JP2002533089A5 - - Google Patents

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子修飾された植物を生産する方法であって、
(a)形質転換を行って完全な植物体に再生することができる少なくとも一つの植物細胞を用意する工程、
(b)少なくとも一つの前記植物細胞に
(i)植物細胞にとって致死的な活性を有する遺伝子産物をコードする抑制可能な致死遺伝子、および
(ii)前記致死遺伝子の遺伝子産物の活性を抑制することができる遺伝子産物をコードするリプレッサー遺伝子
を導入する工程、
(c)少なくとも一つの前記植物細胞から複数の完全な植物体を再生する工程、ならびに
(d)遺伝子修飾された植物内における前記リプレッサー遺伝子および前記抑制可能致死遺伝子の組み込みおよびこれら相互の独立した隔離を決定することにより、前記複数の完全な植物体の少なくとも一つから得られるか、またはその子孫である遺伝子修飾された植物を選択する工程
を含んでなる、方法。
【請求項２】
前記導入工程が、前記抑制可能致死遺伝子を第一のベクター構築物中に用意し、前記リプレッサー遺伝子を第二のベクター構築物中に用意することをさらに含んでなり、前記選択工程の前に前記複数の完全な植物体の少なくとも２つの植物を交雑する工程をさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
抑制可能致死遺伝子を含んでなる前記第一のベクター構築物が条件致死遺伝子をさらに含んでなり、該条件致死遺伝子が、遺伝子修飾された植物に化学的または生理学的ストレスが加えられたときに該植物の細胞にとって致死的な遺伝子産物をコードするように構成されたものである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記リプレッサー遺伝子および前記抑制可能致死遺伝子の相互の独立した隔離の決定が、遺伝子修飾された前記植物の植物細胞の染色体対の向き合った姉妹染色体上に前記リプレッサー遺伝子と前記抑制可能致死遺伝子がそれぞれ配置されていることを決定することを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記導入工程が、前記抑制可能致死遺伝子および前記リプレッサー遺伝子を単一のベクター構築物の部分として用意することを含んでなり、独立した隔離が部位特異的リコンビナーゼまたはトランスポザーゼを用いることによって行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
(a)前記抑制可能致死遺伝子および前記リプレッサー遺伝子の少なくとも一つの転写制御のために組織特異的プロモーター、好ましくは種子特異的プロモーター、より好ましくはファゼオリンプロモーターを用意する工程、
(b)前記リプレッサー遺伝子の転写制御のために誘導性プロモーターを用意する工程、および
(c)前記抑制可能致死遺伝子と作動可能に連結されているＤＮＡオペレーター配列であって、前記リプレッサー遺伝子の遺伝子産物と結合して前記抑制可能致死遺伝子の遺伝子産物の転写を抑制するように構成されているＤＮＡオペレーター配列を用意する工程
のうちの少なくとも一つをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
目的とする形質をコードする遺伝子を第一のベクター構築物中の前記抑制可能致死遺伝子に連結することをさらに含んでなり、前記導入工程が、前記第一のベクター構築物を少なくとも一つの前記植物細胞に導入することを含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
複数の完全な植物体を再生する前記工程が、前記抑制可能致死遺伝子および前記リプレッサー遺伝子についてホモ接合性である少なくとも一つの植物体を再生することを含んでなり、
好ましくは、前記抑制可能致死遺伝子および前記リプレッサー遺伝子についてホモ接合性である少なくとも一つの前記植物体と、前記抑制可能致死遺伝子および前記リプレッサー遺伝子についてホモ接合性である第二の植物体とを交雑して、遺伝子修飾された前記植物を生産する工程をさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
異種生殖細胞質の遺伝子移入または異系交雑の際に発現される少なくとも一つの抑制可能致死遺伝子を有する、遺伝子修飾された植物を生産する方法であって、
(a)形質転換を行って完全な植物体に再生することができる植物細胞を用意する工程、
(b)前記植物細胞に
(i)種子特異的プロモーターによって転写制御されている抑制可能致死遺伝子であって、植物細胞にとって致死的な活性を有する遺伝子産物をコードする、抑制可能致死遺伝子、
(ii)前記抑制可能致死遺伝子と作動可能に連結されているオペレーター配列、
