JP2003137786A

JP2003137786A - 発癌抑制効能を有するテオブロミン

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Publication number: JP2003137786A
Application number: JP2002270191A
Authority: JP
Inventors: Hyong Joo Lee; ヒョンジュリ; Ki Won Lee; キウォンリ; Kyung Sun Kang; キョンソンカン; Dong Young Kim; ドンヨンキム; Hyung Hwan Park; ヒュンファンパク; Manjon Ri; マンジョンリ; Han Soo Kim; ハンスキム; Ik Boo Kwon; イクブクウォン
Original assignee: Lotte Co Ltd; Lotte Confectionery Co Ltd
Current assignee: Lotte Co Ltd; Lotte Confectionery Co Ltd
Priority date: 2001-10-18
Filing date: 2002-09-17
Publication date: 2003-05-14
Also published as: CN1411813A; EP1304046A1; CN1823626A; US20030099686A1; US6693104B2; KR20030032484A; CN1250224C; EP1707207A2; CN100571540C; EP1707207A3; EP1304046B1

Abstract

(57)【要約】【課題】発癌抑制効能を有するテオブロミンを提供す
る。【解決手段】一種のキサンチン誘導体であるテオブロ
ミンは、肝癌を含む種々の癌の促進段階で発生する病理
的現象であるＧＪＩＣ(gap junctional intercellular
communication)の抑制を阻害し、また、癌細胞のＤＮＡ
合成を阻害することにより癌細胞増殖阻害効能を有する
テオブロミンを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、発癌抑制効能を有
するテオブロミンに関し、さらに詳細には、一種のキサ
ンチン誘導体であるテオブロミンが肝癌を含む種々の癌
の促進段階で発生する病理的現象であるＧＪＩＣ(gap j
unctional intercellular communication)の抑制を阻害
し、また、癌細胞のＤＮＡ合成を阻害することにより癌
細胞増殖阻害効能を有するテオブロミンに関する。

【０００２】

【従来の技術】数十年の間、手術、放射線療法、そして
化学療法による治療が行われてきたが、実質的に肝癌、
胃癌、大腸癌を含む大部分の上皮細胞癌の発生率および
これらによる死亡率は減っていない[Sporn, M. B., Lan
cet, 347:1377-1381, 1996 (非特許文献１)]。その理由
は、去る３０年の間、癌を予防的なアプローチより治療
的なアプローチによって研究してきたからである。した
がって、既に明かになったように、数十年の間持続する
癌の多段階的発生を効果的に阻害するか又は遅らせる成
分や食品を摂取することは、癌の発生および死亡率の低
下においてより実質的な結果をもたらすことができ、近
来これに対する多くの研究が行われている[Kang et a
l., Chemoprevention of cancer, Korea Medicine, 200
0 (非特許文献２); Surh, Y. J., Mutat. Res, 428:305
-327, 1999 (非特許文献３); Sporn,M. B., Lancet, 34
7:1377-1381, 1996 (非特許文献１); Caragay, A. B.,
FoodTechnol., 65-68, 1992 (非特許文献４)]。

【０００３】癌化過程は多段階となっており、開始、促
進、進行の三つの段階に大きく分類される。最近は、癌
の予防および抑制剤を開発するに当って、非可逆的で短
時間で進行する癌の開始段階に対する阻害剤よりは、実
質的な癌の予防および抑制剤として、癌の促進および進
行段階の阻害効果を有する物質に集中して研究がされて
いる[ガン・ジンソクの外、化学的癌予防、高麗医学、2
000 （非特許文献２）; Surh, Y. J., Mutat. Res, 42
8:305-327, 1999 (非特許文献３); Sporn, M. B., Lanc
et, 347:1377-1381, 1996 (非特許文献１)]。特に、薬
剤とは異なり、食品抽出物および分画物による癌の予防
および抑制は、可逆的で２０年以上の長期間にわたって
進行される促進段階の阻害効能を有することが、非可逆
的で短時間で進行される開始段階より遥かに現実的であ
ろう[Kang et al., Chemoprevention of cancer, Korea
Medicine, 135-136, 2000 (非特許文献２); Yamasaki,
H.et al, Carcinogenesis 11: 1051-1058, 1999 (非特
許文献５); Kelloff. G. J.et al., Eur. J. Cancer, 3
5: 1755-1762, 1999 (非特許文献６); Surh, Y. J., Mu
tat. Res, 428: 305-327, 1999 (非特許文献３)]。

