JP2003116591A - 微生物の代謝機能評価方法及びその装置 - Google Patents
微生物の代謝機能評価方法及びその装置Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 寒天培地上の任意の場所における微生物の代
謝活性を、寒天培地上に生育させたままの状態で評価す
ることができる微生物の代謝機能評価方法及びその装置
を提供する。 【解決手段】 寒天培地７で培養する微生物８を、前記
寒天培地７上に生育させたままの状態でキャピラリ管６
に充填し、このキャピラリ管６を計測溶液１１に浸し、
この計測溶液１１に配置される作用極としての微小電極
１と参照電極２と、これらの電極１，２に接続されるポ
テンショスタット３により、前記微生物８の代謝機能評
価を行う。
謝活性を、寒天培地上に生育させたままの状態で評価す
ることができる微生物の代謝機能評価方法及びその装置
を提供する。 【解決手段】 寒天培地７で培養する微生物８を、前記
寒天培地７上に生育させたままの状態でキャピラリ管６
に充填し、このキャピラリ管６を計測溶液１１に浸し、
この計測溶液１１に配置される作用極としての微小電極
１と参照電極２と、これらの電極１，２に接続されるポ
テンショスタット３により、前記微生物８の代謝機能評
価を行う。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、微生物の代謝機能
評価方法及びその装置に係り、特に、寒天培地培養微生
物の代謝機能評価方法及びその装置に関するものであ
る。
評価方法及びその装置に係り、特に、寒天培地培養微生
物の代謝機能評価方法及びその装置に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】寒天培地培養法は、微生物の成長に必要
な栄養素を含んだ溶液に寒天を混入することにより、固
相の培地を形成し、その固相の上で目的微生物の増殖を
促す培養法である。この培養法は培地が固化しており取
扱が容易なことから、ファージ、カビ、菌類、酵母、藻
類、その他の微生物の培養系において広く適用されてい
る。
な栄養素を含んだ溶液に寒天を混入することにより、固
相の培地を形成し、その固相の上で目的微生物の増殖を
促す培養法である。この培養法は培地が固化しており取
扱が容易なことから、ファージ、カビ、菌類、酵母、藻
類、その他の微生物の培養系において広く適用されてい
る。
【０００３】従来、液体培地でこれらの微生物を継代培
養する際には、複数の（必ずしも遺伝的に均質でない）
細胞群をイノキュレートする（移植する）ことが普通で
ある。従って、培養中に自然誘発される突然変異の個体
群が含まれる可能性を常に有する。
養する際には、複数の（必ずしも遺伝的に均質でない）
細胞群をイノキュレートする（移植する）ことが普通で
ある。従って、培養中に自然誘発される突然変異の個体
群が含まれる可能性を常に有する。
【０００４】これに対し、寒天培地上に微生物を希釈し
てイノキュレートし、単一細胞に由来するコロニーを形
成させた場合は、遺伝学的に均一なクローンを得ること
ができる（クローン増殖法）。このクローン増殖法は、
突然変異株や遺伝子改変体を作出する工程において極め
て重要な位置を占めている。例えば、寒天培地上に形成
されたコロニーから、望みの個体を選別し、継代するこ
とが可能である。
てイノキュレートし、単一細胞に由来するコロニーを形
成させた場合は、遺伝学的に均一なクローンを得ること
ができる（クローン増殖法）。このクローン増殖法は、
突然変異株や遺伝子改変体を作出する工程において極め
て重要な位置を占めている。例えば、寒天培地上に形成
されたコロニーから、望みの個体を選別し、継代するこ
とが可能である。
【０００５】コロニーの状態の正常／異常を判断する手
立ては、形態観察に頼るところが大きい。このような形
態観察により、例えば、コロニーが偏平であるものは細
胞形態が異常な個体群であると判断できる〔Ｄ．Ｒ．Ｄ
ａｖｉｓ ａｎｄ Ａ．Ｐｌａｓｋｉｔｔ，Ｇｅｎｅ
ｔ．Ｒｅｓ．，１７，３３−４３（１９７１）〕。
立ては、形態観察に頼るところが大きい。このような形
態観察により、例えば、コロニーが偏平であるものは細
胞形態が異常な個体群であると判断できる〔Ｄ．Ｒ．Ｄ
ａｖｉｓ ａｎｄ Ａ．Ｐｌａｓｋｉｔｔ，Ｇｅｎｅ
ｔ．Ｒｅｓ．，１７，３３−４３（１９７１）〕。
【０００６】また、培地組成を工夫することにより、酵
素反応と呈色反応を組み合わせて微生物の酵素活性を視
覚化したり〔Ｊ．Ｐ．Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌ
ａｎｔ Ｃｅｌｌ，６，５３−６３（１９９４）〕、注
目遺伝子（タンパク質）が発現しないと微生物が生存で
きなくすることも試みられている〔Ｍ．Ｇｏｌｄｓｃｈ
ｍｉｄｔ−Ｃｌｅｒｍｏｕｎｔ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｃ．，１９，４０８３−４０８９（１９９
１）〕。
素反応と呈色反応を組み合わせて微生物の酵素活性を視
覚化したり〔Ｊ．Ｐ．Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌ
ａｎｔ Ｃｅｌｌ，６，５３−６３（１９９４）〕、注
目遺伝子（タンパク質）が発現しないと微生物が生存で
きなくすることも試みられている〔Ｍ．Ｇｏｌｄｓｃｈ
ｍｉｄｔ−Ｃｌｅｒｍｏｕｎｔ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｃ．，１９，４０８３−４０８９（１９９
１）〕。
【０００７】ところで、一般的に、コロニーがある程度
大きく発達するまでには、微生物の種類によっては数日
から数週間を要する。
大きく発達するまでには、微生物の種類によっては数日
から数週間を要する。
【０００８】一方、微生物の代謝活性を定量する目的
で、電気化学的手法が広く適用されてきた。電気化学的
手法が適用可能な検出系は以下の３つに分類できる。
で、電気化学的手法が広く適用されてきた。電気化学的
手法が適用可能な検出系は以下の３つに分類できる。
