JP2003113204A

JP2003113204A - 蛍光性重合体微粒子の製造法

Info

Publication number: JP2003113204A
Application number: JP2001305939A
Authority: JP
Inventors: Kaneichiro Motoda; 兼一郎元田
Original assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 2001-10-02
Filing date: 2001-10-02
Publication date: 2003-04-18

Abstract

(57)【要約】【課題】高い輝度と長い蛍光寿命を示し、粒子表面に
適当な抗体又は抗原を結合することにより、これと選択
的に結合する抗原又は抗体を分析する蛍光免疫分析試
薬、特に時間分解蛍光免疫分析法の試薬の原料として有
用な蛍光性重合体微粒子を提供する。【解決手段】蛍光性ランタノイド錯体、水和抑制剤およ
び補助安定剤を溶解したモノマー溶液を乳化剤の存在下
で水が主体の分散媒中に乳化させ、生成するモノマー滴
をラジカル重合させる蛍光性重合体微粒子の製造法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は蛍光性重合体微粒子
の製造法に関する。詳しくは本発明は蛍光免疫分析試
薬、特に時間分解蛍光免疫分析法の試薬の原料として有
用な蛍光性重合体微粒子の製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】デンドリマーを配位子とするランタノイ
ド（以下Ｌｎと略記する）の３価陽イオン（以下Ｌｎ³⁺
と略記する）の錯体において、デンドリマーがＬｎ³⁺を
増感してその蛍光能を大きく向上させることは、Ｍ．Ｋ
ａｗａら；Ｃｈｅｍ．Ｍａｔｅｒ．、１０巻、２８６−
２９６頁（１９９８）に報告されている。この効果は、
紫外線を吸収するポリベンジルエーテルデンドリマーと
Ｌｎ³⁺との錯体において、空間的に大きく広がった該デ
ンドリマーがまず「集光アンテナ」として紫外線のエネ
ルギーを吸収し、次いでこれを、該デンドリマーのフォ
ーカルポイント（Ｆｏｃａｌｐｏｉｎｔ：デンドリマ
ーの分岐構造の開始点）に位置するランタノイド陽イオ
ンに伝達して発光せしめる「アンテナ効果」として理解
されている。そして、かかる「アンテナ効果」は、マト
リクス高分子（例えば該デンドリマー自身）に該錯体を
分散した場合においても観察されることが上記文献に報
告されている。

【０００３】特開２０００−３４５０５２号公報には、
上記の「アンテナ効果」を示すデンドリマー錯体等の蛍
光性ランタノイド錯体を含有し非晶性樹脂をマトリクス
とする組成物の微粒子及びこれを得る方法が開示されて
いる。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】上記の通り、蛍光性ラ
ンタノイド錯体を含有する蛍光性重合体微粒子は知られ
ているが、従来の方法で得られた粒子は蛍光性を示すも
のの輝度の点で必ずしも満足出来るものではなかった。
本発明は上記実情に鑑みてなされたものであり、その課
題は、ランタノイド陽イオンを含有し、従来にない高輝
度を有する蛍光性重合体微粒子の製造法を提供すること
にある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決すべく、蛍光性ランタノイド錯体を含む蛍光性重合
体微粒子の製造法について鋭意系統的な検討を行った結
果、水和抑制剤が蛍光性ランタノイド錯体に対して本来
の水和抑制能だけでなくモノマーへの溶解度を上昇させ
ること、蛍光性ランタノイドデンドリマー錯体の高世代
化により水和防止性および溶解性が向上すること、更に
乳化剤および補助安定剤の存在下で乳化させることによ
りモノマー滴が安定化され重合反応中の蛍光性ランタノ
イド錯体への分散媒の影響が低減されることを見出し、
その結果として蛍光性ランタノイド錯体を高濃度とし、
かつ反応過程における蛍光性ランタノイド錯体の消光が
生起しにくい製造法があることを見出して本発明に到達
した。

【０００６】即ち、本発明の要旨は、蛍光性ランタノイ
ド錯体、水和抑制剤および補助安定剤を溶解したモノマ
ー溶液を乳化剤の存在下で水が主体の分散媒中に乳化さ
せ、生成するモノマー滴をラジカル重合させることを特
徴とする蛍光性重合体微粒子の製造法、に存する。ま
た、本発明の他の要旨は、第２世代以上のデンドロンを
配位子とする蛍光性ランタノイド錯体および補助安定剤
を溶解したモノマー溶液を乳化剤の存在下で水が主体の
分散媒中に乳化させ、生成するモノマー滴をラジカル重
合させることを特徴とする蛍光性重合体微粒子の製造
法、に存する。

【０００７】

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につき
さらに詳細に説明する。＜蛍光性重合体微粒子の製造法（１）＞本発明の蛍光性
重合体微粒子の製造法は、蛍光性ランタノイド錯体、水
和抑制剤および補助安定剤を溶解したモノマー溶液を乳
化剤の存在下で水が主体の分散媒中に乳化させ、生成す
るモノマー滴をラジカル重合させて蛍光性重合体微粒子
を得るものである。ただし、蛍光性ランタノイド錯体と
して第２世代以上のデンドロンを配位子とする蛍光性ラ
ンタノイド錯体を用いる場合には水和抑制剤は必ずしも
用いなくてもよい。＜モノマー滴＞本発明でいうモノマー滴とは、後述する
蛍光性ランタノイド錯体、水和抑制剤および補助安定剤
を溶解したモノマー溶液を水が主体の分散媒中に乳化剤
の存在下で機械的に分散させて生じる安定なサブミクロ
ンサイズの液滴を意味する。ただし、後述する第２世代
以上のデンドロンを配位子とする蛍光性ランタノイド錯
体を用いた場合は、水和抑制剤を用いなくてもよい。＜蛍光性ランタノイド錯体＞本発明に用いられる蛍光性
ランタノイド錯体とは、ランタノイド陽イオンと有機配
位子とを構成成分とし、該配位子の増感作用（配位子を
励起する光のエネルギーによりランタノイド陽イオンが
発光する現象）を示す錯体である。ただし、後述する水
和抑制剤を用いない場合は、第２世代以上のデンドロン
を配位子とする蛍光性ランタノイド錯体の使用が必須で
ある。

【０００８】かかるランタノイド陽イオンとしては、Ｃ
ｅ³⁺，Ｐｒ³⁺，Ｎｄ³⁺，Ｎｄ⁴⁺，Ｓｍ²⁺，Ｓｍ³⁺，Ｅｕ
²⁺，Ｅｕ³⁺，Ｔｂ³⁺，Ｄｙ³⁺，Ｄｙ⁴⁺，Ｈｏ³⁺，Ｅ
ｒ³⁺，Ｔｍ²⁺，Ｔｍ³⁺，Ｙｂ²⁺，Ｙｂ³⁺等が挙げられ、
中でも、Ｐｒ³⁺，Ｎｄ³⁺，Ｓｍ³⁺，Ｅｕ³⁺，Ｔｂ³⁺，Ｄ
ｙ³⁺，Ｈｏ³⁺，Ｅｒ³⁺，Ｔｍ³⁺，Ｙｂ³⁺等の３価陽イオ
ンは、紫外〜近赤外領域、長い寿命、狭い波長幅等の特
徴を持つ蛍光を発することから好適であり、中でもＮｄ
³⁺，Ｓｍ³⁺，Ｅｕ³⁺，Ｔｂ³⁺，Ｄｙ³⁺，およびＴｍ ³⁺が
更に好適であり、Ｅｕ³⁺およびＴｂ³⁺が発光強度の点で
最も好適である。

