JP2002542768A - 抗−ｐ５３抗体 - Google Patents

抗−ｐ５３抗体

Info

Publication number
JP2002542768A
JP2002542768A JP2000606630A JP2000606630A JP2002542768A JP 2002542768 A JP2002542768 A JP 2002542768A JP 2000606630 A JP2000606630 A JP 2000606630A JP 2000606630 A JP2000606630 A JP 2000606630A JP 2002542768 A JP2002542768 A JP 2002542768A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
fragment
polypeptide
nucleic acid
cancer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2000606630A
Other languages
English (en)
Inventor
ワード，ロビン，リン
クームバー，デイビッド，ウィリアム，ジョーン
Original Assignee
セント．ヴィンセンツ ホスピタル シドニー リミテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by セント．ヴィンセンツ ホスピタル シドニー リミテッド filed Critical セント．ヴィンセンツ ホスピタル シドニー リミテッド
Publication of JP2002542768A publication Critical patent/JP2002542768A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)

Abstract

(57)【要約】 本発明は、脊椎動物においてｐ５３蛋白質に対する抗体のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、およびそれらのヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチドおよび抗体（またはその断片）に関する。また、本発明は、診断および治療組成物の開発で用いられるヌクレオチド配列およびポリペプチド配列、およびｐ５３の異常性を呈する癌、慢性関節リウマチおよび他の病気状態の診断および治療でそれらの診断および治療組成物を用いる方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、脊椎動物においてｐ５３蛋白質に対する抗体のポリペプチドをコー
ドするヌクレオチド配列、およびそれらのヌクレオチド配列によってコードされ
るポリペプチドおよび抗体（またはその断片）に関する。また、本発明は診断お
よび治療組成物の開発で用いられるヌクレオチド配列およびｐ５３の異常性を呈
する癌、慢性関節リウマチおよび他の病気状態の診断および治療においてそれら
の診断および治療組成物を用いる方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ｐ５３遺伝子はヒト腫瘍の５０％を超えて突然変異されている（１）。中央Ｄ
ＮＡ結合ドメイン中の点突然変異は最も頻繁に観察される突然変異であり（２）
立体配座変化による機能の喪失をもたらす（３）。突然変異した蛋白質の半減期
は、通常、腫瘍細胞におけるｐ５３の蓄積の増大した結果となる。突然変異体蛋
白質のこの蓄積は、幾人かの癌患者において当該蛋白質に対する免疫応答の発生
で因子を意味する（４）。野生型ｐ５３の立体配座は静的ではなく、野生型およ
び突然変異体の表現型または立体配座の間の変化は、例えば、イン・ビトロにお
いて緩衝液条件、モノクローナル抗体、キナーゼおよび酵素によって、あるいは
イン・ビボにてキナーゼ、ホスファターゼおよび他のｐ５３調節蛋白質によって
誘導される。
【０００３】 抗−ｐ５３血清抗体は、癌およびある範囲の種々の腫瘍を持つ個体の３０％ま
でで検出されている。ｐ５３に対するモノクローナル抗体（ＭＡｂ）は、ｐ５３
の機能および腫瘍形成におけるその役割の調査において価値あるものであった。
【０００４】 Ｍａｂの発生に対する分子的アプローチは、ＥＢＶ形質転換またはハイブリド
ーマ技術のごとき伝統的な方法よりも優れたいくつかの利点を提供する。部分的
には、これは、ヒトにおいてはこれらの伝統的方法がしばしばあるＢ細胞集団に
対する偏りおよび、不安定であるかまたは低レベルの抗体を生産するにすぎない
細胞系の創製の結果となるからである（５）。対照的に、分子遺伝学アプローチ
は、入手できるＢリンパ球のいずれかの源からの遺伝物質の使用が、クローン化
された重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子のランダムな組合せを創製するのを
可能とする。
【０００５】 癌患者におけるｐ５３に対する免疫応答の従前の研究は血清分析に頼ってきた
。これらの研究は、抗−ｐ５３免疫応答の発生における臨床的重要性、エピトー
プの優性遺伝および蛋白質過剰発現の役割に対して重要な情報を生み出してきた
。しかしながら、いくつかの非常に重要な問題が未解決のまま残されている。現
在、通常の細胞不滅化方法または分子生物学的手法いずれかによってヒト抗−ｐ
５３Ｍａｂは単離されていない。よって、ヒト抗−ｐ５３抗体Ｖ遺伝子用法、体
細胞突然変異の程度および抗−ｐ５３抗体の構造的特徴について入手できる情報
はない。そのような情報は、ｐ５３に対する液性免疫応答の性質および重要性の
有意義な理解に非常に有用である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は抗−ｐ５３抗体の単離を記載する。これらの抗体のヌクレオチド配列
および遺伝子用法を調べた。これらの抗体は、正常および病気状態において、並
びにイディオタイプワクチンを含めたワクチンの開発において、当該蛋白質の機
能的研究、ｐ５３の診断評価で用いる豊富な源である。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
１．ｐ５３に対する抗体またはその断片のポリペプチドをコードする核酸。 本発明の第１の具体例によると、抗体（またはその断片）のポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチド配列を含む単離され精製された核酸配列が提供され、
ここに、該抗体（またはその断片）は脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその
部分に対して結合親和性を有し、ここに、該核酸配列は天然に生じる病気に対す
る免疫応答を発現する脊椎動物宿主から得られる。
【０００８】 典型的には、免疫応答は少なくとも１つのｐ５３抗体の発現によって特徴付け
られる。
【０００９】 典型的には、核酸分子は、脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはその部分に
対する結合親和性を有するＦab抗体断片（またはその断片）をコードするポリヌ
クレオチド配列を含む。
【００１０】 本発明の第２の具体例によると、配列番号１ないし３０よりなる群から選択さ
れるポリヌクレオチド配列を含む単離され精製された核酸分子が提供される。
【００１１】 以下の特徴は本発明の第１および第２の具体例に関する。
【００１２】 典型的には、核酸分子はＤＮＡまたはＲＮＡ分子に対応する。
【００１３】 一般に、核酸分子が、抗体断片または相補性決定領域のごとき他の免疫学的に
活性なその断片をコードするポリヌクレオチド配列またはそのアナログを含み、
ここに、該抗体（またはその断片）は脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその
部分に対して結合親和性を有する。
【００１４】 典型的には、抗体断片は機能的抗原−結合ドメインを有する。なおより典型的
には、抗体断片はＦv、Ｆab、Ｆ（ａｂ）2、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）、ｄＡｂ（
単一ドメイン抗体）、二特異的抗体、ジアボディおよびトリアボディよりなる群
から選択される形態で存在することができる。
【００１５】 典型的には、抗体（またはその断片）はｐ５３蛋白質またはその部分に対する
結合親和性を有する。より典型的には、抗体（またはその断片）は、ｐ５３蛋白
質のＮ−末端、Ｃ−末端または中央ドメインあるいはその部分のうちの１以上の
残基に対する結合親和性を有する。なおより典型的には、抗体（またはその断片
）は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基に対する結合親和性を有す
る。さらにより典型的には、抗体（またはその断片）は残基約１０ないし約５５
に対する結合親和性を有する。なおより典型的には、抗体（またはその断片）は
、ｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基約１０ないし約２５、または約
４０ないし約５０、または約２７ないし約４４、あるいはｐ５３蛋白質のＮ−末
端あるいはその部分の約４０ないし約４４に対する結合親和性を有する。なおよ
り典型的には、抗体（またはその断片）は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその
部分の残基約２７ないし約４４に対する結合親和性を有する。なおより典型的に
は、抗体（またはその断片）は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基
約４０ないし約４４に対する結合親和性を有する。
【００１６】 なおより典型的には、抗体（またはその断片）は、ｐ５３蛋白質の中央ドメイ
ンまたはその部分の残基に対する結合親和性を有する。
【００１７】 典型的には、核酸分子は、脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはその部分に
対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）のポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチド配列を含み、ここに、該ポリヌクレオチド配列は、免疫グロブ
リンの軽鎖可変領域ポリペプチドまたは免疫グロブリンの重鎖可変領域ポリペプ
チドをコードする。
【００１８】 より典型的には、核酸分子は、脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはその部
分に対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）のポリペプチドをコード
するポリヌクレオチド配列を含み、ここに、該核酸分子は、免疫グロブリンの軽
鎖可変領域ポリペプチドをコードする第１のポリヌクレオチド配列、および免疫
グロブリンの重鎖可変領域ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド配
列を含む。
【００１９】 典型的には、免疫グロブリン軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド配列
は、免疫グロブリン軽鎖可変（Ｖ領域）および連結（Ｊ領域）セグメントをコー
ドするポリヌクレオチド配列を含む。
【００２０】 典型的には、免疫グロブリン重鎖可変領域ポリヌクレオチドをコードするポリ
ヌクレオチド配列は、免疫グロブリン重鎖可変（Ｖ領域）、多様性（Ｄ領域）お
よび連結（Ｊ領域）セグメントをコードするポリヌクレオチド配列を含む。
【００２１】 より典型的には、また、核酸分子が、免疫グロブリン重鎖可変もしくは免疫グ
ロブリン軽鎖領域と作動可能に連結した１以上の免疫グロブリン定常領域をコー
ドするポリヌクレオチド配列を含む。
【００２２】 なおより典型的には、免疫グロブリン定常領域の少なくとも１つは、免疫グロ
ブリン可変領域が由来する源とは異なる源に由来することができる。なおより典
型的には、免疫グロブリン定常領域が由来する源がヒトである。
【００２３】 典型的には、ｐ５３蛋白質またはその部分は野生型または突然変異体ｐ５３遺
伝子によってコードされる。
【００２４】 典型的には、脊椎動物はヒト、非−ヒト霊長類、ネズミ、ウシ、ヒツジ、ウマ
、ヤギ、ウサギ、トリ、ネコおよびイヌよりなる群から選択される。より典型的
には、脊椎動物はヒト、非−ヒト霊長類またはネズミである。なおより典型的に
は、脊椎動物はヒトである。
【００２５】 典型的には、また、核酸分子は、その範囲内に、本発明の第１または第２の具
体例に関して定義されたポリヌクレオチド配列のアナログを含み、ここに、該ア
ナログは本発明の第１または第２の具体例に関して定義されたポリヌクレオチド
配列によってコードされるポリペプチドと機能的に同一である生物学的活性を有
するポリペプチドをコードし、ここに、該ポリヌクレオチド配列は、過度の試験
および実験なくして分子生物学における標準的な技術を用いて位置決定し、単離
することができる。
【００２６】 典型的には、また、核酸分子は、その範囲内に、本発明の第１および第２の具
体例に関して定義されたポリヌクレオチド配列のアナログを含み、これはそのよ
うに定義されたポリヌクレオチド配列に対して少なくとも４５％相同性を有する
。より典型的には、ポリヌクレオチド配列のアナログは少なくとも５５％相同性
を有し、なおさらに典型的には、アナログは少なくとも６０％相同性を有し、な
おより典型的には、アナログは少なくとも７５％相同性を有し、なおさらに典型
的には、アナログは少なくとも８５％相同性を有し、なおより典型的には、アナ
ログは少なくとも９０％相同性を有し、なおよりさらに典型的には、アナログは
そのように定義されたポリヌクレオチド配列に対して少なくとも９５ないし９９
％相同性を有する。
【００２７】 ２つの核酸配列の間の相同性の程度は、ＧＣＧプログラムパッケージに提供さ
れるＧＡＰのごとき当該分野で公知のコンピュータープログラムによって決定さ
れることができる （Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｗｉｓ
ｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ， Ｖｅｒｓｉｏｎ ８， Ａｕｇｕｓｔ １９
９６， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， ５７５ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ， Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ， ＵＳＡ
５３７１１） （Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ， Ｓ．Ｂ．およびＷｕｎｓｃｈ， Ｃ．
Ｄ．， （１９７０）， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ， ４８， ４４３−４５３）。ＤＮＡ配列比較について以下の設定を
持つＧＡＰ使用：５．０のＧＡＰ創製ペナルティおよび０．３のＧＡＰ延長ペナ
ルティ。
【００２８】 抗体配列は、例えば、５のギャップ創製ペナルティおよび０．３のギャップ幅
ペナルティの血管設定を用い、ＧＣＧプログラムパッケージの一部として利用で
きるＰｉｌｅｕｐアラインメトソフトウェアを用いて相互に整列させることがで
きる。
【００２９】 典型的には、また、核酸分子は、その範囲内に、本発明の第１または第２の具
体例に関して定義されたポリヌクレオチド配列のアナログを含み、ここに、該ア
ナログは低ストリンジェンシーの条件下でポリヌクレオチド配列にハイブリダイ
ズすることができる。より典型的には、低ストリンジェンシーハイブリダイザー
ション条件は６×ＳＳＣ中で５０℃で行われるハイブリダイゼーションに対応す
る。
【００３０】 所与の核酸分子が特定の核酸にハイブリダイズするか否かを決定するための適
当な実験条件は、調べるべき核酸の関連試料を含有するフィルターを５×ＳＳＣ
中に１０分間予備浸漬させること、および５×ＳＳＣ、５×デンハルトの溶液、
０．５％ＳＤＳおよび１００μｇ／ｍｌの変性音波処理サケ精子ＤＮＡの溶液中
に該フィルターを予備ハイブリダイゼーションさせること、続いて、Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋら、 （１９８９；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， 第２版， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａ
ｒｂｏｒ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）に記載されたハイブリダイゼーション方法に従
って、１０ｎｇ／ｍｌの32Ｐ−ｄＣＴＰ−標識プローブの濃度を含有する同一溶
液中でほぼ４５℃にて１２時間ハイブリダイゼーションすることを含むことがで
きる。
【００３１】 次いで、少なくとも５５℃にて（低ストリンジェンシー）、少なくとも６０℃
にて（中程度のストリンジェンシー）、ストリンジェンシー６５℃にて（中程度
／高ストリンジェンシー）、少なくとも７０℃にて（高ストリンジェンシー）、
または少なくとも７５℃にて（非常に高ストリンジェンシー）、２×ＳＳＣ、０
．５％ＳＤＳ中で、次いで、該フィルターを３０分間２回洗浄する。ハイブリダ
イゼーションはＸ−線フィルムへのフィルターの暴露によって検出することがで
きる。
【００３２】 さらに、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーを変更するのに使用す
ることができる当業者によく知られた多数の条件および因子がある。例えば、第
２の核酸分子にハイブリダイズすべき核酸の長さおよび性質（ＤＮＡ、ＲＮＡ、
塩基組成）；ホルムアミド、デキストラン硫酸、ポリエチレングリコール等の存
在または不存在のごとき塩および他の成分の濃度；およびハイブリダイゼーショ
ンの温度および／または洗浄工程の変更。
【００３３】 さらに、２つの所与の核酸配列がある特定の条件下でハイブリダイズするか否
かを理論的に予測することができる。従って、前記した経験的方法の代替法とし
て、本発明の第１または第２の具体例に従って核酸分子にアナログ核酸配列がハ
イブリダイズするか否かに関する決定は、塩濃度および温度のごとき特定の条件
下で公知の配列を持つ２つの異種核酸配列がハイブリダイズするＴｍ（融解温度
）の理論的計算に基づくことができる。
【００３４】 異種核酸配列についての融解温度（Ｔｍ（融解））を決定するにおいて、まず
、相同核酸配列についての融解温度（Ｔｍ（相同））を決定する必要がある。２
つの十分に相補的な核酸ストランド（ホモデュプレックス形成）の間の融解温度
（Ｔｍ（相同））は、以下のごとく、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉ
ｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ
Ｓｏｎｓ、 １９９５に概説された以下の式に従って決定することができる： Ｔｍ（相同）＝８１．５℃＋１６．６（ｌｏｇＭ）＋０．４１（％ＧＣ）−０
．６１（％形態）−５００／Ｌ Ｍ＝一価カチオンのモル濃度 ％ＧＣ＝配列中の塩基の合計数の％グアニン（Ｇ）およびシトシン（Ｃ） ％形態＝ハイブリダイザーション緩衝液中の％ホルムアミド Ｌ＝核酸配列の長さ
【００３５】 前記式によって決定されたＴｍは、２つの十分に相補的な核酸配列の間のホモ
デュプレックス形成のＴｍである（Ｔｍ（相同））。Ｔｍ値を２つの異種核酸配
列のそれに適合させるためには、２つの異種配列の間のヌクレオチド配列におけ
る１％差異がＴｍにおける１℃減少に等しいと仮定する。従って、ヘテロデュプ
レックス形成のためのＴｍ（異種）は、Ｔｍ（相同）から、問題の相同配列およ
び前記ヌクレオチドプローブの間の相同性％差異を差し引くことによって得られ
る。
【００３６】 典型的には、また、核酸分子は、その範囲内に、本発明の第１または第２の具
体例に従って定義されたポリヌクレオチド配列のアナログを含み、これは、遺伝
子暗号の縮重のため、本発明の第２の具体例に従って定義されたポリヌクレオチ
ド配列とはハイブリダイズしないが、脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはそ
の部分に対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）のポリペプチドをコ
ードする。
【００３７】 典型的には、本発明の第１また第２の具体例に従って定義された核酸分子は、
その範囲内に、本発明の第１または第２の具体例に従って定義されたポリヌクレ
オチド配列のオリゴヌクレオチド断片である核酸分子を含む。
【００３８】 典型的には、オリゴヌクレオチド断片は長さが約１０および約１００の間のヌ
クレオチドである。より典型的には、オリゴヌクレオチド断片は長さが約１０お
よび約７５の間のヌクレオチドである。なおより典型的には、オリゴヌクレオチ
ド断片は長さが約１５および約５０の間のヌクレオチドである。さらになおより
典型的には、オリゴヌクレオチド断片は長さが約１５および約３０の間のヌクレ
オチドである。なおさらに典型的には、オリゴヌクレオチド断片は長さが約５お
よび約２５の間のヌクレオチドである。
【００３９】 ２．ｐ５３に対する抗体またはその断片のポリペプチドおよび／またはｐ５３に
対する抗体またはその断片 本発明の第３の具体例により、脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはその断
片に対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）のポリペプチドが提供さ
れ、ここに、該ポリペプチドは天然に生じる病気に対する免疫応答を発現する脊
椎動物宿主から得られる。
【００４０】 典型的には、免疫応答は少なくとも１つのｐ５３抗体の発現によって特徴付け
られる。
【００４１】 本発明の第４の具体例により、ポリペプチドが提供され、ここに、該ポリペプ
チドは本発明の第１または第２の具体例に従って定義された核酸分子によってコ
ードされる。
【００４２】 本発明の第５の具体例により、配列番号３１ないし６０よりなる群から選択さ
れるアミノ酸配列を含むポリペプチドが提供される。
【００４３】 以下の特徴は本発明の第３、第４および第５の具体例に関する。
【００４４】 典型的には、該ポリペプチドは機能的抗原−結合ドメイン、すなわち、重鎖お
よび軽鎖可変ドメインを含む。なおより典型的には、抗体（またはその断片）の
ポリペプチドはＦv、Ｆab、Ｆ（ａｂ）2、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）、ｄＡｂ（単
一ドメイン抗体）、二特異的抗体、ジアボディおよびトリアボディよりなる群か
ら選択される形態で存在することができる。
【００４５】 典型的には、ポリペプチドはｐ５３蛋白質またはその部分に対する結合特性を
有する。より典型的には、抗体はｐ５３蛋白質のＮ−末端、Ｃ−末端または中央
ドメインあるいはその部分のうちの１以上の残基に対する結合親和性を有する。
なおより典型的には、抗体はｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基に対
する結合親和性を有する。さらにより典型的には、抗体は残基約１０ないし約５
５に対する結合親和性を有する。さらになお典型的には、抗体は、ｐ５３のＮ−
末端またはその部分の残基約１０ないし約２５、または約４０ないし約５０、ま
たは約２７ないし約４４、またはｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の約４
０ないし約４４に対する結合親和性を有する。なおさらに典型的には、抗体はｐ
５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基約２７ないし約４４に対する結合親
和性を有する。なおより典型的には、抗体はｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその
部分の残基約４０ないし約４４に対する結合親和性を有する。
【００４６】 なおより典型的には、抗体はｐ５３蛋白質の中央ドメインまたはその一部の残
基に対する結合親和性を有する。
【００４７】 典型的には、ポリペプチドは免疫グロブリンの軽鎖可変領域または重鎖可変領
域ポリペプチドに対応する。
【００４８】 より典型的には、ポリペプチドは免疫グロブリン軽鎖ポリペプチドに対応する
第１のポリペプチド、および免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチドに対応す
る第２のポリペプチドを含む。
【００４９】 典型的には、免疫グロブリン軽鎖可変領域ポリペプチドは免疫グロブリン軽鎖
可変（Ｖ領域）および結合（Ｊ領域）セグメントを含む。
【００５０】 典型的には、免疫グロブリン重鎖可変領域ポリペプチドは免疫グロブリン重鎖
可変（Ｖ領域）、多様性（Ｄ領域）および結合（Ｊ領域）セグメントを含む。
【００５１】 より典型的には、また、ポリペプチドは免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領
域に作動可能に結合した免疫グロブリン定常領域に対応するポリペプチドを含む
。なおより典型的には、定常領域の少なくとも１つは、それから可変領域が由来
する源とは異なる源に由来することができる。さらになお典型的には、それから
定常領域が由来する源はヒトである。
【００５２】 典型的には、ポリペプチドは、その範囲内に、第３、第４または第５の具体例
のポリペプチドのペプチド断片を含み、ここに、該ペプチド断片はｐ５３蛋白質
またはその部分に対する結合親和性を有する。
【００５３】 典型的には、ポリペプチドのペプチド断片は約５ないし約５０の間の隣接アミ
ノ酸である。より典型的には、約５ないし約３５の間の隣接アミノ酸である。な
おより典型的には、約５ないし約３０の間の隣接アミノ酸である。さらにより典
型的には、約５ないし約２５の間の隣接アミノ酸である。さらになお典型的には
、約８ないし約２０の間の隣接アミノ酸である。
【００５４】 典型的には、また、ポリペプチドは、その範囲内に、本発明の第３、第４また
は第５に従って定義されたポリペプチドの相同ポリペプチドを含み、これは、か
く定義されたポリペプチド配列に対して少なくとも３５％相同性を有する。より
典型的には、ポリペプチド配列の相同体は少なくとも４５％相同性を有し、さら
により典型的には、相同体は少なくとも６５％の相同体を有し、なおより典型的
には、相同体は少なくとも７５％の相同体を有し、さらになお典型的には、相同
体は少なくとも８５％の相同体を有し、なおより典型的には、相同体は少なくと
も約９０％の相同体を有し、さらになおより典型的には、相同体は少なくとも９
５ないし９９％の相同体を有する。
【００５５】 ポリペプチドに適用されるごとく、最適に整列された場合の２つのポリペプチ
ド配列の間の相同性の程度は、欠陥ギャップ重率を用い、例えば：ＢＬＡＺＥ（
Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ）ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＡＬＩＧＮのごと
き当該分野で知られたコンピュータ整列プログラムの使用を介して決定すること
ができる。１つの具体的な例は、配列比較について以下の設定：５．０のＧＡＰ
創製ペナルティーおよび０．３ＧＮＰの延長ペナルティーを用い、ＧＣＧプログ
ラムパッケージで提供される（Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａｎｕａｌ Ｆｏｒ ｔｈｅ
Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ， Ｖｅｒｓｉｏｎ ８， Ａｕｇｕｓ
ｔ １９９６， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， ５７５
Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ， Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，
ＵＳＡ ５３７１１）（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ， Ｓ．Ｂ．ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ
， Ｃ．Ｄ．，（１９７０）， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ， ４８， ４４３−４５３）。
【００５６】 本発明の第６の具体例により、抗体（またはその断片）が提供され、ここに、
該抗体（またはその断片）は脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部分に対
する結合親和性を有し、ここに、該抗体は天然に生じる病気に対する免疫応答を
発現する脊椎動物宿主から得られる。
【００５７】 典型的には免疫応答は少なくとも１つのｐ５３の抗体の発現において特徴付け
られる。
【００５８】 典型的には、脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部分に対する結合親和
性を有する抗体（またはその断片）は、本発明の第１または第２の具体例に従っ
て定義された核酸分子によってコードされた抗体（またはその断片）に対応する
。
【００５９】 本発明の第７の具体例により、脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部分
に対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）が提供され、ここに、該抗
体（またはその断片）は、本発明の第３、第４または第５の具体例に従って定義
されたポリペプチドを含む。
【００６０】 典型的には、脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部分に対して結合親和
性を有する抗体（またはその断片）は、本発明の第３、第４または第５の具体例
に従って定義されたポリペプチドに対応する。
【００６１】 典型的には、明細書を通じて記載するごとく、抗体は、全抗体、または抗体断
片、または相補性決定領域のごとき他の免疫学的に活性なその断片であり得る。
より典型的には、抗体断片は機能的抗原−結合ドメイン、すなわち、重鎖および
軽鎖可変ドメインを有する。なおより典型的には、抗体断片はＦv、Ｆab、Ｆ（
ａｂ）2、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）、ｄＡｂ（単一ドメイン抗体）、二特異的抗
体、ジアボディーおよびトリアボディーよりなる群から選択される形態で存在す
ることができる。
【００６２】 以下の特徴は本発明の第６および第７の具体例に関する。
【００６３】 典型的には、抗体（またはその断片）はポリクローナルまたはモノクローナル
抗体である。より典型的には、抗体（またはその断片）はモノクローナル抗体で
ある。なおより典型的には、モノクローナル抗体は分子遺伝学、ハイブリドーマ
またはＥＢＶ（エプスタイン−バールウイルス）形質転換技術を用いて作成され
る。なおより典型的には、モノクローナル抗体は、コンビナトーリアル抗体ライ
ブラリーまたはファージ提示技術を介し、組換え抗体技術を用いて作成すること
ができる。
【００６４】 典型的には、抗体（またはその断片）はｐ５３蛋白質またはその部分に対する
結合親和性を有する。より典型的には、抗体（またはその断片）は、ｐ５３蛋白
質のＮ−末端、Ｃ−末端または中央ドメインあるいはその部分の内の１以上の残
基に対する結合親和性を有する。なおより典型的には、抗体（またはその断片）
は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基に対する結合親和性を有する
。さらにより典型的には、抗体（またはその断片）は、残基約１０ないし約５５
に対する結合親和性を有する。なおより典型的には、抗体（またはその断片）は
、ｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基約１０ないし約２５、または約
４０ないし約５０、または約２７ないし約４４、あるいはｐ５３蛋白質のＮ−末
端またはその部分の約４０ないし約４４に対する結合親和性を有する。なおより
典型的には、抗体（またはその断片）は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部
分の残基約２７ないし約４４に対する結合親和性を有する。さらにより典型的に
は、抗体（またはその断片）は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基
約４０ないし約４４に対する結合親和性を有する。
【００６５】 なおより典型的には、抗体はｐ５３蛋白質の中央ドメインまたはその部分の残
基に対する結合親和性を有する。
【００６６】 以下の特徴は本発明の第１ないし第７の具体例に関する。
【００６７】 典型的には、該病気は癌、慢性関節リウマチおよび冠心臓病よりなる群から選
択される。より典型的には、該病気は癌である。典型的には、癌は発癌性腫瘍；
結腸−直腸癌、乳癌、肺癌、頭部および頸部腫瘍、肝癌、膵臓癌、卵巣癌、胃癌
、脳癌、膀胱癌、前立腺癌および尿管／生殖管癌、食道癌のごとき上皮起源の腫
瘍；肉腫のごとき間葉腫瘍；およびＢ細胞リンパ腫のごとき造血腫瘍よりなる群
から選択される。
【００６８】 本発明の第８の具体例により、本発明の第１または第２の具体例に従って定義
された核酸分子を含むベクターが提供される。
【００６９】 典型的には、該ベクターはシャトルまたは発現ベクターである。より典型的に
は、ベクターはウイルス、プラスミド、バクテリオファージ、ファゲニド、コス
ミド、細菌人工染色体および酵母人工染色体よりなる群から選択される。
【００７０】 典型的には、ベクターはプラスミドであって、ｐＢＲ３２２、Ｍ１３ｍｐ１８
、ｐＵＣ１８およびｐＵＣ１９よりなる群から選択することができる。
【００７１】 典型的には、ベクターはバクテリオファージであって、λｇｔ１０およびλｇ
ｔ１１またはファージ提示ベクター類から選択することができる。より典型的に
は、ファージ提示ベクターはｐＣＯＭＢベクター類に由来するベクター類から選
択される。なおより典型的には、ファージ提示ベクターはＭＣＯ群のものであり
、これは、例えば、ＭＣＯ１、ＭＣＯ３およびＭＣＯ６ベクターを含むことがで
きる。なおより典型的には、ベクターはＭＣＯ３である。
【００７２】 典型的には、ベクターはｐＧ１Ｄ１０２−ＭＣＯまたはｐＫＮ１００−ＭＣＯ
のごとき哺乳動物発現ベクターである。
【００７３】 典型的には、ベクターは複製起点、プロモーター、エンハンサーのごとき発現
制御配列、およびリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化
部位および翻訳ターミネーター配列のごとき必要なプロセッシング情報部位を含
む。
【００７４】 より典型的には、ＭＣＯベクターは、とりわけ、ポリペプチドタグ、アンバー
コドン、遺伝子ＩＩＩ、重鎖および軽鎖特異的マルチクローニング部位、ｏｍｐ
Ａおよび／またはｐｅｌＢリーダー配列、スブチリシン切断部位および／または
６ヒスチジンタグを含有する。
【００７５】 なおより典型的には、ベクターは所望のポリヌクレオチド配列で形質転換され
た細胞の検出を可能とする選択マーカーを含むことができる。
【００７６】 典型的には、ベクターは異種コーディング配列または第３、第４または第５の
具体例のポリペプチドを含む融合蛋白質の発現を可能とする配列を含むことがで
きる。
