JP2003061659A - アスペルギルス属由来の新規なプロモーター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 Aspergillus oryzae由来の新規プロモー
ターが７つ分離され、その塩基配列が決定された。 【効果】 本プロモーターを利用することにより、Aspe
rgillus oryzaeのGTP binding protein等の発現を増強
するほか、他のタンパク質の発現増強も期待される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術的分野】本発明はアスペルギルス
（Aspergillus）属糸状菌の新規プロモーターに関す
る。更に詳細には、本発明はアスペルギルス・オリゼ由
来の新規プロモーター配列をクローニングし、アスペル
ギルス属糸状菌を宿主として有用タンパク質およびペプ
チドを発現させるために必要なＤＮＡ断片を有するプラ
スミドと、それを用いた有用タンパク質およびペプチド
の製造法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】近年の遺伝子組換え技術の発展ととも
に、ヒトの有用タンパク質が大腸菌や酵母を用いて生産
することが可能となってきた。しかし大腸菌を宿主とし
てヒトなどの真核生物由来の遺伝子を発現させた場合、
正常なプロセッシングが行われない、糖鎖が付着しない
などの問題点が指摘されている。また酵母によって異種
タンパクの分泌生産を行う場合は、糖鎖結合はされるも
のの、その分泌量が非常に少ないという欠点を有する。
そこで、高いタンパク分泌能を持つ糸状菌が、真核生物
のタンパク発現の宿主として注目されてきた。なかでも
黄麹菌Aspergillusoryzaeは、清酒や味噌など醸造産業
上で長く使用された実績から、異種遺伝子発現への応用
に積極的に利用されている。既にＭｕｃｏｒ ｍｉｅｈ
ｅｉの酸性プロテアーゼなどがＡ．ｏｒｙｚａｅを宿主
として、工業生産されている。

【０００３】このような麹菌による異種タンパク生産に
は、αアミラーゼやグルコアミラーゼなどのアミラーゼ
遺伝子のプロモーターが用いられることが多い。しかし
ながら、異種タンパクの生産性を向上させるためにはよ
り強力な発現能を有するとともに、様々な遺伝子産物の
発現に対応した複数のプロモーターの探索が不可欠であ
る。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】麹菌の異種タンパク生
産を行うプロモーターとしては、主に麹菌の分泌酵素な
ど生産量が多いタンパクの遺伝子にターゲットが当てら
れている。これは麹菌は菌体外に大量のタンパクを分泌
するため、このようなタンパクの遺伝子プロモーターは
発現能も高いと考える発想である。しかし麹菌の全タン
パクの発現を見た場合、必ずしも菌体外タンパクの遺伝
子が高発現しているわけではなく、菌体内のタンパクの
遺伝子であっても高い発現能を有するものも存在すると
考えられる。

【０００５】本発明者らは、我が国独自の培養法であっ
て、清酒、味噌、醤油、みりん等の発酵産業で利用され
る蒸し米を用いた麹菌の固体培養ではその生産されるタ
ンパク質の種類が多く、未だにクローニングされていな
い遺伝子が多数存在するとの着想を得た。よって、従来
の技術常識にとらわれることなく、固体培養で発現する
遺伝子群からのプロモーターを検索することが望ましい
との新しい発想に本発明者らはたった。

【０００６】さらに、異種遺伝子発現の場合、発現させ
るタンパク質によって相性の良いプロモーターの選択が
重要である。誘導条件、発現条件、培養方法など、目的
遺伝子産物に最も適したプロモーターを選択することが
望ましい。これらの点に鑑み、本発明者らは、効率的な
異種タンパク質発現のためには、様々な発現特性を持つ
複数のプロモーターを準備していくことが必要であると
の観点にたった。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、麹菌の高発現
プロモーターを探索し、様々な異種遺伝子の発現に対応
できる複数のプロモーターを単離し、取得プロモーター
を利用した麹菌の遺伝子発現系を用いて異種タンパク質
を製造する方法を提供することを目的としてなされたも
のである。本発明は以下の様にして上記目的を達成する
ことができた。

