JP2002538786A - ポリヌクレオチドおよびそれによりコードされるタンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、新規の単離されたＳＥＣＸポリヌクレオチドおよびこのＳＥＣＸポリヌクレオチドによってコードされる膜関連ポリペプチドまたは分泌ポリペプチドを提供する。ＳＥＣＸポリペプチド、またはＳＥＣＸのポリペプチド、ポリヌクレオチド、もしくは抗体の任意の誘導体、改変体、変異体、もしくはフラグメントに免疫特異的に結合する抗体もまた提供される。本発明はさらに、広範な病理学的状態の検出および処置、ならびに他の用途にＳＥＣＸのポリペプチド、ポリヌクレオチド、および抗体を利用する方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、ポリヌクレオチドおよびそのようなポリヌクレオチドがコードする
分泌もしくは膜結合型ポリペプチド、ならびにそのポリペプチドおよびポリヌク
レオチドを産生するためのベクター、宿主細胞、抗体および組換え方法に関する
。

【０００２】 （発明の背景） 真核生物細胞は、膜によって複数の機能的の異なる区画に細分され、これらは
、オルガネラと呼ばれている。各オルガネラは、その適切な機能について必須で
あるタンパク質を含む。これらのタンパク質は、しばしばソーティングシグナル
と呼ばれる配列モチーフを含み得る。このソーティングシグナルは、適切な細胞
オルガネラに対してそのタンパク質を標的化することを補助し得る。さらに、ソ
ーティングシグナルは、いくつかのタンパク質が細胞外に搬出または分泌される
ことを指向する。

【０００３】 １つのタイプのソーティング配列は、シグナル配列（シグナルペプチドまたは
リーダー配列とも呼ばれている）である。このシグナル配列は、アミノ末端拡張
を、新たに合成されるポリペプチド鎖Ａ上にシグナル配列として存在し、小胞体
（ＥＲ）と呼ばれる細胞内オルガネラへタンパク質を標的化する。

【０００４】 シグナルペプチドは、一連のタンパク質同士またはタンパク質−脂質の相互作
用に関与し、これは、シグナル配列を含むポリペプチドを、ＥＲにおけるチャネ
ルを介して転位させる。転位後、膜結合型酵素（シグナルペプチダーゼ）は、成
熟タンパク質をシグナル配列から遊離させる。

【０００５】 ＥＲは、膜結合型タンパク質と分泌型タンパク質とを、細胞質に残るタンパク
質から分離するように機能する。一旦ＥＲに標的化されると、分泌型および膜結
合型の両方のタンパク質は、ゴルジ装置と呼ばれる別の細胞オルガネラへとさら
に再分配され得る。そのゴルジは、ベシクル、リソソーム、原形質膜、ミトコン
ドリア、および他の細胞オルガネラに対してタンパク質を指向させる。

【０００６】 ヒト膜結合型および分泌型のタンパク質をコードする限定された数の遺伝子の
みが同定されている。公知の分泌型タンパク質の例としては、インスリン、イン
ターフェロン、インターロイキン、トランスフォーミング増殖因子β、ヒト成長
ホルモン、エリスロポエチン、リンホカインが挙げられる。さらなる新規ヒト分
泌型タンパク質およびそれらをコードする遺伝子を同定および特徴づけることに
ついての必要性が存在する。

【０００７】 （発明の要旨） 本発明は、部分的に、新規ヒトポリペプチド配列およびそれらの配列によって
コードされる膜結合型または分泌型ポリペプチドの発見に基づく。本発明のポリ
ペプチドは、ケモカインレセプター様タンパク質（クローン２７７７６１０）、
セマフォリン（ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎ）タンパク質様スプライス改変体（アセン
ブルクローン２８６４９３３−１および２８６４９３３−２、およびｐＣＥＰ４
／Ｓｅｃ−２８６４９３３ベクターおよびｃＤＮＡクローンｐＣＲ２．１−２８
６４９３３）、推定ミトコンドリアタンパク質（クローン２９８２３３９）、Ｓ
ＬＩＴタンパク質様スプライス改変体（アセンブルクローン３３５２３５８−１
および３３５２３５８−２ならびにｃＤＮＡクローン３３５２３５８−Ｓ１５３
Ａ）、推定ミクロボディ（ペルオキシソーム）関連タンパク質（クローン３８８
４８４６、３８８４８４６−１および３８８４８４６−２）、テトラスパニン様
タンパク質（クローン３９１１６７５および３９１１６７５−２）、推定プロリ
ンリッチ膜タンパク質（クローン４００４０５６および４００４０５６．０．１
４３ｕ）、ラミニン（３−鎖前駆体様タンパク質（クローン４００４７３１−１
）、ＡＶＥＮＡタンパク質様スプライス改変体（クローン４００９３３４−１お
よび４００９３３４−２）、胎児性肺関連タンパク質（クローン４０３５５０８
）ならびに骨髄情報調節タンパク質（クローン４３３９２６４）を包含する。こ
れらのポリヌクレオチドおよびそれによってコードされるポリペプチドは、ＳＥ
ＣＸ遺伝子セットと総称して呼ばれる。その配列は、配列番号１から３２に開示
される。

【０００８】 １つの局面において、本発明は、単離されたＳＥＣＸ核酸分子を含む。これは
、以下の１つ以上のアミノ酸配列を含む、ポリペプチドをコードするヌクレオチ
ド配列を包含する：配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、
２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９ および８１。
例えば、種々の実施形態において、その核酸は以下の配列を含むヌクレオチドを
包含し得る：配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２
１、２３、２５、２７、２９、３１、７４、７６、７８および８０。あるいは、
コードされたＳＥＣＸポリペプチドは、改変体アミノ酸配列を有し得る。例えば
、本明細書に開示されるような、開示されるアミノ酸配列と１００％未満の同一
性または類似性を有する。

【０００９】 本発明はまた、以下の１つ以上のアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド
を包含する：配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、２０、２２、
２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４４、４６ま
たは４８、あるいはこれらのアミノ酸配列の少なくとも１５アミノ酸を有するフ
ラグメント。包含されるのはまた、ＳＥＣＸポリペプチドの天然に存在するポリ
ペプチドである。ここで、そのポリペプチドは、ＳＥＣＸ核酸分子からなる核酸
分子に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によって
コードされる。

【００１０】 本発明に含まれるのはまた、ＳＥＣＸポリペプチドに選択的に結合する抗体で
ある。

【００１１】 本発明はさらに、ＳＥＣＸ核酸分子が発言されるような条件下で、本明細書に
おいて記載されるＳＥＣＸ核酸の１つを発現する宿主細胞を培養することによっ
て、ＳＥＣＸポリペプチドを産生するための方法を包含する。

【００１２】 本発明はまた、ＳＥＣＸポリペプチドまたは核酸の存在を、哺乳動物（例えば
、ヒト）からのサンプル中で検出するための方法を包含する。この方法は、その
哺乳動物に由来するサンプルを、本明細書に記載されるポリペプチドの１つを選
択的に結合する抗体と接触させる工程、およびそのサンプル中でその抗体および
そのポリペプチドを含む反応複合体を検出する工程による。そのサンプル中の複
合体の形成は、そのサンプル中のポリペプチドの存在を示唆する。

【００１３】 本発明はさらに、疾患（例えば、サンプル中にＳＥＣＸポリペプチドに対して
少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドの変更されたレベ
ルに関連する病理的状態）の存在を検出または診断するための方法を包含する。
この方法は、その哺乳動物被検体（例えば、ヒト）からの生物学的サンプル中に
そのポリペプチドを測定する工程、および正常被検体中に、もしくは異なる時間
（例えば、状態の発症前）での同じ被検体中に存在するそのポリペプチドのレベ
ルに対して検出されたレベルを比較する工程を包含する。正常レベルに比較して
そのポリペプチドのレベルにおける増加または減少は、疾患状態を示す。

【００１４】 本発明に含まれるのはまた、哺乳動物（例えば、ヒト）からのサンプル中でＳ
ＥＣＸ核酸分子の存在を検出する方法である。この方法は、そのサンプルを、そ
の核酸分子に選択的にハイブリダイズする核酸プローブまたはプライマーと接触
させる工程、およびその核酸プローブまたはプライマーがそのサンプル中の核酸
分子と結合するか否かを決定する工程を包含する。その核酸プローブまたはプラ
イマーの結合は、その核酸分子がそのサンプルに存在することを示す。

【００１５】 本発明はさらに、哺乳動物（例えば、ヒト）に由来するサンプル中にＳＥＣＸ
核酸の変更したレベルに関連する疾患の存在を検出または診断するための方法を
包含する。この方法は、その哺乳動物被検体からの生物学的サンプル中の核酸の
レベルを測定する工程、および検出されたレベルを、正常被検体中または異なる
ときでの同じ被検体中に存在するその核酸のレベルにおいて検出されるレベルと
を比較する工程を包含する。正常レベルと比較してのその核酸のレベルにおける
増加または減少は、疾患状態を示す。

【００１６】 本発明はまた、哺乳動物（例えば、ヒト）における病理的状態を処置する方法
を包含する。この方法は、その被検体に、ＳＥＣＸポリペプチドを、その被検体
にとってその病理的状態を軽減するに十分な量で投与する工程による。このポリ
ペプチドは、ＳＥＣＸポリペプチドと少なくとも８０％同一のアミノ酸配列を有
する。

【００１７】 あるいは、その哺乳動物は、本明細書において記載される抗体を、その病理状
態を軽減するに十分な量で投与する工程によって処置され得る。

【００１８】 本発明の処置の方法が意図する病理的状態としては、以下が挙げられる：癌、
免疫不全、自己免疫疾患、後天性免疫不全症候群、移植拒絶、アレルギー、病原
生物または因子による感染、炎症障害、関節炎、造血障害、皮膚障害、動脈硬化
、再狭窄、神経学的疾患、アルツハイマー病、外科的または外傷的な創傷、脊髄
損傷、および骨格障害。

【００１９】 他に規定しない限り、本明細書において使用されるすべての技術および科学の
用語は、本発明が属する技術の当業者によって通常理解されるのと同様の意味を
有する。本明細書において記載されるものと類似または等価である方法および材
料が本発明の実施または試験において使用され得るが、適切な方法および材料を
以下に記載する。本明細書において言及されるすべての刊行物、特許出願、およ
び他の参考文献は、その全体が本明細書において参考として援用される。相反す
る場合、本明細書（定義を含む）が支配する。さらに、材料、方法、および実施
例は、例示のみであり、そして限定を意図しない。

【００２０】 本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から
明白である。

【００２１】 （発明の詳細な説明） 本発明は、一部、新規ポリヌクレオチド配列およびこれらの配列にコードされ
る膜結合型ポリペプチドまたは分泌型ポリペプチドの発見に基づく。本発明のヌ
クレオチドによってコードされるポリペプチドとしては以下が挙げられる：クロ
ーン２７７７６１０（ケモカインレセプター様タンパク質、配列番号１−２）；
アセンブルクローン２８６４９３３−１および２８６４９３３−２ならびに ｐ
ＣＥＰ４／Ｓｅｃ−２８６４９３３ベクターおよびｃＤＮＡクローンｐＣＲ２．
１−２８６４９３３（セマフォリンタンパク質様スプライス改変体、配列番号３
−６、２９−３０）；クローン２９８２３３９（推定ミトコンドリアタンパク質
、配列番号７−８）、アセンブルクローン３３５２３５８−１および３３５２３
５８−２ならびにｃＤＮＡクローン３３５２３５８−Ｓ１５３Ａ（ＳＬＩＴタン
パク質様スプライス改変体、配列番号９−１２、３１−３２）；クローン３８８
４８４６、３８８４８４６−１および３８８４８４６−２（推定ミクロボディ／
ペルオキシソーム関連タンパク質スプライス改変体、配列番号１３−１４および
７４−７７）、クローン３９１１６７５および３９１１６７５−２（テトラスパ
ニン（ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎ）様タンパク質スプライス改変体、配列番号１５
−１６および７８−７９）；クローン４００４０５６および４００４０５６．０
．１４３ｕ（推定プロリンリッチ膜タンパク質 スプライス改変体、配列番号１
７−１８および８０−８１）；クローン４００４７３１−１（ラミニン鎖前駆体
様タンパク質、配列番号１９−２０）；クローン４００９３３４−１および４０
０９３３４−２（ＡＶＥＮＡタンパク質様スプライス改変体、配列番号２１−２
４）；クローン４０３５５０８（新規胎児肺関連タンパク質、配列番号２５−２
６）；ならびにクローン４３３９２６４（骨髄性上方制御タンパク質、配列番号
２７−２８）。これらの遺伝子は、総称してＳＥＣＸ遺伝子セットと呼ばれる。
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは表１に示される。表１は、本発明の各ヌ
クレオチドおよびアミノ酸の配列についての配列番号、ならびに本明細書に記載
される種々の局面および実施形態において使用された本発明のクローンに特異的
なプライマーについての配列番号を列挙する。

【００２２】

【表１】 （１．クローン２７７７６１０） クローン２７７７６１０は、１８１２ｂｐの核酸配列（配列番号Ｉ）であり、
これは、もともと骨髄を含む骨組織から同定された。全長クローン（図１）を、
骨組織に発現された配列からさらにアセンブルした。３３３アミノ酸残基を有す
るポリペプチド（配列番号２）をコードするオープンリーディングフレーム（「
ＯＲＦ」）がヌクレオチド５３７−１５３５（図１）に見出された。このヌクレ
オチド配列は、Ｋｏｚａｋ配列を含む。終止コドンＴＧＡがヌクレオチド１５３
６−１５３８に見出される。ＰＳＯＲＴ分析の結果は、そのタンパク質が原形質
膜に局在することを０．６０００の確からしさで推定する。ＳｉｇｎａｌＰプロ
グラムは、シグナル配列が、存在し、おそらく残基４４と残基４５との間でおそ
らく切断することを推定する。これは、アミノ酸ＴＬＡ−ＬＷ（すなわち、Ｔｈ
ｒＬｅｕＡｌａ−ＬｅｕＴｒｐ）の間でダッシュ線で表される。

【００２３】 クローン２７７７６１０のタンパク質は、ヒト７回膜貫通レセプタータンパク
質ＨＮＥＡＡ８１（欧州特許番号９１３４７１−Ａ２）に対して３３３残基のう
ち３３２残基（９９％）が同一および陽性の両方である。本明細書において「同
一」である残基は、２つの配列の間の比較において、２つの配列のアラインメン
トにおいて等価のヌクレオチド塩基またはアミノ酸の残基が、同じ残基であるよ
うな残基に対応する。アラインメントにおける２つの配列の間の比較が、比較さ
れる等価な位置における残基が以下に規定されるような同じアミノ酸または保存
的アミノ酸のいずれかであることを示すとき残基は「陽性」である。クローン２
７７７６１０はまた、３３３残基のうち３２８残基が（９８％）、ケモカインレ
セプター様タンパク質（ＰＣＴ公開ＷＯ９８３９４４１−Ａ１）と同一および陽
性の両方であることが見出された。より弱い類似性もまた、３３８残基のヒト推
定Ｇタンパク質共役レセプターＫＩＡＡ０００１（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｑ１
５３９１）について検出された。

【００２４】 Ｇタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）スーパーファミリーのメンバーは、
７回膜貫通ドメインを含み、ヘテロ三量体Ｇ蛋白質を通じて細胞外シグナルを伝
達する。Ｇタンパク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）は、内在型膜タンパク質であ
り、これは、外部刺激に対する細胞応答の調節におけるその中心的な役割に起因
して非常に薬理学的に重要である。例えば、Ｍａｒｃｈｅｓら、１９９９ Ｔｒ
ｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ ２０（９）：３７０−５；およびＲｏ
ｚｅｎｇｕｒｔ １９９８ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ １７７（４）：５
０７−１７を参照のこと。

【００２５】 ＧＰＣＲレセプターは、選択された神経伝達物質およびペプチドホルモンに特
異的に結合し、そして種々のシグナルの認識およびＧタンパク質媒介性伝達の基
礎をなすようである。リガンド結合したＧＰＣＲによって活性化されるこれらの
シグナルは、種々の正常および異常なプロセスに相関付けられており、これには
、発生、炎症、および悪性形質転換（マトリクス滲出、運動性、化学遊走性、接
着、増殖および生存のシグナル伝達）を含む。これらのシグナル伝達ペプチドは
、細胞プロセスに対するその特徴的効果を、その標的細胞表面上の特定のＧＰＣ
Ｒに結合することによって発揮する。代表的には、神経ペプチドのその同族ＧＰ
ＣＲへの結合は、複数のシグナル伝達経路の活性化する。この経路は、相乗的か
たう組合せの様式で作用して、核への有糸分裂シグナルを連繋し、そして細胞増
殖を促進する。引き続いてのタンパク質リン酸化カスケードの活性化を伴う、脂
質に由来する第二のメッセンジャーにおける迅速な増加は、神経ペプチドに対す
る重要な早期の応答である。シグナル伝達において出現するテーマは、これらの
アゴニストがまた、細胞タンパク質の迅速かつ協調的なチロシン（非レセプター
チロシンキナーゼｐ１２５ｆａｋおよびアダプタータンパク質ｐ１３０ｃａｓな
らびにパラキシリンを含む）リン酸化を誘導する。このチロシンリン酸化経路は
、アクチン骨格の統合性に依存し、そして機能的Ｒｈｏを必要とする。

【００２６】 クローン２７７７６１０タンパク質は、ケモカインレセプター様特性を有する
７回膜貫通レセプタータンパク質である。クローン２７７７６１０は、Ｇタンパ
ク質共役レセプター（ＧＰＣＲ）であり、これは、おそらくγアミノ酪酸レセプ
ターであり、Ｐ２Ｙ様ＧＰＣＲのクラスである。それ自体、クローン２７７７６
１０は、Ｇタンパク質共役レセプター代謝に関連する病理および障害（例えば、
細菌疾患；喘息；真菌疾患；ウイルス疾患；ＨＩＶ−１；ＨＩＶ−２；ガン；食
欲不振；パーキンソン病；高血圧；骨粗鬆症；心筋梗塞；そううつ病；精神分裂
病；ジル・ド・ラ・ツレット症候群；炎症性障害；およびウイルス感染）に有用
である。

【００２７】 他のＧＰＣＲの役割、および２７７７６１０のリンパ組織（例えば、脾臓、骨
髄、リンパ節（実施例６を参照のこと）における高発現に基づいて、本発明者ら
は、２７７７６１０による膜貫通シグナル伝達を阻害する低分子、または２７７
７６１０とリガンドとの相互作用を遮断するように設計されたモノクローナル抗
体での、２７７７６１０の首尾よい治療標的化が、リンパ増殖障害（骨髄腫、骨
髄性白血病、非ホジキンリンパ腫など）または自己免疫疾患（ＳＬＥなど）また
はその両方を調節するにおいて有用性を有し得ることを予期する。同様に、成体
ヒト脳全体、海馬、黒質および脊髄における２７７７６１０の高発現に関して、
２７７７６１０シグナル伝達の、上記のアプローチを用いた調節は、運動機能に
影響を与える特定の神経変性障害を調節する臨床的有用性を有する。

【００２８】 （２．クローン２８６４９３３−１） クローン２８６４９３３−１は、核酸配列（配列番号３）を含み、これは、３
４９８ヌクレオチド（図２）を含む。このクローンは、クローン２８６４９３３
−２（下）に、以下の点を除いて類似する：２８６４９３３−１が１９４２位〜
２１０６位に１６４ヌクレオチドのインサートを有すること。このクローンを生
じる遺伝子フラグメントは、主に心臓組織において見出された。この遺伝子に含
まれるフラグメントもまた、リンパ節、膵臓、視床、脳、唾液腺および副腎にお
いて見出された。クローン２８６４９３３−１は、Ｋｏｚａｋ配列、開始コドン
をヌクレオチド２１４から２１６に、ＴＡＡ終止コドンをヌクレオチド３０３１
〜３０３３に含む。２１４と３０３０との間のヌクレオチド残基は、９３９アミ
ノ酸残基（図２）のタンパク質（配列番号４）をコードするＯＲＦを規定する。
２８６４９３３−１の推定成熟細胞外ドメインに対応するフラグメントの分子ク
ローニングおよび発現を、実施例２および３に与える。ＰＳＯＲＴプログラムは
、２８６４９３３−１タンパク質は、０．４６００の確からしさで原形質膜に局
在することを予測する。このタンパク質は、Ｉ型膜貫通タンパク質であり、ここ
で、その推定膜貫通ドメイン配列番号４の残基６４５−６６１の間であると予測
される。ＳｉｇｎａｌＰプログラミングは、そのタンパク質が残基１８と１９と
の間にシグナルペプチド切断部位を有し、これは、アミノ酸ＡＧＡ−ＧＦ（すな
わち、ＡｌａＧｌｙＡｌａ−ＧｌｙＰｈｅ）の間のダッシュで表される。

【００２９】 ２８６４９３３−１タンパク質は、マウスセマフォリンポリペプチドと、９４
％同一、そして９７％類似であり、８８８アミノ酸残基を共有する（ＧｅｎＢａ
ｎｋ登録番号ＡＡＢ８６４０８）。さらに、ヒトセマフォリンＩＩＩ（ＧｅｎＢ
ａｎｋ登録番号ＡＡＡ６５９３８）に対して３５％同一性および５３％類似性を
示す。これらの理由のために、２８６４９３３−１ポリペプチドは、サイトカイ
ン様増殖因子と考えられる。

【００３０】 セマフォリン（または、コラプシンともいわれる）ファミリーの分子は、神経
発生の間の神経増殖の方向付けにおいて重要な役割を果たす。このファミリーは
、アミノ末端における保存的セマフォリンドメインの存在によって特徴付けられ
る。ヒトセマフォリンＡ（Ｖ）の変異分析は、４０の肺癌中３件の変異（Ｉの場
合における生殖系列）を明らかにした。セマフォリンＥは、ヒト癌（卵巣癌を含
む）における非ＭＤＲ薬物耐性を担っており、そしてＣＤＤＰ耐性細胞株におい
て過剰発現されており、そして多様な化学療法薬物によってならびにＸ線および
ＵＶ照射によって誘導される。Ｙａｍａｄａら、１９９７ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９４：１４７１３−１４７１８。ヒトセマフォリンＥ ｍＲ
ＮＡは、慢性関節リウマチ患者の滑膜線維芽細胞において上方制御される。Ｍａ
ｎｇａｓｓｅｒ−Ｓｔｅｐｈａｎら、１９９７ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙ
ｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２３４：１５３−１５６．ヒトニューロピリン（ｎ
ｅｕｒｏｐｉｌｉｎ）−１（神経細胞方向付けを場気合するコラプシン／セマフ
ォリンファミリーに対するレセプター）は、血管内皮増殖因子についてのアイソ
フォーム特異的レセプターとして内皮細胞および腫瘍細胞によって発現され、そ
してＶＥＧＦ誘導された血管新生を調節すると考えられる。Ｓｏｋｅｒら、１９
９８ Ｃｅｌｌ ９２：７３５−７４５を参照のこと。

【００３１】 セマフォリン（セマフォリンレセプターのプレキシンファミリー）および散乱
（ｓｃａｔｔｅｒ）因子レセプターは、進化的に保存されているタンパク質モジ
ュール（例えば、セマフォリンドメインおよびＭｅｔ関連配列（ＭＲＳ））を共
有する。Ａｒｔｉｇｉａｎｉら、１９９９、ＩＵＢＭＢ Ｌｉｆｅ ４８（５）
：４７７−８２。これらのタンパク質は、細胞に方向付けを与える鍵を媒介する
共通の役割を有する。発生の間、散乱因子レセプターは、細胞移動、上皮管形成
、および神経突起拡張を制御する。セマフォリンおよびそのレセプターは、軸索
の方向付けについての公知のシグナルである。これらはまた、細胞移動および形
態形成を含む発生プロセスを制御すると考えられ、そして免疫機能および腫瘍進
行と相関付けられる。散乱因子および分泌されたセマフォリンは、分散性のリガ
ンドであるが、膜結合型セマフォリンは細胞同士の相互作用によってシグナル伝
達をする。セマフォリンによる細胞の方向付けは、単独またはニューロフィリン
とのレセプター複合体でのプレキシンを必要とする。セマフォリンは、軸索方向
付けにおけるそれらの役割の他に、プレキシンレセプターを通じた細胞忌避の鍵
を媒介することによる、形態形成および組織再モデリングにおいて多重機能を有
する。

【００３２】 ２８６４９３３タンパク質の腫瘍形成における可能な役割は、化学耐性の発生
、放射性治療体制、栄養性因子に制限された二次組織部位の微小環境における生
存、ＶＥＧＦ誘導された血管形成を増強することへの可能な関与。

【００３３】 本明細書においてまとめられるセマフォリンの報告される役割に基づいて、２
８６４９３３の首尾よい治療的標的化および／またはそのスプライス改変体が顕
著な抗腫瘍活性を、確立された細胞傷害性／遺伝的毒性治療（すなわち、化学的
感作、放射性感作）との組み合わせで生じることが予期されている。さらに、セ
マフォリンは、軸索成長および紙型細胞移動における役割を果たす。この点に関
して、２８６４９３３−１および／または２８６４９３３−２の首尾よい治療的
標的化もまた、転移の散在（腫瘍負荷）の程度を限定し得、そして潜在的には、
腫瘍血管新生を制限し得る。２８６４９３３およびそのスプライス改変体の治療
的標的化もまた、２８６４９３３−１または２８６４９３３−２が同族リガンド
と相互作用し、そして膜貫通シグナルを惹起する能力をブロックするヒトまたは
ヒト化モノクローナル抗体の生成によって提供される。同様に、低分子の生成（
合成、細胞透過性ペプチドなど）であって、リガンドに結合した２８６４９３３
−１および／または２８６４９３３−２によって活性化される経路における下流
のシグナル伝達成分の１つ以上を特異的に阻害するものは、上記の顕著な抗腫瘍
活性を有すると予測される。同様に、アンチセンス構築物（裸のＤＮＡ，アデノ
ウイルス構築物）、リボザイムを導入して２８６４９３３−１および／または２
８６４９３３−２の発現を阻害することは、上記の顕著な抗腫瘍活性を有すると
予測される。

【００３４】 実施例７ならびに図１９Ａ、１９Ｂおよび１９Ｃに示される２８６４９３３−
１および２８６４９３３−２の転写物の発現プロファイルに基づいて、２８６４
９３３−１および２８６４９３３−２を標的化するための治療適応としては以下
が挙げられる：腎臓細胞癌腫、小細胞肺癌、小細胞肺癌の大細胞改変体、乳腺癌
、および悪性黒色腫。クローン２８６４９３３−１および２８６４９３３−２は
、発生機能不全（特に、神経系）に関連する病理を診断および／または処置する
ことにおいて、ならびにＣＮＳ病理（例えば、アルツハイマー病およびパーキン
ソン病）の処置において有用である。

【００３５】 （３．クローン２８６４９３３−２） クローン２８６４９３３−２は、ヌクレオチド（図３）の核酸配列（配列番号
５）を有する。このクローンは、以下の点を除いてクローン２８６４９３３−１
（上；図２）で類似する：２８６４９３３−１は、１９４２位−２１０６位にお
いて１６４ヌクレオチドのインサートを有する（クローン２８６４９３３−１に
ついての配列番号３の番号付けに従う）。この相違は、ＲＮＡスプライス改変体
であるようである。このクローン２８６４９３３−２を生じる遺伝子フラグメン
トは、主に、心臓組織において見出される。この遺伝子から転写される配列もま
た、リンパ節、膵臓、視床、脳、唾液腺および副腎において見出される。クロー
ン２８６４９３３−１は、Ｋｏｚａｋ配列、ヌクレオチド２１４〜２１６の開始
コドン、およびヌクレオチド２８６６〜２８６８でのＴＡＡ終止コドンを含む。
従って、２１４と２８６５との間のヌクレオチドは、８８４アミノ酸残基（図３
）のタンパク質（配列番号６）をコードするＯＲＦを規定する。ＰＳＯＲＴプロ
グラムは、２８６４９３３−１タンパク質が原形質膜に、０．４６００の確から
しさで局在することを予測する。ＳｉｇｎａｌＰプログラムは、プログラムは、
そのタンパク質が、残基１８と１９との間にシグナル切断部位をおそらく有する
ようであることを予測する。これは、アミノ酸ＡＧＡ−ＧＦ（すなわち、Ａｌａ
ＧｌｙＡｌａ−ＧｌｙＰｈｅ）の間のダッシュによって表される。

【００３６】 ２８６４９３３−２タンパク質は、８８８アミノ酸残基（ＧｅｎＢａｎｋ登録
番号ＡＡＢ８６４０８）を有するマウスセマフォリンに９５％同一、および９７
％類似する。さらに、これは、ヒトセマフォリンＩＩＩ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番
号ＡＡＡ６５９３８）に対して、３８％の同一性、および５５％の類似性を示す
。

【００３７】 ２８６４９３３−２タンパク質はまた、ＣＪ１４５−１と称するクローン（Ｐ
ＣＴ公開Ｗ０９８２７２０５−Ａ２）からの９７４残基のヒト分泌タンパク質に
対して、８７７残基中８６９残基（９９％）の同一性、および８７７残基中８７
１残基（９９％）の陽性を有することが見出された。２８６４９３３−２配列は
、ヒト胎児脳 ｃＤＮＡ ライブラリーから単離された。そしてこれは、サイズ
および配列の両方においてクローンＣＪ１４５−１とは異なる新規分泌型タンパ
ク質である。クローン２８６４９３３−２は、サイトカインおよび細胞増殖／分
化の活性、免疫刺激もしくは抑制活性、造血調節活性、組織増殖活性、アクチビ
ン／インヒビン活性、化学遊走性／化学運動性活性、造血および血栓活性活性、
レセプター／リガンド活性、抗炎症活性、カドヘリン／腫瘍侵入抑制活性、腫瘍
抑制活性および他の活性のために有用である。クローン２８６４９３３−２はま
た、発生機能不全、特に神経系に関連する病理を診断および／または処置するに
おいて、ならびにＣＮＳ病理（例えば、アルツハイマー病およびパーキンソン病
）の処置において有用である。

【００３８】 （４．クローン２９８２３３９） クローン２９８２３３９ は、８５６ヌクレオチド（図４）の配列（配列番号
７）を有する。これは、Ｋｏｚａｋ配列、１３８位〜１４０位の開始コドン、お
よび７２６位〜７２８位のＴＧＡ終止コドンを含む。残基１３８〜７２５の間の
この配列は、１９６アミノ酸残基（図４）のタンパク質（配列番号８）をコード
するオープンリーディングフレームを規定する。このクローンは、胎児脳に由来
し、そして胎児胸腺および胎盤から６５の配列を用いてアセンブルされた。この
クローンについてのフラグメントはまた、ヒト胎盤、胸腺、甲状腺、および骨肉
腫を含む骨において見出される。ＰＳＯＲＴは、２９８２３３９タンパク質がミ
トコンドリアマトリクス空間に０．７０７７の確からしさで局在することを予測
する。ＳｉｇｎａｌＰは、タンパク質は、公知のＮ末端シグナル配列を有しない
かもしれないことを示唆する。

【００３９】 ２９８２３３９タンパク質は、アプロチニンアナログ前駆体（ＧｅｎＢａｎｋ
登録番号ＡＡＢ５４９５４およびＡＡＢ５４９５６）である１０９残基の人工配
列と、５４残基中１６残基（２９％）の同一性、そして５４残基中２４残基（４
４％）陽性を有する。アプロチニンは、膵臓トリプシンインヒビター前駆体また
は塩基性プロターゼインヒビターとしても知られ、多くの組織において見出され
る細胞内ポリペプチドである。これは、トリプシン、カリクレイン、キモトリプ
シン、およびプラスミンの公知のインヒビターである。ＧｅｎＢａｎｋ登録番号
Ｐ００９７４；ＣｒｅｉｇｈｔｏｎおよびＣｈａｒｌｅｓ、１９８７ Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．１９４（１）：１１−２２。

【００４０】 （５．クローン３３５２３５８−１） クローン３３５２３５８−１は、２３４１ヌクレオチド配列（配列番号９）（
図５）を含む。これは、ヌクレオチド２１５−２１７での開始コドン、およびヌ
クレオチド２１７４−２１７６でのＴＡＡ終止コドンを伴う。残基２１５から２
１７３の間の配列は、６５３残基（図５）のタンパク質（配列番号１０）をコー
ドするＯＲＦを規定する。このクローンは、胎児肝臓に起源を有するポリヌクレ
オチドフラグメントによって同定された。発現される配列はまた、以下に見出さ
れる：胎児肝臓を含む肝臓、胎児腎臓を含む腎臓、および視床。ＰＳＯＲＴプロ
グラムは、３３５２３５８−１タンパク質が０．４６の確からしさで原形質膜に
局在することを予測する。ＳｉｇｎａｌＰプログラムは、このタンパク質がシグ
ナルペプチドを有することを予測する。もっともありそうな切断部位は、残基３
８と３９との間にあり、これは、アミノ酸ＡＡＡ−ＡＳ（すなわち、ＡｌａＡｌ
ａＡｌａ−ＡｌａＳｅｒ）の間のダッシュにより表され、または、残基４１と４
２との間にあり、これはアミノ酸ＡＳＡ−ＧＰ（すなわち、ＡｌａＳｅｒＡｌａ
−ＧｌｙＰｒｏ）の間に表される。タンパク質は、残基５２２と５５１との間に
存在する膜貫通ドメインを有するＩ型膜貫通タンパク質であると予測される。

【００４１】 ３３５２３５８−１タンパク質は、１５３４残基（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｂ
ＡＡ３５１８４）のタンパク質である、ヒトｓｌｉｔ−Ｉタンパク質に対してそ
の残基の３５％が同一であり、そしてその残基の４８％が類似している。３３５
２３５８−１タンパク質はまた、１５２３残基（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＢＡＡ
３５１８６）のタンパク質であるヒトｓｌｉｔ−３タンパク質に対して、３９％
同一であり、そして４６％類似する；そして１５２１残基（ＧｅｎＢａｎｋ登録
番号ＡＡＤ０４３０９）を有するヒト神経原性細胞外ｓｌｉｔタンパク質である
ｓｌｉｔ−２に対して、４０％同一であり、そして４８％類似している。３３５
２３５８−１タンパク質は、仮説的な４５．１ｋＤａタンパク質（ＧｅｎＢａｎ
ｋ登録番号ＣＡＢ７０４７３）に対して全体として５３％の同一性を有する。

【００４２】 ｓｌｉｔ遺伝子は、無脊椎動物および脊椎動物において軸索に対して保存され
た化学忌避性を有するタンパク質をコードする。Ｃｈｅｎら、２０００、Ｎｅｕ
ｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ９６：２３１−２３６；Ｙｕａｎら、１９９９ Ｄｅｖ
Ｂｉｏｌ ２１２：２９０−３０６。例えば、ＳｌｉｔのＲｏｕｎｄａｂｏｕｔ
（細胞表面に発現される）への結合は、神経原性方向付け活性へと相関づけられ
ている。従って、Ｓｌｉｔタンパク質は、胚の複数の領域において軸索突起形成
を指向し得る。

【００４３】 同様に、クローン３３５２３５８−１は、神経発達に関連する病理およびＣＮ
Ｓ病理（例えば、アルツハイマー病およびパーキンソン病）における診断および
治療上の有用性を有する。

【００４４】 ３３５２３５８−１の推定成熟細胞外ドメインの分子クローニングおよび発現
は、実施例４および５に記載される。このクローニングされたフラグメントは、
ヒト精巣および胎児脳から得られたｃＤＮＡサンプルに由来した。得られたクロ
ーンは、クローン３３５２３５８−Ｓ１５３Ａと称し、図５に示されるものから
配列が異なる。それぞれの３３５２３５８−Ｓ１５３Ａヌクレオチド配列は、図
１７Ａ（配列番号３１）に開示され、そしてポリペプチド配列は、図１７Ｂ（配
列番号３２）に開示されている。３３５２３５８−１クローンｃＤＮＡと ３３
５２３５８−Ｓ１５３Ａ ｃＤＮＡとの間の配列相違についての１つの理由は、
おそらく、ｃＤＮＡの組織または器官の供給源である。相であれば、このフェー
ディングは、タンパク質の対立遺伝子改変体（アイソフォームとしても知られる
）（例えば、開示された３３５２３５８−１ ｓｌｉｔ様タンパク質）について
の組織特異的または器官特異的な基礎を表す。従って、３３５２３５８−１ ク
ローンおよび３３５２３５８−Ｓ１５３Ａ クローンは、これらの対立遺伝子改
変体またはスプライス改変体を発現するそれらの組織または細胞型を同定するに
おいて有用性を有する。

【００４５】 ３３５２３５８配列は、ＭＥＧＦ（多重上皮増殖因子様ドメイン）／Ｓｌｉｔ
ファミリーおよびｒｏｕｎｄａｂｏｕｔに関連する。上皮増殖因子を特徴づける
ドメインは、３つのジスルフィド結合を伴う約５０アミノ酸からなる。ＥＧＦ様
ドメインは、以下を含む多数の細胞外事象において重要な役割を果たすと考えら
れる：細胞接着およびレセプター−リガンド相互作用。ＥＧＦ様ドメインを有す
るタンパク質は、しばしば、１，０００を超えるアミノ酸からなり、ＥＧＦ様ド
メインを複数コピー有し、そして特定のタンパク質同士の相互作用に関与するこ
とが知られるさらなるドメインを含む。

【００４６】 このファミリーの重要なメンバーとしては、以下が挙げられる：腫瘍サプレッ
サー（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ、２；ｆａｔ２のホモログ）。Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌ
ａ ｆａｔ遺伝子は、腫瘍サプレッサーであって、その産物は、接触依存性の様
式で成虫円盤（ｄｉｓｃ）において細胞増殖および形態形成を制御する。３３５
２３５８の別の関連物は、Ｓｌｉｔｌ（ＭＥＧＦ４としても知られる）であり、
これは、神経系および内分泌系の形成および維持に関与する。３３６２３５８の
別の関連物は、ｒｏｕｎｄａｂｏｕｔであり、これは、ＣＮＳ中線の軸索交叉を
制御し、そして進化的に保存されている方向付けレセプターの新規サブファミリ
ーを規定するＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ遺伝子である。Ｋｉｄｄら、１９９８ Ｃｅ
ｌｌ ９２：２０５−２１５；Ｎａｋａｙａｍａら、１９９８ Ｇｅｎｏｍｉｃ
ｓ ５１：２７−３４。

【００４７】 腫瘍形成における３３５２３５８の可能な役割としては、化学耐性、放射治療
耐性、二次組織部位の微小環境へと限定された栄養性因子における生存、血管新
生への可能な関与が挙げられる。

【００４８】 本明細書において記載されるＭＥＧＦ／ＳＬＩＴ／Ｒｏｕｎｄａｂｏｕｔの報
告されている役割に基づいて、３３５２３５８および／またはそのスプライス改
変体の首尾良い治療標的化は、確立された細胞傷害性／遺伝子傷害性治療（すな
わち、化学感作、放射性感作）との組合せでの有意な抗腫瘍活性を生じる。さら
に、セマフォリンは、軸索突起成長および神経原性細胞移動における役割を果た
す。この点に関して、３３５２３５８の首尾良い治療上の標的化はまた、転移散
在（腫瘍負荷）の程度（頻度）を限定し得、そして潜在的に腫瘍血管新生を制限
し得る。３３５２３５８およびそのスプライス改変体の治療的標的化は、３３５
２３５８が同族リガンドと相互作用する能力を遮断するか、または膜貫通シグナ
ルを惹起する、ヒトまたはヒト化されたモノクローナル抗体の生成によって提供
される。同様に、低分子の生成（合成、細胞透過性ペプチドなど）であって、リ
ガンドに結合した３３５２３５８によって活性化される経路における下流のシグ
ナル伝達成分の１つ以上を特異的に阻害するものは、上記の顕著な抗腫瘍活性を
有すると予測される。同様に、アンチセンス構築物（裸のＤＮＡ，アデノウイル
ス構築物）、リボザイムを導入して３３５２３５８の発現を阻害することは、上
記の顕著な抗腫瘍活性を有すると予測される。

【００４９】 実施例８および図２０に示される３３５２３５８の転写物の発現プロファイル
に基づいて、３３５２３５８を標的化するための治療適応としては以下が挙げら
れる：選択された肝臓腫／肝臓細胞癌腫および腎臓細胞癌腫。

【００５０】 （６．クローン３３５２３５８−２） ２６０７ヌクレオチド（配列番号１１）のクローン３３５２３５８−２は、Ｋ
ｏｚａｋ配列、ヌクレオチド２１５−２１７の開始コドン、およびヌクレオチド
１９８５−１９８７のＴＡＡ終止コドンを含む（図６）。残基２１５−１９８４
の間のこの配列は、５９０残基（図６）のタンパク質（配列番号１２）のＯＲＦ
を規定する。ＰＳＯＲＴプログラムは、３３５２３５８−２タンパク質が原形質
膜に局在することを予測する。ＳｉｇｎａｌＰプログラミングは、そのタンパク
質が、おそらく残基３８と３９との間にシグナルペプチド切断部位を有すること
を予測し、これは、アミノ酸ＡＡＡ−ＡＳ（すなわち、ＡｌａＡｌａＡｌａ−Ａ
ｌａＳｅｒ）の間のダッシュで表される。このクローンは、成体および胎児の肝
臓を含むヒト肝臓に起源を有する。この遺伝子から転写された配列は、胎児肝臓
を含む肝臓、骨髄を含む骨、脳、および下垂体腺において見出される。

【００５１】 類似性検索は、３３５２３５８−２タンパク質が、１５３４残基を有するヒト
ｓｌｉｔ−１タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＢＡＡ３５１８４）と、３５
％同一、そして４８％類似であることを示す。このｓｌｉｔ遺伝子は、無脊椎動
物および脊椎動物の両方からの軸索に影響を与える保存された化学忌避性活性を
伴うタンパク質をコードする。Ｃｈｅｎら、２０００、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃ
ｅ ９６（１）：２３１−２３６；Ｙｕａｎら、１９９９ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ
２１２（２）：２９０−３０６。細胞表面に発現されたＲｏｕｎｄａｂｏｕｔタ
ンパク質に対するＳｌｉｔの結合は、この神経方向付け活性に相関づけられる。
従って、Ｓｌｉｔタンパク質は、発生胚の多数の領域において軸索突起成長を指
向する。

【００５２】 クローン３３５２３５８−２は、神経発生に関連する病理およびＣＮＳ病理（
例えば、アルツハイマー病およびパーキンソン病）における診断および治療上の
有用性を有する。

【００５３】 （７．クローン３８８４８４６） クローン３８８４８４６は１３４０ヌクレオチド（図７Ａ）のポリヌクレオチ
ドを含み、これはＫｏｚａｋ配列、ヌクレオチド４２１−４２３での開始コドン
、およびヌクレオチド１２８８−１２９０でのＴＡＧ終止コドンを有する。残基
４２１から１２８７の間のこの配列は、２８９アミノ酸残基（図７Ａ）のタンパ
ク質をコードするＯＲＦを規定する。この遺伝子から転写された配列は、下垂体
腺、精巣、胎児腎臓を含む腎臓、胎児脳を含む脳、下垂体腺、胎盤、膵臓、精巣
、脾臓、胎児腎臓を含む腎臓、胎児肝臓、骨格筋、心臓、ＯＶＣＡＲ−３細胞お
よび肺において見出される。ＰＳＯＲＴプログラムは、３８８４８４６タンパク
質が０．７４８０の確からしさでミクロボディ（ペルオキシソーム）に局在する
ことを予測する。そのタンパク質においては公知のシグナルペプチドはないよう
である。

【００５４】 クローン３８８４８４６−１は、ヌクレオチド配列（配列番号７４）の始まり
に開始コドンを有しない。従って、開示されたクローンは、不完全なＯＲＦを表
すと考えられる。シメされた配列の上流に開始コドンが見出され、その結果、ｃ
ＤＮＡ配列は、さらに、図７Ｂに示されたものよりも５’側にさらに伸びると推
測される。ＴＧＡの終止コドンは、ヌクレオチド９７９−９８１に局在する。残
基１と残基９７８との間の３８８４８４６−１ ヌクレオチド配列は、３２６ア
ミノ酸残基（図７Ｂ）のタンパク質配列（配列番号７５）をコードするＯＲＦを
規定する。

【００５５】 全長クローン３８８４８４６−２は、図７Ｃに示される核酸配列（配列番号７
６）を含む。クローン３８８４８４６−２は、ヌクレオチド２９９−３０１に開
始コドン、およびヌクレオチド９８３−９８５にＴＧＡ終止コドンを含む。残基
２９９−９８２の間のこの配列は、２２８アミノ酸残基（図７Ｃ）のタンパク質
（配列番号７７）をコードするＯＲＦを規定する。

