JP2019534249A - 癌の治療のための抗化学忌避剤とのhsp融合タンパク質 - Google Patents
癌の治療のための抗化学忌避剤とのhsp融合タンパク質 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2019534249A JP2019534249A JP2019513309A JP2019513309A JP2019534249A JP 2019534249 A JP2019534249 A JP 2019534249A JP 2019513309 A JP2019513309 A JP 2019513309A JP 2019513309 A JP2019513309 A JP 2019513309A JP 2019534249 A JP2019534249 A JP 2019534249A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cancer
- fusion protein
- composition
- chemical repellent
- kit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/02—Inorganic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/35—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70517—CD8
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
Abstract
Description
本出願は、2016年9月9日に出願された米国仮出願番号62/385,877の利益を主張し、その内容全体は本明細書中に参照により援用される。
本発明は、政府支援によってなされた。米国政府は、本発明における特定の権限を有する。
本開示は、抗化学忌避剤と組み合わせて融合タンパク質を用いた、疾患(例えば、癌)の免疫治療に関する。特に、融合タンパク質は、抗原結合ドメイン(例えば、抗体または抗体フラグメント)およびストレスタンパク質ドメインを含む。
別段の定義がされない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、本発明が属する当業者の1人によって一般に理解されるのと同一の意味を有する。
多くの腫瘍は、腫瘍細胞によって分泌されるケモカインに起因して、例えば、免疫細胞に対して化学忌避効果を有する。腫瘍細胞によって分泌される高濃度のケモカインは、細胞に対して化学忌避効果を有し得るが、一方で、より低い濃度は、そのような効果を有さず、または化学誘引さえもたらす。例えば、T細胞は、濃度依存性およびCXCR4受容体が介在するメカニズムによって、CXCL12(SDF−1)によってはね返される。
本開示は、ストレスタンパク質構成要素および癌細胞結合構成要素を含む融合タンパク質、および、それを用いる方法に関する。特に、本開示は、本明細書に記載の融合タンパク質によって認識され得る、癌細胞または腫瘍のような疾患を有する患者の治療に関する。好ましくは、疾患は、免疫細胞が癌細胞の付近で阻害されるように化学忌避活性を発現する。
ストレスタンパク質構成要素(ストレスタンパク質ドメインとも呼ばれる)は、APCを活性化する任意のポリペプチド配列を含んでよい。一部の実施態様では、ポリペプチド配列は、ストレスタンパク質に由来する。しかしながら、任意のAPC活性化ポリペプチドが検討される。
融合タンパク質の標的結合構成要素は、治療される疾患と関連する抗原に特異的に結合する任意の分子であってよい。特定の実施態様では、標的結合構成要素は、抗体またはそのフラグメントである。用語「抗原結合」、「標的結合」および「腫瘍結合」は、本明細書において相互交換可能に用いられる。
一実施態様では、標的結合構成要素は、メソテリンに特異的である。MSLNは、上皮悪性中皮腫および卵巣癌を含む一般的な上皮癌の表面上に非常に過剰発現されるが、健康な個体内の胸膜、心膜、および腹膜に並んでいる中皮細胞では相対的に低いレベルでのみ発現される。
本明細書に記載の融合タンパク質を抗化学忌避剤と組み合わせて用いて、化学忌避効果と関連する癌細胞または腫瘍を治療することができる。
本明細書に記載の組成物は、有効量で投与される。有効量は、投与モード、治療される特定の状態および所望の成果に依存する。それはまた、上記に述べられるように、状態のステージ、対象の年齢および健康状態、もしあるならば同時的な治療の性質、および、医師によく知られた同様の因子にも依存する。治療的適用については、医学的に望ましい結果を達成するのに十分な量である。
一態様では、本発明は、抗化学忌避剤および本明細書に記載の融合タンパク質を含む医薬組成物に関する。一実施態様では、組成物は、抗原提示細胞をさらに含む。一実施態様では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。一実施態様では、抗原提示細胞は、治療される患者から得られる。一実施態様では、抗原提示細胞は、細胞表面上にCXCR4および/またはCXCR7を発現する。
一態様では、本発明は、疾患の治療のためのパーツのキットに関し、キットは、融合タンパク質および抗化学忌避剤を含む。