【０００８】麹菌をはじめとする糸状菌の遺伝子解析
は、主に液体培養を行った菌体を用いて解析を行うた
め、液体培養で発現する遺伝子については既に多くの報
告例がある。一方、清酒、味噌、醤油、みりんなどの発
酵産業で行われている固体培養については、その遺伝子
発現機構についてはほとんど解明されていない。すなわ
ち、固体培養で発現する遺伝子の解析例は少なく、この
中には未だクローニングされていない未知遺伝子が多数
含まれていることが予想される。そしてこれらの未知遺
伝子のプロモーターの中に、固体培養で強力に発現する
など固体培養での物質生産に適したプロモーターが含ま
れていることが期待できる。そこで、プロモーターの探
索源として固体培養で発現する遺伝子群を用いることに
した。固体培養から得られたｃＤＮＡライブラリーか
ら、未発表の遺伝子に関するｃＤＮＡを抽出し、そのプ
ロモーター領域の単離を行った。

【０００９】プロモーター領域の取得方法の一例とし
て、麹菌のゲノムＤＮＡをテンペレートにしたＰＣＲ法
を挙げる。麹菌からゲノムＤＮＡを抽出してＥｃｏＲ
Ｖ、ＳｃａＩ、ＤｒａＩ、ＰｖｕIIあるいはＳｓｐＩ等
の６ｂｐを認識して平滑末端に切断するそれぞれの制限
酵素で完全消化し、そのゲノムＤＮＡ断片の両端に適当
なアダプターを連結する。この両端にアダプターが連結
されたゲノムＤＮＡ断片を鋳型として、ｃＤＮＡの塩基
配列から合成したプライマーおよびアダプターの一本鎖
部分の配列を有するプライマーを用いてＰＣＲを行う。
増幅産物を電気泳動で確認して１〜２ｋｂ程度の長さを
有するＤＮＡ断片を電気泳動によって単離・精製する。
この断片の塩基配列を決定し、ホモロジー検索から推定
される開始コドンより上流をプロモーター配列とする。

【００１０】また、本発明に係るプロモーターはいずれ
も、アスペルギルス・オリゼ（Aspergillus oryzae）Ｏ
−１０１３（生命工学工業技術研究所（現、独立行政法
人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター））にＦ
ＥＲＭ Ｐ−１６５２８として寄託）にふくまれている
ので、ゲノムＤＮＡから直接切り出すことによって容易
に入手することができる。その場合、当該プロモーター
を含む遺伝子配列を分離し、その配列において、開始コ
ドンより上流をプロモーター配列とし、そのプロモータ
ー活性を上記するプロモーター解析システムで確認して
もよい。

【００１１】さらに得られたプロモーター断片を、既に
作成しているプロモーター活性測定用プラスミドｐＮＧ
ＵＳ（図８）のＧＵＳ遺伝子上流に転写方向が合うよう
に挿入する。このプラスミドをＡ．ｏｒｙｚａｅのｎｉ
ａＤ変異株に導入し、導入プラスミドが宿主の染色体上
のｎｉａＤ ｌｏｃｕｓに１コピーだけ相同組換えを起
こした株を選択する。この遺伝子導入株を種々の条件で
培養し、菌体内のＧＵＳ活性を測定することにより、プ
ロモータ発現能とした。

【００１２】プロモーター解析用プラスミドｐＮＧＵＳ
は、本発明者らが開発するのに成功したものであって、
このプラスミドは、形質転換用マーカーであるＡ．ｏｒ
ｙｚａｅのｎｉａＤ遺伝子（E.S. Unkleら、Mol. Gen.
Genet., 218, p.99-104, 1989）と、レポーター遺伝子
である大腸菌のβ−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）をコー
ドするｕｉｄＡ遺伝子（R. A. Jeffersonら、Proc. Nat
l. Acad. Sci., p.8447-8451,1986）を含むものであ
る。

