JP2003095988A - Ｈｇｆ遺伝子からなる医薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＨＧＦ遺伝子からなる医薬を提供することを
課題とする。 【解決手段】 本発明は、ＨＧＦ遺伝子からなる医薬に
関する。本発明の医薬は、ＨＧＦそのものの投与に比べ
治療効果が持続的であり、また局所選択的に作用させる
ことができるため、ＨＧＦの副作用を低減することが可
能である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は遺伝子治療などに用
いられる医薬に関する。さらに、詳しくはＨＧＦ（Hepa
tocyte Growth Factor）遺伝子からなる医薬、及びＨＧ
Ｆ遺伝子を含有するリポソームに関する。

【０００２】

【従来の技術】ＨＧＦは様々な薬理作用を示す生理活性
ペプチドであり、その薬理作用については、例えば実験
医学 Vol.10, No.3（増刊）330-339（1992）に記載され
ている。ＨＧＦはその薬理作用から肝硬変治療剤、腎疾
患治療剤、上皮細胞増殖促進剤、抗ガン剤、ガン療法用
副作用防止剤、肺障害治療剤、胃・十二指腸損傷治療
剤、脳神経障害治療剤、免疫抑制副作用防止剤、コラー
ゲン分解促進剤、軟骨障害治療剤、動脈疾患治療剤、肺
繊維症治療剤、肝臓疾患治療剤、血液凝固異常治療剤、
血漿低蛋白治療剤、創傷治療剤、神経障害改善薬、造血
幹細胞増加剤、育毛促進剤等（特開平 4-18028号公報、
特開平 4-49246号公報、EP 492614号公報、特開平 6-25
010号公報、WO 93/8821、特開平 6-172207、特開平 7-8
9869号公報、特開平 6-40934号公報、WO 94/2165、特開
平 6-40935号公報、特開平 6-56692号公報、特開平 7-4
1429号公報、WO 93/3061、特開平 5-213721等）として
有用である。

【０００３】遺伝子治療に関しては、アデノシン・デア
ミナーゼ欠損症、ＡＩＤＳ遺伝子治療、癌遺伝子治療、
嚢胞性繊維症性遺伝子治療、血友病遺伝子治療等につい
て現在活発な開発研究が国際的になされている。しか
し、ＨＧＦ遺伝子を用いた遺伝子治療についてはまだ知
られておらず、また遺伝子治療が可能であるかについて
も不明であった。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】ＨＧＦは血中半減期の
短い薬物の１つである。従って、局所における持続的な
投与が望まれていた。また、ＨＧＦは多種多様の薬理作
用を有することから、種々の治療剤としての開発が期待
されている反面、その多種多様の薬理作用から全身的な
投与では副作用が問題となることもありうる。また、Ｈ
ＧＦそのものを静脈内に投与すれば、かなりのＨＧＦが
肝臓に滞留するため、治療目的の臓器に到達する量が少
なくなるという欠点がある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は前記課題を解決
するためになされたものであり、その要旨は、（１）Ｈ
ＧＦ遺伝子からなる医薬、（２）ＨＧＦ遺伝子を含有す
るリポソーム、（３）センダイウイルスと融合させた膜
融合リポソームである上記（２）記載のリポソーム、
（４）上記（２）又は（３）記載のリポソームからなる
医薬、（５）動脈疾患治療剤である（１）又は（４）記
載の医薬、及び（６）軟骨傷害治療剤である（１）又は
（４）記載の医薬に関する。

【０００６】

【発明の実施の形態】本発明に使用される「ＨＧＦ遺伝
子」とは、ＨＧＦを発現し得る遺伝子をいい、当該遺伝
子には、発現されるポリペプチドがＨＧＦと実質的に同
効である限り、その遺伝子配列の一部が欠失又は他の塩
基により置換されていたり、他の塩基配列が一部挿入さ
れていたり、５′末端及び／又は３′末端に塩基が結合
したような遺伝子も包含される。かかるＨＧＦ遺伝子と
しては、例えば、Nature, 342,440 (1989) 、特開平5-1
11383号公報、Biochem. Biophys. Res. Commun. 163,96
7 (1989) などに記載のＨＧＦ遺伝子が例示され、これ
らの遺伝子を本発明で使用することができる。ＨＧＦ遺
伝子は、適当なベクターに組み込んだものを使用する。
例えば、後に挙げるウイルスの遺伝子にＨＧＦ遺伝子を
組み込んだウイルスベクター、又はＨＧＦ遺伝子を組み
込んだ適当な発現ベクターとして使用する。

【０００７】本発明における「医薬」とは、ＨＧＦの有
する薬理作用に基づいたヒトの疾患の治療剤又は予防剤
をいい、例えば上記の治療剤又は予防剤が挙げられる。
本発明によってＨＧＦ遺伝子が細胞に導入された後、該
細胞でＨＧＦが発現され、そのＨＧＦが薬理作用を示
す。従って、本発明の医薬は、ＨＧＦの対象疾患と同様
の対象疾患に有効である。例えば、ＨＧＦ遺伝子を細胞
内に導入した場合、実施例に記載の様に、血管内皮細胞
の増殖は促進されるが、血管平滑筋細胞の増殖は促進さ
れない。さらに、実施例に記載のように、ラットを用い
た動物実験において、生体内心臓にＨＧＦ遺伝子を導入
した場合、血管新生が見られる。従って、ＨＧＦ遺伝子
は動脈疾患、特に血管平滑筋細胞の異常な増殖を主体と
する障害に起因する各種疾患（例えば、血管拡張術（Ｐ
ＴＣＡ）後の再狭窄、動脈硬化症、抹梢循環不全等）の
治療・予防、心筋梗塞、心筋症、末梢性血管閉塞症、心
不全などの疾患の予防・治療に有用である。なお、ＨＧ
Ｆ自体も、血管内皮細胞の増殖は促進するが、血管平滑
筋細胞の増殖を促進せず、同様の治療剤・予防剤として
有用であり、ＨＧＦ遺伝子による効果は、ＨＧＦ自体の
効果に基づくものである。また、実施例に記載の様に、
関節内にＨＧＦ遺伝子を導入すると、関節軟骨細胞の修
復が促進され、プロテオグリカンを合成する細胞の増殖
が促進される。従って、ＨＧＦ遺伝子は種々の軟骨傷
害、例えば骨形成異常症、変形性関節症、変形性椎間板
症、骨折の修復・治癒不全、スポーツによる外傷、キー
パンチャー病などの疾患の予防、治療に有効である。Ｈ
ＧＦ自体も軟骨細胞の修復・増殖を促進し、同様の治療
剤・予防剤として有用であり、ＨＧＦ遺伝子による効果
は、ＨＧＦ自体の効果に基づくものである。

