JP2003000258A - 薬物感受性の評価方法 - Google Patents
薬物感受性の評価方法Info
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- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 薬物に対する感受性の評価方法を提供する。
【解決手段】 mRNA非翻訳領域の多様性が薬物に対する
感受性に影響する遺伝子について、非翻訳領域の差異を
検出し、検出された差異に基づいて薬物に対する感受性
を評価することにより、ヒトまたは動物の薬物に対する
感受性を評価する。
感受性に影響する遺伝子について、非翻訳領域の差異を
検出し、検出された差異に基づいて薬物に対する感受性
を評価することにより、ヒトまたは動物の薬物に対する
感受性を評価する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトまたは動物の
薬物に対する感受性の評価方法に関する。
薬物に対する感受性の評価方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】鎮痛剤や抗癌剤などの薬物に対する感受
性（薬物感受性）には個人差があることが知られてい
る。特に副作用の強い薬物については、過剰量の投与が
重大な結果を招くため、個人差を事前に予測することが
求められている。このため、薬物感受性に個人差が生じ
る原因について研究が進められており、遺伝子の翻訳領
域における多様性が薬物感受性に影響することが報告さ
れている。
性（薬物感受性）には個人差があることが知られてい
る。特に副作用の強い薬物については、過剰量の投与が
重大な結果を招くため、個人差を事前に予測することが
求められている。このため、薬物感受性に個人差が生じ
る原因について研究が進められており、遺伝子の翻訳領
域における多様性が薬物感受性に影響することが報告さ
れている。
【０００３】しかしながら、薬物感受性に関与する遺伝
子の中には、遺伝子のコード領域における多様性が認め
られないものもあり、このような遺伝子が関与する薬物
感受性は、薬物を実際に投与せずに評価することが難し
い。例えば、モルヒネの場合には、従来の研究により、
モルヒネの脳内標的がミューオピオイド受容体であるこ
とは明らかにされていたが、この受容体のタンパク質構
造の個人差はほとんどないため、タンパク質構造からモ
ルヒネ鎮痛効果の個人差を予測することはできない。
子の中には、遺伝子のコード領域における多様性が認め
られないものもあり、このような遺伝子が関与する薬物
感受性は、薬物を実際に投与せずに評価することが難し
い。例えば、モルヒネの場合には、従来の研究により、
モルヒネの脳内標的がミューオピオイド受容体であるこ
とは明らかにされていたが、この受容体のタンパク質構
造の個人差はほとんどないため、タンパク質構造からモ
ルヒネ鎮痛効果の個人差を予測することはできない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、新規な指標
に基づく、薬物感受性を薬物を投与せずに評価する方法
を提供することを目的とする。
に基づく、薬物感受性を薬物を投与せずに評価する方法
を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、モルヒネ
鎮痛効果が減弱したマウス系統であるCXBKマウスを用い
て検討を行った結果、mRNAの非翻訳領域における多様性
が薬物感受性に大きく影響し得ることを見出した。この
知見に基づき、本発明は完成された。
鎮痛効果が減弱したマウス系統であるCXBKマウスを用い
て検討を行った結果、mRNAの非翻訳領域における多様性
が薬物感受性に大きく影響し得ることを見出した。この
知見に基づき、本発明は完成された。
【０００６】本発明は、mRNA非翻訳領域の多様性が薬物
に対する感受性に影響する遺伝子について、非翻訳領域
の差異を検出し、検出された差異に基づいて薬物に対す
る感受性を評価することを含む、ヒトまたは動物の薬物
に対する感受性の評価方法を提供する。
に対する感受性に影響する遺伝子について、非翻訳領域
の差異を検出し、検出された差異に基づいて薬物に対す
る感受性を評価することを含む、ヒトまたは動物の薬物
に対する感受性の評価方法を提供する。
【０００７】非翻訳領域の差異は非翻訳領域の長さの差
異であってもよい。
異であってもよい。
【０００８】遺伝子としては、ミューオピオイド受容体
遺伝子が挙げられ、この場合、薬物はミューオピオイド
受容体を標的とするものである。遺伝子がミューオピオ
イド受容体遺伝子である場合には、薬物としてはモルヒ
ネが挙げられる。
遺伝子が挙げられ、この場合、薬物はミューオピオイド
受容体を標的とするものである。遺伝子がミューオピオ
イド受容体遺伝子である場合には、薬物としてはモルヒ
ネが挙げられる。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明の評価方法は、ヒトまたは
動物の薬物感受性の評価方法であり、mRNA非翻訳領域の
多様性が薬物感受性に影響する遺伝子について、非翻訳
領域の差異を検出し、検出された差異に基づいて薬物感
受性を評価することを特徴とする。
動物の薬物感受性の評価方法であり、mRNA非翻訳領域の
多様性が薬物感受性に影響する遺伝子について、非翻訳
領域の差異を検出し、検出された差異に基づいて薬物感
受性を評価することを特徴とする。
【００１０】本発明において、薬物は、ヒトまたは動物
に作用するものであれば特に限定されず、鎮痛剤、抗癌
剤、抗アレルギー剤、降圧剤、利尿剤、麻酔剤などが挙
げられる。特に、薬物は、ヒトまたは動物の個体間にお
いて感受性の差が大きいものが好ましい。感受性の個人
差の大きい薬物であるほど、感受性の高い個体に薬物が
過剰に投与された場合の影響が大きいからである。
に作用するものであれば特に限定されず、鎮痛剤、抗癌
剤、抗アレルギー剤、降圧剤、利尿剤、麻酔剤などが挙
げられる。特に、薬物は、ヒトまたは動物の個体間にお
いて感受性の差が大きいものが好ましい。感受性の個人
差の大きい薬物であるほど、感受性の高い個体に薬物が
過剰に投与された場合の影響が大きいからである。
