JP2002529507A

JP2002529507A - ウイルス感染を治療するためのコポリマー組成物

Info

Publication number: JP2002529507A
Application number: JP2000582041A
Authority: JP
Inventors: アラクホフ，バレリー; カバノフ，アレクサンダー; パーニアック，マイケル; クリンスキー，エフゲニー
Original assignee: スプラテックファーマインコーポレイテッド
Priority date: 1998-11-18
Filing date: 1999-11-17
Publication date: 2002-09-10
Also published as: CA2351516A1; EP1135137A1; AU1733300A; US6218438B1; EP1135137A4; WO2000028994A1

Abstract

(57)【要約】生物学的製剤またはその誘導体およびポリ(オキシエチレン)−ポリ(オキシプロピレン)ブロックコポリマーを含む、デリバリー用組成物である。該組成物は、感染ウイルスによる免疫不全の治療に有用である。本発明はまた、同組成物を用いた治療方法も含む。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】関連出願の参照本願は、１９９８年１１月１８日付で出願された仮出願番号６０／１０８，９
７５号をもって優先権を主張しており、その開示内容はここに参照のために引用
される。

【０００２】発明の分野ＨＩＶ−１感染のような免疫不全ウイルス感染（ＨＩＶ）を含む、レトロウイ
ルス感染の治療に有用なコポリマー医薬組成物である。

【０００３】該組成物は、治療指数の改善、副作用の減少、および、治療コストの低減を実
現しており、ＨＩＶ、ＭＬＶ、ＨＴＬＶ、Ｅ．ｃｏｌｉ、マイコバクテリアを含
むウイルス、バクテリアおよび寄生虫、ＲＮアーゼＨ、および、病原体の増殖に
重要な役割を担うその他の金属依存性酵素誘発性の様々な感染症の治療に有用で
ありうる。

【０００４】発明の背景ＡＩＤＳ、すなわち不治の病気である後天性免疫不全症候群は、ヒト免疫不全
ウイルス（ＨＩＶ）の感染によって発症する。現在、様々な生物学的製剤（biol
ogical agent）がＨＩＶ−１感染の治療に利用されている（Chaudry MN, and Sh
epp DH, Dermatol Clin. 15:2, 319-29(1997); Beach JW, Clin Ther, 1998 Jan
-Feb, 20:1, 2-25）。ＨＩＶはレトロウイルスであり、その遺伝情報はＲＮＡと
して持ち込まれる。感染後、このウイルス性ゲノムＲＮＡはウイルスＤＮＡに転
換されなければならない。この重要なＨＩＶ複製段階は複数の段階を含み、それ
ぞれウイルス酵素の逆転写酵素（ＲＴ）によって触媒される（Arnold, E. et al
., Drug Des. Discov., 1996 Apr., 13:3-4, 29-47）。ＲＴは３つの酵素活性、
すなわちＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ活性（ＲＤＤＰ）、リボヌクレアーゼ
Ｈ活性（ＲＮアーゼＨ）およびＤＮＡ依存性ポリメラーゼ活性（ＤＤＤＰ）を有
する。哺乳類に似たようなものはないが、ＲＴは抗ウイルス剤開発のための重要
な標的である。多くのこのような阻害剤が見出されており、例えば３’−アジド
−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）および２’，３’−ジデオキシ−３’チア
シチジン（３ＴＣ）のようなジデオキシヌクレオシド（ｄｄＮ）、ならびに、ネ
ビラピン（nevirapine）、キノキサリン（quinoxaline）、ピリジノン（pyridin
one）、ならびにＢＨＡＰのような非ヌクレオシド阻害剤（nonnucleoside inhib
itor）（ＮＮＩ）が挙げられる。ほとんどこれらすべての阻害剤はＲＴのＲＤＤ
Ｐおよび／またはＤＤＤＰ活性を対象にしている。

【０００５】ウイルスＤＮＡ合成が完了すると、そのウイルスＤＮＡはウイルス酵素のイン
テグラーゼ（ＩＮ）で触媒される反応によって感染宿主細胞のＤＮＡに組み込ま
れる。このプロウイルスＤＮＡは、新しいＨＩＶウイルス（ウイルス粒子）を生
産するための遺伝情報をコードしており、この状態において抗ウイルス的な干渉
を受け難い。

【０００６】細胞性装置（cellular machinery）が、プロウイルスＤＮＡ（provirai DNA）
の遺伝情報から新しいＨＩＶのＲＮＡおよびタンパク質を生産することに利用さ
れる。これらのウイルスの構成成分が細胞の形質膜で組み立てられ、新生（nasc
ent）ビリオンが放出される。新生ＨＩＶビリオンは「未成熟な」形態に組み立
てられ、ウイルスの成熟はビリオン放出中およびその後になされる。この成熟は
ビリオンタンパク質のタンパク質分解性のプロセシングを含み、このプロセスは
ＨＩＶプロテアーゼによってなされる。未成熟のＨＩＶビリオンは非感染性であ
ることから、ＨＩＶプロテアーゼが抗ウイルス的な介入（intervention）のため
のもう一つの重要な標的であることがわかってきた。ＨＩＶプロテアーゼの阻害
剤としては、スキナビル（saquinavir）、インジナビル（indinavir）およびリ
トナビル（ritonavir）が挙げられる。

【０００７】プロウイルスＤＮＡ形成までのＨＩＶ複製の段階は、「組み込み前の（pre-in
tegrational）」段階と考えられており、プロウイルスＤＮＡの組み込み後にお
ける新生ビリオンの形成に関与する段階は、「組み込み後の（post-integration
al）」と考えられている。現行のＨＩＶに感染個体への化学療法において、ＲＴ
阻害剤およびＨＩＶプロテアーゼ阻害剤の組み合わせが用いられる。この組み合
わせの臨床的な効果は、ＨＩＶ複製の組み込み前の段階での阻害（ＲＴ）および
組み込み後の段階での阻害（プロテアーゼ）の両方にある程度起因している(Mcl
ntosh EM, et al., Acta Biochim Pol, 1996, 43:4, 583-92)。

【０００８】多くの抗ウイルス剤は、生理的な液体中での溶解度および安定性が低い。化学
療法薬は細胞膜を通過して輸送され難い。さらにこれらの薬剤の多くは、薬理学
的な標的に到達する前に、血漿タンパク質と結合し、さらに血流中の他の非特異
的相互作用によって結合してしまう。加えて、現在の抗ＨＩＶ化学療法薬に関す
るその他の深刻な問題がある。一般に認められた抗ウイルス剤を用いた治療は、
初めのうちはＨＩＶ感染患者の生活の質と寿命を改善させるが、治療が長引くと
必然的に薬剤耐性を招く(Kuritzkes DR, AIDS, 1996 Dec. 10 Suppl 5; S27-31;
Richman DD, Adv Exp Med Biol, 1996, 394; 383-95)。ＲＴ阻害剤への耐性は
ＲＴの突然変異に関連しており、プロテアーゼ阻害剤への耐性はＨＩＶプロテア
ーゼの突然変異に関連している。薬剤耐性ＨＩＶの臨床的様相（clinical appea
rance）は望ましくない予後を付与している。

【０００９】発明の要約本発明は、特に（１）化学療法薬に関する医薬組成物および方法、および（２
）抗ＨＩＶ−１剤、とりわけその標的細胞または組織が生物学的製剤に耐性を有
するものに関する医薬組成物に関するものである。

【００１０】従って本発明は、金属および金属キレート剤（以下、生物学的製剤（biologic
al agent）または生物学的活性製剤（biologically active agent）とする）を
含むＨＩＶ治療のための組成物に関する。

【００１１】一つの実施形態において、本発明は、（ａ）一般式（Ｉ）

【００１２】

【化２】

【００１３】（式中、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃はＨ、ＯＨ、ＣＨ₃、ＯＣＨ₃、Ｃ（ＣＨ₃）₃［−ｔ
ｅｒｔ−ブチル］またはフェニルであり、ＸはＯＣＨ₃またはＯＣＨ₂ＣＨ₃であ
る。金属（Ｍｅ）は化合物Ｉによってキレート化されうる任意の金属である）で示されるＮ−アロイルヒドラゾン（N-aroyl hydrazone）の金属錯体である生
物学的製剤を含む医薬組成物を提供するものである。例えばＦｅ（II）、Ｆｅ（
III）、Ｍｎ（II）、Ｃｏ（II）、Ｍｇ（II）等であり、好ましくはＦｅ（III）
である。

【００１４】最も好ましい形態において、Ｒ₁はＣ（ＣＨ₃）₃であり、Ｒ₂およびＲ₃はＨで
あり、ＭｅはＦｅ（III）であり、ＸはＯＣＨ₃である。

【００１５】本発明は、ブロックコポリマーを組み合わせて使用してもよい。いくつかのブ
ロックコポリマー構造を以下に示す。

【００１６】

【化３】

【００１７】最も簡単なブロックコポリマー構造は末端で結合した二つのセグメントを含み
、Ａ−Ｂ型ジブロック（A-B type diblock）を形成する。二個より多いセグメン
トを末端で連結することによって、Ａ−Ｂ−Ａ型トリブロック（triblock）、Ａ
−Ｂ−Ａ−Ｂ型マルチブロック（multiblock）また同様にマルチセグメント（mu
ltisegment）Ａ−Ｂ−Ｃ構造が生じる。ブロックコポリマーにおいて主鎖を決定
し、そこで一種または数種の反復単位を相違なるポリマーセグメントに連結する
場合、そのコポリマーは例えばＡ（Ｂ）_n型のようなグラフト構造を有する。よ
り複雑な構造としては、例えば（ＡＢ）_nまたはＡ_nＢ_mのような星状ブロック（s
tarblock）が挙げられ、これは単一の中心に二個より多いポリマーセグメントが
結合したものである。

【００１８】好ましい実施形態において、生物学的製剤は、その生物学的製剤の溶解度およ
び／またはその細胞内輸送を改善しうる界面活性剤と組み合わされる。好ましい
界面活性剤は、非イオン系または両性イオン性である。好ましい非イオン系界面
活性剤は、ブロック構造、グラフト構造または星状ブロックコポリマー構造を有
する。好ましいブロックコポリマーは、ポリ(オキシエチレン)鎖セグメントおよ
びポリ(オキシプロピレン)鎖セグメントを含む。さらに、等張水溶液中、３７℃
で、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）が約０．５％（ｗ／ｖ）以下である界面活性剤を
有する組成物が好ましい。