【００５６】 （８．クローン３９１１６７５） クローン３９１１６７５は、１４２８ヌクレオチド（図８Ａ）のポリヌクレオ
チド（配列番号１５）である。ｏｆ １４２８ヌクレオチド（図８Ａ）．ヌクレ
オチド配列は、Ｋｏｚａｋ配列、９６−９８位の開始コドン、およびヌクレオチ
ド９０６−９０８のＴＧＡ終止コドンを含む。残基９６から９０５の間のこの配
列は、２７０アミノ酸残基（図８Ａ）を有するタンパク質（配列番号１６）をコ
ードするＯＲＦを規定する。このクローンは、脾臓細胞から単離されたＤＮＡに
起源を有する。ＰＳＯＲＴプログラムは、原形質膜に局在することを予測する。
Ｓｉｇｎａｌプログラムによれば、このタンパク質は、アミノ酸ＡＷＳ−ＥＫ（
すなわち、ＡｌａＴｒｐＳｅｒ−ＧｌｕＬｙｓ）の間のダッシュによって表され
る、４２と４３との間の最も確からしい切断部位を伴うシグナルペプチドを有す
る。

【００５７】 クローン３９１１６７５−２ は、そのヌクレオチド配列（配列番号７８）の
始まりに開始コドンを有しない。従って、開示されたクローンは、不完全なＯＲ
Ｆを表すと考えられる。開始コドンは、示された配列の上流に見出され、その結
果、そのｃＤＮＡ配列は、図８Ｂに示されたものよりも５’側に伸びることが予
測される。ＴＧＡの終止コドは、ヌクレオチド６２９−６３１に位置する。残基
２と６２８との間の３９１１６７５−２ヌクレオチド配列は、２０９アミノ酸残
基（図８Ｂ）の３９１１６７５−２タンパク質（配列番号７９）をコードするＯ
ＲＦを規定する。

【００５８】 類似性についてのデータベース検索において、３９１１６７５タンパク質は、
２６８残基（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＣ１７１２０）のヒトテトラスパンＮ
ＥＴ−４タンパク質に対して、５７％同一であり、そして７５％陽性であり、な
らびに、２６４残基（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ００５７１４）のヒトテトラ
スパニンＴＳＰＡＮ−５に対して、５７％同一であり、そして７４％陽性である
。

【００５９】 ＴＭ４ＳＦ４（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ４ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ
ｍｅｍｂｅｒ ４；膜貫通４スーパーファミリーメンバー４）は、内在型膜糖タ
ンパク質であり、これは、密度依存性機構により腸上皮細胞の接着および増殖の
状態を調節することが見出された。「膜貫通４スーパーファミリー」（ＴＭ４Ｓ
Ｆ）のメンバーは、細胞表面タンパク質であって、４つの膜貫通ドメインを有す
ると予測されるものである。多くのテトラスパンタンパク質は、他の分子との会
合による「乱雑」な相互作用分子と考えられており、他の分子としては、以下が
挙げられる：系統特異的タンパク質、インテグリン、および他のテトラスパニン
。テトラスパンタンパク質は、多様なプロセスに関与する（例えば、細胞活性お
よび増殖、接着および移動性）、分化および癌）。Ｍａｅｃｋｅｒら、１９９７
ＦＡＳＥＢ Ｊ １１（６）：４２８−４２。テトラスパンファミリータンパ
ク質は、「分子促進剤」（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ）、特
異的表面−細胞タンパク質のグループ化および従って、機能性シグナル複合体の
形成および安定性を増加させるもの）として機能する。従って、これは、原形質
膜のシグナル伝達複合体において補助する。Ｍａｅｃｋｅｒら、１９９７ ＦＡ
ＳＥＢ Ｊ １１（６）：４２８−４２；Ｂｉｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ、１９９
９ Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ ７３（６）：２６００−２００８。神経性トラン
スパニンファミリーメンバーは、軸策成長および標的認識に相関づけられる。Ｐ
ｅｒｒｏｎ ａｎｄ Ｂｉｘｂｙ １９９９ ＦＥＢＳＬｅｔｔ ４６１（１−
２）：８６−９０。

【００６０】 本明細書において記載された、トランスパン関連タンパク質の報告された役割
に基づいて、３９１１６７５および／またはそのスプライス改変体の首尾良い治
療的標的化は、有意な抗腫瘍活性を生じる（特に、確立された細胞傷害／遺伝子
傷害治療（すなわち、化学感作、放射感作）との組合せで）ことが予期される。
この点に関して、３９１１６７５の首尾良い治療標的化はまた、転移散在（腫瘍
負荷）の程度（頻度）を制限し得、そしておそらく腫瘍血管新生を制限し得る。
３９１１６７５およびそのスプライス改変体の治療的標的化はまた、ヒトまたは
ヒト化モノクローナル抗体の生成を介して提供される。この生成は、３９１１６
７５が特定の同族リガンドと相互作用し、そして膜貫通シグナルを惹起する能力
をブロックする。同様に、低分子の生成（合成、細胞透過性ペプチドなど）であ
って、リガンド結合した３９１１６７５によって活性化される経路における下流
のシグナル伝達成分の１つ以上を特異的に阻害するものは、上記の顕著な抗腫瘍
活性を有すると予測される。同様に、アンチセンス構築物（裸のＤＮＡ，アデノ
ウイルス構築物）、リボザイムを導入して３９１１６７５の発現を阻害すること
は、上記の顕著な抗腫瘍活性を有すると予測される。

【００６１】 クローン３９１１６７５は、細胞シグナル伝達および神経発生に関連する病理
、およびＣＮＳ病理（例えば、アルツハイマー病およびパーキンソン病）におい
て診断および処置上の有用性を有する。３９１１６７５遺伝子の遍在的発現に基
づいて（実施例９および図２１を参照のこと）、３９１１６７５を標的化するた
めの特異的治療的適応は、悪性黒色腫である。

【００６２】 （９．クローン４００４０５６） クローン４００４０５６は、１７６７ヌクレオチド（図９）の核酸配列（配列
番号１７）を含む。５１−５３位に開始コドンおよび９８４？９８６位にＴＡＡ
終止コドンが存在する。従って、５１から９８３のヌクレオチドは、３１１アミ
ノ酸残基（図９）のタンパク質（配列番号１８）をコードするＯＲＦを規定する
。このクローンは、唾液腺においてもともと同定された。この遺伝子から転写さ
れた配列は、副腎、胎盤、乳腺組織、前立腺、精巣、子宮、脾臓、胎児胸腺（Ｃ
ＲＬ７０４６）、骨原性肉腫細胞（ＨＴＢ９６）、胎児肺、視床、胎児腎臓およ
びバーキットリンパ腫（すなわちＲａｊｉ細胞）からの総Ｒなライブラリーにお
いて見出され、そして骨髄、黒色腫、下垂体、甲状腺からのｍＲＮＡライブラリ
ーから見出された。ＰＳＯＲＴプログラムは、４００４０５６タンパク質が原形
質膜に局在することを予測する。しかし、ＳｉｇｎａｌＰは、このタンパク質に
ついて公知のシグナルペプチドはないと予測する。

【００６３】 図９Ｂは、クローン４００４０５６．０．１４３ｕのヌクレオチド配列（配列
番号８０）および翻訳されたタンパク質配列（配列番号８１）を示す。クローン
４００４０５６．０．１４３ｕは、ヌクレオチド６３−６５に開始コドンおよび
ヌクレオチド１０２３−１０２５にＴＧＡ終止コドンを有する。残基６３と１０
２２との間の配列は、３２０アミノ酸残基（図９Ｂ）のタンパク質（配列番号８
１）をコードするＯＲＦを規定する。

【００６４】 データベース検索によって、４００４０５６タンパク質が、クローンＨＰ０１
８６２からのタンパク質を含む３１１残基のヒト膜貫通ドメインと、３１１残基
中３０６残基（９８％）の同一性および陽性を有することが示される。このクロ
ーンは、細胞増殖および分化を制御すると考えられる（ＰＣＴ公開Ｗ０９９２７
０９４−Ａ２）。同様に、このタンパク質は、３１１残基のヒトタンパク質（Ｐ
ＣＴ公開ＷＯ９９２７０９４−Ａ２の配列番号１０）に対して３１１残基中３０
６残基（９８％）の同一性および陽性を有する。クローン４００４０５６はさら
に、ヒト３１１残基プロリンリッチ膜タンパク質（ＰＣＴ公開Ｗ０９８３３９１
０−Ａｌ）に対して、３１１残基中３０６残基（９８％）の同一性および陽性を
有する。別の検索において、４００４０５６タンパク質は、３１６残基ラット神
経膜タンパク質３５（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＣ３２４６３）に対して、２
８４残基中１５３残基（５３％）同一、および２８４残基中１９６残基（６９％
）陽性であったことが見出された。さらに、このタンパク質は、ヒトＮＭＤＡレ
セプターグルタメート結合鎖（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＢ９４２９２）の２
０８残基フラグメントに対して、４２％同一および６５％陽性であった。

【００６５】 新規の４００４０５６クローンは、以下を含むある範囲の活性を有する：サイ
トカインおよび細胞分化、免疫刺激／抑制、造血調節、組織増殖、アクチビン／
インヒビン活性、化学遊走性／化学運動性活性、止血／血栓溶解活性、レセプタ
ー／リガンド活性、腫瘍インヒビター、抗炎症およびさらなる未同定の活性。４
００４０５６ ｃＤＮＡは、遺伝子診断のためのプローブおよび遺伝子治療のた
めの遺伝子供給源としての有用性を有する。これらのｃＤＮＡはまた、タンパク
質の大規模発現のために有用である。種々の４００４０５６を用いて形質転換し
た細胞は、対応するリガンドの検出および新規低分子量の医薬のスクリーニング
のために有用である。

【００６６】 ４００４０５６タンパク質は、おそらくヒトプロリンリッチ膜タンパク質（Ｐ
ＲＭＰ）である。ＰＲＭＰは、ラットＮＭＤＡレセプターグルタミン酸結合サブ
ユニットに類似する。ＰＲＭＰは、細胞シグナル伝達、タンパク質輸送、および
細胞画分局在、細胞構造の制御、細胞同士の相互作用、細胞増殖および発生、な
らびに免疫および炎症の応答の調節に関与する。ＰＲＭＰおよびアゴニストを使
用して、組織または器官の再生を促進し得る。ＰＲＭＰのアンタゴニストまたは
インヒビターは、ＰＲＭＰの発現に関与する傷害（例えば、炎症性、アレルギー
状態（例えば、リウマチおよび骨関節炎、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性
皮膚炎、自己免疫状態（例えば、シェーグレン症候群、強皮症、甲状腺亢進症（
グレーブズ病）、全身性ループス（エリテマトーデス）、重症筋無力症、自己免
疫甲状腺炎）、糖尿病、膵臓炎、潰瘍性結腸炎、クローン病、萎縮性胃腸炎、お
よび対宿主移植片病）、異常細胞分化、増殖、または変性に関連する障害（動脈
硬化、アテローム性動脈硬化、アルドステロン症、コルチゾール過剰症（アディ
ソン病）、甲状腺亢進症、結腸直腸ポリープ、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、造血細胞
およびリンパ組織の癌（白血病、リンパ腫（ホジキン病を含む）、リンパ肉腫お
よび骨髄腫を含む）ならびに分泌もしくは吸収に関与する腺、組織および器官な
らびに胃腸管の器官の癌腫を含む）の処置または予防に有用である。

【００６７】 （１０．クローン４００４７３１−１） クローン４００４７３ １−１ は、１６８６ヌクレオチド（図１０）を含む
ポリヌクレオチド（配列番号１９）である。クローンは、Ｋｏｚａｋ配列、３
７２−３７４位の開始コドン、およびヌクレオチド１２７８−１２８０のＴＡＡ
終止コドンを有する。従って、３７２と１２７７との間のこのヌクレオチド残基
は、３０２アミノ酸残基（図１０）を有するタンパク質（配列番号２０）をコー
ドするＯＲＦを規定する。ＰＳＯＲＴは、このタンパク質が０．３６００の低い
確からしさでミトコンドリアマトリクスに局在することを示す。プログラムＳｉ
ｇｎａｌＰは、公知のシグナルペプチドは存在しないことを予測する。この遺伝
子からの転写配列は、脳、下垂体、心臓、胸部および脾臓に見出される。

【００６８】 類似性検索において、４００４７３１−１タンパク質が１７８６残基（Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ登録番号Ｐ０７９４２）を有するタンパク質であるヒトラミニンβ−Ｉ
鎖前駆体（ラミニンＢ Ｉ鎖）に対して、５０％の同一性および６７％の類似
性を有することが見出された。ラミニンは、基底膜の主要な成分であり、そして
血管新生および腫瘍増殖を調節する、いくつかの生物学的活性部位を有する。Ｇ
ｒａｎｔら、１９９４ Ｐａｔｈｏｌ Ｒｅｓ Ｐｒａｃｔ．１９０（９−１０
）：８５４−８６３。ラミニンは、インビトロで軸索の成長を協力に刺激し、そ
して胚発生においておよびＣＮＳ損傷の後に一過的に発現する。Ｌｕｅｂｋｅら
、１９９５ Ｊ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ ２７（１）：１−１４。さらに、ラミニ
ンＢＩ発現は、いくつかの小児常染色体劣性筋ジストロフィーにかかった重篤患
者において非常に障害を受ける。Ｙａｍａｄａら、１９９５ Ｌａｂ Ｉｎｖｅ
ｓｔ．７２（６）：７１５−７２２。従って、クローン４００４７３１−１は、
筋ジストロフィー、細胞成長（ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ）、細胞増殖、血管新生なら
びに神経発生およびＣＮＳ病理（例えば、ＣＮＳ障害、アルツハイマー病および
パーキンソン病）において診断および治療上の有用性を有する。

【００６９】 （１１．クローン４００９３３４−１） クローン４００９３３４−１は、２０１０ヌクレオチド（図１１）を有するポ
リヌクレオチド（配列番号２１）である。このクローンは、クローン４００９３
３４−２（下）に類似するが、後者よりも長い。なぜなら、配列番号２１におい
てヌクレオチド１３６１？１４４０および１５４１−１５９７における挿入物を
有するからである。これらの相違は、ｍＲＮＡのスプライス改変体から生じると
考えられる。クローン４００９３３４−１は、２４３−２４５位の開始コドン、
およびヌクレオチド１６５９？１６５１のＴＧＡ終止コドンを有する。従って、
２４３と１６５８との間の残基は、４７２残基（図１１）のタンパク質（配列番
号２２）をコードするＯＲＦを規定する。ＰＳＯＲソフトウェアプログラムは、
４００９３３４−１タンパク質がミクロボディ（確からしさ＝０．３０）で局在
するという弱い予測を可能にする。ＳｉｇｎａｌＰソフトウェアプログラムは、
タンパク質が公知のシグナルペプチドを欠如することを予測する。この遺伝子か
ら転写された配列は、以下に見出される：ＯＶＣＡＲ−３細胞、ＭＣＦ−７細胞
、乳腺、胎児肺、視床を含む脳、副腎、唾液腺、膵臓、心臓、白血球細胞および
Ｒａｊｉ細胞。

【００７０】 ４００９３３４−１タンパク質は、Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ（ニワトリ）
由来の５５０残基ＡＶＥＮＡタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＢ０１７４
３７およびＢＡＡ３３０１６）に対して、３０４残基中２７２残基（８９％）の
同一性、および３０４残基中２７８残基（９１％）の陽性を有する。これはまた
、マウス ７８３ 残基が可能にするホモログ（神経変異体ＭＥＮＡ＋タンパク
質）（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＣ５２８６４）に対して、２５１残基中２１
８残基（８６％）の同一性、および２５１座に中２２８残基（９０％）の陽性を
有する。４００９３３４−１タンパク質はさらに、３８０ 残基ヒト血管拡張刺
激ホスホタンパク質（ＶＡＳＰ）（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ５０５５２）に対
して、１４６残基中９４残基（６４％）の同一性、および１４６残基中１０７残
基（７３％）の陽性を有する。

【００７１】 従って、クローン４００９３３４−１は、細胞制御、細胞増殖、細胞発生およ
び細胞分化に関連する病理において診断および治療上の有用性を有する。クロー
ン４００９３３４−１はまた、血管新生、発癌性ならびに身体および器官の恒常
性において有用である。

【００７２】 （１２．クローン４００９３３４−２） クローン４００９３３４−２は、１９５２ヌクレオチド（図１２）のポリヌク
レオチド（配列番号２３）である。これは、クローン４００９３３４−１（配列
番号２１、上記）のより短いスプライス改変体であるようである。４００９３３
４−２核酸配列は、Ｋｏｚａｋ配列、ヌクレオチド２４３−２４５に開始コドン
および１７１６−１７１８位に終止コドンを含む。２４３と１７１５の間の残基
は、４９１アミノ酸残基（図１２）を有するタンパク質（配列番号２４）をコー
ドするＯＲＦを規定する。ＰＳＯＲＴプログラムは、４００９３３４−１タンパ
ク質がミクロボディ（確からしさ＝０．３０）に局在するという弱い推測を可能
にする。ＳｉｇｎａｌＰプログラムは、このタンパク質がシグナルペプチドを欠
如することを予測する。この遺伝子から転写された配列は、ＯＶＣＡＲ−３細胞
、ＭＣＦ−７細胞、乳腺、胎児肺を含む肺、視床を含む脳、副腎、唾液腺、膵臓
、心臓、白血球細胞およびＲａｊｉ細胞において見出される。

【００７３】 ４００９３３４−２タンパク質は、Ｇａｌｌｕｓ ｇａｌｌｕｓ（ニワトリ）
からの５５０ 残基ｄ１０３３９８２（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＢ０１７４３
７）ＡＶＥＮＡタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＢＡＡ３３０１６）．に対
して、３０４残基中２７２残基（８９％）の同一性、および３０４残基中２７８
残基（８９％）の陽性を有する。これはまた、マウス７８３残基が可能にしたホ
モログ（神経変異体 ＭＥＮＡ＋タンパク質）（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＣ
５２８６４）に対して、２５１残基中２１８残基（８６％）の同一性、および２
５１残基中２２８残基（９０％）の陽性を有する。４００９３３４−２タンパク
質はさらに、３８０ 残基ヒト血管拡張刺激ホスホタンパク質（ＶＡＳＰ）（Ｇ
ｅｎＢａｎｋ登録番号Ｐ５０５５２）．に対して、１４６残基中９４残基（６４
％）の同一性、および１４６残基中１０７残基（７３％）の陽性を有する。

【００７４】 従って、クローン４００９３３４−２は、細胞制御、細胞増殖、細胞発生およ
び細胞分化に関連する病理において診断および治療上の有用性を有する。クロー
ン４００９３３４−２はまた、血管新生、発癌性、新生物に関連する病理ならび
に身体および器官の恒常性において有用である。

【００７５】 （１３．クローン４０３５５０８） クローン４０３５５０８は、８２７ヌクレオチド（図１３）のポリヌクレオチ
ド配列（配列番号２５）である。このクローンは、Ｋｏｚａｋ配列、２３３−２
３５位の開始コドン、およびヌクレオチド６０２−６０４でのＴＧＡ終止コドン
を含み、従って、１２３残基（図１３）を有するポリペプチド（配列番号２６）
をコードする、残基２３３と６０１の間のＯＲＦを示す。ＰＳＯＲＴプログラム
は、４０３５５０８タンパク質が原形質膜に局在することを予測する。Ｓｉｇｎ
ａｌＰプログラムは、４０３５５０８ポリペプチドがシグナルペプチドを有し、
その最もあるらしい切断部位は、残基２９と３０との間に生じることを予測する
。これは、アミノ酸ＬＦＧ−ＷＰ（すなわち、ＬｅｕＰｈｅＧｌｙ−ＴｒｐＰｒ
ｏ）の間のダッシュによって表される。この遺伝子から転写された配列は、胎児
肺組織において、および複数の生体組織型（リンパ節組織）において見出される
。

【００７６】 類似性検索によって、前立腺癌において上方調節され、そして選択的スプライ
シングされる推定される分泌型タンパク質である５５９残基ヒトタンパク質 Ｐ
Ｂ３９（ＰＯＶ１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＣ３３００４）に対して、１０
８残基中３７残基（３４％）の同一性、および１０８残基中５５残基（５０％）
の陽性を有することが明らかになった。Ｃｏｌｅら、１９９８ Ｇｅｎｏｍｉｃ
ｓ ５１（２）：２８２−２８７。

【００７７】 ＰＢ３９は、ヒト前立腺癌の発生において役割を果たす。同様に、４０３５５
０８および／またはそのスプライス改変体を哺乳動物被検体へ首尾良い治療的標
的化は、特に確立された細胞傷害／遺伝子傷害治療（すなわち、化学感作および
放射感作）との組合わせで有意な抗腫瘍活性を提供する。さらに、４０３５５０
８の首尾良い治療標的化は、転移散在（腫瘍負荷）の程度、頻度またはその両方
を制限する。４０３５５０８はまた、腫瘍血管新生を制限する。なぜなら、４０
３５５０８は、活性化された内皮細胞（例えば、ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶ
ＥＣ））において高度に発現する。

【００７８】 ４０３５５０８およびそのスプライス改変体の治療的標的化はまた、同族レセ
プター塗装誤差要旨、そして膜貫通シグナルを惹起する４０３５５０８の能力を
ブロックする、ヒトまたはヒト化されたモノクローナル抗体の生成を介して提供
される。同様に、低分子の生成（合成、細胞透過性ペプチドなど）であって、リ
ガンドに結合した４０３５５０８によって活性化される経路における下流のシグ
ナル伝達成分の１つ以上を特異的に阻害するものは、上記の顕著な抗腫瘍活性を
有すると予測される。同様に、アンチセンス構築物（裸のＤＮＡ，アデノウイル
ス構築物）、リボザイムを導入して４０３５５０８の発現を阻害することは、上
記の顕著な抗腫瘍活性を有すると予測される。

【００７９】 クローン４０３５５０８は、新生物、細胞増殖および細胞制御に関連する病理
において診断および治療上の有用性を有する。４０３５５０８遺伝子の発現プロ
ファイル（実施例１０および図２２を参照のこと）に基づいて、４０３５５０８
を標的化するための治療適応は、転移性結腸癌腫（ＳＷ４８０のＳＷ６２０転移
性改変体における上方調節）、乳房腺癌、神経芽腫／星状細胞腫、小細胞肺癌お
よび悪性黒色腫を含む。

【００８０】 （１４．クローン４３３９２６４） クローン４３３９２６４は、１０６３ヌクレオチド（図１４）のポリヌクレオ
チド（配列番号２７）であった。クローンは、４８−５０位で開始コドン、およ
び９４５−９４７位でＴＡＡ終止コドンを含む。このクローンは、２９９アミノ
酸残基（図１４）のタンパク質（配列番号２８）をコードする残基４８−９４４
のＯＲＦを含む。ＰＳＯＲＴプログラムは、４３３９２６４タンパク質が０．６
０００の確からしさで原形質膜に局在することを予測する。ＳｉｇｎａｌＰプロ
グラムは、シグナルペプチドが存在すると予測する。その切断部位は、最もおそ
らく、アミノ酸ＬＱＡ−ＲＦ（すなわち、ＬｅｕＧｌｎＡｌａ−ＡｒｇＰｈｅ）
の間のダッシュによって表される残基６９と７０の間に生じる。このクローンは
、リンパ節から単離されたＤＮＡに起源を有する。この遺伝子から転写された配
列は、以下に見出される：ＭＣＦ−７細胞、ＯＶＣＡＲ−３細胞、心臓、前立腺
、子宮、乳腺、唾液腺、視床、骨髄、リンパ節、脾臓、胎児肝臓、胎児胸腺−Ｃ
ＲＬ７０４６、およびＣｌｏｎｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．からの１０のヒト総ＲＮＡラ
イブラリー（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ；脳、胎児脳、肝臓、胎児肝臓、骨格筋
、膵臓、腎臓、心臓、肺および胎盤）。

【００８１】 類似性検索において、４３３９２６４タンパク質が、２９６ 残基マウスの骨
髄上方制御されたタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号０３５６８２）に対して
、２１９残基中１９４残基（８８％）の同一性、および２１９残基中２０７残基
（９４％）の陽性を有することが見出された。さらに、このタンパク質は、１５
３残基のヒト４回膜貫通ドメインＭＡＬＴリンパ球成熟関連タンパク質（Ｇｅｎ
Ｂａｎｋ登録番号Ｐ２１１４５）に対して、１２５残基中３９残基（３１％）、
および１２５残基中５８％（４６％）の陽性を有する。このＭＡＬタンパク質は
、シグナル伝達レセプターならびに脂質二重層を横切る水溶性分子およびイオン
のトランスポーターとして作用すると考えられる。ＡｌｏｎｓｏおよびＷｅｉｓ
ｓｍａｎ １９８７ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．８
４（７）：１９９７−２０００。

【００８２】 定量的リアルタイムＰＣＲを用いて同定された、広汎な正常および癌性の組織
のなかの４３３９２６４の発現の広さ（実施例１１および図２３）は、４３３９
２６４遺伝子によってコードされるタンパク質が細胞恒常性において一般的な役
割を有することを示唆する。４３３９２６４の発現は、もとの組織に対して選択
されたヒト癌細胞株において上昇し、そして生体組織よりもいくつかの胎児組織
において上昇している。このことは、器官形成および組織修復における役割を示
す。４３３９２６４の過剰発現は、腫瘍生成において寄与するはずである。さら
に、成体腎臓よりも高い胎児腎臓における４３３９２６４の発現は、器官形成に
おける４３３９２６４のおそらくの役割を示唆する。

【００８３】 ４３３９２６４および／またはそのスプライス改変体の首尾良い治療的標的化
および下方調節は、有意な抗腫瘍活性を生じ、特に、確立された細胞傷害／遺伝
子傷害の治療（すなわち化学感作、放射感作）との組み合わせて生じる。さらに
、４３３９２６４の首尾良い治療的標的化はまた、転移性散在（すなわち、腫瘍
負荷）の程度および頻度を制限し、そして潜在的に腫瘍血管新生を制限する。

【００８４】 ４３３９２６４およびそのスプライス改変体の治療的標的化はまた、４３３９
２６４が同族レセプターと相互作用し、そして膜貫通シグナルを惹起する能力を
ブロックする、ヒトまたはヒト化されたモノクローナル抗体の生成によって提供
される。同様に、低分子の生成（合成、細胞透過性ペプチドなど）であって、リ
ガンドに結合した４３３９２６４によって活性化される経路における下流のシグ
ナル伝達成分の１つ以上を特異的に阻害するものは、上記の顕著な抗腫瘍活性を
有すると予測される。同様に、アンチセンス構築物（裸のＤＮＡ，アデノウイル
ス構築物）、リボザイムを導入して４３３９２６４の発現を阻害することは、上
記の顕著な抗腫瘍活性を有すると予測される。

【００８５】 クローン４３３９２６４は、新生物、細胞増殖および細胞制御に関連する病理
において診断および治療上の有用性を有する。４３３９２６４遺伝子の発現プロ
ファイル（実施例１１および図２３を参照のこと）に基づいて、４３３９２６４
を標的化するための治療適応は、悪性黒色腫、小分子肺癌腫および腎臓細胞癌腫
を含む。

【００８６】 （核酸） 本発明の１つの局面は、単離された核酸分子（すなわち、配列番号１、３、５
、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７４、７
６、７８および８０、ならびに２９および３１）であって、本発明のＳＥＣＸポ
リペプチドをコードするものに関する。ここで、ＳＥＣＸ ポリペプチドは、以
下からなる群より選択される：クローン２７７７６１０、クローン２８６４９３
３−１、クローン２８６４９３３−２、クローン２９８２３３９、クローン３３
５２３５８−１、クローン３３５２３５８２、クローン３８８４８４６、クロー
ン３８８４８４６−１、クローン３８８４８４６−２、クローン３９１１６７５
、クローン３９１１６７５−２、クローン４００４０５６、クローン４００４０
５６．０．１４３ｕ、クローン４００４７３１−１、クローン４００９３３４−
１、クローン４００９３３４−２、クローン４０３５５０８、およびクローン４
３３９２６４ のポリペプチド（すなわち、配列番号２、４、６、８、１０、１
２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、７５、７７、７９およ
び８１ならびに３０および３２；表１および図１から１７を参照のこと）、ある
いはその生物学的活性部分、ならびにＳＥＣＸコード核酸（例えば、ＳＥＣＸ
ｍＲＮＡ）を同定するためのハイブリダイゼーションプローブとして使用するた
めに十分な核酸フラグメント、およびＳＥＣＸ核酸分子の増幅もしくは変異のた
めのＰＣＲプライマーとして使用するためのフラグメント。本明細書において使
用される用語「核酸分子」とは、ＤＮＡ分子（例えば、ｃＤＮＡまたはゲノムＤ
ＮＡ）、ＲＮＡ分子（例えば、ｍＲＮＡ）、ヌクレオチドアナログを用いて生成
されたＤＮＡもしくはＲＮＡのアナログ、ならびにそれらの誘導体、フラグメン
トおよびホモログを含むことが意図される。この核酸分子は、一本鎖であっても
二本鎖であってもよいが、好ましくは、二本鎖ＤＮＡである。本発明のＳＥＣＸ
核酸としては、以下が挙げられる：配列番号ｌ、３、５、７、９．１１、１３、
１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７４、７６、７８および８０、な
らびに２９および３１（表１および図１−１７）、ならびにそれらのフラグメン
ト、ホモログおよび誘導体。

【００８７】 「プローブ」とは、可変の長さの核酸配列をいい、好ましくは、使用に依存し
て、少なくとも約１０ヌクレオチド（ｎｔ）、１００ｎｔ、または例えば、約６
，０００ｎｔの間である。プローブは、同一、類似または相補的な核酸配列の検
出において使用される。より長いプローブは、通常、天然供給源または組換え供
給源から入手され、非常に特異的であり、そしてオリゴマーよりもはるかに遅く
ハイブリダイズする。プローブは、一本鎖または二本鎖であり得、そしてＰＣＲ
、メンブレンベースのハイブリダイゼーション技術またはＥＬＩＳＡのような技
術において特異性を有するように設計される。

【００８８】 「単離された」核酸分子は、この核酸の天然の供給源中に存在するその他の核
酸分子から分離されているものである。好ましくは、「単離された」核酸は、こ
の核酸が由来する生物のゲノムＤＮＡ中でこの核酸に天然に隣接する配列（すな
わち、この核酸の５’末端および３’末端に位置する配列）。例えば、種々の実
施形態で、ＳＥＣＸポリペプチドの任意の１つをコードする単離された核酸分子
は、ケモカインレセプター様タンパク質、セマホリンタンパク質様スプライス改
変体、推定のミトコンドリアタンパク質（クローン２９８２３３９）、ＳＬＩＴ
タンパク質様スプライス改変体、推定のマイクロボディ（ペルオキシソーム）関
連タンパク質（クローン３８８４８４６）、テトラスパニン様タンパク質、推定
のプロリンリッチ膜タンパク質（クローン４００４０５６）、ラミニンβ鎖前駆
体様タンパク質、ＡＶＥＮＡタンパク質様スプライス改変体（クローン４００９
３３４−１および４００９３３４−２）、胎児肺関連タンパク質（クローン４０
３５５０８）および骨髄性の上方制御されたタンパク質（クローン４３３９２６
４）を含み、この核酸が由来する細胞（（例えば、骨髄を含む）骨組織、心臓、
リンパ節、膵臓，脾臓、胸腺、胎盤、腎臓、肝臓、視床、脳、下垂体、胸部、肺
、唾液腺および副腎を含む組織からの成体細胞および胎児細胞）のゲノムＤＮＡ
中の核酸分子に天然で隣接する核酸配列の約５ｋｂ、４ｋｂ、３ｋｂ、２ｋｂ、
１ｋｂ、０．５ｋｂまたは０．１ｋｂより少ない核酸配列を含み得る。さらに、
「単離された」核酸分子、例えば、ｃＤＮＡ分子は、組換え技法により産生され
るとき、その他の細胞物質または培養培地を実質的に含まないか、または化学的
に合成されるとき、化学物質前駆体もしくはその他の化学物質を実質的に含まな
いものであり得る。

【００８９】 本発明の核酸分子、例えば、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５
、１７、１９、２１、２３、２５または２７、それに加えて２９または３１のヌ
クレオチド配列を有するＳＥＣＸ核酸分子、またはこれらのヌクレオチド配列の
任意の相補物は、標準的な分子生物学的技法および本明細書で提供される配列情
報を用いて単離され得る。ハイブリダイゼーションプローブとして、配列番号１
、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５または２
７、それに加えて２９または３１のＳＥＣＸ核酸配列のすべてもしくは一部分、
またはこれらのヌクレオチド配列の任意の相補物を用い、上記ＳＥＣＸ分子は、
標準的なハイブリダイゼーションおよびクローニング技法（例えば、Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋら（編）、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯ
ＲＹＹ ＭＡＮＵＡＬ第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ、
１９８９；およびＡｕｓｕｂｅｌら、（編）、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯ
ＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓ
ｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９３）を用いて単離され得る。

【００９０】 本発明の核酸は、標準的なＰＣＲ増幅技法に従って、テンプレートとしてｃＤ
ＮＡ、ｍＲＮＡあるいはゲノムＤＮＡ、および適切なオリゴヌクレオチドプライ
マーを用いて増幅され得る。このように増幅された核酸は、適切なベクター中に
クローン化され、そしてＤＮＡ配列分析により特徴付けられ得る。さらに、ＳＥ
ＣＸヌクレオチド配列に対応するオリゴヌクレオチドは、標準的な合成技法、例
えば、自動化ＤＮＡ合成機を用いることにより調製され得る。

【００９１】 本明細書で用いられる用語「オリゴヌクレオチド」は、一連の連結されたヌク
レオチド残基をいい、このオリゴヌクレオチドは、ＰＣＲ反応で用いられ得る十
分な数のヌクレオチド塩基を有する。短いオリゴヌクレオチド配列は、ゲノム配
列もしくはｃＤＮＡ配列を基礎にし得るか、またはそれから設計され得、そして
特定の細胞もしくは組織において、同一、類似もしくは相補的ＤＮＡまたはＲＮ
Ａを増幅し、確認し、もしくはその存在を示すために用いられる。オリゴヌクレ
オチドは、約１０ｎｔ、５０ｎｔ、または１００ヌクレオチドの長さ、好ましく
は約１５ヌクレオチド〜３０ヌクレオチドの長さを有する核酸配列の部分を含む
。１つの実施形態では、１００ヌクレオチドより少ない長さの核酸分子を含むオ
リゴヌクレオチドは、さらに、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５
、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７４、７６、７８および８０、それに
加えて２９および３１の少なくとも６つの連続ヌクレオチド、またはその相補物
を含み得る。オリゴヌクレオチドは、化学的に合成され得、そしてプローブとし
て用いられ得る。

【００９２】 １つの実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号１、３、５、
７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７４、７６
、７８および８０、それに加えて２９または３１に示されるヌクレオチド配列の
相補物であるＳＥＣＸ核酸分子、またはこのヌクレオチド配列の一部分を含む。
このＳＥＣＳヌクレオチド配列に相補的である核酸分子は、配列番号１、３、５
、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７４、７
６、７８および８０、それに加えて２９または３１に示されるヌクレオチド配列
に十分相補的であるか、またはこのヌクレオチド配列の一部分であり、所定のＳ
ＥＣＸヌクレオチド配列に対しミスマッチがないかまたはほとんどなく、それに
よって安定な二本鎖を形成する。

【００９３】 本明細書で用いる用語「相補的」は、核酸分子のヌクレオチド単位間のＷａｔ
ｓｏｎ−ＣｒｉｃｋまたはＨｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対合をいい、そして用語「結
合」は、２つのポリペプチドまたは化合物または関連ポリペプチドまたは化合物
またはその組合せ間の物理的または化学的相互作用を意味する。結合は、イオン
的、非イオン的、Ｖｏｎ ｄｅｒ Ｗａａｌｓ的、疎水的相互作用などを含む。
物理的相互作用は直接的であるかまたは間接的であり得る。間接的相互作用は、
別のポリペプチドまたは化合物によるか、またはその影響に起因し得る。直接的
結合は、別のポリペプチドもしくは化合物によらないか、またはその影響に起因
せずに生じるか、あるいはその他の実質的な化学的中間体がない相互作用をいう
。

【００９４】 さらに、本発明の核酸分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１
５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７４、７６、７８および８０、それ
に加えて２９または３１の核酸配列の一部分のみか、またはプラスミド、例えば
、実施例３に記載のｐＳｅｃＴａｇ２ＢおよびｐＳｅｃＶ５ＨｉｓベクターのＤ
ＮＡ挿入片のヌクレオチド配列を含み得、ここで、例えば、フラグメントは、プ
ローブまたはプライマーまたはＳＥＣＸの生物学的に活性な部分をコードするフ
ラグメントとして用いられ得る。本発明で提供されるフラグメントは、少なくと
も６の（連続する）核酸または少なくとも４の（連続する）アミノ酸として規定
され、それぞれ、核酸の場合特異的ハイブリダイゼーションを、またはアミノ酸
の場合エピトープの特異的認識を可能にするに十分な長さであり、そして多くと
も完全長配列より少ない特定の部分である。フラグメントは、選択される核酸ま
たはアミノ酸配列の任意の連続する部分に由来し得る。誘導体は、直接的である
かまたは部分的置換によるかのいずれかでネイティブな化合物から形成される核
酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、ネイティブな化合物と類似では
あるが、同一ではなく、特定の成分または側鎖に関してそれとは異なる構造を有
する核酸配列またはアミノ酸配列である。アナログは、合成によるか、または異
なる進化的起源に由来し得、そして野生型と比較して類似であるかまたは反対の
代謝活性を有し得る。ホモログは、異なる種由来である特定の遺伝子の核酸配列
またはアミノ酸配列である。

【００９５】 誘導体またはアナログが、以下に記載のように、改変された核酸またはアミノ
酸を含む場合、誘導体およびアナログは、完全長であるかまたは完全長以外であ
り得る。本発明の核酸またはタンパク質の誘導体またはアナログは、種々の実施
形態で、本発明の核酸またはタンパク質に、同じサイズの核酸またはアミノ酸配
列に対して、またはアラインメントが当該分野で公知のコンピューター相同性プ
ログラム（例えば以下を参照のこと）によりなされるアラインされた配列に比較
するとき、少なくとも約３０％、５０％、７０％、８０％、または９５％同一性
（８０−９５％同一性が好適である）で実質的に相同である領域を含む分子であ
るか、またはそのコードする核酸配列が、前記のタンパク質をコードする配列の
相補物に、ストリンジェントな条件下、中程度にストリンジェントな条件下、ま
たは低いストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る分子を含むが、これ
らに限定される訳ではない。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲ
ＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ Ｗｉ
ｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、１９９３、および以下を参照のこ
と。

【００９６】 「相同的核酸配列」または「相同的アミノ酸配列」またはその改変体は、上記
で論議されたような、ヌクレオチドレベルまたはアミノ酸レベルの相同性によっ
と特徴付けられる配列をいう。相同的ヌクレオチド配列は、ＳＥＣＸポリペプチ
ドのイソ型をコードするような配列をコードする。イソ型は、ＲＮＡのオルター
ナティブなスプライシングの結果として同じ生物の異なる組織中で発現され得る
。あるいは、イソ型は異なる遺伝子によりコードされ得る。本発明では、相同的
ヌクレオチド配列は、哺乳動物を含むがそれに限定されないヒト以外の種、そし
てそれ故、例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、および
その他の生物のＳＥＣＸポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。相
同的ヌクレオチド配列はまた、本明細書に提示されるヌクレオチド配列の天然に
存在する対立遺伝子改変体および変異体を含むがこれらに限定されるわけではな
い。しかし、相同的ヌクレオチド配列は、ヒトＳＥＣＸタンパク質をコードする
ヌクレオチド配列を含まない。相同的核酸配列は、配列番号１、３、５、７、９
、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７４、７６、７８
および８０、それに加えて２９または３１における保存的アミノ酸置換（以下を
参照のこと）、およびＳＥＣＸ活性を有するポリペプチドをコードするような核
酸配列を含む。個々のＳＥＣＸタンパク質の生物学的活性は上記に記載されてい
る。相同的アミノ酸配列は、ヒトＳＥＣＸポリペプチドのアミノ酸配列をコード
しない。

【００９７】 ＳＥＣＸポリペプチドは、ＳＥＣＸ核酸のオープンリーディグフレーム（「Ｏ
ＲＦ」）によってコードされる。本発明は、配列番号１、３、５、７、９、１１
、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７４、７６、７８および
８０、それに加えて２９および３１の核酸配列のストレッチを含む核酸配列を含
み、これは、そのアミノ酸配列のＯＲＦを含み、そして配列番号２、４、６、８
、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、７５，７７
、７９および８１、それに加えて３０および３２のポリペプチドをコードする。

【００９８】 「オープンリーディグフレーム」（「ＯＲＦ」）は、潜在的にポリペプチドに
翻訳され得るヌクレオチドに対応する。ＯＲＦを含む核酸のストレッチは、終止
コドンにより中断されない。完全タンパク質のコード配列を示すＯＲＦは、ＡＴ
Ｇ「開始」コドンで始まり、そして３つの停止コドン、すなわち、ＴＡＡ、ＴＡ
Ｇ、またはＴＧＡの１つで停止する。本発明の目的には、ＯＲＦは、開始コドン
、ストップコドン、またはその両方をともなうか、またはそれらのないコード配
列の任意の部分であり得る。真実の細胞タンパク質をコードするための良好な候
補として考慮されるべきＯＲＦには、最小サイズの要求（例えば、５０アミノ酸
またはそれ以上のタンパク質をコードするＤＮＡのストレッチ）がしばしば設定
される。

【００９９】 ヒトＳＥＣＸ遺伝子のクローニングから決定されるヌクレオチド配列は、例え
ば他の組織からの他の細胞型におけるＳＥＣＸ相同体、および他の哺乳動物から
のＳＥＣＸ相同体の同定および／またはクローニングにおける使用のために設計
されたプローブおよびプライマーの生成を可能にする。代表的には、このプロー
ブ／プライマーは、実質的に精製されたオリゴヌクレオチドを含む。代表的には
、このオリゴヌクレオチドは、ストリンジェントな条件下で、配列番号１、３、
５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７４、
７６、７８および８０、それに加えて２９および３１の少なくとも約１２、２５
、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０または４００の連続
的なセンス鎖ヌクレオチド配列にハイブリダイズするヌクレオチド配列、または
実施例３に記載の、例えば、ｐＳｅｃＴａｇ２ＢおよびｐＳｅｃＶ５Ｈｉｓベク
ターのようなプラスミドのＤＮＡ挿入片のヌクレオチド配列；またはＳＥＣＸヌ
クレオチドのアンチセンス鎖ヌクレオチド配列または当該分野で公知のプラスミ
ドのＤＮＡ挿入片のアンチセンス鎖ＳＥＣＸヌクレオチド配列；またはＳＥＣＸ
ヌクレオチドの天然に存在する変異体、または当該分野で公知のプラスミドベク
ターのＤＮＡ挿入片の天然に存在する変異体の領域を含む。

【０１００】 ヒトＳＥＣＸヌクレオチド配列を基にするプローブを用いて、転写物またはこ
のタンパク質または相同体タンパク質をコードするゲノム配列を検出し得る。種
々の実施形態において、このプローブはさらに、それに結合した標識基をさらに
含み、例えば、この標識基は、放射線同位体、蛍光化合物、酵素、または酵素補
因子であり得る。このようなプローブは、例えば、被験体からの細胞のサンプル
中のＳＥＣＸをコードする核酸のレベルを測定することにより、例えば、ＳＥＣ
ＸｍＲＮＡレベルを検出することかまたはゲノムＳＥＣＸ遺伝子が変異したかま
たは欠失したかどうかを検出して、ＳＥＣＸタンパク質を誤発現する細胞または
組織を同定するための診断試験キットの一部分として用いられ得る。

【０１０１】 「ＳＥＣＸの生物学的に活性な部分を有するポリペプチド」は、特定の生物学
的アッセイで測定したとき、用量依存性であるかまたは用量依存性でない、成熟
形態を含む、本発明のポリペプチドの活性に類似の（必ずしも同一である必要は
ない）活性を示すポリペプチドをいう。「ＳＥＣＸの生物学的に活性な部分」を
コードする核酸フラグメントは、ＳＥＣＸの生物学的活性を有するポリペプチド
をコードするＳＥＣＸの部分を単離すること（ここで、ＳＥＣＸタンパク質の生
物学的活性は上記に記載されている）、（例えば、インビトロの組換え発現によ
り）ＳＥＣＸタンパク質のコードされた部分を発現すること、およびＳＥＣＸの
コードされた部分の活性を評価することにより調製され得る。例えば、ＳＥＣＸ
の生物学的に活性な部分をコードする核酸フラグメントは、細胞外ドメイン、例
えば、配列番号４である、クローン２８６４９３３−１のアミノ酸残基１９−６
４４を含む。別の実施形態では、細胞外ドメインを含むＳＥＣＸの生物学的に活
性な部分をコードする核酸フラグメントは、このようなドメイン（例えば、配列
番号１０のアミノ酸残基４２−４８６により示されるヒトクローン３３５２３５
８−１細胞外ドメインをコードする少なくとも配列番号９の核酸）をコードする
ＤＮＡを含む。