【００１３】このプラスミドを用いてプロモーター活性
を測定して有用プロモーターをスクリーニングするに
は、このプラスミドのｕｉｄＡ遺伝子の上流域（例えば
ＳａｌＩ、ＰｓｔＩサイト）に、検討しようとする種々
の遺伝子プロモーター（又はプロモーターと予測される
配列）あるいはその一部分、ＤＮＡ断片をＡｓｐｅｒｇ
ｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ Ｏ−１０１３（ＦＥＲＭ
Ｐ−１６５２８）のｎｉａＤ変異株（アスペルギルス・
オリゼ（Aspergillus oryzae）１０１３−ｎｉａＤ：本
菌株は、硝酸資化能欠損株、Ｎｉｔｒａｔｅ Ｒｅｄｕ
ｃｔａｓｅ欠損株であって、生命工学工業技術研究所
（現、独立行政法人 産業技術総合研究所特許生物寄託
センター）にＦＥＲＭ Ｐ−１７７０７として寄託され
ている。）に導入し、導入プラスミドが宿主染色体のｎ
ｉａＤ ｌｏｃｕｓに１コピーだけ導入された形質転換
体を選択する。そしてこれらの形質転換体のＧＵＳ活性
を測定することにより、プロモーター活性の指標とし、
プロモーターを効率的にスクリーニングするものであ
る。

【００１４】本発明者らは、上記スクリーニング方法
で、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ Ｏ−１０
１３（ＦＥＲＭ Ｐ−１６５２８）のゲノムＤＮＡにつ
いて種々検討した結果、以下に挙げる遺伝子のプロモー
ターが液体培養及び固体培養で強力に発現していること
をはじめて確認し、これら新規プロモーターを開発する
のに成功したものである。

【００１５】ＧＴＰ結合タンパク質（GTP binding prot
ein）遺伝子、ＡＴＰ合成酵素（ATPsynthetase）遺伝
子、シャペロン（chaperon）遺伝子、熱ショックタンパ
ク質（heat shock protein）遺伝子、熱ショックタンパ
ク質活性化タンパク質（activator protein of Hsp70 a
nd Hsp90）遺伝子、Ｇ４核酸結合タンパク質（G4 nucle
ic acid binding protein）遺伝子、ＡＴＰ／ＡＤＰキ
ャリアータンパク質（ATP/ADP carrier protein）遺伝
子。

【００１６】これらのプロモーターについては、いずれ
もその塩基配列の決定にも成功し、それらを配列表の配
列番号１〜７（図１〜図７）にそれぞれ示した。なお、
上記した各遺伝子のプロモーターの記載順序と配列番号
（図番号）は対応している。

【００１７】本発明のプロモーターは上述のようにして
決定された塩基配列に対してストリンジェントな条件、
例えば、０．１％ＳＤＳ、１×ＳＳＣ（６０℃、０．３
ｍｏｌ ＮａＣｌ、０．０３Ｍクエン酸ソーダ）でハイ
ブリダイズする塩基配列をも包含する。

【００１８】本発明のプロモーターは、その下流に、所
望の有用タンパク質遺伝子を連結してベクターを構築
し、該ベクターで宿主を形質転換し、それを培養するこ
とにより、有用タンパク質を著量生産させることができ
る。宿主としては、アスペルギルス・オリゼをはじめ、
その他のアスペルギルス属、リゾプス属、ノイロスポラ
属、ペニシリウム属、トリコデルマ属などの微生物が使
用できる。特に、発現効率の点から、宿主として、アス
ペルギルス・オリゼを用いることが好ましい。

【００１９】得られたプロモーターへの有用タンパク質
遺伝子の連結、ベクターへの挿入は、それ自体公知の方
法で行うことができる。有用タンパク質遺伝子として
は、特に限定するものではない。また、ベクターとして
は、アルギニン要求性などの栄養要求性相補遺伝子、ア
セトアミド資化などの炭素、窒素源資化遺伝子、オリゴ
マイシン耐性などの薬剤耐性遺伝子などが挙げられる。
宿主の形質転換も自体公知の方法で行うことができる。
また、該形質転換体の培養も常法に従って、所望のタン
パク質に適した培地、培養条件を適宜選択することによ
り行うことができ、得られたタンパク質の採取、精製も
公知の方法で行うことができる。

