JP2002529076A - Ｈｉｖ抗原およびサイトカインをコードする禽痘ベクター - Google Patents
Ｈｉｖ抗原およびサイトカインをコードする禽痘ベクターInfo
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Abstract
(57)【要約】
本発明はＨＩＶ抗原（gag および／または pol）およびサイトカイン（γ−インターフェロン）をコードする鶏痘ウイルスに関する。
Description
【０００１】 発明の属する分野 本発明は全般的に、感染防御抗原をサイトカインとともに発現する組換えウイ
ルス構築体およびこれを含むワクチン組成物に関する。本発明は特に、ＨＩＶ抗
原、最も具体的にはＨＩＶ−１抗原に対する免疫応答を誘導可能な組換えウイル
ス構築体に関する。本発明は、とりわけＨＩＶの治療および／または予防処置に
おいて有用である。
ルス構築体およびこれを含むワクチン組成物に関する。本発明は特に、ＨＩＶ抗
原、最も具体的にはＨＩＶ−１抗原に対する免疫応答を誘導可能な組換えウイル
ス構築体に関する。本発明は、とりわけＨＩＶの治療および／または予防処置に
おいて有用である。
【０００２】 発明の背景 本明細書中に数字で引用されている刊行物の詳細は巻末に集められている。
【０００３】 現在、ＨＩＶ感染の有効な処置方法は存在しない。現在の処置戦略は血漿ＨＩ
Ｖ−１ ＲＮＡレベルを非常に低いレベルに抑制することができるが、ＨＩＶ−
１ ＤＮＡを含有する潜在的感染細胞は依然として検出され、ウイルス耐性およ
び再発が一般的である［１，２］。処置誘導性のＨＩＶ−１レベルの減少は、結
果的に、有効な免疫応答のための抗原性刺激を喪失させる。ＨＩＶ−１の制御に
おける重要なエフェクター機構であると思われる、ＨＩＶ特異的細胞障害性Ｔリ
ンパ球（ＣＴＬ）応答は、有効な抗ＨＩＶ治療後には低レベルに減少する［３］
。
Ｖ−１ ＲＮＡレベルを非常に低いレベルに抑制することができるが、ＨＩＶ−
１ ＤＮＡを含有する潜在的感染細胞は依然として検出され、ウイルス耐性およ
び再発が一般的である［１，２］。処置誘導性のＨＩＶ−１レベルの減少は、結
果的に、有効な免疫応答のための抗原性刺激を喪失させる。ＨＩＶ−１の制御に
おける重要なエフェクター機構であると思われる、ＨＩＶ特異的細胞障害性Ｔリ
ンパ球（ＣＴＬ）応答は、有効な抗ＨＩＶ治療後には低レベルに減少する［３］
。
【０００４】 治療的ＨＩＶ−１ワクチンの以前の試みは、ＨＩＶ−１感染個体における抗Ｈ
ＩＶ免疫応答を刺激することが可能であることを示したが、臨床的恩恵は示され
ていない［４−６］。従来の研究では、ＣＴＬ応答誘導不能の、タンパク質に基
づくＨＩＶ−１ワクチンを用いるか、あるいは実質的レベルの複製ＨＩＶ−１で
個体にワクチン接種（vaccinate）した。適度なレベルの複製ＨＩＶ−１でさえ
、有効なＣＴＬ応答を開始および持続させるのに必要とされるＨＩＶ特異的ＣＤ
４＋ Ｔヘルパー（Ｔｈ）応答を喪失させる［７］。
ＩＶ免疫応答を刺激することが可能であることを示したが、臨床的恩恵は示され
ていない［４−６］。従来の研究では、ＣＴＬ応答誘導不能の、タンパク質に基
づくＨＩＶ−１ワクチンを用いるか、あるいは実質的レベルの複製ＨＩＶ−１で
個体にワクチン接種（vaccinate）した。適度なレベルの複製ＨＩＶ−１でさえ
、有効なＣＴＬ応答を開始および持続させるのに必要とされるＨＩＶ特異的ＣＤ
４＋ Ｔヘルパー（Ｔｈ）応答を喪失させる［７］。
【０００５】 さらに、予防用ＨＩＶワクチンは現在存在しない。単純な組換え禽痘ワクチン
（サイトカインの同時発現なし）は一部のヒトおよび非ヒト霊長類患者において
ＣＴＬ応答を誘導し得るが、この応答はしばしば弱く、一時的であり、あるいは
存在しない（non-existant）。ＨＩＶ特異的ＣＴＬおよびＴｈ応答の誘導用の、
より信頼できるワクチンベクターが必要である。
（サイトカインの同時発現なし）は一部のヒトおよび非ヒト霊長類患者において
ＣＴＬ応答を誘導し得るが、この応答はしばしば弱く、一時的であり、あるいは
存在しない（non-existant）。ＨＩＶ特異的ＣＴＬおよびＴｈ応答の誘導用の、
より信頼できるワクチンベクターが必要である。
【０００６】 本発明に至る仕事では、発明者らは、ＨＩＶ gag/pol をコードする核酸分子
およびサイトカイン、特にＩＦＮ−γをコードする核酸分子の両方を含む組換え
鶏痘ウイルス構築体でワクチン接種することによってＨＩＶに対する特異的免疫
応答の大きさおよび表現型を高めることができることを決定した。
およびサイトカイン、特にＩＦＮ−γをコードする核酸分子の両方を含む組換え
鶏痘ウイルス構築体でワクチン接種することによってＨＩＶに対する特異的免疫
応答の大きさおよび表現型を高めることができることを決定した。
【０００７】 本発明の要旨 本明細書および請求の範囲を通して、特に記載しない限り、用語「含む(compr
ise)」ならびに「comprises」および「comprising」のようなバリエーションは
、定まった完全体（integer）もしくは段階（step）または完全体群もしくは段
階群の包含を意味し、任意の他の完全体もしくは段階または完全体群もしくは段
階群の排除を意味しないことが理解されよう。
ise)」ならびに「comprises」および「comprising」のようなバリエーションは
、定まった完全体（integer）もしくは段階（step）または完全体群もしくは段
階群の包含を意味し、任意の他の完全体もしくは段階または完全体群もしくは段
階群の排除を意味しないことが理解されよう。
【０００８】 本明細書はプログラム PatentIn Version 2.0 を用いて調製されたヌクレオチ
ド配列情報（参考文献の後に記載）を含む。配列表中、各ヌクレオチド配列は数
字見出し＜２１０＞、次いで配列番号（the sequence identifier）（例えば＜
２１０＞１、＜２１０＞２など）によって同定される。各ヌクレオチド配列の長
さ、配列のタイプ（ＤＮＡなど）および生物起源は、それぞれ数字見出しフィー
ルド＜２１１＞、＜２１２＞および＜２１３＞に与えられる情報によって示され
る。明細書中に引用されるヌクレオチド配列は、数字見出しフィールド＜４００
＞、次いで配列番号（例えば＜４００＞１、＜４００＞２など）によって与えら
れる情報によって規定される。
ド配列情報（参考文献の後に記載）を含む。配列表中、各ヌクレオチド配列は数
字見出し＜２１０＞、次いで配列番号（the sequence identifier）（例えば＜
２１０＞１、＜２１０＞２など）によって同定される。各ヌクレオチド配列の長
さ、配列のタイプ（ＤＮＡなど）および生物起源は、それぞれ数字見出しフィー
ルド＜２１１＞、＜２１２＞および＜２１３＞に与えられる情報によって示され
る。明細書中に引用されるヌクレオチド配列は、数字見出しフィールド＜４００
＞、次いで配列番号（例えば＜４００＞１、＜４００＞２など）によって与えら
れる情報によって規定される。
【０００９】 本発明の１つの側面は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原またはその誘導体を
コードする第一の核酸分子および、サイトカインまたはその機能的誘導体をコー
ドする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまたはその機能的誘導体
を含む組換えウイルス構築体であって、該ＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘導し
、高め、または他の仕方で刺激するのに有用な組換えウイルス構築体を提供する
。
コードする第一の核酸分子および、サイトカインまたはその機能的誘導体をコー
ドする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまたはその機能的誘導体
を含む組換えウイルス構築体であって、該ＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘導し
、高め、または他の仕方で刺激するのに有用な組換えウイルス構築体を提供する
。
【００１０】 本発明の別の側面では、１つまたはそれ以上のＨＩＶ−１抗原またはその誘導
体をコードする第一の核酸分子および、サイトカインまたはその機能的誘導体を
コードする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまたはその機能的誘
導体を含む組換えウイルス構築体であって、該ＨＩＶ−１抗原に対する免疫応答
を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有用な組換えウイルス構築体を
提供する。
体をコードする第一の核酸分子および、サイトカインまたはその機能的誘導体を
コードする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまたはその機能的誘
導体を含む組換えウイルス構築体であって、該ＨＩＶ−１抗原に対する免疫応答
を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有用な組換えウイルス構築体を
提供する。
【００１１】 本発明のさらに別の側面では、ＨＩＶ−１ Gag および／または Pol またはそ
の誘導体をコードする第一の核酸分子およびサイトカインまたはその機能的誘導
体をコードする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまたはその機能
的誘導体を含む組換えウイルス構築体であって、該 Gag および／または Pol に
対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有用な組換えウ
イルス構築体を提供する。
の誘導体をコードする第一の核酸分子およびサイトカインまたはその機能的誘導
体をコードする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまたはその機能
的誘導体を含む組換えウイルス構築体であって、該 Gag および／または Pol に
対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有用な組換えウ
イルス構築体を提供する。
【００１２】 本発明のさらに別の側面では、ＨＩＶ−１ Gag および／または Pol またはそ
の誘導体をコードする第一の核酸分子および、インターフェロン−γまたはその
機能的誘導体をコードする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまた
はその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築体であって、該 Gag および／ま
たは Pol に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有
用な組換えウイルス構築体を提供する。
の誘導体をコードする第一の核酸分子および、インターフェロン−γまたはその
機能的誘導体をコードする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまた
はその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築体であって、該 Gag および／ま
たは Pol に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有
用な組換えウイルス構築体を提供する。
【００１３】 本発明のさらなる側面では、ＨＩＶ−１ Gag および／または Pol またはその
誘導体をコードする第一の核酸分子および、インターフェロン−γ、その機能的
当価物をコードする第二の核酸分子を包含する鶏痘ウイルスベクターまたはその
機能的誘導体を含む組換えウイルス構築体であって、該 Gag および／または Po
l に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有用な組換
えウイルス構築体を提供する。
誘導体をコードする第一の核酸分子および、インターフェロン−γ、その機能的
当価物をコードする第二の核酸分子を包含する鶏痘ウイルスベクターまたはその
機能的誘導体を含む組換えウイルス構築体であって、該 Gag および／または Po
l に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有用な組換
えウイルス構築体を提供する。
【００１４】 本発明のさらに別の側面は、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原またはその誘導
体をコードする第一の核酸分子および、サイトカインまたはその機能的誘導体を
コードする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまたはその機能的誘
導体を含む組換えウイルス構築体であって、該ＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘
導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有用な組換えウイルス構築体を含む
ワクチンに関する。
体をコードする第一の核酸分子および、サイトカインまたはその機能的誘導体を
コードする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまたはその機能的誘
導体を含む組換えウイルス構築体であって、該ＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘
導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有用な組換えウイルス構築体を含む
ワクチンに関する。
【００１５】 本発明のさらに別の側面では、ＨＩＶ−１ Gag および／または Pol またはそ
の誘導体をコードする第一の核酸分子およびインターフェロンγまたはその機能
的誘導体をコードする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまたはそ
の機能的誘導体を含む組換えウイルス構築体を含むワクチンであって、該 Gag
および／または Pol に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激
するのに有用なワクチンを提供する。
の誘導体をコードする第一の核酸分子およびインターフェロンγまたはその機能
的誘導体をコードする第二の核酸分子を包含する禽痘ウイルスベクターまたはそ
の機能的誘導体を含む組換えウイルス構築体を含むワクチンであって、該 Gag
