JP2003502282A - ヒト転移性細胞の作用因子源から離れた意図された移動 - Google Patents

ヒト転移性細胞の作用因子源から離れた意図された移動

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、転移性能力を有する真核細胞の移動を変調するための方法及び組成物に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 発明の分野 本発明は、転移性能力を有する真核細胞の移動を変調するための方法及び組成
物に関する。より特定すれば、本発明は、対象中の特定の部位中の造血、神経、
上皮、又は間充識起源の細胞の移動を変調するための方法及び組成物に関する。
上記は、とりわけ、対象の特定の部位に関連した転移性細胞の移動を変調する要
求により特徴付けされる症状を処置することにおいて有用である。特定の部位は
炎症部位を含み、そして転移性細胞の移動の変調は病原体又は拒絶から遠く離れ
た移動である。 発明の背景 特定の刺激に対する細胞の応答は、原核生物及び真核生物において起こること
が観察される（Ｄｏｅｔｓｃｈ ＲＮ ａｎｄ Ｓｅｙｍｏｕｒ ＷＦ．，１９
７０；Ｂａｉｌｅｙ ＧＢ ｅｔ ａｌ．，１９８５）。これらの生物において
観察される細胞の移動は、３つの種類に分類される：化学物質の濃度増加に対し
て勾配に沿った細胞のケモタクシス又は移動；化学刺激の勾配下の移動として定
義されてきた陰性ケモタクシス及び化学試薬により誘導される細胞のケモキネシ
ス又はランダムな移動の増加。特定のケモタクシス活性化合物の作用に関する受
容体及びシグナル変換経路は、原核生物において広く定義されてきた。大腸菌ケ
モタクシスの研究は、いくつかの濃度及び条件においてバクテリアを引き付ける
化学物質が他の濃度及び条件において陰性のケモタクシス化学物質及び化学忌避
薬としても作用するかもしれないことを、明らかにしてきた（Ｔｓａｎｇ ｅｔ
ａｌ．，１９７３；Ｒｅｐａｓｋｅ Ｄ ａｎｄ Ａｄｌｅｒ Ｊ．１９８１
；Ｔｉｓａ ＬＳ ａｎｄ Ａｄｌｅｒ Ｊ．，１９９５；Ｔａｙｌｏｒ ＢＬ
ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｏｎ ＭＳ．，１９９８）。 【０００２】 ケモタクシス及びケモキネシスは哺乳類において（ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ Ｍ
Ｗ，Ｗａｒｔｍａｎ Ａ ａｎｄ ＨＭ Ｄｉｘｏｎ，１９３４；Ｌｏｔｚ Ｍ
ａｎｄ Ｈ Ｈａｒｒｉｓ；１９５６ｌＢｏｙｄｅｎ ＳＶ １９６２）ある
クラスの蛋白質、ケモカインと呼ばれる蛋白質（Ｗａｒｄ ＳＧ ａｎｄ Ｗｅ
ｓｔｗｉｃｋ Ｊ；１９９８；Ｋｉｍ ＣＨ ｅｔ ａｌ．，１９９８；Ｂａｇ
ｇｉｏｌｉｎｉ Ｍ，１９９８；Ｆａｒｂｅｒ ＪＭ；１９９７）に応答して起
こることが観察された。 【０００３】 ケモカインは、Ｇ蛋白質にカップリングした受容体を通したシグナリングによ
り細胞の移動を誘導する（Ｗｅｌｌｓ ＴＮ ｅｔ ａｌ．，１９９８）。Ｇ蛋
白質にカップリングされた受容体の膜蛋白質遺伝子ファミリーは７つの仮想膜貫
通ドメインを有することが特徴付けされた。上記ドメインは、細胞外又は細胞質
のループにより接続した膜貫通αヘリックスを表すと信じられる。Ｇ蛋白質カッ
プリング受容体は、広い範囲の生物学上活性な受容体、例えばホルモン、ウイル
ス、成長因子及び神経受容体を含む。 【０００４】 Ｇ蛋白質カップリング受容体は少なくとも８つの分岐した疎水性ループを接続
する約２０から３０のアミノ酸のこれら７つの保存された疎水性ストレッチを含
むものと特徴付けされた。カップリングされた受容体のＧ蛋白質ファミリーは、
神経発生及び神経障害を処置するために使用される神経弛緩作用因子に結合する
ドーパミン受容体を含む。この含むのメンバーの他の例は、カルシトニン、アド
レナリン性、エンドセリン、ｃＡＭＰ、アデノシン、ムスカリン性、アセチルコ
リン、セロトニン、ヒスタミン、トロンビン、キニン、卵胞刺激ホルモン、オプ
シン、上皮分化遺伝子−１受容体、ロドプシンモドラント、サイトメガロウイル
ス受容体等を含む。 【０００５】 ほとんどのＧ蛋白質カップリング受容体は機能性蛋白質構造を安定化すると信
じられているジスルフィド結合を形成する最初の２つの細胞外ループの各々の中
の単一の保存されたシステイン残基を有する。７つの膜貫通領域はＴＭ１，ＴＭ
２，ＴＭ３，ＴＭ４，ＴＭ５，ＴＭ６及びＴＭ７と命名される。ＴＭ３は、シグ
ナル変換に関与する。システイン残基のリン酸化及び脂質化（パルミチル化又は
ファルネシル化）はいくつかのＧ蛋白質カップリング受容体のシグナル変換に影
響し得る。ほとんどのＧ蛋白質カップリング受容体は第３の細胞質ループ及び／
又はカルボキシル末端内に有力なリン酸化部位を含む。いくつかのＧ蛋白質カッ
プリング受容体、例えばβ−アドレノリセプターに関して、蛋白質キナーゼＡ及
び／又は、特定の受容体キナーゼによるリン酸化は受容体脱感作を媒介する。 【０００６】 いくつかの受容体に関しては、Ｇ蛋白質カップリング受容体のリガンド結合部
位はいくつかのＧ蛋白質カップリング受容体膜貫通ドメインにより形成された親
水性ソケットを含むと信じられ、該ソケットはＧ蛋白質カップリング受容体の疎
水性残基に囲まれる。各Ｇ蛋白質カップリング受容体膜貫通ヘリックスの親水性
側面は、内部で向き合って極性リガンド結合部位を形成するように仮定されてい
る。ＴＭ３はいくつかのＧ蛋白質カップリング受容体において、リガンド結合部
位、例えばＴＭ３アスパラギン残基を含むという含蓄がある。さらに、ＴＭ５セ
リン、ＴＭ６アスパラギン及びＴＭ６又はＴＭ７フェニルアラニン又はチロシン
もリガンド結合に関与する。 【０００７】 Ｇ蛋白質カップリング受容体はヘテロトリマーＧ蛋白質により、様々な細胞内
酵素、イオンチャンネル及び輸送体に細胞内でカップリングし得る（Ｊｏｈｎｓ
ｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｅｎｄｏｃ Ｒｅｖ，１９８９，１０：３１７−３３１を
参照）。異なるＧ蛋白質ａ−サブユニットは特定のエフェクターを選択的に刺激
して、細胞の様々な生物学上の機能を変調する。Ｇ蛋白質カップリング受容体の
細胞質の残基のリン酸化はいくつかのＧ蛋白質カップリング受容体のＧ蛋白質カ
ップリングの制御に関する重要な機構として同定されてきた。Ｇ蛋白質カップリ
ング受容体は哺乳類宿主において多数の部位において見いだされる。ケモカイン
誘導性細胞ケモタクシス及びケモキネシスは、Ｇαi−リンクしたシグナル変換
を通して媒介されて、百日咳毒素（ＰＴＸ）によりブロックされ得る（Ｌｕｓｔ
ｅｒ ＡＤ，１９９８；Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ，１９９８）。 【０００８】 ケモカインＳＤＦ−１αは炎症部位への白血球の亜集団の転移を引き起こす（
Ａｉｕｔｉ Ａ ｅｔ ａｌ．１９９７；Ｂｌｅｕｌ ＣＣ ｅｔ ａｌ．１９
９６；Ｂｌｅｕｌ ｅｔ ａｌ．１９９６；Ｏｂｅｒｌｉｎ Ｅ ｅｔ ａｌ．
，１９９６）。さらに、ＳＤＦ−１α又はその受容体ＣＸＣＲ−４を欠損するよ
うに操作されたマウスは、胎児肝臓幹細胞が骨髄へ移動することにおける失敗を
表す、造血細胞及びＢ細胞の異常な発生を有する（Ｆｒｉｅｄｌａｎｄ ＪＳ，
１９９５；Ｔａｎ Ｊ ａｎｄ Ｔｈｅｓｔｒｕｐ−Ｐｅｄｅｒｓｅｎ Ｋ，１
９９５；Ｃｏｒｒｉｇａｎ ＣＪ ａｎｄ Ｋａｙ ＡＢ，１９９６；Ｑｉｎｇ
Ｍ，ｅｔ ａｌ，１９９８；Ｗａｒｄ ＳＧ ｅｔ ａｌ．１９９８）。 【０００９】 ケモタクシスとケモキネシスは哺乳類の細胞集団において定義されてきたが、
哺乳類の末梢血液細胞の陰性なケモタクシスが非特異的刺激、例えば細胞溶解又
は腫瘍組織断片に対する応答において観察されたのみであって（Ｊｏｃｈｉｍｓ
，１９２７；ＭｃＣｕｔｃｈｅｏｎ ｅｔ ａｌ．１９３９；Ｂｅｓｓｉｓ Ｍ
ａｎｄ Ｂｕｒｔｅ Ｂ．，１９６５；Ｎｏｂｌｅ ａｎｄ Ｂｅｎｔｌｅｙ
，１９８１）、報告は極めて限定されていた。高等真核細胞亜集団における陰性
ケモタクシスの詳細な機構は、特異的刺激の定義及び陰性ケモタクシスの変換経
路を含めて定義されていない。さらに、化学誘引物質は原核系において忌避作用
因子として作用することが示されたが、二重作用性化学誘因物質／化学忌避作用
因子化合物の類似の系は高等真核生物において同定されていない。 発明の概要 我々は、転移性細胞忌避活性を有する作用因子（以後、「駆逐作用因子」及び
「駆逐活性」及び／又は「ケモ−フジェタクシス」）の単離を本明細書にて記載
する。我々は、規定された濃度における駆逐作用因子としての以前に単離された
作用因子の同定も記載する。本発明は、前記駆逐作用因子を含む薬学組成物、及
び前記駆逐作用因子を利用する様々な治療及び診断方法を提供する。本発明は、
単離された駆逐性ポリペプチド及びそのようなポリペプチドを結合する作用因子
も提供し、抗体を含む。前記は、とりわけ、対象の特定の部位において転移性細
胞の移動を変調する要求により特徴付けされる症状の治療において使用すること
ができる。重要なそのような部位は、炎症部位を含む。本発明は、そのような駆
逐性活性の変調において有用な作用因子を同定する方法を提供する。 【００１０】 本発明の一つの側面によれば、胸腺のストロマ細胞単離物が、免疫細胞と接触
した場合に免疫細胞を忌避するように提供され、免疫細胞忌避濃度のＳＤＦ−１
αを含まない。特定の態様において、胸腺ストロマ細胞単離物により忌避される
免疫細胞は、成熟Ｔ細胞である。いくつかの態様において、胸腺ストロマ単離物
はポリペプチドを含み、そしてそれは免疫細胞を忌避するポリペプチドである。
特定の態様において、胸腺ストロマ細胞単離物はＧ蛋白質変換経路を通してその
忌避作用を媒介する。さらなる態様において、胸腺ストロマ細胞単離物は、胸腺
ストロマ細胞の、上清、又はその断片である。さらに別の態様において、胸腺ス
トロマ細胞単離物は実質上純粋なポリペプチドである。いくつかの態様において
、上記ポリペプチドはゲニステイン阻害されず、及び／又はウオルトマニン阻害
されない。 【００１１】 本発明の別の側面によれば、有効濃度において成熟Ｔ細胞を忌避するが有効濃
度より低い濃度においては忌避しない、実質上純粋な有機作用因子が提供される
。上記作用因子は芝生状の胸腺ストロマ細胞の上清中の有効濃度において存在し
、少なくとも１時間標準条件下で培養され、そして培養条件は１０7細胞／１０
ｍｌ培地の比を含む。上記作用因子は、熱感受性、プロテアーゼ感受性であり、
そしてｐＨ６．３において０．５Ｍ ＮａＣｌによりイオン交換カラムから溶出
し、そしてＳＤＦ−１αではない。重要な態様において、上記作用因子はポリペ
プチドである。 【００１２】 本発明の一つの側面において、薬学組成物が提供される。上記薬学組成物は、
前記態様の何れかに従い、免疫細胞を忌避するのに有効な量の胸腺ストロマ細胞
単離物、及び薬学上受容可能な担体を含む。 【００１３】 さらなる側面において、本発明は、別の薬学組成物を提供する。上記薬学組成
物は、有効濃度において成熟Ｔ細胞を忌避するが有効濃度より低い濃度において
は忌避しない実質上純粋な有機作用因子を、前記態様の何れかに従い、成熟Ｔ細
胞を忌避するのに薬学上有効な量で、薬学上受容可能な担体と共に含む。いくつ
かの態様において上記作用因子はＳＤＦ−１αではない。重要な態様において、
上記作用因子はポリペプチドである。 【００１４】 本発明の別の側面によれば、前記態様の何れかに従う、駆逐性活性を有する単
離物中で胸腺ストロマ細胞単離物又は作用因子に選択的に結合する、単離された
結合性ポリペプチドも提供される。特定の態様において、上記単離された結合性
ポリペプチドは、抗体又は抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）2断片、
又は胸腺ストロマ細胞単離物に選択駅なＣＤＲ３領域を含む断片又は駆逐性活性
を有する上記単離物中の作用因子である。 【００１５】 さらなる側面に従うと、本発明は、前記態様の何れかに従い成熟Ｔ細胞を忌避
する実質上純粋な有機作用因子に選択的に結合する別の単離された結合性ポリペ
プチドを提供する。特定の態様において、上記単離された結合性ポリペプチドは
、抗体又は抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ）2断片、又は胸腺ストロ
マ細胞単離物に選択的なＣＤＲ３領域を含む断片又は駆逐性活性を有する上記単
離物中の作用因子である。 【００１６】 本発明の別の側面によれば、別の薬学組成物が提供される。この薬学組成物は
、前記態様の何れかに従う、（ｉ）胸腺ストロマ細胞単離物、又は（ｉｉ）成熟
Ｔ細胞を忌避する実質上純粋な有機作用因子、又は（ｉｉｉ）ＳＤＦ−１α（前
記態様の何れかに従う）に選択的に結合する、単離された結合性ポリペプチドを
、それぞれ胸腺ストロマ細胞単離物、成熟Ｔ細胞を忌避する実質上純粋な有機作
用因子、及び／又はＳＤＦ−１αにより、免疫細胞及び／又はＴ細胞の拒絶を阻
害するのに十分な量にて、薬学上受容可能な担体と共に含む。 【００１７】 本発明によると、ストロマ細胞由来の駆逐性作用因子を単離する方法が提供さ
れる。上記方法は、ストロマ細胞の培養物を用意し、ストロマ細胞の培養物から
駆逐性作用因子を含むと想像される上清を分画し、多数の画分からの画分を転移
性能力のある細胞に接触させ、転移性能力を有する細胞の移動を測定し、そして
転移性能力を有する細胞の移動が画分から離れる移動か否かを測定することを含
むが、但し、転移性能力を有する細胞の画分から離れる移動が画分中の駆逐性作
用因子の存在の指標である。特定の態様において、上記ストロマ細胞は胸腺スト
ロマ細胞であり、そして転移性能力を有する細胞は造血細胞である。 【００１８】 特定の態様において、ストロマ細胞は免疫免除された部位／組織から単離され
る。好ましい態様において、転移性能力を有する細胞は造血細胞である。 前記態様の何れかにおいて、多数の画分からの画分は希釈されないか又は濃縮
される。 【００１９】 本発明の別の側面によれば、対象の特定の部位において免疫細胞の移動を阻害
する方法が提供される。該方法は、対象の特定の部位において免疫細胞の移動を
阻害するのに有効な量の駆逐作用因子を、そのような処置を要求する対象の特定
の部位に局所投与することを含む。特定の態様において、上記特定の部位が炎症
部位である場合に、上記方法は、さらに、対象の炎症部位への免疫細胞の移動を
阻害する非駆逐性作用因子の同時投与を含む。特定の態様において、非駆逐性作
用因子は抗炎症性作用因子及び／又は免疫抑圧作用因子を含む。 【００２０】 特定の態様において、対象は自己免疫疾患を有する。好ましい態様において、
自己免疫疾患は、慢性関節リウマチ、ブドウ膜炎、インスリン依存性真性糖尿病
、溶血性貧血、リウマチ性発熱、クローン病、ギラン−バレー症候群、乾癬、甲
状腺炎、グレーブズ病、重症性筋無力症、糸球体腎炎、自己免疫性肝炎、全身性
エリテマトーデスを含む。さらなる態様において、対象は、多発性硬化症、膿瘍
、移植（ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ）、移植（ｉｍｐｌａｎｔ）、アテローム性動脈
硬化、及び／又は心筋炎を有する。 【００２１】 本発明の前記側面及び態様の何れかにおいて、駆逐性作用因子は、ＣＸＣＲ−
４リガンドである。特定の態様において、ＣＸＣＲ−４リガンドは、限定されな
いが、ＨＩＶ−１IIIBｇｐ１２０、小分子Ｔ１３４及びＭＤ３１００，及び／又
はＴ２２（［Ｔｙｒ５，１２，Ｌｙｓ７］−ポリフェムシンＩＩ）を含む。いく
つかの態様において、駆逐性作用因子は、約１μｇ／ｍｌより高い濃度のＳＤＦ
−１α、約２００ｎｇ／ｍｌより高い濃度のＨＩＶ−１IIIBｇｐ１２０、非希釈
胸腺ストロマ細胞由来の媒体、濃縮された胸腺ストロマ細胞由来の媒体、又は胸
腺ストロマ細胞由来のポリペプチド因子である。特定の態様において、上記胸腺
ストロマ細胞由来のポリペプチド因子はその化学忌避性作用をＧ蛋白質変換経路
を通して媒介する。他の態様において、胸腺ストロマ細胞由来のポリペプチド因
子はゲニスタイン阻害されない。さらなる態様において、胸腺ストロマ細胞由来
のポリペプチド因子はウオルトマニン阻害されない。 【００２２】 本発明の一つの側面によれば、免疫細胞に接触したときに免疫細胞を忌避する
ＨｅｐＧ２細胞単離物が提供される。ＨｅｐＧ２はヒト肝臓カルシノーマ（肝臓
癌）由来の細胞系である。特定の態様において、ＨｅｐＧ２細胞単離物により忌
避される免疫細胞は成熟Ｔ細胞である。いくつかの態様において、ＨｅｐＧ２細
胞単離物はＨｅｐＧ２細胞の、上清又は断片である。さらなる態様において、Ｈ
ｅｐＧ２−細胞単離物はポリペプチドを含み、そしてそれは免疫細胞を忌避する
ポリペプチドである。さらに別の態様において、ＨｅｐＧ２細胞単離物は実質上
純粋なポリペプチドである。ＨｅｐＧ２細胞単離物中に存在する好ましいそのよ
うな純粋なポリペプチドは、内部−α−トリプシン阻害作用因子重鎖ＩＩ受容体
（ＩＴＩ Ｈ２）として以前に同定されたポリペプチド（配列番号１：ＧｅｎＢ
ａｎｋ Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｐ１９８２３）であるか、その断片である。さらなる態
様において、ＨｅｐＧ２細胞単離物中に存在する実質上純粋なポリペプチドは、
ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ．Ｎｏｓ．：ＩＹＨＵ２，ＮＰ ０３４７１２，ＮＰ
００２２０７，Ｑ６１７０３，Ｐ９７２７９，Ｏ０２６６８，ＣＡＡ７２３０８
（Ｙ１１５４５），ＢＡＡ１３９３９（Ｄ８９２８６），Ｓ５４３５４，ＣＡＡ
４９８４２（Ｘ７０３９２），ＡＡＡ６０５５８（Ｍ１８１９３），ＣＡＡ３０
１６０（Ｘ０７１７３），１４０９２１９Ａ，又はＡＡＡ５９１９５（Ｍ３３０
３３）によるアミノ酸配列を有するポリペプチド（ポリペプチドのＩＴＩ Ｈ２
ファミリーの全てのメンバー）又はその断片である。 【００２３】 本発明の別の面によれば、有効濃度において成熟Ｔ細胞を忌避するが有効濃度
よりも低い濃度において忌避しない実質上純粋な有機作用因子が提供される。上
記作用因子は、芝生状のＨｅｐＧ２細胞の上清に存在し、少なくとも１時間より
長い時間標準条件下で培養し、そして培養条件は１０7細胞／ｍｌ培地濃度の比
を含む。上記作用因子も、熱感受性、プロテアーゼ感受性であり、そしてｐＨ７
．０において０．３Ｍ ＮａＣｌでイオン交換ヘパリンカラムから溶出する。重
要な態様において、上記作用因子はポリペプチドである。一つの態様において、
上記ポリペプチドは銀染色ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上において約１１０ｋＤａの分
子量を有する。好ましいポリペプチドは、内部−α−トリプシン阻害作用因子重
鎖ＩＩ受容体（ＩＴＩ Ｈ２）として以前に同定されたポリペプチド（配列番号
１：ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｐ１９８２３）であるか、その断片である
。 【００２４】 発明のさらなる側面によれば、薬学組成物が提供される。上記薬学組成物は、
前記態様の何れかに従うＨｅｐＧ２細胞単離物を免疫細胞忌避に薬学上有効な量
で、薬学上受容可能な担体と共に含む。 【００２５】 さらなる側面において、本発明は、別の薬学上受容可能な組成物を提供する。
該薬学組成物は、ＨｅｐＧ２細胞単離物に関する前記態様の何れかに従い有効濃
度において成熟Ｔ細胞を忌避するが有効濃度より低い濃度において忌避しない実
質上純粋な有機作用因子を成熟Ｔ細胞忌避に薬学上有効な量で、薬学上受容可能
な担体と共に含む。重要な態様において、上記作用因子はポリペプチドである。 【００２６】 本発明の別の側面によれば、前記態様の何れかに従い駆逐性活性を有するＨｅ
ｐＧ２細胞単離物又はＨｅｐＧ２細胞単離物中の作用因子に選択的に結合する単
離された結合性ポリペプチドも提供される。特定の態様において、上記単離され
た結合性ポリペプチドは、抗体又は抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ） 2 断片、又は胸腺ストロマ細胞単離物に選択的なＣＤＲ３領域を含む断片又は駆
逐性活性を有する上記単離物中の作用因子である。 【００２７】 さらなる側面によると、本発明は、ＨｅｐＧ２細胞単離物に関する前記態様の
何れかに従い成熟Ｔ細胞を忌避する実質上純粋な有機作用因子に選択的に結合す
る別の単離された結合性ポリペプチドを提供する。特定の態様において、単離さ
れた結合性ポリペプチドは、抗体又は抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ
）2断片、又は胸腺ストロマ細胞単離物に選択的なＣＤＲ３領域を含む断片又は
駆逐性活性を有する上記単離物中の作用因子である。 【００２８】 本発明の別の側面に従うと、別の薬学組成物が提供される。この薬学組成物は
、ＨｅｐＧ２細胞単離物により免疫細胞及び／又は成熟Ｔ細胞の拒絶を阻害する
のに薬学上有効な量の、ＨｅｐＧ２細胞単離物（前記態様の何れかに従い）に選
択的に結合する前記態様の何れかによる単離された結合性ポリペプチドと、薬学
上受容可能な担体を含む。 【００２９】 本発明の一つの側面によれば、免疫細胞に接触したときに免疫細胞を忌避する
カポジサルコーマヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）感染細胞単離物が提供される。
特定の態様において、ＫＳＨＶ感染した細胞単離物により忌避された上記免疫細
胞は成熟Ｔ細胞である。いくつかの態様において、ＫＳＨＶ感染細胞単離物はＫ
ＳＨＶ感染細胞、好ましくは慢性感染性ＫＳＨＶ細胞の上清又は断片である。好
ましい慢性感染性ＫＳＨＶ細胞は、細胞系ＢＣＢＬ−１及びＶＧ−１である。さ
らなる態様において、ＫＳＨＶ感染細胞単離物はポリペプチドを含み、そしてそ
れは免疫細胞を忌避するポリペプチドである。さらに別の態様において、ＫＳＨ
Ｖ感染細胞単離物は実質上純粋なポリペプチドである。 【００３０】 本発明の別の側面によれば、有効濃度において成熟細胞を忌避するが有効濃度
より低い濃度において忌避しない実質上純粋な有機作用因子が提供される。上記