【００２０】以下、実施例を参照しながら本発明を詳細
に説明するが、実施例に使用したプラスミドなどは一例
として挙げたものであり、本発明に使用できるものであ
ればこれらに限定されるものではない。

【００２１】

【実施例１】（麹菌Ａ．ｏｒｙｚａｅ Ｏ−１０１３株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１６５２８）の米麹固体培養ｃＤＮＡ
ライブラリーの構築）麹菌Ａ．ｏｒｙｚａｅ Ｏ−１０
１３株を７０％精米した蒸し米上にて４０時間米麹固体
培養を行った。その培養菌体より常法であるＡＧＰＣ法
（Chomczynski, P.et al., An al. Biochem. 162, 156
〜159(1987))により全ＲＮＡを抽出した。得られた全Ｒ
ＮＡからｏｌｉｇｏｔｅｘ−ｄｔ３０＜ｓｕｐｅｒ＞ｍ
ＲＮＡｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ（寶酒造）を
用いて、ｍＲＮＡを精製した。得られた１μｇのｍＲＮ
Ａを用いて、ＳＭＡＲＴｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｙｃｏ
ｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｋｉｔ（クロンテック社）を用
いてλＴｒｉｐｌＥｘ２ファージｃＤＮＡライブラリー
を構築した。

【００２２】

【実施例２】（有用遺伝子のプロモーター断片の単離方
法）クロンテック社製Ｇｅｎｏｍｅ Ｗａｌｋｅｒを用
いて、プロモーター断片取得用のテンペレートＤＮＡラ
イブラリーを構築した。まず、Ａ．ｏｒｙｚａｅＯ−１
０１３（ＦＥＲＭ Ｐ−１６５２８）のゲノムＤＮＡを
５種類の制限酵素（ＤｒａＩ、ＥｃｏＲＶ、ＰｖｕII、
ＳｃａＩ、ＳｔｕＩ）で切断し、各制限酵素で切断した
ゲノムＤＮＡに対してその両端にアダプターを連結し、
ＰＣＲ増幅用のゲノムテンペレートとする。次にＥＳＴ
情報から得られる遺伝子のアンチセンス配列から設計し
たプライマーと、アダプターから設計したプライマーを
用いて、先に作成したゲノムテンプレートライブラリー
に対してＰＣＲ反応を行う。反応条件のー例は次のとお
りである。

【００２３】 ＰＣＲ条件 ・９５℃（１分）、１サイクル ・９４℃（５秒）、７２℃（３分）、７サイクル ・９４℃（５秒）、６７℃（３分）、７０℃（３分）、３２サイクル ・６７℃（７分）、１サイクル

【００２４】５種類のテンペレートそれぞれについてＰ
ＣＲ反応後、１〜３ｋｂのＤＮＡ断片が増幅されたもの
について、電気泳動装置を用いて単離した。これらの断
片の塩基配列を決定し、ブラストサーチを用いた相同性
検索の結果から推定された開始コドンの上流をプロモー
ター部分とした．

【００２５】

【実施例３】（有用遺伝子のプロモーター活性の測定方
法）まず目的とするプロモーター断片を、プロモーター
活性測定用プラスミドに挿入する。Ｇｅｎｏｍｅ Ｗａ
ｌｋｅｒで単離したプロモーターＤＮＡ断片の両端に、
脱リン酸化を施したＳａｌＩのリンカーをＴ４ＤＮＡリ
ガーゼによりライゲーションする。得られた産物をＴ４
ポリヌクレオチドキナーゼで５’末端をリン酸化後、未
反応のＳａｌＩリンカーをアガロースゲル電気泳動によ
り除去した。得られたプロモーターＳａｌＩ断片をプロ
モーター活性測定用に開発したプラスミドｐＮＧＵＳ
（図８）のＧＵＳ遺伝子上流ＳａｌＩサイトへＴ４ＤＮ
Ａリガーゼにより挿入した。挿入プロモーターの方向が
ＧＵＳ遺伝子のコーディング領域と正の方向にサブクロ
ーニングされたものを選択した。このプロモーター解析
プラスミドｐＮＧＵＳを含む大腸菌（Escherichia col
i）ＩＮ１１３株は、生命工学工業技術研究所（現、独
立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センタ
ー）にＦＥＲＭ Ｐ−１８２５４として寄託されてい
る。