および／または Pol に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激
するのに有用なワクチンを提供する。
【００１６】 本発明のさらに別の側面では、本発明は、本明細書中、上に規定される組換え
ウイルス構築体および１つまたはそれ以上の製薬的に許容される担体および／ま
たは希釈剤を含む、哺乳類のＨＩＶに対する免疫応答を誘導し、高め、または他
の仕方で刺激するのに使用するための医薬組成物を提供する。この組成物には組
換えウイルス構築体を既知の抗ウイルス化合物または分子とともに含ませてもよ
い。
ウイルス構築体および１つまたはそれ以上の製薬的に許容される担体および／ま
たは希釈剤を含む、哺乳類のＨＩＶに対する免疫応答を誘導し、高め、または他
の仕方で刺激するのに使用するための医薬組成物を提供する。この組成物には組
換えウイルス構築体を既知の抗ウイルス化合物または分子とともに含ませてもよ
い。
【００１７】 本発明のさらに別の側面では、哺乳類のＨＩＶに対する免疫応答を誘導し、高
め、または他の仕方で刺激する方法であって、本明細書中、上に規定されるワク
チンの有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘導し、
高め、または他の仕方で刺激するのに十分な時間および条件で該哺乳類に投与す
ることを含む方法を提供する。
め、または他の仕方で刺激する方法であって、本明細書中、上に規定されるワク
チンの有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘導し、
高め、または他の仕方で刺激するのに十分な時間および条件で該哺乳類に投与す
ることを含む方法を提供する。
【００１８】 本発明のさらに別の側面では、哺乳類のＨＩＶに対する免疫応答を誘導し、高
め、または他の仕方で刺激する方法であって、本明細書中、上に規定される組換
えウイルス構築体の有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応
答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに十分な時間および条件で該哺
乳類に投与することを含む方法を提供する。
め、または他の仕方で刺激する方法であって、本明細書中、上に規定される組換
えウイルス構築体の有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応
答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに十分な時間および条件で該哺
乳類に投与することを含む方法を提供する。
【００１９】 本発明のさらに別の側面では、哺乳類を処置する方法であって、本明細書中、
上に規定されるワクチンの有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する
免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに十分な時間および条件
で該哺乳類に投与することを含む方法を提供する。
上に規定されるワクチンの有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する
免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに十分な時間および条件
で該哺乳類に投与することを含む方法を提供する。
【００２０】 本発明のさらに別の側面では、哺乳類を処置する方法であって、本明細書中、
上に規定される組換えウイルス構築体の有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ
抗原に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに十分な時
間および条件で該哺乳類に投与することを含む方法を提供する。
上に規定される組換えウイルス構築体の有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ
抗原に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに十分な時
間および条件で該哺乳類に投与することを含む方法を提供する。
【００２１】 本発明のさらに別の側面では、哺乳類のＨＩＶ感染またはＡＩＤＳを処置し、
ならびに／あるいは予防する方法であって、本明細書中、上に規定されるワクチ
ンの有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘導し、高
め、または他の仕方で刺激するのに十分な時間および条件で投与することを含む
方法を提供する。
ならびに／あるいは予防する方法であって、本明細書中、上に規定されるワクチ
ンの有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘導し、高
め、または他の仕方で刺激するのに十分な時間および条件で投与することを含む
方法を提供する。
【００２２】 本発明のさらに別の側面では、哺乳類のＨＩＶ感染またはＡＩＤＳを処置し、
ならびに／あるいは予防する方法であって、本明細書中、上に規定される組換え
ウイルス構築体の有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答
を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに十分な時間および条件で投与す
ることを含む方法を提供する。
ならびに／あるいは予防する方法であって、本明細書中、上に規定される組換え
ウイルス構築体の有効量を、１つまたはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答
を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに十分な時間および条件で投与す
ることを含む方法を提供する。
【００２３】 本発明はさらに、ＨＩＶ感染を処置および／または予防するための医薬品の製
造における本発明の組換えウイルス構築体の使用にまで拡大する。
造における本発明の組換えウイルス構築体の使用にまで拡大する。
【００２４】 本発明のさらに別の側面では、本明細書中、上に規定される組換えウイルス構
築体を含む、ＨＩＶに対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激す
るのに有用な物質を提供する。
築体を含む、ＨＩＶに対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激す
るのに有用な物質を提供する。
【００２５】 （発明を実施するための最良の形態） 本発明は、一部、ｇａｇ／ｐｏｌなどの１またはそれ以上の保護ＨＩＶ抗原を
コードする核酸分子とＩＦＮ−γなどのサイトカインをコードする核酸分子との
両者を含む組換えウイルス構築物（構築体）を用いてワクチンを行ったときに、
ＨＩＶ、とりわけＨＩＶ−１に対する免疫応答を高めることができるという決定
に基づく。 従って、本発明の１つの側面は、１またはそれ以上のＨＩＶ抗原またはその誘
導体をコードする第一の核酸分子およびサイトカインまたはその機能的誘導体を
コードする第二の核酸分子を導入したアビポックス（avipox、禽痘）ウイルスベ
クターまたはその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築物であって、該ＨＩＶ
抗原に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有効なも
のを提供する。
コードする核酸分子とＩＦＮ−γなどのサイトカインをコードする核酸分子との
両者を含む組換えウイルス構築物（構築体）を用いてワクチンを行ったときに、
ＨＩＶ、とりわけＨＩＶ−１に対する免疫応答を高めることができるという決定
に基づく。 従って、本発明の１つの側面は、１またはそれ以上のＨＩＶ抗原またはその誘
導体をコードする第一の核酸分子およびサイトカインまたはその機能的誘導体を
コードする第二の核酸分子を導入したアビポックス（avipox、禽痘）ウイルスベ
クターまたはその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築物であって、該ＨＩＶ
抗原に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有効なも
のを提供する。
【００２６】 「ＨＩＶ」への言及は、ホモログおよび変異体を含むあらゆるＨＩＶ株への言
及を包含すると理解されなければならない。特に好ましい態様では、該ＨＩＶは
ＨＩＶ−１である。 この本発明の好ましい側面によれば、１またはそれ以上のＨＩＶ−１抗原また
はその誘導体をコードする第一の核酸分子およびサイトカインまたはその機能的
誘導体をコードする第二の核酸分子を導入したアビポックスウイルスベクターま
たはその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築物であって、該ＨＩＶ−１抗原
に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有効なものが
提供される。
及を包含すると理解されなければならない。特に好ましい態様では、該ＨＩＶは
ＨＩＶ−１である。 この本発明の好ましい側面によれば、１またはそれ以上のＨＩＶ−１抗原また
はその誘導体をコードする第一の核酸分子およびサイトカインまたはその機能的
誘導体をコードする第二の核酸分子を導入したアビポックスウイルスベクターま
たはその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築物であって、該ＨＩＶ−１抗原
に対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有効なものが
提供される。
【００２７】 ＨＩＶ−１抗原に対する免疫応答を「誘導し、高め、または他の仕方で刺激す
る（誘引、高揚、または刺激する）」とは、特定の免疫応答を刺激するまたは特
定の免疫応答の刺激を容易にするものとして理解されなければならない。特定の
免疫応答は、本発明の組換えウイルス構築物を含むヌクレオチド配列によってコ
ードされるＨＩＶ抗原の、それぞれいずれか１またはそれ以上のペプチドまたは
エピトープに対して向けられたＴ細胞応答および／または体液性応答であってよ
い。好ましくは、免疫応答はＴｈ−１およびＣＴＬ応答である。しかしながら、
免疫応答がＴｈ−１型の応答に偏向される場合であっても、ある程度の抗体生成
は生じる。
る（誘引、高揚、または刺激する）」とは、特定の免疫応答を刺激するまたは特
定の免疫応答の刺激を容易にするものとして理解されなければならない。特定の
免疫応答は、本発明の組換えウイルス構築物を含むヌクレオチド配列によってコ
ードされるＨＩＶ抗原の、それぞれいずれか１またはそれ以上のペプチドまたは
エピトープに対して向けられたＴ細胞応答および／または体液性応答であってよ
い。好ましくは、免疫応答はＴｈ−１およびＣＴＬ応答である。しかしながら、
免疫応答がＴｈ−１型の応答に偏向される場合であっても、ある程度の抗体生成
は生じる。
【００２８】 「ＨＩＶ抗原またはその誘導体」への言及は、ＨＩＶの成分またはその誘導体
への言及として理解されなければならない。該成分は、ペプチド、ポリペプチド
、タンパク質、または炭水化物などの非タンパク質性の断片であってよい。抗原
は、特異的な免疫応答が刺激されることに関与する１またはそれ以上の部位を含
むと理解されなければならない。たとえば、抗原提示細胞による抗原のプロセシ
ングは、ＭＨＣクラスIIと同時に発現されて特定のＴヘルパー細胞を刺激する１
またはそれ以上のペプチドの産生という結果となる。同様に、該ペプチドのプロ
セシングおよびＭＨＣクラスＩとの同時発現は、Ｔ細胞障害性細胞の１またはそ
れ以上の特異性の刺激に導く。該抗原はまた、体液性免疫応答が向けられる１ま
たはそれ以上のエピトープをも含んでいてよい。該エピトープは線状であっても
よいし、またはコンホメーションエピトープであってもよい。エピトープが線状
エピトープである場合、該エピトープに向けられた特異的な体液性免疫の刺激が
行われるためには、発現された該抗原が天然のコンホメーションに折り畳まれる
ことは必要ではない。該抗原は、たとえば１つのエピトープのみを含み、ハプテ
ンの形態をとってもよい。しかしながら、本発明によれば、該ハプテンを免疫原
性にし、それゆえ本発明に使用するのに適したものにするには該ハプテンをサイ
トカインと同時に発現させれば充分である。
への言及として理解されなければならない。該成分は、ペプチド、ポリペプチド
、タンパク質、または炭水化物などの非タンパク質性の断片であってよい。抗原
は、特異的な免疫応答が刺激されることに関与する１またはそれ以上の部位を含
むと理解されなければならない。たとえば、抗原提示細胞による抗原のプロセシ
ングは、ＭＨＣクラスIIと同時に発現されて特定のＴヘルパー細胞を刺激する１
またはそれ以上のペプチドの産生という結果となる。同様に、該ペプチドのプロ
セシングおよびＭＨＣクラスＩとの同時発現は、Ｔ細胞障害性細胞の１またはそ
れ以上の特異性の刺激に導く。該抗原はまた、体液性免疫応答が向けられる１ま
たはそれ以上のエピトープをも含んでいてよい。該エピトープは線状であっても
よいし、またはコンホメーションエピトープであってもよい。エピトープが線状
エピトープである場合、該エピトープに向けられた特異的な体液性免疫の刺激が
行われるためには、発現された該抗原が天然のコンホメーションに折り畳まれる
ことは必要ではない。該抗原は、たとえば１つのエピトープのみを含み、ハプテ
ンの形態をとってもよい。しかしながら、本発明によれば、該ハプテンを免疫原
性にし、それゆえ本発明に使用するのに適したものにするには該ハプテンをサイ
トカインと同時に発現させれば充分である。
【００２９】 従って、ＨＩＶ「抗原」に対する応答を刺激するとは、ＨＩＶ抗原の１または
それ以上の部位に向けられた特定の免疫細胞（すなわち、Ｔ細胞および／または
Ｂ細胞）の刺激として理解されなければならない。本発明に使用するのに適した
抗原の例としては、これらに限られるものではないが、ＨＩＶウイルス遺伝子ｇ ａｇ 、ｐｒｏ、ｐｏｌおよびｅｎｖによってコードされた１またはそれ以上の分
子が挙げられる。各遺伝子の発現産物には同じ名称だが最初の文字を大文字にし
た通常の字体が与えられる。好ましくは、該ＨＩＶ抗原はＨＩＶ−１ Ｇａｇお
よび／またはＰｏｌ分子またはその誘導体である。
それ以上の部位に向けられた特定の免疫細胞（すなわち、Ｔ細胞および／または