【０００９】一方、本発明に用いられる蛍光性ランタノ
イド錯体に使用可能な有機配位子の化学構造にはランタ
ノイド陽イオンへの増感作用を示す限りにおいて特に制
限はないが、増感作用の点でカルボキシレート基または
β−ジケトネート基を配位構造として有するものが好適
である。＜デンドロンを配位子とする蛍光性ランタノイド錯体＞
本発明におけるデンドロン（Ｄｅｎｄｒｏｎ）とは、近
年盛んになってきているデンドリマー（Ｄｅｎｄｒｉｍ
ｅｒ：樹枝状規則分岐を有する高分子構造の総称）の研
究において、かかる構造単位を持つ分子構築部品という
意味で広く用いられる術語と同意であり、例えば、Ｇ．
Ｒ．Ｎｅｗｋｏｍｅら著の成書：Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ
Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，Ｃｏｎｃｅｐｔｓ・Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ・Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ（ＶＣＨＶｅｒｌ
ａｇｓＧｍｂＨ；Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎ
ｙ；１９９６、ＩＳＢＮ：３−５２７−２９３２５−
６）にて用いられている。そして、分岐構造の開始点
（デンドロンを模式的に扇型と見なした場合の扇の要に
相当）をフォーカルポイントと称し、分岐の次数を「世
代（Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）」と称する（図１を参
照）。本発明におけるデンドロンの分岐点における分岐
の本数には制限はないが、通常２本（図１の場合）又は
３本であり、好ましくは２本である。なお、本発明にお
いては、分岐点が１つの構造（即ち第１世代）もデンド
ロンと見なす。

【００１０】本発明に用いられるデンドロンを配位子と
して用いる場合、発光特性の点から前述のように、フォ
ーカルポイントにカルボキシレート基（下記式（８））
もしくはβ−ジケトネート基（下記式（９））を有する
ことが好ましい。

【００１１】

【化８】

【００１２】

【化９】

【００１３】また、本発明に用いられるデンドロンは、
その化学構造の繰り返し単位に芳香環を有することが好
ましい。これは、該デンドロンが紫外光あるいは可視光
を吸収することにより前記の「アンテナ効果」を発揮さ
せるためである。ここで芳香環としては、例えば、ベン
ゼン環、ナフタレン環、アントラセン環等の炭化水素芳
香環、ピリジン環、キノリン環等の含窒素芳香環等が挙
げられる。本発明に好適なデンドロンの構造例として、
具体的には、ポリベンジルエーテル等の芳香族ポリエー
テル、ポリヒドロキシ安息香酸等の芳香族ポリエステ
ル、芳香族又は半芳香族ポリアミド、芳香族ポリカーボ
ネート、芳香族ポリエステルカーボネート、ポリフェニ
レンスルフィド等の芳香族ポリスルフィド、芳香族ポリ
イミド、芳香族ポリアミドイミド等の炭素以外の元素を
高分子主鎖に含む芳香族系高分子構造等が挙げられる。
このうちポリベンジルエーテル等の芳香族ポリエーテ
ル、ポリヒドロキシ安息香酸等の芳香族ポリエステル等
が好ましく、中でもポリベンジルエーテル等の芳香族ポ
リエーテルがより好ましく、下記式（１０）で表される
３，５−ジオキシベンジル基を繰り返し単位とする構造
（Ｃ．Ｊ．Ｈａｗｋｅｒら；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，
Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．、１０１０−１０１３頁（１
９９０）を参照）が最適である。なお、錯体の発光特性
を大きく損なわない限りにおいて、これらの複数種の構
造が１つのデンドロン中に共存していても差し支えな
い。

【００１４】

【化１０】

【００１５】更に、デンドロンがそのフォーカルポイン
トに下記式（１１）で表される３，５−ジオキシベンゾ
エート構造を有する場合、発光特性の点でＴｂ³⁺および
Ｅｕ ³⁺に対して好適であり、下記式（１２）で表される
３，４−ジオキシベンゾエート構造を有する場合に、Ｔ
ｂ³⁺に対して特に好適であり、下記式（１３）で表され
る２，４−ジオキシベンゾエート構造を有する場合に、
Ｅｕ³⁺に対して特に好適である。

【００１６】

【化１１】

【００１７】

【化１２】

【００１８】

【化１３】

【００１９】本発明に用いられるデンドロンの世代に関
して、後述する水和抑制剤を用いない場合は２世代以上
であることが必須であるが、水和抑制剤を用いる場合は
デンドロンの世代に特に制限はなく、通常１〜４、合成
の容易性および錯体の単位重量当たりの輝度でより好ま
しくは１〜３、更に好ましくは１または２である。一
方、錯体１分子当たりの蛍光能および水和防止性の点で
より好ましくは２〜４、更に好ましくは３または４であ
る。従って、本発明に好適なカルボキシレート錯体の具
体例としては、下記（１４）〜（２１）の構造式により
表されるＬｎ³⁺錯体が挙げられ（下記式（１４）〜（１
７）中、Ｌｎ³⁺はＴｂ³⁺またはＥｕ³⁺を表す）、中でも
式（１９）または（２０）で表されるＴｂ³⁺錯体は実用
的に非常に有用である。更に経済性の点で最も重要なの
は、式（１９）で表されるフォーカルポイントに３，４
−ジオキシベンゾエート構造を有する第２世代ポリベン
ジルエーテルデンドロンを配位子とするＴｂ³⁺錯体であ
る。

【００２０】

【化１４】

【００２１】

【化１５】

【００２２】

【化１６】

【００２３】

【化１７】

【００２４】

【化１８】

【００２５】

【化１９】

【００２６】

【化２０】

【００２７】

【化２１】

【００２８】＜β−ジケトネート型錯体＞本発明に好適
なＥｕ³⁺とβ−ジケトネート基を有する配位子により構
成される蛍光性ランタノイド錯体は、下記一般式（７）
で表されるものである。