融合タンパク質scFv−MtbHsp70は、我々の以前の研究(Yuan J,et al.A novel mycobacterial Hsp70−containing fusion protein targeting mesothelin augments antitumor immunity and prolongs survival in murine models of ovarian cancer and mesothelioma.Journal of Hematology&Oncology.2014;7:15)に示されている、(G4S)3リンカーを間に有する全長MtbHsp70に融合された、抗−MSLN p4 scFv(Bergan L,et al.Development and in vitro validation of anti−mesothelin biobodies that prevent CA125/Mesothelin−dependent cell attachment.Cancer Letters.2007;255(2):263−74)由来のVHおよびVLによって構築された。VIC−008が基づく、オリジナルの融合タンパク質VIC−007は、腫瘍保有マウスの生存の延長および腫瘍増殖の有意な制御を達成したが、処置レジメンの抗腫瘍性の有効性は最適でなかった。抗原性ペプチドは、非共有の相互作用を通してMtbHsp70に結合して、MHCクラスI制限CD8+およびMHCクラスII制限CD4+T細胞応答の両方を誘発することができる。scFv−MtbHsp70融合タンパク質の新バージョン、VIC−008が開発されて、それは、余剰アミノ酸の除去、および、単一アミノ酸突然変異の導入、MtbHsp70の381位における、バリン(V)の代わりにフェニルアラニン(F)によって、オリジナルのVIC−007から改変された(図1)。この変更は、MtbHsp70が偶発的に結合してオフターゲット効果または寛容または自己免疫の誘導をもたらし得る他の抗原を送達する可能性を減少させるために、タンパク質の免疫刺激能を維持しながらペプチド結合を防ぐように設計される。
卵巣癌を、6週齢雌C57BL/6マウスへの、同系癌細胞、Luc−ID8(5×106細胞/マウス)の腹腔内(i.p.)注入によって確立した。全てのマウスは、Jackson laboratoriesから購入した。マウスを、腫瘍細胞の接種後1週間、毎日観察した。腫瘍の発生は、一貫して、悪性腹水に次ぐ腹部の膨満を介して初めに明らかとなり、腫瘍保有マウスは、毛の逆立ち、速い呼吸速度、猫背の姿勢、活性の減少、および、進行性の腹水形成を含む、苦痛の兆候が存在するエンドポイントにおいて安楽死させた。
腫瘍保有マウスにおいて生存を延長するVIC−007およびVIC−008の有効性を、実施例2に記載のように処置したマウスにおいて評価した。
中皮腫腫瘍を、C57BL/6マウスへの、癌細胞、Luc−40LまたはLuc−AE17のi.p.注入によって確立した。1週間後、図4に示されるように、生理食塩水、VIC−008(20μg)、および/またはAMD3100(1μg/g体重)を1週間に1回、4週間投与した。
材料および方法
試薬
融合タンパク質を上述のように構築して、CHO細胞においてWuXi Biologics(Shanghai,China)によって発現して、HPLCによって95%よりも上の純度および1.0EU/mg未満のエンドトキシンレベルで提供した。AMD3100は、Abcam(#ab120718)から購入した。
40LおよびAE17マウス中皮腫細胞株は、ブラウン大学のDepartment of Pathology and Laboratory MedicineのAgnes Kane博士から寄贈された。細胞を、1%L−グルタミン、1%ペニシリン−ストレプトマイシン、および10%ウシ胎児血清で補充されたDMEM中で37℃にて培養した。
5週齢雌C57BL/6マウスを、Jackson Laboratoryから取得して、施設のガイドラインおよびポリシーに従ってMassachusetts General Hospital(MGH)のノトバイオート動物施設内に維持した。1週の順化後、腫瘍を、腹腔内(i.p.)投与されたマウスあたり、4×106 40L細胞または2×106 AE17細胞で開始した。それぞれの群由来のマウスのサブセットは、最後の処置の7日後にケタミン(生理食塩水中9mg/ml)およびキシラジン(生理食塩水中0.9mg/ml)のi.p.投与によって安楽死されて、腫瘍、リンパ節および脾臓の免疫プロファイリングのためにサンプル採取された。それぞれの群内の残りの動物を、生存に関してモニターした。生存試験のために、マウスは、腫瘍細胞の接種後毎日観察された。腫瘍の発生は、一貫して、悪性腹水に次ぐ腹部の膨満の出現を介して初めに明らかとなり、腫瘍保有マウスは、毛の逆立ち、速い呼吸速度、猫背の姿勢、活性の減少、および、進行性の腹水形成を含む、苦痛の兆候が存在するエンドポイントにおいて安楽死させた。
腫瘍接種の7日後に開始して、処置は、1週間に1回、連続する4週間、i.p.注入によって投与された。VIC−008は、1週間に1回、マウスあたり、100μlの生理食塩水中20μgで、i.p.投与されて、AMD3100は、100μlの生理食塩水中1mg/kg体重で、i.p.注入によって1週間に1回与えられた。
腫瘍は、滅菌レーザー刃を用いて機械的に分解されて、40L腫瘍についてコラゲナーゼタイプIVまたはAE17腫瘍についてタイプI(2mg/ml,Sigma)、DNase(0.1mg/ml,Sigma)、ヒアルロニダーゼ(0.1mg/ml,Sigma)、およびBSA(2mg/ml,Sigma)を用いて、RPMI 1640中で、37℃で2時間消化された。細胞懸濁液を100μmフィルターに通して、凝集体を除去した。リンパ節および脾臓をすり潰して、40μmストレーナーを通して濾過した。染色バッファー(#420201,Biolegend)を用いて細胞を洗浄して、表面マーカーに関してコンジュゲート抗体を用いて染色した。合計の生存細胞を、LIVE/DEAD(登録商標)染色(ThermoFisher,#L23105)によって決定した。
脾細胞を、すり潰された脾臓から採取して、40μm細胞ストレーナーを通して濾過して、赤血球溶解バッファーによって処理した。2×106脾細胞を、L−グルタミンで補充されたRPMI 1640培地中、24ウェルプレート内にウェルあたり置いて、2μg/mlの組み換えマウスメソテリン(BioLegend,#594006)を用いて72時間刺激した。最後の5時間中に、ブレフェルジンAおよびMonesin(BioLegend,#420601および#420701)を培養培地に加えた。それから、脾細胞を採取して、サイトメトリー分析に関して対応する抗体を用いて細胞内サイトカイン染色を行なった。
