JP2002525338A

JP2002525338A - 糖尿病の処置および予防のためのケモカインレセプターペプチドワクチン

Info

Publication number: JP2002525338A
Application number: JP2000571948A
Authority: JP
Inventors: モーリーンハワード，; シュリカントデシュパンデ，; ウォルターファーリン，; サブハシンアリミリ，
Original assignee: コリクサコーポレイション
Priority date: 1998-09-30
Filing date: 1999-09-30
Publication date: 2002-08-13
Also published as: KR20010082217A; NO20011537L; EP1117429A4; CN1328470A; WO2000018431A1; EP1117429A1; CA2345978A1; NO20011537D0; IL142283A0; US6171590B1; US20010006942A1; AU6285399A

Abstract

(57)【要約】本発明は、炎症性応答の処置および予防のための組成物ならびに方法における使用のための、ケモカインレセプタータンパク質由来の免疫原性オリゴペプチドを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の背景）本発明は、自己免疫疾患に関連する炎症性応答を阻害するための新規組成物お
よび方法に関する。特に、本発明は、ケモカインレセプター分子の細胞外領域由
来のペプチドでのワクチン接種に関する。

【０００２】ケモカインは、炎症中に産生され、そして白血球補充を調節する低分子量サイ
トカインのファミリーを構成する。これらの分子は、白血球の経内皮（ｔｒａｎ
ｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ）移動に関与することに加え、Ｔ細胞の活性化に対す
るシグナル伝達カスケード性の同時刺激を誘導する、７回の膜貫通Ｇタンパク質
結合レセプターに対するリガンドである（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍら、Ａｎｎ．Ｒｅ
ｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：６１７−６４８（１９９１），Ｐｒｅｍｂａｃｋら、
Ｎａｔ．Ｍｅｄ．２：１１７４−１１７８（１９９６））。ケモカインの２つの
サブファミリー（ＣＣおよびＣＸＣと称する）が、発見されている。ＣＣおよび
ＣＸＣケモカインは、システイン−システインまたはシステイン−Ｘ−システイ
ン（ここで、Ｘは、代表的には別のＬアミノ酸である）のいずれかで開始するＮ
末端アミノ酸配列において、互いに異なる。これらはまた、これらのレセプター
に対するこれらの結合パターンにおいて異なる。例えば、ＣＣケモカインは、Ｃ
Ｃレセプターに結合し、そしてＣＸＣレセプターに結合せず、そして逆もまた同
様である。

【０００３】異なるケモカインは、造血細胞によって発現された特異的な７回の膜貫通レセ
プターを活性化することによって、造血細胞の異なる集団の輸送を調節する（Ｂ
ａｇｇｉｏｌｉｎｉら、Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．５５：９７−１７９（１９９
４）；Ｇｅｒａｒｄら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：１４０−１
４５（１９９４））。最近の刊行物は、調節性Ｔ細胞のＴｈ１およびＴｈ２のサ
ブセットが、それぞれ、ケモカインレセプターＣＸＣＲ３およびＣＣＲ３によっ
て固有に特徴付けられることを示す（Ｓａｌｌｕｓｔｏら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ
．１８７：８７５−８８３（１９９８）；Ｂｏｎｅｃｃｈｉら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ．１８７：１２９−１３４（１９９８）；Ｑｉｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ
ｅｓｔ．１０１：７４６−７５４（１９９８））。いくつかの研究は、ＣＮＳに
おける星状細胞によって産生された３つの特定のケモカイン、ＩＰ−１０、ＲＡ
ＮＴＥＳおよびＭＣＰ−１の発現を、ＥＡＥの初期の間のこの組織内の炎症性浸
潤の存在と相関付けた（Ｒａｎｓｏｈｏｆｆら、ＦＡＳＥＢＪ．７：５９２−
６００（１９９３）；Ｇｌａｂｉｎｓｋｉら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１５０
：６１７−６３０（１９９５）Ｇｏｄｉｓｋａら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏ
ｌ．５８：１６７−１７６（１９９５）；およびＥｎｇら、Ｎｅｕｒｃｈｅｍ．
Ｒｅｓ．２１５１１−５２５（１９９６））。３つ全てのケモカインは、特定の
実験モデルにおいてＴリンパ球を補充し得ることが示されているが、ＩＰ−１０
は、この系統の造血細胞に特異的であることが実証されている（Ｔａｕｂら、Ｊ
．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７７：１８０９−１８１４（１９９３）；Ｇａｒｒら、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：３６５２−３６５６（１
９９４）；およびＦａｒｂｅｒ、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６１：２４６−
２５７（１９９７））。ｃｒｇ−２（ヒトＩＰ−１０のマウスホモログ）に対す
るアンチセンスホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを髄腔内注入したＭＢＰ
免疫化ラットは、ＥＡＥの疾患臨床スコアの減少を示す（Ｗｏｊｃｉｋら、Ｊ．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２７８：４０４−４１０（１９９６）
）。

【０００４】さらに、いくつかのケモカインレセプター（例えば、ＩＬ２活性化ヒトＴリン
パ球上にあり、休止Ｔリンパ球上にないＣＸＣＲ３）のより高い発現が、実証さ
れている（Ｌｏｅｔｓｃｈｅｒら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：９６３−９６
９（１９９６））。

【０００５】多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系（ＣＮＳ）における局在化した脱髄によ
って引き起こされるＴ細胞依存性自己免疫疾患であり、患者に利用可能な治療的
選択肢は限られるほどしかない。広範な研究は、これらの自己反応性Ｔリンパ球
は、いつもではないが頻繁に、ＩＦＮｇ、ＩＬ−２およびＴＮＦａを高レベルに
産生するが、ＩＬ−４、Ｉｌ−５およびＩＬ−１０のほとんどまたは全く発現し
ない、Ｔｈ１表現型を発現することを示している。

【０００６】自己免疫疾患（例えば、ＭＳ）に対する現在の治療法は、抗炎症性薬剤または
一般的な免疫抑制剤の使用を含む。自己免疫疾患を制御するための先行技術の方
法は、自己免疫応答に関連するケモカインによって媒介される炎症性応答を特異
的に排除するための、単純な自己媒介性の方法を提供しない。本発明は、これら
および他の必要性に取り組む。

【０００７】（発明の要旨）本発明は、患者においてケモカインレセプター分子に対する免疫応答を誘導す
る方法を提供する。この方法は、アジュバントおよびケモカインレセプター分子
（例えば、ＣＸＣＲ３）の細胞外領域由来の免疫原性ケモカインレセプターポリ
ペプチドを含む、免疫学的有効量の薬学的組成物を患者に投与する工程を包含す
る。

【０００８】この免疫原性ペプチドは、好ましくは立体配置的に拘束される（例えば、環化
によって）。免疫原性ペプチドの長さは、本発明に重要ではない。代表的に、こ
のペプチドは、約１０〜約５０の残基からなり、よりしばしば、約１５〜約３０
の残基からなる。本発明の例示的免疫原性ペプチドとしては、

【０００９】

【化４】が挙げられる。

【００１０】免疫原性ペプチドは、多くの手段のいずれかによって投与され得る。代表的に
、これらは、非経口的に投与される。アジュバントは、例えば、ミョウバンであ
り得る。

【００１１】好ましい実施態様において、この方法は、患者において炎症部位へのＴ細胞の
補充を阻害するために使用される。代表的に、この炎症性応答は、自己免疫疾患
（例えば、多発性硬化症）に関連する。

【００１２】本発明はまた、上記の方法における使用に適切な薬学的組成物を提供する。

【００１３】（定義）用語「ペプチド」は、本明細書中で「オリゴペプチド」または「ポリペプチド
」と交換可能に使用され、代表的には隣接するアミノ酸のα−アミノ基とカルボ
ニル基との間のペプチド結合によって互いに連結される、一連の残基（代表的に
は、Ｌ−アミノ酸）を示す。

【００１４】用語「環状ペプチド」とは、Ｎ末端残基が、直接的にか、または中間体を介し
てかのいずれかでＣ末端残基に連結されるペプチドをいう。２つの残基間の連結
の例は、以下に記載のようなジスルフィド結合およびチオエーテル連結を含む。

【００１５】本発明の「免疫原性ケモカインレセプターポリペプチド」は、患者中の自己免
疫応答（例えば、多発性硬化症）における炎症に関連するケモカインレセプター
分子に対して免疫応答を誘発し得るポリペプチドである。以下により詳細に示さ
れるように、このポリペプチド中の残基の配列は、ケモカインレセプター分子中
のポリペプチド配列に同一であるか、または実質的に同一である。従って、「ケ
モカインレセプター分子の細胞外領域由来」の配列を有する本発明のポリペプチ
ドは、この領域の天然に存在するケモカインレセプターアミノ酸配列に、同一で
あるか、または実質的同一であるかのいずれかの配列を有するポリペプチドであ
る。

【００１６】本明細書中で使用される場合、ケモカインレセプター分子の「細胞外領域」は
、ネイティブ分子を発現する細胞の表面上に露出された分子の領域である。図１
は、ヒトＣＸＣＲ３分子の細胞外ドメインの模式図を提供する。この分子は、Ｎ
末端から開始する、ＳＰ−１、ＳＰ−２、ＳＰ−３およびＳＰ−４と命名される
４つの細胞外領域を有する。

【００１７】「非特異的免疫応答エンハンサー」は、外因性抗原に対する免疫応答を増強す
る任意の物質である。非特異的免疫応答エンハンサーの例としては、アジュバン
ト、生分解性ミクロスフェア（例えば、ポリ乳酸ガラクチド）およびリポソーム
（化合物は、この中に取り込まれる：例えば、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、米国特許第
４，２３５，８７７号を参照のこと）が挙げられる。ワクチン調製物は、一般的
に、例えば、Ｍ．Ｆ．ＰｏｗｅｌｌおよびＭ．Ｊ．Ｎｅｗｍａｎ編、「Ｖａｃｉ
ｎｅＤｅｓｉｇｎ（ｔｈｅｓｕｂｕｎｉｔａｎｄａｄｊｕｖａｎｔａ
ｐｐｒｏａｃｈ）」、ＰｌｅｎｕｍＰｒｅｓｓ（ＮＹ，１９９５）に記載され
る。