【００１９】他の実施形態において、本発明は、予め選択された組織を生物学的製剤の標的
にする方法を提供する。この方法は、予め選択された組織を有する動物に上記組
成物を投与することを含み、ここで標的部位（targeting moiety）は該組織を標
的にするように選択される。

【００２０】さらに他の実施形態において、本発明は、ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オ
キシプロピレン）ブロックコポリマーおよび生物学的製剤またはその誘導体を含
む生物学的活性製剤をデリバリーするための組成物に関し、ここでポリ（オキシ
エチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロックコポリマーの疎水性部分の割合
は約５０％である。

【００２１】好ましいブロックコポリマーは、式：

【００２２】

【化４】

【００２３】

【化５】

【００２４】で示され、式中、ｘ、ｙ、ｚ、ｉおよびｊは、約２〜約８００の値であり、Ｒ¹
、Ｒ²の対のそれぞれについては、一方が水素でありかつ他方がメチル基である
。

【００２５】他の好ましい実施形態において、本発明は、生物学的活性製剤またはその誘導
体および式：

【００２６】

【化６】

【００２７】（式中、Ｒ¹、Ｒ²の対のそれぞれについては、一方が水素でありかつ他方がメチ
ル基である）で示されるブロックコポリマーを含む、生物学的活性製剤またはその誘導体のデ
リバリーのための組成物に関する。

【００２８】他の好ましい実施形態において、本発明は、生物学的製剤またはその誘導体お
よび式：

【００２９】

【化７】

【００３０】（式中、ｘ、ｙおよびｚは約２〜約８００の値である）で示されるブロックコポリマーを含む、生物学的活性製剤またはその誘導体のデ
リバリーのための組成物に関する。

【００３１】本発明はまた、これらの組成物を用いたＨＩＶ−１感染を含む感染症を治療す
る方法に関する。

【００３２】発明の詳細な説明定義本明細書に使用される以下の用語は、以下の意味を有する。生物学的製剤：Ｉのように示される一般的な構造を有するＮ−アロイルヒドラゾ
ンの金属錯体である。

【００３３】

【化８】

【００３４】ＣＣ ₅₀ ：５０％細胞毒性が記録される濃度である。抗ウイルス化合物に関する細
胞毒性とは、細胞変性、すなわちウイルス感染による細胞死とは異なり、薬剤そ
れ自身から生じる毒性のことをいう。慢性感染細胞（chronically-infected cell）：「継続的な感染（persistently-
infected）」細胞としても知られている。これらはＨＩＶに感染しており、細胞
ＤＮＡに組み込まれたプロウイルスＤＮＡを含み、継続的に新しいウイルス粒子
を生産している。これらの細胞において、ＨＩＶ感染による明白な細胞変性効果
（cytopathic effect）が現われない。細胞変性効果（cytopathic effect）：ＨＩＶ感染による細胞致死（cell killin
g）および細胞死（cell death）である。疎水性部分の割合：Ｂ型ブロックによって製造されるブロックコポリマーの分子
量の割合である。疎水性部分の質量：ブロックコポリマーのＢ型ブロックが占める分子量である。
ＩＣ₅₀ ：５０％阻害効果が得られる濃度である。親油性部位：標的部位に結合して、コポリマーミセルの親油性部分に分配される
親油性置換基である。プロウイルス：感染宿主細胞のゲノムＤＮＡに組み込まれるウイルスＤＮＡであ
る。耐性：ウイルスレベルでの耐性とは、抗ウイルス剤に対するＨＩＶ応答が欠如す
ることであり、これは特定のウイルス遺伝子の突然変異によって生じる。細胞レ
ベルでは、生物学的製剤に対して同時に耐性が生じる現象をいう。合胞体：ＨＩＶ感染誘発性の細胞融合に起因する巨大な多核細胞からなる構成体
である。標的部位（Targeting moiety）：細胞、組織、ウイルス、または、細胞表面レセ
プターもしくはアクセプター分子のような基層成分によって認識される分子構造
である。

【００３５】本発明は特に、生物学的製剤、とりわけその標的細胞または標的組織がＨＩＶ
−１に感染しているような生物学的製剤に関する、医薬組成物および方法に関す
る。ヒトの細胞型の多くはＨＩＶに感染しやすいが、感染の程度は細胞型によっ
てかなり異なる。一般的に、ＣＤ４レセプターを有する細胞（ＣＤ４＋細胞）が
最も感染しやすく、最もＨＩＶ複製を許容しやすい。このような細胞としては、
例えばＴ−リンパ球およびマクロファージが挙げられる。

【００３６】リンパ球の細胞系および単球／マクロファージ由来の永続的に確立された多様
な細胞系が、インビトロ培養でＨＩＶを増殖、維持することに用いられうる。こ
れらは、成人Ｔ細胞白血病患者から分離されたクローン化ヒトＴ−リンパ球細胞
であるＣＤ４＋ＭＴ２およびＭＴ４細胞系を含む。これらの細胞は、ＨＩＶ誘発
性の細胞変性効果を非常に受けやすく、抗ウイルス剤の急性感染細胞変性阻害の
分析に有用である。

【００３７】他の細胞としては、ヒト皮膚Ｔリンパ腫（cutaneous T-lymphoma）患者から得
られたクローン化Ｈ９細胞系が挙げられる。Mann, DL et al., AIDS Res Hum Re
troviruses 5:253 (1989)を参照。Ｈ９細胞はＣＤ４＋であり、ＨＩＶ感染を許
容しやすいが、ＨＩＶ誘発性の細胞変性効果を比較的受けにくい。ＨＩＶに感染
すると、これらの細胞は感染によって死なずに継続的に新しいウイルスを生産す
る。このような感染細胞、すなわちＨ９＋は「慢性的に感染した（chronically-
infected）」または「継続的に感染した（persistently-infected）」と述べら
れる。

【００３８】プロウイルスＤＮＡの形成までのＨＩＶ複製の段階は「組み込み前の」段階と
考えられており、プロウイルスＤＮＡの組み込み後における新生ビリオンの形成
に関与する段階は「組み込み後の（post-integrational）」と考えられている。
ＭＴ２およびＭＴ４細胞系は、ＨＩＶ複製の組み込み前の段階に対する抗ウイル
ス活性（特にウイルス性の逆転写に対する効果）を評価するのに有用である。Ｈ
９＋細胞は、ウイルスの組み立て、放出および成熟を含む、ＨＩＶ複製の組み込
み後段階に対する抗ウイルス活性を試験するのに有用である。

【００３９】ＨＩＶ感染患者の体液、例えば血液、精液および膣液（vaginal fluid）は、
遊離ビリオンだけでなく、ウイルス感染白血球（リンパ球およびマクロファージ
を含む）も含む。Levy, J.A. Microbiol. Rev. 57: 183 (1993)を参照。これら
のＨＩＶ感染細胞は、非感染細胞へのウイルス伝播（すでに感染した個体中での
伝播、および、感染個体から非感染個体への伝播の両方）の重要な源である。こ
のような感染の伝播は、慢性感染細胞で生産される遊離ＨＩＶビリオンへ晒され
ること、または、非感染細胞と継続的な感染細胞とが接触すること（細胞−細胞
伝播）に起因するものでありうる。非感染ＭＴ２細胞とＨ９＋細胞との共培養（
co-culture）は、ＨＩＶの細胞−細胞伝播の阻害に関する抗ウイルス剤の効果を
評価するのに有用な手段である。

【００４０】本発明の組成物はまた、ＨＩＶ−１感染細胞への薬剤透過性を増強するのに用
いられうる。

【００４１】生物学的活性製剤錯体化されていない原物質の（Uncomplexed parent）Ｎ−アロイルヒドラゾン
である、Ｎ−（４−ｔ−ブチルベンゾイル）−２−ヒドロキシ−１−ナフタルデ
ヒドヒドラゾン（naphthaldehyde hydrazone）（ＢＢＮＨ；II）は、インビトロ
におけるＨＩＶ−１ＲＴの３種の酵素活性（ＲＤＤＰ、ＲＮアーゼＨおよびＤ
ＤＤＰ）すべてに関する良好な阻害剤であり、感染細胞中のＨＩＶ−１複製を阻
害する。Borkow et al.,Biochemistry 36: 3179 (1997)を参照。

【００４２】

【化９】

【００４３】

【外１】

【００４４】題がある。インビトロでのＲＴＲＮアーゼＨおよびＩＮ両方の阻害は、時間依
存性のプロセスであり、ＢＢＮＨと酵素とを１０〜１５分プレインキュベートし
た後しか最大阻害を示さない。このプレインキュベーションの必要性は、ＨＩＶ
−１感染細胞におけるＲＴＲＮアーゼＨおよび／またはＩＮの阻害剤としての
化合物の有用性を減少させてしまう。加えてＢＢＮＨは細胞毒性であり、おそら
くこの広範囲の特異性を有する金属キレート化剤と、正常細胞の金属依存性代謝
に関与する酵素との相互作用に起因するのであろう。

【００４５】ＢＢＮＨのＦｅ（III）錯体は、錯体化されていない原物質のＢＢＮＨに比べ
て、インビトロでのＲＴに対する改善された阻害活性を示す。Ｆｅ（III）−Ｂ
ＢＮＨは、実質的には細胞毒性ではない。しかしながら、該化合物はまた細胞中
のＨＩＶ−１複製に対して抗ウイルス活性も示さないが、インビトロにおいて優
れたＲＴ阻害を示す。Ｆｅ（III）−ＢＢＮＨはまたほとんど水媒体に不溶であ
り、感染細胞に運搬するには有機溶媒の使用が必要である。このようなアプロー
チはインビトロ試験には適用されるが、化学療法プロセス用のインビボにおいて
は使用できない。さらにその上、Ｆｅ（III）−ＢＢＮＨの細胞中におけるＨＩ
Ｖ−１複製の阻害能力を試験するインビボの実験でさえ（ここでＦｅ（III）−
ＢＢＮＨの水−有機配合物を用いている）、化合物は非常に低い活性を示した。
これは、Ｆｅ（III）−ＢＢＮＨが細胞培養液中で溶解形態のままでいることが
できないために、複合体の細胞吸収が制限されることに起因するものと思われる
。それゆえにＦｅ（III）−ＢＢＮＨは、感染細胞中でそのウイルス標的に到達
することができない。