【００２９】

【化２２】

【００３０】但し、一般式（７）において、Ｒ¹は炭素
数６以下のアルキル基または炭素数６以下のフッ化アル
キル基を、Ｒ²は芳香族基をそれぞれ表す。好適なＲ¹と
しては、例えばメチル基，エチル基，ｎ−ブチル基，ｎ
−ヘキシル基等の直鎖アルキル基、イソプロピル基，イ
ソブチル基等の分岐を有するアルキル基、トリフルオロ
メチル基，ペンタフルオロエチル基，ヘプタフルオロプ
ロピル基，ノナフルオロブチル基等の直鎖状パーフルオ
ロアルキル基、ヘプタフルオロイソプロピル基，ノナフ
ルオロイソブチル基等の分岐を有するパーフルオロアル
キル基等が挙げられ、より好適なのはトリフルオロメチ
ル基，ペンタフルオロエチル基，ヘプタフルオロプロピ
ル基，ノナフルオロブチル基等の直鎖状パーフルオロア
ルキル基、およびヘプタフルオロイソプロピル基等の炭
素数４以下のパーフルオロアルキル基、更に好適なのは
トリフルオロメチル基，ペンタフルオロエチル基，ヘプ
タフルオロプロピル基等の炭素数３以下のパーフルオロ
アルキル基、最も好適なのはトリフルオロメチル基であ
る。一方、好適なＲ²としては、フェニル基，ナフチル
基，アントラセニル基，ピレニル基等の芳香族炭化水素
基、チオフェン基（又はテノイル基）やフラニル基（又
はフロイル基）等の硫黄原子や酸素原子等のヘテロ原子
を含有する芳香族基等が挙げられ、中でもフェニル基ま
たはチオフェン基がより好適である。従って、本発明に
好適な具体的な構造例としては、下記式（２２）で表さ
れるナフチル基を有する構造、あるいは下記式（２３）
で表されるチオフェン基で置換された構造等が挙げられ
る。

【００３１】

【化２３】

【００３２】

【化２４】

【００３３】＜モノマー＞本発明において、ラジカル重
合可能な化合物の性質には何ら特別な制限はなく、通常
使用されている全てのモノマーを使用することが可能で
ある。本発明に適したモノマー種として、Ｃ１〜Ｃ２０
−アルキル（メタ）アクリレート、炭素原子２０個まで
を有するビニル芳香族化合物、炭素原子２０個までを有
するカルボン酸のビニルエステル、エチレン系不飽和ニ
トリル、ハロゲン化ビニル、Ｃ１〜Ｃ１０−アルコール
のビニルエーテル、１個または２個の二重結合を有する
Ｃ２〜Ｃ８−脂肪族炭化水素または前記モノマーの混合
物から選択されたモノマーが挙げられる。

【００３４】本発明に好適なアルキル（メタ）アクリレ
ートの例としては、Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル（メタ）ア
クリレートであり、より具体的にはアクリル酸メチル、
アクリル酸エチル、アクリル酸イソプロピル、アクリル
酸ｎ−ブチル、アクリル酸ヘキシル、アクリル酸フェニ
ル、アクリル酸ベンジル、アクリル酸アダマンチル、ア
クリル酸２−ヒドロキシエチル、メタクリル酸メチル、
メタクリル酸エチル、メタクリル酸イソプロピル、メタ
クリル酸ｎ−ブチル、メタクリル酸ヘキシル、メタクリ
ル酸フェニル、メタクリル酸ベンジル、メタクリル酸ア
ダマンチル、メタクリル酸２−ヒドロキシエチルおよび
メタクリル酸２−エチルヘキシル等が挙げられる。

【００３５】本発明に好適なビニル芳香族化合物として
は、スチレン、ビニルトルエン、α−メチルスチレン、
β−メチルスチレン、α−ブチルスチレン、４−ｎ−ブ
チルスチレン、４−ｎ−デシルスチレンおよび４−アセ
トキシスチレン等が挙げられる。本発明に好適なカルボ
ン酸のビニルエステルとしては、ラウリン酸ビニル、ス
テアリン酸ビニル、プロピオン酸ビニルおよび酢酸ビニ
ル等が挙げられる。

【００３６】本発明に好適なニトリルとしては、アクリ
ロニトリルおよびメタクリロニトリル等が挙げられる。
本発明に好適なハロゲン化ビニルとしては、クロロ置換
されたエチレン系不飽和化合物、フルオロ置換されたエ
チレン系不飽和化合物もしくはブロモ置換されたエチレ
ン系不飽和化合物等が挙げられ、より好ましくは塩化ビ
ニルおよび塩化ビニリデンである。

【００３７】本発明に好適なビニルエーテルの例は、ビ
ニルメチルエーテルおよびビニルイソブチルエーテル等
であり、より好ましくはＣ１〜Ｃ４−アルコールのビニ
ルエーテルが挙げられる。本発明に好適な１個の二重結
合を有するモノマーは、エテンおよびプロペン等であ
り、２個のオレフィン性二重結合を有するＣ２〜Ｃ８−
炭化水素の例は、ブタジエン、イソプレンおよびクロロ
プレン等である。

【００３８】上記モノマー種のうち、本発明においてよ
り好ましいモノマーは、アルキル（メタ）アクリレート
およびビニル芳香族化合物である。更にランタノイド錯
体の溶解性からメタクリル酸メチルおよびスチレンが最
も好ましい。＜乳化剤＞本発明に用いられる乳化剤とは、水とモノマ
ーを乳化して安定な乳濁状態を形成させる意図で加えら
れる化合物のことである。

【００３９】複数種の乳化剤を混合してもよいが、使用
する場合には、個々の成分は、勿論、相溶性でなければ
ならない。一般に使用される乳化剤は、例えばエトキシ
ル化脂肪族アルコール（ＥＯ単位：３〜５０、Ｃ８〜Ｃ
３６−アルキル）、エトキシル化モノアルキルフェノー
ル、ジアルキルフェノールおよびトリアルキルフェノー
ル（ＥＯ単位：３〜５０、Ｃ４〜Ｃ９−アルキル）、ス
ルホコハク酸のジアルキルエステルのアルカリ金属塩並
びに硫酸アルキル（Ｃ８〜Ｃ１２−アルキル）、エトキ
シル化アルカノール（ＥＯ単位：４〜３０、Ｃ１２〜Ｃ
１８−アルキル）、エトキシル化アルキルフェノール
（ＥＯ単位：３〜５０、Ｃ４〜Ｃ９−アルキル）、アル
キルスルホン酸（Ｃ１２〜Ｃ１８−アルキル）およびア
ルキルアリールスルホン酸（Ｃ９〜Ｃ１８−アルキル）
のアルカリ金属塩およびアンモニウム塩、およびアルキ
ルカルボン酸（Ｃ１２〜Ｃ１８−アルキル）のアルカリ
金属塩である。また、必要に応じ反応性乳化剤を用いる
ことも可能である。

【００４０】本発明に用いられる好適な乳化剤の具体例
としては、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム，ド
デシルスルホン酸ナトリウム等のスルホン酸塩、パルミ
チン酸ナトリウム，ステアリン酸ナトリウム等のカルボ
ン酸塩等の陽イオン性界面活性剤等が挙げられる。＜補助安定剤＞本発明に用いられる補助安定剤とは、モ
ノマー滴の大きさを安定化させる意図で加えられる低分
子化合物のことで、水への溶解度が非常に低くてモノマ
ーに可溶である特徴を有する。