【０００９】（１）試料微生物の生体反応に伴い放出／
吸収する物質が、電気化学活性物質（電極表面で酸化還
元反応する物質）である場合：微生物は呼吸／光合成に
伴い、酸素を吸収／放出する。酸素は電気化学的に活性
であるため、酸素還元電流を観測することにより、試料
溶液中の酸素濃度を定量できる。これは、クラーク型酸
素電極が広く使用されている。
吸収する物質が、電気化学活性物質（電極表面で酸化還
元反応する物質）である場合：微生物は呼吸／光合成に
伴い、酸素を吸収／放出する。酸素は電気化学的に活性
であるため、酸素還元電流を観測することにより、試料
溶液中の酸素濃度を定量できる。これは、クラーク型酸
素電極が広く使用されている。
【００１０】（２）試料微生物中の酸化還元反応に伴い
生成する物質が、電極と直接反応しないかあるいは電極
反応速度が極めて遅い場合：適当な酸化還元電位を有す
る物質（レドックス種）を試料溶液中に添加する。例え
ば、添加したレドックス種の酸化体が生体内の電子伝達
系から電子を奪い還元体に変化する場合には、還元体の
濃度変化を定量できる。
生成する物質が、電極と直接反応しないかあるいは電極
反応速度が極めて遅い場合：適当な酸化還元電位を有す
る物質（レドックス種）を試料溶液中に添加する。例え
ば、添加したレドックス種の酸化体が生体内の電子伝達
系から電子を奪い還元体に変化する場合には、還元体の
濃度変化を定量できる。
【００１１】（３）試料微生物内の酵素活性を評価する
場合：適当なレドックス種と注目酵素反応に特異的な基
質を添加する。酵素媒質の濃度に依存するレドックス種
の濃度変化を計測することにより、酵素の活性を定量す
る。
場合：適当なレドックス種と注目酵素反応に特異的な基
質を添加する。酵素媒質の濃度に依存するレドックス種
の濃度変化を計測することにより、酵素の活性を定量す
る。
【００１２】以上に挙げたような微生物の代謝活性を評
価する場合、ある程度まとまった数の個体が必要とな
る。例えば、通常のクラーク型酵素電極では、計測に必
要とする個体数は、大腸菌、酵母の場合１０6 〜１０9
個程度である。また、代謝活性計測にあたり、寒天培地
から剥がして回収し、計測溶液に懸濁する工程も必要と
なる。
価する場合、ある程度まとまった数の個体が必要とな
る。例えば、通常のクラーク型酵素電極では、計測に必
要とする個体数は、大腸菌、酵母の場合１０6 〜１０9
個程度である。また、代謝活性計測にあたり、寒天培地
から剥がして回収し、計測溶液に懸濁する工程も必要と
なる。
【００１３】電気化学顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ ｅｌ
ｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）
は探針である微小電極を試料表面に近接し走査すること
により、試料の放出／吸収する分子種の検出や、分子種
の分布の画像化を可能にする装置である〔Ａ．Ｊ．Ｂａ
ｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，６１，１
３２−１３８（１９８９）；Ｒ．Ｃ．Ｅｎｇｓｔｒｏｍ
ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，５８，８４４
−８４８（１９８６）〕。既に、電気化学顕微鏡による
細胞や生体組織の機能評価が報告されている。
ｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ）
は探針である微小電極を試料表面に近接し走査すること
により、試料の放出／吸収する分子種の検出や、分子種
の分布の画像化を可能にする装置である〔Ａ．Ｊ．Ｂａ
ｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，６１，１
３２−１３８（１９８９）；Ｒ．Ｃ．Ｅｎｇｓｔｒｏｍ
ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．，５８，８４４
−８４８（１９８６）〕。既に、電気化学顕微鏡による
細胞や生体組織の機能評価が報告されている。
【００１４】また、細胞の呼吸／光合成活性評価は既に
報告がある〔Ｔ．Ｙａｓｕｋａｗａｅｔ ａｌ．，Ｄｅ
ｎｋｉ Ｋａｇａｋｕ，６６，６６０−６６１（１９９
８）〕。電子伝達機能の評価は、酸化還元物質（レドッ
クス種）としてキノン類を応用した例がある〔Ｔ．Ｙａ
ｓｕｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ
Ｊ．，７６，１１２９−１３５（１９９９）〕。
報告がある〔Ｔ．Ｙａｓｕｋａｗａｅｔ ａｌ．，Ｄｅ
ｎｋｉ Ｋａｇａｋｕ，６６，６６０−６６１（１９９
８）〕。電子伝達機能の評価は、酸化還元物質（レドッ
クス種）としてキノン類を応用した例がある〔Ｔ．Ｙａ
ｓｕｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ
Ｊ．，７６，１１２９−１３５（１９９９）〕。
【００１５】
【発明が解決しようとする課題】ところが、単一細胞レ
ベルの細胞内酵素活性の評価は報告されていない。
ベルの細胞内酵素活性の評価は報告されていない。
【００１６】上記した従来の報告では、何れも液体培地
で培養される細胞の評価を行っており、寒天培地上で培
養する微生物の機能を、寒天培地上に生育する状態のま
まで評価した報告はない。
で培養される細胞の評価を行っており、寒天培地上で培
養する微生物の機能を、寒天培地上に生育する状態のま
まで評価した報告はない。
【００１７】本発明は、上記状況に鑑みて、寒天培地上
の任意の場所における微生物の代謝活性を、寒天培地上
に生育させたままの状態で評価することができる、微生
物の代謝機能評価方法及びその装置を提供することを目
的とする。
の任意の場所における微生物の代謝活性を、寒天培地上
に生育させたままの状態で評価することができる、微生
物の代謝機能評価方法及びその装置を提供することを目
的とする。
【００１８】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するために、 〔１〕微生物の代謝機能評価方法において、寒天培地で