rGH−ffLuc−eGFPトランスジェニックマウスは、Foxp3+Treg細胞において、グリーン蛍光タンパク質(GFP)を発現する。脾臓をこれらのマウスから集めて、すり潰して、40μmストレーナーを通して濾過した。CD4+脾細胞由来のGFP−Foxp3を発現している細胞を、FACSAria(BD Biosciences)でソートして、それから、抗−CD3/CD28抗体(1μg/ml)の存在または不存在下で24時間、AMD3100(5μg/ml)に曝した。最後の5時間中に、ブレフェルジンAおよびMonesin(BioLegend,#420601および#420701)を培養培地中に加えた。それから、細胞を採取して、CD3、CD4、CD25、Foxp3、IL−2およびCD40Lに特異的なコンジュゲート抗体によって染色して、フローサイトメトリーによって分析した。
p値はGraphPad Prism 6によって計算した。別段の記載がない限り、群の間を比較するためのp値は、ダネット多重比較検定によるOne−way ANOVAまたはウェルチの補正による独立t検定によって得られた。Kaplan−Meier法および対数順位検定を用いて、群の間の生存を比較した。P<0.05は、統計的に有意と考えられる。データは、平均±SEMとして表される。
AMD3100およびVIC−008による併用療法は、腫瘍制御およびマウス生存を増大させる
2つの腹腔内悪性中皮腫モデルを、同系40LおよびAE17細胞株を別個に用いて免疫応答性C57BL/6マウスにおいて確立した。ここで、中皮腫保有マウスにおける腫瘍増殖および動物生存に対するAMD3100およびVIC−008の効果は、単独または組み合わせで用いて試験された。VIC−008単独(20μg/マウス)によって処置された動物では、40LおよびAE17モデルの両方において、生理食塩水コントロール処置と比較して、最後の処置の1週間後に集められた腹腔内腫瘍の合計重量が一般に減少して(図7A〜7B)、動物生存が有意に延長された(図7C−7D)(それぞれ、P<0.01およびP<0.01)。1mg/kgのマウス体重でのAMD3100単独は、生理食塩水コントロール処置と比較して、40LおよびAE17マウスMMモデルの両方において、生存に対するほんのわずかな利益を与えた。しかしながら、VIC−008およびAMD3100による組み合わせの処置は、40LおよびAE17モデルの両方において、生理食塩水コントロールと比較して、腫瘍制御を有意に高めて(それぞれ、P<0.0001およびP<0.001)、動物生存を延長させた(それぞれ、P<0.0001およびP<0.0001)。さらに、組み合わせの処置は、40LおよびAE17モデルの両方において、VIC−008単剤療法と比較して、腫瘍増殖の阻害(それぞれ、P<0.001およびP<0.05)およびマウス生存の延長(それぞれ、P<0.0001およびP<0.001)に対するさらに有意に改善された抗腫瘍有効性を示した。これらのデータは、組み合わされると、AMD3100は、いずれかの薬剤による単剤療法と比較して、40LおよびAE17 MMマウスモデルの両方において、VIC−008の抗腫瘍効果を有意に高めることを示唆する。
脾臓、腋窩リンパ節および鼡径リンパ節、および腹腔内腫瘍を、最後の処置の1週間後に腫瘍保有マウスから集めた。単一細胞をこれらの組織から調製して、フローサイトメトリーによって分析した(図8A)。40LおよびAE17モデルの両方に関して脾臓(それぞれ、P<0.05およびP<0.05)および腫瘍(それぞれ、P<0.01およびP<0.01)から、および、AE17モデルにおいてリンパ節(P<0.01)から、回収された合計の生存細胞中のCD8+T細胞の割合は、生理食塩水コントロール群におけるものと比較して、VIC−008処置群において有意に増大した(図8B〜8F)。VIC−008およびAMD3100の組み合わせ処置群では、40LおよびAE17モデルの両方に関して脾臓(それぞれ、P<0.05およびP<0.05)および腫瘍(それぞれ、P<0.01およびP<0.05)から、および、AE17モデルにおいてリンパ節(P<0.001)から、回収された合計の生存細胞中のCD8+T細胞の割合は、生理食塩水コントロール群におけるものと比較して有意に増大した。AMD3100処置は、これらの組織におけるCD8+T細胞の割合を増大させなかった。さらに、VIC−008および組み合わせ処置群の間でCD8+T細胞の割合に違いはなく、VIC−008が、これらの組織のリンパ球浸潤を増大させることを示唆した。
次に、腫瘍保有マウス由来の脾臓およびリンパ節から単離された単一細胞を、エクスビボで組み換えメソテリンによって再刺激して、CD8+T細胞における細胞内IFN−γを分析した。40L(P<0.001)およびAE17(P<0.001)モデルの両方における脾臓CD8+T細胞中およびAE17モデル(P<0.01)におけるリンパ節CD8+T細胞中のメソテリン特異的なIFN−γ発現は、生理食塩水によって処置されたマウスにおけるものと比較して、VIC−008単独で処置されたマウスにおいて有意に高かった(図9A〜9D)。VIC−008およびAMD3100の組み合わせ処置群では、40L(P<0.01)およびAE17(P<0.01)モデルの両方における脾臓CD8+T細胞中およびAE17モデル(P<0.001)におけるリンパ節CD8+T細胞中のメソテリン特異的なIFN−γ発現は、生理食塩水によって処置されたマウスにおけるものと比較して有意に高かった。AMD3100処置はそれ自体、CD8+T細胞における抗原特異的なIFN−γ分泌を高めなかった。合わせると、これらのデータは、40LおよびAE17中皮腫マウスモデルの両方において、VIC−008処置が抗腫瘍CD8+T細胞応答を高めるという見解を支持する。
