JP2003500648A - Ｔｓｅに誘発された組織変化を赤外分光法を用いて診断する方法 - Google Patents
Ｔｓｅに誘発された組織変化を赤外分光法を用いて診断する方法Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明の目的は、動物およびヒトの組織におけるＴＳＥに誘導された変化を該組織の赤外線スペクトルを測定することによって即座に診断することである。薄切りの組織、組織片または均質化組織のいずれかを組織試料として扱う。この赤外線スペクトル測定は赤外分光法（例えば、透過、全反射減衰、直接または拡散反射）を利用する既知の実験器具を用いて行なわれる。試験した試料の赤外線スペクトルと健康な試料または病理学的に変化した組織試料から得られた赤外線スペクトルからなる参考データバンクとを比較することによって、ＴＳＥに誘導された病理学的変化の検出は行なわれる。未知試料のスペクトルと参考データバンクとの適合は、好ましくはパターン認識法（例えば、多変量統計モデル、人工神経ネットワーク、遺伝的アルゴリズム）を用いて行なわれる。
Description
【０００１】
本発明は動物またはヒト組織における伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）に誘発され
る病理学的変化を、赤外分光法（ＩＲ分光法）を用いて即座に検出するための方
法に関する。
る病理学的変化を、赤外分光法（ＩＲ分光法）を用いて即座に検出するための方
法に関する。
【０００２】
伝達性海綿状脳症は、多くの動物およびヒトに影響を及ぼし得る中枢神経系（
ＣＮＳ）の伝染性神経変性疾患である。本明細書ではＴＳＥは、種々の種属に生
じるＴＳＥの様々な形態の疾患を網羅する用語として用いる。羊を起源とするが
、ハムスターおよびマウスにも伝達し得る疾患であるスクレイピー（繋駕症（tr
otting disease））に加えて、その他のＴＳＥとして、畜牛におけるウシ海綿状
脳症（ＢＳＥ）、ある種のアメリカジカおよびエルクにおける慢性消耗症（ＣＷ
Ｄ）、ミンクにおける伝達性ミンク脳症（ＴＭＥ）、猫におけるネコ海綿状脳症
（ＦＳＥ）およびカモシカにおける海綿状脳症の５つの型が今のところ知られて
いる。ヒトにおけるＴＳＥは、クライツフェルト−ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルト
マン−ストロイストラー−シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症
（ＦＦＩ）およびクールーの４つの型に区別される。
ＣＮＳ）の伝染性神経変性疾患である。本明細書ではＴＳＥは、種々の種属に生
じるＴＳＥの様々な形態の疾患を網羅する用語として用いる。羊を起源とするが
、ハムスターおよびマウスにも伝達し得る疾患であるスクレイピー（繋駕症（tr
otting disease））に加えて、その他のＴＳＥとして、畜牛におけるウシ海綿状
脳症（ＢＳＥ）、ある種のアメリカジカおよびエルクにおける慢性消耗症（ＣＷ
Ｄ）、ミンクにおける伝達性ミンク脳症（ＴＭＥ）、猫におけるネコ海綿状脳症
（ＦＳＥ）およびカモシカにおける海綿状脳症の５つの型が今のところ知られて
いる。ヒトにおけるＴＳＥは、クライツフェルト−ヤコブ病（ＣＪＤ）、ゲルト
マン−ストロイストラー−シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症
（ＦＦＩ）およびクールーの４つの型に区別される。
【０００３】
ＴＳＥは、ａ）神経膠症を伴う脳組織における特徴的な海綿状変化の組織学的
証拠、ｂ）ウェスタンブロット試験、組織染色（histo-blot）試験および免疫組
織化学を用いた異常プリオンタンパク質（ＰｒＰ）の蓄積についての免疫学的証
拠、ｃ）電子顕微鏡を用いたスクレイピーに関連する（ＰｒＰ）原繊維（ＳＡＦ
）の証拠、およびｄ）動物における伝達実験を用いた感染性ＴＳＥ因子の証拠に
基づいて明確に診断し得る。
証拠、ｂ）ウェスタンブロット試験、組織染色（histo-blot）試験および免疫組
織化学を用いた異常プリオンタンパク質（ＰｒＰ）の蓄積についての免疫学的証
拠、ｃ）電子顕微鏡を用いたスクレイピーに関連する（ＰｒＰ）原繊維（ＳＡＦ
）の証拠、およびｄ）動物における伝達実験を用いた感染性ＴＳＥ因子の証拠に
基づいて明確に診断し得る。
【０００４】
動物並びにヒトにおける脳脊髄液および／または血清において、特定のタンパ
ク質濃度が増加する臨床症状および化学実験の所見[ Protein 14-3-3 (Zerr et
al. (1997) N. Engl. J. Med. 336: 874; Zerr et al. (1998) Ann. Neurol. 43
: 32-40.), Protein S100 (Otto et al. (1997) J. Neurol. 244: 566-570; Ott
o et al. (1998) Brit. Med. J. 316: S77S82; Otto et al. (1998) J. Neurovi
rol. 4: 572-573)およびneuron-specific enolase (Zerr et al. (1995) Lancet
345: 1609-1610) ]では仮診断し得るのみである。同様のことがヒトＴＳＥに関
連して生じる、ＥＥＧまたはＭＲ断層写真にて認められる変化について当てはま
る。
ク質濃度が増加する臨床症状および化学実験の所見[ Protein 14-3-3 (Zerr et
al. (1997) N. Engl. J. Med. 336: 874; Zerr et al. (1998) Ann. Neurol. 43
: 32-40.), Protein S100 (Otto et al. (1997) J. Neurol. 244: 566-570; Ott
o et al. (1998) Brit. Med. J. 316: S77S82; Otto et al. (1998) J. Neurovi
rol. 4: 572-573)およびneuron-specific enolase (Zerr et al. (1995) Lancet
345: 1609-1610) ]では仮診断し得るのみである。同様のことがヒトＴＳＥに関
連して生じる、ＥＥＧまたはＭＲ断層写真にて認められる変化について当てはま
る。
【０００５】
ＴＳＥの検出手法を開発、改良できれば、とりわけ以下の目的が達成される。
ａ）ヒトＴＳＥについての鑑別診断の改良。この疾患は剖検または脳の生検に
より、いくらかの確実性をもって診断し得るだけである。 ｂ）血液、器官および組織並びにそれから作り出されたヒトまたは動物由来の
製品におけるＴＳＥ汚染の検出。 ｃ）ヒトＴＳＥに感染した血液、器官、組織の提供者の同定。 ｄ）屠殺場または農場における家畜（例えば、畜牛および羊）についてのＴＳ
Ｅ感染の臨床前または臨床段階の検出。 ＴＳＥ疾患は疾患を持つ動物の肉を食べることによって伝染し得るために、家畜