【００２６】プロモーター部分を挿入したプラスミドを
麹菌に挿入することにより、挿入したプロモーターの支
配下でレポーター遺伝子であるＧＵＳ遺伝子が発現し、
プロモーターの発現能をＧＵＳ活性で測定することがで
きる。このプラスミドでＡ．ｏｒｙｚａｅのｎｉａＤ変
異株（Aspergillus oryzae 1013-niaD:FERM P-17707）
を形質転換し、プラスミドが宿主のゲノムのｎｉａＤ
ｌｏｃｕｓに１コピーのみ導入された形質転換体を選択
する。この形質転換体を様々な培養条件で培養し、ＧＵ
Ｓ生産能を測定し、それぞれのプロモーター発現能とし
た。このように、プロモーター解析用プラスミドｐＮＧ
ＵＳを利用することによって、目的とするプロモーター
を選択、取得することが可能となり、本発明を容易に実
施することができる。

【００２７】

【実施例４】（単離遺伝子のプロモーターの液体培養、
固体培養における発現能の検討）ＧＴＰ結合タンパク質
（GTP binding protein）遺伝子、ＡＴＰ合成酵素（ATP
synthetase）遺伝子、シャペロン（chaperon）遺伝子、
熱ショックタンパク質（heat shock protein）遺伝子、
熱ショックタンパク質活性化タンパク質（activator pr
otein of Hsp70 and Hsp90）遺伝子、Ｇ４核酸結合タン
パク質（G4 nucleic acid binding protein）遺伝子、
ＡＴＰ／ＡＤＰキャリアータンパク質（ATP/ADP carrie
r protein）遺伝子の各プロモーターを利用して、下記
する各種培養条件下でＧＵＳタンパク質の生産を行った
（表１）。

【００２８】 （液体培養） ＤＰＹ培地： デキストリン−ペプトン−酵母エキス培地 Ｃｚ−Ｄｏｘ培地： ツァペック−ドックス培地 （固体培養） 寒天培地；米麹培地；小麦フスマ培地

【００２９】 （表１） ──────────────────────────────────── 培養条件 遺伝子名 DPY Cz-Dox 寒天 米麹 小麦フスマ ──────────────────────────────────── GTP結合タンパク質遺伝子 （GTP binding protein) 637 196 863 1072 593 ATP合成遺伝子 (ATP synthetase) 2268 2186 759 973 1667 シャペロン遺伝子 (chaperon) 6907 1453 6855 814 1717 熱ショックタンパク質遺伝子 (heat shock protein) 772 226 475 643 773 熱ショックタンパク質活性化タンパク質遺伝子 (actiator protein of Hsp70 and Hsp90) 497 184 391 565 577 G4核酸結合タンパク質遺伝子 (G4 nucleic acid binding protein) 72 168 61 178 166 ATP/ADPキャリアータンパク質遺伝子 (ATP/ADP carrier protein) 3156 690 1921 3004 3192 ──────────────────────────────────── GUS activity(U/mg-protein)