作用因子は、芝生状のＫＳＨＶ感染細胞の上清に有効濃度で存在し、少なくとも
１時間の時間標準条件下で培養し、そして培養条件は１０7細胞／ｍｌ培地の比
を含む。上記作用因子も熱感受性、及び／又はプロテアーゼ感受性である。重要
な態様において、上記作用因子はポリペプチドである。 【００３１】 本発明のさらなる側面によれば、薬学組成物が提供される。薬学組成物は前記
態様に従いＫＳＨＶ感染細胞単離物を免疫細胞忌避に薬学上有効な量にて、薬学
上受容可能な単体と共に含む。 【００３２】 さらなる側面において、本発明は、別の薬学組成物を提供する。該薬学組成物
は、有効濃度において成熟Ｔ細胞を忌避するが有効濃度より低い濃度においては
忌避しない実質上純粋な有機作用因子を、ＫＳＨＶ感染細胞単離物に関する前記
態様の何れかに従い、成熟Ｔ細胞を忌避する薬学上有効な量にて、薬学上受容可
能な担体と共に含む。重要な態様において上記作用因子はポリペプチドである。 【００３３】 本発明の別の態様によれば、前記態様の何れかに従い駆逐性活性を有するＫＳ
ＨＶ感染細胞単離物又はＫＳＨＶ感染細胞単離物中の作用因子に選択的に結合す
る単離された結合性ポリペプチドも提供さらる。特定の態様において、上記単離
された結合性ポリペプチドは、抗体又は抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａ
ｂ）2断片、又はＫＳＨＶ感染細胞単離物又はＫＳＨＶ感染細胞単物中の作用因
子に選択的なＣＤＲ３領域を含む駆逐性活性を有する断片である。 【００３４】 さらなる側面によれば、本発明は、ＫＳＨＶ感染細胞単離物に関する前記態様
の何れかに従い、成熟Ｔ細胞を忌避する実質上純粋な有機作用因子に選択的に結
合する、別の単離された結合性ポリペプチドを提供する。特定の態様において、
上記単離された結合性ポリペプチドは、抗体又は抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片
、Ｆ（ａｂ）2断片、又はＫＳＨＶ感染細胞単離物又はＫＳＨＶ感染細胞単物中
の作用因子に選択的なＣＤＲ３領域を含む駆逐性活性を有する断片である。 【００３５】 本発明の別の側面によれば、別の薬学組成物が提供される。この薬学組成物は
、ＫＳＨＶ感染細胞単離物による成熟細胞及び／又はＴ細胞の拒絶を阻害するの
に薬学上有効な量の、（前記態様の何れかに従い）ＫＳＨＶ感染細胞単離物に選
択的に結合する前記態様の何れかに従う、単離された結合性ポリペプチド、及び
薬学上受容可能案担体を含む。 【００３６】 本発明の別の側面によれば、対象の特定の部位から離して細胞の移動を促進す
る方法が提供される。上記方法は、対象の特定の部位から離して細胞の移動を促
進するのに有効な量の駆逐性作用因子を、そのような処置を要求する対象の特定
の部位に局所投与することを含む。いくつかの態様において、上記特定部位は、
炎症部位である。特定の態様において、上記特定の部位は胚（ｇｅｒｍ）細胞含
有部位である。さらなる態様において、上記特定部位は腫瘍を囲むエリアである
が、腫瘍を囲むすぐ隣のエリアではない。いくつかの重要な態様において、上記
特定部位は移植された組織及び／又は移植物である。重要な駆逐性作用因子、細
胞種等は上で記載されたとおりである。前記態様の何れかにおいて、好ましい細
胞は免疫細胞である。 【００３７】 本発明のさらなる側面において、インビトロにおいて未成熟のＴ細胞から成熟
Ｔ細胞を識別する方法が提供される。上記方法は、成熟及び未成熟Ｔ細胞の混合
された集団に駆逐性作用因子を接触させ、そして駆逐性作用因子に関して細胞を
測定することを含むが、但し、駆逐性作用因子から離れた細胞の移動が成熟Ｔ細
胞の指標である。 【００３８】 本発明の別の側面によれば、駆逐性作用因子の選抜のための方法が提供される
。上記方法は、駆逐性作用因子と想像される作用因子を転移能力を有する細胞に
接触させ、上記作用因子に関して転移能力を有する細胞の移動を測定し、そして
転移性能力を有する細胞の移動が作用因子から離れるかを測定することを含み、
但し転移性能力を有する細胞の作用因子から離れる移動が上記作用因子を駆逐性
作用因子とする指標である。特定の態様において、転移性能力を有する細胞は造
血細胞である。いくつかの態様において、転移性能力を有する細胞は神経細胞で
ある。さらなる態様において、転移性能力を有する細胞は間充識細胞である。い
くつかの態様において、転移性能力を有する細胞は胚幹細胞である。特定の態様
において、転移性能力を有する細胞は胚（ｇｅｒｍ）細胞である。別の態様にお
いて、駆逐性作用因子であると叙述された作用因子は定義された濃度において化
学誘因物質であるが定義された濃度より高い濃度においては駆逐性作用因子であ
ることが知られている。好ましい態様において、そのような駆逐性作用因子はサ
イトカインを含む。さらに別の態様において、駆逐性作用因子であると想像され
る作用因子は、生物学上の流体中に存在する作用因子である。好ましい態様にお
いて、生物学上の流体は、滑液、脳髄液、フェロピアンチューブ液、精液、眼液
、心膜液、胸膜液、炎症性滲出液及び腹水液を含む。別の好ましい態様において
、駆逐性作用因子であると想像される作用因子は、腫瘍細胞培養上清、腫瘍細胞
溶出液及び／又は腫瘍細胞溶解液中に存在する作用因子である。いくつかの態様
において、腫瘍細胞はＨｅｐＧ２細胞であり、そして転移性能力を有する細胞は
造血細胞である。さらに好ましい態様において、駆逐性作用因子であると想像さ
れる作用因子はｃＤＮＡライブラリーの発現産物である。 【００３９】 本発明の一つの側面によれば、物質の表面から免疫細胞を忌避する方法が提供
される。上記方法は、物質表面から免疫細胞を忌避するのに有効な量の駆逐性作
用因子で物質表面をコートすることを含む。特定の態様において、上記物質表面
は移植物の一部である。移植物を含む材料は、合成性材料又は有機組織材料であ
る。重要な駆逐性作用因子、細胞種等は上記記載のとおりである。 【００４０】 本発明の別の側面によれば、駆逐性作用因子の転移性細胞特異的駆逐活性を変
調する作用因子に関して選抜する方法が提供される。上記方法は、転移性能力を
有する細胞、駆逐性作用因子及び候補の抗駆逐性作用因子を含む混合物を形成さ
せ、該混合物を、候補の抗駆逐性作用因子の駆逐性作用因子への結合を可能にす
る条件下でインキュベートし、そして候補の抗駆逐性作用因子の不在下で測定さ
れた対照レベルの駆逐活性に対する試験駆逐活性のレベルを比較することを含む
。いくつかの態様において、駆逐活性の対照レベルに対しての試験駆逐活性レベ
ルの低下は、候補の抗駆逐作用因子が駆逐性作用因子の駆逐活性を阻害する抗駆
逐作用因子に関してのリード化合物であることを示す。特定の別の態様において
、駆逐活性の対照レベルに対しての試験駆逐活性の増加は、候補の抗駆逐活性作
用因子が駆逐性作用因子の駆逐性活性を増加させる抗駆逐性作用因子に関するリ
ード化合物であることを示す。特定の別の態様において、駆逐性作用因子は、約
１μｇ／ｍｌより高い濃度のＳＤＦ−１α、約２００ｎｇ／ｍｌより高い濃度の
ＨＩＶ−１IIIBｇｐ１２０、非希釈胸腺ストロマ細胞由来媒体、濃縮された胸腺
ストロマ細胞由来の媒体、又は胸腺ストロマ細胞由来のポリペプチド因子，非希
釈ＨｅｐＧ２細胞由来の媒体、濃縮されたＨｅｐＧ２細胞由来の媒体又はＨｅｐ
Ｇ２細胞由来のポリペプチド因子、内部―α―トリプシン阻害作用因子重鎖ＩＩ
前駆体（ＩＴＩ Ｈ２）、非希釈カポジサルコーマヘルペスウイルス感染細胞由
来の媒体、濃縮されたカポジサルコーマヘルペスウイルス感染細胞由来の媒体又
はカポジサルコーマヘルペスウイルス感染細胞由来のポリペプチド因子である。 【００４１】 別の態様において、転移性能力を有する細胞は、造血細胞、神経細胞、上皮細
胞、間充織細胞、胚幹細胞、アンギオジェネシスに関与する細胞（血管形成）又
は胚細胞である。 【００４２】 本発明の別の態様によれば、表面部位を含む症状を有する対象において免疫応
答を増強するための方法が提供される。該方法は、対象の特定の部位において免
疫細胞特異的駆逐性活性を阻害するのに有効な量の抗駆逐性作用因子を、そのよ
うな処置の要求のある対象の特定部位に局所投与することを含む。いくつかの態
様において、上記特定部位は病原体感染の部位である。さらなる態様において、
特定部位は腫瘍を囲むすぐとなりのエリアである。特定の態様において、抗駆逐
性作用因子はサイトカイン結合性作用因子である。別の態様において、サイトカ
イン結合性作用因子は抗サイトカイン抗体又はサイトカインアゴニストである。
好ましい態様において、サイトカインはＳＤＦ−１αである。 【００４３】 本発明のさらなる側面によれば、対象において腫瘍細胞の転移を阻害する方法
が提供される。該方法は、対象の腫瘍の部位からの腫瘍細胞の転移を阻害するの
に有効な量の駆逐性作用因子をそのような処置の要求のある対象の腫瘍部位に局
所投与することを含む。特定の態様において、上記抗駆逐性作用因子はサイトカ
イン結合性作用因子である。別の態様において、サイトカイン結合性作用因子は
抗サイトカイン抗体又はサイトカインアゴニストである。好ましい態様において
、サイトカインはＳＤＦ−１αである。 【００４４】 本発明の別の側面において、対象の腫瘍部位への上皮細胞の転移を阻害する方
法が提供される。該方法は、対象の腫瘍の部位への上皮細胞の転移を阻害するの
に有効な量の駆逐性作用因子をそのような処置の要求のある対象の腫瘍部位周辺
エリアに局所投与することを含む。特定の態様において、腫瘍部位周辺のエリア
は腫瘍部位のすぐ隣ではない。重要な駆逐性作用因子は上で記載されたとおりで
ある。 【００４５】 本発明のさらなる側面によれば、対象を避妊する方法が提供される。該方法は
、対象の胚細胞の転移を阻害するのに有効な量の抗駆逐作用因子を、そのような
処置が必要な対象に投与することを含む。特定の態様において、抗駆逐性作用因
子はサイトカイン結合性作用因子である。いくつかの態様において、サイトカイ
ン結合性作用因子は抗サイトカイン抗体又はサイトカインアゴニストである。好
ましい態様において、サイトカインはＳＤＦ−１αである。 【００４６】 本発明の別の側面によれば、不稔及び早産の出産及び障害性妊娠を含む早産の
分娩を治療する方法が提供される。該方法は、対象において免疫細胞が胚細胞に
密接して転移することを阻害するのに有効な量の駆逐性作用因子を、そのような
処置を必要とする対象に投与することを含む。さらなる態様において、投与は対
象の胚細胞含有部位に限定される。 【００４７】 駆逐性作用因子がポリペプチドとして同定される（例えば、ＳＤＦ−１α．，
ＨＩＶ−１IIIBｇｐ１２０，ＩＴＩ Ｈ２等）、本発明の前に記載された側面及
び態様の何れかにおいて、本発明に従う有用なそのようなポリペプチドの断片は
、駆逐性活性を伴う断片のみである。当業者は、当業界公知の方法を使用して完
全長のポリペプチドの欠失を最初に創製し、そして本発明の教示に従いそれらの
駆逐活性に関してそのような断片を試験することにより、そのような活性を断片
が有するか否かを容易に測定することができる（例えば実施例参照）。 【００４８】 本発明のこれら及び他の側面、並びに様々な利点及び有用性は、好ましい態様
の詳細な説明に関してより明らかとなる。 配列の簡単な説明 配列番号１は内部−α−トリプシン阻害作用因子重鎖ＩＩ前駆体（ＩＴＩ Ｈ
２）のアミノ酸配列である（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ．Ｎｏ．Ｐ１９８２３）。
発明の詳細な説明 本発明は、真核転移性細胞忌避活性を有する作用因子の発見を含む（以後、「
駆逐性作用因子」及び「駆逐性活性」）。本発明は、規定された濃度において化
学誘因物質であることが以前に知られており、規定された濃度より高い濃度にお
いては駆逐性作用因子として作用する、作用因子の予測されなかった発見も含む
。前記駆逐性作用因子を含む薬学組成物、及び前記駆逐性作用因子を利用する様
々な治療法及び診断法も以下において詳細に説明される。前記は、とりわけ、対
象の特定の部位の転移性細胞の移動を変調する要求により特徴付けされる症状の
処置において使用することができる。 【００４９】 本明細書にて使用されるとおり、対象は、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、ウマ、
ブタ、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ネコ又は齧歯類である。全ての態様において、ヒト
対象が好ましい。 【００５０】 「駆逐性活性」は、転移性能力を有する細胞（即ち、忌避性刺激から離れるこ
とができる細胞）を忌避（又は化学性忌避）する作用因子の能力を意味する。従
って、転移性能力を有する作用因子は「転移性作用因子」である。そのような活
性は、本明細書にて記載されるトランス転移系（実施例参照）又は当業界でよく
知られた他の系（例えば、米国特許５，５１４．５５５、題：「リンパ球化学誘
因物質に基づくアッセイ及び治療方法」、１９９６年５月７日にＳｐｒｉｎｇｅ
ｒ，ＴＡらに対して発行）の何れかを使用して検出することができる。 【００５１】 本発明は、一部、駆逐性活性を有する新規な胸腺ストロマ細胞単離物、転移性
能力を有する細胞、特に成熟Ｔ細胞を忌避することに関する。よって、胸腺スト
ロマ細胞単離物は免疫細胞の転移の阻害が望まれる症状において一般的に有用で
ある。そのような症状は以下において詳細に記載され、そしてそれらの大多数に
おいて炎症性応答に関連する。以下において大変詳しく説明されるとおり、胸腺
ストロマ細胞単離物は密接してストロマ細胞から生産される。胸腺ストロマ細胞
単離物はプロテアーゼ及び熱に感受性であり、そしてｐＨ６．３において０．５
Ｍ ＮａＣｌにて典型的なセファロースイオン交換カラムから溶出し、そして上
記作用因子はＳＤＦ−１αではない。好ましい態様において、胸腺ストロマ細胞
単離物はポリペプチドからなり、そしてそれは免疫細胞を忌避するこのポリペプ
チドである。好ましい態様において、胸腺ストロマ細胞単離物は免疫細胞忌避濃
度のＳＤＦ−１αを含まない。本明細書にて使用されるとおり、「免疫細胞忌避
濃度のＳＤＦ−１α」は、約１００ｎｇ／ｍｌより高い何れかのＳＤＦ−１α濃
度である。特定の態様において、免疫細胞忌避濃度のＳＤＦ−１αは約１５０ｎ
ｇ／ｍｌより高いＳＤＦ−１αの何れかの濃度である。さらなる態様おいて、免
疫細胞忌避濃度のＳＤＦ−１αは約３００ｎｇ／ｍｌ，５００ｎｇ／ｍｌ，７５
０ｎｇ／ｍｌ及び１μｇ／ｍｌからなる群から選択される濃度より高いＳＤＦ−
１α濃度の何れかである。 【００５２】 胸腺細胞単離物に関して本明細書にて使用されるとおり、「単離物（即ち、単
離された）」は、その天然環境から分離されて、その同定又は使用を可能にする
ために十分な量にて存在することを意味する。蛋白質及びポリペプチドに言及す
る場合の単離されたは、例えば：（ｉ）発現クローニングにより選択的に生産さ
れるか、又は（ｉｉ）クロマトグラフィー又は電気泳動により部分精製されたこ
とを意味する。単離された蛋白質又はポリペプチドは、必要でなはいが、実質上
精製されていてよい。本発明の特定の態様において、胸腺ストロマ細胞単離物は
実質上純粋なポリペプチドである。用語「実質上純粋な」は、上記蛋白質又はポ
リペプチドが、それらの意図された使用のために実用的かつ適切な程度まで、そ
れ（それら）が天然又はインビトロ系において見いだされるかもしれない他の物
質を本質的に含まないことを意味する。実質上純粋なポリペプチドは当業界にお
いてよく知られた技術により製造してよい。単離された蛋白質は薬学上の生成物
中で薬学上受容可能な担体と混合してよいから、上記蛋白質は上記生成物のほん
のわずかな重量パーセンテージからなってよい。上記蛋白質は、それが生物系に
おいて関連するかもしれない多くの物質から分離されるように、即ち特定の他の
蛋白質から単離されるように、それでもなお単離される。 【００５３】 駆逐性ポリペプチド（又は胸腺ストロマ細胞単離物）は非均質蛋白質様溶液、
例えば細胞培養上清又は細胞ホモジェネートから単離することができる。胸腺ス
トロマ細胞は、一片の胸腺組織をばらばらにすることにより対象から単離するこ
とができ、そして細胞懸濁液になる。これらの胸腺ストロマ細胞懸濁液は標準の
細胞培養技術に従い培養することができる。小さな規模では、上記培養物が培養
プレート、フラスコ及びディッシュ中に含まれ得る。大きな規模では、上記培養
物をローラーボトル、回転フラスコ及び他の大規模培養用容器、例えば発酵器中
に含ませることができる。三次元の孔性の固形マトリックス内の培養も使用して
よい。好ましい態様において、胸腺ストロマ細胞は以下に詳細に記載される１６
から２２週の流産児のヒト胎児胸腺から得ることができる。 【００５４】 便宜上は、胸腺ストロマ細胞単離物は上記の細胞培養の上清から単離すること
ができるが、全培養物をホモジェナイズして駆逐性ポリペプチドの単離に関して
以下に記載される工程に供することができる（胸腺ストロマ細胞単離物）。典型
的には、上清を細胞培養物の吸引又は遠心分離により取り出すことにより、細胞
を除去する。培養物は細胞及び細胞残渣を除去するために濾過することもできる
。重要な態様において、回収された上清は（その全体が）ストロマ細胞単離物で
ある。 【００５５】 駆逐性ポリペプチド（胸腺ストロマ細胞単離物）含有上清を標準のクロマトグ
ラフィー手法に従い分画することにより、駆逐性ポリペプチド（又は胸腺ストロ
マ細胞単離物）の単離を促進する。当業者は、そのような手法を熟知することと
なり、限定ではないが、サイズ排除クロマトグラフィー、ＦＰＬＣ，ＨＰＬＣ，
ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマト
グラフィー、免疫親和性クロマトグラフィー等を含む。 【００５６】 好ましい態様において、上清を含む胸腺ストロマ細胞の単離物の分画は、次に
、免疫細胞、特に成熟Ｔ細胞を忌避するのに使用される。本明細書にて使用され
る「免疫細胞」は造血細胞起源であり（以下の議論参照）、抗原の特異的認識に
関与する。免疫細胞は、抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）、例えば樹状細胞又はマクロ
ファージ、Ｂ細胞を含む。本明細書にて使用される「成熟Ｔ細胞」は、ＣＤ４lo ＣＤhiＣＤ６９+ＴＣＲ+，ＣＤ４hiＣＤ８loＣＤ６９+ＴＣＲ+，ＣＤ４+ＣＤ３+ ＲＯ+及び／又はＣＤ８+ＣＤ３+ＲＯ+表現型のＴ細胞を含む。 【００５７】 胸腺ストロマ細胞単離物に対する成熟Ｔ細胞の駆逐性の応答は、上記の通り、
又は実施例において詳細に記載されるトランス転移アッセイに従い測定すること
ができる。他の適切な方法は当業者に知られており、日常的な実験のみを使用し
て用いることができる。 【００５８】 胸腺ストロマ細胞単離物に関して陽性の画分を、前記の方法論を使用した選抜
の追加のラウンドに供することができる。画分の精製度は、画分のアリコートを
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ又は画分内の構成物の混合物を可視化するための他の分析法に
供することにより、培養刺激の各ラウンド後に評価することができる。胸腺スト
ロマ細胞単離物の蛋白質、核酸、脂質、糖質等としての性質は、任意の時間にお
いて、前記のクラスの分子のための非特異的分解酵素で陽性画分のアリコートを
処理し、そして処理された画分を上記と同じアッセイにおいて試験することによ
り、確認することができる。 【００５９】 胸腺ストロマ細胞単離物は、次に、所望ならば免疫学上の方法及び分子生物学
上の方法を使用してさらに単離することができる（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｊ．Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９，又はＣｕｒｒｅｎ
ｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ
．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏ
ｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照）。例えば、十分に精製された胸腺ス
トロマ細胞単離物に関して陽性な画分（即ち、駆逐性活性を有する）は、標準法
に従い蛋白質配列決定に供される。例えば、画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、膜
例えばポリビニリデンフロリドへエレクトロブロッティングにより転写し、そし
てエドマン分解によりＮ−末端アミノ酸配列決定することができる。あらゆる配
列情報を使用することにより、存在する蛋白質と相同性に関してデータベースを
スクリーニングして、標準法、例えばコロニーハイブリダイゼーション又はポリ
メラーゼ鎖停止反応によりｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするのに有用
な縮重核酸を生成することもできる。あるいは、陽性画分を使用して、胸腺スク
リーニング細胞単離物を認識する抗体を生成することができる。そのような抗体
は、次に、発現クローニングプロトコルウエスタンブロット、及び胸腺ストロマ
細胞単離物の単離に有用な他の技術において使用することができる。前記の方法
においては、あらゆるｃＤＮＡライブラリー、発現ライブラリー等が、胸腺スト
ロマ細胞から好ましく創製される。 【００６０】 本発明は、本明細書に開示されたような胸腺ストロマ細胞単離物に結合する蛋
白質を単離することをも可能にするかもしれず、胸腺ストロマ細胞単離物の抗体
及び細胞結合パートナー、例えば受容体を含む。一度胸腺ストロマ細胞単離物が
当業者に公知の標準法に従い単離されたなら、胸腺ストロマ細胞単離物（又は実
質上精製された細胞上清又は画分でさえも）を使用して、標準法に従いポリクロ
ーナル又はモノクローナル抗体を生成することができる（例えば、Ｈａｒｌｏｗ
ａｎｄ Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８８）。 【００６１】 胸腺ストロマ細胞単離物に結合する蛋白質は、例えば、胸腺ストロマ細胞単離