【００７７】 本発明の第９の具体例により、本発明の第８の具体例に従って定義されたベク
ターで形質転換された宿主細胞が提供される。
【００７８】 典型的には、宿主細胞は天然における原核生物または真核生物である。
【００７９】 より典型的には、原核生物宿主細胞は細菌を含み、そのような細菌の例はＥ．
ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、およびＳｅｒｒａｔｉａを含む。
【００８０】 より典型的には、真核生物宿主細胞は酵母、ポリープ、植物、昆虫細胞および
哺乳動物細胞（イン・ビボまたは組織培養いずれかにおけるもの）よりなる群か
ら選択することができる。哺乳動物細胞の例はＣＨＯ細胞系、ＣＯＳ細胞系、Ｈ
ｅＬａ細胞、Ｌ細胞、ネズミ３Ｔ３細胞、ｃ６神経膠細胞および骨髄腫細胞系を
含む。
【００８１】 さらにより典型的には、真核生物宿主細胞はＣＨＯ ＤＧ４４細胞である。
【００８２】 本発明の第１０の具体例により、本発明の第９の具体例に従って定義された宿
主細胞を含む脊椎動物が提供され、ここに、該脊椎動物はヒトを含まない。
【００８３】 ３．医薬／治療および診断組成物 本発明の第１１の具体例により、医薬上許容される担体、アジュバントおよび
／または希釈剤と共に、本発明の第３、第４または第５の具体例に従って定義さ
れたポリペプチド、またはペプチド断片、あるいは本発明の第６または第７の具
体例に従って定義された抗体（またはその断片）を含む医薬組成物が提供される
。
【００８４】 典型的には、医薬組成物に存在する抗体は全抗体として存在することができる
か、あるいは抗体断片または相補性決定領域のごとき他の免疫学的に活性な断片
として存在することができる。より典型的には、抗体断片は機能的抗原−結合ド
メイン、すなわち、重鎖および軽鎖可変ドメインを有する。なおより典型的には
、抗体断片はＦｖ、Ｆab、Ｆ（ａｂ）2、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）、ｄＡｂ（単
一ドメイン抗体）、二特異的抗体、ジアボディおよびトリアボディよりなる群か
ら選択される。
【００８５】 典型的には、医薬組成物に存在するポリペプチド、ペプチド断片または抗体ま
たはその断片ポリペプチド／キレート、ポリペプチド／薬物、ポリペプチド／プ
ロドラッグ、ポリペプチド／トキシン、ポリペプチド／イメージングマーカー、
抗体／キレート、抗体／薬物、抗体／プロドラッグ、抗体／トキシンおよび抗体
／イメージングマーカーよりなる群から選択される形態で存在することもできる
。
【００８６】 より典型的には、キレートは90Ｙ、131Ｉおよび188Ｒｅよりなる群から選択さ
れる。
【００８７】 より典型的には、薬物は細胞毒性薬物であり得る。なおより典型的には、細胞
毒性薬物はアドリアマイシン、メルファラン、シスプラチン、タキソール、フル
オロウラシル、シクロホスファミド、および、ここに引用してその全内容を一体
化させる（「Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｓｏｕｒｃｅ Ｂｏｏｋ」，
Ｍ．Ｃ．Ｐｅｒｒｙ ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ， 第２版，１
９９６）に含まれるもののごとき当業者に知られた他のものよりなる群から選択
することができる。
【００８８】 より典型的には、該プロドラッグは抗体指向性プロドラッグ療法またはＡＤＥ
ＰＴである。
【００８９】 より典型的には、該トキシンはリシン、アブリン、ジフテリアトキシンおよび
シュードモナスエンドトキシン（ＰＥ４０）よりなる群から選択することができ
る。
【００９０】 典型的には、該イメージングマーカーは、ガンマカウンターまたは手で保持さ
れたガンマプローブによって検出することができる物質、および核磁気共鳴スペ
クトロメーターを用いて核磁気共鳴イメージングによって検出することができる
物質を含む。
【００９１】 より典型的には、ガンマスキャナーを用いて検出することができるイメージン
グマーカーは125Ｉ、131Ｉ、123Ｉ、111Ｉｎ、105Ｒｈ、153Ｓｍ、67Ｃｕ、67Ｇ
ａ、166Ｈｏ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、189Ｒｅおよび99mＴｃよりなる群から選択さ
れるイメージングマーカーを含む。
【００９２】 典型的には、核磁気共鳴スペクトロメーターを用いて検出することができるイ
メージングマーカーはガドリニウムである。
【００９３】 典型的には、本発明の第１１の具体例に従う医薬組成物はＧ−ＣＳＦ、ＧＭ−
ＣＳＦ、インターロイキンのごときサイトカインを含むことができる。
【００９４】 典型的には、本発明の第１１の具体例に従う医薬組成物はマンナンのごときア
ジュバンドを含むことができる。
【００９５】 本発明の第１２の具体例により、ワクチンが提供され、該ワクチンは、医薬上
許容される担体、アジュバントおよび／または希釈剤と共に、本発明の第１また
は第２の具体例に従って定義された核酸分子またはその断片、または本発明の第
３、第４または第５の具体例に従って定義されたポリペプチドまたはペプチド断
片、または本発明の第６または第７の具体例に従って定義された抗体またはその
断片を含む。
【００９６】 典型的には、該ワクチンはイディオタイプワクチンである。
【００９７】 典型的には、本発明の抗体（またはその断片）はイディオタイプ免疫原として
用いることができる。このようにして用いる場合、本発明の抗体（またはその断
片）は免疫原として機能することができ、元の抗体（Ａｂ１）のイディオタイプ
に対する第２の抗体（Ａｂ２）およびＴ細胞（Ｔ2）応答を誘導する。Ａｂ２抗
体は抗原結合部位（イディオタイプ）を含めた元の抗体上のエピトープに結合す
ることができる。抗−イディオタイプ抗体、Ａｂ２は、Ａｂ１と同一のエピトー
プを認識することができる抗−抗−イディオタイプ抗体（Ａｂ３）ならびにＴ細
胞（Ｔ3）を自然に誘導することができる。第１の抗体はｐ５３エピトープおよ
びＡｂ２双方に結合することができるので、Ａｂ２は（ｐ５３上の）抗原エピト
ープの構造を模倣する。Ａｂ３抗体のある割合は元の抗体と同一のエピトープに
結合し、元の抗体の効率を増加させ遅延させることができる。この抗−イディオ
タイプネットワークの誘導の結果、部分的には、ｐ５３−特異的ＣＴＬの誘導を
介して転移から保護される。
【００９８】 あるいは、本発明のポリペプチドのペプチド断片を含むワクテン組成物はペプ
チドの合成によって調整されうる、たとえば該ペプチドは本発明のポリペプチド
のＣＤＲおよび／またはＦＲの選択アミノ酸領域を構成することができる典型的
に本発明のポリペプチドのペプチド断片は脊椎動物において蛋白質またはｐ５３
その部分の結合親和性をもつこともできるしもたないこともできる。
【００９９】 別法として、該ワクチンは経口、吸入、局所または非経口経路を介する投与用
に処方される。より典型的には、投与の経路は非経口である。
【０１００】 本発明の第１３の具体例により、免疫学的に有効量の本発明の第３、第４また
は第５の具体例に従って定義されたポリペプチド（またはそのペプチド断片）、
または本発明の第６または第７の具体例に従って定義された抗体（またはその断
片）、または本発明の第１１の具体例に従って定義された医薬組成物、または本
発明の第１２の具体例に従って定義されたワクチンを脊椎動物に投与することを
含む、脊椎動物において病気に対する免疫応答を誘導する方法が提供される。
【０１０１】 典型的には、本発明の第１３の具体例に従って投与されるポリペプチド、また
はペプチド断片、または抗体（またはその断片）は医薬上許容される担体、アジ
ュバントおよび／または希釈剤と共に投与される。
【０１０２】 典型的には、本発明の第１３の具体例に従って投与されるポリペプチド、また
はペプチド断片、または抗体（またはその断片）は、Ｇ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ
、インターロイキンのごときサイトカインと同時にまたは順次に投与することも
できる。
【０１０３】 典型的には、本発明の第１３の具体例による医薬組成物はマンナンのごときア
ジュバントを含むこともできる。
【０１０４】 本発明の第１４の具体例により、脊椎動物において病気に対する免疫応答を誘
導するにおいて使用される場合の、本発明の第３、第４または第５の具体例に従
って定義されたポリペプチド（またはそのペプチド断片）、または本発明の第６
または第７の具体例に従って定義された抗体（またはその断片）、または本発明
の第１１の具体例に従って定義された医薬組成物、または本発明の第１２の具体
例に従って定義されたワクチンが提供される。
【０１０５】 本発明の第１５の具体例により、本発明の第３、第４または第５の具体例に従
って定義されたポリペプチド（またはそのペプチド断片）、または本発明の第６
または第７の具体例に従って定義された抗体（またはその断片）の、脊椎動物に
おける病気に対する免疫応答を誘導するためのワクチンの調製における使用が提
供される。
【０１０６】 本発明の第１６の具体例により、免疫学的に有効な量の本発明の第１２の具体
例に従って定義されたワクチンを脊椎動物に投与することを含む、脊椎動物にお
いて病気に対する免疫応答を誘導する方法が提供される。
【０１０７】 本発明の第１７の具体例により、脊椎動物において病気に対する免疫応答を誘
導するのに使用する場合の、本発明の第１２の具体例に従って定義されたワクチ
ンが提供される。
【０１０８】 本発明の第１８の具体例により、治療および／または予防を必要とする脊椎動
物において病気を治療および／または予防する方法が提供され、該方法は、治療
上有効量の、 本発明の第３、第４または第５の具体例によるポリペプチド（ま
たはそのペプチド断片）、本発明の第６または第７の具体例による抗体（または
その断片）、本発明の第１１の具体例によって定義された医薬組成物、または本
発明の第１２の具体例によって定義されたワクチンを投与することを含む。
【０１０９】 本発明の第１９の具体例により、治療および／または予防を必要とする脊椎動
物において病気の治療／または予防で用いる場合の、本発明の第３、第４または
第５の具体例によるポリペプチド（またはそのペプチド断片）、または本発明の
第６または第７の具体例による抗体（またはその断片）、または本発明の第１１
の具体例により定義された医薬組成物、または本発明の第１２の具体例により定
義されたワクチンが提供される。
【０１１０】 本発明の第２０の具体例により、治療および／または予防を必要とする脊椎動
物において病気の治療および／または予防を行うための医薬の調製における、本
発明の第３、第４または第５の具体例によるポリペプチド（またはそのペプチド
断片）、または本発明の第６または第７の具体例による抗体（またはその断片）
、または本発明の第１１の具体例により定義された医薬組成物、または本発明の
第１２の具体例により定義されたワクチンの使用が提供される。
【０１１１】 典型的には、該病気は癌、慢性関節リウマチおよび冠心臓病よりなる群から選
択される。より典型的には、該病気は癌である。
【０１１２】 該癌が発癌性腫瘍；結腸−直腸癌、乳癌、肺癌、頭部および頸部腫瘍、肝癌、
膵臓癌、卵巣癌、胃癌、脳癌、膀胱癌、前立腺癌および尿管／生殖管癌、食道癌
のごとき上皮起源の腫瘍；肉腫のごとき間葉腫瘍；およびＢ細胞リンパ腫のごと
き造血腫瘍よりなる群から選択される。
【０１１３】 ４．抗体／核酸ベースの方法およびｐ５３を検出するためのキット 本発明の第２１の具体例により、診断上許容される担体および／または希釈剤
とともに、本発明の第６または第７の具体例に従って定義された抗体（またはそ
の断片）を含む、脊椎動物においてｐ５３遺伝子によってコードされたポリペプ
チドの検出のための診断キットが提供される。
【０１１４】 典型的には、該キットは以下の容器： （ａ）本発明の第６または第７の具体例に従って定義された抗体（またはその
断片）を含有する第１の容器、および （ｂ）検出可能な標識と共に、抗体（またはその断片）の結合パートナーを含
むコンジュゲートを含有する第２の容器； を含むことができる。
【０１１５】 より典型的には、該キットは、さらに、洗浄試薬、および結合した抗体の存在
を検出することができる他の試薬のような他の成分を含有する１以上の他の容器
を含むことができる。なおより典型的には、該検出試薬は標識された（２次）抗
体を含むことができ、または、ここに、本発明の抗体（またはその断片）はそれ
自体標識され、当該区画は本発明の標識された抗体（またはその断片）と反応す
ることができる抗体結合試薬を含むことができる。
【０１１６】 本発明の第２２の具体例により、 （ａ）脊椎動物からの試料を核酸プローブと接触させ、次いで、 （ｂ）該核酸試料およびポリヌクレオチド配列の間のハイブリダイゼーション
を検出する； ことを特徴とする脊椎動物において病気につきスクリーニングする方法が提供さ
れる。
【０１１７】 典型的には、非−ハイブリダイゼーションと比較したハイブリダイゼーション
は病気を示す。典型的には、該病気は癌である。
【０１１８】 典型的には、該核酸プローブは、試料からの核酸に選択的にハイブリダイズす
ることができる本発明の第１または第２の具体例に従って定義されたポリヌクレ
オチド配列の部分に対応する。
【０１１９】 典型的には、ハイブリダイゼーションは当業者にとってルーチン的かつ標準的
である技術を介して起こし、検出することができ、該技術はサザーンおよびノー
ザンハイブリダイゼーション、ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）およびリガーゼ鎖
反応（ＬＣＲ）増幅を含む。
【０１２０】 所望の特異性および選択性に応じて、種々の低い、中程度または高いストリン
ジェンシーのハイブリダイゼーションレベルを用いることができる。
【０１２１】 本発明の第２３の具体例により、 （ａ）脊椎動物からの試料を、本発明の第６または第７の具体例に従って定義
された抗体（またはその断片）と接触させ、次いで、 （ｂ）ｐ５３ポリペプチドに結合した抗体（またはその断片）の存在を検出す
る； ことを含む脊椎動物において病気につきスクリーニングする方法が提供される。
【０１２２】 典型的には、正常レベルを比較した試料中のｐ５３ポリペプチドの変化したレ
ベルは病気を示す。 典型的には、該病気は癌である。
【０１２３】 ５．遺伝子治療 本発明の第２４の具体例により、遺伝子治療の方法が提供され、該方法は： （ａ）本発明の第１または第２の具体例に従って定義された核酸分子、または
本発明の第８の具体例に従って定義されたベクターを宿主細胞に挿入し、 （ｂ）形質転換された細胞において核酸分子を発現させる； ことを含む。
【０１２４】 典型的には、核酸分子またはベクターは、マイクロインジェクション、ＣａＰ
Ｏ4沈殿、エレクトロポレーション、リポフェクション／リポソーム融合、粒子
衝撃および核酸の化学的に修飾された蛋白質へのカップリングより成る群から選
択される方法を用いて挿入される。
【０１２５】 典型的には、核酸分子またはベクターは宿主細胞の核に挿入される。
【０１２６】 典型的には、核酸分子を含有する発現ベクターは細胞に挿入され、該細胞はイ
ン・ビトロで増殖され、次いで、多数患者に注入される。より典型的には、ベト
ロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、アデノ−関連ウイルス、ヘ
ルペスウイルス、いくつかのＲＮＡウイルスまたはウシパピローマウイルスのよ
うなウイルスに由来する発現ベクターを、標的化細胞集団への核酸の送達で用い
ることができる。より典型的には、標的化細胞集団は腫瘍細胞を含む。
【０１２７】 ６．脊椎動物におけるｐ５３蛋白質またはその部分に対する結合親和性を有する
抗体（またはその断片）の調製 本発明の第２５の具体例により、脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部
分に対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）を製造する方法が提供さ
れ、該製法は： （ａ）脊椎動物から、本発明の第１または第２の具体例によって定義された核
酸分子を単離し、 （ｂ）該核酸分子をベクターにクローンし、 （ｃ）抗体断片ライブラリーを構築し、次いで、 （ｄ）注目する抗体を発現するクローンにつき該ライブラリーをスクリーニン
グする； ことを含む。
【０１２８】 典型的には、本発明の第２５の具体例に従って定義された該製法によって調製
された抗体（またはその断片）は、脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部
分に対する結合親和性を有する。
【０１２９】 典型的には、核酸試料は、ｐ５３と反応性の抗体を発現する、ｐ５３の発現に
関連した病気に罹った個体から得られる。より典型的には、該病気は癌、慢性関
節リウマチおよび冠心臓病よりなる群から選択される。なおより典型的には、該
病気は癌である。さらにより典型的には、該癌が発癌性腫瘍；結腸−直腸癌、乳
癌、肺癌、頭部および頸部腫瘍、肝癌、膵臓癌、卵巣癌、胃癌、脳癌、膀胱癌、
前立腺癌および尿管／生殖管癌、食道癌のごとき上皮起源の腫瘍；肉腫のごとき
間葉腫瘍；およびＢ細胞リンパ腫のごとき造血腫瘍よりなる群から選択される。
【０１３０】 典型的には、核酸試料は病気に罹った器官、または該病気の発現の収集点から
採取される。なおより典型的には、該器官はリンパ節である。
【０１３１】 典型的には、核酸試料は本発明の第１または第２の具体例によるポリヌクレオ
チド配列より成る。
【０１３２】 典型的には、核酸試料はｍＲＮＡである。より典型的には、クローンはＲＴ−
ＰＣＲ（逆転写構想−ＰＣＲ）を介して調製され、適当なベクターにクローンさ
れる。
【０１３３】 典型的には、ベクターはファージ提示ベクターである。より典型的には、ベク
ターはＭＣＯ１、ＭＣＯ３、およびＭＣＯ６より成る群から選択される。なおよ
り典型的には、ベクターはＭＣＯ１である。
【０１３４】 典型的には、核酸クローンはファージ提示ライブラリーにパッケージされて一
次抗体ライブラリーを得る。より典型的には、ファージ提示ライブラリーは、組
換えｐ５３に対してパンすることによって増幅し、得られた抗体を選択した。
【０１３５】 典型的には、抗体ライブラリーは抗体断片を発現するクローンを表し、ここに
、該抗体はｐ５３蛋白質またはその部分に対する結合親和性を有する。より典型
的には、抗体断片はＦab断片である。なおより典型的には、組換え抗体断片は精
製される。さらにより典型的には、抗体断片はｐ５３蛋白質またはその部分に対
する結合親和性を有する。
【０１３６】 典型的には、ｐ５３蛋白質またはその部分に対する結合親和性を有する抗体（
またはその断片）は本発明の第６または第７の具体例に従って定義される。
【０１３７】 本発明の第２６の具体例により、本発明の第１または第２の具体例の核酸分子
を用い、脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部分に対する結合親和性を有
する抗体（またはその断片）のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を突
き止める方法が提供される。
【０１３８】 典型的には、該方法は： （ａ）生物学的試料と、本発明の第１または第２の具体例の核酸分子とを接触
させ、次いで、 （ｂ）該核酸分子にハイブリダイズする生物学的試料中のヌクレオチド配列を
同定する； ことを含む。
【０１３９】 典型的には、工程（ａ）は相同配列のハイブリダイゼーションを促進する条件
下で行われ、その条件は当業者によく知られている。
【０１４０】 本発明のこの具体例で特に考えられるのは、抗体（またはその断片）のポリペ
プチドをコードするヌクレオチド配列をつきとめる方法であり、ここに、該抗体
は脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部分に対する結合親和性を有する。
【０１４１】 典型的には、該方法は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端、Ｃ−末端または中央ドメイ
ンあるいはその部分のうちの１以上の残基に対する結合親和性を有する抗体（ま
たはその断片）のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を突き止める方法
である。
【０１４２】 より典型的には、該方法は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基に
対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）のポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列を突き止める方法である。
【０１４３】 なおより典型的には、抗体（またはその断片）は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端ま
たはその部分の残基に対する結合親和性を有する。なおより典型的には、抗体（
またはその断片）は残基約１０ないし約５５に対する結合親和性を有する。さら
により典型的には、抗体（またはその断片）は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端または
その部分の残基約１０ないし約２５、または約４０ないし約５０、または約２７
ないし約４４、またはｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の約４０ないし約
４４に対する結合親和性を有する。なおより典型的には、抗体（またはその断片
）は、ｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基約２７ないし約４４に対す
る結合親和性を有する。さらにより典型的には、抗体（またはその断片）は、ｐ
５３蛋白質のＮ−末端またはその部分の残基約４０ないし約４４に対する結合親
和性を有する。
【０１４４】 なおより典型的には、該方法は、ｐ５３蛋白質の中央ドメインまたはその部分
の残基に対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）のポリペプチドをコ
ードするヌクレオチド配列を突き止める方法である。
【０１４５】 定義 用語「抗体」は、抗原上の特異的エピトープに結合することができる免疫グロ
ブリン分子を意味する。抗体はポリクローナル混合物よりなることができるか、
あるいは性質はモノクローナルであってよい。さらに、抗体は天然源から、また
は組換え源に由来する全免疫グロブリンであり得る。本発明の抗体は、例えば、
全抗体として、または抗体断片、あるいは相補性決定領域のごときその他の免疫
学的に活性な断片を含めた種々の形態で存在することができる。同様に、抗体は
機能的抗原−結合ドメインすなわち、重鎖および軽鎖可変ドメインを有する抗体
断片として存在することができる。また、抗体断片はＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ） 2 、ｓｖＦｖ（一本鎖Ｆｖ）、ｄＡｂ（単一ドメイン抗体）、二特異的抗体、ジ
アボディおよびトリアボディよりなる群から選択される形態で存在することがで
きる。
【０１４６】 「抗原−認識部分」は、抗体の標的抗原（またはエピトープまたはイディオタ
イプ）への結合および／またはその認識を担う抗体（またはその断片）の可変領
域の１以上の部分を意味する。例えば、それはＣＤＲ領域または全可変領域、あ
るいは抗体の結合特性を変化させることなく、当該領域に誘導することができる
コーディング領域中のいずれの変化も含めたこれらの２つの領域のいずれかの組
合せを含む。
【０１４７】 本発明の抗体（またはその断片）は、脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはそ
の部分に対する結合親和性を有する。好ましくは、本発明の抗体（またはその断
片）は約１０5Ｍ-1を超える、より好ましくは約１０6Ｍ-1を超える、なおより好
ましくは約１０7Ｍ-1を超える、最も好ましくは、１０8Ｍ-1を超える結合親和性
または親和力を有する。結合親和性を生じさせるおよびそれを総括する技術はＳ
ｃａｔｃｈａｒｄ（１９４９）， Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， ５１， ６６０−６７２お
よびＭｕｎｓｏｎ（１９８３）， Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ ９２， ５４３−５７７（ここに引用してその各々の内容を一体化させる）
にレビューされている。
【０１４８】 本明細書中で用いるごとく、「遺伝子導入」は、外来性核酸分子を細胞に導入
するプロセスを意味する。遺伝子導入は、当該遺伝子によってコードされる特定
の産物の発現を可能とするように通常は行われる。該産物は蛋白質、ポリペプチ
ド、アンチセンスＤＮＡ またはＲＮＡあるいは酵素的に活性なＲＮＡを含むこ
とができる。遺伝子導入は培養した細胞において、または動物への直接的投与に
よって行うことができる。一般に、遺伝子導入は、非特異的または受容体媒介相
互作用による標的細胞との核酸の接触、膜を通ってのまたはエンドサイトーシス
による核酸の細胞への摂取、および原形質膜またはエンドソームからの核酸の細
胞質への放出のプロセスを含む。発現は、加えて、細胞の核への核酸の移動、お
よび転写のための適切な核因子への結合を必要とするであろう。
【０１４９】 本明細書中で用いるごとく、「遺伝子治療」は遺伝子導入の形態であり、ここ
で用いられる遺伝子導入の定義内に含まれ、具体的には、イン・ビボまたはイン
・ビトロで細胞からの治療産物を発現させるための遺伝子導入をいう。遺伝子導
入は、エクス・ビボで細胞に対して行うことができ、次いで、該細胞は患者に移
植されるか、あるいは患者への核酸または核酸−蛋白質複合体の直接的投与によ
って行うことができるか、あるいは患者への修飾細胞の導入によって行うことが
できる。
【０１５０】 本明細書中で用いるごとく、用語「天然に生じる病気」とは、自然に起こった
が、遺伝子内には誘導されない病気をいう。
【０１５１】 遺伝子または遺伝子産物の点において、用語「野生型」とは、天然に生じる種
のメンバーのほとんどに特徴的であるその遺伝子または遺伝子産物をいい、かく
して、任意に、遺伝子または遺伝子産物の「正常」または「野生型」形態を命名
する。
【０１５２】 遺伝子または遺伝子産物の点において、用語「突然変異体」とは、野生型遺伝
子もしくは遺伝子産物と比較した場合の遺伝子または遺伝子産物の変化をいう。
【０１５３】 用語「単離され精製された」とは、問題の物質がその宿主から取り出され、伴
う不純物が減少されるかまたは排除されたことを意味する。本質的には、それは
、目的の種が存在する支配的な種であり（すなわち、モラーベースで、それが組
成物中でいずれかの他の個々の種よりも豊富であり）好ましくは、実質的に精製
された画分が、目的の種が存在する全てのマクロ分子種の（モラーベースで）少
なくとも約３０％を含む組成物であることを意味する。一般に、実質的に純粋な
組成物は、当該組成物に存在する全てのマクロ分子種の約８０ないし９０％を超
えて含む。最も好ましくは、目的の種は実質的に均一に精製され（汚染した種は
通常の検出方法によって組成物中に検出できない）、ここに、該組成物は実質的
に単一のマクロ分子種より成る。
【０１５４】 用語「作動可能に連結した」とは、例えば、核酸がもう１つの核酸配列と機能
的な関係におかれる場合にそれが「作動可能に連結された」状況をいう。例えば
、もしそれがコーディング配列の転写を行うならば、プロモーターまたはエンハ
ンサーはコーディング配列に作動可能に連結している。
【０１５５】 保存的アミノ酸置換とは、同様の側鎖を有する残基の相互交換性をいう。例え
ば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群はグリシン、アラニン、バリン、ロイシン
、およびイソロイシンであり；脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は
セリン、およびスレオニンであり；アミド−含有側鎖を有するアミノ酸の群はア
スパラギンおよびグルタミンであり；芳香族側鎖を有するアミノ酸の群はフェニ
ルアラミン、チロシンおよびトリプトファンであり；塩基性側鎖を有するアミノ
酸の群はリシン、アルギニン、およびヒスチジンであり；硫黄−含有側鎖を有す
るアミノ酸の群はシステインおよびメチオニンである。典型的には、保存アミノ
酸置換基はバリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リ
シン−アルギニン、アラニン−バリンおよびアスパラギン−グルタミンである。
【０１５６】 本明細書中で用いるごとく、用語「ポリペプチド」とは、ペプチド結合によっ
て一緒に結合されたアミノ酸よりなるポリマーを意味する。
【０１５７】 アミノ酸配列を参照して本明細書中で用いる用語「アナログ」とは、本発明の
核酸配列の誘導体である配列を意味し、その誘導体は１以上の塩基の付加、欠失
、置換を含み、ここに、コードされたポリペプチドは配列番号１ないし３０の核
酸配列によってコードされるポリペプチドと実質的に同一の機能を保持する。
【０１５８】 本明細書の文脈では用語「を含む」は「原理的には含むが、必ずしもそれだけ
ではない」を意味する。さらに、「含む」のごとき語句「を含む」の変形はそれ
に対応して変化した意味を有する。
【０１５９】
【本発明の実施の態様】
１．ｐ５３に対する抗体またはその断片のポリペプチドをコードする核酸 ここに記載する単離された核酸分子の機能的同等体は本発明の範囲内に含まれ
る。遺伝暗号の縮重は、同一アミノ酸を特定する他のコドンによるあるコドンの
置換を可能とし、よって、同一の蛋白質を生起するであろう。核酸配列は実質適
に変化できる。というのはメチオニンおよびトリプトファンを例外として、公知
のアミノ酸は１を超えるコドンによってコードできるからである。かくして、本
発明のポリヌクレオチド配列の一部または全部は、ここに記載されたものとはか
なり異なる核酸配列を生じるように合成できるであろう（図４）。しかしながら
、そのコードされたアミノ酸配列は保存されるであろう。
【０１６０】 加えて、核酸配列は、図４に示された核酸またはその誘導体の５’−末端／ま
たは３’−末端への少なくとも１つのヌクレオチドの付加、欠失、または置換に
由来するヌクレオチド配列を含むことができる。例えば、本発明は、本発明の核
酸配列またはその誘導体の５’−末端における開始コドンとしてのＡＴＧの付加
から、または本発明のヌクレオチド配列またはその誘導体の３’−末端における
終止コドンとしてのＴＴＡ、ＴＡＧまたＴＧＡの付加から得られるいずれの核酸
配列も含めることも意図する。さらに、本発明の核酸分子は、必要であれば、そ
の５’−末端および／または３’−末端に付加された制限エンドヌクレアーゼ認
識部位を有することができる。
【０１６１】 与えられた核酸配列のそのような機能的改編は、それに融合した外来性核酸配
列によってコードされる異種蛋白質の分泌および／またはプロセッシングを促進
する機会を供する。遺伝子暗号によって許された本発明のヌクレオチド配列およ
びその断片の全ての変形は従って本発明に含まれる。
【０１６２】 さらに、コドンを欠失させ、または縮重コドン以外のコドンによって１以上の
コドンを置き換えて構造的に修飾されたポリペプチド（未修飾核酸分子によって
生じたポリペプチドの実質的に同一の利用性または活性を有するもの）を得るこ
とができる。当該分野で認識されているごとく、２つのポリペプチドは、核酸分
子の間の差異が遺伝暗号の縮重に関連しないが、その生成を引き起こす２つの核
酸分子がそうであるように機能的に同等である。
【０１６３】 本発明の第１または第２の具体例による核酸分子は、天然に結合したまたは異
種のプロモーター領域を含めた、コーディング配列に作動可能に連結した発現制
御配列を含むことができる。好ましくは、発現制御配列は、原核生物宿主細胞を
形質転換またはトランスフェクトできるベクター中の天然の厳格生物であろう。
なおより好ましくは、本発明の抗体をコードするポリヌクレオチドはファージ提
示ベクターにクローンされる。
【０１６４】 しかしながら、本発明の第１または第２の具体例による核酸分子は真核生物発
現系にクローンすることもでき、また、天然に会合したまたは異種プロモーター
領域を含めた、コーディング配列に作動可能に連結した発現制御配列を含むこと
もできる。好ましくは、発現制御配列は、真核生物宿主細胞を形質転換またはト
ランスフェクトできるベクター中の真核生物プロモーター系であろう。
【０１６５】 一旦ベクターが適当な宿主に取り込まれたならば、宿主はヌクレオチド配列の
高レベル発現、発現された免疫グロブリンの収集および精製に適した条件下に維
持される。
【０１６６】 さらに、宿主細胞は、ベクターの宿主への挿入に際して、ベクターの選択され
た特徴が、関連する発現されたポリペプチドが宿主細胞の表面で提示され、また
は培養基に分泌／発現されるのを可能とするように選択される。そのような細胞
の例は、各々、ＸＬ１−ＢｌｕｅおよびＨＢ２１５１を含む。効果的には、いず
れかの非−サプレッサー株によるＦａｂの可溶性発現が考えられ、これらは、Ｅ
．ｃｏｌｉ ＨＢ２１５１またはＭＣ１０６１を含む。あるいは、Ｅ．ｃｏｌｉ
ＸＬ １−ｂｌｕｅまたはＴＧ−１αのごとき、ファージの表面に融合したＦ
ａｂの発現のためのサプレッサー株。
【０１６７】 これらの発現ベクターは、典型的には、エピソームとして、または宿主染色体
ＤＮＡの一体的一部として宿主生物で複製することができる。例えば、典型的な
選択マーカーはアンピシリン−抵抗性またはヒグロマイシン−抵抗性を含み、そ
れにより、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能とする。
【０１６８】 一般に、原核生物は本発明のＤＮＡ配列をコローニングするのに使用すること
ができる。Ｅ． ｃｏｌｉは、本発明のＤＮＡ配列をクローンするのに特に有用
な１つの原核生物宿主である。典型的には、Ｅ． ｃｏｌｉは、それ自体が細菌
中で生産されるファージによって、Ｆａｂのごとき抗体（またはその断片）を生
産する。具体的な例は、可溶性抗体（またはその断片）を発現するＨＢ２１５１
、および、細胞表面で、例えば、ファージ提示で抗体（またはその断片）を発現
するＸＬ１−Ｂｌｕｅを含む。
【０１６９】 また、酵母のごとき真核生物生物もまた発現で有用である。Ｓａｃｃｈａｒｏ
ｍｙｃｅｓ種は好ましい酵母宿主であり、適当なベクターは、所望の発現制御配
列、複製起点、終止配列等を有する。典型的な酵母プロモーターは、とりわけ、
アルコールデヒドロゲナーゼ２、イソチトクロームＣ、およびマルトースおよび
ガラクトシダーゼ資化を担う酵素からのプロモーターを含む。
【０１７０】 また、哺乳動物細胞は、免疫グロブリンまたはその断片をコードするヌクレオ
チドセグメントを発現させるための典型的な宿主である。無傷異種蛋白質を分泌
することができる多数の適当な宿主細胞が当該分野で開発されており、ＣＨＯ細
胞系、種々のＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、Ｌ細胞および骨髄腫細胞系を含む。
これらの細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサー
のごとき発現制御配列、およびリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポ
リアデニル化部位および転写ターミネーター配列のごとき必要なプロセッシング
情報部位を含むことができる。
【０１７１】 注目するＤＮＡセグメントを含有するベクターは、細胞宿主のタイプに応じて
、よく知られた方法によって宿主細胞に導入することができる。例えば、塩化カ
ルシウムトランスフェクションおよびエレクトロポレーションは原核生物細胞で
通常に利用され、他方、リン酸カルシウム処理、エレクトロポレーション、リポ
フェクション、バイオティックスまたはウイルス−ベースのトランスフェクショ