【００４１】具体的な補助安定剤の水中への溶解度は、
２５℃の水中で、０．００１重量％以下であることが好
ましく、０．０００１重量％以下であることがより好ま
しい。また、モノマー中への溶解度は、２５℃のモノマ
ー中で０．１重量％以上であることが好ましく、１重量
％以上であることがより好ましく、１０重量％以上であ
ることが最も好ましい。

【００４２】本発明に適当な補助安定剤の例としては、
Ｃ８〜Ｃ３０−アルカン類、具体的にはヘキサデカン
等、Ｃ８〜Ｃ３０−アルキル（メタ）アクリレート類、
具体的にはメタクリル酸イソデシル、メタクリル酸ラウ
リルおよびメタクリル酸ステアリル等、ラジカル重合し
たポリマー類、例えば、ポリメチルメタクリレート、ポ
リスチレン、ポリエステルおよびポリウレタン等、が挙
げられる。

【００４３】モノマーにする補助安定剤の量は、好まし
くは０．１〜５０重量％、より好ましくは１〜３０重量
％、最も好ましくは２〜１０重量％である。＜水和抑制剤＞本発明において、第２世代以上のデンド
ロンを配位子とする蛍光性ランタノイド錯体を用いない
場合は、以下のような水和抑制剤を必ず用いる必要があ
る。本発明に用いられる水和抑制剤とは、電荷的に中性
（つまり非イオン性）かつ、ランタノイド陽イオンに配
位することで水和等による蛍光強度の低下を抑制し、更
に蛍光性ランタノイド錯体のモノマー溶液への溶解度を
増す効果のある有機化合物を意味する。

【００４４】かかる有機化合物としては、ホスフィンオ
キシド類（下記一般式１）、リン酸エステル類（下記一
般式２）、スルホキシド類（下記一般式３）、亜リン酸
エステル類（下記一般式４）、ホスフィン類（下記一般
式５）、スルフィド類（下記一般式６）、アミン類、窒
素含有芳香族類等が挙げられる。

【００４５】

【化２５】

【００４６】

【化２６】

【００４７】

【化２７】

【００４８】

【化２８】

【００４９】

【化２９】

【００５０】

【化３０】

【００５１】ただし、一般式（１）〜（６）中のＲ¹，
Ｒ²およびＲ³は、アルキル基，フッ化アルキル基，又は
芳香族炭化水素基のいずれでもよく、Ｒ¹，Ｒ²およびＲ
³が同一の官能基であってもそれぞれ異なっていてもよ
い。好適なＲ¹，Ｒ²およびＲ ³としては、例えばメチル
基，エチル基，ｎ−ブチル基，ｎ−ヘキシル基，ｎ−オ
クチル基，ｎ−デシル基，ｎ−ドデシル基等の直鎖アル
キル基、イソプロピル基，イソブチル基等の分岐を有す
るアルキル基、トリフルオロメチル基，ペンタフルオロ
エチル基，ヘプタフルオロプロピル基，ノナフルオロブ
チル基等の直鎖状パーフルオロアルキル基、ヘプタフル
オロイソプロピル基，ノナフルオロイソブチル基等の分
岐を有するパーフルオロアルキル基、フェニル基，ナフ
チル基，アントラセニル基，ピレニル基等の芳香族炭化
水素基等が挙げられ、より好適なのはｎ−ブチル基，ｎ
−ヘキシル基，ｎ−オクチル基，ｎ−デシル基，ｎ−ド
デシル基、最も好適なのはｎ−オクチル基である。

【００５２】本発明に好適な水和抑制剤として、具体的
には、トリブチルホスフィンオキシド，トリヘキシルホ
スフィンオキシド，トリオクチルホスフィンオキシド，
トリデシルホスフィンオキシド，トリフェニルホスフィ
ンオキシド等のホスフィンオキシド類、リン酸トリメチ
ル，リン酸トリブチル等のリン酸エステル類、ジメチル
スルホキシド，ジブチルスルホキシド，メチルフェニル
スルホキシド，ジフェニルスルホキシド等のスルホキシ
ド類、亜リン酸トリメチル等の亜リン酸エステル類、ト
リブチルホスフィン，トリヘキシルホスフィン，トリオ
クチルホスフィン，トリデシルホスフィン，トリフェニ
ルホスフィン，トリシクロヘキシルホスフィン等のホス
フィン類、ジメチルスルフィド，ジエチルスルフィド，
エチルプロピルスルフィド，メチルフェニルスルフィ
ド，ジオクチルスルフィド等のスルフィド類、ドデシル
アミン，ヘキサデシルアミン，エチレンジアミン，ジエ
チレントリアミン等のアミン類、ピリジン，ビピリジ
ン，フェナントロリン，ビピラジン，ナフチリジン，テ
ルピリジン，イミダゾール等の窒素含有芳香族類等が挙
げられる。これらのうち、希土類元素の酸素親和性か
ら、トリブチルホスフィンオキシド，トリヘキシルホス
フィンオキシド，トリオクチルホスフィンオキシド，ト
リデシルホスフィンオキシド，トリフェニルホスフィン
オキシド等のホスフィンオキシド類、リン酸トリメチ
ル，リン酸トリブチル等のリン酸エステル類、ジメチル
スルホキシド，ジブチルスルホキシド，メチルフェニル
スルホキシド，ジフェニルスルホキシド等のスルホキシ
ド類等の酸素配位性化合物が好ましく、モノマーへの溶
解性からトリブチルホスフィンオキシド，トリヘキシル
ホスフィンオキシド，トリオクチルホスフィンオキシ
ド，トリデシルホスフィンオキシド，リン酸トリブチル
あるいはジブチルスルホキシド等のアルキル基の炭素数
が４以上である長鎖アルキル基含有化合物が更に好まし
く、塩基性の強さ（即ち配位力の強さ）からトリオクチ
ルホスフィンオキシドあるいはリン酸トリブチルが最も
好ましい。なお、錯体の発光特性を大きく損なわない限
りにおいて、これらの複数種の水和抑制剤が共存してい
ても差し支えない。＜蛍光性重合体微粒子＞本発明の蛍光性重合体微粒子
は、前述した蛍光性ランタノイド錯体が重合体内部に均
一に分散していることを特徴とするものである。ここ
で、重合体としては、（メタ）アクリル系樹脂またはス
チレン系樹脂が好ましく、特に紫外域での透明性の点か
らは（メタ）アクリル系樹脂が特に好ましい。また、
（メタ）アクリル系樹脂を採用すると、本発明の蛍光性
重合体微粒子を蛍光免疫分析試薬として用いる場合に、
その分散液中の蛍光性重合体微粒子が合成樹脂製の容器
内壁に付着残留しにくいといった副次的な好ましい効果
が見られる場合がある。なお、複数種のモノマーが共重
合された重合体を用いてもよい。

