より入手し、メチレンブルーはマリ
ンドトケミカルカンパニー（St. Louis, MO, USA）より入手した。タイロード溶
液（mEq/l）の組成物はNa⁺（153.6）、K⁺（5.3）、Ca⁺⁺（3.0）、Mg⁺⁺（1.2）、
Cl⁻⁻（157.2）、Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻⁻―（0.6）、SO₄ ⁻⁻（1.2）、HCO₃ ⁻（7.1）
およびブドウ糖（11.4）を含む。

【００３３】 統計的分析 データはコンピューター（Acknowledge 3.2 program, Biopac systems, USA）
で分析し、全ての弛緩反応は所定の実験で追跡する時、PHE−誘発最大収縮点とc
hleop下方屈折間の距離である最大弛緩百分率で表わした。統計分析はt−testで
行ない、薬濃度による平滑筋テンション変化を算定回帰分析を用いて分析した。
0.05未満のp値は統計的有意を示す。値は平均の平均±標準偏差および弛緩百分
率として表わした。

【００３４】 Ｃ．実験結果 イカリンは海綿体および動脈切片のベース平行状態で収縮または弛緩を誘発し
なかったが、ＰＨＥにて予備収縮した海綿体で濃度関連弛緩反応を示した。イカ
リン分画がＰＨＥ（５×１０^−６Ｍ）で収縮を誘発したウサギ陰茎海綿体平滑筋
および動脈血管弛緩作用（％）は次の表１に示した。

【００３５】

【表１】

【００３６】 算定回帰分析を用いてイカリン分画の陰茎海綿体平滑筋および動脈血管の半分
有効濃度（ＥＣ_５０）はそれぞれ４．０８ｍｇ／ｍｌおよび２２．４ｍｇ／ｍｌ
であった。

【００３７】 イカリンがＰＨＥ（５×１０^−６Ｍ）で収縮を誘発したウサギ陰茎海綿体平滑
筋および動脈血管弛緩作用（％）は次の表２に示した。

【表２】

【００３８】 算定回帰分析を用いて陰茎海綿体平滑筋および動脈血管に対するイカリンの半
分有効濃度（ＥＣ_５０）は４．６７×１０^−４Ｍ、２．６３×１０^−３であった
。 このような試験結果はイカリン分画およびイカリンは陰茎海綿体および動脈血
管に濃度依存的な弛緩作用があって、イカリン分画のイカリン含量８％を鑑みて
その弛緩効果とイカリンの弛緩効果を比較して分析した結果、イカリンは淫羊霍
成分のうち、陰茎海綿体および動脈血管弛緩作用の主成分であることが分かり、
陰茎海綿体において動脈血管に比べて強い弛緩作用のあることがわかる。

【００３９】 陰茎海綿体に対するイカリンの弛緩効果はアトロピン（１０^−６Ｍ）で前処理
して１３．９８％抑制し、プロスタグランジン抑制剤インドメタシン（１０^−４ Ｍ）で前処理して６．８１％抑制した。しかしイカリン（１０^−４）の弛緩効果
はアトロピン（１０^−４Ｍ）とインドメタシン（１０^−４Ｍ）によって有意的に
抑制されなかった（ｐ＞０．０５）。海綿体に対するイカリンの弛緩効果は脱内
皮細胞化によって有意的に抑制された（３２％、ｐ＜０．０１）。海綿体に対す
るイカリンの弛緩効果は酸化窒素スキャベンジャーピロガロール（１０^−４Ｍ）
およびＮＯ合成抑制剤Ｌ−ＮＮＡ（１０^−４Ｍ）で前処理の際、それぞれ１９．
７２％および２５．９５％と有意的に抑制された（ｐ＜０．０５）。海綿体に対
するイカリンの弛緩効果はピロガロール（１０^−４Ｍ）、Ｎ^ω−ニトリック−Ｌ
−アルギニン（Ｌ−ＮＮＡ；１０^−４Ｍ）、脱内皮細胞化（Ｄｅ−ｅｎｄｏ）、
メチレンブルー（ＭＢ；１０^−４Ｍ）および１Ｈ−［１，２，４］オキサジアゾ
ロ｛４，３−ａ｝キノキサリン−１−オン（ＯＤＱ；１０^−４Ｍ）で前処理の際
、それぞれ４１．８２％および８７．７６％と有意的に抑制された。イカリンの
陰茎海綿体平滑筋弛緩作用が内皮細胞を除去した場合、アトロピン（１０^−６Ｍ
）、インドメタシン（１０^−４Ｍ）、ピロガロール（１０^−４Ｍ）およびＮＯ合
成抑制剤Ｌ−ＮＮＡ（１０^−４Ｍ）で前処理に及ぼす影響（％）は次の表３に示
した。