Ｂ細胞）の刺激として理解されなければならない。本発明に使用するのに適した
抗原の例としては、これらに限られるものではないが、ＨＩＶウイルス遺伝子ｇ ａｇ 、ｐｒｏ、ｐｏｌおよびｅｎｖによってコードされた１またはそれ以上の分
子が挙げられる。各遺伝子の発現産物には同じ名称だが最初の文字を大文字にし
た通常の字体が与えられる。好ましくは、該ＨＩＶ抗原はＨＩＶ−１ Ｇａｇお
よび／またはＰｏｌ分子またはその誘導体である。
【００３０】 この好ましい態様によれば、ＨＩＶ−１ Ｇａｇおよび／またはＰｏｌまたは
その誘導体をコードする第一の核酸分子およびサイトカインまたはその機能的誘
導体をコードする第二の核酸分子を導入したアビポックスウイルスベクターまた
はその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築物であって、該Ｇａｇおよび／ま
たはＰｏｌに対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有
効なものが提供される。
その誘導体をコードする第一の核酸分子およびサイトカインまたはその機能的誘
導体をコードする第二の核酸分子を導入したアビポックスウイルスベクターまた
はその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築物であって、該Ｇａｇおよび／ま
たはＰｏｌに対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激するのに有
効なものが提供される。
【００３１】 「サイトカイン」とは、免疫応答の刺激を変調することのできるあらゆるサイ
トカインまたはその誘導体をいう。たとえば、該サイトカインは、免疫応答を誘
導し、アップレギュレーションし、高め、または維持する。特に好ましいサイト
カインは、Ｔｈ１応答、ＣＴＬ応答を支持するか、または応答をＴｈ１型の応答
に偏向させるものであり、たとえばＩＬ−２およびγインターフェロンまたはそ
の機能的誘導体である。好ましいサイトカインはγインターフェロンである。
トカインまたはその誘導体をいう。たとえば、該サイトカインは、免疫応答を誘
導し、アップレギュレーションし、高め、または維持する。特に好ましいサイト
カインは、Ｔｈ１応答、ＣＴＬ応答を支持するか、または応答をＴｈ１型の応答
に偏向させるものであり、たとえばＩＬ−２およびγインターフェロンまたはそ
の機能的誘導体である。好ましいサイトカインはγインターフェロンである。
【００３２】 従って、特に好ましい態様において、ＨＩＶ−１ Ｇａｇおよび／またはＰｏ
ｌまたはその誘導体をコードする第一の核酸分子およびインターフェロンγまた
はその機能的誘導体をコードする第二の核酸分子を導入したアビポックスウイル
スベクターまたはその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築物であって、該Ｇ
ａｇおよび／またはＰｏｌに対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で
刺激するのに有効なものが提供される。
ｌまたはその誘導体をコードする第一の核酸分子およびインターフェロンγまた
はその機能的誘導体をコードする第二の核酸分子を導入したアビポックスウイル
スベクターまたはその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築物であって、該Ｇ
ａｇおよび／またはＰｏｌに対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で
刺激するのに有効なものが提供される。
【００３３】 本発明に使用するのに適したアビポックスウイルスベクターは、アビポックス
ウイルスの全体または一部またはその誘導体を含む。本発明は、修飾したウイル
ス、たとえば弱毒化したウイルスなどの誘導体を包含するものと理解されなけれ
ばならない。本発明に使用するのに適したアビポックスウイルスの例としては、
これらに限られるものではないが、家禽ポックスウイルスおよびカナリヤポック
スウイルスが挙げられる。好ましくは、該アビポックスウイルスは家禽ポックス
ウイルスである。
ウイルスの全体または一部またはその誘導体を含む。本発明は、修飾したウイル
ス、たとえば弱毒化したウイルスなどの誘導体を包含するものと理解されなけれ
ばならない。本発明に使用するのに適したアビポックスウイルスの例としては、
これらに限られるものではないが、家禽ポックスウイルスおよびカナリヤポック
スウイルスが挙げられる。好ましくは、該アビポックスウイルスは家禽ポックス
ウイルスである。
【００３４】 最も好ましい態様において、ＨＩＶ−１ Ｇａｇおよび／またはＰｏｌまたは
その誘導体をコードする第一の核酸分子およびインターフェロンγまたはその機
能的誘導体をコードする第二の核酸分子を導入した家禽ポックスウイルスベクタ
ーまたはその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築物であって、該Ｇａｇおよ
び／またはＰｏｌに対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激する
のに有効なものが提供される。
その誘導体をコードする第一の核酸分子およびインターフェロンγまたはその機
能的誘導体をコードする第二の核酸分子を導入した家禽ポックスウイルスベクタ
ーまたはその機能的誘導体を含む組換えウイルス構築物であって、該Ｇａｇおよ
び／またはＰｏｌに対する免疫応答を誘導し、高め、または他の仕方で刺激する
のに有効なものが提供される。
【００３５】 "誘導体"というとき、天然、合成または融合タンパク質を含む組換え体資源か
らのフラグメント、一部、部分、均等物、類似体、変異体、相同体、擬似体を含
むものと理解されるべきである。誘導体はアミノ酸の挿入、削除または置換によ
って誘導され得る。アミノ酸挿入誘導体はアミノおよび／またはカルボキシル末
端融合物および、単一のまたは複数のアミノ酸の配列内挿入物を含む。挿入アミ
ノ酸配列変異体は、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基がタンパク質の予め定め
られた位置に導入される変異体であるが、得られた生成物の適当なスクリーニン
グによればランダムな挿入であってもよい。削除変異体は配列から１つまたはそ
れ以上のアミノ酸の除去によることを特徴とする。置換アミノ酸変異体は、配列
中の少なくとも一個のアミノ酸が除去され別のアミノ酸がその位置に挿入される
変異体である。アミノ酸配列への付加は他のペプチド、ポリペプチドまたはタン
パク質との融合を含む。
らのフラグメント、一部、部分、均等物、類似体、変異体、相同体、擬似体を含
むものと理解されるべきである。誘導体はアミノ酸の挿入、削除または置換によ
って誘導され得る。アミノ酸挿入誘導体はアミノおよび／またはカルボキシル末
端融合物および、単一のまたは複数のアミノ酸の配列内挿入物を含む。挿入アミ
ノ酸配列変異体は、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基がタンパク質の予め定め
られた位置に導入される変異体であるが、得られた生成物の適当なスクリーニン
グによればランダムな挿入であってもよい。削除変異体は配列から１つまたはそ
れ以上のアミノ酸の除去によることを特徴とする。置換アミノ酸変異体は、配列
中の少なくとも一個のアミノ酸が除去され別のアミノ酸がその位置に挿入される
変異体である。アミノ酸配列への付加は他のペプチド、ポリペプチドまたはタン
パク質との融合を含む。
【００３６】 誘導体は、ペプチド、ポリペプチドまたは他のタンパク質性または非タンパク
質性分子に融合した総タンパク質の特定のエピトープまたは一部を有するフラグ
メントを含む。例えば、ベクターまたはその誘導体は細胞内への移行を容易にす
る分子と融合していてもよい。核酸配列の誘導体は、単一または複数のヌクレオ
チドの置換、削除およびまたは他の核酸分子との融合を含む付加によって誘導さ
れる。本発明の核酸分子の誘導体はオリゴヌクレオチド、ＰＣＲプライマー、ア
ンチセンス分子および核酸分子の融合物を含む。
質性分子に融合した総タンパク質の特定のエピトープまたは一部を有するフラグ
メントを含む。例えば、ベクターまたはその誘導体は細胞内への移行を容易にす
る分子と融合していてもよい。核酸配列の誘導体は、単一または複数のヌクレオ
チドの置換、削除およびまたは他の核酸分子との融合を含む付加によって誘導さ
れる。本発明の核酸分子の誘導体はオリゴヌクレオチド、ＰＣＲプライマー、ア
ンチセンス分子および核酸分子の融合物を含む。
【００３７】 均等物は機能的な類似体またはアゴニストとして働き得る分子というときも含
むものと理解されるべきである。均等物は必ずしも当該分子から誘導される必要
はないが、ある種の立体配置的な類似性をもっていてもよい。別法として、均等
物は、当該分子のある種の免疫的かつ生理化学的性質に類似するように設計する
ことができる。例えば、均等物は天然の生成物のスクリーニング後検出すること
ができる。均等物はまたペプチド擬態物を含む。ここでいう相同体はこれに限定
されるものではないが、異なる種属から誘導される分子を含む。フラグメントは
本発明の目的を達成するのに効果的な部分を含む。
むものと理解されるべきである。均等物は必ずしも当該分子から誘導される必要
はないが、ある種の立体配置的な類似性をもっていてもよい。別法として、均等
物は、当該分子のある種の免疫的かつ生理化学的性質に類似するように設計する
ことができる。例えば、均等物は天然の生成物のスクリーニング後検出すること
ができる。均等物はまたペプチド擬態物を含む。ここでいう相同体はこれに限定
されるものではないが、異なる種属から誘導される分子を含む。フラグメントは
本発明の目的を達成するのに効果的な部分を含む。
【００３８】 本発明の使用に適する核酸分子はＤＮＡまたはＲＮＡであってもよい。好まし
くは上記の核酸分子はＤＮＡである。核酸分子によってコードされたサイトカイ
ンまたはＨＩＶ抗原というときは上記核酸分子の発現生成物をいう。
くは上記の核酸分子はＤＮＡである。核酸分子によってコードされたサイトカイ
ンまたはＨＩＶ抗原というときは上記核酸分子の発現生成物をいう。
【００３９】 本発明はいずれか一つの作用の理論または方法に限定されるものではなく、本
発明の組換え構築体の投与はＨＩＶ特異的Ｔ−細胞の応答の表現型および規模を
増強すると考えられる。それはまた本発明の構築体を含むＴ−細胞抗原に対する
Ｔ−細胞の能力範囲の拡大をもたらし得る。従って、本発明の組換えウイルス性
構築体を投与された人におけるＨＩＶ−１(特に本発明の構築体を含むＨＩＶ−
１抗原)に対する感染防御免疫応答が刺激される。
発明の組換え構築体の投与はＨＩＶ特異的Ｔ−細胞の応答の表現型および規模を
増強すると考えられる。それはまた本発明の構築体を含むＴ−細胞抗原に対する
Ｔ−細胞の能力範囲の拡大をもたらし得る。従って、本発明の組換えウイルス性
構築体を投与された人におけるＨＩＶ−１(特に本発明の構築体を含むＨＩＶ−
１抗原)に対する感染防御免疫応答が刺激される。
【００４０】 医薬組成物の形態の当該ウイルス性構築体の投与は都合のよい手段によって行
うことができる。医薬組成物のウイルス性構築体または試剤は具体的なケースに
よって変化する量で投与された場合、治療作用を発揮するものをいう。例えば、
人または動物によって種々に変化する。広範囲の投与量を適用し得る。例えば、
一人の患者について、構築体約０.１μg〜約１mg／kg体重／日を投与することが
できる。投与計画は最適の治療効果をもたらすように調整することができる。例
えば、数回に分割した投与量で日、週、月または他の適当な時間毎に投与するこ
とができ、またその投与量は症状の緊急性による指示に比例して減少させること
ができる。構築体は、経口、静脈内(水溶性の場合)、経鼻、腹腔内、筋肉内、皮
下、皮内または坐薬経路、または移植(例えば、徐放性分子を用いて)などの都合
のよい方法で投与することができる。
うことができる。医薬組成物のウイルス性構築体または試剤は具体的なケースに
よって変化する量で投与された場合、治療作用を発揮するものをいう。例えば、
人または動物によって種々に変化する。広範囲の投与量を適用し得る。例えば、
一人の患者について、構築体約０.１μg〜約１mg／kg体重／日を投与することが
できる。投与計画は最適の治療効果をもたらすように調整することができる。例
えば、数回に分割した投与量で日、週、月または他の適当な時間毎に投与するこ
とができ、またその投与量は症状の緊急性による指示に比例して減少させること
ができる。構築体は、経口、静脈内(水溶性の場合)、経鼻、腹腔内、筋肉内、皮
下、皮内または坐薬経路、または移植(例えば、徐放性分子を用いて)などの都合
のよい方法で投与することができる。
【００４１】 従って、本発明の別の態様は、組換えウイルス性構築体を含むワクチンであっ
て、構築体が１またはそれ以上のＨＩＶ−抗原またはその誘導体をコードする第
１核酸分子およびサイトカインまたはその機能的誘導体をコードする第２核酸分
子を組み込んだ禽痘ウイルスベクターまたはその機能的誘導体を含み、その組換
えウイルス構築体が該ＨＩＶ−抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激
する効果を有するワクチンに関する。
て、構築体が１またはそれ以上のＨＩＶ−抗原またはその誘導体をコードする第
１核酸分子およびサイトカインまたはその機能的誘導体をコードする第２核酸分
子を組み込んだ禽痘ウイルスベクターまたはその機能的誘導体を含み、その組換
えウイルス構築体が該ＨＩＶ−抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激
する効果を有するワクチンに関する。
【００４２】 好ましくは、上記ＨＩＶ抗原はＨＩＶ−１Ｇagおよび／またはＰolである。さ
らにより好ましくは、上記サイトカインはγ−インターフェロンである。
らにより好ましくは、上記サイトカインはγ−インターフェロンである。
【００４３】 好ましい具体例によれば、構築体がＨＩＶ−１Ｇagおよび／またはＰolまたは
その誘導体をコードする第１核酸分子およびγ−インターフェロンまたはその機
能的誘導体をコードする第２核酸分子を組み込んだ禽痘ウイルスベクターまたは
その機能的誘導体を含む組換えウイルス性構築体を含むワクチンであって、上記
ワクチンが該Ｇagおよび／またはＰolに対する免疫応答を誘引、高揚、または刺
激する効果を有するワクチンを提供する。
その誘導体をコードする第１核酸分子およびγ−インターフェロンまたはその機
能的誘導体をコードする第２核酸分子を組み込んだ禽痘ウイルスベクターまたは
その機能的誘導体を含む組換えウイルス性構築体を含むワクチンであって、上記
ワクチンが該Ｇagおよび／またはＰolに対する免疫応答を誘引、高揚、または刺