【０００８】「リポソーム」とは、内部に水層を有する
脂質二重層でできた閉鎖小胞体であり、その脂質２分子
膜構造は生体膜に極めて近似していることが知られてい
る。本発明のリポソームを製造する際に使用するリン脂
質としては、例えばレシチン、リゾレシチン等のホスフ
ァチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジ
ルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスフ
ァチジル酸等の酸性リン脂質、又はこれらのアシル基を
ラウロイル基、ミリストイル基、オレオイル基等に置換
したリン脂質、ホスファチジル・エタノールアミン、ス
フィンゴミエリン等のスフィンゴリン脂質等などがあ
る。また、コレステロール等を添加することもできる。
リポソームは、例えば通常の細胞膜中に存在する脂質な
ど天然の材料から通常知られた方法で製造することがで
きる。本発明のＨＧＦ遺伝子を含有するリポソームは、
例えば精製したリン脂質の薄膜をＨＧＦ遺伝子を含有す
る溶液に懸濁し、超音波処理等を施して製造することが
できる。

【０００９】また、本発明のＨＧＦ遺伝子を含有するリ
ポソームは、適宜ウイルス等と融合させて膜融合リポソ
ームとしてもよい。その場合、ウイルスを、例えば、紫
外線等で不活性化することが好ましい。特に好ましい膜
融合リポソームとして、センダウイルス（Hemagglutina
ting virus of Japan：ＨＶＪ）と融合させた膜融合リ
ポソームが挙げられる。この膜融合リポソームは、日経
サイエンス、1944年４月号、32-38頁、J. Biol Chem.,
266(6), 3361-3364 (1991) 等記載の方法で製造するこ
とができ、例えば、紫外線照射等で不活性化した精製Ｈ
ＶＪとＨＧＦ遺伝子ベクターを含有するリポソーム懸濁
液とを混合し、緩やかに撹拌した後、結合しなかったＨ
ＶＪをショ糖密度勾配遠心法で除去することにより、Ｈ
ＶＪ融合リポソーム（ＨＶＪ−リポソーム）を調製する
ことができる。また、リポソームに、標的細胞に親和性
を有するものを結合させて細胞への遺伝子導入効率を上
げることができる。標的細胞に親和性を有するものとし
ては、例えば、抗体、レセプター等のリガンド等が挙げ
られる。

【００１０】ＨＧＦ遺伝子の細胞内への導入方法として
は、ウイルスベクターによるもの、及びその他のものに
大別される（日経サイエンス、1994年４月号、20-45
頁、月刊薬事、36(1),23-48 (1994) 、及びこれらの引
用文献等）。本発明の医薬においてはいずれの方法も適
用することができる。ウイルスベクターによる導入方法
としては、例えばレトロウイルス、アデノウイルス、ア
デノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイ
ルス、ポリオウイルス、シンビス他のＲＮＡウイルス等
にＨＧＦ遺伝子を組み込んで導入する方法が挙げられ
る。この中で、レトロウイルス、アデノウイルス、アデ
ノ関連ウイルス等を用いた方法が特に好ましい。その他
の導入方法としては、リポソーム法、リポフェクチン
法、マイクロインジェクション法、リン酸カルシウム
法、エレクトロポレーション法等が挙げられ、リポソー
ム法が特に好ましい。

【００１１】また、ＨＧＦ遺伝子を実際に医薬として作
用させるには、ＨＧＦ遺伝子を直接体内に導入するIn V
ivo法、及びヒトからある種の細胞を採取し体外でＨＧ
Ｆ遺伝子を該細胞に導入しその細胞を体内に戻すEx Viv
o法がある（日経サイエンス,1994年４月号, 20-45頁、
月刊薬事, 36(1), 23-48 (1994) 、及びこれらの引用文
献等）。本発明の医薬においては治療目的の疾患、標的
臓器等に応じて、適宜いずれかの方法を選択して適用す
ることができる。In Vivo法は、Ex Vivo法に比べて費用
と手間が少なく、また簡便である。Ex Vivo法は、ＨＧ
Ｆ遺伝子の細胞内導入の効率がよい。

【００１２】本発明の医薬において、In Vivo 法により
投与する場合は治療目的の疾患、標的臓器等に応じた適
当な投与経路により投与され得る。例えば、静脈、動
脈、皮下、筋肉内などに投与するか、又は腎臓、肝臓、
肺、脳、神経等の疾患の対象部位に直接投与することが
できる。疾患部位に直接投与すれば、臓器選択的に治療
することができる。例えば、「ＰＴＣＡ後の再狭窄」に
対する遺伝子を用いる治療では、動脈内に投与すること
で実施でき（実験医学、12 (15増刊), 1298-1933(199
4)）、好ましくはＰＴＣＡにおけるバルーンの先に本発
明の医薬をつけて、血管にこすりつければそのまま血管
内皮細胞及び血管平滑筋細胞に導入することも可能であ
る。