【０００４】種々の組織において細胞の恒常性維持に重
要な役割をするＧＪＩＣ(gap junctional intercellula
r communication)の抑制は、多段階の癌化過程のうち、
特に癌の促進段階において発生する重要な生化学的指標
として認められており、このような過程を阻害する物質
は癌の促進段階を阻害することにより癌の予防および抑
制効果を有すると認められている。また、癌細胞のＤＮ
Ａ合成による増殖は癌の促進段階の重要な生化学的指標
として認められており、このような過程を阻害する物質
は癌の進行段階を阻害することにより、癌の予防および
抑制効果を有すると認められている[Kang et al., Chem
oprevention of cancer, Korea Medicine, 135-136, 20
00 (非特許文献２); Yamasaki, H. et al, Carcinogene
sis 11:1051-1058, 1990 (非特許文献５); Kelloff. G.
J. et al., Eur. J. Cancer, 35:1755-1762,1999 (非
特許文献６); Surh, Y. J., Mutat. Res, 428: 305-32
7, 1999 (非特許文献３); Holder. J. W. et al., Canc
er Res., 53:3475-3485, 1993 (非特許文献７)]。

【０００５】コーヒー、茶、コーラ、チョコレートなど
のような種々の食品にはキサンチン誘導体であるカフェ
インが含有されている[イ・ウジュ、薬理学講義、医学
文化社, 195-198, 1993]。しかし、カフェインとは異な
り、一種のキサンチン誘導体であるテオブロミンは、特
にカカオ豆および豆皮に多量含有されている。一般に、
カカオ豆にはテオブロミンが約１．５〜３％、カカオ豆
の皮には約２％程含有されており、カカオ豆を原料とし
て作られるチョコレートのような加工食品には約０．２
〜０．５％程含有されているが、これは、カフェイン含
有量の約７〜１０倍に該当する[Barry, L. Z. et al.,
J. Food Sci., 45:314-316, 1980 (非特許文献８)]。キ
サンチン誘導体の一般的な薬理作用としては、中枢神経
興奮作用、骨格筋および心筋の興奮作用、平滑筋および
冠状動脈の弛緩効果、胃酸分泌亢進および利尿効果など
がある。しかし、テオブロミンのこのような薬理作用は
カフェインより遥かに弱いと知られている[イ・ウジ
ュ、薬理学講義、医学文化社、195-198, 1993]。また、
カフェインが種々の食品に広く存在し、様々な薬理作用
を有するのに対し、テオブロミンはカカオ豆および豆皮
にのみ相当量存在するという特性によってカフェインに
比べて多くの研究が行われてはいない。

【０００６】カフェインは、現在まで胃癌治療剤の相乗
作用[Takahashi, M. et al., Anticancer Res. 18:4399
-4402, 1998 (非特許文献９)]、肺癌の阻害作用[Jeffre
y, C. et al., Cancer Res. 38:1757-1761, 1978 (非特
許文献１０); Chung, F. L.et al., Cancer Res., 58:4
096-4101, 1998 (非特許文献１１)]、発癌誘導物質であ
るＴＰＡ(12-O-tetradecanoyphorbol-13-acetate)によ
って誘導される癌化過程の阻害効果[Perchellet, J. P.
et al., Cancer Res. 41:3927-3925, 1981(非特許文献
１２)]など一部癌の阻害効果があると報告された。ま
た、緑茶および紅茶の癌予防効能においてポリフェノー
ル以外にカフェインもまた重要な役割をすると報告され
た[Yang. C. S., Biofactor 13:73-79, 1999 (非特許文
献１３); Huang, M.T. et al., Cancer Res. 57: 2623-
2629, 1997 (非特許文献１４);Lu, Y.P. et al., Cance
r Res., 61: 5002-5009, 2001 (非特許文献１５)]。

【０００７】しかし、これまでカカオ豆およびカカオ豆
の皮に含有されているテオブロミンの癌予防および抑制
効能に関する研究は報告されていない。特に、韓国人お
よび東洋人に最も高い発病率および死亡率を示す肝癌お
よび胃癌、大腸癌に対する予防および抑制効能に関する
報告はされていない。

【０００８】

【非特許文献１】スポーン・エム・ビー (Sporn, M.
B.), ランセット (Lancet), 1996年, 347巻, p1377-138
1

【非特許文献２】カン他(Kang et al.), ケモプリベン
ション・オブ・キャンサー (Chemoprevention of cance
r), コレアメディスン (Korea Medicine), 2000年, p13
5-136