【０１０２】 （ＳＥＣＸ改変体） 本発明はさらに、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１
９、２１、２３、２５、２７、７４、７６、７８および８０、それに加えて２９
および３１の少なくとも１つに示されるＳＥＣＸヌクレオチド配列とは異なるが
、遺伝子コードの縮重、そしてそれ故、上記のヌクレオチド配列の任意によって
コードされるのと同じＳＥＣＸタンパク質をコードする任意の１つ以上の核酸分
子を包含する。別の実施形態では、本発明の単離されたＳＥＣＸ核酸分子は、配
列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２
６、２８、７５、７７、７９および８１、これに加えて３０および３２に示され
るアミノ酸配列の任意の１つを有するタンパク質をコードするヌクレオチド配列
を有する。

【０１０３】 これらのヒトＳＥＣＸヌクレオチド配列、またはプラスミドまたはベクターの
ＤＮＡ挿入片のＳＥＣＸヌクレオチド配列に加えて、ＳＥＣＸのアミノ酸配列中
の変化に至るＤＮＡ配列多形性が集団（例えば、ヒト集団）内に存在し得ること
とが当業者に認識され得る。ＳＥＣＸ遺伝子におけるこのような遺伝的多形性は
、自然の対立遺伝子の変動に起因して集団内の個体間で存在し得る。本明細書で
用いられる用語「遺伝子」および「組換え遺伝子」は、ＳＥＣＸタンパク質、好
ましくは哺乳動物ＳＥＣＸタンパク質をコードするオープンリーディングフレー
ムを含む核酸分子をいう。このような自然の対立遺伝子変動は、代表的には、Ｓ
ＥＣＸ遺伝子のヌクレオチド配列において１−５％の分散を生じ得る。自然の対
立遺伝子変動の結果であり、そしてＳＥＣＸの機能的活性を変えないＳＥＣＸ中
のこのようなヌクレオチド変動および得られるアミノ酸多形性の任意およびすべ
ては、本発明の範囲内にあることが意図される。

【０１０４】 さらに、他の種からのＳＥＣＸタンパク質をコードし、そしてそれ故、本明細
書に開示されるヒト配列とは異なるヌクレオチド配列を有する核酸分子が、本発
明の範囲内に含まれることが意図される。本発明のＳＥＣＸｃＤＮＡの自然の対
立遺伝子改変体および相同体に相当する核酸分子は、ヒトｃＤＮＡ、またはその
一部分を、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下、標準的なハイブ
リダイゼーション技法によるハイブリダイゼーションプローブとして用い、本明
細書に開示されたヒトＳＥＣＸ核酸に対するそれらの相同性を基に単離され得る
。例えば、可溶性のヒトＳＥＣＸｃＤＮＡは、ヒトの膜結合ＳＥＣＸに対するそ
の相同性を基に単離され得る。同様に、膜結合ヒトＳＥＣＸｃＤＮＡは、可溶性
ヒトＳＥＣＸに対するその相同性を基に単離され得る。

【０１０５】 従って、別の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、長さが少なくと
も６ヌクレオチドであり、そしてストリンジェントな条件下で、少なくとも１つ
のＳＥＣＸヌクレオチド配列を含む核酸分子にハイブリダイズする。別の実施形
態では、この核酸は、長さが少なくとも１０、２５、５０、１００、２５０、５
００または２０００ヌクレオチドである。別の実施形態では、本発明の単離され
た核酸分子はコード領域にハイブリダイズする。本明細書で用いられる用語「ス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズする」は、その条件下で、互いに少な
くとも６０％相同性であるヌクレオチド配列が、代表的には互いにハイブリダイ
ズしたままである、ハイブリダイゼーションおよび洗浄のための条件を記載する
ことを意図する。

【０１０６】 相同体（すなわち、ヒト以外の種に由来するＳＥＣＸタンパク質をコードする
核酸）またはその他の関連配列（例えばパラログ）は、核酸ハイブリダイゼーシ
ョンおよびクローニングの分野において周知の方法を用い、プローブとして特定
のヒト配列のすべてまたは一部分との、低、中程度または高ストリンジェンシー
ハイブリダイゼーションにより得られ得る。

【０１０７】 本明細書で用いられる語句「ストリンジェントハイブリダイゼーション条件」
は、その条件下で、プローブ、プライマーまたはオリゴヌクレオチドが、その標
的配列にハイブリダイズするが、その他の配列にはハイブリダイズしない条件を
いう。ストリンジェントな条件は配列依存性であり、そして異なる状況で異なる
。より長い配列は、より短い配列より高い温度で特異的にハイブリダイズする。
一般に、ストリンジェントな条件は、規定されたイオン強度およびｐＨで、特定
の配列の熱融解点（Ｔｍ）より約５℃低いように選択される。このＴｍは、標的
配列に相補的なプローブの５０％が、平衡状態で標的配列にハイブリダイズする
（規定されたイオン強度、ｐＨおよび核酸濃度下）温度である。標的配列は一般
に過剰で存在するので、Ｔｍでは、５０％のプローブが平衡状態で占有されてい
る。代表的には、ストリンジェントな条件は、ｐＨ７．０〜８．３で、塩濃度が
約１．０Ｍナトリウムイオンより少なく、代表的には約０．０１〜１．０Ｍナト
リウムイオン（またはその他の塩）、そして温度が短いプローブ、プライマーま
たはオリゴヌクレオチド（例えば、１０ｎｔ〜５０ｎｔ）について少なくとも約
３０℃、そしてより長いプローブ、プライマーおよびオリゴヌクレオチドについ
て少なくとも約６０℃であるような条件である。ストリンジェントな条件はまた
、ホルムアミドのような、脱安定化材の添加で達成され得る。

【０１０８】 ストリンジェントな条件は、当業者に公知であり、そしてＡｕｓｕｂｅｌら（
編）、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩ
ＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）、６．３
．１−６．３．６に見出され得る。好ましくは、この条件は、代表的には、互い
に少なくとも約６５％、７０％、７５％、８５％、９０％、９５％、９８％、ま
たは９９％相同な配列が、互いにハイブリダイズしたままであるような条件であ
る。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の非制限的な例は、６５℃
における、６×ＳＳＣ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ
ＥＤＴＡ、０．０２％ＰＶＰ、０．０２％Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％ＢＳＡ、お
よび５００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ、次いで５０℃における０．２×ＳＳ
Ｃ、０．０１％ＢＳＡ中の１回以上の洗浄である。ＳＥＣＸヌクレオチド配列に
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする本発明の単離された核酸分子は
、天然に存在する核酸分子に相当する。本明細書で用いられる「天然に存在する
」核酸分子は、天然にある（例えば、天然のタンパク質をコードする）ヌクレオ
チド配列を有するＲＮＡまたはＤＮＡ分子をいう。

【０１０９】 第２の実施形態では、少なくとも１つのＳＥＣＸ核酸分子、またはそのフラグ
メント、アナログまたは誘導体に、中程度のストリンジェンシーの条件下で、ハ
イブリダイズ可能である核酸配列が提供される。中程度のストリンジェンシーハ
イブリダイゼーション条件の非制限的な例は、５５℃における、６×ＳＳＣ、５
×デンハート溶液、０．５％ＳＤＳおよび１００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ
中のハイブリダイゼーション、次いで３７℃における１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤ
Ｓ中における１回以上の洗浄である。用いられ得る中程度のストリンジェンシー
のその他の条件は、当該分野で周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）、
１９９３、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ
ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ、およびＫｒｉｅｇｌ
ｅｒ、１９９０、ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳＦＥＲ ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ
、Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ、
ＮＹを参照のこと。

【０１１０】 第３の実施形態では、低ストリンジェンシーの条件下で、少なくとも１つのＳ
ＥＣＸ核酸分子、そのフラグメント、アナログまたは誘導体にハイブリダイズ可
能である核酸が提供される。低ストリンジェンシーハイブリダイゼーション条件
の非制限的な例は、４０℃における、３５％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０２％ＰＶＰ、
０．０２％Ｆｉｃｏｌｌ、０．２％ＢＳＡ、１００ｍｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮ
Ａ、１０％（ｗｔ／ｖｏｌ）硫酸デキストラン中のハイブリダイゼーション、次
いで５０℃における２×ＳＳＣ、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、
５ｍＭ ＥＤＴＡ、および０．１％ＳＤＳ中の１回以上の洗浄である。用いられ
得る（例えば、クロススピーシーズハイブリダイゼーション）低ストリンジェン
シーのその他の条件は当該分野で周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）
、１９９３、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ
ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ＮＹ、およびＫｒｉｅｇ
ｌｅｒ、１９９０、ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳＦＥＲ ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯ
Ｎ、Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ、Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ
、ＮＹ；ＳｈｉｌｏおよびＷｅｉｎｂｅｒｇ、１９８１、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７８：６７８９−６７９２を参照のこと。

【０１１１】 （保存的変異） 集団中に存在し得るＳＥＣＸ配列の天然に存在する対立遺伝子改変体に加えて
、当業者は、変化が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、
１９、２１、２３、２５、２７、７４、７６、７８および８０、それに加えて２
９および３１の少なくとも１つのＳＥＣＸヌクレオチド配列中に変異により導入
され得、それによってＳＥＣＸタンパク質の機能的能力を改変することなく、コ
ードされたＳＥＣＸタンパク質のアミノ酸中の変化に至ることをさらに認識する
。例えば、「非必須」アミノ酸残基におけるアミノ酸置換に至るヌクレオチド置
換が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、
２４、２６、２８、７５、７７、７９および８１、それに加えて３０および３２
の配列、または当該分野で公知のプラスミドまたはベクターのＤＮＡ挿入片のＳ
ＥＣＸヌクレオチド配列中に作成され得る。「非必須」アミノ酸残基は、生物学
的活性を改変することなく、ＳＥＣＸの野生型配列から改変され得る残基であり
、ここで「必須」アミノ酸残基は、生物学的活性に必要である。例えば、本発明
のＳＥＣＸタンパク質間で保存されているアミノ酸残基は、特に改変されにくい
ことが予測される。

【０１１２】 本発明の別の局面は、活性に必須ではないアミノ酸残基中の変化を含むＳＥＣ
Ｘタンパク質をコードする核酸分子に関する。このようなＳＥＣＸタンパク質は
、アミノ酸配列において、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、
１８、２０、２２、２４、２６、２８、７５、７７、７９および８１、それに加
えて３０および３２から異なり、なお生物学的活性を保持する。１つの実施形態
では、単離された核酸分子は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含み
、ここで、このタンパク質は、少なくとも１つのＳＥＣＸアミノ酸配列に少なく
とも約４５％相同であるアミノ酸配列を含む。好ましくは、この核酸分子により
コードされるタンパク質は、少なくとも１つのＳＥＣＸポリペプチドに少なくと
も約６０％相同であり、より好ましくは少なくとも約７０％相同であり、少なく
とも約８０％相同であり、少なくとも約９０％相同であり、そして最も好ましく
はその所定のＳＥＣＸポリペプチドに少なくとも約９５％相同である。

【０１１３】 所定のＳＥＣＸタンパク質に相同であるＳＥＣＸタンパク質をコードする単離
された核酸分子は、１つ以上のアミノ酸置換、付加または欠失がコードされたタ
ンパク質中に導入されるように、相当するＳＥＣＸヌクレオチド配列中に１つ以
上のヌクレオチド置換、付加または欠失を導入することにより作成され得る。

【０１１４】 変異は、標準的な技法、例えば、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介変異誘
発により、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１
、２３、２５、２７、７４、７６、７８および８０、それに加えて２９および３
１中に導入され得る。好ましくは、保存的アミノ酸置換は、１つ以上の予測され
た非必須アミノ酸残基において作成される。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ
酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。類似の側
鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは当該分野で規定されている。これらのフ
ァミリーは、塩基性側鎖もつアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジ
ン）、酸性側鎖もつアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷
電極性側鎖もつアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリ
ン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖もつアミノ酸（例えば、
アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メ
チオニン、トリプトファン）、β分岐側鎖もつアミノ酸（例えば、スレオニン、
バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖もつアミノ酸（例えば、チロシン、
フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。従って、ＳＥＣＸ中
の予測された非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残
基で置換される。あるいは、別の実施形態では、変異は、ＳＥＣＸコード配列の
すべてまたは一部分に沿って、例えば、飽和変異誘発によりランダムに導入され
得、そして得られる変異体をＳＥＣＸ生物学的活性についてスクリーニングされ
得、活性を保持する変異体を同定する。変異誘発の後、コードされたＳＥＣＸタ
ンパク質は、当該分野で公知の任意の組換え技法により発現され得、そしてタン
パク質の活性が測定され得る。

【０１１５】 １つの実施形態では、変異体ＳＥＣＸタンパク質は、（１）他のＳＥＣＸタン
パク質、他の細胞表面タンパク質、またはその生物学的に活性な部分とタンパク
質：タンパク質相互作用を形成する能力、（２）変異体ＳＥＣＸタンパク質とＳ
ＥＣＸリガンドとの間の複合体形成；（３）細胞内標的タンパク質またはその生
物学的に活性な部分に結合する変異体ＳＥＣＸタンパク質の能力；（例えばアビ
ジンタンパク質）についてアッセイされ得る。

【０１１６】 （アンチセンス） 本発明の別の局面は、ＳＥＣＸ核酸分子、またはそのフラグメント、アナログ
もしくは誘導体にハイブリダイズし得るかまたは相補的である単離されたアンチ
センス核酸分子に関する。「アンチセンス」核酸は、タンパク質をコードする「
センス」核酸に相補的であるヌクレオチド配列、例えば、二本鎖ｃＤＮＡ分子の
コード配列に相補的であるか、またはｍＲＮＡ配列に相補的であるヌクレオチド
配列を含む。特定の局面では、ＳＥＣＸコード鎖の少なくとも約１０、２５、５
０、１００、２５０または５００ヌクレオチドに相補的、またはその一部分にの
み相補的な配列を含むアンチセンス核酸分子が提供される。ＳＥＣＸタンパク質
のフラグメント、相補体、誘導体およびアナログをコードする核酸分子、または
ＳＥＣＸ核酸配列に相補的なアンチセンス核酸がさらに提供される。

【０１１７】 １つの実施形態では、アンチセンス核酸分子は、ＳＥＣＸをコードするヌクレ
オチド配列のコード鎖の「コード領域」に対するアンチセンスである。用語「コ
ード領域」は、アミノ酸残基（例えば、図１−１７に示されるＯＲＦ）に翻訳さ
れるコドンを含むヌクレオチド配列の領域をいう。別の実施形態では、このアン
チセンス核酸分子は、ＳＥＣＸをコードするヌクレオチド配列のコード鎖の「非
コード領域」に対するアンチセンスである。用語「非コード領域」は、アミノ酸
に翻訳されない、コード領域に隣接する５’および３’配列をいう（すなわち、
５’および３’非翻訳領域ともいう）。

【０１１８】 本明細書に開示されるＳＥＣＸをコードするコード鎖（例えば、配列番号１、
３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７
４、７６、７８および８０、それに加えて２９および３１）が与えられれば、本
発明のアンチセンス核酸は、ＷａｔｓｏｎおよびＣｒｉｃｋまたはＨｏｏｇｓｔ
ｅｅｎ塩基対合の規則に従って設計され得る。このアンチセンス核酸分子は、Ｓ
ＥＣＸｍＲＮＡの全コード領域に相補的であり得るが、より好ましくは、ＳＥＣ
ＸｍＲＮＡのコードまたは非コード領域の一部分に対してのみアンチセンスであ
るオリゴヌクレオチドである。例えば、このアンチセンスオリゴヌクレオチドは
、ＳＥＣＸｍＲＮＡの翻訳開始部位を取り囲む領域に相補的であり得る。アンチ
センスオリゴヌクレオチドは、例えば、長さが約５、１０、１５、２０、２５、
３０、３５、４０、４５または５０ヌクレオチドであり得る。本発明のアンチセ
ンス核酸は、当該分野で公知の手順を用いる化学的合成または酵素的連結を用い
て構築され得る。例えば、アンチセンス核酸（例えば、アンチセンスオリゴヌク
レオチド）は、天然に存在するヌクレオチド、または分子の生物学的安定性を増
大するため、もしくはアンチセンスとセンス核酸との間に形成される二本鎖の物
理的安定性を増大するために設計された種々に改変されたヌクレオチド（例えば
、ホスホロチオエート誘導体およびアクリジン置換されたヌクレオチドが用いら
れ得る）を用いて化学的に合成され得る。

【０１１９】 アンチセンス核酸を生成するために用いられ得る改変されたヌクレオチドの例
は：５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨ
ードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カ
ルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−
２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラ
シル、β−Ｄ−ガラクトシルケオシン、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニ
ン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２
−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシト
シン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル
、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルケオシン
、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチ
ルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ヴ
ィブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎ）、プソイドウラシル、ケオシン（ｑ
ｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チ
オウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢
酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、５−メチル−２−チオウ
ラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、（ａ
ｃｐ３）ｗ、および２，６−ジアミノプリンを含む。あるいは、このアンチセン
ス核酸は、核酸がアンチセンス方向にサブクローン化された発現ベクターを用い
て生物学的に産生され得る（すなわち、挿入された核酸から転写されたＲＮＡは
、以下のサブセクションでさらに記載されるように、目的の標的核酸に対してア
ンチセンス配向である）。

【０１２０】 代表的には、本発明のアンチセンス核酸分子は、それらがＳＥＣＸタンパク質
をコードする細胞ｍＲＮＡおよび／またはゲノムＤＮＡとハイブリダイズするか
、またはそれに結合するように被検体に投与されるか、またはインサイチュ（ｉ
ｎ ｓｉｔｕ）で生成され、それによって、例えば、転写および／または翻訳を
阻害することによりタンパク質の発現を阻害する。このハイブリダイゼーション
は、従来のヌクレオチド相補性により、安定な二本鎖を形成するか、または、例
えば、ＤＮＡ二本鎖に結合するアンチセンス核酸分子の場合、二重らせんの主溝
における特異的相互作用を通じてであり得る。本発明のアンチセンス核酸分子の
投与の経路の例は、組織部位における直接注入を含む。あるいは、アンチセンス
核酸分子は、改変されて、選択された細胞を標的にし、次いで全身的に投与され
る。例えば、全身投与には、アンチセンス分子は、それらが選択された細胞表面
上に発現されたレセプターまたは抗原に特異的に結合するように改変され得る。
例えば、これは、このアンチセンス核酸分子を、細胞表面レセプターまたは抗原
に結合するペプチドまたは抗体に連結することによる。このアンチセンス核酸分
子はまた、本明細書に記載のベクターを用いて細胞に送達され得る。アンチセン
ス分子の十分な細胞内濃度を達成するために、アンチセンス核酸分子が強力なｐ
ｏｌＩＩまたはｐｏｌＩＩＩプロモーターの制御下に配置されるベクター構築物
が好適である。

【０１２１】 なお別の実施形態では、本発明のアンチセンス核酸分子は、αアノマー核酸分
子である。αアノマー核酸分子は、相補的ＲＮＡと特異的な二本鎖ハイブリッド
を形成し、そこでは、通常のβユニットとは反対に、鎖は互いに平行に走る（Ｇ
ａｕｌｔｉｅｒら、（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ Ｒｅｓ １５：６
６２５−６６４１）。このアンチセンス核酸分子はまた、２’−ｏ−メチルリボ
ヌクレオチド（Ｉｎｏｕｅら（１９８７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
１５：６１３１−６１４８）、またはキメラＲＮＡ−ＤＮＡアナログ（Ｉｎｏ
ｕｅら、（１９８７）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ２１５：３２７−３３０）を含み得る
。

【０１２２】 （リボザイムおよびＰＮＡ成分） 核酸改変は、非制限的な例として、改変された塩基、および糖リン酸骨格が改
変または誘導体化されている核酸を含む。これらの改変は、少なくとも一部分、
改変された核酸の化学的安定性を、それらが、例えば、被験体における治療的適
用にアンチセンス結合性核酸として用いられ得るように増大するために実施され
る。

【０１２３】 １つの実施形態では、本発明のアンチセンス核酸はリボザイムである。リボザ
イムは、それらに対してリボザイムが相補的領域を有する一本鎖核酸、例えばｍ
ＲＮＡを切断し得るリボヌクレアーゼ活性をもつ触媒的ＲＮＡ分子である。従っ
て、リボザイム（例えば、ハンマーヘッドリボザイム（Ｈａｓｅｌｈｏｆｆおよ
びＧｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９１に記載さ
れている））は、ＳＥＣＸｍＲＮＡ転写物を触媒的に切断し、それによってＳＥ
ＣＸｍＲＮＡの翻訳を阻害するために用いられ得る。ＳＥＣＸをコードする核酸
に特異性を有するリボザイムは、本明細書に開示のＳＥＣＸｃＤＮＡのヌクレオ
チド配列（すなわち、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、
１９、２１、２３、２５、２７、７４、７６、７８および８０、それに加えて２
９および３１）に基づいて設計され得る。例えば、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ Ｌ
−１９ ＩＶＳ ＲＮＡの誘導体を、活性部位のヌクレオチド配列が、ＳＥＣＸ
をコードするｍＲＮＡにおいて切断されるべきヌクレオチド配列に相補的である
ように構築し得る。例えば、Ｃｅｃｈら、米国特許第４，９８７，０７１号；お
よびＣｅｃｈら、米国特許第５，１１６，７４２号を参照のこと。あるいは、Ｓ
ＥＣＸｍＲＮＡは、ＲＮＡ分子のプールから特異的リボヌクレアーゼ活性を有す
る触媒的ＲＮＡを選択するために用いられ得る。例えば、Ｂａｒｔｅｌら（１９
９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１４１１−１４１８を参照のこと。

【０１２４】 あるいは、ＳＥＣＸ遺伝子発現は、ＳＥＣＸ遺伝子の調節領域（例えば、ＳＥ
ＣＸプロモーターおよび／またはエンハンサー）に相補的であるヌクレオチド配
列を標的にし、標的細胞中のＳＥＣＸ遺伝子の転写を妨害する三重らせん構造を
形成することによって阻害され得る。一般に、Ｈｅｌｅｎｅ（１９９１）Ａｎｔ
ｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６：５６９−８４；Ｈｅｌｅｎｅら（１９
９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６；およびＭａｈ
ｅｒ（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４：８０７−１５を参照のこと。

【０１２５】 種々の実施形態では、ＳＥＣＸの核酸は、塩基部分、糖部分またはリン酸骨格
で改変され、例えば、分子の安定性、ハイブリダイゼーション、または溶解性を
改善し得る。例えば、核酸のデオキシリボースリン酸骨格を改変してペプチド核
酸を生成し得る（Ｈｙｒｕｐら（１９９６）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ４
：５−２３を参照のこと）。本明細書で用いる用語「ペプチド核酸」または「Ｐ
ＮＡ」は、デオキシリボースリン酸骨格がプソイドペプチド（ｐｓｅｕｄｏｐｅ
ｐｔｉｄｅ）骨格で置換され、かつ４つの天然のヌクレオ塩基のみが保持されて
いる、核酸模倣物、例えば、ＤＮＡ模倣物をいう。ＰＮＡの中性の骨格は、低イ
オン強度条件下で、ＤＮＡおよびＲＮＡへの特異的ハイブリダイゼーションを可
能にすることが示されている。ＰＮＡオリゴマーの合成は、Ｈｙｒｕｐら（１９
９６）上述；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅら（１９９６）ＰＮＡＳ ９３：１４
６７０−６７５に記載のような、標準的な固相ペプチド合成プロトコールを用い
て実施され得る。

【０１２６】 ＳＥＣＸのＰＮＡは、治療適用および診断適用で用いられ得る。例えば、ＰＮ
Ａは、例えば、転写または翻訳抑止（ａｒｒｅｓｔ）を誘導すること、または複
製を阻害することにより、遺伝子発現の配列特異的調節のためのアンチセンスま
たはアンチ遺伝子剤として用いられ得る。ＳＥＣＸのＰＮＡはまた、例えば、Ｐ
ＮＡ特異的ＰＣＲクランピングによる、例えば、遺伝子中の１塩基対変異の分析
に；他の酵素、例えば、Ｓ１ヌクレアーゼと組み合わせて用いる場合、人工の制
限酵素として（Ｈｙｒｕｐ Ｂ．（１９６６）上述）；またはＤＮＡ配列および
ハイブリダイゼーションのプローブまたはプライマーとして（Ｈｙｒｕｐら（１
９６６）上述；Ｐｅｒｒｙ−Ｏ’Ｋｅｅｆｅ（１９９６）上述）用いられ得る。

【０１２７】 別の実施形態では、ＳＥＣＸのＰＮＡは、例えば、それらの安定性または細胞
の取り込みを増大するために、ＰＮＡに親油性基またはその他の補助基を結合す
ることによるか、ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの形成によるか、またはリポソームの使
用もしくは当該分野で公知のその他の技法によって改変され得る。例えば、ＰＮ
ＡとＤＮＡの有利な性質を組み合わせ得る、ＳＥＣＸのＰＮＡ−ＤＮＡキメラが
生成され得る。このようなキメラは、ＰＮＡ部分の高い結合親和性および特異性
を提供しながら、ＤＮＡ部分と相互作用するために、ＤＮＡ認識酵素、例えば、
ＲＮａｓｅＨおよびＤＮＡポリメラーゼを可能にする。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラは
、塩基スタッキング、ヌクレオ塩基間の結合の数、および配向の点から選択され
た適切な長さのリンカーを用いて連結され得る（Ｈｙｒｕｐ（１９９６）上述）
。ＰＮＡ−ＤＮＡキメラの合成は、Ｈｙｒｕｐ（１９６６）上述およびＦｉｎｎ
ら（１９９６）Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２４：３３５７−６３に記載の
ように実施されえる。例えば、ＤＮＡ鎖を、標準的なホルホルアミダイトカップ
リング化学を用いて固体支持体上で合成し得、そして改変ヌクレオシドアナログ
、例えば、５’−（４−メトキシトリチル）アミノ−５’−デオキシ−チミジン
ホスホルアミダイトを、ＰＮＡとＤＮＡの５’末端との間に用い得る（Ｍａｇら
（１９８９）Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １７：５９７３−８８）。次いで、
ＰＮＡモノマーを段階的様式でカップリングし、５’ＰＮＡセグメントと３’Ｄ
ＮＡセグメントをもつキメラ分子を生成する（Ｆｉｎｎら（１９９６）上述）。
あるいは、キメラ分子は、５’ＤＮＡセグメントと３’ＰＮＡセグメントを有し
て合成され得る。Ｐｅｔｅｒｓｅｎら（１９７５）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈ
ｅｍ Ｌｅｔｔ ５：１１１９−１１１２４を参照のこと。

【０１２８】 その他の実施形態では、このオリゴヌクレオチドは、ペプチド（例えば、イン
ビボで宿主細胞レセプターを標的にするため）、または細胞膜を横切る輸送を容
易にする薬剤（例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３−６５５６；Ｌｅｍａｉｔｒ
ら、１９８７、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８４：６４８−６５２
；ＰＣＴ公報番号ＷＯ０８８／０９８１０を参照のこと）もしくは血液脳関門を
横切る輸送を容易にする薬剤（例えば、ＰＣＴ公報番号Ｗ０８９／１０１３４を
参照のこと）のような他の付属基を含み得る。さらに、オリゴヌクレオチドは、
ハイブリダイゼーショントリガー切断剤（例えば、Ｋｒｏｌら、１９８８、Ｂｉ
ｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：９５８−９７６を参照のこと）またはインターカ
ーレーティング剤（例えば、Ｚｏｎ、１９８８、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．５：５３
９−５４９を参照のこと）を用いて改変され得る。この目的のために、このオリ
ゴヌクレオドは、例えば、ペプチド、ハイブリダイゼーショントリガー架橋剤、
輸送剤、ハイブリダイゼーショントリガー切断剤などの他の分子に連結され得る
。

【０１２９】 （ＳＥＣＸタンパク質） 本発明の新規タンパク質は、その配列が図１−１５および１７に提供される（
配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、
２６、２８、７５，７７、７９および８１、それに加えて３０および３２）ＳＥ
ＣＸタンパク質を含む。本発明はまた、なおそのＳＥＣＸ活性および生理学的機
能を維持するタンパク質、またはその機能的フラグメントをコードしながら、そ
の任意の残基が図１−１５および１７に示される対応する残基から変化し得る、
変異体または改変体タンパク質を含む。この変異体または改変体タンパク質にお
いて、２０％までまたはそれ以上の残基がそのように変化し得る。

【０１３０】 一般に、ＳＥＣＸ様機能を保持するＳＥＣＸ改変体は、配列中の特定位置の残
基が他のアミノ酸により置換され、そしてさらに、親タンパク質の２つの残基間
にさらなる残基（単数または複数）を挿入する可能性、および親配列から１つ以
上の残基を欠失する可能性を含む。任意のアミノ酸置換、挿入または欠失は、本
発明に包含される。好適な状況では、この置換は、上記で規定されるような保存
的置換である。

【０１３１】 本発明の１つの局面は、単離されたＳＥＣＸタンパク質、およびその生物学的
に活性な部分、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくは相同体に関
する。抗ＳＥＣＸ抗体を惹起するための免疫原としての使用に適するポリペプチ
ドフラグメントもまた提供される。１つの実施形態では、ネイティブＳＥＣＸタ
ンパク質が、標準的なタンパク質精製技法を用いる適切な精製スキームにより、
細胞または組織供給源から単離され得る。別の実施形態では、ＳＥＣＸタンパク
質は、組換えＤＮＡ技法により生産される。組換え発現の代替えとして、ＳＥＣ
Ｘタンパク質またはポリペプチドは、標準的なペプチド合成技法を用いて化学的
に合成され得る。

【０１３２】 「単離された」または「精製された」タンパク質または生物学的に活性なその
部分は、ＳＥＣＸタンパク質が由来する細胞または組織供給源からの細胞材料ま
たはその他の夾雑タンパク質を実質的に含まないか、化学的に合成されたとき、
化学的前駆体またはその他の化学物質を実質的に含まない。用語「細胞材料を実
質的に含まない」は、ＳＥＣＸタンパク質が、単離されるかまたは組換えにより
産生された細胞の細胞成分から分離されているこのタンパク質の調製物を含む。
１つの実施形態では、用語「細胞材料を実質的に含まない」は、非ＳＥＣＸタン
パク質（本明細書ではまた「汚染タンパク質」と呼ばれる）が約３０％（乾燥重
量による）より少ない、より好ましくは約２０％より少ない非ＳＥＣＸタンパク
質、なおより好ましくは約１０％より少ない非ＳＥＣＸタンパク質、そして最も
好ましくは約５％より少ない非ＳＥＣＸタンパク質を有する、ＳＥＣＸタンパク
質の調製物を含む。このＳＥＣＸタンパク質または生物学的に活性なその部分が
組換えにより産生されるとき培養培地を実質的に含まないこともまた好適である
。すなわち、培養培地は、タンパク質調製物の容量の約２０％より少ないか、よ
り好ましくは約１０％より少ないか、そして最も好ましくは約５％より少ない。

【０１３３】 用語「化学的前駆体またはその他の化学物質を実質的に含まない」は、タンパ
ク質の合成において含まれる化学的前駆体またはその他の化学物質からこのタン
パク質が分離されているＳＥＣＸタンパク質の調製物を含む。１つの実施形態で
は、用語「化学的前駆体またはその他の化学物質を実質的に含まない」は、化学
的前駆体またはその他の化学物質を約３０％（乾燥重量による）より少く、より
好ましくは化学的前駆体またはその他の化学物質を約２０％より少なく、なおよ
り好ましくは化学的前駆体またはその他の化学物質を約１０％より少なく、そし
て最も好ましくは化学的前駆体またはその他の化学物質を約５％より少なく有す
るＳＥＣＸタンパク質の調製物を含む。

【０１３４】 ＳＥＣＸタンパク質の生物学的に活性な部分は、完全長のＳＥＣＸタンパク質
より少ないアミノ酸配列を含み、そしてＳＥＣＸタンパク質の少なくとも１つの
活性を示す、ＳＥＣＸタンパク質のアミノ酸配列（例えば、配列番号２、４、６
、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、７５，
７７、７９および８１、それに加えて３０および３２）に十分に相同的であるか
、またはそれに由来するアミノ酸配列を含む。代表的には、生物学的に活性な部
分は、ＳＥＣＸタンパク質の少なくとも１つの活性をともなうドメインまたはモ
チーフを含む。ＳＥＣＸタンパク質の生物学的に活性な部分は、例えば、１０、
２５、５０、１００またはそれ以上のアミノ酸の長さのポリペプチドであり得る
。

【０１３５】 本発明のＳＥＣＸタンパク質の生物学的活性な部分は、上記セクション１−１
４で同定された構造的ドメインの少なくとも１つを含み得ることが理解されるべ
きである。ＳＥＣＸタンパク質の代替えの生物学的に活性な部分は、ＳＥＣＸタ
ンパク質の細胞外ドメインを含み得る。ＳＥＣＸタンパク質の別の生物学的に活
性な部分は、ＳＥＣＸタンパク質の膜貫通ドメインを含み得る。本発明のＳＥＣ
Ｘタンパク質のなお別の生物学的に活性な部分は、ＳＥＣＸタンパク質の細胞内
ドメインを含み得る。

【０１３６】 さらに、このタンパク質のその他の領域が欠失したその他の生物学的に活性な
部分が、組換え技法により調製され、ネイティブなＳＥＣＸタンパク質の１つ以
上の機能的活性について評価され得る。

【０１３７】 ある実施形態では、このＳＥＣＸタンパク質は、配列番号２、４、６、８、１
０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、７５，７７、７
９および８１、それに加えて３０および３２に示される任意の１つ以上のアミノ
酸配列を有し得る。他の実施形態では、このＳＥＣＸタンパク質は、配列番号２
、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８
、７５，７７、７９および８１、それに加えて３０および３２の任意の１つに実
質的に相同であり、そして以下に詳細に記載されるように、天然の対立遺伝子変
動または変異誘発に起因してアミノ酸配列がなお異なるが、所定のＳＥＣＸタン
パク質の機能的活性を保持する。従って、別の実施形態では、このＳＥＣＸタン
パク質は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２
２、２４、２６、２８、７５，７７、７９および８１、それに加えて３０および
３２のアミノ酸配列の任意の１つに少なくとも約７５％相同であるアミノ酸配列
を含み、そしてＳＥＣＸタンパク質の機能的活性を保持するタンパク質である。

【０１３８】 本発明はさらに、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１
９、２１、２３、２５または２７、それに加えて２９または３１の任意の１つの
ヌクレオチド配列を含む核酸分子にストリンジェントな条件下でハイブリダイズ
するヌクレオチド配列を有する核酸分子によりコードされる、ＳＥＣＸタンパク
質、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくは相同体を特徴にする。

【０１３９】 （２つ以上の配列間の相同性の決定） ２つのアミノ酸配列または２つの核酸の相同性のパーセントを決定するために
、これらの配列を最適な比較の目的にアラインする（例えば、第２のアミノ酸ま
たは核酸配列との最適アラインメントのために第１のアミノ酸または核酸配列の
も配列中にギャップを導入し得る）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌク
レオチド位置でアミノ酸またはヌクレオチドを比較する。第１の配列中の位置が
第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められ
るとき、この分子はその位置で相同である（すなわち、本明細書で用いるとき、
アミノ酸または核酸「相同性」は、アミノ酸または核酸「同一性」と等価である
）。

【０１４０】 核酸配列相同性は、２つの配列間の同一性の程度で決定され得る。この相同性
は、ＧＣＧプログラムパッケージで提供されるＧＡＰソフトウェアのような当該
分野で公知のコンピュータープログラムを用いて決定され得る。Ｎｅｅｄｌｅｍ
ａｎおよびＷｕｎｓｃｈ １９７０ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ４８：４４３−４
５３を参照のこと。ＧＣＧ ＧＡＰソフトウェアを核酸配列比較のために以下の
設定を用い：５．０のＧＡＰ作成ペナルティーおよび０．３のＧＡＰ伸長ペナル
ティー、上記で言及した類似の核酸配列のコード領域は、好ましくは、配列番号
１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５または
２７、それに加えて２９または３１の任意の１つで示されたＤＮＡ配列のＣＤＳ
（すなわちコードする）部分と、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、
９０％、９５％、９８％、または９９％の同一性の程度を示す。

【０１４１】 用語「配列同一性」は、２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列が、
比較の特定の領域に亘って残基ごとについて同一である程度をいう。用語「配列
同一性のパーセント」は、その比較の領域に亘り最適にアラインされた配列を比
較すること、両方の配列において同一の核酸塩基（例えば、核酸の場合、Ａ、Ｔ
、Ｃ、Ｇ、Ｕ、またはＩ）がある位置の数を決定し、一致した位置の数を生成す
ること、比較領域中の位置の総数（すなわち、ウンンドウサイズ）で一致した位
置の数を除すること、およびこの結果に１００を乗じ配列同一性のパーセントを
得ることにより算出される。本明細書で用いる用語「実質的に同一」は、ポリヌ
クレオチド配列の特徴を示し、ここで、このポリヌクレオチドは、比較領域に亘
って参照配列と比較したとき、少なくとも８０％の配列同一性、好ましくは少な
くとも８５％の配列同一性そしてしばしば９０〜９５％の配列同一性、より通常
は少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。ポリペプチド配列中のア
ミノ酸残基を比較するとき、同様の計算が用いられる。

【０１４２】 （キメラおよび融合タンパク質） 本発明はまた、ＳＥＣＸキメラまたは融合タンパク質を提供する。本明細書で
用いられるとき、ＳＥＣＸ「キメラタンパク質」または「融合タンパク質」は、
非ＳＥＣＸポリペプチドと作動可能に連結されたＳＥＣＸポリペプチドを含む。
「ＳＥＣＸポリペプチド」は、ＳＥＣＸに相当するアミノ酸配列を有するポリペ
プチドをいい、その一方、「非ＳＥＣＸポリペプチド」は、このＳＥＣＸタンパ
ク質に実質的に相同ではないタンパク質に相当するアミノ酸配列を有するポリペ
プチドをいう（例えば、ＳＥＣＸタンパク質とは異なり、しかも同一かまたは異
なる生物に由来するタンパク質）。ＳＥＣＸ融合タンパク質の中で、ＳＥＣＸポ
リペプチドは、ＳＥＣＸタンパク質のすべてか、またはその一部分に対応する。
１つの実施形態では、ＳＥＣＸ融合タンパク質は、ＳＥＣＸタンパク質の少なく
とも１つの生物学的に活性な部分を含む。別の実施形態では、ＳＥＣＸ融合タン
パク質は、ＳＥＣＸタンパク質の少なくとも２つの生物学的に活性な部分を含む
。なお別の実施形態では、ＳＥＣＸ融合タンパク質は、ＳＥＣＸタンパク質の少
なくとも３つの生物学的に活性な部分を含む。融合タンパク質において、用語「
作動可能に連結される」は、ＳＥＣＸポリペプチドおよび非ＳＥＣＸポリペプチ
ドが互いにインフレームで融合していることを示すことを意図する。非ＳＥＣＸ
ポリペプチドは、ＳＥＣＸポリペプチドのＮ末端またはＣ末端に融合され得る。

【０１４３】 例えば、１つの実施形態では、ＳＥＣＸ融合タンパク質は、目的の活性に関与
することが知られる第２のタンパク質の細胞外ドメインに作動可能に連結された
ＳＥＣＸドメインを含む。このような融合タンパク質はさらに、ＳＥＣＸ活性を
調節する化合物のためにスクリーニングアッセイにおいて利用され得る（このよ
うなアッセイは以下に詳細に記載される）。

【０１４４】 １つの実施形態では、この融合タンパク質は、ＧＳＴ−ＳＥＣＸ融合タンパク
質であり、ここではＳＥＣＸ配列が、ＧＳＴ（すなわち、グルタチオンＳ−トラ
ンスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合される。このような融合タンパク質は、組
換えＳＥＣＸの精製を容易にし得る。

【０１４５】 別の実施形態では、この融合タンパク質は、そのＮ末端に異質シグナル配列を
含むＳＥＣＸタンパク質である。例えば、ネイティブなＳＥＣＸシグナル配列（
すなわち、上記セクション１−１４に記載のような、ほぼアミノ酸１〜２６）を
除去し、別のタンパク質からのシグナル配列で置き換え得る。特定の宿主では（
例えば、哺乳動物宿主細胞）、ＳＥＣＸの発現および／または分泌は、異質シグ
ナル配列の使用により増大され得る。

【０１４６】 なお別の実施形態では、この融合タンパク質は、ＳＥＣＸ−免疫グロブリン融
合タンパク質であり、ここでは主に細胞外ドメインを含むＳＥＣＸ配列が、免疫
グロブリンタンパク質ファミリーのメンバーに由来する配列に融合される。本発
明のこのＳＥＣＸ−免疫グロブリン融合タンパク質は、薬学的組成物中に取り込
まれ、そして被験体に投与されて、細胞の表面上でＳＥＣＸリガントとＳＥＣＸ
タンパク質との間の相互作用を阻害し、それによってインビボのＳＥＣＸ媒介信
号伝達を抑制し得る。このＳＥＣＸ−免疫グロブリン融合タンパク質を用い、Ｓ
ＥＣＸ同族リガンドの生体利用性に影響を与え得る。ＳＥＣＸリガンド／ＳＥＣ
Ｘ相互作用の阻害は、増殖障害および分化障害の両方の処置、および細胞生存を
調節（例えば、促進または阻害）することに、治療的に有用であり得る。さらに
、本発明のこのＳＥＣＸ−免疫グロブリン融合タンパク質は、被験体中で抗ＳＥ
ＣＸ抗体を産生するための免疫原として用い得、ＳＥＣＸリガンドを精製し、そ
してＳＥＣＸリガンドとのＳＥＣＸの相互作用を阻害する分子を同定するスクリ
ーニングアッセイで用いられ得る。

【０１４７】 本発明のＳＥＣＸキメラまたは融合タンパク質は、標準的な組換えＤＮＡ技法
により産生され得る。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡフラ
グメントを、従来の技法に従って、例えば、連結のための平滑末端または粘着（
ｓｔａｇｇｅｒ）末端、適切な末端を提供するための制限酵素消化、必要に応じ
て粘着（ｃｏｈｅｓｉｖｅ）末端のフィルイン、所望しない連結を避けるための
アルカリホスファターゼ処理、および酵素的連結を採用することにより、インフ
レームで一緒に連結する。別の実施形態では、融合遺伝子を、自動化ＤＮＡ合成
機を含む従来技法により合成し得る。あるいは、遺伝子フラグメントのＰＣＲ増
幅を、キメラ遺伝子配列を生成するために次いでアニールおよび再増幅され得る
、２つの連続遺伝子フラグメント間の相補的オーバハングを生じるアンカープラ
イマーを用いて実施し得る（例えば、Ａｕｓｂｅｌら（編）ＣＵＲＲＥＮＴ Ｐ
ＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ Ｗ
ｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２を参照のこと）。さらに、融合成分（例えば、Ｇ
ＳＴポリペプチド）をすでにコードした多くの発現ベクターが市販されている。
ＳＥＣＸをコードする核酸は、この融合成分がＳＥＣＸタンパク質にインフレー
ム連結されるように、このような発現ベクター中にクローン化され得る。

【０１４８】 本発明はまた、種々のＳＥＣＸポリペプチド由来のシグナル配列を提供する。
このシグナル配列は、例えば、上記の、ＳＥＣＸポリペプチドのためのＳｉｇｎ
ａｌＰソフトウェアプログラムにより推定されるＳＥＣＸポリペプチドについて
同定されるシグナルペプチドを含むポリペプチドを含む。これらのシグナル配列
は、所望の細胞内または細胞外（細胞からの分泌が所望される場合）位置に連結
されたポリペプチド配列を指向させるために有用である。いくつかの実施形態で
は、このシグナル配列は、連結されたポリペプチドを所望の細胞内区画に指向さ
せるに十分であるＳＥＣＸシグナル配列の一部分を含む。