【００４６】本発明において、様々な生物学的製剤が適切に使用される。これらに限定され
ないが、構造Ｉとして示される、Ｆｅ（III）のような金属との１：１錯体であ
るＮ−アロイルヒドラゾン類の化合物が挙げられる。

【００４７】

【化１０】

【００４８】式中、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、Ｈ、ＯＨ、ＣＨ₃、ＯＣＨ₃、Ｃ（ＣＨ₃）₃［−
ｔｅｒｔ−ブチル］またはフェニルであり、Ｘは、ＯＣＨ₃またはＯＣＨ₂ＣＨ₃
である。Ｍｅは好ましくはＦｅ（III）である。さらに好ましくは、Ｒ₁はＣ（Ｃ
Ｈ₃）₃であり、Ｒ₂およびＲ₃はＨであり、ＭｅはＦｅ（III）であり、ＸはＯＣ
Ｈ₃である。

【００４９】また生物学的製剤としても、構造式IIIとして示される、Ｆｅ（III）のような
金属との１：１錯体であるＮ−アロイルヒドラゾン類の化合物が挙げられる。

【００５０】

【化１１】

【００５１】式中、Ｒ₁はＨ、ＯＨ、ＣＨ₃またはＯＣＨ₃であり、ＸはＯＣＨ₃またはＯＣＨ ₂ ＣＨ₃である。好ましいＭｅはＦｅ（III）である。最も好ましい形態において
は、Ｒ₁はＯＨであり，ＭｅはＦｅ（III）であり、ＸはＯＣＨ₃である。

【００５２】ブロックコポリマー近年の調査は、発明の名称が「生物学的製剤組成物（Biological Agent Compo
sitions）」である１９９５年６月７日付で出願された米国特許出願第０８／４
７８，９７８号に詳細に記載されており、その内容は本明細書中に引用される。
そこでは、化学療法薬の効力を増強するための本発明のブロックコポリマーの有
効性は（ａ）疎水性部分の割合、および（ｂ）疎水性部分の質量に依存している
ことが示されている。この有効性は、該割合（ａ）の増加または該質量（ｂ）の
増加のいずれかまたは両方によって増加する。これらの疎水性部分の割合および
疎水性部分の質量の増加はまた、改善されたミセル形成特性と相関しており、こ
こでこれらのコポリマーにおけるミセル形成はより低い濃度で起こる。Hunter e
t al., Macromolecules 26:5030 (1993); Hunter et al., Macromolecules 26:5
592 (1993); Alexandris et al., Macromolecules 27:2414 (1994)を参照。

【００５３】特定の理論に限定されることは好ましくないが、ミセル形成は、改善された生
物学的製剤のデリバリー特性をもたらす物理的特性を評価するための代理物（su
rrogate）として役に立つと考えられている。同様に特定の理論に限定されるこ
とは好ましくないが、改善された生物学的製剤効率および多剤耐性の克服（reve
rsion）をもたらすのは、ミセルそれ自体ではないと考えられている。

【００５４】（ａ）ミセルを形成すること（ここでより大きい有効性は減少されたＣＭＣで
測定される）および（ｂ）様々な生物学的製剤の分配（partitioning）を様々な
生物学的製剤から遊離しているよりむしろミセル状にすることにおけるコポリマ
ーの有効性は、同じパターンに従って増加する。生物学的製剤がミセルに会合し
たままであると仮定すれば、低濃度のミセルの存在によって生物学的製剤および
コポリマーがともに標的組織に確実に到達することが促進されると考えられてい
る。ミセル形態に荷担する分配係数（partitioning coefficient）が、生物学的
製剤がミセルに会合したままであるという仮定に信憑性があるということの保証
を助長している。生物学的製剤のミセル形態はまた、非標的組織による取り込み
から生物学的製剤を保護すると考えられている。この組織は生物学的製剤を代謝
して不活性なまたは毒性の代謝産物にしたり、血液成分、細胞成分等に非特異的
に吸収したりする。

【００５５】本発明の組成物はまた、組み込まれた生物学的製剤の実質的な部分を有する予
め形成されたミセル、または、患者への生物学的製剤の投与中またはその後にそ
れらに溶解している薬剤の実質的な部分とミセルを形成するコポリマー組成物、
のいずれかを含む。本発明の目標とする実施形態において、標的部位は、ミセル
と予め会合するかまたは投与中にミセルに会合するかのいずれかである。特に好
ましいブロックコポリマーは、生理的な温度、等張溶液中で低いＣＭＣ値を有す
るものである。このようなブロックコポリマーは、被験者の血液などの体液で実
質的に希釈された後でも生物学的製剤のミセル状デリバリー賦形剤（delivery v
ehicle）を維持することができる。このような低いＣＭＣ値によって、本発明の
薬剤組成物におけるブロックコポリマーのレベルを減少させて使用することがで
きる。本発明はまた、ハンス（Hansch）およびレオ（Leo）によって開発された
フラグメント定数を参照して説明することもできる。Hansch and Leo, Substitu
ent Constants for Correlation Analysis in Chemistry and Biology, Wiley,
New York, 1979; James, Solubility and Related Properties, Marcel Dekker,
New York, 1986, pp. 320-325を参照。この定数は、分子がオクタノール−水混
合物により形成される相の間に分配される傾向に対する分子部分の寄与を見積も
ることに使用するために開発された。これらの定数は、一般的にハンス−レオフ
ラグメント分配定数（Hansch-Leo fragmental partition constant）（以降、こ
こでは“ハンス−レオフラグメント定数という）と言及される。有機分子に関す
るオクタノール−水分配係数（Ｐ）のハンス−レオ概算は、以下の式によって計
算される。

【００５６】

【数１】

【００５７】式中、ｆ_n値は、分子中の異なる基のフラグメント定数であり、ａ_n値は分子中
のある型の基の数であり、Ｆ_m値は単結合または二重結合のような特定の分子特
徴に関するファクターであり、ｂ_m値はこのような分子特徴の数である。例えば
、エチレンオキサイド反復単位（−ＣＨ₂ＣＨＯ−）に関するハンス−レオフラ
グメント定数は、

【００５８】

【数２】

【００５９】となるであろう。

【００６０】プロピレンオキサイド（−ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₃）Ｏ−）反復単位に関するハンス
−レオフラグメント定数は、

【００６１】

【数３】

【００６２】となるであろう。

【００６３】当業者であれば、分配定数を概算するためのハンス−レオアプローチ、すなわ
ちハンス−レオフラグメント定数が適用されるアプローチによって経験的な分配
係数を正確に得ることができない、ということを理解するであろう。ハンス−レ
オの「化学および生物学における相関分析にの置換定数（Substituent Constant
s for Correlation Analysis in Chemistry and Biology）」、Wiley, New York
, 1979；ジェームス（James）の「溶解度および関連した特性（Solubility and
Related Properties）」、Marcel Dekker, New York, 1986, pp. 320-325を参照
。しかしながら、このアプローチはポリマーのデリバリー賦形剤の疎水性特徴を
定義するためであれば十分正確である。

【００６４】１９９５年６月７日付で出願された米国特許出願第０８／４７８，９７８号、
１９９３年４月２８日付で出願された米国特許出願第０８／０５４，４０３号、
１９９８年２月６日付で出願された米国特許出願第０９／０１９，６４８号、お
よび、１９９８年２月２７日付で出願された米国特許出願第０９／０３１，２７
９号の全開示を、ここに参照するによって引用する。

【００６５】本発明で有用な好ましいブロックコポリマーは、式：

【００６６】

【化１２】

【００６７】で示されるポリマーからなる群より選択される。

【００６８】式中、ＡおよびＡ’はＡ型直鎖状ポリマーセグメントであり、ＢおよびＢ’は
Ｂ型直鎖状ポリマーセグメントであり、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴はそれぞれ式（
Ｉ）、（II）もしくは（III）のブロックコポリマーまたは水素であり、Ｌは結
合基（linking group）であり、ただし、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³またはＲ⁴のうちの２つ
以下は水素である。

【００６９】ポリエーテルコポリマーにおける全親水性（Ａ型）ブロックまたは全疎水性（
Ｂ型）ブロックの反復単位の数は、好ましくは約２〜約８００である。より好ま
しくは反復単位の数は約４〜約２００であり、さらにより好ましくは約５〜約８
０である。ブロックからなる反復単位は、Ａ型およびＢ型に関して、一般的に約
３０〜約５００、好ましくは約３０〜約１００、さらにより好ましくは約３０〜
約６０の分子量を有する。一般的に、Ａ型またはＢ型ブロックそれぞれにおいて
、反復単位間の結合の少なくとも約８０％がエーテル結合であり、好ましくは少
なくとも約９０％がエーテル結合であり、さらに好ましくは少なくとも約９５％
がエーテル結合である。本発明の目的のエーテル結合は、グリコシド結合（すな
わち糖結合（sugar linkages））を含む。しかしながら一つの観点において、単
純なエーテル結合が好ましい。

【００７０】好ましくは、Ａ型ブロックを含むすべての反復単位は、約−０．４未満、より
好ましくは約−０．５未満、さらにより好ましくは約−０．７未満のハンス−レ
オフラグメント定数を有する。好ましくは、Ｂ型ブロックを含むすべての反復単
位は、ハンス−レオフラグメント定数が−約０．３０以上、より好ましくは−約
０．２０以上である。

【００７１】本発明の第一の実施形態によるポリマーとして、以下の式を有するブロックコ
ポリマーが挙げられる。

【００７２】

【化１３】

【００７３】

【化１４】

【００７４】式中、ｘ、ｙ、ｚ、ｉおよびｊは、約２〜約８００、好ましくは約５〜約２０
０、さらに好ましくは約５〜約８０の値であり、ここでＲ¹、Ｒ²の対のそれぞれ
については、一方が水素でありかつ他方がメチル基である。式（Ｖ）〜（VII）
は過剰に簡素化されており、実際にはＢブロック内のイソプロピレン残基の方向
はランダムである。このランダムな方向は式（VIII）および（IX）に示されてお
り、これらはより完全である。このようなポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキ
シプロピレン）化合物は、Santon, Am. Perfumer Cosmet., 72(4):54-58 (1958)
; Schmolka, Loc. cit. 82(7):25-30 (1967); Non-ionic Surfactants, Schick,
ed. (Dekker, N.Y., 1967), pp. 300-371によって説明されている。このような
化合物の多くは「リポロキサマー（lipoloxamer）」、「プルロニック（pluroni
c）」および「シンペロニック（synperonic）」のような商品名で商業的に入手
可能である。Ｂ−Ａ−Ｂ式のプルロニックポリマーはしばしば「リバースト（re
versed）」プルロニック、「プルロニックＲ」または「メロキサポール（meroxa
pol）」のように記載される。