【非特許文献３】スルス・ワイ・ジェー (Surh, Y.
J.), ミューテーション・リサーチ (Mutat.Res), 1999
年, 428巻, p305-327

【非特許文献４】キャラゲイ・エー・ビー(Caragay, A.
B.), フードテクノロジー (Food Technol.), 1992年,
p65-68

【非特許文献５】山崎他 (Yamasaki, H. et al), カル
シノゲシス (Carcinogenesis), 1999年,11巻: p1051-10
58

【非特許文献６】ケロフ・ジー・ジェー他 (Kelloff.
G. J. et al.), ユーロピアン・ジャーナル・オブ・キ
ャンサー (Eur. J. Cancer), 1999年, 35巻, p1755-176
2

【非特許文献７】ホールダー・ジェイ・ダブリュウ他
(Holder. J. W. et al.), キャンサー・リサーチ (Canc
er Res.), 1993年, 53巻, p3475-3485

【非特許文献８】バリー・エル・ゼット他 (Barry, L.
Z. et al.), ジャーナル・オブ・フード・サイエンス
(J. Food Sci.), 1980年, 45巻, p314-316

【非特許文献９】高橋他 (Takahashi, M. et al.), ア
ンティキャンサー・リサーチ (Anticancer Res.) 1998
年, 18巻, p4399-4402

【非特許文献１０】ジェフリー・シー他 (Jeffrey, C.
et al.), キャンサー・リサーチ (CancerRes.) 1978年,
38巻, p1757-1761

【非特許文献１１】チャン・エフ・エル他 (Chung, F.
L. et al.), キャンサー・リサーチ (Cancer Res.), 19
98年, 58巻, p4096-4101

【非特許文献１２】パルチェッレット・ジェイ・ピー他
(Perchellet, J. P. et al.), キャンサー・リサーチ
(Cancer Res.) 1981年, 41巻, 3927-3925

【非特許文献１３】ヤン・シー・エス (Yang. C. S.),
バイオファクター (Biofactor), 1999年,13巻 p73-79

【非特許文献１４】ヒュアング・エム・ティー他 (Huan
g, M.T. et al.), キャンサー・リサーチ(Cancer Res.)
1997年, 57巻, p2623-2629

【非特許文献１５】ルー・ワイ・ピー他 (Lu, Y.P. et
al.), キャンサー・リサーチ (Cancer Res.), 2001年,
61巻, p5002-5009

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明者ら
は、人体への安全性が確保された天然食品由来の発癌抑
制剤を鋭意研究した結果、カカオ豆およびカカオ豆の皮
に多量含有されているテオブロミンが生体内での恒常性
維持に重要な役割をし、発癌促進および進行段階におい
て発生するＧＪＩＣの抑制を阻害し、また、肝癌および
胃癌、大腸癌細胞のＤＮＡ合成を阻害して癌細胞の増殖
抑制効能を有することによりテオブロミンが発癌抑制効
能を有することを発見し、本発明を完成するに至った。
したがって、本発明は、テオブロミンを有効成分とする
発癌抑制剤を提供することにその目的がある。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明は、下記一般式
（Ｉ）で表されるテオブロミンを有効成分として含む発
癌抑制剤をその特徴とする。

【００１１】

【化３】

【００１２】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明によるテオブロミンは、癌の促進および進行過程
で発生する現象であるＧＪＩＣ(gap junctional interc
ellular communication)を抑制することおよび癌細胞の
ＤＮＡ合成を阻害して増殖を阻害する効能を示すことに
より、癌の予防および抑制に有用である。

【００１３】したがって、本発明は、カカオ豆または豆
皮から分離するか、化学的に合成したテオブロミンを有
効成分として含む医薬品または食品添加剤を含む。本発
明による乾燥カカオ豆からカカオバターを除去してから
残った分画物(カカオマス)またはカカオ豆の皮１重量部
に、５０％アセトン、５０％エタノールまたは５０％メ
タノール[Duksan, Korea]水溶液４〜１０重量部を加
え、４０〜７０℃の温度で４〜６時間還流しながら攪拌
抽出した後、抽出物を遠心分離して得られた上澄液を集
め、残滓を繰り返して抽出した後、前記抽出物を濾過、
乾燥してカカオ豆または豆皮抽出物を得る。この抽出物
を公知の方法であるKreiser'smethod[Kreiser, W. R.,
et al, J. Assoc. Off. Anal. Chem., 61:1424-1428,19
78]に従ってＨＰＬＣを用いてテオブロミンを分離す
る。