【００１８】句「単離された」または「生物学的に純粋」とは、そのネイティブの状態に見
出されるように通常それに付随する成分を、実質的または本質的に含まない物質
をいう。従って、本発明のケモカインレセプターポリペプチドは、それらのイン
サイチュ環境と通常には結合する物質（Ｔ細胞上の他の表面タンパク質）を含ま
ない。タンパク質が、均質なバンドまたは優勢なバンドにまで単離されている場
合でさえ、所望のタンパク質と共に同時に精製された、ネイティブタンパク質の
５〜１０％の範囲の微量混入物が存在する。本発明の単離されたポリペプチドは
、このような内因性の同時精製されたタンパク質を含まない。

【００１９】用語「残基」とは、アミド結合またはアミド結合模倣物によってオリゴペプチ
ドに組み込まれた、アミノ酸またはアミノ酸模倣物をいう。

【００２０】２つの核酸配列またはポリペプチドは、以下に記載のような最大の一致につい
て整列された場合に、この２つの配列において、それぞれヌクレオチドまたはア
ミノ酸残基の配列が同じである場合に、同一であるといわれる。２以上の核酸配
列またはポリペプチド配列の状況下で、用語「同一」またはパーセント「同一性
」とは、以下の配列比較アルゴリズムの１つを使用してか、または手動アライメ
ントおよび目視によって測定されるように、比較ウィンドウにわたって最大の一
致について比較および整列される場合に、同じであるか、または同じである特定
のパーセンテージのアミノ酸残基もしくはヌクレオチドを有する、２以上の配列
あるいはサブ配列をいう。配列同一性のパーセンテージが、タンパク質またはペ
プチドに関して使用される場合、同一ではない残基位置が、しばしば、保存的ア
ミノ酸置換によって異なり、ここで、アミノ酸残基は、類似の化学特性（例えば
、電荷または疎水性）を有する他のアミノ酸残基と置換され、従って、分子の機
能的特性を変化しないことが認識される。配列が、保存的置換において異なる場
合、パーセント配列同一性は、その置換の保存的性質について補正するように上
方調整され得る。この調整を行うための手段は、当該分野で周知である。代表的
には、これは、完全な不一致よりもむしろ部分的不一致として保存的置換をスコ
ア付けし、それによってパーセント配列同一性を増加することを含む。従って、
例えば、同一のアミノ酸は、１のスコアを与えられ、そして非保存的０のスコア
が与えられる場合、保存的置換は、０と１の間のスコアが与えられる。保存的置
換のスコア付けは、例えば、プログラムＰＣ／ＧＥＮＥ（Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎ
ｅｔｉｃｓ，ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）で
実行されるような、例えば、ＭｅｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ，Ｃｏｍｐｕｔｅ
ｒＡｐｐｌｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．４：１１−１７（１９８８）のアルゴリ
ズムに従って計算される。

【００２１】２つの核酸またはポリペプチドの状況下で、句「実質的に同一」とは、以下の
配列比較アルゴリズムの１つを使用してか、または手動アライメントおよび目視
によって測定されるように、比較ウィンドウにわたって最大の一致について整列
される場合に、少なくとも６０％、好ましくは７０％、より好ましくは８０％、
最も好ましくは９０〜９５％のヌクレオチドまたはアミノ酸残基同一性を有する
、配列あるいはサブ配列をいう。この定義はまた、試験配列の相補体をいい、試
験配列が参照配列に対して実質的な同一性を有する場合に、この試験配列は、実
質的な配列またはサブ配列相補性を有する。

【００２２】当業者は、２つのポリペプチドが免疫学的に類似する場合、この２つのポリペ
プチドもまた「実質的に同一」であり得ることを認識する。従って、タンパク質
構造の全体が類似し得るが、２つのポリペプチドの一次構造は、有意な差異を示
す。従って、２つのポリペプチドが実質的に同一であるか否かを測定するための
方法は、各ポリペプチドに対するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体
の結合を測定する工程を含む。２つのポリペプチドは、第１のポリペプチドに特
異的な抗体が、第１のポリペプチドに対する少なくとも３分の１の親和性で第２
のポリペプチドに結合する場合に、実質的に同一である。

【００２３】配列比較のために、代表的には、１つの配列は参照配列として作用し、これに
対して試験配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列
および参照配列は、コンピューターに入力され、必要に応じてサブ配列の座標が
指定され、そして配列アルゴリズムプログラムパラメーターが、指定される。次
いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメーターに基づき、
参照配列に対する試験配列についてのパーセント配列同一性を計算する。

【００２４】比較のための配列の最適アライメントは、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅ
ｒｍａｎ、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性
アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズ
ムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：２４４４（１９８８）の類似性についての検索方法
によって、これらのアルゴリズムのコンピューター化インプリメンテーション（
ＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅ，
ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ，５７５Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ｄｒ．Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦ
ＡＳＴＡ）によって、または目視（一般的に、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏ
ｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら
編、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓ、ＧｒｅｅｎｅＰｕｂｌｉｓｈｉｎ
ｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．とＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，
Ｉｎｃ．との共同事業（１９９５補遺）（Ａｕｓｕｂｅｌ）を参照のこと）に
よって行われ得る。

【００２５】パーセント配列同一性および配列類似性を決定するために適切なアルゴリズム
の例は、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらは、そ
れぞれ、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０
３−４１０およびＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９７７）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ
Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載される。ＢＬＡＳＴ分析を実行する
ためのソフトウェアは、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．
ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を介して公に入手可能である。このアルゴリズムは
、問い合わせ配列において短いワード長Ｗを同定することによって最初に高スコ
アの配列対（ＨＳＰ）を同定する工程を含み、この問い合わせ配列は、データベ
ース配列中の同じ長さのワードと整列された場合、いくつかの正の値の閾値スコ
アＴを一致するか、または満足する。Ｔは、隣接ワードスコア閾値と称する（Ａ
ｌｔｓｃｈｕｌら、前出）。これらの最初の隣接ワードヒットは、これらを含む
より長いＨＳＰを見出すために検索を開始するためのシードとして作用する。次
いで、このワードヒットは、累積アライメントスコアが増加され得る限り、各配
列に沿って両方向に伸長される。累積スコアは、ヌクレオチド配列については、
パラメーターＭ（一致残基の対に対する報酬スコア；常に＞０）およびＮ（不一
致残基に対するペナルティースコア；常に＜０）を使用して計算される。アミノ
酸配列については、スコア付けマトリックスを使用して、累積スコアを計算する
。各方向へのワードヒットの伸長は、以下の場合に停止する：累積アライメント
スコアが、その最大達成値から量Ｘ低下する場合；累積スコアが、１以上の負の
スコアの残基アライメントの蓄積に起因して、０以下になる場合；またはいずれ
かの配列の末端に到達した場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ、
およびＸは、アライメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラ
ム（ヌクレオチド配列に対する）は、デフォルトとして１１のワード長（Ｗ）、
１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４および両鎖の比較を使用する。アミノ酸
配列に対して、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、デフォルトとして３のワード長（Ｗ
）、１０の期待値（Ｅ）およびＢＬＯＳＵＭ６２スコア付けマトリックスを使用
する（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：１０９１５（１９８９）を参照のこと）。

【００２６】パーセント配列同一性を計算することに加え、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた
、２つの配列間の類似性の統計学的分析を実行する（例えば、Ｋａｒｌｉｎおよ
びＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：
５８７３−５７８７（１９９３））。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供され
る類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌ
クレオチド配列またはアミノ酸配列間の一致が偶然に起こる確率の指標を提供す
る。例えば、参照核酸に対する試験核酸の比較における最小合計確率が、約０．
１未満、より好ましくは、０．０１未満および最も好ましくは、０．００１未満
である場合に、この核酸は、参照核酸と類似するとみなされる。

【００２７】２つの核酸配列またはポリペプチドが実質的に同一であるさらなる指標は、以
下に記載のように、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、第２の核
酸によってコードされるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であることである
。従って、例えば、２つのペプチドが、保存的置換でのみ異なる場合、その１つ
のポリペプチドは、代表的に第２のポリペプチドと実質的に同一である。２つの
核酸配列が、実質的に同一である別の指標は、以下に記載のように、２つの分子
がストリンジェント条件下で互いにハイブリダイズすることである。

【００２８】「保存的に改変された改変体」は、アミノ酸配列および核酸配列の両方に適用
する。特に核酸配列に関して、保存的に改変された改変体とは、同一または本質
的に同一のアミノ酸配列をコードする核酸の配列をいうか、またはその核酸がア
ミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一の配列をいう。遺伝コードの縮重
のために、多くの機能的に同一の核酸が、任意の所定のタンパク質をコードする
。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧおよびＧＣＵは、全てアミノ酸アラニ
ンをコードする。従って、アラニンがあるコドンによって特定される全ての位置
で、そのコドンは、コードされるポリペプチドを変更することなく、記載される
対応するコドンのいずれかに変更され得る。このような核酸の改変体は「サイレ
ント改変体」であり、これは、保存的に改変された改変体の１種である。ポリペ
プチドをコードする本明細書中の全ての核酸配列はまた、その核酸の全ての可能
なサイレント改変体を記載する。当業者は、核酸における各コドン（ＡＵＧ（通
常、メチオニンに対するたった１つのコドンである）を除く）は、機能的に同一
の分子を生じるように改変され得ることを認識する。従って、ポリペプチドをコ
ードする核酸の各サイレント改変体は、各記載される配列中に暗示される。

【００２９】アミノ酸配列に関して、当業者は、コードされる配列における単一のアミノ酸
または少ないパーセンテージのアミノ酸を変更する、核酸、ペプチド、ポリペプ
チドまたはタンパク質配列における個々の置換は、その変更が、あるアミノ酸の
化学的に類似のアミノ酸での置換を生じる場合、「保存的に改変された改変体」
であることを認識する。機能的に類似のアミノ酸を提供する保存的置換の表は、
当該分野で周知である。

【００３０】以下の６つの群は、各々、別のアミノ酸に対して保存的置換であるアミノ酸を
含む：１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）
および６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）（例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（１９８４））を参照のこ
と）。

【００３１】２つの核酸配列またはポリペプチドが実質的に同一である指標は、第１の核酸
によってコードされるポリペプチドが、第２の核酸によってコードされるポリペ
プチドに対して惹起された抗体と免疫学的に交差反応性であることである。従っ
て、例えば、２つのペプチドが保存的配列でのみ異なる場合、その１つのポリペ
プチドは、代表的に、第２のポリペプチドに実質的に同一である。２つの核酸配
列が、実質的に同一である別の指標は、以下に記載のように、２つの分子または
それらの相補体が、ストリンジェント条件下で互いにハイブリダイズすることで
ある。