【００７５】式（VIII）の「ポリキサミン」ポリマーは、テトロニック（Tetronic R^TM）と
いう商品名でＢＡＳＦ（Wyandotte, MI）から入手可能である。式（VIII）で示
されるポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレンブロックの順番は逆転さ
せることもでき、それによってテトロニックＲ（Tetronic R^TM）が形成され、こ
れもＢＡＳＦより入手可能である。Schmolka, J. Am. Oil. Soc., 59:110 (1979
)を参照。ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンブロックコポリマーもま
た、エチレンオキサイド反復単位およびプロピレンオキサイド反復単位のランダ
ム混合物を含む親水性ブロックによって設計されている。ブロックの親水性特徴
を維持するためには、エチレンオキサイドを優勢にする。同様に、疎水性ブロッ
クはエチレンオキサイド反復単位とプロピレンオキサイド反復単位との混合物で
ありうる。このようなブロックコポリマーは、プルラドット（Pluradot^TM）とい
う商品名でＢＡＳＦより入手可能である。

【００７６】特定のブロックコポリマーの疎水性／親水性特性は、オキシプロピレン基の数
に対するオキシプロピレン基の数の比に依存する。例えば、ポリ（オキシエチレ
ン）−ポリ（オキシプロピレン）の単一のブロックコポリマーを含む組成におい
て、この関係は、中心の疎水性ブロックおよび末端の親水性ブロックの分子量を
考慮すれば、以下のように表される。

【００７７】

【数４】

【００７８】式中、Ｈはオキシプロピレン単位の数であり、Ｌはオキシエチレン単位の数で
ある。疎水性のＢ型セグメントおよび親水性のＡ型セグメントを含むブロックコ
ポリマーのような一般的な場合において、疎水性−親水性特性およびミセル形成
特性は、以下のように定義されるｎ値に関連する。

【００７９】

【数５】

【００８０】式中、|Ｂ|および|Ａ|は、それぞれコポリマーの疎水性および親水性ブロック
における反復単位の数であり、ｂおよびａはそれぞれ反復単位の分子量である。

【００８１】適切なｎ値を有するブロックコポリマーの選択は、特異的な薬剤の疎水性／親
水性特性、または、配合される薬剤混合物の複合的な疎水性／親水性特性に依存
する。典型的には、ｎは約０．２〜約９．０、より好ましくは約０．２５〜約１
．５の範囲の値をとりうる。この範囲は、数値的な臨界としてではなく、主な親
水性ポリ（オキシエチレン）ブロックおよび主な疎水性ポリ（オキシプロピレン
）ブロック間の最適な疎水性／親水性バランスを表しているとしてみなされるべ
きである。

【００８２】本発明の重要な観点は、ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）
の異なるブロックコポリマーの混合物を用い、特定の生物学的製剤に適した特異
的な疎水性−親水性バランスを達成し、適切な粒度を保つことを含む。例えば、
第一ブロックコポリマーにおいてｎは１．０であり、ここで第二ブロックコポリ
マーにおいてｎは１．５である。ここでｎが１．３である材料を所望する場合、
第一ブロックコポリマーを１質量部、第二ブロックコポリマーを１．５質量部用
いればよい。

【００８３】従って、このような混合物のより一般的な関係は以下のように示される。

【００８４】

【数６】

【００８５】式中、Ｈ₁およびＨ₂はそれぞれ第一および第二ブロックコポリマーにおけるオ
キシプロピレン単位の数であり、Ｌ₁は第一ブロックコポリマーにおけるオキシ
エチレン単位の数であり、Ｌ₂は第二ブロックコポリマーにおけるオキシエチレ
ン単位の数であり、ｍ₁は第一ブロックコポリマーの質量比（weight proportion
）であり、および、ｍ₂は第二ブロックコポリマーの質量比である。

【００８６】さらにより一般的な場合、すなわち疎水性Ｂ型ブロックコポリマーおよび親水
性Ａ型ブロックコポリマーを含むＫ個のブロックコポリマーの混合物の場合、Ｎ
値は以下のように表される。

【００８７】

【数７】

【００８８】式中、｜Ａ｜_iおよび｜Ｂ｜_iはｉ番目のブロックコポリマーにおける親水性（
Ａ型）および疎水性（Ｂ型）ブロックの反復単位の数であり、ｍはブロックコポ
リマーの質量比であり、Ｍは混合物における全ブロックコポリマーの質量比の総
計、すなわち

【００８９】

【数８】

【００９０】であり、ａおよびｂはそれぞれこれらのブロックコポリマーの親水性および疎水
性ブロックの反復単位の分子量である。

【００９１】一つのポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロックコポリマ
ーだけが用いられている場合、Ｎはｎに等しい。相似関係は、ポリ(オキシエチ
レン)−ポリ(オキシプロピレン)の二つ以上のブロックコポリマーを用いている
組成物に適用されるだろう。

【００９２】ブロックコポリマーの混合物が使用されている場合、Ｎ値が用いられ、この値
は、構成するコポリマーの質量部に基づいて平均された、関与している各コポリ
マーに関するｎの加重平均でありうる。Ｎ値は、コポリマー混合物のミセル形成
特性を概算するのに用いられる。ブロックコポリマー混合物を使用すると溶解度
が増し、血清タンパク質存在下でより疎水性のブロックコポリマーが凝集するこ
とを防ぐ。特に、エチレンオキサイド含有量が５０％を超過するポリ(オキシエ
チレン)−ポリ(オキシプロピレン) ブロックコポリマーは、エチレンオキサイド
含有量が５０％以下である疎水性ブロックコポリマーに溶解する。このような混
合物において、疎水性および親水性コポリマーの好ましい比は少なくとも２：１
（ｗ／ｗ）、好ましくは少なくとも５：１（ｗ／ｗ）、さらにより好ましくは少
なくとも８：１（ｗ／ｗ）である。ポリエチレンオキサイド−ポリプロピレンオ
キサイドコポリマー以外のコポリマーが用いられる場合、同様のアプローチが、
あるクラスの一つのポリマーの疎水性／親水性特性を、他のクラスのものの特性
に関連させることに応用されうる。

【００９３】上記パラメータを用いて、ポリ(オキシエチレン)−ポリ(オキシプロピレン)の
一つ以上のブロックコポリマーを、Ｎ値が約０．１〜約９、より好ましくは約０
．２５〜約１．５になるように結合させる。結合したコポリマーはミセルを形成
し、Ｎ値はこのようにして形成されたミセルの大きさにある程度影響を及ぼす。
典型的には、ミセルは約１０〜２５ｎｍの平均直径を持ちうるが、この範囲は広
く変化する。得られた調製物の平均直径のほとんどは、準弾性光散乱技術によっ
て簡単に測定できる。

【００９４】プルロニックの多くは、以下の式を満たすように設計されている。

【００９５】

【化１５】

【００９６】もちろん当業者であれば、ｍ値およびｎ値は通常、統計的な平均を示し、一般
的に特定の分子における第一ブロックの反復単位の数が、必ずしも第三ブロック
の反復単位の数と等しいわけではない、ということが認識されるであろう。ブロ
ックコポリマーの数による特徴づけは、式（Ｘ）への参照によって説明され、以
下に示される。

【００９７】

【表１】

【００９８】本発明に関する他の特異的なポリ(オキシエチレン)−ポリ(オキシプロピレン)
コポリマーとして、以下のものが挙げられる。

【００９９】

【表２】

【０１００】

【表３】

【０１０１】

【表４】

【０１０２】式（VIII）のジアミンが結合したプルロニックもまた、式：

【０１０３】

【化１６】

【０１０４】で示されるジアミンが結合したポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンポリ
マーのファミリーに属する一つである。

【０１０５】式中、破線は第二の窒素から延長しているポリエーテルの対称的なコピーを示
し、Ｒ^*は炭素数約２〜約６のアルキレン、炭素数約５〜約８のシクロアルキレ
ンまたはフェニレンであり、Ｒ¹およびＲ²は（ａ）両方とも水素、または（ｂ）
一方は水素であり他方はメチルのいずれかであり、Ｒ³およびＲ⁴は（ａ）両方と
も水素、または（ｂ）一方は水素であり他方はメチルのいずれかである。ここで
Ｒ³およびＲ⁴両方が水素の場合、Ｒ⁵およびＲ⁶の一つは水素であり他方はメチル
であり、Ｒ³およびＲ⁴の一つがメチルの場合、Ｒ⁵およびＲ⁶両方は水素である。
式（VIII）の−ＮＨ₂−ＣＨ₂ＣＨ₂−ＮＨ₂−基および式（XI）のＮ−Ｒ^*−Ｎ基
は結合基である式（IV）のＬの例である。

【０１０６】当業者であれば、本発明の実施が例えばポリ(オキシエチレン)−ポリ(オキシ
プロピレン)化合物に限られる場合、上述した典型的な式はあまりにも限定的で
ある、ということが理解されるであろう。重要な特徴は、Ａ型ブロックにおいて
モノマーの平均ハンス−レオフラグメント定数が約−０．４以下であることであ
る。従って、第一ブロックを形成している単位は、エチレンオキサイドのみから
構成される必要はない。同様に、すべてのＢ型ブロックがプロピレンオキサイド
単位のみから構成される必要はない。その代わりに、ブロックは、第一実施形態
のパラメータを維持しさえすれば、式（Ｖ）〜（IX）で定義されるモノマー以外
のモノマーを含んでもよい。従って、最も簡単な例において、ブロックＡにおけ
る少なくとも一つのモノマーは前述したように側鎖の基で置換されうる。