(iii)前記オペレーター配列に結合することにより前記抑制可能致死遺伝子の遺伝子産物の活性を抑制することができる遺伝子産物をコードする細菌リプレッサー遺伝子、および
(iv)前記抑制可能致死遺伝子に連結された、目的とする形質をコードする少なくとも一つの遺伝子
を導入する工程、
(c)前記植物細胞から完全な植物体を再生する工程、
(d)前記リプレッサー遺伝子および前記抑制可能致死遺伝子の組み込みおよびこれら相互の独立した隔離を決定することにより、前記完全な植物体から得られるか、またはその子孫である遺伝子修飾された植物を選択する工程
を含んでなる、方法。
【請求項１０】
(a)植物細胞にとって致死的な活性を有する遺伝子産物をコードする、抑制可能致死遺伝子、および
(b)前記抑制可能致死遺伝子の遺伝子産物の活性を抑制することができる遺伝子産物をコードするリプレッサー遺伝子
を含んでなる、遺伝子修飾された植物またはその子孫であって、
前記抑制可能致死遺伝子および前記リプレッサー遺伝子が前記植物のゲノム中に安定して組み込まれており、相互に独立して隔離されている、遺伝子修飾された植物またはその子孫。
【請求項１１】
遺伝子修飾された植物に化学的または生理学的ストレスが加えられたときに該植物の細胞にとって致死的な遺伝子産物をコードする条件致死遺伝子をさらに含んでなる、請求項１０に記載の遺伝子修飾された植物。
【請求項１２】
前記リプレッサー遺伝子と前記抑制可能致死遺伝子が、遺伝子修飾された前記植物の染色体対の向き合った姉妹染色体上にそれぞれ配置されている、請求項１０に記載の遺伝子修飾された植物。
【請求項１３】
前記抑制可能致死遺伝子および前記リプレッサー遺伝子が単一のベクター構築物の部分として前記植物中に導入されてなり、前記単一のベクター構築物が、前記リプレッサー遺伝子と前記抑制可能致死遺伝子の相互に独立した隔離を可能とする少なくとも一つの部位特異的リコンビナーゼまたはトランスポザーゼを含むものである、請求項１０に記載の遺伝子修飾された植物。
【請求項１４】
(a)前記抑制可能致死遺伝子および前記リプレッサー遺伝子の少なくとも一つの転写制御のための組織特異的プロモーター、好ましくは種子特異的プロモーター、より好ましくはファゼオリンプロモーター、
(b)前記リプレッサー遺伝子の転写制御のための誘導性プロモーター、ならびに
(c)前記抑制可能致死遺伝子と作動可能に連結されているＤＮＡオペレーター配列であって、前記リプレッサー遺伝子の遺伝子産物と結合して前記抑制可能致死遺伝子の遺伝子産物の転写を抑制するように構成されているＤＮＡオペレーター配列
のうちの少なくとも一つをさらに含んでなる、請求項１０に記載の遺伝子修飾された植物。
【請求項１５】
前記抑制可能致死遺伝子が、目的とする形質をコードする遺伝子に連結されている、請求項１０に記載の遺伝子修飾された植物。
【請求項１６】
前記抑制可能致死遺伝子が、オペレーター配列と作動可能に連結されるとともに種子特異的プロモーターによって転写制御されており、
リプレッサー遺伝子が、前記オペレーター配列に結合することにより前記抑制可能致死遺伝子を抑制することができる遺伝子産物をコードする細菌リプレッサー遺伝子を含み、そして、
目的とする形質をコードする少なくとも一つの遺伝子が前記抑制可能致死遺伝子に連結されている、請求項１０に記載の遺伝子修飾された植物。
【請求項１７】
請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の遺伝子修飾された植物またはその子孫を生育地から除去する方法であって、前記抑制可能致死遺伝子の抑制を解除する物質またはストレスを前記植物に適用することを含んでなる、方法。
【請求項１８】
請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の遺伝子修飾された植物またはその子孫を生育地から除去する方法であって、前記リプレッサー遺伝子の発現を阻害することを含んでなり、これにより前記抑制可能致死遺伝子の抑制が解除される、方法。
【請求項１９】
請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の遺伝子修飾された植物またはその子孫を生育地から除去する方法であって、前記抑制可能致死遺伝子の抑制を解除する外部からの物質または化学的もしくは生理学的ストレスを前記植物に適用することを含んでなる、方法。
【請求項２０】
請求項１１に記載の遺伝子修飾された植物またはその子孫を生育地から除去する方法であって、化学的または生理学的ストレスを前記植物に適用することを含んでなり、これにより、遺伝子修飾された前記植物の細胞に致死的な前記遺伝子産物が発現する、方法。
【請求項２１】
前記抑制可能致死遺伝子が目的とする形質をコードする遺伝子に連結されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。