【００３２】句「選択的（または特異的）にハイブリダイズする」とは、配列が複雑な混合
物で存在する場合（例えば、全細胞性またはライブラリーの、ＤＮＡあるいはＲ
ＮＡ）、分子がストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で特定のヌク
レオチド配列に対してのみ結合、二重鎖形成、またはハイブリダイズすることを
いう。

【００３３】句「ストリンジェントハイブリダイゼーション条件」とは、プローブが、代表
的には、核酸の複雑な混合物において、その標的配列にハイブリダイズするが、
他の配列にハイブリダイズしない条件をいう。ストリンジェント条件は、配列依
存性であり、そして異なる状況下で異なる。より長い配列は、より高い温度で特
異的にハイブリダイズする。核酸のハイブリダイゼーションの広範なガイドは、
Ｔｉｊｓｓｅｎ，ＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓｉｎＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａ
ｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ−−Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
ｗｉｔｈＮｕｃｌｅｉｃＰｒｏｂｅｓ，「Ｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｐｒｉ
ｎｃｉｐｌｅｓｏｆｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎａｎｄｓｔｒａｔｅｇ
ｙｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄａｓｓａｙｓ」（１９９３）に見出され
る。一般に、高いストリンジェント条件は、規定されるイオン強度のｐＨでの特
定の配列に対する熱融解点（Ｔ_m）より約５〜１０℃低くなるように選択される
。より低いストリンジェンシー条件は、一般的に、Ｔ_mより約１５〜３０℃低く
なるように選択される。Ｔ_mは、標的に対して相補的なプローブの５０％が、平
衡状態（標的配列が過剰に存在するので、Ｔ_mで５０％のプローブが、平衡状態
で占められる）で標的配列にハイブリダイズする温度（規定されるイオン強度、
ｐＨおよび核酸濃度下の）である。ストリンジェント条件は、塩濃度が、ｐＨ７
．０〜８．３で、約１．０Ｍ未満のナトリウムイオン濃度、代表的に約０．０１
〜１．０Ｍのナトリウムイオン濃度（または他の塩）であり、そして温度が、短
いプローブ（例えば、１０〜５０ヌクレオチド）に対して少なくとも約３０℃、
そして長いプローブ（例えば、５０ヌクレオチドより長い）に対して少なくとも
約６０℃である条件である。ストリンジェント条件はまた、ホルムアミドのよう
な脱安定化剤の添加によって達成され得る。選択的または特異的ハイブリダイゼ
ーションのために、陽性シグナルは、少なくともバックグラウンドの２倍、好ま
しくはバックグラウンドの１０倍のハイブリダイゼーションである。

【００３４】ストリンジェント条件下で互いにハイブリダイズしない核酸は、それらがコー
ドするポリペプチドが実質的に同一である場合、なお実質的に同一である。これ
は、例えば、核酸のコピーが、遺伝コードに許容される最大のコドンの縮重を使
用して作製される場合に生じる。このような場合、核酸は、代表的に、中程度に
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。

【００３５】本発明において、本発明の核酸を含むゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡは、本明細
書中に開示される核酸配列を使用するストリンジェント条件下での標準的なサザ
ンブロットにおいて同定され得る。この開示の目的のために、このようなハイブ
リダイゼーションに適切なストリンジェント条件は、４０％ホルムアミド、１Ｍ
ＮａＣｌ、１％ＳＤＳの緩衝液中、３７℃でのハイブリダイゼーション、お
よび少なくとも約５０℃、通常は、約５５℃〜約６０℃の温度で、０．２×ＳＳ
Ｃ中２０分間の少なくとも１回の洗浄を含む条件であるか、または等価的条件で
ある。陽性ハイブリダイゼーションは、少なくともバックグラウンドの２倍であ
る。当業者は、代替的なハイブリダイゼーションおよび洗浄条件を利用して、同
様のストリンジェンシーの条件を提供し得ることを容易に認識する。

【００３６】ストリンジェント条件下で互いにハイブリダイズしない核酸は、それらがコー
ドするポリペプチドが実質的に同一である場合、なお実質的に同一である。これ
は、例えば、核酸のコピーが、遺伝コードに許容される最大のコドンの縮重を使
用して作製される場合に生じる。このような場合、核酸は、代表的に、中程度に
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。例示
的な「中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、４０％ホ
ルムアミド、１ＭＮａＣｌ、１％ＳＤＳの緩衝液中、３７℃でのハイブリダ
イゼーション、および１×ＳＳＣ中、４５℃での洗浄を含む。陽性ハイブリダイ
ゼーションは、少なくともバックグラウンドの２倍である。当業者は、代替的な
ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件を利用して、同様のストリンジェンシー
の条件を提供し得ることを容易に認識する。

【００３７】２つのポリヌクレオチドが実質的同一であるさらなる指標は、オリゴヌクレオ
チドプライマー対によって増幅された参照配列を、次いで、ストリンジェントハ
イブリダイゼーション条件ン下でプローブとして使用して、ｃＤＮＡまたはゲノ
ムライブラリーから試験配列を単離し得るか否か、または例えば、ＲＮＡゲルま
たはＤＮＡゲルブロットハイブリダイゼーション分析において試験配列を同定し
得るか否かである。

【００３８】（好ましい実施態様の説明）本発明は、炎症性応答の処置および予防のための組成物および方法における使
用のための、ケモカインレセプタータンパク質配列に由来する免疫原性ポリペプ
チドを提供する。このポリペプチドは、種々の疾患に関連する炎症性応答を媒介
するケモカインレセプター分子に対する免疫応答を誘導し得る。好ましい実施態
様において、本発明のポリペプチドは、立体配置的に拘束され（例えば、環化に
よって）、そしてヒトＣＸＣＲ３の細胞外領域に由来する。本発明のポリペプチ
ドでの免疫化は、特定のケモカインレセプターに対する特異的免疫応答を提供し
、そしてこれらの分子によって媒介される炎症性応答の特異的阻害を生じる。

【００３９】この方法は、ケモカインによって媒介される任意の炎症性応答を処置するため
に使用され得る。特に、この方法は、自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症）の
処置に有用である。世界中で６００，０００人の個体が罹患するヒト脱髄疾患で
ある、多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系（ＣＮＳ）の乏突起神経膠細胞のミ
エリン鞘の損傷から生じる。ＭＳの病因および原因は、未だ確証されていないが
、この疾患が免疫学的な根拠を有すること、および遺伝的因子および環境因子の
両方が、この病因に寄与することが広く考えられる。自己免疫発生の中心的メデ
ィエイタは、ＣＮＳにおける１以上の自己抗原に特異的な宿主ＣＤ４＋Ｔ細胞で
あると考えられ、その後、これらの細胞の自己抗原活性化の後に一連の組織破壊
的炎症性メディエイタが産生される。実際に、ＭＳ病理の結果としてＭＳ患者の
脳において生じる脱髄の病巣斑の免疫組織学的分析は、これらの斑を浸潤するＣ
Ｄ４＋Ｔ細胞の存在を明らかにした。

【００４０】ＭＳの基礎をなす免疫病理学的機構の理解の改善は、脱髄の実験モデルの研究
から発達した。最も一般的に使用されるモデルである、実験アレルギー性脳脊髄
炎（ＥＡＥ）は、自己抗原特異的ＣＤ４＋ＭＨＣクラスＩＩ制限Ｔ細胞によって
媒介される、遺伝的に感受性のマウスの自己免疫炎症性障害である。感受性ＳＪ
Ｌ／Ｊマウスにおいて、この疾患は、麻痺の再発−回復の臨床過程を提示し得、
これは、この疾患を、疾患の予防および処置の両方において種々の免疫調節スト
ラテジーの効力を研究するための理想的なシステムにする。

【００４１】本発明は、この疾患設定下での自己反応性Ｔ細胞のサイトカイン産生性の表現
型に対してなく、病理の部位（例えば、ＭＳの場合のＣＮＳ内の）に対する宿主
循環からのそれらの輸送に焦点を当てる。上記のように、造血細胞移動は、ケモ
カインによって調節される。

【００４２】いくつかの実施態様において、本発明は、ＣＸＣＲ３と命名される７回の膜貫
通ケモカインレセプターに対するペプチドワクチンを提供する。ＩＰ−１０の走
化性のフィンガープリントと一致して、ＣＸＣＲ３は、活性化エフェクターＴリ
ンパ球上に排他的に発現される。本発明の例示的ペプチドは、表１に示されるＣ
ＸＣＲ３タンパク質の細胞外ドメイン由来のペプチドを含む。

【００４３】好ましい実施態様において、本発明のポリペプチドは、環化される。ペプチド
を環化するための方法は、以下に詳細に記載される。ペプチドがジスルフィド結
合によって環化されるこれらの場合、当業者は、ペプチドが、このペプチド内ま
たは各末端のいずれかでシステイン残基をさらに含むことを認識する。

【００４４】本発明における使用に適切なポリペプチドは、種々の方法で得られ得る。簡便
には、これらは、自動合成器（例えば、Ｂｅｃｋｍａｎ、ＡｐｐｌｉｅｄＢｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓまたは他の市販のペプチド合成器）を使用して、周知のプロト
コルを用いる従来の技術によって合成され得る。これらはまた、当該分野で周知
の技術を使用して手動的に合成され得る。例えば、ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕ
ｎｇ、ＳｏｌｉｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，（Ｒｏ
ｃｋｆｏｒｄ，Ｉｌｌ．，Ｐｉｅｒｃｅ）、第２版（１９８４）を参照のこと。

【００４５】あるいは、特定のケモカインレセプターポリペプチドをコードするＤＮＡ配列
をクローン化して、そして発現させてこのポリペプチドを提供し得る。ケモカイ
ンレセプターをコードする核酸分子は、当該分野で公知であり、このような遺伝
子の配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋから入手可能である（例えば、ＧｅｎＢａ
ｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＨＳＵ８３３２６、ＨＳＵ９７１２３およびＡＦ
００５０５８を参照のこと）。