次に、CD8+T細胞上のプログラム化された細胞死タンパク質−1(PD−1)の発現を、脾臓、腫瘍およびリンパ節において評価した。40LおよびAE17腫瘍保有マウスの両方における脾臓中およびAE17マウスに関するリンパ節中のPD−1を発現しているCD8+T細胞の割合に、VIC−008処置群および生理食塩水コントロール群の間で有意差は無かった(図10A〜10C)。著しい対照において、生理食塩水によって処置されたコントロールと比較して、VIC−008処置群における有意により多い腫瘍内のCD8+T細胞が、40L腫瘍(P<0.05)およびAE17腫瘍(P<0.01)においてPD−1を発現した(図10D〜10E)。PD−1を発現しているCD8+T細胞のパーセンテージは、脾臓およびリンパ節におけるたった5〜10%と比較して、40L腫瘍およびAE17腫瘍においてそれぞれ43〜76%および28〜47%の範囲であった。これらのデータは、VIC−008処置によって誘導される腫瘍環境におけるCD8+T細胞の抗腫瘍活性が、PD−1/PD−L1パスウェイの活性化によって妨げられ得ることを示す。
次に、Treg細胞に対するAMD3100の影響を評価した。AMD3100は、40L腫瘍保有マウスの脾臓中に見られるTreg細胞の割合を変化させなかった(図11A〜11B)。AE17腫瘍保有マウスでは、AMD3100単独は、リンパ節中のTregを一般に減少させて(図11C)、AMD3100は、単独またはVIC−008と組み合わせて、生理食塩水処置と比較して、Treg細胞に対するCD8+T細胞の細胞比を有意に増大させた(それぞれ、P<0.01およびP<0.0001)(図11D)。40LおよびAE17モデル由来の腫瘍では、両方とも、単剤療法として適用されたAMD3100は、生理食塩水処置と比較して、Tregの割合を有意に低減させて(それぞれ、P<0.05およびP<0.01)、Tregに対するCD8+T細胞の比を増大させた(それぞれ、P<0.001およびP<0.01)(図11E〜11F)。AMD3100およびVIC−008の組み合わせの処置群では、40LおよびAE17モデルの両方において、生理食塩水処置と比較して、Tregの割合は有意に低減して(それぞれ、P<0.05およびP<0.05)、Tregに対するCD8+T細胞の比は増大した(それぞれ、P<0.001およびP<0.0001)。これらの2つのミューリン中皮腫モデルでは、AMD3100は、腫瘍内のTreg浸潤を減少させた。
AMD3100は、単独またはVIC−008と組み合わせて、40L(図12A、それぞれ、P<0.01およびP<0.001)およびAE17(図12B、それぞれ、P<0.001およびP<0.01)モデルにおけるリンパ節の両方において、Foxp3+集団内のCD25+細胞に対するCD25−細胞の比を有意に増大させることが観察された。Foxp3+CD25−Treg集団中、有意により多くの細胞が、AMD3100単剤療法およびVIC−008との併用療法後に表現型的にIL−2+CD40L+であり(図12C〜12E)、Treg細胞からFoxp3を失わずにCD25を失っているヘルパー様細胞への変化を示唆した(それらの免疫抑制機能を失っていてよい)。AMD3100単剤療法および併用療法群の間で、Foxp3+CD25−Treg集団中のIL−2+CD40L+細胞の割合に違いはなく、AMD3100処置が、ヘルパー様細胞へのTregの再プログラミングの主な駆動体であり得ることを示唆した。
次に、AMD3100によって駆動されるTreg調節が、単離された単一細胞において開始され得るかどうか取り組んだ。T−Red/FoxP3 GFPトランスジェニックマウスにおいてCD4+脾細胞からGFP−Foxp3を発現している細胞をソートして、AMD3100によってインビトロで処置した。AMD3100処置単独は、Foxp3+CD4+集団中のCD25+細胞に対するCD25−細胞の割合の比を変化させなかった(図13A〜13B)。しかしながら、TCR活性化をトリガーするための抗−CD3/CD28抗体による刺激の存在下では、AMD3100処置は、Foxp3+CD4+集団中のCD25+細胞に対するCD25−細胞の割合の比を有意に増大させて(図13C〜13D、P=0.0017)、より多くのFoxp3+CD25−TregをIL−2+CD40L+細胞に変換した(図13E−13F、P=0.0015)。これらのデータは、ヘルパー様細胞へのTreg細胞の変換が、TCR活性化の際の単一細胞のAMD3100処置によって仲介され得ることを示唆した。
Claims (43)
- それを必要とする患者において癌を治療する方法であって、
前記癌は、化学忌避特性を発現し、
前記方法は、前記患者に、
a)有効量の融合タンパク質を投与するステップ、その融合タンパク質は、癌細胞結合構成要素およびストレスタンパク質構成要素を含み、ここで、前記癌細胞結合構成要素は、前記癌細胞に結合して、前記ストレスタンパク質構成要素は、樹状細胞を活性化して、癌抗原を標的化するCD3陽性T細胞の発生をもたらす;および
b)前記患者に、有効量の抗化学忌避剤を同時に投与するステップ;
を含み、
ここで、前記融合タンパク質および前記抗化学忌避剤の組み合わせは、前記癌を治療する、
方法。 - 請求項1の方法であって、
前記抗化学忌避剤は、AMD3100またはその誘導体、AMD11070、AMD12118、AMD11814、AMD13073、FAMD3465、C131、BKT140、CTCE−9908、KRH−2731、TC14012、KRH−3955、BMS−936564/MDX−1338、LY2510924、GSK812397、KRH−1636、T−20、T−22、T−140、TE−14011、T−14012、TN14003、TAK−779、AK602、SCH−351125、タンニン酸、NSC 651016、サリドマイド、GF 109230X、化学忌避ケモカインの二量体化と干渉する抗体、および、化学忌避ケモカインに関する受容体の二量体化と干渉する抗体からなる群より選択される、