【００１１】動物は特に限定されないが、通常には、脊
椎動物であり、好ましくは哺乳動物である。
椎動物であり、好ましくは哺乳動物である。
【００１２】遺伝子は、mRNA非翻訳領域の多様性が薬物
感受性に影響する遺伝子であればよい。mRNA非翻訳領域
の多様性が薬物感受性に影響する遺伝子は、その産物が
個体の薬物感受性に影響するもの（以下、「薬物感受性
に関与する遺伝子」ともいう）であって、薬物感受性が
異なる個体間で非翻訳領域に塩基配列の差異を有するも
のを意味する。薬物感受性に関与する遺伝子の例として
は、薬物の受容体の遺伝子、薬物の代謝に関与する酵素
の遺伝子などが挙げられる。
感受性に影響する遺伝子であればよい。mRNA非翻訳領域
の多様性が薬物感受性に影響する遺伝子は、その産物が
個体の薬物感受性に影響するもの（以下、「薬物感受性
に関与する遺伝子」ともいう）であって、薬物感受性が
異なる個体間で非翻訳領域に塩基配列の差異を有するも
のを意味する。薬物感受性に関与する遺伝子の例として
は、薬物の受容体の遺伝子、薬物の代謝に関与する酵素
の遺伝子などが挙げられる。
【００１３】mRNAの非翻訳領域の多様性が薬物感受性に
影響する遺伝子は、以下のような方法によって見出すこ
とができる。
影響する遺伝子は、以下のような方法によって見出すこ
とができる。
【００１４】（１）薬物感受性が異なるヒトまたは動物
について、ゲノムDNAを鋳型としたPCR法などでその薬物
感受性に関与する遺伝子の非翻訳領域を増幅する。その
領域のサイズや塩基配列を電気泳動法やシーケンス法に
よって解析することで差異を同定する。差異の同定され
たものが本発明の評価方法に使用できる遺伝子である。
について、ゲノムDNAを鋳型としたPCR法などでその薬物
感受性に関与する遺伝子の非翻訳領域を増幅する。その
領域のサイズや塩基配列を電気泳動法やシーケンス法に
よって解析することで差異を同定する。差異の同定され
たものが本発明の評価方法に使用できる遺伝子である。
【００１５】（２）薬物感受性が異なるヒトまたは動物
よりmRNAを調製し、同時に多数の遺伝子発現パターンが
解析できるマイクロアレイ法によって、そのmRNAをプロ
ーブとした遺伝子発現のプロファイリングを行う。発現
に差異が認められる遺伝子について、その非翻訳領域の
サイズや塩基配列を解析し、その領域の差異を同定する
とともに、薬物感受性に関与することを確認する。差異
が同定されかつ薬物感受性に関与するものが本発明の評
価方法に使用できる遺伝子である。
よりmRNAを調製し、同時に多数の遺伝子発現パターンが
解析できるマイクロアレイ法によって、そのmRNAをプロ
ーブとした遺伝子発現のプロファイリングを行う。発現
に差異が認められる遺伝子について、その非翻訳領域の
サイズや塩基配列を解析し、その領域の差異を同定する
とともに、薬物感受性に関与することを確認する。差異
が同定されかつ薬物感受性に関与するものが本発明の評
価方法に使用できる遺伝子である。
【００１６】なお、本発明の評価方法に使用できる遺伝
子は、mRNA非翻訳領域の多様性が薬物感受性に影響する
遺伝子である限り、上記の方法により見い出されるもの
に限定されるものではない。
子は、mRNA非翻訳領域の多様性が薬物感受性に影響する
遺伝子である限り、上記の方法により見い出されるもの
に限定されるものではない。
【００１７】非翻訳領域の差異は、塩基配列の差異を検
出してもよいし、塩基配列の差異がサイズ（長さ）に反
映されている場合には長さの差異として検出してもよ
い。
出してもよいし、塩基配列の差異がサイズ（長さ）に反
映されている場合には長さの差異として検出してもよ
い。
【００１８】mRNAの非翻訳領域における差異の検出方法
は、特に限定されない。例えば、長さの差異の場合に
は、非翻訳領域の長さはmRNAの全長に反映されるので、
mRNAの全長を測定してもよい。例えば、試料からmRNAを
調製し、アガロースゲル電気泳動に付し、mRNAに相補的
な塩基配列を有する標識したプローブを用いてノザーン
ブロット分析を行うことによりmRNAの長さの差異を検出
できる。長さの異なるmRNAについてそれぞれの塩基配列
が明らかになっている場合や塩基配列の差異が明らかに
なっている場合には、それらの塩基配列に基づいて、mR
NAの長さや塩基配列の差異が増幅産物の性質（長さ等）
や有無に反映されるように設定したプライマーを用い、
試料から調製されたcDNAを鋳型としてPCR法により増幅
を行い、その増幅産物の性質や有無を調べることにより
mRNAの長さや塩基配列の差異を検出できる。また、長さ
の異なるmRNAを生じる遺伝子や塩基配列の異なるmRNAを
生じる遺伝子のゲノムＤＮＡにおける塩基配列が明らか
になっている場合には、それらの塩基配列に基づいて、
mRNAの長さや塩基配列の差異が増幅産物の性質（長さ
等）や有無に反映されるように設定したプライマーを用
い、試料から調製されたcDNAまたはゲノムDNAを鋳型と
してPCR法により増幅を行い、その増幅産物の性質や有
無を調べることによりmRNAの長さや塩基配列の差異を検
出できる。
は、特に限定されない。例えば、長さの差異の場合に
は、非翻訳領域の長さはmRNAの全長に反映されるので、
mRNAの全長を測定してもよい。例えば、試料からmRNAを
調製し、アガロースゲル電気泳動に付し、mRNAに相補的
な塩基配列を有する標識したプローブを用いてノザーン
ブロット分析を行うことによりmRNAの長さの差異を検出
できる。長さの異なるmRNAについてそれぞれの塩基配列
が明らかになっている場合や塩基配列の差異が明らかに
なっている場合には、それらの塩基配列に基づいて、mR
NAの長さや塩基配列の差異が増幅産物の性質（長さ等）
や有無に反映されるように設定したプライマーを用い、
試料から調製されたcDNAを鋳型としてPCR法により増幅
を行い、その増幅産物の性質や有無を調べることにより
mRNAの長さや塩基配列の差異を検出できる。また、長さ
の異なるmRNAを生じる遺伝子や塩基配列の異なるmRNAを
生じる遺伝子のゲノムＤＮＡにおける塩基配列が明らか
になっている場合には、それらの塩基配列に基づいて、
mRNAの長さや塩基配列の差異が増幅産物の性質（長さ
等）や有無に反映されるように設定したプライマーを用