【０１０７】他の観点において、本発明は、少なくとも一つの式（Ｉ）〜（Ｘ）のブロック
コポリマーを含む薬剤組成物に関する。ここでＡ型およびＢ型ブロックは、実質
的に式−０−Ｒ⁵である反復単位からなる。ここでＲ⁵は、（１）−（ＣＨ₂）、−ＣＨ（Ｒ⁶）−であり、ここでｎは０または約１〜約５
の整数であり、Ｒ⁶は水素、炭素数約３〜約８のシクロアルキル、炭素数約１〜
約６のアルキル、フェニル、アルキルフェニル（ここで、該アルキルは炭素数約
１〜約６である）、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル（ここで該アルキルは炭素
数約１〜約６である）、炭素数約１〜約６のアルコキシ、炭素数約２〜約７のア
ルキルカルボニル、アルコキシカルボニル（ここでアルコキシは炭素数約１〜約
６である）、アルコキシカルボニルアルキル（ここでアルコキシおよびアルキル
はそれぞれ独立して炭素数約１〜約６である）、アルキルカルボキシアルキル（
ここでそれぞれ独立してアルキルは炭素数約１〜約６である）、アミノアルキル
（ここで、該アルキルは炭素数約１〜約６である）、アルキルアミンまたはジア
ルキルアミノ（ここでそれぞれ独立してアルキルは炭素数約１〜約６である）、
モノ−またはジ−アルキルアミノアルキル（ここでそれぞれ独立してアルキルは
炭素数約１〜約６である）、クロロ、クロロアルキル（ここで該アルキルは炭素
数約１〜約６である）、フルオロ、フルオロアルキル（ここで該ａｌｋｙｌは炭
素数約１〜約６である）、シアノもしくはシアノアルキル（ここで該アルキルは
炭素数約１〜約６である）、またはカルボキシルであり；（２）約３〜約８員環の炭素原子を有する炭素環式化合物（carbocyclic grou
p）であり、ここで該基は例えば、シクロアルキルまたは芳香族基であり、炭素
数約１〜約６のアルキル、炭素数約１〜約６のアルコキシ、炭素数約１〜約６の
アルキルアミノ、を含んでもよい、ジアルキルアミノ（ここで該アルキルはそれ
ぞれ独立して炭素数約１〜約６である）、アミノ、スルホニル、ヒドロキシ、カ
ルボキシル、フルオロまたはクロロ置換であり、または（３）約３〜約８員環の炭素原子を有するヘテロ環式基（heterocyclic group
）、これらはヘテロシクロアルキルまたはへテロ芳香族基を含み、これらは、酸
素、窒素、硫黄およびそれらの混合物からなる郡より選択される約１〜約４のヘ
テロ原子を含み、および、炭素数約１〜約６のアルキル、炭素数約１〜約６のア
ルコキシ、炭素数約１〜約６のアルキルアミノ、炭素数約１〜約６のジアルキル
アミノ（ここで該アルキルはそれぞれ独立して約１〜約６の炭素、アミノ、スル
ホニル、ヒドロキシ、カルボキシル、フルオロまたはクロロ置換である）である
。

【０１０８】好ましくは、ｎは約１〜約３の整数である。Ｒ⁵を含む炭素環式化合物または
へテロ環式化合物は、好ましくは約４〜約７、より好ましくは約５〜約６の環状
原子を含む。ヘテロ環式は、好ましくは約１〜約２のヘテロ原子を含み、より好
ましくは一つのヘテロ原子を含む。ヘテロ環式は、好ましくは炭水化物（carboh
ydrate）または炭水化物類似体である。

【０１０９】当業者であれば、これらのポリマーを形成するのに必要なモノマーは合成的に
得られることが理解されるであろう。Vaughn et al., J. Am. oil Chem. Soc. 2
8: 294 (1951)を参照。いくつかの場合において、モノマーの重合は適切な保護
基を用いることが必要とされる、ということも当業者に理解されるであろう。一
般的に、ＡおよびＢ型ブロックは少なくとも約８０％、より好ましくは約９０％
、さらにより好ましくは９５％の反復単位−ＯＲ⁵−を含む。

【０１１０】他の観点において、本発明は、式（Ｉ）〜（Ｘ）のブロックコポリマーを含む
薬剤組成物に関する。ここで、Ａ型およびＢ型ブロックは、本質的に式−０−Ｒ ⁷ の反復単位を含み、ここでＲ⁷は炭素数１〜６のアルキレン基である。

【０１１１】本発明のブロックコポリマーは、好ましくは、等張水溶液中、生理的な温度で
約１０ｎｍ〜約１００ｎｍの直径を持つミセルを形成する。ミセルは、水溶液中
で、両親媒性物質の非極性部分のミクロ相分離（microphase separation）によ
って形成される、ある程度両親媒性の分子の超分子錯体である。両親媒性物質の
濃度が定められた温度におけるその両親媒性物質に特有のＣＭＣに達するとミセ
ルが形成される。ブロックコポリマーの親水性および疎水性セグメントの大きさ
を変化させることによって、生理的条件下におけるコポリマーのミセル形成傾向
、および、生理的条件下で形成されるミセルの平均サイズを変化させることがで
きる。これらの傾向はまた、異なる疎水性および親水性ブロックの混合物とコポ
リマーとをブレンドすることによって調節されうる。ミセルは、Ｂブロックの水
不溶性反復単位とそれに溶解している生物学的製剤の親油性部分とで形成された
密集コア（dense core）、および、Ａブロックと生物学的製剤の疎水性部分とで
形成された親水性シェルを有する。このミセルは、水性環境において、翻訳的（
translational）かつ回転的な自由（freedom）を有しており、ミセルを含む水性
環境は水同様の低い粘度を有する。典型的にミセル形成は、約０．００１〜５％
（ｗ／ｖ）のコポリマー濃度で生じる。

【０１１２】本発明のブロックコポリマーによって形成された小さいサイズのミセルは、細
い毛細管にこれらミセルを通すことによって細胞に取り込ませることができる。
このミセルはまた、大量の適切な生物学的製剤を組み込むことができる。

【０１１３】本発明のミセル中の薬剤保持効果は、下記式によって決定される分配係数（Ｐ
）を用いて定量化される。

【０１１４】

【数９】

【０１１５】式中、［Ａｇｅｎｔ］_aqは、ミセルの外側の水性環境中における生物学的製剤
の濃度であり、［Ａｇｅｎｔ］_rnはミセル中の該薬剤の濃度を示す。いくつかの場合において、より疎水性である環境に対する水性環境の場合、Ｐは
ある種の薬剤の異なる蛍光特性に基づき簡便かつ正確に概算することができる。

【０１１６】標的化（Targeting）炭素数約３〜約４１の炭化水素を含む親油性部位にカップリングされる標的部
位で形成される標的分子の一部分は、本発明の標的化に関する実施形態における
組成物のミセルに組み込ませることができる。典型的にこの部分は、組成物中、
約１０％（ｗ／ｗ）以下のコポリマー成分を含む。親油性部分は、非共有結合に
よってブロックコポリマーのミセル中に組み込まれる疎水性「アンカー」として
作用し、それによって標的部分がミセルの一部（ただしそれをこえて伸長しうる
）となる、と考えられている。このような標的部分は、本発明の標的化で用いる
ミセルに組み込まれることが好ましい。しかしながら、標的化に関する実施形態
に関して、親油性部分は、標的部分とミセルとを会合させる非共有結合に有効な
、任意の疎水性部分でありうる。標的化に関する実施形態に関して、親油性部分
としては、例えば脂肪酸残基、脂肪、リン脂質または天然もしくは合成ポリマー
が挙げられる。使用における入手可能性および簡便さから、脂肪酸残基のような
炭化水素基を含む親油性部分が好ましい。

【０１１７】標的部分は、細胞、組織、ウイルスまたは基層部位（substratum site）に親
和性を有する。典型的な標的部位としては、これらに限定されないが、細胞の結
合成分に親和性を有する抗体およびホルモン、細胞の結合成分によって認識され
る炭水化物部分を含む任意の分子、ならびに、細胞の結合成分に結合する薬剤が
挙げられる。「結合成分」という用語は、レセプター分子およびアクセプター分
子の両方を含む。この結合成分は、好ましくは細胞表面結合成分（cell-surface
binding component）である。ポリクローナルおよびモノクローナル抗体の両方
が、商業的に入手可能または文献に記載されているものも含めて、用いることが
できる。またリガンドは、例えばインスリンのような、標的部位に結合する天然
に生じるタンパク質である。標的部分の例は、これらに限定されないが、脳グリ
ア細胞に対する抗α₂−ＧＰ抗体（α₂−糖タンパク質）であり、これはSlepnev
et al., Bioconjugate Chem. 3: 273-274 (1992)によって説明されている。

【０１１８】ポリペプチドの特異性をできるだけ保持するために、一つのみまたは二つの親
油性部分をそれぞれポリペプチド分子に結合させることが好ましい。この結合は
、Kabanov et al., Protein Engineering, 3:39-42 (1989)によって説明されて
いる方法で達成され、この内容は参照によってここに引用される。この方法にお
いて、親油性部分またはそれらの反応性類似体は、界面活性剤であるビス−(２
−エチルヘキシル)スルホコハク酸ナトリウム｛ＡＯＴ（登録商標）｝の存在下
で標的部分と反応し、オクタンおよび少量の水によって逆相ミセル（reversed m
icelle）、すなわち内側に水を有し外側にオクタンを有するミセルを形成するこ
とができる。このような逆相ミセルは、ミクロ反応体（microreactor）として得
られ、これによって親油性部分によるポリペプチド分子の均一なポイント修飾（
point modification）が可能である。ステアロイルクロライドまたはラウロイル
クロライドのような脂肪酸の反応性誘導体を、この反応系を用いてポリペプチド
または他の親水性標的分子と反応させることができる。この反応系は脂肪酸アシ
ルでの置換の程度が限定されるので、より大きい生物学的製剤や標的部分の溶解
度が概ね保存される。

【０１１９】試験システム（Test systems）ブロックコポリマーの生物学的活性製剤に対する効果を評価するために、ＨＩ
Ｖ−1感染ＭＴ２細胞系およびＨＩＶ−1感染Ｈ９細胞系が用いられる。多くのヒ
ト細胞型がＨＩＶに感染しやすいが、細胞型によってその感染程度は大きく異な
る。一般的に、ＣＤ４レセプターを有する細胞（ＣＤ４＋細胞）は、最も簡単に
感染し、ＨＩＶ複製を最も許容しやすい。このような細胞としては、例えば、Ｔ
リンパ球およびマクロファージが挙げられる。