方法。 - 請求項2の方法であって、
前記抗化学忌避剤は、AMD3100である、
方法。 - 請求項1から3のいずれか一項の方法であって、
前記ストレスタンパク質は、HSP70またはその免疫活性化フラグメントおよび/または改変配列である、
方法。 - 請求項4の方法であって、
前記のHSP70またはその免疫活性化フラグメントおよび/または改変配列は、Mycobacterium tuberculosis由来である、
方法。 - 請求項1から5のいずれか一項の方法であって、
前記癌細胞結合構成要素は、単鎖抗体、可変ドメイン、または、Fabドメインである、
方法。 - 請求項1から6のいずれか一項の方法であって、
前記融合タンパク質は、配列番号1または配列番号2のペプチド配列と少なくとも85%の配列相同性を有するペプチドを含む、
方法。 - 請求項7の方法であって、
前記融合タンパク質は、配列番号2のペプチド配列を含む、
方法。 - 請求項1から8のいずれか一項の方法であって、
前記抗化学忌避剤および前記融合タンパク質は、共投与される、
方法。 - 請求項1から8のいずれか一項の方法であって、
前記抗化学忌避剤は、前記融合タンパク質の投与の前に投与される、
方法。 - 請求項1から8のいずれか一項の方法であって、
前記抗化学忌避剤は、前記融合タンパク質の投与の後に投与される、
方法。 - 請求項1から11のいずれか一項の方法であって、
前記癌細胞結合構成要素は、メソテリン、アルファフェトプロテイン、CEA、CA−125、MUC−1、Her2Neu、ETA、NY−ESO−1、VEGF、VEGFR1、VEGFR2、PSMA、前立腺特異的抗原、HPV17E7、突然変異体p53、surviving、ras、MAGE、gp100、チロシナーゼ、WT1、PR1、葉酸結合タンパク質、CA−19−9、FAP、G250、およびA33からなる群より選択されるタンパク質に特異的である、
方法。 - 請求項12の方法であって、前記抗体は、メソテリンに特異的である、
方法。 - 請求項1から13のいずれか一項に記載の方法であって、
前記癌は、中皮腫、乳癌、頭頚部癌、白血球癌、肝臓癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、皮膚癌、骨癌、脳腫瘍、白血病癌、肺癌、結腸癌、肛門癌、CNS癌、メラノーマ癌、腎癌、子宮頸癌、食道癌、精巣癌、脾臓癌、腎臓癌、リンパ性癌、膵癌、胃癌、白血病、リンパ腫、骨髄腫、胃腸癌、または甲状腺癌を含む、
方法。 - 請求項1から14のいずれか一項の方法であって、
前記癌は、メソテリンを発現する、
方法。 - 請求項1から15のいずれか一項の方法であって、
前記融合タンパク質は、注入を介して投与される、
方法。 - 請求項16の方法であって、
前記融合タンパク質は、腫瘍内に直接注入される、
方法。 - 請求項1から17のいずれか一項の方法であって、
前記抗化学忌避剤は、注入を介して投与される、
方法。 - 融合タンパク質および抗化学忌避剤を含む医薬組成物であって、
前記融合タンパク質は、癌細胞結合構成要素およびストレスタンパク質構成要素を含む、
医薬組成物。 - 請求項19の組成物であって、
抗原提示細胞をさらに含む、
組成物。 - 請求項20の組成物であって、
前記抗原提示細胞は、樹状細胞である、
組成物。 - 請求項19から21のいずれか一項の組成物であって、
前記抗化学忌避剤は、AMD3100またはその誘導体、AMD11070、AMD12118、AMD11814、AMD13073、FAMD3465、C131、BKT140、CTCE−9908、KRH−2731、TC14012、KRH−3955、BMS−936564/MDX−1338、LY2510924、GSK812397、KRH−1636、T−20、T−22、T−140、TE−14011、T−14012、TN14003、TAK−779、AK602、SCH−351125、タンニン酸、NSC 651016、サリドマイド、GF 109230X、化学忌避ケモカインの二量体化と干渉する抗体、および、化学忌避ケモカインに関する受容体の二量体化と干渉する抗体からなる群より選択される、
組成物。 - 請求項22の組成物であって、
前記抗化学忌避剤は、AMD3100である、
組成物。 - 請求項19から23のいずれか一項の組成物であって、
前記ストレスタンパク質は、HSP70またはその免疫活性化フラグメントおよび/または改変配列である、
組成物。 - 請求項24の組成物であって、
前記のHSP70またはその免疫活性化フラグメントおよび/または改変配列は、Mycobacterium tuberculosis由来である、
組成物。 - 請求項19から25のいずれか一項の組成物であって、
前記癌細胞結合構成要素は、単鎖抗体、可変ドメイン、または、Fabドメインである、
組成物。 - 請求項19から26のいずれか一項の組成物であって、
前記癌細胞結合構成要素は、メソテリン、アルファフェトプロテイン、CEA、CA−125、MUC−1、Her2Neu、ETA、NY−ESO−1、VEGF、VEGFR1、VEGFR2、PSMA、前立腺特異的抗原、HPV17E7、突然変異体p53、surviving、ras、MAGE、gp100、チロシナーゼ、WT1、PR1、葉酸結合タンパク質、CA−19−9、FAP、G250、およびA33からなる群より選択されるタンパク質に特異的である、
組成物。 - 請求項27の組成物であって、
前記抗体は、メソテリンに特異的である、
組成物。 - 請求項28の組成物であって、
前記融合タンパク質は、配列番号1または配列番号2のペプチド配列と少なくとも85%の配列相同性を有するペプチドを含む、
組成物。 - 請求項29の組成物であって、
前記融合タンパク質は、配列番号2のペプチド配列を含む、
組成物。 - 請求項19から30のいずれか一項の組成物であって、
注入のために製剤化される、