い、試料から調製されたcDNAまたはゲノムDNAを鋳型と
してPCR法により増幅を行い、その増幅産物の性質や有
無を調べることによりmRNAの長さや塩基配列の差異を検
出できる。
【００１９】非翻訳領域の多様性が薬物感受性に影響す
る遺伝子としては、ミューオピオイド受容体遺伝子が挙
げられる。ミューオピオイド受容体遺伝子の非翻訳領域
には、非翻訳領域の長さの差異に反映される差異があ
る。
る遺伝子としては、ミューオピオイド受容体遺伝子が挙
げられる。ミューオピオイド受容体遺伝子の非翻訳領域
には、非翻訳領域の長さの差異に反映される差異があ
る。
【００２０】薬物感受性に関与する遺伝子としてミュー
オピオイド受容体遺伝子を用いた場合には、薬物はミュ
ーオピオイド受容体を標的とするものであればよく、こ
のような薬物の例としては、モルヒネが挙げられる。
オピオイド受容体遺伝子を用いた場合には、薬物はミュ
ーオピオイド受容体を標的とするものであればよく、こ
のような薬物の例としては、モルヒネが挙げられる。
【００２１】本発明の方法により、薬物感受性が評価で
きる理由は以下の様に考えられる。後記実施例に示され
る様に、モルヒネの鎮痛効果が減弱していることが知ら
れているCXBKマウスにおいて、ミューオピオイド受容体
遺伝子のmRNAの非翻訳領域が異常に長いこと、ミューオ
ピオイド受容体遺伝子のmRNAの脳内量が減少しているこ
と、及び、コードされるミューオピオイド受容体自体に
は異常がないことが判明した。さらに、ミューオピオイ
ド受容体遺伝子のmRNAの非翻訳領域の異常と、モルヒネ
鎮痛効果の減弱とが関連していることが確認された。以
上から、ミューオピオイド受容体遺伝子のmRNAの非翻訳
領域の塩基配列に基づいて、モルヒネに対する感受性を
評価できることが判明した。これは、mRNAの非翻訳領域
の異常のためにmRNAが不安定でその脳内量が減少し、そ
の結果、ミューオピオイド受容体の脳内量が減少してモ
ルヒネの鎮痛効果が減弱するためと推定される。また、
ミューオピオイド受容体を標的とする薬物（オピオイ
ド）に対する感受性もモルヒネに対する感受性と同様に
評価できると考えられる。
きる理由は以下の様に考えられる。後記実施例に示され
る様に、モルヒネの鎮痛効果が減弱していることが知ら
れているCXBKマウスにおいて、ミューオピオイド受容体
遺伝子のmRNAの非翻訳領域が異常に長いこと、ミューオ
ピオイド受容体遺伝子のmRNAの脳内量が減少しているこ
と、及び、コードされるミューオピオイド受容体自体に
は異常がないことが判明した。さらに、ミューオピオイ
ド受容体遺伝子のmRNAの非翻訳領域の異常と、モルヒネ
鎮痛効果の減弱とが関連していることが確認された。以
上から、ミューオピオイド受容体遺伝子のmRNAの非翻訳
領域の塩基配列に基づいて、モルヒネに対する感受性を
評価できることが判明した。これは、mRNAの非翻訳領域
の異常のためにmRNAが不安定でその脳内量が減少し、そ
の結果、ミューオピオイド受容体の脳内量が減少してモ
ルヒネの鎮痛効果が減弱するためと推定される。また、
ミューオピオイド受容体を標的とする薬物（オピオイ
ド）に対する感受性もモルヒネに対する感受性と同様に
評価できると考えられる。
【００２２】非翻訳領域の塩基配列は進化的にあまり保
存されていないので、マウスに限らず、他の動物やヒト
でもミューオピオイド受容体遺伝子のmRNAの非翻訳領域
が個体間で多様であると考えられる。従って、非翻訳領
域がmRNAの安定性に大きく影響して、mRNA量に個体差が
生じること、及び、mRNAの大小がミューオピオイド受容
体タンパク質量の大小に対応し、タンパク質量にも個体
差が生じ、最終的にオピオイドの効果に個体差が生じる
ことは、マウス以外の動物やヒトにおいても同様である
と考えられる。さらに、ミューオピオイド受容体遺伝子
に限らず、他の薬剤感受性に関与する遺伝子においても
mRNAの非翻訳領域が個体間で多様であると考えられる。
存されていないので、マウスに限らず、他の動物やヒト
でもミューオピオイド受容体遺伝子のmRNAの非翻訳領域
が個体間で多様であると考えられる。従って、非翻訳領
域がmRNAの安定性に大きく影響して、mRNA量に個体差が
生じること、及び、mRNAの大小がミューオピオイド受容
体タンパク質量の大小に対応し、タンパク質量にも個体
差が生じ、最終的にオピオイドの効果に個体差が生じる
ことは、マウス以外の動物やヒトにおいても同様である
と考えられる。さらに、ミューオピオイド受容体遺伝子
に限らず、他の薬剤感受性に関与する遺伝子においても
mRNAの非翻訳領域が個体間で多様であると考えられる。
【００２３】
【実施例】以下、実施例により本発明を説明する。
【００２４】
【実施例１】（１）CXBKマウスにおける異常なミューオ
ピオイド受容体(μ-OR) mRNA CXBKマウスにおけるオピオイド受容体(OR) mRNAの発現
を調べるために、ノザーンブロット分析を行った。
ピオイド受容体(μ-OR) mRNA CXBKマウスにおけるオピオイド受容体(OR) mRNAの発現
を調べるために、ノザーンブロット分析を行った。
【００２５】マウスは、２３±１℃、相対湿度５０±５
％、及び、１２時間明暗周期（午前７時〜午後７時が
明）に維持した環境下で、同性の同腹仔とともにアルミ
ニウムケージ（ケージ当たり５匹以下）で飼育した。マ
ウスは、標準市販実験飼料（NMF; Oriental Yeast Co.
Ltd.）及び水を随意に摂取可能とした。CXBKマウスは、
初めはThe Jackson Laboratoryから購入した。C57BL/6C
rSlc(B6)及びBALB/cCrSlc(BALB/c)マウスは、日本SLCか
ら購入した。実験操作及び飼育条件は、インスティチュ
ーショナル・アニマル・ケア・アンド・ユーズ・コミッ
ティー(Institutional Animal Care and Use Comittee)
により承認された。全ての動物は、当研究所の動物実験
ガイドラインに沿って、人道的に世話し取り扱った。
％、及び、１２時間明暗周期（午前７時〜午後７時が
明）に維持した環境下で、同性の同腹仔とともにアルミ
ニウムケージ（ケージ当たり５匹以下）で飼育した。マ
ウスは、標準市販実験飼料（NMF; Oriental Yeast Co.