【０１４９】 （ＳＥＣＸアゴニストおよびアンタゴニスト） 本発明はまた、ＳＥＣＸアゴニスト（模倣物）として、またはＳＥＣＸアンタ
ゴニストとして機能するＳＥＣＸタンパク質の改変体に関する。ＳＥＣＸタンパ
ク質の改変体、例えば、ＳＥＣＸタンパク質の離散した点変異または短縮型が、
変異誘発により生成され得る。ＳＥＣＸタンパク質のアゴニストは、天然に存在
する形態のＳＥＣＸタンパク質と実質的に同じ生物学的活性、またはその生物学
的活性のサブセットを保持し得る。ＳＥＣＸタンパク質のアンタゴニストは、天
然に存在する形態のＳＥＣＸタンパク質の１つ以上の活性を、例えば、ＳＥＣＸ
タンパク質を含む細胞シグナル伝達カスケードの下流または上流メンバーに競合
的に結合することにより阻害し得る。従って、特異的生物学的効果が、限られた
機能の改変体を用いた処理により惹起され得る。１つの実施形態では、このタン
パク質の天然に存在する形態の生物学活性のサブセットを有する改変体を用いた
被験体の処置は、ＳＥＣＸタンパク質の天然に存在する形態を用いた処置に対し
て被験体におけるより少ない副作用を有する。

【０１５０】 ＳＥＣＸアゴニスト（模倣物）として、またはＳＥＣＸアンタゴニストのいず
れかとして機能するＳＥＣＸタンパク質の改変体は、ＳＥＣＸタンパク質アゴニ
ストまたはアンタゴニスト活性のためのＳＥＣＸタンパク質の変異体、例えば短
縮型変異体のコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより同
定され得る。１つの実施形態では、ＳＥＣＸ改変体の多彩なライブラリーは、核
酸レベルのコンビナトリアル変異誘発により生成され、そして多彩な遺伝子ライ
ブラリーによりコードされる。ＳＥＣＸ改変体の多彩なライブラリーは、例えば
、合成オリゴヌクレオチドの混合物を、潜在的なＳＥＣＸ配列の縮重セットが、
個々のポリペプチドとして、あるいは、その中にＳＥＣＸ配列のセットを含む（
例えば、ファージディスプレイのための）より大きな融合タンパク質のセットと
して発現可能であるように、酵素的に連結することにより産生され得る。縮重オ
リゴヌクレオチド配列から潜在的なＳＥＣＸ改変体のライブラリーを産生するた
めに用いられ得る種々の方法がある。縮重遺伝子配列の化学的合成は、自動化Ｄ
ＮＡ合成機中で実施され得、次いでこの合成遺伝子は、適切な発現ベクター中に
連結される。遺伝子の縮重セットの使用は、１つの混合物において、潜在的なＳ
ＥＣＸ配列の所望のセットをコードする配列のすべての供給量を可能にする。縮
重オリゴヌクレオチドを合成する方法は当該分野で公知である（例えば、Ｎａｒ
ａｎｇ（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ３９：３；Ｉｔａｋｕｒａら（１
９８４）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ５３：３２３；Ｉｔａｋｕｒａら
（１９８４）Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８：１０５６；Ｉｋｅら（１９８３）Ｎｕｃ
ｌ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ １１：４７７）。

【０１５１】 （ポリペプチドライブラリー） さらに、ＳＥＣＸタンパク質コード配列のフラグメントのライブラリーを用い
て、ＳＥＣＸタンパク質の改変体のスクリーニングおよび引き続く選択のための
ＳＥＣＸフラグメントの多彩な集団を生成し得る。１つの実施形態では、コード
配列フラグメントのライブラリーは、ＳＥＣＸコード配列の二本鎖ＰＣＲフラグ
メントを、１分子あたり約１つのみのニックが生じる条件下、ヌクレアーゼで処
理すること、二本鎖ＤＮＡを変性させること、異なるニック産物からのセンス／
アンチセンス対を含み得る二本鎖を形成するためにこのＤＮＡを再生すること、
Ｓ１ヌクレアーゼを用いた処理により再形成された二本鎖から一本鎖部分を除去
すること、および得られるフラグメントライブラリーを発現ベクター中に連結す
ることにより生成し得る。この方法により、ＳＥＣＸタンパク質の種々のサイズ
のＮ末端および内部フラグメントをコードする発現ライブラリーが派生し得る。

【０１５２】 点変異または短縮により作成されたコンビナトリアルライブラリーの遺伝子産
物をスクリーニングするため、選択された性質を有する遺伝子産物のｃＤＮＡラ
イブラリーをスクリーニングするためのいくつかの技法が当該分野で公知である
。このような技法を、ＳＥＣＸタンパク質のコンビナトリアル変異誘発により生
成された遺伝子ライブラリーの迅速スクリーニングに適用可能である。大きな遺
伝子ライブラリーをスクリーニングするための、高スループット分析に適した最
も広く用いられる技法は、代表的には、遺伝子ライブラリーを複製可能な発現ベ
クター中にクローニングすること、得られるベクターのライブラリーで適切な細
胞を形質転換すること、およびこのコンビナトリアル遺伝子を、所望の活性の検
出が、その産物が検出された遺伝子をコードするベクターの単離を容易にする条
件下で発現することを含む。ライブラリー中の機能的変異体の頻度を増大する新
規技法であるリクルーシブエンセブル変異誘発（ＲＥＭ）を、スクリーニングア
ッセイと組み合わせて用い、ＳＥＣＸ改変体を同定し得る（ＡｒｋｉｎおよびＹ
ｏｕｒｖａｎ（１９９２）ＰＮＡＳ ８９：７８１１−７８１５；Ｄｅｌｇｒａ
ｖｅら（１９９３）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ６：３２７−３
３１）。

【０１５３】 １つの実施形態では、細胞を基礎にしたアッセイを開発して、多彩なＳＥＣＸ
ライブラリー、例えば、変異体ＳＥＣＸポリペプチドのライブラリーを分析し得
る。例えば、発現ベクターのライブラリーを、通常、ＳＥＣＸ依存様式（例えば
、シグナル伝達複合体による）で特定のリガンドまたはレセプターに応答する細
胞株中にトランスフェクトし得る。次いでトランスフェクトされた細胞を、推定
のＳＥＣＸ相互作用体と接触させ、そしてシグナル伝達複合体によるシグナル伝
達に対する変異体ＳＥＣＸの発現の影響を、例えば、細胞活性または細胞生存を
測定することにより検出し得る。次いで、プラスミドＤＮＡを、阻害、あるいは
例えばサイトカイン誘導の能力をスコアする細胞から回収し、そして個々のクロ
ーンをさらに特徴付け得る。

【０１５４】 （抗ＳＥＣＸ抗体） 本発明は、本発明の任意のポリペプチドに免疫特異的に結合する、Ｆ_abまたは
（Ｆ_ab）₂のような抗体または抗体フラグメントを包含する。

【０１５５】 単離されたＳＥＣＸタンパク質、またはその部分もしくはフラグメントは、ポ
リクローナル抗体およびモノクローナル抗体調製のための標準的な技法を用いて
、ＳＥＣＸに結合する抗体を生成するための免疫原として用いられ得る。完全長
のＳＥＣＸタンパク質が用いられ得るが、あるいは、本発明は、免疫原としての
使用のためのＳＥＣＸの抗原性ペプチドフラグメントを提供する。ＳＥＣＸの抗
原性ペプチドは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２
０、２２、２４、２６、２８、７５，７７、７９および８１、それに加えて３０
および３２で示されるアミノ酸配列の少なくとも４アミノ酸残基を含み、そして
このペプチドに対して惹起された抗体がＳＥＣＸと特異的な免疫複合体を形成す
るように、ＳＥＣＸのエピトープを含む。好ましくは、この抗原性ペプチドは、
少なくとも６、８、１０、１５、２０、または３０のアミノ酸残基を含む。より
長い抗原性ペプチドが、使用および当業者に周知の方法により依存して、より短
い抗原性ペプチドよりもしばしば好適である。

【０１５６】 本発明の特定の実施形態では、抗原性ペプチドにより包含される少なくとも１
つのエピトープは、ＳＥＣＸタンパク質の表面上に位置する領域、例えば、親水
性領域である。ヒトＳＥＣＸタンパク質配列の疎水性分析は、ＳＥＣＸポリペプ
チドのどの領域が特に親水性であり、そしてそれ故、抗体産生を標的にするため
に有用な表面残基をコードするようであることを示す。抗体産生を標的にする手
段として、親水性および疎水性の領域を示すヒドロパシープロットを、例えば、
フーリエ変換とともにまたはなしの、Ｋｙｔｅ ＤｏｏｌｉｔｔｌｅまたはＨｏ
ｐｐ Ｗｏｏｄｓ法を含む、当該分野で周知の任意の方法により生成し得る。例
えば、それらの全体が本明細書に参考として援用される、ＨｏｐｐおよびＷｏｏ
ｄｓ、１９８１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：３８２
４−３８２８；ＫｙｔｅおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ １９８２、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂ
ｉｏｌ．１５７：１０５−１４２を参照のこと。

【０１５７】 本明細書で開示されるように、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、
１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、７５，７７、７９および８１、そ
れに加えて３０および３２のＳＥＣＸタンパク質配列、またはその誘導体、フラ
グメント、アナログもしくは相同体を、これらのタンパク質成分に免疫特異的に
結合する抗体の生成における免疫原として利用し得る。本明細書で用いる用語「
抗体」は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な
部分、すなわち、ＳＥＣＸのような抗原に特異的に結合（免疫反応）する抗原結
合部位を含む分子をいう。このような抗体は、制限されずに、ポリクローナル抗
体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、ＦａｂおよびＦ_(ab')2フラグ
メント、およびＦ_ab発現ライブラリーを含む。特定の実施形態では、ヒトＳＥＣ
Ｘタンパク質に対する抗体が開示される。当該分野で公知の種々の手順が、ＳＥ
ＣＸタンパク質配列、またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくは相同
体に対するポリクローナルまたはモノクローナル抗体の産生のために用いられ得
る。これらのタンパク質のいくつかを以下で論議する。

【０１５８】 ポリクローナル抗体の産生のために、種々の適切な宿主動物（例えば、ウサギ
、ヤギ、マウスまたはその他の哺乳動物）を、ネイティプタンパク質、またはそ
の合成改変体、または前述の誘導体での注射により免疫化し得る。適切な免疫原
調製物は、例えば、組換えにより発現されたＳＥＣＸタンパク質または化学的に
合成されたポリペプチドを含有し得る。この調製物は、アジュバントをさらに含
み得る。免疫学的応答を増大するために用いられる種々のアジュバントは、制限
されずに、フロイントの完全および不完全アジュバント、ミネラルゲル（例えば
、水酸化アルミニウム）、表面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニック
ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン、ジニトロフェノー
ルなど）、Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−ＧｕｅｒｉｎおよびＣｏｒｙｎ
ｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍのようなヒトアジュバント、または類似の
免疫刺激剤を含む。所望であれば、ＳＥＣＸに対して惹起された抗体分子は、哺
乳動物（例えば、血液）から単離され、そしてさらに、ＩｇＧフラクションを得
るためのプロテインＡクロマトグラフィーのような、周知の技法により精製され
得る。

【０１５９】 本明細書で用いられる用語「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗
体組成物」は、ＳＥＣＸの特定のエピトープと免疫反応し得る抗原結合部位の特
定の１種のみを含む抗体分子の集団をいう。従って、代表的には、モノクローナ
ル抗体組成物は、それと免疫反応する特定のＳＥＣＸタンパク質に対し、単一の
結合親和性を示す。特定のＳＥＣＸタンパク質配列、またはその誘導体、フラグ
メント、アナログもしくは相同体に対して惹起されたモノクローナル抗体の調製
には、連続的な細胞株培養による抗体分子の産生のために提供する任意の技法が
利用され得る。このような技法は、制限されずに、ハイブリドーマ技法（Ｋｏｈ
ｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５ Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７
を参照のこと）；トリオーマ技法；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（Ｋｏｚｂｏ
ｒら、１９８３ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ４：７２）およびヒトモノクロ
ーナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技法（Ｃｏｌｅら、１９８５
ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨ
ＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．７７−９６頁を参照のこと）を
含む。ヒトモノクローナル抗体を、本発明の実施において利用し得、そしてヒト
ハイブリドーマを用いることによるか（Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ Ｎａ
ｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８０：２０２６−２０３０を参照のこと）、
またはインビトロでヒトＢ細胞をエプスタイン−バーウイルスで形質転換するこ
とにより（Ｃｏｔｅら、１９８５ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥ
Ｓ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ
．７７−９６頁を参照のこと）産生され得る。上記の引用の各々は、それらの全
体が参考として本明細書に援用される。

【０１６０】 本発明によれば、技法は、ＳＥＣＸタンパク質に特異的な単鎖抗体の産生のた
めに適合され得る（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号を参照のこと）。
さらに、方法は、Ｆ_ab発現ライブラリーの構築のために適合され得（例えば、Ｈ
ｕｓｅら、１９８９ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１を参照のこ
と）、ＳＥＣＸタンパク質配列、またはその誘導体、フラグメント、アナログも
しくは相同体に対し、所望の特異性を有するモノクローナルＦ_abフラグメントの
迅速かつ有効な同定を可能にする。非ヒト抗体は、当該分野で周知の技法により
「ヒト化」され得る。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号を参照のこと。
ＳＥＣＸタンパク質に対するイディオタイプを含む抗体フラグメントを、当該分
野で公知の技法により産生し得、これには、制限されないで：（ｉ）抗体分子の
ペプシン消化により産生されるＦ_(ab')2フラグメント；（ｉｉ）Ｆ_(ab')2フラグ
メントのジスルフィド架橋を還元することにより生成されるＦ_abフラグメント；
（ｉｉｉ）抗体分子のパパインおよび還元剤での処理により生成されるＦ_abフラ
グメントおよび（ｉｖ）Ｆ_vフラグメントが含まれる。

【０１６１】 さらに、ヒトおよび非ヒト部分の両方を含むキメラ抗体およびヒト化モノクロ
ーナル抗体のような、組換え抗ＳＥＣＸ抗体（これらは、標準組換えＤＮＡ技術
を用いて作製され得る）は、本発明の範囲内である。このようなキメラ抗体およ
びヒト化モノクローナル抗体は、当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術により生成
され得る。この技術は例えば、以下に記載の方法を用いる：国際出願番号ＰＣＴ
／ＵＳ８６／０２２６９；欧州特許出願番号１８４，１８７号；欧州特許出願番
号１７１，４９６；欧州特許出願番号１７３、４９４；ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ
８６／０１５３３；米国特許第４，８１６，５６７号；米国特許第５，２２５
，５３９号；欧州特許出願番号１２５，０２３号；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１〜１０４３；Ｌｉｕら（１９８７）ＰＮＡＳ
８４：３４３９〜３４４３；Ｌｉｕら（１９８７）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３
９：３５２１〜３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）ＰＮＡＳ ８４：２１４〜２１
８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら（１９８７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ４７：９９９〜
１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６〜４４９；Ｓ
ｈａｗら（１９８８）Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ ８０：１５５３
〜１５５９）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０
２〜１２０７；Ｏｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；
Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２〜５２５；Ｖｅｒｈｏ
ｅｙａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；ならびにＢｅｉｄ
ｌｅｒら（１９８８）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４１：４０５３〜４０６０。上記
引用の各々は、それらの全体において参考として本明細書中に援用される。

【０１６２】 １つの実施形態において、所望の特異性を保有する抗体のスクリーニングのた
めの方法論は、当該分野内で公知の酵素結合抗体免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ
）および他の免疫学的に媒介された技術を含むが、これに限定されない。特定の
実施形態において、ＳＥＣＸタンパク質の特定のドメインに対して特異的である
抗体の選抜は、このようなドメインを所有しているＳＥＣＸタンパク質のフラグ
メントに結合するハイブリドーマの生成により容易にされる。ＳＥＣＸタンパク
質、またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログ内の上記ド
メインについて特異的である抗体がまた、本願明細書において提供される。

【０１６３】 抗ＳＥＣＸ抗体は、ＳＥＣＸタンパク質の局在化および／または定量化に関す
る当該分野で公知の方法において用いられ得る（例えば、適切な生理学的なサン
プル内のＳＥＣＸタンパク質のレベルを測定する使用のために、診断的方法にお
ける使用のために、タンパク質の画像化における使用のために、など）。所定の
実施形態において、ＳＥＣＸタンパク質、またはそれらの誘導体、フラグメント
、アナログまたはホモログの抗体（抗体由来の結合ドメインを含む）は、薬理学
的に活性な化合物［本明細書中、以降において「治療剤」］として利用される。

【０１６４】 抗ＳＥＣＸ抗体（例えば、モノクローナル抗体）は、標準技術（例えばアフィ
ニティークロマトグラフィまたは免疫沈降）によって、ＳＥＣＸを単離するため
に用いられ得る。抗ＳＥＣＸ抗体は、細胞からの天然のＳＥＣＸ、そして宿主細
胞において発現される組換え的に産生されたＳＥＣＸの精製を容易にし得る。さ
らに、抗ＳＥＣＸ抗体が、（例えば、細胞の溶菌液または細胞上清における）Ｓ
ＥＣＸタンパク質を検出するために用いられ、ＳＥＣＸタンパク質の発現の量お
よびパターンを評価し得る。抗ＳＥＣＸ抗体は、例えば、所定の治療レジメンの
有効性を決定するために、臨床試験の手順の一部として組織におけるタンパク質
レベルを診断的にモニターするために用いられ得る。検出は、抗体を検出可能物
質に連結する（すなわち、物理的に連結する）ことにより容易になり得る。検出
可能物質の例としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光材料、生物発
光材料および放射性物質が挙げられる。適切な酵素の例としては、西洋ワサビペ
ルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチ
ルコリンエステラーゼが挙げられる；適切な補欠分子族複合体の例としては、ス
トレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる；適切な蛍
光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソ
チオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミン（ｄｉｃｈｌｏｒｏ
ｔｒｉａｚｉｎｙｌａｍｉｎｅ）フルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィ
コエリトリンが挙げられる；発光材料の例としては、ルミノールが挙げられる；
生物発光材料の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが
挙げられる；そして、適切な放射性物質の例としては¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、³⁵Ｓまたは ³ Ｈが挙げられる。

【０１６５】 （ＳＥＣＸ組換え発現ベクターおよび宿主細胞） 本発明の別の局面は、ＳＥＣＸタンパク質、またはそれらの誘導体、フラグメ
ント、アナログもしくはホモログをコードする核酸を含む、ベクター、好ましく
は、発現ベクターに関する。本明細書において使用する場合、用語「ベクター」
は、それに連結された別の核酸を輸送し得る核酸分子をいう。１つの型のベクタ
ーは、「プラスミド」である。これはさらなるＤＮＡセグメントが連結され得る
環状の二本鎖ＤＮＡループをいう。他の型のベクターは、ウイルス性ベクターで
あり、ここでさらなるＤＮＡセグメントが、ウイルスゲノムに連結され得る。特
定のベクターは、ベクターが導入される宿主細胞中で自律複製し得る（例えば、
細菌性の複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム性哺乳動物ベクター
）。他のベクター（例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター）は、宿主細胞へ
の導入の際、宿主細胞のゲノムに組み込まれ、そして、これにより宿主ゲノムと
ともに複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結される
遺伝子の発現を導き得る。このようなベクターは、本明細書において「発現ベク
ター」と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術における有用な発現ベクターは、
しばしばプラスミドの形態である。本願明細書において、「プラスミド」および
「ベクター」は、プラスミドが最も一般的に用いられる形態のベクターであるの
で、交換可能に使用され得る。しかし、本発明は、等価の機能を果たす、ウイル
ス性ベクター（例えば、複製欠損レトロウィルス、アデノウィルス、およびアデ
ノ随伴ウィルス）のような、このような他の形態の発現ベクターを含むことを意
図する。

【０１６６】 本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における核酸の発現に適切な形態の
本発明の核酸を含む。これは、組換え発現ベクターが、発現されるべき核酸配列
に作動可能に連結されている、発現に用いられるべき宿主細胞に基づいて選択さ
れる、１つ以上の調節配列を含むことを意味する。組換え発現ベクター内で、「
作動可能に連結する」とは、目的のヌクレオチド配列が、（例えば、インビトロ
の転写／翻訳系において、またはベクターが宿主細胞に導入される場合は、宿主
細胞において）ヌクレオチド配列の発現を可能にする様式で調節配列に連結され
るという意味を意図する。用語「調節配列」は、プロモーター、エンハンサーお
よび他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことを
意図する。このような調節配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；ＧＥＮＥ ＥＸＰ
ＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯ
ＬＯＧＹ １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａ
ｌｉｆ．（１９９０）に記載されている。調節配列は、多くの型の宿主細胞にお
いてヌクレオチド配列の構成的発現を指向する配列、および特定の宿主細胞のみ
においてヌクレオチド配列の発現を指向する配列（例えば、組織特異的調節配列
）を含む。発現ベクターの設計が形質転換されるべき宿主細胞の選択、所望のタ
ンパク質の発現のレベルなどのような因子に依存し得ることは当業者には明白で
ある。本発明の発現ベクターは、宿主細胞に導入され得、それにより、本明細書
に記載される核酸によりコードされるタンパク質またはペプチド（融合タンパク
質またはペプチドを含む）（例えば、ＳＥＣＸタンパク質、またはＳＥＣＸの変
異形態、融合タンパク質など）を生成し得る。

【０１６７】 本発明の組換え発現ベクターは、原核生物細胞または真核生物細胞における、
ＳＥＣＸ発現のために設計され得る。例えば、ＳＥＣＸは、細菌細胞（例えば、
Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを用いる）、酵母細
胞または哺乳動物細胞において発現され得る。適切な宿主細胞は、Ｇｏｅｄｄｅ
ｌ；ＧＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ
ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ １８５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａ
ｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．（１９９０）にさらに考察されている。あるいは
、組換え型発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列およびＴ７ポリ
メラーゼを用いて、インビトロで転写および翻訳され得る。

【０１６８】 原核生物におけるタンパク質の発現は、最も頻繁には、融合タンパク質または
非融合タンパク質のいずれかの発現を指向する構成的プロモーターまたは誘導性
プロモーターを含むベクターを有するＥ．ｃｏｌｉにおいて実行される。融合ベ
クターは、そこにコードされるタンパク質に、通常、組換えタンパク質のアミノ
末端に、多数のアミノ酸を付加する。このような融合ベクターは、代表的には、
以下の３つの目的のために役立つ：（１）組換えタンパク質の発現を増加させる
こと；（２）組換えタンパク質の可溶性を増加させること；および（３）アフィ
ニティー精製においてリガンドとして作用することによって組換えタンパク質の
精製の際に補助すること。しばしば、融合発現ベクターにおいて、タンパク質分
解の切断部位が、融合部分の結合部に導入され、そしてこの組換えタンパク質に
より、融合タンパク質の精製の後に融合部分から組換えタンパク質を分離するこ
とが可能になる。このような酵素、およびその同族の認識配列は、第Ｘａ因子、
トロンビン、およびエンテロキナーゼを含む。代表的な融合発現ベクターとして
は、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合タンパ
ク質、またはプロテインＡを、それぞれ、標的の組換えタンパク質に融合するｐ
ＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．；Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ
Ｊｏｈｎｓｏｎ（１９８８）Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０）、ｐＭＡＬ（Ｎｅ
ｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｂｅｖｅｒｌｙ，Ｍａｓｓ．）およびｐ
ＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．）が挙げられ
る。

【０１６９】 適切な誘導性非融合Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターの例には、ｐＴｒｃ（Ａｍｒａ
ｎｎら（１９８８）Ｇｅｎｅ ６９：３０１−３１５）およびｐＥＴ １１ｄ（
Ｓｔｕｄｉｅｒら、ＧＥＮＥ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：
ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）６０−８９）が挙げ
られる。

【０１７０】 Ｅ．ｃｏｌｉにおける組換えタンパク質発現を最大化するための１つのストラ
テジーは、組換えタンパク質をタンパク質分解的に切断する能力が損なわれた宿
主細菌中でタンパク質を発現することである。Ｇｏｔｔｅｓｍａｎ，ＧＥＮＥ
ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ：ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＥＮＺ
ＹＭＯＬＯＧＹ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ
，Ｃａｌｉｆ．（１９９０）１１９−１２８を参照のこと。別のストラテジーは
、各アミノ酸についての個々のコドンが、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて優先的に利用さ
れるコドンであるように発現ベクターに挿入される核酸の核酸配列を変更するこ
とである（Ｗａｄａら（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０
：２１１１−２１１８）。本発明のこのような核酸配列の変更は、標準的なＤＮ
Ａ合成技術によって実行され得る。

【０１７１】 別の実施形態において、ＳＥＣＸ発現ベクターは、酵母発現ベクターである。
酵母Ｓ．ｃｅｒｉｖｉｓａｅにおける発現のためのベクターの例には、ｐＹｅｐ
Ｓｅｃ１（Ｂａｌｄａｒｉら、（１９８７）ＥＭＢＯ Ｊ ６：２２９−２３４
）、ｐＭＦａ（ＫｕｒｊａｎおよびＨｅｒｓｋｏｗｉｔｚ、（１９８２）Ｃｅｌ
ｌ ３０：９３３−９４３）、ｐＪＲＹ８８（Ｓｃｈｕｌｔｚら、（１９８７）
Ｇｅｎｅ ５４：１１３−１２３）、ｐＹＥＳ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏ
ｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）、およびｐｉｃＺ（
ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）が挙
げられる。

【０１７２】 あるいは、ＳＥＣＸは、バキュロウイルス発現ベクターを使用して、昆虫細胞
中で発現され得る。培養昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）中でのタンパク質の発
現のために利用可能なバキュロウイルスベクターには、ｐＡｃシリーズ（Ｓｍｉ
ｔｈら（１９８３）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ３：２１５６−２１６５）お
よびｐＶＬシリーズ（ＬｕｃｋｌｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８９）Ｖｉｒ
ｏｌｏｇｙ １７０：３１−３９）が挙げられる。

【０１７３】 なお別の実施形態において、本発明の核酸は、哺乳動物発現ベクターを使用し
て、哺乳動物細胞中で発現される。哺乳動物発現ベクターの例には、ｐＣＤＭ８
（Ｓｅｅｄ（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ ３２９：８４０）およびｐＭＴ２ＰＣ（
Ｋａｕｆｍａｎら（１９８７）ＥＭＢＯ Ｊ ６：１８７−１９５）が挙げられ
る。哺乳動物細胞中で使用される場合、発現ベクターの制御機能は、しばしば、
ウイルスの調節エレメントによって提供される。例えば、一般に使用されるプロ
モーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、およびシ
ミアンウイルス４０に由来する。原核生物細胞および真核生物細胞の両方のため
の他の適切な発現系については、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、ＭＯＬＥＣＵＬ
ＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐ
ｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９の第１６章および第１７章を参照
のこと。

【０１７４】 別の実施形態において、組換え哺乳動物発現ベクターは、特定の細胞型（例え
ば、組織特異的調節エレメントを使用して核酸を発現する）中で優先的に核酸の
発現を指向し得る。組織特異的調節エレメントは、当該分野で公知である。適切
な組織特異的なプロモーターの非限定的な例には、アルブミンプロモーター（肝
臓特異的；Ｐｉｎｋｅｒｔら（１９８７）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ １：２６８−２
７７）、リンパ特異的プロモーター（ＣａｌａｍｅおよびＥａｔｏｎ（１９８８
）Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４３：２３５−２７５）、Ｔ細胞レセプターの特定
のプロモーターにおいて（ＷｉｎｏｔｏおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８９）
ＥＭＢＯ Ｊ ８：７２９−７３３）および免疫グロブリンの特定のプロモータ
ーにおいて（Ｂａｎｅｒｊｉら（１９８３）Ｃｅｌｌ ３３：７２９−７４０；
ＱｕｅｅｎおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ（１９８３）Ｃｅｌｌ ３３：７４１−７
４８）、ニューロン特異的プロモーター（例えば、ニューロフィラメントプロモ
ーター；ＢｙｒｎｅおよびＲｕｄｄｌｅ（１９８９）ＰＮＡＳ ８６：５４７３
−５４７７）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄら（１９８５）Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２３０：９１２−９１６）、ならびに乳腺特異的プロモーター（例えば
、ミルク乳清プロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号および欧州出願公
開第２６４，１６６号）が挙げられる。発生的に調節されるプロモーターもまた
含まれる（例えば、マウスホックス（ｍｕｒｉｎｅ ｈｏｘ）プロモーター（Ｋ
ｅｓｓｅｌおよびＧｒｕｓｓ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３７４−３
７９）およびａ−フェトプロテインプロモーター（ＣａｍｐｅｓおよびＴｉｌｇ
ｈｍａｎ（１９８９）Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ ３：５３７−５４６）。

【０１７５】 本発明はさらに、アンチセンス方向で発現ベクターにクローニングされた本発
明のＤＮＡ分子を含む組換え発現ベクターを提供する。すなわち、そのＤＮＡ分
子は、ＳＥＣＸ ｍＲＮＡに対するアンチセンスであるＲＮＡ分子の発現（ＤＮ
Ａ分子の転写によって）を可能にする様式で調節配列に作動可能に連結される。
調節配列は、種々の細胞型においてアンチセンスＲＮＡ分子の連続的な発現を指
向する、アンチセンス方向でクローニングされた核酸に作動可能に連結される調
節配列（ウイルスプロモーターおよび／もしくはエンハンサー）が選択され得る
か、または例えば、アンチセンスＲＮＡの構成的発現、組織特異的発現、または
細胞特異的発現を指向する調節配列が、選択され得る。アンチセンス発現ベクタ
ーは、組換えプラスミド、ファージミド、または弱毒化されたウイルスの形態で
あり得、ここではアンチセンス核酸は、高効率調節領域の制御下で産生され、そ
の活性は、ベクターが導入される細胞型によって決定され得る。アンチセンス遺
伝子を使用する遺伝子発現の調節の議論については、Ｗｅｉｎｔｒａｕｂら、「
Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｓ ａ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｏｏｌ ｆｏ
ｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ」、Ｒｅｖｉｅｗｓ−−Ｔｒｅｎｄｓ
ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、第１巻（１）１９８６を参照のこと。

【０１７６】 本発明の別の局面は、本発明の組換え発現べクターが導入された宿主細胞に関
する。用語「宿主細胞」および「組換え宿主細胞」は、本明細書中で、交換可能
に使用される。このような用語は、特定の対象の細胞をいうのみでなく、そのよ
うな細胞の子孫または潜在的な子孫をいうことが理解される。変異または環境的
影響のいずれかに起因して、特定の改変が次の世代において生じ得るので、この
ような子孫は、実際、親の細胞と同一でないかもしれないが、なお、本明細書中
で使用されるような用語の範囲内に含まれる。

【０１７７】 宿主細胞は、任意の原核生物細胞または真核生物細胞であり得る。例えば、Ｓ
ＥＣＸタンパク質は、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、昆虫細胞、酵母また
は哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）またはＣ
ＯＳ細胞）で発現され得る。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。

【０１７８】 ベクターＤＮＡは、従来的な形質転換またはトランスフェクション技術を介し
て原核生物細胞または真核生物細胞に導入され得る。本明細書中で使用される場
合、用語「形質転換」および「トランスフェクション」とは、外来性の核酸（例
えば、ＤＮＡ）を宿主細胞に導入するための当該分野で認識される種々の技術を
いうことを意図し、これらには、リン酸カルシウムまたは塩化カルシウム共沈殿
、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、または
エレクトロポレーションが含まれる。宿主細胞を形質転換またはトランスフェク
ションするための適切な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ Ｃ
ＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ．第２版、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）および他の実験室マニュアルに見出され
得る。

【０１７９】 安定な哺乳動物細胞のトランスフェクションのために、使用される発現ベクタ
ーおよびトランスフェクション技術に依存して、細胞のほんの一部のみが外来Ｄ
ＮＡをそのゲノムに組み込み得ることが知られている。これらの要素を同定およ
び選択するために、選択マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードす
る遺伝子が、一般的には目的の遺伝子とともに宿主細胞に導入される。種々の選
択マーカーには、薬物（例えば、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、およびメトトレ
キサート）に対する耐性を付与するものが含まれる。選択マーカーをコードする
核酸は、ＳＥＣＸをコードするベクターと同じベクター上で宿主細胞に導入され
得るか、あるいは別々のベクター上で導入され得る。導入された核酸で安定にト
ランスフェクトされた細胞は、薬物選択によって同定され得る（例えば、選択マ
ーカー遺伝子を取り込んだ細胞は生存し、一方他の細胞は死滅する）。

【０１８０】 本発明の宿主細胞（例えば、培養中の原核生物宿主細胞および真核生物宿主細
胞）は、ＳＥＣＸタンパク質を産生（すなわち、発現）するために使用され得る
。従って、本発明はさらに、本発明の宿主細胞を使用して、ＳＥＣＸタンパク質
を産生するための方法を提供する。１つの実施形態において、本発明の方法は、
ＳＥＣＸタンパク質が産生されるような適切な培地中で、本発明の宿主細胞（こ
こに、ＳＥＣＸをコードする組換え発現ベクターが導入された）を培養する工程
を包含する。別の実施形態において、本発明はさらに、培地または宿主細胞から
ＳＥＣＸを単離する工程を包含する。

【０１８１】 （トランスジェニック動物） 本発明の宿主細胞はまた、非ヒトトランスジェニック動物を作製するために使
用され得る。例えば、１つの実施形態において、本発明の宿主細胞は、ＳＥＣＸ
コード配列が導入された、受精した卵母細胞または胚性幹細胞である。次いで、
このような宿主細胞は、外因性のＳＥＣＸ配列がそのゲノムに導入された非ヒト
トランスジェニック動物、または内因性のＳＥＣＸ配列が変更された相同組換え
動物を作製するために使用され得る。このような動物は、ＳＥＣＸの機能および
／または活性を研究するため、ならびにＳＥＣＸ活性のモジュレーターを同定お
よび／または評価するために有用である。本明細書中で使用される場合、「トラ
ンスジェニック動物」とは、非ヒト動物であり、好ましくは哺乳動物であり、よ
り好ましくは、ラットまたはマウスのような齧歯類であり、その動物の１つ以上
の細胞が、導入遺伝子を含む。トランスジェニック動物の他の例としては、非ヒ
ト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ヤギ、ニワトリ、両生類などが挙げられる。導
入遺伝子は、細胞（この細胞からトランスジェニック動物が発生する）のゲノム
に組み込まれかつ成熟動物のゲノムに残存する、外因性のＤＮＡであり、それに
よって、トランスジェニック動物の１つ以上の細胞型または組織においてコード
された遺伝子産物の発現を指示する。本明細書中で使用される場合、「相同組換
え動物」とは、非ヒト動物であり、好ましくは哺乳動物であり、より好ましくは
マウスであり、ここで内因性のＳＥＣＸ遺伝子は、内因性の遺伝子と、その動物
の発生の前にその動物の細胞（例えば、その動物の胚細胞）に導入された外因性
のＤＮＡ分子との間の相同組換えによって変更されている。

【０１８２】 本発明のトランスジェニック動物は、ＳＥＣＸをコードする核酸を、例えば、
マイクロインジェクション、レトロウイルス感染によって、受精した卵母細胞の
雄性前核に導入すること、および卵母細胞が偽妊娠した雌性養育動物（ｆｏｓｔ
ｅｒ ａｎｉｍａｌ）中で発生することを可能にすることによって作製され得る
。ヒトのＳＥＣＸ ｃＤＮＡは、非ヒト動物のゲノムに導入遺伝子として導入さ
れ得る。あるいは、ヒトのＳＥＣＸ遺伝子の非ヒトホモログ（例えば、マウスの
ＳＥＣＸ遺伝子）は、ヒトのＳＥＣＸ ｃＤＮＡに対するハイブリダイゼーショ
ンに基づいて単離され得（以下にさらに記載される）、そして導入遺伝子として
使用され得る。イントロン配列およびポリアデニル化シグナルもまた導入遺伝子
中に含まれ得、その導入遺伝子の発現の効率を増大させ得る。組織特異的調節配
列（単数または複数）は、特定の細胞に対して、ＳＥＣＸタンパク質の発現を指
示するように、ＳＥＣＸ導入遺伝子に作動可能に連結される。胚の操作およびマ
イクロインジェクションを介するトランスジェニック動物（特に、マウスのよう
な動物）を生成するための方法は、当該分野で慣習的になっており、そして例え
ば、米国特許第４，７３６，８６６号；同第４，８７０，００９号；および同第
４，８７３，１９１号；ならびにＨｏｇａｎ １９８６、ＭＡＮＩＰＵＬＡＴＩ
ＮＧ ＴＨＥ ＭＯＵＳＥ ＥＭＢＲＹＯ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ
ｏｒ，Ｎ．Ｙ．に記載されている。同様の方法は、他のトランスジェニック動物
の作製のために使用される。トランスジェニック初代（ｆｏｕｎｄｅｒ）動物は
、そのゲノムにおけるＳＥＣＸ導入遺伝子の存在および／またはその動物の組織
または細胞中のＳＥＣＸ ｍＲＮＡの発現に基づいて同定され得る。次いで、ト
ランスジェニック初代動物は、導入遺伝子を有するさらなる動物を繁殖させるた
めに使用され得る。さらに、ＳＥＣＸをコードする導入遺伝子を有するトランス
ジェニック動物は、さらに、他の導入遺伝子を有する他のトランスジェニック動
物に繁殖させ得る。

【０１８３】 相同組換え動物を作製するために、ＳＥＣＸ遺伝子の少なくとも一部を含むベ
クターを調製する。この遺伝子において、欠失、付加、または置換が導入されて
、それによってそのＳＥＣＸ遺伝子が変化されている（例えば、機能的に破壊さ
れる）。ＳＥＣＸ遺伝子はヒト遺伝子（例えば、配列番号１、３、５、７、９、
１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、７４、７６、７８お
よび８０、ならびに２９および３１のｃＤＮＡ）であり得るが、より好ましくは
、ヒトのＳＥＣＸ遺伝子の非ヒトホモログである。例えば、配列番号２９のヒト
のＳＥＣＸ遺伝子のマウスホモログは、マウスゲノムにおいて内因性のＳＥＣＸ
遺伝子を変更するのに適切な相同組換えベクターを構築するために使用され得る
。１つの実施形態において、そのベクターは、相同組換えに際して、その内因性
のＳＥＣＸ遺伝子が、機能的に破壊されるように設計される（すなわち、機能的
タンパク質をもはやコードしない；「ノックアウト」ベクターともいわれる）。

【０１８４】 あるいは、このベクターは、相同組換えに対して、内因性ＳＥＣＸ遺伝子が変
異されるか、あるいはさもなければ、変更されるが、なお機能性タンパク質をコ
ードするように、設計され得る（例えば、上流の調節領域が変更され、それによ
って内因性ＳＥＣＸタンパク質の発現を変更し得る）。相同組換えベクターにお
いて、ＳＥＣＸ遺伝子の変更された部分は、ＳＥＣＸ遺伝子のさらなる核酸によ
って、その５’末端および３’末端で隣接され、相同組換えが、ベクターによっ
て保有される外因性ＳＥＣＸ遺伝子と胚幹細胞中の内因性ＳＥＣＸ遺伝子との間
で起こることを可能にする。さらなる隣接するＳＥＣＸ核酸は、内因性遺伝子と
の首尾よい相同組換えのために十分な長さである。典型的に、数キロベースの隣
接するＤＮＡ（５’末端および３’末端の両方における）が、ベクターに含まれ
る。例えば、相同組換えベクターの記述についてＴｈｏｍａｓら（１９８７）Ｃ
ｅｌｌ ５１：５０３を参照のこと。このベクターは、（例えば、エレクトロポ
レーションによって）胚幹細胞株に導入され、導入されたＳＥＣＸ遺伝子が内因
性ＳＥＣＸ遺伝子と相同組換えした細胞が、選択される（例えば、Ｌｉら（１９
９２）Ｃｅｌｌ ６９：９１５を参照のこと）。

【０１８５】 次いで、選択された細胞が、動物（例えば、マウス）の胚盤胞へ注入され、凝
集キメラを形成する。例えば、Ｂｒａｄｌｅｙ（１９８７）のＴｅｒａｔｏｃａ
ｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ
Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ編、ＩＲＬ、Ｏｘ
ｆｏｒｄ、１１３頁〜１５２頁を参照のこと。次いで、キメラ胚が、適切な偽妊
娠雌性養育動物に移植され得、そしてその胚は分娩に到る。その生殖細胞中に相
同組換えされたＤＮＡを保有する子孫が、動物を繁殖させるために使用され得、
この動物の全ての細胞は、導入遺伝子の生殖系列伝達による、相同組換えされた
ＤＮＡを含む。相同組換えベクターおよび相同組換え動物を構築するための方法
が、さらに以下に記載される；Ｂｒａｄｌｅｙ（１９９１）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２：８２３−８２９；ＰＣＴ国際公開番号：ＷＯ９０
／１１３５４；ＷＯ９１／０１１４０；ＷＯ９２／０９６８；およびＷＯ／９３
／０４１６９。

【０１８６】 別の実施形態において、導入遺伝子の調節された発現を可能にする選択された
系を含む非ヒトトランスジェニック動物が産生され得る。このような系の１つの
例は、バクテリオファージＰ１のｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系である。ｃ
ｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系の記述については、例えば、Ｌａｋｓｏら（１
９９２）ＰＮＡＳ ８９：６２３２−６２３６を参照のこと。リコンビナーゼ系
の別の例は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰリコ
ンビナーゼ系である（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１
：１３５１−１３５５）。ｃｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系が導入遺伝子の発
現を調節するために使用される場合、Ｃｒｅリコンビナーゼおよび選択されたタ
ンパク質の両方をコードする導入遺伝子を含む動物が必要となる。このような動
物は、例えば、２種のトランスジェニック動物（一方は選択されたタンパク質を
コードした導入遺伝子を含み、他方はリコンビナーゼをコードした導入遺伝子を
含む）を交配することによる「二重の」トランスジェニック動物の構築によって
提供され得る。

【０１８７】 本明細書中に記載されるトランスジェニック非ヒト動物のクローンがまた、Ｗ
ｉｌｍｕｔら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ ３８５：８１０−８１３に記載される
方法に従って、産生され得る。簡単には、トランスジェニック動物からの細胞（
例えば、体細胞）は単離および誘導される、増殖サイクルから出、そしてＧ₀フ
ェイズに入り得る。次いで、静止性細胞が、例えば、電気パルスの使用により、
その静止性細胞が単離される同種の動物から摘出された卵母細胞へ融合され得る
。次いで、この再構築された卵母細胞は培養され、これにより、これは桑実胚ま
たは未分化胚芽細胞に発達し、次いで、偽妊娠雌性養育動物に移される。この雌
性養育動物から産まれた子孫は、その細胞（例えば、その体細胞）が単離された
動物のクローンである。

【０１８８】 （薬学的組成物） 本発明のＳＥＣＸ核酸分子、ＳＥＣＸタンパク質、および抗ＳＥＣＸ抗体（こ
れはまた、本明細書中で、「活性な化合物」とも呼ばれる）、ならびにそれらの
誘導体、フラグメント、アナログ、および相同体が、投与に適した薬学的組成物
に組み込まれ得る。このような組成物は、典型的に、核酸分子、タンパク質また
は抗体、および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書中で使用される場
合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、薬学的な投与に適合した、任意および
全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収
遅延剤（ｄｅｌａｙｉｎｇ ａｇｅｎｔ）などを含むことが意図される。このよ
うなキャリアは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓ
ｃｉｅｎｃｅｓ（当該分野の標準的参考文献）（本明細書中に参考として援用さ
れる）の最新版に記載される。このようなキャリアまたは希釈剤の好ましい例と
しては、水、生理食塩水、ｆｉｎｇｅｒ溶液、デキストロース溶液、および５％
ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。リポソームおよび
非水性ビヒクル（例えば、不揮発性油）もまた、使用され得る。薬学的に活性な
物質におけるこのような媒体および薬剤の使用は、当該分野で周知である。任意
の従来の媒体または薬剤が活性な化合物と不適合である範囲を除いて、組成物に
おけるその使用が考慮される。補助活性化合物はまた、組成物へ組み込まれ得る
。

【０１８９】 本発明の薬学的組成物は、その意図される投与の経路と適合するように処方さ
れる。投与の経路の例には、非経口（例えば、静脈、皮内、皮下）投与、経口（
例えば、吸入）投与、経皮（局所的）投与、経粘膜（ｔｒａｎｓｍｕｃｏｓａｌ
）投与、および直腸投与が挙げられる。非経口適用、皮内適用または皮下適用の
ために使用される溶液または懸濁液は、以下の成分を含み得る：注射用水、生理
食塩水溶液、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレング
リコールまたは他の合成溶媒のような、滅菌希釈剤；ベンジルアルコールまたは
メチルパラベンのような、抗菌剤；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムの
ような、抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸のような、キレート剤；酢酸塩、ク
エン酸塩またはリン酸塩のような、緩衝液、および塩化ナトリウムまたはデキス
トロースのような、張度の調節のための薬剤。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリ
ウムのような酸または塩基で調整され得る。非経口調製物は、アンプル、使い捨
てシリンジ、あるいはガラスまたはプラスチックから作製される多用量のバイア
ル中に入れられ得る。