組成物。 - 請求項19から31のいずれか一項の組成物であって、
薬学的に許容できる賦形剤をさらに含む、
組成物。 - 患者における癌の治療のためのパーツのキットであって、
前記キットは、治療的に有効量の抗化学忌避剤、および、癌細胞結合構成要素およびストレスタンパク質構成要素を含む融合タンパク質を含み、
前記癌細胞結合構成要素は、前記癌によって発現される抗原を認識する、
パーツのキット。 - 請求項33のパーツのキットであって、
前記抗化学忌避剤は、AMD3100またはその誘導体、AMD11070、AMD12118、AMD11814、AMD13073、FAMD3465、C131、BKT140、CTCE−9908、KRH−2731、TC14012、KRH−3955、BMS−936564/MDX−1338、LY2510924、GSK812397、KRH−1636、T−20、T−22、T−140、TE−14011、T−14012、TN14003、TAK−779、AK602、SCH−351125、タンニン酸、NSC 651016、サリドマイド、GF 109230X、化学忌避ケモカインの二量体化と干渉する抗体、および、化学忌避ケモカインに関する受容体の二量体化と干渉する抗体からなる群より選択される、
パーツのキット。 - 請求項33のパーツのキットであって、
前記抗化学忌避剤は、AMD3100である、
パーツのキット。 - 請求項33から35のいずれか一項のパーツのキットであって、
前記ストレスタンパク質は、HSP70またはその免疫活性化フラグメントおよび/または改変配列である、
パーツのキット。 - 請求項36のパーツのキットであって、
前記のHSP70またはその免疫活性化フラグメントおよび/または改変配列は、Mycobacterium tuberculosis由来である、
パーツのキット。 - 請求項33から37のいずれか一項のパーツのキットであって、
前記癌細胞結合構成要素は、単鎖抗体、可変ドメイン、または、Fabドメインである、
パーツのキット。 - 請求項33から38のいずれか一項のパーツのキットであって、
前記融合タンパク質は、配列番号1または配列番号2のペプチド配列と少なくとも85%の配列相同性を有するペプチドを含む、
パーツのキット。 - 請求項39のパーツのキットであって、
前記融合タンパク質は、配列番号2のペプチド配列を含む、
パーツのキット。 - 請求項33から40のいずれか一項のパーツのキットであって、
前記融合タンパク質および/または前記抗化学忌避剤は、注入のために製剤化される、
パーツのキット。 - 請求項33から41のいずれか一項のパーツのキットであって、
前記融合タンパク質および前記抗化学忌避剤は、同一の製剤内である、
パーツのキット。 - 請求項33から42のいずれか一項のパーツのキットであって、
前記癌を治療するための指示書をさらに含む、
パーツのキット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201662385877P | 2016-09-09 | 2016-09-09 | |
US62/385,877 | 2016-09-09 | ||
PCT/US2017/050618 WO2018049118A1 (en) | 2016-09-09 | 2017-09-08 | Hsp fusion protein with anti-chemorepellant agent for treatment of cancer |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2019534249A true JP2019534249A (ja) | 2019-11-28 |
JP2019534249A5 JP2019534249A5 (ja) | 2020-08-13 |
Family
ID=61562352
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019513309A Pending JP2019534249A (ja) | 2016-09-09 | 2017-09-08 | 癌の治療のための抗化学忌避剤とのhsp融合タンパク質 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11325951B2 (ja) |
EP (1) | EP3509609A4 (ja) |
JP (1) | JP2019534249A (ja) |
WO (1) | WO2018049118A1 (ja) |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5075109A (en) | 1986-10-24 | 1991-12-24 | Southern Research Institute | Method of potentiating an immune response |
GB9126677D0 (en) | 1991-12-16 | 1992-02-12 | Johnson Matthey Plc | Improvements in chemical compounds |
US5514555A (en) | 1993-03-12 | 1996-05-07 | Center For Blood Research, Inc. | Assays and therapeutic methods based on lymphocyte chemoattractants |
WO2000059941A1 (en) | 1999-04-08 | 2000-10-12 | The General Hospital Corporation | Purposeful movement of human migratory cells away from an agent source |