培養する微生物を、寒天培地上に生育させたままの状態
でキャピラリ管に充填し、このキャピラリ管を計測溶液
に浸し、この計測溶液に配置される作用極としての微小
電極と参照電極と、これらの電極に接続されるポテンシ
ョスタットにより、前記微生物の代謝機能評価を行うこ
とを特徴とする。
成するために、 〔１〕微生物の代謝機能評価方法において、寒天培地で
培養する微生物を、寒天培地上に生育させたままの状態
でキャピラリ管に充填し、このキャピラリ管を計測溶液
に浸し、この計測溶液に配置される作用極としての微小
電極と参照電極と、これらの電極に接続されるポテンシ
ョスタットにより、前記微生物の代謝機能評価を行うこ
とを特徴とする。
【００１９】〔２〕上記〔１〕記載の微生物の代謝機能
評価方法において、前記微小電極と微生物の位置を、精
密位置決め装置で制御することを特徴とする。
評価方法において、前記微小電極と微生物の位置を、精
密位置決め装置で制御することを特徴とする。
【００２０】〔３〕上記〔１〕又は〔２〕記載の微生物
の代謝機能評価方法において、前記微生物の代謝機能評
価は、前記微生物近傍の酸素濃度分布を計測することに
よる前記微生物の呼吸活性および光合成活性の評価であ
ることを特徴とする。
の代謝機能評価方法において、前記微生物の代謝機能評
価は、前記微生物近傍の酸素濃度分布を計測することに
よる前記微生物の呼吸活性および光合成活性の評価であ
ることを特徴とする。
【００２１】〔４〕上記〔１〕又は〔２〕記載の微生物
の代謝機能評価方法において、前記微生物の代謝機能評
価は、酸化還元物質（レドックス種）を前記計測溶液に
共存させ、前記微生物近傍の酸化還元物質濃度分布を計
測することによる前記微生物の電子伝達機能の評価であ
ることを特徴とする。
の代謝機能評価方法において、前記微生物の代謝機能評
価は、酸化還元物質（レドックス種）を前記計測溶液に
共存させ、前記微生物近傍の酸化還元物質濃度分布を計
測することによる前記微生物の電子伝達機能の評価であ
ることを特徴とする。
【００２２】〔５〕上記〔１〕又は〔２〕記載の微生物
の代謝機能評価方法において、前記微生物の代謝機能評
価は、酸化還元物質（レドックス種）を前記計測溶液に
共存させ、前記微生物近傍の酸化還元物質濃度分布を計
測することによる前記微生物の酵素活性の評価であるこ
とを特徴とする。
の代謝機能評価方法において、前記微生物の代謝機能評
価は、酸化還元物質（レドックス種）を前記計測溶液に
共存させ、前記微生物近傍の酸化還元物質濃度分布を計
測することによる前記微生物の酵素活性の評価であるこ
とを特徴とする。
【００２３】〔６〕微生物の代謝機能評価方法であっ
て、上記〔３〕、〔４〕又は〔５〕記載の微生物の代謝
機能評価の後に、計測に供した前記微生物を継代培養す
ることを特徴とする。
て、上記〔３〕、〔４〕又は〔５〕記載の微生物の代謝
機能評価の後に、計測に供した前記微生物を継代培養す
ることを特徴とする。
【００２４】〔７〕微生物の代謝機能評価装置におい
て、計測溶液を有する計測容器と、この計測容器内の計
測溶液に浸されるとともに、寒天培地で培養する微生物
を、前記寒天培地上に生育させたままの状態で充填した
キャピラリ管と、前記微生物の近傍に配置される作用極
としての微小電極と、参照電極と、前記微小電極と参照
電極に接続されるポテンショスタットと、前記キャピラ
リ管の位置を決める精密位置決め装置と、この精密位置
決め装置と前記ポテンショスタットに接続されるコンピ
ュータとを具備することを特徴とする。
て、計測溶液を有する計測容器と、この計測容器内の計
測溶液に浸されるとともに、寒天培地で培養する微生物
を、前記寒天培地上に生育させたままの状態で充填した
キャピラリ管と、前記微生物の近傍に配置される作用極
としての微小電極と、参照電極と、前記微小電極と参照
電極に接続されるポテンショスタットと、前記キャピラ
リ管の位置を決める精密位置決め装置と、この精密位置
決め装置と前記ポテンショスタットに接続されるコンピ
ュータとを具備することを特徴とする。
【００２５】〔８〕上記〔７〕記載の微生物の代謝機能
評価装置において、前記微生物と前記微小電極間に配置
される膜を具備することを特徴とする。
評価装置において、前記微生物と前記微小電極間に配置
される膜を具備することを特徴とする。
【００２６】より具体的には、
（１）寒天培地上の任意の場所に存在する微生物を、下
地の寒天培地と共にキャピラリ管で型抜きする。微生物
が存在する面がキャピラリ管の片端部に位置するよう
に、キャピラリ管内の微生物／寒天部分をスライドさせ
る。さらに、そのキャピラリ片端部を膜で覆い微生物を
保持する。
地の寒天培地と共にキャピラリ管で型抜きする。微生物
が存在する面がキャピラリ管の片端部に位置するよう
に、キャピラリ管内の微生物／寒天部分をスライドさせ
る。さらに、そのキャピラリ片端部を膜で覆い微生物を
保持する。
【００２７】（２）微小電極とキャピラリ管の位置を精
密位置決め装置で制御し、キャピラリ管片端部に固定し
た微生物の代謝に伴う吸収／放出物質の濃度勾配を計測
する。
密位置決め装置で制御し、キャピラリ管片端部に固定し
た微生物の代謝に伴う吸収／放出物質の濃度勾配を計測
する。
【００２８】（３）寒天培地表面に生育したままの状態
で微生物の呼吸／光合成活性を評価するために酸素濃度
勾配を計測する。
で微生物の呼吸／光合成活性を評価するために酸素濃度
勾配を計測する。
【００２９】（４）寒天培地表面に生育したままの状態
で微生物の電子伝達機構を評価するために、酸化還元物
質の濃度勾配を計測する。
で微生物の電子伝達機構を評価するために、酸化還元物
質の濃度勾配を計測する。
【００３０】（５）生きた細胞や生体組織中の酵素活性
を評価するために、計測溶液中に酸化還元物質と注目酵
素特有の基質を共存させる。
を評価するために、計測溶液中に酸化還元物質と注目酵
素特有の基質を共存させる。
【００３１】（６）必要に応じて、キャピラリ、膜、計
測用容器、計測容器をオートクレーブで滅菌し、精密位
置決め装置を７０％エタノール滅菌し、アルコールラン