【００４６】標準的な技術を使用して、ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし、所望の
配列をコードする配列を同定し得る（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ−ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐ
ｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨ
ａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８９を参照のこと）。融合タンパク質（２
以上のタンパク質のアミノ酸配列の全てまたは一部からなるタンパク質）は、組
換え産生され得る。さらに、インビトロ変異誘発技術を使用して、無関係のタン
パク質を、適切な配列を含むように変異させ得る。

【００４７】種々の天然の供給源由来のケモカインレセプタータンパク質はまた、標準的な
タンパク質精製技術を使用して簡便に単離される。ペプチドは、任意の種々の公
知の技術（例えば、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イオン交換
クロマトグラフィーまたは免疫親和性クロマトグラフィー、サイズによる分離、
あるいは電気泳動を含む）によって精製され得る（一般的には、Ｓｃｏｐｅｓ，
Ｒ．，ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒ
ｌａｇ，Ｎ．Ｙ．（１９８２）を参照のこと）。

【００４８】本発明の免疫原性ケモカインレセプターポリペプチドは、未改変ペプチドの実
質的に全ての生物学的活性を増加させるか、または少なくとも維持しながら、種
々の所望の特性（例えば、改善された薬理学的特性）を提供するように改変され
得ることが理解される。例えば、このポリペプチドは、このペプチドのアミノ酸
配列を伸長、減少することによって改変され得る。異なるアミノ酸またはアミノ
酸模倣物での置換もまたなされ得る。

【００４９】本発明に使用されるペプチドは、このペプチドが、所望のケモカインレセプタ
ー分子に対して免疫応答を誘導し得る限り、以下の実施例の節に開示されるペプ
チドと同一である必要はない。従って、当業者は、多くの保存的置換（以下によ
り詳細に記載される）が、実質的にペプチドの活性に影響を及ぼすことなく成さ
れ得ることを認識する。

【００５０】単一のアミノ酸置換、欠失または挿入は、どの残基が改変に比較的非感受性で
あるかを決定するために使用され得る。置換は、好ましくは、小さい、比較的中
性の部分（たとえば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｐｒｏまたは類似の残基）によってなさ
れる。単一のアミノ酸置換の効果はまた、Ｄアミノ酸を使用して走査され得る。
置換または付加される残基の数および型は、必須の接触点の間に必要な間隔およ
び求められる特定の機能的特性（例えば、疎水性対親水性）に依存する。親
ペプチドと比較して、免疫原性の増加はまた、このような置換によって達成され
得る。任意の事象において、このような置換は、例えば、結合を破壊し得る立体
的干渉および電荷的干渉を回避するように選択されるアミノ酸残基または他の分
子フラグメントを使用するべきである。

【００５１】しかし、置換アミノ酸は、タンパク質中で天然に存在するアミノ酸（例えば、
Ｌ−α−アミノ酸、またはそれらのＤ−異性体）に限定される必要はない。ペプ
チドは、当業者に周知のアミノ酸模倣物のような種々の部分で置換され得る。

【００５２】免疫原性ケモカインレセプターポリペプチドの個々の残基は、ペプチド結合ま
たはペプチド結合模倣物によってペプチド中に組み込まれ得る。本発明のペプチ
ド結合模倣物としては、当業者に周知のペプチド骨格改変が挙げられる。このよ
うな改変としては、アミド窒素、α−炭素、アミドカルボニルの改変、アミド結
合の完全置換、伸長、欠失または骨格架橋が挙げられる。一般には、Ｓｐａｔｏ
ｌａ，ＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＡｍｉ
ｎｏＡｃｉｄｓ，ＰｅｐｔｉｄｅｓａｎｄＰｒｏｔｅｉｎｓ，第ＶＩＩ（
Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ編、１９８３）を参照のこと。いくつかのペプチド骨格改変
は、公知であり、これらとしては、Ψ［ＣＨ₂Ｓ］、Ψ［ＣＨ₂ＮＨ］、Ψ［ＣＳ
ＮＨ₂］、Ψ［ＮＨＣＯ］、Ψ［ＣＯＣＨ₂］およびΨ［（Ｅ）または（Ｚ）ＣＨ
＝ＣＨ］が挙げられる。上記で使用される命名法は、Ｓｐａｔｏｌａ、上記に提
案されるものに従う。この状況において、Ψは、アミド結合の非存在を示す。ア
ミド基を置換する構造は、大括弧内に示される。

【００５３】アミノ酸模倣物はまた、ペプチド中に組み込まれ得る。本明細書中で使用され
る場合、「アミノ酸模倣物」は、本発明のポリペプチド中のアミノ酸の置換物と
して立体配置的および機能的に作用する、天然に存在するアミノ酸以外の部分で
ある。このような部分は、そのペプチドが適切なケモカインレセプター分子に対
して免疫応答を誘発する能力を干渉しない限り、アミノ酸残基の置換物として作
用する。アミノ酸模倣物は、非タンパク質アミノ酸（例えば、β−γ−δ−アミ
ノ酸、β−γ−δ−イミノ酸（例えば、ピペリジン−４−カルボン酸））ならび
に多くのＬ−α−アミノ酸の誘導体を含み得る。多くの適切なアミノ酸模倣物は
、当業者に公知であり、これらには、シクロヘキシルアニリン、３−シクロヘキ
シルプロピオン酸、Ｌ−アダマンチルアラニン、アダマンチル乳酸などが挙げら
れる。本発明のペプチドに適切なペプチド模倣物は、ＭｏｒｇａｎおよびＧａｉ
ｎｏｒ、（１９８９）Ａｎｎ．Ｒｅｐｔｓ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：２４３−
２５２によって議論される。

【００５４】上記のように、本発明において使用されるペプチドは、標的ケモカインレセプ
ター分子の対応する配列に同一である必要はないが、実質的に同一であり得る。
従って、このペプチドは、種々の変化（例えば、挿入、欠失および置換（保存的
または非保存的のいずれか））に供され得、ここで、このような変化は、それら
の使用において特定の利点を提供し得る。本発明のポリペプチドは、これらが、
ケモカインレセプター分子の標的領域における配列に実質的に同一（以下に定義
されるように）である配列を含むかぎり、多くの方法において改変され得る。

【００５５】比較的短いアミノ酸配列（約３０残基未満）のアライメントおよび比較は、代
表的に容易である。より長い配列の比較は、２つの配列の最適アライメントを達
成するためのより優れた方法を必要とし得る。比較ウィンドウを整列するための
配列の最適アライメントは、上記の方法によって実行され得る。

【００５６】いくつかの実施態様において、本発明のポリペプチドは、本明細書中に記載の
複数のポリペプチドを含むか、または本明細書中に記載の少なくとも１つのポリ
ペプチドおよび無関係の配列を含む融合タンパク質であり得る。融合パートナー
は、例えば、Ｔヘルパーエピトープ（免疫学的融合パートナー）、好ましくはヒ
トによって認識されるＴヘルパーエピトープを提供する際に補助し得るか、また
はネイティブの組換えタンパク質より高収率でこのタンパク質（発現エンハンサ
ー）を発現する際に補助し得る。特定の好ましい融合パートナーは、免疫学的か
つ発現増強性の両方の融合パートナーである。他の融合パートナーは、タンパク
質の可溶性を増加するように、またはタンパク質が所望の細胞内区画へ標的され
るのを可能にするように選択され得る。なおさらなる融合パートナーとしては、
タンパク質の精製を容易にするアフィニティータグが挙げられる。

【００５７】融合タンパク質は、一般的に、標準的な技術（化学結合体化を含む）を使用し
て調製され得る。好ましくは、融合タンパク質は、発現系において、非融合タン
パク質と比較して増加したレベルの産生を可能にする、組換えタンパク質として
発現される。手短に言うと、このポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列は、
別々に構築され得、そして適切な発現ベクター内に連結され得る。一方のポリペ
プチド成分をコードするＤＮＡ配列の３’末端は、ペプチドリンカーを用いて、
または用いずに、この配列のリーディングフレームが同位相であるように、第２
のポリペプチド成分をコードするＤＮＡ配列の５’末端に連結される。このこと
は、両方の成分ポリペプチドの生物学的活性を保持する単一の融合タンパク質へ
の翻訳を可能にする。

【００５８】ペプチドリンカー配列は、第１のポリペプチド成分と第２のポリペプチド成分
を、各ポリペプチドがその二次構造および三次構造に折り畳まれることを確実に
するのに十分な距離で分離するために、使用され得る。このようなペプチドリン
カー配列は、当該分野で周知の標準的な技術を使用して融合タンパク質内に組み
込まれる。適切なペプチドリンカー配列は、以下の要素に基づいて選択され得る
：（１）それらの可動的な拡張された立体配座を取る能力；（２）それらの第１
のポリペプチドおよび第２のポリペプチド上の機能的エピトープと相互作用する
二次構造を取る不能性；および（３）ポリペプチド機能的エピトープと反応し得
る疎水性残基または荷電残基の欠失。好ましいペプチドリンカー配列は、Ｇｌｙ
、ＡｓｎおよびＳｅｒ残基を含む。他のほぼ中性のアミノ酸（例えば、Ｔｈｒお
よびＡｌａ）もまた、リンカー配列として使用され得る。リンカーとして有効に
使用され得るアミノ酸配列としては、Ｍａｒａｔｅａら、Ｇｅｎｅ４０：３９
−４６、１９８５；Ｍｕｒｐｈｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ８３：８２５８−８２６２，１９８６；米国特許第４，９３５，２３３
号および米国特許第４，７５１，１８０号に開示される配列が挙げられる。リン
カー配列は、一般的に、１〜約５０アミノ酸長であり得る。リンカー配列は、第
１および第２のポリペプチドが、機能的ドメインを分離し、そして立体的干渉を
防止するために使用され得る、非必須のＮ末端アミノ酸領域を有する場合には、
必要とされない。

【００５９】本発明のポリペプチドは、代表的に、ケモカインレセプターの細胞外ドメイン
由来の少なくとも約１０残基、およびより好ましくは少なくとも約１５残基を含
む。特定の実施態様において、ペプチドは、約５０残基を超えず、そして代表的
には約３０残基を超えない。例えば、以下に記載のペプチドは、約１５〜約２５
残基からなる。