物及び胸腺ストロマ細胞単離物とそれら各々の結合パートナーの複合体の存在又
は不在を検出するためのスクリーニングアッセイにおいて、及び胸腺ストロマ細
胞単離物及び胸腺ストロマ細胞単離物とそれら各々の結合パートナーの複合体を
単離する精製プロトコルにおいて使用することができる。そのようなアッセイを
使用することにより、結合特異性を確認することができる。 【００６２】 本発明は、よって、ペプチド結合作用因子を包含し、それは例えば胸腺スクリ
ーニング細胞単離物に選択的に結合して該単離物又は作用因子（又は上記作用因
子）の駆逐性特性を阻害する能力を有する抗体又は抗体断片であり得る。重要な
態様において、上記ペプチド結合作用因子は成熟Ｔ細胞を忌避する実質上純粋な
有機作用因子に選択的に結合する。さらなる重要な態様において、ペプチド結合
作用因子はＳＤＦ−１αに選択的に結合して、免疫細胞の拒絶を阻害する。抗体
はポリクローナル及びモノクローナル抗体を含み、慣用の方法論に従い製造され
る。 【００６３】 重要なことは、当業界において知られるとおり、抗体分子のほんのわずかな部
分、パラトープがそのエピトープへの抗体の結合に関与する（一般的には、Ｃｌ
ａｒｋ，Ｗ．Ｒ．（１９８６）Ｔｈｅ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｆｏｕｎｄ
ａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ ＆
Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｒｏｉｔｔ，Ｉ．（１９９１）Ｅｓｓ
ｅｎｔｉａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７ｔｈ Ｅｄ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｏｘｆｏｒｄを参照）。ｐ
Ｆｃの領域及びＦｃの領域は、例えば相補カスケードのエフェクターであるが、
抗原結合には関与しない。ｐＦｃの領域が酵素により分割される抗体、又はｐＦ
ｃの領域なしに製造される抗体は、Ｆ（ａｂ’）2断片と称され、完全な抗体の
抗原結合部位の両方を保持する。同様に、Ｆｃ両方が酵素により分割された抗体
、又はＦｃ両方なしに製造された抗体は、Ｆａｂ断片と称され、完全抗体分子の
抗原結合部位の一つを保持する。さらに進行すると、Ｆａｂ断片は共有結合した
抗体軽鎖とＦｄと記される抗体重鎖の一部からなる。Ｆｄ断片は抗体の特異性の
主要な決定基であり（単一のＦｄ断片は抗体の特異性を変えることなく１０まで
の異なる軽鎖に付随する。）、そしてＦｄ断片は単離においてエピトープ結合親
和性を保持する。 【００６４】 抗体の抗原結合部分の中には、当業界において知られるとおり、抗原のエピト
ープに直接相互作用する相補決定領域（ＣＤＲｓ）、及びパラトープの三次元構
造を保持するフレームネットワーク（ＦＲｓ）が存在する（一般的には、Ｃｌａ
ｒｋ，１９８６；Ｒｏｉｔｔ，１９９１を参照）。ＩｇＧイムノグロブリンの重
鎖Ｆｄ断片と軽鎖の両方においては、４つのフレームネットワーク領域（ＦＲ１
からＦＲ４）があり、各々は３つの相補決定領域（ＣＤＲ１からＣＤＲ３）によ
り分離されている。ＣＤＲｓ、及び特にＣＤＲ３領域、及びより特定すれば重鎖
ＣＤＲ３は抗体の特異性に大きな責任を果たし得る。 【００６５】 哺乳類の抗体の非ＣＤＲ領域が元の抗体のエピトープ特異性を保持したまま同
種又は異種の抗体の類似の領域で置換されてよいことは現在当業界において確立
されている。これは、非ヒトＣＤＲｓがヒトＦＲ及／又はＦｃ／ｐＦｃ’に連結
されて機能を有する抗体を生じるような、「ヒト化」抗体の開発及び使用におい
てもっとも明白に証明される。即ち、例えばＰＣＴ国際公開番号ＷＯ ９２／０
４３８１は、マウスのＦＲ領域能力を少なくとも一部がヒト起源のＦＲ領域で置
換されたヒト化マウスＲＳＶ抗体の生産及び使用を教示する。そのような抗体は
、抗原結合能力を有する完全な抗体の断片を含み、しばしば、「キメラ」抗体と
称される。 【００６６】 即ち、当業者には明らかになるとおり、本発明は、Ｆ（ａｂ’）2，Ｆａｂ，
Ｆｖ及びＦｄ断片；Ｆｃ及び／又はＦＲ及び／又はＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２
及び／又は軽鎖ＣＤＲ３領域が相同なヒト又は非ヒト配列で置換されたキメラ抗
体；ＦＲ及び／又はＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２及び／又は軽鎖ＣＤＲ３領域が
相同なヒト又は非ヒト配列で置換されたキメラＦ（ａｂ’）2断片；ＦＲ及び／
又はＣＤＲ１及び／又はＣＤＲ２及び／又は軽鎖ＣＤＲ３領域が相同なヒト又は
非ヒト配列で置換されたキメラＦａｂ断片；及びＦＲ及び／又はＣＤＲ１及び／
又はＣＤＲ２領域がヒト又は非ヒト配列で置換されたキメラＦｄ断片に関しても
提供する。 【００６７】 即ち、本発明は、胸腺ストロマ細胞単離物に特異的に結合する多くのサイズ及
び種類のポリペプチド、及び胸腺ストロマ細胞単離物とその結合パートナーの両
方の複合体を含む。これらのポリペプチドは抗体技術以外の源にも由来してよい
。例えば、そのようなポリペプチド結合作用因子は、溶液中で、固定化された形
態で、あるいはファージディスプレイライブラリーとして容易に調製できる縮重
ペプチドライブラリーにより提供することができる。コンビナトリアルライブラ
リーも一つ又は複数のアミノ酸を含むポリペプチドを合成できる。ライブラリー
は、さらに、ペプトイド及び非ペプチド合成部分を合成することができる。 【００６８】 以下に詳細なとおり、前記抗体及び他の結合分子は、例えば組織発現蛋白質を
同定するため又は蛋白質を生成するために使用してもよい。抗体は、胸腺ストロ
マ細胞単離物を発現する細胞及び組織をイメージするための特定の診断用標識作
用因子にカップリングしてもよい。 【００６９】 本発明は、別の部分において、規定された濃度において免疫細胞の化学誘因物
質として作用することが以前に知られている作用因子が規定された濃度よりも高
い濃度にて同じ細胞に対して駆逐性作用因子としても作用するとの予測されなか
った発見に関する。好ましい態様において、そのような駆逐性作用因子はサイト
カインを含む。「サイトカイン」は、一つの細胞亜集団から放出されて、例えば
免疫応答の生成又は制御における細胞内メディエーターとして作用する非抗体の
可溶性蛋白質に関する一般用語である。Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ；Ｈａ
ｎｄｂｏｏｋ ｆｏｒ Ｂａｓｉｃ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
（Ａｇｇｒａｗａｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ，１９９１）（あらゆる目的のためにその
全体を引用により編入する）。サイトカインは、例えばインターロイキンＩＬ−
１からＩＬ−１５、腫瘍ネクローシス因子αアンドβ、インターフェロンα、β
及びγ、腫瘍成長因子ベータ（ＴＧＦ−β）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）及び
顆粒球単球コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）を含む。各サイトカインのその標
的細胞上への作用は細胞表面メディエーターへの結合を通して媒介される。サイ
トカインはホルモンと多くの特性を共有するが、インビボにおいてそれらが一般
的には組織中の隣の細胞に局所的に作用する点において古典的なホルモンとは異
なる。サイトカインの活性は、細胞成長を促進すること（例えば、ＩＬ−２，Ｉ
Ｌ−４及びＩＬ−７）、及び成長を停止させること（ＩＬ−１０，腫瘍ネクロー
シス因子及びＴＧＦ−β）からウイルス耐性を誘導すること（ＩＦＮα，β及び
γ）まで及ぶ。Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ ｅ
ｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８９）；免疫学辞典（Ｒｏ
ｉｔｔ ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９９２）を参照されたい（
あらゆる目的のためにそれらの全ては引用により編入される）。特定の態様にお
いて、上記サイトカインは化学誘因及び／又はケモキネシスの特性を有するサイ
トカインである。そのようなサイトカインの例は、：ＲＰＡＦ，Ｎ−製作用因子
化されたペプチド、Ｃ５ａ，ＬＴＢ4，ＬＸＡ4，ケモカイン：ＣＸＣ，ＩＬ−８
ＧＣＰ−２，ＧＲＯα，ＧＲＯβ，ＧＲＯγ，ＥＮＡ−７８，ＮＡＰ−２ＩＰ−
１０，ＭＩＧ，Ｉ−ＴＡＣ，ＳＤＦ−１α，ＢＣＡ−１，ＰＦ４，ボルカイン（
Ｂｏｌｅｋｉｎｅ），ＭＩＰ−１α，ＭＩＰ−１β，ＲＡＮＴＥＳ，ＨＣＣ−１
，ＭＣＰ−１，ＭＣＰ−２，ＭＣＰ−３，ＭＣＰ−４，ＭＣＰ−５（マウスのみ
），リューコタクチン−１（ＨＣＣ−２，ＭＩＰ−５），エオタクシン、エオタ
クシン−２（ＭＰＩＦ−２）、エオタクシン−３（ＴＳＣ），ＭＤＣ，ＴＡＲＣ
，ＳＬＣ（エクソダス−２，６ＣＫｉｎｅ），ＭＩＰ−３α（ＬＡＲＣ，エクソ
ダス−１），ＥＬＣ（ＭＩＰ−３β），Ｉ−３０９，ＤＣ−ＣＫ１（ＰＡＲＣ，
ＡＭＡＣ−１），ＴＥＣＫ，ＣＴＡＫ，ＭＰＩＦ（ＭＩＰ−３），ＭＩＰ−５（
ＨＣＣ−２），ＨＣＣ−４（ＮＣＣ−４），ＭＩＰ−１γ（マウスのみ），Ｃ−
１０（マウスのみ）；Ｃ：リンホタクチン；ＣＸ3Ｃ：フラクテルカイン（ニュ
ーロタクチン）を含む。もっとも好ましくは、上記サイトカインは、ケモカイン
のＣｙｓ−Ｘ−Ｃｙｓファミリーのメンバーである（ＣＸＣＲ−４受容体に結合
するケモカイン）。本発明の好ましいそのような作用因子は、ＳＤＦ−１α、Ｓ
ＤＦ−１β、及びｍｅｔ−ＳＤＦ−１βを含む。さらに好ましい態様において、
そのような駆逐性作用因子は、他のＣＸＣＲ−４受容体リガンドを含む。ＣＸＣ
Ｒ−４リガンドは、限定ではないが、ＨＩＶ−１IIIBｇｐ１２０，小分子Ｔ１３
４及びＭＤ３１００、及び／又はＴ２２（［Ｔｙｒ５，１２，Ｌｙｓ７］−ポリ
フェムシンＩＩ）を含む（Ｈｅｖｅｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ｂｉｏｌ
，１９９８，８：３６９−７６）。 【００７０】 ＳＤＦ−１αは胸腺及び骨髄のストロマにより生産されるサイトカイン（ケモ
カイン）であり（12-15及び米国特許５，７５６，０８４，題「ヒトストロマ由
来の因子１α及び１β」、Ｈｏｎｊｏらに対して１９９８年５月２６日に発行）
、１００ｎｇ／ｍｌより低い濃度において高い効果及び高い能力のリンパ球化学
誘因物質として報告された。我々は、予期せずに、約２００ｎｇ／ｍｌより高い
濃度、そして好ましくは１μｇ／ｍｌより高い濃度のＳＤＦ−１αが、免疫細胞
に対して、より特定すれば成熟Ｔ細胞に対して有力な駆逐性作用因子として作用
することを発見し、実施例において詳細に記載される。 【００７１】 ＨＩＶＬＡＩのサブストレインＩＩＩＢの組換えエンベロープ糖蛋白質（ＨＩ
ＶIIIBｇｐ１２０）は、ＨＩＶに対する中和抗体を生成するために当業界におい
て広く使用されてきた。ｇｐ１２０と細胞へのＨＩＶの効率よい侵入のためのＣ
ＸＣＲ−４共受容体の間の対合が確立された（Ｓｔｏｔｔ ＥＪ，ｅｔ ａｌ．
，Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，１９９８，７９（Ｐｔ３）：４２３−３２）。我々
は、約１０ｎｇ／ｍｌより高い濃度、好ましくは約２００ｎｇ／ｍｌより高い濃
度にてＨＩＶIIIBｇｐ１２０が免疫細胞、より特定すれば成熟Ｔ細胞に対して有
力な駆逐性作用因子として作用することを発見し、詳細は実施例において詳細に
記載される。 【００７２】 別の側面において、本発明は、ストロマ細胞由来の駆逐性作用因子を単離する
方法を含む。該方法によれば、ストロマ細胞の培養物を第一に調製する。以下に
記載される他の細胞及び要素のあるなしに拘わらず繊維芽細胞を含むストロマ細
胞（用語「繊維芽細胞」は本明細書においてはそのような細胞を含むように集約
的に使用される）を組織培養容器（典型的な二次元培養ディッシュ又は三次元マ
トリックス）上に接種する。これらの繊維芽細胞は限定されないが、皮膚、肝臓
、膵臓、骨髄、リンパ節、胸腺、腎臓、ＣＮＳ，脳等を含む組織又は器官に由来
してよく、生検（適切な場合）によるか又は解剖に際して得ることができる。事
実、繊維芽細胞はあらゆる適切な死体の器官から、良質にて、より便利に得るこ
とができる。 【００７３】 繊維芽細胞は繊維芽細胞の源として作用する適切な器官又は組織をバラバラに
することにより容易に単離してよい。これは、当業者には知られた技術を使用し
て容易に達成してよい。例えば、上記組織又は器官は、機械でバラバラにするか
、又は隣の細胞との接続を弱くする分解酵素及び／又はキレート作用因子で処理
することができ、感知できるような細胞の破壊無しに個々の細胞の懸濁液に組織
を分散させることができる。酵素による解離は、組織をミンスして、ミンスされ
た組織を多数の任意の酵素を単独又は組み合わせて処理することにより達成する
ことができる。これらは、限定ではないが、トリプシン、キモトリプシン、コラ
ーゲナーゼ、及び／又はヒアルウロニダーゼ、ＤＮａｓｅ，プロナーゼ、ディス
パーゼ等を含む。機械による破壊は、多くの方法により達成することができ、限
定ではないが、グラインダ、ブレンダー、篩、ホモジェナイザーの使用、細胞に
圧力をかけるか、又はインソネーターを含む。組織をバラバラにする技術の総説
については、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌ
ｌｓ，Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２ｄ Ｅ
ｄ．，Ａ．Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７，Ｃｈ．９，
ｐｐ．１０７−１２６を参照。 【００７４】 組織が個々の細胞懸濁液に適応されたなら、該懸濁液を、繊維芽細胞及び／又
は他のストロマ細胞及び／又は要素が得られた亜集団に分類することができる。
これは、細胞分離のための標準の技術を使用して達成してもよく、限定されない
が、特定の細胞種のクローニング及び選択、望まない細胞の破壊（負の選択）、
混合された集団における異なる細胞の凝集力に基づく分離、凍結−溶解手法、混
合された集団中の異なる接着特性、濾過、慣用の及びゾーン遠心分離、遠心分離
洗浄（カウンター連続遠心分離）、単位重力分離、逆電流分離、電気泳動及び蛍
光活性化細胞分類を含む。クローン選択及び細胞分離技術の総説については、Ｆ
ｒｅｓｈｎｅｙ，Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ，Ａ Ｍａ
ｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２ｄ Ｅｄ．，Ａ．Ｒ．
Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７，Ｃｈ．１１ ａｎｄ １２
，ｐｐ．１３７−１６８を参照。 【００７５】 繊維芽細胞の単離は、例えば、以下のとおりに実施してよい：新鮮な組織サン
プルを徹底的に洗浄して、ハンクスバランス塩溶液（ＨＢＳＳ）中でミンスする
ことにより、血清を除去する。ミンスされた組織は解離酵素、例えばトリプシン
の新たに調製された溶液中で１−１２時間インキュベートする。そのようなイン
キュベーションの後に、解離した細胞を懸濁し、遠心分離により沈殿させ、そし
て培養ディッシュ上に置く。全ての繊維芽細胞が他の細胞より前に接着し、よっ
て、適切なストロマ細胞が選択的に単離され、そして成長し得る。単離された繊
維芽細胞を次に芝生状に成長させ、芝生状の培養物から取り上げ、そして三次元
マトリックス上に接種する（Ｎａｕｇｈｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．
Ｍｅｄ．，１８：２１９−２５０参照）。培養容器の高濃度のストロマ細胞、例
えば約１０6から５ｘ１０7細胞／ｍｌを用いた接種は、短い時間の芝生状ストロ
マ細胞培養物の確立をもたらすことになる。 【００７６】 上記のとおり、ゆるい結合の組織中に見いだされる他のストロマ細胞は、繊維
芽細胞と共に培養容器上に接種してよい。これらのストロマ細胞は、繊維芽細胞
が由来する同じ適切な器官に容易に由来してよく、限定ではないが、皮膚、肝臓
、膵臓、骨髄、リンパ節、胸腺、腎臓、ＣＮＳ，脳等を含み、上で論じられた当
業界公知の方法を使用する。そのような細胞は、限定ではないが、上皮細胞、血
管周囲細胞、マクロファージ、単球、プラズマ細胞、乳房細胞、含脂肪細胞等を
含む。一つの例において、限定ではないが繊維芽細胞、上皮細胞、マクロファー
ジ／単球、含脂肪細胞及び網状細胞を含む造血組織のストロマ細胞を使用して、
組織培養ディッシュ及び／又は三次元マトリックスを接種することができる。 【００７７】 造血ストロマ細胞は、低い重力、例えば３０００ｇにおける遠心分離により骨
髄細胞懸濁液中に形成される「バッフィーコート」から容易に得てよい。肝臓の
ストロマ細胞は、繊維芽細胞、Ｋｕｐｆｆｅｒ細胞、及び血管及び胆管の上皮細
胞を含む。同様に、膠細胞をストロマ細胞として使用して、神経細胞及び組織の
増殖を支持することができ；この目的のための膠細胞は胚又は成人の脳のトリプ
シン処理又はコラーゲナーゼ消化により得ることができる（Ｐｏｎｔｅｎ ａｎ
ｄ Ｗｅｓｔｅｒｍａｒｋ，１９８０，Ｆｅｄｅｒｏｆ，Ｓ．Ｈｅｒｔｚ，Ｌ．
，ｅｄｓ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．
２０９−２２７中）。 【００７８】 ストロマ細胞の接種後に、上記容器を適切な利用培地中で細胞の成長に代謝上
好都合な条件下でインキュベートする。本明細書にて使用されるとおり、「代謝
上好都合な条件」なる節は、細胞の分割を促進する条件を意味する。そのような
条件は、栄養培地中での３７℃における５％ＣＯ2発酵器中での９０％より高い
湿度の成長を含む。多くの市販の培地、例えばＲＰＭＩ １６４０，フィッシャ
ー、イスコブ、マッコイ、ダルベッコ修飾イーグル培地等は血清を加えても加え
なくてもよく、栄養培地としての使用に適しているかもしれない。抗生物質、例
えばペニシリン及びストレプトマイシンを含んでもよい。好ましい態様において
、ストロマ細胞は最初に短い時間（例えば、少なくとも１時間）１０％血清存在
下で培養する。次に、培地を血清を含まない培地に変えることにより、連続培養
条件下で培地中に存在するその他の（即ち、非ストロマ細胞由来の）因子の数を
最小にする。血清を含まないストロマ細胞培地は、よって、ストロマ細胞の連続
インキュベーションに際してストロマ細胞条件化培地（上清）になる。 【００７９】 新たに接種された培養物は約３−６細胞周期の代謝上好都合な条件下で生育さ
せることを可能にする細胞周期は、本明細書において定義されるとおり、有糸分
裂の間の時間の長さである。好ましくは、ストロマ細胞を芝生状に生育させる（
例えば、懸濁液中１０7細胞／１０ｍｌ培地の濃度にて）。 【００８０】 ストロマ細胞培養物の上清を次に単離する。典型的には、上清を細胞培養物の
吸引又は遠心分離により取り出すことにより、細胞を除去する。培養物は細胞及
び細胞残渣を除去するために濾過することもできる。上清（駆逐性作用因子を含
むと想像される）を、次に多数の画分に分画し、そして多数の画分からの画分を
、転移性能力を有する細胞に接触させる。「転移性能力を有する細胞」は真核細
胞であり、限定ではないが、造血起源の細胞、神経起源の細胞、上皮起源の細胞
、アンギオジェネシスに関与する細胞、間充織起源の細胞、胚幹細胞、胚（ｇｅ
ｒｍ）細胞を含む。転移性能力を有するそのような細胞は、様々なケモタクシス
シグナルに応答することができ、化学誘因性シグナル及び化学忌避性（駆逐性）
シグナルを含む。上記応答は典型的にはアクチン骨格における変化を含む。 【００８１】 「造血起源」の細胞は、限定ではないが、多機能性幹細胞、多型潜在性始原細
胞及び／又は特定の造血系列にかかわる始原細胞を含む。特定の造血系列にかか
わる始原細胞は、Ｔ細胞系列、Ｂ細胞系列、樹状細胞系列、ランゲルハンス細胞
系列及び／又はリンパ性組織特異的マクロファージ細胞系列のものであってよい
。造血細胞は、組織、例えば骨髄、末梢血（固定化された末梢血を含む）、臍血
、胎盤血、胎児肝臓、胚細胞（胚幹細胞を含む）、大動脈−生殖腺−中腎由来の
細胞、及びリンパ性軟組織に由来してよい。リンパ性軟組織は、胸腺、脾臓、肝
臓、リンパ節、皮膚、扁桃腺、及びＰｅｙｅｒのパッチを含む。他の態様におい
て、「造血起源の」細胞は、前に記載した細胞の何れかのインビトロ培養、特に
始原細胞のインビトロ培養物に由来してよい。 【００８２】 神経起源の細胞は、ニューロン及び膠、及び／又はＲＲ／Ｂを発現する中枢及
び末梢の神経組織の両方の細胞を含む（米国特許５，８６３，７４４、題「Ｎｅ
ｕｒａｌ ｃｅｌｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍａｒｋｅｒ ＲＲ／Ｂ ａｎｄ ＤＮ
Ａ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｓａｍｅ」，Ａｖｒａｈａｍらに対して１９９９年１月
２６日に発行を参照）。 【００８３】 上皮起源の細胞は、体のフリーな表面を覆いそして系列化する（ｌｉｎｅ）組
織の細胞を含む。そのような上皮組織は、皮膚及び感覚器官の細胞並びに血管，
胃腸管、気道、腎臓及び内分泌器官を系列化する特別な細胞を含む。 【００８４】 間充織起源の細胞は、典型的な繊維芽細胞マーカー、例えばコラーゲン、ビメ
ンチン及びフィブロネクチンを発現する細胞を含む。 アンギオジェネシスに関与する細胞は血管形成に関与する細胞であり、上皮起
源の細胞及び間充織起源の細胞を含む。 【００８５】 胚幹細胞は全ての系列の細胞を生じることができる細胞であり；それは自己再
生できる細胞でもある。 胚細胞は、一倍体生殖体を生産するように特殊化された細胞である。それは幹