Ltd.）及び水を随意に摂取可能とした。CXBKマウスは、
初めはThe Jackson Laboratoryから購入した。C57BL/6C
rSlc(B6)及びBALB/cCrSlc(BALB/c)マウスは、日本SLCか
ら購入した。実験操作及び飼育条件は、インスティチュ
ーショナル・アニマル・ケア・アンド・ユーズ・コミッ
ティー(Institutional Animal Care and Use Comittee)
により承認された。全ての動物は、当研究所の動物実験
ガイドラインに沿って、人道的に世話し取り扱った。
【００２６】mRNAは、各ナイーブ成獣雄マウスの脳から
メッセンジャーRNAアイソレーションキット（Stratagen
e）を用いて別々に調製した。RNAサイズマーカーは、No
vagenから購入した。RNAをホルムアルデヒドを含む１％
アガロースゲルで電気泳動し、ニトロセルロース膜（PR
OTRAN; Schleicher & Schuell）またはナイロン膜（Hyb
ond-N+; Amersham Pharmacia Biotech）に転写させた。
μ、δ及びκオピオイド受容体mRNA用のプローブは、Pf
u DNAポリメラーゼ(Stratagene)を用いるPCRにより、pS
PORμ、pSPORδ及びpSPORκをそれぞれ鋳型として用い
て調製した。受容体の膜貫通V-VII領域に相当するフラ
グメントに対する共通プライマー対は、5'-CT(C/G)ATCA
TC(A/T)(C/T)(G/T)GT(C/G)TG(C/T)TA-3'（センスプライ
マー：配列番号１）及び5'-GCGGATCCTTGAAGTT(C/T)TC(C
/G)TCCAG-3'（アンチセンスプライマー：配列番号２）
であった。ハイブリダイゼーションは、[32-P]標識プロ
ーブ（2×106cpm/ml）を用いて、ハイブリダイゼーショ
ン溶液（ExpressHyb Hybridization Solution; Clonete
ch）中60℃で約20時間行った。ブロットは、0.1%SDSを
含む0.1×SSC（150 mM NaCl及び25 mMクエン酸ナトリウ
ム）により42℃で洗浄した。オートラジオグラフィーを
行い、BAS-5000イメージングアナライザー（Fujifilm）
を用いて分析した。任意の測定領域における放射能に比
例する光刺激ルミネセンス(PSL)（Amemiya et al. (198
7) Science, 237:164-168）の値を定量分析で比較し
た。膜を、0.1%SDSを含む0.1×SSC中100℃で10分処理
し、デハイブリダイズした。μ、δ及びκ-OR mRNAの発
現を同じ膜を用いて分析した。
メッセンジャーRNAアイソレーションキット（Stratagen
e）を用いて別々に調製した。RNAサイズマーカーは、No
vagenから購入した。RNAをホルムアルデヒドを含む１％
アガロースゲルで電気泳動し、ニトロセルロース膜（PR
OTRAN; Schleicher & Schuell）またはナイロン膜（Hyb
ond-N+; Amersham Pharmacia Biotech）に転写させた。
μ、δ及びκオピオイド受容体mRNA用のプローブは、Pf
u DNAポリメラーゼ(Stratagene)を用いるPCRにより、pS
PORμ、pSPORδ及びpSPORκをそれぞれ鋳型として用い
て調製した。受容体の膜貫通V-VII領域に相当するフラ
グメントに対する共通プライマー対は、5'-CT(C/G)ATCA
TC(A/T)(C/T)(G/T)GT(C/G)TG(C/T)TA-3'（センスプライ
マー：配列番号１）及び5'-GCGGATCCTTGAAGTT(C/T)TC(C
/G)TCCAG-3'（アンチセンスプライマー：配列番号２）
であった。ハイブリダイゼーションは、[32-P]標識プロ
ーブ（2×106cpm/ml）を用いて、ハイブリダイゼーショ
ン溶液（ExpressHyb Hybridization Solution; Clonete
ch）中60℃で約20時間行った。ブロットは、0.1%SDSを
含む0.1×SSC（150 mM NaCl及び25 mMクエン酸ナトリウ
ム）により42℃で洗浄した。オートラジオグラフィーを
行い、BAS-5000イメージングアナライザー（Fujifilm）
を用いて分析した。任意の測定領域における放射能に比
例する光刺激ルミネセンス(PSL)（Amemiya et al. (198
7) Science, 237:164-168）の値を定量分析で比較し
た。膜を、0.1%SDSを含む0.1×SSC中100℃で10分処理
し、デハイブリダイズした。μ、δ及びκ-OR mRNAの発
現を同じ膜を用いて分析した。
【００２７】この結果、CXBKマウスは、サイズの大きい
（14.5 kb）μ-OR mRNAを脳に有していた一方、マウス
の先祖系統であるB6マウスは12 kbのμ-OR mRNAを有し
ていた。B6とCXBKマウスのヘテロ接合体は、14.5 kb mR
NAの信号はかすかではあったが、両方のmRNAを有してい
た。マウスの他方の先祖系統であるBALB/cマウスは、12
kb μ-OR mRNAのみを有していた。CXBKマウスにおける
μ-OR mRNAのシグナル強度は、等量の脳mRNAを電気泳動
し分析したところ、B6及びBALB/cマウスにおける強度の
約60%であった。δ-OR mRNAのサイズは、全ての系統で
同じであったが、CXBKマウスにおけるδ-OR mRNAのシグ
ナル強度は、B6及びBALB/cマウスにおける強度よりも高
かった。κ-OR mRNAのサイズ及びシグナル強度は、全て
の系統において、有意には異なっていなかった。μ-OR
mRNAにおけるサイズの相違は、CXBKマウスのμ-OR遺伝
子が、先祖系統のマウスのものと異なることを示唆す
る。
（14.5 kb）μ-OR mRNAを脳に有していた一方、マウス
の先祖系統であるB6マウスは12 kbのμ-OR mRNAを有し
ていた。B6とCXBKマウスのヘテロ接合体は、14.5 kb mR
NAの信号はかすかではあったが、両方のmRNAを有してい
た。マウスの他方の先祖系統であるBALB/cマウスは、12
kb μ-OR mRNAのみを有していた。CXBKマウスにおける
μ-OR mRNAのシグナル強度は、等量の脳mRNAを電気泳動
し分析したところ、B6及びBALB/cマウスにおける強度の
約60%であった。δ-OR mRNAのサイズは、全ての系統で
同じであったが、CXBKマウスにおけるδ-OR mRNAのシグ
ナル強度は、B6及びBALB/cマウスにおける強度よりも高
かった。κ-OR mRNAのサイズ及びシグナル強度は、全て
の系統において、有意には異なっていなかった。μ-OR
mRNAにおけるサイズの相違は、CXBKマウスのμ-OR遺伝
子が、先祖系統のマウスのものと異なることを示唆す
る。
【００２８】（２）CXBKマウスにおけるμ-OR mRNAの分
布 in situハイブリダイゼーション組織化学分析を用い
て、CXBKマウスの脳におけるμ-OR mRNAの発現と、B6マ
ウスの脳における発現を比較した。
布 in situハイブリダイゼーション組織化学分析を用い
て、CXBKマウスの脳におけるμ-OR mRNAの発現と、B6マ
ウスの脳における発現を比較した。
【００２９】μ-OR mRNA用のプローブは、開始メチオニ
ンコドンを含むμ-ORcDNA配列（Ikeda et al. (1996) A
nn. NY Acad. Sci. 801:95-109）の一部に相補的な45-m