プをチャンバー内で燃焼させながら無菌的に計測する。
計測後、計測に供した試料をチャンバー内で新しい寒天
培地上に無菌的に移植し、引き続き継代培養する。
測用容器、計測容器をオートクレーブで滅菌し、精密位
置決め装置を７０％エタノール滅菌し、アルコールラン
プをチャンバー内で燃焼させながら無菌的に計測する。
計測後、計測に供した試料をチャンバー内で新しい寒天
培地上に無菌的に移植し、引き続き継代培養する。
【００３２】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て詳細に説明する。
て詳細に説明する。
【００３３】図１は本発明の実施例を示す寒天培地培養
微生物の代謝機能評価装置の模式図である。
微生物の代謝機能評価装置の模式図である。
【００３４】この図において、１は微小電極〔作用極
（探針電極）〕、２は参照電極（参照極／対極）、３は
ポテンショスタット、４はコンピュータ、５は精密位置
決め装置、６はキャピラリ管、７は寒天培地、８は微生
物試料、９は膜、１０は計測用容器、１１は計測溶液、
１２は電極シール部である。
（探針電極）〕、２は参照電極（参照極／対極）、３は
ポテンショスタット、４はコンピュータ、５は精密位置
決め装置、６はキャピラリ管、７は寒天培地、８は微生
物試料、９は膜、１０は計測用容器、１１は計測溶液、
１２は電極シール部である。
【００３５】電気化学計測系は、微小電極１、参照電極
２、およびポテンショスタット３で構成されている。微
小電極〔作用極（探針電極）〕１には、白金微小電極
〔電極半径４μｍ、電極シール部（ガラスシール部）１
２を含む全体半径１５μｍ〕を用い、その微小電極１は
計測用容器１０の下側に固定した。参照電極２は銀／塩
化銀電極を用いた。ポテンショスタット３は探針（微小
電極）１の電位制御と電流検出のために使用した。
２、およびポテンショスタット３で構成されている。微
小電極〔作用極（探針電極）〕１には、白金微小電極
〔電極半径４μｍ、電極シール部（ガラスシール部）１
２を含む全体半径１５μｍ〕を用い、その微小電極１は
計測用容器１０の下側に固定した。参照電極２は銀／塩
化銀電極を用いた。ポテンショスタット３は探針（微小
電極）１の電位制御と電流検出のために使用した。
【００３６】酸素還元電流、ＦＭＡ（ｆｅｒｒｏｃｅｎ
ｅｍｅｔｈａｎｏｌ）酸化電流、およびＦＭＡ+ 還元電
流を検出するための探針電極１の電位は、銀／塩化銀参
照電極２の電位に対し、各々−０．６Ｖ、＋０．５Ｖお
よび＋０．１Ｖとした。試料は、寒天培地７上で培養し
た微生物試料８を、下地の寒天培地７とともにキャピラ
リ管（内径０．６ｍｍφ、外径１．０ｍｍφ）６で型抜
きしたものを使用した。
ｅｍｅｔｈａｎｏｌ）酸化電流、およびＦＭＡ+ 還元電
流を検出するための探針電極１の電位は、銀／塩化銀参
照電極２の電位に対し、各々−０．６Ｖ、＋０．５Ｖお
よび＋０．１Ｖとした。試料は、寒天培地７上で培養し
た微生物試料８を、下地の寒天培地７とともにキャピラ
リ管（内径０．６ｍｍφ、外径１．０ｍｍφ）６で型抜
きしたものを使用した。
【００３７】キャピラリ管６の片端部に微生物試料８を
配置し、さらに膜９で被覆した。膜９と計測溶液１１の
界面近傍には、微生物試料８の代謝反応に伴う反応物質
の吸収／生成物質の放出に起因して、反応／生成物質の
濃度勾配が形成される。探針電極１で反応／生成物質の
空間分布を記録するために、キャピラリ管６の位置を精
密位置決め装置（中央精機、Ｍ９１０３）５により制御
した。ポテンショスタット３及び精密位置決め装置５は
コンピュータ４により制御した。
配置し、さらに膜９で被覆した。膜９と計測溶液１１の
界面近傍には、微生物試料８の代謝反応に伴う反応物質
の吸収／生成物質の放出に起因して、反応／生成物質の
濃度勾配が形成される。探針電極１で反応／生成物質の
空間分布を記録するために、キャピラリ管６の位置を精
密位置決め装置（中央精機、Ｍ９１０３）５により制御
した。ポテンショスタット３及び精密位置決め装置５は
コンピュータ４により制御した。
【００３８】本発明の計測においては、以下のような生
体機能情報の取得が期待できる。
体機能情報の取得が期待できる。
【００３９】（１）微生物試料８の生体反応に伴い放出
／吸収する物質が、電気化学活性物質（電極表面で酸化
還元反応する物質）である場合には、その物質の濃度勾
配を直接計測する。
／吸収する物質が、電気化学活性物質（電極表面で酸化
還元反応する物質）である場合には、その物質の濃度勾
配を直接計測する。
【００４０】（２）微生物試料８の電子伝達機能を評価
する場合、適当な酸化還元電位を有する物質（レドック
ス種）を計測溶液１１に共存させる。例えば、あるレド
ックス種の酸化体が生体内の電子伝達系から電子を奪い
還元体に変化する場合には、微生物試料８近傍には酸化
体の減少及び還元体の増加に伴う濃度勾配が形成され
る。従って、レドックス種の濃度勾配を計測することに
より、微生物試料８の電子伝達機能を評価できる。
する場合、適当な酸化還元電位を有する物質（レドック
ス種）を計測溶液１１に共存させる。例えば、あるレド
ックス種の酸化体が生体内の電子伝達系から電子を奪い
還元体に変化する場合には、微生物試料８近傍には酸化
体の減少及び還元体の増加に伴う濃度勾配が形成され
る。従って、レドックス種の濃度勾配を計測することに
より、微生物試料８の電子伝達機能を評価できる。
【００４１】（３）微生物試料８内の酵素活性を評価す
る場合、適当なレドックス種と注目酵素反応に特異的な
基質を共存させる。酸素反応に伴うレドックス種の濃度
勾配形成が基質の有無に依存する場合は、レドックス種
の濃度勾配を計測することにより、微生物試料８の酵素
活性を評価できる。
る場合、適当なレドックス種と注目酵素反応に特異的な
基質を共存させる。酸素反応に伴うレドックス種の濃度
勾配形成が基質の有無に依存する場合は、レドックス種
の濃度勾配を計測することにより、微生物試料８の酵素
活性を評価できる。
【００４２】クラミドモナス（Ｃｈｌａｍｙｄｏｍｏｎ
ａｓ ｒｅｉｎｈａｄｉｔｉｉ １３７ｃ株）は、液体
培地、寒天培地のどちらでも培養できる微生物である。