細胞よりもさらに分化した細胞であって、より分化した胚系列細胞をまだ生じる
ことができる。 【００８６】 転移性能力を有する細胞の移動は、本明細書のどこか（例えば、実施例）で記
載された何れかの方法に従い測定され、そして当業者は転移性能力を有する細胞
の移動が画分（ｆｒａｃｔｉｏｎ）から離れているか否かを決定するかもしれな
い。画分から離れての転移性能力を有する細胞のそのような移動は、画分中の駆
逐性作用因子の存在の指標である。 【００８７】 駆逐性作用因子（ストロマ又は他の細胞単離物）を含有する上清は標準のクロ
マトグラフィー手法に従い分画されることにより、上記駆逐性ポリペプチド（胸
腺ストロマ細胞又は他の細胞の単離物）の単離を促進する。当業者はそのような
手法に精通しており、限定ではないが、サイズ排除クロマトグラフィー、ＦＰＬ
Ｃ，ＨＰＬＣ，ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、
疎水性クロマトグラフィー、免疫親和性クロマトグラフィー等を含む（実施例の
欄も参照）。 【００８８】 特定の態様において、ストロマ細胞は胸腺ストロマ細胞であり、そして転移性
能力を有する細胞は造血細胞である。他の態様において、ストロマ細胞は免疫免
除された（ｐｒｉｖｉｌｅｇｅｄ）部位／組織から単離される。「免疫免除され
た組織」は、免疫細胞の寛容を有する組織であり、限定ではないが、脳組織、中
枢神経計（ＣＮＳ）、精巣、胎盤、又は目の組織を含む（例えば、水性体液）。 【００８９】 他の駆逐性分子は、別の組織又は生物学上の流体のホモジェネート又は上清、
あるいは他の生物学上の物質から、前記の方法論を用いて単離することができる
。好ましい態様において、生物学上の流体は、限定ではないが、滑液、脳髄液、
卵管液、精液、目の液体、心膜液、胸膜液、炎症滲出液及び腹水液を含む。 【００９０】 他の好ましい態様において、駆逐性作用因子と想像される作用因子は、主要細
胞培養上清、主要細胞溶出物、及び／又は主要細胞溶解物に存在する作用因子で
ある（実施例の欄も参照）。主要細胞は免疫認識を逃れると考えられる癌又は腫
瘍種であってよい。そのような癌又は腫瘍は、以下の起源であってよい：胆管癌
；脳癌、膠芽腫及び髄芽腫を含む；胸部癌；頸部癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜
癌；食道癌；胃癌；血液新生物。急性リンパ性及び骨髄性白血病を含む；多発性
ミエローマ；ＡＩＤＳ関連白血病及び成人Ｔ細胞白血病リンパ腫；上皮内新生物
、Ｂｏｗｅｎ疾患及びパジェット病を含む；肝臓癌リンパ腫（ヘパトカルシノー
マ）；肺癌；リンパ腫、ホジキン病及びリンパ球性リンパ腫を含む；神経芽腫；
口腔癌、偏平上皮細胞カルシノーマを含む；卵巣癌、上皮細胞、幹細胞、胚細胞
及び間充織細胞から生じるものを含む；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；肉腫、平滑
筋腫、横紋筋腫、脂肪肉腫、繊維肉腫及び骨肉腫を含む；皮膚癌、メラノーマ、
カポジ肉腫、好塩基細胞（ｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒ）癌及び偏平上皮細胞癌；
精巣癌、胚腫瘍（セミノーマ、非セミノーマ［テラトーマ、コリオカルシノーマ
］）、ストロマ腫瘍及び胚細胞腫瘍を含む；甲状腺癌、甲状腺アデノカルシノー
マ及び延髄カルシノーマを含む；及び腎臓癌、アデノカルシノーマ及びウイルム
ズ腫瘍。重要な態様において、免疫認識を逃れる癌又は腫瘍は、神経膠腫、直腸
カルシノーマ、結腸直腸癌、リンパ細胞由来の白血病、絨毛性カルシノーマ及び
メラノーマを含む。 【００９１】 前記態様の何れかにおいて、転移性能力を有する細胞は造血細胞である。好ま
しい態様において、造血細胞は免疫細胞である。 別の側面によれば、本発明は、物質表面から免疫細胞を忌避する方法を含む。
本明細書で使用される「物質表面」は、限定ではないが、歯科及び整形外科置換
移植物、人工弁、及び有機移植可能な組織、例えばステント、アロジェニック及
び／又はキセノジェニックの組織、器官及び／又は脈管構造を含む。 【００９２】 移植可能な置換装置は、数年間内部組織の外科修理又は置換において使用され
てきた。整形外科移植物は様々な装置を含み、各々は特定の医学上の要求を満た
すように適合された。そのような装置の例は、股関節置換装置、ひざ関節置換装
置、肩関節置換装置、及び不安定な骨をセットするのに使用されるピン、ブレー
ス及びプレートである。いくつかの現代の整形外科及び歯科の移植物は、高い強
度を達成するために高い性能の金属、例えばコバルトークローム及びチタン合金
を使用する。これらの物質は、成型及びマシニングを含む完成した金属作業技術
を使用してこれらの装置の典型的な複雑な形へ容易に製作される。 【００９３】 上記物質表面は、免疫細胞を忌避するために有効な量の駆逐性作用因子でコー
トされる。重要な態様において、物質表面は移植物の一部である。重要な態様に
おいて、駆逐性作用因子に加えて、物質表面は細胞成長強化作用因子、抗感染作
用因子及び／又は抗炎症作用因子でコートされる。 【００９４】 本明細書で使用される細胞成長強化作用因子は、細胞の成長を刺激する作用因
子を含み、そして成長因子、例えばＰＤＧＦ，ＥＧＦ，ＦＧＦ，ＴＧＦ，ＮＧＦ
，ＣＮＴＦ及びＧＤＮＦを含む。 【００９５】 本明細書で使用される抗感染作用因子は微生物の活性を低下させるか又は殺す
作用因子であり、アズトレオナム；クロルヘキシジングルコネート；イミドウレ
ア；リセタミン；ニブロキサン；ピラズモナムナトリウム；プロピオン酸、ピリ
チオンナトリウム；サングイナリウム塩酸；チゲモナムジコリン；アセダプソン
；アセトスルフォンナトリウム；アラメシン；アレキシジン；アムジノシリン；
アムジノシリンピボキサル；アミシクリン；アミフロキサシン；アミフロキサシ
ンメシレート；アミカシン；アミカシン硫酸；アミノサリチル酸；アミノサリチ
ル酸ナトリウム；アモキシリン；アンフォミシン；アンピシリン；アンピシリン
ナトリウム；アパルシリンナトリウム；アプラマイシン；アスパルトシン；アス
トロマイシン硫酸；アビラマイシン；アボパルシン；アジスロマイシン；アズロ
シリン；アズロシリンナトリウム；バカンピシリン塩酸；バシトラシン；バシト
ラシンメチレンジサリチル酸；バシトラシン亜鉛；バンベルマイシン；ベンゾリ
パスカルシウム；ベリスロマイシン；ベタマイシン硫酸；ビアペネム；ビニラマ
イシン；ビフェナミン塩酸；ビスピリチオンマグスルフェックス；ブチカシン；
ブチロシン硫酸；カプレオマイシン硫酸；カバドックス；カルベニシリン二ナト
リウム；カルベニシリンインダニルナトリウム；カルベニシリンフェニルナトリ
ウム；カルベニシリンカリウム；カルモナムナトリウム；エファクロア、セファ
ドロキシル；セファマンドール；セファマンドールナフェート；セファマンドー
ルナトリウム；セファパロール；セファトリジン；セファザフルーナトリウム；
セファゾリン；セファゾリンナトリウム；セフメノキシン塩酸；セフメタゾール
；セフメタゾール塩酸；セフォニシドモノナトリウム；セフォニシドナトリウム
；セフォペラゾンナトリウム；セフォラニド；セフォキシチンナトリウム；セフ
ピミゾールナトリウム；セフミラミド；セフピラミドナトリウム；セフピローム
硫酸；セフポドキシムプロクセチル；セフプロジル；セフロキサジン；セフスロ
ジンナトリウム；セフタジジム；セフチブテン；セフチゾキシムナトリウム；セ
フトリアキゾンナトリウム；セフロキシム；セフロキシムアクセチル；セフロキ
サムピボクセチル；セフロキサムナトリウム；セファセトリルナトリウム；セフ
ァレキシン塩酸；セファログリシン；セファロリジン；セファロチンナトリウム
；セファピリンナトリウム；セファラジン；セトシクリン塩酸；セトフェニコル
；クロラムフェニコール琥珀酸ナトリウム；クロルヘキシジンホスファニレ−ト
；クロロキシレノール；クロロテトラサイクリン重硫酸；クロロテトラサイクリ
ン塩酸；シノキサシン；シプロフロキサシン；シプロフロキサシン塩酸；シロレ
マイシン；クラリスロマイシン；クリナフロキサシン塩酸；クリンダマイシン；
クリンダマイシン塩酸；クリンダマイシンパルミチン酸塩酸；クリンダマイシン
リン酸；クロファジミン；クロキサシリンベンザチン；クロキサシリンナトリウ
ム；クロキシキン；クロリスチメテートナトリウム；コリスチン硫酸；クママイ
シン；クママイシンナトリウム；シクラシリン；シクロセリン；ダルフォプリス
チン；ダプソン；ダトマイシン；デメクロサイクリン；デメクロサイクリン塩酸
；デメシクリン；デノフンギン；ダイアベリジン；ジクロクサシリン；ジクロキ
サシリンナトリウム；ジヒドロストレプトマイシン硫酸；ジピリチオン；ジリス
ロマイシン；ドキシシクリン；ドキシシクリンカルシウム；ドキシシクリンフォ
スファテックス；ドキシシクリンヒクレート；ドロキサシンナトリウム；エノキ
サシネピシリン；エピテトラサイクリン塩酸；エリスロマイシン；エリスロマイ
シンアシストレート；エリスロマイシネストレート；エリスロマイシンエチル琥
珀酸；エリスロマイシングルセプテート；エリスロマイシンラクトビオネート；
エリスロマイシンプロピオネート；エリスロマイシンステアリン酸；エタンブト
ール塩酸；エチオナミド；フレロキサシン；フロキサシリン；フルダラニン；フ
ルメキン；フォスフォマイシン；フォスフォマイシントロメタミン；フモキシシ
リン；フラゾリウムクロリド；フラゾリウム酒石酸；フシデートナトリウム；フ
シディック酸；ゲンタマイシン硫酸；グロキシモナム；グラミシジン；ハロプロ
ギン；ヘタシリン；ヘタシリンカリウム；ヘキセジン；イバウロキサシン；イミ
ペネム；イスコナゾール；イセパミシン；イソニアジド；ジョサマイシン；カナ
マイシン硫酸；キタサマイシン；レボフラルタドン；レボプロピリシリンカリウ
ム；レキシスロマイシン；リンコマイシン；リンコマイシン塩酸；ロメフラキサ
シン；ロメフロキサシン塩酸；ロメフロキサシンメシレート：ンロラカルベフ；
マフェニド；メクロサイクリン；メクロサイクリンスルフォサリチル酸；メガロ
マイシンリン酸カリウム；マキドックス；メロペネム；メタサイクリン；メタサ
イクリン塩酸；メテナミン；メテナミン馬尿酸；メタナミンマンデレート；メチ
シリンナトリウム；メチオプリム；メトロニダゾール塩酸；メトロニダゾールリ
ン酸；メズロシリン；メズロシリンナトリウム；ミノシクリン塩酸；ミリンカマ
イシン塩酸；モネンシン；モネンシンナトリウム；ナフシリンナトリウム；ナリ
ジキシン酸ナトリウム；ナリジキシン酸；ナタマイシン；ネブラマイシン；ネオ
マイシンパルミチン酸；ネオマイシン硫酸；ネオマイシンウンデシレネート；ナ
チルマイシン硫酸；ニュートラマイシン；ニフラデン；ニフラデゾーン；ニフラ
テル；ニフラトロン；ニフルダジル；ニフリミド；ニフルピリノール；ニフルキ
ナゾール；ニフルチアゾール；ニトロサイクリン；ニトロフラントニン；ニトロ
ミド；ノルフロキサシン；ノボビオシンナトリウム；オフロキサシン；オルメト
プリム；オキサシリンナトリウム；オキシモナム；オキシモナムナトリウム；オ
キソリニン酸；オキシテトラサイクリン；パウロマイシン；ペフロキサシン；ペ
フロキサシンメシレート；ペナメシリン；ペニシリンＧベンザチン；ペニシリン
Ｇカリウム；ペニシリンＧプロカイン；ペニシリンＧナトリウム；ペニシリンＶ
；ペニシリンＶベンザチン；ペニシリンＶヒドロバミン；ペニシリンＶカリウム
；ペンチジドンナトリウム；フェニルアミノサリチル酸；ピペラシンナトリウム
；ピルベニシリンナトリウム；ピリジシリンナトリウム；ピルリマイシン塩酸；
ピヴァンピシリン塩酸；ピバンピシリンパモエート；ピバンピシリンプロベネー
ト；ポリミキシンＢ硫酸；ポルフィロマイシン；プロピカシン；ピラジナミド；
ピリチオン亜鉛；キンデカミン酢酸；キヌプリスチン；ラセファニコール；ラモ
プラニン；ラニマイシン；レロマイシン；レプロマイシン；リファブチン；リフ
ァメタン；リファメキシル；リファミド；リファンピン；リファペンチン；リフ
ァキシミン；ロリテトラサイクリン；ロリテトラサイクリン硝酸；ロサラマイシ
ンブチル酸；ロサラマイシンプロピオン酸；ロサラマイシンリン酸ナトリウム；
ロサラマイシンステアリン酸；ロソキサシン；ロクサルソン；ロキシスロマイシ
ン；サンサイクリン；サンフェトリネムナトリウム；サルモキシリン；サルピシ
リン；スコパフンギン；シソマイシン；シソマイシン硫酸；スパルフロキサシン
；スペクチノマイシン塩酸；スピラマイシン；スタリマイシン塩酸；ステフィマ
イシン；ストレプトマイシン硫酸；ストレプトニコジド；スルファベンズ；スル
ファベンズアミド；スルファセタミド；スルファセタミドナトリウム；スルファ
シチン；スルファジアジン；スルファジアジンナトリウム；スルファドキシン；
スルファレン；スルファメラジン；スルファメター；スルファメタジン；スルフ
ァメチゾール；スルファメトキサゾール；スルファモノメトキシン；スルファミ
キソール；スルファニレート亜鉛；スルファニトラン；スルファサラジン；スル
ファソミゾール；スルファチアゾール；スルファザメート；スルフィソキサゾー
ル；スルフィソキサザオールアセチル；スルフィキサゾールジオラミン；スルフ
ォミキシン；スロペネム；スルタミシリン；サンシリンナトリウム；タランピシ
リン塩酸；テイコプラニン；テモフロキサシン塩酸；テモシリン；テトラサイク
リン；テトラサイクリン塩酸；テトラサイクリンリン酸複合体；テトロキソプリ
ム；チアムフェニコール；チフェンシリンカリウム；チカルシリンクレジルナト
リウム；チカルシリン二ナトリウム；チカルシリン一ナトリウム；チクラトーン
；チオドニウムクロリド；トブラマイシン；トブラマイシン硫酸；トスフロキサ
シン；トリメトプリム；トリメトプリム硫酸；トリスルファピリミジン；トロレ
アンドマイシン；トロスペクトマイシン硫酸；チロチリシン；バンコマイシン；
バンコマイシン塩酸；バージニアマイシン；ゾルバマイシン；ジフロキサシン塩
酸；ラウリルイソキノリニウムブロミド；モクサラクタム二ナトリウム；オルニ
ダゾール；ペンチソマイシン；及びサラフロキサシン塩酸を含む。 【００９６】 抗炎症性作用因子は以下に記載される。 本発明の一つの側面によれば、対象において特定の部位への免疫細胞の移動を
阻害する方法が提供される。該方法は、対象の特定の部位屁の免疫細胞の移動を
阻害するのに有効な量の駆逐性作用因子を、そのような処置を要求する対象の特
定の部位に局所投与することを含む。 【００９７】 一つの重要な態様において、本発明は、対象の炎症部位への免疫細胞の移動を
阻害する方法を提供する。本明細書にて使用される「炎症」は、外来抗原及び／
又はケガあるいは組織の破壊により現れた局所性の防御応答であり、外来抗原、
損傷性作用因子及び／又は損傷した組織を破壊するか、希釈するか又は封鎖する
ように作用する。炎症は、ウイルス、バクテリア、外傷、化学物質、熱、冷却、
あらゆる他の有害な刺激により組織が損傷を受けた場合に起こる。そのような例
において、免疫系の古典的な武器（ＴＡ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ）は、細
胞及び炎症性応答のメディエーターである可溶性生成物（好中球、好酸球、好塩
基球、キニン及び凝集系及び相補系）を干渉する。 【００９８】 典型的な炎症応答は、（ｉ）抗原（損傷）の場所の部位における白血球の凝集
；（ｉｉ）Ｂ及びＴリンパ球、マクロファージ及び別の相補経路により媒介され
る「外来」及び他の（壊死性／損傷組織）抗原の特異的及び非特異的認識；（ｉ
ｉｉ）相補成分、リンホカイン及びモノカイン、キニン、アラキドン酸代謝物及
び乳房細胞／好塩基球生成物による、特異的及び非特異的エフェクター細胞の補
充を伴う炎症性応答の増幅；及び（ｉｖ）ファゴサイトーシスによる抗原粒子（
損傷組織）の究極の除去を伴う抗原破壊へのマクロファージ、好中球及びリンパ
球関与により特徴付けされる。免疫系が「自己」と「非自己」（外来）抗原を識
別する能力は、よって、「非自己」抗原に対する特異的防御として免疫系を機能
させるのに極めて重大である。 【００９９】 「非自己」抗原は、対象に侵入する物質上の抗原、又は対象の上に存在するが
対象自身の構成物とは検出上異なるか又は外来性であり、一方「自己」抗原は健
康な対象においてそれ自身の構成物とは検出上異なるか又は外来性ではない抗原
である。しかしながら、特定の疾患状態を含む特定の条件下では、個々の免疫系
はそれ自身の構成物を「非自己」として同定し、そして「自己抗原」に対する免
疫応答を開始し、時々例えば侵入する微生物又は外来の物質からのような、より
多くのダメージ又は苦痛を引き起こし、そしてしばしば対象において重度の病気
を生じる。 【０１００】 別の重要な態様において、炎症は「自己抗原」に対する免疫応答により引き起
こされ、そして本発明による処置の必要な対象は自己免疫疾患を有する。本明細
書において使用される「自己免疫疾患」は、対象の免疫系がそれ自身の器官又は
組織を攻撃する場合の結果であり、その組織の破壊に関連した臨床上の症状を生
じ、疾患、例えば慢性関節リウマチ、ブドウ膜炎、インスリン依存性真性糖尿病
、溶血性貧血、リウマチ熱、クローン病、ギラン−バレー症候群、乾癬、甲状腺
炎、グレーブズ病、重症性筋無力症、糸球体腎炎、自己免疫性肝炎、多発性硬化
症、全身性エリテマトーデス等を含む。 【０１０１】 自己免疫疾患は、遺伝的疾病素因のみ、特定の外来性因子（例えば、ウイルス
、バクテリア、化学物質等）又は両方により引き起こされるかもしれない。いく
つかの形態の自己免疫性は、リンパ球には通常暴露されないエリア、例えば神経
組織又は目のレンズへの外傷の結果として生じる。これらのエリア能力は組織が
リンパ球に暴露された場合、それらの表面蛋白質は抗原として作用することがで
きず、そして抗体の生産及び細胞の免疫応答を誘発して、次にそれらの組織を破
壊し始める。他の自己免疫疾患は対象自身の組織に抗原上類似か又は交差反応性
の抗原の対象の暴露の後に発症する。リウマチ熱において、例えば、リウマチ熱
を引き起こすストレプトコッカスバクテリアの抗原一部が、ヒトの心臓の一部に
交差反応性である。抗体はバクテリア抗原と心筋抗原を識別できず、結果として
それらの抗原の何れかを有する細胞が破壊され得る。 【０１０２】 他の上記免疫疾患、例えばインスリン依存性糖尿病（ランゲルハンス島のベー
タ細胞を生成するインスリンの破壊を含む）、筋肉硬化症（神経系の伝導繊維の
破壊を含む）及び慢性関節リウマチが、ほとんどの細胞媒介性自己免疫応答の結
果として特徴決定されており、主にＴ細胞の作用によるらしい（Ｓｉｎｈａ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，２４８：１３８０を参照）。さらに別
の、例えばｍｙｅｓｔｈｅｎｉａ ｇｒａｖｉｓ及び全身性エリテマトーデスが
体液性の自己免疫応答の主な結果であるとして特徴付けされる。にもかかわらず
、本発明に従う前記症状の何れかに関与する炎症部位への免疫細胞の移動の阻害
は、炎症応答の拡大を阻害して上記特定の部位を「自己損傷」から防御するため
、対象にとって有益である。好ましい態様において、対象は慢性関節リウマチ、
多発性硬化症又はブドウ膜炎を有する。 【０１０３】 さらに重要な態様において、炎症は「非自己抗原」に対する免疫応答により引
き起こされ（壊死性自己物質の抗原を含む）、そして本発明による処置を必要と
する対象は移植のレシピエントであり、アテローム性動脈硬化症を有し、心筋梗
塞及び／又は貧血性脈拍を罹患しており、膿瘍を有し、及び／又は心筋炎を有す
る。これは、細胞（又は器官）移植後、あるいは心筋梗塞又は貧血性脈拍後に移
植された細胞（器官）からの特定の抗原、又は心臓又は脳からの壊死細胞が、免
疫性リンパ球及び／又は自己抗体の生産を刺激し、のちに炎症／拒絶に関与する
か（移植の場合）、又は炎症を起こして症状を悪化させる心臓又は脳の細胞を攻
撃する（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｍ．Ｎｕｃ．Ｍｅｄ．１９８９，
１９：２３８；Ｌｅｉｎｏｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｐａｔ
ｈ，１９９０，９：６７；Ｍｏｎｔａｌｂａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｏｋｅ，
１９９１，２２：７５０）。 【０１０４】 本発明のまた別の側面によれば、特定の部位を含む症状を有する対象において
免疫応答を増強する方法が提供される。該方法は、上記対象の特定の部位におい
て免疫細胞特異的駆逐性活性を阻害するのに有効な量の駆逐性作用因子をそのよ
うな処置を必要とする対象の特定部位に局所投与することを含む。いくつかの態
様において、上記特定部位は病原体感染の部位である。免疫細胞が感染を排除す
る助けとなる有効な補充は、よって、有益である。 【０１０５】 特定の態様において、上記特定部位は胚細胞を含む部位である。この場合、免
疫細胞のこれらの特定部位への補充は、望まれない胚細胞及び／又は移植された
胚及び移植されなかった胚を排除することを助ける。さらなる態様において、抗
駆逐性作用因子以外の避妊作用因子の同時投与も提供される。非抗駆逐性避妊作
用因子は当業界において知られている。 【０１０６】 さらなる態様において、上記特定部位は腫瘍のすぐ周囲のエリアである。ほと
んどの公知の腫瘍は免疫認識を逃れるから、免疫細胞の上記腫瘍部位への移動を
増強することは有益である。さらなる態様において、抗避妊作用因子以外の抗癌
作用因子の同時投与も提供される。非抗駆逐性抗癌作用因子は：アシビシン；ア
クラルビシン；アコダゾール塩酸；アクロナイン；アドゼレシン；アルデスロイ
キン；アルトレタミン；アンボマイシン；アメタントロン酢酸；アミノグルテチ
ミド；アムサクリン；アナストロゾル；アンスラマイシン；アスパラギナーゼ；
アスペルリン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタート；ベ
ンゾデパ；ビカルタミド；ビサントレン塩酸；ビスナフィドジメシレート；ビゼ
レシン；ブレオマイシン硫酸；ブレキナールナトリウム；オウロピリミン；ブス
ルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カラセミド；カルベチマー；カル
ボプラチン；カルムスチン；カルビシン塩酸；カルゼレシン；セデフィンゴール