激する効果を有するワクチンを提供する。
【００４４】 最も好ましくは、上記禽痘ウイルスは鶏痘ウイルスである。
【００４５】 本発明の別の態様は哺乳動物におけるＨＩＶに対する免疫応答を誘導、増強、
またはさもなくば刺激するのに使用するための上記で定義した組換えウイルス構
築体および１つまたはそれ以上の医薬的に許容され得る担体および／または希釈
剤を含む医薬組成物である。この組成物は組換えウイルス構築体とともに公知の
抗ウイルス化合物または分子もまた含んでいてもよい。
またはさもなくば刺激するのに使用するための上記で定義した組換えウイルス構
築体および１つまたはそれ以上の医薬的に許容され得る担体および／または希釈
剤を含む医薬組成物である。この組成物は組換えウイルス構築体とともに公知の
抗ウイルス化合物または分子もまた含んでいてもよい。
【００４６】 注射用に適した医薬形態は滅菌水溶液(水溶性の場合)および注射溶液または懸
濁液の用時調製製剤のための滅菌粉末を含む。すべての場合おいてこの形態は滅
菌されていなければならずまた容易に注射可能な状態になる程度に液体でなけれ
ばならない。製造および貯蔵条件のもと安定でなければならないし、バクテリア
やカビなどの微生物による汚染作用から保護されていなければならない。担体は
また、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセリン、プロピレン
グリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど)、それらの適当な混合物お
よび植物油を含有する溶媒または分散媒体であってもよい。適当な液性は、例え
ば、リシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散の場合には必要な粒径
を保つことによって、界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物
の作用からの防御は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソル
ビン酸、サーメロサール(thirmerosal)などの種々の抗菌または殺菌剤によって
行うことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含
むのが好ましい。注射用組成物の吸収遅延は組成物中に吸収遅延剤、例えば、モ
ノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを使用することによって行うことが
できる。
濁液の用時調製製剤のための滅菌粉末を含む。すべての場合おいてこの形態は滅
菌されていなければならずまた容易に注射可能な状態になる程度に液体でなけれ
ばならない。製造および貯蔵条件のもと安定でなければならないし、バクテリア
やカビなどの微生物による汚染作用から保護されていなければならない。担体は
また、例えば、水、エタノール、ポリオール(例えば、グリセリン、プロピレン
グリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど)、それらの適当な混合物お
よび植物油を含有する溶媒または分散媒体であってもよい。適当な液性は、例え
ば、リシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散の場合には必要な粒径
を保つことによって、界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物
の作用からの防御は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソル
ビン酸、サーメロサール(thirmerosal)などの種々の抗菌または殺菌剤によって
行うことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含
むのが好ましい。注射用組成物の吸収遅延は組成物中に吸収遅延剤、例えば、モ
ノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを使用することによって行うことが
できる。
【００４７】 活性成分が適切に保護されるとき、それらは、例えば、不活性希釈剤または同
化性可食担体とともに経口投与するか、または硬質または軟質のゼラチンカプセ
ルに封入するか、または錠剤に打錠するか、または直接食物や食事に混合するこ
ともできる。経口治療用投与については、活性化合物を担体とともに混合し、摂
取可能な錠剤、口内錠剤、トローチ、カプセル、エリクシル、懸濁剤、シロップ
、ウエハースなどの形態で用いることができる。このような組成物および製剤は
活性化合物を少なくとも１重量％含んでいる。組成物および製剤の％は、当然変
化してもよく、好都合には単位当たり約５〜約８０重量％の範囲である。治療的
に有用な組成物内の活性化合物の量は適当な投与量が得られる量である。本発明
の好ましい組成物および製剤は、経口投与単位形態が活性化合物約０.１μg〜２
０００mgの範囲で含むように調製される。
化性可食担体とともに経口投与するか、または硬質または軟質のゼラチンカプセ
ルに封入するか、または錠剤に打錠するか、または直接食物や食事に混合するこ
ともできる。経口治療用投与については、活性化合物を担体とともに混合し、摂
取可能な錠剤、口内錠剤、トローチ、カプセル、エリクシル、懸濁剤、シロップ
、ウエハースなどの形態で用いることができる。このような組成物および製剤は
活性化合物を少なくとも１重量％含んでいる。組成物および製剤の％は、当然変
化してもよく、好都合には単位当たり約５〜約８０重量％の範囲である。治療的
に有用な組成物内の活性化合物の量は適当な投与量が得られる量である。本発明
の好ましい組成物および製剤は、経口投与単位形態が活性化合物約０.１μg〜２
０００mgの範囲で含むように調製される。
【００４８】 錠剤、トローチ、ピル、カブセルなどは下記のものを含んでいてもよい：トラ
ガントガム、アラビアゴム、トウモロコシデンプンまたはゼラチンなどの結合剤
；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプ
ン、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；および
ショ糖、乳糖またはサッカリンなどの甘味料、またはペパーミント油、冬緑油ま
たはさくらんぼフレーバーなどの矯味剤を添加することもできる。投与単位形態
がカプセルのとき、上記の種類の材料に加えて、液体の担体を含んでいてもよい
。コーティング剤として、またはそうでなければ単位投与の物理的形態を変える
ために、種々の他の材料を含んでいてもよい。例えば、錠剤、ピルまたはカプセ
ルはセラック、糖またはその両方でコーティングされていてもよい。シロップ剤
およびエレクシル剤は活性化合物、甘味料としてのショ糖、保存剤としてのメチ
ルおよびプロピルパラベン、着色料およびさくらんぼまたはオレンジフレーバー
などの矯味剤を含んでいてもよい。もちろん、単位投与形態の製造に用いられる
材料は医薬的に純粋でなければならず、採用される量で実質的に無毒でなければ
ならない。さらに、活性化合物は徐放性製剤および調剤に処方することができる
。
ガントガム、アラビアゴム、トウモロコシデンプンまたはゼラチンなどの結合剤
；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプ
ン、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；および
ショ糖、乳糖またはサッカリンなどの甘味料、またはペパーミント油、冬緑油ま
たはさくらんぼフレーバーなどの矯味剤を添加することもできる。投与単位形態
がカプセルのとき、上記の種類の材料に加えて、液体の担体を含んでいてもよい
。コーティング剤として、またはそうでなければ単位投与の物理的形態を変える
ために、種々の他の材料を含んでいてもよい。例えば、錠剤、ピルまたはカプセ
ルはセラック、糖またはその両方でコーティングされていてもよい。シロップ剤
およびエレクシル剤は活性化合物、甘味料としてのショ糖、保存剤としてのメチ
ルおよびプロピルパラベン、着色料およびさくらんぼまたはオレンジフレーバー
などの矯味剤を含んでいてもよい。もちろん、単位投与形態の製造に用いられる
材料は医薬的に純粋でなければならず、採用される量で実質的に無毒でなければ
ならない。さらに、活性化合物は徐放性製剤および調剤に処方することができる
。
【００４９】 医薬的に許容し得る担体および／または希釈剤は、いずれかのおよび全ての溶
媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延
化剤などを含む。医薬的に活性な物質のためのそれら媒質および剤の使用は、当
該分野でよく知られている。いずれかの通常の媒質または剤が活性成分と適合し
ない場合を除いて、治療学的組成物中でのそれらの使用を意図するものとする。
補助的な活性成分をも組成物に含有し得る。
媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延
化剤などを含む。医薬的に活性な物質のためのそれら媒質および剤の使用は、当
該分野でよく知られている。いずれかの通常の媒質または剤が活性成分と適合し
ない場合を除いて、治療学的組成物中でのそれらの使用を意図するものとする。
補助的な活性成分をも組成物に含有し得る。
【００５０】 投与が容易であることおよび用量が均一であることのために、非経口組成物を
用量単位形態で製剤化することが特に有利である。本明細書で使用する用量単位
形態とは、単位用量として処置する哺乳動物の被験者に適合する物理的に別個な
単位を意味し、各単位は所望の治療学的効果を生み出すように計算された予め決
めた量の活性物質を、必要とされる医薬的な担体と共に含有する。本発明の新規
な用量単位形態についての詳細は、（ａ）活性物質に特有の性質および達成すべ
き特定の治療学的効果、および（ｂ）身体の健康が本明細書で詳細に開示するよ
うに損なわれている病態を有する生きている被験者における疾患の処置のために
活性物質などの混ぜ合わせに関する分野に固有な制限により決定され、それらに
直接に左右される。
用量単位形態で製剤化することが特に有利である。本明細書で使用する用量単位
形態とは、単位用量として処置する哺乳動物の被験者に適合する物理的に別個な
単位を意味し、各単位は所望の治療学的効果を生み出すように計算された予め決
めた量の活性物質を、必要とされる医薬的な担体と共に含有する。本発明の新規
な用量単位形態についての詳細は、（ａ）活性物質に特有の性質および達成すべ
き特定の治療学的効果、および（ｂ）身体の健康が本明細書で詳細に開示するよ
うに損なわれている病態を有する生きている被験者における疾患の処置のために
活性物質などの混ぜ合わせに関する分野に固有な制限により決定され、それらに
直接に左右される。
【００５１】 主要な活性成分を、便利で有効な投与のために、本明細書で先に開示した用量
単位形態中で適当な医薬的に許容し得る担体と、有効な量で混ぜ合わせる。例え
ば、単位用量形態は主要な活性化合物を０.５μｇ〜約２０００ｍｇの範囲の量
で含有する。比率で表わすと、活性化合物は通常、約０.５μｇ〜約２０００ｍ
ｇ／担体ｍＬで存在する。補助的な活性成分を含有する組成物の場合には、用量
は該成分の投与の通常の用量および様式に照らして決定する。
単位形態中で適当な医薬的に許容し得る担体と、有効な量で混ぜ合わせる。例え
ば、単位用量形態は主要な活性化合物を０.５μｇ〜約２０００ｍｇの範囲の量
で含有する。比率で表わすと、活性化合物は通常、約０.５μｇ〜約２０００ｍ
ｇ／担体ｍＬで存在する。補助的な活性成分を含有する組成物の場合には、用量
は該成分の投与の通常の用量および様式に照らして決定する。
【００５２】 本発明の更に別の態様は哺乳動物におけるＨＩＶに対する免疫反応を誘起し、
増大しまたはそうでなければ刺激する方法を提供するものであって、該方法はそ
れら哺乳動物に、ワクチンの有効な量を１つ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫反応
を誘起し、増大しまたはそうでなければ刺激するのに十分な時間と条件下で投与
することを含む。
増大しまたはそうでなければ刺激する方法を提供するものであって、該方法はそ
れら哺乳動物に、ワクチンの有効な量を１つ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫反応
を誘起し、増大しまたはそうでなければ刺激するのに十分な時間と条件下で投与
することを含む。
【００５３】 該ＨＩＶはＨＩＶ−１が好ましい。
【００５４】 本発明の更に別の態様は哺乳動物におけるＨＩＶに対する免疫反応を誘起し、
増大しまたはそうでなければ刺激する方法を提供するものであって、該方法はそ
れら哺乳動物に、本明細書で先に定義した組換えウイルス構築物の有効な量を、
１つ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫反応を誘起し、増大しまたはそうでなければ
刺激するのに十分な時間と条件下で投与することを含む。
増大しまたはそうでなければ刺激する方法を提供するものであって、該方法はそ
れら哺乳動物に、本明細書で先に定義した組換えウイルス構築物の有効な量を、
１つ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫反応を誘起し、増大しまたはそうでなければ
刺激するのに十分な時間と条件下で投与することを含む。
【００５５】 該ＨＩＶはＨＩＶ−１が好ましい。
【００５６】 本発明のなお別の態様は哺乳動物の処置方法を提供するものであって、該方法
はそれら哺乳動物に、本明細書で先に定義したワクチンの有効な量を、１つ以上
のＨＩＶ抗原に対する免疫反応を誘起し、増大しまたはそうでなければ刺激する
のに十分な時間と条件下で投与することを含む。
はそれら哺乳動物に、本明細書で先に定義したワクチンの有効な量を、１つ以上
のＨＩＶ抗原に対する免疫反応を誘起し、増大しまたはそうでなければ刺激する
のに十分な時間と条件下で投与することを含む。
【００５７】 該ＨＩＶ抗原はＨＩＶ−１抗原が好ましい。
【００５８】 本発明のなお別の態様は哺乳動物の処置方法を提供するものであって、該方法
はそれら哺乳動物に、本明細書で先に定義した組み換えウイルス構築物の有効な
量を、１つ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫反応を誘起し、増大しまたはそうでな
ければ刺激するのに十分な時間と条件下で投与することを含む。
はそれら哺乳動物に、本明細書で先に定義した組み換えウイルス構築物の有効な