クラミドモナスの培養条件は以下の通りとした。
ａｓ ｒｅｉｎｈａｄｉｔｉｉ １３７ｃ株）は、液体
培地、寒天培地のどちらでも培養できる微生物である。
クラミドモナスの培養条件は以下の通りとした。
【００４３】ＴＡＰ液体培地で継代後、希釈系列の細胞
懸濁液をＴＡＰ寒天培地上にイノキュレートし、植物用
培養器中で３〜７日間培養した。ＴＡＰ培地は栄養源と
して酢酸塩を含む〔Ｅ．Ｈ．Ｈａｒｒｉｓ，Ｃｈｌａｍ
ｙｄｏｍｏｎａｓ Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ，Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．（１９８９）〕。培養条
件は２２℃、明期１２時間／暗期１２時間のサイクルを
繰り返した。
懸濁液をＴＡＰ寒天培地上にイノキュレートし、植物用
培養器中で３〜７日間培養した。ＴＡＰ培地は栄養源と
して酢酸塩を含む〔Ｅ．Ｈ．Ｈａｒｒｉｓ，Ｃｈｌａｍ
ｙｄｏｍｏｎａｓ Ｓｏｕｒｃｅｂｏｏｋ，Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．（１９８９）〕。培養条
件は２２℃、明期１２時間／暗期１２時間のサイクルを
繰り返した。
【００４４】膜９は寒天培地表面の微生物試料保持を補
強すると同時に、膜９を透過する物質の選択性を制御す
る。例えば、フィルターメンブレン（ミリポア、テフロ
ン（登録商標）製、ポアサイズ３μｍ）を用いた場合、
膜透過過程において物質選択性を有しない。また、酸素
透過性膜（Ｙｅｌｌｏｗ Ｓｐｒｉｎｇ Ｉｎｓｔｒｕ
ｍｅｎｔ）を用いた場合、酸素の選択的な膜透過が期待
できる。仮に、膜９を用いない場合でも、微生物は寒天
培地表面に保持され、かつ良好な時間応答が期待でき
る。
強すると同時に、膜９を透過する物質の選択性を制御す
る。例えば、フィルターメンブレン（ミリポア、テフロ
ン（登録商標）製、ポアサイズ３μｍ）を用いた場合、
膜透過過程において物質選択性を有しない。また、酸素
透過性膜（Ｙｅｌｌｏｗ Ｓｐｒｉｎｇ Ｉｎｓｔｒｕ
ｍｅｎｔ）を用いた場合、酸素の選択的な膜透過が期待
できる。仮に、膜９を用いない場合でも、微生物は寒天
培地表面に保持され、かつ良好な時間応答が期待でき
る。
【００４５】図２に探針電極１を微生物試料（クラミド
モナス）８の最近接地点に配置して光（白色光、６０ｋ
ｌｘｓ）をオン／オフした際の酸素還元電流値の時間変
化を示した。この図２において、横軸は時間（ｓ）、縦
軸は還元電流を示している。
モナス）８の最近接地点に配置して光（白色光、６０ｋ
ｌｘｓ）をオン／オフした際の酸素還元電流値の時間変
化を示した。この図２において、横軸は時間（ｓ）、縦
軸は還元電流を示している。
【００４６】計測溶液は１７ｍＭ（ミリモル）リン酸バ
ッファー溶液を使用した。線ａは膜がない場合、線ｂは
酸素透過性膜を用いた場合の経時変化を示す。いずれの
場合も、光照射とともに電流値が上昇し、照射を止める
と電流は減衰してもとの値に戻る挙動を示した。これ
は、クラミドモナスの光合成作用に対応する酸素濃度変
化を反映している。線ａと線ｂでは時間応答がほぼ等し
いことから、経時変化が、膜透過過程ではなく、微生物
試料（クラミドモナス）の酸素生成速度を反映している
ことが分かる。
ッファー溶液を使用した。線ａは膜がない場合、線ｂは
酸素透過性膜を用いた場合の経時変化を示す。いずれの
場合も、光照射とともに電流値が上昇し、照射を止める
と電流は減衰してもとの値に戻る挙動を示した。これ
は、クラミドモナスの光合成作用に対応する酸素濃度変
化を反映している。線ａと線ｂでは時間応答がほぼ等し
いことから、経時変化が、膜透過過程ではなく、微生物
試料（クラミドモナス）の酸素生成速度を反映している
ことが分かる。
【００４７】図３にフィルターメンブレンを膜に用いた
場合の、微生物試料８の最近接点から膜面と垂直方向の
距離（μｍ）に対する酸素濃度（ｍＭ）を示した。
場合の、微生物試料８の最近接点から膜面と垂直方向の
距離（μｍ）に対する酸素濃度（ｍＭ）を示した。
【００４８】この図３において、線ａおよび線ｂは暗黒
下および光照射（明条件）下の酸素濃度勾配を示す。な
お、走査速度は１４．７μｍ／ｓ、計測溶液１１はリン
酸バッファー溶液、試料８はクラミドモナスである。
下および光照射（明条件）下の酸素濃度勾配を示す。な
お、走査速度は１４．７μｍ／ｓ、計測溶液１１はリン
酸バッファー溶液、試料８はクラミドモナスである。
【００４９】暗黒下ａにおいては、微生物試料８の呼吸
活性を反映して、微生物試料近傍の酸素濃度は、計測溶
液の酸素濃度（０．２１ｍＭ）に比較して減少する。明
条件下ｂにおいては、光合成活性を反映して、試料近傍
の酸素濃度は増加している。濃度勾配より呼吸／光合成
に伴う微生物試料８の酸素消費／生成速度を定量するこ
とが可能である。
活性を反映して、微生物試料近傍の酸素濃度は、計測溶
液の酸素濃度（０．２１ｍＭ）に比較して減少する。明
条件下ｂにおいては、光合成活性を反映して、試料近傍
の酸素濃度は増加している。濃度勾配より呼吸／光合成
に伴う微生物試料８の酸素消費／生成速度を定量するこ
とが可能である。
【００５０】本発明は、生体内のレドックスバランスに
関する情報を得る目的にも適用できる。そのためには、
適当な酸化還元電位を有する物質（レドックス種）を計
測溶液１１に共存させる。
関する情報を得る目的にも適用できる。そのためには、
適当な酸化還元電位を有する物質（レドックス種）を計
測溶液１１に共存させる。
【００５１】図４は探針を微生物試料８の最近接地点に
配置して、光をオン／オフした際のＦＭＡ酸化電流
（ａ）およびＦＭＡ+ 還元電流（ｂ）の時間変化を示す
図である。
配置して、光をオン／オフした際のＦＭＡ酸化電流
（ａ）およびＦＭＡ+ 還元電流（ｂ）の時間変化を示す
図である。
【００５２】この図４において、横軸は時間、縦軸は電
流（ｐＡ）を示している。なお、膜９にはフィルターメ
ンブレンを使用し、微生物試料８にはクラミドモナスを
用いた。縦軸は還元電流を正、酸化電流を負で表示し
た。計測溶液１１には０．５ｍＭＦＭＡ+ を含むリン酸