【００１３】また、Ex Vivo法による場合には、常法に
準じ、ヒトの細胞（例えば、リンパ球、造血幹細胞等）
を採取し、それに本発明の医薬を感作させて遺伝子導入
を行った後、ＨＧＦ産生細胞をヒトへ戻すことが行われ
る。In Vivo法により投与する場合は、種々の製剤形態
（例えば、液剤等）をとりうるが、一般的には有効成分
であるＨＧＦ遺伝子を含有する注射剤等とされる。ま
た、必要に応じて、慣用の担体を加えてもよい。当該注
射剤等は常法により調製することができ、例えば、ＨＧ
Ｆ遺伝子を適切な溶剤（例えば、滅菌された水、緩衝
液、生理食塩水等）に溶解した後、フィルター等で濾過
して滅菌し、次いで無菌的な容器に充填することにより
調製することができ、またＨＧＦ遺伝子に代え、ＨＧＦ
遺伝子を組み込んだウイルスベクターを製剤化してもよ
い。さらに、ＨＧＦ遺伝子を包埋したリポソーム（又は
ＨＪＶ−リポソーム）においては、懸濁剤、凍結剤、遠
心分離濃縮凍結剤などのリポソーム製剤の形態とするこ
とができる。製剤中のＨＧＦ遺伝子の含量は、治療目的
の疾患、標的臓器、患者の年齢、体重などにより適宜調
製することができるが、通常ＨＧＦ遺伝子として0.0001
mg〜100mg、好ましくは0.001mg〜１０mgであり、これを
数日ないし数月に１回投与するのが適当である。

【００１４】

【実施例】以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はこれらの実施例によりなんら限定
されるものではない。なお、使用した実験材料及び方法
の概要は以下のとおりである。

【００１５】実験材料及び方法(1) ＨＧＦ発現ベクター ＨＧＦ発現ベクターの調製は、ｐＵＣ−ＳＲα発現ベク
ター（FEBS, 333, 61-66 (1993)）のＥｃｏ ＲＩとＮ
ｏｔ Ｉサイトの間にヒトＨＧＦ ｃＤＮＡ（2.2kb ：
Biochem. Biophys. Res. Commun.,172, 321-327 (199
0)；日本特許公開平5-111383）を挿入することにより行
なった。このプラスミドベクターにおいて、ＨＧＦ ｃ
ＤＮＡの転写はＳＲαプロモーターにより制御される
（Nature 342, 440-443 (1989)）。

【００１６】(2) 細胞培養 ラットの冠動脈内皮細胞は、８週令のスプラギュードウ
リィ（ＳＤ）ラットの心臓を酵素的に消化したものから
密度勾配遠心法により単離した（Transplantation 57,
1653-1660 (1994)）。ラットの大動脈平滑筋細胞（以
下、ＶＳＭＣという）は、１２週令ＳＤラットから酵素
処理により得た（J. Clin. Invest., 93,355-360 (199
4)）。これらの細胞は、１０％（vol/vol）ウシ胎児血
清、ペニシリン（１００Ｕ／ml）、ストレプトマイシン
（１００μg／ml）を含有するＤＭＥＭ培地で維持し
た。細胞は、３７℃、９５％空気−５％ＣＯ₂の加湿雰
囲気中、２日ごとに培地を交換してインキュベートし
た。これらの細胞は、免疫組織学的及び形態的観察によ
り、それぞれ内皮細胞及び平滑筋細胞であることが示さ
れた。ヒト大動脈内皮細胞（５代継代）及びヒトＶＳＭ
Ｃ（５代継代）は、クラボ社より入手したものを用い、
上記と同様な方法で、５％ウシ胎児血清、上皮成長因子
（１０ng／ml）、塩基性繊維芽細胞成長因子（２ng／m
l）及びデキサメサゾン（１μM）を含有するＭＣＤＢ１
３１培地で培養した。なお、静止期の内皮細胞は、J. C
lin. Invest. 86, 1690-1697 (1990) ; ibid. 94, 824-
829 (1994) に従って調製した。

【００１７】(3) ＨＶＪ−リポソームのIn Vitro遺伝子
導入 感作される内皮細胞又はＶＳＭＣは、１０⁸個を６ウエ
ルプレートに播種し、８０％コンフルエンスまで増殖さ
せた。細胞は、２mM塩化カルシウムを含む平衡塩類溶液
（１３７mM NaCl, 5.4mM KCl, １０mM Tris-HCl, pH7.
6、以下「ＢＳＳ」という）で３回洗浄し、実施例１で
得たＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ（2.5 mgの脂質及び１
０μｇの包埋ＤＮＡ含有）の溶液１ml又は比較例１で得
たＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔの溶液１mlを加え、４
℃で５分間、さらに３７℃で３０分間インキュベートし
た。細胞は洗浄し、１０％ウシ血清を含む新鮮培地中、
ＣＯ ₂インキュベーターで維持した。