；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリバイン；クリスナ
トールメシレート；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ダクチノ
マイシン；ダウノルビシン塩酸；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニ
ン；デザグアニンメシレート；ジアジクオン；ドセタクセル；ドクソルビシン；
ドクソルビシン塩酸；ドロロキシフェン、ドロロキシフェンクエン酸；ドロモス
タノローンプロピオン酸；デュアゾマイシン；エダトレキセート；エフロルニチ
ン塩酸；エラサミトルシン；エンロプラチン；エンプロメート、エピプロピジン
；エピルビシン塩酸；エルブロゾール；エソルビシン塩酸；エストラムスチン；
エストラムスチンリン酸ナトリウム；エタニダゾール；エトポシド；エトポシド
リン酸；エトプリン；ファドラゾール塩酸；ファザラビン；フェンレチニド；フ
ロキシウリジン；フルダラビンリン酸；フルロウラシル；フルロシタビン；フォ
スキドン；フォストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；ゲムシタビン塩酸；ヒ
ドキシウレア；イダルビシン塩酸；イフォスアミド；イルモフォシン；インター
フェロンアルファ−２ａ；インターフェロンアルファ−２ｂ；インターフェロン
アルファ−ｎ１；インターフェロンアルファ−ｎ３；インターフェロンベータ−
１ａ；インターフェロンガンマ１ｂ；イプロプラチン；イリノテカン塩酸；ラン
レオチド酢酸；レトロゾール；ロイプロリド酢酸；リアロゾール塩酸；ロメトレ
ゾールナトリウム；ロムスチン；ロソキサントロン塩酸；マソプロコル；マイタ
ンシン；メクロレタミン塩酸；メゲストロール酢酸；メレンゲステロール酢酸；
メルファラン；メノガリル；メルカプロプリン；メトトレキセート；マイトギリ
ン；マイトマルシン；マイトマイシン；マイトスペア；マイトタン；マイトキサ
ントロン塩酸；マイコフェノール酸；ノコダゾール；ノガルマイシン；オルマプ
ラチン；オキシスラン；パクリタクセル；パガスパルガーゼ；ペリオマイシン；
ペンタムスチン；ペプロマイシン硫酸；パーフォスアミド；ピポブロマン；ピポ
スルファン；ピロキサントロン塩酸；プリマイシン；プロメスタン；ポドフィロ
ックス、ポルフィマーナトリウム；プルフィロマイシンプレドニムスチン；プロ
カルバジン塩酸；プロマイシン；プロマイシン塩酸；ピラゾフリン；リボプリン
；ログレチミド；サフィンゴール塩酸；スムスチン；シムトラゼン；スパルフォ
セートナトリウム；スパルソマイシン；スピロゲルマニウム塩酸；スピロムスチ
ン；スピロプラチン；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；スルフォフェヌ
ール；タリソマイシン；トクソテレ；テコガランナトリウム；テガファー；テロ
キサントロン塩酸；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクト
ン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チアゾフリン；チラパザミン；ト
ポテカム塩酸；トレミフェンクエン酸；トレストロン酢酸；トリシリビンリン酸
；トリメトレキセート；トリメトレキセートグルクロネート；トリプトレリン；
ツブロゾール塩酸；ウラシルムスタード；ウレデパ；バプレオチド、ベルテポル
フィン；ビンブラスチン硫酸；ビンクリスチン硫酸；ビンデシン；ビンデシン硫
酸；ビネピジン硫酸；ビングリシネート硫酸；ビンリューロシン硫酸；ビノレル
ビン酒石酸；ビンロシジン硫酸；ビンゾリジン硫酸；ボロゾール；ゼニプラチン
；ジノスタチン；ゾルビシン塩酸を含む。 【０１０７】 本発明のさらなる側面において、対象の腫瘍細胞転移を阻害する方法が提供さ
れる。該方法は、対象の腫瘍部位からの腫瘍細胞の転移を阻害するのに有効な量
の抗駆逐性作用因子をそのような処置を必要とする対象の腫瘍部位に局所投与す
ることを含む。特定の態様において、上記駆逐性作用因子はサイトカイン結合作
用因子である。好ましい態様において、上記サイトカインはＳＤＦ−１αである
。さらなる態様において、抗駆逐性作用因子以外の抗癌作用因子の同時投与も提
供される。抗癌作用因子は上記のとおりである。 【０１０８】 本発明の別の側面によれば、対象の腫瘍部位への内皮細胞の移動を阻害する方
法が提供される。該方法は、対象における内皮細胞の腫瘍部位への移動を阻害す
るのに有効な量でそのような処置を必要とする対象の腫瘍部位の周囲のエリアに
局所投与することを含む。特定の態様において、腫瘍部位の周囲のエリアは腫瘍
のすぐそばではない。重要な駆逐性作用因子は上記のとおりである。 【０１０９】 本発明のさらなる側面において、対象の避妊方法が提供される。該方法は、対
象において胚細胞の移動を阻害するのに有効な量の抗駆逐性作用因子をそのよう
な処置を必要とする対象に投与することを含む。特定の態様において、上記抗駆
逐性作用因子はサイトカイン結合作用因子である。いくつかの態様において、上
記サイトカイン結合作用因子は抗サイトカイン抗体又はサイトカインアゴニスト
である。好ましい態様において、上記サイトカインはＳＤＦ−１αである。さら
なる態様において、上記投与は対象の胚細胞含有部位に限られる。 【０１１０】 本発明の別の側面によれば、不稔及び障害性妊娠を含む早産の分娩を治療する
方法が提供される。該方法は、対象において免疫細胞が胚細胞（卵、精子、受精
卵又は移植された胚を含む）に密接して転移することを阻害するのに有効な量の
駆逐性作用因子を、そのような処置を必要とする対象に投与することを含む。さ
らなる態様において、投与は対象の胚細胞含有部位に限定される。 【０１１１】 前記の治療方法は、本発明の駆逐性作用因子を用いて協同的、付加的、又は相
乗的に作用させることができる本発明の駆逐性作用因子と共に非駆逐性作用因子
を同時投与することにより、対象の炎症部位への免疫細胞の移動を阻害してよい
。いくつかの態様によれば、駆逐性作用因子は非駆逐性作用因子と実質上同時に
投与することにより、炎症部位への免疫細胞の移動を阻害する。「実質上同時」
は、駆逐性作用因子を、非駆逐性作用因子の投与のは時間的に十分接近して対し
て局所投与することを意味し、それにより非駆逐性作用因子が駆逐性作用因子の
移動阻害活性に有効な作用を及ぼしうる。即ち、実質上同時は、非駆逐性作用を
投与する前、同時、及び／又は後に投与することを意味する。駆逐性作用因子は
ポリペプチド及び／又は駆逐性作用因子を発現する核酸として投与することがで
きる。 【０１１２】 特定の態様において、非駆逐性作用因子は免疫抑圧作用因子である。そのよう
な免疫抑圧作用因子は：アザチオプリン；アザチオプリンナトリウム；シクロス
ポリン；ダルトロバン；グスペリマストリヒドロクロリド；シロリマス；タクロ
リマスを含む。 【０１１３】 他の態様において、非駆逐性作用因子は抗炎症作用因子である。そのような抗
炎症作用因子は：アルクロフェナック；アルクロメタゾンジプロピオネート；ア
ルゲストンアセトアニド；アルファアミラーゼ；アムシナファル；アムシナフィ
ド；アムフェナックナトリウム；アミプリローズ塩酸；アナキンラ；アニロラッ
ク；アニトラザフェン；アパゾン；バルサラジド二ナトリウム；ベンダザック；
ベノキサプロフェン；ベンジダミン塩酸；ブロメラニン；ブロペラモール；ブデ
ソニド；カルプロフェン；シクロプロフェン；シンタゾン；クリプロフェン；ク
ロベタゾルプロピオン酸；クロベタゾンブチル酸；クロピラック；クロチカゾン
プロピオン酸；コルメタゾン酢酸；コルトドキソン；デフラゾコルト；デソニド
；ドソキシメタゾン；デキサメタゾンジプロピオン酸；ジクロフェナックカリウ
ム；ジクロフェナックナトリウム；ジフロラゾン二酢酸；ジフルミドンナトリウ
ム；ジフルニサル；ジフルプレドネート；ジフタローン；ジメチルスルフォキシ
ド；ドロシノニド；エンドリソン；エンリモマブ；エノリカムナトリウム；エピ
リゾール；エトドラック；エトフェナメート：フェルビナック；フェナモール；
フェンブフェン；フェンクロフェナック；フェンクロラック；フェンドサル；フ
ェンピパロン；フェンチアザック；フラザロン；フラザコート；フルフェナミッ
ク酸；フルミゾール；フルニソリド酢酸；フルニキシン；フルニキシンメグルミ
ン；フルオコルチンブチル；フルロメトロン酢酸；フルクアゾン；フリブプロフ
ェン；フルレトフェン；フルチカゾンプロピオン酸；フラプロフェン；フロブフ
ェン；ハルシノニド；ハロベタゾールプロピオン酸；ハロプレドン酢酸；イブフ
ェナック；イブプロフェン；イブプロフェンアルミニウム；イブプロフェンピコ
ナール；イロニダップ；インドメタシン；インドメタシンナトリウム；インドプ
ロフェン；インドキソール；イントラゾール；イソフルプレドン酢酸；イソキセ
ペック；イソキシカム；ケトプロフェン；ロフェミゾール塩酸；ロルノキシカム
；ロテプレドノールエタボネート；メクロフェナメートナトリウム；メクロフェ
ナミック酸；メクロリゾン二ブチル酸；メファナミック酸；メサラミン；メセク
ラゾン；メチルプレドニソロンスレプタネート；モルニフルメート；ナブメトン
；ナプロキセン；ナプロキセンナトリウム；ナプロキソール；ニマゾン；オサラ
ジンナトリウム；オルゴテイン；オルパノキシン；オキサプロジン；オキシフェ
ンブタゾン；パラニリン塩酸；ペントサンポリスルフェートナトリウム；フェン
ブタゾンナトリウムグリセレート；ピルフェニドン；ピロキサカムシンナメート
；ピロキシカムアラミン；ピロプロフェン；プレドナゼート；プリフェロン；プ
ロドリック酸；プロウアゾン；プロキサゾル；プロキサゾルクエン酸；リメキソ
ロン；ロマザリート；サルコレックス；サルナセジン；サルサレート；サングイ
ナリウムクロリド；セクラゾン；セルメタシン；スドキシカム；スリンダック；
スプロフェン；タルメタシン；タルニフルメート；タロサレート；テブフェロン
；テニダップ；テニダップナトリウム；テノキシカム；テシカム；テシミド；テ
トラダミン；ティオピナック；チクソコルトルピバレート；トルメチン；トルメ
チンナトリウム；トリクロニド；トリフミデート；ジドメタシン；ゾメピラック
ナトリウムを含む。 【０１１４】 上記の組成物は有効量にて投与する。有効量は、投与の様式、処置される特定
の症状及び望まれる結果に依存することになる。上で論じられたとおり、症状の
段階、対象の年齢及び肉体の状態、同時の治療法の性質、もしあるならば、及び
医学経験者によく知られた類似の因子にも依存することになる。治療応用のため
には、それは医学上所望の結果を達成するのに十分な量である。いくつかの場合
、これは炎症の局所的（部位特異的）減少である。他の場合、それは腫瘍成長及
び／又は転移の阻害である。 【０１１５】 一般的に、本発明の活性化合物の用量は１日あたり０．０１ｍｇ／ｋｇから１
日あたり１０００ｍｇ／ｋｇである。５０−５００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量が適
切になることは予測される。様々な投与経路が利用可能である。本発明の方法は
、一般的には、医学上受容可能なあらゆる様式を用いて実施してよく、臨床上受
容されない副作用を引き起こすことなく上記活性化合物の有効なレベルを生じる
あらゆる様式を意味する。そのような投与の様式は、経口、直腸、鼻内、皮膚間
又は非経口経路を含む。用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内又は点滴を含
む。静脈内又は筋肉内経路は、長期間の治療及び予防のためには特に適切でない
。それらは、しかしながら、緊急の状況において好ましい。経口投与は患者に対
する利便性並びに用量スケジュールのために、予防処置に好適になる。ペプチド
を治療に使用する場合、特定の態様においては、所望の投与経路は肺エアロゾル
による。ペプチドを含むエアロゾル送達系を製造する技術は、当業者にはよく知
られている。一般的には、そのような系は抗体の生物学上の特性、例えばパラト
ープ結合能力を顕著に損なわない成分を利用するべきである（例えば、Ｓｃｉａ
ｒｒａ ａｎｄ Ｃｕｔｉｅ，”Ａｅｒｏｓｏｌ，”ｉｎ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ ｅｄｉｔ
ｉｏｎ，１９９０，ｐｐ１６９４−１７１２を参照；引用により編入される）。
当業者は、過度な実験に訴えることなしに抗体又はペプチドのエアロゾルを製造
する様々なパラメーター及び条件を容易に決定することができる。 【０１１６】 経口投与に適した組成物は別個のユニット、例えばカプセル、タブレット、ト
ローチ作用因子として存在させてよく、各々が活性な作用因子を予め決定された
量含む。他の組成物は、水性液体又は非水性液体、例えばシロップ、エリクシル
又はエマルジョン中の懸濁液を含む。 【０１１７】 非経口投与のための製造物は、滅菌の水性又は非水性溶液、懸濁液又はエマル
ジョンを含む。非水性溶作用因子の例は、プロピレングリコールポリエチレング
リコール、植物油例えばオリーブオイル、注射可能な有機エステル例えばオレイ
ン酸エチルである。水性担体は、水、アルコール／水性溶液、エマルジョン又は
懸濁液を含み、塩溶液及び緩衝媒体を含む。非経口媒体は、塩化ナトリウム溶液
、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸化リン
ゲル又は固定化オイルを含む。静脈内媒体は、流体及び栄養補給作用因子、電解
質補給作用因子（例えばリンゲルデキストロースに基づくもの）等を含む。保存
作用因子及び他の添加物も存在させてよく、例えば抗微生物作用因子、抗酸化作
用因子、キレート作用因子及び不活性ガス等を含む。低用量は他の形態の投与に
よりもたらされ、例えば静脈内投与である。対象の応答が初期用量適用時に不十
分な事象においては、高い用量（又は別のより局在化された送達経路による有効
な高い用量）を患者の寛容が許容する範囲で用いてよい。１日あたりの複数用量
は適切な全身の化合物レベルを達成するために意図される。 【０１１８】 駆逐性作用因子、駆逐性結合作用因子又はその断片は薬学上受容可能な担体と
、任意に化合してよい。本明細書にて使用される用語「薬学上受容可能な担体」
は、ヒトへの投与にて記した一つ又は複数の適合性固形又は液体の充填作用因子
、希釈作用因子又は封入物質を意味する。用語「担体」は有機又は無機の成分、
天然又は合成を意味し、上記活性成分は適用を促進するために組み合わされる。
薬学組成物の成分は本発明の分子と及び互いに混合させることができ、所望の薬
学上の効果を実質上損なうような相互作用がないような様式における。 【０１１９】 他の側面の本発明は、駆逐性及び抗駆逐性作用因子の薬学組成物を含む。 投与される場合、本発明の薬学組成物は薬学上受容可能な量にて、薬学上受容
可能な組成物にて適用される。そのような製造物は日常的には、塩、緩衝作用因
子、保存作用因子、適合性担体、及び任意の他の治療作用因子を含んでよい。医
薬において使用される場合、塩は薬学上受容可能な塩であるべきであるが、薬学
上受容不可能な塩は薬学上重要可能な塩を製造するために便利に使用してよく、
本発明の範囲から除外されない。そのような薬理学上及び薬学上受容可能な塩は
、限定されないが、以下の酸：塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、
マレイン酸、酢酸、サリチル酸、クエン酸、蟻酸、マロン酸、琥珀酸等から製造
された塩を含む。また、薬学上受容可能な塩はアルカリ金属又はアルカリ土類金
属、例えばナトリウム、カリウム又はカルシウム塩を含む。 【０１２０】 駆逐性分子（核酸又はポリペプチド）は組換えにより生産されるのが好ましい
が、そのような分子は生物学上の抽出物から単離してよい。組換え生産された駆
逐性作用因子、例えばＳＤＦ−１αポリペプチドは、ＳＤＦ−１αと別のポリペ
プチドとの融合物を含むキメラ蛋白質、例えば例えば−蛋白質結合、配列特異的
核酸結合（例えばＧＡＬ４）を提供及び増強するか、アッセイ条件下でＳＤＦ−
１αポリペプチドの安定性を増強するか、又は検出可能なモイエティ、例えば緑
色の蛍光蛋白質を提供することができるポリペプチドを含む。ＳＤＦ−１安定性
をポリペプチド又は断片に融合させたポリペプチドは、例えば免疫認識又は蛍光
標識により、上記融合蛋白質を容易に検出する手段を提供してもよい。 【０１２１】 様々な技術を本発明の核酸（ＳＤＦ−１αセンス及びアンチセンス、優性陰性
）を細胞に導入するために用いてよく、核酸が宿主にインビトロで導入されるか
インビボで導入されるかに依存する。そのような技術は、核酸ＣａＰＯ4沈殿物
のトランスフェクション、ＤＥＡＥに付随させた核酸のトランスフェクション、
興味のある核酸を含むレトロウイルスによるトランスフェクション、リポソーム
媒介トランスフェクション等を含む。特定の用途のためには、上記核酸は特定の
細胞を標的とすることが好ましい。そのような例においては、本発明の核酸を細
胞に送達するために使用される媒体（例えば、レトロウイルス、又は他のウイル
ス；リポソーム）は、それに連結させた標的化分子を有することができる。例え
ば、標的細胞上の表面膜蛋白質に関して特異的な抗体又は標的細胞上の受容体の
リガンド等の分子を核酸送達媒体に結合させるか又は取り込むことができる。例
えば、リポソームを用いて本発明の核酸を送達する場合、エンドサイトーシスに
関連する表面膜蛋白質に結合する蛋白質を標的化及び／又は取り込み促進のため
にリポソーム製作用因子に取り込んでよい。そのような蛋白質は、特定の細胞種
に指向性のキャプシッド蛋白質又はその断片、循環に際して中和を受ける蛋白質
の抗体、細胞内局在を標的化して細胞内半減期を増強する蛋白質等を含む。ポリ
マー送達系も核酸を細胞に送達するために成功して使用されており、当業者には
明らかである。そのような系は核酸の経口送達さえも可能にする。 【０１２２】 他の送達系は、時間放出、遅延放出又は持続性放出送達系を含むことができる
。そのような系は駆逐性作用因子の繰り返しの投与を回避し、対象及び医師の利
便性を増加させる。多くの種類の放出送達系が利用可能であり、当業者には知ら
れている。それらは、ポリマーベース系、例えばポリ（ラクチド−グリコリド）
、コポリオキサレート、ポリカプロラクトン、ポリエステルアミド、ポリオルト
エステル、ポリヒドロキシブチル酸、及びポリ無水物を含む。薬作用因子を含む
前記のポリマーのマイクロカプセルは、例えば、米国特許５，０７５，１０９に
記載される。送達系は非ポリマー系を含み、それは、脂質、例えばステロール、
例えばコレステロール、コレステロールエステル及び脂肪酸又は中性脂肪例えば
モノ−、ジー及びトリ−グリセリド；ヒドロゲル放出系；シラスティック（ｓｙ
ｌａｓｔｉｃ）系；ペプチドに基づく系；ワックスコーティング；慣用のバイン
ダーを使用して圧縮されたタブレット及び賦形作用因子；部分融合された移植物
等である。特定の例は、限定されないが、（ａ）抗炎症作用因子がマトリックス
内の形態にて含まれる侵食系であり、例えば米国特許４，４５２，７７５、４，
６６７，０１４、４，７４８，０３４及び５，２３９，６６０に記載されたもの
及び（ｂ）活性成分が制御された速度にてポリマーから浸透する拡散系であり、
例えば米国特許３，８３２，２５３及び３，８５４，４８０に記載されたもので
ある。 【０１２３】 本発明の好ましい送達系はコロイド分散系である。コロイド分散系は、脂質に
基づく系であり、オイルインウオーターエマルジョン、ミセル、混合されたミセ
ル、及びリポソームを含む。本発明の好ましいコロイド分散系はリポソームであ
る。リポソームはインビボ又はインビトロにおいて送達ベクターとして有用な人
工膜容器である。大きなユニラメラ容器（ＬＵＶ）であって０．２−４．０μｍ
のものが大きなマクロ分子を封入できることが示された。ＲＮＡ、ＤＮＡ及び完
全ビリオンは水性インテリア内に封入することができ、そして生物学上活性な形
態にて細胞に送達されると信じられる（Ｆｒａｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎ
ｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ（１９８１）６：７７）。リポソームが有効な遺
伝子輸送ベクターであるためには、一つ又は複数の以下の特徴を示すべきである
：（１）興味のある遺伝子の生物学上の活性を保持した高い効率の封入；（２）
非標的細胞に比しての標的細胞への選択的且つ実質的な結合；（３）小胞の水性
含有物の標的細胞のサイトプラズムへの高い効率の送達及び（４）遺伝情報の正
確且つ有効な発現。 【０１２４】 リポソームは、リポソームの特定のリポソーム、例えばモノクローナル抗体、
糖、糖脂質、又は蛋白質に対するカップリングにより特定の組織を標的化してよ
い。リポソームは、Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬから、例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商
標名）及びＬＩＰＯＦＥＣＴＡＣＥ（商標名）として市販されており、カチオン
性脂質、例えばＮ−［１−（２，３ジオレイルオキシル）−プロピル］−Ｎ，Ｎ
，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）及びジメチルジオクタデ
シルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）を形成する。リポソームを作成するため
の方法は当業界においてよく知られており、多くの刊行物において記載されてき
た。リポソームはＧｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，Ｇ．ｉｎ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，（１９８５）３：２３５−２４１において総説され
た。 【０１２５】 一つの重要な態様において、好ましい媒体は、生物適合性ミクロ粒子又は哺乳
類レシピエントへの移植にて記した移植物である。この方法により有用な例示の
生物侵食性移植物はＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ／０３３０７（公開番号Ｗ