【００４０】

【表３】

【００４１】 多様な濃度でＯＤＱ（１０^−７Ｍ−１０^−４Ｍ）のイカリンの陰茎海綿体平滑
筋弛緩作用に及ぼす影響は次の表４に示した

【表４】

【００４２】 実験３ イカリンのホスホジエステラーゼ活性に対する影響 実験方法 １．人体血小板中のホスホジエステラーゼ分離 陰茎海綿体および血小板中にはホスホジエステラーゼＶ型が多く分布されてい
るため、薬理効果試験の際、通常的に血小板でＰＤＥ Ｖ型酵素を分離して試験
薬物の反応を測定する。人体血液３６０グラムを１０分間遠心分離（３６０ｇ）
して血小板が豊富な血漿（ＰＲＰ）を得た後、さらにＰＲＰを１０分間遠心分離
（１４００ｇ）して血小板を沈殿させた。沈殿した血小板１ｍｌの氷冷均質化緩
衝液（Ｈｅｐｅｓ ２０ｎＭ，スクロース ０．２５Ｍ，ＥＤＴＡ １ｍＭ，フ
ェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）１ｍＭ，ｐＨ７．２）で浮遊
させた後、超音波振とう器（Ｃｅｌｌ ｄｉｓｔｕｐｔｏｒ、Ｂｕｒｋａｒｄ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｕｘｂｒｉｄｇｅ、Ｍｉｄｄｌｅｓｅｘ、ＵＫ）を用い
て細胞膜を破壊した。細胞溶解物（ｌｕｓａｔｅ）を１０分間放置し、６０分間
連続遠心分離（１６５．０００ｇ）して得られた上層液をＰｈａｍａｃｉａ Ｆ
ＰＬＣ（Ｐｈａｒａｍａｃｉａ ＬＴＤ．，Ｍｉｌｔｏｎ Ｋｅｙｎｅｓ，ＵＫ
）を用いて酵素を分離した。

【００４３】 分離した酵素はモノ−Ｑイオン交換クロマトグラフィー（ｍｏｎｏ−Ｑ ｉｏ
ｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を用いて精製し、得ら
れた酵素に対しＰＤＥ活性度を測定して活性のある酵素を選んで液体窒素の中に
保管した後、使用した。

【００４４】 ２．ＰＤＥ酵素活性抑制物質の測定 ホスホジエステラーゼの活性検定を最終反応容量０．５ｍｌについて行い、測
定のための全準備過程は氷上で進行した。検定緩衝液（Ｔｒｉｓ ４０ｍＭ ｐ
Ｈ８．０，ＭｇＣｌ_２ １０ｍＭ，ＢＳＡ ０．１２５ｍｇ／ｍｌ，２−メルカ
プトエタノール ３．７５ｍＭ）は常に新しいものを作って使用し、酵素被作用
物質である［２Ｈ］ｃＧＭＰ（約２８ ｃｉ／ｍｍｏｌ；約１００，０００ｃｐ
ｍ／１００μＬ）は検定緩衝液で予め用意した後に使用した。試験管に［３Ｈ］
ｃＧＭＰ２００μＬを入れて試験物質（イカリン１０^−１０−１０^−４Ｍ）それ
ぞれ１００μｌを入れた後、精製されたＰＤＥ酵素と検定緩衝液を加えて３０℃
で２０分間反応した。酵素反応の中止は沸騰水に４５〜６０秒間漬けて終了し、
変換された［３Ｈ］アデノシンはＡＧ１−Ｘ２ｒｅｓｉｏｎ（Ｂｉｏ−Ｒｅｄ）
でＮａＯＨ（０．１Ｎ）を用いてイオン交換クロマトグラフィーで溶出して得ら
れた試料の放射線活性を測定する方法でホスホジエステラーゼＶの活性を測定し
た。

【００４５】 ３．実験結果 本実験結果によれば、イカリンはＰＤＥ酵素活性度の抑制効果（％）は濃度依存
的抑制作用を示した（１０^−８Ｍ、０．０６％；１０^−７Ｍ、３２．７％；１０ ^−６ Ｍ、５６．２％；１０^−５Ｍ、８３．７％；１０^−４Ｍ、９９．９％）、Ｅ
Ｃ５０ 約０．４３μＭ。結果は以下の表の通りである。