【００６０】本発明の好ましい実施態様において、免疫原性ペプチドは、立体配置的に拘束
される。このことを達成するための手段は、当該分野で周知である（例えば、Ｈ
ｒｕｂｙおよびＢｏｎｎｅｒ，ＭｅｔｈｏｄｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉ
ｏｌｏｇｙ，３５巻：ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓＰｒｏｔｏｃｏｌ
ｓＰｅｎｎｉｎｇｔｏｎおよびＤｕｎｎ編（ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，Ｔｏ
ｔｏｗａＮＪ，１９９４）を参照のこと）。立体配置的に拘束されたペプチド
を調製するための好ましい手段は、環化を介する。環化オリゴペプチドを生成す
るための一般に使用される任意の方法は、本発明のペプチドを生成するために使
用され得る。例えば、特定の実施態様において、ペプチドは、両末端にシステイ
ン残基を含み、これは、ジスルフィド結合を介した環状ペプチドの生成を可能に
する。このようなペプチドの酸化剤（例えば、酸素、ヨウ素または類似の薬剤）
での処理は、クロマトグラフィー法または化学的精製の他の方法を使用してさら
に精製され得る環状ペプチドを生成する。環状ペプチドの構築はまた、チオエー
テル結合を介して達成され得る。例えば、Ｎ−ブロモアセチル誘導体化ペプチド
は、スルフィドリル含有残基（例えば、システイン）と反応され得る。環化は、
チオエーテル結合を形成するための、ペプチド中のシステインの遊離スルフィド
リルの、ブロモアセチル基との反応によって生じる（Ｒｏｂｅｙら、Ａｎａｌ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７７：３７３−７（１９８９）および米国特許第５，０６６
，７１６）。

【００６１】環状ペプチドを構築する他の方法は、当該分野で公知である。これらには、側
鎖−側鎖、側鎖−主鎖および主鎖−主鎖の環化が挙げられる、さらに、リンカー
は、ペプチドのアミノ末端およびカルボキシル末端を連結するために使用され得
る。リンカーは、アミノ末端およびカルボキシル末端の両方に対して共有結合を
形成し得る。適切なリンカーは、当業者に周知であり、これらには、直鎖炭素リ
ンカーまたは分枝鎖炭素リンカー、複素環炭素リンカー、あるいはペプチドリン
カーが挙げられるが、これらに限定されない。リンカーは、カルボキシル末端ア
ミノ酸およびアミノ末端アミノ酸に、それらの側鎖基を介して（例えば、システ
インへのジスルフィド結合を介して）またはその末端アミノ酸のα炭素のアミノ
基およびカルボキシル基を介して連結され得る。

【００６２】環化のための適切な方法の一般的考察については、ＨｒｕｂｙおよびＢｏｎｎ
ｅｒ，ＭｅｔｈｏｄｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，３５巻：Ｐ
ｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓＰｒｏｔｏｃｏｌｓＰｅｎｎｉｎｇｔｏ
ｎおよびＤｕｎｎ編（ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，ＴｏｔｏｗａＮＪ，１９９
４）を参照のこと。例えば、環化は、カルバ（ｃａｒｂａ）アナログおよびチオ
エーテル（Ｌｅｂｌら、Ｐｅｐｔｉｄｅ１９８６Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ
ｏｆｔｈｅ１９ｔｈＥｕｒｏｐｅａｎＰｅｐｔｉｄｅＳｙｍｐｏｓｉ
ｕｍ３４１−３４４頁；Ｒｏｂｅｙら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７７：
２７２−７（１９８９）および米国特許第５，０６６，７１６号）、ビス−チオ
エーテル（Ｍｏｓｂｅｒｇら、ＪＡＣＳ１０７：２９８６−２９８７（１９８
５））、アゾペプチド（Ｓｉｅｍｉｏｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．３４：（１９９１）、ならびに他の環状構造（例えば、架橋構造）（Ｃｈａｒ
ｐｅｎｔｉｅｒ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３２（６）：１１８４−１１
９０（１９８９）、Ｔｈａｉｓｒｉｖｏｎｇｓ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ
．３４（４）：１２７（１９９１）およびＯｚｅｋｉ，Ｅ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐ
ｅｐｔｉｄｅＰｒｏｔｅｉｎＲｅｓ．３４：１１１（１９８９））の形成を
含み得る。骨格間（ｂａｃｋｂｏｎｅ−ｔｏ−ｂａｃｋｂｏｎｅ）位置からの環
化もまた、使用され得る。

【００６３】架橋は、特別な型の環化であり、ここで、ペプチド中の離れた部位が、別々の
架橋分子またはフラグメントを使用してともに結合される。架橋分子としては、
例えば、無水コハク酸分子（Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ，Ｂら、前出）、およびカ
ルボキシメチレンフラグメント（Ｔｈａｉｓｒｉｖｏｎｇｓ，Ｓ．ら、前出）が
挙げられ得る。金属による架橋もまた使用され得る（Ｏｚｅｋｉ，Ｅ．ら、前出
）。

【００６４】いくつかの実施態様において、ペプチドは、２つ以上のシステイン残基を含む
。これらのシステインは、ペプチド内またはいずれかの末端で、置換または付加
され得る。システインの位置は、ジスルフィド結合が、それらの間で形成し得、
これが環状ペプチドの生成を可能にする限り、重要ではない。例えば、このよう
なペプチドの酸化剤（例えば、酸素、ヨウ素または類似の薬剤）での処理は、ク
ロマトグラフィー法または化学的精製の他の方法を使用してさらに精製され得る
環状ペプチドを生成する。

【００６５】ペプチドの使用に加え、本発明のペプチドに対して惹起される抗体が、炎症性
応答を阻害するために使用され得る。抗体は、当業者に周知の技術を使用して本
発明のペプチドに対して惹起され得る。抗イディオタイプ抗体もまた、生成され
得る。以下の議論は、利用可能な技術の一般的概要として示されるが；当業者は
、以下の方法に対する多くの変更が公知であることを認識する。

【００６６】多くの免疫原は、ペプチドと特異的に反応性である抗体を産生するために使用
され得る。例えば、ケモカインレセプター分子全体または所望の配列を含むフラ
グメントが使用され得る。本明細書中に開示されるような合成ペプチドは、直鎖
形態または環化されてかのいずれかで使用され得る。

【００６７】ポリクローナル抗体を産生する方法は、当業者に公知である。手短に言うと、
免疫原（抗原）、好ましくは精製ポリペプチド、適切なキャリアに結合されたポ
リペプチド（例えば、ＧＳＴ、キーホールリンペットヘモシアニン（ｈｅｍａｎ
ｏｃｙａｎｉｎ）など）、または免疫化ベクター（例えば、組換えウイルスワク
シニア）内に組み込まれたポリペプチド（米国特許第４，７２２，８４８号を参
照のこと）を、アジュバントと混合して、そして動物を、この混合物で免疫化す
る。免疫原調製物に対する動物の免疫応答を、試験血液を採取し、目的のポリペ
プチドに対する反応性の力価を測定することによってモニターする。免疫原に対
する抗体の適切に高い力価が得られる場合、血液を動物から採取し、そして抗血
清を調製する。ポリペプチドに対して反応性の抗体を富化するための抗血清のさ
らなる分画を、所望の場合に実行する（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃ
ｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＷｉｌｅｙ
／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ；およびＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８９）Ａｎｔ
ｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌＣｏｌｄＳｐｒ
ｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ，ＮＹを参照のこと）。

【００６８】いくつかの場合において、種々の哺乳動物宿主（例えば、マウス、げっ歯目、
霊長類、ヒトなど）からモノクローナル抗体を調製することが望ましい。このよ
うなモノクローナル抗体を調製するための技術の記載は、例えば、Ｓｔｉｔｅｓ
ら（編）ＢａｓｉｃａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４
版）ＬａｎｇｅＭｅｄｉｃａｌＰｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＬｏｓＡｌｔ
ｏｓ，ＣＡ，およびそれに引用される参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、
前出；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ（第２版）Ａｃａｄｅｍｉ
ｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ；ならびにＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌ
ｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５−４９７に見出される。
簡単に要約すると、この方法は、免疫原を動物に注射することによって進行する
。次いで、動物を屠殺し、そしてその脾臓から細胞を採取し、黒色腫細胞と融合
させる。その結果が、インビトロで再生可能なハイブリッド細胞すなわち「ハイ
ブリドーマ」である。次いで、ハイブリドーマの集団をスクリーニングし、個々
のクローンを単離し、これらのクローンの各々は、免疫原に対する単一の抗体種
を分泌する。この様式において、得られた個々の抗体種は、免疫原性物質に対し
て認識された特定の部位に対して応答して生成された、免疫動物由来の不死化さ
れ、かつクローン化された単一のＢ細胞の産物である。

【００６９】不死化の代替方法としては、エプスタインバーウイルス、癌遺伝子、もしくは
レトロウイルスでの形質転換、または当該分野で公知の他の方法が挙げられる。
単一の不死化細胞から生じるコロニーは、抗原についての所望の特異性および親
和性の抗体の産生についてスクリーニングされ、そしてこのような細胞によって
産生されるモノクローナル抗体の収率は、様々な技術によって増大される。この
技術としては、脊椎動物（好ましくは、哺乳動物）宿主の腹膜腔への注入が挙げ
られる。特定のモノクローナルおよびポリクローナル抗体は、通常、少なくとも
約１ｍＭ、より通常には少なくとも約５０μＭ、および最も好ましくは少なくと
も約１μＭ以上のＫ_Dで結合する。

【００７０】他の適切な技術は、ファージベクターまたは類似のベクターにおける組換え抗
体のライブラリーの選択を含む（例えば、Ｈｕｓｅら、（１９８９）Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕ
ｒｅ３４１：５４４−５４６；およびＶａｕｇｈａｎら、（１９９６）Ｎａｔ
ｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：３０９−３１４を参照のこと）。

【００７１】頻繁には、本発明のペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナルを提供する物
質を、共有結合するかまたは非共有結合するかのいずれかによって標識される。
広範な種々の標識および結合体化技術は公知であり、そして科学文献および特許
文献の両方に広範に報告されている。適切な標識とては、放射性ヌクレオチド、
酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分、磁性粒子などが
挙げられる。このような標識の使用を教示する特許としては、米国特許第３，８
１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第
３，９９６，４３５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号
；および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。また、組換え免疫グロブリン
が産生され得る。Ｃａｂｉｌｌｙ，米国特許第４，８１６，５６７号；およびＱ
ｕｅｅｎら、（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８
６：１００２９−１００３３を参照のこと。