【００１８】(4) 内皮細胞及びＶＳＭＣＨ中のＨＧＦ濃
度の測定 感作される内皮細胞及びＶＳＭＣが産生するＨＧＦ濃度
の測定はＥＬＩＳＡ法で行なった。即ち、ラット又はヒ
トの内皮細胞又はＶＳＭＣは６ウエルプレート（コーニ
ング社製）に５×１０⁴細胞／cm²の細胞密度で播種し、
２４時間培養した。感作後２４時間して、培地を交換し
更に４８時間培養した。ＨＧＦの放出を検討するため、
感作された細胞（感作４８時間後）は洗浄し、インスリ
ン（５×１０^-7M）、トランスフェリン（５μg／ml）及
びアスコルベート（0.2mM）を含有する無血清培地１ml
に加えた。２４時間後、培養培地を集め、６００ｇで１
０分間遠心し、−２０℃で保存した。培地中のＨＧＦ濃
度は、抗ラットＨＧＦ抗体又は抗ヒトＨＧＦ抗体を用い
た酵素免疫法で測定した（Exp. Cell Res. 210, 326-33
5 (1994) ; Jpn. J. CancerRes., 83, 1262-1266 (199
2)）。ウサギ抗ラット又は抗ヒトＨＧＦ ＩｇＧを、９
６ウエルプレート（コーニング社製）に４℃で１５時間
コートした。３％ウシ血清アルブミンを含むＰＢＳ（リ
ン酸緩衝食塩液）でブロッキングした後、培養培地を各
ウエルに加え、２５℃で２時間インキュベートした。ウ
エルは、0.025％トゥイーンを含むＰＢＳ（PBS-トゥイ
ーン）で３回洗浄後、ビオチン化ウサギ抗ラットＨＧＦ
ＩｇＧ又は抗ヒトＨＧＦ ＩｇＧを添加し、２５℃で
２時間インキュベートした。PBS-トゥイーンで洗浄後、
ウエルは西洋ワサビ パーオキシダーゼ結合ストレプト
アビジン−ビオチン複合体（PBS-トゥイーン溶液）とイ
ンキュベートした。酵素反応は、基質溶液（2.5mM O-フ
ェニレンジアミン、１００mM リン酸ナトリウム、５０
mM クエン酸、0.015％過酸化水素含有）を添加するこ
とにより開始した。酵素反応は、１Ｍ硫酸を添加するこ
とにより停止し、４９０nmの吸光度を測定した。なお、
抗ヒトＨＧＦ抗体はヒトＨＧＦとのみ交差反応し、ラッ
トＨＧＦとは反応せず、また抗ラットＨＧＦ抗体はラッ
トＨＧＦとのみ交差反応し、ヒトＨＧＦとは反応しな
い。

【００１９】(5) ＨＧＦ 使用したヒト及びラット組換ＨＧＦは、ヒト又はラット
ＨＧＦ ｃＤＮＡを含む発現プラスミドで感作されたＣ
ＨＯ細胞又はＣ−１２７細胞の培養液から精製したもの
を使用した（Cell, 77, 261-271 (1994) ; J. Clin. In
vest. 93, 355-360 (1994)）。

【００２０】(6) 統計的解析 全ての実験は少なくとも３回行い、測定値は平均値±標
準誤差で示した。測定値の統計的解析は、ダンカン法
（Duncan's test）で行った。

【００２１】(7) ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染
色、アザン（Ａｚａｎ）染色 ＨＧＦ遺伝子を導入したラットを遺伝子導入後１０日
に、ヘバリンを加えた生理食塩水を潅流して屠殺し、引
き続きＰＢＳで調製した４％パラホルムアルデヒドによ
る固定を一晩行った。固定後にパラフィン包埋を行って
切片を作製し、通常の方法によりＨＥ染色、Ａｚａｎ染
色を行った。顕微鏡下にて微小血管数を数えた。

【００２２】実施例１ＨＧＦ発現ベクターを含有するＨＶＪ−リポソームの調
製 テトラヒドロフランに、ホスファチジルセリン、ホスフ
ァチジルコリン及びコレステロールを重量比で１：4.8
：２で混合した。テトラヒドロフランをロータリーエ
バポレーターで留去することで、この脂質の混合物（１
０mg）を容器壁に析出させた。ウシ胸腺から精製したＨ
ＭＧ １ 核蛋白（high mobility group1 nuclear pro
tein）９６μｇとプラスミドＤＮＡ（３００μｇ）のＢ
ＳＳ（２００μｌ）溶液と２０℃で１時間混合し、次い
で上記の脂質に添加した。リポソーム−ＤＮＡ−ＨＭＧ
１複合体懸濁液はボルテックスで混合し、３秒間超音
波処理をし、３０分間撹拌した。精製したＨＶＪ（Ｚ
株）は、使用直前に３分間紫外線照射 (１１０erg/mm²
sec)で不活性化した。上記で得られたリポソーム懸濁液
（0.5 ml, 脂質１０mgを含有）とＨＶＪ（20,000 hemag
glutinating units）を全液量が４mlとなる様にＢＳＳ
を加えて、混合した。この混合物を４℃で１０分間イン
キュペートし、さらに３７℃で３０分間ゆっくりと撹拌
した。融合していないＨＶＪは、ショ糖密度勾配遠心法
で、ＨＶＪ−リポソームから除去した。すなわち、ショ
糖密度勾配における上層を集めることで、ＨＧＦ発現ベ
クターを含有するＨＶＪ−リポソーム（１０μｇ／mlの
ＨＧＦ発現ベクターを含有する）を得た。以下、ＨＧＦ
発現ベクターを含有するＨＶＪ−リポソームを、ＨＶＪ
−リポソーム−ＤＮＡと称する。

【００２３】実施例２ＨＧＦ発現ベクターを含有するＨＶＪ−リポソームのラ
ットへの投与 ＨＧＦ発現ベクターを含有するＨＶＪ−リポソームの調
製は、ＨＭＧ １ 核蛋白を６４μｇ、プラスミドＤＮ
Ａを２００μｇ用いて、実施例に記載の方法に従って行
った。また、リポソーム懸濁液（0.5 ml, 脂質１０mgを
含有）とＨＶＪ（35,000 hemagglutinating units）を
全液量が２mlとなる様にＢＳＳを加えて混合した。ＳＤ
ラット（４００−５００ｇ；日本チャールズリバー社よ
り購入）に対しベントバルビタール・ナトリウム塩（0.
1ml／１００mg）を腹腔内投与して麻酔し、保温して自
動呼吸器により呼吸を確保した。ラットに左側開胸術を
施し、ＨＶＪ−リポソームＤＮＡ又はＨＶＪ−リポソー
ム−ｃｏｎｔ（２０μｌ）を３０Ｇの注射針を用いて、
心尖に直接、慎重に注入した。