についてＴＳＥ疾患を診断できることは重要である。例えば、ＢＳＥに汚染され
た牛肉を消費することが、ヒトにおける新異型ＣＪＤ（ｎｖＣＪＤ）の原因とな
るのではないかと考えられている。現在、幾つかの国では消費者を保護し、病気
の蔓延を防ぐために畜牛群の汚染レベルについて公式な監視システムを導入して
いる。屠殺場において、屠殺体が使い物になるか否かを明らかにするために、通
常の（ルーチン）点検をしている思われる。
より、いくらかの確実性をもって診断し得るだけである。 ｂ）血液、器官および組織並びにそれから作り出されたヒトまたは動物由来の
製品におけるＴＳＥ汚染の検出。 ｃ）ヒトＴＳＥに感染した血液、器官、組織の提供者の同定。 ｄ）屠殺場または農場における家畜（例えば、畜牛および羊）についてのＴＳ
Ｅ感染の臨床前または臨床段階の検出。 ＴＳＥ疾患は疾患を持つ動物の肉を食べることによって伝染し得るために、家畜
についてＴＳＥ疾患を診断できることは重要である。例えば、ＢＳＥに汚染され
た牛肉を消費することが、ヒトにおける新異型ＣＪＤ（ｎｖＣＪＤ）の原因とな
るのではないかと考えられている。現在、幾つかの国では消費者を保護し、病気
の蔓延を防ぐために畜牛群の汚染レベルについて公式な監視システムを導入して
いる。屠殺場において、屠殺体が使い物になるか否かを明らかにするために、通
常の（ルーチン）点検をしている思われる。
【０００６】
異常プリオンタンパク質に対して感受的で、かつ大量の試料群から素早くスク
リーニングすることができ、そして大量生産において診断することができる種々
の試験系が開発されている。これには、蛍光標識ペプチドを用いるキャピラリー
電気泳動免疫測定（Schmerr & Jenny (1998) Electrophoresis 19: 409-419) お
よびデルフィア（Delfia）と呼ばれる蛍光ランタニドキレート剤を用いる免疫検
出系（Safar et, al. (1998) Nature Medicine 4. 1157-1165）が挙げられる 。
リーニングすることができ、そして大量生産において診断することができる種々
の試験系が開発されている。これには、蛍光標識ペプチドを用いるキャピラリー
電気泳動免疫測定（Schmerr & Jenny (1998) Electrophoresis 19: 409-419) お
よびデルフィア（Delfia）と呼ばれる蛍光ランタニドキレート剤を用いる免疫検
出系（Safar et, al. (1998) Nature Medicine 4. 1157-1165）が挙げられる 。
【０００７】
大規模な使用に適している唯一の診断方法が、ＴＳＥに感染した家畜を同定す
るのに現在利用されている。これは、屠殺場における利用に制限される、また開
発者の記述によると、畜牛のＢＳＥを検出することができるのは臨床症状が表れ
る前の半年までである。（インターネット http://www.prionics.chにおける生
産者情報（the manufacturer's information）を参照)。
るのに現在利用されている。これは、屠殺場における利用に制限される、また開
発者の記述によると、畜牛のＢＳＥを検出することができるのは臨床症状が表れ
る前の半年までである。（インターネット http://www.prionics.chにおける生
産者情報（the manufacturer's information）を参照)。
【０００８】
スイスに拠点のあるプリオニクス ＡＧ（Prionics AG）によって開発されたこ
の方法は、屠殺した畜牛の延髄から得られた組織試料を均質化（ホモジナイズ）
し、プロテイナーゼＫ酵素を用いて処理する。この処理の後に残っているはずの
異常プリオンタンパク質を６Ｈ４モノクローナル抗体（プリオニクス製）を用い
て標識化した後、ウェスタンブロット法を用いて染色する。この製品には、この
方法を用いることで試料を得てから最終的な結果を得るまでは１２時間以内であ
ると記載されている。
の方法は、屠殺した畜牛の延髄から得られた組織試料を均質化（ホモジナイズ）
し、プロテイナーゼＫ酵素を用いて処理する。この処理の後に残っているはずの
異常プリオンタンパク質を６Ｈ４モノクローナル抗体（プリオニクス製）を用い
て標識化した後、ウェスタンブロット法を用いて染色する。この製品には、この
方法を用いることで試料を得てから最終的な結果を得るまでは１２時間以内であ
ると記載されている。
【０００９】
本発明の目的はＴＳＥに誘導された組織変化を素早く、確実に、そして費用効
率よく検出する方法の開発である。本発明の方法は、屠殺場における通常操作を
効率的に行なわせる。従って、本発明の課題は組織におけるＴＳＥに誘発される
病理学的変化を検出するための方法を提供することにある。当該変化はスクレイ
ピー、ＢＳＥまたはその他のＴＳＥ疾患によって生じ得る。この課題は（ａ）Ｔ
ＳＥによって生じた病理学的変化を伴う組織試料に赤外線を当て、照射後のスペ
クトル特性を記録すること、および（ｂ）このようにして得た赤外線スペクトル
を、ＴＳＥの感染した組織および非感染組織の赤外線スペクトルを含む参考デー
タベースと比較し、分類することによる本発明方法によって解決される。本発明
の態様を引用形式請求項に記載する。
率よく検出する方法の開発である。本発明の方法は、屠殺場における通常操作を
効率的に行なわせる。従って、本発明の課題は組織におけるＴＳＥに誘発される
病理学的変化を検出するための方法を提供することにある。当該変化はスクレイ
ピー、ＢＳＥまたはその他のＴＳＥ疾患によって生じ得る。この課題は（ａ）Ｔ
ＳＥによって生じた病理学的変化を伴う組織試料に赤外線を当て、照射後のスペ
クトル特性を記録すること、および（ｂ）このようにして得た赤外線スペクトル
を、ＴＳＥの感染した組織および非感染組織の赤外線スペクトルを含む参考デー
タベースと比較し、分類することによる本発明方法によって解決される。本発明
の態様を引用形式請求項に記載する。
【００１０】
本発明に用いる方法は主に、病理学的に変化した組織の赤外線スペクトル測定
に基づく。疾患に特有の変化が組織の赤外線スペクトルに影響し得ることは、多
くの文献および特許出願によって知られている（米国特許 5, 168, 162 (Wong &
Rigas; 米国特許 5, 038, 039; Wong, Rigas; Lasch & Naumann (1998) Cell.
Mol. Biol. 44: 189-202; Lasch et al. (1998) Proc. SPIE 3257: 187-198; Ch
oo et. al. (1996) Biophys. J. 71: 1672-1679)。しかし、ＴＳＥ組織試料に対
して行なった赤外線スペクトルについてのデータは発表されていない。
に基づく。疾患に特有の変化が組織の赤外線スペクトルに影響し得ることは、多
くの文献および特許出願によって知られている（米国特許 5, 168, 162 (Wong &
Rigas; 米国特許 5, 038, 039; Wong, Rigas; Lasch & Naumann (1998) Cell.