【００７２】本発明の抗体はまた、治療目的（例えば、自己免疫応答を阻害する）ために、
生物（例えば、ヒト患者）に投与され得る。その抗体が惹起される種とは異なる
生物に投与される抗体は、しばしば免疫原性である。従って、例えば、ヒトに投
与されるマウス抗体は、しばしば、複数回の投与の際に、抗体に対する免疫学的
応答（例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答）を誘導する。この抗体の免
疫原性特徴は、この抗体の部分または全てをヒト配列に特徴的に変更し、それに
より、キメラ抗体またはヒト抗体をそれぞれ産生することによって減少される。

【００７３】キメラ抗体は、ヒト部分および非ヒト部分を含む免疫グロブリン分子である。
より詳細には、ヒト化キメラ抗体の抗原結合領域（または可変領域）は、非ヒト
供給源（例えば、マウス）に由来し、そしてこのキメラ抗体の定常領域（これは
、免疫グロブリンに生物学的エフェクター機能を付与する）は、ヒト供給源に由
来する。このキメラ抗体は、非ヒト抗体分子の抗原結合特異的およびヒト抗体分
子によって付与されたエフェクター機能を有するはずである。キメラ抗体を生成
する多数の方法は、当業者に周知である（例えば、米国特許第５，５０２，１６
７号、同第５，５００，３６２号、同第５，４９１，０８８号、同第５，４８２
，８５６号、同第５，４７２，６９３号、同第５，３５４，８４７号、同第５，
２９２，８６７号、同第５，２３１，０２６号、同第５，２０４，２４４号、同
第５，２０２，２３８号、同第５，１６９，９３９号、同第５，０８１，２３５
号、同第５，０７５，４３１号および同第４，９７５，３６９号を参照のこと）
。代替アプローチは、非ヒト化抗体のＣＤＲ領域を、組換えＤＮＡ技術によって
ヒト定常領域に結合することによる、ヒト化抗体の生成である。Ｑｕｅｅｎら、
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３
３（１９８９）およびＷＯ９０／０７８６１を参照のこと。

【００７４】１つの好ましい実施態様において、組換えＤＮＡベクターが使用されて、本発
明のペプチドに対する抗体を産生する細胞株がトランスフェクトされる。新規な
組換えＤＮＡベクターは、この細胞株の免疫グロブリン定常領域をコードする遺
伝子の全てまたは部分を置換する「置換遺伝子」（例えば、置換遺伝子は、ヒト
免疫グロブリンまたは特定の免疫グロブリンクラスの定常領域の全てまたは部分
をコードし得る）、および抗体産生細胞内の免疫グロブリン配列との標的化相同
組換えを可能にする「標的配列」を含む。

【００７５】別の実施態様において、組換えＤＮＡベクターが使用されて、所望のエフェク
ター機能（例えば、ヒト免疫グロブリンの定常領域）を有する抗体を産生する細
胞株がトランスフェクトされ、この場合は、この組換えベクターに含まれる置換
遺伝子は、抗体の領域の全てまたは部分をコードし得、そしてこの組換えベクタ
ーに含まれる標的配列は、抗体産生細胞内の相同組換えおよび標的化された遺伝
子の改変を可能にする。いずれかの実施態様において、可変領域または定常領域
の一部のみが置換される場合、得られるキメラ抗体は、同じ抗原を規定し得、そ
して／またはなお変更されるかもしくは改良される同じエフェクター機能を有し
得、その結果、このキメラ抗体は、より大きな抗原特異性、より大きな親和性結
合定数、増大したエフェクター機能、またはトランスフェクトされた抗体産生細
胞株による増大した分泌および産生などを実証し得る。

【００７６】別の実施態様において、本発明は、完全なヒト抗体を提供する。ヒト抗体は、
全体的に、特徴的なヒトポリペプチド配列からなる。本発明のヒト抗体は、広範
な種々の方法を使用する際に産生され得る（例えば、Ｌａｒｒｉｃｋら、米国特
許第５，００１，０６５号を参照のこと）。１つの好ましい実施態様において、
本発明のヒト抗体は、トリオーマ（ｔｒｉｏｍａ）細胞で最初に産生される。次
いで、この抗体をコードする遺伝子がクローニングされ、そして他の細胞、特に
、非ヒト哺乳動物細胞において発現される。トリオーマ技術によってヒト抗体を
産生するための一般的なアプローチは、Ｏｓｔｂｅｒｇら、（１９８３）Ｈｙｂ
ｒｉｄｏｍａ２：３６１−３６７、Ｏｓｔｂｅｒｇ，米国特許第４，６３４，
６６４号、およびＥｎｇｅｌｍａｎら、米国特許第４，６３４，６６６号によっ
て記載されている。この方法によって得られる抗体産生細胞株は、トリオーマと
呼ばれる。なぜなら、これらは、３つの細胞（２つのヒト細胞および１つのマウ
ス細胞）に由来するからである。トリオーマは、ヒト細胞から作製された本来の
ハイブリドーマより安定に抗体を産生することが見出されている。

【００７７】（処方および投与）本発明のペプチドまたは抗体（代表的には、モノクローナル抗体）およびその
薬学的組成物は、哺乳動物（特に、ヒト）に投与して、有害な免疫炎症性応答（
特に、自己免疫応答に関連するもの）を処置および／または予防するために有用
である。３０を超える自己免疫疾患が現在公知であり、これらの疾患には、重症
筋無力症（ＭＧ）、多発性硬化症（ＭＳ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）
、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）などが挙げ
られる。適切な処方は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ
ｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＭａｒｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，Ｐ
ｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ，第１７版（１９８５）に見出される。

【００７８】本発明の免疫原性ペプチドまたは抗体は、予防的に投与されるか、または疾患
に既に罹患している個体に投与される。ペプチド組成物は、このペプチドが由来
するケモカインレセプター分子に対する有効な免疫応答を誘発するに十分な量で
、患者に投与される。有効な免疫応答は、炎症の部位へのＴ細胞の漸増を阻害す
るものである。これを達成するに適切な量は、「治療的に有効な用量」または「
免疫学的に有効な用量」と規定される。この使用に有効な量は、例えば、ペプチ
ド組成、投与の様式、処置される疾患の状態および重篤度、患者の体重および健
康の一般的な状態、ならびに処方する医師の判断に依存するが、開始免疫化（治
療的または予防的投与のため）のための範囲は、一般的には、７０ｋｇの患者あ
たり約０．１ｍｇ〜約１．０ｍｇ、より一般的には、７０ｋｇの体重あたり約０
．５ｍｇ〜約０．７５ｍｇである。追加免疫投薬量は、代表的には、患者の応答
および状態に依存して、数週間から数ヶ月間にわたって追加免疫レジメを使用し
て約０．１ｍｇ〜約０．５ｍｇのペプチドである。適切なプロトコルは、０、４
、２、６、１０および１４週での注射、続いて、２４週および２８週でのさらな
る追加免疫注射を含む。

【００７９】本発明のペプチドおよび組成物は、一般的に、重症疾患状態、すなわち、生命
を脅かすかまたは潜在的に生命を脅かす状況において使用され得ることに、留意
されるべきである。このような場合、外来性物質の最小化およびペプチドの相対
的な非毒性性質を顧みて、治療する医師によって、実質的に過剰なこれらのペプ
チド組成物を投与することが可能であり、そしてその投与が所望され得ると思わ
れ得る。

【００８０】治療的使用のために、投与は、自己免疫疾患の最初の徴候時に開始されるべき
である。これに、少なくとも症状が実質的に排除されるまで、およびその後の期
間に、追加免疫容量が続く。いくつかの状況において、追加免疫用量の前に負荷
投与量が必要とされ得る。生じる免疫応答は、治癒を助けるか、または少なくと
も部分的に症状および／もしくは合併症を静止するのを助ける。ペプチドを含有
するワクチン組成物は、この疾患に感受性であるか、さもなければこの疾患の危
険性に有る患者に、標的ケモカインレセプター抗原に対する免疫応答を惹起する
ために予防的に投与される。

【００８１】薬学的組成物（ペプチドまたは抗体のいずれかを含有する）は、非経口投与ま
たは経口投与を意図される。好ましくは、この薬学的組成物は、非経口的に、例
えば、皮下的、皮内的、または筋肉内的に投与される。従って、本発明は、非経
口投与のための組成物を提供し、この組成物は、受容可能なキャリア、好ましく
は水性キャリア中に溶解または懸濁された免疫原性ペプチドの溶液を含む。種々
の水性キャリアが使用され得、例えば、水、緩衝化水、０．４％生理食塩水、０
．３％グリシン、ヒアルロン酸などである。これらの組成物は、従来の、周知の
滅菌化技術によって滅菌され得るか、または濾過滅菌される。得られる水溶液は
、そのまま使用のためにパッケージングされ得るか、または凍結乾燥され得、凍
結乾燥した調製物は、投与の前に、滅菌溶液と合わせられる。この組成物は、適
切な生理学的条件に必要な薬学的に受容可能な補助物質（例えば、緩衝化剤、張
度調整剤、湿潤化剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナト
リウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン
酸トリエタノールアミンなど）を含み得る。

【００８２】固体組成物について、従来の非毒性固体キャリアが使用され得、例えば、薬学
的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム
、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸
マグネシウムなどが挙げられる。経口投与について、薬学的に受容可能な非毒性
組成物は、任意の正常に使用される賦形剤（例えば、以前に列挙したキャリア）
および一般には、１０〜９５％の活性成分（すなわち、本発明の１つ以上のペプ
チド）、およびより好ましくは、２５％〜７５％の濃度で組み込むことによって
形成される。

【００８３】上記のように、ペプチド組成物は、このペプチドに対する免疫応答を誘導する
ことが意図される。従って、免疫応答を最大化するに適した組成物および投与方
法が好ましい。例えば、ペプチドは、キャリアに連結されてか、または活性なペ
プチド単位のホモポリマーもしくはヘテロポリマーとして、宿主（ヒトを含む）
に導入され得る。あるいは、ポリペプチドの「カクテル」が使用され得る。１つ
より多いポリペプチドの混合物は、増加した免疫学的反応の利点を有し、そして
、異なるペプチドがポリマーを形成するために使用される場合、多数のエピトー
プに対して抗体を誘導するさらなる能力を有する。例えば、α鎖およびβ鎖の細
胞外領域からの配列を含むポリペプチドは、組み合わせて使用され得る。有用な
キャリアは当該分野で周知であり、そして例えば、ＫＬＨ、サイログロブリン、
ヒト血清アルブミンのようなアルブミン、破傷風トキソイド、ポリ（リジン：グ
ルタミン酸）のようなポリアミノ酸、インフルエンザ、Ｂ型肝炎ウイルスコアタ
ンパク質、Ｂ型肝炎ウイルス組換えワクチンなどが挙げられる。