【００３０】上記から明らかなように、ＧＴＰ結合タン
パク質（GTP binding protein)遺伝子プロモーターは各
種培養条件の中で、米麹で最も多く発現する事が示され
た。同様に、ＡＴＰ合成（ATP synthetase）遺伝子プロ
モーターはＤＰＹ培養で、シャペロン（chaperon）遺伝
子プロモーターは寒天培養で、熱ショックタンパク質遺
伝子（heat shock protein）遺伝子プロモーターはＤＰ
Ｙ培養と小麦フスマ培養で、熱ショックタンパク質活性
化タンパク質（activator protein of Hsp70 and Hsp9
0）遺伝子プロモーターは米麹培養と小麦フスマ培養
で、Ｇ４核酸結合タンパク質（G4 nucleic acid bindin
g protein）遺伝子は米麹培養で、ＡＴＰ／ＡＤＰキャ
リアータンパク質（ATP/ADP carrier protein）遺伝子
のプロモーターはＤＰＹ培養と小麦フスマ培養で最も強
く発現することが示された。単離した各プロモーターの
支配下で大量のＧＵＳタンパクが生産され、これらのプ
ロモーターの有効性が示された。

【００３１】

【発明の効果】本発明によって７種類のプロモーターが
新たに開発された。これら麹菌に含まれるプロモーター
又はこれらプロモーター由来のＤＮＡを利用することに
より、これらのプロモーターが直接関連する同種の遺伝
子はもとより他の遺伝子のきわめて効率的な発現システ
ムが構築された。

【００３２】

【配列表】 ＳＥＱＵＥＮＣＥ ＬＩＳＴＩＮＧ <110> Gekkeikan Inc., Ltd. <120> Novel Promotors of Genus Aspergillus <130> 6463 <141> 2001-8-21 <160> 7 <210> 1 <211> 870 <212> DNA <213> Aspergillus oryzae <400> 1 aagttgcggc agggttgggt cttaaaggtc caacccctgc gataccctgt gagaaatggc 60 agtaagctag ccggaatata gttgtcatat gcaagcatgc ctcaaagaca gaagccagac 120 tagcgttggc cagattcatc tcctgccaat catagagatt agggttgggt actgttccgc 180 cagtggaagt taaaagtctc accaatccat tgaactgggc atggattttg tacaatcaat 240 ttgatgagct ggaaccataa ggtaaattaa aaaatagaaa caaggagaga agagggcgac 300 acaagatcat gtagtgtgtt ttcaatgaag ggctgggggg gaagacaatt aatatttacc 360 gtccgaggtt acccgttgga aatacaaaat gtcagtcagt gagtagattc gaaaccgtca 420 aggcggaaac atcccgtgac tgccaccgtg ctaaaggcga cacgctaaac cggatttggg 480 tggcctctcc atcatctaaa gtgacgaccg tttaattccc tccgcctcac tgggtatcga 540 tctttccaag taccttgcga cagtgcactt gtgcccaccg ctattttctc ttggtattgg 600 tgcaatacgt tggtgaccct ggatttctat ttgtctattt ttcctttcgc gacccttgct 660 caggtctcca acttaggctc tctcagtgtc 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aaggagggga ggggaaaaaa aaaaaaaaaa aaagtttgaa aaagtgaaac 480 tggacgctga cgaatgtctc atatctagaa cctttacgag cttcttggta atttataccc 540 ttcctgagtt gcgccctata gatttgcttt gatctttc 578 <210> 7 <211> 1239 <212> DNA <213> Aspergillus oryzae <400> 7 agtatctaag ctagaccact gtaagttgcg taatgatccg atagagacca attgccagcc 60 aggtaatctc ctattgacag gtctgaattc tttggtagat tcgcatgaca cgtatgtatc 120 atagtaccta ttaatatccg aggtagtttg aggtcagcac atatgagaac cttgggagta 180 aatagctgaa tatgagggat ttagccatta tcagccctgc aagctatggg aggcttgaga 240 ccaaaacata tcgaagctgg aagagatggc gaataggaga aatagaatga aatcggctag 300 tccggagtat cattcaagat atcaaagtgc tcttcagacg gtgtacgaac gccatggcaa 360 ccgatagccg gcgatgcaca cgaccaacgt tagcttcaga atttcataca gctctatggt 420 acggagcggc aaagagattc agtgatcatc ttgaatttgc ctagttcatt ttccgtatgg 480 cgaatacaaa agtcaaagcc aaggagtcga tgtcctttgc cgattaaaat tttgatttgc 540 catcggaaac tcgggaccaa agggaagaaa gggaacttcc ccatgtgggt gtgggtgact 600 gagcgtctgt ttttgagcgg agaggctcca attgtttgtt ggttcggtca cggggaaatg 660 ggaaagggag ggaaaattcc caaggaagat gagaaacctt ttctagacag tatcagaacg 720 accgattcgg tatgcatccg agaaaatcca accgcgatga tagacctccc tagatgaaga 780 atattattat agacatagct tctttttaaa gagtagaacc caatagttct tgatatctat 840 caaaagcaat tgatctatat ttaattctct ttcttttttt tccccttctc ctttcttgtt 900 ttgggggcat ctcacctgna caaaaccagt cggaatggtt tctggagcga tcgggagata 960 tcggctctgg ttgcctgggc cagcattagc gtcggttcca gttttttttt tttttttttt 1020 ttctcccctt cctccctgga ctgccggtcg ctgccactgc gaaattggcc agcgtatcct 1080 aaagcggtct tagcgtctct gctcgcttct tcccgcttac aagagccttc gctcgctatt 1140 ttttctccct ttcccttcct tcttctcttc tttcttccat cactctctta tccatctcct 1200 ctcttggttg tttagttttt attcttcaca gccgccaag 1239