Mol. Biol. 44: 189-202; Lasch et al. (1998) Proc. SPIE 3257: 187-198; Ch
oo et. al. (1996) Biophys. J. 71: 1672-1679)。しかし、ＴＳＥ組織試料に対
して行なった赤外線スペクトルについてのデータは発表されていない。
【００１１】
本明細書が基礎とする実験データは、モデル系としてスクレイピーを感染させ
たハムスターのＣＮＳ試料を用いて展開した。ハムスターにスクレイピーを感染
させた後に、ＣＮＳ組織試料の赤外線スペクトルに特徴的な変化が現れることが
この動物モデルにおいて見出された。この変化は本発明の方法を用いること、即
ち非感染健常動物から得られた試料をそれぞれ比較することで同定された。基本
的に、本方法は任意のＴＳＥ疾患群の臨床像を診断するのに利用できる。本発明
の方法に従い、赤外線スペクトルを用いるＴＳＥ診断は、参照するための由来の
分かっている組織のスペクトルと検査する組織のスペクトルとを比較することが
必要である。従って、本方法の実用化には健康な組織試料および異常な組織試料
から得られたＩＲスペクトルの信頼のおける参考データベースの存在が必要であ
る。この参考データベースは、標準化された診断方法を行なうためなら一度しか
作る必要がない。
たハムスターのＣＮＳ試料を用いて展開した。ハムスターにスクレイピーを感染
させた後に、ＣＮＳ組織試料の赤外線スペクトルに特徴的な変化が現れることが
この動物モデルにおいて見出された。この変化は本発明の方法を用いること、即
ち非感染健常動物から得られた試料をそれぞれ比較することで同定された。基本
的に、本方法は任意のＴＳＥ疾患群の臨床像を診断するのに利用できる。本発明
の方法に従い、赤外線スペクトルを用いるＴＳＥ診断は、参照するための由来の
分かっている組織のスペクトルと検査する組織のスペクトルとを比較することが
必要である。従って、本方法の実用化には健康な組織試料および異常な組織試料
から得られたＩＲスペクトルの信頼のおける参考データベースの存在が必要であ
る。この参考データベースは、標準化された診断方法を行なうためなら一度しか
作る必要がない。
【００１２】
未知の試料から得られたスペクトルと参考データベースとのマッチングは、コ
ンピューターによるパターン認識法、例えば多変量統計、人工神経ネットワーク
、遺伝的アルゴリズムなどを用いて行なうことができる。
ンピューターによるパターン認識法、例えば多変量統計、人工神経ネットワーク
、遺伝的アルゴリズムなどを用いて行なうことができる。
【００１３】
このスペクトルは試料に赤外光を当て、現れる輻射のスペクトル特性を記録す
ることで得られる、即ち赤外光が組織と相互作用した後に得られる。試料の大き
さを最小にすることを望む場合は、顕微分光メーター法（microspectrometric t
echnique）の利用が有利である。赤外線顕微鏡を利用する場合は、薄切りの組織
から位置解析についてスペクトルデータを得ることができるため、本方法はかな
り特異的でかつ感度がよくなる。今後の改良については、赤外線可視導波管（in
frared optical waveguide）を内視鏡として用いることができるなら、感染した
生物を直接ＴＳＥ診断することが容易になる。
ることで得られる、即ち赤外光が組織と相互作用した後に得られる。試料の大き
さを最小にすることを望む場合は、顕微分光メーター法（microspectrometric t
echnique）の利用が有利である。赤外線顕微鏡を利用する場合は、薄切りの組織
から位置解析についてスペクトルデータを得ることができるため、本方法はかな
り特異的でかつ感度がよくなる。今後の改良については、赤外線可視導波管（in
frared optical waveguide）を内視鏡として用いることができるなら、感染した
生物を直接ＴＳＥ診断することが容易になる。
【００１４】
図１に本方法の典型的なフローチャートを示す。組織においてＴＳＥに誘発さ
れる変化を検出するこの新しい方法は、試料を得てから１分以内に使用者が結果
を知らせることができる。このことは、わずか１２時間後までに結果を得ること
ができるプリオンタンパク質の免疫学的検出および免疫組織学的診断に対して本
方法を優位にしている。従って、通常操作に本発明の方法を用いた場合には、試
験結果を待つのに屠殺体を中間貯蔵する必要は事実上ない。この診断方法の素早
さは屠殺体の貯蔵時間を最小限にし、屠殺体を冷凍保存するのに必要な場所およ
びエネルギー費を最小限にすることができるため、既知の方法と比較して経済的
に有利である。加えて、最終消費の段階において肉がより新鮮になる。
れる変化を検出するこの新しい方法は、試料を得てから１分以内に使用者が結果
を知らせることができる。このことは、わずか１２時間後までに結果を得ること
ができるプリオンタンパク質の免疫学的検出および免疫組織学的診断に対して本
方法を優位にしている。従って、通常操作に本発明の方法を用いた場合には、試
験結果を待つのに屠殺体を中間貯蔵する必要は事実上ない。この診断方法の素早
さは屠殺体の貯蔵時間を最小限にし、屠殺体を冷凍保存するのに必要な場所およ
びエネルギー費を最小限にすることができるため、既知の方法と比較して経済的
に有利である。加えて、最終消費の段階において肉がより新鮮になる。
【００１５】
本方法は、スペクトルを記録し、処理し、そして分類する過程を完全にコンピ
ューターにより制御し、容易に自動化できるため容易に通常（ルーチン）過程に
組み入れることができる。試料調製の比較的簡単な処理過程にスタッフがわずか
に必要ではあるが、他の方法とは異なり、多大な労力（例えば、プロテイナーゼ
Ｋ消化によるプリオンタンパク質の濃縮）または（免疫組織学的方法による）薄
切りの組織の染色などの試料の前処理は必要ではない。
ューターにより制御し、容易に自動化できるため容易に通常（ルーチン）過程に