量を、１つ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫反応を誘起し、増大しまたはそうでな
ければ刺激するのに十分な時間と条件下で投与することを含む。
【００５９】 該ＨＩＶ抗原はＨＩＶ−１抗原が好ましい。
【００６０】 「哺乳動物」とは、霊長類（例えば、ヒト、サル）、家畜動物（例えば、ヒツ
ジ、ウシ、ウマ、ロバ、ヤギ、ブタ）、実験室試験用動物（例えば、ラット、モ
ルモット、ウサギ、ハムスター）、仲間的動物（例えば、イヌ、ネコ）および捕
獲された野生動物（例えば、カンガルー、シカ、キツネ）を含む全ての動物を含
むと理解すべきである。
ジ、ウシ、ウマ、ロバ、ヤギ、ブタ）、実験室試験用動物（例えば、ラット、モ
ルモット、ウサギ、ハムスター）、仲間的動物（例えば、イヌ、ネコ）および捕
獲された野生動物（例えば、カンガルー、シカ、キツネ）を含む全ての動物を含
むと理解すべきである。
【００６１】 本発明の方法は、ＨＩＶ感染およびＡＩＤＳの治療および／または予防におい
て有用である。例えば、本発明のワクチンをＨＩＶに感染していることが分かっ
ている被験者に投与し、次いでＨＩＶに対する免疫反応を誘起して、その結果Ａ
ＩＤＳの発症を防止することができる。別法として、本発明の方法は血清ウイル
ス負荷を減少し、ＡＩＤＳの症状を軽減し、またはＨＩＶ感染の危険があると考
えられる哺乳動物の免疫を誘起するのに使用することができる。
て有用である。例えば、本発明のワクチンをＨＩＶに感染していることが分かっ
ている被験者に投与し、次いでＨＩＶに対する免疫反応を誘起して、その結果Ａ
ＩＤＳの発症を防止することができる。別法として、本発明の方法は血清ウイル
ス負荷を減少し、ＡＩＤＳの症状を軽減し、またはＨＩＶ感染の危険があると考
えられる哺乳動物の免疫を誘起するのに使用することができる。
【００６２】 本発明の方法は、特にＨＩＶ感染の早期ではウイルス保有宿主の確立を防止す
るのに、またはＨＩＶ感染の供給源への曝露後の期間に特に有用となり得る。
るのに、またはＨＩＶ感染の供給源への曝露後の期間に特に有用となり得る。
【００６３】 本発明のなお別の態様は哺乳動物のＨＩＶ感染またはＡＩＤＳの治療方法およ
び／または予防方法を提供するものであって、該方法は本明細書で先に定義した
ワクチンの有効な量を、１つ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫反応を誘起し、増大
しまたはそうでなければ刺激するのに十分な時間と条件下で投与することを含む
。
び／または予防方法を提供するものであって、該方法は本明細書で先に定義した
ワクチンの有効な量を、１つ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫反応を誘起し、増大
しまたはそうでなければ刺激するのに十分な時間と条件下で投与することを含む
。
【００６４】 該ＨＩＶ抗原はＨＩＶ−１抗原が好ましい。
【００６５】 本発明の更になお別の態様は、哺乳動物のＨＩＶ感染またはＡＩＤＳの治療方
法および／または予防方法を提供するものであって、該方法は本明細書で先に定
義した組み換えウイルス構築物の有効な量を、１つ以上のＨＩＶ抗原に対する免
疫反応を誘起し、増大しまたはそうでなければ刺激するのに十分な時間と条件下
で投与することを含む。
法および／または予防方法を提供するものであって、該方法は本明細書で先に定
義した組み換えウイルス構築物の有効な量を、１つ以上のＨＩＶ抗原に対する免
疫反応を誘起し、増大しまたはそうでなければ刺激するのに十分な時間と条件下
で投与することを含む。
【００６６】 該ＨＩＶ抗原はＨＩＶ−１抗原が好ましい。
【００６７】 「有効な量（有効量）」とは、所望の免疫反応を得るのに、予防するのに、発
症を遅らせたりもしくは進行を阻害するのに、または処置する特定の病気の発症
もしくは進行を全く停止するのに少なくとも部分的に必要な量を意味する。この
量は、処置する個体の健康状態および身体状態、処置する個体の分類群、個体が
有する抗体を合成する免疫系の能力、所望する保護の程度、ワクチンの製造化、
医療状況の評価およびその他の関連因子に応じて変わる。それらの量はかなり広
い範囲に及び、その量は決まりきった治験で決定することができるであろうと予
想される。
症を遅らせたりもしくは進行を阻害するのに、または処置する特定の病気の発症
もしくは進行を全く停止するのに少なくとも部分的に必要な量を意味する。この
量は、処置する個体の健康状態および身体状態、処置する個体の分類群、個体が
有する抗体を合成する免疫系の能力、所望する保護の程度、ワクチンの製造化、
医療状況の評価およびその他の関連因子に応じて変わる。それらの量はかなり広
い範囲に及び、その量は決まりきった治験で決定することができるであろうと予
想される。
【００６８】 本明細書で「治療（処置）」および「予防」とは、最も広義に解釈すべきであ
る。用語「治療」とは哺乳動物が全快するまで治療することを必ずしも意味する
ものではない。同様に、用度「予防」とは、被験者が最後まで病気にかからない
であろうことを必ずしも意味するものではない。従って、治療および予防とは、
特定の病気の症状の緩和、または特定の病気が進展する危険の防止もしくはそう
でなければ低下を含む。用語「予防」は、特定の病気の発症の激しさを減少させ
るものと解釈することができる。「治療」もまた、存在する病気の激しさまたは
急性の発作の回数を減少し得る。
る。用語「治療」とは哺乳動物が全快するまで治療することを必ずしも意味する
ものではない。同様に、用度「予防」とは、被験者が最後まで病気にかからない
であろうことを必ずしも意味するものではない。従って、治療および予防とは、
特定の病気の症状の緩和、または特定の病気が進展する危険の防止もしくはそう
でなければ低下を含む。用語「予防」は、特定の病気の発症の激しさを減少させ
るものと解釈することができる。「治療」もまた、存在する病気の激しさまたは
急性の発作の回数を減少し得る。
【００６９】 この方法に関連して、本発明のワクチンは、公知の抗ウイルス化合物または分
子と共に投与することができる。それらの化合物または分子としては、例えば逆
転写酵素インヒビター（例えば、ジドブジンまたは３ＴＣ）またはプロテアーゼ
インヒビター（例えば、インディナビル（Indinavir））を含むが、これらに限
定されない。「共に投与する」とは、同一の製剤でまたは２つの異なる製剤を同
一もしくは異なる経路によって同時に投与すること、または同一もしくは異なる
経路によって順次投与することを意味する。「順次」投与とは、ワクチンの投与
および公知の抗ウイルス化合物もしくは分子の投与との間の時間（秒、分、時間
または日）差を意味する。ワクチンおよび公知の抗ウイルス化合物もしくは分子
をいずれの順序でも投与することができる。
子と共に投与することができる。それらの化合物または分子としては、例えば逆
転写酵素インヒビター（例えば、ジドブジンまたは３ＴＣ）またはプロテアーゼ
インヒビター（例えば、インディナビル（Indinavir））を含むが、これらに限
定されない。「共に投与する」とは、同一の製剤でまたは２つの異なる製剤を同
一もしくは異なる経路によって同時に投与すること、または同一もしくは異なる
経路によって順次投与することを意味する。「順次」投与とは、ワクチンの投与
および公知の抗ウイルス化合物もしくは分子の投与との間の時間（秒、分、時間
または日）差を意味する。ワクチンおよび公知の抗ウイルス化合物もしくは分子
をいずれの順序でも投与することができる。
【００７０】 投与経路としては、例えば静脈内、腹膜内、皮下、頭蓋内、皮内、筋肉内、眼
球内、鞘内、大脳内、鼻腔内、静脈内注射、点滴および移植を含むが、これらに
限定されない。筋肉内経路が特に好ましい。
球内、鞘内、大脳内、鼻腔内、静脈内注射、点滴および移植を含むが、これらに
限定されない。筋肉内経路が特に好ましい。
【００７１】 本発明は更に、ＨＩＶ感染の治療および／または予防のための薬物の製造にお
ける、被験用組換えウイルス構築物の使用にまで及ぶ。
ける、被験用組換えウイルス構築物の使用にまで及ぶ。
【００７２】 該ＨＩＶ感染は、ＨＩＶ−１感染が好ましい。
【００７３】 本発明のなお別の態様は、哺乳動物におけるＨＩＶに対する免疫反応を誘起し
、増大しまたはそうでなければ刺激するのに有用な薬剤を提供するものであって
、該薬剤は本明細書で先に定義した組換えウイルス構築物を含む。
、増大しまたはそうでなければ刺激するのに有用な薬剤を提供するものであって
、該薬剤は本明細書で先に定義した組換えウイルス構築物を含む。
【００７４】 本発明の更なる特徴は、以下の限定されない実施例でより十分に記載する。し
かしながら、それら詳細な記載は単に本発明を例示する目的で含むものと理解す
べきである。
かしながら、それら詳細な記載は単に本発明を例示する目的で含むものと理解す
べきである。
【００７５】 実施例１ 動物 マカク(M.nemestrina、２４〜３２ヶ月齢)にＳＲＶ感染はなく、処置する前に
ケタミン(１０ｍg／ｋgＩＭ)で麻酔した。この実験は、制度化された動物実験・
倫理委員会(the institutional Animal Experimentation and Ethics Committee
s)によって承認された。
ケタミン(１０ｍg／ｋgＩＭ)で麻酔した。この実験は、制度化された動物実験・
倫理委員会(the institutional Animal Experimentation and Ethics Committee
s)によって承認された。
【００７６】 試験した７頭の動物は以前に記載されている［９、１０］。４頭(Ｍ２、Ｍ３
、Ｍ４、Ｍ５)を対照とし、この実験の期間中はワクチン投与を行なわなかった
。これら４頭の動物(Ｍ２〜５)には、ＤＮＡとＦＰＶ ＨＩＶ−１ワクチン(サイ
トカインを含まない)を実験の１１〜１９ヶ月前に投与しておき、この実験の９
ヶ月前にＨＩＶ−１投与に抵抗させた。３頭の動物(Ｍ７、Ｍ９、Ｍ１０)にはＨ
ＩＶ−１ワクチン投与は前もって行なわず、この実験の９ヶ月前にＨＩＶ−１Ｌ ＡＩ を静脈内投与することによりＨＩＶ−１に感染させた。これら動物のうちの
２頭(Ｍ９、Ｍ１０)には、gag／polとヒトＩＦＮγの両方をコードする新規ＦＰ
Ｖを投与し、１頭（Ｍ７)にはgag／polのみをコードするＦＰＶワクチンを投与
した。各ＦＰＶワクチンは、３ヶ月の間隔をおいて、ＨＩＶ−１感染後９ヶ月目
と１２ヶ月目に、ＩＭ投与により２回、０．３ｍＬ中ＰＦＵ１０８で前大腿部へ
投与した。
、Ｍ４、Ｍ５)を対照とし、この実験の期間中はワクチン投与を行なわなかった
。これら４頭の動物(Ｍ２〜５)には、ＤＮＡとＦＰＶ ＨＩＶ−１ワクチン(サイ
トカインを含まない)を実験の１１〜１９ヶ月前に投与しておき、この実験の９
ヶ月前にＨＩＶ−１投与に抵抗させた。３頭の動物(Ｍ７、Ｍ９、Ｍ１０)にはＨ
ＩＶ−１ワクチン投与は前もって行なわず、この実験の９ヶ月前にＨＩＶ−１Ｌ ＡＩ を静脈内投与することによりＨＩＶ−１に感染させた。これら動物のうちの
２頭(Ｍ９、Ｍ１０)には、gag／polとヒトＩＦＮγの両方をコードする新規ＦＰ
Ｖを投与し、１頭（Ｍ７)にはgag／polのみをコードするＦＰＶワクチンを投与
した。各ＦＰＶワクチンは、３ヶ月の間隔をおいて、ＨＩＶ−１感染後９ヶ月目
と１２ヶ月目に、ＩＭ投与により２回、０．３ｍＬ中ＰＦＵ１０８で前大腿部へ
投与した。
【００７７】 すべてのマカクは、ＨＩＶ−１ワクチン接種前に、予め破傷風トキソイド(CSL
, Parkville, Australia)でＩＭ投与により３回ワクチン接種した。ワクチン接
種後、各動物を、前に記載されたように［１１］、注射部位の腫脹または発赤に
ついて、および多様な通常のマカクの行動(個々のおよび仲間同士の戯れ、略奪
、取り替え(replacement)、マウンティングおよび毛繕い行動)を計測することに
より活性について調べた。ワクチン接種の１週間前における平均の基底の活性と
比較したとき、総活性の２５％の減少を有意であるとみなした。１日の体温の記
録は、ハンドヘルド電子体温計(Braun Thermoscan)を用い、この温度計を舌へ１
秒以上あてがうよう動物を訓練することによって測定した。この体温の測定方法
は、安静時のマカクに対して直腸体温計を用いて２２回連続して得られた直腸温
よりも０〜０.８℃(平均０.３℃)低いことが分かった。
, Parkville, Australia)でＩＭ投与により３回ワクチン接種した。ワクチン接
種後、各動物を、前に記載されたように［１１］、注射部位の腫脹または発赤に
ついて、および多様な通常のマカクの行動(個々のおよび仲間同士の戯れ、略奪
、取り替え(replacement)、マウンティングおよび毛繕い行動)を計測することに
より活性について調べた。ワクチン接種の１週間前における平均の基底の活性と
比較したとき、総活性の２５％の減少を有意であるとみなした。１日の体温の記
録は、ハンドヘルド電子体温計(Braun Thermoscan)を用い、この温度計を舌へ１
秒以上あてがうよう動物を訓練することによって測定した。この体温の測定方法
は、安静時のマカクに対して直腸体温計を用いて２２回連続して得られた直腸温
よりも０〜０.８℃(平均０.３℃)低いことが分かった。
【００７８】 実施例２ ワクチン ヒトＩＦＮγ遺伝子を有するまたは有しないＨＩＶ−１gag／pol遺伝子は、Ｆ
ＰＶゲノムのＦＰＶチミジンキナーゼ(ＴＫ)領域と３'オープンリーディングフ
レーム(ＯＲＦ)の間に、E. coli lacZおよびgptマーカー遺伝子とともに挿入し
た。図１および図２参照。
ＰＶゲノムのＦＰＶチミジンキナーゼ(ＴＫ)領域と３'オープンリーディングフ
レーム(ＯＲＦ)の間に、E. coli lacZおよびgptマーカー遺伝子とともに挿入し
た。図１および図２参照。
【００７９】プラスミド構築物 Ａ. ＦＰＶ-gag／pol-ＩＦＮγの構築のためのプラスミド これらプラスミドの構造を図１に示す。 １. ＨＩＶ−１のgag／pol遺伝子、ARV-2／SF2単離物を、sacIおよびNdeIエン
ドヌクレアーゼを用いてpUC19.ARV(Chiron Corporation, Emeryville, CA)から
得た。この断片(ヌクレオチド６８４〜５１３２に対応、Genbank Accession No.
K02007)を、Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼで平滑末端とし、HincIIで線状化したpBC
B07(12)ヘ、ワクシニアＰ７.５プロモーターの制御下に挿入した。このプラスミ
ドをpBCB07.ARVと命名した。
ドヌクレアーゼを用いてpUC19.ARV(Chiron Corporation, Emeryville, CA)から
得た。この断片(ヌクレオチド６８４〜５１３２に対応、Genbank Accession No.