【００１４】前記方法で得られたテオブロミンまたは化
学的に合成されたテオブロミンに対してＧＪＩＣの抑制
および癌細胞の増殖阻害効果を調査する。テオブロミン
は、癌の促進および進行過程で発生するＧＪＩＣの抑制
および癌細胞増殖を阻害することにより癌の予防および
抑制効果が確認された。一方、本発明は、テオブロミン
を有効成分とする医薬品または食品添加剤を含むが、前
記抽出物医薬品または食品添加剤への製造方法は公知の
方法に従う。

【００１５】医薬物に製造する際には、テオブロミンそ
の自体でも使用できるが、薬剤学的に許容可能な担体(c
arrier)、賦形剤(forming agent)、希釈剤(diluent)な
どと混合して粉末、顆粒、カプセルまたは注射剤などに
製造可能である。また、本発明によるテオブロミンの投
与容量は、体内吸収度、体重、患者の年齢、性別、健康
状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率、疾患の重症
度などによって変化し、一般に、テオブロミンは体重１
ｋｇ当り０．１〜５ｍｇ程投与することが好ましい。し
たがって、本発明の有効成分を含む薬剤は有効量の範囲
を考慮して製造し、このように剤型化した単位投与型製
剤は、必要に応じて薬剤の投与を監視するか観察する専
門家の判断と個人の要求に応じて、専門化された投薬法
を使用するか一定時間の間隔で数回投与することができ
る。

【００１６】一方、食品添加剤に製造する際には、飲
料、ガム、お菓子類などの食品素材に本発明のテオブロ
ミンを含ませて製造できる。以上述べたテオブロミンを
有効成分として含む医薬品および食品添加剤は癌の予防
効果はもちろん抑制効果にも優れている。

【００１７】

【実施例】以下、本発明を下記実施例によってさらに詳
細に説明するが、本発明は実施例によって限定されな
い。

【００１８】（参考例１：カカオ豆からテオブロミンの
分離）カカオ豆からココアバターを除去してから残った
分画物(カカオマス)１重量部に５０％アセトン[Duksan,
Korea]水溶液６重量部を加え、６０℃の温度で５時間
還流しながら攪拌抽出した後、抽出物を遠心分離して得
られた上澄液を集め、残滓を繰り返して抽出した後、前
記抽出物を濾過、乾燥してカカオ豆および豆皮抽出物を
得た。この抽出物を公知の方法であるKreiser's method
[Kreiser, W.R., et al, J. Assoc. Off. Anal. Che
m., 61:1424-1428, 1978]によってHPLC[Waters, USA]を
行ってテオブロミンを分離した。

【００１９】（参考例２：カカオ豆の皮からテオブロミ
ンの分離）前記参考例１と同様に、カカオ豆の皮１重量
部に５０％アセトン[Duksan, Korea]水溶液６重量部を
加え、６０℃の温度で５時間還流しながら攪拌抽出した
後、抽出物を遠心分離して得られた上澄液を集め、残滓
を繰り返して抽出した後、前記抽出物を濾過、乾燥して
カカオ豆および豆皮抽出物を得た。この抽出物を公知の
方法であるKreiser's method [Kreiser, W. R., et al,
J. Assoc. Off. Anal. Chem., 61:1424-1428, 1978]に
よってＨＰＬＣ[Waters, USA]を用いてテオブロミンを
分離した。

【００２０】（参考例３：合成されたテオブロミン）合
成法によって商業的に市販されているテオブロミン[Sig
ma, USA]を購入して実験に用いた。

【００２１】前記のように得られたカカオ豆、豆皮およ
び合成法によって商業的に市販されているテオブロミン
[Sigma, USA]の癌予防および抑制効能を評価するための
実験方法として、癌促進剤であるＨ_２Ｏ_２によって誘発
されるＧＪＩＣ抑制、およびこれを調節する主要なタン
パク質であるコネクシン４３(connexin43)の高リン酸化
(hyperphosphorylation)阻害、そして肝癌、胃癌および
大腸癌細胞の増殖阻害を測定した。