バッファーを用いた。光照射に伴い、微生物試料近傍で
ＦＭＡ酸化電流の増加およびＦＭＡ+ 還元電流の減少が
観測された。これは、光照射下にのみ機能する光合成電
子伝達継路と相互作用することにより、ＦＭＡ+がＦＭ
Ａに還元されたことを示している。細胞内の葉緑体膜で
起きたＦＭＡ+ 還元反応に起因し、微生物試料近傍のＦ
ＭＡ濃度が上昇する。
流（ｐＡ）を示している。なお、膜９にはフィルターメ
ンブレンを使用し、微生物試料８にはクラミドモナスを
用いた。縦軸は還元電流を正、酸化電流を負で表示し
た。計測溶液１１には０．５ｍＭＦＭＡ+ を含むリン酸
バッファーを用いた。光照射に伴い、微生物試料近傍で
ＦＭＡ酸化電流の増加およびＦＭＡ+ 還元電流の減少が
観測された。これは、光照射下にのみ機能する光合成電
子伝達継路と相互作用することにより、ＦＭＡ+がＦＭ
Ａに還元されたことを示している。細胞内の葉緑体膜で
起きたＦＭＡ+ 還元反応に起因し、微生物試料近傍のＦ
ＭＡ濃度が上昇する。
【００５３】光合成電子伝達経路から電子を奪う反応は
Ｈｉｌｌ反応と呼ばれ、反応速度はレドックス種の標準
酸化還元電位と密接な関係にある。酸化還元電位の異な
る複数のレドックス種の光応答を追跡することにより、
電子伝達機構の詳細を評価できると期待される。
Ｈｉｌｌ反応と呼ばれ、反応速度はレドックス種の標準
酸化還元電位と密接な関係にある。酸化還元電位の異な
る複数のレドックス種の光応答を追跡することにより、
電子伝達機構の詳細を評価できると期待される。
【００５４】本発明は、微生物試料８内の酵素活性評価
にも適用できる。生体内のペルオキシダーゼ活性を評価
するために、基質として過酸化水素を、レドックス種と
してＦＭＡを選択した。
にも適用できる。生体内のペルオキシダーゼ活性を評価
するために、基質として過酸化水素を、レドックス種と
してＦＭＡを選択した。
【００５５】図５は微生物試料８の最近接点から膜面と
垂直方向の距離（μｍ）に対するＦＭＡ+ の濃度（ｍ
Ｍ）を示す図である。
垂直方向の距離（μｍ）に対するＦＭＡ+ の濃度（ｍ
Ｍ）を示す図である。
【００５６】計測溶液１１は０．５ｍＭＦＭＡを含むリ
ン酸バッファー溶液を使用した。線（ａ）および線
（ｂ）は過酸化水素濃度０および０．５ｍＭにおけるＦ
ＭＡ+ の濃度勾配を示す。なお、膜９はフィルターメン
ブレンを使用した。微生物試料走査速度は１４．７μｍ
／ｓ、試料８はクラミドモナスである。
ン酸バッファー溶液を使用した。線（ａ）および線
（ｂ）は過酸化水素濃度０および０．５ｍＭにおけるＦ
ＭＡ+ の濃度勾配を示す。なお、膜９はフィルターメン
ブレンを使用した。微生物試料走査速度は１４．７μｍ
／ｓ、試料８はクラミドモナスである。
【００５７】過酸化水素の添加に伴い、微生物試料８近
傍でＦＭＡ+ の増加が観測された。ＦＭＡ+ の増加は過
酸化水素を基質とする酵素反応に由来すると考えられ
る。つまり、ＦＭＡ+ の生成速度は、微生物試料中に含
まれるペルオキシダーゼの活性を反映する。この手法を
応用し還元電流応答の過酸化水素濃度依存性を検討する
ことにより、最大酵素反応速度やミカエリスーメンテン
定数を求めることも可能である。
傍でＦＭＡ+ の増加が観測された。ＦＭＡ+ の増加は過
酸化水素を基質とする酵素反応に由来すると考えられ
る。つまり、ＦＭＡ+ の生成速度は、微生物試料中に含
まれるペルオキシダーゼの活性を反映する。この手法を
応用し還元電流応答の過酸化水素濃度依存性を検討する
ことにより、最大酵素反応速度やミカエリスーメンテン
定数を求めることも可能である。
【００５８】図６に本発明により計測されたクラミドモ
ナスを新しい寒天培地上に継代した後、３日目の写真
（ａ）（代用図）およびその拡大図（ｂ）を示した。
ナスを新しい寒天培地上に継代した後、３日目の写真
（ａ）（代用図）およびその拡大図（ｂ）を示した。
【００５９】計測では、０．５ｍＭＦＭＡおよび０．５
ｍＭ過酸化水素濃度を含むリン酸バッファー溶液中にお
いてペルオキシダーゼ活性を評価した。計測後も、クラ
ミドモナスは正常に増殖している。図６（ｂ）に示すよ
うに、細菌類による汚染が認められず無菌的培養がなさ
れていることが分かった。
ｍＭ過酸化水素濃度を含むリン酸バッファー溶液中にお
いてペルオキシダーゼ活性を評価した。計測後も、クラ
ミドモナスは正常に増殖している。図６（ｂ）に示すよ
うに、細菌類による汚染が認められず無菌的培養がなさ
れていることが分かった。
【００６０】以上、寒天培地上の微生物試料の代謝活性
を、寒天培地上に生育させたままの状態で評価した実施
例を挙げた。代謝活性として、呼吸活性、光合成活性、
電子伝達機能、ペルオキシダーゼ活性の評価が可能であ
ることを示した。
を、寒天培地上に生育させたままの状態で評価した実施
例を挙げた。代謝活性として、呼吸活性、光合成活性、
電子伝達機能、ペルオキシダーゼ活性の評価が可能であ
ることを示した。
【００６１】いずれの場合も、計測の後に、計測された
微生物試料を新しい寒天培地上に移すと、引き続き正常
に増殖することが確認された。すなわち、計測溶液中に
浸漬したことに対する、被計測微生物試料の増殖に関す
る影響はほとんどないことが分かった。
微生物試料を新しい寒天培地上に移すと、引き続き正常
に増殖することが確認された。すなわち、計測溶液中に
浸漬したことに対する、被計測微生物試料の増殖に関す
る影響はほとんどないことが分かった。
【００６２】本発明の計測における無侵襲性は、実際に
様々な微生物の突然変異株や遺伝子改変体を代謝活性に
基づきスクリーニングする際に、極めて重要な特徴であ
る。
様々な微生物の突然変異株や遺伝子改変体を代謝活性に
基づきスクリーニングする際に、極めて重要な特徴であ
る。
【００６３】なお、最近、微小体積内に動物／植物細胞
を充填し、呼吸／光合成活性を評価する方法が提案され
ている〔特願２０００−１５３０１３〕。本発明は、こ
の技術に類似している部分もあるが、以下の点で全く新
しい工夫がなされている。
を充填し、呼吸／光合成活性を評価する方法が提案され
ている〔特願２０００−１５３０１３〕。本発明は、こ
の技術に類似している部分もあるが、以下の点で全く新
しい工夫がなされている。