【０１９０】 注入使用に適した薬学的組成物は、滅菌水性溶液（ここで、水溶解性）または
分散液、および滅菌の注入可能な溶液または分散液の即座の調製のための滅菌粉
末を含む。静脈投与において、適切なキャリアには、生理食塩水、静菌水、Ｃｒ
ｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ^TM（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）または
リン酸塩緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、組成
物は、滅菌性でなければならず、そして容易な注入性（ｓｙｒｉｎｇａｂｉｌｉ
ｔｙ）が存在する程度に流動性であるべきである。これは、製造および保存の条
件下で安定でなければならず、そして、細菌および真菌のような微生物の汚染行
為に対して保護されるべきである。このキャリアは、例えば、以下を含む溶媒ま
たは分散媒であり得る：水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、
プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）ならびにそれ
らの適切な混合物。適切な流動性が、例えば、レシチンのようなコーティングの
使用によって、分散液の場合に、要求される粒子サイズを維持することによって
、および界面活性剤を使用することによって維持され得る。微生物の作用の防止
は、種々の抗菌剤および抗真菌剤（例えば、パラベン、クロロブタノール、フェ
ノール、アスコルビン酸、チメロサールなど）によって達成され得る。多くの場
合、組成物中に等張剤（例えば、砂糖、ポリアルコール（例えば、マンニトール
（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトール）塩化ナトリウム）を含むことが好ましい。
注入可能組成物の長時間吸収は、組成物に吸収を遅らせる薬剤（例えば、アルミ
ニウムモノステアレートおよびゼラチン）を含ませることによってもたらされ得
る。

【０１９１】 滅菌注射可能溶液は、必要量のこの活性化合物（例えば、ＳＥＣＸタンパク質
あるいは抗ＳＥＣＸ抗体））を、適切な溶媒中に、上記で列挙される成分の１つ
または組み合わせと共に組み込み、必要な場合、続いて濾過滅菌することによっ
て調製され得る。一般的に、分散液は、活性化合物を、塩基性分散媒および上記
で列挙される成分から必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクル中へ組み込むこ
とによって調製される。滅菌注射可能液剤の調製のための滅菌散剤の場合におい
て、調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥であり、これにより、活性成分および
既に滅菌濾過されたその液剤からの任意のさらなる所望の成分の散剤を得る。

【０１９２】 経口組成物は、一般的に、不活性希釈剤または食用キャリアを含む。これらは
、ゼラチンカプセルに封入され得るか、または錠剤へと圧縮され得る。経口治療
投与の目的のために、この活性化合物は、賦形剤とともに組み込まれ得、そして
錠剤、トローチ剤、またはカプセル剤の形態で使用され得る。経口組成物はまた
、マウスウォッシュとしての使用のために流体キャリアを使用して調製され得、
ここで、この流体キャリア中のこの化合物は、経口的に適用され、そしてさっと
動かされ、そして吐き出されるか、または飲み込まれる。薬学的に適合性の結合
剤、および／またはアジュバント材料が、この組成物の一部として含まれ得る。
錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などが、任意の以下の成分または同様の性
質を有する化合物を含み得る：結合剤（例えば、微結晶セルロース、ガムトラガ
ントまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）、崩壊剤
（例えば、アルギン酸）、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、またはコーンスターチ）；滑沢剤
（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓ）；滑り剤（ｇｌ
ｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味剤（例えば、スクロー
スまたはサッカリン）；あるいは香味剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メ
チル、またはオレンジフレーバー）。

【０１９３】 吸入による投与について、この化合物は、適切な噴霧剤（例えば、二酸化炭素
のような気体）を含む圧縮容器またはディスペンサー、あるいは噴霧器から、エ
アロゾル噴霧の形態で送達される。

【０１９４】 全身的投与はまた、経粘膜手段または経皮手段により得る。経粘膜投与または
経皮投与について、浸透される障壁に適切な浸透剤が、処方物において使用され
る。このような浸透剤は、一般的に、当該分野で公知であり、そして、例えば、
経粘膜投与については、界面活性剤、胆汁酸塩、およびフシジン酸誘導体が挙げ
られる。経粘膜投与は、鼻噴霧または坐剤の使用によって達成され得る。経皮投
与については、この活性化合物は、当該分野で一般的に公知である軟膏剤、軟膏
、ゲル、またはクリーム剤へ処方される。

【０１９５】 この化合物はまた、直腸送達のための坐剤（例えば、ココアバターおよび他の
グリセリドのような従来の坐剤ベースと共に）または貯留（ｒｅｎｔｅｎｔｉｏ
ｎ）浣腸の形態で調製され得る。

【０１９６】 １つの実施形態において、この活性化合物は、身体からの迅速な排出に対して
この化合物を保護するキャリアを用いて調製され（例えば、制御放出処方物）、
これには、移植片およびマイクロカプセル化された送達系が挙げられる。酢酸エ
チレンビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステ
ル、およびポリ乳酸のような、生分解性、生体適合性ポリマーが使用され得る。
このような処方物の調製のための方法は、当該業者には明らかである。これらの
材料はまた、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｎｏｖａ Ｐｈａｒ
ｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販され、手に入れることができる。リ
ポソーム懸濁剤（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を感染させた細胞へ
標的化されるリポソームを含む）がまた、薬学的に受容可能なキャリアとして使
用され得る。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるよ
うな、当業者に公知の方法に従って調製され得る。

【０１９７】 投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投薬単位形態で、経口組成物ま
たは非経口組成物を処方することが、特に有益である。本明細書で使用される投
薬単位形態は、処置される被験体のための単位投薬量として適切な物理的に個々
の単位をいい；各単位は、必要とされる薬学的キャリアと関連して所望の治療的
効果を生じるように計算された、所定量の活性化合物を含む。本発明の投薬単位
形態についての詳細は、この活性化合物、および達成される特定の治療効果、な
らびに個体の処置のためのこのような活性化合物を調合する当該分野に固有の制
限によって決定されるか、あるいはこれらに直接依存する。

【０１９８】 本発明の核酸分子は、ベクターに挿入され得、そして遺伝子治療ベクターとし
て使用され得る。遺伝子治療ベクターは、被験体へ、例えば静脈注射、局所投与
（米国特許第５，３２８，４７０号を参照のこと）によって、または定位注射（
例えば、Ｃｈｅｎら（１９９４）ＰＮＡＳ９１：３０５４−３０５７を参照のこ
と）によって送達され得る。遺伝子治療ベクターの薬学的調製物には、受容可能
な希釈剤中の遺伝子治療ベクターが挙げられ得、または遺伝子送達ビヒクルが組
み込まれる除放性マトリックスが挙げられ得る。あるいは、完全な遺伝子送達ベ
クターが組換え細胞からインタクトで産生され得（例えば、レトロウイルスベク
ター）、薬学的調製物は、遺伝子送達系を産生する１以上の細胞を含み得る。

【０１９９】 薬学的組成物は、投与のための使用説明書と共の容器、包装、またはディスペ
ンサーに含まれ得る。

【０２００】 （発明の使用および方法） 本明細書中で記載される核酸分子、タンパク質、タンパク質相同体、および抗
体は、細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインを含み、それ故、以下の１つ以上の
方法において使用され得る：（ａ）スクリーニングアッセイ；（ｂ）検出アッセ
イ（例えば、染色体マッピング、組織タイピング、法医学生物学）；（ｃ）予測
医学（例えば、診断アッセイ、予後アッセイ、臨床試験モニタリング、および薬
理ゲノミックス）；ならびに（ｄ）処置の方法（例えば、治療および予防）。Ｓ
ＥＣＸタンパク質は、他の細胞性タンパク質と相互作用し、従って、以下のため
に使用され得る：（ｉ）各タンパク質活性の調節；（ｉｉ）細胞増殖の制御；（
ｉｉｉ）細胞分化の制御；および（ｉｖ）細胞生存の制御。

【０２０１】 本発明の単離された核酸分子は、以下にさらに説明されるように、ＳＥＣＸタ
ンパク質（例えば、遺伝子治療用途における宿主細胞中の組換え発現ベクター）
を発現するため、ＳＥＣＸ ｍＲＮＡ（例えば、生物学的サンプルにおいて）ま
たはＳＥＣＸ遺伝子における遺伝子損傷を検出するため、ならびにＳＥＣＸ活性
を調節するために使用され得る。さらに、ＳＥＣＸタンパク質は、ＳＥＣＸ活性
または発現を調節する薬物または化合物をスクリーニングするために、ならびに
ＳＥＣＸタンパク質の不十分なもしくは過剰な産生によって、あるいはＳＥＣＸ
野生型タンパク質と比較して減少したもしくは異常な活性を有するＳＥＣＸタン
パク質形態の産生によって特徴付けられる障害（例えば、ガンまたはプレクラン
プシア（ｐｒｅｃｌａｍｐｓｉａ）のような増殖性障害あるいは上記１〜１４節
に記載される任意の疾患または障害）を処置するために使用され得る。さらに、
本発明の抗ＳＥＣＸ抗体が、ＳＥＣＸタンパク質を検出して単離するため、およ
びＳＥＣＸ活性を調節するために使用され得る。

【０２０２】 本発明は、さらに、上述のスクリーニングアッセイによって同定される新規の
薬剤、および本明細書中で記載されるような処置のためのそれらの使用に関する
。

【０２０３】 （スクリーニングアッセイ） 本発明は、調節因子、すなわち、ＳＥＣＸタンパク質に結合するか、あるいは
例えば、ＳＥＣＸの発現またはＳＥＣＸの活性に対して刺激効果または阻害効果
を有する、候補または試験化合物または薬剤（例えば、ペプチド、ペプチド模倣
物、小分子または他の薬物）を同定するための方法（本明細書中において「スク
リーニングアッセイ」とも称される）を提供する。

【０２０４】 １実施形態において、本発明は、ＳＥＣＸタンパク質またはポリペプチド、あ
るいはその生物学的に活性な部分の膜結合形態に結合するか、または膜結合形態
の活性を調節する、候補化合物もしくは試験化合物をスクリーニングするための
アッセイを提供する。本発明の試験化合物は、当該分野において公知のコンビナ
トリアルライブラリー法における多数のアプローチの任意のものを使用して得ら
れ得、これには、以下が挙げられる：生物学的ライブラリー；空間的にアクセス
可能な平行固相もしくは溶液相ライブラリー；逆重畳を要する合成ライブラリー
法；「１ビーズ１化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラ
フィー選択を使用する合成ライブラリー法。生物学的ライブラリーアプローチは
ペプチドライブラリーに限定されるが、他の４つのアプローチは、ペプチド、非
ペプチドオリゴマーもしくは化合物の小分子ライブラリーに適用可能である（Ｌ
ａｍ（１９９７）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ １２：１４５）。

【０２０５】 分子ライブラリーの合成のための方法の例は、当該分野において、例えば以下
に見出され得る：ＤｅＷｉｔｔら（１９９３）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ
Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６９０９；Ｅｒｂら（１９９４）Ｐｒｏｃ Ｎａｔ
ｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．９１：１１４２２；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ
ら（１９９４）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ３７：２６７８；Ｃｈｏら（１９９３）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１３０３；Ｃａｒｒｅｌｌら（１９９４）Ａｎｇｅｗ
Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ ３３：２０５９；Ｃａｒｅｌｌら（１９
９４）Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ ３３：２０６１；およ
びＧａｌｌｏｐら（１９９４）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ３７：１２３３。

【０２０６】 化合物のライブラリーは、溶液中で（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ（１９９２）
ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １３：４１２〜４２１）、あるいはビーズ上（Ｌ
ａｍ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５４：８２〜８４）、チップ上（Ｆｏｄｏｒ
（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６４：５５５〜５５６）、細菌（Ｌａｄｎｅｒ
米国特許第５，２２３，４０９号）、胞子（Ｌａｄｎｅｒ ＵＳＰ’４０９）、
プラスミド（Ｃｕｌｌら（１９９２）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ
ＵＳＡ ８９：１８６５〜１８６９）またはファージ上（ＳｃｏｔｔおよびＳｍ
ｉｔｈ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３８６〜３９０；Ｄｅｖｌｉｎ（
１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：４０４〜４０６；Ｃｗｉｒｌａら（１９９
０）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：６３７８〜６
３８２；Ｆｅｌｉｃｉ（１９９１）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２２：３０１〜３
１０；Ｌａｄｎｅｒ上記）において示され得る。

【０２０７】 １実施形態において、アッセイは細胞ベースのアッセイであり、ここで、ＳＥ
ＣＸタンパク質、またはその生物学的に活性な部分の膜結合形態を細胞表面上に
発現する細胞が、試験化合物と接触され、そしてこの試験化合物が、ＳＥＣＸタ
ンパク質に結合する能力が、決定される。例えば、細胞は、哺乳動物起源または
酵母細胞であり得る。この試験化合物がＳＥＣＸタンパク質に結合する能力の決
定は、例えば、その試験化合物を放射性同位体標識または酵素標識とカップリン
グさせて、この試験化合物のＳＥＣＸタンパク質またはその生物学的に活性な部
分に対する結合が複合体におけるその標識化合物を検出することによって検出さ
れ得ることによって、達成され得る。例えば、試験化合物は、¹²⁵Ｉ、³⁵Ｓ、¹⁴
Ｃ、または³Ｈで直接的または間接的のいずれかで標識され得、そしてその放射
性同位体が、放射線放射の直接の計数により、またはシンチレーション計数によ
り、検出され得る。あるいは、試験化合物は、例えば、西洋ワサビペルオキシダ
ーゼ、アルカリホスファターゼ、またはルシフェラーゼで酵素的に標識され得、
そしてこの酵素的標識が、適切な基質の生成物への転換を決定することにより、
検出され得る。１実施形態において、このアッセイは、ＳＥＣＸタンパク質、ま
たはその生物学的に活性な部分の膜結合形態をその細胞表面上に発現する細胞を
、ＳＥＣＸと結合する公知の化合物と接触させて、アッセイ混合物を形成する工
程、このアッセイ混合物を試験化合物に接触させる工程、ならびにこの試験化合
物がＳＥＣＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程を包含し、ここでこ
の試験化合物がＳＥＣＸタンパク質と相互作用する能力を決定する工程が、この
試験化合物がＳＥＣＸ、またはその生物学的に活性な部分と、公知の化合物と比
較して優先的に結合する能力を決定する工程を包含する。

【０２０８】 別の実施形態において、アッセイは、細胞ベースのアッセイであり、ＳＥＣＸ
タンパク質またはその生物学的に活性な部分の膜結合形態を細胞表面上で発現す
る細胞を、試験化合物と接触させる工程、ならびにこの試験化合物が、ＳＥＣＸ
タンパク質またはその生物学的に活性な部分の活性を調節（例えば、刺激または
阻害）する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物がＳＥＣＸ、または
その生物学的に活性な部分の活性を調節する能力の決定は、例えば、ＳＥＣＸタ
ンパク質が、ＳＥＣＸ標的分子に結合またはこれら標的分子と相互作用する能力
を決定することによって、達成され得る。本明細書中において使用する場合には
、「標的分子」とは、ＳＥＣＸタンパク質が自然に結合または相互作用する分子
であり、例えば、ＳＥＣＸ相互作用タンパク質を発現する細胞の表面の分子、第
二の細胞の表面上の分子、細胞外の環境の分子、細胞膜の内部表面と会合する分
子、または細胞質分子である。ＳＥＣＸ標的分子は、本発明の非ＳＥＣＸ分子ま
たはＳＥＣＸタンパク質またはポリペプチドであり得る。１実施形態において、
ＳＥＣＸ標的分子は、シグナル伝達経路の構成要素であり、これは、細胞膜を通
って細胞内への細胞外シグナル（例えば、化合物が膜結合ＳＥＣＸ分子に結合す
ることにより発生するシグナル）の伝達を促進する。その標的は、例えば、触媒
活性を有する第二の細胞内タンパク質または下流シグナル分子のＳＥＣＸとの会
合を容易にするタンパク質であり得る。

【０２０９】 ＳＥＣＸタンパク質がＳＥＣＸ標的分子に結合するかまたはその標的分子と相
互作用する能力の決定は、直接の結合を決定するための上記方法の１つにより、
達成され得る。１実施形態において、ＳＥＣＸタンパク質がＳＥＣＸ標的分子に
結合するかまたはその標的分子と相互作用する能力の決定は、その標的分子の活
性を決定することにより、達成され得る。例えば、この標的分子の活性は、その
標的の細胞第二メッセンジャー（すなわち、細胞内Ｃａ²⁺、ジアシルグリセロー
ル、ＩＰ₃など）の誘導を検出すること、適切な基質の標的の触媒活性／酵素活
性を検出すること、レポーター遺伝子（検出可能なマーカー（例えば、ルシフェ
ラーゼ）をコードする核酸に作動的に連結されたＳＥＣＸ応答性調節エレメント
を含む）の誘導を検出すること、または細胞応答（例えば、細胞生存度、細胞分
化、または細胞増殖）を検出することにより、決定され得る。

【０２１０】 なお別の実施形態において、本発明のアッセイは、無細胞アッセイであり、Ｓ
ＥＣＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物に接触させる工
程、ならびにその試験化合物がＳＥＣＸタンパク質またはその生物学的に活性な
部分と結合する能力を決定する工程を包含する。この試験化合物の、ＳＥＣＸタ
ンパク質への結合は、上記のように、直接的または間接的にのいずれかで決定さ
れ得る。１実施形態において、このアッセイは、ＳＥＣＸタンパク質またはその
生物学的に活性な部分を、ＳＥＣＸに結合する公知の化合物に接触させて、アッ
セイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物に接触させる工程
、ならびにその試験化合物がＳＥＣＸタンパク質と相互作用する能力を決定する
工程を包含し、ここで、この試験化合物がＳＥＣＸタンパク質と相互作用する能
力を決定する工程は、この試験化合物が、公知の化合物と比較して、ＳＥＣＸ、
またはその生物学的に活性な部分と優先的に相互作用する能力を決定する工程を
包含する。

【０２１１】 別の実施形態において、アッセイは、無細胞アッセイであり、ＳＥＣＸタンパ
ク質またはその生物学的に活性な部分を試験化合物と接触させる工程、ならびに
その試験化合物がＳＥＣＸタンパク質またはその生物学的に活性な部分の活性を
調節（例えば、刺激または阻害）する能力を決定する工程を包含する。この試験
化合物がＳＥＣＸの活性を調節する能力の決定は、例えば、ＳＥＣＸタンパク質
が、ＳＥＣＸ標的分子に結合する能力を、直接的結合の決定のための上記方法の
１つによって決定することにより、達成され得る。代替の実施形態において、こ
の試験化合物がＳＥＣＸの活性を調節する能力の決定は、ＳＥＣＸタンパク質が
、ＳＥＣＸ標的分子をさらに調節する能力を決定することにより、達成され得る
。例えば、この標的分子の適切な基質に対する触媒活性／酵素活性は、上に記載
のように決定され得る。

【０２１２】 なお別の実施形態において、無細胞アッセイは、ＳＥＣＸタンパク質またはそ
の生物学的に活性な部分を、ＳＥＣＸに結合する公知の化合物に接触させてアッ
セイ混合物を形成する工程、このアッセイ混合物を試験化合物と接触させる工程
、ならびにこの試験化合物がＳＥＣＸタンパク質と相互作用する能力を決定する
工程を包含し、ここで、この試験化合物がＳＥＣＸタンパク質と相互作用する能
力の決定は、ＳＥＣＸタンパク質が、ＳＥＣＸ標的分子と優先的に結合するか、
またはその標的分子の活性を優先的に調節する能力を決定する工程を包含する。

【０２１３】 本発明の無細胞アッセイは、ＳＥＣＸの、可溶性の形態または膜結合形態の両
方の使用に受け入れられる。膜結合形態のＳＥＣＸを含む無細胞アッセイの場合
には、ＳＥＣＸの膜結合形態が溶液中に維持されるように、可溶化剤を利用する
ことが望ましくあり得る。このような可溶化剤の例には、非イオン性界面活性剤
が挙げられ、例えば、ｎ−オクチルグルコシド、ｎ−ドデシルグルコシド、ｎ−
ドデシルマルトシド、オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド、デカノイル−Ｎ−
メチルグルカミド、Ｔｒｉｔｏｎ（登録商標）Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ（登録
商標）Ｘ−１１４、Ｔｈｅｓｉｔ（登録商標）、イソトリデシルポリ（エチレン
グリコールエーテル）_n（Ｉｓｏｔｒｉｄｅｃｙｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅ
ｇｌｙｃｏｌ ｅｔｈｅｒ）_n、３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモ
ニオ−１−プロパンスルホネート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ
）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｉｎｉｏｌ−１−ｐｒｏｐａｎｅ ｓｕｌｆｏｎａｔ
ｅ）（ＣＨＡＰＳ）、３−（３−コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ−２−
ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート（３−（３−ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏ
ｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｉｎｉｏｌ−２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｐｒｏ
ｐａｎｅ ｓｕｌｆｏｎａｔｅ）（ＣＨＡＰＳＯ）、またはＮ−ドデシル−Ｎ，
Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネートである。

【０２１４】 本発明の上記アッセイ方法の１つより多い実施形態において、ＳＥＣＸ、また
はその標的分子のいずれかを固定して、そのタンパク質の一方または両方の非複
合形態からの複合形態の分離を促進し、そしてそのアッセイの自動化に適用させ
ることが、望ましくあり得る。試験化合物の、ＳＥＣＸへの結合、または候補化
合物の存在下および非存在下での、ＳＥＣＸの標的分子との相互作用は、これら
の反応物を収容するために適切な任意の容器内で、達成され得る。このような容
器の例には、マイクロタイタープレート、試験管、および微小遠心管が挙げられ
る。１実施形態において、そのタンパク質の一方または両方がマトリックスに結
合することを可能にするドメインの付加する融合タンパク質が、提供され得る。
例えば、ＧＳＴ−ＳＥＣＸ融合タンパク質またはＧＳＴ標的融合タンパク質は、
グルタチオンセファロースビーズ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ｓｔ．Ｌｏ
ｕｉｓ、ＭＯ）またはグルタチオン誘導体化マイクロタイタープレート上に吸着
され得、次いでこれらは、試験化合物と合わせられるか、あるいは試験化合物お
よび吸着されない標的タンパク質、またはＳＥＣＸタンパク質のいずれかと合わ
せられ、そしてこの混合物が、複合体形成に貢献する条件下（例えば、塩および
ｐＨに関して生理学的条件）でインキュベートされる。インキュベーションに続
いて、ビーズまたはマイクロタイタープレートウェルを洗浄して、結合していな
いあらゆる成分を除去し、ビーズの場合にはマトリックスを固定し、例えば上記
のように、複合体を直接的または間接的のいずれかで決定する。あるいは、複合
体がマトリックスから解離され得、そしてＳＥＣＸの結合レベルまたは活性レベ
ルを、標準的な技術を使用して決定し得る。

【０２１５】 タンパク質をマトリックスに固定するための他の技術がまた、本発明のスクリ
ーニングアッセイにおいて使用され得る。例えば、ＳＥＣＸ、またはその標的分
子のいずれかが、ビオチンとストレプトアビジンとの結合を利用して、固定され
得る。ビオチニル化ＳＥＣＸ、または標的分子は、当該分野において周知の技術
を使用して、ビオチンＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）から調製され得
（例えば、ビオチニル化キット、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋ
ｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．）、そしてストレプトアビジン被覆した９６ウェルのプレー
ト（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウェルに固定され得る。あるいは、Ｓ
ＥＣＸ、または標的分子と反応性であるがＳＥＣＸタンパク質のその標的分子へ
の結合を妨害しない抗体が、ＳＥＣＸタンパク質の標的分子への結合を妨害せず
、そのプレートのウェルに誘導体化され得、そして結合していない標的またはＳ
ＥＣＸが、抗体の結合によってウェル内にトラップされ得る。このような複合体
を検出するための方法には、ＧＳＴ固定複合体に関しての上記のものに加えて、
ＳＥＣＸ、または標的分子と反応性の抗体を使用する、複合体の免疫検出、なら
びにＳＥＣＸ、または標的分子に関する酵素活性の検出に依存する酵素結合アッ
セイが挙げられる。

【０２１６】 別の実施形態において、ＳＥＣＸ発現のモジュレーターは、細胞を候補化合物
と接触させ、そして細胞中のＳＥＣＸ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現を決定
する方法において同定される。候補化合物の存在下でのＳＥＣＸ ｍＲＮＡまた
はタンパク質の発現レベルは、候補化合物の非存在下でのＳＥＣＸ ｍＲＮＡま
たはタンパク質の発現レベルと比較される。次いで、候補化合物は、この比較に
基づいて、ＳＥＣＸ発現のモジュレーターとして同定され得る。例えば、ＳＥＣ
Ｘ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が候補化合物の非存在下より、その存在下
における方が大きい（統計的に有意に大きい）場合、この候補化合物は、ＳＥＣ
Ｘ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現の刺激物質として同定される。あるいは、
ＳＥＣＸ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現が候補化合物の非存在下よりその存
在下の方が少ない（統計的に有意に少ない）場合、この候補化合物は、ＳＥＣＸ
ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現のインヒビターとして同定される。細胞中の
ＳＥＣＸ ｍＲＮＡまたはタンパク質の発現レベルは、ＳＥＣＸ ｍＲＮＡまた
はタンパク質を検出するために本明細書中に記載の方法によって決定され得る。

【０２１７】 本発明のなお別の局面において、ＳＥＣＸタンパク質は、ツーハイブリッドア
ッセイまたはスリーハイブリッドアッセイにおいて「ベイトタンパク質」として
使用されて（例えば、米国特許第５，２８３，３１７号；Ｚｅｒｖｏｓら（１９
９３）Ｃｅｌｌ ７２：２２３−２３２；Ｍａｄｕｒａら（１９９３）Ｊ Ｂｉ
ｏｌ Ｃｈｅｍ ２６８：１２０４６−１２０５４；Ｂａｒｔｅｌら（１９９３
）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １４：９２０−９２４；Ｉｗａｂｕｓｃｈｉら
（１９９３）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ８：１６９３−１６９６；およびＢｒｅｎｔ
ＷＯ９４／１０３００を参照のこと）、ＳＥＣＸ（「ＳＥＣＸ結合タンパク質」
または「ＳＥＣＸ−ｂｐ」）に結合するか、またはこれと相互作用し、そしてＳ
ＥＣＸ活性を調節する他のタンパク質を同定し得る。このようなＳＥＣＸ結合タ
ンパク質はまた、例えば、ＳＥＣＸ経路の上流または下流エレメントとしてＳＥ
ＣＸタンパク質によるシグナル伝達に関与するようである。

【０２１８】 ツーハイブリッドシステムは、分離可能なＤＮＡ結合ドメインおよび活性化ド
メインからなる、大部分の転写因子のモジュール的性質に基づく。簡潔には、こ
のアッセイは、２つの異なるＤＮＡ構築物を利用する。一方の構築物においては
、ＳＥＣＸをコードする遺伝子が公知の転写因子（例えば、ＧＡＬ−４）のＤＮ
Ａ結合ドメインをコードする遺伝子に融合される。他方の構築物においては、Ｄ
ＮＡ配列のライブラリー由来の、未同定タンパク質（「プレイ」または「サンプ
ル」）をコードするＤＮＡ配列が、公知の転写因子の活性化ドメインをコードす
る遺伝子に融合される。「ベイト」および「プレイ」タンパク質がインビボで相
互作用して、ＳＥＣＸ依存性複合体を形成し得る場合、この転写因子のＤＮＡ結
合ドメインおよび活性化ドメインは、非常に近くにある。近位にあることにより
、転写因子に応答性の転写調節部位に作動可能に連結されたレポーター遺伝子（
例えば、ＬａｃＺ）の転写を可能にする。レポーター遺伝子の発現が検出され得
、そして機能的転写因子を含む細胞コロニーは、単離され得、そしてＳＥＣＸと
相互作用するタンパク質をコードするクローニングされた遺伝子を得るために使
用され得る。

【０２１９】 本発明は、上記のスクリーニングアッセイにより同定される新規な薬剤および
上記の処置のためのこの薬剤の使用に関する。

【０２２０】 （検出アッセイ） 本明細書中で同定されるｃＤＮＡ配列のタンパク質またはフラグメント（およ
び対応する完全な遺伝子配列）は、ポリヌクレオチド試薬として多くの方法で使
用され得る。例えば、これらの配列を使用して、（ｉ）染色体上にそれぞれの遺
伝子をマッピングし得；従って遺伝病と関連する遺伝子領域を位置決定し得る；
（ｉｉ）微量の生物学的サンプルから個体を同定し得る（組織型決定）；および
（ｉｉｉ）生物学的サンプルの法医学的識別を助け得る。これらの適用は、以下
の節において記載される。

【０２２１】 （染色体マッピング） 一旦遺伝子の配列（または配列の一部分）が単離されると、この配列を用いて
染色体上に遺伝子の位置をマッピングし得る。このプロセスは、染色体マッピン
グとよばれる。従って、本明細書中に記載のＳＥＣＸ配列の一部またはフラグメ
ントを用いて、それぞれ、ＳＥＣＸ遺伝子の位置を染色体上にマッピングし得る
。ＳＥＣＸ配列を染色体にマッピングすることは、これらの配列と、疾患と関連
する遺伝子とを相関付ける際の重要な第一歩である。

【０２２２】 簡潔には、ＳＥＣＸ遺伝子は、ＳＥＣＸ配列からＰＣＲプライマー（好ましく
は、１５〜２５ｂｐの長さ）を調製することにより染色体にマッピングし得る。
ＳＥＣＸ配列のコンピューター分析を用いて、ゲノムＤＮＡにおける１つを超え
るエキソンにまたがらないプライマーを迅速に選択し得、従って、増幅プロセス
を複雑にし得る。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細
胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために使用され得る。ＳＥＣＸ配列に
対応するヒト遺伝子を含むハイブリッドのみが増幅されたフラグメントを生じる
。

【０２２３】 体細胞ハイブリッドは、異なる哺乳動物由来の体細胞（例えば、ヒトおよびマ
ウス細胞）を融合することにより調製される。ヒトおよびマウスのハイブリッド
が増殖および分裂するにつれ、それらは、無作為な順序で徐々にヒト染色体を失
うが、マウス染色体を維持する。マウス細胞は増殖できないが、ヒト細胞は増殖
できる培地を使用することにより、それらは特定の酵素を失うので、必要な酵素
をコードする遺伝子を含む１つのヒト染色体が維持される。種々の培地を使用す
ることによって、ハイブリッド細胞株のパネルが確立され得る。パネルにおける
各細胞株は、単一のヒト染色体または少数のヒト染色体いずれかおよびマウス染
色体の完全なセットを含み、これにより、個々の遺伝子を特定のヒト染色体にマ
ッピングすることが容易に可能になる（Ｄ’Ｅｕｓｔａｃｈｉｏら（１９８３）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２０：９１９−９２４）。ヒト染色体のフラグメントのみを
含む体細胞ハイブリッドはまた、転座および欠失を伴うヒト染色体を使用するこ
とにより生成され得る。

【０２２４】 体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは、特定の染色体に特定の配列を割り
当てるためには迅速な手順である。１つのサーマルサイクラーを用いて一日に３
つ以上の配列が割り当てられ得る。ＳＥＣＸ配列を使用して、オリゴヌクレオチ
ドプライマーを設計すると、下位位置決定（ｓｕｂｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）
は、特定の染色体由来のフラグメントのパネルを用いて達成され得る。

【０２２５】 中期染色体スプレッドに対するＤＮＡ配列の蛍光インサイチュハイブリダイゼ
ーション（ＦＩＳＨ）をさらに使用して、一工程で正確な染色体位置を提供し得
る。染色体スプレッドは、コルセミド（染色体紡錘体を破壊する）のような化学
物質により分裂が中期においてブロックされた細胞を使用して行われ得る。この
染色体は、トリプシンで短時間処理され得、次いで、ギムザ染色され得る。薄い
バンドおよび濃いバンドのパターンが各染色体で発生し、その結果、この染色体
は、個々に同定され得る。ＦＩＳＨ技術は、５００または６００塩基ほどの短さ
のＤＮＡ配列と共に使用され得る。しかし、１，０００塩基より大きなクローン
は、簡単な検出に十分なシグナル強度で、独特の染色体位置に結合する可能性が
より高い。好ましくは、１，０００塩基、そしてより好ましくは、２，０００塩
基が妥当な時間量で良好な結果を得るために十分である。この技術の総説につい
ては、Ｖｅｒｍａら、ＨＵＭＡＮ ＣＨＲＯＭＯＳＯＭＥＳ：Ａ ＭＡＮＵＡＬ
ＯＦ ＢＡＳＩＣ ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ（Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８８）を参照のこと。

【０２２６】 染色体マッピングの試薬は、単一の染色体またはその染色体上の単一部位を印
付けするために個々に使用され得るか、または試薬のパネルは複数部位および／
または複数染色体を印付けするために使用され得る。遺伝子の非コード領域に対
応する試薬は、実際に、マッピング目的のために好ましい。コード鎖は、遺伝子
ファミリー内に保存されており、従って、染色体マッピングの間に交叉ハイブリ
ダイゼーションの機会が増大する可能性が高い。

【０２２７】 一旦配列が正確な染色体位置にマッピングされると、その配列の染色体上の物
理的位置は、遺伝子マップデータと相関し得る。このようなデータは、例えば、
ＭｃＫｕｓｉｃｋ，ＭＥＮＤＥＬＩＡＮ ＩＮＨＥＲＩＴＡＮＣＥ ＩＮ ＭＡ
Ｎ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄ
ｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通じてオンラインで入手可能）において見いだされ
る。次いで、同じ染色体領域にマッピングされる遺伝子と疾患との間の関係は、
例えば、Ｅｇｅｌａｎｄら（１９８７）Ｎａｔｕｒｅ，３２５：７８３−７８７
に記載される連鎖分析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝）によって同定され
得る。

【０２２８】 さらに、ＳＥＣＸ遺伝子と関連する疾患に罹患した個体と、この疾患に罹患し
ていない個体との間のＤＮＡ配列における差異が決定され得る。罹患した個体の
いくらかまたは全てにおいて変異が認められるが、非罹患個体のいずれにおいて
も認められない場合、この変異は特定の疾患の候補薬剤である可能性が高い。罹
患個体と非罹患個体の比較は、一般に、染色体における構造的変化（例えば、染
色体スプレッドから可視であるか、またはそのＤＮＡ配列に基づいたＰＣＲを用
いて検出可能な欠失または転座）を最初に探すことを包含する。最終的に、いく
らかの個体に由来する遺伝子の完全な配列決定を行って、変異の存在を確認し、
かつ多型に由来する変異を区別する。

【０２２９】 （組織型決定（ｔｉｓｓｕｅ ｔｙｐｉｎｇ）） 本発明のＳＥＣＸ配列はまた、わずかな生物学的サンプルから個体を識別する
ために使用され得る。この技術において、個体のゲノムＤＮＡは、１つ以上の制
限酵素で消化され、そして同定のために独特のバンドを生成するためにサザンブ
ロット上でプローブされる。本発明の配列は、ＲＦＬＰ（米国特許第５，２７２
，０５７号に記載の「制限フラグメント長多型」）のためのさらなるＤＮＡマー
カーとして有用である。

【０２３０】 さらに、本発明の配列を用いて、個体のゲノムの選択された部分について実際
の塩基ごとにＤＮＡ配列を決定する代替的技術を提供し得る。従って、本明細書
中に記載のＳＥＣＸ配列を用いて、配列の５’末端および３’末端から２つのＰ
ＣＲプライマーを調製し得る。次いで、これらのプライマーを使用して、個体の
ＤＮＡを増幅し得、そしてこれを逐次的に配列決定し得る。

【０２３１】 このように調製された個体由来の対応するＤＮＡ配列のパネルは、各個体が、
対立遺伝子差異に起因するこのようなＤＮＡ配列の独特のセットを有するので、
唯一の個体識別を提供し得る。本発明の配列は、個体由来および組織由来の配列
のこのような識別を得るために使用され得る。本発明のＳＥＣＸ配列は、ヒトゲ
ノムの部分を独特に表す。対立遺伝子のバリエーションは、これらの配列のコー
ド領域においてある程度生じ得、そして非コード領域においてより大きな程度に
生じる。個々のヒト間での対立遺伝子のバリエーションは、各５００塩基につき
約１回の頻度で生じる。対立遺伝子のバリエーションの多さは、制限フラグメン
ト長多型（ＲＦＬＰ）を含む単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）に起因する。

【０２３２】 本明細書中で記載の配列の各々は、標準物質（これに対して個体からのＤＮＡ
が識別の目的で比較され得る）として使用され得る。より多くの多型が非コード
領域で生じるので、個体を区別するために、それほど多くの配列が必要であるわ
けではない。配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２
１、２３、２５、２７、７４、７６、７８、および８０、加えて２９および３１
のいずれか１つ以上の非コード配列は、おそらく１０〜１，０００プライマーの
パネルを用いてポジティブな個体識別を不自由なく提供し得る。これらのプライ
マーは、各々が１００塩基の増幅された非コード配列を生じる。推定コード配列
が使用される場合、ポジティブな個体識別に関するプライマーのより多くの適切
な数は、５００〜２，０００である。

【０２３３】 ＳＥＣＸ配列のさらなる用途は、生物学的サンプルにおける細胞型または組織
型を同定することである。上記で議論したように、種々のＳＥＣＸ遺伝子は１つ
以上の細胞型において発現される。従って、１つ以上のＳＥＣＸ遺伝子に由来す
るＲＮＡ分子の存在に基づいて細胞型が同定され得る。種々のＳＥＣＸ遺伝子の
組織分布は、図１９〜２３および実施例６〜１１において示され、そして以下で
議論される。

【０２３４】 （法医学的生物学におけるＳＥＣＸ配列の使用） ＤＮＡに基づく識別技術はまた、法医学的生物学において使用され得る。法医
学的生物学は、例えば、犯罪者をポジティブに識別するための手段として、犯罪
現場で見いだされた生物学的証拠の遺伝子型決定を利用する科学分野である。こ
のような識別を行うために、ＰＣＲ技術を用いて非常に少量の生物学的サンプル
（例えば、犯罪現場で見いだされた毛髪もしくは皮膚のような組織、または血液
、唾液もしくは精液のような体液）から得られたＤＮＡ配列を増幅し得る。次い
で、増幅された配列は標準物質と比較され、それによって、生物学的サンプルの
起源の識別を可能にし得る。

【０２３５】 本発明の配列を使用して、ヒトゲノムにおける特定の遺伝子座に標的化され得
るポリヌクレオチド試薬（例えば、ＰＣＲプライマー）を提供し得る。このＰＣ
Ｒプライマーは、例えば、別の「識別マーカー」（すなわち、特定の個体に独特
な別のＤＮＡ配列）を提供することにより、ＤＮＡベースの法医学的識別の信頼
性を増大し得る。上記のように、実際の塩基配列情報は、制限酵素で生成したフ
ラグメントにより形成されるパターンに対する正確な代替手段として識別のため
に使用され得る。ＳＥＣＸ遺伝子の非コード領域に標的化される配列は、より多
くの多型が非コード領域に生じ、このことにより、この技術を使用して個体を区
別することがより容易になるので、この用途のために特に適切である。ポリヌク
レオチド試薬の例としては、ＳＥＣＸ配列またはその部分（例えば、本明細書中
に記載のＳＥＣＸ配列の非コード領域に由来するフラグメント）が挙げられ得、
この部分は、少なくとも２０塩基、好ましくは３０塩基の長さを有する。

【０２３６】 本明細書中に記載のＳＥＣＸ配列は、ポリヌクレオチド試薬（例えば、インサ
イチュハイブリダイゼーション技術において使用され得る標識プローブまたは標
識可能プローブ）を提供して、特定の組織（例えば、脳組織など）を同定するた
めにさらに使用され得る。これは、法医学的病理学者に未知の起源の組織が提示
された場合に非常に有用である。このようなＳＥＣＸプローブのパネルを使用し
て、種により、および／または起源の型により組織を同定し得る。

【０２３７】 このように、これらの試薬（例えば、ＳＥＣＸプライマーまたはプローブ）を
用いて、組織培養物を夾雑物質についてスクリーニングし得る（すなわち、培養
物中の異なる型の細胞の混在についてのスクリーニング）。

【０２３８】 （治療剤の生物学的効果の決定） 本発明の種々の実施形態において、適切なインビトロまたはインビボアッセイ
を利用して、特定の治療剤の効果およびその投与が罹患組織の処置を示すか否か
を決定する。

【０２３９】 種々の特定の実施形態において、インビトロアッセイが患者の障害に関与する
代表的な細胞型で行われ、所定の治療剤がこの細胞型に対して所望の効果を発揮
したか否かを決定し得る。治療において使用する化合物は、ヒト被験体において
試験する前に適切な動物モデル系において試験され得る。これらの動物モデル系
としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ラット、マウス、ニワ
トリ、ウシ、サル、ウサギなど。同様に、インビボ試験については、当該分野で
公知の任意の動物モデル系が、ヒト被験体に対する投与の前に使用され得る。

【０２４０】 （悪性疾患） ＳＥＣＸタンパク質は、細胞膜に位置し、そして細胞の増殖および分化の調節
に関与すると考えられている。従って、本発明の治療剤は、細胞の過剰増殖およ
び／または細胞増殖の制御の欠損（例えば、癌、悪性疾患および腫瘍）に関連す
る疾患または障害の治療的処置または予防的処置において有用であり得る。その
ような過剰増殖障害の総説について、例えば、Ｆｉｓｈｍａｎら、１９８５、Ｍ
ＥＤＩＣＩＮＥ、第２版、Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａ
ｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡを参照のこと。

【０２４１】 本発明の治療剤を、悪性疾患および関連する障害の処置または予防における効
力について、当該分野内において公知の任意の方法によってアッセイし得る。そ
のようなアッセイとしては、形質転換された細胞または患者の腫瘍由来の細胞を
利用するインビトロアッセイ、ならびに癌または悪性疾患の動物モデルを使用す
るインビボアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。可能性のある有効
な治療剤は、例えば、コントロールと比較して、培養物中での腫瘍由来細胞また
は形質転換細胞の増殖を阻害するか、または動物モデルにおいて腫瘍の後退を生
じる治療剤である。

【０２４２】 本発明の実施において、一旦、悪性疾患または癌が、活性を調節すること（す
なわち、阻害するか、アンタゴナイズするか、またはアゴナイズする）による処
置に対して感受性であることが示されると、引き続いて、その癌または悪性疾患
が、タンパク質機能を調節するように作用する治療剤の投与によって処置または
予防され得る。

【０２４３】 （前悪性状態） 癌または悪性疾患の治療または予防処置において有効な本発明の治療剤はまた
、前悪性状態の処置および／または前悪性から新生物状態もしくは悪性疾患状態
への進行を防ぐための処置のために投与され得る。そのような予防的用途または
治療的用途が、先行する新生物または癌への進行が知られているか、またはそれ
が疑われる状態（特に、過形成、化生、または最も特に、異形成からなる非新生
物細胞増殖が生じた場合）において、示される。そのような異常な細胞増殖の総
説について、例えば、ＲｏｂｂｉｎｓおよびＡｎｇｅｌｌ、１９７６、ＢＡＳＩ
Ｃ ＰＡＴＨＯＬＯＧＹ、第２版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．、Ｐｈｉ
ｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡを参照のこと。

【０２４４】 過形成は、細胞の構造または機能における有意な変化なしに、組織または器官
における細胞数の増加を含む、制御された細胞の増殖の形態である。例えば、子
宮内膜の過形成は、しばしば子宮内膜癌に進行することが実証されている。化生
は、成熟した細胞または十分に分化した細胞の１つの型が、成熟した細胞の別の
型に置換する、制御された細胞増殖の形態である。化生は、上皮組織細胞または
結合組織細胞において生じ得る。異形成は、一般に癌の前駆体であると考えられ
、そして上皮において主に見出される。異形成は、非新生物細胞増殖の最も無秩
序な形態であり、個々の細胞の均一性および細胞の構築上の配向の損失を含む。
異形成は、慢性の刺激または炎症が存在する場所で特徴的に生じ、そしてしばし
ば、頸部、気道、口腔、および胆嚢において見出される。