【００２２】（実施例１：テオブロミンのＧＪＩＣ増加
効能）テオブロミンが、生体内に存在する主要な癌促進
物質であるＨ_２Ｏ_２によってＧＪＩＣが抑制されると
き、主要な現象であるギャップジャンクションチャンネ
ル (gap junction channel)の抑制および調節に重要な
タンパク質であるコネクシン４３の高リン酸化(hyperph
osphorylation)の阻害するかを測定した。

【００２３】<１−１> テオブロミンのＨ _２Ｏ _２による
ギャップジャンクションチャンネル抑制の阻害効能テオブロミンのＨ_２Ｏ_２によって発生するギャップジャ
ンクションチャンネル抑制阻害効能を測定するために、
公知の方法であるScrape Loading/Dye Transfer(SL/DT)
assay[Upham, B. L., Kang, K. S., Cho, H. Y., & Tr
osko, J. E. Carcinogenesis 18:37-42, 1997]を用いる
が、詳しく説明すると次の通りである。

【００２４】肝細胞のギャップジャンクションチャンネ
ルの抑制を測定するために、肝細胞としてWB-F344細胞
を用いた。ＭＥＭ培地に１０％ＦＢＳを加え、ペニシ
リン(penicillin)１００ＩＵ／ｍｌ、ストレプトマイシ
ン(streptomycin) １００μｇ／ｍｌを加えた培地を用
いて５％ＣＯ_２、３７℃培養器[Forma Scientific C
o., Marjetta, OH, USA]で前記細胞を培養した。細胞培
養に用いた培地組成物はすべてGIBCO BRL[Grand Islan
d, NY, USA]社製品を用いた。このように培養された肝
細胞をプラスチック皿(plastic dish)に、各々２ｍｌ分
株して（１ｘ１０^５cells/ml）４４時間培養した。上記
の培地を、種々の濃度でテオブロミンを溶解した新鮮な
培養液で、対照群は新鮮な培養液のみで置き換えた。４
時間後種々の濃度のテオブロミンを、生体内に存在する
主要な癌促進物質であるＨ_２Ｏ_２とともに処置した。１
時間後ルシファーイエロー(lucifer yellow)染色液を用
いてギャップジャンクションチャンネル抑制阻害程度
を、共焦点レーザー顕微鏡（confocal microscopy）[Bi
oRad, Hercules, CA, USA]で測定した。

【００２５】図１から分かるように、２００μｍの濃度
のテオブロミンで処理することにより、Ｈ_２Ｏ_２によっ
て抑制されるギャップジャンクションチャンネルを、対
照群水準と比較して完全に回復する効果を示した。

【００２６】<１−２> テオブロミンのＨ _２Ｏ _２による
コネクシン４３の高リン酸化の阻害効能生体内に存在する主要な癌促進物質であるＨ_２Ｏ_２によ
ってＧＪＩＣが抑制されるとき発生する主要な現象であ
るコネクシン４３(connexin43)の高リン酸化を、テオブ
ロミンが阻害するか測定するために、公知の方法である
ウェスタンブロッティング分析法(western blotting an
alysis)[Upham, B. L., Kang, K. S., Cho, H. Y., & T
rosko, J. E. Carcinogenesis 18:37-42, 1997]を用い
て分析した。

【００２７】前記<１−１>と同様に培養された細胞から
タンパク質を抽出するために、１ｍＭフェニルメチルス
ルホニルフルオリド(Phenylmethylsulfonylfluoride, P
MSF)を含む２０％ＳＤＳで抽出した。タンパク質含量は
DC assay kit[Bio-Rad Corp., Richmond, CA, USA]を用
いて測定した。各々のタンパク質抽出物から約１５μｇ
に該当するタンパク質を１２．５％ SDS-PAGEに入れ、
電気泳動して分離した。コネクシン４３は、モノクロー
ナル抗体[Zymed, South San Francisco, CA, USA]を用
いて反応させた後、ＥＣＬキット[Amersham, Life Scie
nce, Denver, USA]を用いて感知した。

【００２８】図２から分かるように、テオブロミンは２
００μｍ以上の濃度でＨ_２Ｏ_２によって発生するコネク
シン４３の高リン酸化を阻害する効能を示した。図１お
よび２から分かるように、テオブロミンは肝癌を含む種
々の癌促進過程の病理的現象として生体内の主要な癌促
進剤であるＨ_２Ｏ_２によって発生するＧＪＩＣの抑制[U
pham, B. L., Kang, K. S., Cho, H. Y., & Trosko, J.
E. Carcinogenesis 18:37-42, 1997; Yamasaki, H. et
al, Carcinogenesis 11:1051-1058, 1999; Kelloff.
G. J. et al., Eur. J. Cancer, 35:1755-1762, 1999;
Surh, Y. J., Mutat. Res, 428:305-327, 1999; Trosk
o, J. E., Cancer Res. 53:3475-3485, 1993; Rosenkra
nz, H. S. et al, Carcinogenesis 21:1007-1011, 200
0]を阻害することにより、発癌抑制効能がある。