erオリゴヌクレオチドであった。オリゴヌクレオチド
を、ターミナルデオキシリボヌクレオチチジルトランス
フェラーゼ（宝酒造）を用いて[33P]dATPで標識し、セ
ファデックスG-25スピンカラム（Boehringer Mannhei
m）を用いて精製した。プローブの比活性は5×108dpm/
μgであった。In situハイブリダイゼーションは以前に
報告（Ikeda et al. (1998) J. Comp. Neurol. 399:139
-151）されたように行った。成獣雄B6及びCXBKマウスの
脳の水平及び矢状切片をスライド上の置き、４％パラホ
ルムアルデヒド／0.1 MナトリウムＰＢＳで固定した。
切片を、5×10 3dpm/μlのプローブを含むハイブリダイ
ゼーション溶液中で42℃において16時間ハイブリダイズ
させた。スライドを、0.1×SSC-0.1%サルコシル(Sarkos
yl)で、55℃において40分間ずつ３回洗浄し、脱水し、B
AS-5000イメージングアナライザー（Fijifilm）を用い
て分析した。PSLの値を定量分析により比較した。次い
で、スライドをハイパーフィルム-β-マックス（Amersh
am Pharmacia Biotech）に２週間露出させ、X線フィル
ム像を得た。
ンコドンを含むμ-ORcDNA配列（Ikeda et al. (1996) A
nn. NY Acad. Sci. 801:95-109）の一部に相補的な45-m
erオリゴヌクレオチドであった。オリゴヌクレオチド
を、ターミナルデオキシリボヌクレオチチジルトランス
フェラーゼ（宝酒造）を用いて[33P]dATPで標識し、セ
ファデックスG-25スピンカラム（Boehringer Mannhei
m）を用いて精製した。プローブの比活性は5×108dpm/
μgであった。In situハイブリダイゼーションは以前に
報告（Ikeda et al. (1998) J. Comp. Neurol. 399:139
-151）されたように行った。成獣雄B6及びCXBKマウスの
脳の水平及び矢状切片をスライド上の置き、４％パラホ
ルムアルデヒド／0.1 MナトリウムＰＢＳで固定した。
切片を、5×10 3dpm/μlのプローブを含むハイブリダイ
ゼーション溶液中で42℃において16時間ハイブリダイズ
させた。スライドを、0.1×SSC-0.1%サルコシル(Sarkos
yl)で、55℃において40分間ずつ３回洗浄し、脱水し、B
AS-5000イメージングアナライザー（Fijifilm）を用い
て分析した。PSLの値を定量分析により比較した。次い
で、スライドをハイパーフィルム-β-マックス（Amersh
am Pharmacia Biotech）に２週間露出させ、X線フィル
ム像を得た。
【００３０】この結果、CXBKマウスの脳において、μ-O
R mRNAは、B6マウスの脳と同様の様式で、種々の脳の領
域で発現していた。しかし、CXBKマウスの脳におけるmR
NAのシグナル強度は、有意に低かった（B6マウスの脳に
おけるシグナル強度の約70%）。このことは、ノザーン
ブロット分析の結果と一致した。同様の結果が、B6及び
CXBKマウスの脳の矢状切片でも得られた。これらの結果
は、μ-OR mRNAの発現レベルがCXBKマウスの脳全般にお
いて低いことを示唆する。
R mRNAは、B6マウスの脳と同様の様式で、種々の脳の領
域で発現していた。しかし、CXBKマウスの脳におけるmR
NAのシグナル強度は、有意に低かった（B6マウスの脳に
おけるシグナル強度の約70%）。このことは、ノザーン
ブロット分析の結果と一致した。同様の結果が、B6及び
CXBKマウスの脳の矢状切片でも得られた。これらの結果
は、μ-OR mRNAの発現レベルがCXBKマウスの脳全般にお
いて低いことを示唆する。
【００３１】（３）B6及びCXBKマウスのμ-OR遺伝子間
の塩基配列の相違 完全なコード領域を含む、μ-OR mRNAの一部（2184塩
基、GenBankアクセッション番号AB047546）をB6とCXBK
マウスで比較した。配列決定は以下のように行った。
の塩基配列の相違 完全なコード領域を含む、μ-OR mRNAの一部（2184塩
基、GenBankアクセッション番号AB047546）をB6とCXBK
マウスで比較した。配列決定は以下のように行った。
【００３２】CXBKマウス及びB6マウスの脳cDNAを、1st
ストランドcDNAシンセシスキット（Clontech）を用い
て、対応するmRNAをテンプレートとして合成した。ゲノ
ムDNAは、マウスの尾または肝臓から調製した。DNAフラ
グメントは、Pfu DNAポリメラーゼを用いてPCRにより増
幅した。μ-ORcDNA用のPCRプライマーは、5'-GCGCCTCCG
TGTACTTCTAA-3'（センスプライマー：配列番号３）及び
5'-GATGGCAGCCTCTAAGTTTA-3'（アンチセンスプライマ
ー：配列番号４）であった。PCR産物の塩基配列は、PCR
プライマーと以下のような他のプライマーを用いて分析
した。5'-AACCATGGACAGCAGCGCCG-3'（配列番号５）、5'
-GCCACTAGCACGCTGCCCTT-3'（配列番号６）、5'-CAGTGGA
TCGAACTAACCACCAGCT-3'（配列番号７）及び5'-GGATTTTG
CTCAGAATGGTGGCATG-3'（配列番号８）（Kaufman et al.
(1995) J. Biol. Chem. 270:15877-15883）。μ-OR遺
伝子（翻訳開始部位の5'-隣接領域）用のPCRプライマー
は、5'-AATGCATTCTTGCTCCTCAAGGATC-3'（センスプライ
マー：配列番号９）及び5'-TCCCTGGGCCGGCGCTGCTGTCCAT
-3'（アンチセンスプライマー：配列番号１０）であっ
た。PCR産物の塩基配列は、PCRプライマーと以下のよう
な他のプライマーを用いて分析した。5'-AGTGGGGGCACAT
GAAACAGGCTTC-3'（配列番号１１）、5'-GAGGGTTATTAATG
TTGTCCTTTAC-3'（配列番号１２）及び5'-GTTGTTACAAAGA
AACTTAGAGTCT-3'（配列番号１３）（Liang et al. (199
5) Brain Res. 679:82-88）。塩基配列決定は、PRISM 3
10ジェネティックアナライザー（Applied Biosystems）
を用いて行った。
ストランドcDNAシンセシスキット（Clontech）を用い
て、対応するmRNAをテンプレートとして合成した。ゲノ
ムDNAは、マウスの尾または肝臓から調製した。DNAフラ
グメントは、Pfu DNAポリメラーゼを用いてPCRにより増
幅した。μ-ORcDNA用のPCRプライマーは、5'-GCGCCTCCG
TGTACTTCTAA-3'（センスプライマー：配列番号３）及び
5'-GATGGCAGCCTCTAAGTTTA-3'（アンチセンスプライマ
ー：配列番号４）であった。PCR産物の塩基配列は、PCR
プライマーと以下のような他のプライマーを用いて分析
した。5'-AACCATGGACAGCAGCGCCG-3'（配列番号５）、5'
-GCCACTAGCACGCTGCCCTT-3'（配列番号６）、5'-CAGTGGA
TCGAACTAACCACCAGCT-3'（配列番号７）及び5'-GGATTTTG
CTCAGAATGGTGGCATG-3'（配列番号８）（Kaufman et al.