【０１２０】リンパ球および単球／マクロファージ由来の永続的に確立されている様々な細
胞系が、インビトロ培養においてＨＩＶを繁殖かつ維持するために用いられうる
。これらはＣＤ４＋ＭＴ２およびＭＴ４細胞系を含み、これらは成人のＴ細胞性
白血病患者より分離されたクローン化ヒトＴリンパ球である。これらの細胞は、
ＨＩＶ誘発性の細胞変性効果を非常に受けやすく、抗ウイルス剤の急性感染性の
細胞変性に対する阻害の分析に有用である。

【０１２１】他の細胞として、ヒト皮膚Ｔリンパ腫患者から得られたクローン化Ｈ９細胞系
が挙げられる。Mann, DL et al., AIDS Res Hum Retroviruses 5:253 (1989)を
参照。Ｈ９細胞はＣＤ４＋であり、ＨＩＶに感染しやすいが、ＨＩＶ誘発性の細
胞変性効果を比較的受けにくい。ＨＩＶに感染すると、これらの細胞は感染によ
って死なずに継続的に新しいウイルスを生産する。これらの感染細胞、すなわち
Ｈ９＋を、「慢性的に感染した」または「継続的に感染した」とする。

【０１２２】プロウイルスＤＮＡ形成までのＨＩＶ複製の段階は、「組み込み前の」段階と
考えられており、プロウイルスＤＮＡの組み込み後における新生ビリオンの形成
に関与する段階は、「組み込み後の（post-integrational）」と考えられている
。Ｈ９＋細胞は、ウイルスの組み立て、放出および成熟に対する効果を含む、Ｈ
ＩＶ複製の組み込み後の段階に対する抗ウイルス活性を評価するのに有用である
。

【０１２３】投与経路経口によるデリバリーは、本組成物の投与に好ましい方法である。経口投与に
関して、本組成物は、錠剤、カプセル、ロゼンジ、トローチ、粉剤、シロップ、
エリキシル剤、水溶液および懸濁液等の形態で用いられ得る。錠剤の場合、使用
される担体は、ラクトース、クエン酸ナトリウムおよびホスフェートを含む。例
えばスターチのような様々な崩壊剤、および、例えばステアリン酸マグネシウム
、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクのような潤滑剤が、一般的に錠剤に用い
られる。カプセル様式の経口投与の場合、有用な希釈剤はラクトースおよび高分
子量のポリエチレングリコールである。経口的な使用で水性懸濁液が必要な場合
、本組成物を乳化剤および懸濁化剤と混合してもよい。必要であれば、ある種の
甘味剤および／または着香剤が添加されうる。

【０１２４】本発明の医薬組成物はまた、多数の他の経路によって投与され得、例えばこれ
らに限定されないが、局所的で、直腸内に、経膣で、エアロゾルの使用による肺
経路により、または、非経口的に、すなわちこれらに限定されないが、筋肉内、
皮下、腹腔内、動脈内もしくは静脈内に投与され得る。本組成物を単独で投与し
てもよく、または、標準的な製薬の方法に従い製薬上許容される担体または賦形
剤と混合してもよい。

【０１２５】非経口投与に関して通常は、その結合体の滅菌溶液を調製し、その溶液のｐＨ
を適切に調節し緩衝化する。静脈内での使用の際、溶質の総濃度は、調合物が等
張になるように制御すべきである。眼への投与に関して、軟膏または滴下可能な
液体が、例えばアプリケーターまたは点眼容器のような当業界で周知の眼のデリ
バリーシステムによって運搬され得る。このような組成物は、ヒアルロン酸、硫
酸コンドロイチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロールまたはポリ（ビニルア
ルコール）のようなムコ様剤（mucomimetics）、例えばソルビン酸、ＥＤＴＡま
たは塩化ベンジルクロニウム（benzylchronium chloride）のような保存剤、な
らびに、通常の量の希釈剤および／または担体を含む。肺への投与に関して、希
釈剤および／または担体は、エアロゾルの形成を許容するのに適切なものが選択
され得る。

【０１２６】本発明の組成物の坐薬形態が、経膣、尿道および直腸経由の投与において有用
である。一般的にこのような坐薬は、室温では固形だが体温で融解する物質の混
合物によって構成されうる。このような賦形剤を形成するのに用いられる物質と
しては、一般的に、カカオ脂、グリセリンゼラチン、水素化植物油、様々な分子
量のポリエチレングリコールの混合物、および、ポリエチレングリコールの脂肪
酸エステルが挙げられる。坐薬投与に関するさらなる考察については、Remingto
n's Pharmaceutical Sciences, 16th Ed., Mack Publishing, Easton, PA, 1980
, pp. 1530-1533を参照。似たようなゲルまたはクリームが、膣、尿道、直腸経
由の投与に用いられうる。

【０１２７】下記実施例は、本発明の本質をさらに代表するものであり、本発明の概念を制
限するものではなく、本発明の概念は添付される請求の範囲によってのみ規定さ
れる。

【０１２８】実施例１−ＢＢＮＨおよびＦｅ（III）−ＢＢＮＨ錯体のインビトロの阻害活
性様々な濃度のＢＢＮＨおよびＦｅ（III）−ＢＢＮＨ錯体を、ＨＩＶ−１逆転写
酵素のＲＮＡ依存性およびＤＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ活性、ならびにＲＮ
ＡアーゼＨ活性（それぞれ、ＲＴＲＤＤＰ、ＲＴＤＤＤＰおよびＲＴＲＮ
アーゼＨ）の阻害能力について試験した。ＲＴＲＤＤＰおよびＲＴＤＤＤＰ
を分析するために、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．８）、６０ｍＭのＫＣ
ｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ₂、ｐ５１／ｐ６６ＲＴ１０ｎｇ、０．１〜０．５
ユニットのテンプレート／プライマー、および０．５〜２５μＭの［³Ｈ］ｄＮ
ＴＰを含む反応混合物（総量で１００μｌ）が用いられた。試験化合物のアリコ
ートをＤＭＳＯに溶解させ、反応混合物に加え、１０〜２０分、３７℃でインキ
ュベートした後、冷１０％ジクロロ酢酸中の２０ｍＭピロリン酸ナトリウム５０
０μｌで急冷した。氷上で１０分経過後、そのサンプルをワットマン９３４−Ａ
Ｈグラスファイバーフィルター（Whatman 934-AH glass fiber filter）でろ過
し、１０％ジクロロ酢酸およびエタノールで洗浄し、放射活性を液体シンチレー
ション分析によって測定した。ＲＴＲＮアーゼＨを分析するために、５０ｍＭ
のトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、６０ｍＭのＫＣｌ、８ｍＭのＭｇＣｌ₂、お
よび様々な量の（［³Ｈ］ｒＧ）−ポリ（ｄＣ）を含む反応混合物（総量で５０
μｌ）が用いられた。一般的に、分析あたりｐ５１／ｐ６６ヘテロ二量体ＲＴ
１０ｎｇが用いられた。ＤＭＳＯに溶解した試験化合物のアリコートを反応混合
物に加え、２０分、３７℃でインキュベートした。次に試験管を氷上に置いて急
冷し、１００μｌの冷７％過塩素酸を加えた。氷上で１０分経過後、そのサンプ
ルを１２，０００ｇ、１５分遠心分離し、１００μｌの上清を慎重に分取し、放
射活性を液体シンチレーション分析によって測定した。その試験結果を表１に示
す。

【０１２９】

【表５】

【０１３０】実施例２−ＢＢＮＨおよびＦｅ(III)-ＢＢＮＨ錯体の細胞変性活性様々な濃度のＢＢＮＨおよびＦｅ(III)-ＢＢＮＨ錯体を、非感染ＭＴ２細胞に
対する細胞変性活性について試験した。化合物のジエチルスルホキシド溶液のア
リコートを、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地中のＭＴ２細胞(２×１０⁵ 細胞／ｍｌ)に加え、試験化合物を規定された最終濃度にした。その細胞および
試験化合物を、4日、37℃で、5%CO₂ 存在下で培養し、次に化合物の細胞毒効果
を標準ＸＴＴ分析（standard XTT assay）を用いて分析した。その結果より計算
されたＣＣ₅₀は、ＢＢＮＨに関しては１０±０．５μＭであり、Ｆｅ（ＩＩＩ）
−ＢＢＮＨに関しては１０００μＭ以上であった。

【０１３１】実施例３−ＢＢＮＨおよびＦｅ(III)-ＢＢＮＨ錯体の阻害活性様々な濃度のＢＢＮＨおよびＦｅ(III)-ＢＢＮＨ錯体を、感染ＭＴ２細胞のＨ
ＩＶ−１感染阻害能力について試験した。化合物のジメチルスルホキシド溶液の
アリコートを、10%ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地中の感染ＭＴ２細胞(２×１
０⁵細胞／ｍｌ)に加え、試験化合物を決定された最終濃度にした。その細胞およ
び試験化合物を、30分、３７℃でインキュベートし、ＨＩＶビリオンの懸濁液を
接種させた。その細胞、試験化合物およびＨＩＶを、１８時間、３７℃でインキ
ュベートし、その細胞を遠心分離によって回収し、洗浄し、１０％ウシ胎児血清
および最初に用いたのと同じ濃度の試験化合物を含むＲＰＭＩ培地中に再懸濁し
た。次に細胞を３７℃で培養した(培養液は必要に応じて交換した)。ＨＩＶ誘発
性の細胞変性(合胞体)の顕微鏡検査によって、および/または、培養液中のＨＩ
Ｖｐ２４抗原レベルを分析することによって、ＨＩＶ感染を評価した。その結果
より計算されたＩＣ₅₀ は、ＢＢＮＨに関しては1.5 ± 0.5 μＭであり、Ｆｅ（
III）-ＢＢＮＨに関しては50 μＭ超であった. 実施例４−Ｆｅ（III）-ＢＢＮＨの水および有機溶媒に対する溶解度Ａ．ＤＭＳＯに対するＦｅ（III）ＢＢＮＨの溶解度のキャリブレーション１ｍｇのＦｅ（III）ＢＢＮＨを１ｍｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）
に溶解した。その溶液のアリコートをさらにＤＭＳＯで希釈し、以下の最終濃度
にした。１０００ｍｇ／ｍｌ；５００ｍｇ／ｍｌ；２００ｍｇ／ｍｌ；１００ｍ
ｇ／ｍｌ；４０ｍｇ／ｍｌ；２０ｍｇ／ｍｌ；１０ｍｇ／ｍｌ。各濃度ポイント
のものを三連で調製した。そのサンプルのアリコート（５０ｍｌ）を、９６ウェ
ルのプレートに移した。全サンプルのλ４００ｎｍにおける光学濃度（ＯＤ）を
、マイクロプレートリーダー（Microplate Reader）を用いて測定した。その結
果を表２に示す。