組み入れることができる。試料調製の比較的簡単な処理過程にスタッフがわずか
に必要ではあるが、他の方法とは異なり、多大な労力（例えば、プロテイナーゼ
Ｋ消化によるプリオンタンパク質の濃縮）または（免疫組織学的方法による）薄
切りの組織の染色などの試料の前処理は必要ではない。
【００１６】
本発明の方法は高度に特殊化した専門家（例えば、組織学者）を必要とせず、
ＴＳＥ診断を最適化するのに一般に知られた方法であるコンピューターによるパ
ターン認識法を用いて、ＩＲスペクトルを分類することで行なうことができる。
このスペクトルは厳格な数学的基準に従って評価されるために、実験から推定す
る必要がなく、ヒトの判断ミスを回避できるので診断の信頼性は高い。
ＴＳＥ診断を最適化するのに一般に知られた方法であるコンピューターによるパ
ターン認識法を用いて、ＩＲスペクトルを分類することで行なうことができる。
このスペクトルは厳格な数学的基準に従って評価されるために、実験から推定す
る必要がなく、ヒトの判断ミスを回避できるので診断の信頼性は高い。
【００１７】
本発明の方法は実施する際には適当なスタッフが必要であるが、材料費が事実
上必要ではないために経済的に妥当な設計である。
上必要ではないために経済的に妥当な設計である。
【００１８】
位置解析について薄切りの組織を分析する特異的ＩＲ顕微鏡法の態様における
本発明の方法の利点は、スペクトル解析における構造情報と本方法から得られる
高位置解析とが組み合わせられることである。病因における個々の神経の関与は
、ＩＲ顕微鏡が提供し得るマッピングを用いて記録し、研究することができる。
本発明方法の診断感度が非常に高いのは、病気の細胞および健康な細胞の特徴が
実際上平均化しないからである、このことはマッピングの相関性を提示しない方
法には当然に起こるのであるが。本方法のこの態様はデータ収集のために比較的
多くの時間をまだ必要とし、検査し位置解析する組織領域の大きさに応じて１〜
６時間かかるかもしれなかった。しかし、本方法は未だに理解されていないＴＳ
Ｅの発病機構の化学的研究および臨床研究に広く利用されるだろう。今後、この
態様は種々の製造業者によって開発されている、いわゆる多数（array）赤外線
探知機と組み合わせることで、位置解析について薄切り領域を完全に、そして大
変短時間にＩＲスペクトル測定することができるようになり、最終的にはこの方
法が通常診断を素早くするのに適することになるだろう。
本発明の方法の利点は、スペクトル解析における構造情報と本方法から得られる
高位置解析とが組み合わせられることである。病因における個々の神経の関与は
、ＩＲ顕微鏡が提供し得るマッピングを用いて記録し、研究することができる。
本発明方法の診断感度が非常に高いのは、病気の細胞および健康な細胞の特徴が
実際上平均化しないからである、このことはマッピングの相関性を提示しない方
法には当然に起こるのであるが。本方法のこの態様はデータ収集のために比較的
多くの時間をまだ必要とし、検査し位置解析する組織領域の大きさに応じて１〜
６時間かかるかもしれなかった。しかし、本方法は未だに理解されていないＴＳ
Ｅの発病機構の化学的研究および臨床研究に広く利用されるだろう。今後、この
態様は種々の製造業者によって開発されている、いわゆる多数（array）赤外線
探知機と組み合わせることで、位置解析について薄切り領域を完全に、そして大
変短時間にＩＲスペクトル測定することができるようになり、最終的にはこの方
法が通常診断を素早くするのに適することになるだろう。
【００１９】
本発明の方法は、始めに死後の生物から組織試料を得ることが必要である。試
料は動物およびヒト生体から獲得し得る。
料は動物およびヒト生体から獲得し得る。
【００２０】
本方法は、用語「伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）」、例えばＢＳＥ、スクレイピ
ーまたはＣＪＤによって表されるそれぞれ特定の臨床型を検出するのに適してい
る。
ーまたはＣＪＤによって表されるそれぞれ特定の臨床型を検出するのに適してい
る。
【００２１】
ＴＳＥに誘導された病理学的変化の認められる組織の全ては、組織試料を収集
する部位として用いることができる。今日我々が知る限りでは、影響を受ける組
織としては中枢神経系、末梢神経系、リンパ系、消化器系、内分泌系、循環系お
よび呼吸器系の器官がある。収集する部位として好ましいのは中枢神経系および
末梢神経系であり、特に都合が良いのは延髄およびバロリアン脳橋（Varolian p
ons）である。本発明方法が実施する特有の方法に応じて組織試料を調製する。
する部位として用いることができる。今日我々が知る限りでは、影響を受ける組
織としては中枢神経系、末梢神経系、リンパ系、消化器系、内分泌系、循環系お
よび呼吸器系の器官がある。収集する部位として好ましいのは中枢神経系および
末梢神経系であり、特に都合が良いのは延髄およびバロリアン脳橋（Varolian p
ons）である。本発明方法が実施する特有の方法に応じて組織試料を調製する。
【００２２】
十分に水分補給させた組織試料を分析するための小さな組織片を収集する。ネ
ガティブ試料を工業用のＩＲキュベットに入れる。もう１つの方法としては、Ｈ 2 Ｏにおける組織原料を均質化し、部分標本をＩＲキュベットに移す。本方法の
変法としては、この懸濁液の部分標本をＩＲ伝達試料ホルダー上で透明フィルム
のように乾燥させる；この乾燥過程は減圧することで促進される（Helm et al.
(1991) J. Gen. Microbiol. 137: 69-79)。
ガティブ試料を工業用のＩＲキュベットに入れる。もう１つの方法としては、Ｈ 2 Ｏにおける組織原料を均質化し、部分標本をＩＲキュベットに移す。本方法の
変法としては、この懸濁液の部分標本をＩＲ伝達試料ホルダー上で透明フィルム
のように乾燥させる；この乾燥過程は減圧することで促進される（Helm et al.