(1995) J. Biol. Chem. 270:15877-15883）。μ-OR遺
伝子（翻訳開始部位の5'-隣接領域）用のPCRプライマー
は、5'-AATGCATTCTTGCTCCTCAAGGATC-3'（センスプライ
マー：配列番号９）及び5'-TCCCTGGGCCGGCGCTGCTGTCCAT
-3'（アンチセンスプライマー：配列番号１０）であっ
た。PCR産物の塩基配列は、PCRプライマーと以下のよう
な他のプライマーを用いて分析した。5'-AGTGGGGGCACAT
GAAACAGGCTTC-3'（配列番号１１）、5'-GAGGGTTATTAATG
TTGTCCTTTAC-3'（配列番号１２）及び5'-GTTGTTACAAAGA
AACTTAGAGTCT-3'（配列番号１３）（Liang et al. (199
5) Brain Res. 679:82-88）。塩基配列決定は、PRISM 3
10ジェネティックアナライザー（Applied Biosystems）
を用いて行った。
【００３３】この結果、CXBKマウスにおけるμ-OR mRNA
のコード領域（1197塩基）の配列は、B6マウスのものと
同じであった。このことは、μ-ORタンパク質の構造は
正常であり、μ-OR mRNAの非翻訳領域(UTR)がCXBKマウ
スにおいて異常に長いことを示す。配列の相違は、調べ
た3'-UTR領域（726塩基）にはなく、調べた5'-UTR領域
（214塩基）には単一塩基の配列の相違のみがあった。
このことは、B6マウスとCXBKマウスとの間のμ-OR mRNA
のサイズの相違は、μ-OR mRNAの調べていないUTRに存
在することを示している。また、B6及びCXBKμ-OR遺伝
子における、翻訳開始部位の5'-隣接領域（1107塩基
対、GenBankアクセッション番号AB047547）も比較し
た。これらの間の配列の相違は、5'-UTRの相違に対応す
るものを除いて検出されなかった。単一塩基の配列の相
違がCXBK表現型全体を引き起こすとは、BALB/cマウスが
この領域にCXBKマウスと同じ塩基配列を有するため、考
えられない。
のコード領域（1197塩基）の配列は、B6マウスのものと
同じであった。このことは、μ-ORタンパク質の構造は
正常であり、μ-OR mRNAの非翻訳領域(UTR)がCXBKマウ
スにおいて異常に長いことを示す。配列の相違は、調べ
た3'-UTR領域（726塩基）にはなく、調べた5'-UTR領域
（214塩基）には単一塩基の配列の相違のみがあった。
このことは、B6マウスとCXBKマウスとの間のμ-OR mRNA
のサイズの相違は、μ-OR mRNAの調べていないUTRに存
在することを示している。また、B6及びCXBKμ-OR遺伝
子における、翻訳開始部位の5'-隣接領域（1107塩基
対、GenBankアクセッション番号AB047547）も比較し
た。これらの間の配列の相違は、5'-UTRの相違に対応す
るものを除いて検出されなかった。単一塩基の配列の相
違がCXBK表現型全体を引き起こすとは、BALB/cマウスが
この領域にCXBKマウスと同じ塩基配列を有するため、考
えられない。
【００３４】（４）CXBKμ-OR遺伝子の２コピーを受け
継いでいるマウス（CXμ） CXBKμ-OR遺伝子とCXBK表現型との関連を調べるため、B
6マウスとCXBKマウスのヘテロ接合体を交配させること
により同腹仔を作成した。これらの同腹仔は以下の通り
であった。B6μ-OR遺伝子の２コピーを受け継いでいる
マウス（B6μ）、CXBKμ-ORを受け継いでいるマウス（C
Xμ）、及び、CXBKμ-OR遺伝子の１コピーを受け継いで
いるマウス（Heμ）。これらの同腹仔を用いて、CXBKマ
ウスの脳におけるOR mRNAのサイズ及びレベルの相違
が、CXBKμ-OR遺伝子に起因するものか否か明らかにす
るために、（１）と同様にノザーンブロット分析を行っ
た。この結果、B6μマウス及びCXμマウスにおけるμ-O
R mRNAのサイズは、それぞれ、B6マウス及びCXBKマウス
におけるものと同じと推定された。CXμマウスにおける
μ及びδ-OR mRNAのシグナル強度は、B6μマウスにおけ
るシグナル強度と比較した場合、それぞれ、低及び高で
あった。Heμマウスは、B6マウスとCXBKマウスのヘテロ
接合体と同様にこれらのμ-OR mRNAの両方を有してい
た。これらの結果は、CXBKμ-OR遺伝子が、CXBKマウス
におけるOR mRNAのサイズ及び発現レベルの相違を引き
起こしていることを示唆する。
継いでいるマウス（CXμ） CXBKμ-OR遺伝子とCXBK表現型との関連を調べるため、B
6マウスとCXBKマウスのヘテロ接合体を交配させること
により同腹仔を作成した。これらの同腹仔は以下の通り
であった。B6μ-OR遺伝子の２コピーを受け継いでいる
マウス（B6μ）、CXBKμ-ORを受け継いでいるマウス（C
Xμ）、及び、CXBKμ-OR遺伝子の１コピーを受け継いで
いるマウス（Heμ）。これらの同腹仔を用いて、CXBKマ
ウスの脳におけるOR mRNAのサイズ及びレベルの相違
が、CXBKμ-OR遺伝子に起因するものか否か明らかにす
るために、（１）と同様にノザーンブロット分析を行っ
た。この結果、B6μマウス及びCXμマウスにおけるμ-O
R mRNAのサイズは、それぞれ、B6マウス及びCXBKマウス
におけるものと同じと推定された。CXμマウスにおける
μ及びδ-OR mRNAのシグナル強度は、B6μマウスにおけ
るシグナル強度と比較した場合、それぞれ、低及び高で
あった。Heμマウスは、B6マウスとCXBKマウスのヘテロ
接合体と同様にこれらのμ-OR mRNAの両方を有してい
た。これらの結果は、CXBKμ-OR遺伝子が、CXBKマウス
におけるOR mRNAのサイズ及び発現レベルの相違を引き
起こしていることを示唆する。
【００３５】（５）CXμマウスの、オピオイドに対する
減弱した感受性 第２に、これらの同腹仔を用いて、テールフリック、ホ
ットプレート及びオープンフィールドのテストにより、
CXBKμ-OR遺伝子がCXBKマウスにおけるモルヒネ効果の
減弱に関係するか否かを調べた。これらのテストは、以
下の様に実施した。
減弱した感受性 第２に、これらの同腹仔を用いて、テールフリック、ホ
ットプレート及びオープンフィールドのテストにより、
CXBKμ-OR遺伝子がCXBKマウスにおけるモルヒネ効果の
減弱に関係するか否かを調べた。これらのテストは、以
下の様に実施した。
【００３６】ナイーブ成獣マウス（6〜15週齢）を、全
ての実験で使用した。各マウスは、昼間（午前8:00以降
午後5:00以前）に試験した。マウスの体重を測定し、テ
ールフリック(tail-flick)、オープンフィールド(open-
field)及びホットプレート(hot-plate)のテストを（こ
の順序で）行い、基本的反応性及び活動性を調べた。モ
ルヒネ塩酸（10 mg/ml）は、武田純薬工業から購入し
た。(1S-trans)-3,4-ジクロロ-N-メチル-N-(2-[1-プロ
リジニル]シクロヘキシル)ベンゼンアセトアミド塩酸
[(-)-U-50488]（Research Biochemicals）を蒸留水に溶
解し、使用時までストック溶液を-20℃に保存した。各
薬剤溶液を、各実験日に滅菌生理食塩水(0.9%NaCl)で1
mg/mlに希釈した。薬剤溶液を、10 ml/kgの用量でマウ
スに腹腔内注射した。テールフリック、オープンフィー
ルド及びホットプレートのテストは、注射の10、15及び
20分後にそれぞれ行った。テールフリックテストは、若
干の改変（Ikeda et al. (1999) Neurosci. Res. 34:14
9-155）をしたD'Amour及びSmith（J. Pharmacol. Exp.