【０１３２】

【表６】

【０１３３】Ｂ．異なる有機溶媒中のＦｅ３０６濃度の分析Ｆｅ（III）ＢＢＮＨのサンプル（各１ｍｇ）を１ｍｌの下記溶媒に加えた。１）Ｈ₂Ｏ１００％；２）アセトニトリル１００％；３）９０％アセトニトリル，１０％Ｈ₂Ｏ；４）８０％アセトニトリル，２０％Ｈ₂Ｏ；５）メタノール１００％；６）９０％メタノール，１０％Ｈ₂Ｏ；７）ＤＭＦＡ１００％；８）ＤＭＳＯ１００％；そのサンプルを回転器（rotator）を用いて３時間、室温で激しく攪拌した。
その後サンプルを１０，０００ｇで１０分間遠心分離した。上清(各５００μｌ)
を分離し、高速減圧遠心分離（speed-vac centrifuge）によって乾燥した。次に
各サンプルをＤＭＳＯ５００μｌに溶解させ、アリコート(各５０μｌ)を９６
ウェルのプレートに移した。マイクロプレートリーダーを用いて、(４００ｎｍ
で光学濃度を測定した。次にサンプル中の試験化合物の濃度を、上記校正データ
を用いて決定した。試験化合物の各濃度を三連で測定した。その結果を表３に示
す。

【０１３４】

【表７】

【０１３５】実施例５−有機溶媒におけるＦｅ（III）ＢＢＮＨの溶解度に関する様々な塩
およびｐＨの効果Ｆｅ（III）ＢＢＮＨのサンプル(各1mg)を、以下の範囲の溶媒１ｍｌに加えた
。

【０１３６】１）９０％アセトニトリル；１０％０．０１Ｍ酢酸アンモニウム（水中），
ｐＨ７．０；２）９０％アセトニトリル；１０％０．０１Ｍ酢酸アンモニウム（水中），
ｐＨ５．０；３）９０％アセトニトリル；１０％０．０１Ｍ酢酸アンモニウム（水中）
，ｐＨ３．０；４）９０％メタノール；１０％０．０１Ｍ酢酸アンモニウム（水中），ｐ
Ｈ７．０；５）９０％メタノール；１０％０．０１Ｍ酢酸アンモニウム（水中），ｐ
Ｈ５；６）９０％メタノール；１０％０．０１Ｍ酢酸アンモニウム（水中），ｐ
Ｈ３；７）９０％アセトニトリル；１０％０．０１Ｍ蟻酸アンモニウム（水中）
，ｐＨ６．２；８）９０％アセトニトリル；１０％０．０１Ｍ蟻酸アンモニウム（水中）
，ｐＨ５；９）９０％アセトニトリル；１０％０．０１Ｍ蟻酸アンモニウム（水中）
，ｐＨ３；１０）９０％メタノール；１０％０．０１Ｍ蟻酸アンモニウム（水中），ｐ
Ｈ６．２；１１）９０％メタノール；１０％０．０１Ｍ蟻酸アンモニウム（水中），ｐ
Ｈ５．０；１２）９０％メタノール；１０％０．０１Ｍ蟻酸アンモニウム（水中），ｐ
Ｈ３．０；１３）９０％メタノール；１０％０．０１Ｍリン酸バッファー（水中）（
０．０１Ｍ），ｐＨ３．０；１４）９０％メタノール；１０％０．０１Ｍリン酸バッファー（水中），
ｐＨ５．０；そのサンプルを、回転器を用いて３時間、室温で激しく攪拌した。その後、そ
のサンプルを、１０，０００ｇで１０分遠心分離した。その上清（各５００μｌ
）を分離し、高速減圧遠心分離によって乾燥した。各サンプルを、ＤＭＳＯ５
００μｌに溶解させ、そのアリコート（各５０μｌ）を９６ウェルのプレートに
移した。光学濃度を(４００ｎｍでマイクロプレートリーダーを用いて測定した
。次にそのサンプル中のＦｅ（III）ＢＢＮＨ濃度を、実施例４Ａで示したキャ
リブレーションを用いることによって決定された。Ｆｅ（III）ＢＢＮＨの各濃
度を、三連で分析した。その結果を表４に要約する。

【０１３７】

【表８】

【０１３８】実施例６−Ｆｅ（III）ＢＢＮＨの水溶性に関する様々なブロックコポリマー
の効果Ｆｅ（III）ＢＢＮＨのサンプル（各１ｍｇ）を、プルロニックの様々な水溶
液１ｍｌに加えた。そのサンプルを、回転器を用いて３時間、室温で激しく攪拌
した。次にそのサンプルを、１０，０００ｇで１０分遠心分離した。その上清（
各５００μｌ）を分離し、高速減圧遠心分離によって乾燥した。各サンプルを、
５００μｌのＤＭＳＯに溶解させ、そのアリコート（各５０μｌ）を９６ウェル
のプレートに移した。その光学濃度を(４００ｎｍでマイクロプレートを用いて
測定した。次にサンプル中の試験化合物濃度を、実施例４Ａで示したキャリブレ
ーションを用いて決定した。Ｆｅ（III）ＢＢＮＨの各濃度は、三連で分析され
た。その結果を表５に要約する。鉄３０６の各濃度を三連で測定した。

【０１３９】

【表９】

【０１４０】実施例７−Ｆｅ（III）ＢＢＮＨの水溶性に関するブロックコポリマー濃度の
効果様々な量のＦｅ（III）ＢＢＮＨを、２００μｌのジメチルホルムアミドに溶
解させ、そのアリコート（各２０μｌ）を様々な濃度の等量のプルロニックＰ８
５のメタノール溶液と混合した。酢酸ナトリウム水溶液（１０μｌ）を、塩の最
終濃度が６０ｍＭになるように各サンプルに加えた。そのサンプルを高速減圧遠
心分離によって乾燥した。各サンプルを１００μｌの１０％プルロニックＰ８５
水溶液中に溶解させた。そのサンプルを、回転器を用いて２時間、室温で激しく
攪拌した。その後、そのサンプルを１０，０００ｇ、１０分遠心分離した。その
上清を分離し、１０％プルロニックＰ８５水溶液で希釈し、校正曲線の範囲内に
あわせた。そのアリコート（各５０μｌ）を９６ウェルプレートに移し分析した
。その光学濃度を(４００ｎｍでマイクロプレートリーダーを用いて測定した。
次にそのサンプル中のＦｅ（III）ＢＢＮＨの濃度を実施例４Ａに示したキャリ
ブレーションを用いて決定した。Ｆｅ（III）ＢＢＮＨの各濃度を三連で測定し
た。その結果を表６に要約する。鉄３０６の各濃度を三連で測定した。

【０１４１】

【表１０】

【０１４２】実施例８−ＭＴ２細胞におけるＨＩＶ−１急性感染の阻害に関する試験化合物の効果化合物Ｉを含む配合物を、非感染ＭＴ２細胞におけるＨＩＶ−１感染の阻害能
力について、化合物Ｉ単独と比較して試験した。化合物Ｉのジメチルスルホキシ
ド溶液、または、コポリマー−化合物Ｉ配合物の水溶液のアリコートを、１０％
ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地中の非感染ＭＴ２細胞(２×１０⁵細胞／ｍｌに
加え、試験化合物を決定された最終濃度にした。その細胞および試験化合物は３
０分、３７℃でインキュベートされ、次にＨＩＶビリオンの懸濁液を接種させた
。その細胞、試験化合物およびＨＩＶを１８時間、３７℃でインキュベートし、
その細胞を遠心分離によって回収し、洗浄し、１０％ウシ胎児血清および最初に
用いたのと同じ濃度の試験化合物を含むＲＰＭＩ培地で再懸濁した。次にその細
胞を３７℃で培養した (培養液は必要に応じて交換した)。ＨＩＶ誘発性の細胞
変性(合胞体)の顕微鏡検査によって、および/または、培養液上清中のＨＩＶｐ
２４抗原レベルを分析することによってＨＩＶ感染を評価した。試験の結果によ
り、ＤＭＳＯ中に溶解した化合物Ｉは２５μＭまでの濃度では顕著な活性はほと
んど見られず、一方で化合物が配合されたコポリマーのＩＣ₅₀は４．８±０．４
μＭであることが示された。いくつかの試験において、試験化合物およびＨＩＶ
−１ビリオンを、同時に非感染ＭＴ２細胞に加えた。その結果は、試験化合物を
ＨＩＶビリオンの添加の３０分前に細胞に加えた実験の結果と類似していた。

【０１４３】実施例９−コポリマー−生物学的製剤配合物とＨＩＶ−１で慢性的に感染しているＨ９細胞（Ｈ９＋）とのインキュベーション：ＨＩＶビリオンの感染力における効果化合物Ｉを含む配合物を、Ｈ９＋細胞より生産されるＨＩＶビリオンの感染力
に対する阻害効果能力について化合物I単独と比較して試験した。化合物Ｉのジ
メチルスルホキシド溶液、または、コポリマー−化合物Ｉ配合物の水溶液のアリ
コートを、10%ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地中の慢性的に感染しているＨ９
細胞(Ｈ９＋; ５×１０⁵ 細胞／ｍｌ)に加え、試験化合物を決定された最終濃度
にした。その細胞および試験化合物を１８時間、３７℃でインキュベートし、そ
の細胞と生産されたＨＩＶビリオンとを、７５０×ｇで遠心分離することによっ
て分離した。上清のアリコート(ＨＩＶビリオンを含む)を、１０％ウシ胎児血清
を含むＲＰＭＩ培地中の非感染ＭＴ２細胞(２×１０⁵ 細胞／ｍｌ)に加えた。そ
の細胞およびＨＩＶビリオンを１８時間、３７℃でインキュベートし、その細胞
を遠心分離によって分離し、洗浄し、１０％ウシ胎児血清を含み試験化合物を含
まないＲＰＭＩ培地で再懸濁した。次にその細胞を３７℃で培養した (培養液は
必要に応じて交換した)。ＨＩＶ誘発性の細胞変性 (合胞体)の顕微鏡検査によっ
て、および/または、培養液上清中のＨＩＶｐ２４抗原レベルを分析することに
よってＨＩＶ感染を評価した。その試験結果により、ＤＭＳＯに溶解した化合物
Ｉは、１０μＭまでの濃度において顕著な活性をほとんど示さず、一方で化合物
が配合されたコポリマーのＩＣ₅₀は０．１±０．０５μＭであったことが示され
た。