Ｏ９５／２４９２９、題「Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ｇｅｎｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ
Ｓｙｓｔｅｍ」）に記載される。ＰＣＴ／ＵＳ／０３０７は、適切なプロモータ
ーの制御下で外来遺伝子を含むための、生物適合性、好ましくは生物分解性ポリ
マーマトリックスを記載する。上記ポリマーマトリックスは、患者内の外来性遺
伝子の持続された放出を達成するために使用される。本発明によれば、本明細書
に記載された駆逐性作用因子を、生物適合性、好ましくはＰＣＴ／ＵＳ／０３３
０７に開示された生物分解性ポリマーマトリックス内に封入するか又は分散させ
る。 【０１２６】 ポリマーマトリックスは、ミクロ粒子例えばミクロ球体（駆逐性作用因子は固
形ポリマーマトリックスを通して分散する）又はミクロカプセル（駆逐性作用因
子はポリマーの殻のコアに供給される）の形態が好ましい。駆逐性作用因子を含
む他の形態のポリマーマトリックスは、フィルム、コーティング、ゲル、移植物
、及びステントを含む。ポリマーマトリックス装置のサイズと組成は、マトリッ
クスが導入される組織中に好ましい放出動力学をもたらすように選択される。ポ
リマーマトリックスのサイズは、さらに、使用される送達方法に従い選択される
。好ましくは、塩エアロゾル経路を使用する場合に、ポリマーマトリックスと駆
逐性作用因子が表面媒体に包含される。ポリマーマトリックス組成物は両者の好
ましい分解速度を有し、そして生物接着性の材料により形成されるように選択さ
れ、さらに輸送の効率を増加させる。上記マトリックス組成物は、分解せず、し
かし延長された時間をかけて拡散により放出するように選択することもできる。 【０１２７】 別の重要な態様において、上記送達系は、局所性の部位当意的送達に適した生
物適合性ミクロ球体である。そのようなミクロ球体はＣｈｉｃｋｅｒｉｎｇ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇ．，（１９９６）５２：９
６−１０１及びＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，（１９９
７）３８６：４１０−４１４に開示されている。 【０１２８】 非生物分解性及び生物適合性ポリマーマトリックスの両者を使用することによ
り、本発明の駆逐性作用因子を患者に送達することができる。生物分解性マトリ
ックスが好ましい。そのようなポリマーは天然又は合成ポリマーであってよい。
合成ポリマーが好ましい。上記ポリマーは、放出が望まれる時間、一般的には数
時間から数年の長さのオーダーの時間に基づいて選択される。典型的には、数時
間から３から１２カ月の範囲の期間をかけた放出がもっとも望まれる。上記ポリ
マーは任意に水中のその重量の約９０％までを吸収することができるヒドロゲル
の形態であり、そしてさらには任意に多価イオン又は他のポリマーと架橋結合さ
れる。 【０１２９】 一般的に、駆逐性作用因子は、分散によりあるいはより好ましくはポリマーマ
トリックスの分解により生物侵食性移植物を使用して送達される。生物分解送達
系を形成するために使用できる合成ポリマーの例は、ポリアミド、ポリカーボネ
ート、ポリアルキレン、ポリアルキレングリコール、ポリアルキレンオキシド、
ポリアルキレンテレフタレート、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、
ポリビニルエステル、ポリビニルハライド、ポリビニルピロリドン、ポリグリコ
イド、ポリシロキサン、ポリウレタン及びそれらのコポリマー、アルキルセルロ
ース、ヒドロキシアルキルセルロース、セルロースエーテル、セルロースエステ
ル、ニトロセルロース、アクリルおよびメタクリルエステルのポリマー、メチル
セルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプ
ロピルメチルセルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロース、セルロースアセ
テート、セルロースプロピオネート、ルロースアセテートブチレート、セルロー
スアエートフタレート、カルボキシルエチルセルロース、セルローストリアセテ
ート、セルローススルフェートナトリウム塩、ポリ（メチルメタクリレート）、
ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブ
チルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメ
タクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレ
ート）、ポリメチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ
（イソブチルアクリレート）、ポリ（オクタデシルアクリレート）、ポエイエチ
レン、ポリプロピレン、ポリ（エチレングリコール）、ポリ（エチレンオキシド
）、ポリ（エチレンテレフタレート）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリビニル
アセテート、ポリビニルクロリド、ポリスチレン、ポリビニルピロリドン、及び
乳酸とグリコール酸のポリマー、ポリ無水物、ポリ（オルト）エステル、ポリ（
ブチク（ｂｕｔｉｃ）酸）、ポリ（バレリック酸）、及びポリ（ラクチド−コカ
プロラクトン）、及び天然ポリマー例えばアルギン酸塩及び他のポリサッカライ
ド、デキストラン及びセルロースを含む、コラーゲン、その化学誘導体（化学基
、例えばアルキル、アルキレン、ヒドロキシル化、酸化、及び当業者により日常
的に作成される他の修飾の置換、付加）、アルブミン及び他の親水性蛋白質、ゼ
イン及び他のプロラミン及び疎水性蛋白質、コポリマー及びそれらの混合物を含
む。一般的には、これらの物質は酵素加水分解によるか又はインビボの水への暴
露、表面によるか又は大量の侵食により分解する。 【０１３０】 非生物分解性ポリマーの例は、エチレンビニルアセテート、ポリ（メタ）アク
リル酸、ポリアミド、コポリマー及びそれらの混合物を含む。 特に興味のある生物接着性ポリマーは、Ｈ．Ｓ．Ｓｗｈｎｅｙ，Ｃ．Ｐ．Ｐａ
ｔｈｋ ａｎｄ Ｊ．Ａ．Ｈｕｂｅｌｌ ｉｎ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ
，（１９９３）２６：５８１−５８７に記載された生物侵食性ヒドロゲル、ポリ
ヒアルウロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリ無水物、ポリアクリル酸
、アルギン酸塩、キトサン、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタ
クリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレー
ト）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、
ポリ（カウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メ
チルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルア
クリレート）、及びポリ（オクタデシルアクリレート）であり、その教示は本明
細書に編入される、 さらに、本発明の重要な態様は、ポンプに基づくハードウエア送達系を含む、
そのいくつかは移植に適合される。そのような移植可能なポンプは制御された放
出マイクロチップを含む。好ましい制御放出マイクロチップはＳａｎｔｉｎｉ，
ＪＴ Ｊｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｕｒｅ，１９９９，３９７：３３５−３３８
に記載されており、その内容は引用により本明細書に編入される。 【０１３１】 長期間持続性放出移植物の使用は、慢性の症状の処置に特に適しているかもし
れない。長期間の放出は、本明細書で使用されるのは、移植物が構築されて配列
されることにより少なくとも３０日間、好ましくは６０日間活性成分を治療レベ
ルにて送達することを意味する。長期間の持続性放出移植物は当業者にはよく知
られており、上記放出系のいくつかを含む。 【０１３２】 特定の態様において、本発明の単離された駆逐性作用因子は、炎症のある部位
、例えば慢性関節リウマチの対象の場合関節、アテローム性動脈硬化の場合血管
等である。例えば、これは、単離された駆逐性分子（核酸又はポリペプチド）を
バルーンカテーテルの表面に付着させ；上記カテーテルをバルーン部分が炎症部
位、例えば閉鎖部位に着くまで対象に挿入し、そしてバルーンを膨らませてバル
ーン表面を閉鎖部位の血管壁に接触させることにより、達成することができる。
この様式において、上記組成物は特定の炎症部位に局所標的化させることにより
、免疫細胞のこれらの部位への移動を変調することができる。別の例において、
局所等よは、そのような処置を必要とする部位への移植可能なポンプを含む。好
ましいポンプは上記のとおりである。さらなる実施例において、膿瘍の処置を含
む場合、駆逐性作用因子は局所、例えば軟膏又は皮膚製作用因子中にて送達して
よい。任意には、本発明の駆逐性分子を非駆逐性分子（例えば、抗炎症作用因子
、炎症抑圧作用因子等）と組み合わせて送達する。 【０１３３】 本発明の好ましい態様において、本発明の単離された駆逐性作用因子はバルー
ン血管形成手法と組み合わせて対象に等よする。バルーン血管形成手法は、ガス
を抜かれたバルーンを有するカテーテルを動脈内に挿入することを含む。ガス抜
きされたバルーンはアテローム性動脈硬化プラーク及び炎症の部位の近位に配置
して、プラークが動脈壁に対して圧縮されるようにガスで膨らませる。結果とし
て、動脈の表面上の内皮細胞の層が破壊されて、それにより下層の血管平滑筋細
胞を露出させる。単離された駆逐性分子はアテローム性動脈硬化プラークの部位
及び炎症の部位における単離された駆逐性分子の放出を可能にする様式にて、バ
ルーン血管形成カテーテルに付着させる。単離された駆逐性分子は当業界公知の
標準手法によりバルーン血管形成カテーテルに付着させてよい。例えば、バルー
ンをガスで膨らませるまで局所環境に放出される点においてバルーン血管形成カ
テーテルの区画に、単離された駆逐性分子を用意する。あるいは、単離された駆
逐性分子をバルーン表面に含浸させ、バルーンがガスで膨れるにつれて動脈壁の
細胞にそれが接触するようにする。駆逐性分子はＦｌｕｇｅｌｍａｎ，ｅｔ ａ
ｌ．，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，ｖ．８５，ｐ．１１１０−１１１７（１９９２
）に開示されたような穿孔したバルーンカテーテルにおいて送達してもよい。例
えば、治療用蛋白質のバルーン血管形成カテーテルへの付着のための例示の手法
に関しては、公表されたＰＣＴ特許出願ＷＯ９５／２３１６１も参照されたい。
この手法は治療用核酸をバルーン血管形成カテーテルに付着させるための日常的
な実験以上のものを使用しないで修飾することができる。 【０１３４】 本発明は以下の実施例を参照してより完全に理解される。これらの実施例は、
しかしながら、本発明の態様を例示することを単に意図し、発明の範囲を限定す
ることを意図しない。 実施例 材料と方法 成人ヒト静脈血サンプリング及び末梢血Ｔ細胞の亜集団の分類 末梢血を１２人の健康なドナーから得た（２５−４０歳、平均年齢３１）。末
梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）を末梢血からＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅを使用
して得た。ＰＢＭＣを抗ＣＤ４（ＰＥ）、抗ＣＤ８（ＰＥ），抗ＣＤ４５ＲＡ（
ＦＩＴＣ）、抗ＣＤ４５ＲＯ（ＦＩＴＣ）（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ
，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）で染色した。末梢血細胞のＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+，
ＣＤ４+ＣＤ４５ＲＯ+及びＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+又はＣＤ８+ＣＤ４５ＲＯ+亜集
団をＦＡＣＳバンテージソーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ
Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して分類した。各Ｔ細胞亜集団の精製度は免疫表現型
決定により９９％より高いことが分かった。ケモカイン受容体に関する平均蛍光
強度を含むケモカイン受容体発現も測定し、そしてＳＤＦ−１αに関する細胞受
容体に対する抗ＣＸＣＲ４（ＰＥ）（Ｐｈａｒｍａｇｅｎ／Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉ
ｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて、
分類した細胞を染色することにより、各Ｔ細胞亜集団に関して比較した。分類さ
れた成人末梢血Ｔ細胞亜集団を一晩血清不含イスコベス修飾培地（ＧＩＢＣＯ
ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）中で、ケモタクシスアッセイにおけ
るそれらの使用の前に培養した。 ヒト胎児胸腺及び胎児血液の加工及びヒト胎児胸腺及び胎児血液Ｔ細胞の精製さ
れた亜集団の調製 ヒト胎児胸腺及び末梢血サンプルは、１６から２２週の流産児から、Ｉｎｓｔ
ｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄにより承認されたガイドライン
に従い得た。胸腺は物理的にバラバラにして単核細胞懸濁液を生成した。胸腺を
ＣＤ８（ＦＩＴＣ），ＣＤ３（ＰＥ）及びＣＤ４（ＡＰＣ）で染色し、そして三
重陰性未成熟胸腺（ＴＮ）（ＣＤ３-，ＣＤ４-，ＣＤ８-）及び成熟二重陽性（
ＤＰ）（ＣＤ４+，ＣＤ８+）及び単一陽性（ＳＰ）胸腺（ＣＤ３+ＣＤ４+又はＣ
Ｄ３+ＣＤ８+）の精製された亜集団に細胞ソーティングにより分類した。胎児血
液の単核細胞（ＦＢＭＣ）を胎児血液からＦｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅを使用
して上記のとおりに調製した。ＦＢＭＣはＣＤ８（ＦＩＴＣ），ＣＤ３（ＰＥ）
，ＣＤ４（ＡＰＣ）及び抗ＣＤ４５ＲＡ（ＦＩＴＣ）で標識した。ＣＤ４+ＣＤ
４５ＲＡ+及びＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+のＴ細胞の精製された亜集団を分類して、
ケモタクシスアッセイにおける使用の前に一晩イスコベス修飾培地中で培養した
。 トランス移動アッセイ：ＳＤＦ−１αの使用 ３つのケモタクシスアッセイをこの研究において使用した。第一に、定量性ケ
モタクシストランス移動アッセイをトランスウエル系（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ
．，ＮＹ）（６．５ｍｍ直径、５μｍ孔サイズ、ポリカーボネート膜）を使用し
て前記１３のとおりに実施した。精製されたＴ細胞及び胸腺亜集団（５ｘ１０4
細胞）を各ウエルの上部チェンバーに全容量１５０μｌのＩＭＤＭのみに加えた
。ＳＤＦ−１α（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ，ＮＪ）を１０
μｇ／ｍｌ，１μｇ／ｍｌ，１００ｎｇ／ｍｌ，１０ｎｇ／ｍｌ及び０ｎｇ／ｍ
ｌにてトランスウエルの底部、上部又は底部及び上部の両方のチェンバー内で使
用することにより、それぞれＳＤＦ−１αの陽性、陰性及び不在のグラジエント
のチェックボード分析マトリックスを生成した。細胞を百日咳毒素（ＰＴＸ）１
００ｎｇ／ｍｌで１時間、ゲニスタイン（１μｇ／ｍｌ２０分間）、ハービマイ
シン（１μＭ２０分間）またはウオルトマニン（１μＭ２０分間）（Ｓｉｇｍａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で、組織培養
インキュベーター中で３７℃及び５％ＣＯ2において、選択された実験において
トランスウエルの上部チェンバーへのそれらの添加前に、前処理した。 【０１３５】 この様式により調製したトランスウエルを３時間３７℃、５％ＣＯ２インキュ
ベーターにおいてインキュベートした。細胞を底部のチェンバーから３時間後に
回収して細胞を計数して、免疫表現型及びＣＸＣＲ−４ケモカイン受容体発現を
測定した。 【０１３６】 第２の半定量性トランス移動アッセイは組織培養挿入物（６．５ｍｍ直径、０
．４５μｍ孔サイズ、ポリカーボネート膜）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏ
ｒｄ ＭＡ）を含んだ。成人末梢血Ｔ細胞亜集団（１ｘ１０5細胞）を１２ウエ
ルの組織培養ディッシュ上の血清不含イスコベス培地中にプレートした。次に、
組織培養プレートを３７℃において１時間インキュベートすることにより、細胞
がウエルのベース上に平均して安定するのを可能にした。ＳＤＦ−１αを含む０
．１ｍｌのＩＭＤＭを最終濃度１０μｇ／ｍｌ，１μｇ／ｍｌ，１００ｎｇ／ｍ
ｌ，１０ｎｇ／ｍｌ又は０ｎｇ／ｍｌにて、次に組織培養挿入物中に分散させた
。組織培養挿入物を、挿入物の縁と組織培養プレートのウエルの縁との間のギャ
ップが０．３ｃｍになるように、１２ウエルの組織培養プレートのウエルの中心
に静かにおいた。トランスウエル挿入物を有するウエルを１８時間まで３７℃に
おいて顕微鏡の加熱したステージ上でインキュベートして、時間経過に従い１時
間あたり１２０フレームにてビデオ顕微鏡の読みにより、あるいはポラロイド（ 登録商標）スチル写真により観察した。グラジエントの保守は、メチレンブルー の挿入物への負荷およびインキュベート時間にわたり色の保存されたグラジエン トを観察することにより評価した。 【０１３７】 第３の半定量性移動アッセイにおいては、Ｔ細胞集団（１ｘ１０5細胞）を０
．５ｍｌの０．５％メチルセルロース（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ）と滅菌培地中で混合して、２４ウエルの
プレート中に入れた。５μｌのＰＢＳ又はＳＤＦ−１αを１０μｇ／ｍｌ又は１
００ｎｇ／ｍｌの濃度にて次にいずかにウエルの縁のセット位置において加熱し
た（３７℃）顕微鏡のステージ上で１８時間までのインキュベーション前に、メ
チルセルロースに分散させて、時間経過ビデオ顕微鏡により観察した。 トランス移動アッセイ：胸腺ストロマ細胞膜（ＴＳＣＭ）の使用 この研究にて使用されるケモタクシスアッセイは上記ＳＤＦ−１αに関してで
あった。定量性ケモタクシストランス移動アッセイをトランスウエル系も用いて
実施した。血清不含ヒト胎児胸腺ストロマ条件化培地をトランスウエルの上部、
底部又は上部と底部のチェンバーに加えることにより、条件化培地中のケモタク
シス活性を血清不含ＩＭＤＭ中で１：２、１：１０及び１：１５にて評価した。
熱不活性化ＴＳＣＭもケモタクシスアッセイにおいて使用した。 【０１３８】 細胞の移動が起こるのを可能にするため、インキュベーター中で（５％ＣＯ２
）３時間３７℃においた。細胞を底部チェンバーから３時間後に回収して、正確
に細胞を計数し、そして免疫表現型決定し、そしてケモカイン受容体発現を上部
チェンバーから底部チェンバーに移動した細胞に関して測定した。 トランス移動アッセイ：ＳＤＦ−１α、組換えＨＩＶIIIBｇｐ１２０及び阻害作
用因子の使用 ２つのケモタクシスアッセイをこの研究において使用した。最初に、定量性ケ
モタクシストランス移動アッセイを上記ＳＤＦ−１αに関して実施した（及びＫ
ｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１９９８，９１：４４３４）。精製されたＴ
細胞及び胸腺亜集団（５ｘ１０4細胞）を各ウエルの上部チェンバーに全容量１
５０μｌのＩＭＤＭのみにて加えた。ＳＤＦ−１α（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ，Ｒ
ｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ，ＮＪ）は１０μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ，１００ｎｇ／ｍ
ｌ，１０ｎｇ／ｍｌ及び０ｎｇ／ｍｌにてトランスウエルの底部、上部又は底部
と上部の両方のチェンバー使用して、それぞれＳＤＦ−１の陽性、陰性及び不在
のグラジエントのチェックボード分析マトリックスを生成した。組換えエンドト
キシン不含ＨＩＶIIIBｇｐ１２０も２ｎｇ／ｍｌ，２０ｎｇ／ｍｌ，２００ｎｇ
／ｍｌ及び２μｇ／ｍｌの濃度において末梢血Ｔ細胞に関するケモキネシス刺激
として利用した。 【０１３９】 細胞を百日咳毒素（ＰＴＸ）（１００ｎｇ／ｍｌで１時間３７℃）、ゲニスタ
イン（１μｇ／ｍｌ２０分間３７℃）、ハービマイシン（１μＭ２０分間３７℃
）、ウオルトマニン（１μＭ２０分間３７℃）、８−Ｂｒ−ｃＡＭＰ（１００μ
Ｍ１５分間室温）（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ Ｌ
ｏｕｉｓ，ＭＯ）で、組織培養インキュベーター中で３７℃及び５％ＣＯ2にお
いて、選択された実験においてトランスウエルの上部チェンバーへのそれらの添
加前に、前処理した。 【０１４０】 第２の半定量性トランス移動アッセイにおいては、Ｔ細胞亜集団（１ｘ１０5
細胞）を滅菌培地中の０．５％メチルセルロース０．５ｍｌと混合して、２４ウ
エルにプレートした。ＰＢＳ又はＳＤＦ−１α ５μｌを１０μｇ／ｍｌまたは
１００ｎｇ／ｍｌにて、次に０．５ｍｌのメチルセルロース中にてウエルの縁の
セット位置にて、加熱（３７℃）した顕微鏡のステージ上での１８時間までのイ