【００２４】比較例１ＨＧＦ発現ベクターを含有しないＨＶＪ−リポソームの
製造 ＨＧＦ遺伝子を含まないベクターに、実施例１記載の方
法と同様の操作を行って、ＨＧＦ発現ベクターを含有し
ないＨＶＪ−リポソームの製造した。以下、ＨＧＦ発現
ベクターを含有しないＨＶＪ−リポソームを、ＨＶＪ−
リポソーム−ｃｏｎｔと称する。

【００２５】比較例２ヒトＴＧＦ−β発現ベクターを含有するＨＶＪ−リポソ
ームの調製 ヒトＴＧＦ−β発現ベクターを用いて、実施例１と同様
にしてヒトＴＧＦ−β発現ベクターを含有するＨＶＪ−
リポソームを調製した。ここで、ヒトＴＧＦ−β発現ベ
クターとしては、文献？に従って調製されたベクターを
用いた。以下、ヒトＴＧＦ−β発現ベクターを含有する
ＨＶＪ−リポソームを、ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ
（ＴＧＦ−β）と称する。

【００２６】試験例１ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラット冠動脈内
皮細胞のＨＧＦの発現 ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ（リポソーム中のＨＧＦ発
現ベクター濃度：１０μｇ／ml）を、ラット冠動脈内皮
細胞（細胞数：１０⁸個）に感作し、ＨＧＦの産生量を
ＥＬＩＳＡ法で測定した。また、対照として、ＨＶＪ−
リポソーム−ｃｏｎｔを用いて、上記と同様な試験を行
った。更に、非感作ラット冠動脈内皮細胞についてもＨ
ＧＦ産生量を測定した（無処置群）。その結果を図１に
示す（ｎ＝６）。図中、ＨＧＦはＨＶＪ−リポソーム−
ＤＮＡを感作したラット冠動脈内皮細胞群である。図１
に示されるように、ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作
したラット冠動脈内皮細胞は高いレベルでＨＧＦを産生
し、分泌した。それに対して、無処置群及びＨＶＪ−リ
ポソーム−ｃｏｎｔで感作したラット冠動脈内皮細胞群
には、実質上、ＨＧＦ産生は認められなかった。細胞数
で測ってみると、ＨＧＦ発現群では有意に高い細胞数で
あった。

【００２７】試験例２内皮細胞の増殖に対する感作されたＨＧＦの発現ベクタ
ーの効果 ヒト内皮細胞にＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作
し、外因的に添加した組換ヒトＨＧＦの存在下（１、１
０及び１００ｎｇ／ml）又は非存在下に培養し、細胞数
の増加率（％）を測定した。その結果を図２（折線グラ
フ）に示す（ｎ＝６）。図中、ＤＳＦはＨＶＪ−リポソ
ーム−ｃｏｎｔを感作した内皮細胞群、ＨＧＦは所定濃
度の組換ヒトＨＧＦの存在下に培養した群を示す（＊：
Ｐ＜0.05,＊＊：Ｐ＜0.01対ＤＳＦ）。図２の折線グラ
フに示されるように、外因的に添加したＨＧＦにより内
皮細胞の増殖は促進されることが明らかになった。一
方、ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ（濃度：１０μｇ／m
l）を感作した内皮細胞を培養し、細胞数の増加を測定
し、増加率（％）を求めた。また、対照として、ＨＶＪ
−リポソーム−ｃｏｎｔを感作した内皮細胞を培養し、
細胞数の増加を測定し、増加率（％）を求めた。その結
果を図２（棒グラフ）に示す（ｎ＝６）。図中、ＤＳＦ
はＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作した内皮細胞
群、ＨＧＦベクターはＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感
作した内皮細胞群を示す（＊＊；Ｐ＜0.01対ＤＳＦ、
＃：Ｐ＜0.05対ＨＧＦ 100ng/ml）。図２の棒グラフに
示されるように、ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作し
た内皮細胞の増加率は対照に比べて著しく高く、また外
因的に添加したＨＧＦの効果に対しても有意に高いこと
が明らかになった。

【００２８】更に、上記のＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ
を感作した内皮細胞の培養をウサギ抗ヒトＨＧＦ抗体の
存在下又は非存在下に行ない、細胞数の増加を測定し、
増加率（％）を求めた。また、対照として、ＨＶＪ−リ
ポソーム−ｃｏｎｔを感作した内皮細胞を培養し、同様
に細胞数の増加率（％）を求めた。なお、ウサギ抗ヒト
ＨＧＦ抗体は文献（Jpn. J. Cancer Res., 83, 1262-12
66 (1992)）に記載の方法により精製し、この抗体は１
０μｇ／mlの濃度において１０ｎｇ／mlの生物活性を中
和することができる。更に、抗ヒトＨＧＦ抗体はヒトＨ
ＧＦとのみ交差反応し、ラットＨＧＦとは反応せず、抗
ラットＨＧＦ抗体はラットＨＧＦとのみ交差反応し、ヒ
トＨＧＦとは反応しない。また、正常ウサギ血清ＩｇＧ
（１０μｇ／ml）をコントロールとして用いた。その結
果を図３に示す（ｎ＝６）。図中、対照はＩｇＧコント
ロールの存在下に培養したＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎ
ｔ感作内皮細胞群；ＨＧＦはＩｇＧコントロールの存在
下に培養したＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ感作内皮細胞
群；ＨＧＦａｂはウサギ抗ヒトＨＧＦ抗体の存在下に培
養したＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ感作内皮細胞群を示
す。なお、増加率（％）は、対照の増加率を１００とし
た相対％で示した（＊：Ｐ＜0.01対対照、＃：Ｐ＜0.05
対ＨＧＦ）。図３に示されるように、抗ヒトＨＧＦ抗体
の存在により、ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ感作内皮細
胞の増殖は抑制され、対照と同程度の細胞増加率であっ
た。このことより、ＨＧＦは、内皮細胞の増殖因子であ
ることが明らかになった。