【００５３】本発明の蛍光性重合体微粒子中の蛍光性ラ
ンタノイド錯体の濃度に制限はないが、通常、０．０１
〜５０重量％、輝度の点で好ましくは０．１〜５０重量
％、蛍光性重合体微粒子の粒径制御の点でより好ましく
は０．１〜４０重量％、更に好ましくは１〜３０重量
％、最も好ましくは２〜２５重量％とする。本発明の蛍
光性重合体微粒子の粒径には特に制限はないが、通常、
体積平均メディアンとして０．０１〜２０μｍの範囲と
する。特に蛍光免疫分析試薬として用いる場合には、体
積平均メディアンが０．０５〜２μｍであることが好ま
しい。この値が大きすぎると沈降性等の理由で好ましく
なく、逆に小さすぎると発光特性の点で好ましくない。
こうした理由で、本発明の蛍光性重合体微粒子の体積平
均メディアンはより好ましくは０．１〜１μｍ、更に好
ましくは０．１〜０．８μｍ、最も好ましくは０．２〜
０．５μｍとする。

【００５４】本発明の蛍光性重合体微粒子の粒径分布に
は特に制限はないが、通常、粒径分散係数δとして２以
下とする。ここで粒径分散係数δとは、レーザー光散乱
等の汎用的な手法で測定される重合体微粒子の粒径分布
測定結果において、小粒径側からの積算体積がＡ％とな
る粒径ＤＡを用いて下記式（２４）により定義される量
である。従って、全粒子の粒径が同一である（即ち粒径
分布がない）理想的な場合、このδの値はゼロとなる。

【００５５】

【数１】 δ＝（Ｄ９０−Ｄ１０）／Ｄ５０（２４）特に、蛍光免疫分析試薬として本発明の蛍光性重合体微
粒子を用いる場合には、該δの値は小さいほど分析精度
が高まるので、好ましくは１．０以下、より好ましくは
０．８以下、更に好ましくは０．７以下、最も好ましく
は０．６以下とする。

【００５６】本発明の蛍光性重合体微粒子の発生する蛍
光の寿命には特に制限はないが、蛍光免疫分析試薬とし
て使用する場合には、パルス励起光による蛍光強度が１
／ｅ（但し、ｅは自然対数の底）となるまでの時間で定
義する蛍光寿命が０．００５ミリ秒以上であることが望
ましい。これは、測定試料に含まれる不純物によるバッ
クグラウンドの蛍光（有機物を由来とすることが多く、
通常、数〜数１０ナノ秒程度の寿命となる）が消失した
後で、十分な蛍光強度を有することがＴＲ−ＦＩＡ測定
の原理上、必要であるためである。該蛍光寿命は、蛍光
種にもよるが、好ましくは０．０１ミリ秒以上、より好
ましくは０．１ミリ秒以上、更に好ましくは０．５ミリ
秒以上、最も好ましくは１ミリ秒以上とする。特にＴｂ
³⁺が蛍光種の場合、本発明により該蛍光寿命は１ミリ秒
以上とすることが可能であり、非常に有用である。

【００５７】本発明の蛍光性重合体微粒子を蛍光免疫分
析試薬として用いる場合、測定対象の抗原又は抗体と結
合する抗体又は抗原を結合する官能基を蛍光性重合体微
粒子の表面に有することが必要である。かかる結合の様
式に制限はないが、蛍光性重合体微粒子表面に設ける官
能基として好適なのは、カルボキシル基、酸塩化物基等
の酸ハロゲン化物基、酸無水物基、エステル基、アミド
基、マレイミド基、チオール基、水酸基、およびアミノ
基等で、中でもカルボキシル基、酸塩化物基、酸無水物
基、マレイミド基、チオール基、アミノ基等が更に好適
で、カルボキシル基あるいは酸塩化物基が最も好適であ
る。なお、エステル基は加水分解により容易にカルボキ
シル基に変換できるので、エステル基を表面に有する蛍
光性重合体微粒子は有用な中間体である。これらの抗体
を結合するための官能基量は、本発明の蛍光性重合体微
粒子の単位重量当たりの官能基当量として表現すると、
通常、０．００１〜０．５ミリ当量／グラム、好ましく
は０．００５〜０．２ミリ当量／グラム、より好ましく
は０．０１〜０．１ミリ当量／グラム、更に好ましくは
０．０２〜０．０７ミリ当量／グラム、最も好ましくは
０．０３〜０．０５ミリ当量／グラムとする。＜蛍光性重合体微粒子の製造法（２）＞本発明の蛍光性
重合体微粒子の製造法は、以下の二通りの方法である。
一方は、蛍光性ランタノイド錯体、水和抑制剤および補
助安定剤を溶解したモノマー溶液を、水が主体の分散媒
中に乳化剤の存在下で乳化させ、そのモノマー滴をラジ
カル重合させて蛍光性重合体微粒子を得る方法であり、
他方は、第２世代以上のデンドロンを配位子とする蛍光
性ランタノイド錯体および補助安定剤を溶解したモノマ
ー溶液を水が主体の分散媒中に乳化剤の存在下で乳化さ
せ、そのモノマー滴をラジカル重合させて蛍光性重合体
微粒子を得る方法である。

【００５８】本発明の蛍光性重合体微粒子の好適な製造
方法の具体例を示す。まず、内部を窒素置換した容器に
水（８０重量部）を入れ、乳化剤（例えば、ドデシルス
ルホン酸ナトリウム：１．２重量部）とｐＨ緩衝剤（例
えば、炭酸水素ナトリウム：０．０４重量部）を溶解し
た溶液（以下、水溶液という）と、蛍光性ランタノイド
錯体（４重量部）、水和抑制剤（例えば、トリオクチル
ホスフィンオキシド：１．５重量部）、補助安定剤（例
えば、メタクリル酸ステアリル：０．４重量部）および
ラジカル発生剤（例えば、ＡＩＢＮ：０．２重量部）を
溶解したモノマー（例えば、メタクリル酸メチル：２０
重量部）溶液（以下、モノマー溶液という）とを用意す
る。次に水溶液を攪拌しながらモノマー溶液を滴下して
乳濁させる。更に反応容器を氷浴につけ、油滴がなくな
るまで超音波を照射する（例えば、湘南科学社より供給
された超音波分散機ＵＨ−６００；出力６００Ｗ、周波
数２０Ｈｚ、７０％出力にて使用なら約３０分）。その
後、温水浴（例えば、８０℃）につけて攪拌を継続する
ことによって重合反応（例えば３時間）を行う。重合終
了後は温水浴を外して室温まで放冷し、蛍光性重合体微
粒子を得る。

【００５９】本発明の蛍光性重合体微粒子の製造法にお
いて、水が主体の分散媒として好適な組み合わせは水と
メタノール，エタノール，アセトン，Ｎ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミド，テトラヒドロフラン等が挙げられるが、
分散媒としては水単独が最適である。本発明の蛍光性重
合体微粒子の製造法において、好適な蛍光性ランタノイ
ド錯体としては、前述のデンドロンを配位子とする錯体
やβ−ジケトネート型錯体等が挙げられ、本発明に好適
な具体的な構造例としては、下記構造式（１８）で表さ
れるフォーカルポイントに３，４−ジオキシベンゾエー
ト構造を有する第２世代ポリベンジルエーテルデンドロ
ンを配位子とするＴｂ³⁺錯体や下記式（２２）で表され
るＥｕ（ＮＴＡ）₃が最適である。