【表５】

【００４６】 この実験結果によれば、イカリンは陰茎海綿体で大動脈血管に比べて強い弛緩
作用があり、このような弛緩作用は平滑筋内皮細胞と関連性があってＥＤＲＦお
よびＮＯの生成及び活性化に作用し、イカリンの陰茎海綿体平滑筋の弛緩作用は
陰茎海綿体平滑筋細胞のホスホジエステラーゼの活性化を抑制してｃＧＭＰ酵素
の加水分解を抑制し、海綿体平滑筋のｃＧＭＰ濃度を増加して海綿体平滑筋の弛
緩作用を増強させ、陰茎勃起に増進効果のあることが立証された。

【００４７】 実験例４：臨床効果 イカリンの臨床効果を調べるために国際的に通用される性機能評価設問紙（In
ternational index of erectile function, IIEF-5）を用いて56名の性機能障害
を訴える志願者を対象にしてランダムに2群に分けてコントロール薬二重盲検法
を用いて予備臨床試験を行なった。患者の平均年齢は39±6.1才で発病期間は5.4
±3.7年であった。対象患者のうち、糖尿病患者が17名、高血圧患者9名、心臓病
患者8名であった。試験薬物とコントロール薬は包装を同様にし、投薬者と患者
は薬物に対する情報を認知していない状態でランダムに試験薬物（イカリン錠50
mg／錠、2錠／回、3回／日）およびコントロール薬をそれぞれ1ヶ月間服用した
。全患者は試験薬物を投与する前に性機能評価設問紙を用いて性機能を評価し、
試験薬物服用後、性機能評価設問紙を用いて性機能の変化を再評価し、その評価
結果を比較分析した。

【００４８】 IIEF評価表を用いたイカリン錠の性機能障害患者に対する臨床効果は次の表6
に示した。

【表６】

【００４９】 上記結果よりわかるように、薬物を投与する前に性機能を評価した評点の中、
陰茎勃起および勃起維持に対する自信感1.82±0.54、陰茎が膣内挿入の可能な勃
起頻度1.89±0.67、性交時、陰茎が膣内挿入後に勃起維持できる頻度 1.82±0.6
5、性交時に勃起および勃起維持のできない頻度1.89±0.61、性生活に対する満
足度1.79±0.62であった。投与後、陰茎勃起および勃起維持に対する自信感をイ
カリン錠3.32±0.39、コントロール薬2.04±0.63、性交時陰茎が膣内挿入の可能
な勃起頻度はイカリン錠3.11±0.32、コントロール薬約2.07±0.88、性交時に陰
茎が膣内挿入後に勃起維持できる頻度はイカリン錠3.18±0.47、コントロール薬
2.17±0.97、性交時に勃起および勃起維持のできない頻度はイカリン錠3.25±0.
43、コントロール薬2.18±0.92、性生活に対する満足度はイカリン錠3.36±0.47
、コントロール薬2.14±0.95であった。これらの結果は、臨床的効果が統計学的
に有意に増加した（p＜0.01）ことを証明している。全臨床有効性はイカリン錠7
5.4％、コントロール薬35.4％であった。4名の患者で軽微な胃腸反応を示した他
は、特殊な副作用は観察されずに糖尿病、高血圧及び心臓病の患者での臨床効果
や副作用で有意な差は観察されなかった。

【００５０】

【発明の効果】 上述のように、イカリン化合物は平滑筋および動脈血管においても弛緩作用を
有しているのみならず、陰茎海綿体において強い弛緩作用を有して性機能を向上
させる。さらにイカリンは性機能障害治療の際、副作用が殆どなく、糖尿病、高
血圧および心臓病を伴う患者も安全且つ有効に使用することができる。したがっ
て、イカリンを含有する本発明の薬剤学的組成物は性機能障害および血管系疾患
の予防および治療のための薬剤として安全で効果的に使用することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 9/20 Ａ６１Ｋ 9/20 9/48 9/48 31/7048 31/7048 Ａ６１Ｐ 9/08 Ａ６１Ｐ 9/08 15/10 15/10 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＺ，Ｌ Ｃ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 性機能障害および血管収縮に関する疾患の予防および治療用
   薬剤組成物の製造のためのイカリンの使用。
2. 【請求項２】 有効活性成分としてのイカリンおよび薬学的に許容される担
   体または賦形剤を含有する性機能障害および血管収縮に関する疾患の予防および
   治療用薬剤組成物。
3. 【請求項３】 イカリン含有量が単位用量当たり１０−５００ｍｇであるこ
   とを特徴とする請求項１または２に記載の使用または薬剤組成物。
4. 【請求項４】 錠剤、丸剤、丹剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、軟膏剤、ド
   リンク剤または注射剤である請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用または薬
   剤組成物。
5. 【請求項５】 経口、筋肉および皮下注射、皮膚粘膜、直腸、尿道、淫道ま
   たは静脈に投与する剤型である請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用または
   薬剤組成物。