【００２９】試験例３ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣ
の培養上清のラット冠動脈内皮細胞への効果 ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣ
の培養上清を、静止期にあるラット冠動脈内皮細胞培養
系（細胞数：１０⁵個）に加え、３日間培養し、当該内
皮細胞数の増加を調べた。また、対照として、ＨＶＪ−
リポソーム−ｃｏｎｔを感作したラットＶＳＭＣの培養
上清を用いて、同様にして内皮細胞数の増加を調べた。
その結果を図４に示す（ｎ＝６）。図中、対照はＨＶＪ
−リポソーム−ｃｏｎｔを感作したラットＶＳＭＣの培
養上清を添加した群；ＨＧＦはＨＶＪ−リポソーム−Ｄ
ＮＡを感作したラットＶＳＭＣの培養上清を添加した群
である。図４に示されるように、ＨＶＪ−リポソーム−
ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣの培養上清を添加した
群においては、内皮細胞数の有意な増加がみられた。

【００３０】上記のＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ又はＨ
ＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作したラットＶＳＭＣ
の培養上清のＨＧＦ濃度を、抗ヒトＨＧＦ抗体及び抗ラ
ットＨＧＦ抗体を用いたＥＬＩＳＡ法で測定した。ま
た、非感作のＶＳＭＣの培養上清中のＨＧＦ濃度も測定
した（無処置群）。抗ヒトＨＧＦ抗体を用いた測定結果
を図５に、抗ラットＨＧＦ抗体を用いた結果を図６に示
す（いずれもｎ＝６）。図中、対照はＨＶＪ−リポソー
ム−ｃｏｎｔを感作したラットＶＳＭＣの培養上清群；
ＨＧＦはＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラット
ＶＳＭＣの培養上清群である。図５に示されるように、
ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣ
の培養上清にはＨＧＦが検出され、その値は対照に対し
て有意に高かった。また、図６に示されるように、ＨＶ
Ｊ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣの培
養上清にはラットＨＧＦも検出され、その値は対照に対
して有意に高かった。なお、図５及び図６に示されるよ
うに、無処理群及び対照群では培養上清中にＥＬＩＳＡ
法で測定できる程度の量のＨＧＦは存在しなかった。

【００３１】試験例４ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラット冠動脈内
皮細胞の培養上清のラット冠動脈内皮細胞への効果 ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラット冠動脈内
皮細胞の培養上清を静止期のラット冠動脈内皮細胞培養
系（細胞数：１０⁵個）に加え、３日間培養し、当該内
皮細胞数の増加を調べた。また、対照として、ＨＶＪ−
リポソーム−ｃｏｎｔを感作したラット冠動脈内皮細胞
の培養上清を用いて、同様にして内皮細胞数の増加を調
べた。その結果を図７に示す。図中、ＡはＨＶＪ−リポ
ソーム−ＤＮＡを感作したラット冠動脈内皮細胞の培養
上清を添加した群（ｎ＝８）；ＢはＨＶＪ−リポソーム
−ｃｏｎｔを感作したラット冠動脈内皮細胞の培養上清
を添加した群（ｎ＝８）；Ｃは無処置群（ｎ＝１５）で
ある。図７に示されるように、ＨＶＪ−リポソーム−Ｄ
ＮＡを感作したラット冠動脈内皮細胞の培養上清を添加
した群においては、内皮細胞数の有意な増加がみられた
のに対し、対照群では細胞数は無処置群と同程度であっ
た。（対照群：0.117±0.002 , Ａ群：0.148 ±0.03
Ｐ＜0.01）。

【００３２】次に、ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作
したラット冠動脈内皮細胞の培養上清に抗ＨＧＦ抗体を
加え、上記と同様にして内皮細胞数の増加を調べた。そ
の結果を図８に示す（ｎ＝８）。図中、ＡはＨＶＪ−リ
ポソーム−ＤＮＡを感作したラット冠動脈内皮細胞の培
養上清を添加した群；ＢはＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎ
ｔを感作したラット冠動脈内皮細胞の培養上清を添加し
た群；ＣはＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラッ
ト冠動脈内皮細胞の培養上清に抗ＨＧＦ抗体を添加した
群；ＤはＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラット
冠動脈内皮細胞の培養上清にコントロール抗体を添加し
た群である。図８のＡ及びＣに示されるように、ＨＶＪ
−リポソーム−ＤＮＡを感作したラット冠動脈内皮細胞
の培養上清の細胞増殖促進活性は、抗ＨＧＦ抗体を添加
により完全に消失した。このことより、ＨＶＪ−リポソ
ーム−ＤＮＡを感作したラット冠動脈内皮細胞の培養上
清の細胞増殖促進活性はＨＧＦに起因することが明らか
になった。

【００３３】試験例５ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したヒトＶＳＭＣの
ヒト内皮細胞への効果 ヒトＶＳＭＣ細胞培養インサート（コースター社製、孔
径0.45μｍ）に播種し、１０％ウシ血清を添加したＤＭ
ＥＭ培地で増殖させた。一方、ヒト内皮細胞は、６ウエ
ルプレートに播種し、１０％ウシ血清を添加したＤＭＥ
Ｍ培地で維持した。ＶＳＭＣが８０％コンフルエントに
なったときに、ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ（リポソー
ムの中のＤＮＡ含量：１０μｇ）又はＨＶＪ−リポソー
ム−ｃｏｎｔと４℃で５分間、次いで３７℃で３０分間
インキュベートした。感作した後、感作ＶＳＭＣを含む
インサートを静止期のヒト内皮細胞を含むウエルに加え
た。ＶＳＭＣと内皮細胞とを、0.5％ウシ血清を含むＤ
ＭＥＭ培地中で３日間共培養し、ＷＳＴ−細胞数測定キ
ット（ワコー社製）を用いて細胞数の測定を行なった。
その結果を図９に示す（ｎ＝６）。図中、対照はＨＶＪ
−リポソーム−ｃｏｎｔで感作したＶＳＭＣとの共培養
群；ＨＧＦはＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡで感作したＶ
ＳＭＣの培養上清群である。図９に示されるように、Ｈ
ＶＪ−リポソーム−ＤＮＡで感作したヒトＶＳＭＣは、
静止期にある非感作ヒト内皮細胞の増殖を有意に増加さ
せることが明らかになった。