ンキュベート前に分散させ、そして時間経過ビデオ顕微鏡により細胞の移動を観
察した。 ＳＤＦ−１によるインビボの二次免疫応答の部位へのＴ細胞の浸潤の変調 Ｃ５７／Ｂ６マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＭＥ）を
得て、０．０１％未満のＬＰＳを含む１００μｇのチキンオバルブミン（Ｓｉｇ
ｍａ）でリミュラスアッセイにより皮下にプライムして、１００μｌの完全フロ
イントアジュバント（ＣＦＡ）（Ｓｉｇｍａ）に溶解した。３日間ｏｖａプライ
ムしたマウスを腹膜内注射により１００μｇ／ｍｌのオバルブミン（Ｏｖａ）を
２５０μｌのｄｄＨ２Ｏに溶解してチャレンジした。第２の２５０μｌのＩＰ注
射をこれらのマウスに与え、次の日からマウスＳＤＦ−１αを１００ｎｇ／ｍｌ
，１μｇ／ｍｌ又は５又はｇ／ｍｌ含んだ。これらのマウスを第２ＩＰの２４時
間後に安楽死させ、そして５ｍｌのＰＢＳの腹膜洗浄を腹膜嚢及びその含有物の
直接可視化により実施して、末梢血の汚染を回避した。この様式にて回収した腹
膜液細胞は＜０．１％赤血球細胞を含んだ。３群の対照マウスを使用した。最初
に、Ｃ５７／Ｂ６マウスをＯｖａプライム前に安楽死させ、そして腹膜洗浄を実
施した。第２群の対照マウスは、上記のとおりに皮下プライムしてＯｖａで腹膜
チャレンジして、次に２４時間後に安楽死させた。第３郡は上記のとおりにプラ
イムおよびＯｖａチャレンジして２４時間後に２５０μｌのｄｄＨ2Ｏを腹膜内
注射した。これらのマウスは安楽死させて、２４時間後に腹膜洗浄した。３つの
個別の実験を２匹から３匹のマウスを用いて各実験において実施した。 【０１４１】 腹膜液から回収した細胞を血球計数計を用いて計数して、生存性をトリパンブ
ルー排除により測定して、そして全生存有核細胞数を腹膜液ｍｌあたり測定した
。この様式により回収された腹膜液は＜０．１％赤血球細胞を含むことがわかっ
た。腹膜液の血液学上のスメアも用意され、そしてギムザ染色した。ＦａｃｓＣ
ａｌｉｂｕｒフローサイトメトリー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使
用したフローサイトメトリーを次に腹膜液細胞に対して抗マウスＴ細胞単球抗体
（抗ＣＤ３−ＰＥ，抗ＣＤ８−ＰＥＲＣＰ，抗ＣＤ４−ＡＰＣ及び抗ＴＣＲγδ
、抗ＣＤ１１ｂ、抗ＴＣＲαβ）（Ｃａｌｔａｇ）及びアイソタイプ対照の２つ
のパネルを使用して実施した。核亜集団（ＣＤ３+，ＣＤ３+ＣＤ４+，ＣＤ３+Ｃ
Ｄ８+）のＴ細胞に対する比率を全有核細胞画分の腹膜液内のパーセンテージと
して測定した。 結果 ＳＤＦ−１αは我々がヒトＴ細胞の亜集団に対してのケモキネシス効果を評価
した胸腺及び骨髄ストロマ１２−１５により生産されたケモカインであり、最初
に成人Ｔ細胞を循環させ、そして胎児胸腺を循環させ、そして同じ胎児からのＴ
細胞を循環させた。成人末梢血Ｔ細胞を精製度≧９９％にてフローサイトメトリ
ーによりＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+及びＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+（ナイーブ細胞を表す
）及びＣＤ４+ＣＤ４５ＲＯ+及びＣＤ８+ＣＤ４５ＲＯ+（メモリー細胞を表す）
の亜集団に単離した。全ての集団は表され（全リンパ球細胞の１５−３１％）、
そしてＳＤＦ−１α受容体ＣＸＣＲ−４に関して高いパーセンテージの細胞陽性
を示した。 【０１４２】 標準トランスウエルトランス移動アッセイにおいて、ＳＤＦ−１αは、ＣＤ８ + ＣＤ４５ＲＡ+＞ＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+＞ＣＤ４+ＣＤ４５ＲＯ+＞ＣＤ８+ＣＤ
４５ＲＯ+の相対的な順で各亜集団に関してケモキネシス及び化学誘因活性を証
明した。ピークの化学誘因活性は１００ｎｇ／ｍｌの濃度にて９７％のＣＤ８+
ＣＤ４５ＲＡ+，８５％のＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+、７９％のＣＤ４+ＣＤ４５ＲＯ + 、そして５１％のＣＤ８+ＣＤ４５ＲＯ+のＳＤＦ−１αの陽性グラジエントに
対してＴ細胞トランス移動で観察された。 【０１４３】 ＳＤＦ−１α濃度を１μｇ／ｍｌ及び１０μｇ／ｍｌに上げて、濃度勾配に対
する細胞応答の比率を下げ、そしてＳＤＦ−１αから離れるＴＡ細胞の移動を開
始し、我々はフジェタクシスと読んだ。最大のフジェタクシスは１μｇ／ｍｌの
ＣＤ８+ＣＤ４５ＲＯ+，ＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+及びＣＤ４+ＣＤ４５ＲＯ+及び１
０μｇ／ｍｌのＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+細胞に関して記された。１０μｇ／ｍｌに
おいてＳＤＦ−１αから離れるＴ細胞の比率は、相対順序でＣＤ８+ＣＤ４５Ｒ
Ｏ+〜ＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+＞ＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+＞ＣＤ４+ＣＤ４５ＲＯ+で
あって、そして各細胞のサブセットに関してのケモキネシスより顕著に大きかっ
た（ｐ＜０．０１；Ｓｔｕｄｅｎｔ ｔ Ｔｅｓｔ）（図１Ａ）。１０μｇ／ｍ
ｌのＳＤＦ−１αから離れる移動は、ケモキネシスより一貫して２倍から１倍高
く、そしてＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+及びＣＤ８+ＣＤ４５ＲＯ+細胞に関してはケモ
タクシスよりも高かった。ＳＤＦ−１αの濃度を１００ｎｇｍｌから１０μｇ／
ｍｌに上げるにつれて、ＳＤＦ−１αから離れる移動はＣＤ４+ＣＤ４５ＲＯ+以
外の全ての細胞に関して増加したが、ＳＤＦ−１αに対してのケモタクシスは全
ての細胞に関して２７倍の因子まで低下した（図１Ｂ）。 【０１４４】 フジェタクシスをさらに探求するため、組織培養物がＳＤＦ−１αのリザーバ
ーとして機能して、血清不含培地中に分散した細胞を含む培養ウエルの中心にお
いた、第２の細胞転移アッセイを開始した。挿入物が１０μｇ／ｍｌのＳＤＦ−
１αを含んだ場合、組織培養ウエル中の成人末梢血Ｔ細胞亜集団はＳＤＦ−１α
の源に対して移動すること、及び第２の集団は離れて移動することが観察された
。挿入物が１００ｎｇ／ｍｌのＳＤＦ−１αを含んだ場合に挿入物に対する移動
のみが観察された。ＳＤＦ−１αに向かうＴ細胞亜集団及び離れるＴ細胞亜集団
両者の分極化は、血清を含まない培地を挿入物に適用するか、又は高い濃度のＳ
ＤＦ−１αが挿入物及び組織培養ウエル中の周囲培地の両方に存在した場合にも
観察されなかった。 【０１４５】 濃度依存性方向性移動のプロセスをさらに評価するために、第３のトランス移
動アッセイを使用した。Ｔ細胞亜集団（１ｘ１０5細胞）を半固形メチルセルロ
ースマトリックス中に入れ、ＳＤＦ−１αを固定した位置に負荷し、そして細胞
移動を時間経過ビデオ顕微鏡により記録した。メチルセルロースを横切っての勾
配の移動は、培養物を通して染料の先を監視することにより個別の実験において
証明した；プロセスは我々のインキュベーションの間は平衡を達成しなかった。
末梢Ｔ細胞亜集団の一貫した移動は、高い濃度のＳＤＦ−１αから離れ、そして
低い濃度のＳＤＦ−１αに向かうように観察された。 【０１４６】 高い濃度から離れる移動が分化の部位からの成熟細胞の出現に関して相対的で
あるかもしれないのか否かを調査するため、我々は、個々の流産児からの胸腺及
び末梢血からのＴ細胞発生のステージを表す細胞を試験した。胎児の血液のＣＤ
４+ＣＤ４５ＲＡ+及びＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+Ｔ細胞亜集団は成人末梢血中と同じ
免疫表現型集団に匹敵するＣＸＣＲ−４発現のレベルを示した。三重陰性（ＴＮ
）、二重陽性（ＤＰ）及び単一陽性（ＳＰ）胎児胸腺は、胎児又は成人の末梢血
ｔ細胞の何れかよりもしばしば低いＣＸＣＲ−４陽性であった（ｐ＜０．０５，
Ｐａｉｒｅｄ ｔ Ｔｅｓｔ）。発現する胸腺を上のＣＸＣＲ−４の平均蛍光強
度も血液Ｔ細胞より低かった（ｐ＜０．０１，Ｐａｉｒｅｄ ｔ Ｔｅｓｔ）。
胎児胸腺のＴＮ，ＤＰ及びＳＰ亜集団及びＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+及びＣＤ８+Ｃ
Ｄ４５ＲＡ+の胎児血液Ｔ細胞のトランス移動分析は、ほとんどの未成熟ＴＮサ
ブセットを除いて、ＳＤＦ−１αに応答して最小の細胞移動を証明した。胸腺亜
集団においてはフジェタクシスを示さず、上記のとおり，１μｇ／ｍｌ及び１０
μｇ／ｍｌにおいてさえ、ＳＤＦ−１αに応答してバックグラウンドケモキネシ
スレベルであった。 【０１４７】 ＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+及びＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+胎児血液Ｔ細胞は、同じ胎児
由来のＤＰ及びＳＰ胸腺に比べて、ＳＤＦ−１αからの顕著に高いレベルのケモ
タクシス及びフジェタクシスを示した（ｐ＜０．０５；Ｐａｉｒｅｄ ｔ Ｔｅ
ｓｔ）。成人末梢血Ｔ細胞を用いた場合のように、胎児血液Ｔ細胞は、１００ｎ
ｇ／ｍｌもＳＤＦ−１αの濃度において最大のケモタクシス応答を示し、一方、
フジェタクシスは１μｇから１０μｇ／ｍｌの間の濃度において観察された。即
ち、同じ個体からの胎児のサンプルは、Ｔ細胞が胸腺を循環に出させる（ｅｘｉ
ｔ）場合にのみ、駆逐性能力の獲得を証明した。フジェタクシスを経験する能力
は、細胞が完全に分化した場合に組織培養ウエルの端に移動したインビトロＴ細
胞分化系を観察したときと一致する分化ステージ特異性を表した。 【０１４８】 我々は、次に、ケモカインのシグナルに向かうか又は離れる細胞の移動のプロ
セスが同様に媒介されるのか否かを評価した。百日咳毒素（ＰＴＸ）は、Ｇαｉ
カップリングされたシグナリングを阻害するが、１０ｎｇ／ｍｌから１０μｇ／
ｍｌの間の濃度においてＳＤＦ−１αに対する全ての細胞移動応答を阻害した（
図２）。しかしながら、キナーゼ阻害作用因子のプレインキュベーションは、ケ
モタクシスに比べてフジェタクシスに関して異なる阻害プロフィールを生じた。
これは、ピークケモタクシス（１００ｎｇ／ｍｌ）又はピークフジェタクシス（
１０μｇ／ｍｌ）を誘導したＳＤＦ−１α濃度においてもっとも容易に観察され
た。チロシンキナーゼ阻害作用因子、ゲニステイン及びハービマイシンは、ケモ
タクシスを阻害したが、フジェタクシスに対しては最小の効果しか有さなかった
。ＰＩ−３キナーゼ阻害作用因子、ウオルトマニンは比較的フジェタクシス、ケ
モタクシス及びケモキネシスを阻害した。キナーゼ阻害作用因子に対するこの違
う感受性は、同じリガンドに対するケモキネシスに比しての夕いつのシグナリン
グ経路の媒介するフジェタクシスを示した。 Ｔ細胞トランス移動に対するＴＳＣＭ（胸腺ストロマ条件化培地）の効果 ＴＳＣＭも各４つのＴ細胞亜集団の各々に関して明確なケモキネシス及び化学
誘因性活性を示した（図３を参照）。化学誘因性活性の順序は、ＣＤ８＋ＣＤ４
５ＲＯ＋＞ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋＞ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋＞ＣＤ８＋ＣＤ４
５ＲＡ＋であった。ＴＳＣＭの化学誘因性効果は希釈により弱められ（ｄｉｌｕ
ｔｅｄ ｏｕｔ）、そしてＰＴＸにより阻害された。ＴＳＣＭは全ての研究され
たＴ細胞亜集団に対して最小のケモキネシス活性しか有さなかった。ＴＳＣＭか
ら離れる細胞の移動も、研究された全てのＴ細胞亜集団において証明された。Ｃ
Ｄ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋及びＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＯ＋細胞集団においては、ＴＳＣ
Ｍから離れるこの細胞移動がＴＳＣＭ用量の希釈により低下した。しかしながら
、ＴＳＣＭはＣＤ８＋ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞集団中の希釈により増強された。Ｓ
ＤＦ−１α及びＳＤＦ−１βはＴＳＣＭ中の１０ｎｇ／ｍｌより上の濃度におけ
る免疫アッセイにより検出できなかった。さらに、分画した場合に、異なる画分
のＴＳＣＭはＣＤ４+ＲＯ+Ｔ細胞のトランス移動に対して異なる効果を有した。
化学誘因性活性は溶出物の画分４（ｐＨ５．２，０．２５Ｍ ＮａＣｌ）に存在
し、そして駆逐性活性は溶出物の画分１０（ｐＨ６．３，０．５Ｍ ＮａＣｌ）
に付随した。 【０１４９】 前記のデータは、ヒトＴ細胞の亜集団が高い濃度のＳＤＦ−１α及びＴＳＣＭ
から離れる意とされた移動を経ることを証明する。組織中のケモカインの局所濃
度は、プロテオグリカン結合に関する与えられた高い親和性を評価するのが難し
いかもしれないが、マイクロモル範囲において仮定され16、そして生物学上の流
体中のいくつかのケモカイン濃度は＞１μｇ／ｍｌと計算された。我々のデータ
は、ＳＤＦ−１α及びＴＳＣＭが胸腺唐の成熟細胞の移住のプロセスに関与し、
そしてｌａｃプロモーターにより駆動される百日咳毒素を発現するトランスジェ
ニックマウスが正常な完全に分化したＴ細胞を形成できるが、これらの細胞は胸
腺からのそれらの出口を作り損ねるという、８年前の観察の一つの説明を提供す
ることを示す。 フジェタクシスはＣＸＣＲ−４媒介性である 我々は、次に、ケモカインシグナルへ向かうか又は離れる細胞移動のプロセス
が類似のトランスダクション経路により媒介されたか否かを評価した。ＳＤＦ−
１シグナリングを阻害する抗ＣＸＣＲ−４特異的モノクローナル抗体による細胞
のプレインキュベーションは、ＳＤＦ−１α濃度に応答したＴ細胞亜集団のケモ
キネシス及びフジェタクシスの両方の阻害をもたらした。さらに、ＰＴＸは、Ｇ
αｉシグナリングを阻害するが、１０ｎｇ／ｍｌから１０μｇ／ｍｌの間の濃度
においてＳＤＦ−１αに向かうＴ細胞移動及びＳＤＦ−１αから離れるＴ細胞移
動を阻害した。キナーゼ阻害財を用いた細胞のプレインキュベーションは、しか
しながら、ケモタクシスに比して、フジェタクシスに関して異なる阻害プロフィ
ールをもたらした。これは、ピークケモタクシス（１００ｎｇ／ｍｌ）又はピー
クフジェタクシス（１μｇ／ｍｌ又は１０μｇ／ｍｌ）を誘発するＳＤＦ−１α
濃度を用いてもっとも容易らしかった。 【０１５０】 ＳＤＦ−１を含むケモカインは、ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（
ＰＩ−３）及びチロシンキナーゼを含む複数シグナルトランスダクション経路を
活性化することが示された（Ｇａｎｊｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅ
ｍ．，１９９８，３６，２３１６９；Ｔｕｒｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．，１９９５，５：２４３７；Ｔｕｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９７７，２：２１６Ｓ）。我々は、フジ
ェタクシス又はケモタクシスのシグナルがＰＩ−３及びチロシンキナーゼ阻害作
用因子に対して異なる感受性を有するかもしれないと仮定した。ＰＩ−３キナー
ゼ阻害作用因子、ウオルトマニンは、比較的、ＳＤＦ−１により誘発されたフジ
ェタクシス、ケモタクシス及びケモキネシスを阻害した。顕著な対照として、チ
ロシンキナーゼ阻害作用因子ゲニスタイン及びハービマイシンはケモタクシスを
阻害したが、フジェタクシスに対しては最小の効果しか示さなかった。循環ヌク
レオチドは複数のＧ蛋白質カップリングされた受容体に関してシグナリング媒介
物として機能し（Ｄａａｋａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，６６５
５，ｐ８８；Ｓｅｌｂｉｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ
Ｓｃｉ，１９９８，３：８７−９３）、そしてネトリン（ｎｅｔｒｉｎ）−１
の神経成長のコーン（ｃｏｎｅ）の応答の拒絶（ｒｅｐｕｌｓｉｏｎ）から誘因
（ａｔｔｒａｃｔ）への変換を示した（Ｓｏｎｇ Ｈ−Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ，１９９８，２８１：１５１５）。我々は、膜透過性ｃＡＭＰアゴニ
スト８−Ｂｒ−ｃＡＭＰがフジェタクシスを阻害したがケモタクシスを阻害しな
かったこと、及び阻害が濃度依存性であったことに注目した。一緒にすると、こ
れらのデータは、フジェタクシス及びケモタクシスが同じリガンドの異なる濃度
に応答してシグナルトランスダクション経路の異なる活性化によりもたらされる
ことを示唆する。 ＨＩＶ−１IIIBｇｐ１２０はインビトロＴ細胞移動の二方向性合図（ｃｕｅ）で
ある 駆逐性シグナルを媒介することにおけるＣＸＣＲ−４の役割をさらに確認する
ため、我々は、ＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+Ｔ細胞に対して精製されたエンドトキシン
不含ＨＩＶIIIBｇｐ１２０（Ｘ４−ＨＩＶ−１ ｇｐ１２０としても知られる）
を使用した。ＳＤＦ−１非依存性及びＣＤ４依存性のケモタクシス及びフジェタ
クシスが濃度依存性様式にて観察されたが（図４）、しかしながら、ケモタクシ
スを経た細胞の比率はＳＤＦ−１を用いて観察されたよりも顕著に低かった。高
い濃度のＨＩＶIIIBｇｐ１２０（２μｇ／ｍｌ）はＨＩＶ蛋白質から離れるＴ細
胞の最大の移動を引き起こした。対照的に、約２００ｎｇ／ｍｌのＨＩＶ−１
ｇｐ１２０のピーク濃度は、Ｔ細胞が組換えレトロウイルス蛋白質への移動を誘
導した。ＳＤＦ−１と同様に、ＨＩＶIIIBｇｐ１２０により誘発されたＴ細胞の
二方向性移動は百日咳毒素及びＰＩ−３キナーゼ阻害作用因子ウオルトマニンに
より阻害された。さらに、ＨＩＶIIIBｇｐ１２０から離れる移動はｃＡＭＰアゴ
ニストである８−Ｂｒ−ｃＡＭＰによる阻害に対して別の感受性であった。さら
に、ＨＩＶ感染患者由来のＨＩＶ−１特異的ＣＴＬクローンはＸ４−ＨＩＶ−１
ｇｐ１２０に対する二方向性応答を呈することが示された。 【０１５１】 我々は、従って、限定ではないが、ＳＤＦ−１α及びβ、ｍｅｔ−ＳＤＦ−１
β、ＨＩＶIIIBｇｐ１２０、小分子Ｔ１３４及びＭＤ３１００，Ｔ２２［Ｔｙｒ
５，１２，Ｌｙｓ７］−ポリフェムシンＩＩ、各分子のアゴニスト等を含むＣＸ
ＣＲ−４リガンドがヒトＴ細胞の亜集団の移動に対して濃度依存性の二方向性効
果を有すると結論する。 ＳＤＦ−１濃度はインビボにおいて炎症性浸潤物を変える 高い濃度のＳＤＦ−１から離れるＴ細胞の移動の現象がインビボの免疫生理に
関連するか否かを評価するため、我々はＣ５７ＢＬ／６マウスをオバルブミンで
免疫して次にチャレンジした。我々は、フローサイトメトリー分析に十分な量に
て有効に細胞を回収する我々の能力のために、腹膜内チャレンジを選択した。チ
ャレンジ用量のＯｖａの２４時間後、我々は、マウスに等量のＰＢＳ、又は低濃
度又は高濃度のＳＤＦ−１を注射した。さらに２４時間後、ＰＢＳ又はＳＤＦ−
１を注射されなかったか又は注射されたＯｖａチャレンジ動物を犠牲にして、チ
ャレンジ部位の細胞を定量して免疫表現型を決定した。シャム注射されたか、Ｐ
ＢＳ注射されたか、又は低用量（１００ｎｇ／ｍｌ）のＳＤＦ−１を注射された
動物の間でＴ細胞の蓄積に関して顕著な差異は観察されず、そしてベースライン
のＴ細胞浸潤を越える顕著な浸潤又は２４時間後の抗原性チャレンジを全てが証
明した。顕著な対照として、高い用量（５μｇ／ｍｌ）のＳＤＦ−１によるＴ細
胞浸潤は対照の浸潤よりも顕著に低く鈍く（ｐ＝０．０２）、高い濃度のケモカ
インが、移動しておそらくは炎症部位においてＴ細胞の蓄積の潜在性を逆転させ
る能力を証明する。注目するのは、使用さえたＳＤＦ−１濃度が、インビトロ分
析に使用された４つのサブセットのＴ細胞に対して証明可能な毒性を有さなく、
そしてマウスＰＢＭＣ又はＣＤ３+細胞のアポトーシスの証拠がないことである
（図５参照）。 癌細胞系由来の仮想フジェタクシンの精製 ＨｅｐＧ２条件化された培地（ＨｅｐＧ２ＣＭ）の調製 ＨｅｐＧ２細胞系（ヒトヘパトカルシノーマ由来−ＡＴＣＣ番号：ＨＢ８０６
５，ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）をＭＥＭ＋１０％熱失活胎児ウシ血清
＋ペニシリン／ストレプトマイシン＋Ｌ−グルタミン中で芝生状になるまで生育
させた。芝生状ＨｅｐＧ２細胞は次に血清不含培地に４８時間移し、そして血清
不含条件化培地（ＨｅｐＧ２ＣＭ〜をこれらの培養物から回収した。以下に詳細
なトランス移動アッセイ又はフジェタクシン分離系における使用の前に、Ｈｅｐ
Ｇ２ＣＭを０．４μｍのフィルターで濾過した。 仮想フジェタクシンを含むＨｅｐＧ２ ＣＭの画分の調製 １．ヘパリンは、ほとんどのグルイコシル化された分泌蛋白質を特異的に結合す
る能力を有する高度に硫酸化されたグリコサミノグリカンでである。２００ｍｌ
のＨｅｐＧ２ＣＭを、１０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７で平衡化された、５ｍｌ
のＨｉＴｒａｐヘパリンカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）に負荷した。該カラムを
ＮａＣｌの段階的濃度増加により溶出した。主要な駆逐性活性は０．３Ｍ Ｎａ
Ｃｌ溶出画分に検出された（活性画分）。 ２．カチオン交換カラムＨｉＴｒａｐ Ｓｐ セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ）を第２精製工程として使用した。ヘパリンカラムからの活性画分を５０ｍＭ
ＭＥＳ，ｐＨ６．４に対して透析し、そして５０ｍＭ ＭＥＳ，ｐＨ６．４で
平衡化した、１ｍｌのＨｉＴｒａｐ Ｓｐカラムに負荷した。次に、該カラムを