K02007)を、Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼで平滑末端とし、HincIIで線状化したpBC
B07(12)ヘ、ワクシニアＰ７.５プロモーターの制御下に挿入した。このプラスミ
ドをpBCB07.ARVと命名した。
【００８０】 ２. ヒトＩＦＮγ遺伝子をコードする配列は、プラスミドpUC9-2テンプレート
よりＰＣＲによって得た。pUC9-2は、ヒトＩＦＮγｃＤＮＡの８４４塩基対のSa
u３Ａフラグメントを含んでいる（１３）。センスＰＣＲプライマーは、５'-gct
taattctctcggｇａｔｃgatg(＜４００＞１)とした。このプライマーは、ＩＦＮγ
ｃＤＮＡ(Genbank Accession No. X13274)のヌクレオチド８９〜１１１の範囲に
及び、Sau３Ａ部位(太字（訳者注：本翻訳文においては全角で示す）)を作製す
るために２つのミスマッチが導入されている。ＩＦＮγｃＤＮＡ開始コドンには
下線を引いている。アンチセンスプライマーは５'-attcｇｇatccattacaaaaaagtt
gc(＜４００＞２)とした。このプライマーは、この遺伝子のヌクレオチド７５１
〜７２６(アンチセンス鎖、ヌクレオチド６０７に位置する終止コドンの下流)の
範囲に及び、BamHI／SauA部位(太字（訳者注：本翻訳文においては全角で示す）
)を作製するために４つのミスマッチと、センス鎖においてTTTTTNT転写ターミネ
ーター(下線)を作製するために１つのミスマッチが導入されている。
よりＰＣＲによって得た。pUC9-2は、ヒトＩＦＮγｃＤＮＡの８４４塩基対のSa
u３Ａフラグメントを含んでいる（１３）。センスＰＣＲプライマーは、５'-gct
taattctctcggｇａｔｃgatg(＜４００＞１)とした。このプライマーは、ＩＦＮγ
ｃＤＮＡ(Genbank Accession No. X13274)のヌクレオチド８９〜１１１の範囲に
及び、Sau３Ａ部位(太字（訳者注：本翻訳文においては全角で示す）)を作製す
るために２つのミスマッチが導入されている。ＩＦＮγｃＤＮＡ開始コドンには
下線を引いている。アンチセンスプライマーは５'-attcｇｇatccattacaaaaaagtt
gc(＜４００＞２)とした。このプライマーは、この遺伝子のヌクレオチド７５１
〜７２６(アンチセンス鎖、ヌクレオチド６０７に位置する終止コドンの下流)の
範囲に及び、BamHI／SauA部位(太字（訳者注：本翻訳文においては全角で示す）
)を作製するために４つのミスマッチと、センス鎖においてTTTTTNT転写ターミネ
ーター(下線)を作製するために１つのミスマッチが導入されている。
【００８１】 ＰＣＲ産物をSau３Ａで消化し、pAF09（１４）のBamHI部位へクローニングし
た。これにより、ＦＰＶ Ｐ．Ｅ／Ｌ二方向性プロモーターの制御下にヒトＩＦ
Ｎγ遺伝子が配置され、この遺伝子の開始コドンをＰ．Ｅ／Ｌ開始コドンについ
てインフレームで有する。このプラスミドをpDB42aと命名した。このプラスミド
はさらに、E. coli lacZおよびgptマーカー遺伝子をそれぞれＰ．Ｅ／Ｌおよび
ワクシニアＰ.７.５プロモーターの制御下に含み、組換えを容易にする鶏痘ＴＫ
遺伝子と３'ＯＲＦ領域を含んでいる。
た。これにより、ＦＰＶ Ｐ．Ｅ／Ｌ二方向性プロモーターの制御下にヒトＩＦ
Ｎγ遺伝子が配置され、この遺伝子の開始コドンをＰ．Ｅ／Ｌ開始コドンについ
てインフレームで有する。このプラスミドをpDB42aと命名した。このプラスミド
はさらに、E. coli lacZおよびgptマーカー遺伝子をそれぞれＰ．Ｅ／Ｌおよび
ワクシニアＰ.７.５プロモーターの制御下に含み、組換えを容易にする鶏痘ＴＫ
遺伝子と３'ＯＲＦ領域を含んでいる。
【００８２】 ３. gag／pol遺伝子およびＰ７.５プロモーターは、EcoRI消化によりpBC07.ARV
から取り出し、Ｔ４ポリメラーゼで平滑化し、SmaI線状化pDB42aへクローニング
した。このプラスミドpDB42a.gag／polは、ＦＰＶ-gag／pol-hＩＦＮγの構築に
使用した。
から取り出し、Ｔ４ポリメラーゼで平滑化し、SmaI線状化pDB42aへクローニング
した。このプラスミドpDB42a.gag／polは、ＦＰＶ-gag／pol-hＩＦＮγの構築に
使用した。
【００８３】Ｂ. ＦＰＶ-gag／polの構築のためのプラスミド これらのプラスミドの構造を図２に示す。 １. ＨＩＶ−１のgag／pol遺伝子は、テンプレートとしてpUC19.ARVを用いて得
た(上記１を参照)。センスＰＣＲプライマーは、５'-taattａｔｃｇａｔaataaat g ggtgcgagagcg(＜４００＞３)とした。このプライマーは、Ｐ．Ｅ／Ｌプロモー
ター由来の配列とＨＩＶ−１gag／pol遺伝子(Genbank Accession No. K02007)の
ヌクレオチド７９１〜８０５を含んでいる。gag遺伝子産物の開始コドンには下
線を引き、太字（訳者注：本翻訳文においては全角で示す）はClaI部位を示す。
アンチセンスプライマーは、５'-aaaｇｇａｔｃctttagctttcttaaaaaaaaacatatgg
(＜４００＞４)とした。このプライマーは、遺伝子のヌクレオチド５１６４〜５
１２８(センス鎖上、ヌクレオチド５１０１に位置するpol終止コドンの下流)の
範囲に及ぶ。BamHI部位(太字（訳者注：本翻訳文においては全角で示す）)を作
製するために２つのミスマッチと、センス鎖において２つの重複したTTTTTNT転
写ターミネーター(下線)を作製するために４つのミスマッチが導入されている。
た(上記１を参照)。センスＰＣＲプライマーは、５'-taattａｔｃｇａｔaataaat g ggtgcgagagcg(＜４００＞３)とした。このプライマーは、Ｐ．Ｅ／Ｌプロモー
ター由来の配列とＨＩＶ−１gag／pol遺伝子(Genbank Accession No. K02007)の
ヌクレオチド７９１〜８０５を含んでいる。gag遺伝子産物の開始コドンには下
線を引き、太字（訳者注：本翻訳文においては全角で示す）はClaI部位を示す。
アンチセンスプライマーは、５'-aaaｇｇａｔｃctttagctttcttaaaaaaaaacatatgg
(＜４００＞４)とした。このプライマーは、遺伝子のヌクレオチド５１６４〜５
１２８(センス鎖上、ヌクレオチド５１０１に位置するpol終止コドンの下流)の
範囲に及ぶ。BamHI部位(太字（訳者注：本翻訳文においては全角で示す）)を作
製するために２つのミスマッチと、センス鎖において２つの重複したTTTTTNT転
写ターミネーター(下線)を作製するために４つのミスマッチが導入されている。
【００８４】 ＰＣＲ産物をClaIとBamHIで消化し、pAF04(D. Boyle, personal communicatio
n)のClaIとBamHI部位の間にクローニングした。これにより、gag／pol遺伝子は
、gag遺伝子の天然の開始コドンが利用されるように整列されたＦＰＶ Ｐ．Ｅ／
Ｌ二方向性プロモーターの制御下に配置される。これは、gag遺伝子産物の発現
とミリストイル化に必須である。このプラスミドをpDB43と命名した。このプラ
スミドはさらに、ワクシニアＰ７.５プロモーターの制御下にE. coli gptマーカ
ー遺伝子、および組換えを容易にするためにＦＰＶ ＴＫ遺伝子と３'ＯＲＦ領域
を含んでいる。
n)のClaIとBamHI部位の間にクローニングした。これにより、gag／pol遺伝子は
、gag遺伝子の天然の開始コドンが利用されるように整列されたＦＰＶ Ｐ．Ｅ／
Ｌ二方向性プロモーターの制御下に配置される。これは、gag遺伝子産物の発現
とミリストイル化に必須である。このプラスミドをpDB43と命名した。このプラ
スミドはさらに、ワクシニアＰ７.５プロモーターの制御下にE. coli gptマーカ
ー遺伝子、および組換えを容易にするためにＦＰＶ ＴＫ遺伝子と３'ＯＲＦ領域
を含んでいる。
【００８５】ウイルス構築 組換えウイルスは、標準的な方法（１５）により、ＦＰＶ-Ｍ３感染したニワ
トリ雛細胞をpDB42agag／polまたはpDB43でトランスフェクトすることによって
構築した。プラスミドのｔ遺伝子および３'ＯＲＦ領域の両方と野生型ウイルス
との間の相同的組換えにより、ＨＩＶgag／polおよびgpt遺伝子(ｈＩＦＮγおよ
びlacZ遺伝子を有するおよび有しない)のウイルスへの挿入が起こる。gpt遺伝子
はミコフェノール酸に対する耐性を付与し、組換えウイルスは増幅され、ミコフ
ェノール酸存在下での数ラウンドのプラ-ク精製の後に選択された。挿入部位に
連結した配列に相補的なプライマーを用いてＰＣＲを用い、野生型の親ウイルス
が存在しないことを確認した。
トリ雛細胞をpDB42agag／polまたはpDB43でトランスフェクトすることによって
構築した。プラスミドのｔ遺伝子および３'ＯＲＦ領域の両方と野生型ウイルス
との間の相同的組換えにより、ＨＩＶgag／polおよびgpt遺伝子(ｈＩＦＮγおよ
びlacZ遺伝子を有するおよび有しない)のウイルスへの挿入が起こる。gpt遺伝子
はミコフェノール酸に対する耐性を付与し、組換えウイルスは増幅され、ミコフ
ェノール酸存在下での数ラウンドのプラ-ク精製の後に選択された。挿入部位に
連結した配列に相補的なプライマーを用いてＰＣＲを用い、野生型の親ウイルス
が存在しないことを確認した。
【００８６】 実施例３ 血液細胞計数および血漿生化学 ワクチンによって発現したＩＦＮγが血漿生化学または血液細胞数に異常きた
すかどうかを調べるため、一組の生化学的および細胞の解析を、マカクから採取
した一連の血液試料に対して行なった。マルチパラメーター生化学的解析および
血球計測は自動化された機械で行ない、血球数は手動で確認した。白血球数と判
別は手動計測によって確認した。ワクチン投与の前後で得たＰＢＭＣを単球およ
びＴ細胞マーカーについて染色し、以前［９］に記載されたようにＣＤ２（Leu5
-PE, Becton Dickinson, San Jose, CA）、ＣＤ４（OKT4-FITC, Ortho Diagnost
ics, Raritan, NJ）、ＣＤ８（Leu2a-FITC, Becton Dickinson）およびＣＤ１４
に対する抗体を用いてフローサイトメトリーによって解析した。
すかどうかを調べるため、一組の生化学的および細胞の解析を、マカクから採取
した一連の血液試料に対して行なった。マルチパラメーター生化学的解析および
血球計測は自動化された機械で行ない、血球数は手動で確認した。白血球数と判
別は手動計測によって確認した。ワクチン投与の前後で得たＰＢＭＣを単球およ
びＴ細胞マーカーについて染色し、以前［９］に記載されたようにＣＤ２（Leu5
-PE, Becton Dickinson, San Jose, CA）、ＣＤ４（OKT4-FITC, Ortho Diagnost
ics, Raritan, NJ）、ＣＤ８（Leu2a-FITC, Becton Dickinson）およびＣＤ１４
に対する抗体を用いてフローサイトメトリーによって解析した。
【００８７】 実施例４ ＨＩＶ−１抗体およびＴｈ応答 ２００μgの標準混合ＨＩＶ−１タンパク質ストック［９］を用い、粒子の凝
集（Serodia-HIV, Fujirebio, Japan)およびウェスタンブロッティングによって
、血漿をＨＩＶ−１抗体について調べた。リンパ球増殖応答は、記載されたよう
に［９］、標準的な３Ｈ−チミジン取り込みアッセイによって調べた。ウェルに
１０５細胞／ウェルで入れたマカクＰＢＭＣを３つ組にして、１０％自己由来熱
不活化血清を含む培地中、１０μg／ｍLの組換えＨＩＶ−１ＳＰ２ｇｐ１２０ま
たはＨＩＶ−１ＳＰ２ｐ２４(Chiron)で６日間刺激し、β-計測の前に３Ｈ−チ
ミジンでパルスした。ＰＢＭＣはさらに、培地のみでインキュベーションするか
または１０μg／ｍLの培養細胞由来の対照抗体を添加した培地でインキュベーシ
ョンし、刺激されない対照の応答を調べ、明確な有糸分裂のおよび抗原の対照応
答としてＰＨＡ(１０μg／ｍL)または破傷風トキソイド(０.０１Lf／ｍL)で刺激
した。増殖を刺激指数(ＳＩ、抗原により刺激された細胞の平均の３Ｈ−チミジ
ン取り込み／抗原刺激なしの平均の取り込み)として表す。選択されたリンパ球
増殖培養細胞から得られた上清を、ＥＩＡ(Genzyme, Cambridge, MA)により、Ｉ
Ｌ−４およびＩＦＮγの存在について分析した。
集（Serodia-HIV, Fujirebio, Japan)およびウェスタンブロッティングによって
、血漿をＨＩＶ−１抗体について調べた。リンパ球増殖応答は、記載されたよう
に［９］、標準的な３Ｈ−チミジン取り込みアッセイによって調べた。ウェルに
１０５細胞／ウェルで入れたマカクＰＢＭＣを３つ組にして、１０％自己由来熱
不活化血清を含む培地中、１０μg／ｍLの組換えＨＩＶ−１ＳＰ２ｇｐ１２０ま
たはＨＩＶ−１ＳＰ２ｐ２４(Chiron)で６日間刺激し、β-計測の前に３Ｈ−チ
ミジンでパルスした。ＰＢＭＣはさらに、培地のみでインキュベーションするか
または１０μg／ｍLの培養細胞由来の対照抗体を添加した培地でインキュベーシ
ョンし、刺激されない対照の応答を調べ、明確な有糸分裂のおよび抗原の対照応
答としてＰＨＡ(１０μg／ｍL)または破傷風トキソイド(０.０１Lf／ｍL)で刺激
した。増殖を刺激指数(ＳＩ、抗原により刺激された細胞の平均の３Ｈ−チミジ
ン取り込み／抗原刺激なしの平均の取り込み)として表す。選択されたリンパ球
増殖培養細胞から得られた上清を、ＥＩＡ(Genzyme, Cambridge, MA)により、Ｉ
Ｌ−４およびＩＦＮγの存在について分析した。
【００８８】 実施例５ 定量的なＨＩＶ特異的ＣＴＬ解析 マカクのマカクＰＢＭＣにおけるＨＩＶ−１EnvおよびGag／Pol抗原に対する
ＣＴＬ前駆体度数の解析を限界希釈法［９］により行なった。９６ウェルの丸底
プレートに１０５〜８.８×１０３細胞／ウェルの７連の１.５倍希釈でＰＢＭＣ
を２４回分プレートした。ＨＩＶ−１ＬＡＩEnv／Gag／Pol抗原を発現する組換
えワクシニアウイルスで感染させた１０４の自己由来ＰＢＭＣで各ウェルを刺激
し、１０Ｕ／ｍLのｒＩＬ−２(Hoffman-La Roche, Nutley, NJ)を３〜４日間毎
日加えた。１０〜１４日後、各ウェルの細胞を、野生型ワクシニアまたはＨＩＶ
−１ＬＡＩEnv抗原またはＨＩＶ−１ＬＡＩGag／Polを発現する組換えワクシニ
アで感染させた自己由来標的細胞に対する細胞溶解活性について分析した。細胞
溶解が標的からの平均の自律的放出を３標準偏差分越えれば、ウェルを陽性とみ
なした。ＣＴＬ度数および９５％信頼区間を、S Kalams, Harvard Medical Scho
ol［１６］により提供されたソフトウエアを用いて最大尤解析によって決定した
。標的細胞は、ＰＢＭＣをヒヒヘルパーウイルスであるH.papio［９］で感染さ
せることにより各マカクから確立された自己由来Ｂリンパ芽細胞腫細胞系(ＢＬ
ＣＬ)であった。ＢＬＣＬは、１頭の対照動物（Ｍ４）のＰＢＭＣでは形質転換
できず、１頭のワクチン投与された動物（Ｍ１０）に由来する長期間の培養細胞
においては維持できず、ＣＴＬのデータはそれらの動物からとることができなか
った、
ＣＴＬ前駆体度数の解析を限界希釈法［９］により行なった。９６ウェルの丸底
プレートに１０５〜８.８×１０３細胞／ウェルの７連の１.５倍希釈でＰＢＭＣ
を２４回分プレートした。ＨＩＶ−１ＬＡＩEnv／Gag／Pol抗原を発現する組換
えワクシニアウイルスで感染させた１０４の自己由来ＰＢＭＣで各ウェルを刺激
し、１０Ｕ／ｍLのｒＩＬ−２(Hoffman-La Roche, Nutley, NJ)を３〜４日間毎
日加えた。１０〜１４日後、各ウェルの細胞を、野生型ワクシニアまたはＨＩＶ
−１ＬＡＩEnv抗原またはＨＩＶ−１ＬＡＩGag／Polを発現する組換えワクシニ
アで感染させた自己由来標的細胞に対する細胞溶解活性について分析した。細胞
溶解が標的からの平均の自律的放出を３標準偏差分越えれば、ウェルを陽性とみ