【００８４】１つより多いペプチドの使用は、本発明のポリペプチドに対する免疫応答を増
大するために特に有用である。以下に実証されるように、このポリペプチドは、
患者において発現される自己ケモカインレセプター分子に由来し得るが、免疫応
答を誘導し得る。いくつかの場合において、自己ポリペプチドに対する免疫応答
は、十分に強くなくてもよい。これらの場合において、ポリペプチドに対する寛
容性を破壊することが必要であり得る。組成物は、外来ポリペプチドおよび自己
ポリペプチドの両方に対して免疫応答を誘導する自己ポリペプチドに十分類似の
１つ以上の外来ポリペプチドを含み得る（Ｍａｍｕｌａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．１４９：７８９−７９５（１９９２）を参照のこと）。適切なタンパク質とし
ては、この目的のために設計された合成ポリペプチド、または天然の供給源由来
の同種タンパク質（例えば、自己ポリペプチドと同じ遺伝子座で異なる対立遺伝
子によってコードされるタンパク質）からのポリペプチド配列が挙げられる。

【００８５】任意の種々の非特異的免疫応答エンハンサーが、本発明のワクチンにおいて使
用され得る。例えば、アジュバントが含まれ得る。ほとんどのアジュバントは、
迅速な異化から抗原を保護するように設計された物質（例えば、水酸化アルミニ
ウムまたはミネラルオイル）、および免疫応答の刺激因子（例えば、リピドＡ、
ＢｏｒｔａｄｅｌｌａｐｅｒｔｕｓｓｉｓまたはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ由来のタンパク質）を含む。適切なアジュバントは
、例えば、以下のものが市販されている：フロイント不完全アジュバントおよび
完全アジュバント（ＤｉｆｃｏＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，
ＭＩ）；ＭｅｒｃｋＡｄｊｕｂｖａｎｔ６５（ＭｅｒｋａｎｄＣｏｍｐ
ａｎｙ，Ｉｎｃ．，Ｒａｈｗａｙ，ＮＪ）；水酸化アルミニウムゲル（ミョウバ
ン）またはリン酸アルミニウムのようなアルミニウム塩；カルシウム、鉄または
亜鉛の塩；アシル化チロシンの不溶性懸濁物；アシル化糖；カチオン的またはア
ニオン的に誘導体化されたポリサッカリド；ポリホスファゼン；生分解性ミクロ
スフェア；モノホスホリルリピドＡおよびクイル（ｑｕｉｌ）Ａ。ＧＭ−ＣＳＦ
またはインターロイキン−２、インターロイキン−７、またはインターロイキン
−１２のようなサイトカインもまた、アジュバントとして使用され得る。他の適
切なアジュバントとしては、以下が挙げられる：Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−
スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ｎｏｒ−
ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ＣＧＰ１１６３７、ｎｏｒ−
ＭＤＰともいわれる）、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌアラニル−Ｄ−イソグルタミ
ニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３
−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＣＧＰ１９８３５Ａ，ＭＴ
Ｐ−ＰＥといわれる）、およびＲＩＢＩ（これは、２％スクアレン／Ｔｗｅｅｎ
８０エマルジョン中に細菌から抽出された３つの成分（モノホスホリルリピド
Ａ、トレハロースジミコレート、および細胞壁骨格（ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ）
を含む）。アジュバントの有効性は、免疫原性ペプチドに対して指向される抗体
の量を測定することによって決定され得る。

【００８６】特に有用なアジュバントおよび免疫化スケジュールは、Ｋｗａｋら、Ｎｅｗ
Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２７−１２０９−１２０５（１９９２）に記載される。
そこに記載される免疫学的アジュバントは、リン酸緩衝化生理食塩水中に、５％
（ｗｔ／ｖｏｌ）スクアレン、２．５％ＰｌｕｒｏｎｉｃＬ１２１ポリマーお
よび０．２％ポリソルベートを含む。

【００８７】薬学的処方物中の本発明の免疫学的ペプチドの濃度は、幅広く（すなわち、約
０．１％未満、通常は約２％または少なくとも約２％からほとんど２０％から５
０％以上（重量で））変動し得、そして選択される投与の特定の態様に従って、
液体体積、粘度などによって主に選択される。

【００８８】本発明のペプチドはまた、弱毒化ウイルス宿主（例えば、痘疹または鶏痘）に
よって発現され得る。このアプローチは、本発明のペプチドをコードするヌクレ
オチド配列を発現するために、ベクターとしてのワクシニアウイルスの使用を含
む。宿主への導入の際に、組換えワクシニアウイルスは、免疫原性ペプチドを発
現し、それにより免疫応答を誘発する。免疫化プロトコルに有用なワクシニアベ
クターおよび方法は、米国特許第４，７２２，８４８号に記載される。別のベク
ターはＢＣＧである（ＢａｃｉｌｌｅＣａｌｍｅｔｔｅＧｕｅｒｉｎ）。Ｂ
ＣＧベクターはＳｔｏｖｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ３５１：４５６−４６０（１９
９１））に記載される。本発明のペプチドの治療的投与または免疫化に有用な広
範な種々の他のベクター（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉベクター
など）は、本明細書中の記載から、当業者に明らかである。

【００８９】薬学的組成物またはワクチンは、上記の１つ以上のポリペプチドをコードする
ＤＮＡを含み得、その結果、このポリペプチドはインサイチュで生成される。上
記のように、このＤＮＡは、当業者に公知の任意の種々の送達系内に存在し得、
この系としては、核酸発現系、細菌およびウイルス発現系が挙げられる。多くの
遺伝子送達技術が当該分野で周知である（例えば、Ｒｏｌｌａｎｄ，Ｃｒｉｔ，
Ｒｅｖ，Ｔｈｅｒａｐ．ＤｒｕｇＣａｒｒｉｅｒＳｙｓｔｅｍｓ１５：１
４３−１９８、１９９８およびそこに引用される参考文献に記載される技術）。
適切な核酸発現系は、患者における発現に必要なＤＮＡ配列（例えば、適切なプ
ロモーターおよび終結シグナル）を含む。細菌送達系は、その細胞表面上にポリ
ペプチドの免疫原性部分を発現するか、またはこのようなエピトープを分泌する
、細菌（例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓ−Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｒｉｎ）の投
与を含む。好ましい実施態様において、このＤＮＡは、ウイルス発現系（例えば
、ワクシニアウイルスもしくは他のポックスウイルス、レトロウイルス、または
アデノウイルス）を使用して導入され得、これらは、非病原性（欠損性）の複製
コンピテントウイルスの使用を含み得る。適切な系は、例えば、以下に開示され
る：Ｆｉｓｈｅｒ−Ｈｏｃｈら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ８６：３１７−３２１、１９８９；Ｆｌｅｘｎｅｒら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．５６９：８６−１０３、１９８９；Ｆｌｅｘｎｅｒら、Ｖａｃ
ｃｉｎｅ８：１７−２１、１９９０；米国特許第４，６０３，１１２号、同第
４，７６９，３３０号、および同第５，０１７，４８７号；ＷＯ８９／０１９７
３；米国特許第４，７７７，１２７；ＧＢ２，２００，６５１；ＥＰ０，３
４５，２４２；ＷＯ９１／０２８０５；Ｂｅｒｋｎｅｒ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅｓ６：６１６−６２７、１９９８；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら、Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ２５２：４３１−４３４、１９９１；Ｋｏｌｌｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：２１５−２１９、１９９４；Ｋａｓｓ−Ｅｉ
ｓｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：１１４９
８−１１５０２、１９９３；Ｇｕｚｍａｎら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ８８：
２８３８−２８４８，１９９３；ならびにＧｕｚｍａｎら、Ｃｉｒ．Ｒｅｓ．７
３：１２０２−１２０７、１９９３。ＤＮＡをこのような発現系に組み込むため
の技術は、当業者に周知である。このＤＮＡはまた、例えば、Ｕｌｍｅｒら、Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ２５９：１７４５−１７４９、１９９３によって記載され、そし
てＣｏｈｅｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５９；１６９１−１６９２に概説されるよう
に、「裸」であり得る（Ｗｏｌｆｆら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４７：１４６５−１
４６８（１９９０）ならびに米国特許第５，５８０，８５９号および同第５，５
８９，４６６もまた参照のこと）。裸のＤＮＡの取り込みは、ＤＮＡを生分解性
ビーズ（これは、細胞に効率的に輸送される）上にコーティングすることによっ
て増大され得る。

【００９０】血清半減期を増大するために、このペプチドはまた、被包され得るか、リポソ
ームの内腔に導入され得るか、コロイドとして調製され得るか、またはこのペプ
チドの延長された血清半減期を提供する他の従来の技術が使用され得る。種々の
方法は、例えば、Ｓｚｏｋａら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ
．９：４６７（１９８０）、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１
，７２８号および同第４，８３７，０２８号に記載されるように、リポソームを
調製するために利用可能である。

【００９１】本発明のペプチドまたは抗体はまた、診断目的のために使用され得る。例えば
、ペプチドは、自己抗体をスクリーニングして、ワクチン接種が有効であること
を確証するために使用され得る。抗体は、疾患に関連する特定のケモカインレセ
プター分子の存在を検出するために使用され得る。

【００９２】以下の実施例は、限定のためではなく、例示のために提供される。

【００９３】（実施例１）この実施例は、ＣＸＣＲ３活性化のための再現可能なバイオアッセイを記載す
る。

【００９４】ヒトＣＸＣＲ３についてのｃＤＮＡを発現するＮＳＯ−１細胞の安定な株トラ
ンスフェクタントを、標準的な技術に従って調製した。トランスフェクタント上
のｈｕ−ＣＸＣＲ３の表面発現は、トランスフェクトしていない親ＮＳＯ−１細
胞と比べて、マウス抗ヒトＣＸＣＲ３モノクローナル抗体（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅ
ｍｓ）を使用するＦＡＣＳ染色によって確認した。