【０２４５】 あるいは、または過形成、化生、または異形成として特徴付けられる異常な細
胞増殖の存在に加えて、患者由来の細胞サンプル内で、インビボまたはインビト
ロのいずれかにおいて示される形質転換表現型または悪性疾患表現型の１つ以上
の特徴の存在が、上記のタンパク質の活性を調節する能力を有する治療剤の予防
的／治療的投与の望ましさの指標である。形質転換された表現型の特徴としては
、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）形態学的変化；（ｉｉ）
よりゆるい、下層への付着；（ｉｉｉ）細胞間接触阻止の喪失；（ｉｖ）足場依
存性の喪失；（ｖ）プロテアーゼ放出；（ｖｉ）増加した糖輸送；（ｖｉｉ）減
少した血清要求性；（ｖｉｉ）胎児抗原の発現；（ｉｘ）２５０ｋＤａ細胞表面
タンパク質の消滅など。例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓら１９８６、ＭＯＬＥＣＵＬ
ＡＲ ＰＡＴＨＯＬＯＧＹ、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ、Ｐｈｉｌａｄｅ
ｌｐｈｉａ、ＰＡを参照のこと。

【０２４６】 本発明の特定の実施形態において、悪性疾患についての以下の１つ以上の素因
を示す患者が、治療剤の有効量の投与によって処置される：（ｉ）悪性疾患に関
連する染色体転座（例えば、慢性骨髄性白血病についてのフィラデルフィア染色
体（ｂｃｒ／ａｂｌ）および濾胞性リンパ腫についてのｔ（１４；１８）など）
；（ｉｉ）家族性ポリープ症またはガードナー症候群（結腸癌の可能性のある前
兆）；（ｉｉｉ）未確認の重要性の単一クローン性高ガンマグロブリン血症（多
発性骨髄腫の可能性のある前駆体）；ならびに（ｖｉ）メンデル（遺伝子）遺伝
パターンを示す癌または前癌疾患（例えば、結腸の家族性ポリープ症、ガードナ
ー症候群、遺伝性外骨腫症、多発性内分泌腺腫症（ｐｏｌｙｅｎｄｏｃｒｉｎｅ
ａｄｅｎｏｍａｔｏｓｉｓ）、ポイツ−ジェガーズ症候群、フォン・レックリ
ングハウゼン病の神経線維腫症、アミロイド産生および褐色細胞腫をともなう甲
状腺髄様癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ ｔｈｙｒｏｉｄ ｃａｒｉｃｉｎｏｍａ）、
網膜芽細胞腫、頸動脈小体腫瘍、皮膚の黒色癌、眼内の黒色癌、色素性乾皮症、
毛細血管拡張性運動失調、チェディアック−東症候群、白子症、ファンコーニ再
生不良性貧血およびブルーム症候群）を有する人の一親等。

【０２４７】 別の実施形態において、本発明の治療剤が、ヒト患者に投与されて、乳癌、結
腸癌、肺癌、膵臓癌、または子宮癌、あるいは黒色腫または肉腫の進行を防ぐ。

【０２４８】 （過剰増殖性障害および異常増殖性（ｄｙｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ）障
害） 本発明の１つの実施形態において、治療剤が、過剰増殖性障害または良性の異
常増殖性障害の治療的処置または予防的処置において投与される。過剰増殖性疾
患または障害の処置または予防における本発明の治療剤の効力が、当該分野にお
いて公知の任意の方法によってアッセイされ得る。そのようなアッセイとしては
、インビトロの細胞増殖アッセイ、過剰増殖性疾患または障害の動物モデルを使
用するインビトロまたはインビボアッセイなどが挙げられる。可能性のある効果
的な治療剤は、例えば、コントロールとの比較において、培養物中の細胞増殖を
促進し得るか、あるいは動物モデルにおける増殖または細胞増殖を生じ得る。

【０２４９】 本発明の特定の実施形態は、肝臓の肝硬変（瘢痕が、通常の肝臓再生プロセス
を上回る状態）；瘢痕プロセスが通常の再生を妨げる、皮膚の形状を損じること
を生じるケロイド（過形成性瘢痕）形成の処置；乾癬（皮膚の過剰な増殖および
適切な細胞運命の決定の遅延によって特徴付けられる一般的な皮膚の状態）；良
性腫瘍；線維性嚢状態および組織肥厚（例えば、良性膵臓肥厚）の処置または予
防に関する。

【０２５０】 （神経変性障害） ＳＥＣＸタンパク質は、細胞成熟の脱調節およびアポトーシス（この両方が神
経変性疾患の特徴である）に関係し得る。従って、本発明の治療剤（限定される
ことはないが、特に上記のタンパク質の活性を調節（または供給）する治療剤）
が、神経変性疾患の処置または予防において効果的であり得る。神経変性障害に
関与する上記のタンパク質の活性を調節する本発明の治療剤を、そのような神経
変性疾患または障害を処置または予防することにおける効力について、当該分野
において公知の任意の方法によってアッセイし得る。そのようなアッセイとして
は、調節された細胞成熟もしくはアポトーシスの阻害についてのインビトロアッ
セイ、または神経変性疾患または障害の動物モデルを使用するインビボアッセイ
、あるいは以下に記載する任意のアッセイが挙げられる。可能性のある効果的な
治療剤は、例えば限定されないが、コントロールと比較して、調節された細胞成
熟を促進し、培養物中の細胞アポトーシスを防ぎ、あるいは動物モデルにおける
神経変性を減少する。

【０２５１】 一旦、神経変性疾患または障害が、調節活性による処置に対して感受性である
ことが示されると、その神経変性疾患または障害が、活性を調節する治療剤の投
与によって処置または予防され得る。そのような疾患としては、加齢に関与する
全ての変性性障害（特に、変形性関節症および神経変性障害）が挙げられる。

【０２５２】 （器官移植に関連する障害） ＳＥＣＸは、器官移植に関連する障害（特に、限定されないが、器官拒絶反応
）に関係し得る。本発明の治療剤（特に、活性を調節（または供給）する治療剤
）は、器官移植に関連する疾患または障害の処置または予防において効果的であ
り得る。本発明の治療剤（特に、上記タンパク質のレベルまたは活性を調節する
治療剤）は、このような器官移植に関連する疾患および障害の処置または予防に
おける効力について、当該分野で公知の任意の方法によってアッセイされ得る。
このようなアッセイとしては、下記のような細胞培養モデルを使用するインビト
ロアッセイ、または器官移植に関連する疾患および障害の動物モデルを使用する
インビボアッセイが挙げられ、例えば、以下を参照のこと。潜在的に効果的な治
療剤は、例えば、限定されないが、コントロールに対して比較して、動物モデル
における免疫拒絶応答を減少する。

【０２５３】 従って、一旦、器官移植に関連する疾患および障害が、活性の調節による処置
に対して感受性であることが示されると、このような疾患または障害は、活性を
調節する治療剤の投与によって処置または予防され得る。

【０２５４】 （心臓血管疾患） ＳＥＣＸは、アテローム性動脈硬化症のプラーク形成を含む、心臓血管障害に
関係し得る。心臓血管疾患（脳血栓症または脳出血を含む）、虚血性心疾患また
は虚血性腎疾患、末梢血管疾患、または他の主要な血管の血栓症、および他の疾
患（真性糖尿病、高血圧、甲状腺機能不全、コレステロールエステル貯蔵病、全
身性エリテマトーデス、ホモシステイン症（ｈｏｍｏｃｙｓｔｅｉｎｅｍｉａ）
、および家族性のタンパク質または脂質プロセシング疾患などを含む）のような
疾患は、アテローム性動脈硬化症に直接的または間接的のいずれかで関連する。
従って、本発明の治療剤（特に、活性または形成を調節（または供給）する治療
剤）は、アテローム性動脈硬化症に関連する疾患または障害の処置または予防に
有効であり得る。本発明の治療剤（特に、レベルまたは活性を調節する治療剤）
は、このような疾患および障害の処置または予防における効力について、当該分
野で公知の任意の方法（以下に記載の方法を含む）によってアッセイされ得る。

【０２５５】 広範な動物モデルおよび細胞培養モデルが、アテローム性動脈硬化症に関与す
るプロセスについて存在する。動物モデルの限定的かつ非排他的な列挙としては
、以下が挙げられる：早発性アテローム性動脈硬化症についてのノックアウトマ
ウス（ＫｕｒａｂａｙａｓｈｉおよびＹａｚａｋｉ，１９９６、Ｉｎｔ．Ａｎｇ
ｉｏｌ．１５：１８７−１９４）、アテローム動脈硬化症のトランスジェニック
マウスモデル（Ｋａｐｐｅｌら、１９９４、ＦＡＳＥＢ Ｊ．８：５８３−５９
２）、動物モデルのアンチセンスオリゴヌクレオチド処置（Ｃａｌｌｏｗ，１９
９５、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１０：５６９−５７６）、アテロ
ーム性動脈硬化症についてのトランスジェニックウサギモデル（Ｔａｙｌｏｒ，
１９９７，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ８１１：１４６−１５２）、高
コレステロール血症動物モデル（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ，１９９６，Ｄｉａｂｅｔ
ｅｓ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．３０（補遺）：１−１１）、高脂血症マ
ウス（Ｐａｉｇｅｎら、１９９４、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．５：
２５８−２６４）、および動物におけるリポキシゲナーゼの阻害（Ｓｉｇａｌら
、１９９４、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７１４：２１１−２２４）。
さらに、インビトロ細胞モデルとしては、以下が挙げられるが、これらに限定さ
れない：低密度リポタンパク質に曝露された単球（Ｆｒｏｓｔｅｇａｒｄら、１
９９６、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １２１：９３−１０３）、クローン
化された血管平滑筋細胞（Ｓｕｔｔｌｅｓら、１９９５、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒ
ｅｓ．２１８：３３１−３３８）、内皮細胞由来の化学誘引物質に曝されたＴ細
胞（Ｋａｔｚら、１９９４、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．５５：５６７−５７
３）、培養されたヒト大動脈内皮細胞（Ｆａｒｂｅｒら、１９９２、Ａｍ．Ｊ．
Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６２：Ｈ１０８８−１０８５）、および泡沫細胞培養物（Ｌ
ｉｂｂｙら、１９９６、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｌｉｐｉｄｏｌ ７：３３０−３
３５）。潜在的に効果的な治療剤は、例えば、限定されないが、コントロールに
対して比較して、細胞培養モデルにおける泡沫細胞形成、またはアテローム性動
脈硬化症の高コレステロール血症マウスモデルにおけるアテローム性動脈硬化症
のプラーク形成を減少する。

【０２５６】 従って、一旦、アテローム性動脈硬化症に関連する疾患または障害が、活性ま
たは形成の調節による処置に対して感受性であることが示されると、この疾患ま
たは障害は、活性を調節する治療剤の投与によって処置または予防され得る。

【０２５７】 （サイトカインおよび細胞増殖／分化活性） 本発明のＳＥＣＸタンパク質は、サイトカイン活性、細胞増殖活性（誘導する
か、または阻害するかのいずれか）、または細胞分化活性（誘導するか、または
阻害するかのいずれか）を示し得るか、あるいは特定の細胞集団における他のサ
イトカインの産生を誘導し得る。全ての既知のサイトカインを含む、現在までに
発見された多くのタンパク質因子は、因子依存性の１以上の細胞増殖アッセイに
おいて活性を示し、従って、これらのアッセイは、サイトカイン活性の簡便な確
認法として作用する。本発明のタンパク質の活性は、以下を含むが、これらに限
定されない細胞株についての多くの従来の因子依存性細胞増殖アッセイの任意の
１つによって確認される：３２Ｄ、ＤＡ２、ＤＡ１Ｇ、Ｔ１０、Ｂ９、Ｂ９／１
１、ＢａＦ３、ＭＣ９／Ｇ、Ｍ＋（ｐｒｅＢ Ｍ＋）、２Ｅ８、ＲＢ５、ＤＡ１
、１２３、Ｔ１１６５、ＨＴ２、ＣＴＬＬ２、ＴＦ−１、Ｍｏ７ｅおよびＣＭＫ
。

【０２５８】 本発明のタンパク質の活性は、数ある方法でもとりわけ、以下の方法によって
測定され得る：以下に記載されるアッセイを含むが、これらに限定されない、Ｔ
細胞増殖または胸腺細胞増殖についてのアッセイ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏ
ｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｉｇａｎら編、Ｇｒｅｅｎ Ｐ
ｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒ
ｓｃｉｅｎｃｅ（第３章および第７章）；Ｔａｋａｉら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ
１３７：３４９４−３５００、１９８６；Ｂｅｒｔａｇｎｏｉｌｉら、Ｊ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ １４５：１７０６−１７１２、１９９０；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉ
ら、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３３：３２７−３４１、１９９１；Ｂｅｒｔ
ａｇｎｏｌｌｉら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４９：３７７８−３７８３、１９９
２；Ｂｏｗｍａｎら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５２：１７５６−１７６１，１９
９４。

【０２５９】 脾細胞、リンパ節細胞または胸腺細胞のサイトカイン産生および／または増殖
についてのアッセイとしては、ＫｒｕｉｓｂｅｅｋおよびＳｈｅｖａｃｈ：Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ Ｐｒｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｃｏｌｉｇａｎ
ら編、第１巻、３．１２．１−１４頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎ
ｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ １９９４；およびＳｃｈｒｅｉｂｅｒ：Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、第１
巻、６．８．１−８頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎ
ｔｏ １９９４に記載のアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。

【０２６０】 造血細胞およびリンパ球産生細胞の増殖および分化についてのアッセイとして
は、以下によって記載されるアッセイが挙げられるが、これに限定されない：Ｂ
ｏｔｔｏｍｌｙら：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、第１巻、６．３．１−６．３．１２頁、Ｊｏｈ
ｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ １９９１；ｄｅＶｒｉｅ
ｓら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７３：１２０５−１２１１，１９９１；Ｍｏｒｅ
ａｕら、Ｎａｔｕｒｅ ３３６：６９０−６９２、１９８８；Ｇｒｅｅｎｂｅｒ
ｇｅｒら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２９３
１−２９３８，１９８３；Ｎｏｒｄａｎ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、第１巻、６．６．１−５
頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ １９９１；Ｓ
ｍｉｔｈら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：１８
５７−１８６１，１９８６；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｉｎ
ｔｅｒｌｅｕｋｉｎ １１−Ｂｅｎｎｅｔｔら：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃ
ｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、第１巻、６．１５
．１頁、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ １９９１
；Ｃｉａｒｌｅｔｔａら：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、第１巻、６．１３．１頁、Ｊｏｈｎ Ｗ
ｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｔｏｒｏｎｔｏ １９９１。

【０２６１】 抗原に対するＴ細胞クローン応答についてのアッセイ（とりわけ、増殖および
サイトカイン産生を測定することによって、ＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用に影響し、
そしてＴ細胞の効果を指向するタンパク質を同定する）としては、以下に記載さ
れるアッセイが挙げられるが、これらに限定されない：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏ
ｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、Ｇｒｅｅｎ
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔ
ｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（第３章、第６章および第７章）；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら
、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７７：６０９１−６０９５
，１９８０；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎ １１：４０５
−４１１，１９８１；Ｔａｋａｉら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３７：３４９４−
３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４０：５０８−５
１２，１９８８。

【０２６２】 （免疫刺激活性または免疫抑制活性） 本発明のＳＥＣＸタンパク質はまた、免疫刺激活性または免疫抑制活性（アッ
セイが本明細書中に記載される活性を含むが、これらに限定されない）を示し得
る。タンパク質は、種々の免疫不全および免疫障害（重症複合型免疫不全（ＳＣ
ＤＩ）を含む）の処置（例えば、Ｔリンパ球および／またはＢリンパ球の成長お
よび増殖の（上方または下方）調節、ならびにＮＫ細胞および他の細胞集団の細
胞溶解活性の誘発）において有用であり得る。これらの免疫不全は、遺伝性であ
り得るか、またはウイルス（例えば、ＨＩＶ）および細菌感染または真菌感染に
よって引き起こされ得るか、あるいは自己免疫障害から生じ得る。より詳細には
、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染または他の感染によって引き起こされる感
染性疾患は、本発明のタンパク質を使用して処置可能であり得、この感染として
は、ＨＩＶ、肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、ミコバクテリア、リーシュマニ
ア種、マラリア種による感染、およびカンジダ症のような種々の真菌感染が挙げ
られる。もちろん、この点に関して、本発明のタンパク質はまた、免疫系に対す
るブーストが、一般に所望され得る（すなわち、癌の処置において）場合に有用
であり得る。

【０２６３】 本発明のタンパク質を使用して処置され得る自己免疫障害としては、例えば、
以下が挙げられる：結合組織疾患、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、慢
性関節リウマチ、自己免疫性肺炎、ギヤン−バレー症候群、自己免疫性甲状腺炎
、インスリン依存性真性糖尿病、重症筋無力症、対宿主性移植片病および自己免
疫性炎症性眼疾患。本発明のこのようなタンパク質はまた、喘息（特に、アレル
ギー性喘息）または他の呼吸系障害のような、アレルギー反応およびアレルギー
状態の処置に有用であり得る。免疫抑制が所望される他の状態（例えば、器官移
植を含む）もまた、本発明のタンパク質を使用して処置可能であり得る。

【０２６４】 本発明のタンパク質を使用して、多くの方法で、免疫応答することが可能であ
り得る。下方調節は、すでに進行中の免疫応答を阻害またはブロックする形態で
あり得るか、免疫応答の誘導を妨げることを含み得る。活性化Ｔ細胞の機能は、
Ｔ細胞応答を抑制することによってか、またはＴ細胞における特異的寛容を誘導
することによってか、あるいはその両方によって阻害され得る。Ｔ細胞応答の免
疫抑制は、一般に、抑制剤に対するＴ細胞の連続的曝露を必要とする、能動的な
非抗原特異的プロセスである。寛容（Ｔ細胞における非応答性またはアネルギー
（ｅｎｅｒｇｙ）を誘導することを含む）は、一般的に抗原特異的であり、そし
て寛容化剤に対する曝露が停止した後で持続するという点で免疫抑制と識別可能
である。操作的には、寛容は、寛容化剤の非存在下における特異的抗原に対する
再曝露の際に、Ｔ細胞応答の欠如によって実証され得る。

【０２６５】 １以上の抗原機能を（Ｂリンパ球抗原機能（例えば、Ｂ７のような）を含むが
、限定されない）を下方調節するか、または妨げること（例えば、活性化Ｔ細胞
による高レベルのリンホカイン合成を妨げること）は、組織、皮膚および器官の
移植の状況、ならびに対宿主性移植片病（ＧＶＨＤ）において有用である。例え
ば、Ｔ細胞機能のブロックは、組織移植における組織破壊の減少を生じるはずで
ある。代表的に、組織移植において、移植片の拒絶は、Ｔ細胞によるその外来と
しての認識、それに続く移植片を破壊する免疫反応を介して開始される。移植前
に免疫細胞上でＢ７リンパ球抗原のその天然のリガンドとの相互作用を阻害また
はブロックする分子（例えば、Ｂ７−２活性を有するペプチドの可溶性モノマー
形態単独、あるいは別のＢリンパ球抗原（例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−３）または
ブロッキング抗体の活性を有するペプチドのモノマー形態との組み合わせ）は、
対応する同時刺激シグナルの移行を伴わずに、免疫細胞上でその分子の天然のリ
ガンドへの結合を導き得る。このような形態でＢリンパ球抗原機能をブロックす
ることは、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）によるサイトカイン合成を妨げ、従って
、免疫抑制剤として作用する。さらに、同時刺激の欠如はまた、Ｔ細胞を活性化
して、それによって被験体において寛容を誘導するのに十分であり得る。Ｂリン
パ球抗原ブロッキング試薬による長期の寛容の誘導は、これらのブロッキング試
薬の繰り返しの投与の必要性を回避し得る。被験体において十分な免疫抑制また
は寛容を達成するために、Ｂリンパ球抗原の機能をブロックすることが必要であ
り得る。

【０２６６】 器官移植片拒絶またはＧＶＨＤの予防における特定のブロッキング試薬の効力
は、ヒトにおける効力を予測する動物モデルを使用して評価され得る。使用され
得る適切な系の例としては、ラットにおける同種異系の心臓移植片およびマウス
における異種膵臓島細胞移植片が挙げられ、その両方は、Ｌｅｎｓｃｈｏｗら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５７：７８９−７９２（１９９２）およびＴｕｒｋａら、Ｐ
ｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、８９：１１１０２−１１１０５
（１９９２）に記載されるようなインビボでのＣＴＬＡ４Ｉｇ融合タンパク質の
免疫抑制効果を試験するために使用されている。さらに、ＧＶＤＨのマウスモデ
ル（Ｐａｕｌ編、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｒａｖｅｎ
Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８９、８４６〜８４７頁を参照のこと）
は、その疾患の発症に対する、インビボでのＢリンパ球抗原機能のブロックの効
果を決定するために使用され得る。

【０２６７】 ブロッキング抗原機能はまた、自己免疫疾患の処置に治療的に有用であり得る
。多くの自己免疫疾患は、自己組織に対して反応性であり、そしてその疾患の病
理に関係するサイトカインおよび自己抗体の産生を促進する、Ｔ細胞の不適切な
活性化の結果である。自己反応性Ｔ細胞の活性化の予防は、疾患の症状を軽減し
得るか、または排除し得る。Ｂリンパ球抗原のレセプター：リガンド相互作用を
破壊することによってＴ細胞の同時刺激をブロックする試薬の投与は、Ｔ細胞の
活性化を阻害し、そしてその疾患プロセスに関係し得る自己抗体またはＴ細胞誘
導性サイトカインの産生を妨げるために使用され得る。さらに、ブロッキング試
薬は、疾患の長期の軽減を導き得る自己反応性Ｔ細胞の抗原特異的寛容を誘導し
得る。自己免疫障害の予防または軽減におけるブロッキング試薬の効力は、ヒト
自己免疫疾患のよく特徴付けられた多くの動物モデルを使用して決定され得る。
例としては、マウス実験用自己免疫脳炎、ＭＲＬ／ｌｐｒ／ｌｐｒマウスまたは
ＮＺＢハイブリッドマウスにおける全身性エリテマトーデス、マウス自己免疫コ
ラーゲン関節炎、ＮＯＤマウスおよびＢＢラットにおける真性糖尿病、ならびに
マウス実験用重症筋無力症が挙げられる（Ｐａｕｌ編、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８
９、８４０〜８５６頁を参照のこと）。

【０２６８】 免疫応答を上方調節する手段として、抗原機能（好ましくは、Ｂリンパ球抗原
機能）の上方調節もまた、治療に有用であり得る。免疫応答の上方調節は、既存
の免疫応答を増強するか、または初期免疫応答を誘発する形態であり得る。例え
ば、Ｂリンパ球抗原機能の刺激を介して免疫応答を増強することは、ウイルス感
染の場合において有用であり得る。さらに、全身性ウイルス疾患（例えば、イン
フルエンザ、感冒および脳炎）は、Ｂリンパ球抗原の刺激形態の全身性投与によ
って軽減され得る。

【０２６９】 あるいは、抗ウイルス免疫応答は、患者からＴ細胞を除去し、本発明のペプチ
ドを発現するか、または本発明の可溶性ペプチドの刺激形態を伴うかのいずれか
の、ウイルス抗原でパルスしたＡＰＣで、このＴ細胞をインビトロで同時刺激し
、そして患者にこのインビトロ活性化Ｔ細胞を再導入することによって、感染患
者において増強され得る。抗ウイルス免疫応答を増強する別の方法は、患者から
感染細胞を単離し、本明細書中に記載されるような本発明のタンパク質をコード
する核酸を、この感染細胞にトランスフェクトして（その結果、これらの細胞が
その表面上にこのタンパク質の全てまたは一部を発現する）、そしてこのトラン
スフェクト細胞を患者に再導入することである。ここで、この感染細胞は、イン
ビボでＴ細胞に対して同時刺激シグナルを送達し、それによってＴ細胞を活性化
することが可能である。

【０２７０】 別の適用では、抗原機能（好ましくはＢリンパ球抗原機能）の上方調節または
増大が腫瘍免疫の誘導において有用であり得る。本発明の少なくとも１つのペプ
チドをコードする核酸をトランスフェクトされた腫瘍細胞（例えば、肉腫、黒色
腫、リンパ腫、白血病、神経芽細胞腫、癌腫）を、被験体中の腫瘍特異的寛容を
克服するために被験体に投与し得る。所望であれば、腫瘍細胞はトランスフェク
トされてペプチドの組み合わせを発現し得る。例えば、患者から得られた腫瘍細
胞に、Ｂ７−２−様活性を有するペプチド単独、またはＢ７−１−様活性および
／またはＢ７−３−様活性を有するペプチドを組み合わせて発現する発現ベクタ
ーを用いて、エクスビボでトランスフェクトし得る。このトランスフェクトされ
た腫瘍細胞は、患者に戻され、トランスフェクトされた細胞の表面上にペプチド
の発現を生じる。あるいは、遺伝子治療技法を用いて、インビボのトランスフェ
クションのために腫瘍細胞を標的化し得る。

【０２７１】 腫瘍細胞の表面上のＢ細胞リンパ球抗原の活性を有する本発明のペプチドの存
在は、Ｔ細胞に対して必要な同時刺激シグナルを提供し、トランスフェクトされ
た腫瘍細胞に対するＴ細胞媒介免疫応答を誘導する。さらに、ＭＨＣクラスＩま
たはＭＨＣクラスＩＩ分子を欠くか、または十分な量のＭＨＣクラスＩまたはＭ
ＨＣクラスＩＩ分子を再発現しない腫瘍細胞は、ＭＨＣクラスＩａ鎖タンパク質
およびβ₂マイクログロブリンタンパク質、またはＭＨＣクラスＩＩａ鎖タンパ
ク質およびＭＨＣクラスＩＩβ鎖タンパク質のすべてまたは一部（例えば、細胞
質−ドメイン短縮化部分）をコードする核酸でトランスフェクトされ得、それに
よって細胞表面上にＭＨＣクラスＩまたはＭＨＣクラスＩＩタンパク質を発現す
る。Ｂリンパ球抗原（例えば、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−３）の活性を有する
ペプチドと組み合わせた適切なクラスＩまたはクラスＩＩ ＭＨＣの発現は、ト
ランスフェクトされた腫瘍細胞に対するＴ細胞媒介性免疫応答を誘導する。必要
に応じて、不変鎖（ｉｎｖａｒｉａｎｔ ｃｈａｉｎ）のようなＭＨＣクラスＩ
Ｉ関連タンパク質の発現をブロックするアンチセンス構築物をコードする遺伝子
もまた、Ｂリンパ球抗原の活性を有するペプチドをコードするＤＮＡで同時トラ
ンスフェクトされ得、腫瘍関連抗原の提示を促進し、そして腫瘍特異的免疫を誘
導する。従って、ヒト被験体におけるＴ細胞媒介免疫応答の誘導は、被験体にお
ける腫瘍特異的寛容を十分に克服し得る。

【０２７２】 本発明のタンパク質の活性は、とりわけ、以下の方法により測定され得る：Ｃ
ＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ．Ｃｏｌｉｇ
ａｎら編、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎ
ｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（第３章、第７章）；Ｈｅｒｒｍａ
ｎｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ７８：２４８８−２
４９２、１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １２８：１９６
８−１９７４、１９８２；Ｈａｎｄａら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３５：１５６
４−１５７２、１９８５：Ｔａｋａｉら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３７：３４９
４−３５００、１９８６；Ｔａｋａｉら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４０：５０８
−５１２、１９８８；Ｈｅｒｒｍａｎｎら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓ
ｃｉ ＵＳＡ ７８：２４８８−２４９２、１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら、Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ １２８：１９６８−１９７４、１９８２；Ｈａｎｄａら、Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ １３５：１５６４−１５７２、１９８５；Ｔａｋａｉら、Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ １３７：３４９４−３５００、１９８６；Ｂｏｗｍａｎら、
Ｊ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６１：１９９２−１９９８；Ｔａｋａｉら、Ｊ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ １４０：５０８−５１２、１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら、Ｃ
ｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ １３３：３２７−３４１、１９９１；Ｂｒｏｗｎら、
Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５３：３０７９−３０９２、１９９４に記載のアッセイ
が挙げられるがこれらに限定されない、胸腺細胞または脾細胞の細胞傷害性のた
めの適切なアッセイ。

【０２７３】 Ｔ細胞依存性免疫グロブリン応答およびアイソタイプスイッチングのための（
特に、Ｔ細胞依存性抗体応答を調節し、しかもＴｈ１／Ｔｈ２プロフィールに影
響するタンパク質を同定する）アッセイとしては、Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ、Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ １４４：３０２８−３０３３、１９９０；ならびにＭｏｎｄ
およびＢｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＩＭ
ＭＵＮＯＬＯＧＹ、Ｃｏｌｉｇａｎら編、第１巻、３．８．１．−３．８．１６
、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｔｏｒｏｎｔｏ １９９４に記載
のようなアッセイが挙げられるがこれらに限定されない。

【０２７４】 混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（特に、優先的にＴｈ１およびＣＴＬ応
答を生成するタンパク質を同定するアッセイ）としては、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲ
ＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、Ｇｒｅｅ
ｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉ
ｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（第３章、第７章）；Ｔａｋａｉら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ １３７：３４９４−３５００、１９８６；Ｔａｋａｉら、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ １４０：５０８−５１２、１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら、Ｊ Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ １４９：３７７８−３７８３、１９９２に記載のアッセイが挙げら
れるがこれらに限定されない。

【０２７５】 樹状細胞依存性アッセイ（特に、ナイーブなＴ細胞を活性化する樹状細胞によ
り発現されるタンパク質を同定するアッセイ）としては、Ｇｕｅｒｙら、Ｊ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ １３４：５３６−５４４、１９９５；Ｉｎａｂａら、Ｊ Ｅｘｐ
Ｍｅｄ １７３：５４９−５５９、１９９１；Ｍａｃａｔｏｎｉａら、Ｊ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ １５４：５０７１−５０７９、１９９５；Ｐｏｒｇａｄｏｒら、
Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８２：２５５−２６０、１９９５；Ｎａｉｒら、Ｊ Ｖ
ｉｒｏｌ ６７：４０６２−４０６９、１９９３；Ｈｕａｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２６４：９６１−９６５、１９９４；Ｍａｃａｔｏｎｉａら、Ｊ．Ｅｘｐ
Ｍｅｄ １６９：１２５５−１２６４、１９８９；Ｂｈａｒｄｗａｊら、Ｊ Ｃ
ｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ ９４：７９７−８０７、１９９４；およびＩｎａｂ
ａら、Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７２：６３１−６４０、１９９０に記載のアッセ
イが挙げられるがこれらに限定されない。

【０２７６】 リンパ球生存／アポトーシスのためのアッセイ（特に、スーパー抗原誘導後に
アポトーシスを妨げるタンパク質およびリンパ球ホメオスタシスを調節するタン
パク質を同定する）としては、Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚら、Ｃｙｔｏｍｅｔ
ｒｙ １３：７９５−８０８、１９９２；Ｇｏｒｃｚｙｃａら、Ｌｅｕｋｅｍｉ
ａ ７：６５９−６７０、１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ ５３：１９４５−１９５１、１９９３；Ｉｔｏｈら、Ｃｅｌｌ ６６：２３
３−２４３、１９９１；Ｚａｃｈａｒｃｈｕｋ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４５：
４０３７−４０４５、１９９０；Ｚａｍａｉら、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １４：８
９１−８９７、１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら、Ｉｎｔｅｒｎａｔ Ｊ Ｏｎｃ
ｏｌ １：６３９−６４８、１９９２に記載のアッセイが挙げられるがこれらに
限定されない。

【０２７７】 Ｔ細胞の拘束および発生の初期段階に影響するタンパク質のアッセイとしては
、Ａｎｔｉｃａら、Ｂｌｏｏｄ ８４：１１１−１１７、１９９４；Ｆｉｎｅら
、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５５：１１１−１２２、１９９４；Ｇａｌｙら
、Ｂｌｏｏｄ ８５：２７７０−２７７８、１９９５；Ｔｏｋｉら、Ｐｒｏｃ
Ｎａｔ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：７５４８−７５５１、１９９１に記
載のアッセイが挙げられるがこれらに限定されない。

【０２７８】 （造血調節活性） 本発明のＳＥＣＸタンパク質は、造血の調節において、そして結果として骨髄
細胞不全またはリンパ球細胞不全の処置において有用であり得る。コロニー形成
性細胞または因子依存性細胞株を支援する周縁の生物学的活性でさえ、造血を調
節することにおける、例えば、単独またはその他のサイトカインとの組み合わせ
で、赤血球系前駆体細胞の成長および増殖を支援することにおける関与を示し、
それによって、例えば、種々の貧血を処置することにおけるか、または赤血球系
前駆体細胞および／または赤血球細胞の産生を刺激するための照射／化学的療法
と組み合わせた使用のための有用性；例えば、結果として骨髄抑制を防ぐかまた
は処置するための化学的療法と組み合わせて有用な、骨髄細胞（例えば、顆粒球
および単球／マクロファージ）の成長および増殖を支持する（すなわち伝統的な
ＣＳＦ活性）ことにおける有用性；巨核球そして結果として血小板の成長および
増殖を支持し、それによって血小板減少症のような種々の血小板障害の予防また
は処置を可能にすること、そして一般に、血小板輸血に代わる使用か、またはそ
れへの優待のための有用性；および／または上記の任意および全ての造血幹細胞
に成熟し得、そしてそれ故、種々の幹細胞障害（再生不良性貧血および発作性夜
行性ヘモグロビン尿を含むがこれらに限定されない、通常、移植で処置されるよ
うな障害）における治療有用性を見出す、造血幹細胞の成長および増殖を支持す
ることにおける有用性、ならびに正常細胞または遺伝子治療のために遺伝子操作
された細胞として、インビボまたはエキソビボ（すなわち、骨髄移植または末梢
前駆体細胞移植（同種または異種）と組み合わせた）のいずれかで、照射／化学
的療法後に幹細胞区画を再増殖させることにおける有用性を示す。

【０２７９】 本発明のタンパク質の活性は、特に、以下の方法により測定され得る： 種々の造血株の増殖および分化の適切なアッセイは上記で引用される。

【０２８０】 胚幹細胞分化のアッセイ（特に、胚分化造血に影響するタンパク質を同定する
アッセイ）は、制限されずに：Ｊｏｈａｎｓｓｏｎら、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １
５：１４１−１５１、１９９５；Ｋｅｌｌｅｒら、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ
１３：４７３−４８６、１９９３；ＭｃＣｌａｎａｈａｎら、Ｂｌｏｏｄ ８
１：２９０３−２９１５、１９９３に記載のアッセイを含む。

【０２８１】 幹細胞生存および分化のアッセイ（特にリンパ−造血を調節するタンパク質を
同定するアッセイ）は、制限されずに：メチルセルロースコロニー形成アッセイ
、ＣＵＬＴＵＲＥ ＯＦ ＨＥＭＡＴＯＰＯＩＥＴＩＣ ＣＥＬＬＳ．Ｆｒｅｓ
ｈｎｅｙら、編、Ｖｏｌ ２６５−２６８頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ １９９４における、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、；Ｈｉｒａ
ｙａｍａら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：５９０７
−５９１１、１９９２；ＣＵＬＴＵＲＥ ＯＦ ＨＥＭＡＴＯＰＯＩＥＴＩＣ
ＣＥＬＬＳ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら、編、Ｖｏｌ ２３−３９頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌ
ｉｓｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ １９９４における、ＭｃＮｉｅｃ
ｅおよびＢｒｉｄｄｅｌｉ；Ｎｅｂｅｎら、Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ ２２：３
５３−３５９、１９９４；ＣＵＬＴＵＲＥ ＯＦ ＨＥＭＡＴＯＰＯＩＥＴＩＣ
ＣＥＬＬＳ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙら、編、Ｖｏｌ １−２１頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌ
ｉｓｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ １９９４における、Ｐｌｏｅｍａ
ｃｈｅｒ；ＣＵＬＴＵＲＥ ＯＦ ＨＥＭＡＴＯＰＯＩＥＴＩＣ ＣＥＬＬＳ．
Ｆｒｅｓｈｎｅｙら、編、Ｖｏｌ １６３−１７９頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，
Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ １９９４における、Ｓｐｏｏｎｃｅｒｅｔ
ら；ＣＵＬＴＵＲＥ ＯＦ ＨＥＭＡＴＯＰＯＩＥＴＩＣ ＣＥＬＬＳ．Ｆｒｅ
ｓｈｎｅｙら、編、Ｖｏｌ １３９−１６２頁、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ
．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ １９９４における、Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ、に記
載のアッセイを含む。

【０２８２】 （組織増殖活性） 本発明のＳＥＣＸタンパク質はまた、骨、軟骨、腱、靭帯および／または神経
組織成長または再生のために使用される組成物、ならびに創傷治癒および組織修
復および組織置換のために使用される組成物、そして火傷、切開および潰瘍の処
置における有用性を有し得る。

【０２８３】 本発明のタンパク質は、骨が正常に形成されない状況で軟骨および／または骨
増殖を誘導し、ヒトおよびその他の動物における骨折および軟骨損傷または欠損
の治癒における適用を有する。本発明のタンパク質を採用するこのような調製物
は、閉鎖骨折整復および開放骨折整復における予防的使用、そしてまた人工関節
の改善された固定における使用を有し得る。骨形成剤により誘導されたデノボ骨
形成は、先天的、外傷誘導、または腫瘍切除誘導脳顔面頭蓋欠陥の修復に寄与し
、そしてまた美容成形手術に有用である。

【０２８４】 本発明のタンパク質はまた、歯周病の処置において、およびその他の歯修復プ
ロセスで用いられ得る。このような薬剤は、骨形成性細胞を誘因するか、骨形成
性細胞の増殖を刺激するか、骨形成性細胞の前駆体の分化を誘導する環境を提供
し得る。本発明のタンパク質はまた、骨および／または軟骨修復の刺激によるか
、または炎症プロセスにより媒介される組織破壊の炎症またはプロセス（コラゲ
ナーゼ活性、破骨細胞活性など）をブロックすることによるような、骨粗鬆症ま
たは変形性関節炎の処置で有用であり得る。

【０２８５】 本発明のタンパク質に寄与し得る組織再生活性の別のカテゴリーは、腱／靭帯
形成である。このような組織が通常形成されない状況で、腱／靭帯様組織または
その他の組織形成を誘導する本発明のタンパク質は、ヒトおよびその他の動物に
おける、腱または靭帯断裂、変形およびその他の腱または靭帯欠陥の治癒におけ
る適用を有する。腱／靭帯様組織誘導性タンパク質を採用するこのような調製物
は、腱または靭帯組織への損傷を防ぐことにおける予防的使用、ならびに腱また
は靭帯の骨またはその他の組織の改善された固定、および腱または靭帯組織への
欠陥を修復することにおける使用を有し得る。本発明の組成物により誘導される
デノボの腱／靭帯様組織形成は、先天的、外傷誘導、またはその他の起源のその
他の腱または靭帯欠陥の修復に寄与し、そしてまた腱または靭帯の付着または修
復のための美容成形手術で有用である。本発明の組成物は、腱形成性細胞または
靭帯形成性細胞を誘引するか、腱形成性細胞または靭帯形成性細胞の増殖を刺激
するか、腱形成性細胞または靭帯形成性細胞の前駆体の分化を誘導するか、また
は組織修復を行うためにインビボに戻すためにエキソビボで腱／靭帯の細胞また
は前駆体の増殖を誘導する環境を提供し得る。本発明の組成物はまた、腱炎、毛
根管症候群およびその他の腱または靭帯欠陥の処置において有用であり得る。こ
の組成物はまた、当該分野で周知であるキャリアとして、適切なマトリックスお
よび／または金属イオン封鎖剤を含み得る。

【０２８６】 本発明のタンパク質はまた、ニューロン細胞の増殖のため、および神経および
脳組織の再生のために、すなわち、中枢神経系疾患および末梢神経系疾患および
神経障害、ならびにニューロン細胞または神経組織への変性、死滅または外傷を
含む機械的および外傷障害の処置のために有用であり得る。より詳細には、タン
パク質は、末梢神経損傷、末梢神経障害および局所神経障害のような末梢神経系
の疾患、ならびにアルツハイマー病，パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮
側索硬化症、およびシャイ−ドレーガー症候群のような中枢神経系の疾患の処置
で用いられ得る。本発明に従って処置され得るさらなる症状は、脊髄障害，頭部
外傷および発作のような脳血管性疾患のような機械的および外傷的障害を含み得
る。化学的療法またはその他の医療治療から生じる抹消神経障害もまた、本発明
のタンパク質を用いて治療可能であり得る。

【０２８７】 本発明のタンパク質はまた、圧迫性潰瘍、血管不全に関連する潰瘍、手術また
は外傷創傷などを含むがこれらに限定されない非治癒創傷のより良好な、または
より迅速な閉鎖を促進するために有用であり得る。

【０２８８】 本発明のタンパク質がまた、器官（例えば、膵臓、肝臓、腸、腎臓、皮膚、内
皮を含む）、筋肉（平滑筋、骨格筋または心筋）および血管（血管内皮を含む）
組織のようなその他の組織の生成または再生に、またはこのような組織を含む細
胞の増殖を促進するために活性を示し得ることが予想される。所望の効果の一部
分は、繊維症瘢痕の阻害または調整によってであり得、正常組織を再生させる。
本発明のタンパク質はまた、血管形成活性を示し得る。

【０２８９】 本発明のタンパク質はまた、腸の保護または再生のため、および肺若しくは肝
臓の繊維症、種々の組織における再灌流傷害、および全身サイトカイン損傷から
生じる症状の処置のために有用であり得る。

【０２９０】 本発明のタンパク質はまた、前駆体組織または細胞から上記の組織の分化を促
進若しくは阻害するため；または上記の組織の増殖を阻害するために有用であり
得る。

【０２９１】 本発明のタンパク質の活性はまた、特に、以下の方法により測定され得る： 組織生成活性のためのアッセイは、制限されずに：国際特許公開番号ＷＯ９５
／１６０３５（骨、軟骨、腱）；国際特許公開番号ＷＯ９５／０５８４６（神経
、ニューロン）；国際特許公開番号ＷＯ９１／０７４９１（皮膚、内皮）に記載
されるアッセイを含む。

【０２９２】 創傷治癒活性のためのアッセイは、制限されずに：Ｅａｇｌｓｔｅｉｎおよび
Ｍｅｎｚ、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ ７１：３８２−８４（１９７
８）によって改変されるような、Ｗｉｎｔｅｒ、Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ Ｗｏｕｎ
ｄ Ｈｅａｌｉｎｇ、７１−１１２頁（ＭａｉｂａｃｈおよびＲｏｖｅｅ編）、
Ｙｅａｒ Ｂｏｏｋ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｉｎｃ．、Ｃｈ
ｉｃａｇｏに記載のアッセイを含む。

【０２９３】 （アクチビン／インヒビン活性） 本発明のＳＥＣＸタンパク質はまた、アクチビン関連活性またはインヒビン関
連活性を示し得る。インヒビンは、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の放出を阻害す
るその能力によって特徴付けられ、一方、アクチビンは、卵胞刺激ホルモン（Ｆ
ＳＨ）の放出を刺激するその能力によって特徴付けられる。従って、本発明のタ
ンパク質は、単独またはインヒビンファミリーのメンバーとのヘテロ二量体にお
いて、雌性哺乳動物における受胎能を減少し、そして雄性哺乳動物における精子
形成を減少するインヒビンの能力に基づく避妊薬として有用であり得る。他のイ
ンヒビンの十分な量の投与は、これら哺乳動物における不妊症を誘導し得る。あ
るいは、本発明のタンパク質は、ホモ二量体としてか、またはインヒビンｂ群の
他のタンパク質サブユニットとのヘテロ二量体として、下垂体前葉の細胞からの
ＦＳＨ放出を刺激するアクチビン分子の能力に基づいて、受胎能誘導治療として
有用であり得る。例えば、米国特許第４，７９８，８８５号を参照のこと。本発
明のタンパク質はまた、ウシ、ヒツジ、およびブタのような家畜の一生の生殖効
率を増加するように、性的に未熟な哺乳動物における受胎能の開始の促進のため
に有用であり得る。

【０２９４】 本発明のタンパク質の活性は、とりわけ、以下の方法によって測定され得る： アクチビン／インヒビン活性のアッセイとしては、以下に記載されるものが挙
げられるが、これらに限定されない：Ｖａｌｅら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ
９１：５６２〜５７２、１９７２；Ｌｉｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：７７
９〜７８２、１９８６；Ｖａｌｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：７７６〜７７９、
１９８６；Ｍａｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３１８：６５９〜６６３、１９８５；
Ｆｏｒａｇｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：３０
９１〜３０９５、１９８６。