ンは他の細胞宿主で使用することができる。哺乳動物細胞を形質転換するのに使
用される他の方法はトランスフェクション、形質転換、コンジュゲーション、プ
ロトプラスト融合、ポリブレン、リポソーム、エレクトロポレーション、パーテ
ィンクルガン技術およびマイクロインジェクションの使用を含む（一般に、Ｓａ
ｍｂｏｏｋら， １９８９参照）。
【０１７２】 ベクターの導入の後、受容体宿主細胞は、一般に、導入されたベクターを含有
する細胞の増殖を固有に選択する選択培地で増殖させる。種々のインキュベーシ
ョン条件を用いて本発明のポリペプチドを形成することができるが、最も好まし
い条件は生理条件を模倣する条件である。
【０１７３】 別法として、本発明の核酸配列の修飾または不活化はよく知られたアンチセン
ス技術、すなわち、ポリペプチドをコードする配列と相補的にヌクレオチド配列
な関係する技術を用いて行うことができる。より具体例には、本発明の核酸によ
ってコードされるポリペプチドの生産は改変することができる、すなわち、細胞
中で転写することができ、細胞中で生産された結果としてのｍＲＮＡにハイブリ
ダイズすることができるポリペプチドをコードするこれらの核酸配列と相補的な
ポリヌクレオチド配列を導入することによって減少または排除することができる
。相補的アンチセンスヌクレオチド配列がポリヌクレオチドｍＲＮＡにハイブリ
ダイズするのを可能とする条件下で反応が起こることに基づき、かくして、翻訳
されたポリペプチドの量は改変される、すなわち、減少または排除される。
【０１７４】 ２．ｐ５３に対する抗体またはその断片のポリペプチドおよび／またはｐ５３に
対する抗体またはその断片 抗体または免疫グロブリンは、典型的には、４つの共有結合したペプチド鎖よ
りなる。例えば、ＩｇＧ抗体は２つの軽鎖および２つの重鎖を有する。各軽鎖は
重鎖に共有結合している。今度は、各重鎖は他のものに共有結合して、免疫グロ
ブリン立体配座としても知られている「Ｙ」立体配置を形成する。これらの分子
の断片、または各重鎖または軽鎖単独は抗原に結合することができる。
【０１７５】 正常な抗体重鎖および軽鎖はＮ−末端（ＮＨ2）可変（Ｖ）領域、およびＣ−
末端（ＣＯＯＨ）定常（Ｃ）領域を有する。重鎖可変領域はＶHといわれ（例え
ば、Ｖγ含む）、軽鎖可変領域はＶLといわれる（ＶκおよびＶλを含む）。可
変領域は抗体同族抗原に結合する分子の一部であり、他方、重鎖上のＦｃ領域（
Ｃ領域の第２および第３ドメイン）は抗体のエフェクター機能（例えば、相補的
固定、オプソニ化）を決定する。全長免疫グロブリンまたは抗体「軽鎖」は、Ｎ
−末端の可変領域遺伝子およびＣＯＯＨ−末端のκ（カッパ）またはλ（ラムダ
）定常領域は遺伝子によってコードされる。全長免疫グロブリンまたは抗体「重
鎖」は、同様に、可変領域遺伝子および定常領域遺伝子、例えば、ガンマのもの
によってコードされる。典型的には、「ＶL」はＶLおよびＪL（Ｊまたは結合領
域）遺伝子セグメントによってコードされる軽鎖の一部を含み、「ＶH」はＶHお
よびＤH（Ｄまたは多様性領域）およびＪH遺伝子セグメントによってコードされ
る重鎖の一部を含む。
【０１７６】 免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領域は、相補性決定領域またはＣＤＲとも
呼ばれる３つの超可変領域によって腸段される「フレームワーク」領域よりなる
。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は種内で比較的保存されて
いる。抗体のフレームワーク領域、すなわち、構成成分の軽鎖および重鎖の組み
合わされたフレームワーク領域は、三次元空間においてＣＤＲを位置させ整列さ
せるように働く。ＣＤＲは、主として、抗原のエピトームの結合を担う。ＣＤＲ
は、典型的には、Ｎ−末端から出発して順次番号が付けられ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ
２およびＣＤＲ３と言われる。
【０１７７】 軽鎖の２つのタイプ、κ（カッパ）およびλ（ラムダ）はイソタイプと言われ
る。イソタイプ決定基は、典型的には、一般にＣL、特にＣκまたはＣλとも言
われる、軽鎖の定常領域に存在する。同様に、ＣHとしても知られる重鎖分子の
定常領域は抗体のイソタイプを決定する。抗体は、重鎖のイソタイプに応じてＩ
ｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥと呼ばれる。イソタイプは、各々、
重鎖定常領域のμ（ミュー）、δ（デルタ）、γ（ガンマ）、α（アルファ）お
よびε（イプシロン）セグメントにコードされる。
【０１７８】 重鎖イソタイプは、オプソニ化または補体固定のごとき抗体の異なるエフェク
ター機能を決定する。加えて、重鎖イソタイプは抗体の分泌された形態を決定す
る。分泌されたＩｇＧ、ＩｇＤおよびＩｇＥイソタイプは、典型的には、単一の
単位またはモノマー形態で見い出される。分泌されたＩｇＭイソタイプはペンタ
マー形態で見い出され；分泌されたＩｇＡはモノマーおよびダイマー双方の形態
で見いだすことができる。
【０１７９】 関連する態様において、本発明はモノクローナル抗体，またはＦａｂ（Ｆａｂ
）2、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆｖ）ｄＡｂ（単一ドメイン抗体）、二特異的抗体、ジ
アボディーおよびトリアボディー、または他の免疫学的に活性なその断片（例え
ば、ＣＤＲ領域）をその要旨とする。そのような断片は免疫抑制剤として有用で
ある。別法として、本発明の抗体はエフェクターまたはレポーター分子をそれに
付着させることができる。例えば、本発明の抗体またはその断片は、共有架橋構
造によってそれに付着した重金属原子、またはリシンのごときトキシンをキレー
ト化するためにマクロ環を有することができる。加えて、完全な抗体分子のＦｃ
の断片ＣＨ3ドメインは、キレート、トキシン、薬物またはプロドラッグのごと
き酵素またはトキシン分子によって置き換え、またはコンジュゲートすることが
でき、免疫グロブミン鎖の一部はビオチン、フルオロプローン、ホスフォターゼ
およびペルオキシダーゼのごときポリペプチドエフェクターまたはレポーター分
子と結合させることができる。また、当業者によく知られた標準的な手法に従っ
て二特異的抗体を生産することもできる。
【０１８０】 本発明では、さらに、抗体の可変および／または定常領域を遺伝的に修飾して
、相同な可変および定常領域アミノ酸配列を効果的に含ませることが考えられる
。一般的に可変領域の変化は、抗体またはその断片の抗原結合特性を改良または
修飾するようになすことができるであろう。定常領域の変化は、一般に、補体固
定化、膜との相互作用、他のエフェクター機能のごとき生物学的特性を改良また
は修飾するようになされるであろう。
【０１８１】 この文脈においては、効果的に相同性とは、抗体（またはその断片）の可変領
域の一次構造における差異は抗体またはその断片の結合特徴を変化させることが
できないという概念を言う。得られた抗体またはその断片がその所望の特性を保
有する限り、アミノ酸の変化は効果的に相同性の配列において許容される。
【０１８２】 ポリペプチドまたは抗体もしくはその断片に置けるアミノ酸の変化は関連分野
の当業者によく知られた技術によって行うことができる。例えば、アミノ酸の変
化は、適切なリーディングフレームが維持されるという制限下で、ヌクレオチド
付加、欠失、または置換を含むヌクレオチド置き換え技術に行うことができる。
例示的な技術はランダム突然変異誘発、部位特異的突然変異誘発、オリゴヌクレ
オリド−媒介またはポリヌクレオチド−媒介突然変異誘発、存在するまたは作成
された制限酵素部位の使用を介する選択された領域の欠失、ポリメラーゼ鎖反応
を含む。
【０１８３】 関連する態様において、本発明では、さらに、配列番号３１ないし６０のポリ
ペプチドのペプチド断片が考えられる。例えば、約５および約５０の間の隣接ア
ミノ酸、好ましくは約５および約３５の間のアミノ酸、なおより好ましくは約５
および約３０の間のアミノ酸、さらにより好ましくは約５および約２５の間のア
ミノ酸、なおさらに好ましくは約８および約２０の間のアミノ酸を含むペプチド
断片が本発明のこの態様で考えられる。そのようなペプチド断片はｐ５３蛋白質
またはその部分に対する親和性を有していても有していなくてもよいことが当業
者に認識されるであろう。
【０１８４】 例えば、ペプチド断片は、本発明のポリペプチドのＶＬ鎖および／またはＶＡ
鎖から選択することができる。好ましくは、ペプチド断片は相補性決定領域（Ｃ
ＤＲ）および／またはＶＨおよび／またはＶＬ鎖フレームワーク領域（ＦＲ）か
ら選択することができる。なおより好ましくペプチド断片はＣＤＲのＶＨおよび
／またはＶＬ領域より選択される。
【０１８５】 本発明のペプチド断片は、例えば、イディオタイプ応答を生じさせるために免
疫化プロトコルにおいて産業的用途を見い出す。当業者によって認識されるであ
ろごとく、本発明のペプチド断片を用いて、ｐ５３（野生型または突然変異体）
に対する免疫性を誘導するのに効果的な量の投与によってそのような免疫化を必
要とする患者を免疫化することができる。当該分野における１つの技術は、ルー
チ的実験によって、ペプチド断片のどのような効果的な非毒性量がこの目的用で
あるかを決定することができるであろう。一般に、しかしながら、効果的な投与
量は、用量当たり約５ミリグラムないし１００ミリグラム、好ましくは用量当た
り約５ミリグラムないし約７５ミリグラム、より好ましくは用量当たり約１０ミ
リグラムないし約５０ミリグラムなおより好ましくは用量当たり約２０ミリグラ
ムないし約４０ミリグラムの範囲にあると予測される。
【０１８６】 また、本発明の第３、第４および第５の具体例のポリペプチドもおよび／また
は第６および第７の具体例の抗体は、脊椎動物においてｐ５３蛋白質の機能的研
究で有用である。当業者に明らかなように、例示的な研究は、正常および病気態
においてｐ５３発現を決定するアッセイ、細胞の増殖およびｐ５３に結合する抗
体の増殖に対する効果を含む。例えば、機能的研究は、イン・ビボまたはイン・
ビトロで行うことができる。より好ましくは、機能的研究はイン・ビトロで行わ
れる。
【０１８７】 ３．医薬／治療および診断組成物 もう１つの態様において、本発明は、本発明の抗体（またはその断片）が、治
療、予防または診断用途で供される医薬組成物をその要旨とする。また、そのよ
うな抗体は免疫トキシン、すなわち、２つの成分によって特徴付けられ、イン・
ビトロまたはイン・ビボで選択された細胞を殺すのに特に有用な分子として供す
ることもできる。１つの成分は、付着または吸収された場合に通常細胞に致命的
である細胞毒製剤である。「送達ビヒクル」として知られている第２の成分は、
毒性剤を癌腫細胞のごとき特定の細胞型に送達する手段を提供する。２つの成分
は、種々のよく知られた化学的または遺伝子的手法のいずれかによって通常は一
緒に化学的に結合される。例えば、細胞毒性剤が蛋白質であって、第２の成分が
無傷免疫グロブリンである場合結合はヘテロ二官能性架橋剤、例えば、カルボジ
イミド、グルタルアルデヒド等によることができる。
【０１８８】 一旦発現されれば、本発明のポリペプチドは、ＨＰＬＣ精製、サイズ排除、イ
オン交換および免疫アフィニティー（カラム）クロマトグラフィー、ゲル電気泳
動等を含めた当該分野で標準的な手法に従って精製することができる。
【０１８９】 本発明の抗体は、癌を含めた多数のヒトの病気に対する受動的または能動的治
療剤として用いることができ、ここに、そのような癌は、発癌性腫瘍；結腸−直
腸癌、乳癌、肺癌、頭部および頸部腫瘍、肝癌、膵臓癌、卵巣癌、胃癌、脳癌、
膀胱癌、前立腺癌および尿管／生殖管癌、食道癌のごとき上皮起源の腫瘍；肉腫
のごとき間葉腫瘍；およびＢ細胞リンパ腫のごとき造血腫瘍を含むことができる
。
【０１９０】 本発明の抗体（またはその断片）は、その天然形態にて、あるいは抗体／キレ
ート、抗体／薬物、抗体／プロドラッグ、抗体／トキシンまたは抗体イメージン
グマーカー複合体の一部として用いることができる。加えて、全抗体または抗体
断片（Ｆａｂ2、Ｆａｂ、Ｆｖ）は、抵抗−イディオタイプ応答の生成のための
免疫療法においてイメージング試薬としてまたは潜在的ワクンもしくは免疫原と
して用いることができる。
【０１９１】 抗体（またはその断片）およびイメージングマーカーのコンジュゲートは、ｐ
５３を発現する腫瘍を要し、適当な検出手段によってイメージングマーカーの存
在が検出された患者において、癌（ここに、そのような癌は発癌性腫瘍；結腸−
直腸癌、乳癌、肺癌、頭部および頸部腫瘍、肝癌、膵臓癌、卵巣癌、胃癌、脳癌
、膀胱癌、前立腺癌および尿管／生殖管癌、食道癌のごとき上皮起源の腫瘍；肉
腫のごとき間葉腫瘍；およびＢ細胞リンパ腫のごとき造血腫瘍を含むことができ
る）を含めた多数のヒト病気のイン・ビボ診断アッセイのために医薬上有効な量
で投与することができる。
【０１９２】 抗体／イメージングマーカーの投与および検出、ならびに抗体／イメージング
マーカーをコンジュゲートする方法は当該分野で容易に知られたまたは容易に決
定される方法で達成される。そのような抗体（イメージングマーカーの投与量は
、患者の年齢および体重に依存して変化するであろう）。一般的に、投与量は、
正常な組織と区別して腫瘍部位を可視化または検出するのに効果的であるべきで
ある。好ましくは、一回の投与量は０，１ｍｇないし２００ｍｇの間であろう。
より好ましくは約１ｍｇないし約１５０ｍｇの間であり；なおより好ましくは約
５ｍｇないし約１００ｍｇの間であり；なおより好ましくは、一回の投与量は約
１０ｍｇないし約５０ｍｇの間であろう。
【０１９３】 例示的なイメージングマーカーは、ガンマスキャナーまたは手に保持されたガ
ンマプローブによって検出することができる物質、および核磁気共鳴スペクトロ
メーターを用いて核磁気共鳴イメージングによって検出することができる物質を
含む。
【０１９４】 例えば、ガンマスキャナーを用いて検出することができるイメージングマーカ
ーは、125Ｉ、131Ｉ、123Ｉ、111Ｉｎ、105Ｒｈ、153Ｓｍ、67Ｃｕ、67Ｇａ、16 6 Ｈｏ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅおよび99mＴｃよりなる群から選択されるイ
メージングマーカーを含む。
【０１９５】 核磁気共鳴スペクトロメーターを用いて検出することができるイメージングマ
ーカーの例はガドリニウムである。
【０１９６】 治療的効果を生じさせるのに有用な抗体（またはその断片）の量は当業者によ
く知られた標準的な技術によって決定することができる。抗体は、一般に、医薬
上許容される緩衝液内で標準的な技術によって供され、いずれかの所望の経路に
よって投与することができる。本発明の抗体の効率、およびヒトによるその許容
性のため、これらの抗体を反復して投与して、ヒト内で種々の病気または病気状
態と戦うことが可能である。
【０１９７】 当業者出あれば、ルーチン的な実験によって、いずれの効果的な非毒性量の抗
体（またはその断片）が免疫抑制を誘導する目的用であるかを決定することがで
きるであろう。一般に、しかしながら、効果的な投与量は、１日につき体重１キ
ログラム当たり約０．０５ないし約１００ミリグラム、好ましくは１日につき体
重１キログラム当たり約０．０５ないし約５０より好ましくは約０．５ないし約
２５、なおより好ましくは約０．５ないし約１０ミリグラムの範囲にあると予測
される。別法として、効果的な投与量は５００ｍｇ／ｍ2までであろう。一般に
、効果的な投与量は約５０ないし約５００ｍｇ／ｍ2、好ましくは約５０ないし
約２００ｍｇ／ｍ2，より好ましくは約７５ないし約２５０ｍｇ／ｍ2、なおより
好ましくは、約７５ないし約１５０ｍｇ／ｍ2の範囲にあると予測される。
【０１９８】 また、本発明の抗体（またはその断片）は、脊椎動物において腫瘍を治療する
のに有用なはずである。より具体的には、それは腫瘍のサイズを低下させ、腫瘍
の成長を抑制し、および／または腫瘍を担う脊椎動物の生存時間を延長させるの
に有用なはずである
【０１９９】 従って、また、本発明は有効な非毒性量の抗体またはその断片をヒトまたは動
物に投与することによるヒトまたは他の動物において腫瘍を治療する方法に関す
る。当業者出あれば、ルーチン的実験によって、いずれの有効な非毒性量の抗体
またはその断片が癌形成腫瘍を治療する目的用であるかを決定することができよ
う。しかしながら、一般には、有効な投与量は１日につき体重１キログラム当た
り約０．０５ないし約１００ミリグラム、好ましくは１日につき体重１キログラ
ム当たり約０，０５ないし約５０、より好ましくは約０，５ないし約２５、なお
より好ましくは約０，５ないし約１０ミリグラムの範囲にあると予測される。別
法として、有効な投与量は約５００ｍｇ／ｍ2までであろう。一般に、効果的な
投与量は約５０ないし約５００ｍｇ／ｍ2、好ましくは約５０ないし約２５０ｍ
ｇ／ｍ2、より好ましくは約７５ないし約２５０ｍｇ／ｍ2、なおより好ましくは
約７５ないし約１５０ｍｇ／ｍ2の範囲にあると予測される。
【０２００】 本発明の抗体は、治療または予防効果を生じるのに十分な量にて、前記治療方
法に従って、脊椎動物、例えば、ヒトまたは他の動物に投与することができる。
【０２０１】 本発明の抗体は、本発明の抗体またはその断片を公知の技術に従って通常の医
薬上許容される担体または希釈剤と組み合わせることによって調製した通常の投
与形態でそのようなヒトまたは他の動物に投与することができる。医薬上許容さ
れる担体または希釈剤の形態および特徴は、それと組み合わせる有効成分の量、
投与経路および他のよく知られた変数によって指示されることは当業者に認識さ
れるであろう。
【０２０２】 本発明の抗体（またはその断片）の投与経路は経口、非経口、吸入または局所
で有り得る。本明細書中で用いるごとく、用語非経口は静脈内、皮内、筋肉内、
皮下、直腸、膣または腹腔内投与を含む。皮下および筋肉内形態の非経口投与が
一般に好ましい。
【０２０３】 予防的または治療的に免疫抑制を誘導する、または治療的に癌形成腫瘍を治療
するのに本発明の化合物を使用する毎日の非経口および経口投与量方法は、一般
に、１日につき体重１キログラム当たり約０，０５ないし約１００、このましく
は約０，０５ないし約５０、より好ましくは約０，５ないし約２５、なおより好
ましくは約０，５ないし約１０ミリグラムの範囲にあるであろう。別法として、
有効な投与量は約５００ｍｇ／ｍ2までであろう。一般に、有効な投与量は約５
０ないし約５００ｍｇ／ｍ2好ましくは約５０ないし約２５０ｍｇ／ｍ2より好ま
しくは約７５ないし約２５０ｍｇ／ｍ2なおより好ましくは約７５ないし約１５
０ｍｇ／ｍ2の範囲にあると予測される。
【０２０４】 また本発明の抗体またその断片は吸入、すなわち、鼻孔内および／または経口
吸入投与によって投与することもできる。エアロゾル処方または計量用量インハ
ーラーのごときそのような投与についての適当な投与形態は通常の技術によって
調製することができる。使用すべき本発明の化合物の好ましい投与量は、一般に
、１日につき体重１キログラムあたり約０．０５ないし約１００、好ましくは約
０．０５ないし約５０、より好ましくは約０，５ないし約２５、なおより好まし
くは約０．５ないし約１０ミリグラムの範囲内にある。別法として、効果的な投
与量は約５００ｍｇ／ｍ2までであろう。一般に、有効な投与量は約５０ないし
約５００ｍｇ／ｍ2好ましくは約５０ないし約２５０ｍｇ／ｍ2より好ましくは約
７５ないし約２５０ｍｇ／ｍ2なおより好ましくは約７５ないし約１５０ｍｇ／
ｍ2の範囲にあると予測される。
【０２０５】 本発明の抗体またはその断片は局所投与することもできる。局所投与とは非全
身投与を意味し、本発明の抗体（またはその断片）化合物の表皮、口腔への外部
適用、およびそのような抗体の耳、目および鼻への注入（ここに、それは血流に
有意には侵入しない）を含む。全身投与とは経口、静脈内、腹腔内および筋肉内
投与を意味する。治療または予防効果に必要な抗体またはその断片の量は、もち
ろん、選択された抗体、治療すべき疾患の性質およびひどさおよび治療を受ける
動物に応じて変化し、最終的には医師の判断による。本発明の抗体またその断片
の適当な局所用量は、一般に、１日につき体重１キログラム当たり約１ないし約
１００ミリグラム、１日につき体重１キログラム当たり好ましくは約０．０５な
いし約５０、より好ましくは約０，５ないし約２５、なおより好ましくは約０．
５ないし約１０ミリグラムの範囲内にある。別法として、効果的な投与量は約５
００ｍｇ／ｍ2までであろう。一般に、有効な投与量は約５０ないし約５００ｍ
ｇ／ｍ2好ましくは約５０ないし約２５０ｍｇ／ｍ2より好ましくは約７５ないし
約２５０ｍｇ／ｍ2なおより好ましくは約７５ないし約１５０ｍｇ／ｍ2の範囲に
あると予測される。
【０２０６】 本発明に従いここに開示した治療処方の投与において、好ましい非毒性医薬担
体、希釈剤、賦形剤および／またはアジュバントがある。前記処方の投与では、
治療すべきポリペプチドをこれらの非毒性担体、希釈剤、賦形剤および／または
アジュバントと混合し、カプセル、水性もしくは油性懸濁液、エマルジョン、シ
ロップ、エリキシルまたは注射溶液の形態とすることができる。
【０２０７】 医薬上または動物医学上許容される担体または希釈剤の例は脱ミネラル化また
は蒸留した水；生理食塩水；ピーナッツ油、サフラワー油、オリーブ油、綿実油
、トウモロコシ油、ゴマ油、落花生油またはヤシ油のごとき植物ベース油；メチ
ルトリシロキサン、フェニルポリシロキサンおよびメチルフェニルポリシロキサ
ンのごときポリシロキサンを含めたシリコーン油；揮発性シリコーン；流動パラ
フィン、ソフトパラフィンまたはスクアランのごとき鉱油；メチルセルロース、
エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチル
セルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースのごときセルロース誘導
体；低級アルコール、例えば、エタノールまてはイソプロパノール；低級アラル
カノール；低級ポリアルキレングリコールまたは低級アルキレングリコール、例
えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコー
ル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールまたはグリセリン；パ
ルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピルまたはオレイン酸エチルの
ごとき脂肪酸エステル；ポリビニルピロリドン；寒天；カラギーナン；トラガカ
ントガムまたはアラビアガム、および石油ゼリーである。典型的には、担体また
は担体類は組成物の１０重量％ないし９９．９重量％を形成する。
【０２０８】 経口用途のための適当な担体、希釈剤、賦形剤およびアジュバントのいくつか
の例はピーナッツ油、流動パラピン、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、
メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アラビアガム、トラガカントガム、
デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、ゼラチンおよびレ
シチンを含む。加えて、これらの経口処方は適当な香味剤および着色剤を含有す
ることができる。カプセル形態で用いる場合、カプセルは、崩壊を遅延させるモ
ノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルのごとき化合物で被
覆することができる。
【０２０９】 アジュバントは、典型的には、エモリエント、乳化剤、増粘剤、保存剤、殺菌
剤および緩衝剤を含む。
【０２１０】 経口投与のための個体形態は、ヒトおよび動物医薬実践で許容されるバインダ
ー、甘味財、崩壊剤、希釈剤、フレーバー剤、コーティグ剤、保存剤、滑沢剤お
よび／または遅延剤を含有することができる。適当なバインダーはアラビアガム
、ゼラチン、コーンスターチ、トラガカントガム、アルギン酸ナトリウム、カル
ボキシメチルセルロースまたはポリエチレングリコールを含む。適当な甘味剤は
スクロース、ラクトース、グルコース、アスパルテームまたはサッカリンを含む
。適当な崩壊剤はコーンスターチ、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、
グアガム、キサンタンガム、ベントナイト、アルギン酸または寒天を含む。適当
な希釈剤はラクトース、ソルビトール、マンニトール、デキストロース、カオリ
ン、セルロース、炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウムまたはリン酸二カルシウム
を含む。適当なフレーバー剤は、ペパーミント油、イチヤクソウ、チェリー、オ
レンジまたはキイチゴフレーバーの油を含む。適当なコーティング剤はアクリル
酸および／またはメタクリル酸および／またはそのエステルのポリマーまたはコ
ポリマー、ワックス、脂肪アルコール、ゼイン、シェラックまたはグルテンを含
む。適当な保存材は安息香酸ナトリウム、ビタミンＥ、アルファ−トコフェロー
ル、アスコルリン酸、メチルパラベン、プロピルパラベンまたは重亜硫酸ナトリ
ウムを含む。適当な滑沢剤はステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、オレイ
ン酸ナトリウム、塩化ナトリウムまたはタルクを含む。適当な遅延剤はモノステ
アリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルを含む。
【０２１１】 経口投与のための液体形態は前記した剤に加えて液体担体を含有することがで
きる。適当な液体担体は水、オリーブ油、ピーナッツ油、ゴマ油、ヒマワリ油、
サフラワー油、落花生油、ヤシ油、流動パラフィン、エチレングリコール、プロ
ピレングリコール、ポリエチレングルコール、エタノール、プロパノール、イソ
プロパノール、グリセロール、脂肪アルコール、トリグルセリドまたはその混合
物を含む。
【０２１２】 経口投与のための懸濁液は、さらに、分散剤および／または懸濁化剤を含むこ
とができる。適当な懸濁化剤はナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチル
セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ア
ルギン酸ナトリウムまたはアセチルアルコールを含む。適当な分散剤はレシチン
、ステアリン酸のごとき脂肪酸のポリオキシエチレンエステル、ポリオキシエチ
レンソルビトールモノ−またはジ−オレエート、−ステアレートまたは−ラウレ
ート、ポリオキシエチレンソルビタンモノ−またはジ−オレエート、−ステアレ
ートまたは−ラウレート等を含む。
【０２１３】 経口投与のためのエマルジョンは、さらに、１以上の乳化剤を含むことができ
る。適当な乳化剤は前記例示の分散剤あるいはグアーガム、アカシアガムまたは
トラガカントガムのごとき天然ガムを含む。
【０２１４】 注射用溶液または懸濁液としての投与では、非毒性の非経口的に許容される希
釈剤または担体はリンガー液、等張生理食塩水、リン酸緩衝化生理食塩水、エタ
ノールおよび１，２プロピレングリコールを含むことができる。
【０２１５】 さらに、組換えポリペプチドを含有するワクチン組成物は、当業者によく知ら
れた標準的な方法によって使用するために調製することができる。１つの具体例
において、免疫原性ペプチドは本発明によるポリヌクレオチド配列（またはその
断片）の発現によって組換え系で生産し、引き続いて単離することができる。例
えば、注目する外来性遺伝子を含有する微生物細胞は多量バイオリアクターで培
養し、次いで、遠心によって収集し、引き続いて、例えば、高圧ホモゲナイゼー
ションによって破壊することができる。得られた細胞溶解物は前記したもののご
とき適当な希釈剤に再懸濁し、濾過して免疫原の水性懸濁液を得ることができる
。組換え蛋白質は、例えば、０，１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を５０ないし
５００μｇ／ｍｌ濃度まで希釈し、次いで、滅菌した０．２２ミクロンのフィル
ターを通すことによって粗製形態で投与することができる。
【０２１６】 別法として、組換えポリペプチドを含有するワクチン組成物は、チャイニーズ
ハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞のごとき宿主細胞を利用して哺乳動物発現系で調
製することができる。ｐ５３またはその部分に対する結合親和性を有する抗体（
またはその断片）は、無結成培地でのバッチ発酵を用いて製造することができる
。発酵後、抗体を、クロマトグラフィーおよびウイルス不活化／除去工程を一体
化させる多工程手法を介して精製することができる。例えば、抗体は、プロテイ
ンＡアフィニティークロマトグラフィーによってまず分離し、ついで、溶媒／洗
剤処理していずれの脂質エンベロープウイルスも不活化することができる。さら
なる精製では、典型的には、アニオンおよびカチオン交換クロマトグラフィーを
用いて残存する蛋白質、溶媒／洗剤および核酸を除去することができる。精製さ
れた抗体は、さらにゲル濾過カラムを用いて、精製し、０．９％生理食塩水に処
方することができる。ついで、処方されたバルク製剤を滅菌し、ウイルス濾過し
、分注することができる。
【０２１７】 別法として、本発明の抗体（またはその断片）はイディオタイプ免疫原として
用いることができる。当業者に知られたごとく、このように用いる場合、本発明
の抗体（またはその断片）は免疫原として機能し、元の抗体（Ａｂ１）のイディ
オトープに対する第２の抗体（Ａｂ２）およびＴ細胞（Ｔ2）応答を誘導するこ
とができる。Ａｂ２抗体は、抗原結合部位（イディオタイプ）を含めた元の抗体
上のエピトープに結合することができる。抗−イディオタイプ抗体Ａｂ２は、抗
−抗−イディオタイプ抗体（Ａｂ３）ならびにＡｂ１と同一のエピトープを認識
することができるＴ細胞（Ｔ3）を自然に誘導することができる。第１の抗体は
ｐ５３エピトープおよびＡｂ２に共に結合するので、Ａｂ２は抗原性エピトープ
（ｐ５３上）の構造を模倣する。ある割合のＡｂ３抗体はもとの抗体（Ａｂ１）
と同一のエピトープに結合し、元の抗体の効率を増加させ、延長することができ
る。この抗−イディオタイプネットワークの誘導の結果、ｐ５３−特異的ＣＴＬ
の誘導を部分的には介して転移から保護される。
【０２１８】 別法として、本発明のポリペプチドのペプチド断片を含有するワクチン組成物
は、例えばＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ モデル４３０Ａでの自動合
成によるごとく、当業者に知られた標準的な方法を用いてペプチドの合成によっ
て調製することができる。例えば、ペプチドは本発明のペプチドのＣＤＲおよび
／またはＦＲの選択されたアミノ酸領域を含むことができる。合成ペプチドは、
例えば、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を５０ないし５００μｇ／ｍｌ濃
度に希釈し、滅菌された０．２２ミクロンフィルターに通した後に投与すること
ができる。
【０２１９】 別法として、ワクチンはＤＮＡベースのワクチンであり得る。１つの態様にお
いて、ＤＮＡベースのワクチンは、本発明の第１または第２の具体例で定義され
た核酸分子、またはその断片を含む裸のＤＮＡを含むことができる。
【０２２０】 もう１つの態様において、ＤＮＡベースのワクチンは、発現ベクターにクロー
ン化された本発明の第１または第２の具体例で定義された核酸分子、またはその
断片を含む裸のＤＮＡを含むことができる。典型的には、発現ベクターは真核生
物発現ベクターであり、複製起点、プロモーター、エンハンサーのごとき発現制
御配列、およびリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部
位、および転写ターミネーター配列のごとき必要なプロセッシング情報を含む。
【０２２１】 典型的なワクチン化方法は、複数用量、一般には、１、２または３つの等しい
用量でワクチンを送達することである。
【０２２２】 一般に、本発明のワクチンに対する抗体の生産を誘導するには、それらは、適
当な分散剤、懸濁化剤および／または湿潤剤を用い、当該分野で知られた方法で
処方した油性もしくは水性懸濁液であり得る。適当な分散剤、懸濁化剤および湿
潤剤の例はフロイント完全／不完全アジュバント、Ｍｏｎｔｅｎｉｄｅ Ｍａｒ
ｃｏｌアジュバントおよびリン酸緩衝化生理食塩水およびマンナンを含む。
【０２２３】 前記言及の例は例示的にすぎず、当該分野で知られた他の適当な担体、希釈剤
、賦形剤およびアジュバントは本発明の精神を逸脱することなく使用することが
できることが認識されよう。
【０２２４】 ４．抗体／核酸ベースの方法およびｐ５３を検出するためのキット また、本発明は、試料中のｐ５３ポリペプチドを検出する方法を含み、ここに
、該方法は、 （ａ）試料を、本発明の第６または第７の具体例に従って定義された抗体（ま
たはその断片）と接触させ、次いで、 （ｂ）ｐ５３ポリペプチドに結合した抗体（またはその断片）の存在を検出す
る； ことを含む。
【０２２５】 典型的には、変化したレベルのｐ５３ポリペプチドは病気の存在または開始を
示すことができ、ここに、そのような病気の例は癌である。
【０２２６】 テスト試料と共に抗体（またはその断片）をインキュベートするための条件は
、アッセイで使用される検出の様式、検出方法、および使用される抗体のタイプ
および性質に応じて広く変化する。当業者であれば、通常入手できる免疫学的ア
ッセイのいずれか１つを検出の方法を行うのに使用することができることを容易
に認識するであろう。例えば、これらのアッセイはラジオイムノアッセイ、酵素
結合免疫検定法、および／または免疫蛍光アッセイを含む。
【０２２７】 さらに、アッセイで用いるテスト試料は組織、細胞、蛋白質、または細胞の膜
抽出物、および血液、血清、血漿または尿のごとき生物学的液体よりなることが
できる。
【０２２８】 本発明の前記方法を実行するためのキットは、検出の前記方法を行うための全
ての必要な試薬を含有する。例えば、該キットは以下の容器： （ａ）本発明の抗体（またはその断片）を含有する第１の容器； （ｂ）検出可能な標識と共に抗体（またはその断片）の結合パートナーを含む
コンジュゲートを含有する第２の容器； を含む。
【０２２９】 典型的には、該キットは、さらに、洗浄試薬、および結合した抗体の存在を検
出できる他の試薬のような他の成分を含有する１以上の他の容器を含むことがで
きる。より典型的には、検出試薬は標識された（二次）抗体を含むことができる
か、あるいは本発明の抗体（またはその断片）それ自体が標識される場合、区画
は、本発明の標識された抗体（またはその断片）と反応することができる抗体結
合試薬を含むことができる。
【０２３０】 さらに、抗体に関して前記したごとく、本発明のキットは、発明的才能を用い
ることなくして、核酸プローブ用のキットに容易に取り込むことができる。当業
者であれば、前記した当該分野で公知の技術に従って、本発明のポリヌクレオチ
ドから核酸プローブを選択するであろう。テストすべき試料は、限定されるもの
ではないが、ヒト組織のＲＮＡ試料を含む。
【０２３１】 そのようなキットは、その中に配された前記核酸プローブを有する少なくとも
１つの容器手段を含む。該キットは、さらに、以下の：洗浄試薬および結合した
核酸プローブの存在を検出することができる試薬の１以上を含む他の容器を含む
ことができる。検出試薬の例は、限定されるものではないが、標識されたプロー
ブ、酵素標識プローブ（ホ−スラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリ性ホス
ファターゼ）、およびアフィニティー標識プローブ（ビオチン、アビジンまたは
ストレプトアビジン）を含む。
【０２３２】 詳細において、区画化されたキットは、試薬が別々の容器に含有されたいずれ
かのキットを含む。そのような容器は小さなガラス容器、プラスチック容器また
はプラスチックもしくは紙のストリップを含む。そのような容器は、試料および
試薬が交差−汚染せず、各容器の剤または溶液を１の区画からもう１つの区画ま