【００６４】（１）一般に、微生物を液体培地で培養し
た場合には、正常個体群のみならず、液体培養中に生じ
る自然突然変異個体群の活性変異を含んだ状態での評価
に相当する。これに対し、本発明は、微生物の代謝活性
を、遺伝的均一性の保証されたクローン状態で評価する
ことを可能にした。本発明は、液体培地で培養する細胞
を計測対象とするのではなく、寒天培地（固相）の表面
で増殖する微生物を計測対象としている。従って、計測
のために必要な試料の調整工程が全く新規な発明であ
る。本発明では、微生物を寒天培地表面から回収する工
程、及び細胞や微生物を溶液に懸濁する工程が不要とな
る。
た場合には、正常個体群のみならず、液体培養中に生じ
る自然突然変異個体群の活性変異を含んだ状態での評価
に相当する。これに対し、本発明は、微生物の代謝活性
を、遺伝的均一性の保証されたクローン状態で評価する
ことを可能にした。本発明は、液体培地で培養する細胞
を計測対象とするのではなく、寒天培地（固相）の表面
で増殖する微生物を計測対象としている。従って、計測
のために必要な試料の調整工程が全く新規な発明であ
る。本発明では、微生物を寒天培地表面から回収する工
程、及び細胞や微生物を溶液に懸濁する工程が不要とな
る。
【００６５】（２）本発明の計測工程は先行特許出願の
発明と類似している。しかしながら酸素濃度の計測に基
づく呼吸／光合成活性の評価法のみならず、生体と酸化
還元反応をし得るレドックス種を利用することにより、
計測し得る生体反応の適用範囲を広げている。また、本
発明で適用される膜は、膜の選択的透過性を利用して電
極で検出される物質の選択性を向上させる目的よりもむ
しろ、微生物の保持性向上の目的で使用されている。
発明と類似している。しかしながら酸素濃度の計測に基
づく呼吸／光合成活性の評価法のみならず、生体と酸化
還元反応をし得るレドックス種を利用することにより、
計測し得る生体反応の適用範囲を広げている。また、本
発明で適用される膜は、膜の選択的透過性を利用して電
極で検出される物質の選択性を向上させる目的よりもむ
しろ、微生物の保持性向上の目的で使用されている。
【００６６】（３）本発明は、計測後に計測に供した微
生物を引き続き無菌的に継代培養する工程を付加するこ
とが可能である。本発明の計測が無菌的に行われている
以上、本発明による代謝活性計測工程は純粋培養の一過
程として容易に組み入れることが出来る。
生物を引き続き無菌的に継代培養する工程を付加するこ
とが可能である。本発明の計測が無菌的に行われている
以上、本発明による代謝活性計測工程は純粋培養の一過
程として容易に組み入れることが出来る。
【００６７】この特性により、本発明は、様々な遺伝子
座に変異のある各細胞のクローンの中から、代謝活性の
違いに基づいて（突然）変異株をスクリーニングする際
に、高い実用性を有する。
座に変異のある各細胞のクローンの中から、代謝活性の
違いに基づいて（突然）変異株をスクリーニングする際
に、高い実用性を有する。
【００６８】なお、本発明は上記実施例に限定されるも
のではなく、本発明の趣旨に基づいて種々の変形が可能
であり、これらを本発明の範囲から排除するものではな
い。
のではなく、本発明の趣旨に基づいて種々の変形が可能
であり、これらを本発明の範囲から排除するものではな
い。
【００６９】
【発明の効果】以上、詳細に説明したように、本発明に
よれば、以下のような効果を奏することができる。
よれば、以下のような効果を奏することができる。
【００７０】（Ａ）微生物の突然変異株や遺伝子改変体
をスクリーニングする技術に応用でき、現行の形態観察
や標識判定によるスクリーニングとは異なり、代謝活性
に基づくスクリーニング方法を可能にする。さらに計測
に必要な試料は微量であり、スクリーニングに要する時
間と手間を著しく減ずることが出来る。
をスクリーニングする技術に応用でき、現行の形態観察
や標識判定によるスクリーニングとは異なり、代謝活性
に基づくスクリーニング方法を可能にする。さらに計測
に必要な試料は微量であり、スクリーニングに要する時
間と手間を著しく減ずることが出来る。
【００７１】（Ｂ）古くから微生物の利用技術は社会の
幅広い分野に浸透しており、酵母等を直接食品加工の目
的で使用する場合や、微生物の産生物質を医薬品として
回収する産業も大きく発展してきた。さらに、遺伝子組
み替え技術の大きな発展で、今後も様々な機能を有する
微生物の開発は益々盛んになると予測される。突然変異
誘発剤処理、遺伝子タギングを行った細胞群の中から、
従来のスクリーニング方法で単離され得なかった優秀な
品質や特異な株を発見する目的において、微生物の新規
スクリーニング技術が社会に果たす役割は大変重要であ
る。
幅広い分野に浸透しており、酵母等を直接食品加工の目
的で使用する場合や、微生物の産生物質を医薬品として
回収する産業も大きく発展してきた。さらに、遺伝子組
み替え技術の大きな発展で、今後も様々な機能を有する
微生物の開発は益々盛んになると予測される。突然変異
誘発剤処理、遺伝子タギングを行った細胞群の中から、
従来のスクリーニング方法で単離され得なかった優秀な
品質や特異な株を発見する目的において、微生物の新規
スクリーニング技術が社会に果たす役割は大変重要であ
る。
【図１】本発明の実施例を示す寒天培地培養微生物の代
謝機能評価装置の模式図である。
謝機能評価装置の模式図である。
【図２】本発明の実施例を示す微小電極で記録された酸
素還元電流の光応答特性を示す図である。
素還元電流の光応答特性を示す図である。
【図３】本発明の実施例を示す微生物試料の最近接点か
ら膜面と垂直方向の距離に対する酸素濃度を示す図であ
る。
ら膜面と垂直方向の距離に対する酸素濃度を示す図であ
る。
【図４】本発明の実施例を示すＦＭＡ酸化電流（ａ）お
よびＦＭＡ+ 還元電流（ｂ）の光応答特性を示す図であ
る。
よびＦＭＡ+ 還元電流（ｂ）の光応答特性を示す図であ
る。
【図５】本発明の実施例を示す試料の最近接点から膜面
と垂直方向の距離に対するＦＭＡ+ の濃度を示す図であ
る。
と垂直方向の距離に対するＦＭＡ+ の濃度を示す図であ
る。
【図６】本発明により計測されたクラミドモナスを新し