【００３４】試験例６ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣ
のラット冠動脈内皮細胞への効果 ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣ
（細胞数：１０⁸個）と静止期にあるラット冠動脈内皮
細胞（細胞数：１０⁵個）とを、３日間共培養し、当該
冠動脈内皮細胞の増加数を調べた。また、対照として、
ＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作したラットＶＳＭ
Ｃを用いて、同様に共培養して内皮細胞数の増加を調べ
た。その結果を図１０に示す（ｎ＝６）。図中、ＨＧＦ
はＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭ
Ｃ群、対照はＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作した
ラットＶＳＭＣ群である。図１０に示される様に、ＨＶ
Ｊ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣより
放出されたＨＧＦにより内皮細胞の増殖が刺激され、細
胞数の増加が認められた（対照群：0.126 ±0.006、Ｈ
ＧＦ群：0.156 ±0.01 Ｐ＜0.05）。

【００３５】試験例７ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣ
の増殖 ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣ
とＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作したラットＶＳ
ＭＣをそれぞれ個別に培養し、細胞数の増加を比較検討
したが、ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作は細胞増殖
になんら影響は与えなかった。このことから、ＨＧＦに
はＶＳＭＣに対する細胞増殖促進活性はないことが判明
した。

【００３６】試験例８ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを直接注入したラット心筋
における新生血管増生 ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを直接注入したラット心
筋、ＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを直接注入したラッ
ト心筋及び無処置のラット心筋をＨＥ染色、Ａｚａｎ染
色し、検鏡して微小血管数を数えた。その結果を図１１
に示す。図中、ＨＧＦはＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを
直接注入したラット心筋の微小血管数、対照はＨＶＪ−
リポソーム−ｃｏｎｔを直接注入したラット心筋の微小
血管数である。図１１で示されるように、ＨＶＪ−リポ
ソーム−ＤＮＡを注入したラット心筋では、ＨＶＪ−リ
ポソーム−ｃｏｎｔを注入したラット心筋及び無処置の
ラット心筋と比較して、有意に微小血管数が増加した。
このことは、内皮細胞増殖作用を持つＨＧＦが生体にお
いて血管新生作用を持つことを示している。

【００３７】試験例９ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを関節内に直接導入するこ
とによる関節軟骨の修復 １０週齢のフィッシャーラットの大腿骨顆間部に直径
１．８ｍｍのキルシュナー鋼線を用い軟骨下骨を貫く損
傷を作製した。術後１週の時点で、実施例１で作製した
ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ（１００μｌ／膝）を直接
的に関節内へ導入した。コントロールとして、比較例１
で作製したＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔおよび比較例
２で作製したＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ（ＴＧＦ−
β）を同量関節内に投与した。これらの遺伝子等の導入
後１、３、４週でラットを屠殺し、組織学的に修復部位
を観察した。その結果、図１２に示されるように、ＨＶ
Ｊ−リポソーム−ＤＮＡの関節内への投与後３週で修復
組織に一部にトルイジンブルー染色にて染色されるプロ
テオグリカンの合成を認める軟骨様細胞の出現を認める
ことができた。また、図１３に示されるように、ＨＶＪ
−リポソーム−ＤＮＡの関節内への投与後４週ではさら
にプロテオグリカンの合成を認める軟骨様細胞の出現範
囲が広がる傾向を認めた。図１４に示されるように、比
較例２で作製したＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ（ＴＧＦ
−β）の関節内への投与の場合には、投与後４週でこの
様な軟骨様細胞の出現は認められなかった。また、図１
５に示されるように、比較例１で作製したＨＶＪ−リポ
ソーム−ｃｏｎｔの関節内への投与の場合には、投与後
４週でこの様な軟骨様細胞の出現は認められなかった。

【００３８】

【発明の効果】本発明の医薬は、ＨＧＦそのものの投与
に比べ治療効果が持続的であり、また局所選択的に作用
させることができるため、ＨＧＦの副作用を低減するこ
とが可能である。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、試験例１における、ＨＶＪ−リポソー
ム−ＤＮＡを感作したラット冠動脈内皮細胞でのＨＧＦ
の発現を示す図である。

【図２】図２の折線グラフは、試験例２における、ＨＶ
Ｊ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作した内皮細胞のＨＧＦ
存在下又は非存在下における細胞増加率を示す図であ
る。図中、ＨＧＦはＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感
作した内皮細胞群、ＨＧＦは所定濃度の組換ヒトＨＧＦ
の存在下に培養した群を示す。図２の棒グラフは、試験
例２における、ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作した
内皮細胞の細胞増加率を示す図である。図中、ＤＳＦは
ＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作した内皮細胞群、
ＨＧＦベクターはＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作し
た内皮細胞群を示す。

【図３】図３は、試験例２における、抗ＨＧＦ抗体の存
在下又は非存在下におけるＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ
を感作した内皮細胞の細胞増加率を示す図である。図
中、対照はＩｇＧコントロールの存在下に培養したＨＶ
Ｊ−リポソーム−ｃｏｎｔ感作内皮細胞群；ＨＧＦはＩ
ｇＧコントロールの存在下に培養したＨＶＪ−リポソー
ム−ＤＮＡ感作内皮細胞群；ＨＧＦａｂはウサギ抗ヒト
ＨＧＦ抗体の存在下に培養したＨＶＪ−リポソーム−Ｄ
ＮＡ感作内皮細胞群を示す。なお、増加率（％）は、対
照の増加率を１００とした相対％で示した。