【０１４４】実施例１０−コポリマー−生物学的製剤配合物と、ＨＩＶ−１で慢性的に感染しているＨ９細胞(Ｈ９＋)とのインキュベーション：ＨＩＶの細胞から細胞への感染に対する効果化合物Ｉを含む配合物を、Ｈ９＋細胞から生産されたＨＩＶから非感染ＭＴ２
細胞への、細胞から細胞への伝播（cell-to-cell transmission）に対する阻害
能力について、化合物Ｉ単独と比較して試験した。化合物Ｉのジメチルスルホキ
シド溶液、または、コポリマー−化合物Ｉ配合物の水溶液のアリコートを、１０
％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地中の慢性的に感染しているＨ９細胞(Ｈ９＋
；５×１０⁵細胞／ｍｌ)に加え、試験化合物を決定された最終濃度にした。その
細胞および試験化合物を１８時間、３７℃でインキュベートし、その細胞を７５
０×ｇで遠心分離することによって単離し、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ
培地に再懸濁しその後遠心分離することによって数回洗浄した。その細胞を最終
的に１０％ウシ胎児血清を含み試験化合物を含まないＲＰＭＩ培地に懸濁した。
これらＨ９＋細胞のアリコートを、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地中の
非感染ＭＴ２細胞 (３×１０⁵細胞／ｍｌ)に加え、最終的なＭＴ２：Ｈ９＋細胞
比を３０：１にした。次にその細胞を３７℃で培養した (培養液は必要に応じて
交換した)。ＨＩＶ誘発性のＭＴ２細胞の細胞変性(合胞体)の顕微鏡検査によっ
て、および/または、培養液上清中のＨＩＶｐ２４抗原レベルを分析することに
よって、ＨＩＶ感染を評価した。その試験結果により、ＤＭＳＯに溶解した化合
物Ｉは、２５μＭまでの濃度において顕著な活性を示さず、一方で化合物を配合
したコポリマーのＩＣ₅₀は２．５±０．０５μＭであった。

【０１４５】実施例１１−試験化合物の予防効果:前処理後のＨＩＶ感染に対する非感染Ｍ
Ｔ２細胞の前処理の効果化合物Ｉを含む配合物を、非感染ＭＴ２細胞を分離したＨＩＶビリオンによる
感染から保護する能力について、化合物Ｉと比較して試験した。化合物Ｉのジメ
チルスルホキシド溶液、または、コポリマー−化合物Ｉ配合物の水溶液のアリコ
ートを、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地中の非感染ＭＴ２細胞（３×
１０⁵細胞／ｍｌ）に加え、試験化合物を決定された最終濃度にした。その細胞
および試験化合物を２４時間、３７℃でインキュベートし、その細胞を７５０×
ｇで遠心分離することによって単離し、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ培地
で再懸濁してその後に遠心分離することによって数回洗浄した。その細胞を最終
的に１０％ウシ胎児血清を含み試験化合物を含まないＲＰＭＩ培地に再懸濁した
。ＨＩＶビリオンのアリコートを加え、その細胞を３７℃で培養した（培養液は
必要に応じて交換した）。ＭＴ２細胞のＨＩＶ誘発性の細胞変性（合胞体）の顕
微鏡検査によって、および／または、培養上清中のＨＩＶｐ２４抗原レベルを分
析することによってＨＩＶ感染を評価した。その試験結果により、ＤＭＳＯに溶
解した化合物Ｉは１０μＭまでの濃度において顕著な活性を示さず、一方で化合
物を配合したコポリマーのＩＣ₅₀は０．８±０．０３μＭであったことが示され
た。

【０１４６】実施例１２−ブロックコポリマーのミセルサイズ以下に示すポリ(オキシプロピレン)のポリ(オキシエチレン)に対する比を有す
るポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）のブロックコポリマーを
、以下に示す濃度のＲＰＭＩ１６４０媒体中に分散させた。その混合物を４０
分、３００℃でインキュベートした。平均ミセル直径を準弾性光散乱（quasiela
stic light scattering）によって測定した。Kabanov et al.、Macromolecules
28: 23032314, 1995を参照。その結果を表７に示す。

【０１４７】

【表１１】

【０１４８】実施例１３−ブロックコポリマーの急性毒性プルロニックＦ１０８、Ｐ８５およびＬ６１の急性毒性を、年齢が５週間のＢ
ＡＬＢ／ｃ雄マウスを用いて研究した。各実験グループはマウスを６匹含んでい
た。

【０１４９】等張のプルロニック溶液の様々な用量を、腹腔内に投与した。１４日間、動物
の死亡率を毎日モニターした。ＬＤ₅₀および最大耐量（maximum tolerated dosa
ge）（“ＭＴＤ”すなわち、等しく処理された６匹の動物がいずれも死なない用
量）を、プロビット解析によって計算した。Chan and Hayes in Principles and
Methods of Toxicology、Hayes、A.W., ed.、Raven Press、New York、1989、p
p. 169-189を参照。その結果を表８に示す。

【０１５０】

【表１２】

【０１５１】実施例１４−ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロックコポリマーの溶液挙動（Solution Behavior）ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロックコポリマーを、
１０μＭのリン酸緩衝生理食塩水（phosphate-buffered saline）、ｐＨ７．４
（ＰＢＳ）中の、または、以下に示す濃度の、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）の
２．５％ＰＢＳ溶液に溶解し、その混合物を少なくとも１時間、２２．５(Ｃま
たは３７(Ｃでインキュベートした。その後、この系で形成された凝集体の有効
直径を、Kabanov et al.、Macromolecules 28、2303-2314 (1995)によって説明さ
れている準弾性光散乱方法によって測定した。その結果を表９に示す。

【０１５２】

【表１３】

【０１５３】

【表１４】

【０１５４】

【表１５】

【０１５５】これらの結果により、（１）プロピレンオキサイド含有量が５０％（ｗ／ｖ）
以上の疎水性ポリ（エチレンオキサイド）−ポリ（プロピレンオキサイド）ブロ
ックコポリマーは、生理的温度で水溶液中で凝集する傾向を有すること、（２）
これらコポリマーの凝集および相分離は血清タンパク質の存在下で顕著に増強さ
れることが示唆された。

【０１５６】実施例１５−疎水性プルロニックコポリマーの溶液挙動に対する親水性プルロニックコポリマーの効果 . 単一のコポリマーの代わりに、二つの異なるポリ（エチレンオキサイド）−ポ
リ（プロピレンオキサイド）ブロックコポリマーの混合物を用いた以外は、実施
例３、４と同じ方法が用いられた。その結果を表１０に示す。

【０１５７】

【表１６】

【０１５８】これらの結果により、（１）エチレンオキサイド含有量が５０％（ｗ／ｖ）超
の親水性ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロックコポリマ
ーは、プロピレンオキサイド含有量が５０％（ｗ／ｖ）以上の疎水性親水性ポリ
（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロックコポリマーの、生理的
温度における凝集を防ぐこと、（２）エチレンオキサイド含有量が５０％（ｗ／
ｖ）超の親水性ポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロックコ
ポリマーは、プロピレンオキサイド含有量が５０％以上の疎水性親水性ポリ（オ
キシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロックコポリマーが血清タンパク
質存在下で凝集することを防ぐことが示された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者カバノフ，アレクサンダーアメリカ合衆国，ネブラスカ州 68144，オマハ，サウス 126スストリート 1304 (72)発明者パーニアック，マイケルカナダ，ケベック州エイチ４エイチ１エス７，バーダン，デスマーチェイス 825 (72)発明者クリンスキー，エフゲニーカナダ，ケベック州エイチ７ブイ１ジェイ８，ラバル，ブラバードカーティアーウェストシャープ306 3215 Ｆターム(参考） 4C076 AA12 CC35 DD08E DD08F DD09E DD09F EE23E EE23F EE25E EE25F FF15 FF16 GG46 4C206 AA01 AA02 HA08 JB11 KA01 KA04 MA02 MA04 MA29 MA30 NA05 NA13 NA14 ZB33 ZC55 ZC75

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式：【化１】（式中、Ｒ₁、Ｒ₂およびＲ₃は、Ｈ、ＯＨ、ＣＨ₃、ＯＣＨ₃、Ｃ（ＣＨ₃）₃［−
ｔｅｒｔ−ブチル］、フェニルであり、Ｘは−ＯＣＨ₃または−ＯＣＨ₂ＣＨ₃で
ある）で示されるＮ−アロイルヒドラゾンおよび金属を含む抗ウイルス医薬組成物
【請求項２】ＭｅはＦｅ（III）である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】Ｒ₁は−Ｃ（ＣＨ₃）₃であり、Ｒ₂およびＲ₃は水素原子であ
り、ＭｅはＦｅ（III）であり、Ｘは−ＯＣＨ₃である、請求項１に記載の組成物
。
【請求項４】非イオン性または両親媒性の界面活性剤をさらに含む、請求
項1に記載の医薬組成物。
【請求項５】該界面活性剤は、非イオン性ブロックコポリマーである、請
求項２に記載の医薬組成物。
【請求項６】該非イオン性ブロックコポリマーは、ポリ(オキシエチレン)
−ポリ(オキシプロピレン)である、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項７】ポリ(オキシプロピレン)ブロックの好ましい含有率が、ポリ
(オキシエチレン)−ポリ(オキシプロピレン)分子の含有量の約５０％である、請
求項４に記載の医薬組成物。
【請求項８】請求項1に記載の組成物の有効量を哺乳類に投与することを
含む、ＨＩＶ感染を治療する方法。