MXPA04000982A (es) | 2001-07-31 | 2004-04-20 | Anormed Inc | Metodos para movilizar celulas progenitoras/madre. |
CA2586765A1 (en) * | 2004-11-05 | 2006-12-28 | The General Hospital Corporation | Purposeful movement of human migratory cells away from an agent source |
US7943133B2 (en) * | 2006-02-02 | 2011-05-17 | Boston Biocom Llc | Mesothelin antibody protein fusions and methods of use |
ES2581984T3 (es) | 2006-02-02 | 2016-09-08 | The General Hospital Corporation | Fusiones de anticuerpos manipulados y proteínas de estrés |
CN1865281B (zh) * | 2006-06-02 | 2012-08-22 | 北京大学人民医院 | 卵巢癌抗独特型抗体6b11 t细胞表位肽及其应用 |
WO2009129502A2 (en) | 2008-04-18 | 2009-10-22 | The General Hospital Corporation | Immunotherapies employing self-assembling vaccines |
US9155723B2 (en) * | 2010-06-28 | 2015-10-13 | The General Hospital Corporation | Anti-CXCR4 as a sensitizer to cancer therapeutics |
US20170260286A1 (en) * | 2016-03-10 | 2017-09-14 | The General Hospital Corporation | Antigen-Binding Fusion Proteins with Modified HSP70 Domains |
-
2017
- 2017-09-08 EP EP17849584.2A patent/EP3509609A4/en active Pending
- 2017-09-08 JP JP2019513309A patent/JP2019534249A/ja active Pending
- 2017-09-08 US US16/331,845 patent/US11325951B2/en active Active
- 2017-09-08 WO PCT/US2017/050618 patent/WO2018049118A1/en unknown
-
2022
- 2022-05-09 US US17/739,444 patent/US20220275032A1/en active Pending
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
LI, T. ET AL.: ""The expression of CXCR4, CXCL12 and CXCR7 in malignant pleural mesothelioma"", JOURNAL OF PATHOLOGY, vol. 223, no. 4, JPN6021019443, 2011, pages 519 - 530, XP055756689, ISSN: 0004758014, DOI: 10.1002/path.2829 * |
YUAN, J. ET AL.: ""A novel mycobacterial Hsp70-containing fusion protein targeting mesothelin augments antitumor immun", JOURNAL OF HEMATOLOGY & ONCOLOGY, vol. 7, JPN6021019441, 2014, pages 15, XP021179146, ISSN: 0004758012, DOI: 10.1186/1756-8722-7-15 * |
ZENG, Y. ET AL.: ""Improved Antitumoral Efficacy of Mesothelin Targeted Immune Activating Fusion Protein in Murine Mod", INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER AND CLINICAL RESEARCH, vol. 3, no. 2, JPN6021019442, 30 March 2016 (2016-03-30), pages 051, ISSN: 0004758013 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3509609A1 (en) | 2019-07-17 |
US20190375800A1 (en) | 2019-12-12 |
WO2018049118A1 (en) | 2018-03-15 |
US20220275032A1 (en) | 2022-09-01 |
EP3509609A4 (en) | 2021-01-20 |
US11325951B2 (en) | 2022-05-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Garaude et al. | Simultaneous targeting of toll-and nod-like receptors induces effective tumor-specific immune responses | |