(1991) J. Gen. Microbiol. 137: 69-79)。
【００２３】
局在的な特定のマッピングデータを集めるために、ＩＲ顕微鏡測定する配置に
おいて、本方法を行なうために凍結切片を作成する。これをＩＲの透明顕微鏡ス
ライドに均一にのせる。本方法は薄切りの組織を固定する必要は全くない。この
試料は測定するまで室温の乾燥した場所で保存する。
おいて、本方法を行なうために凍結切片を作成する。これをＩＲの透明顕微鏡ス
ライドに均一にのせる。本方法は薄切りの組織を固定する必要は全くない。この
試料は測定するまで室温の乾燥した場所で保存する。
【００２４】
赤外線導波管を用いる他の態様において、最小侵入技術（minimal invasion t
echnique）を用いて組織内に線導波管を導入し、組織から直接、赤外線スペクト
ルを収集することにより、この方法をインビボに適用することができる。この態
様は、現在利用されている導波管では、まだスペクトル感度が低く、柔軟性がな
く、そして大きすぎるので、赤外線導波管技術を改良し、実用的にすることが必
要である。既述の調製の変法についてキュベット、または試料ホルダー／スライ
ドに適した原料は、従来からＩＲ分光法に用いられる水に不溶性の光学用資材で
あって、その中でもＣａＦ2およびＢａＦ2が特に有用であることが分かった。
echnique）を用いて組織内に線導波管を導入し、組織から直接、赤外線スペクト
ルを収集することにより、この方法をインビボに適用することができる。この態
様は、現在利用されている導波管では、まだスペクトル感度が低く、柔軟性がな
く、そして大きすぎるので、赤外線導波管技術を改良し、実用的にすることが必
要である。既述の調製の変法についてキュベット、または試料ホルダー／スライ
ドに適した原料は、従来からＩＲ分光法に用いられる水に不溶性の光学用資材で
あって、その中でもＣａＦ2およびＢａＦ2が特に有用であることが分かった。
【００２５】
ＩＲスペクトルに必要とされる物質の量およびその表面範囲は非常に狭くする
ことができる。条件設定（例えば、焦点を合わせるビームを用いる若しくは用い
ない、またはＩＲ顕微鏡を使用する分光法）に応じて、試料の大きさはμｇ〜ｎ
ｇの範囲で使用することができる。照射する試料領域の直径は、１〜３ｍｍから
１０〜３０ｍｍの間で変更できる。大きさの下限値は、およそ１個または数個の
細胞（例えば、神経細胞）である。
ことができる。条件設定（例えば、焦点を合わせるビームを用いる若しくは用い
ない、またはＩＲ顕微鏡を使用する分光法）に応じて、試料の大きさはμｇ〜ｎ
ｇの範囲で使用することができる。照射する試料領域の直径は、１〜３ｍｍから
１０〜３０ｍｍの間で変更できる。大きさの下限値は、およそ１個または数個の
細胞（例えば、神経細胞）である。
【００２６】
本発明の方法に基づき、記載した様式で調製した組織試料の赤外線スペクトル
を測定する。従来の分散装置と比較して素早くデータを収集でき、感度が高いこ
とを含めて利点の多いことが知られているフーリエ変換赤外線分光計を用いて、
スペクトルを得ることが好ましい。一般的に従来の分散ＩＲ分光計を用いること
もできるが、それでは本方法が減速することとなるだろう。基本的に、一般に知
られているＩＲ分光分析装置（例えば、透過／吸収、全反射減衰、直接または拡
散反射）のそれぞれを、このスペクトル測定に用いることができる。透過／吸収
分光法が特に有用であることが証明された。
を測定する。従来の分散装置と比較して素早くデータを収集でき、感度が高いこ
とを含めて利点の多いことが知られているフーリエ変換赤外線分光計を用いて、
スペクトルを得ることが好ましい。一般的に従来の分散ＩＲ分光計を用いること
もできるが、それでは本方法が減速することとなるだろう。基本的に、一般に知
られているＩＲ分光分析装置（例えば、透過／吸収、全反射減衰、直接または拡
散反射）のそれぞれを、このスペクトル測定に用いることができる。透過／吸収
分光法が特に有用であることが証明された。
【００２７】
赤外線スペクトルは一般に中赤外線スペクトル領域、即ち５００〜４０００ｃ
ｍ-1において得られる。感染した組織試料および健康な組織試料のスペクトルが
記録したスペクトル領域において特徴的な変化を示すと、使用者が確認した場合
でも近赤外線範囲４０００〜１００００ｃｍ-1内の狭いスペクトル領域でさえ診
断を成功させ得る。１０００〜１３００ｃｍ-1の範囲においてＴＳＥ感染組織と
非感染組織との間に特に際立ったスペクトル差が検出され、この範囲が診断にと
りわけ好ましいことが分かった。
ｍ-1において得られる。感染した組織試料および健康な組織試料のスペクトルが
記録したスペクトル領域において特徴的な変化を示すと、使用者が確認した場合
でも近赤外線範囲４０００〜１００００ｃｍ-1内の狭いスペクトル領域でさえ診
断を成功させ得る。１０００〜１３００ｃｍ-1の範囲においてＴＳＥ感染組織と
非感染組織との間に特に際立ったスペクトル差が検出され、この範囲が診断にと
りわけ好ましいことが分かった。
【００２８】
１つまたはいくつかの好ましいスペクトル領域は、スペクトルの外観検査（対
象群と比較して、強く、そして最も特徴的な変化を示す領域を選択すること）ま
たはスペクトル特性を選択するのに一般に知られた多変量法によって選択するこ
とができる。
象群と比較して、強く、そして最も特徴的な変化を示す領域を選択すること）ま
たはスペクトル特性を選択するのに一般に知られた多変量法によって選択するこ
とができる。
【００２９】
物理的パラメーター、例えばスペクトル分解または多数のスペクトル平均など
は分類または診断の成功に重大な影響を実際に与えることなく、ＩＲ分光法にお
ける典型的な範囲内で変更し得る。スペクトルの取得および試料の調製について
のパラメータを決定する場合、非感染動物由来の組織試料の対象測定を含め、全
ての測定に対して同一のパラメーターが選択されなければならない。
は分類または診断の成功に重大な影響を実際に与えることなく、ＩＲ分光法にお
ける典型的な範囲内で変更し得る。スペクトルの取得および試料の調製について
のパラメータを決定する場合、非感染動物由来の組織試料の対象測定を含め、全
ての測定に対して同一のパラメーターが選択されなければならない。
【００３０】
スペクトル条件はスペクトル分類における選択された数学的な統計方法が何で
あるかに関係無く有利であることを証明した。ここで用い得る一般に知られた方
法には一次または二次微分の計算、デコンヴォルーション、またはその他スペク
トルの明暗を増加させ、バンドの認識を容易にし、そして生じ得る基準問題を最
小限にする方法が挙げられる。サンプル群を大きくする場合は、因子分析などの
多変量統計法を使用することが重要なデータ整理の助けとなることが分かった。
あるかに関係無く有利であることを証明した。ここで用い得る一般に知られた方
法には一次または二次微分の計算、デコンヴォルーション、またはその他スペク
トルの明暗を増加させ、バンドの認識を容易にし、そして生じ得る基準問題を最
小限にする方法が挙げられる。サンプル群を大きくする場合は、因子分析などの
多変量統計法を使用することが重要なデータ整理の助けとなることが分かった。
【００３１】
本方法は先に参考スペクトルのデータベースを作成することが必要である。Ｔ
ＳＥに感染した生体および非感染個体由来の試料のスペクトルを測定する。試料
を調製し、未知試料を用いるのと同じ方法でスペクトルを得る。参考および試料
の測定に対するパラメーターが全て同一であることが重要である。
ＳＥに感染した生体および非感染個体由来の試料のスペクトルを測定する。試料
を調製し、未知試料を用いるのと同じ方法でスペクトルを得る。参考および試料
の測定に対するパラメーターが全て同一であることが重要である。
【００３２】
試験する試料のスペクトルと参考データベースに保存されたスペクトルとを比