【００６０】

【化３１】

【００６１】

【化３２】

【００６２】本発明の蛍光性重合体微粒子の製造法にお
いて、好適なモノマーとしては前述のようにランタノイ
ド錯体の溶解性からメタクリル酸メチルおよびスチレン
が最も好ましい。また、モノマーに対する乳化剤量は
０．１〜５０重量％の量で使用されることが好ましい。
より好ましくは０．２〜２０重量％であり、最も好まし
くは０．５〜１０重量％である。

【００６３】本発明の蛍光性重合体微粒子の製造法にお
いて、ラジカル発生剤としては特に制限はなく、水溶性
のラジカル発生剤、例えば過硫酸ナトリウム，過硫酸カ
リウム，過硫酸リチウム，過硫酸アンモニウム等の過硫
酸塩等、もしくはラジカル重合性モノマーに溶解性のも
の、例えば、Ｎ，Ｎ−アゾビスイソブチロニトリル（Ａ
ＩＢＮ）等のアゾ化合物、過酸化ベンゾイル等の過酸化
物等が挙げられる。また、異種のラジカル開始剤を併用
してもよい。この場合、モノマー溶液中に親油性のラジ
カル開始剤（例えばＡＩＢＮ）を溶かし込んでおいて
も、分散媒中に水溶性のラジカル開始剤（例えば過硫酸
カリウム）を溶かし込んでいてもよい。

【００６４】更にラジカル反応の副反応を抑制するため
に、必要に応じて炭酸水素ナトリウム，炭酸水素カリウ
ム，リン酸水素ナトリウム，リン酸水素カリウム等のｐ
Ｈ緩衝剤を併用する場合もある。本発明の蛍光性重合体
微粒子の製造法において、ｐＨ緩衝剤の濃度に制限はな
いが、ラジカル発生剤に対してモル比で１：１から１：
２が好ましい範囲である。

【００６５】本発明の蛍光性重合体微粒子の製造法にお
いて、水溶液中の乳化剤濃度に制限はないが、乳化状態
の安定性から１ｍＭから１００ｍＭが好ましく、更に粒
径制御の容易さから１０ｍＭから５０ｍＭが最も好まし
い。本発明の蛍光性重合体微粒子の製造法において、モ
ノマー溶液中の蛍光性ランタノイド錯体の濃度に制限は
ないが、通常、０．０１〜５０重量％、輝度の点で好ま
しくは０．１〜５０重量％、蛍光性重合体微粒子の粒径
制御の点でより好ましくは０．１〜４０重量％、更に好
ましくは１〜３０重量％、最も好ましくは２〜２５重量
％である。

【００６６】本発明の蛍光性重合体微粒子の製造法にお
いて、水和抑制剤の添加量に制限はないが、蛍光性ラン
タノイド錯体のモノマー溶液への溶解度が損なわれにく
い好適な範囲として、モル比で１：０．５から１：１０
（蛍光性ランタノイド錯体：水和抑制剤）が挙げられ
る。本発明の蛍光性重合体微粒子の製造法において、ラ
ジカル発生剤の濃度に制限はないが、重合反応制御の容
易さから分散媒に対して１ｍＭから２０ｍＭが好まし
い。

【００６７】本発明の蛍光性重合体微粒子の製造法にお
いて、水溶液とモノマー溶液の重量比に制限はないが、
モノマー溶液の重量比が少なくては非効率であり、多く
ては蛍光性重合体微粒子が不安定になるため、水溶液と
モノマー溶液の重量比に関して好ましくは９９：１から
５０：５０、より好ましくは９５：５から７０：３０、
最も好ましくは９０：１０から８０：２０である。

【００６８】本発明の蛍光性重合体微粒子の製造法にお
いて、サブミクロンサイズのモノマー滴を形成させる際
の超音波発生源に制限はないが、一般的にはオムニミキ
サー、ミクロフルイダイザーや超音波ホモジナイザー等
が用いられる。また、照射時間に関しては、装置の出力
や強度分布等に依存するので特に規定できないが、通常
は１０〜６０分である。

【００６９】本発明の蛍光性重合体微粒子の製造法にお
いて、重合温度に制限はなく、ラジカル発生剤の半減期
などを基準に設定されるが、通常は４０〜９５℃、より
好ましくは５０〜９０℃、最も好ましくは６０〜８０℃
である。

【００７０】

【実施例】次に、実施例により本発明の具体的態様を更
に詳細に説明するが、本発明は、その要旨を越えない限
り、これらの実施例によって限定されるものではない。
なお、原料試薬は、特に記載がない限り、東京化成社製
のものを精製を加えずに使用した。［測定装置と条件等］（１）ＮＭＲ：日本電子社製ＪＮＭ−ＥＸ２７０型ＦＴ
−ＮＭＲ（¹Ｈ：２７０ＭＨｚ，¹³Ｃ：６７．８ＭＨ
ｚ）、溶媒：ＣＤＣｌ₃。（２）蛍光：日立製作所社製Ｆ−２５００型蛍光光度
計。（３）粒度測定：日機装社製９２３０型マイクロトラッ
クＵＰＡ粒度分析計を用い、動的光散乱法（ドップラー
散乱光解析）により蛍光性重合体微粒子の粒径及び粒度
分布を求めた。＜蛍光性デンドリマー錯体の合成＞前掲のＭ．Ｋａｗａ
らの文献において、フォーカルポイント部分の原料であ
る３，５−ジヒドロキシ安息香酸エチルの代わりに、
３，４−ジヒドロキシ安息香酸エチルを用いて同様の合
成を行い、第１、第２および第３世代のデンドリティッ
クカルボン酸を合成し、これらを配位子とするＴｂ³⁺錯
体（それぞれ［３４Ｇ−１］₃−Ｔｂ、［３４Ｇ−２］₃
−Ｔｂおよび［３４Ｇ−３］₃−Ｔｂという）を同様に
調製した。即ち、ベンジルブロミド（２．０５当量）と
３，５−ジヒドロキシベンジルアルコール（１．０当
量）とを１８−クラウン−６エーテル（０．２当量）と
新たに粉砕した無水炭酸カリウム（２．５当量）との存
在下、アセトン中、６０℃で縮合してデンドリティック
ベンジルアルコールを得るエーテル化反応、及び、これ
に四臭化炭素（１．２５当量）とトリフェニルホスフィ
ン（１．２５当量）とをテトラヒドロフラン（以下ＴＨ
Ｆと略記する）中で作用させて相当するデンドリティッ
クベンジルブロミドに変換する臭素化反応とを繰り返し
て任意世代のデンドリティックブロミドを得る。これを
３，４−ジヒドロキシ安息香酸エチルと前記同様のエー
テル化反応で縮合し、次いで過剰当量の水酸化カリウム
を含水メタノール／ＴＨＦ混合溶液中で作用させるエス
テル加水分解反応で１世代上のデンドリティックカルボ
ン酸を得る。こうして得たカルボン酸（３当量）をＴｂ
³⁺の酢酸塩無水物（１当量）と還流クロロベンゼン中で
反応させ、脱酢酸による配位子交換反応で目的とする錯
体を得る。なお、これら３種の構造は、それぞれ本明細
書中の構造式（１８）、（１９）および（２０）に相当
する。＜蛍光性重合体微粒子の調製＞以下、蛍光性重合体微粒
子の調製例を示す。