なした。ＣＴＬ度数および９５％信頼区間を、S Kalams, Harvard Medical Scho
ol［１６］により提供されたソフトウエアを用いて最大尤解析によって決定した
。標的細胞は、ＰＢＭＣをヒヒヘルパーウイルスであるH.papio［９］で感染さ
せることにより各マカクから確立された自己由来Ｂリンパ芽細胞腫細胞系(ＢＬ
ＣＬ)であった。ＢＬＣＬは、１頭の対照動物（Ｍ４）のＰＢＭＣでは形質転換
できず、１頭のワクチン投与された動物（Ｍ１０）に由来する長期間の培養細胞
においては維持できず、ＣＴＬのデータはそれらの動物からとることができなか
った、
【００８９】 実施例６ HIV-1 DNAおよびウイルスレベルの分析 記載したPCR条件[9]を用いてPBMC試料から抽出したDNAからHIV-1 gagおよびHL
A-DQ DNAを増幅し、それぞれプライマーペアSK38/39およびGH26/27(Gibco-BRL)
を用いて定量した。105個のPBMCから得たDNAをDQバンド密度に従って8E5細胞DNA
(HIV-1 DNA 1コピー/細胞を含む)と比較して標準化し、分光光度計(Ultrospec 3
000, Pharmacia Biotech)で260nmの吸収を測定することにより確認した。106個
のマカークPBMCと106個のPHA刺激プールヒトPBMCおよび50U/ml IL-2を同時培養
することによりウイルス分離を行った。新鮮培地およびIL-2を１週間に２回培養
に加え、PHA刺激ヒトPBMCを１週間に１回、４週間加えた。HIV-1 p24 EIA (Abbo
tt Laborators, Abbott Park, IL)により培養上清中のHIV-1を定量した。
A-DQ DNAを増幅し、それぞれプライマーペアSK38/39およびGH26/27(Gibco-BRL)
を用いて定量した。105個のPBMCから得たDNAをDQバンド密度に従って8E5細胞DNA
(HIV-1 DNA 1コピー/細胞を含む)と比較して標準化し、分光光度計(Ultrospec 3
000, Pharmacia Biotech)で260nmの吸収を測定することにより確認した。106個
のマカークPBMCと106個のPHA刺激プールヒトPBMCおよび50U/ml IL-2を同時培養
することによりウイルス分離を行った。新鮮培地およびIL-2を１週間に２回培養
に加え、PHA刺激ヒトPBMCを１週間に１回、４週間加えた。HIV-1 p24 EIA (Abbo
tt Laborators, Abbott Park, IL)により培養上清中のHIV-1を定量した。
【００９０】 実施例 7 IFN-γ発現FPVの安全性 一般に、局所的に供給する、ウイルスベクターによりコードされたサイトカイ
ンは、全身的に投与するサイトカインより毒性が低い[8]。本発明者らは、FPVga
g/pol-IFN-γの反応原性（reactogenicity）を４マッチ非免疫コントロールおよ
びFPVgag/pol-IFN-γのみを投与したコントロール動物との比較により分析した
。あらゆる有意な副作用を検出するために高用量のFPVワクチンを投与した（108 FPU)。FPV免疫マカーク３頭すべてにおいてワクチネーション後の最初の２４時
間に活動性の44〜75％の低下がみられ、FPVgag/pol-IFN-γ免疫動物２頭のうち
１頭(M9)に24〜48時間の間に活動性の28%低下がみられたが、その後は全ての動
物が正常であった。FPVワクチネーション動物３頭すべてにおいてワクチネーシ
ョン後１〜２日に注射部位の腫脹が観察された。FPVワクチネーション後に発熱
はみられなかった(図3a)。すべての動物の体重増加は正常であった。ワクチネー
ション後、PBMC中のCD4+もしくはCD8+T細胞サブセット、または単球レベルは変
化しなかった (図3b)。さらに、FPVgag/polまたはFPVgag/pol-IFN-γワクチネー
ション後に、血漿電解質、血漿クレアチニンおよび尿素により評価した腎機能、
肝機能マーカー、ヘモグロビン、白血球数、または血小板数の有意な変化はみら
れなかった。
ンは、全身的に投与するサイトカインより毒性が低い[8]。本発明者らは、FPVga
g/pol-IFN-γの反応原性（reactogenicity）を４マッチ非免疫コントロールおよ
びFPVgag/pol-IFN-γのみを投与したコントロール動物との比較により分析した
。あらゆる有意な副作用を検出するために高用量のFPVワクチンを投与した（108 FPU)。FPV免疫マカーク３頭すべてにおいてワクチネーション後の最初の２４時
間に活動性の44〜75％の低下がみられ、FPVgag/pol-IFN-γ免疫動物２頭のうち
１頭(M9)に24〜48時間の間に活動性の28%低下がみられたが、その後は全ての動
物が正常であった。FPVワクチネーション動物３頭すべてにおいてワクチネーシ
ョン後１〜２日に注射部位の腫脹が観察された。FPVワクチネーション後に発熱
はみられなかった(図3a)。すべての動物の体重増加は正常であった。ワクチネー
ション後、PBMC中のCD4+もしくはCD8+T細胞サブセット、または単球レベルは変
化しなかった (図3b)。さらに、FPVgag/polまたはFPVgag/pol-IFN-γワクチネー
ション後に、血漿電解質、血漿クレアチニンおよび尿素により評価した腎機能、
肝機能マーカー、ヘモグロビン、白血球数、または血小板数の有意な変化はみら
れなかった。
【００９１】 実施例 8 T細胞免疫原性 FPVgag/pol-IFN-γによるワクチネーションがGag/pol特異的Th反応を増強する
か否かを検討するため、９カ月前にHIV-1感染させたマカークをFPVgag/pol-IFN-
γ(2頭、M9およびM10)またはFPVgag/pol(1頭、M7)で２回ワクチネーションした
。p24 Gagタンパク質に対するTh増殖反応は、初回FPVgag/po1-IFN-γワクチネー
ション後１〜２週間で4〜7倍増加し、３カ月後もベースラインレベルより高かっ
た(図4a)。２回目のFPVgag/pol-IFN-γワクチネーション後、p24-特異的Th反応
はさらにベースラインよりブーストされ（5〜30倍）、少なくともさらに２カ月
間維持された。2回のFPVgag/pol免疫を受けた動物のp24特異的Th反応は３倍増加
した。破傷風特異的Th反応はFPVワクチネーション後変化しなかった（時間によ
る変動<3倍)。コントロールマカーク４頭(M2、M3、M4、M5)のGagまたは破傷風抗
原に対するTh反応は４ヶ月の観察期間にわたり変化せず、変動<2倍であった(p24
に対する平均SIは3.2であり、破傷風トキソイドに対するそれは3.6であった)。
か否かを検討するため、９カ月前にHIV-1感染させたマカークをFPVgag/pol-IFN-
γ(2頭、M9およびM10)またはFPVgag/pol(1頭、M7)で２回ワクチネーションした
。p24 Gagタンパク質に対するTh増殖反応は、初回FPVgag/po1-IFN-γワクチネー
ション後１〜２週間で4〜7倍増加し、３カ月後もベースラインレベルより高かっ
た(図4a)。２回目のFPVgag/pol-IFN-γワクチネーション後、p24-特異的Th反応
はさらにベースラインよりブーストされ（5〜30倍）、少なくともさらに２カ月
間維持された。2回のFPVgag/pol免疫を受けた動物のp24特異的Th反応は３倍増加
した。破傷風特異的Th反応はFPVワクチネーション後変化しなかった（時間によ
る変動<3倍)。コントロールマカーク４頭(M2、M3、M4、M5)のGagまたは破傷風抗
原に対するTh反応は４ヶ月の観察期間にわたり変化せず、変動<2倍であった(p24
に対する平均SIは3.2であり、破傷風トキソイドに対するそれは3.6であった)。
【００９２】 本発明者らは、HIV-1感染動物のFPVgag/pol-IFN-γワクチネーションがGag特
異的Th反応の表現型の変化と関連するかどうかについても評価した。FPVgag/pol
およびFPVgag/pol-IFN-γの両方を投与した動物からのGag特異的Th反応によりIF
N-γの分泌増加が観察されたが、IL-4の分泌は増加しなかった（サイトカイン分
泌の変調度はFPVgag/pol-IFN-γ免疫動物でより大きかった)(図4b)。FPVワクチ
ネーション後、動物M7、M9、およびM10からの破傷風特異的Th表現型の変化はみ
られず、FPVワクチネーション動物３頭全てのFPVワクチネーション前およびワク
チネーション後２〜６週間のIL-4分泌はIFN-γより大きかった(4〜12倍）。
異的Th反応の表現型の変化と関連するかどうかについても評価した。FPVgag/pol
およびFPVgag/pol-IFN-γの両方を投与した動物からのGag特異的Th反応によりIF
N-γの分泌増加が観察されたが、IL-4の分泌は増加しなかった（サイトカイン分
泌の変調度はFPVgag/pol-IFN-γ免疫動物でより大きかった)(図4b)。FPVワクチ
ネーション後、動物M7、M9、およびM10からの破傷風特異的Th表現型の変化はみ
られず、FPVワクチネーション動物３頭全てのFPVワクチネーション前およびワク
チネーション後２〜６週間のIL-4分泌はIFN-γより大きかった(4〜12倍）。
【００９３】 実施例９ FPVgag/pol-IFN-γ免疫後のHIV特異的CTL活性 HIV-1複製に由来する抗原刺激の顕著な減少に逆らってCTL反応を維持する免疫
戦略に現在かなりの関心が向けられている[2、5]。HIV-1感染後最初の数カ月間
のHIV-1 DNAの減少と平行するマカークにおけるHIV-1特異的CTL反応、および「
潜伏」期におけるHIV-1特異的CTL反応は低い（＜10 HIV特異的CTL/106 PSMC)[9]
。限界希釈分析により、Gag/Pol(Envではなく)抗原に対するCTL前駆体は、１回
のFPVgag/pol-IFN-γワクチネーション後に＜5から15/106 PBMCに、また２回目
のFPVgag/pol-IFN-γワクチネーション後に44/106 PBMCに増加した(図3)。非ワ
クチネーションコントロール動物（M2、M3、M5）、もしくはIFN-γを含まないFP
Vgag/pol-IFN-γでワクチネーションしたコントロール動物(M7、図5)では、Gag/
PolまたはEnv特異的CTLの検出し得る増加はなかった（＜5/106 PBMC)。
戦略に現在かなりの関心が向けられている[2、5]。HIV-1感染後最初の数カ月間
のHIV-1 DNAの減少と平行するマカークにおけるHIV-1特異的CTL反応、および「
潜伏」期におけるHIV-1特異的CTL反応は低い（＜10 HIV特異的CTL/106 PSMC)[9]
。限界希釈分析により、Gag/Pol(Envではなく)抗原に対するCTL前駆体は、１回
のFPVgag/pol-IFN-γワクチネーション後に＜5から15/106 PBMCに、また２回目
のFPVgag/pol-IFN-γワクチネーション後に44/106 PBMCに増加した(図3)。非ワ
クチネーションコントロール動物（M2、M3、M5）、もしくはIFN-γを含まないFP
Vgag/pol-IFN-γでワクチネーションしたコントロール動物(M7、図5)では、Gag/
PolまたはEnv特異的CTLの検出し得る増加はなかった（＜5/106 PBMC)。
【００９４】 実施例10 ワクチネーション後のHIV-1レベル FPVgag/pol-IFN-γワクチネーションが予めHIV-1、HIV-1 DNA、および培養可
能なウイルスに感染したマカークのHIV-1ウイルスレベルを変化させるか否かの
検討をワクチネーションの前および後に試験した。env特異的プライマーを用い
ると、動物M7、M9、およびM10では、ワクチネーション前０、１、および４カ月
のHIV-1 DNAは＜10コピー/105 PBMCであり、初回FPVワクチネーション後１、２
、および４週目のHIV-1 DNAも＜10コピー/105 PBMCのままであり、HIV-1 DNAレ
ベルの検出し得る変化はみられなかった。ワクチネーションの前（0、-4週）も
しくは後（+1、+2、+4、+6週）のワクチネーションFPV動物３頭のいずれの同時
培養PBMCからもHIV-1は回収できなかった。血漿HIV-1 RNAレベルが100〜400コピ
ーの場合、用いた同時培養法ではHIV-1が常套的に回収され[(9)、(10)]、このこ
とはHIV-1血漿RNAの有意な上昇が起きなかったことを示唆している。
能なウイルスに感染したマカークのHIV-1ウイルスレベルを変化させるか否かの
検討をワクチネーションの前および後に試験した。env特異的プライマーを用い
ると、動物M7、M9、およびM10では、ワクチネーション前０、１、および４カ月
のHIV-1 DNAは＜10コピー/105 PBMCであり、初回FPVワクチネーション後１、２
、および４週目のHIV-1 DNAも＜10コピー/105 PBMCのままであり、HIV-1 DNAレ
ベルの検出し得る変化はみられなかった。ワクチネーションの前（0、-4週）も
しくは後（+1、+2、+4、+6週）のワクチネーションFPV動物３頭のいずれの同時
培養PBMCからもHIV-1は回収できなかった。血漿HIV-1 RNAレベルが100〜400コピ
ーの場合、用いた同時培養法ではHIV-1が常套的に回収され[(9)、(10)]、このこ
とはHIV-1血漿RNAの有意な上昇が起きなかったことを示唆している。
【００９５】 実施例１１ HIV-1抗体レベル Gag/Pol特異抗体も２回のFPVワクチネーション後に増加した(図6)。p24特異抗
体はワクチネーション動物３頭すべてで増加し、FPVgag/pol-IFN-γおよびFPVga
g/polワクチネーション動物間で差はみられなかった。gp120抗体反応の変化もみ
られなかった。 当業者は、本明細書に記載の発明について、具体的に記載した以外の変化およ
び修飾が可能であることを十分理解するであろう。本発明にはそのようなすべて
の変化および修飾が含まれると理解すべきである。本発明には、個々にかまとめ
て本明細書に示すかまたは暗示した全ての工程、特徴、組成物および化合物、な
らびに該工程もしくは特徴のあらゆる２またはそれ以上のあらゆる全ての組合せ
も含まれる。
体はワクチネーション動物３頭すべてで増加し、FPVgag/pol-IFN-γおよびFPVga
g/polワクチネーション動物間で差はみられなかった。gp120抗体反応の変化もみ
られなかった。 当業者は、本明細書に記載の発明について、具体的に記載した以外の変化およ
び修飾が可能であることを十分理解するであろう。本発明にはそのようなすべて
の変化および修飾が含まれると理解すべきである。本発明には、個々にかまとめ
て本明細書に示すかまたは暗示した全ての工程、特徴、組成物および化合物、な
らびに該工程もしくは特徴のあらゆる２またはそれ以上のあらゆる全ての組合せ
も含まれる。
【００９６】 参考文献
【表１】
【配列表】
【図１ａ】 ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγ構築の模式図。
【図１ｂ】 ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγ構築の模式図。
【図２ａ】 ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ構築の模式図。
【図２ｂ】 ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ構築の模式図。
【図３ａ】 ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγ免疫の安全性のグラフ表示。
カニクイザルのＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγワクチン後に有意の発熱は記録
されなかった。動物Ｍ９およびＭ１０（◆、
カニクイザルのＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγワクチン後に有意の発熱は記録