Ther. 72:74-79 (1941))の方法に従って行った。カット
オフ時間は15秒であった。ホットプレートテストは、若
干の改変（Ikeda et al.(1999) Neurosci. Res. 34:149
-155）をしたWoolfe及びMacDonald (J. Pharmacol. Ex
p. Ther. 80:300-307(1944))の方法に従って行った。金
属プレートの温度は52.0±0.2℃に調節した。テスト開
始から一回目のジャンプまでの潜時を測定し、カットオ
フ時間は300秒であった。オープンフィールドテスト
は、以前に報告（Ikeda et al. (1995) Mol. Brain Re
s. 33:61-71）されたように行った。マウスの水平及び
垂直の移動を300秒間測定した。この実験では、種々の
種類の移動がよく相関しており、歩行距離をマウスの移
動として用いた。ANOVA及びScheffeのFポストホック検
定を、群のデータを統計的に解析するのに用いた。p<0.
05を統計的に有意とした。
ての実験で使用した。各マウスは、昼間（午前8:00以降
午後5:00以前）に試験した。マウスの体重を測定し、テ
ールフリック(tail-flick)、オープンフィールド(open-
field)及びホットプレート(hot-plate)のテストを（こ
の順序で）行い、基本的反応性及び活動性を調べた。モ
ルヒネ塩酸（10 mg/ml）は、武田純薬工業から購入し
た。(1S-trans)-3,4-ジクロロ-N-メチル-N-(2-[1-プロ
リジニル]シクロヘキシル)ベンゼンアセトアミド塩酸
[(-)-U-50488]（Research Biochemicals）を蒸留水に溶
解し、使用時までストック溶液を-20℃に保存した。各
薬剤溶液を、各実験日に滅菌生理食塩水(0.9%NaCl)で1
mg/mlに希釈した。薬剤溶液を、10 ml/kgの用量でマウ
スに腹腔内注射した。テールフリック、オープンフィー
ルド及びホットプレートのテストは、注射の10、15及び
20分後にそれぞれ行った。テールフリックテストは、若
干の改変（Ikeda et al. (1999) Neurosci. Res. 34:14
9-155）をしたD'Amour及びSmith（J. Pharmacol. Exp.
Ther. 72:74-79 (1941))の方法に従って行った。カット
オフ時間は15秒であった。ホットプレートテストは、若
干の改変（Ikeda et al.(1999) Neurosci. Res. 34:149
-155）をしたWoolfe及びMacDonald (J. Pharmacol. Ex
p. Ther. 80:300-307(1944))の方法に従って行った。金
属プレートの温度は52.0±0.2℃に調節した。テスト開
始から一回目のジャンプまでの潜時を測定し、カットオ
フ時間は300秒であった。オープンフィールドテスト
は、以前に報告（Ikeda et al. (1995) Mol. Brain Re
s. 33:61-71）されたように行った。マウスの水平及び
垂直の移動を300秒間測定した。この実験では、種々の
種類の移動がよく相関しており、歩行距離をマウスの移
動として用いた。ANOVA及びScheffeのFポストホック検
定を、群のデータを統計的に解析するのに用いた。p<0.
05を統計的に有意とした。
【００３７】モルヒネ（Mor）鎮痛効果についてテール
フリック及びホットプレートテストを行った結果を図１
のＡ，Ｂに、モルヒネ誘発性活動昂進についてオープン
フィールドテストを行った結果を図１のＣに示す。ま
た、CXBKμ-OR遺伝子が、CXBKマウスにおける、選択的
κアゴニストの(-)-U-50488（U-50）の鎮痛効果の減弱
を引き起こすか否か調べた結果を図１のＤに示す。図１
中の値は平均値±SEMである。Ａ〜Ｃにおいては各群１
０匹、Ｄにおいては各群６匹であった。
フリック及びホットプレートテストを行った結果を図１
のＡ，Ｂに、モルヒネ誘発性活動昂進についてオープン
フィールドテストを行った結果を図１のＣに示す。ま
た、CXBKμ-OR遺伝子が、CXBKマウスにおける、選択的
κアゴニストの(-)-U-50488（U-50）の鎮痛効果の減弱
を引き起こすか否か調べた結果を図１のＤに示す。図１
中の値は平均値±SEMである。Ａ〜Ｃにおいては各群１
０匹、Ｄにおいては各群６匹であった。
【００３８】B6μ、Heμ及びCXμのマウスは、モルヒネ
が投与されないときには、同様な潜時で熱刺激に反応
し、同様の自発的活動を示した。しかし、10 mg/kgのモ
ルヒネの腹腔内投与後では、CXμマウスは、鎮痛テスト
において、同腹仔と比べて有意に短い潜時で熱刺激に反
応した（p<0.05 リピーテドメジャーANOVA）。このこと
は、CXμマウスはモルヒネ鎮痛効果が低下していること
を示す。オープンフィールドテストにおいては、B6μ及
びHeμマウスは、モルヒネ投与の前後とも同様な距離歩
行した。このことは、これらのマウスでは、馴化による
移動活性の低下が、モルヒネ誘発性活動昂進により相殺
されたことを示す。対照的に、CXμマウスは、モルヒネ
投与後は、モルヒネ投与前に比べて、有意に短い距離を
歩行した（p<0.001; ペアードｔテスト）。このこと
は、モルヒネが、CXμマウスの移動に対する、馴化の阻
害効果を相殺することができなかったことを示す。これ
らの結果は、モルヒネの、CXBKマウスにおける鎮痛効果
及び活動性昂進効果の減弱がCXBKμ-OR遺伝子と関連し
ていることを示す。
が投与されないときには、同様な潜時で熱刺激に反応
し、同様の自発的活動を示した。しかし、10 mg/kgのモ
ルヒネの腹腔内投与後では、CXμマウスは、鎮痛テスト
において、同腹仔と比べて有意に短い潜時で熱刺激に反
応した（p<0.05 リピーテドメジャーANOVA）。このこと
は、CXμマウスはモルヒネ鎮痛効果が低下していること
を示す。オープンフィールドテストにおいては、B6μ及
びHeμマウスは、モルヒネ投与の前後とも同様な距離歩
行した。このことは、これらのマウスでは、馴化による
移動活性の低下が、モルヒネ誘発性活動昂進により相殺
されたことを示す。対照的に、CXμマウスは、モルヒネ
投与後は、モルヒネ投与前に比べて、有意に短い距離を
歩行した（p<0.001; ペアードｔテスト）。このこと
は、モルヒネが、CXμマウスの移動に対する、馴化の阻
害効果を相殺することができなかったことを示す。これ
らの結果は、モルヒネの、CXBKマウスにおける鎮痛効果
及び活動性昂進効果の減弱がCXBKμ-OR遺伝子と関連し
ていることを示す。
【００３９】テールフリックテストにおいて、CXμマウ
スは、10 mg/kgの(-)-U-50488の腹腔内投与後に、同腹
仔と比べて有意に短い潜時で熱刺激に応答した（p<0.05
リピーテドメジャーANOVA）。この結果は、CXBKマウス
の(-)-U-50488鎮痛効果の減弱も、CXBKμ-OR遺伝子と関
連することを示す。
スは、10 mg/kgの(-)-U-50488の腹腔内投与後に、同腹
仔と比べて有意に短い潜時で熱刺激に応答した（p<0.05
リピーテドメジャーANOVA）。この結果は、CXBKマウス
の(-)-U-50488鎮痛効果の減弱も、CXBKμ-OR遺伝子と関
連することを示す。
【００４０】これらの、CXBKμ-OR遺伝子とCXBK表現型
との間の三つの相関は、CXBKμ-OR遺伝子が、CXBK表現
型に寄与することを示唆する。
との間の三つの相関は、CXBKμ-OR遺伝子が、CXBK表現
型に寄与することを示唆する。
【００４１】
【発明の効果】本発明により、薬物に対する感受性を、
薬物を投与せずに評価することが可能になり、薬物に対
する感受性の個体差を考慮した薬物投与が可能になる。
本発明の評価方法によれば、非翻訳領域のサイズや塩基
配列の差異を解析するだけで、適切な薬物処方を推奨す
ることができる。
薬物を投与せずに評価することが可能になり、薬物に対
する感受性の個体差を考慮した薬物投与が可能になる。
本発明の評価方法によれば、非翻訳領域のサイズや塩基
配列の差異を解析するだけで、適切な薬物処方を推奨す
ることができる。
【００４２】
【配列表】