【００７１】実施例１内部を窒素置換したガラス製フラスコ中に水（８０重量
部）を入れ、炭酸水素ナトリウム（０．０４重量部）と
ドデシルスルホン酸ナトリウム（花王社製：商品名エマ
ール１０ニードル、以下ＳＤＳと略記する）（１．２重
量部）を溶解した。これを攪拌しながら、メタクリル酸
メチル（以下ＭＭＡと略記する）（２０重量部）、前記
で合成した第２世代の蛍光性デンドリマーＴｂ³⁺錯体
［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂ（４重量部）、メタクリル酸ス
テアリル（以下ＳＭＡと略記する）（０．４重量部）、
ＡＩＢＮ（０．２重量部）、及びトリオクチルホスフィ
ンオキシド（以下ＴＯＰＯと略記する）（１．５重量
部）を混合したモノマー溶液を滴下して乳濁させた。次
いで反応容器を氷浴につけ、油滴がなくなるまで約３０
分超音波を照射した（湘南科学社より供給された超音波
分散機ＵＨ−６００；出力６００Ｗ、周波数２０Ｈｚ、
７０％出力にて使用）。その後、温水浴につけて反応液
温を８０℃に調整し、約６時間攪拌を継続した後、温水
浴を外して室温まで放冷した。こうして得られた乳濁液
に含まれる蛍光性重合体微粒子は、体積平均メディアン
が０．１６μｍ、下記式（２４）で定義される粒径分散
係数δが１．４であった。

【００７２】

【数２】 δ＝（Ｄ９０−Ｄ１０）／Ｄ５０（２４）実施例２実施例１において［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂの使用量を
２．３重量部に変更し、更にＴＯＰＯを使用せずに同様
の操作を行った。こうして得られた乳濁液に含まれる蛍
光性重合体微粒子は、体積平均メディアンが０．１０μ
ｍ、前記式（２４）で定義される粒径分散係数δが１．
９であった。

【００７３】実施例３内部を窒素置換したガラス製フラスコ中に水（７０重量
部）を入れ、炭酸水素ナトリウム（０．０２重量部）と
ＳＤＳ（０．１２重量部）を溶解した。これを攪拌しな
がら、ＭＭＡ（２０重量部）、前記で合成した第１世代
の蛍光性デンドリマーＴｂ³⁺錯体［３４Ｇ−１］₃−Ｔ
ｂ（１．２重量部）、ＳＭＡ（０．４重量部）、及びＴ
ＯＰＯ（０．７５重量部）を混合したモノマー溶液を滴
下して乳濁させた。次いで反応容器を氷浴につけ、油滴
がなくなるまで実施例１同様に約０．５時間超音波を照
射した。その後、温水浴につけて反応液温を８０℃に調
整し、過硫酸カリウム（以下ＫＰＳと略記する）（０．
０６重量部）を水（１０重量部）に溶かした溶液を投入
して、約６時間攪拌を継続した後、温水浴をはずして室
温まで放冷した。こうして得られた乳濁液に含まれる蛍
光性重合体微粒子は、体積平均メディアンが０．１５μ
ｍ、前記式（２４）で定義される粒径分散係数δが１．
４であった。

【００７４】実施例４実施例１において［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂを前記で合成
した第３世代の蛍光性デンドリマーＴｂ³⁺錯体［３４Ｇ
−３］₃−Ｔｂ（２．８重量部）に変更し、同様の操作
を行った。こうして得られた乳濁液に含まれる蛍光性重
合体微粒子は、体積平均メディアンが０．１１μｍ、前
記式（２４）で定義される粒径分散係数δが１．６であ
った。

【００７５】実施例５実施例１においてＳＤＳの使用量を０．１２重量部に変
更し、同様の操作を行った。こうして得られた乳濁液に
含まれる蛍光性重合体微粒子は、体積平均メディアンが
０．３０μｍ、前記式（２４）で定義される粒径分散係
数δが１．３であった。

【００７６】実施例６実施例３において炭酸水素ナトリウムの使用量を０．１
重量部に、ＳＤＳの使用量を１．２重量部に、［３４Ｇ
−１］₃−Ｔｂを［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂの４重量部に、
ＴＯＰＯの使用量を１．５重量部に、更にＫＰＳの使用
量を０．３重量部に変更し、同様の操作を行った。こう
して得られた乳濁液に含まれる蛍光性重合体微粒子は、
体積平均メディアンが０．１３μｍ、前記式（２４）で
定義される粒径分散係数δが１．４であった。

【００７７】実施例７実施例３において、［３４Ｇ−１］₃−ＴｂをＥｕ（Ｎ
ＴＡ）₃の１．５０重量部に、ＴＯＰＯの使用量を０．
５重量部に変更し、同様の操作を行った。こうして得ら
れた乳濁液に含まれる蛍光性重合体微粒子は、体積平均
メディアンが０．２２μｍ、前記式（２４）で定義され
る粒径分散係数δが１．４であった。

【００７８】比較例１実施例３において［３４Ｇ−１］₃−Ｔｂの使用量を
０．５０重量部に変更し、更にＴＯＰＯを使用せずに同
様の操作を行った。こうして得られた乳濁液に含まれる
蛍光性重合体微粒子は、体積平均メディアンが０．１１
μｍ、前記式（２４）で定義される粒径分散係数δが
１．３であった。

【００７９】比較例２内部を窒素置換したガラス製フラスコ中に水（８０重量
部）を入れ、炭酸水素ナトリウム（０．０４重量部）と
ＳＤＳ（１．２重量部）とを溶解した。これを攪拌しな
がら、ＭＭＡ（２０重量部）、［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂ
（４重量部）、およびＡＩＢＮ（０．２重量部）を混合
したモノマー溶液を滴下して乳濁させた。その後、温水
浴につけて反応液温を８０℃に調整し、約６時間攪拌を
継続した後、温水浴を外して室温まで放冷した。こうし
て得られた乳濁液に含まれる蛍光性重合体微粒子は、体
積平均メディアンが０．３５μｍ、前記式（２４）で定
義される粒径分散係数δが１．３であった。