較する。スペクトルはパターン認識法、例えば多変量統計アルゴリズム、人工神
経ネットワークまたは遺伝的アルゴリズムなどを用いて分類されることが好まし
い。この段階では、健康またはＴＳＥ感染のような２つのクラス問題に基づいて
スペクトルを分類する。
較する。スペクトルはパターン認識法、例えば多変量統計アルゴリズム、人工神
経ネットワークまたは遺伝的アルゴリズムなどを用いて分類されることが好まし
い。この段階では、健康またはＴＳＥ感染のような２つのクラス問題に基づいて
スペクトルを分類する。
【００３３】
本方法を位置解析に用いる場合には、試料（顕微鏡のスライドに適する薄切り
の組織）を赤外線顕微鏡のビームパスに置く。赤外線分光処理における透過また
は反射によって、スペクトルを得ることができる。赤外線スペクトルは種々の組
織領域から得られる。位置解析は測定する位置間の増分（インクリメント）によ
り決定され得る。規定された増分を伴う自由に選択できる格子に基づき、自動ス
ペクトル測定を容易にするコンピューターに制御されたＸ−Ｙステージを用いる
ことは大変便利である。このＸ−ＹステージはＩＲ顕微鏡分野の標準的な付属物
である。
の組織）を赤外線顕微鏡のビームパスに置く。赤外線分光処理における透過また
は反射によって、スペクトルを得ることができる。赤外線スペクトルは種々の組
織領域から得られる。位置解析は測定する位置間の増分（インクリメント）によ
り決定され得る。規定された増分を伴う自由に選択できる格子に基づき、自動ス
ペクトル測定を容易にするコンピューターに制御されたＸ−Ｙステージを用いる
ことは大変便利である。このＸ−ＹステージはＩＲ顕微鏡分野の標準的な付属物
である。
【００３４】
位置解析（マッピング）における測定結果は、連続赤外線スペクトルにおける
それぞれのスペクトルが薄切りの組織の虚像格子の画素を表す。このようにして
、薄切りの組織の選択された領域を完全に網羅するＩＲデータが得られる。組織
におけるＴＳＥの広がりについての特有の位置情報は、それぞれのマッピング記
録と参照データベースとを比較した後に、健康または感染のように分類すること
で支持される。本発明の方法を用いた赤外線スペクトルにおける疾患に特有の変
形に基づき、スクレイピーに感染したハムスターから得られたＣＮＳ試料を、健
康な対象動物から得られた試料と区別し得る方法を、以下の実施例において例示
する。
それぞれのスペクトルが薄切りの組織の虚像格子の画素を表す。このようにして
、薄切りの組織の選択された領域を完全に網羅するＩＲデータが得られる。組織
におけるＴＳＥの広がりについての特有の位置情報は、それぞれのマッピング記
録と参照データベースとを比較した後に、健康または感染のように分類すること
で支持される。本発明の方法を用いた赤外線スペクトルにおける疾患に特有の変
形に基づき、スクレイピーに感染したハムスターから得られたＣＮＳ試料を、健
康な対象動物から得られた試料と区別し得る方法を、以下の実施例において例示
する。
【００３５】実施例１
成体のシリアンハムスター（Mesocricetus auratus）の雌にスクレイピー株２
６３Ｋ（Dr. Richard Kimberlinから提供された）を大脳内および腹膜内に感染
させた。この疾患の終末期（感染後７０〜１２０日目）において、この動物の脳
（Ｓ）および適合する非感染対象動物の脳を死後に取り出した；比較するための
対応する組みの年齢は近似している。ＣａＦ2窓付きの、光路長８μｍ（層の厚
み）のＦＴＩＲキュベットにありのままに切除した延髄およびバロリアン脳橋の
小片（μｇ量規模）を入れた。ＦＴＩＲ分光計（スペクトル分解：４ｃｍ-1、ア
ポディゼーション：ハップ−ジェンゼル（Happ-Genzel）、走査数：１２６、ゼ
ロ充填：４）を用いて、この試料の赤外線スペクトルを透過／吸収について測定
した。Ｓ−およびＮ−組織試料の２つの典型的なスペクトルを図２に示す、１３
００〜１０００ｃｍ-1のスペクトル領域に観察され得る差は特に際立っている。
バンドを良好に視覚化するため２次微分を表し、バンドピークを極小値として示
す。
６３Ｋ（Dr. Richard Kimberlinから提供された）を大脳内および腹膜内に感染
させた。この疾患の終末期（感染後７０〜１２０日目）において、この動物の脳
（Ｓ）および適合する非感染対象動物の脳を死後に取り出した；比較するための
対応する組みの年齢は近似している。ＣａＦ2窓付きの、光路長８μｍ（層の厚
み）のＦＴＩＲキュベットにありのままに切除した延髄およびバロリアン脳橋の
小片（μｇ量規模）を入れた。ＦＴＩＲ分光計（スペクトル分解：４ｃｍ-1、ア
ポディゼーション：ハップ−ジェンゼル（Happ-Genzel）、走査数：１２６、ゼ
ロ充填：４）を用いて、この試料の赤外線スペクトルを透過／吸収について測定
した。Ｓ−およびＮ−組織試料の２つの典型的なスペクトルを図２に示す、１３
００〜１０００ｃｍ-1のスペクトル領域に観察され得る差は特に際立っている。
バンドを良好に視覚化するため２次微分を表し、バンドピークを極小値として示
す。
【００３６】実施例２
実施例１に記載の態様の変法として、実施例１のようにして得られた１０個の
Ｓ−サンプルおよび１０個のＮ−サンプルを水中にてホモジナイズした（組織原
料１ｍｇ当たり水１０μｌ）。懸濁液３５μｌを微生物試料の測定にも適してい
るＺｎＳｅ製のＰＣ制御多数試料ホルダーに適用し（Helm et al. (1991) J. Ge
n. Microbiol. 137: 69-79; Heim et al. (1991) J. Microbiol. Meth. 14: 127
-142; Neumann (1998) Proc. SPIE 3257: 245-257）、文献に記載するように乾
燥させた。このようにして、得られたフィルムの赤外線透過スペクトルを測定し
、１１００〜１０００ｃｍ-1のスペクトル領域におけるスペクトルの二次微分に
基づいて階層的に分類した。ワードの（Ward's）アルゴリズムを用いて計算した
このスペクトル分類の系統樹を図３に示す。感染させた動物（Ｓ−３からＳ−１
０）のスペクトルは、健康な動物（Ｎ−１からＮ−１０）のスペクトルと完全に
同定し得る。
Ｓ−サンプルおよび１０個のＮ−サンプルを水中にてホモジナイズした（組織原
料１ｍｇ当たり水１０μｌ）。懸濁液３５μｌを微生物試料の測定にも適してい
るＺｎＳｅ製のＰＣ制御多数試料ホルダーに適用し（Helm et al. (1991) J. Ge
n. Microbiol. 137: 69-79; Heim et al. (1991) J. Microbiol. Meth. 14: 127
-142; Neumann (1998) Proc. SPIE 3257: 245-257）、文献に記載するように乾
燥させた。このようにして、得られたフィルムの赤外線透過スペクトルを測定し
、１１００〜１０００ｃｍ-1のスペクトル領域におけるスペクトルの二次微分に
基づいて階層的に分類した。ワードの（Ward's）アルゴリズムを用いて計算した
このスペクトル分類の系統樹を図３に示す。感染させた動物（Ｓ−３からＳ−１
０）のスペクトルは、健康な動物（Ｎ−１からＮ−１０）のスペクトルと完全に
同定し得る。
【００３７】実施例３
実施例１および２に記載の態様の変法として、既述のＮ−およびＳ−動物から
得られたＣＮＳ試料の凍結切片を作り、一般に知られているＦＴＩＲマッピング
法（Diem et al. (1999) Appl. Spectroscopy 53: 148A-160A; Lasch & Neumann
(1998) Cell. Mol. Biol. 44; 189-202; Choo et al. (1996) Biophys. J. 71:
1672-1679）および赤外線映像法（Lasch & Neumann (1998) Cell. Mol. Biol.