【００２９】（実施例２：テオブロミンの肝癌細胞増殖
（ＤＮＡ合成）阻害効能）テオブロミンの肝癌細胞の増
殖阻害効能を測定するために、公知の方法[Marshall,
E. S. et al. European J. Cancer, 30A: 1370-1376,
1994]に従って^３Ｈ−チミジン・アップテーク・アッセ
イ(thymidine uptake assay)を行った。肝癌細胞の増殖
阻害活性を測定するために、肝癌細胞としてHepG2細胞
を用いた。RPMI-1640培地に１０％ＦＢＳを加え、ペニ
シリン(penicillin)１００ＩＵ／ｍｌ、ストレプトマイ
シン(streptomycin)１００μｇ／ｍｌを添加した培地を
用いて、５％ＣＯ_２、３７℃培養器[Forma Scientific
Co., Marjetta, OH, USA]で前記細胞を培養した。細胞
培養に用いた培地組成物はすべてGIBCO BRL[Grand Isla
nd, NY, USA]社製品を用いた。

【００３０】テオブロミン添加による癌細胞株の増殖抑
制効果を調査するために、培養したHepG2肝癌細胞を９
６ウェルプレート(well plate)に２ｘ１０^４個細胞を分
株し、前記参考例１、２および３で得られたテオブロミ
ンを種々の濃度で添加して７２時間培養した。細胞回収
６時間前にウェル当り１μＣｉを加えて培養した。培養
後細胞回収器具[Cambridge Scientific Inc., cambridg
e, MA, USA]を用いて細胞をガラス繊維フィルター[Bran
del Inc., Gaithersburg, MA, USA]に回収した。回収し
た細胞とシンチレーションカクテル(scintillation coc
ktail)[Wallac, Turku, Finland] ３ｍｌを混合して、
液体シンチレーションカウンター(liquid scintillatio
n counter)[Wallac, Turku, Finland]で放射能を測定し
た。本実施例に従って３回反復実験を行った。

【００３１】図３に示したように、処理したテオブロミ
ンの濃度が次第に増加するほど肝癌細胞のＤＮＡ合成が
阻害されることを観察することにより、肝癌細胞の増殖
阻害率は処理したテオブロミンの濃度に依存的であるこ
とが分かる。

【００３２】（実施例３：テオブロミンの胃癌細胞増
殖（ＤＮＡ合成）阻害効能）前記実施例２と同様な方法
でテオブロミンを胃癌細胞株であるSNU1に種々の濃度で
処理した結果を図４に示した。図４に示したように、処
理したテオブロミンの濃度が次第に増加するほど胃癌細
胞株の増殖が抑制されることを観察することにより、胃
癌細胞の増殖阻害率が処理したテオブロミンの濃度に依
存的であることが分かる。

【００３３】（実施例４：テオブロミンの大腸癌細胞増
殖（ＤＮＡ合成）阻害効果）前記実施例２と同様の方法
で、大腸癌細胞株であるSNUC2Aを種々の濃度のテオブロ
ミンで処理した結果を図５に示した。図５に示したよう
に、処理したテオブロミンの濃度が次第に増加するほど
大腸癌細胞株の増殖が抑制されることを観察することに
より、大腸癌細胞の増殖阻害率が処理したテオブロミン
の濃度に依存的であることが分かる。

【００３４】結論として、テオブロミンはＧＪＩＣを増
加させ、肝癌、胃癌、大腸癌細胞のＤＮＡ合成を阻害し
て癌細胞の増殖を阻害する効果を有することにより、癌
の予防および抑制効能を有することが分かる。

【００３５】（実施例５：錠剤の製造）有効成分１０ｇラクトース７０ｇ結晶性セルロース１５ｇステアリン酸マグネシウム５ｇ総量１００ｇ前記成分を細かく粉砕混合した後、直打法(direct tabl
eting method)によって錠剤を製造した。各錠剤の総量
は１００ｍｇであり、そのうち有効成分の含量は１０ｍ
ｇである。