で定量的に添加できるように、１の区画からもう１つの区画への試薬の効果的な
移動を可能とする。そのような容器は、テスト試料を許容するであろう容器、ア
ッセイで用いられるプローブまたはプライマーを含有する容器、（リン酸緩衝化
生理食塩水、トリス緩衝液等のごとき）洗浄試薬を含有する容器、およびハイブ
リダイズされたプローブ、結合抗体、アミド産物等を検出する試薬を含有する容
器を含む。
【０２３３】 さらに、当業者であれば、本発明における核酸プローブは、当該分野で公知の
確立されたキットフォーマットのうちの１つに容易に取り込むことができるのを
容易に認識するであろう。
【０２３４】 ５．遺伝子治療 その最も単純な形態において、遺伝子導入は、マイクロインジェクションのプ
ロセスを通じて、単にに、微量なＤＮＡを細胞の核に注入することによって行う
ことができる。一旦組換え遺伝子が細胞に導入されれば、それは、転写および翻
訳についての細胞の通常のメカニズムによって認識することができ、遺伝子産物
は発現されるであろう。
【０２３５】 また、ＤＮＡをより多数の細胞に導入するために、他の方法も試みられてきた
。これらの方法は、ＤＮＡがＣａＰＯ4で沈殿され、ピノサイトーシスによって
細胞に取り入れられるトランスフェクション；細胞が大電圧パルスに暴露されて
、膜にホールを導入するエレクトロポレーション；標的細胞と融合する油性小胞
にＤＮＡがパッケージされるリポフェクション／リポソーム融合；および小さな
プロジェクタイルに結合したＤＮＡを用いる粒子衝撃を含む。ＤＮＡを細胞に導
入するためのもう１つの方法は、ＤＮＡを化学的に修飾された蛋白質にカップリ
ングすることがである。
【０２３６】 １つの具体例において、本発明によるポリヌクレオチド配列を含有する発現ベ
クターは細胞に導入され、細胞はイン・ビトロで増殖され、次いで、多数で患者
に注入される。レトロウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、アデノ
−関連ウイルス、ヘルペスウイルス、いくつかのＲＮＡウイルス、またはウシパ
ピローマウイルスのごときウイルスに由来する発現ベクターは、本発明のポリヌ
クレオチド配列の標識された細胞集団（例えば、腫瘍細胞）への送達に用いるこ
とができる。当業者によく知られた方法を用いて、コーディング配列を含有する
組換えウイルスベクターを構築することができる。別法として、蛋白質配列をコ
ードする組換え核酸分子は裸のＤＮＡとして、または復元されたシステム、例え
ば、標的細胞への送達のためのリポソームまたは他の脂質システムで用いること
ができる。
【０２３７】 また、アデノウイルス蛋白質は、エンドソームを脱安定化でき、ＤＮＡの細胞
への摂取を増強できることが示されている。ＤＮＡ複合体を含有する溶液へのア
デノウイルスの混合、または蛋白質架橋剤を用いるＤＮＡのアデノウイルスに共
有結合したポリリシンへの結合は、組換え遺伝子の摂取および発現を実質的に改
良する。
【０２３８】 さて、具体的な実施例を参照することによって、本発明をより詳細に記載する
が、それは断じて本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきものではない。
【０２３９】 実施例 実施例１ 抗−ｐ５３ヒト抗体の単離および特徴づけ 材料および方法 患者のデータ 知らされた同意を得た後、血液および組織試料を、結直腸癌の再切開を受けつ
つある１９９３−１９９７からのＳｔ Ｖｉｎｃｅｎｔ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ
で観察された１００人の個人から収集した。
【０２４０】 固まった血液を２０００ｇにて１０分間遠心分離し、使用に先立って血清を−
７０℃にてアリコットにて貯蔵した。５０人の健康な個人からの試料を得、全て
のＥＬＩＳＡおよび免疫沈殿実験で対照として用いた。腫瘍の領域における新鮮
な結腸周囲リンパ節は結腸切開組織から収穫し、ＲＮＡ抽出に先立って液体窒素
中で凍結した（６）。
【０２４１】 ｐ５３の免疫組織化学的検出 各個人からのパラフィン包埋腫瘍組織の切片を、従前に記載されているごとく
、ｐ５３の免疫組織化学分析に付した（７）。腫瘍組織は、１０の高出力場の平
均が、間質細胞および正常上皮中の染色の不存在下で、核染色された腫瘍細胞の
５％を超えて示す場合、蓄積された突然変異体ｐ５３を有すると考えられた。
【０２４２】 組換えｐ５３の生産 組換えｐ５３を発現させ、精製した。略言すると、発現ベクターｐＥＴ１９ｂ
中の野生型ｐ５３のｃＤＮＡクローンをＥ． ｃｏｌｉ株ＢＬ２１（ＤＥ３）（
Ｎｏｖａｇｅｎｅ Ｉｎｃ． Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）にトランスフェクトし
た。Ｎｉ2 +樹脂を用い、粗製細菌溶解物から蛋白質を精製した。ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）、次いで、免疫ブロッティングによってｐ５３の
純度を評価した。蛋白質の濃度は、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で生じた標準
的な曲線を参照し、Ｂｉｏｃｈｏｎｉｎｃｉｃ ａｃｉｄ方法を用いて測定した
。
【０２４３】 抗−ｐ５３血清抗体の検出 マイクロタイタープレート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂ． Ｎｕｎｃ， Ｄｅｎｍａｒ
ｋ）のウェルを、４℃にて一晩、精製された組換えｐ５３（リン酸緩衝化生理食
塩水：ＰＢＳ中５μｇ／ｍｌ）でコートした。コートしたウェルを２００μｌの
ＰＢＳで各々３回洗浄し、次いで、室温（ＲＴ）にて１時間、ＰＢＳ／２％ Ｂ
ＳＡでブロックした。患者の血清試料（ｎ＝１００）をＰＢＳ中の１００中で希
釈し、次いで、二連でｐ５３に適用し、ＲＴにて１時間インキュベートした。ア
ルカリ性ホスファターゼ結合ヤギ抗−ヒトＩｇＧ Ｆｃ−特異的抗体（ＰＢＳ／
２％ＢＳＡ中０．５μｇ／ｍｌ：Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓａｒｃ
ｈ Ｌａｂ Ｉｎｃ， ＰＡ， ＵＳＡ）で結合抗体を検出した。ｐ５３に対す
る各患者の反応性は、従前に記載されているごとく、抗−ｐ５３抗体を含有する
ことが知られている対照血清から生じた標準曲線に対する値として表した（７）
。血清の活性を、健康な群のボランティア（ｎ＝５０）と比較し、抗−ｐ５３の
スコアが正常な群の平均を超える＞２標準偏差である場合に抗−ｐ５３抗体につ
いて陽性と考えた。
【０２４４】 抗−ヒトＩｇＧ Ｆｃ−特異的抗体をマウス抗−ヒトＩｇＧ（ＩｇＧ１、Ｉｇ
Ｇ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４：ＤＡＫＯ Ｃｏｒｐ ＣＡ， ＵＳＡ）アイソ
タイプ特異的抗体（１μｇ／ｍｌ）で置き換え、アルカリ性ホスファターゼ（Ａ
Ｐ）結合ヤギ抗−マウス抗体（ＰＢＳ／２％ＢＳＡ中０．５μｇ／ｍｌ：Ｊａｃ
ｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓａｒｃｈ Ｌａｂ Ｉｎｃ）で検出する以外は
、前記したプロトコルを用い、反応性血清中の抗体のアイソタイプを評価した。
【０２４５】 抗−ｐ５３血清力価は、バックグラウンドを３倍超えるシグナルを生じた血清
の最低希釈と定義した。
【０２４６】 ライブラリの構築およびバイオパニング 結腸周囲リンパ節を破砕して、液体窒素中の微細な粉末とし、標準的な手法を
用いて全ＲＮＡを抽出した（８）。ＩｇＧ１カッパ鎖Ｆａｂライブラリを、従前
に記載されているごとくＭＣＯ１ベクター中に構築した（９）。略言すれば、ヒ
トカッパおよびＩｇＧ１免疫グロブリン遺伝子に特異的なプライマーを用いるＲ
Ｔ−ＰＣＲによって、免疫グロブリン遺伝子を増幅し、各々、Ｓａｃ１／Ｘｂａ
１またはＳｐｅ１／Ｘｈｏ１で消化した。次いで、産物を順次（軽鎖、次いで、
重鎖）ファージ提示ファゲミドベクターにクローニングした。ＭＣＯ１、および
コンビナトーリアルライブラリーをＸＬ１−ｂｌｕｅ細胞にエレクトロポレーシ
ョンし、ヘルパーファージでパッケージして、一次抗体ファージライブラリーを
得た。
【０２４７】 最終重鎖および軽鎖構築体のエレクトロポレーション（各ライブラリーにつき
ｎ＝２０）後に採取したクローンのある割合から、ライブラリーのサイズを計算
した。重鎖および軽鎖の可変領域を増幅する診断ＰＣＲおよびＢｓｔＮ１フィン
ガープリンティング（後記参照）を用いて、ユニークな重鎖および軽鎖インサー
トを持つクローンの数を計算した。これに基づいて、全ライブラリーサイズを見
積もった。
【０２４８】 マイクロタイタープレートのウェルは、前記したごとく組換えｐ５３でコート
し、次いで、ＰＢＳで洗浄し、ＢＳＡ（２％ｖ／ｖ）／ＰＢＳでブロックした。
ファージ抗体ライブラリーのアリコット（１００μｌ中１０12ｃｆｕ）を各ウェ
ルに適用し、室温で２時間インキュベートした。過剰のファージを、ＰＢＳ／Ｔ
ｗｅｅｎでの６回の洗浄でプレートから洗浄し、続いて、ＰＢＳ中で２回洗浄し
た。次いで、接着性ファージを室温にて１０分間、１００μｌの０．１Ｍグリシ
ン、ｐＨ３．０で溶出し、１ＭトリスｐＨ８で中和した。溶出したファージを、
従前に記載されているごとく次のラウンドのパニングのために再度増幅した（６
）。パニング手法は５回行った。各ラウンドのパニングからの溶出したアウトプ
ットからアリコットを採取し、これを用いて、可溶性Ｆａｂの生産のためにＥ．
ｃｏｌｉ非サプレッサー株ＨＢ２１５１を感染させた。感染した細菌を、５０μ
ｇ／ｍｌのカルベニシリンを含むルリアブロス寒天上に平板培養し、可溶性Ｆａ
ｂ生産のために単一コロニーを拾った。
【０２４９】 ＥＬＩＳＡによる可溶性Ｆａｂ反応性の分析 ２％グルコース（ｖ／ｖ）および５０μｇ／ｍｌのカルベニシリン（２ＹＴ／
ｇｌｕ／ｃａｒｂ）を含む２ＹＴブロス中、３７℃にて、培養を単一コロニーか
ら一晩培養した。次いで、これらを２ＹＴ／ｇｌｕ／ｃａｒｂ中の１００中で希
釈し、０．８のＯＤまで３７℃にて増殖させた。次いで、培養を遠心し、１Ｍ
ＩＰＴＧおよび５０μｇ／ｍｌを含有する２ＹＴに再懸濁し、３０℃にて一晩増
殖させた。遠心に続き、一晩の培養からの上清を、ＥＬＩＳＡによって抗−ｐ５
３Ｆａｂにつき評価した。
【０２５０】 ｐ５３でコートしたＥＬＩＳＡプレートに、細胞上清を二連で適用し、ＲＴに
て２時間インキュベートした。ＰＢＳでの洗浄の後、１００μｌの抗−ｍｙｃモ
ノクローナル抗体９Ｅ１０を各ウェルに添加し（重鎖のＣ末端のｍｙｃタグを検
出、ＰＢＳ／０．５％ＢＳＡ中０．５μｇ／ｍｌ）、室温にて１時間インキュベ
ートした。ウェルを再度洗浄し、ＨＲＰ結合ヤギ抗−マウス（ＰＢＳ／２％ＢＳ
Ａ中０．５μｇ／ｍｌ：Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓａｒｃｈ Ｌａ
ｂ Ｉｎｃ）抗体を添加した。さらなる洗浄の後、１００μｌのＴＭＢ基質（Ｋ
ｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｇａ
ｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ ＭＤ）で発色させ、５０μｌの１Ｍ硫酸で反応を停止さ
せた。ＯＤが、ｐ５３でコートされていないウェルで観察されたシグナルの３倍
を超える場合にクローンは陽性であると考えた。各ＥＬＩＳＡにおいて、９Ｅ１
０を含まない陰性対照を用いて、Ｆａｂ、二次抗体およびｐ５３の交差反応性を
検出した。
【０２５１】 １０−０．０１５μｇ／ｍｌの濃度でコートしたｐ５３を用い、あるいはコー
トしたＥＬＩＳＡプレート（１μｇ／ｍｌ）への適用に先立って、１時間、５０
μｇ／ｍｌの可溶性ｐ５３と共にＦａｂをインキュベートすることによって、反
応性抗−ｐ５３Ｆａｂを再度分析した。軽鎖がｐ５３への結合に関与しているこ
とを確認するために、ビオチン化ヤギ抗−ヒトカッパ特異的抗体（ＰＢＳ／２％
ＢＳＡ中０．２μｇ／ｍｌ：Ｒｏｃｋｌａｎｄ， Ｇｉｌｂｅｒｔｓｖｉｌｌｅ
， ＰＡ）、続いてＨＲＰ結合ストレプトアビジン（ＰＢＳ／２％ＢＳＡ中０．
０５μｇ／ｍｌ：ＤＡＫＯ Ｃｏｒｐ）を用いてＥＬＩＳＡを反復した。
【０２５２】 Ｆａｂの他の抗原との交差反応性は、ｐ５３について記載したのと同様の方法
を用いるＥＬＩＳＡによって評価した。以下の抗原および濃度を用いた；インス
リン（５μｇ／ｍｌ）、ＥｒｂＢ２細胞外ドメイン（５μｇ／ｍｌ；Ｒｕｔｈ
Ｌｙｏｎｓ， Ｇａｒｖａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｓｙｄｎｅｙ， Ａｕｓ
ｔｒａｌｉａ寄贈）Ｍｕｃ１（５μｇ／ｍｌ；ｌａｎ ＭｃＫｅｎｚｉｅ博士、
Ａｕｓｔｉｎ Ｒｅｓａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ，
Ａｕｓｔｒａｌｉａ寄贈）、およびＣＥＡ（５μｇ／ｍｌ；Ｍａｔｓｕｏｋａ
ら１９９１によって記載されたごとく組織から抽出）、破傷風トキソイド（１μ
ｇ／ｍｌ；ＣＳＬ， Ｍｅｌｂｏｕｒｎｅ， Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、ＢＳＡ（
１μｇ／ｍｌ：Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ， Ｃａｓｔｌｅ Ｈｉｌｌ， Ａ
ｕｓｔｒａｌｉａおよびキーホールリンペットヘムシアニン（１μｇ／ｍｌ；Ｓ
ｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）。
【０２５３】 免疫沈殿によるＦａｂ反応性の分析 突然変異体ｐ５３を含有する結直腸癌細胞系ＨＴ２９を用いて、真核生物細胞
からのヒトｐ５３とＦａｂとの反応性を評価した。ほぼ１０7細胞をＴＮＥＳ緩
衝液（５０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、２ｍＭ ＥＤＴＡ、１００ｍＭ ＮａＣｌ
、１％ＮＰ−４０プロテアーゼ阻害剤カクテル［Ｂｏｅｈｒｉｇｅｒ Ｍａｎｎ
ｈｅｉｍ、Ｃａｓｔｌｅ Ｈｉｌｌ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ］および１ｍＭ ＰＭ
ＳＦ）中に溶解させ、次いで、１００００ｇでの１０分間の遠心によって細胞夾
雑物を除去した。およそ２５０μｇの溶解物を各免疫沈殿で用いた。マウス抗Ｄ
Ｏ７（０．５μｇ：ＤＡＫＯ Ｃｏｒｐ）または細菌が発現したＦａｂのいずれ
かを該溶解物に添加し、４℃にて１時間インキュベートした。次いで、Ｆａｂを
含有する混合物に抗−ｍｙｃ ９Ｅ１０抗体（１μｇ）を添加し、４℃にて１時
間インキュベートした。この時点で、２０μｌの（充填した容量）プロテインＡ
−セファロース（Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．， Ｓａｎ
Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ， ＣＡ）を全てのチューブに添加し、４℃にてさらに１
時間インキュベートした。プロテインＡセファロースをＰＢＳで４回洗浄し、変
性および還元条件下で１０％ＰＡＧＥに付した。エレクトロブロッティングによ
って、蛋白質をＰＶＤＦ膜に移し、１０％スキムミルク粉末でブロックし、当該
蛋白質のＮ末端領域につき特異的なヤギ抗−Ｐ５３抗体でプローブした（Ｓａｎ
ｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈ．， Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ， ＣＡ）。これ
に続いて、ロバ抗−ヤギ−ＨＲＰ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓ
ａｒｃｈ Ｌａｂ Ｉｎｃ）を添加し、次いで、ケミルミネセント基質（ＤｕＰ
ｏｎｔ ＮＥＮ， Ｎｏｒｔｈ Ｓｙｄｎｅｙ Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を用いて
ブロットを発色させた。陰性Ｆａｂ対照（破傷風トキソイドにつき特異的なＦａ
ｂ）、およびプロテインＡセファロースおよび抽出物のみの対照を、陰性対照と
して各実験に含めた。
【０２５４】 エピトープマッピング ヒトｐ５３から誘導された欠失突然変異体の組をエピトープマッピングで用い
た。使用された欠失突然変異体は、（１０）によって記載されたＨｕｐ５３、３
Ｍ（残基１−３９３）、３Ｒ（１−２２３）、４Ｕ（１−１０６）、１１（２７
−３９３）および１８（４４−３９３）であった。簡単に述べると、当該構築体
を含有するＥ． ｃｏｌｉ（Ｂ１２１ ＤＥ３λ）の培養をＯＤ０．８まで増殖
させた。細胞を細菌溶解緩衝液（５０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、１０ｍＭ ＥＤ
ＴＡ、５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ＬＰ−４０および１ｍＭ ＰＭＳＦ）に溶解さ
せ、５０μｌの溶解物を前記したＰＡＧＥおよびエレクトロブロッティングに付
した。細菌が発現したＦａｂをＲＴにて１時間膜と共にインキュベートし、次い
で、ＰＢＳで洗浄した。結合したＦａｂを９Ｅ１０およびＨＲＰ−結合ヤギ抗−
マウスで検出した。陰性対照は前記と同じであった。
【０２５５】 配列分析 選択されたクローンの可変領域は、製造業者の仕様（Ｐｒｏｍｅｇａ， Ｍａ
ｄｉｓｏｎ， ＷＩ）に従ってサイクル配列決定キットを用いて、配列決定した
。ミニプレプＤＮＡはアルカリ性溶解によって調製し、ＤＮＡの両方のストラン
ドを、可変領域の外側のプライマーを用いて配列決定した。軽鎖を配列決定する
のに用いたプライマーは５’−ＡＡ ＧＡＣ ＡＧＣ ＴＡＴ ＣＧＣ ＧＡＴ
Ｔ（ＯｍｐＡリーダー配列）および５’−ＡＴＧ ＡＡＧ ＡＣＡ ＧＡＴ
ＧＧＴ ＧＣＡ ＧＣ（カッパ定常領域の５’末端）であり、重鎖では、５’−
ＣＴＡ ＣＧＧ ＣＡＧ ＣＣＧ ＣＴＧ ＧＡＴ ＴＧ（ＰｅｌＢリーダー配
列）および５’−ＧＧＡ ＡＧＴ ＡＧＴ ＣＣＴ ＴＧＡ ＣＣＡ Ｇ（Ｉｇ
Ｇ ＣＨ１領域の５’末端）であった。
【０２５６】 Ｆａｂクローンについての重鎖および軽鎖可変領域は、ＤＮＡプロット整列パ
ッケージおよびＶ塩基配列データベースを用い、利用可能なＶ遺伝子、Ｄ遺伝子
およびＪ遺伝子にマッチさせた。
【０２５７】 ＣｈａｎｇおよびＣａｓａｌｉ（１１）の方法を用い、ｐ５３抗体の各々につ
いての、ＣＤＲおよびフレームワーク（ＦＲ）における置換突然変異（Ｒ）の頻
度は、最も近い生殖系遺伝子に関して計算した。置換突然変異が予測されたラン
ダム頻度未満またはそれを超えて起こる確率は、生殖系遺伝子におけるＲ突然変
異の予測される数、Ｆａｂ配列における観察されたＲ突然変異の現実の数、およ
びＣＤＲまたはＦＲに局所化されるＲ突然変異の確率を用い、二項分布モデルで
計算した（１１）。重鎖の１−９４および軽鎖の１−９５からのアミノ酸を、Ｒ
突然変異の分布で用いた。ＦＲ１領域におけるプライマー配列の結果として起こ
るアミノ酸残基は分析から排除した。０．０５未満のｐ値は、Ｒとしてが非ラン
ダム様式で起こったことを示した。
【０２５８】 Ｆａｂ精製 可溶性Ｆａｂは硫酸アンモニウム（３５％（ｗ／ｖ）最終）中で沈殿させ、５
ｍｌのＰＢＳに再懸濁させ、次いで、ＩＭＡＣアフィニティクロマトグラフィー
によって精製した。Ｆａｂを含有する溶出した画分をプールし、次いで、ＨＢＳ
緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ
ＥＤＴＡおよび０．００５％ＮＰ４０）でのサイズ排除クロマトグラフィー（
Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ Ｐｈａｒｍａｃｉａ）によって分画した。純度はＰＡ
ＧＥおよび銀染色によって評価した。
【０２５９】 選択されたＦａｂのＢＩＡｃｏｒｅ分析 標準的なアミン固定化プロトコルを用い、組換えｐ５３をＣＭ５チップにカッ
プリングさせた。５０ｍＭ Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよび２００ｍＭ
Ｎ−（ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミドを用い、該チッ
プを活性化した。酢酸ナトリウム（１Ｍ、ｐＨ４．８）の１０中で希釈したＰＤ
Ｓ中１００μｇ／ｍｌの組換えｐ５３を、１０μｌ／分の流速で注入した。４０
０ＲＵ未満がアフィニティー分析のためにチップにカップリングされた。
【０２６０】 全ての測定はＨＢＳ緩衝液中で行った。アフィニティーの分析では、１０ない
し２００ｎＭの範囲の濃度のＦａｂを、３０μｌ／分の流速で９０秒間で２フロ
ー細胞（１つはｐ５３とカップリングし、他方はカップリングしていないもの）
にわたって注入した。解離は、ＨＢＳ緩衝液の注入によって９０秒間にわたって
測定した。３０μｌ／分流速にて、２０μｌの１Ｍグリシン（ｐＨ２）でチップ
を再生させた。ブランクフロー細胞のＲＵをｐ５３結合細胞から差し引き、グロ
ーバルフィットのためのＢｌＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎ３ソフトウェアパッケージ
を用い、アフィニティー定数を計算した。
【０２６１】 結果 患者の血清の分析および抗体ライブラリー構築 ｐ５３に対する抗体につきスクリーニングした結直腸癌を持つ１００人の患者
のうち、１７人は抗−ｐ５３抗体を有することが判明した。ｐ５３反応性血清を
有することが判明した患者から、さらなる実験のために６人を選択し、陰性対照
として検出可能な抗−ｐ５３抗体を持たない１人の患者を含めた。加えて、患者
の各々を、ｐ５３と反応性の支配的ＩｇＧイソタイプについて評価した。選択し
た全ての個人は、圧倒的に、ＩｇＧ１反応性抗−ｐ５３抗体を有することが判明
した。従って、これらの６人の結直腸癌患者から採取した結腸周囲リンパ節組織
からＩｇＧ１ｋ抗体ライブラリーを構築した。臨床データ、血清および全長ｐ５
３に対する反応性と共に、構築した個体の各々からの抗体ライブラリーのサイズ
を表１に示す。
【０２６２】 抗−ｐ５３Ｆａｂ選択 各抗体ライブラリーを、組換えｐ５３に対する５ラウンドのパニングに付した
。溶出されたファージの数の２０ないし１００倍増加がラウンド４および５で観
察された。
【０２６３】 ｐ５３に対する反応性を持つＦａｂは、パニングの最初の３ラウンドの各々の
後に各ライブラリーから単離した３２ファージクローンから同定されなかった（
分析したクローンの全数＝９６０）。患者１６３からのライブラリーは、ラウン
ド４からの１／３２のｐ５３反応性クローンおよびラウンド５からの４２／１２
８のｐ５３反応性クローンを有することが判明した。ラウンド４または５からの
陽性クローン（アウトプットファージから分析したクローン）は、患者抗体ライ
ブラリー１００、１０７、１４９、３５７または７９０（各ライブラリーから分
析した１９２ファージクローン）から同定されなかった。
【０２６４】 ライブラリー１６３から単離した４３のｐ５３反応性クローンは制限酵素消化
によって分析し、正しいサイズの重鎖の欠如に基づきさらなる分析から排除した
。全てのクローンは、予測されるサイズの軽鎖インサートを有した。頻繁切断制
限酵素ＢｓｔＮ１を用い、残りの３８クローンを可変領域ＰＣＲ産物からフィン
ガープリントしたＤＮＡであった。これは、５つのユニークな軽鎖プロフィール
と対合する４つのユニークな重鎖ＢｓｔＮ１プロフィールの同定を可能とし、ユ
ニークな重鎖および軽鎖組合せを持つ合計１４のクローンを与える（結果は示さ
ず）。ユニークな重鎖を持つ４つのクローンをエピトープマッピングし、組換え
ｐ５３、細胞系由来ｐ５３に対する反応性、ならびに他の抗原（クローン１６３
．１、１６３．５、１６３．１７、１６３．２４）との交差反応性につき分析し
た。ユニークな重鎖および軽鎖組合せを持つ１４のクローンのヌクレオチド配列
を測定し、推定アミノ酸配列が得られ、突然変異パターンを分析した。
【０２６５】 抗−ｐ５３Ｆａｂ反応性の立体配座 クローン１６３．１、５、１７および２４と変化させた濃度のｐ５３との反応
性を図１に示す。また、ｐ５３結合における重鎖および軽鎖双方のヒツジ抗−ヒ
トカッパ抗体（結果を示さず）関与を用い、ｐ５３に対するＦａｂの反応性が示
された。ＥＬＩＳＡ分析に先立って過剰のｐ５３とともにプレインキュベートす
ると、シグナルは、標準的なプロトコルで観察されたレベルの１１ないし２７％
の間まで低下した（結果は示さず）。さらに、４つのクローンはＣＥＡ、ｅｒｂ
Ｂ２、ＭＵＣ−１、インスリン、破傷風トキソイド、ＫＬＨおよびＢＳＡを含め
た他の抗原に対する反応性は示さなかった（図２）。
【０２６６】 細菌溶解物中でｐ５３を検出するＦａｂの能力をウェスタン分析によって評価
した（図３ａ）。Ｆａｂは溶解物中でｐ５３を検出できなかったが、他の蛋白質
と反応するようには見えなかった。加えて、Ｆａｂの各々は、ヒト結直腸癌細胞
系ＨＴ−２９からの突然変異体ｐ５３を免疫沈殿させることができたのが判明し
た（図３ｂ）。
【０２６７】 エピトープマッピング Ｆａｂクローン１６３．１、５、１７および２４のエピトープマッピングは、
全てが、全長Ｈｕｐ５３、および欠失構築体３Ｍ、３Ｒ、４Ｕおよび１１と反応
性であることを示した。クローンのいずれも１８構築体（残基４４−３９３）と
反応性ではなく、これは、Ｆａｂが、ヒトｐ５３の残基２７および４４（包括的
）の間のエピトープと反応性であることを示す。
【０２６８】 アフィニティー分析 抗体１６３．１、５、１７および２４についての解離定数は、各々、１．１９
×１０-8、１．５×１０-8、１．５７×１０-8および１．３８×１０-8であった
。χ2値は、ドリフティングベースラインとの１：１相互作用についてのモデル
を用いた場合、全て１未満であった。
【０２６９】 配列の分析 １４のクローンの各々では、最も近い生殖系遺伝子がマッチし、この遺伝子か
らのパーセントヌクレオチド差を表ＩＩに示す。１４のＦａｂクローンの可変領
域の比較は、全てのクローンが、相互に９５％を超える相同性を有し、同一のＶ
遺伝子、Ｄ遺伝子およびＪ遺伝子組合せを有するように見えることを示した（表
ＩＩ）。これらのクローンのＶ領域は、ＶＨ１遺伝子ファミリーからのＶ遺伝子
ＤＰ−７（ＶＨ１−４６）、およびＪ遺伝子、ＪＨ４ｂよりなるものであった。
全てのクローンが同様なＤ領域を有したが、公知のＤ遺伝子配列との相同性の欠
如のため、Ｄセグメント遺伝子は信頼性をもってこれらのクローンに帰属できな
かった。これらの１４のクローンの全ての重鎖は、Ｖ遺伝子領域全体にかなりの
突然変異を有した。重鎖Ｖ遺伝子およびマッチした生殖系Ｖ遺伝子の間のパーセ
ント差は１４．６ないし１８．５％の範囲であった。突然変異はＣＤＲ領域のみ
ならずＦＲ１およびＦＲ３領域にわたって頻繁であった。ＦＲ２領域には比較的
少ない突然変異があった。これらの１４のクローンの軽鎖パートナーは、重鎖よ
りもマッチしたＶ遺伝子とより大きな相同性を有し、突然変異のパーセンテージ
は０ないし５．９％の範囲であった。これらのクローンの軽鎖パートナーは、Ｊ
Ｋ２またはＪＫ４遺伝子いずれかと組合せて同一の軽鎖Ｖ遺伝子ＤＰＫ−２４を
用いた。
【０２７０】 突然変異分析 １４クローンからの推定アミノ酸配列を用いて、ＦＲおよびＣＤＲ領域内の置
き換えおよびサイレント突然変異を推定し（図４）、これらの値を用いて、ＦＲ
またはＣＤＲにおける置き換え突然変異がランダムではない確率を計算した。ラ
ンダム突然変異（置き換えまたはサイレント）は与えられた配列全体で均一に起
こり、他方、抗原駆動応答はしばしば局在化され、その結果、抗原選択によって
定義される選択圧に応じて、置き換え突然変異のより高いまたはより低い割合が
もたらされる（１１）。ＦＲおよびＣＤＲ領域における突然変異は抗原駆動選択
の結果として生じた確率を表ＩＩＩに示す。
【０２７１】 ＤＰ−７ Ｖ遺伝子から誘導された全ての重鎖は、予測されるよりもＦＲに置
ける置き換え突然変異のより低い割合の結果として０．０５未満のｐ値を有した
。これは、ＦＲにおける置き換え突然変異の抑制を伴った抗原−駆動Ｂ細胞選択
を示唆する。対照的に、同一クローンのＣＤＲ領域におけるＲ突然変異は、ラン
ダムで予測され得るよりも大きくなかった。マッチした軽鎖配列の分析は、クロ
ーン１６３．１６および１６３．２３のみがかなり異なる数のＲ突然変異を有す
ることを示した。これらの例において、パターンはＦＲでおこる陰性選択を持つ
重鎖を反映するが、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２領域における抗原駆動選択の明瞭な
証拠ではない。
【０２７２】 考察 これらの研究において、コンビナトーリアル抗体遺伝子ライブラリーおよびフ
ァージ提示を用いて、ｐ５３腫瘍サプレッサー遺伝子産物に対する特異性を持つ
高アフィニティーヒトＦａｂ断片を単離した。残基２７および４４の間のｐ５３
のアミノ末端領域に結合した単離Ｆａｂは、組換えｐ５３、および結直腸癌細胞
から免疫沈殿した突然変異体ｐ５３双方と反応性であった。この研究は、ｐ５３
に対する証明可能な抗体応答を持つ個体からの抗−ｐ５３抗体の単離の最初の報
告を表す。それ自体、それは、悪性疾患を持つヒトで観察された遺伝子用法およ
びｐ５３に対する免疫応答のエピトープ特異性についての重要な情報を提供する
。また、それは、有用な免疫治療剤としてのこれらの開発のための再現性のある
戦略も提供する。
【０２７３】 抗体ファージ提示技術は、ある範囲の感染性および自己免疫疾患に対する液性
免疫応答の性質および特異性を調べるのにますます使用されている。結直腸癌を
持つ幾人かの個体の血清中の抗−ｐ５３抗体の発生は、重要な腫瘍サプレッサー
遺伝子産物に対するこの応答の特異性をより精密に調査する機会を提供した。
【０２７４】 この研究では、結直腸腫瘍を排出する結腸周囲リンパ節からライブラリーを構
築した。というのは、この組織は抗−ｐ５３抗体の富化源を表すらしいと考えら
れた。特異的Ｆａｂを単離する確率をさらに増大させるため、本発明者らは、ｐ
５３蛋白質またはその部分に対する証明可能なＩｇＧ１応答を持つ個体を選択し
た。この点に関し、ｐ５３に対する高アフィニティーを持つ全てのそれらのＦａ
ｂは、最高のｐ５３に対する血清抗体力価を持つ個体から誘導され、および証明
可能な血清応答を持たない個体から抗体は単離されなかったことに注意されたい
。
【０２７５】 まず、この研究は、天然に生じるｐ５３抗体の遺伝的構造を調べ、それらを生
産した免疫応答の性質に関しその構造から推定する機会を提供した。
【０２７６】 ヌクレオチド配列決定は、ｐ５３ＦａｂのＶ遺伝子がかなりの突然変異（１４
ないし１８．５％）を受けることを示し、これは、Ｔｔｈ（ポリメラーゼ）誘導
エラーに基づいて説明できそうもない知見である（１２）。事実、Ｖ遺伝子突然
変異のこの頻度は、クラススイッチした生殖系中心および記憶Ｂ細胞（４％まで
）について報告されているものよりも高く、これは、単離された抗体がこれらの
個体における特異的抗原−駆動液性免疫応答の発生を反映することを強く支持す
る。特に高い突然変異の頻度は、悪性疾患を持つ個体における抗原暴露の慢性的
性質を反映し得る。免疫系に対するｐ５３提示のメカニズムは以前として確かで
はないが、当該プロセスは腫瘍の生成のプロセスにおいて初期に発生することは
明瞭である。例えば、血清ｐ５３抗体は、悪性疾患の検出に数年先立って喫煙者
で報告されている（１３）。これは、抗原性ｐ５３が病気の間中免疫系に対して
提示でき、この継続的暴露はＶ遺伝子におけるかなりの体細胞突然変異率の原因
で有り得ることを示唆する。
【０２７７】 Ｖ遺伝子における置き換え突然変異の頻度の統計学的解析は、単離されたＦａ
ｂが抗原−駆動選択の結果として生じるという争いを支持するさらなる証拠を提
供する。置き換え突然変異での陰性選択はＶＨ１ファミリー抗体のフレームワー
ク領域で観察され、ＣＤＲ１およびクローン１６３．１７の２におけるその陽性
選択はアフィニティ成熟抗体の典型的な特徴である。
【０２７８】 Ｆａｂの構造的特徴、それから誘導される推定は、表面プラズモン共鳴を用い
るアフィニティ分析によって支持される。単離されたＦａｂは、全て、変性ｐ５
３に対して比較的高い親和性を示し、これは、再度、それらが特異的抗原−駆動
免疫応答の産物を表すことを示唆する。
【０２７９】 安定なクローナルＦａｂの成功した単離もまた、天然に生じるｐ５３抗体のエ
ピトープ特異性のより精密な調査を可能とした。この実験で単離されたＦａｂは
、ｐ５３の残基２７−４４（ヒトｐ５３に対して圧倒的に特異的である領域）に
結合した（１４）。この領域は、転写マシーナリー、ならびにウイルス蛋白質と
の相互作用のための部位として特に重要である（１５）。今日、ｐ５３に対する
ほとんどのポリクローナル抗体血清およびネズミモノクローナルは、Ｎ−末端領
域（１０−２５、４０−５０）、中央領域（１２０−１３０、２０５−２１５、
２８５−２９５）およびＣ−末端領域（３４５−３９３）中の残基にわたる狭い
範囲の免疫優性エピトープに結合することが示されている。この研究は、癌を持
つ個体からのリンパ球がそのような抗体のユニークで価値ある源を表し、この重
要な源の首尾よい開発への戦略の概略を示すことを示す。
【０２８０】 実施例２ ｐ５３の中央ドメインに対する抗−ｐ５３抗体の単離および特徴付け 材料および方法 ｐ５３中央およびカルボキシ末端ドメインの精製 全ｐ５３の中央カルボキシ末端ドメイン（中央ドメイン、残基９５−２９８；
カルボキシ末端ドメイン、２８３−３９３）を、ｐ５３特異的プライマー（中央
順方向、５’−ｇｇｃｃｃｃａｔａｔｇｔｃｔｔｃｔｇｔｃｃｃｔｔｃｃｃａｇ
；中央逆方向、５’−ａｇｔｃａｔａｔｇｔｃａｃａｇｃｔｃｇｔｇｇｔｃａｇ
ｇｃｔｃ；カルボキシ順方向、５’−ｇａｇａｃｃａｔａｔｇａｃａｇａｇｇａ
ａｃａｇａａｔｃｔｃ；カルボキシ逆方向、５’−ａｇｔｃａｔａｔｇｔｃａｇ
ｔｃｔｇａｇｔｃａｇｇｃｃｃ）を用いるＰＣＲによって野生型ｐ５３配列から
増幅した。ＰＣＲ産物をＮＤＥ１で消化し、細菌発現ベクターｐＥＴ１９ｂ（Ｎ
ｏｖａｇｅｎｅ）のＮＤＥ１部位にクローンした。中央およびカルボキシ末端ド
メインを発現させ、全ｐ５３について記載したごとく精製した。
【０２８１】 精製した中央ドメインおよびカルボキシ末端ドメイン蛋白質を、中央またはカ
ルボキシ末端ドメイン特異的血清抗体を持つ結直腸癌患者の同定、Ｆａｂ抗体の
バイオパニング、および可溶性中央ドメイン反応性Ｆａｂの検出で用いた。これ
を行うためのプロトコルは、中央ドメインまたはカルボキシ末端ドメインをＰＢ
Ｓ中２μｇ／ｍｌにてマイクロタイタープレートのウェルにコートした以外は実
施例１に記載したのと実質的に同一である。
【０２８２】 交差反応性ＥＬＩＳＡで用いる抗原を、カルコネート緩衝液中２μｇ／ｍｌで
コートしたｐ５３のカルボキシ末端ドメインおよびＰＢＳ中２μｇ／ｍｌでコー
トした初期妊娠因子（ＥＰＦ）を除き前記した（実施例１）のと同一濃度でコー
トした。
【０２８３】 免疫ブロット分析 ＳＤＳ／ＰＡＧＥゲルで泳動させた精製全ｐ５３および中央ドメインを、１０
０Ｖにて１時間、ＰＶＤＦ膜（０．２２μＭ、ＮＥＮ／Ｄｕｐｏｎｔ）に電気ブ
ロットし、（Ｔｏｗｂｉｎら， １９７９）、１０％スキムミルク粉末／ＰＢＳ
中で１時間ブロックした。一次抗体ＤＯ７（１０％スキムミルク粉末／ＰＢＳ中
０．２５μｇ／ｍｌ）、Ｐａｂ２４０ ＤＯ７（１０％スキムミルク粉末／ＰＢ
Ｓ中０．２５μｇ／ｍｌ）、１６３．１ Ｆａｂ細菌上清または１１５９．８上
清を、次いで、室温にて一時間インキュベートした。これに続き、該膜をＰＢＳ
中で３回洗浄し（洗浄ごとに１０分）、アルカリ性フォスファターゼヤギ抗−マ
ウスまたはアルカリ性フォスファターゼヤギ抗ヒトＦａｂ（１０％スキムミルク
粉末ＰＢＳ中０．１μｇ／ｍｌ）と共に１時間インキュベートし、次いで、ＰＢ
Ｓで３回洗浄した。該膜を、アルカリ性フォスファターゼ基質溶液（炭酸緩衝液
ｐＨ９．６中ＮＢＴ［０．３μｇ／ｍｌ］、ＢＣＩＰ［０．１５μ２ｇ／ｍｌ］
）の添加に先立って５分間で炭酸緩衝液で平衡化させた。
【０２８４】 結果 中央ドメイン反応性クローンの単離 純粋なｐ５３中央ドメイン蛋白質 に対して５ラウンドのバイオパニングを行