い寒天培地上に継代した後、３日目の写真（ａ）（代用
図）およびその拡大図（ｂ）である。
い寒天培地上に継代した後、３日目の写真（ａ）（代用
図）およびその拡大図（ｂ）である。
１ 微小電極（作用極，探針電極）
２ 参照電極（参照極／対極）
３ ポテンショスタット
４ コンピュータ
５ 精密位置決め装置
６ キャピラリ管
７ 寒天培地
８ 微生物試料
９ 膜
１０ 計測用容器
１１ 計測溶液
１２ 電極シール部（ガラスシール部）
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｇ０１Ｎ 27/46 Ｍ
(72)発明者 大矢 博昭
山形県山形市十日町４−１−32−304
(72)発明者 野田 博行
山形県山形市春日町１−55−205
(72)発明者 末永 智一
宮城県仙台市青葉区貝ヶ森５−２−１
Ｆターム(参考） 4B029 AA07 BB01 CC03 FA01
4B063 QA18 QA20 QQ05 QR69 QR90
QX04
Claims (8)
- 【請求項１】 寒天培地で培養する微生物を、前記寒天
培地上に生育させたままの状態でキャピラリ管に充填
し、該キャピラリ管を計測溶液に浸し、該計測溶液に配
置される作用極としての微小電極と参照電極と、これら
の電極に接続されるポテンショスタットにより、前記微
生物の代謝機能評価を行うことを特徴とする微生物の代
謝機能評価方法。 - 【請求項２】 請求項１記載の微生物の代謝機能評価方
法において、前記微小電極と微生物の位置を、精密位置
決め装置で制御することを特徴とする微生物の代謝機能
評価方法。 - 【請求項３】 請求項１又は２記載の微生物の代謝機能
評価方法において、前記微生物の代謝機能評価は、前記
微生物近傍の酸素濃度分布を計測することによる微生物
の呼吸活性および光合成活性の評価であることを特徴と
する微生物の代謝機能評価方法。 - 【請求項４】 請求項１又は２記載の微生物の代謝機能
評価方法において、前記微生物の代謝機能評価は、酸化
還元物質を前記計測溶液に共存させ、前記微生物近傍の
酸化還元物質濃度分布を計測することによる前記微生物
の電子伝達機能の評価であることを特徴とする微生物の
代謝機能評価方法。 - 【請求項５】 請求項１又は２記載の微生物の代謝機能
評価方法において、前記微生物の代謝機能評価は、酸化
還元物質を前記計測溶液に共存させ、前記微生物近傍の
酸化還元物質濃度分布を計測することによる、微生物の
酵素活性の評価であることを特徴とする微生物の代謝機
能評価方法。 - 【請求項６】 請求項３、４又は５記載の微生物の代謝
機能評価の後に、計測に供した前記微生物を継代培養す
ることを特徴とする微生物の代謝機能評価方法。 - 【請求項７】（ａ）計測溶液を有する計測容器と、
（ｂ）該計測容器内の計測溶液に浸されるとともに、寒
天培地で培養する微生物を、前記寒天培地上に生育させ
たままの状態で充填したキャピラリ管と、（ｃ）前記微
生物の近傍に配置される作用極としての微小電極と、
（ｄ）参照電極と、（ｅ）前記微小電極と参照電極に接
続されるポテンショスタットと、（ｆ）前記キャピラリ
管の位置を決める精密位置決め装置と、（ｇ）該精密位
置決め装置と前記ポテンショスタットに接続されるコン
ピュータとを具備することを特徴とする微生物の代謝機
能評価装置。 - 【請求項８】 請求項７記載の微生物の代謝機能評価装
置において、前記微生物と前記微小電極間に配置される
膜を具備することを特徴とする微生物の代謝機能評価装
置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001316387A JP2003116591A (ja) | 2001-10-15 | 2001-10-15 | 微生物の代謝機能評価方法及びその装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001316387A JP2003116591A (ja) | 2001-10-15 | 2001-10-15 | 微生物の代謝機能評価方法及びその装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003116591A true JP2003116591A (ja) | 2003-04-22 |
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ID=19134409
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001316387A Withdrawn JP2003116591A (ja) | 2001-10-15 | 2001-10-15 | 微生物の代謝機能評価方法及びその装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2003116591A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005049854A1 (ja) * | 2003-11-19 | 2005-06-02 | Sakata Seed Corporation | 土壌微生物を格納したバイオセンサーおよびその利用 |
| JP2006329639A (ja) * | 2005-05-23 | 2006-12-07 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 土壌環境の診断方法 |
| JP2012242274A (ja) * | 2011-05-20 | 2012-12-10 | Univ Of Tsukuba | 食品検査装置及び食品検査方法 |
-
2001
- 2001-10-15 JP JP2001316387A patent/JP2003116591A/ja not_active Withdrawn
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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