されなかった。動物Ｍ９およびＭ１０（◆、
【化１】 ）はＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγを１０８ＰＦＵ ＩＭ投与され、動物Ｍ７
（△）はＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌを投与され、動物Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４およびＭ５（
○）はワクチンを受けない対照であった。
（△）はＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌを投与され、動物Ｍ２、Ｍ３、Ｍ４およびＭ５（
○）はワクチンを受けない対照であった。
【図３ｂ】 ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγ免疫の安全性のグラフ表示。
カニクイザルのＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγワクチン後にＴ細胞または単球
数に変化は観察されなかった。ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγ（Ｍ９、Ｍ１０
）またはＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ（Ｍ７）でワクチンした動物からのＰＢＭＣを、
ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ１４＋単球について、ワクチン前（
△、ワクチン前の８ヶ月に６回、平均±ＳＤを示す）、ワクチンを施した日（○
）およびワクチン後（
カニクイザルのＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγワクチン後にＴ細胞または単球
数に変化は観察されなかった。ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγ（Ｍ９、Ｍ１０
）またはＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ（Ｍ７）でワクチンした動物からのＰＢＭＣを、
ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ１４＋単球について、ワクチン前（
△、ワクチン前の８ヶ月に６回、平均±ＳＤを示す）、ワクチンを施した日（○
）およびワクチン後（
【化２】 、ワクチン後４週間の間に毎週、平均±ＳＤを示す）に染色した。
【図４ａ】 カニクイザルのＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγワクチン後の
高められたｇａｇ特異的Ｔｈ１応答のグラフ表示。ｐ２４抗原に対するＴ細胞の
増殖性応答（proliferative response）を、ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγ（
動物Ｍ９、Ｍ１０、塗りつぶした棒および斜線の棒）またはＦＰＶｇａｇ／ｐｏ
ｌ（動物Ｍ７、白抜きの棒）でのカニクイザルの２回のワクチン（矢印）後に連
続して測定した。
高められたｇａｇ特異的Ｔｈ１応答のグラフ表示。ｐ２４抗原に対するＴ細胞の
増殖性応答（proliferative response）を、ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγ（
動物Ｍ９、Ｍ１０、塗りつぶした棒および斜線の棒）またはＦＰＶｇａｇ／ｐｏ
ｌ（動物Ｍ７、白抜きの棒）でのカニクイザルの２回のワクチン（矢印）後に連
続して測定した。
【図４ｂ】 カニクイザルのＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγワクチン後の
高められたｇａｇ特異的Ｔｈ１応答のグラフ表示。ＦＰＶワクチンの前および後
に得られた、組換えＨＩＶ−１ＳＦ２ｐ２４タンパク質刺激に応答したＰＢＭＣ
によるＩＦＮ−γおよびＩＬ−４の分泌。ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγワク
チンしたカニクイザル（Ｍ９およびＭ１０）およびＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ免疫し
た動物（Ｍ７）を示す。
高められたｇａｇ特異的Ｔｈ１応答のグラフ表示。ＦＰＶワクチンの前および後
に得られた、組換えＨＩＶ−１ＳＦ２ｐ２４タンパク質刺激に応答したＰＢＭＣ
によるＩＦＮ−γおよびＩＬ−４の分泌。ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγワク
チンしたカニクイザル（Ｍ９およびＭ１０）およびＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ免疫し
た動物（Ｍ７）を示す。
【図５】 ＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌ−ＩＦＮγワクチン後の高められたＧａｇ
／ｐｏｌ特異的ＣＴＬ応答のグラフ表示。Ｅｎｖ抗原およびＧａｇ／ｐｏｌ抗原
に対するＣＴＬ前駆体の定量をＦＰＶワクチン後に分析した。ＣＴＬの頻度を最
初のＦＰＶワクチンおよびブースターＦＰＶワクチン（矢印）後に評価した。ワ
クシニア抗原のみを発現する対照標的の認識は差し引いてある。
／ｐｏｌ特異的ＣＴＬ応答のグラフ表示。Ｅｎｖ抗原およびＧａｇ／ｐｏｌ抗原
に対するＣＴＬ前駆体の定量をＦＰＶワクチン後に分析した。ＣＴＬの頻度を最
初のＦＰＶワクチンおよびブースターＦＰＶワクチン（矢印）後に評価した。ワ
クシニア抗原のみを発現する対照標的の認識は差し引いてある。
【図６】 Ｇａｇ／ｐｏｌ特異的抗体がＦＰＶｇａｇ／ｐｏｌワクチン後に
高められることを示す写真表示。ＦＰＶワクチン（矢印）後の動物Ｍ７、Ｍ９お
よびＭ１０からの系列希釈血漿（１：１００希釈）のウエスタンブロッティング
。ストリップを第一のワクチンおよび第二のワクチンの前または後の週に標識す
る。陰性対照および陽性対照は、それぞれ未感染のヒトおよびＨＩＶ−１に感染
したヒトを表す。
高められることを示す写真表示。ＦＰＶワクチン（矢印）後の動物Ｍ７、Ｍ９お
よびＭ１０からの系列希釈血漿（１：１００希釈）のウエスタンブロッティング
。ストリップを第一のワクチンおよび第二のワクチンの前または後の週に標識す
る。陰性対照および陽性対照は、それぞれ未感染のヒトおよびＨＩＶ−１に感染
したヒトを表す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 31/18 ４Ｃ０８７ Ａ６１Ｐ 31/18 (Ｃ１２Ｎ 7/04 Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:92） //(Ｃ１２Ｎ 7/04 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｒ 1:92） Ａ６１Ｋ 37/66 Ｃ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 デイビッド・バーナード・ボイル オーストラリア3224ビクトリア州レオポル ド、メアリー・プレイス６番 (72)発明者 イアン・アリスター・ラムショー オーストラリア2611オーストラリアン・キ ャピタル・テリトリー、ダフィ、カララ・ クロース28番 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA14 BA31 CA02 DA02 EA02 4B065 AA90X AA93Y AA97Y AB01 BA02 CA45 4C084 AA13 DA14 DA24 NA14 ZB332 ZC552 4C085 AA03 4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 MA04 NA14 ZB03 ZB33 ZC55 4C087 AA01 AA02 BC83 NA14 ZB03 ZB33 ZC55
Claims (38)
- 【請求項１】 １またはそれ以上のＨＩＶ抗原またはその誘導体をコードす
る第１核酸分子およびサイトカインまたはその機能的誘導体をコードする第２核
酸分子を組み込んだ禽痘ウイルスベクターまたはその機能的誘導体からなり、該
ＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激する効果を有する組換え
ウイルス構築体。 - 【請求項２】 該ＨＩＶ抗原がＨＩＶ−１である請求項１の組換えウイルス
構築体。 - 【請求項３】 該ＨＩＶ−１抗原がＧagおよび/またはＰolである請求項２
の組換えウイルス構築体。 - 【請求項４】 該サイトカインがγ-インターフェロンである請求項１、２
または３の組換えウイルス構築体。 - 【請求項５】 該サイトカインがIL-2である請求項１、２または３の組換え
ウイルス構築体。 - 【請求項６】 該禽痘ウイルスが鶏痘ウイルスである請求項１−５のいずれ
か１つの組換えウイルス構築体。 - 【請求項７】 該禽痘ウイルスがカナリア痘ウイルスである請求項１−５の
いずれか１つの組換えウイルス構築体。 - 【請求項８】 該禽痘ウイルスが鶏痘ウイルスであり、該ＨＩＶ−１抗原が
Ｇagおよび/またはＰolであり、該サイトカインがγ-インターフェロンである請
求項１の組換えウイルス構築体。 - 【請求項９】 １またはそれ以上のＨＩＶ抗原またはその誘導体をコードす
る第１核酸分子およびサイトカインまたはその機能的誘導体をコードする第２核
酸分子を組み込んだ禽痘ウイルスベクターまたはその機能的誘導体からなり、そ
の組換えウイルス構築体が該ＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または
刺激する効果を有するワクチン組成物。 - 【請求項１０】 該ＨＩＶ抗原がＨＩＶ−１である請求項９のワクチン組成
物。 - 【請求項１１】 該ＨＩＶ−１抗原がＧagおよび/またはＰolである請求項
１０のワクチン組成物。 - 【請求項１２】 該サイトカインがγ-インターフェロンである請求項９、
１０または１１のワクチン組成物。 - 【請求項１３】 該サイトカインがIL-2である請求項９、１０または１１の
ワクチン組成物。 - 【請求項１４】 該禽痘ウイルスが鶏痘ウイルスである請求項９−１３のい
ずれか１つのワクチン組成物。 - 【請求項１５】 該禽痘ウイルスがカナリア痘ウイルスである請求項９−１
３のいずれか１つのワクチン組成物。 - 【請求項１６】 該禽痘ウイルスが鶏痘ウイルスであり、該ＨＩＶ−１抗原
がＧagおよび/またはＰolであり、該サイトカインがγ-インターフェロンである
請求項９のワクチン組成物。 - 【請求項１７】 請求項１−８のいずれか１つの組換えウイルス構築体およ
び１またはそれ以上の医薬用担体および/または希釈剤からなる医薬組成物。 - 【請求項１８】 請求項１−８のいずれか１つのウイルス構築体の有効量を
、１またはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激す
るに充分な時間および条件下に、哺乳動物に投与することを特徴とする哺乳動物
におけるＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激する方法。 - 【請求項１９】 該ＨＩＶ抗原がＨＩＶ−１である請求項１８の方法。
- 【請求項２０】 該ウィルス構築体が請求項３のウィルス構築体である請求
項１９の方法。 - 【請求項２１】 請求項９−１６のいずれか１つのワクチン組成物の有効量
を、１またはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激
するに充分な時間および条件下に、哺乳動物に投与することを特徴とする哺乳動
物におけるＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激する方法。 - 【請求項２２】 該ＨＩＶ抗原がＨＩＶ−１である請求項２１の方法。
- 【請求項２３】 該ワクチン組成物が請求項１１の組成物である請求項２２
の方法。 - 【請求項２４】 請求項１−８のいずれか１つのウイルス構築体の有効量を
、１またはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激す
るに充分な時間および条件下に、哺乳動物に投与することを特徴とする哺乳動物
の治療方法。 - 【請求項２５】 該ＨＩＶ抗原がＨＩＶ−１である請求項２４の方法。
- 【請求項２６】 該ウィルス構築体が請求項３のウィルス構築体である請求
項２５の方法。 - 【請求項２７】 請求項１−８のいずれか１つのワクチン組成物の有効量を
、１またはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激す
るに充分な時間および条件下に、哺乳動物に投与することを特徴とする哺乳動物
の治療方法。 - 【請求項２８】 該ＨＩＶ抗原がＨＩＶ−１である請求項２７の方法。
- 【請求項２９】 該ウィルス構築体が請求項３のウィルス構築体である請求
項２８の方法。 - 【請求項３０】 請求項１−８のいずれか１つの組換えウイルス構築体の有
効量を、１またはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または
刺激するに充分な時間および条件下に、哺乳動物に投与することを特徴とする哺
乳動物におけるＨＩＶ感染またはＡＩＤＳの治療および/または予防方法。 - 【請求項３１】 該ＨＩＶ抗原がＨＩＶ−１である請求項３０の方法。
- 【請求項３２】 該ウィルス構築体が請求項３のウィルス構築体である請求
項３１の方法。 - 【請求項３３】 請求項９−１６のいずれか１つのワクチン組成物の有効量
を、１またはそれ以上のＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激
するに充分な時間および条件下に、哺乳動物に投与することを特徴とする哺乳動
物におけるＨＩＶ感染またはＡＩＤＳの治療および/または予防方法。 - 【請求項３４】 該ＨＩＶ抗原がＨＩＶ−１である請求項３３の方法。
- 【請求項３５】 該ワクチン組成物が請求項１１のワクチン組成物である請
求項３４の方法。 - 【請求項３６】 請求項１−８のいずれか１つの組換えウイルス構築体の、
ＨＩＶ感染の治療および/または予防処置用医薬の製造における使用。 - 【請求項３７】 該ＨＩＶ抗原がＨＩＶ−１である請求項３６の使用。
- 【請求項３８】 請求項１−８のいずれか１つの組換えウイルス構築体から
なる、哺乳動物におけるＨＩＶに対する免疫応答を誘引、高揚、または刺激する
ために有用な薬剤。
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|---|---|---|---|
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| AUPP7007A AUPP700798A0 (en) | 1998-11-09 | 1998-11-09 | Recombinant viral constructs and methods relating thereto |
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|---|---|---|---|---|
| JP2007508327A (ja) * | 2003-10-15 | 2007-04-05 | バイラックス・ディベロップメント・プロプライエタリー・リミテッド | レトロウィルス（ｅｇｈｉｖ）およびサイトカインをコードするポックスウィルスベクター |
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