【０２９５】 （走化性／ケモキネシス活性） 本発明のタンパク質は、哺乳動物細胞（例えば、単球、線維芽細胞、好中球、
Ｔ細胞、肥満細胞、好酸球、上皮細胞および／または内皮細胞を含む）について
の走化性またはケモキネシス活性（例えば、ケモカインとして作用する）を有し
得る。走化性およびケモキネシスタンパク質を使用して、所望の細胞集団を所望
の作用部位に動員または誘引し得る。走化性またはケモキネシスタンパク質は、
組織に対する創傷および他の外傷の処置、ならびに局所的感染の処置において、
特に利点を提供する。例えば、リンパ球、単球または好中球の、腫瘍または感染
部位への誘引は、腫瘍または感染因子に対する改善された免疫応答を生じ得る。

【０２９６】 タンパク質またはペプチドは、それが直接的または間接的に、特定の細胞集団
の指向された方向付けまたは移動を刺激し得る場合、そのような細胞集団につい
て走化性活性を有する。好ましくは、タンパク質またはペプチドは、細胞の移動
を直接刺激する能力を有する。特定のタンパク質が細胞の集団について走化性活
性を有するか否かは、細胞の走化性についての任意の公知のアッセイにおいて、
そのようなタンパク質またはペプチドを使用することによって、容易に決定され
得る。

【０２９７】 本発明のタンパク質の活性は、とりわけ、以下の方法によって測定され得る。
走化性活性についてのアッセイ（走化性を誘導するか、または妨げるタンパク質
を同定する）は、細胞の膜を横切っての移動を誘導するタンパク質の能力、なら
びに１つの細胞集団の別の細胞集団に対する接着を誘導するタンパク質の能力を
測定するアッセイからなる。移動および接着についての適切なアッセイとしては
以下に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されない：ＣＵＲＲＥＮＴ
ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、Ｃｏｌｉｇａｎら編（第
６．１２章、Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｌｐｈａ ａｎｄ ｂｅｔａ
Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ６．１２．１〜６．１２．２８）；Ｔａｕｂら、Ｊ Ｃ
ｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ ９５：１３７０〜１３７６、１９９５；Ｌｉｎｄら、Ａ
ＰＭＩＳ １０３：１４０〜１４６、１９９５；Ｍｕｌｌｅｒら、Ｅｕｒ Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ ２５：１７４４〜１７４８；Ｇｒｕｂｅｒｅｔら、Ｊ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ １５２：５８６０〜５８６７、１９９４；Ｊｏｈｎｓｔｏｎら、Ｊ
Ｉｍｍｕｎｏｌ １５３：１７６２〜１７６８、１９９４。

【０２９８】 （うっ血活性および血栓崩壊活性） 本発明のタンパク質はまた、うっ血活性または血栓崩壊活性を示し得る。結果
として、そのようなタンパク質は、種々の凝固障害（血友病のような遺伝性疾患
を含む）の処置において有用であること、または凝固および外傷、外科手術また
は他の原因によって生じる創傷の処置における他のうっ血事象を促進することが
予測される。本発明のタンパク質はまた、血栓症の溶解または形成阻害のため、
およびそこから生じる状態（例えば、心臓血管および中枢神経系血管の梗塞（例
えば、発作））の処置および予防のために有用であり得る。

【０２９９】 本発明のタンパク質の活性は、とりわけ、以下の方法によって測定され得る。
うっ血および血栓崩壊活性のアッセイとしては、以下に記載されるものが挙げら
れるが、これらに限定されない：Ｌｉｎｅｔら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｌ．２６：１３１〜１４０、１９８６；Ｂｕｒｄｉｃｋら、Ｔｈｒｏｍｂｏｓ
ｉｓ Ｒｅｓ．４５：４１３〜４１９、１９８７；Ｈｕｍｐｈｒｅｙら、Ｆｉｂ
ｒｉｎｏｌｙｓｉｓ ５：７１〜７９（１９９１）；Ｓｃｈａｕｂ、Ｐｒｏｓｔ
ａｇｌａｎｄｉｎｓ ３５：４６７〜４７４、１９８８。

【０３００】 （レセプター／リガンド活性） 本発明のタンパク質はまた、レセプター、レセプターリガンドまたはレセプタ
ー／リガンド相互作用のインヒビターもしくはアゴニストとしての活性を実証し
得る。そのようなレセプターおよびリガンドの例としては、限定することなく、
サイトカインレセプターおよびそのリガンド、レセプターキナーゼおよびそのリ
ガンド、レセプターホスファターゼおよびそのリガンド細胞間相互作用に関与す
るレセプターおよびそのリガンド（限定することなく、細胞接着分子（セレクチ
ン、インテグリンおよびそのリガンド）、ならびに抗原提示、抗原認識および細
胞性免疫応答および液性免疫応答の発生に関与するレセプター／リガンド対を含
む）が挙げられる。レセプターおよびリガンドはまた、関連するレセプター／リ
ガンド相互作用の可能性のあるペプチドまたは低分子インヒビターのスクリーニ
ングにおいて有用である。本発明のタンパク質（限定することなく、レセプター
およびリガンドのフラグメントを含む）が、それ自体で、レセプター／リガンド
相互作用のインヒビターとして有用であり得る。

【０３０１】 本発明のタンパク質の活性は、とりわけ、以下の方法によって測定され得る。
レセプター−リガンド活性の適切なアッセイとしては、限定することなく、以下
に記載されるものが挙げられる：ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ
ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、Ｃｏｌｉｇａｎら編、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉ
ｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ
（第７．２８章、Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ａｄｈｅ
ｓｉｏｎ ｕｎｄｅｒ ｓｔａｔｉｃ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ７．２８．１−
７．２８．２２）、Ｔａｋａｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ８４：６８６４〜６８６８、１９８７；Ｂｉｅｒｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ．１６８：１１４５〜１１５６、１９８８；Ｒｏｓｅｎｓｔｅｉｎら、Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６９：１４９〜１６０ １９８９；Ｓｔｏｌｔｅｎｂｏｒｇ
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １７５：５９〜６８、１９９４；Ｓ
ｔｉｔｔら、Ｃｅｌｌ ８０：６６１〜６７０、１９９５。

【０３０２】 （抗炎症活性） 本発明のタンパク質はまた、抗炎症活性を示し得る。抗炎症活性は、炎症応答
に関与する細胞に対する刺激を提供すること（細胞間相互作用（例えば、細胞接
着）を阻害するか、または促進することによって）によってか、炎症プロセスに
関与する細胞の走化性を阻害するか、または促進することによってか、細胞の血
管外遊出を阻害するか、または促進するかによってか、あるいは炎症応答を直接
的により阻害するか、またはより促進する他の因子の産生を刺激するか、または
抑制することによって、達成され得る。そのような活性を示すタンパク質を使用
して、炎症状態（慢性状態または急性状態を含む）（限定することなく、感染に
関連する炎症（例えば、敗血症性ショック、敗血症または全身性炎症応答症候群
（ＳＩＲＳ））、虚血−灌流損傷、内毒素の致死性、関節炎、補体媒介性激症拒
絶症、腎炎、サイトカイン誘導性胚損傷またはケモカイン誘導性胚損傷、炎症性
腸疾患、クローン病、またはＴＮＦもしくはＩＬ−１のようなサイトカインの過
剰産生より生じるものが挙げられる）を処置し得る。本発明のタンパク質はまた
、抗原性物質または抗原性材料に対する、アナフィラキシーおよび過敏症の処置
のためにも、有用であり得る。

【０３０３】 （腫瘍阻害活性） 腫瘍の免疫学的処置または予防について上記に記載された活性に加えて、本発
明のタンパク質は、他の抗腫瘍活性を示し得る。タンパク質は、直接的または間
接的（例えば、ＡＤＣＣを介して）腫瘍増殖を阻害し得る。タンパク質は、腫瘍
組織または腫瘍前駆体組織に作用することによって、腫瘍増殖を支持するために
必要な組織の形成を阻害することによって（例えば、新脈管形成を阻害すること
によって）、腫瘍増殖を阻害する他の因子、物質または細胞型の産生を生じるこ
とによって、あるいは腫瘍増殖を促進する因子、物質または細胞型を、抑制、除
去または阻害することによって、その腫瘍阻害活性を示し得る。

【０３０４】 （他の活性） 本発明のタンパク質はまた、以下のさらなる活性または効果の１つ以上を示し
得る：限定はされないが、細菌、ウイルス、真菌および他の寄生生物を含む感染
因子の、増殖、感染または機能を阻害するか、あるいは死滅させること；身体的
特徴（限定することなく身長、体重、髪の色、目の色、皮膚、赤肉に対する脂肉
の比、または他の組織色素沈着、あるいは器官または身体部分のサイズまたは形
状（例えば、胸部増大または減少、骨の形態または形状の変化）が挙げられる）
を生じること（抑制することまたは増強すること）；バイオリズムあるいはサー
カディアンサイクルまたはサーカディアンリズムを生じること；雄性被験体また
は雌性被験体の受胎能を生じること；食事脂肪、脂質、タンパク質、炭水化物、
ビタミン、ミネラル、補因子または他の栄養因子もしくは栄養成分の、代謝、異
化作用、同化作用、プロセシング、利用、貯蔵または除去を生じること；行動的
特徴（食欲、性欲、ストレス、認識（認識障害を含む）、うつ病（抑うつ障害を
含む）および狂暴症を含むが、これらに限定されない）を生じること；鎮痛性効
果または他の疼痛減少効果を提供すること；造血系列以外の系列における胚性幹
細胞の分化または増殖を促進すること；ホルモン活性または内分泌活性；酵素の
場合、酵素の欠損を矯正すること、および欠損関連疾患を処置すること；過剰増
殖障害（例えば、乾癬）の処置；免疫グロブリン様活性（例えば、抗原または補
体に結合する活性）；ならびにワクチン組成物において抗原として作用し、その
ようなタンパク質または他の物質あるいはそのようなタンパク質と交差反応する
実体に対する免疫応答を惹起する能力。

【０３０５】 （予測医療） 本発明はまた、診断アッセイ、予後アッセイ、薬物ゲノム（ｐｈａｒｍａｃｏ
ｇｅｎｏｍｉｃｓ）およびモニタリング臨床試験が、予後（予測）の目的に使用
され、これによって個体を予防的に処置する、予測医療の分野に関する。従って
、本発明の１つの局面は、ＳＥＣＸタンパク質および／または核酸の発現、なら
びにＳＥＣＸの活性を、生物学的サンプル（例えば、血液、血清、細胞、組織）
の関連で決定し、これによって、異常なＳＥＣＸの発現または活性に関連して、
個体が疾患または障害に罹患するかどうか、あるいは障害を発症するリスクがあ
るかどうかを決定する。本発明はまた、個体が、ＳＥＣＸのタンパク質、核酸の
発現または活性と関連した障害を発症するリスクがあるかどうかを決定するため
の予後的（または予測的）アッセイを提供する。例えば、ＳＥＣＸの遺伝子にお
ける変異が、生物学的サンプルにおいてアッセイされ得る。このようなアッセイ
は、予後的または予測的な目的に使用され得、これによってＳＥＣＸのタンパク
質、核酸の発現または活性によって特徴付けられるかまたは関連した障害の発病
の前に個体を予防的に処置する。

【０３０６】 本発明の別の局面は、個体におけるＳＥＣＸのタンパク質、核酸の発現あるい
はＳＥＣＸの活性を決定するための方法を提供し、これによって、その個体につ
いての適切な治療的または予防的試薬（本明細書において「薬物ゲノム」とよば
れる）を選択する。薬物ゲノムは、個体の遺伝型（例えば、特定の試薬に対して
応答する個体の能力を決定するために試験された個体の遺伝型）に基づいて個体
の治療的または予防的処置のための試薬（例えば、薬物）の選択を可能にする。

【０３０７】 本発明のなお別の局面は、臨床試験におけるＳＥＣＸの発現または活性に対す
る試薬（例えば、薬剤、化合物）の影響をモニタリングすることに関する。

【０３０８】 これらおよび他の試薬は、以下の節でさらに詳細に記載される。

【０３０９】 （診断アッセイ） 生物学的サンプルにおけるＳＥＣＸの存在または非存在を検出するための例示
的な方法は、試験被験体から生物学的サンプルを得る工程、およびその生物学的
サンプルをＳＥＣＸのタンパク質またはＳＥＣＸタンパク質をコードする核酸（
例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ）を検出し得る化合物もしくは薬剤とを接触さ
せ、その結果、ＳＥＣＸの存在が、その生物学的サンプルにおいて検出される、
工程を包含する。ＳＥＣＸのｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡを検出するための薬
剤は、ＳＥＣＸ ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡにハイブリダイズし得る、標識
された核酸プローブである。この核酸プローブは、例えば、全長のＳＥＣＸの核
酸もしくはその部分の核酸（例えば、少なくとも、１５、３０、５０、１００、
２５０もしくは５００ヌクレオチド長のオリゴヌクレオチドであり、ストリンジ
ェントな条件下でＳＥＣＸのｍＲＮＡまたはゲノムＤＮＡと特異的にハイブリダ
イズするに十分である核酸）であり得る。本発明の診断アッセイにおける使用の
ための他の適切なプローブは本明細書において記載されている。

【０３１０】 ＳＥＣＸのタンパク質を検出するための薬剤は、ＳＥＣＸのタンパク質に結合
し得る抗体であり、好ましくは、検出可能な標識を有する抗体である。抗体は、
ポリクローナルであり得るか、またはより好ましくはモノクローナル抗体であり
得る。インタクトな抗体またはそのフラグメント（例えば、ＦａｂまたはＦ（ａ
ｂ’）₂）が使用され得る。用語「標識（された）」とは、プローブまたは抗体
に関して、検出可能な物質をそのプローブもしくは抗体にカップリングさせる（
すなわち、物理的に連結する）ことによってそのプローブまたは抗体を直接標識
すること、ならびに、直接標識された別の試薬との反応性によってそのプローブ
もしくは抗体の間接的な標識をすることを包含することが意図される。間接的な
標識の例としては、蛍光標識された二次抗体を用いた一次抗体の検出、および蛍
光標識されたストレプトアビジンを用いて検出され得るようにＤＮＡプローブの
ビオチンを用いた末端標識が挙げられる。用語「生物学的サンプル」とは、被験
体から単離された、組織、細胞および生物学的流体ならびに被験体に存在する組
織、細胞および流体を含むことが意図される。すなわち、本発明の検出方法を用
いて、ＳＥＣＸのｍＲＮＡ、タンパク質またはゲノムＤＮＡを、生物学的サンプ
ル中で、インビトロおよびインビボで検出し得る。例えば、ＳＥＣＸのｍＲＮＡ
の検出のためのインビトロ技術としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよ
びインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。ＳＥＣＸのタンパク質の
検出のためのインビトロ技術としては、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ
）、ウェスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光が挙げられる。ＳＥＣＸのゲ
ノムＤＮＡを検出するためのインビトロ技術としては、サザンハイブリダイゼー
ションが挙げられる。さらに、ＳＥＣＸのタンパク質の検出のためのインビボ技
術としては、標識された抗ＳＥＣＸ抗体を被験体に導入することが挙げられる。
例えば、その抗体は、放射性マーカーを用いて標識され得る。被験体における放
射性マーカーの存在および位置は、標準的な画像化技術によって検出され得る。

【０３１１】 １つの実施形態において、この生物学的サンプルは、その試験被験体からのタ
ンパク質分子を含む。あるいは、その生物学的サンプルは、その試験被験体から
のｍＲＮＡ分子またはその試験被験体からのゲノムＤＮＡ分子を含み得る。好ま
しい生物学的サンプルは、被験体から従来の手段によって単離された末梢血白血
球サンプルである。

【０３１２】 別の実施形態において、本発明の方法はさらに、コントロール被験体からコン
トロール生物学的サンプルを得る工程、そのコントロールサンプルを、ＳＥＣＸ
のタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡを検出し得る化合物もしくは薬剤
と接触させ、その結果、ＳＥＣＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡ
の存在がその生物学的サンプルにおいて検出される、工程、およびそのコントロ
ールサンプルにおけるＳＥＣＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲノムＤＮＡの
存在と、その試験サンプルにおけるＳＥＣＸのタンパク質、ｍＲＮＡもしくはゲ
ノムＤＮＡの存在とを比較する工程を包含する。

【０３１３】 本発明はまた、生物学的サンプルにおけるＳＥＣＸの存在を検出するためのキ
ットを包含する。例えば、このキットは、以下を備え得る：生物学的サンプルに
おいてＳＥＣＸのタンパク質またはｍＲＮＡを検出し得る、標識された化合物も
しくは薬剤；そのサンプルにおいてＳＥＣＸの量を決定するための手段；および
そのサンプルにおいて、標準と、ＳＥＣＸの量とを比較するための手段。この化
合物または薬剤は、適切な容器内に包装され得る。このキットは、さらに、ＳＥ
ＣＸのタンパク質または核酸を検出するためにキットを用いるための指示書を備
え得る。

【０３１４】 （予後アッセイ） 本明細書において記載された診断方法をさらに利用して、ＳＥＣＸの異常発現
または異常活性に関連した疾患もしくは障害を有するかまたはその発症の危険に
ある被験体を同定し得る。例えば、本明細書に記載されるアッセイ（例えば、上
述の診断アッセイまたは下記のアッセイ）を利用して、ＳＥＣＸのタンパク質、
核酸の発現または活性に関連する障害（例えば、癌または線維症障害）あるいは
、上記の節１−１４に記載されるような、個体におけるＳＥＣＸ特異的疾患を有
するかまたはその発症の危険に有る被験体を同定し得る。あるいは、この予後ア
ッセイを利用して、疾患または障害を有するかまたはその発症の危険に有る被験
体を同定し得る。従って、本発明は、ＳＥＣＸの異常発現または異常活性に関連
する疾患もしくは障害を同定するための方法を提供する。ここで、試験サンプル
は、被験体から得られ、そしてＳＥＣＸのタンパク質または核酸（例えば、ｍＲ
ＮＡ、ゲノムＤＮＡ）が検出され、ここで、ＳＥＣＸのタンパク質または核酸の
存在は、ＳＥＣＸの異常発現または異常活性に関連する疾患または障害を有する
かまたはその発症の危険にある被験体についての診断指標である。本明細書にお
いて使用される「試験サンプル」とは、目的の被験体から得られた生物学的サン
プルをいう。例えば、試験サンプルは、生物学的流体（例えば、血清）、細胞サ
ンプル、または組織であり得る。

【０３１５】 さらに、本明細書に記載される予後アッセイを使用して、被験体が薬剤（例え
ば、アゴニスト、アンタゴニスト、ペプチド模倣物、タンパク質、ペプチド、核
酸、低分子、または他の薬物候補）が投与されてＳＥＣＸの異常発現または異常
活性に関連する疾患または障害を処置し得るか否かを決定し得る。例えば、その
ような方法を用いて、被験体が疾患（例えば、癌または子癇前症（ｐｒｅｃｌａ
ｍｐｓｉａ）あるいは、上記の節１−１４に記載されるような、個体におけるＳ
ＥＣＸ特異的疾患）について薬剤を用いて有効に処置され得るか否かを決定し得
る。従って、本発明は、ＳＥＣＸの異常発現または異常活性に関連する障害につ
いての薬剤を用いて被験体が有効に処置され得るか否かを決定するための方法を
提供する。ここで、試験サンプルが得られ、そしてＳＥＣＸのタンパク質または
核酸が検出される（例えば、ここで、ＳＥＣＸのタンパク質または核酸の存在は
、ＳＥＣＸの異常発現または異常活性に関連する障害を処置するための薬剤をそ
の被験体に投与し得ることについての診断指標である）。

【０３１６】 本発明の方法はまた、ＳＥＣＸの遺伝子における遺伝的損傷を検出し、それに
よって、その損傷遺伝子を有する被験体が異常な細胞増殖および／または分化に
よって特徴付けられる障害についての危険に有るか否かを決定するためにも使用
され得る。種々の実施形態において、本発明の方法は、その被験体からの細胞の
サンプルにおいて、ＳＥＣＸのタンパク質をコードする遺伝子の統合性に影響を
与える変更の少なくとも１つによって特徴付けられる遺伝的損傷、あるいはＳＥ
ＣＸの遺伝子の誤発現の存在または非存在を検出する工程を包含する。例えば、
そのような遺伝的損傷は、以下の少なくとも１つの存在を確認することによって
検出され得る：（１）ＳＥＣＸの遺伝子からの１つ以上のヌクレオチドの欠失；
（２）ＳＥＣＸの遺伝子への１つ以上のヌクレオチドの付加；（３）ＳＥＣＸの
遺伝子の１つ以上のヌクレオチドの置換、（４）ＳＥＣＸの遺伝子の染色体再配
置；（５）ＳＥＣＸの遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物のレベルにおける変
更、（６）ＳＥＣＸの遺伝子の異常改変（例えば、ゲノムＤＮＡのメチル化パタ
ーンの異常改変）、（７）ＳＥＣＸの遺伝子のメッセンジャーＲＮＡ転写物の非
野生型スプライシングパターンの存在、（８）ＳＥＣＸのタンパク質の非野生型
レベル、（９）ＳＥＣＸの遺伝子の対立遺伝子の欠失、ならびに（１０）ＳＥＣ
Ｘのタンパク質の不適切な翻訳後修飾。本明細書において記載されるように、当
該分野において、多数の公知のアッセイ技術が存在し、これらは、ＳＥＣＸの遺
伝子における損傷を検出するために使用され得る。好ましい生物学的サンプルは
、従来手段によって被験体から単離された末梢血白血球サンプルである。しかし
、有核細胞を含む任意の生物学的サンプルが使用され得、これには、例えば、頬
粘膜細胞が挙げられる。

【０３１７】 特定の実施形態において、損傷の検出は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に
おけるプローブ／プライマーの使用を包含する（例えば、米国特許第４，６８３
，１９５号および同４，６８３，２０２号を参照のこと）（例えば、アンカーＰ
ＣＲまたはＲＡＣＥ ＰＣＲ）あるいは、連結連鎖反応（ＬＣＲ）（例えば、Ｌ
ａｎｄｅｇｒａｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：１０７７−１０８０
；およびＮａｋａｚａｗａら（１９９４）ＰＮＡＳ ９１：３６０−３６４）を
参照のこと。後者は、ＳＥＣＸの遺伝子における点変異を検出するために特に有
用であり得る）（Ａｂｒａｖａｙａら（１９９５）Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２３：６７５−６８２を参照のこと）。この方法は、患者
から細胞のサンプルを収集する工程、核酸（例えば、ゲノム、ｍＲＮＡまたはそ
の両方）をそのサンプルの細胞から単離する工程、ＳＥＣＸの遺伝子に特異的に
ハイブリダイズする１つ以上のプライマーと、その核酸サンプルとをＳＥＣＸの
遺伝子のハイブリダイゼーションおよび増幅が（存在する場合）生じるような条
件下で、接触させる工程、ならびに増幅産物の存在もしくは非存在を検出する工
程、またはその増幅産物の大きさを検出する工程およびその大きさをコントロー
ルサンプルと比較する工程を包含し得る。ＰＣＲおよび／またはＬＣＲは、本明
細書に記載される変異を検出するために使用される技術のいずれかとともに予備
的増幅工程として使用されるために所望され得ることが予想される。

【０３１８】 代替的な増幅方法としては、以下が挙げられる：自己維持配列複製（Ｇｕａｔ
ｅｌｌｉら、１９９０、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８７
：１８７４−１８７８）、転写増幅系（Ｋｗｏｈ、ら、１９８９、Ｐｒｏｃ Ｎ
ａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：１１７３−１１７７）、Ｑ−βレプ
リカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉら、１９８８、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：１
１９７）、または他の任意の核酸増幅方法、それに続いて、当業者に周知な技術
を用いたその増幅された分子の検出。これらの検出スキームは、そのような分子
が非常に極少数で存在する場合、核酸分子の検出のために特に有用である。

【０３１９】 代替の実施形態において、サンプル細胞からのＳＥＣＸの遺伝子における変異
は、制限酵素切断パターンにおける変更によって同定され得る。例えば、サンプ
ルおよびコントロールのＤＮＡが単離され、増幅され（必要に応じて）、１つ以
上の制限エンドヌクレアーゼを用いて消化され、そしてフラグメント長の大きさ
がゲル電気泳動によって決定され、そして比較される。サンプルＤＮＡとコント
ロールＤＮＡとの間のフラグメント長の大きさにおける差違は、そのサンプルＤ
ＮＡにおける変異を示す。さらに、配列特異的なリボザイムの使用（例えば、米
国特許第５，４９３，５３１号を参照のこと）を使用して、リボザイム切断部位
の発生または喪失によって特異的な変異の存在についてスコア付けし得る。

【０３２０】 他の実施形態において、ＳＥＣＸにおける遺伝的変異は、サンプル核酸および
コントロール核酸（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ）を、数百または数千のオリゴ
ヌクレオチドプローブを含む高密度アレイに対してハイブリダイズさせることに
よって同定され得る（Ｃｒｏｎｉｎら（１９９６）Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔａｔｉｏ
ｎ ７：２４４−２５５；Ｋｏｚａｌら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃ
ｉｎｅ ２：７５３−７５９）。例えば、ＳＥＣＸにおける遺伝的変異は、Ｃｒ
ｏｎｉｎら、上記のように光生成ＤＮＡプローブを含む二次元アレイにおいて同
定され得る。手短には、第一のプローブハイブリダイゼーションアレイを用いて
、サンプルおよびコントロールにおける長いストレッチのＤＮＡを通じて走査し
て、連続的に重複するプローブの線形アレイを作成することによってその配列の
間の塩基変化を同定し得る。この工程は、点変異の同定を可能にする。この工程
に続いて、検出される全ての改変体または変異体に相補的な、より小さな特化さ
れたプローブアレイを用いて、特定の変異の特徴付けを可能にする第二のハイブ
リダイゼーションアレイがある。各変異アレイは、一方が野生型遺伝子に対して
相補的であり、そして他方が変異遺伝子に対して相補である並行プローブセット
から構成される。

【０３２１】 なお別の実施形態において、当該分野で公知の種々の配列決定反応のいずれか
を使用して、ＳＥＣＸ遺伝子を直接配列決定し得、そしてサンプルのＳＥＣＸ配
列と対応する野生型（コントロール）配列とを比較することによって、変異を検
出し得る。配列決定反応の例としては、ＭａｘｉｍおよびＧｉｌｂｅｒｔ（１９
７７）ＰＮＡＳ ７４：５６０またはＳａｎｇｅｒ（１９７７）ＰＮＡＳ ７４
：５４６３によって開発された技術に基づくものが挙げられる。診断アッセイを
実施する場合、種々の自動化配列決定手順のいずれかを利用し得ることもまた意
図される（Ｎａｅｖｅら、（１９９５）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９：４
４８）。これらには、質量分析法による配列決定法（例えば、ＰＣＴ国際公開番
号ＷＯ ９４／１６１０１；Ｃｏｈｅｎら（１９９６）Ａｄｖ Ｃｈｒｏｍａｔ
ｏｇｒ ３６：１２７−１６２；およびＧｒｉｆｆｉｎら（１９９３）Ａｐｐｌ
Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ３８：１４７−１５９を参照のこと
）が含まれる。

【０３２２】 ＳＥＣＸ遺伝子における変異を検出するための他の方法としては、切断薬剤か
らの保護を使用して、ＲＮＡ／ＲＮＡもしくはＲＮＡ／ＤＮＡのヘテロ二重鎖に
おけるミスマッチ塩基を検出する方法が挙げられる（Ｍｙｅｒｓら（１９８５）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１２４２）。一般に、「ミスマッチ切断」の当該分野
の技術は、野生型のＳＥＣＸ配列を含む（標識された）ＲＮＡまたはＤＮＡを、
組織サンプルから得られた潜在的な変異体ＲＮＡまたはＤＮＡとハイブリダイズ
させることによって形成されるヘテロ二重鎖を提供する工程によって始まる。こ
の二本鎖の二重鎖を、二重鎖の一本鎖領域（例えば、そのコントロールとサンプ
ルの鎖との間の塩基対ミスマッチに起因して存在するもの）を切断する薬剤を用
いて処理する。例えば、ＲＮＡ／ＤＮＡ二重鎖を、ＲＮａｓｅを用いて処理し得
、そしてＤＮＡ／ＤＮＡハイブリッドを、そのミスマッチ領域を酵素的に消化す
ることに対して、Ｓ１ヌクレアーゼを用いて処理し得る。他の実施形態において
、ＤＮＡ／ＤＮＡまたはＲＮＡ／ＤＮＡのいずれかの二重鎖を、ミスマッチ領域
を消化するために、ヒドロキシルアミンまたは四酸化オスミウム、およびピペリ
ジンを用いて処理し得る。次いで、そのミスマッチ領域の消化後、得られた材料
を変性ポリアクリルアミドゲル上で、大きさで分離して、変異の部位を決定する
。例えば、Ｃｏｔｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ
ＵＳＡ ８５：４３９７；Ｓａｌｅｅｂａら（１９９２）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅ
ｎｚｙｍｏｌ ２１７：２８６−２９５を参照のこと。１つの実施形態において
、コントロールのＤＮＡまたはＲＮＡは、検出のために標識され得る。

【０３２３】 なお別の実施形態において、ミスマッチ切断反応は、二本鎖ＤＮＡにおけるミ
スマッチ塩基対を認識する１つ以上のタンパク質（いわゆる「ＤＮＡミスマッチ
修復」酵素）を、細胞のサンプルから得られたＳＥＣＸ ｃＤＮＡにおける点変
異を検出およびマッピングするために規定された系において使用する。例えば、
Ｅ．ｃｏｌｉのｍｕｔＹ酵素は、Ｇ／ＡミスマッチでＡを切断し、そしてＨｅＬ
ａ細胞からのチミジンＤＮＡグリコシダーゼは、Ｇ／ＴミスマッチでＴを切断す
る（Ｈｓｕら（１９９４）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ １５：１６５７〜１
６６２）。例示的な実施形態に従って、ＳＥＣＸ配列（例えば、野生型ＳＥＣＸ
配列）に基づくプローブは、試験細胞由来のｃＤＮＡまたは他のＤＮＡ産物にハ
イブリダイズされる。二重鎖は、ＤＮＡミスマッチ修復酵素を用いて処理され、
そしてその切断産物（もしあれば）は、電気泳動プロトコルなどから検出され得
る。例えば、米国特許第５，４５９，０３９号を参照のこと。

【０３２４】 他の実施形態において、電気泳動の移動度における変化は、ＳＥＣＸ遺伝子に
おける変異を同定するために使用される。例えば、一本鎖配座多型（ＳＳＣＰ）
は、変異体と野生型核酸との間の電気泳動の移動度における差異を検出するため
に使用され得る（Ｏｒｉｔａら（１９８９）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓ
ｃｉ ＵＳＡ：８６：２７６６、またＣｏｔｔｏｎ（１９９３）Ｍｕｔａｔ Ｒ
ｅｓ ２８５：１２５〜１４４；Ｈａｙａｓｈｉ（１９９２）Ｇｅｎｅｔ Ａｎ
ａｌ Ｔｅｃｈ Ａｐｐｌ ９：７３〜７９を参照のこと）。サンプルおよびコ
ントロールＳＥＣＸ核酸の一本鎖ＤＮＡフラグメントは、変性され、そして再生
される。一本鎖核酸の二次構造は、配列に従って変化し、電気泳動の移動度にお
いて得られる変化は、１つの塩基変化さえも検出し得る。ＤＮＡフラグメントは
、標識され得るか、または標識されたプローブを用いて検出され得る。アッセイ
の感度は、二次構造が、配列中の変化に対してより感受的である、（ＤＮＡより
もむしろ）ＲＮＡを使用することによって増強され得る。１つの実施形態におい
て、本発明の方法は、ヘテロ二重鎖分析を利用して、電気泳動の移動度における
変化に基づいて二本鎖のヘテロ二重鎖分子を分離する（Ｋｅｅｎら（１９９１）
Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ ７：５）。

【０３２５】 なお別の実施形態において、一定勾配の変性剤を含有するポリアクリルアミド
ゲルにおける変異体または野生型フラグメントの移動は、変性勾配ゲル電気泳動
（ＤＧＧＥ）を使用してアッセイされる（Ｍｙｅｒｓら（１９８５）Ｎａｔｕｒ
ｅ ３１３：４９５）。ＤＧＧＥが分析の方法として使用される場合、ＤＮＡは
、例えば、ＰＣＲにより約４０ｂｐの高融点ＧＣリッチＤＮＡのＧＣクランプを
付加することによって、完全には変性されないことを確実するように改変される
。さらなる実施形態において、温度勾配は、コントロールおよびサンプルＤＮＡ
の移動度における差異を同定するために、変性剤勾配の代わりに使用される（Ｒ
ｏｓｅｎｂａｕｍおよびＲｅｉｓｓｎｅｒ（１９８７）Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｃｈｅ
ｍ ２６５：１２７５３）。

【０３２６】 点変異を検出するための他の技術の例としては、以下が挙げられるが、これら
に限定されない：選択的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーション、選択的増
幅、または選択的プライマー伸長。例えば、オリゴヌクレオチドプライマーは、
既知の変異が中心的に配置されるように調製され得、次いで、完全なマッチが見
出される場合にのみハイブリダイゼーションを許容する条件下で標的ＤＮＡにハ
イブリダイズされる（Ｓａｉｋｉら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２４：１６３
）；Ｓａｉｋｉら（１９８９）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ
８６：６２３０）。このような対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドは、この
オリゴヌクレオチドがハイブリダイズ膜に付着され、そして標識された標的ＤＮ
Ａがハイブリダイズされる場合に、ＰＣＲ増幅された標的ＤＮＡまたは多くの異
なる変異にハイブリダイズされる。

【０３２７】 あるいは、選択的ＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子特異的増幅技術は、本発明
と合わせて使用され得る。特異的増幅についてのプライマーとして使用されるオ
リゴヌクレオチドは、分子の中心において（その結果、増幅は、差次的ハイブリ
ダイゼーションに依存する）（Ｇｉｂｂｓら（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ １７：２４３７〜２４４８）か、あるいは適切な条件下でミス
マッチが妨げされ得るかまたはポリメラーゼ伸長を減少し得る、１つのプライマ
ーの３’の最末端で、目的の変異を保有し得る（Ｐｒｏｓｓｎｅｒ（１９９３）
Ｔｉｂｔｅｃｈ １１：２３８）。さらに、変異の領域において新規な制限部位
を導入することは、切断に基づく検出を行うために望ましくあり得る（Ｇａｓｐ
ａｒｉｎｉら（１９９２）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｂｅｓ ６：１）。特定の
実施形態において、増幅はまた、増幅用Ｔａｑリガーゼを使用して実施され得る
ことが予測される（Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ
Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：１８９）。このような場合において、連結は、５’配列
の３’末端に完全なマッチが存在する場合にのみ生じ、増幅の存在または非存在
を探索することによって、特定の部位で既知の変異の存在を検出することを可能
にする。

【０３２８】 本明細書中に記載される方法は、例えば、本明細書中に記載れる少なくとも１
つのプローブ核酸または抗体試薬を含む、予めパッケージングされた診断キット
を利用することによって実施され得、これは、例えば、ＳＥＣＸ遺伝子を含む疾
患または疾病の症状または家族病歴を示す患者を診断するための臨床的設定にお
いて簡便に使用され得る。

【０３２９】 さらに、ＳＥＣＸが発現される任意の細胞型または組織（好ましくは、末梢血
白血球）は、本明細書中に記載される予後アッセイにおいて利用され得る。しか
し、有核細胞を含む任意の生物学的サンプル（例えば、頬粘膜細胞を含む）が、
使用され得る。

【０３３０】 （薬理ゲノム学（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ）） ＳＥＣＸ活性（例えば、ＳＥＣＸ遺伝子発現）に対する刺激性または阻害性の
影響を有する因子、すなわちモジュレーターは、本明細書中に記載されるスクリ
ーニングアッセイによって同定されるように、異常なＳＥＣＸ活性に関連する障
害（例えば、癌または妊娠性障害、あるいは上記個々の節１〜１４に記載される
ような、ＳＥＣＸに特異的な疾患）を処置（予防的または治療的に）するために
個体に投与され得る。このような処置と合わせて、個体の薬理ゲノム学（すなわ
ち、個体の遺伝子型と外来化合物または薬物に対するその個体の応答との間の関
係についての研究）が、考慮され得る。治療剤の代謝における差異は、薬理学的
に活性な薬物の用量と血中濃度との間の関係を変更することによって、重篤な毒
性または治療の失敗を導き得る。従って、個体の薬理ゲノム学は、個体の遺伝子
型の考慮に基づく予防的または治療的処置のために有効な薬剤（例えば、薬物）
の選択を許容する。このような薬理ゲノム学は、さらに、適切な投薬量および治
療剤レジメンを決定するために使用され得る。従って、ＳＥＣＸタンパク質の活
性、ＳＥＣＸ核酸の発現、あるいは個体におけるＳＥＣＸ遺伝子の変異含量が決
定されて、それによって個体の治療的または予防的処置のために適切な薬剤を選
択し得る。

【０３３１】 薬理ゲノム学は、罹患された人において変更された薬物の性質および異常な作
用に起因する、薬物に応答する臨床的に有意な遺伝性変更を扱う。例えば、Ｅｉ
ｃｈｅｌｂａｕｍ、Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，
１９９６，２３：９８３〜９８５およびＬｉｎｄｅｒ、Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，１
９９７，４３：２５４〜２６６を参照のこと。一般に、２つの型の薬理ゲノム学
状態が、区別され得る。遺伝的状態は、薬物が身体に作用する方法を変更する１
つの因子として伝達されるか（変更された薬物作用）、または遺伝的状態は、身
体が薬物に作用する方法を変更する１つの因子として伝達される（変更された薬
物代謝）。これらの薬理ゲノム学状態は、稀な欠損としてか、または多型として
のいずれかで生じ得る。例えば、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ
６ＰＤ）欠損は、一般的な遺伝性酵素病であり、この主な臨床的合併症は、酸化
剤薬物（抗マラリア剤、スルホンアミド、鎮痛薬、ニトロフラン）の摂取および
ソラマメの摂取（ｃｏｎｓｏｍｐｔｉｏｎ）後の溶血である。

【０３３２】 例示的な実施形態として、薬物代謝酵素の活性は、薬物作用の強度および期間
の両方の主要な決定因子である。薬物代謝酵素（例えば、Ｎ−アセチルトランス
フェラーゼ２（ＮＡＴ２）およびシトクロムＰ４５０酵素ＣＹＰ２Ｄ６およびＣ
ＹＰ２Ｃ１９）の遺伝的多型の発見は、幾人かの患者が予期される薬物効果を得
ないか、または薬物の標準的かつ安全な用量を摂取した後に過大な薬物応答およ
び深刻な毒性を示すことに関しての説明を提供した。これらの多型は、集団にお
いて２つの表現型（高い代謝能を持つ人（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｍｅｔａｂｏｌ
ｉｚｅｒ）（ＥＭ）および低い代謝能を持つ人（ｐｏｏｒ ｍｅｔａｂｏｌｉｚ
ｅｒ）（ＰＭ））で発現される。ＰＭの罹患率は、異なる集団の間で異なる。例
えば、ＣＹＰ２Ｄ６をコードする遺伝子は高度に多型であり、そしていくらかの
変異がＰＭにおいて同定されており、この全ては機能的ＣＹＰ２Ｄ６の非存在に
至る。ＣＹＰ２Ｄ６およびＣＹＰ２Ｃ１９の低い代謝能を持つ人は、彼らが標準
的な用量を受ける場合に、かなり頻繁に過大な薬物応答および副作用を経験する
。代謝産物が活性な治療的部分である場合、そのＣＹＰ２Ｄ６形成代謝産物であ
るモルヒネによって媒介されるコデインの鎮痛効果について実証されるように、
ＰＭは治療的応答を示さない。他の極端なものは、標準的な用量に応答しない、
いわゆる超迅速な代謝能を持つ人である。最近、超迅速な代謝の基準となる分子
は、ＣＹＰ２Ｄ６遺伝子増幅に起因していることが同定されている。

【０３３３】 従って、ＳＥＣＸのタンパク質の活性、ＳＥＣＸの核酸の発現、あるいは個体
におけるＳＥＣＸの遺伝子の変異内容を決定されて、それによって、その個体の
治療的または予防的処置のために適切な薬剤を選択し得る。さらに、薬理ゲノム
学の研究を使用して、個体の薬物応答性の表現型の同定に対して薬物代謝酵素を
コードする多型対立遺伝子の遺伝子型を適用し得る。この知見は、用量または薬
物選択に適用される場合、有害な反応または治療の失敗を回避し得、従って、被
験体をＳＥＣＸの調節因子（例えば、本明細書中に記載される例示的なスクリー
ニングアッセイの１つによって同定される調節因子）を用いて処置する場合に治
療的または予防的効率を増強し得る。

【０３３４】 （臨床試験の間の効果のモニタリング） ＳＥＣＸの発現または活性（例えば、異常な細胞増殖および／または分化を調
節する能力）に対する薬剤（例えば、薬物、化合物）の影響をモニタリングする
ことは、基本的なスクリーニングにおいてのみならず、臨床試験においてもまた
適用され得る。例えば、本明細書中に記載されるようなスクリーニングアッセイ
によって決定される薬剤が、ＳＥＣＸの遺伝子発現、タンパク質レベルを増加す
るため、またはＳＥＣＸ活性をアップレギュレートする効力を、減少したＳＥＣ
Ｘの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはダウンレギュレートしたＳＥＣＸの
活性を示す被験体の臨床試験においてモニターし得る。あるいは、スクリーニン
グアッセイによって決定される薬剤が、ＳＥＣＸの遺伝子発現、タンパク質レベ
ルを減少、またはＳＥＣＸの活性をダウンレギュレートする効力を、増加したＳ
ＥＣＸの遺伝子発現、タンパク質レベル、またはアップレギュレートしたＳＥＣ
Ｘの活性を示す被験体の臨床試験においてモニターし得る。このような臨床試験
において、ＳＥＣＸの発現または活性、および好ましくは、例えば、細胞性増殖
障害、または上記個々の節１〜１４に記載するような、ＳＥＣＸに特異的な疾患
に関与した他の遺伝子が、「リードアウト（読み出し）（ｒｅａｄ ｏｕｔ）」
、すなわち、特定の細胞の免疫応答のマーカーとして使用され得る。

【０３３５】 例えば、限定の目的ではないが、ＳＥＣＸを含む遺伝子（これは、ＳＥＣＸ活
性（例えば、本明細書中に記載されるようなスクリーニングアッセイにおいて同
定される）を調節する薬剤（例えば、化合物、薬物または低分子）を用いる処置
によって、細胞内で調節される）が、同定され得る。従って、細胞性増殖障害に
対する薬剤の効果を研究するために、例えば、臨床試験において、細胞が単離さ
れ得、そしてＲＮＡが調製され得、そしてＳＥＣＸおよびこの障害に関与する他
の遺伝子の発現のレベルについて分析され得る。遺伝子発現のレベル（すなわち
、遺伝子発現パターン）は、本明細書中に記載されるように、ノーザンブロット
分析もしくはＲＴ−ＰＣＲによるか、あるいは産生されるタンパク質の量を測定
することによるか、本明細書中に記載されるような方法の１つによるか、あるい
はＳＥＣＸまたは他の遺伝子の活性のレベルを測定することによって、定量され
得る。この様式で、この遺伝子発現パターンは、この薬剤に対する細胞の生理学
的応答の指標であるマーカーとして作用し得る。従って、この応答状態は、この
薬剤を用いる個体の処置の前、および処置の間の種々の時点で、決定され得る。

【０３３６】 １つの実施形態において、本発明は、薬剤（例えば、アゴニスト、アンタゴニ
スト、タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣物、核酸、低分子、または本明細書
中に記載されるスクリーニングアッセイによって同定される他の薬物候補物）を
用いる、被験体の処置の効力をモニタリングするための方法を提供し、これは、
以下の工程を包含する：（ｉ）薬剤の投与の前に、被験体から投与前サンプルを
得る工程；（ｉｉ）この投与前サンプルにおいて、ＳＥＣＸのタンパク質、ｍＲ
ＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現のレベルを検出する工程；（ｉｉｉ）この被験
体から１つ以上の投与後サンプルを得る工程；（ｉｖ）この投与後サンプルにお
いて、ＳＥＣＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性
のレベルを検出する工程；（ｖ）この投与前サンプルにおけるＳＥＣＸのタンパ
ク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現または活性のレベルを、この投与後
サンプルにおけるＳＥＣＸのタンパク質、ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡの発現
または活性のレベルと比較する工程；ならびに（ｖｉ）従って、この被験体に対
する薬剤の投与を変更する工程。例えば、この薬剤の増加した投与は、検出され
るよりも高いレベルにＳＥＣＸの発現または活性を増加するために（すなわち、
この薬剤の効力を増加するために）望ましくあり得る。あるいは、この薬剤の減
少した投与は、検出されるよりも低いレベルにＳＥＣＸの発現または活性を減少
するために（すなわち、この薬剤の効力を減少するために）望ましくあり得る。