44: 189-202: Lasch et al. (1998) Proc. SPIE 3257: 187-198）を用いて測定
し、特徴づけした。６０μｍの開口を通じてインクリメント５０μｍにおいて１
．５ｍｍ×１．５ｍｍ領域のスペクトルを得た。はじめに、種々の脳構造に対す
る典型的なスペクトルを区別するために、Ｓ−およびＮ−試料から得られたスペ
クトルを階層的に別々に分類した。図４Ａは、１４５０と９５０ｃｍ-1の間にお
ける主要素の３つに基づいて主要素分析を行ない（およそ５００点のデータ）、
データ圧縮をした後に計算した系統樹を示す。細胞学的に定義された４つの脳構
造：分子層、神経節細胞層、顆粒細胞層、白質物質に、主な４つの分類を割り当
てることができる。加えて、小脳内の特定の構造に対応する９つのスペクトル分
類（１〜９の番号をつける）に分けた。図４Ａは９３０スペクトルを含む３番目
のスペクトルのマッピング記録を、より鮮明にするためにそれぞれ示すだけであ
る。続いて、Ｎ−およびＳ−試料の相当するスペクトル分類のスペクトル（例え
ば、分子層スペクトルの分類２−小脳の灰白質）を比較した。図４Ｂの上部（ａ
）では、スクレイピーに感染した動物由来の試料スペクトル（破線）と健康な動
物由来の試料スペクトル（実線）の標準ベクトル２次微分とを比較する。下部は
それぞれの組織構造について、ａ）のＳ−およびＮ−スペクトルの標準ベクトル
の差スペクトルを示す。この比較に用いられたスペクトルは全て図４Ａ）のスペ
クトル分類Ａのスペクトルの平均である。これらは小脳層の名前およびスペクト
ル分類の数によって同定される。それぞれの組織分類に観察される特徴的なスペ
クトル差は、疾患に関連する病理過程を確実に診断するのに適している。
得られたＣＮＳ試料の凍結切片を作り、一般に知られているＦＴＩＲマッピング
法（Diem et al. (1999) Appl. Spectroscopy 53: 148A-160A; Lasch & Neumann
(1998) Cell. Mol. Biol. 44; 189-202; Choo et al. (1996) Biophys. J. 71:
1672-1679）および赤外線映像法（Lasch & Neumann (1998) Cell. Mol. Biol.
44: 189-202: Lasch et al. (1998) Proc. SPIE 3257: 187-198）を用いて測定
し、特徴づけした。６０μｍの開口を通じてインクリメント５０μｍにおいて１
．５ｍｍ×１．５ｍｍ領域のスペクトルを得た。はじめに、種々の脳構造に対す
る典型的なスペクトルを区別するために、Ｓ−およびＮ−試料から得られたスペ
クトルを階層的に別々に分類した。図４Ａは、１４５０と９５０ｃｍ-1の間にお
ける主要素の３つに基づいて主要素分析を行ない（およそ５００点のデータ）、
データ圧縮をした後に計算した系統樹を示す。細胞学的に定義された４つの脳構
造：分子層、神経節細胞層、顆粒細胞層、白質物質に、主な４つの分類を割り当
てることができる。加えて、小脳内の特定の構造に対応する９つのスペクトル分
類（１〜９の番号をつける）に分けた。図４Ａは９３０スペクトルを含む３番目
のスペクトルのマッピング記録を、より鮮明にするためにそれぞれ示すだけであ
る。続いて、Ｎ−およびＳ−試料の相当するスペクトル分類のスペクトル（例え
ば、分子層スペクトルの分類２−小脳の灰白質）を比較した。図４Ｂの上部（ａ
）では、スクレイピーに感染した動物由来の試料スペクトル（破線）と健康な動
物由来の試料スペクトル（実線）の標準ベクトル２次微分とを比較する。下部は
それぞれの組織構造について、ａ）のＳ−およびＮ−スペクトルの標準ベクトル
の差スペクトルを示す。この比較に用いられたスペクトルは全て図４Ａ）のスペ
クトル分類Ａのスペクトルの平均である。これらは小脳層の名前およびスペクト
ル分類の数によって同定される。それぞれの組織分類に観察される特徴的なスペ
クトル差は、疾患に関連する病理過程を確実に診断するのに適している。
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フロントページの続き
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ
，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，
ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ
Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ
)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，
ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ，
ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＭ，Ｄ
Ｚ，ＥＥ，ＧＤ，ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ
，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，
ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，Ｎ
Ｚ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ
，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
(72)発明者 エリーザベト・バルダウフ
ドイツ連邦共和国デー−14624ダルゴヴ、
バーンホーフシュトラーセ45ツェー番
(72)発明者 ペーター・ラッシュ
ドイツ連邦共和国デー−10247ベルリン、
ミュッゲルシュトラーセ24番
(72)発明者 ミヒャエル・ベーケス
ドイツ連邦共和国デー−14624ダルゴヴ、
バーンホーフシュトラーセ45ツェー番
Ｆターム(参考） 2G045 AA24 AA25 BA14 CB01 FA16
FA25 GB01
2G059 AA06 BB12 BB14 CC16 DD13
EE01 EE02 EE10 EE12 FF03
HH01 HH06 JJ17 MM01 MM03
MM05 MM10
Claims (10)
- 【請求項１】 組織におけるＴＳＥに誘導された病理学的変化を診断する方
法であって、該変化がスクレイピー、ＢＳＥまたは他のＴＳＥ疾患群の疾患によ
って引き起こされ、 （ａ）ＴＳＥが原因の病理学的変化を示す組織試料に赤外線を照射し、試料と相
互作用した後のスペクトル特性を記録する、そして （ｂ）このようにして得られた赤外線スペクトルを、ＴＳＥに感染した組織およ
び非感染組織の赤外線スペクトルを含む参考データベースと比較し、分類するこ
とを特徴とする診断方法。 - 【請求項２】 該組織試料が中枢神経系、末梢神経系、またはリンパ系、消
化器系、内分泌系、循環系若しくは呼吸器系の器官から採取された組織試料であ
ることを特徴とする、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 組織の該赤外線スペクトルが中赤外線領域５００〜４０００
ｃｍ-1または近赤外線領域４０００〜１００００ｃｍ-1、あるいは両方の領域の
１つまたは幾つかの領域において測定されることを特徴とする、請求項１および
２のいずれかに記載の方法。 - 【請求項４】 組織の該赤外線スペクトルが中赤外線領域１０００〜１３０
０ｃｍ-1のスペクトル領域において測定されることを特徴とする、請求項１〜３
のいずれかに記載の方法。 - 【請求項５】 該赤外線スペクトルが該試料と相互作用し、特徴的に変化し
た輻射を透過／吸収、全反射減衰、直接または拡散反射の測定器具において、あ
るいはＩＲ導波管を用いることによって検出することを特徴とする、請求項１〜
４のいずれかに記載の方法。 - 【請求項６】 試験した試料の該赤外線スペクトルを１つまたは幾つかのパ
ターン認識法、好ましくは多変量統計アルゴリズムまたは人工神経ネットワーク
を用いて参考データベースと比較し、最適なスペクトル特性を抜き出す方法、例
えば遺伝的アルゴリズムを用いて当該比較が基づくスペクトル認識を決定するこ
とを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。 - 【請求項７】 該赤外線スペクトルが、透過または直接反射分光分析のため
のＩＲ顕微鏡を用いて薄切りの組織について測定されることを特徴とする、請求
項１〜６のいずれかに記載の方法。 - 【請求項８】 該赤外線スペクトルが位置解析において測定されること、即
ち赤外線ビームが試料を透過する組織部位についてマッピングすることを特徴と
する、請求項７に記載の方法。 - 【請求項９】 マッピングした赤外線スペクトルのそれぞれと参考データベ
ースとを比較することで、組織における疾患の広がりについての局在的な情報を