【図面の簡単な説明】

【図１】ＧＴＰ結合タンパク質遺伝子プロモーターの塩
基配列（８７０塩基）を示す。

【図２】ＡＴＰ合成酵素遺伝子プロモーターの塩基配列
（１０６２塩基）を示す。

【図３】シャペロン遺伝子プロモーターの塩基配列（６
５４塩基）を示す。

【図４】熱ショックタンパク質遺伝子プロモーターの塩
基配列（７９９塩基）を示す。

【図５】熱ショックタンパク質活性化タンパク質遺伝子
プロモーターの塩基配列（８７７塩基）を示す。

【図６】Ｇ４核酸結合タンパク質遺伝子プロモーターの
塩基配列（５７８塩基）を示す。

【図７】ＡＴＰ／ＡＤＰキャリアータンパク質遺伝子プ
ロモーターの塩基配列（１２３９塩基）を示す。

【図８】プラスミドｐＮＧＵＳの制限酵素地図を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 小畑 浩 京都市伏見区片原町300 月桂冠株式会社 総合研究所内 (72)発明者 秦 洋二 京都市伏見区片原町300 月桂冠株式会社 総合研究所内 (72)発明者 川戸 章嗣 京都市伏見区下鳥羽小柳町24 月桂冠株式 会社総合研究所内 (72)発明者 杉並 孝二 京都市伏見区片原町300 月桂冠株式会社 内 (72)発明者 安部 康久 京都市伏見区片原町300 月桂冠株式会社 内 Ｆターム(参考） 4B024 AA20 CA01 DA11 FA02 GA30 HA20

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列表の配列番号１〜７のいずれか１つ
   に示されるＤＮＡ。
2. 【請求項２】 請求項１記載のＤＮＡとストリンジェン
   トな条件下でハイブリダイズするＤＮＡ。
3. 【請求項３】 アスペルギルス属由来である請求項1又
   は請求項２記載のプロモーター。
4. 【請求項４】 アスペルギルス・オリゼ由来である請求
   項１又は請求項２記載のプロモーター。
5. 【請求項５】 アスペルギルス・オリゼのＧＴＰ結合タ
   ンパク質（GTP binding protein）遺伝子、ＡＴＰ合成
   酵素（ATP synthetase）遺伝子、シャペロン（chapero
   n）遺伝子、熱ショックタンパク質（heat shock protei
   n）遺伝子、熱ショックタンパク質活性化タンパク質（a
   ctivator protein of Hsp70 and Hsp90）遺伝子、Ｇ４
   核酸結合タンパク質（G4 nucleic acid binding protei
   n）遺伝子、ＡＴＰ／ＡＤＰキャリアータンパク質（ATP
   /ADP carrier protein）遺伝子の何れかより選ばれた請
   求項４記載のプロモーター。