【図４】図４は、試験例３における、ＨＶＪ−リポソー
ム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣの培養上清のラッ
ト冠動脈内皮細胞に対する細胞増殖効果を示す図であ
る。図中、対照はＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作
したラットＶＳＭＣの培養上清を添加した群；ＨＧＦは
ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣ
の培養上清を添加した群である。

【図５】図５は、試験例３における、ＨＶＪ−リポソー
ム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣの培養上清のＨＧ
Ｆ濃度を、抗ヒトＨＧＦ抗体を用いて測定した結果を示
す図である。図中、無処置は非感作ＶＳＭＣの培養上清
群；対照はＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作したラ
ットＶＳＭＣの培養上清群；ＨＧＦはＨＶＪ−リポソー
ム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣの培養上清群であ
る。

【図６】図６は、試験例３における、ＨＶＪ−リポソー
ム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣの培養上清のＨＧ
Ｆ濃度を、抗ラットＨＧＦ抗体を用いて測定した結果を
示す図である。図中、無処置は非感作ＶＳＭＣの培養上
清群；対照はＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作した
ラットＶＳＭＣの培養上清群；ＨＧＦはＨＶＪ−リポソ
ーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣの培養上清群で
ある。

【図７】図７は、試験例４における、ＨＶＪ−リポソー
ム−ＤＮＡを感作したラット冠動脈内皮細胞の培養上清
のラット冠動脈内皮細胞に対する細胞増殖効果を示す図
である。図中、ＡはＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作
したラット冠動脈内皮細胞の培養上清を添加した群；Ｂ
はＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを感作したラット冠動
脈内皮細胞の培養上清を添加した群；Ｃは無処置群であ
る。

【図８】図８は、試験例４における、抗ＨＧＦ抗体の存
在下での、ＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラッ
ト冠動脈内皮細胞の培養上清のラット冠動脈内皮細胞に
対する細胞増殖効果を示す図である。図中、ＡはＨＶＪ
−リポソーム−ＤＮＡを感作したラット感動脈内皮細胞
の培養上清を添加した群；ＢはＨＶＪ−リポソーム−ｃ
ｏｎｔを感作したラット冠動脈内皮細胞の培養上清を添
加した群；ＣはＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作した
ラット冠動脈内皮細胞の培養上清に抗ＨＧＦ抗体を添加
した群；ＤはＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡを感作したラ
ット冠動脈内皮細胞の培養上清にコントロール抗体を添
加した群である。

【図９】図９は、試験例５における、ＨＶＪ−リポソー
ム−ＤＮＡを感作したヒトＶＳＭＣと非感作ヒト内皮細
胞を共培養したときの内皮細胞の細胞増加を示す図であ
る。図中、対照はＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔで感作
したＶＳＭＣとの共培養群；ＨＧＦはＨＶＪ−リポソー
ム−ＤＮＡで感作したＶＳＭＣの培養上清群である。

【図１０】図１０は、試験例６における、ＨＶＪ−リポ
ソーム−ＤＮＡを感作したラットＶＳＭＣと非感作ラッ
ト冠動脈内皮細胞を共培養したときの内皮細胞の細胞増
加を示す図である。図中、対照はＨＶＪ−リポソーム−
ｃｏｎｔで感作したＶＳＭＣとの共培養群；ＨＧＦはＨ
ＶＪ−リポソーム−ＤＮＡで感作したＶＳＭＣの培養上
清群である。

【図１１】図１１は、試験例８における、ＨＶＪ−リポ
ソーム−ＤＮＡを直接注入したラット心筋の微小血管数
の増加を示す図である。図中、ＨＧＦはＨＶＪ−リポソ
ーム−ＤＮＡを直接注入したラット心筋の微小血管数、
対照はＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔを直接注入したラ
ット心筋の微小血管数である。

【図１２】図１２は、試験例９における、ＨＶＪ−リポ
ソーム−ＤＮＡの関節内への投与後３週でのトルイジン
ブルー染色にて染色されるプロテオグリカンの合成を認
める軟骨様細胞の出現を示す図である。

【図１３】図１３は、試験例９における、ＨＶＪ−リポ
ソーム−ＤＮＡの関節内への投与後４週でのトルイジン
ブルー染色にて染色されるプロテオグリカンの合成を認
める軟骨様細胞の出現を示す図である。

【図１４】図１４は、試験例９における、比較例２で作
製したＨＶＪ−リポソーム−ＤＮＡ（ＴＧＦ−β）の関
節内への投与後４週でのトルイジンブルー染色にて染色
されるプロテオグリカンの合成を認める軟骨様細胞が認
められないことを示す図である。

【図１５】図１５は、試験例９における、比較例１で作
製したＨＶＪ−リポソーム−ｃｏｎｔの関節内への投与
後４週でのトルイジンブルー染色にて染色されるプロテ
オグリカンの合成を認める軟骨様細胞が認められないこ
とを示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 冨田 哲也 大阪府豊中市曽根西町１−９−１Ｂ901 (72)発明者 越智 隆弘 兵庫県神戸市須磨区須磨寺町１−３−７ Ｆターム(参考） 4C076 AA19 BB11 CC09 CC11 DD63 DD70 FF67 FF68 4C084 AA13 MA24 MA66 NA06 NA12 NA14 ZA362 ZA962 4C087 BC83 MA24 MA66 NA06 NA12 NA14 ZA36 ZA96

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＨＧＦ遺伝子からなる医薬。
2. 【請求項２】 ＨＧＦ遺伝子を含有するリポソーム。
3. 【請求項３】 センダイウイルスと融合させた膜融合リ
   ポソームである請求項２記載のリポソーム。
4. 【請求項４】 請求項２又は３記載のリポソームからな
   る医薬。
5. 【請求項５】 動脈疾患治療剤である請求項１又は４記
   載の医薬。
6. 【請求項６】 軟骨傷害治療剤である請求項１又は４記
   載の医薬。