【００３６】（実施例６：粉末剤の製造）有効成分５ｇトウモロコシ澱粉５５ｇカルボキシセルロース４０ｇ総量１００ｇ前記成分を細かく粉砕混合して粉末を製造した。硬質カ
プセルに粉末１００ｍｇを入れてカプセル剤を製造し
た。

【００３７】（実施例７：毒性試験）本発明のテオブロ
ミンに対して毒性実験を次のように行った。具体的に
は、テオブロミンをジメチルスルホキシド(dimethylsul
foxide、以下ＤＭＳＯ)に溶解し、水で希釈した後、こ
れをマウス(群当り１０匹)に各々０．５ｇ／ｋｇ投与し
た後７日間観察したが、死亡したマウスはいなかった。

【００３８】（実施例８）ガムベース２０重量％、砂糖
７６．９重量％、香料１重量％および水２重量％とテオ
ブロミン０．１重量％を配合して通常の方法でチューイ
ングガムを製造した。

【００３９】（実施例９）砂糖６０重量％、水飴３９．
８重量％および香料０．１重量％とテオブロミン０．１
重量％を配合して通常の方法でキャンディを製造した。

【００４０】（実施例１０）糖アルコール５０重量％、
還元水飴４９．８重量％および香料０．１重量％とテオ
ブロミン０．１重量％を配合して通常の方法でキャンデ
ィを製造した。

【００４１】（実施例１１）薄力粉１級２５．５９重量
％、中力粉１級２２．２２重量％、精白糖４．８０重量
％、食塩０．７３重量％、ブドウ糖０．７８重量％、パ
ームショートニング１１．７８重量％、重炭酸アンモニ
ウム１．５４重量％、炭酸水素ナトリウム０．１７重量
％、重亜硫酸ナトリウム０．１６重量％、米粉１．４５
重量％、ビタミンＢ_１０．０００１重量％、ビタミン
Ｂ_２０．０００１重量％、ミルク香０．０４重量％、
水２０．６９９８重量％、全脂粉乳１．１６重量％、代
用粉乳０．２９重量％、第一リン酸カルシウム０．０３
重量％、散布塩０．２９重量％および噴霧乳７．２７重
量％とテオブロミン１重量％を配合して通常の方法でビ
スケットを製造した。

【００４２】（実施例１２）蜜０．２６重量％、チオク
ト酸アミド0.0002重量％、ニコチン酸アミド0.0004重量
％、塩酸リボフラビンナトリウム0.0001重量％、塩酸ピ
リドキシン0.0001重量％、イノシトール0.001重量％、
オルト酸0.002重量％および水98.7362重量％とテオブロ
ミン１重量％を配合して通常の方法で飲料を製造した。

【００４３】（実施例１３）果物エキス３．５重量％、
果物ピューレ４．８重量％、砂糖７．７８重量％、クエ
ン酸０．１１重量％、香料０．１重量％および精製水８
２．７１重量％とテオブロミン１重量％を配合して通常
の方法で飲料を製造した。

【００４４】（実施例１４）豚肉６５．１８重量％、鶏
肉２５重量％、澱粉３．５重量％、大豆蛋白１．７重量
％、食塩１．６２重量％、ブドウ糖０．５重量％および
グリセリン１．５重量％とテオブロミン１重量％を配合
して通常の方法でソーセージを製造した。

【００４５】（実施例１５）スピルリナ５５重量％、グ
アガム酵素分解物１０重量％、ビタミンＢ_１塩酸塩
０．０１重量％、ビタミンＢ_６塩酸塩０．０１重量
％、ＤＬ−メチオニン０．２３重量％、ステアリン酸
マグネシウム０．７重量％、乳糖２２．２重量％および
トウモロコシ澱粉１．８５重量％とテオブロミン１０重
量％を配合して通常の方法で錠剤型健康補助食品を製造
した。

【００４６】（実施例１６）キトオリゴ糖１１．２６重
量％、ニンニク粉末０．２重量％、銀杏葉の抽出物粉末
０．２重量％、ベータカロチン(３０％懸濁液)０．９重
量％、アルファトコフェロール１．２重量％、レシチン
１．２重量％、精製パーム油４．５重量％、黄蝋１．６
重量％、大豆油18.994重量％、ゼラチン３７．８３重量
％、グリセリン１６．５１重量％、エチルバニリン０．
０９重量％、二酸化チタン０．０７６重量％および食用
色素０．４４重量％とテオブロミン５重量％を配合して
通常の方法でカプセル型健康補助食品を製造した。