直線勾配のＮａＣｌ濃度で溶出した。 ３．ＭｏｎｏＱは、蛋白質の迅速且つ高い解析の分離のための設計された唯一の
ポリマー粒子を有するアニオン交換体である。前の工程においてＨｉＴｒａｐ
Ｓｐカラムから溶出された活性画分を次に２０ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ８．０で透
析し、そして、ＭｏｎｏＱ ＨＲ５／５カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて
さらに分画した。次に、該カラムをＮａＣｌ直線勾配濃度を用いて溶出した。駆
逐性活性プロフィール（標準トランス移動アッセイを使用して）と銀染色ＳＤＳ
−ＰＡＧＥゲルを比較することにより、画分＃１８の約１１０ｋＤａ（ｐ１１０
）の特定のバンドがいつもそのような駆逐性活性に相関することを見いだした。
４．ｐ１１０のマイクロ配列決定：ｐ１１０候補を同定するため、トリプシン消
化生成物のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ（マトリックス補助されたレーザー脱着／
イオン化およびタムオブフライト質量分光分析）を実施した。その結果のペプチ
ドの質量を用いて増強バージョンのＦＲＡＧＦＩＴプログラム（Ｈｅｎｚｅｌ
ＷＪ，１９９３，ｐｎａｓ ９０，５１１１及びＡｒｎｏｔｔ Ｄ，１９９８，
Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １９，９６８）を用いて、蛋白質及びＤＮＡ
配列の探索を行った。質量分光分析の結果は、ｐ１１０が内部−α−トリプシン
阻害作用因子重鎖ＩＩ前駆体（ＩＴＩ Ｈ２）として以前に同定された蛋白質で
あることを示した。ＩＴＩ Ｈ２は内部−α−トリプシン阻害作用因子（ＩＹＩ
）ファミリーのメンバーであり、肝臓で合成される血漿蛋白質のグループからな
る。ヒトＩＴＩ Ｈ２は９４６アミノ酸（１８ａａのシグナルペプチドを含む）
からなる糖蛋白質である（配列番号１）。それは、血漿への分泌後にＮ末端及び
Ｃ末端の分割工程を経て、結局６４８ａａの成熟蛋白質になる。ＩＴＩ蛋白質は
、重鎖（Ｈ１，Ｈ２，Ｈ３，Ｈ４）及び軽鎖（ビクニン）からなり、そしてクニ
ッツタイプのプロテアーゼ阻害作用因子のスーパーファミリーに属する。２つの
ヘッドのクニッツタイプのプロテアーゼ阻害作用因子配列を有するビクニンは、
セリンプロテアーゼ阻害作用因子の活性の理由である。しかしながら、インビト
ロにてＩＴＩファミリーメンバーにより阻害されるプロテアーゼのアレイは、血
漿において他のプロテアーゼ阻害作用因子により、より効果的に阻害される。よ
って、ＩＴＩファミリーメンバーの生物学上のプロテアーゼ阻害作用因子として
の重要性は未知である（Ｓａｌｉｅｒ ＪＰ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ，
Ｓｃｉ．，１９９０，１５：４３５）。ＩＴＩファミリーメンバーは、細胞外マ
トリックス安定化（Ｃｈｅｎ Ｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，
１９９４，２６９：２８２８２）、腫瘍の侵入（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｈ．ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９５，２７０：８３６１）、転移（
Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ Ｃａｎｃｅｒ，１９９５，６
３：４５５）及び関節炎（Ｈｕｔａｄｉｌｏｋ Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒ
ｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．，１９８８，４７：３７７）に関与することが示唆されてき
た。 インビトロ及びインビボのＨｅｐＧ２ＣＭの画分１８の生物学上の活性 血清不含培地中での１：１０希釈の画分１８（元の画分容積１００−２００μ
ｌ）は一貫して上記Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞に関して最大の駆逐性活性を含むこと
が示された。我々は、インビトロ及びインビボトランス移動アッセイにおいて画
分１８の駆逐性活性のバイオロジーを試験した。 画分１８のインビトロの阻害作用因子感受性 Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞を、抗ＣｘＣＲ−４（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）（２０μ
ｇ／ｍｌにて室温で３０分間）、百日咳毒素（ＰＴＸ）（１００ｎｇ／ｍｌにて
３７℃で３０分間）、ゲニステイン（１μｇ／ｍｌにて３７℃において２０分間
）、ハービマイシン（１μＭにて３７℃において２０分間）、ウオルトマイシン
（１μＭにて３７℃において２０分間）、８−Ｂｒ−ｃＡＭＰ（１００μＭＬＳ
Ｃにて室温で１５分間）又は８−Ｂｒ−ｃＧＭＰ（１００又はＭにて室温におい
て１５分間）（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ Ｌｏｕ
ｉｓ，ＭＯ）で、選択された実験のトランスウエルの上部チェンバーへのそれら
の添加前に、前処理した。この様式において調製されたトランスウエルを３時間
３７℃／５％ＣＯ2発酵器にてインキュベートした。細胞を底部チェンバーから
３時間後に回収して、細胞計数を実施した。Ｊｕｒｋａｔ細胞の移動のトランス
移動に対する阻害作用因子の効果を試験した。ＣＸＣＲ−４、ゲニスタイン及び
ハービマイシンは画分１８により誘発されたフジェタクシスを対照レベルの４０
−６０％阻害した。ＰＴＸは画分１８に応答性のフジェタクシスを対照レベルの
３０％阻害した。ｃＡＭＰアゴニスト８−Ｂｒ−ｃＡＭＰはフジェタクシスの９
５％阻害をもたらしたが、一方８−Ｂｒ−ｃＡＭＰは顕著にフジェタクシスを阻
害しなかった。 画分１８のインビボの活性 Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂａ
ｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）を、皮下への、０．０１％未満のＬＰＳを含む、１０
０μｇのチキンォバルブミン（Ｏｖａ）（Ｓｉｇｍａ）でリムルスアッセイによ
りプライムし、そして１００μｌの完全フロイトアジュバント（ＣＦＡ）（Ｓｉ
ｇｍａ）に溶解した。３日後、Ｏｖａプライムしたマウスに、２５０マウスをｌ
ｄｄＨ2Ｏ中に溶解した１００μｇのＯｖａを腹膜内（ＩＰ）注射によりチャレ
ンジした。２回目の２５０μｌのＩＰ注射をこれらのマウスに次の日に与えたが
、ＨｅｐＧ２ＣＭ画分１８、画分２２（インビトロの顕著な駆逐性活性なし）又
はカラム通過（ＰＴ）の１：１０希釈を含んだ。これらのマウスを２回目のＩＰ
注射の３及び２４時間後に安楽死させて、５ｍｌのＰＢＳによる腹膜内洗浄を腹
膜嚢及びその含有物の直接可視化により実施して、末梢血汚染を回避した。この
様式において回収された末梢血細胞は＜０．１％の赤血球細胞を含んだ。 【０１５２】 対照マウスは３グループ使用した。最初に、Ｃ５７ ＢＬ／６Ｊを、Ｏｖａプ
ライミング及び腹膜内洗浄を実施する前に、安楽死させた。対照マウスの第２の
グループは、上記のとおりに皮下プライムしてＯｖａ腹膜内チャレンジし、そし
て次に３及び２４時間後に安楽死させた。第３のグループは上記のとおりにプラ
イムおよびＯｖａでチャレンジして、２４時間後に２５０μｌのｄｄＨ2Ｏのみ
を腹膜内注謝した。これらのマウスを安楽死させ、そして腹膜内洗浄をさらに３
及び２４案後に実施した。３つの独立した実験を２又は３匹のマウスを用いて各
グループ各実験において実施した。 【０１５３】 腹膜内流体から回収された細胞を血球計数計により計数して、それらの生存性
をトリパンブルー排除により測定し、そして腹膜内流体ｍｌあたりの全部の有核
生存細胞のカウントを測定した。この様式において回収された腹膜内流体は＜０
．１％の赤血球細胞を含むことがわかった。腹膜内流体の血液学上のスメアも用
意して、ギムザ染色した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ フローサイトメトリー（Ｂ
ｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用したフローサイトメトリーを次に２つ
のパネルの抗マウスＴ細胞及び単球抗体（抗ＣＤ３−ＰＥ，抗ＣＤ８−ビオチン
、抗ＣＤ４−ＡＰＣ及び抗ＴＣＲγδ、抗ＣＤ１１ｂ、抗ＴＣＲαβ−ＦＩＴＣ
）（Ｃａｌｔａｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｓｉｓｃｏ，
ＣＡ）及びアイソトープ対照（Ｃａｌｔａｇ）を用いて腹膜内流体細胞上で実施
した。ビオチン配合抗体を用いた第２工程の染色は、ストレプトアビジン−ＰＥ
ＲＣＰ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて実施した。各細胞亜集団
のＴ細胞（ＣＤ３+，ＣＤ３+ＣＤ４+，ＣＤ３+ＣＤ８+）の比率は腹膜内流体内
の全有核細胞画分のパーセンテージとして測定した。 【０１５４】 画分１８はＯｖａのＩＰチャレンジにより誘発されたＴ細胞浸潤物を排除する
ことが示された。画分２２またはパススルーは抗原チャレンジ部位からのＴ細胞
の移動を顕著に作用させなかった（図６）。 【０１５５】 本発明のこの側面によれば、内部−α−トリプシン阻害作用因子重鎖ＩＩ前駆
体（ＩＴＩ Ｈ２）ファミリーのポリペプチドの他のメンバーは同様な駆逐性活
性を有し、よって、本発明に有用であると信じられる。そのようなメンバーは、
ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃ．Ｎｏｓ．：ＩＹＨＵ２，ＮＰ ０３４７１２，ＮＰ
００２２０７，Ｑ６１７０３，Ｐ９７２７９，Ｏ０２６６８，ＣＡＡ７２３０８
（Ｙ１１５４５），ＢＡＡ１３９３９（Ｄ８９２８６），Ｓ５４３５４，ＣＡＡ
４９８４２（Ｘ７０３９２），ＡＡＡ６０５５８（Ｍ１８１９３），ＣＡＡ３０
１６０（Ｘ０７１７３），１４０９２１９Ａ，又はＡＡＡ５９１９５（Ｍ３３０
３３）による配列を有するポリペプチドを含む。 カポジサルコーマヘルペスウイルス及びフジェタクシス ヒトカポジサルコーマヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）はカポジサルコーマを含
む免疫妥協性（ｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｒｏｍｉｓｅｄ）宿主において多くの異な
る新生物疾患を引き起こす。ＫＳＨＶは多数のヒトケモカイン相同物をコードす
ることが示され、ヒトケモカインＭＩＰ−１α及びＭＩＰ−１βに相同なｖＭＩ
ＰＩ及びｖＭＩＰ−ＩＩを含む。我々は、ウイルスのケモカインがヒトＴ細胞上
に駆逐性応答を及ぼし、それにより腫瘍が免疫制御に侵入することを可能にする
と仮定する。 【０１５６】 我々は、ヒトＴ細胞亜集団及びＫＳＨＶ特異的ＣＴＬクローンの、ＫＳＨＶ蛋
白質ｖＭＩＰ−Ｉ及びｖＭＩＰ−ＩＩ及びＫＳＨＶにより慢性的に感染していて
且つヒト腫瘍系列ＢＣＢＬ−１及びＶＧ−１に由来する当業界公知の２つの細胞
系からの血清不含上清に対するケモタクシス性応答及び駆逐性応答を試験した。
ＢＣＢＬ−１はＨＨＶ−８／ＫＳＨＶに潜在的に感染した体腔に基づくＢリンパ
球腫瘍に由来するＢ細胞系であり；ＥＢＶのＤＮＡはこの系列中に存在しない（
Ｒｅｎｎｅ，Ｒ．，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１９９６，２：３４
２−３４６）。 結果 顕著な駆逐性応答はＣＤ４ＲＡおよびＣＤ４ＲＯ細胞に関してＶＧ−１上清に
対して１：２希釈にて血清不含培地中に、及びＣＤ４ＲＯ及びＣＤ８ＲＯ Ｔ細
胞に関してＢＣＢＬ−上清に対して１：２希釈において発見された。 【０１５７】 Ｔ細胞サブセットも、１０ｎｇ／ｍｌの濃度においてＭＩＰ−１αに対する明
確なケモタクシス応答を示した。注目すべきは、Ｔ細胞が１００ｎｇ／ｍｌの濃
度においては、ｖＭＩＰ−Ｉに対する明確な駆逐性応答を示したが、ｖＭＩＰ−
ＩＩには示さなかった。 引用文献 【０１５８】 【表１】 【０１５９】 図面の詳細な説明 図１。ＳＤＦ−１αはフジェタクシス、ケモタクシス及びケモキネシスを誘発し
、入れたケモカイン濃度により変わる。（Ａ）駆逐性（無地の棒）、ケモタクシ
ス（ストライプの棒）及びケモキネシス（点描の棒）のトランス移動応答を１０
μｇ／ｍｌのＳＤＦ−１αに対する応答について、４つの成人末梢血Ｔ細胞亜集
団（ＣＤ８+ＣＤ４５ＲＯ+，ＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+，ＣＤ８+ＣＤ４５ＲＯ+及び
ＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+）の各々に関して示す。各データ点は、３つの個別の実験
の平均とＳ．Ｅ．Ｍ．を表す。（Ｂ）１００ｎｇ／ｍｌから１０μｇ／ｍｌの間
のＳＤＦ−１αの濃度に応答して４つの成人末梢血亜集団に関して観察されたフ
ジェタクシス及びケモタクシスにおけるパーセントとの変化を描写する。 図２。フジェタクシスとケモタクシスの両者は百日咳毒素により阻害可能である
。ＳＤＦ−１αに対する用量応答曲線をフジェタクシス及びケモタクシス及びＰ
ＴＸによる処理なし（――ｘ――）及び処理あり（- - ｘ - -）の２つの成人末
梢血Ｔ細胞亜集団（ＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+及びＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+）各々につ
いての個々に関して示す。各データ点は、３つの個別の実験の平均とＳ．Ｅ．Ｍ
．を表す。 図３。共選ストロマ細胞培地（ＴＳＣＭ）に対しての末梢血Ｔ細胞亜集団のケモ
タクシス性応答。生成されたＴＡ細胞亜集団のケモタクシスを上記のトランス移
動系において試験した。ＴＳＣＭに対する陽性ケモタクシス又は化学誘因性を試
験するため、ＴＳＣＭを濃度を変えながらＩＭＤＭ中で底部チェンバーにのみお
いた。フジェタクシスを試験するため、ＴＳＣＭを上部チェンバーにおき、そし
てケモキネシスを試験するために、ＴＳＣＭを上部及び底部チェンバーにおいた
。ケモキネシスを、非希釈ＴＳＣＭ，１：１０に希釈したＴＳＣＭ及び熱失活さ
せたＴＳＣＭ（６５℃において６０分間）及びＰＴＸで前処理した細胞のコンテ
クスト中のＴＳＣＭで処理した細胞に関して試験した。ケモタクシス応答は細胞
移動の３つの種類の各々に関して、及び４つのＴ細胞亜集団（ＣＤ８+ＣＤ４５
ＲＯ+，ＣＤ４+ＣＤ４５ＲＡ+，ＣＤ８+ＣＤ４５ＲＯ+及びＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ + ）の各々に関して個別に示す。 図４。組換えＨＩＶIIIBｇｐ１２０に応答したＣＤ４非依存性、ＣＸＣＲ−４依
存性、濃度依存性様式におけるＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+Ｔ細胞の駆逐性。ＨＩＶII IB ｇｐ１２０に対するＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+Ｔ細胞のケモタクシス（△）、フジ
ェタクシス（ｘ）及びケモキネシス（□）応答を示す（図４Ａ）。ＨＩＶIIIBｇ
ｐ１２０に対するＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+Ｔ細胞の転移性応答は、組換えＨＩＶ−
１糖蛋白質２０ｎｇ／ｍｌ及び２００ｎｇ／ｍｌの濃度に応答しての、抗ＣＸＣ
Ｒ−４（斑点の棒）、ＰＴＸ（ストライプの棒）及び培地のみのインキュベーシ
ョン（無地の棒）の前処理後を示す（図４）。注目すべきは、ＣＤ８+ＣＤ４５
ＲＡ+Ｔ末梢血Ｔ細胞のフジェタクシスが、ＨＩＶ−１ｃｍ２３５由来のＣＣＲ
−５特異性ｇｐ１２０に応答して観察されなかった（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓ
ｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ＡＩＤＳ Ｒｅａｇｅｎｔ ａｎｄ Ｒ
ｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｐｒｏｇｒａｍ）。ＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+末梢血Ｔ細胞を巻
く透過性循環ヌクレオチド阻害作用因子８−Ｂｒ−ｃＡＭＰ（△），８−Ｂｒ−
ｃＧＭＰ（□）又は培地のみ（ｘ）と共に、濃度を変えたＨＩＶ−１ｇｐ１２０
とのトランス移動アッセイにおけるそれらの使用の前に、インキュベートした。
Ｔ細胞の濃度依存性ケモタクシス及びフジェタクシス応答を示す（図４Ｃ）。各
データ点は、３つの個別の実験の平均とＳ．Ｅ．Ｍ．を表す。 図７。ＫＳＨＶに慢性的に感染された細胞系由来の上清へのヒトＴ細胞のトラン
ス移動（図７Ａ；ＢＣＢＬ−１及図７Ｂ：ＶＧ−１）。フジェタクシス（黒の棒
）及ケモタクシス（ストライプの棒）の転移性応答を示す。顕著な駆逐性応答を
ＣＤ４ＲＡ及ＣＤ４ＲＯのＶＧ−１上清１：２希釈の血清不備含培地中について
、及びＣＤ４ＲＯ及ＣＤ８ＲＯ Ｔ細胞のＢＣＢＬ−１上清１：２希釈に関して
示す。 【配列表】 【図面の簡単な説明】 【図１】 図１（Ａ）は、様々なＴ細胞サブセットにおいて、ＳＤＦ−１αがフジェタク
シス、ケモタクシス及びケモキネシスを誘導することを示す棒グラフである。図
１（Ｂ）は、Ｔ細胞表面サブセットに対する様々なＳＤＦ−１αの効果を示すグ
ラフである。 【図２】 図２は、フジェタクシスとケモタクシスの両方が百日咳毒素により阻害可能で
あることを示す、ＳＤＦ−１αに対する用量応答曲線である。 【図３】 図３は、末梢血Ｔ細胞集団に対するヒト胸腺ストロマ細胞単離物（ＴＳＣＭ）
の効果を示す棒グラフである。 【図４】 図４は、ＣＤ８+ＣＤ４５ＲＡ+Ｔ細胞が、組換えＨＩＶ−１IIIBｇｐ１２０に
対する応答において、ＣＤ４非依存性、ＣＸＣＲ−４依存性（図１２Ｂ）、濃度
依存性様式（図１２Ａ及び１２Ｃ）にて駆逐することを示すグラフである。 【図５】 図５は、高い濃度（５μｇ／ｍｌ）のＳＤＦ−１αがインビボにおいて二次免
疫応答の部位から遠く離れてＴ細胞転移を引き起こすことを示すグラフである。 【図６】 図６は、ＨｅｐＧ２ＣＭ画分１８がインビボにて抗原性チャレンジの部位にＴ
細胞浸潤物を捨てることを示すグラフである。 【図７】 図７は、Ｔ細胞サブセットがＫＳＨＶ感染細胞単離物（上清）に対する応答に
おいて駆逐することを示すグラフである；（Ａ）ＢＣＢＬ−１細胞；（Ｂ）ＶＧ
―１細胞。
【手続補正書】 【提出日】平成１３年１０月１０日（２００１．１０．１０） 【手続補正１】 【補正対象書類名】図面 【補正対象項目名】全図 【補正方法】変更 【補正の内容】 【図１】 【図２】 【図３】 【図４】 【図５】 【図６】 【図７】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 7/06 7/06 9/00 9/00 9/10 １０１ 9/10 １０１ 13/12 13/12 17/06 17/06 19/02 19/02 21/04 21/04 25/00 25/00 29/00 29/00 １０１ １０１ 35/04 35/04 37/02 37/02 43/00 １０５ 43/00 １０５ Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ， ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，Ｋ Ｐ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ， ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，Ｓ Ｇ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ポズナンスキー，マーク・シー アメリカ合衆国マサチューセッツ州02129 −2000，チャールズタウン，サーティーン ス・ストリート，ビルディング 149，マ サチューセッツ・ゼネラル・ホスピタル・ イースト，スイート 5219 (72)発明者 ラスター，アンドリュー・ディー アメリカ合衆国マサチューセッツ州02129 −2000，チャールズタウン，サーティーン ス・ストリート，ビルディング 149，マ サチューセッツ・ゼネラル・ホスピタル・ イースト，スイート 5219 (72)発明者 スキャッデン，デービッド・ティー アメリカ合衆国マサチューセッツ州02129 −2000，チャールズタウン，サーティーン ス・ストリート，ビルディング 149，マ サチューセッツ・ゼネラル・ホスピタル・ イースト，スイート 6403 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA07 BA44 CA18 DC50 NA14 ZA012 ZA362 ZA662 ZA752 ZA812 ZA892 ZA962 ZB072 ZB112 ZB152 ZB212 ZC352 4C087 AA01 BB42 NA14 ZA01 ZA45 ZA55 ZA66 ZA75 ZA81 ZA89 ZA96 ZB07 ZB08 ZB15 ZC35 4H045 AA10 CA40 DA01 EA20

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 【請求項１】 免疫細胞に接触させたときに免疫細胞を忌避する胸腺ストロマ
    細胞単離物であって、但しＳＤＦ−１αの免疫細胞忌避濃度を含まない前記単離
    物。
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