った。最終ラウンドのパニングから採取したクローンからの可溶性Ｆａｂ（ｎ＝
８８）を、ＥＬＩＳＡによって蛋白質に対する反応性につき評価した。単一のク
ローン（１１５９．８）が中央ドメインに対して全ｐ５３に対して反応性である
ことが判明した（図１１）。さらなる分析は、１１５９．８が、腫瘍抗原、自己
蛋白質、外来性蛋白質およびハプテンを含めたある範囲の他の抗原と反応しない
ことを明らかとし、ｐ５３の中央ドメインに対するこのクローンの特異性が確認
され得（図１２）。
【０２８５】 また、全ｐ５３および中央ドメインに結合する該クローンの能力をイムノブロ
ットによって評価した（図１３）。１１５９．８は、ネズミモノクローナル抗体
ＤＯ７およびＰａｂ２４０と同様に全ｐおよび中央ドメインに結合したことが示
された。これらのネズミモノクローナル抗体は、各々、ｐ５３のアミノ末端およ
び中央ドメインに対して特異的である。アミノ末端反応性Ｆａｂクローン１６３
．１で中央ドメイン反応性は観察されず、このドメインに対する１１５９．８の
特異性が確認される。クローン１１５９．８のヌクレオチド配列および推定アミ
ノ酸配列は、各々、１１５９．８軽鎖可変配列および１１５９．８重鎖可変配列
についての配列番号２９および３０に見い出すことができる。
【０２８６】 実施例３−哺乳動物発現ベクター ＭＣＯ１の構築 等濃度（１μｇ）の２つの合成オリゴヌクレオチド９９量体（センス：ＣＴ
ＡＧＴ ＧＧＣ ＣＡＧ ＧＣＣ ＧＧＣ ＣＡＧ ＧＡＡ ＣＡＡ ＡＡＡ
ＣＴＣ ＡＴＣ ＴＣＡ ＧＡＡ ＧＡＧ ＧＡＴ ＣＴＧ ＡＡＴ ＧＧＧ
ＧＣＣ ＧＣＡ ＴＡＧ ＴＴＣ ＣＣＣ ＧＧＧ ＧＣＴ ＧＣＴ ＣＡＣ
ＴＡＴ ＡＣＧ ＣＧＣ ＣＡＧ ＧＡＧ Ｇ）および９１量体（アンチセンス
：ＣＴＧ ＧＣＧ ＣＧＴ ＡＴＡ ＧＴＧ ＡＧＣ ＡＧＣ ＣＣＣ ＧＧＧ
ＧＡＡ ＣＴＡ ＴＧＣ ＧＧＣ ＣＣＣ ＡＴＴ ＣＡＧ ＡＴＣ ＣＴＣ
ＴＴＣ ＴＧＡ ＧＡＴ ＧＡＧ ＴＴＴ ＴＴＧ ＴＴＣ ＣＴＧ ＧＣＣ
ＧＧＣ ＣＴＣ ＧＣＣ Ａ）を、７５℃にって２分間加熱し、続いて１．５
時間にわたって３５℃まで冷却することによってＳｅｑｕａｎａｓｅ反応緩衝液
（ＵＳＢ）中でアニールした。次いで、二本鎖オリゴヌクレオチド（３０ピコモ
ル）を、２７℃で６０分間、１０ｍＭ ＡＴＰ、１×ポリヌクレオチドキナーゼ
緩衝液および１０Ｕポリヌクレオチドキナーゼ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎ
ｎｈｅｉｍ）中でインキュベートすることによってリン酸化した。該キナーゼを
不活化し、ＤＮＡをフェノール抽出し、エタノール沈殿させ、２０μｌの水に再
懸濁させた。次いで、二本鎖オリゴヌクレオチドをホスファターゼ−処理したＳ
ｐｅＩ／ＢｓｔＸＩ消化のＮＰＣ３に連結し、構築体を電気ポテントＸＬ１−Ｂ
ｌｕｅ Ｅ． ｃｏｌｉ細胞（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に形質転換した。合成オ
ルゴヌクレオチドカセットを含有するクローンを、次いで、制限酵素分析（ＭＣ
Ｏ１は、ＮＰＣ３に存在しないＳｍａＩ部位を含有する）によって、およびヌク
レオチド配列決定（Ｓａｎｇｅｒ）によって同定した。
【０２８７】 実施例４ 全抗体の構築 材料および方法 全抗体のクローニングおよび生産のための戦略を図５に示す。選択されたＦａ
ｂクローンからの重鎖および軽鎖可変領域を、タッチダウンプロトコルを用いる
ＰＣＲによって増幅した。典型的な反応は、鋳型ＤＮＡ（１００ｎｇ）、５０ピ
コモルの各ＰＣＲプライマー（重鎖プライマー、ｐ５３Ｖｈｆｏｒ−５’−ａｔ
ａ ｇｔｔ ｇｃｇ ｇｃｃ ｇｃｔ ｇｔｇ ｃａｇ ｃｔｇ ｃｔｃ ｇａ
ｇおよびｐ５３Ｖｈｒｅｖ ５’−ａｇｔ ｔｔｃ ａｃｔ ａｇｔ ｔｇａ
ｇｇａ ｇａｃ ｇｇｃ；軽鎖プライマー、ｐ５３Ｖｋｆｏｒ ５’−ｔｔａ
ｃａｔ ｇｔｃ ｇａｃ ｇｃｇ ｇｃｃ ｇａｇ ｃｔｃ ａｃｃ およびｐ
５３Ｖｋｒｅｖ：５’−ｃｃｃ ｔｇｇ ｔｔｃ ｇａｃ ｃｔｔ ｔａｇ ｔ
ｔｔ ａｇａ ｔｃｔ ａｃｔ ｇａｔ）、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2、２００μ
Ｍ ｄＮＴＰ、０．１２Ｕ Ｐｆｕポリメラーゼを５０μｌの容量中に含んだ。
ＰＣＲについての条件は４分間の９４℃、次いで、２サイクルの３０秒間の９４
℃（変性）、１分間の６５℃（プライマーアニーリング）、９０秒間の７２℃（
プライマー延長）であった。次いで、アニーリング工程を各連続したラウンドで
０．５℃だけ低下させた以外は同一の条件下で、さらに２０サイクルを行った。
次いで、最後の１０ＰＣＲサイクルを５５℃のアニーリング温度で行った。
【０２８８】 重鎖および軽鎖ＰＣＲ産物を０．８％（ｗ／ｖ）Ｎｕｓｉｅｖｅアガロースで
電気泳動し、Ｑｉａｑｕｉｃｋ ＤＮＡ精製からの（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精
製し、適切な制限エンドヌクレアーゼ（重鎖、Ｎｏｔ１およびＳｐｅ１；軽鎖、
Ｓａｌ１およびＸｂａ１）で消化した。次いで、精製された重鎖を重鎖発現ベク
ターｔＧ１Ｄ１０５にクローンし、軽鎖を軽鎖発現ベクターｅＫＮ１０１にクロ
ーンした（図５）。製造業者の仕様に従って（Ｐｒｏｎｅｇａ）、個々の重鎖お
よび軽鎖クローンの配列を配列決定法によって決定した。選択された重鎖および
軽鎖クローンをＸＬ１−ｂｌｕｅ Ｅ．ｃｏｌｉで増殖させ、プラスミドをアル
カリ溶解によって抽出し、次いで、ＣｓＣｌグラジエント遠心によって二重精製
した。
【０２８９】 ＣＨＯ細胞系を発現する抗体のトランスフェクションおよび選択 親細胞系ＣＨＯ ＤＧ４４を６×１０5細胞／皿にて１０ｃｍのさらに接種し
、ＨＴ（１０ｍＭナトリウムヒポキサンチン、１．６ｍＭチミジン）を補足した
ＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭ ＩＩ（Ｇｉｂｃｏ）中で増殖させた。重鎖（ｐＧ１Ｄ１０
２）および軽鎖（ｐＫＮ１００）を含有するベクターを、製造業者の仕様に従い
Ｆｕｇｅｎｅトランスフェクション試薬（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅ
ｉｍ）を用いてＣＨＯ ＤＧ４４にトランスフェクトした。簡単に述べれば、等
しい量の重鎖および軽鎖ベクター（１ないし５μｇのＤＮＡ合計）を１：３のＤ
ＮＡ：Ｆｕｇｅｎｅ比率にてＦｕｇｅｎｅに添加し、室温で１０分間混合した。
Ｆｕｇｅｎｅ／ＤＮＡ混合物を培地および細胞に滴下し、次いで、一晩インキュ
ベートした。
【０２９０】 メトトレキセート（５ｎＭ）およびＧ４１８（５００μｇ／ｍｌ）を含有する
ＣＨＯ−Ｓ−ＳＦＭ−ＩＩにトランスフェクトされた細胞を継代し、抗体を発現
したトランスフェクタントのプールを、引き続いて、０．５細胞／ウェルの細胞
密度にて平板培養した。メトトレキセートの濃度を各継代で増加させ（５ないし
５０ｎＭ）、Ｇ４１８のレベルを、徐々に、同一時間にわたって培養基から除去
した。特異的クローンを増殖させ、次いで、０．５細胞／ウェルにおけるもう１
つのラウンドのクローニングに付して、細胞のクローン集団が生成したことを確
認した。全抗−ｐ５３抗体の生産用に選択したクローン（Ａ１、Ｂ４）をＧ４１
８またはメトトレキセートを含まない培地中に維持した。
【０２９１】 全抗体生産および精製 選択された細胞系を細胞培養およびスピナーフラスコ（１×１０5−２×１０6 細胞／ｍｌ）中で５ないし１０日間にわたって培養し、次いで、培養基および細
胞をまず１２００ｇにて遠心して、ほとんどの細胞を除去し、次いで、４０００
ｇにて１５分間再度遠心して他の細胞夾雑物を除去した。
【０２９２】 プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーを用い、抗体を培養上清から
精製した。簡単に述べれば、１ｍｌのプロテインＡ（ＢｉｏＲａｄ ＡｆｆｉＰ
ｒｅｐプロテインＡ樹脂）を含有するカラムを５０ｍｌのＰＢＳで平衡化させ、
上清を重力下でカラムに流した。次いで、樹脂を重力下で１０ｍｌのＰＢＳで洗
浄した。抗体を１０ｍｌの０．１Ｍグリシン／０．２Ｍ ＮａＣｌ ｐＨ３で溶
出させ、０．５ｍｌずつの画分に収集し、その各々を５０μｌの１ＭトリスＨＣ
ｌ、ｐＨ８でｐＨ７に調製した。精製した抗体を全ての抗体特徴付けで用いた。
【０２９３】 精製した全抗体を検出し、抗−ヒト抗体捕獲ＥＬＩＳＡを用いて定量した。マ
イクロタイタープレートのウェルを、４℃にて一晩、１００μｌのヤギ抗−ヒト
ＩｇＧ Ｆｃ特異的抗体（０．１ Ｍ ＮａＨＣＯ3／０．１％Ｂｒｏｎｉｄｏ
ｘ）でコートした。次いで、ウェルを２００μｌのＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅ
ｎ／０．１％Ｂｒｏｎｉｄｏｘで３回洗浄し、３７℃にて１時間で、ＰＢＳ／１
％スキムミルク／０．５％ＢＳＡ／０．１％Ｂｒｏｎｉｄｏｘでブロックした。
ヒト抗体の系列希釈（１：２ないし１：２０００）をウェルに適用し、３７℃に
て１時間インキュベートした。次いで、ウェルをＰＢＳ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ
／０．１％Ｂｒｏｎｉｄｏｘで３回洗浄し、３７℃にて３０分間、１００μｌの
ビオチン結合抗−ヒトカッパ（ＰＢＳ／１％スキムミルク／０．５％ＢＳＡ／０
．１％Ｂｒｏｎｉｄｏｘ中０．５μｇ／ｍｌ；Ｒｏｃｋｌａｎｄ， ＭＡ， Ｕ
ＳＡ）と共にウェルをインキュベートした。ウェルを３回洗浄し、１００μｌの
アルカリ性ホスファターゼ結合ストレプトアビジン（ＰＢＳ／１％スキムミルク
／０．５％ＢＳＡ／０．１％Ｂｒｏｎｉｄｏｘ中０．０４ｍｇ／ｍｌ；Ｊａｃｋ
ｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓａｒｃｈ Ｌａｂ Ｉｎｃ）を３７℃にて３０分
間で各ウェルに添加した。さらなる洗浄後、ｐ−ニトロフェニルアルカリ性ホス
ファターゼ基質（炭酸緩衝液中１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ）を添加し、約２０分
間で色を発色させ、吸光度を４１０ｎｍで読んだ。６５ないし０．４ｎｇ／ｍｌ
の範囲の濃度に希釈した陽性対照ＩｇＧ１抗体（Ｔｈｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉ
ｔｅ， ＵＫ）を用いて生じた標準曲線と未知の吸光度値を比較することによっ
て、抗体の濃度を計算した。
【０２９４】 全抗体の特徴付け 抗−ｐ５３抗体のＥＬＩＳＡ分析 精製ｐ５３（ＰＢＳ中にμｇ／ｍｌの１００μｌ）、ｐ５３の中央ドメイン（
ＰＢＳ中にμ／ｍｌの１００μｌ）およびＣ−末端ドメイン（炭酸緩衝液中２μ
／ｍｌの１００μｌ）を４℃にて一晩、マイクロタイタープレートのウェルにコ
ートした。ウェルを２００μｌのＰＢＳで３回洗浄し、１００μｌの精製抗体を
二連で適応し、室温にて２時間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、１０
０μｌのＨＲＰ結合ヤギ抗−ヒト（ＰＢＳ／２％ＢＳＡ中０．５μｇ／ｍｌ：Ｊ
ａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓａｒｃｈ Ｌａｂ Ｉｎｃ）抗体を添加し
た。さらなる洗浄の後、１００μｌのＴＭＢ基質（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎ
ｄ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ Ｍ
Ｄ）で色を発色させ、５０μｌの１Ｍ硫酸で反応を停止させた。この抗体をＨＲ
Ｐ結合ヤギ抗−マウス（ＰＢＳ／２％ＢＳＡ中０．５μｇ／ｍｌ：Ｊａｃｋｓｏ
ｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓａｒｃｈ Ｌａｂ Ｉｎｃ）でこの抗体を検出した以
外は同様の条件下で、モノクローナル抗体ＤＯ７（０．１μｇ／ｍｌ）を陽性対
照として用いた。
【０２９５】 ｐ５３抗体と他の抗原との反応性を、ｐ５３で前記したのと同様の方法を用い
るＥＬＩＳＡによって評価した。以下の抗原および濃度をウェルのコーティング
で用いた：インスリン（５μｇ／ｍｌ）、ｅｒｂＢ２細胞外ドメイン（２μｇ．
ｍｌ）、ＣＥＡ（１μｇ／ｍｌ）、ＢＳＡ（２０μｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌ
ｄｒｉｃｈ， Ｃａｓｔｌｅｈｉｌｌ， Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、キーホールリ
ンペッドヘモシアニン（１μｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＢＳＭ
（１０μｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ−Ａｒｄｒｉｃｈ， Ｃａｓｔｌｅｈｉｌｌ，
Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、雌鳥卵白リゾチウム（１０μｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ−Ａ
ｌｄｒｉｃｈ， Ｃａｓｔｌｅｈｉｌｌ， Ａｕｓｔｒａｌｉａ）および初期妊
娠因子（１０μｇ／ｍｌ）。
【０２９６】 エピトープ分析 ｐ５３遺伝子−断片ライブラリーの構築 ｐ５３遺伝子を、ｐＥＴ１９ｂ／ｐ５３構築体（７）からＰＣＲ増幅し、０．
８％Ｎｕｓｉｅｖｅゲル上で泳動させ、Ｑｉａｑｕｉｃｋ ＤＮＡ精製カラムを
用いて精製した。遺伝子断片をＤＮａｓｅ Ｉ（０．５Ｕ／ｍｌ）で消化し、１
００ないし３００塩基対の間のｐ５３遺伝子断片をゲル−精製し、Ｔ4ＤＮＡポ
リメラーゼを用いて末端−再対合させた。リン酸化リンカーＦＵＳＰ（１６）を
平滑末端とし、ｐ５３遺伝子断片に連結し、１２．５μｌの１０×ＰＣＲ緩衝液
（Ｆｉｓｈｅｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ， Ｐｅｒｔｈ， Ａｕｓｔｒａｌｉａ）、１
２．５μｌの２５ｍＭ ＭｇＣｌ2、２０μｌの１．２５ｍＭ ｄＮＴＰ、２．
５Ｕ Ｔｔｈポリメラーゼ（Ｆｉｓｈｅｒ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｐｅｒｔｈ，Ａｕ
ｓｔｒａｌｉａ）および２５０ピコモルの各プライマー：ＭＣＯ２３４（５’−
ａｔａｔｃｃａｇａｃｇｃｔｇｇｃｇｇｔｇ）およびＭＣＯ２３５（５’−ＡＴ
ＡＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＧＧＣＧＧＴＧ）を含有する７５μｌ混合物中で、連結
した産物をＰＣＲ増幅した。５分間の９４℃で出発し、続いて、１分間の９４℃
、３０秒間の６０℃、３０秒間の７２℃の３５サイクルの増幅、次いで、１０分
間の７２℃の最終インキュベーションを行い、Ｐａｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｇｅ
ｎｅＡｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ９６００ を用いてＰＣＲ反応を行った。
ＰＣＲ増幅断片をゲル精製し、Ｐｆｌ Ｍｉ（ＤＮＡの５ｕ／μｇ）で消化し、
ＳｆlＩ（５ｕ／μｇのＤＮＡ）消化ｆＵＳＥ５ベクターＤＮＡに連結した（１
７）。Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｇｅｎｅ Ｐｕｌｓｅｒを用い、連結混合物をＭＣ１０
６１に電気形質転換した。ライブラリーのサイズを測定するために、１および１
０μｌの培養のアリコットを、テトラサイクリン（２０μｇ／ｍｌ）およびスト
レプトマイシン（５０μｇ／ｍｌ）を含有するルリアブロス寒天プレート上で平
板培養した。残りの培養を、テトラサイクリン（２０μｇ／ｍｌ）およびストレ
プトマイシン（５０μｇ／ｍｌ）を補足した４００ｍｌの２ＹＴ中で一晩増殖さ
せた。ファージを精製し、Ｓｍｉｔｈによって記載されているごとく力価測定し
た（１８）。
【０２９７】 ｐ５３遺伝子断片ライブラリーのアフィニティー選択 マイクロタイタープレートのウェルを、ＰＢＳ中の１００μｌの抗−ｐ５３抗
体（１０μｇ／ｍｌ）で４℃にて一晩コートした。溶液を除去し、ウェルを０．
０５％Ｔｗｅｅｎ／ＰＢＳで３回洗浄し、次いで、３７℃にて１時間、０．０５
％Ｔｗｅｅｎおよび２％スキムミルクを含有するＰＢＳでブロックした。０．０
５％Ｔｗｅｅｎおよび２％スキムミルクを含有するＰＢＳ中１０11ＴＵ／１００
μｌに希釈したｐ５３遺伝子断片ライブラリーを添加し、プレートを３７℃にて
１時間インキュベートした。未結合ファージを、０．０５％Ｔｗｅｅｎ／ＰＢＳ
中での５回の、ＰＢＳ／０．５％Ｔｗｅｅｎ中での５回の洗浄によって除去した
。室温にて、結合したファージを１００μｌの０．１Ｍグリシン、ｐＨ３．０で
１０分間溶出させ、溶出物を１０μｌの１Ｍトリス−ＨＣｌ、ｐＨ９．５で直ち
に中和した。中和したファージ溶液を用いて、３７℃にて１５分間、１ｍｌの中
期対数期間のＫ９１Ｋａｎ培養を感染させた。テトラサイクリン（０．２μｇ／
ｍｌ）を含有する１０ｍｌの２ＹＴ中、３７℃にて、さらに３０分間、培養をイ
ンキュベートした。１００、１および０．０１μｌの培養のアリコットを、テト
ラサイクリン（２０μｇ／ｍｌ）およびカナマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を含
有するルリアブロス寒天に平板培養して、各アリコットのコロニー形成単位およ
び感染後力価を測定した。残存する感染培養を、テトラサイクリン（２０μｇ／
ｍｌ）およびカナマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を含有する１００ｍｌの２ＹＴ
に添加し、次いで、震盪しつつ一晩インキュベートしてライブラリーを増幅させ
た。ファージを沈殿させ、第２ラウンドのパニングで用いた。３ラウンドのパニ
ングを行った。
【０２９８】 ファージＥＬＩＳＡによる陽性クローンスクリーニング 各ラウンドのパニングのアウトプットからの単一コロニーを一晩増殖させ、フ
ァージを単離した。マイクロタイタープレートのウェルを、パニングで用いるの
と同一条件下で抗−ｐ５３抗体でコートした。新たに調製したファージ（１０10 −１０11ｃｆｕ／ｍｌ）をコートしたおよびコートしていないウェル上で１時間
インキュベートし、次いで、０．０５％Ｔｗｅｅｎ／ＰＢＳで洗浄した。ＰＢＳ
で洗浄した後、１００μｌのＨＲＰ結合マウス抗−Ｍ１３（ＰＢＳ／２％ＢＳＡ
中０．５μｇ／ｍｌ：Ｐｈａｒｍａｃｉａ）抗体を添加し、室温で１時間インキ
ュベートした。さらに洗浄した後、１００μｌのＴＭＢ基質（Ｋｉｒｋｅｇａａ
ｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕ
ｒｇ ＭＤ）で色を発色させ、５０μｌの１Ｍ硫酸で反応を停止させた。
【０２９９】 免疫沈殿 以下の細胞系を免疫沈殿：ＨＴ２９（突然変異体ｐ５３を含むヒト結直腸癌細
胞系）で用いた。ＭＣＦ−７（野生型ｐ５３を持つ乳癌細胞系）およびＭｅｔｈ
Ａ（突然変異体ｐ５３を持つマウス腫瘍細胞系）。ほぼ１０7細胞をＴＮＥＳ緩
衝液（５０ｍＭトリス ｐＨ７．５， ２ｍＭ ＥＤＴＡ， １００ｍＭ Ｎａ
Ｃｌ、 １％ノニデッドＰ４０， プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｂｏｅｈｒｉ
ｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）および１ｍＭ ＰＭＳＦ）中で溶解させ、次いで
、１００００ｇでの１０分間の遠心によって細胞夾雑物を除去した。細胞溶解物
からのほぼ２５０μｇの全蛋白質を各免疫沈殿で用いた。モノクローナル抗体Ｄ
Ｏ７（０．５μｇ）または全抗−ｐ５３抗体（ほぼ１μｇ／ｍｌ）のいずれかを
溶解物に添加し、４℃にて１時間インキュベートした。この時点で、２０μｌ（
充填容量）のプロテインＡ−セファロース（Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ Ｉｎｃ．）を全てのチューブに添加し、４℃にてさらに１時間インキュベ
ートした。プロテインＡセファロースをＰＢＳで４回洗浄し、変性および還元条
件下で１０％ＳＤＳ ＰＡＧＥに付した。エレクトロブロッティングによって、
蛋白質をＰＶＤＦ膜に移し、１０％スキムミルク粉末でブロックし、蛋白質のＮ
−末端につき特異的なヤギ抗−ヒトｐ５３抗体（０．２μｇ／ｍｌ）でプローブ
した。これに続き、ＰＢＳで４回洗浄し、ＨＲＰ結合ロバ抗−ヤギ抗体（０．２
μｇ／ｍｌ）と共に１時間インキュベートし、ＰＢＳで４回洗浄した。ケミルミ
ネセンス基質（ＤｕＰｏｎｔ ＮＥＮ）を用いてブロットを発色させた。プロテ
インＡセファロース単独、および抽出物単独は、各々、陰性対照として全ての実
験に含ませた。
【０３００】 免疫組織化学 結直腸腫瘍組織の４μｍパラフィン切片を脱ろうし、再度水和し、３％（ｖ／
ｖ）過酸化水素で５分間処理し、次いで、０．０１Ｍクエン酸緩衝液ｐＨ６．０
中で１０分間マイクロ波処理した。次いで、全抗−ｐ５３抗体（Ｃ４Ｂ４）また
はモノクローナル抗体ＤＯ７（共に２％ＢＳＡ／ＴＢＳ中２．５μｇ／ｍｌに希
釈）いずれかと共に１時間インキュベートする前に、該切片を正常ウサギ血清（
２％ＢＳＡ／ＴＢＳ中１：５）で２０分間ブロックした。次いで、ホースラディ
ッシュペルオキシダーゼ結合ウサギ抗ヒトまたはホースラディッシュペルオキシ
ダーゼ結合ウサギ抗−マウス（２％ＢＳＡ／ＴＢＳ中１：１００）と共にスライ
ドを３０分間インキュベートすることによって、結合した抗体を検出した（各々
３０分間）。各インキュベーションの後、ＴＢＳ中で十分洗浄した。３−３’−
ジアミンベンジジン：４塩酸塩（０．００３％過酸化水素中０．０３％）で色を
発色させ、設置する前に切片をヘマトキシリンで逆染色した。
【０３０１】 全抗体の構築および特徴付け 発現ベクターｐＫＮ１００およびｐＧ１Ｄ１０２にクローンした可変領域遺伝
子を配列決定し、親Ｆａｂクローンと同一の配列を有することが示された。ＣＨ
Ｏ細胞を、ベクターおよび２つのクローン、トランスフェクタントのプールから
のＣ４Ｂ４およびＣ４Ａ１で首尾よくトランスフェクトした。ＥＬＩＳＡによっ
て分析すると、両クローンからの抗体は全ｐ５３と反応するが、当該蛋白質の中
央またはＣ−末端ドメインとは反応しないことが示され、これは、それらがアミ
ノ末端領域単独と反応性であることを示す。プロテインＡクロマトグラフィーを
用いて、クローンＣ４Ｂ４からの抗体を精製し、還元および非還元条件下でＳＤ
Ｓ ＰＡＧＥによって分析し、正しいサイズの重鎖および軽鎖を持つ全抗体を生
じることが示された（図６）。精製抗体は、ハプテン、自己抗原および腫瘍抗原
を含めたある範囲の抗原との交差反応性につきＥＬＩＳＡによって評価した。抗
体Ｃ４Ｂ４は全ｐ５３に結合するが、アッセイで用いた他の抗原には結合しない
ことが判明した（図７）。Ｃ４Ｂ４からの抗体生産はＣ４Ａ１から得られたもの
よりも高く、従って、このクローンを最終ラウンドのクローニングに付して、Ｃ
４Ｂ４Ｇ４というクローンを得た。
【０３０２】 ヒト細胞系ＨＴ２９およびＭＣＦ−７、およびマウス細胞系ＭｅｔｈＡを用い
て、真核生物細胞から誘導されたｐ５３に対する全抗体の反応性を評価した。Ｃ
４Ｂ４は、ｐ５３モノクローナル抗体ＤＯ７と同様に、野生型および突然変異体
ｐ５３ならびに突然変異体ネズミｐ５３を免疫沈殿させることができることが示
された（図８）。
【０３０３】 エピトープ分析 ｐ５３遺伝子断片ライブラリーを、精製Ｃ４Ｂ４抗体に対する３ラウンドのパ
ニングに付した。ラウンド２および３からのファージクローンのＣ４Ｂ４に対す
る反応性についての分析は、ラウンド２における１５／２２クローンおよびラウ
ンド３からの１９／２２が抗体に結合したことを示した。反応性クローンの配列
分析は、それらが、全て、４０ないし５４のアミノ酸残基を含有するｐ５３の断
片を含有することを示した（図９）。欠失突然変異体および親Ｆａｂ抗体１６３
．５を用いる実験で定義されたエピトープと比較すると、該エピトープは４０な
いし４４からの残基を含むと定義する。
【０３０４】 免疫組織化学 精製Ｃ４Ｂ４Ｇ４抗体を用いて、結直腸癌を持つ個人からの腫瘍組織およびマ
ッチした正常組織の４μｍ切片中のｐ５３を検出した。抗体は腫瘍細胞と特異的
に反応性であり、それは陽性対照抗体ＤＯ７と同様の核染色パターンを有するこ
とが示された（図１０）。
【０３０５】 実施例５−ｐ５３検出系 本発明の抗体またはその断片は、正常および病気状態の脊椎動物においてｐ５
３遺伝子によってコードされたポリペプチドの検出で用いることができる。例え
ば、抗体を用いて、以下のように患者試料からのｐ５３蛋白質を捕獲することが
できる。
【０３０６】 抗−ｐ５３Ｆａｂのごとき抗−ｐ５３抗体またはその断片を、約２μｇ／ｍｌ
の溶液を用い、適当な表面（例えば、ＥＬＩＳＡプレート、ポリソーブ−イミュ
ノプレー（ＮＵＮＣ， Ｄｅｎｍａｒｋ））にコートする。次いで、これを、表
面をリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する前に、約２％（ｗ／ｖ）の濃
度のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロックする。患者の試料を添加し、除去
する前に適当な時間インキュベートし、表面を再度ＰＢＳで洗浄する。次いで、
レポーター分子（例えば、アルカリ性ホスファターゼ、ホースラディッシュペル
オキシダーゼＦＩＴＣ）に結合したｐ５３特異的ポリクローナル抗体を添加し、
しかる後、表面を再度ＰＢＳまたは他の緩衝液で洗浄した。次いで、レポーター
分子に適した基質（例えば、ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）と共に５−
ブロモ−４−クロロ−３−インドリルホスフェート（ＢＣＩＰ）、３，３’，５
，５’−テトラメチルベンジジン二塩化物（ＴＭＢ））を添加して、結合したｐ
５３蛋白質を可視化し、必要に応じて、それを定量する。
【０３０７】 実施例６−医薬組成物 本発明の抗体またはその断片を単独で投与するのはもちろん可能であるが、そ
れは医薬処方として投与するのが好ましい。有効成分は、局所投与では、処方の
０．００１重量％ないし１０重量％、例えば、１重量％ないし５重量％を含むこ
とができるが、それは処方の１０重量％もと多く、しかしながら、好ましくは５
重量％過剰ではなく、より好ましくは０．１重量％ないし１重量％を含むことが
できる。
【０３０８】 本発明の局所処方は、１以上の許容される担体、および所望によりいずれかの
他の治療成分と共に有効成分を含む。担体は処方の他の成分に適合する意味で「
許容される」ものでなければならず、その受容者に有害であってはならない。
【０３０９】 局所投与に適した処方は、リニメント、ローション、クリーム、軟膏またはペ
ースト、および目、耳または鼻への投与に適した点剤のごとき、治療が必要な部
位への皮膚を通しての浸透に適した液体または半液体製剤を含む。
【０３１０】 本発明の点剤は滅菌水性もしくは油性溶液もしくは懸濁液を含むことができる
。これらは、有効成分を、殺菌および／または殺菌類剤および／またはいずれか
の他の適当な保存剤（所望により、界面活性剤を含む）の水溶液に溶解させるこ
とによって調製することができる。次いで、得られた溶液を濾過によって透明化
し、適当な容器に移し、滅菌することができる。滅菌は、９０℃ないし１００℃
にて３０分間オートクレーブ処理し、または維持することによって、あるいは濾
過し、続いて無菌技術により容器に移すことによって達成することができる。点
剤に含めるのに適した殺菌剤および殺菌類剤の例は硝酸もしくは酢酸フェニル水
銀（０．００２％）、塩化ベンザルコニウム（０．０１％）および酢酸クロルヘ
キシジン（０．０１％）である。油性溶液の調製に適した溶媒はグリセロール、
希釈されたアルコールおよびプロピレングリコールを含む。
【０３１１】 本発明によるローションは、皮膚または目への適用に適したものを含む。目ロ
ーションは所望により殺菌剤を含有する滅菌水性溶液を含むことができ、点剤の
調製に関して前記したのと同様の方法によって調製することができる。皮膚への
適用のためのローションまたはリニメントは、アルコールまたはアセトンのごと
き、乾燥を速め、皮膚を冷却するための剤、および／またはグリセロールのごと
きモイスチャーライザー、またはヒマシ油または落花生油のごときアルコールを
含むこともできる。
【０３１２】 本発明のクリーム、軟膏またはペーストは、外用のための有効成分の半固体処
方である。それらは、有効成分を、グリースまたは非グリース基剤と共に、微粉
砕または粉末形態単独または水性または非水性流体中の溶液または懸濁液に混合
することによって作成することができる。該基剤は、プロピレングリコールまた
はマクロゴールのごときアルコールと共に、ハード、ソフトまたは流動パラフィ
ン、グリセロール、ミツロウ、金属セッケンのごとき炭化水素、粘液；アーモン
ド、トウモロコシ、落花生、ひましまたはオリーブ油のごとき天然起源の油；羊
毛脂質またはその誘導体、ステアリン酸またはオレイン酸のごとき脂肪酸を含む
ことができる。
【０３１３】 処方は、ソルビタンエステルまたはポリオキシエチレン誘導体のごときアニオ
ン性、カチオン性または非イオン性界面活性剤のようないずれかの適当な界面活
性剤を配合することができる。天然ガムのごとき懸濁化剤、セルロース誘導体ま
たはシリカ質シリカのごとき無機材料ならびにラノリンのごとき他の成分を含め
ることができる。
【０３１４】 さらに、本発明の抗体（またはその断片）の個々の投与の最適量および間隔は
、治療すべき疾患の性質および程度、投与の形態、経路および部位、および治療
すべき特定の脊椎動物の性質によって決定されるであろうことは当業者に明らか
であろう。また、そのような最適条件は通常の技術によって決定することができ
る。
【０３１５】 また、規定された日数の間における一日当たりに与えられる本発明の抗体（ま
たはその断片）の投与の数のごとき治療の最適コースは、治療決定テストの通常
のコースを用い当業者によって確認できることは当業者に明らかであろう。
【０３１６】 以下は処方の単なる例示的例であって、断じて本発明の範囲を限定するもので
はないと解釈されるべきである。
【０３１７】 実施例６（ａ）−カプセル組成物 カプセルの形態の本発明の抗体（またはその断片）を含有する医薬組成物は、
標準的ツーピースハードゼラチンカプセルに粉末形態の本発明の５０ｍｇの抗体
（またはその断片）、１００ｍｇのラクトース、３５ｍｇのタルクおよび１０ｍ
ｇのステアリン酸マグネシウムを充填することによって調製される。
【０３１８】 実施例６（ｂ）−注射非経口組成物 注射による投与に適した形態の本発明の医薬組成物は、２重量％の本発明の抗
体（またはその断片）を１０容量％のプロピレングリコールおよび水中で撹拌す
ることによって調製することができる。溶液は濾過によって滅菌する。
【０３１９】 実施例６（ｃ）−軟膏組成物 軟膏としての送達用の典型的な組成物は、スムーズで均一な生成物を得るため
に分散させた１００．０ｇまでの白色ソフトパラフィンと共に、１．０ｇの本発
明の抗体（またはその断片）を含む。次いで、コラプシブル金属チューブに該分
散液を充填する。
【０３２０】 実施例６（ｄ）−局所クリーム組成物 局所クリームとしての送達用の典型的な組成物は以下に概説する： 抗体（その断片）１．０ｇ ポラワックスＧＰ２００ ２５．０ｇ ラノリン無水物３．０ｇ 白色ミツロウ４．５ｇ ヒドロキシ安息香酸メチル０．１ｇ 脱イオン水または滅菌水で１００．０ｇとする
【０３２１】 ポラワックス、ミツロウおよびラノリンを一緒に６０℃で加熱し、ヒドロキシ
安息香酸メチルの溶液を添加し、高スピード撹拌を用いてホモゲナイゼーション
を達成する。次いで、温度を５０℃まで降下させる。次いで、本発明の抗体（ま
たはその断片）を添加し、徹底的に分散させ、組成物を低速撹拌しつつ冷却させ
る。
【０３２２】 実施例６（ｅ）−局所ローション組成物 局所ローションとして送達用の典型的な組成物を以下に概説する： 抗体（またはその断片）１．２ｇ ソルビタンモノラウレート０．８ｇ ポリソルベート２０ ０．７ｇ セトステアリルアルコール１．５ｇ グリセリン７．０ｇ ヒドロキシ安息香酸メチル０．４ｇ 滅菌水で１００．００ｍｌとする
【０３２３】 ヒドロキシ安息香酸メチルおよびグリセリンを７５℃にて７０ｍｌの水に溶解
させる。ソルビタンモノラウレート、ポリソルベート２０およびセトステアリル
アルコールを７５℃にて一緒に融解させ、水性溶液に添加する。得られたエマル
ジョンをホモゲナイズし、連続的に撹拌しつつ冷却させ、本発明の抗体（または
その断片）を残りの水中の懸濁液として添加する。全懸濁液をホモゲナイズされ
るまで撹拌する。
【０３２４】 実施例６（ｆ）−点眼剤組成物 点眼剤としての送達用の典型的な組成物を以下に概説する： 抗体（またはその断片）０．３ｇ ヒドロキシ安息香酸メチル０．００５ｇ ヒドロキシ安息香酸プロピル０．０６ｇ 精製水で１００．００ｍｌとする
【０３２５】 ヒドロキシ安息香酸メチルおよびプロピルを７５℃にて７０ｍｌの精製水に溶
解させ、得られた溶液を冷却させる。次いで、本発明の抗体（またはその断片）
を添加し、メンブランフィルター（０．０２２μｍポアサイズ）を通す濾過によ
って溶液を滅菌し、滅菌容器に無菌的に溶解する。
【０３２６】 実施例６（ｇ）−吸入投与用の組成物（Ｉ） ２０〜３０ｍｌの容量のエアロゾル容器では、ポリソルベート８５またはオレ
イン酸のごとき０．５ないし０．８重量％の滑沢剤と１０ｍｇの本発明の抗体（
またはその断片）の混合物を添加し、混合物をフレオンのごときプロペラントに
分散させ、鼻孔内または経口吸入投与いずれかのための適当なエアロゾル容器に
入れる。
【０３２７】 実施例６（ｈ）−吸入投与用の組成物（ＩＩ） ２０〜３０ｍｌの容量のエアロゾル容器では、エタノール（８ないし１０ｍｌ
）中の１０ｍｇの本発明の抗体（またはその断片）、ポリソルベート８５または
オレイン酸のごとき０．１ないし０．２％の潤滑剤の混合物を添加し、混合物を
フレオンのごときプロペラントに分散させ、鼻孔内または経口吸入投与いずれか
のための適当なエアロゾル容器に入れる。
【０３２８】 実施例６（ｉ）−非経口投与用組成物 また、本発明の抗体（またはその断片）および医薬組成物は非経口投与、すな
わち、皮下、筋肉内または静脈内投与で有用である。
【０３２９】 非経口投与用の組成物は、通常、本発明の抗体（またはその断片）の溶液また
は水、緩衝化水、０．４％生理食塩水および０．３％グリセリン等のごとき許容
される担体に溶解させたそのカクテルを含み、ここに、そのような溶液は滅菌さ
れており、粒子状物質は比較的ない。次いで、これらの溶液を滅菌する。
【０３３０】 該組成物は、さらに、ｐＨ調製剤および緩衝剤のごとき適当な生理学的条件に
必要な医薬上許容される物質を含有することができる。そのような組成物中の本
発明の抗体（またはその断片）の濃度は変化させることができ、それは選択され
た特定様式の投与に従って、流体容量、粘度等に主として基づくであろう。
【０３３１】 かくして、筋肉内注射のための本発明の医薬組成物は、１ｍｌの滅菌緩衝化水
および５０ｍｇの本発明の抗体（またはその断片）を含有するように調製するこ
とができる。
【０３３２】 同様に、静脈内注入用の医薬組成物は２５０ｍｌの滅菌リンゲル液、および１
５０ｍｇの本発明の抗体（またはその断片）を含むことができる。非経口投与で
きる組成物を調製する方法は当業者に明らかであり、例えば、引用してここに一
体化させる、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅ， 第１５版、 Ｍａｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａ
ｎｙ， Ｅａｓｔｅｎ， Ｐａにより詳細に記載されている。
【０３３３】 また、本発明の抗体（またはその断片）は貯蔵のために凍結乾燥し、使用に先
立って復元することができる。
【０３３４】 意図する結果に応じて、本発明の医薬組成物は予防および／または治療処置の
ために投与することができる。治療適用では、組成物は、少なくとも部分的に病