得ることを特徴とする、請求項７および８のいずれかに記載の方法。 - 【請求項１０】 該参考データベースが、赤外分光法を用いて組織の区域を
同定することができるＴＳＥに感染した組織および非感染組織の全構造について
の参考スペクトルを含むことを特徴とする、請求項７〜９のいずれかに記載の方
法。
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|---|---|---|---|
| DE19923811.1 | 1999-05-20 | ||
| DE19923811A DE19923811C1 (de) | 1999-05-20 | 1999-05-20 | Verfahren zur Diagnose TSE-induzierter Veränderungen in Geweben mittels Infrarotspektroskopie |
| PCT/DE2000/001404 WO2000072007A2 (de) | 1999-05-20 | 2000-05-03 | Verfahren zur diagnose tse-induzierter veränderungen in geweben mittels infrarotspektroskopie |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003500648A true JP2003500648A (ja) | 2003-01-07 |
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ID=7909061
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|---|---|---|---|
| JP2000620345A Expired - Fee Related JP3569231B2 (ja) | 1999-05-20 | 2000-05-03 | Ｔｓｅに誘発された組織変化を赤外分光法を用いて診断する方法 |
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| EP (1) | EP1181552B1 (ja) |
| JP (1) | JP3569231B2 (ja) |
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| AU (1) | AU5671500A (ja) |
| DE (3) | DE19923811C1 (ja) |
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| ES (1) | ES2193967T3 (ja) |
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| WO2007126004A1 (ja) * | 2006-04-26 | 2007-11-08 | Dic Corporation | スペクトル分析装置およびそのプログラム |
| JP2013528419A (ja) * | 2010-05-03 | 2013-07-11 | エモヴィ インコーポレーテッド | 膝関節病状評価および診断補助のための方法ならびにシステム |
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| DE10109901B4 (de) * | 2001-02-22 | 2004-02-05 | Bundesrepublik Deutschland vertreten durch den Bundesminister für Gesundheit, dieses vertreten durch das Robert-Koch-Institut, vertreten durch seinen Leiter | Verfahren zum Nachweis von TSE-induzierten Veränderungen in menschlichen und tierischen Körperflüssigkeiten |
| DE10127500A1 (de) * | 2001-06-06 | 2002-12-12 | Simon Kammermeier | Verfahren zur Früherkennung von BSE bei Rindern |
| US20040171026A1 (en) * | 2001-09-05 | 2004-09-02 | Hochstrasser Denis Francois | Diagnostic method for transmissible spongiform encephalopathies |
| GB2379737A (en) * | 2001-09-05 | 2003-03-19 | Univ Geneve | Diagnostic method for spongiform encephalopathy disease |
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| ES2246113B1 (es) * | 2003-10-31 | 2007-04-01 | Consejo Sup. De Invest. Cientificas | Procedimiento de deteccion ante-mortem de proteinas prionicas por espectroscopia infrarroja y su uso en el diagnostico de encefalopatias espongiformes transmisibles. |
| DE102004061064A1 (de) * | 2004-12-18 | 2006-06-29 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren und Vorrichtung zur spektroskopischen Untersuchung von Körperflüssigkeiten und Gewebeproben hinsichtlich eines erhöhten Alzheimerverdachts |
| JP5047962B2 (ja) * | 2006-07-06 | 2012-10-10 | 株式会社疲労科学研究所 | 近赤外光を用いたガン、全身性エリテマトーデス（ｓｌｅ）又は抗リン脂質抗体症候群に関する検査・診断装置の作動方法 |
| DE102008035532B4 (de) | 2008-07-29 | 2016-01-07 | Carl Zeiss Ag | Verfahren zur Bestimmung der Reflexionscharakteristik einer Substanz |
| US8655807B2 (en) * | 2010-04-05 | 2014-02-18 | Applied Research Associates, Inc. | Methods for forming recognition algorithms for laser-induced breakdown spectroscopy |
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| EP0644412A3 (de) | 1993-09-17 | 1995-08-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Analyse klinisch relevanter Flüssigkeiten und Suspensionen. |
| US6031232A (en) * | 1995-11-13 | 2000-02-29 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Method for the detection of malignant and premalignant stages of cervical cancer |
| DE19841217B4 (de) * | 1997-10-27 | 2005-06-16 | Applied Photonics Worldwide, Inc., Reno | Gerät und Verfahren zur spektroskopischen Analyse von menschlichem oder tierischem Gewebe oder Körperfluiden |
| US6399314B1 (en) * | 1999-12-29 | 2002-06-04 | American Cyanamid Company | Methods of detection of amyloidogenic proteins |
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2000
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