【００８０】比較例３比較例２において［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂを［３４Ｇ−
１］₃−Ｔｂの１．５０重量部に変更し、モノマー溶液
中に更にＴＯＰＯ（０．７５重量部）を溶かした溶液に
変更して同様の操作を行った。こうして得られた乳濁液
に含まれる蛍光性重合体微粒子は、体積平均メディアン
が０．３１μｍ、前記式（２４）で定義される粒径分散
係数δが１．４であった。

【００８１】得られた蛍光性重合体微粒子の平均粒径
（体積平均メディアン）、相対蛍光強度を表−１にまと
めた。［実施例１〜７及び比較例１〜３の蛍光性重合体微粒子
の蛍光強度測定］（１）サンプル調製上記実施例１〜７及び比較例１〜３の蛍光性重合体微粒
子を固形分濃度が１０ｐｐｍとなるように脱塩水にそれ
ぞれ分散して調製した。（２）蛍光強度測定上記の蛍光光度計を用い、溶液サンプルは光路長さ１ｃ
ｍの石英セルに入れて測定を実施した。

【００８２】強度を測定した蛍光は５４５ｎｍ（Ｔｂ³⁺
錯体）および６１５ｎｍ（Ｅｕ³⁺錯体）付近のピークと
し、励起波長は該観測波長を固定した場合の励起スペク
トルの最大値の波長とした。蛍光強度は比較例１の蛍光
強度の測定値を１としてこれに対する相対値で表した。
結果を表−１に示す。

【００８３】

【表１】表−１蛍光性重合体微粒子の特性水和抑体積平均相対蛍番号蛍光性錯体制剤メディアン光強度実施例１［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂ有０．１６μｍ２６．３実施例２［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂ無０．１０μｍ１１．４実施例３［３４Ｇ−１］₃−Ｔｂ有０．１５μｍ２０．２実施例４［３４Ｇ−３］₃−Ｔｂ有０．１１μｍ３５．４実施例５［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂ有０．３０μｍ４８．７実施例６［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂ有０．１３μｍ５７．３実施例７Ｅｕ（ＮＴＡ）₃ 有０．２２μｍ２６．７比較例１［３４Ｇ−１］₃−Ｔｂ無０．１１μｍ１比較例２［３４Ｇ−２］₃−Ｔｂ無０．３５μｍ１．２比較例３［３４Ｇ−１］₃−Ｔｂ有０．３１μｍ１．５＜蛍光性重合体微粒子の蛍光免疫分析試薬への応用＞実
施例１〜７及び比較例１〜３の乳濁液に含まれる蛍光性
重合体微粒子は表面にエステル基を有し、該エステル基
の加水分解によりカルボキシル基量は必要に応じて制御
できるので、カルボキシル基と抗体分子の結合により蛍
光免疫分析試薬として利用可能である。

【００８４】

【発明の効果】本発明の製造法によって得られる蛍光性
重合体微粒子は、長い蛍光寿命を有する蛍光性ランタノ
イド錯体を均一に含有するので、高輝度の蛍光体として
利用される。また本発明の蛍光性重合体微粒子の表面に
カルボキシル基等の官能基を導入し、適当な抗体又は抗
原を結合すると、これと選択的に結合する抗原又は抗体
を分析する蛍光免疫分析試薬、特に時間分解蛍光免疫分
析法の試薬の原料として有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】デンドリマーの世代とフォーカルポイントを表
す模式図である。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】蛍光性ランタノイド錯体、水和抑制剤お
よび補助安定剤を溶解したモノマー溶液を乳化剤の存在
下で水が主体の分散媒中に乳化させ、生成するモノマー
滴をラジカル重合させることを特徴とする蛍光性重合体
微粒子の製造法。
【請求項２】水和抑制剤が、下記一般式（１）〜
（６）で表される化合物からなる群から選ばれる少なく
とも１種である、請求項１に記載の蛍光性重合体微粒子
の製造法。【化１】【化２】【化３】【化４】【化５】【化６】（但し、一般式（１）〜（６）中のＲ¹、Ｒ²およびＲ³
は、それぞれアルキル基、フッ化アルキル基又は芳香族
炭化水素基を表し、相互に異なっていてもよい。）
【請求項３】蛍光性ランタノイド錯体に対する水和抑
制剤の添加量が、モル比で０．５：１から１０：１であ
る、請求項１又は２に記載の蛍光性重合体微粒子の製造
法。
【請求項４】モノマーに対する乳化剤の量が、０．１
〜５０重量％である、請求項１〜３のいずれかに記載の
蛍光性重合体微粒子の製造法。
【請求項５】蛍光性ランタノイド錯体が、デンドロン
を配位子とするものである、請求項１〜４のいずれかに
記載の蛍光性重合体微粒子の製造法。
【請求項６】デンドロンの世代数が第２世代以上であ
る、請求項５に記載の蛍光性重合体微粒子の製造法。
【請求項７】第２世代以上のデンドロンを配位子とす
る蛍光性ランタノイド錯体および補助安定剤を溶解した
モノマー溶液を乳化剤の存在下で水が主体の分散媒中に
乳化させ、生成するモノマー滴をラジカル重合させるこ
とを特徴とする蛍光性重合体微粒子の製造法。
【請求項８】モノマーが、アルキル（メタ）アクリレ
ートまたはビニル芳香族化合物である、請求項１〜７の
いずれかに記載の蛍光性重合体微粒子の製造法。
【請求項９】蛍光性ランタノイド錯体が、フォーカル
ポイントにカルボキシレート基もしくはβ−ジケトネー
ト基を有するデンドロンを配位子とするものである、請
求項５〜８のいずれかに記載の蛍光性重合体微粒子の製
造法。
【請求項１０】デンドロンが、ポリベンジルエーテル
構造を有するものである、請求項５〜９に記載の蛍光性
重合体微粒子の製造法。
【請求項１１】蛍光性ランタノイド錯体が、テルビウ
ム３価陽イオン（Ｔｂ³⁺）錯体であり、デンドロンがそ
のフォーカルポイントに３，４−ジオキシベンゾエート
構造を有するものである、請求項９又は１０に記載の蛍
光性重合体微粒子の製造法。
【請求項１２】蛍光性ランタノイド錯体が、ユウロピ
ウム３価陽イオン（Ｅｕ³⁺）錯体であり、デンドロンが
そのフォーカルポイントに２，４−ジオキシベンゾエー
ト構造を有するものである、請求項９又は１０に記載の
蛍光性重合体微粒子の製造法。
【請求項１３】蛍光性ランタノイド錯体が、下記一般
式（７）で表されるユウロピウム３価陽イオン（Ｅ
ｕ³⁺）のβ−ジケトネート型錯体である、請求項１〜４
及び８のいずれかに記載の蛍光性重合体微粒子の製造
法。【化７】（但し、一般式（７）中、Ｒ¹は炭素数６以下のアルキ
ル基または炭素数６以下のフッ化アルキル基を、Ｒ²は
芳香族基を、それぞれ表す）
【請求項１４】 β−ジケトネート型錯体がナフタレン
環もしくはチオフェン環を含有するものである、請求項
１３に記載の蛍光性重合体微粒子の製造法。