気およびその合併症を治癒、または少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で
、すでに病気に罹った患者に投与される。予防適用では、抗体（またはその断片
）またはそのカクテルを含有する組成物をすでに病気状態にはない患者に投与し
て患者の抵抗性を高める。
【０３３５】 医薬組成物の単一または複数投与は、治療医師によって選択される用量レベル
およびパターンで行うことができる。それにもかかわらず、本発明の医薬組成物
は患者を効果的に治療するのに十分な量の改変抗体（またはその断片）を提供す
るべきである。
【０３３６】 本発明の抗体は、抗体（またはその断片）と同一の療法で有用であろうペプチ
ドまたは非ペプチド化合物（ミメティックス）いずれかのデザインおよび合成で
必要であろうことにも注意すべきである。
【表Ｉ】
【表II】
【表IIIＡ】
【表IIIＢ】
【表IVＡ】
【表IVＢ】
【表Ｖ】 文献 １．Ｈｏｌｌｓｔｅｉｎ， Ｍ．， Ｄ．Ｓｉｄｒａｎｓｋｙ，Ｂ．Ｖｏｇｅｌ
ｓｔｅｉｎ．Ｃ．Ｃ．Ｈａｒｒｉｓ．１９９１．ｐ５３ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ
ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２５３：４９ ２．Ｐａｖｌｅｔｉｃｈ．Ｎ．Ｐ．Ｋ．Ａ．Ｃｈａｍｂｅｒｓ， Ｃ．Ｏ．Ｐａ
ｂｏ：１９９３．Ｔｈｅ ＤＮＡ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｐ５
３ ｃｏｎｔａｉｎｓ ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｒｅｇｉｏｎ
ｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｈｏｔ ｓｐｏｔｓ．
Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ７：２５５６ ３．Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ．Ｂ．，Ｋ．Ｗ．Ｋｉｎｚｌｅｒ．１９９２．ｐ５３
ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ．７０：５２
３． ４．Ｗｉｎｔｅｒ， Ｓ．Ｆ．，Ｊ．Ｄ．Ｍｉｎｎａ Ｂ．Ｅ．Ｊｏｈｎｓｏｎ
， Ｔ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ， Ａ．Ｆ．Ｇａｚｄａｒ， Ｄ．Ｐ．Ｃａｒｂｏ
ｎｅ．１９９２．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇ
ａｉｎｓｔ ｐ５３ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｐ
ｐｅａｒｓ ｔｏ ｂｅ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ ｔｙｐｅ ｏｆ
ｐ５３ ｍｕｔａｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．５２：４１
６８ ５．Ａｂｒａｍｓ， Ｐ．Ｇ．，Ｊ．Ｌ．Ｒｏｓｓｉｏ， Ｈ．Ｃ． Ｓｔｅｖ
ｅｎｓｏｎ， Ｋ．Ａ． Ｆｏｏｎ．１９８６．Ｏｐｔｉｍａｌ ｓｔｒａｔｅ
ｇｉｅｓ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｈｕｍａｎ−ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏ
ｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌｏｇｙ １２１：１０７． ６．Ｃｌａｒｋ， Ｍ．Ａ．， Ｎ．Ｊ．Ｈａｗｋｉｎｓ， Ａ．Ｐａｐａｉｏ
ａｎｎｏｕ，Ｒ．Ｊ．Ｆｉｄｄｅｓ， Ｒ．Ｌ．Ｗａｒｄ．１９９７． Ｉｓｏ
ｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉ−Ｃ−Ｅｒｂｂ−２ Ｆａｂｓ Ｆ
ｒｏｍ ａ Ｌｙｍｐｈ Ｎｏｄｅ−Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌ
ａｙ Ｌｉｂｒａｒｙ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ ＆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１０９：１６６ ７．Ｃｏｏｍｂｅｒ， Ｄ．， Ｎ．Ｊ．Ｈａｗｋｉｎｓ，Ｍ．Ｃｌａｒｋ，
Ａ．Ｍｅａｇｈｅｒ， Ｒ．Ｌ．Ｗａｒｄ．１９９６． Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ
ｓａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｒｒｅ
ｌａｔｅｓ ｏｆ Ｓｅｒｕｍ Ａｎｔｉ−Ｐ５３ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉ
ｎ Ｂｒｅａｓｔ ａｎｄ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇ
ｙ． １２２：７５７ ８．Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ， Ｐ．， Ｎ．Ｓａｃｃｈｉ．１９８７．Ｓｉｎ
ｇｌｅ−ｓｔｅｐ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＲＮＡ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｂｙ
ａｃｉｄ ｇｕａｎｉｄｉｎｉｕｍ ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ−ｐｈｅｎｏｌ−
ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ． Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ． １６２：１５６ ９．Ｗａｒｄ．Ｒ．Ｌ．Ｍ．Ａ．Ｃｌａｒｋ， Ｊ．Ｌｅｅｓ．Ｎ．Ｊ．Ｈａｗ
ｋｉｎｓ．１９９６．Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ Ｆｒｏｍ Ｐｈａｇｅ−Ｄｉｓｐｌａｙ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ Ｕｓｉ
ｎｇ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｃｌｅａｖａｇｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１８９：７３ １０．Ｎｉｓｓｉｍ，Ａ．， Ｈ．Ｒ． Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ， Ｉ．Ｍ．Ｔ
ｏｍｌｉｎｓｏｎ， Ｇ．Ｆｌｙｎｎ．Ｃ．Ｍｉｄｇｌｅｙ， Ｄ．Ｌａｎｅ，
Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ．１９９４． Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｆ
ｒｏｍ ａ ’ｓｉｎｇｌｅ ｐｏｔ’ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ ｌｉｂ
ｒａｒｙ ａｓ ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｒｅａｇｅｎｔｓ． Ｅｍｂ
ｏ Ｊｏｕｒｎａｌ．１３：６９２ １１．Ｃｈａｎｇ， Ｂ．， Ｐ．Ｃａｓａｌｉ．１９９４． Ｔｈｅ ＣＤＲ
１ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ａ ｍａｊｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ
ｈｕｍａｎ ｇｅｒｍｌｉｎｅ ｌｇ ＶＨ ｇｅｎｅｓ ａｒｅ ｉｎｈｅ
ｒｅｎｔｌｙ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｔｏ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｐ
ｌａｃｅｍｅｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ． １５：３６７ １２．Ｈｅｎｇｅｎ．Ｐ．Ｎ． １９９５． Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ｏｆ ＤＮＡ
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｓ ｆｏｒ ＰＣＲ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２０：３２４ １３．Ｌｕｂｉｎ， Ｒ．， Ｂ．Ｓｃｈｌｉｃｈｔｈｏｌｚ， Ｄ．Ｂｅｎｇ
ｏｕｆａ， Ｇ．Ｚａｌｃｍａｎ， Ｊ．Ｔｒｅｄａｎｉｅｌ， Ａ．Ｈｉｒｓ
ｃｈ， Ｃ．Ｃ．ｄｅ Ｆｒｏｍｅｎｔｅｌ．Ｃ．Ｐｒｅｕｄｈｏｍｍｅ， Ｐ
．Ｆｅｎａｕｘ．Ｇ．Ｆｏｕｒｎｉｅｒ， ｅｔ ａｌ． １９９３．Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ ｏｆ ｐ５３ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗ
ｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ｃａｎｃｅｒｓ ｄｅｆｉｎｅ Ｂ−ｃｅｌｌ ｅｐ
ｉｔｏｐｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐ５３： ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｎ
ｐｒｉｍａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｏｎ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ ｓｕｒｆａｃｅ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ． ５３：
５８７２ １４．Ｓｏｕｓｓｉ Ｔ．， Ｐ Ｍａｙ． １９９６ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ
ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐ５３ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｒｅｌａｔ
ｉｏｎ ｔｏ ｇｅｎｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ：ａ ｓｅｃｏｎｄ ｌｏｏｋ．
Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６０：６２３ １５．Ｋｏ．Ｌ．Ｊ．Ｃ．Ｐｒｉｖｅｓ．１９９６．ｐ５３：ｐｕｚｚｌｅ ａ
ｎｄ ｐａｒａｄｉｇｍ Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１０：１０５４ １６．Ｎａｇｅｓｈａ Ｈ．Ｓ．，Ｍ．Ｙｕ ａｎｄ Ｌ．Ｆ．Ｗａｎｇ，１９
９６， Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｎｋｅｒ−ｌｉｇａｔｉｏｎ−Ｐ
ＣＲ ｆｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ
ｅｐｉｔｏｐｅ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．６０，１４７−５４ １７．Ｐｅｔｅｒｓｅｎ Ｇ．Ｄ．Ｓｏｎｇ， Ｂ．Ｈｕｇｌｅ−Ｄｏｒｒ．Ｉ
．Ｏｌｄｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｅ．Ｋ．Ｂａｕｔｚ； １９９５， Ｍａｐｐ
ｉｎｇ ｏｆ ｌｉｎｅａｒ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ｇｅｎｅ−ｆｒａ
ｇｍｅｎｔ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ． Ｍｏｌ Ｇ
ｅｎ Ｇｅｎｅｔ， ２４９．４２５−３１ １８．Ｓｍｉｔｈ Ｇ．Ｐ．， １９８５， Ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｆｕｓ
ｉｏｎ ｐｈａｇｅ：ｎｏｖｅｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｓ ｔ
ｈａｔ ｄｉｓｐｌａｙ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｖ
ｉｒｉｏｎ ｓｕｒｆａｃｅ， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２２８， １３１５−７
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は直接的ＥＬＩＳＡにおける変化させた濃度のｐ５３に対す
るＦａｂの反応性を示す。ｐ５３へのＦａｂ結合は９Ｅ１０で検出し、続いて、
ヤギ抗−マウス特異的ＨＲＰ結合抗体で検出した。抗−破傷風トキソイドは、破
傷風トキソイドと反応したＦａｂを用いた場合に得られたシグナルを示す。
【図２】 図２はＥＬＩＳＡによって評価したＦａｂと他の抗原との交差反
応性を示す。（粗製細菌上清からの）結合Ｆａｂは９Ｅ１０、続いて、ヤギ抗−
マウス特異的ＨＲＰ結合抗体で検出した。ｐ５３で得られたシグナルは他の抗原
で観察されたのより４倍大きかった。
【図３】 （ａ）は細菌溶解物における組換えｐ５３へのＦａｂクローンの
結合を示す。ＤＯ７の結合はＨＲＰ−ヤギ抗−マウスで検出した（レーン１）。
ヒト−抗−ｐ５３Ｆａｂ（１６３．１、５、１７、２４：レーン３−６）および
ヒト抗−破傷風Ｆａｂ（陰性対照：レーン２）は９Ｅ１０、続いてＨＲＰ−ヤギ
抗−マウス抗体で検出した。 図３（ｂ）は、結直腸癌細胞系ＨＴ−２９からの免疫沈殿の免疫ブロット分析
を示す。免疫沈殿は、ＤＯ７陽性対照抗体（レーン２）、破傷風トキソイドと反
応性のヒトＦａｂ抗体（レーン１）、クローン１６３．１、５、１７、２４（各
々、レーン３−６）および溶解物単独を持つプロテインＡからのＦａｂ（レーン
７）を用いて行った。免疫沈殿および電気ブロッティングに続き、ブロットを、
ヤギ抗ｐ５３抗体、続いて、ＨＲＰ−結合ロバ抗−ヤギ抗体と共にインキュベー
トした。
【図４】 図４はｐ５３と反応性の重鎖（４Ａ）および軽鎖（４Ｂ）クロー
ンの推定アミノ酸配列を示す。置換（上方の場合）およびサイレント突然変異（
下方の場合）を最も相同の生殖系配列に関して示す。
【図５】 図５は哺乳動物発現ベクターのマップを示す。選択されたＦａｂ
クローンの重鎖および軽鎖遺伝子を、各々、ｐＧ１Ｄ１０５のＮｏｔ１およびＳ
ｐｅ１およびｐＫＮ１０１のＳａｌ１およびＸｂａ１にクローンした。重鎖およ
び軽鎖ベクターはネオマイシン抵抗性およびジヒドロ葉酸レダクターゼ遺伝子を
含有し、これは、各々、抗生物質Ｇ４１８およびメトトレキセートに対する抵抗
性を付与し、形質転換細胞の選択を可能とする。
【図６】 図６はクローンＣ４Ｂ４からの全抗−ｐ５３抗体の精製を示す１
０％ＰＡＧＥを示す。分子量マーカーはゲルの左側に示し、右の矢印は重鎖およ
び軽鎖の位置を示す。
【図７】 図７はＥＬＩＳＡによって評価したＣ４Ｂ４およびＤＯ７とｐ５
３および他の抗原との交差反応性を示す。Ｃ４Ｂ４はＨＲＰ結合ヤギ抗−ヒト特
異的抗体で検出し、ＤＯ７はＨＲＰ結合ヤギ抗−マウス特異的抗体で検出した。
ＨＲＰ結合ヤギ抗−ヒトとの反応性は陰性対照として用いた。
【図８】 図８は結直腸癌細胞系ＨＴ−２９、ＭＣＦ−７およびＭｅｔｈＡ
からの免疫沈殿の免疫ブロット分析を示す。免疫沈殿は精製されたＣ４Ｂ４およ
び抗−ｐ５３モノクローナル抗体ＤＯ７を用いて行った。溶解物を含むプロテイ
ンＡ単独での免疫沈殿を陰性対照として用いた。免疫沈殿および電気ブロッティ
ングに続き、ブロットを、ヤギ抗−ｐ５３抗体、続いてＨＲＰ結合ロバ抗−ヤギ
−ＨＲＰと共にインキュベートした。Ｃ４Ｂ４との免疫沈殿の結果、ＤＯ７と同
様の反応性のパターンが得られた。陰性対照では有意な反応性は観察されなかっ
た。
【図９】 図９は単離されたｐ５３遺伝子断片ペプチドの配列の整列を示す
。特異的なヌクレオチド配列を持つ３つのファージクローンをｐ５３の配列と比
較した。断片のサイズは１４ないし３２アミノ酸の範囲であり、ｐ５３のアミノ
末端における領域に対応した。
【図１０】 図１０はＣ４Ｂ４抗体を用いる結直腸腫瘍におけるｐ５３染色
の免疫組織化学的分析を示す。結合した抗体はＨＲＰ結合ヤギ抗−ヒト抗体で検
出した。より大きなフレームは結直腸上皮（茶色に染まった領域）における陽性
核染色を示し、他方、Ｃ４Ｂ４なしの組織の同様の領域はより小さなフレームで
示し、これは、腫瘍組織（青色染色）のいずれかの核染色を示さない。
【図１１】 図１１は、全ｐ５３、ｐ５３の中央ドメインに対する変化させ
た濃度の１１５９．８の反応性を示す。ｐ５３へのＦａｂ結合は９Ｅ１０、続い
てアルカリ性ホスファターゼ結合ヤギ抗−マウス抗体で検出した。ＢＳＡに対す
る抗体の反応性は陰性対照として用いた。
【図１２】 図１２はＥＬＩＳＡによって評価したＦａｂと他の抗原との交
差反応性を示す。ｐ５３に対するＦａｂの結合は９Ｅ１０、続いてアルカリ性ホ
スファターゼ結合ヤギ抗−マウス抗体で検出した。
【図１３】 図１３はＦａｂ１１５９．８および１６３．１を用いる全ｐ５
３およびｐ５３の中央ドメインの免疫検出を示す。４ないし２０％のＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥをＰＶＤＶに電気ブロットし、Ｆａｂ１１５９．８および１６３．１、な
らびに陽性対照ネズミモノクローナル抗体ＤＯ７およびＰａｂ２４０でプローブ
した。Ｆａｂはアルカリ性ホスファターゼ結合ヤギ抗−ヒトＦａｂ2特異的抗体
で検出し、他方、ネズミ抗体はアルカリ性ホスファターゼ結合ヤギ抗−マウス抗
体で検出した。
【手続補正書】
【提出日】平成１３年１１月８日（２００１．１１．８）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３３６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３３６】 本発明の抗体は、抗体（またはその断片）と同一の療法で有用であろうペプ
チドまたは非ペプチド化合物（ミメティックス）いずれかのデザインおよび合成
で必要であろうことにも注意すべきである。
【表Ｉ】
【表ＩＩ】
【表ＩＩＩＡ】
【表ＩＩＩＢ】
【表ＩＶＡ】
【表ＩＶＢ】
【表Ｖ】 文献 １．Ｈｏｌｌｓｔｅｉｎ， Ｍ．， Ｄ．Ｓｉｄｒａｎｓｋｙ，Ｂ．Ｖｏｇｅｌ
ｓｔｅｉｎ．Ｃ．Ｃ．Ｈａｒｒｉｓ．１９９１．ｐ５３ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ
ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２５３：４９ ２．Ｐａｖｌｅｔｉｃｈ．Ｎ．Ｐ．Ｋ．Ａ．Ｃｈａｍｂｅｒｓ， Ｃ．Ｏ．Ｐａ
ｂｏ：１９９３．Ｔｈｅ ＤＮＡ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ｐ５
３ ｃｏｎｔａｉｎｓ ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｒｅｇｉｏｎ
ｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｊｏｒ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｈｏｔ ｓｐｏｔｓ．
Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ７：２５５６ ３．Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ．Ｂ．，Ｋ．Ｗ．Ｋｉｎｚｌｅｒ．１９９２．ｐ５３
ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ．７０：５２
３． ４．Ｗｉｎｔｅｒ， Ｓ．Ｆ．，Ｊ．Ｄ．Ｍｉｎｎａ Ｂ．Ｅ．Ｊｏｈｎｓｏｎ
， Ｔ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ， Ａ．Ｆ．Ｇａｚｄａｒ， Ｄ．Ｐ．Ｃａｒｂｏ
ｎｅ．１９９２．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇ
ａｉｎｓｔ ｐ５３ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｐ
ｐｅａｒｓ ｔｏ ｂｅ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ ｔｙｐｅ ｏｆ
ｐ５３ ｍｕｔａｔｉｏｎ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ．５２：４１
６８ ５．Ａｂｒａｍｓ， Ｐ．Ｇ．，Ｊ．Ｌ．Ｒｏｓｓｉｏ， Ｈ．Ｃ． Ｓｔｅｖ
ｅｎｓｏｎ， Ｋ．Ａ． Ｆｏｏｎ．１９８６．Ｏｐｔｉｍａｌ ｓｔｒａｔｅ
ｇｉｅｓ ｆｏｒ ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ｈｕｍａｎ−ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏ
ｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌｏｇｙ １２１：１０７． ６．Ｃｌａｒｋ， Ｍ．Ａ．， Ｎ．Ｊ．Ｈａｗｋｉｎｓ， Ａ．Ｐａｐａｉｏ
ａｎｎｏｕ，Ｒ．Ｊ．Ｆｉｄｄｅｓ， Ｒ．Ｌ．Ｗａｒｄ．１９９７． Ｉｓｏ
ｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉ−Ｃ−Ｅｒｂｂ−２ Ｆａｂｓ Ｆ
ｒｏｍ ａ Ｌｙｍｐｈ Ｎｏｄｅ−Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌ
ａｙ Ｌｉｂｒａｒｙ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ ＆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．１０９：１６６ ７．Ｃｏｏｍｂｅｒ， Ｄ．， Ｎ．Ｊ．Ｈａｗｋｉｎｓ，Ｍ．Ｃｌａｒｋ，
Ａ．Ｍｅａｇｈｅｒ， Ｒ．Ｌ．Ｗａｒｄ．１９９６． Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ
ｓａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｒｒｅ
ｌａｔｅｓ ｏｆ Ｓｅｒｕｍ Ａｎｔｉ−Ｐ５３ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉ
ｎ Ｂｒｅａｓｔ ａｎｄ Ｃｏｌｏｎ Ｃａｎｃｅｒ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏ
ｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇ
ｙ． １２２：７５７ ８．Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ， Ｐ．， Ｎ．Ｓａｃｃｈｉ．１９８７．Ｓｉｎ
ｇｌｅ−ｓｔｅｐ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＲＮＡ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｂｙ
ａｃｉｄ ｇｕａｎｉｄｉｎｉｕｍ ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ−ｐｈｅｎｏｌ−
ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ． Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ． １６２：１５６ ９．Ｗａｒｄ．Ｒ．Ｌ．Ｍ．Ａ．Ｃｌａｒｋ， Ｊ．Ｌｅｅｓ．Ｎ．Ｊ．Ｈａｗ
ｋｉｎｓ．１９９６．Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ Ｆｒｏｍ Ｐｈａｇｅ−Ｄｉｓｐｌａｙ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ Ｕｓｉ
ｎｇ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｃｌｅａｖａｇｅ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１８９：７３ １０．Ｎｉｓｓｉｍ，Ａ．， Ｈ．Ｒ． Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ， Ｉ．Ｍ．Ｔ
ｏｍｌｉｎｓｏｎ， Ｇ．Ｆｌｙｎｎ．Ｃ．Ｍｉｄｇｌｅｙ， Ｄ．Ｌａｎｅ，
Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ．１９９４． Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｆ
ｒｏｍ ａ ’ｓｉｎｇｌｅ ｐｏｔ’ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ ｌｉｂ
ｒａｒｙ ａｓ ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｒｅａｇｅｎｔｓ． Ｅｍｂ
ｏ Ｊｏｕｒｎａｌ．１３：６９２ １１．Ｃｈａｎｇ， Ｂ．， Ｐ．Ｃａｓａｌｉ．１９９４． Ｔｈｅ ＣＤＲ
１ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ａ ｍａｊｏｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ
ｈｕｍａｎ ｇｅｒｍｌｉｎｅ ｌｇ ＶＨ ｇｅｎｅｓ ａｒｅ ｉｎｈｅ
ｒｅｎｔｌｙ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｔｏ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｐ
ｌａｃｅｍｅｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ． １５：３６７ １２．Ｈｅｎｇｅｎ．Ｐ．Ｎ． １９９５． Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ｏｆ ＤＮＡ
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｓ ｆｏｒ ＰＣＲ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ２０：３２４ １３．Ｌｕｂｉｎ， Ｒ．， Ｂ．Ｓｃｈｌｉｃｈｔｈｏｌｚ， Ｄ．Ｂｅｎｇ
ｏｕｆａ， Ｇ．Ｚａｌｃｍａｎ， Ｊ．Ｔｒｅｄａｎｉｅｌ， Ａ．Ｈｉｒｓ
ｃｈ， Ｃ．Ｃ．ｄｅ Ｆｒｏｍｅｎｔｅｌ．Ｃ．Ｐｒｅｕｄｈｏｍｍｅ， Ｐ
．Ｆｅｎａｕｘ．Ｇ．Ｆｏｕｒｎｉｅｒ， ｅｔ ａｌ． １９９３．Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ ｏｆ ｐ５３ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗ
ｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ｃａｎｃｅｒｓ ｄｅｆｉｎｅ Ｂ−ｃｅｌｌ ｅｐ
ｉｔｏｐｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐ５３： ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｎ
ｐｒｉｍａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｏｎ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ ｓｕｒｆａｃｅ． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ． ５３：
５８７２ １４．Ｓｏｕｓｓｉ Ｔ．， Ｐ Ｍａｙ． １９９６ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ
ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐ５３ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｒｅｌａｔ
ｉｏｎ ｔｏ ｇｅｎｅ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ：ａ ｓｅｃｏｎｄ ｌｏｏｋ．
Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２６０：６２３ １５．Ｋｏ．Ｌ．Ｊ．Ｃ．Ｐｒｉｖｅｓ．１９９６．ｐ５３：ｐｕｚｚｌｅ ａ
ｎｄ ｐａｒａｄｉｇｍ Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．１０：１０５４ １６．Ｎａｇｅｓｈａ Ｈ．Ｓ．，Ｍ．Ｙｕ ａｎｄ Ｌ．Ｆ．Ｗａｎｇ，１９
９６， Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｎｋｅｒ−ｌｉｇａｔｉｏｎ−Ｐ
ＣＲ ｆｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ
ｅｐｉｔｏｐｅ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．６０，１４７−５４ １７．Ｐｅｔｅｒｓｅｎ Ｇ．Ｄ．Ｓｏｎｇ， Ｂ．Ｈｕｇｌｅ−Ｄｏｒｒ．Ｉ
．Ｏｌｄｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｅ．Ｋ．Ｂａｕｔｚ； １９９５， Ｍａｐｐ
ｉｎｇ ｏｆ ｌｉｎｅａｒ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ
ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ｇｅｎｅ−ｆｒａ
ｇｍｅｎｔ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ． Ｍｏｌ Ｇ
ｅｎ Ｇｅｎｅｔ， ２４９．４２５−３１ １８．Ｓｍｉｔｈ Ｇ．Ｐ．， １９８５， Ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｆｕｓ
ｉｏｎ ｐｈａｇｅ：ｎｏｖｅｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｓ ｔ
ｈａｔ ｄｉｓｐｌａｙ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｎ ｔｈｅ ｖ
ｉｒｉｏｎ ｓｕｒｆａｃｅ， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２２８， １３１５−７ 国際出願日における明細書の第６８頁に記載の表Ｖの後半部分（配列番号第３
６から６０）が欠落したため、正しい表と変更させていただきます。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 39/395 Ｔ ４Ｃ０８５ 48/00 ４Ｃ０８７ 49/00 Ｃ ４Ｈ０４５ 48/00 Ａ６１Ｐ 9/00 49/00 19/02 51/00 35/00 Ａ６１Ｐ 9/00 Ｃ０７Ｋ 16/18 19/02 16/42 35/00 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ０７Ｋ 16/18 1/19 16/42 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/15 7/00 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 1/21 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 5/10 33/577 Ｂ 7/00 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｒ 1:19 Ｇ０１Ｎ 33/53 1:07 33/577 Ｃ１２Ｒ 1:38 // Ｃ１２Ｐ 21/08 1:465 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:42 Ｃ１２Ｒ 1:19） 1:425 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:91 Ｃ１２Ｒ 1:07） Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＣ (Ｃ１２Ｎ 1/21 5/00 Ｂ Ｃ１２Ｒ 1:38） Ｃ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｒ 1:465） 43/00 (Ｃ１２Ｎ 1/21 49/02 Ｂ Ｃ１２Ｒ 1:42） Ｃ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:425） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ， ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，Ｋ Ｒ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，Ｓ Ｉ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 クームバー，デイビッド，ウィリアム，ジ ョーン オーストラリア国 ニューサウスウェール ズ 2050，カンパーダウン，デニソン ス トリート 145 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 AA12 BA45 CA04 DA02 DA05 DA06 DA07 DA08 DA09 DA12 EA04 GA11 HA12 HA15 HA17 4B063 QA19 QQ46 QR08 QR33 QR42 QR56 QS25 QS34 QX02 4B064 AG27 CA02 CA04 CA06 CA10 CA19 CA20 CC24 DA01 DA05 DA13 DA14 4B065 AA01X AA15X AA26X AA41X AA46X AA48X AA72X AA90X AA91X AA93X AA93Y AB01 BA02 CA44 CA45 CA46 4C084 AA02 AA07 AA12 AA13 BA02 CA17 MA52 MA55 ZA36 ZB15 ZB26 4C085 AA02 AA03 AA13 AA14 AA19 AA26 AA27 CC23 CC24 HH03 HH07 KA03 KA04 KA29 KB07 KB09 KB10 LL18 4C087 AA02 BC83 CA12 ZA36 ZB15 ZB26 4H045 AA11 AA20 AA30 BA10 CA41 DA75 DA76 EA20 EA23 EA28 EA50 EA51 FA73