<110> 理化学研究所(RIKEN)
<120> 薬物感受性の評価方法
<130> P-8682
<160> 13
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 1
ctsatcatcw ykgtstgyta 20
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 2
gcggatcctt gaagttytcr tccag 25
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 3
gcgcctccgt gtacttctaa 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 4
gatggcagcc tctaagttta 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 5
aaccatggac agcagcgccg 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 6
gccactagca cgctgccctt 20
<210> 7
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 7
cagtggatcg aactaaccac cagct 25
<210> 8
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 8
ggattttgct cagaatggtg gcatg 25
<210> 9
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 9
aatgcattct tgctcctcaa ggatc 25
<210> 10
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 10
tccctgggcc ggcgctgctg tccat 25
<210> 11
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 11
agtgggggca catgaaacag gcttc 25
<210> 12
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 12
gagggttatt aatgttgtcc tttac 25
<210> 13
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 13
gttgttacaa agaaacttag agtct 25
【図１】 モルヒネ及び(-)-U-50499に対する感受性の
評価結果を示す。
評価結果を示す。
【手続補正書】
【提出日】平成１４年１月３０日（２００２．１．３
０）
０）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】 モルヒネ及び(-)-U-50488に対する感受性の
評価結果を示す。
評価結果を示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 矢野 良治
埼玉県和光市広沢２番１号 理化学研究所
内
(72)発明者 熊西 敏郎
新潟県新潟市浦山２−１−66−216
(72)発明者 小林 徹
新潟県新潟市関屋田町１−113
Ｆターム(参考） 4B024 AA11 CA09 CA12 HA14
4B063 QA07 QA08 QA11 QQ53 QR55
QR62 QS25 QS34
Claims (4)
- 【請求項１】 mRNA非翻訳領域の多様性が薬物に対する
感受性に影響する遺伝子について、非翻訳領域の差異を
検出し、検出された差異に基づいて薬物に対する感受性
を評価することを含む、ヒトまたは動物の薬物に対する
感受性の評価方法。 - 【請求項２】 非翻訳領域の差異が非翻訳領域の長さの
差異である請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 遺伝子がミューオピオイド受容体遺伝子
であり、薬物がミューオピオイド受容体を標的とするも
のである請求項１または２記載の方法。 - 【請求項４】 薬物がモルヒネである請求項３記載の方
法。
Priority Applications (3)
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|---|---|---|---|
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| US10/073,647 US20030003050A1 (en) | 2001-06-13 | 2002-02-11 | Method for evaluating drug sensitivity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001178169A JP2003000258A (ja) | 2001-06-13 | 2001-06-13 | 薬物感受性の評価方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003000258A true JP2003000258A (ja) | 2003-01-07 |
Family
ID=19018911
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001178169A Pending JP2003000258A (ja) | 2001-06-13 | 2001-06-13 | 薬物感受性の評価方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
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| JP (1) | JP2003000258A (ja) |
| CA (1) | CA2369717A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008079607A (ja) * | 2006-08-31 | 2008-04-10 | Tokyoto Igaku Kenkyu Kiko | Ｇｉｒｋチャネル遺伝子解析による薬物感受性の評価方法 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7450127B2 (en) * | 2005-03-23 | 2008-11-11 | Hurco Companies Inc. | Method of tolerance-based trajectory planning |
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2001
- 2001-06-13 JP JP2001178169A patent/JP2003000258A/ja active Pending
-
2002
- 2002-02-06 CA CA002369717A patent/CA2369717A1/en not_active Abandoned
- 2002-02-11 US US10/073,647 patent/US20030003050A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008079607A (ja) * | 2006-08-31 | 2008-04-10 | Tokyoto Igaku Kenkyu Kiko | Ｇｉｒｋチャネル遺伝子解析による薬物感受性の評価方法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20030003050A1 (en) | 2003-01-02 |
| CA2369717A1 (en) | 2002-12-13 |
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