Jadus et al. | Lung cancer: a classic example of tumor escape and progression while providing opportunities for immunological intervention | |
Matsushita et al. | Comparative methodologies of regulatory T cell depletion in a murine melanoma model | |
EP1434596B1 (en) | Enhancement of immune responses by agonist 4-1bb-antibodies | |
Randazzo et al. | Active‐specific immunotherapy of human cancers with the heat shock protein Gp96—revisited | |
AU2009226077B2 (en) | Heat shock protein gp96 vaccination and methods of using same | |
JP2021531013A (ja) | Il2アゴニスト | |
Mattiuz et al. | Type 1 conventional dendritic cells and interferons are required for spontaneous CD4+ and CD8+ T‐cell protective responses to breast cancer | |
Kroon et al. | Radiotherapy and cisplatin increase immunotherapy efficacy by enabling local and systemic intratumoral T-cell activity | |
EP2257301B1 (en) | Allogeneic cancer cell-based immunotherapy | |
Iezzi et al. | DNA vaccination against oncoantigens: a promise | |
JP6220111B2 (ja) | 乳癌再発の予防用ワクチン | |
JP2018522041A (ja) | 改変酵母−ブラキュリー免疫療法組成物 | |
Allegra et al. | Vaccination of multiple myeloma: Current strategies and future prospects | |
Tran et al. | A therapeutic Her2/neu vaccine targeting dendritic cells preferentially inhibits the growth of low Her2/neu–expressing tumor in HLA-A2 transgenic mice | |
Platt et al. | C3d regulates immune checkpoint blockade and enhances antitumor immunity | |
Hernandez et al. | High-dose IL-2/CD25 fusion protein amplifies vaccine-induced CD4+ and CD8+ neoantigen-specific T cells to promote antitumor immunity | |
Cannon et al. | Cellular immunotherapy for ovarian cancer | |
JP2015520129A (ja) | 多価乳がんワクチン | |
Beyer et al. | Immunoregulatory T cells: role and potential as a target in malignancy | |
WO2018049130A1 (en) | Ex vivo antigen-presenting cells or activated cd-positive t cells for treatment of infectious diseases | |
JP2022528422A (ja) | インターロイキン2(il2)およびインターフェロン(ifn)を含む治療 | |
US20220275032A1 (en) | HSP Fusion Protein with Anti-Chemorepellant Agent for Treatment of Cancer | |
US20220323493A1 (en) | Ex vivo antigen-presenting cells or activated cd-positive t cells for treatment of cancer | |
JP2018501247A (ja) | 免疫療法による治療および組成物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200703 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200703 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210428 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210524 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20210817 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211124 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20220422 |