Claims (131)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 抗体（またはその断片）のポリペプチドをコードするポリヌ
    クレオチド配列を含む単離され精製された核酸配列であって、該抗体（またはそ
    の断片）が脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部分に対する結合親和性を
    有し、ここに、該核酸配列は天然に生じる病気に対する免疫応答を発現する脊椎
    動物宿主から得られることを特徴とする該核酸配列。
  2. 【請求項２】 該免疫応答が少なくとも１つのｐ５３抗体の発現によって特
    徴付けられる請求項１記載の核酸配列。
  3. 【請求項３】 脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはその部分に対する結
    合親和性を有するＦab抗体断片（またはその断片）をコードするポリヌクレオチ
    ド配列を含む請求項１または２記載の核酸配列。
  4. 【請求項４】 配列番号１ないし３０よりなる群から選択されるポリヌクレ
    オチド配列を含む単離され精製された核酸配列。
  5. 【請求項５】 該核酸配列がＤＮＡである請求項１ないし４いずれか１記載
    の核酸配列。
  6. 【請求項６】 該核酸配列がＲＮＡである請求項１ないし４いずれか１記載
    の核酸配列。
  7. 【請求項７】 該核酸配列が、抗体断片またはその他の免疫学的に活性な断
    片をコードするポリヌクレオチド配列またはそのアナログであり、ここに、該抗
    体（またはその断片）が脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部分に対する
    結合親和性を有する請求項１ないし６いずれか記載の核酸配列。
  8. 【請求項８】 該抗体断片または他の免疫学的に活性な断片が少なくとも１
    つの相補的な決定領域を含む請求項７記載の核酸配列。
  9. 【請求項９】 該抗体断片が少なくとも１つの機能的抗原−結合ドメインを
    含む請求項７または８記載の核酸配列。
  10. 【請求項１０】 該抗体断片がＦｖ、Ｆab、Ｆ（ａｂ）2、ｓｃＦｖ（一本
    鎖Ｆｖ）、ｄＡｂ（単一ドメイン抗体）、二特異的抗体、ジアボディおよびトリ
    アボディよりなる群から選択される請求項７ないし９いずれか１記載の核酸配列
    。
  11. 【請求項１１】 該抗体（またはその断片）がｐ５３蛋白質またはその部分
    のＮ−末端、Ｃ−末端または中央ドメインのうちの１以上の残基に対する結合親
    和性を有する請求項１ないし１０のいずれか１記載の核酸配列。
  12. 【請求項１２】 該抗体（またはその断片）がｐ５３蛋白質またはその部分
    のＮ−末端の残基に対する結合親和性を有する請求項１ないし１１いずれか１記
    載の核酸配列。
  13. 【請求項１３】 該抗体（またはその断片）がｐ５３蛋白質またはその部分
    のＮ−末端の残基約１０ないし約５５に対する結合親和性を有する請求項１ない
    し１２いずれか１記載の核酸配列。
  14. 【請求項１４】 該抗体（またはその断片）がｐ５３蛋白質またはその部分
    のＮ−末端の残基約１０ないし約２５に対する結合親和性を有する請求項１ない
    し１２いずれか１記載の核酸配列。
  15. 【請求項１５】 該抗体（またはその断片）がｐ５３蛋白質またはその部分
    のＮ−末端の残基約４０ないし約５０に対する結合親和性を有する請求項１ない
    し１２いずれか１記載の核酸配列。
  16. 【請求項１６】 該抗体（またはその断片）がｐ５３蛋白質またはその部分
    のＮ−末端の残基約２７ないし約４４に対する結合親和性を有する請求項１ない
    し１２いずれか１記載の核酸配列。
  17. 【請求項１７】 該抗体（またはその断片）がｐ５３蛋白質またはその部分
    のＮ−末端の残基約４０ないし約４４に対する結合親和性を有する請求項１ない
    し１２いずれか１記載の核酸配列。
  18. 【請求項１８】 該抗体（またはその断片）がｐ５３蛋白質の中央ドメイン
    またはその部分の残基に対する結合親和性を有する請求項１ないし１１いずれか
    １記載の核酸配列。
  19. 【請求項１９】 該配列が、脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部分
    に対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）のポリペプチドをコードす
    るポリヌクレオチド配列を含み、ここに、該ポリヌクレオチド配列が、免疫グロ
    ブリンの軽鎖可変領域ポリペプチドまたは免疫グロブリンの重鎖可変領域ポリペ
    プチドをコードする請求項１ないし１８いずれか１記載の核酸配列。
  20. 【請求項２０】 該配列が、脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部分
    に対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）のポリペプチドをコードす
    るポリヌクレオチド配列を含み、ここに、該核酸配列が、免疫グロブリンの軽鎖
    可変領域をコードする第１のポリペプチド配列、および免疫グロブリンの重鎖可
    変領域ポリペプチドをコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む請求項１な
    いし１９いずれか１記載の核酸配列。
  21. 【請求項２１】 該脊椎動物がヒト、非−ヒト霊長類、ネズミ、ウシ、ヒツ
    ジ、ウマ、ヤギ、ウサギ、トリ、ネコおよびイヌよりなる群から選択される請求
    項１ないし２０いずれか１記載の核酸配列。
  22. 【請求項２２】 該脊椎動物がヒトである請求項１ないし２１いずれか１記
    載の核酸配列。
  23. 【請求項２３】 請求項１ないし２２いずれか１記載の核酸配列のアナログ
    を含み、ここに、該アナログは該ポリヌクレオチド配列によってコードされるポ
    リペプチドと機能的に同一である生物学的活性を有するポリペプチドをコードす
    る単離され精製された核酸配列。
  24. 【請求項２４】 該病気が癌、慢性関節リウマチおよび冠心臓病よりなる群
    から選択される請求項１ないし２３いずれか１記載の核酸配列。
  25. 【請求項２５】 該病気が癌である請求項２４記載の核酸配列。
  26. 【請求項２６】 該癌が発癌性腫瘍；結腸−直腸癌、乳癌、肺癌、頭部およ
    び頸部腫瘍、肝癌、膵臓癌、卵巣癌、胃癌、脳癌、膀胱癌、前立腺癌および尿管
    ／生殖管癌、食道癌のごとき上皮起源の腫瘍；肉腫のごとき間葉腫瘍；およびＢ
    細胞リンパ腫のごとき造血腫瘍よりなる群から選択される請求項２５記載の核酸
    配列。
  27. 【請求項２７】 脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはその部分に対する
    結合親和性を有する抗体（またはその断片）のポリペプチドであって、ここに、
    該ポリペプチドが天然に生じる病気に対する免疫応答を発現する脊椎動物宿主か
    ら得られる該ポリペプチド。
  28. 【請求項２８】 該免疫応答が少なくとも１つのｐ５３抗体の発現によって
    特徴付けられる請求項２７記載のポリペプチド。
  29. 【請求項２９】 該ポリペプチドが、請求項１ないし２６いずれか１記載の
    核酸配列によってコードされる単離され精製されたポリペプチド。
  30. 【請求項３０】 配列番号３１ないし６０よりなる群から選択されるアミノ
    酸配列を含む単離され精製されたポリペプチド。
  31. 【請求項３１】 該ポリペプチドがＦｖ、Ｆab、Ｆ（ａｂ）2、ｓｃＦｖ（
    一本鎖Ｆｖ）、ｄＡｂ（単一ドメイン抗体）、二特異的抗体、ジアボディおよび
    トリアボディよりなる群から選択される請求項２７ないし３０いずれか１記載の
    ポリペプチド。
  32. 【請求項３２】 該ポリペプチドがｐ５３蛋白質またはその部分に対する結
    合親和性を有する請求項２７ないし３１いずれか１記載のポリペプチド。
  33. 【請求項３３】 該ポリペプチドが、ｐ５３蛋白質のＮ−末端、Ｃ−末端ま
    たは中央ドメインあるいはその部分の１以上の残基に対する結合親和性を有する
    請求項２７ないし３２いずれか１記載のポリペプチド。
  34. 【請求項３４】 該ポリペプチドがｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分
    の残基に対する結合親和性を有する請求項２７ないし３３いずれか１記載のポリ
    ペプチド。
  35. 【請求項３５】 該ポリペプチドがｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分
    の残基約１０ないし約５５に対する結合親和性を有する請求項２７ないし３４い
    ずれか１記載のポリペプチド。
  36. 【請求項３６】 該ポリペプチドがｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分
    の残基約１０ないし約２５に対する結合親和性を有する請求項２７ないし３４い
    ずれか１記載のポリペプチド。
  37. 【請求項３７】 該ポリペプチドがｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分
    の残基約４０ないし約５０に対する結合親和性を有する請求項２７ないし３４い
    ずれか１記載のポリペプチド。
  38. 【請求項３８】 該ポリペプチドがｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分
    の残基約２７ないし約４４に対する結合親和性を有する請求項２７ないし３４い
    ずれか１記載のポリペプチド。
  39. 【請求項３９】 該ポリペプチドがｐ５３蛋白質のＮ−末端またはその部分
    の残基約４０ないし約４４に対する結合親和性を有する請求項２７ないし３４い
    ずれか１記載のポリペプチド。
  40. 【請求項４０】 該ポリペプチドがｐ５３蛋白質の中央ドメインまたはその
    部分の残基に対して結合親和性を有する請求項２７ないし３３いずれか１記載の
    ポリペプチド。
  41. 【請求項４１】 請求項２７ないし４０いずれか１記載のポリペプチドの相
    同ポリペプチドである単離され精製されたポリペプチド。
  42. 【請求項４２】 該ポリペプチドが請求項２７ないし４０いずれか１記載の
    ポリペプチドに対して少なくとも４５％相同である請求項４１記載のポリペプチ
    ド。
  43. 【請求項４３】 該ポリペプチドが請求項２７ないし４０いずれか１記載の
    ポリペプチドに対して少なくとも７５％相同である請求項４１記載のポリペプチ
    ド。
  44. 【請求項４４】 該ポリペプチドが請求項２７ないし４０いずれか１記載の
    ポリペプチドに対して少なくとも９５％ないし９９％相同である請求項４１記載
    のポリペプチド。
  45. 【請求項４５】 該病気が癌、慢性関節リウマチおよび冠心臓病よりなる群
    から選択される請求項２７ないし４４いずれか１記載のポリペプチド。
  46. 【請求項４６】 該病気が癌である請求項４５記載のポリペプチド。
  47. 【請求項４７】 該癌が発癌性腫瘍；結腸−直腸癌、乳癌、肺癌、頭部およ
    び頸部腫瘍、肝癌、膵臓癌、卵巣癌、胃癌、脳癌、膀胱癌、前立腺癌および尿管
    ／生殖管癌、食道癌のごとき上皮起源の腫瘍；肉腫のごとき間葉腫瘍；およびＢ
    細胞リンパ腫のごとき造血腫瘍よりなる群から選択される請求項４６記載のポリ
    ペプチド。
  48. 【請求項４８】 配列番号３１ないし６０いずれか１つのポリペプチドのペ
    プチド断片であって、該ペプチド断片は脊椎動物に投与された場合に免疫応答を
    誘導する該ペプチド断片。
  49. 【請求項４９】 該ペプチド断片が配列番号３１ないし６０いずれか１つの
    約５および約５０の間の隣接アミノ酸を含む請求項４８記載のペプチド断片。
  50. 【請求項５０】 該ペプチド断片が配列番号３１ないし６０いずれか１つの
    約５および約３０の間の隣接アミノ酸を含む請求項４８または４９記載のペプチ
    ド断片。
  51. 【請求項５１】 該ペプチド断片が配列番号３１ないし６０いずれか１つの
    約８および約２０の間の隣接アミノ酸を含む請求項４８または５０いずれか１記
    載のペプチド断片。
  52. 【請求項５２】 該ペプチド断片が相補性決定領域に由来する請求項４８記
    載のペプチド断片。
  53. 【請求項５３】 該免疫応答がイディオタイプ応答である請求項４８ないし
    ５２いずれか１記載のペプチド断片。
  54. 【請求項５４】 該脊椎動物がヒトである請求項４８ないし５３いずれか１
    記載のペプチド断片。
  55. 【請求項５５】 脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはその部分に対する
    結合親和性を有する抗体またはその断片であって、該抗体は天然に生じる病気に
    対する免疫応答を発現する脊椎動物宿主から得られる該抗体またはその断片。
  56. 【請求項５６】 該免疫応答がｐ５３抗体の発現によって特徴づけられる請
    求項５５記載の抗体またはその断片。
  57. 【請求項５７】 脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはその部分に対する
    結合親和性を有し、請求項２７ないし４７いずれか１記載のポリペプチドよりな
    る抗体またはその断片。
  58. 【請求項５８】 脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはその部分に対する
    結合親和性を有し、請求項１ないし２６いずれか１記載の核酸配列によってコー
    ドされる抗体またはその断片。
  59. 【請求項５９】 該断片が免疫学的に活性な断片である請求項５５ないし５
    ８いずれか１記載の抗体断片。
  60. 【請求項６０】 該断片が少なくとも１つの相補性決定領域を含む請求項５
    ５ないし５９いずれか１記載の抗体断片。
  61. 【請求項６１】 該断片がＦｖ、Ｆab、Ｆ（ａｂ）2、ｓｃＦｖ（一本鎖Ｆ
    ｖ）、ｄＡｂ（単一ドメイン抗体）、二特異的抗体、ジアボディおよびトリアボ
    ディよりなる群から選択される請求項５５ないし６０いずれか１記載の抗体断片
    。
  62. 【請求項６２】 ポリクローナル抗体である請求項５５ないし６１いずれか
    １記載の抗体またはその断片。
  63. 【請求項６３】 モノクローナル抗体である請求項５５ないし６１いずれか
    １記載の抗体またはその断片。
  64. 【請求項６４】 該抗体またはその断片がｐ５３蛋白質のＮ−末端、Ｃ−末
    端または中央ドメインあるいはその部分のうちの１以上の残基に対する結合親和
    性を有する請求項５７ないし６３いずれか１記載の抗体またはその断片。
  65. 【請求項６５】 該抗体またはその断片がｐ５３蛋白質のＮ−末端またはそ
    の部分の残基に対する結合親和性を有する請求項５７ないし６４いずれか１記載
    の抗体またはその断片。
  66. 【請求項６６】 該抗体またはその断片がｐ５３蛋白質のＮ−末端の残基約
    １０ないし約５５あるいはその部分に対する結合親和性を有する請求項５７ない
    し６５いずれか１記載の抗体またはその断片。
  67. 【請求項６７】 該抗体またはその断片がｐ５３蛋白質のＮ−末端の残基約
    １０ないし約２５あるいはその部分に対する結合親和性を有する請求項５７ない
    し６５いずれか１記載の抗体またはその断片。
  68. 【請求項６８】 該抗体またはその断片がｐ５３蛋白質のＮ−末端の残基約
    ４０ないし約５０あるいはその部分に対する結合親和性を有する請求項５７ない
    し６５いずれか１記載の抗体またはその断片。
  69. 【請求項６９】 該抗体またはその断片がｐ５３蛋白質のＮ−末端の残基約
    ２７ないし約４４あるいはその部分に対する結合親和性を有する請求項５７ない
    し６５いずれか１記載の抗体またはその断片。
  70. 【請求項７０】 該抗体またはその断片がｐ５３蛋白質のＮ−末端の残基約
    ４０ないし約４４あるいはその部分に対する結合親和性を有する請求項５７ない
    し６５いずれか１記載の抗体またはその断片。
  71. 【請求項７１】 該抗体またはその断片がｐ５３蛋白質の中央ドメインまた
    はその部分の残基に対する結合親和性を有する請求項５７ないし６４いずれか１
    記載の抗体またはその断片。
  72. 【請求項７２】 該病気が癌、慢性関節リウマチおよび冠心臓病よりなる群
    から選択される請求項５５ないし７１いずれか１記載の抗体またはその断片。
  73. 【請求項７３】 該病気が癌である請求項７２記載の抗体またはその断片。
  74. 【請求項７４】 該癌が発癌性腫瘍；結腸−直腸癌、乳癌、肺癌、頭部およ
    び頸部腫瘍、肝癌、膵臓癌、卵巣癌、胃癌、脳癌、膀胱癌、前立腺癌および尿管
    ／生殖管癌、食道癌のごとき上皮起源の腫瘍；肉腫のごとき間葉腫瘍；およびＢ
    細胞リンパ腫のごとき造血腫瘍よりなる群から選択される請求項７３記載の抗体
    またはその断片。
  75. 【請求項７５】 請求項１ないし２６いずれか１記載の核酸配列を含むベク
    ター。
  76. 【請求項７６】 該ベクターがウイルス、プラスミド、バクテリオファージ
    、ファゲミド、コスミド、細菌、人工染色体および酵母人工染色体よりなる群か
    ら選択される請求項７５記載のベクター。
  77. 【請求項７７】 該バクテリオファージがλｇｔ１０およびλｇｔ１１およ
    びファージ提示ベクターよりなる群から選択される請求項７６記載のベクター。
  78. 【請求項７８】 該ファージ提示ベクターがｐＣＯＭＢベクターに由来する
    ベクター類から選択される請求項７７記載のベクター。
  79. 【請求項７９】 該ファージ提示ベクターがＭＣＯ群のものである請求項７
    ６または７７記載のベクター。
  80. 【請求項８０】 該ファージ提示ベクターがＭＣＯ１、ＭＣＯ３およびＭＣ
    Ｏ６ベクターよりなる群から選択される請求項７７ないし７９いずれか１記載の
    ベクター。
  81. 【請求項８１】 該ファージ提示ベクターがＭＣＯ３である請求項７７ない
    し８０いずれか１記載のベクター。
  82. 【請求項８２】 該ベクターが哺乳動物発現ベクターである請求項７５記載
    のベクター。
  83. 【請求項８３】 該哺乳動物発現ベクターがｐＧ１Ｄ１０２−ＭＣＯまたは
    ｐＫＮ１００−ＭＣＯである請求項８２記載のベクター。
  84. 【請求項８４】 請求項７５ないし８３いずれか１記載のベクターで形質転
    換された宿主細胞。
  85. 【請求項８５】 該宿主細胞がＥ．ｃｏｌｉ， Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｓｔｒ
    ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、ＳａｌｍｏｎｅｌｌａおよびＳ
    ｅｒｒａｔｉａよりなる群から選択される請求項８４記載の宿主細胞。
  86. 【請求項８６】 該宿主細胞が酵母、菌類、植物、昆虫細胞および哺乳動物
    細胞よりなる群から選択される請求項８４記載の宿主細胞。
  87. 【請求項８７】 該哺乳動物細胞がＣＨＯ細胞系、ＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ
    細胞、Ｌ細胞、ネズミ３Ｔ３細胞、ｃ６神経膠腫細胞および骨髄腫細胞系よりな
    る群から選択される請求項８６記載の宿主細胞。
  88. 【請求項８８】 該哺乳動物細胞がＣＨＯ ＤＧ４４細胞である請求項８６
    または８７記載の宿主細胞。
  89. 【請求項８９】 請求項８４ないし８８いずれか１記載の宿主細胞を含む非
    −ヒト脊椎動物。
  90. 【請求項９０】 医薬上許容される担体、アジュバントおよび／または希釈
    剤と共に、請求項２７ないし４７いずれか１記載のポリペプチド、請求項４８な
    いし５４いずれか１記載のペプチド断片、または請求項５５ないし７４いずれか
    １記載の抗体またはその断片を含む医薬組成物。
  91. 【請求項９１】 該ポリペプチドがポリペプチド／キレート、ポリペプチド
    ／薬物、ポリペプチド／プロドラッグ、ポリペプチド／トキシン、ポリペプチド
    ／イメージングマーカー、抗体／キレート、抗体／薬物、抗体／プロドラッグ、
    抗体／トキシンおよび抗体／イメージングマーカーよりなる群から選択される形
    態である請求項９０記載の医薬組成物。
  92. 【請求項９２】 該キレートが30Ｙ、131Ｉおよび188Ｒｅよりなる群から選
    択される請求項９１記載の医薬組成物。
  93. 【請求項９３】 該薬物が細胞毒性薬物である請求項９１記載の医薬組成物
    。
  94. 【請求項９４】 該細胞毒性薬物がアドリアマイシン、メルファラン、シス
    プラチン、タキソール、フルオロウラシル、シクロフォスファミドよりなる群か
    ら選択される請求項９３記載の医薬組成物。
  95. 【請求項９５】 該プロドラッグが抗体指向性プロドラッグ療法またはＡＤ
    ＥＰＴである請求項９１記載の医薬組成物。
  96. 【請求項９６】 該トキシンがリシン、アブリン、ジフテリアトキシンおよ
    びシュードモナスエンドトキシン（ＰＥ４０）よりなる群から選択される請求項
    ９１記載の医薬組成物。
  97. 【請求項９７】 該イメージングマーカーが125Ｉ、131Ｉ、123Ｉ、111Ｉｎ
    、105Ｒｈ、153Ｓｍ、67Ｃｕ、67Ｇａ、166Ｈｏ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、189Ｒｅお
    よび99mＴｃよりなる群から選択される請求項９１記載の医薬組成物。
  98. 【請求項９８】 該イメージングマーカーがガドリニウムである請求項９１
    記載の医薬組成物。
  99. 【請求項９９】 医薬上許容される担体、アジュバントおよび／または希釈
    剤と共に、請求項１ないし２６いずれか１記載の核酸配列またはその断片、また
    は請求項２７ないし４７いずれか１記載のポリペプチド、または請求項４８ない
    し５４いずれか１記載のペプチド断片、または請求項５５ないし７４いずれか１
    記載の抗体またはその断片を含むワクチン。
  100. 【請求項１００】 該ワクチンがイディオタイプワクチンである請求項９９
    記載のワクチン。
  101. 【請求項１０１】 該ワクチンが経口、吸入、局所または非経口経路を介す
    る投与用に処方される請求項９９または１００記載のワクチン。
  102. 【請求項１０２】 免疫学的に有効な量の請求項２７ないし４７いずれか１
    記載のポリペプチド（またはそのペプチド断片）、または請求項４８ないし５４
    いずれか１記載のペプチド断片、または請求項５５ないし７４いずれか１記載の
    抗体（またはその断片）、または請求項９０ないし９８いずれか１記載の医薬組
    成物、または請求項９９ないし１０１いずれか１記載のワクチンを脊椎動物に投
    与することを特徴とする脊椎動物において病気に対する免疫応答を誘導する方法
    。
  103. 【請求項１０３】 該ポリペプチド、ペプチド断片または抗体（またはその
    断片）が医薬上許容される担体、アジュバントおよび／または希釈剤と共に投与
    される請求項１０２記載の方法。
  104. 【請求項１０４】 治療上有効量の請求項２７ないし４７いずれか１記載の
    ポリペプチド（またはそのペプチド断片）、または請求項４８ないし５４いずれ
    か１記載のペプチド断片、または請求項５５ないし７４いずれか１記載の抗体（
    またはその断片）、または請求項９０ないし９８いずれか１記載の医薬組成物、
    または請求項９９ないし１０１いずれか１記載のワクチンを脊椎動物に投与する
    ことを特徴とする、治療および／または予防を必要とする脊椎動物において病気
    を治療および／または予防する方法。
  105. 【請求項１０５】 該病気が癌、慢性関節リウマチおよび冠心臓病よりなる
    群から選択される請求項１０２ないし１０４いずれか１記載の方法。
  106. 【請求項１０６】 該病気が癌である請求項１０２ないし１０５いずれか１
    記載の方法。
  107. 【請求項１０７】 該癌が発癌性腫瘍；結腸−直腸癌、乳癌、肺癌、頭部お
    よび頸部腫瘍、肝癌、膵臓癌、卵巣癌、胃癌、脳癌、膀胱癌、前立腺癌および尿
    管／生殖管癌、食道癌のごとき上皮起源の腫瘍；肉腫のごとき間葉腫瘍；および
    Ｂ細胞リンパ腫のごとき造血腫瘍よりなる群から選択される請求項１０６記載の
    方法。
  108. 【請求項１０８】 診断上許容される担体および／または希釈剤と共に、請
    求項５５ないし７４いずれか１記載の抗体（またはその断片）を含む、脊椎動物
    においてｐ５３遺伝子によってコードされたポリペプチドの検出用の診断キット
    。
  109. 【請求項１０９】 （ａ）請求項５５ないし７４いずれか１記載の抗体（ま
    たはその断片）を含有する第１の容器および （ｂ）検出可能な標識と共に該抗体（またはその断片）の結合パートナーを含
    むコンジュゲートを含有する第２の容器を含む請求項１０８記載の診断キット。
  110. 【請求項１１０】 （ａ）脊椎動物からの試料を、請求項１ないし２６いず
    れか１記載の核酸配列、またはそのオリゴヌクレオチド断片を含む核酸プローブ
    と接触させ、次いで、 （ｂ）核酸試料およびポリヌクレオチド配列の間のハイブリダイゼーションを
    検出することを特徴とする脊椎動物において病気をスクリーニングする方法。
  111. 【請求項１１１】 該オリゴヌクレオチド断片が長さが約１０ないし約１０
    ０ヌクレオチドの間で請求項１１０記載の方法。
  112. 【請求項１１２】 該オリゴヌクレオチド断片が長さが約１５ないし約３０
    ヌクレオチドの間で請求項１１０または１１１記載の方法。
  113. 【請求項１１３】 非−ハイブリダイゼーションと比較したハイブリダイゼ
    ーションが病気を示す請求項１１０ないし１１２いずれか１記載の方法。
  114. 【請求項１１４】 該病気が癌である請求項１１０ないし１１３いずれか１
    記載の方法。
  115. 【請求項１１５】 ハイブリダイゼーションが低、中程度または高ストリン
    ジェンシー下で行われる請求項１１０ないし１１４いずれか１記載の方法。
  116. 【請求項１１６】 ハイブリダイゼーションが高ストリンジェンシー下で行
    われる請求項１１０ないし１１５いずれか１記載の方法。
  117. 【請求項１１７】 （ａ）脊椎動物からの試料を、請求項５５ないし７４い
    ずれか１記載の抗体（またはその断片）を接触させ、次いで、 （ｂ）ｐ５３ポリペプチドに結合した抗体（またはその断片）の存在を検出す
    ることを特徴とする脊椎動物において病気をスクリーニングする方法。
  118. 【請求項１１８】 該病気が癌である請求項１１７記載の方法。
  119. 【請求項１１９】 （ａ）請求項１ないし２６いずれか１記載の核酸配列、
    または請求項７５ないし８３いずれか１記載のベクターを宿主細胞に挿入し；（
    ｂ）形質転換細胞において核酸配列を発現させることを特徴とする遺伝子治療方
    法。
  120. 【請求項１２０】 該ベクターが発現ベクターである請求項１１９記載の方
    法。
  121. 【請求項１２１】 （ａ）請求項１ないし２６いずれか１記載の核酸配列を
    脊椎動物から単離し； （ｂ）該核酸配列をベクターにクローニングし； （ｃ）抗体断片ライブラリーを構築し、次いで、 （ｄ）注目する抗体を発現するクローンにつき該ライブラリーをスクリーニン
    グする； ことを特徴とする脊椎動物において、ｐ５３蛋白質またはその部分に対する結合
    親和性を有する抗体（またはその断片）の製法。
  122. 【請求項１２２】 該抗体（またはその断片）が、脊椎動物において、ｐ５
    ３蛋白質またはその部分に対する結合親和性を有する請求項１２１記載の方法。
  123. 【請求項１２３】 該核酸配列が病気にかかった器官、または病気の発現に
    ついての収集点から得られる請求項１２１記載の製法。
  124. 【請求項１２４】 該器官がリンパ節である請求項１２３記載の製法。
  125. 【請求項１２５】 該ベクターがファージ提示ベクターである請求項１２１
    ないし１２４いずれか１記載の製法。
  126. 【請求項１２６】 該ベクターがＭＣＯ１、ＭＣＯ３およびＭＣＯ６よりな
    る群から選択される請求項１２５記載の製法。
  127. 【請求項１２７】 該ベクターがＭＣＯ１である請求項１２５または１２６
    記載の製法。
  128. 【請求項１２８】 請求項１ないし２６いずれか１記載の核酸配列またはそ
    のオリゴヌクレオチド断片を用い、脊椎動物においてｐ５３蛋白質またはその部
    分に対する結合親和性を有する抗体（またはその断片）のポリペプチドをコード
    するヌクレオチド配列を突き止める方法。
  129. 【請求項１２９】 （ａ）生物学的試料を、請求項１ないし２６いずれか１
    記載の核酸配列またはそのオリゴヌクレオチド断片と接触させ、次いで、 （ｂ）該核酸配列またはオリゴヌクレオチド断片にハイブリダイズする生物学
    的試料中のヌクレオチド配列を同定することを含む請求項１２８記載の方法。
  130. 【請求項１３０】 該オリゴヌクレオチド断片が長さが約１０ないし約１０
    ０の間のヌクレオチドである請求項１２９記載の方法。
  131. 【請求項１３１】 該オリゴヌクレオチド断片が長さが約１５ないし約３０
    の間のヌクレオチドである請求項１２９または１３０記載の方法。
JP2000606630A 1999-03-19 2000-03-15 抗−ｐ５３抗体 Pending JP2002542768A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AUPP9321A AUPP932199A0 (en) 1999-03-19 1999-03-19 Anti-p53 antibodies
AU9321 1999-03-19
PCT/AU2000/000189 WO2000056770A1 (en) 1999-03-19 2000-03-15 ANTI-p53 ANTIBODIES