【００４７】

【発明の効果】以上述べたように、本発明のテオブロミ
ンは、癌の促進および進行過程の重要な病理的現象であ
るＧＪＩＣの抑制および癌細胞の増殖を阻害することに
よって発癌抑制効能を示した。本発明によるテオブロミ
ンを製剤化して使用すると、前記物質を食品同等物とし
て使用できるため、毒性を除去するための別途の精製過
程がなくても安全に摂取して発癌抑制効果が得られる。
また、簡単な分離工程で高い発癌抑制効能を示す物質を
分離して製剤化すれば済むので、既存の発癌抑制剤に比
べて生産原価を低めることができ、特に膨大な量のカカ
オ豆の皮をリサイクルすることにより経済性を向上する
ことができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ラットの肝上皮細胞(rat liver epithelial
cell)において生体内に存在する主要な癌促進剤である
Ｈ_２Ｏ_２によって発生するＧＪＩＣの抑制を阻害する、
テオブロミンの効能を示す写真である。[ａ：対照群、
ｂ：４００μｍＨ_２Ｏ_２処理群、ｃ：２００μｍテオ
ブロミン＋４００μｍＨ_２Ｏ_２処理群]

【図２】ラットの肝上皮細胞において癌促進剤である
Ｈ_２Ｏ_２によって発生するＧＪＩＣを調節する主要なタ
ンパク質であるコネクシン４３(connexin43)の高リン酸
化(hyperphosphorylation)を阻害する、テオブロミンの
効能を示す写真である。[ａ：対照群、ｂ：４００μｍ
Ｈ_２Ｏ_２処理群、ｃ：２００μｍテオブロミン＋４
００μｍＨ_２Ｏ_２処理群]

【図３】肝癌細胞であるHepG2のＤＮＡ合成を阻害す
ることによる、テオブロミンの増殖抑制効能を示すグラ
フである。

【図４】胃癌細胞であるSNU1のＤＮＡ合成を阻害する
ことによる、テオブロミンの増殖抑制効能を示すグラフ
である。

【図５】大腸癌細胞であるSNUC2AのＤＮＡ合成を阻害
することによる、テオブロミンの増殖抑制効能を示すグ
ラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者リヒョンジュ大韓民国 137−754 ソウルソーチョー −クバンベ−３ドンサミクアパートメント２−103 (72)発明者リキウォン大韓民国キョンギ−ドー 441−100 スウォンクウォンソン−クソードン−ドン 136−４ (72)発明者カンキョンソン大韓民国キョンギ−ドー 440−300 スウォンジャンガン−クジュンジャ−ドンヨンコット−マウルビョクサンアパートメント 422−302 (72)発明者キムドンヨン大韓民国キョンギ−ドー 423−033 クワンミョン−シチュルサン−３ドンチュルサンジュゴンアパートメント 1318 −202 (72)発明者パクヒュンファン大韓民国キョンギ−ドー 412−725 ゴヤン−シドクヤン−クヘンシン−ドンムーウォン−マウルシナンアパートメント 801−502 (72)発明者リマンジョン大韓民国キョンギ−ドー 441−390 スウォンクウォンソン−ククウォンソン −ドン 1199−１ドゥーサンドンガアパートメント 104−1104 (72)発明者キムハンス大韓民国キョンギ−ドー 411−350 ゴヤン−シイルサン−クマドゥー−ドン 787 ガンチョン−マウル 310−704 (72)発明者クウォンイクブ大韓民国 156−010 ソウルドンジャク −クシンデバン−ドン 395−67 ロッテグワンクタワー 2404 Ｆターム(参考） 4B018 MD18 MD57 ME08 MF01 4C086 AA01 AA02 CB07 GA17 MA01 MA04 MA35 MA43 NA09 NA14 ZB26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式（Ｉ）で表されるテオブロミ
ンを有効成分として含むことを特徴とする発癌抑制剤。【化１】
【請求項２】前記テオブロミンが、カカオ豆または豆
皮から分離されるか、または化学的に合成されたもので
あることを特徴とする、請求項１記載の発癌抑制剤。
【請求項３】下記一般式（Ｉ）で表されるテオブロミ
ンを含有することを特徴とする、発癌抑制効能を有する
食品添加剤。【化２】