【０３３７】 （処置の方法） 本発明は、異常なＳＥＣＸの発現または活性に関連する障害の危険性のある（
または感受性）か、またはこの障害を有する被験体を処置する予防的および治療
的の両方の方法を提供する。

【０３３８】 （障害） （その疾患または障害に罹患していない被験体と比較して）増加したレベルま
たは生物学的活性によって特徴付けられる疾患および障害は、活性を拮抗する（
すなわち、低減または阻害する）治療剤を用いて処置され得る。活性を拮抗する
治療剤は、治療的または予防的な様式で、投与され得る。利用され得る治療剤と
しては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：（ｉ）上記ペプチド、ま
たはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモログ；（ｉｉ）上記ペプ
チドに対する抗体；（ｉｉｉ）上記ペプチドをコードする核酸；（ｉｖ）アンチ
センス核酸および「機能不全性」である（すなわち、上記ペプチドに対するコー
ド配列のコード配列内の異種挿入に起因する）核酸の投与が、相同組換えによっ
て上記ペプチドの内因性機能を「ノックアウトする」ために利用される（例えば
、Ｃａｐｅｃｃｈｉ、１９８９、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２８８〜１２９２
を参照のこと）；または（ｖ）上記ペプチドとその結合パートナーとの間の相互
作用を変化させる、調節因子（すなわち、インヒビター、アゴニストおよびアン
タゴニスト（本発明のさらなるペプチド模倣物または本発明のペプチドに対して
特異的な抗体を含む））。

【０３３９】 （その疾患または障害に罹患していない被験体と比較して）減少したレベルま
たは生物学的活性によって特徴付けられる疾患および障害は、活性を増加させる
（すなわち、活性に対するアゴニストである）治療剤を用いて処置され得る。活
性をアップレギュレートする治療剤は、治療的または予防的な様式で、投与され
得る。利用され得る治療剤としては、以下が挙げられるが、これらに限定されな
い：上記ペプチド、またはそのアナログ、誘導体、フラグメントもしくはホモロ
グ；あるいはバイオアベイラビリティーを増加させるアゴニスト。

【０３４０】 増加したレベルまたは減少したレベルは、ペプチドおよび／またはＲＮＡを定
量することによって、容易に検出され得る。この定量は、患者の組織サンプルを
（例えば、生検組織から）入手し、そしてそのサンプルを、その発現したペプチ
ド（または上記ペプチドのｍＲＮＡ）のＲＮＡレベルまたはペプチドレベル、構
造および／または活性をインビトロでアッセイすることによる。当該分野におい
て周知の方法としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：イムノア
ッセイ（例えば、ウェスタンブロット分析、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）
ポリアクリルアミドゲル電気泳動が後に続く免疫沈降、免疫細胞化学などによる
）および／またはｍＲＮＡの発現を検出するためのハイブリダイゼーションアッ
セイ（例えば、ノーザンアッセイ、ドットブロット、インサイチュハイブリダイ
ゼーションなど）。

【０３４１】 （予防的方法） １つの局面において、本発明は、被験体において異常なＳＥＣＸの発現または
活性と関連する疾患または状態を、ＳＥＣＸの発現または少なくとも１つのＳＥ
ＣＸ活性を調節する薬剤をこの被験体に投与することによって予防するための方
法を提供する。異常なＳＥＣＸの発現または活性によって引き起こされるかまた
はこれらに起因する、疾患にかかる危険がある被験体は、例えば、本明細書中に
記載の診断アッセイまたは予後アッセイのいずれか、またはそれらの組み合わせ
によって、同定され得る。予防薬剤の投与は、疾患または障害が予防されるか、
あるいはその進行を遅らせられるように、このＳＥＣＸ異常の特徴である症状の
発現の前に行い得る。このＳＥＣＸ異常の型に依存して、例えば、ＳＥＣＸアゴ
ニスト薬剤またはＳＥＣＸアンタゴニスト薬剤が、その被験体を処置するために
使用され得る。その適切な薬剤は、本明細書中に記載のスクリーニングアッセイ
に基づいて決定され得る。本発明の予防方法は、以下の小区分において、さらに
議論される。

【０３４２】 （治療方法） 本発明の調節方法は、細胞を、その細胞に関するＳＥＣＸタンパク質活性の活
性のうちの１つ以上を調節する薬剤と接触させる工程を包含する。ＳＥＣＸタン
パク質活性を調節する薬剤は、核酸またはタンパク質、ＳＥＣＸタンパク質の天
然に存在する同族リガンド、ペプチド、ＳＥＣＸペプチド模倣物、または他の低
分子のような、本明細書中に記載されるような薬剤であり得る。１つの実施形態
において、この薬剤は、ＳＥＣＸタンパク質活性のうちの１つ以上を刺激する。
このような刺激薬剤の例としては、活性なＳＥＣＸタンパク質、およびその細胞
に導入されたＳＥＣＸをコードする核酸分子が挙げられる。別の実施形態におい
て、この薬剤は、ＳＥＣＸタンパク質活性のうちの１つ以上を阻害する。このよ
うな阻害薬剤の例としては、アンチセンスＳＥＣＸ核酸分子、および抗ＳＥＣＸ
抗体が挙げられる。これらの調節方法は、インビトロで（例えば、その薬剤とと
もにその細胞を培養することによって）、あるいはインビボで（例えば、被験体
にその薬剤を投与することによって）実施され得る。このように、本発明は、Ｓ
ＥＣＸのタンパク質または核酸分子の、異常な発現または異常な活性によって特
徴付けられる、疾患または障害に罹患した個体を処置する方法を提供する。１つ
の実施形態において、この方法は、ＳＥＣＸの発現または活性を調節する（例え
ば、アップレギュレートまたはダウンレギュレートする）薬剤（例えば、本明細
書中に記載のスクリーニングアッセイによって同定される薬剤）あるいはそのよ
うな薬剤の組み合わせを投与する工程を包含する。別の実施形態において、この
方法は、ＳＥＣＸのタンパク質または核酸分子を、低減したかまたは異常な、Ｓ
ＥＣＸの発現または活性を補償するための治療として、投与する工程を包含する
。

【０３４３】 ＳＥＣＸ活性の刺激は、ＳＥＣＸが異常にダウンレギュレートされている状況
、および／またはＳＥＣＸ活性の増加が有益な効果を有するようである状況にお
いて、望ましい。このような状況の１つの例は、被験体が、異常な細胞増殖およ
び／または細胞分化によって特徴付けられる障害（例えば、癌）を有する場合で
ある。このような状況の別の例は、被験体が妊娠疾患（例えば、プレクランプシ
ア（ｐｒｅｃｌａｍｐｓｉａ））を有する場合である。本発明の他の疾患として
は、上記個々の節１〜１４に記載されるような、ＳＥＣＸに特異的な疾患が挙げ
られる。

【０３４４】 本発明は、本明細書に記載される特定の実施形態によって、範囲が限定される
ことはない。実際、本明細書において記載されたものに加えて、本発明の種々の
改変が、上記の記載および添付の図面から、当業者に明らかとなる。そのような
改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内にあることが意図される。

【０３４５】 本発明はさらに、以下の実施例によって例示されるが、これらは、限定として
解釈されるべきではない。本出願を通じて引用される全ての参考文献、特許およ
び公開された特許出願の内容が、本明細書によって参考として援用される。

【０３４６】 （実施例） （実施例１． 放射ハイブリッドマッピングは本発明のクローンの染色体位置を
同定する。） ヒト染色体マーカーを用いる放射ハイブリッドマッピングを、本発明に記載の
多数のクローンについて実施した。これらの結果を得るために使用した手順は、
当該分野において公知の方法（例えば、Ｓｔｅｅｎら １９９９ Ｇｅｎｏｍｅ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ９：ＡＰ１−ＡＰ８）に類似する。無作為化した放射によ
り誘導したヒト染色体フラグメントを含む９３細胞クローンのパネルを、９６ウ
ェルプレート内で、所定のクローンを独特の様式で同定するよう設計したＰＣＲ
プライマーを使用して、スクリーニングした。これらの結果を表２に示す。この
表は、クローン番号、クローンが見出される染色体、マーカー遺伝子から捜査さ
れたクローンまでのｃＲでの距離、およびマーカー遺伝子の同一性を提供する。

【０３４７】

【表２】 （実施例２． ２８６４９３３−１の分子クローニング） ２８６４９３３−１タンパク質に関して予測されたオープンリーディングフレ
ームは、マウスセマフォリンＶｉａタンパク質に対して全体で９５％の同一性を
有する９３９アミノ酸長Ｉ型膜貫通タンパク質をコードする。予測したシグナル
ペプチド配列は、残基１〜１８の間であり、そして予測した膜貫通ドメインは、
残基６４５〜６６１の間である。残基１９〜６４４由来の予測した成熟タンパク
質（すなわち、シグナルペプチドの除去後）の細胞外ドメインをコードする、２
８６４９３３−１タンパク質に対するｃＤＮＡのフラグメントを、ヒト胎児脳ｃ
ＤＮＡからクローニングした。

【０３４８】 以下のオリゴヌクレオチドプライマーを、ＰＣＲによって、２８６４９３３−
１ ４の捜査された成熟形態を増幅するために、設計した：

【０３４９】

【化１】 クローニングのために、正方向プライマーは、インフレームＢａｍＨＩ制限部
位を含み、そして逆方向プライマーは、インフレームＸｈｏＩ制限部位を含む。

【０３５０】 ＰＣＲ反応を、５ｎｇのヒト胎児脳ｃＤＮＡを用いて設定した。反応混合物は
、１μＭの２８６４９３３ＭａｔＦおよび２８６４９３３Ｆ−ＴＯＰＯ−逆方向
プライマーの各々、５μモルのｄＮＴＰ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｉｅｓ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ）および１マイクロリットルの５０×Ａｄ
ｖａｎｔａｇｅ−ＨＦ２ポリメラーゼ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ）（５０マイクロリットル容量中）を含んだ
。以下の反応条件を使用した： ａ） ９６℃ ３分間 ｂ） ９６℃ ３０秒間変性 ｃ） ６０℃ ３０秒間、プライマーアニーリング ｄ） ７２℃ ３分間伸長 工程（ｂ）〜（ｄ）を４５回繰り返す ｅ） ７２℃ １０分間最終伸長。

【０３５１】 約１．９ｋｂｐの予測した増幅産物を、アガロースゲル電気泳動により検出し
た。このフラグメントをゲルから単離し、そしてＭ１３正方向プライマー、Ｍ１
３逆方向プライマーを使用して、ベクターｐＣＲ２．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ
、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）に連結した。クローニングしたインサートを、以下
の遺伝子特異的プライマーを使用して、ＰＣＲアンプリコンとして配列決定した
：

【０３５２】

【化２】 クローニングしたｃＤＮＡ（配列番号２９）が、残基１９と残基６４４との間
の２８６４９３３の予測した成熟細胞外ドメインをコードするオープンリーディ
ングフレームを有することを確かめた（配列番号３０）（図１５）。図１５にお
いて、ＢａｍＨＩクローニング部位およびＸｈｏＩクローニング部位、ならびに
これらによりコードされるアミノ酸（従ってクローニングされた配列の一部では
ない）は、太字体である。この構築物は、ｐＣＲ２．１−２８６４９３３と呼ば
れる。

【０３５３】 （実施例３． ヒト胚腎臓２９３細胞におけるｈ２８６４９３３の発現） オリゴヌクレオチドプライマーである、ｐＳｅｃ−Ｖ５−Ｈｉｓ正方向および
ｐＳｅｃ−Ｖ５−Ｈｉｓ逆方向を設計し、ｐｃＤＮＡ３．１−Ｖ５Ｈｉｓ（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）発現ベクター由来のフラグメント
を増幅した。このＰＣＲ産物を、ＸｈｏＩおよびＡｐａＩで消化し、そしてＩｇ
κリーダー配列（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を保有す
る、ＸｈｏＩ／ＡｐａＩで消化したｐＳｅｃＴａｇ２ Ｂベクターに連結した。
得られるベクターｐＳｅｃＶ５Ｈｉｓの正しい構造を、ＤＮＡ配列分析により確
認した。ベクターｐＳｅｃＶ５Ｈｉｓを、ＰｍｅＩおよびＮｈｅＩで消化し、そ
してＰｍｅＩ−ＮｈｅＩフラグメントを、ＢａｍＨＩ／クレノウおよびＮｈｅＩ
で処理したベクターｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃ
Ａ）に連結した。得られたベクターを、ｐＣＥＰ４／Ｓｅｃと名付けた。

【０３５４】

【化３】 ｈ２８６４９３３配列を含む２ｋｂのＢａｍＨＩ−ＸｈｏＩフラグメントを、
ｐＣＲ２．１−２８６４９３３（実施例２）から単離し、そしてＢａｍＨＩ−Ｘ
ｈｏＩで消化したｐＣＥＰ４／Ｓｅｃにサブクローニングして、発現ベクターｐ
ＣＥＰ４／Ｓｅｃ−２８６４９３３を生成した。ｐＣＥＰ４／Ｓｅｃ−２８６４
９３３ベクターを、ＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅＰｌｕｓ試薬を使用し、製造業
者の指示に従って（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
、Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）２９３細胞内にトランスフェクトした
。細胞ペレットおよび上清を、トランスフェクションの７２時間後に収集し、そ
して抗Ｖ５抗体を用いるウェスタンブロット（還元条件）によって、ｈ２８６４
９３３発現について試験した。図１６は、２９３細胞により分泌されるｈ２８６
４９３３が、約７０ｋＤａおよび約１００ｋＤａのＶ５エピトープを有する２つ
のバンドにおいて検出されることを示す。この７０ｋＤａのバンドは、グリコシ
ル化されていないタンパク質を表すと推定され、そしてＶ５エピトープを付加し
た６２６残基クローンを除いて、Ｍ_rに対応する。プログラムＰＲＯＳＩＴＥは
、細胞外ｈ２８６４９３３ドメインに、６つのＮ−グリコシル化部位を予測する
。１００ｋＤａのバンドは、このタンパク質のグリコシル化形態を起源とすると
考えられる。

【０３５５】 （実施例４． ３３５２３５８−１の分子クローニング） クローン３３５２３５８−１の予測されたオープンリーディングフレームは、
残基５２２と残基５５１との間に膜貫通ドメインがあると予測される、６５３ア
ミノ酸残基のＩ型膜貫通タンパク質をコードする。予測した成熟タンパク質の細
胞外セグメントをコードするｃＤＮＡ（すなわち、シグナルペプチドの切断後）
を、クローニングした。

【０３５６】 分泌シグナル予測法（ＧＣＧ：ＳＰＳＣＡＮ−Ｅｕｋａｒｙｏｔｅ）は、３３
５２３５８−１について、シグナルペプチド切断部位を残基４１と残基４２との
間と予測する。従って、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを設計して、残基
４２〜４８６の３３５２３５８の予測した成熟細胞外ドメインをＰＣＲ増幅した
：

【０３５７】

【化４】 クローニングのために、正方向プライマーは、インフレームＢａｍＨＩ制限部
位を含み、そして逆方向プライマーは、インフレームＳａｌＩ制限部位を含む。

【０３５８】 ２つの別個のＰＣＲ反応を、５ｎｇのヒト精巣ｃＤＮＡテンプレートおよびヒ
ト胎児脳ｃＤＮＡテンプレートをそれぞれ用いて設定した。反応混合物は、１μ
Ｍの３３５２３５８Ｃ正方向プライマーおよび３３５２３５８Ｃ逆方向プライマ
ーの各々、５μモルのｄＮＴＰ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ）および１マイクロリットルの５０×Ａｄｖａｎｔ
ａｇｅ−ＨＦ２ポリメラーゼ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、
Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ ＣＡ）（５０マイクロリットル容量中）を含んだ。以下の
反応条件を使用した： ａ） ９６℃ ３分間 ｂ） ９６℃ ３０秒間変性 ｃ） ７０℃ ３０秒間、プライマーアニーリング。この温度を１℃／サイク
ルで次第に低下させた ｄ） ７２℃ ３分間伸長 工程（ｂ）〜（ｄ）を１０回繰り返す ｅ） ９６℃ ３０秒間変性 ｆ） ６０℃ ３０秒間アニーリング ｇ） ７２℃ ３分間伸長 工程（ｅ）〜（ｇ）を２５回繰り返す ｈ） ７２℃ １０分間最終伸長。

【０３５９】 １３３５ｂｐの予測した増幅産物を、アガロースゲル電気泳動により、両方の
サンプルにおいて検出した。これらのフラグメントをアガロースゲルから精製し
、そしてｐＣＲ２．１ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃ
Ａ）に連結した。Ｍ１３正方向ベクタープライマーおよびＭ１３逆方向ベクター
プライマー、ならびに以下の遺伝子特異的プライマー：

【０３６０】

【化５】 を使用して、クローニングしたインサートを、ＰＣＲアンプリコンとして配列決
定し、そして３３５２３５８−Ｓ１５３Ａと指定したオープンリーディングフレ
ームとして確認した。このクローンに関して得られたヌクレオチド配列（配列番
号３１）を、図１７パネルＡに示す。このクローニング部位は、下線を引いた斜
字体である。クローン３３５２３５８−Ｓ１５３Ａに対して得られた配列は、ク
ローン３３５２３５８−１について予測された配列と、６つの部位で異なる。こ
れらは、図１７Ａにおいて下線を引いた太字体で示される。クローン３３５２３
５８−Ｓ１５３Ａに対して翻訳されたタンパク質配列（配列番号３２）を、図１
７パネルＢに示す。ヌクレオチドレベルで見出される配列差異の５つは、アミノ
酸差異に翻訳され、クローン３３５２３５８−１に対して予測された配列と比較
される；これらは同様に、図１７Ｂにおいて、下線を引いた太字体で示される。
（図１７Ｂにおいて、各末端においてクローニング部位によりコードされる２つ
のアミノ酸残基は示されない。図１７Ｂの最初のアミノ酸残基は、図１７Ａのヌ
クレオチド７〜９によりコードされる）。

【０３６１】 （実施例５．ヒト胚性腎２９３細胞におけるｈ３３５２３５８の発現） ベクターｐＣＥＰ４／Ｓｅｃを、実施例３に記載のように調製した。ｈ３３５
２３５８配列を含む１．３ｋｂのフラグメントを、ＢａｍＨＩ−ＳａｌＩ消化に
よってｐＣＲ２．１−３３５２３５８（実施例４において調製）から単離し、そ
してＢａｍＨＩ−ＸｈｏＩ消化ｐＣＥＰ４／Ｓｅｃ中にサブクローン化して、発
現ベクターｐＣＥＰ４／Ｓｅｃ−３３５２３５８を作製した。このｐＣＥＰ４／
Ｓｅｃ−３３５２３５８ベクターを、製造業者の指示に従ってＬｉｐｏｆｅｃｔ
ａｍｉｎｅＰｌｕｓ^TM試薬（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ）を用いて、２９３細胞にトラ
ンスフェクトした。細胞のペレットおよび上清をトランスフェクションの７２時
間後に収集し、そして抗Ｖ５抗体を用いるウェスタンブロッティング（還元条件
）によって、ｈ３３５２３５８の発現について試験した。図１８は、２９３細胞
によって分泌されたｈ３３５２３５８が、約９８ｋＤａで、Ｖ５エピトープを保
有するバンドにおいて検出されることを示す。このバンドは、このタンパク質の
グリコシル化形態を表すと推定される。なぜなら、プログラムＰＲＯＳＩＴＥが
、細胞外ｈ３３５２３５８ドメインポリペプチドにおいて８つのＮ−グリコシル
化部位を予想するからである。

【０３６２】 （実施例６． ＴａｑＭａｎ^TM分析によって決定される、組織における２７７
７６１０の発現） ２７７７６１０の発現を、下記の表３に示される組織において、実時間定量的
ＰＣＲ（ｒｅａｌ ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ）によって評
価した。表３の第１欄における番号付けは、図１９Ａ〜Ｃから図２３におけるヒ
ストグラムのレーンの順序に対応する。

【０３６３】

【表３】 使用されたＰＣＲアッセイにおいて、結合されたリポーターおよび消光色素の
両方を有するオリゴヌクレオチドからなる蛍光発生的プローブを、順方向プライ
マーと逆方向プライマーとの間で標的配列に特異的にアニールした。このプロー
ブがＤＮＡポリメラーゼの５’ヌクレアーゼ活性によって切断される場合、レポ
ーター色素は消光色素から分離され、そして配列特異的シグナルが生成される。
各サイクルで、さらなるレポーター色素分子がそれらの個々のプローブから切断
され、そして蛍光強度における増加を、ＰＣＲの間モニターする。

【０３６４】 プローブおよびプライマーを、入力として２７７７６１０の配列を用いて、Ｐ
ｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ ＢｉｏｓｙｓｔｅｍのＰｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓ
ソフトウェアパッケージ（ＡｐｐｌｅコンピューターのＭａｃｉｎｔｏｓｈ Ｐ
ｏｗｅｒ ＰＣ用バージョンＩ）に従って設計した。反応条件についてはデフォ
ルト設定を使用し、そして以下のパラメーターをプライマーを選択する前に設定
した：プライマー濃度＝２５０ｎＭ、プライマー融解温度（Ｔ_m）範囲＝５８〜
６０℃、プライマー最適Ｔｍ＝５９℃、最大プライマー差異＝２℃、プローブは
５’Ｇを有さない、プローブのＴ_mはプライマーＴ_mよりも１０℃高くなければな
らない、アプリコンサイズは７５ｂｐ〜１００ｂｐ。選択されたプローブおよび
プライマー（下記を参照のこと）を合成し、二重ＨＰＬＣ精製してカップリング
されていない色素を除去し、そしてそれぞれプローブの５’末端および３’末端
へのレポーターおよび消光色素の効率的なカップリングについて、質量分析法に
よって評価した。

【０３６５】 ＰＣＲ条件：サンプルＲＮＡを、広範な正常組織および腫瘍組織から得た。各
組織由来のＲＮＡ（ポリＡ＋ＲＮＡ、２．８ｐｇ）および細胞株由来のＲＮＡ（
総ＲＮＡ、７０ｎｇ）を、９６ウェルのＰＣＲプレートの各ウェルにスポットし
た。順方向プライマー、逆方向プライマー、および２７７７６１０特異的プロー
ブ（下記を参照のこと；および参照として供するために、別の遺伝子についての
プライマーおよびプローブの別のセット）を含むＰＣＲ反応混液を、ＰＥ Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ７７００用の１×ＴａｑＭａｎ^TMＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉ
ｘを使用して、５ｍＭ ＭｇＣｌ₂、ｄＮＴＰｓ（ｄＡ、ｄＧ、ｄＣ、ｄＵ（１
：１：１：２の比率にて））、０．２５Ｕ／ｍｌ ＡｍｐｌｉＴａｑ Ｇｏｌｄ ^TM （ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）、および０．４Ｕ／μｌ ＲＮａｓｅインヒ
ビター、および０．２５Ｕ／μｌ逆転写酵素と共にセットした。逆転写を４８℃
にて３０分間実施し、次いで、以下のように増幅／ＰＣＲサイクルを実施した：
９５℃で１０分間、次いで以下の４０サイクル：９５℃で１５秒間、６０℃で１
分間。

【０３６６】 分析において使用されたＴａｑＭａｎプローブおよびプライマー：

【０３６７】

【化６】 （実施例７． ＴａｑＭａｎ^TM分析によって決定される、組織における２８６
４９３３の発現） ２８６４９３３の発現のＴａｑＭａｎ^TM分析を、実施例６に記載のように実施
した。逆転写を４８℃にて３０分間実施し、次いで、以下のように増幅／ＰＣＲ
サイクルを実施した：９５℃で１０分間、次いで以下の４０サイクル：９５℃で
１５秒間、６０℃で１分間。プライマー−プローブのセットは、下記の通りであ
る。結果を図１９において、それぞれパネルＡ、Ｂ、およびＣに示す。図１９の
各パネルについての細胞型は、上記の表３に規定される。

【０３６８】 プライマーおよびプローブ２つのセットは、２８６４９３３−１および２８６
４９３３−２に共通である核酸の領域を標的化した。プライマー−プローブセッ
ト８８は、Ａｇ８８（配列番号５３〜５５）を含み、そしてプライマー−プロー
ブセット２９１は、Ａｇ２９１（配列番号５６〜５８）を含む。

【０３６９】

【化７】 プライマーおよびプローブ第３のセットは、より長いスプライス改変体である
２８６４９３３−１にのみ特異的に存在するセグメントを標的化した。プライマ
ー−プローブセット３４１は、Ａｇ３４１（配列番号５９〜６１）を含む。

【０３７０】

【化８】 （実施例８． ＴａｑＭａｎ^TM分析によって決定される、組織における３３５
２３５８の発現） ３３５２３５８の発現のＴａｑＭａｎ^TM分析を、表３に記載のような組織パネ
ルを用いて実施例６に記載のように実施した。逆転写を４８℃にて３０分間実施
し、次いで、以下のように増幅／ＰＣＲサイクルを実施した：９５℃で１０分間
、次いで以下の４０サイクル：９５℃で１５秒間、６０℃で１分間。

【０３７１】 ３３５２３５８の分析において使用されたＴａｑＭａｎ^TMプローブおよびプラ
イマーを以下に示す（入力配列に対するプライマーおよびプローブのアニーリン
グ位置は、それぞれ呈色および下線で示される）。プライマー−プローブセット
４２は、Ａｇ４２（配列番号６２〜６４）を含む。結果を図２０に示す。

【０３７２】

【化９】 （実施例９． ＴａｑＭａｎ^TM分析によって決定される、組織における３９１
１６７５の発現） ３９１１６７５の発現のＴａｑＭａｎ^TM分析を、表３に記載のような組織パネ
ルを用いて実施例６に記載のように実施した。逆転写を４８℃にて３０分間実施
し、次いで、以下のように増幅／ＰＣＲサイクルを実施した：９５℃で１０分間
、次いで以下の４０サイクル：９５℃で１５秒間、６０℃で１分間。３９１１６
７５の発現分析において使用されたＴａｑＭａｎプローブおよびプライマーは、
プライマー−プローブセット１１５であり、これはＡｇ１１５（配列番号６５〜
６７）を含む。結果を図２１に示す。

【０３７３】

【化１０】 （実施例１０． ＴａｑＭａｎ^TM分析によって決定される、組織における４０
３５５０８の発現） ４０３５５０８の発現のＴａｑＭａｎ^TM分析を、表３に記載のような組織パネ
ルを用いて実施例６に記載のように実施した。逆転写を４８℃にて３０分間実施
し、次いで、以下のように増幅／ＰＣＲサイクルを実施した：９５℃で１０分間
、次いで以下の４０サイクル：９５℃で１５秒間、６０℃で１分間。クローン４
０３５５０８の発現分析において使用されたＴａｑＭａｎプローブおよびプライ
マーは、プライマー−プローブセット１１８を含み、Ａｇ１１８と名付けた（配
列番号６８〜７０）。結果を図２２に示す。

【０３７４】

【化１１】 （実施例１１． ＴａｑＭａｎ^TM分析によって決定される、組織における４３
３９２６４の発現） ４３３９２６４の発現のＴａｑＭａｎ^TM分析を、表３に記載のような組織パネ
ルを用いて実施例６に記載のように実施した。逆転写を４８℃にて３０分間実施
し、次いで、以下のように増幅／ＰＣＲサイクルを実施した：９５℃で１０分間
、次いで以下の４０サイクル：９５℃で１５秒間、６０℃で１分間。クローン４
３３９２６４の発現分析において使用されたＴａｑＭａｎプローブおよびプライ
マーは、プライマー−プローブセット１２０を含み、Ａｇ１２０と名付けた（配
列番号７１〜７３）。結果を図２３に示す。

【０３７５】

【化１２】 （等価物） 本発明の特定の実施形態に関する前述の詳細な説明から、ＳＥＣＸ遺伝子につ
いての特有のヌクレオチド、ポリペプチド、およびそれらの使用方法が記載され
ていることは明らかである。特定の実施形態が、本明細書中で詳細に開示された
が、これは例示目的のためのみに例としてなされ、そして上記の添付した特許請
求の範囲に関して制限することを意図されない。特に、種々の置換、変更、およ
び改変が、特許請求の範囲によって規定される本発明の精神および範囲から逸脱
することなく本発明に対してなされ得ることは、本発明者らによって意図される
。例えば、ＳＥＣＸヌクレオチドもしくはポリペプチドまたはそれらの使用方法
の選択は、本明細書中に記載される実施形態の見識を有する当業者に慣用的事象
であるとみなされる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、クローン２７７７６１０のヌクレオチドおよびコードされるポリペプ
チドの図である。

【図２】 図２は、クローン２８６４９３３−１のヌクレオチドおよびコードされるポリ
ペプチドの図である。

【図３】 図３は、クローン２８６４９３３−２のヌクレオチドおよびコードされるポリ
ペプチドの図である。

【図４】 図４は、クローン２９８２３３９のヌクレオチドおよびコードされるポリペプ
チドの図である。

【図５】 図５は、クローン３３５２３５８−１のヌクレオチドおよびコードされるポリ
ペプチドの図である。

【図６】 図６は、クローン３３５２３５８−２のヌクレオチドおよびコードされるポリ
ペプチドの図である。

【図７Ａ】 図７は、クローン３８８４８４６（図７Ａ）、クローン３８８４８４６−１（
図７Ｂ）、およびクローン３８８４８４６−２（図７Ｃ）の、ヌクレオチドおよ
びコードされるポリペプチドの図である。

【図７Ｂ】 図７は、クローン３８８４８４６（図７Ａ）、クローン３８８４８４６−１（
図７Ｂ）、およびクローン３８８４８４６−２（図７Ｃ）の、ヌクレオチドおよ
びコードされるポリペプチドの図である。

【図７Ｃ】 図７は、クローン３８８４８４６（図７Ａ）、クローン３８８４８４６−１（
図７Ｂ）、およびクローン３８８４８４６−２（図７Ｃ）の、ヌクレオチドおよ
びコードされるポリペプチドの図である。

【図８Ａ】 図８は、クローン３９１１６７５（図８Ａ）およびクローン３９１１６７５−
２（図８Ｂ）のヌクレオチドおよびコードされるポリペプチドの図である。

【図８Ｂ】 図８は、クローン３９１１６７５（図８Ａ）およびクローン３９１１６７５−
２（図８Ｂ）のヌクレオチドおよびコードされるポリペプチドの図である。

【図９Ａ】 図９は、クローン４００４０５６（図９Ａ）およびクローン４００４０５６．
０．１４３ｕ（図９Ｂ）のヌクレオチドおよびコードされるポリペプチドの図で
ある。

【図９Ｂ】 図９は、クローン４００４０５６（図９Ａ）およびクローン４００４０５６．
０．１４３ｕ（図９Ｂ）のヌクレオチドおよびコードされるポリペプチドの図で
ある。

【図１０】 図１０は、クローン４００４７３１−１のヌクレオチドおよびコードされるポ
リペプチドの図である。

【図１１】 図１１は、クローン４００９３３４−１のヌクレオチドおよびコードされるポ
リペプチドの図である。

【図１２】 図１２は、クローン４００９３３４−２のヌクレオチドおよびコードされるポ
リペプチドの図である。

【図１３】 図１３は、クローン４０３５５０８のヌクレオチドおよびコードされるポリペ
プチドの図である。

【図１４】 図１４は、クローン４３３９２６４のヌクレオチドおよびコードされるポリペ
プチドの図である。

【図１５】 図１５は、ｃＤＮＡクローンｐＣＲ２．１−２８６４９３３のヌクレオチドお
よびコードされるポリペプチドの図である。

【図１６】 図１６は、２９３細胞におけるｐＣＥＰ４／Ｓｅｃ２８６４９３３ベクターの
発現の還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後のウェスタンブロットを示す。

【図１７】 図１７は、ｃＤＮＡクローン３３５２３５８−Ｓ １５３Ａについて得られた
ヌクレオチド（パネルＡ）およびアミノ酸（パネルＢ）の配列を示す。このクロ
ーンは、３３５２３５８−１の細胞外ドメインを含み、ここで、その下線を引い
た配列は、隣接配列を示す。

【図１８】 図１８は、還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ後の２９３細胞抽出物のウェスタンブロット
において分析された２９３細胞中のｐＣＥＰ４／Ｓｅｃ−３３５２３５８ベクタ
ーの発現を示す。

【図１９Ａ】 図１９は、プライマープローブセット８８（パネルＡ）、プライマープローブ
セット２９１（パネルＢ）、およびプライマープローブセット３４１（パネルＣ
）を利用した、クローン２８６４９３３の発現のリアルタイム定量ＰＣＲ（Ｔａ
ｑＭａｎ^TM）分析を示す。

【図１９Ｂ】 図１９は、プライマープローブセット８８（パネルＡ）、プライマープローブ
セット２９１（パネルＢ）、およびプライマープローブセット３４１（パネルＣ
）を利用した、クローン２８６４９３３の発現のリアルタイム定量ＰＣＲ（Ｔａ
ｑＭａｎ^TM）分析を示す。

【図１９Ｃ】 図１９は、プライマープローブセット８８（パネルＡ）、プライマープローブ
セット２９１（パネルＢ）、およびプライマープローブセット３４１（パネルＣ
）を利用した、クローン２８６４９３３の発現のリアルタイム定量ＰＣＲ（Ｔａ
ｑＭａｎ^TM）分析を示す。

【図２０】 図２０は、３３５２３５８の発現のリアルタイム定量ＰＣＲ（ＴａｑＭａｎ^TM ）分析を示す。

【図２１】 図２１は、３９１１６７５の発現のリアルタイム定量ＰＣＲ（ＴａｑＭａｎ^TM ）分析を示す。

【図２２】 図２２は、４０３５５０８の発現のリアルタイム定量ＰＣＲ（ＴａｑＭａｎ^TM ）分析を示す。

【図２３】 図２３は、４３３９２６４の発現のリアルタイム定量ＰＣＲ（ＴａｑＭａｎ^TM ）分析を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 7/00 Ａ６１Ｐ 17/00 ４Ｃ０８４ 9/10 17/02 ４Ｃ０８５ 17/00 19/02 ４Ｈ０４５ 17/02 25/00 19/02 25/28 25/00 29/00 25/28 31/00 29/00 35/00 31/00 37/06 35/00 37/08 37/06 Ｃ０７Ｋ 14/47 37/08 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ０７Ｋ 14/47 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｐ 21/02 33/50 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/566 33/50 Ｃ０７Ｋ 16/18 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/566 5/00 Ａ // Ｃ０７Ｋ 16/18 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 CB01 DA13 DA36 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 CA09 CA20 DA03 EA04 FA02 FA18 GA13 HA13 HA14 HA17 4B063 QA01 QA19 QQ02 QQ08 QQ21 QQ43 QQ53 QQ61 QQ79 QQ89 QR08 QR32 QR35 QR40 QR42 QR56 QR62 QR72 QR80 QS16 QS25 QS34 QX02 QX10 4B064 AG01 CA10 CA19 CC01 CC24 DA01 DA13 4B065 AA01X AA58X AA72X AA93X AA93Y AB01 AC14 BA02 BA05 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 AA17 BA01 BA22 CA53 CA56 DC50 ZA01 ZA16 ZA36 ZA45 ZA51 ZA89 ZA96 ZB02 ZB13 ZB26 ZB32 4C085 AA13 BB31 EE01 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 EA20 EA50 FA71 FA74

Claims (27)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＳＥＣＸをコードする単離された核酸分子または該核酸分子
   の相補体であって、該分子は、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１
   ６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９、お
   よび８１に対して少なくとも９９％同一である配列を有するポリペプチドをコー
   ドするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子または該核酸分子の相補体
   。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の核酸分子または該核酸分子の相補体であっ
   て、前記ヌクレオチド配列が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１
   ６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９、お
   よび８１のポリペプチドをコードする、核酸分子または該核酸分子の相補体。
3. 【請求項３】 請求項１に記載の核酸分子または該核酸分子の相補体であっ
   て、該分子は、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、
   ２１、２３、２５、２７、２９、３１、７４、７６、７８、および８０のヒトＳ
   ＥＣＸをコードする、核酸分子または該核酸分子の相補体。
4. 【請求項４】 請求項１に記載の単離された核酸分子または該核酸分子の相
   補体であって、該分子が、配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１
   ７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、７４、７６、７８、および８
   ０のヌクレオチドの配列を含む核酸分子に相補的な核酸配列に対して、ストリン
   ジェントな条件下でハイブリダイズする、単離された核酸分子または該核酸分子
   の相補体。
5. 【請求項５】 請求項１に記載の単離された核酸分子であって、該分子が、
   配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、
   ２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９、および８１のアミノ酸配列、また
   は配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４
   、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９、および８１のアミノ酸配列にお
   いて１以上の保存的置換を含むアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、
   単離された核酸分子。
6. 【請求項６】 請求項１に記載の核酸分子のオリゴヌクレオチドまたはその
   相補体であって、該核酸分子は１００ヌクレオチド未満の長さであり、そして配
   列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５
   、２７、２９、３１、７４、７６、７８、および８０の少なくとも６個連続した
   ヌクレオチドを含む、オリゴヌクレオチドまたはその相補体。
7. 【請求項７】 請求項１に記載の核酸分子を含む、核酸ベクター。
8. 【請求項８】 前記ベクターが発現ベクターである、請求項７に記載の核酸
   ベクター。
9. 【請求項９】 前記核酸分子に作動可能に連結された調節エレメントをさら
   に含む、請求項７に記載のベクター。
10. 【請求項１０】 請求項１に記載の単離された核酸分子を含む、宿主細胞。
11. 【請求項１１】 単離されたポリペプチドであって、以下： ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、
    ２４、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９、および８１のアミノ酸配列
    を含むポリペプチド； ｂ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、
    ２４、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９、および８１のアミノ酸配列
    を含むポリペプチドのフラグメントであって、該フラグメントが、配列番号２、
    ４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、
    ３０、３２、７５、７７、７９、および８１の少なくとも６個連続したアミノ酸
    を含む、フラグメント； ｃ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、
    ２４、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９、および８１のアミノ酸配列
    を含むポリペプチドの誘導体； ｄ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、
    ２４、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９、および８１のアミノ酸配列
    を含むポリペプチドのアナログ； ｅ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、
    ２４、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９、および８１のアミノ酸配列
    を含むポリペプチドのホモログ；ならびに ｆ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、
    ２４、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７９、および８１のアミノ酸配列
    を含むポリペプチドの天然に存在する対立遺伝子改変体であって、該ポリペプチ
    ドが、ストリンジェントな条件下で核酸分子にハイブリダイズする核酸分子によ
    ってコードされる、対立遺伝子改変体、 からなる群から選択されるポリペプチドに対して少なくとも９９％同一である、
    単離されたポリペプチド。
12. 【請求項１２】 前記ポリペプチドまたはそのフラグメントが、配列番号２
    、４、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８
    、３０、３２、７５、７７、７９、および８１のうちの少なくとも１つのアミノ
    酸配列を含む、請求項１１に記載のポリペプチド。
13. 【請求項１３】 請求項１１に記載のポリペプチドに選択的に結合する抗体
    、ならびに該抗体のフラグメント、ホモログ、アナログ、および誘導体。
14. 【請求項１４】 請求項１１に記載のポリペプチドを産生する方法であって
    、該方法は、前記核酸分子が発現される条件下で、請求項１０に記載の宿主細胞
    を培養する工程を包含する、方法。
15. 【請求項１５】 サンプル中において請求項１１に記載のポリペプチドの存
    在を検出する方法であって、該サンプルと請求項１１に記載のポリペプチドに選
    択的に結合する化合物とを接触させる工程、および請求項１１に記載のポリペプ
    チドに結合した化合物が該サンプル中に存在するか否かを決定する工程を包含す
    る、方法。
16. 【請求項１６】 サンプル中において請求項１に記載の核酸分子の存在を検
    出する方法であって、該サンプルと該核酸分子に選択的に結合する核酸プローブ
    またはプライマーとを接触させる工程、および請求項１に記載の核酸分子に結合
    した核酸プローブまたはプライマーが該サンプル中に存在するか否かを決定する
    工程を包含する、方法。
17. 【請求項１７】 請求項１１に記載のポリペプチドの活性を調節する方法で
    あって、該方法は、請求項１１に記載のポリペプチドを含む細胞サンプルと該ポ
    リペプチドに結合する化合物とを、該ポリペプチドの活性を調節するに十分な量
    で接触させる工程を包含する、方法。
18. 【請求項１８】 ＳＥＣＸ関連障害を処置または予防する方法であって、該
    方法は、このような処置または予防が所望される被験体に、以下： ａ）請求項１に記載の核酸； ｂ）請求項１１に記載のポリペプチド；および ｃ）請求項１３に記載の抗体、 からなる群から選択される治療剤の一定量を投与する工程を包含し、 ここで、該治療剤は、該被験体において該ＳＥＣＸ関連障害を処置または予防す
    るに十分な量で投与される、方法。
19. 【請求項１９】 薬学的組成物であって、以下： ａ）請求項１に記載の核酸； ｂ）請求項１１に記載のポリペプチド；および ｃ）請求項１３に記載の抗体、 からなる群から選択される治療剤の治療的有効量または予防的有効量、および薬
    学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
20. 【請求項２０】 １以上の容器において請求項１９に記載の薬学的組成物の
    治療的有効量または予防的有効量を含む、キット。
21. 【請求項２１】 ヒト疾患に関連した症候群を処置するための医薬の製造に
    おける治療剤の使用であって、該疾患はＳＥＣＸ関連障害から選択され、ここで
    該治療剤は、以下： ａ）請求項１に記載の核酸； ｂ）請求項１１に記載のポリペプチド；および ｃ）請求項１３に記載の抗体、 からなる群から選択される、使用。
22. 【請求項２２】 ＳＥＣＸ関連障害に対する活性の調節因子またはＳＥＣＸ
    関連障害に対する潜伏もしくは素因の調節因子をスクリーニングする方法であっ
    て、該方法は、以下； ａ）ＳＥＣＸ関連障害について危険性の増加した試験動物に対して、試験化合
    物を投与する工程であって、該試験動物は、ＳＥＣＸタンパク質を組換え的に発
    現する、工程； ｂ）該試験動物における該タンパク質の活性の発現を測定する工程； ｃ）該タンパク質を組換え的に発現し、かつＳＥＣＸ関連障害について危険性
    の増加していないコントロール動物において、該タンパク質の活性を測定する工
    程；および ｄ）該試験動物および該コントロール動物における該タンパク質の発現を比較
    する工程であって、ここで該コントロール動物と相対的な該試験動物における該
    タンパク質の活性の変化は、該試験化合物が、ＳＥＣＸ関連障害の潜伏の調節因
    子であることを示す、工程、 を包含する、方法。
23. 【請求項２３】 請求項２２に記載の方法であって、ここで前記試験動物は
    、野生型試験動物と相対的に増加したレベルで、試験タンパク質導入遺伝子を発
    現するかまたはプロモーターの制御下で該導入遺伝子を発現する組換え試験動物
    であり、ここで該プロモーターは、該導入遺伝子のネイティブな遺伝子プロモー
    ターではない、方法。
24. 【請求項２４】 請求項１１に記載のＳＥＣＸポリペプチドの変更されたレ
    ベルに関連した疾患の存在または該疾患に対する素因を決定する方法であって、
    該方法は、以下： ａ）哺乳動物被験体由来のサンプルにおける該ポリペプチドの量を測定する工
    程；および ｂ）工程（ａ）における該ポリペプチドの量を、コントロールサンプル中に存
    在する該ポリペプチドの量に対して比較する工程、 を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の工程（ａ）におけ
    る該ポリペプチドのレベルの変更が疾患状態を示す、方法。
25. 【請求項２５】 請求項１に記載のＳＥＣＸ核酸の変更されたレベルに関連
    した疾患の存在または該疾患に対する素因を決定する方法であって、該方法は、
    以下： ａ）哺乳動物被験体由来のサンプルにおける該核酸の量を測定する工程；およ
    び ｂ）工程（ａ）における該核酸の量を、コントロールサンプル中に存在する該
    核酸の量に対して比較する工程、 を包含し、ここで、該コントロールサンプルと比較した場合の工程（ａ）におけ
    る該核酸のレベルの変更が疾患状態を示す、方法。
26. 【請求項２６】 哺乳動物における病理学的状態を処置する方法であって、
    該方法は、被験体に、病理学的状態を軽減する量のポリペプチドを投与する工程
    を包含し、ここで該ポリペプチドが、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１
    ４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、７５、７７、７
    ９、および８１のアミノ酸配列を有するポリペプチドに対して少なくとも９５％
    同一なアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはその生物学的に活性なフラグ
    メントである、方法。
27. 【請求項２７】 哺乳動物における病理学的状態を処置する方法であって、
    該方法は、被験体に、病理学的状態を軽減するに十分な量の請求項１３に記載の
    抗体を投与する工程を包含する、方法。