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2002542768A true JP2002542768A (ja) 2002-12-17

Family

ID=3813518

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2000606630A Pending JP2002542768A (ja) 1999-03-19 2000-03-15 抗−ｐ５３抗体

Country Status (7)

Country Link
US (2) US20070128672A1 (ja)
EP (2) EP1171469A4 (ja)
JP (1) JP2002542768A (ja)
AU (1) AUPP932199A0 (ja)
CA (1) CA2365104A1 (ja)
NZ (2) NZ513976A (ja)
WO (1) WO2000056770A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007023815A1 (ja) * 2005-08-23 2007-03-01 Yamasa Corporation 心疾患及びウイルス性疾患治療薬

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2003900767A0 (en) * 2003-02-21 2003-03-13 St Vincent's Hospital Sydney Limited Idiotypic vaccine
CN113287569B (zh) * 2021-05-27 2023-04-07 四川康城生物科技有限公司 一种免疫低下动物模型的构建方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08505607A (ja) * 1992-11-26 1996-06-18 ユニバーシティ オブ ダンディー ｐ５３タンパク質の活性化

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ334809A (en) * 1996-10-07 2000-12-22 Schering Corp Assay for the detection of antibodies against p53
FR2755144B1 (fr) * 1996-10-29 1998-11-27 Rhone Poulenc Rorer Sa Fragments d'anticorps a chaine unique anti-p53 et utilisation
IL121041A0 (en) * 1997-06-09 1997-11-20 Yeda Res & Dev Immunogenic compositions for induction of anti-tumor immunity

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH08505607A (ja) * 1992-11-26 1996-06-18 ユニバーシティ オブ ダンディー ｐ５３タンパク質の活性化

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN6010010885, Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．, 1991, Ｖｏｌ．２２２, ｐ．５８１−５９７ *
JPN6010010887, Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．, 1992, Ｖｏｌ．８９, ｐ．４４５７−４４６１ *
JPN6010010889, Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ, 1994, Ｖｏｌ．１３， Ｎｏ．１４, ｐ．３２４５−３２６０ *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007023815A1 (ja) * 2005-08-23 2007-03-01 Yamasa Corporation 心疾患及びウイルス性疾患治療薬

Also Published As

Publication number Publication date
WO2000056770A1 (en) 2000-09-28
AUPP932199A0 (en) 1999-04-15
US20080233120A1 (en) 2008-09-25
EP1171469A1 (en) 2002-01-16
EP1908479A2 (en) 2008-04-09
EP1171469A4 (en) 2003-04-16
NZ536766A (en) 2006-04-28
CA2365104A1 (en) 2000-09-28
NZ513976A (en) 2005-01-28
US20070128672A1 (en) 2007-06-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3689909A1 (en) Tigit antibody, antigen-binding fragment thereof, and medical use thereof
EP1623997B1 (en) Recombinant antibodies and fragments recognising ganglioside n-glycolyl-gm3 and use thereof in the diagnosis and treatment of tumours
JP2022528061A (ja) 抗クローディン１８．２抗体及びその用途
KR20190082815A (ko) 중화 항-tl1a 단일 클론 항체
EP3741777A1 (en) Pd-l1 antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof
WO2019098763A9 (ko) 알파-시누클레인에 대한 항체 및 그 용도
KR102405278B1 (ko) Alk7 결합 단백질 및 이들의 용도
JP2022523710A (ja) Ｃｄ４４に特異的な抗体
JP4535424B2 (ja) 多発性骨髄腫の治療法
JP2005528884A (ja) Ｍｎ結合および細胞接着中和活性を有するヒト抗体
WO2021147984A1 (zh) 抗angptl3抗体及其应用
JP2022514693A (ja) Ｍｕｃ１８に特異的な抗体
WO2019076277A1 (zh) 抗pd-1抗体和抗lag-3抗体联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途
JP2022514786A (ja) Ｍｕｃ１８に特異的な抗体
JP2016516092A (ja) Ｍ−ｃｓｆを標的とする抗体
RU2534890C2 (ru) Антитела против mst1r и их применение
US20080233120A1 (en) Anti-p53 Antibodies
EP1862178A1 (en) Use of HLTF antibodies for diagnosis and treatment of cancer
JP2022517865A (ja) Ｃｘｃｌ１機能に関与する疾患の治療のための組成物および方法
AU769679B2 (en) Anti-p53 antibodies
US20240043568A1 (en) Development of new tumor engager therapeutic drug and use thereof
JP2002515230A (ja) ベロ毒素ｉｉを認識するヒト型化抗体、および該抗体を産生する細胞株
AU2004201808A1 (en) Anti-p53 antibodies
AU2007202756A1 (en) Anti-p53 antibodies
TW202409087A (zh) 抗ror1抗體

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20070314

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20100302

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20100727