【００９５】ＣＸＣＲ３活性化のためのバイオアッセイを確立するために、ＣＸＣＲ３トラ
ンスフェクタント細胞を、ヒトＩＰ−１０、またはマウス抗ヒトＣＸＣＲ３抗体
のいずれかとともに培養し、そして細胞の生理学的応答を、マイクロフィジオメ
ーターを使用して測定した。この機械は、細胞表面上のリガンドレセプター結合
から生じる細胞培養物の細胞外培地のｐＨにおける変化を測定する。これらの細
胞外酸性化速度測定は、抗原特異的Ｔ細胞活性化およびＴ細胞エピトープ同定の
マーカーとして、以前は使用されていた。現在のアッセイを使用して、ＩＰ−１
０またはアゴニスト抗ＣＸＣＲ３抗体への結合に関与するケモカインまたはケモ
カインレセプターペプチドの同定のための、生物学的読み出しを提供する。

【００９６】この実験は、図１に示したように、ヒトＩＰ−１０および抗ＣＸＣＲ３抗体の
両方に誘引された実質的な酸性速度が、ＣＸＣＲ３トランスフェクタントにおい
て変化することを示した。重要なことに、同じリガンドは，トランスフェクトし
ていないＮＳＯ−１細胞の酸性化速度における変化を誘導しない（図１）。

【００９７】（実施例２）この実施例は、ヒトＣＸＣＲ３由来ペプチドの合成を記載する。

【００９８】ヒトＣＸＣＲ３の表面部分の模式図を、図２に示す。レセプターは、４つの表
面部分、４つの細胞内部分、および７つの膜貫通部分を有する。表面部分を、Ｎ
−末端から始めてＳＰ−１、ＳＰ−２、ＳＰ−３およびＳＰ−４と命名した。

【００９９】表１に示したペプチドはこれらの４つの表面部分に由来し、固相ペプチド合成
によって調製した。ペプチドの名前は、それらが由来するＣＸＣＲ３の表面部分
に基づく。例えば、ＳＰ−１−１は、このペプチドが、ＣＸＣＲ３タンパク質の
第１の部分に由来することを意味する。

【０１００】（表１）

【０１０１】

【表１】これらのレセプター由来ペプチドの抗ＣＸＣＲ３抗体を結合する能力を、標準
的なＥＬＡＩＳＡフォーマットを使用して評価した。このペプチドを、０．１Ｍ
炭酸水素緩衝液中に溶解し、そして９６ウェルＥＬＩＳＡプレート上に一晩コー
トした。過剰なペプチドを取り除き、そしてウェルにおける非特異的結合部位を
、０．１％ウシ血清アルブミンによってブロックした。抗ＣＸＣＲ３抗体（０．
５μｇ／ウェル）をこれらのウェルに添加し、そして２時間インキュベートした
。過剰な抗体を、ＰＢＳで洗浄することによって取り除いた。ＨＲＰ結合体化ヤ
ギ抗マウス抗体を、検出のための二次抗体として使用した。７つのレセプター由
来ペプチドのうちの２つ（いわゆる、ＳＰ−１−３およびＳＰ−４−１）は、抗
ＣＸＣＲ３抗体への実質的な結合を示した。抗ＣＸＣＲ３抗体が７つのレセプタ
ー由来ペプチドのうちの２つに結合したという結論のためのさらなる支持は、同
じ相互作用のＦＡＣＳ分析によって提供された。これらの研究は、レセプター由
来ペプチドＳＰ−４−１が、抗ＣＸＣＲ３抗体のＣＸＣＲ３細胞株トランスフェ
クタントへの結合を強力にブロックしたことを明らかにした。レセプター由来ペ
プチドＳＰ−１−３は、この抗体のＣＸＣＲ３トランスフェクタントへの結合の
部分的な阻害を提供した。対照的に、抗体非結合レセプター由来ペプチドである
ＳＰ−２−１は、ＣＸＣＲ３トランスフェクタントへの結合を阻害できなかった
。本明細書中に記載されるデータは、抗ＣＸＣＲ３抗体が、ＣＸＣＲ３細胞外ド
メインの２つの別々のペプチド部分に結合し得ることを、包括的に実証する。

【０１０２】（実施例３）この実施例は、本発明のペプチドワクチンが、マウスにおけるＥＡＥを予防す
るために使用され得ることを実証する。

【０１０３】（動物実験のためのプロトコル：）ＳＪＬマウス（６〜８週齢）を、ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ
から得た。これらを、２週間、検疫所に維持した。これらのマウスは、プロテオ
リピドタンパク質（ＰＬＰ）からのペプチドで免疫化した場合に、ＥＡＥを発症
した。これらのマウスの免疫化に使用したペプチド配列は、ＰＬＰ１３９−１
５１であり、そしてＣ末端にてアミド化する（ＨＳＬＧＷＬＧＨＰＤＫＦ−ＮＨ
２）。この実験について、疾患の誘導を、０日目とみなす。疾患の誘導の３週間
前に、このマウスに、完全フロイントアジュバントと混合したヒトＣＸＣＲ３Ｓ
−Ｐ４−１ペプチドをワクチン接種した。

【０１０４】（処置のためのペプチドＣＦＡエマルジョンの調製）４ｍｇのヒトＣＸＣＲ３ＳＰ−４−１ペプチドを、１ｍｌのリン酸緩衝化生
理食塩水（ｐＨ７．４、ＰＢＳ）中に溶解した。ＶＷＲ（Ｄｉｆｃｏ，Ａｄｊｕ
ｖａｎｔＣｏｍｐｌｅｔｅＨ３７ＲＡ）から得られるＣＦＡの１ｍｌを、ペ
プチド溶液に添加し、そしてこの混合物を、微細先端ソニケーターを用いて５秒
間超音波処理した。このエマルジョンを、２５ゲージ針に適合した１ｍｌシリン
ジ中にとった（２本のシリンジが必要）。各マウスに、１００μｌのエマルジョ
ン（ｅｍｕｌｓｉｎ）を、後ろ足の近くの各側腹部の下に、皮下注射によって与
えた（マウスあたりの総容量＝２００μ、マウスあたりの総ペプチド＝２００μ
ｇ）。

【０１０５】（ＣＦＡ単独の調製：）１ｍｌのＰＢＳおよび１ｍｌのＣＦＡを混合し、そして５秒間超音波処理し、
そしてエマルジョンを、２５ゲージの針に適合した１ｍｌシリンジにいれる。各
マウスに、１００μｌのエマルジョンを、後ろ足の近くの各側腹部の下に、皮下
注射によって与えた（マウスあたりのＣＦＡの総容量＝２００μ）。

【０１０６】（疾患の誘導：）等量のＣＦＡをペプチドの水溶液（ＰＢＳ中４ｍｇ／ｍｌ）に添加し、そして
混合物を５秒間超音波処理した。このエマルジョンを、２５ゲージの針に適合し
た１ｍｌシリンジにいれ、そしてマウスのフットパッドおよび背中に皮下注射し
た（マウスあたり全２００μｌ）。

【０１０７】（ＳＰ４−１ペプチドに対する抗体応答の試験）マウスを、０週目および５週目で採血し、そして血清を、ヒトＣＸＣＲ３Ｓ
Ｐ−４−１ペプチドに対する抗体の存在について、ＥＬＩＳＡによって試験した
。簡単に述べると、０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム緩衝液に溶解したＳＰ４−１ペ
プチドを、９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに一晩プレートした。このプレート上
の非特異的結合部位を、ＰＢＳ中０．１％ウシ血清アルブミン溶液でコートした
。このウェルを洗浄し、そして血清（ＰＢＳ中に希釈した）をこのウェルに添加
し、そして室温にて１．５時間インキュベートした。次いで、このウェルを洗浄
し、そしてＨＲＰ結合体化抗マウス免疫グロブリン抗体を使用して、抗ＳＰ４−
１抗体の存在を検出した。このＥＬＩＳＡの結果は、ＳＰ４−１処理したマウス
が、このペプチドに対する抗体応答を示すことを明らかに示した。

【０１０８】（ＥＡＥ研究の結果）Ｓｐ４−１を、上記のＥＡＥの誘導の２１日前および１４日前にＣＦＡを共に
投与した（図３）。この結果を図４に示す。ほとんどの未処置のマウスおよびＣ
ＦＡ処置マウスは、ＥＡＥの臨床的な症状を示したが、ＣＦＡ中のＳＰ４−１で
処置した８匹のマウスのうち７匹は臨床的な症状を示さなかったと見ることがで
きる。

【０１０９】上記の実施例は、本発明を例示するために提供されるが、その範囲は限定しな
い。本発明の他の改変物は、当業者に容易に明らかであり、そして添付の特許請
求の範囲によって包含される。本明細書中に引用される全ての刊行物、特許、お
よび特許出願は、本明細書中に参考として援用される。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、抗ヒトＣＸＣＲ３ＭａｂまたはＩＰ−１０のＣＸＣＲ３−ＮＳＯト
ランスフェクタントへの結合に起因する、酸性化速度の変化を示す。５×１０⁵
のＣＸＣＲ３−ＮＳＯトランスフェクタント細胞および非トランスフェクト「Ｂ
ＯＮＺＯ−ＮＳＯ」細胞（ネガティブコントロール）を、寒天と共にマイクロフ
ィジオメーター（ｍｉｃｒｏｐｈｙｓｉｏｍｅｔｅｒ）チャンバーにスポットし
、そして１、５、１０ｍｇ／ｍｌの抗ＣＸＣＲ３（図１ａ）またはＩＰ−１０（
図１ｂ）を１０分間ポンプ注入した。ＮＳＯ−ＣＸＣＲ３トランスフェクタント
細胞において、抗ＣＸＣＲ３による酸性化速度の用量依存性の増加が存在する。
非トランスフェクトＢＯＮＺＯ−ＮＳＯ細胞は、抗ＣＸＣＲ３抗体またはＩＰ−
１０のいずれによっても酸性化速度の変化に、全く変化を示さなかった。矢印は
、細胞にリガンドを添加した時間を示す。

【図２】図２は、７回の膜貫通Ｇタンパク質結合ヒトＣＸＣＲ３の構造を示す。細胞外
ドメインのアミノ酸のみを示す。

【図３】図３は、本発明のペプチドワクチンを使用してマウスにおいてＥＡＥを予防す
る実験の模式図である。

【図４】図４は、本発明のペプチドワクチンを使用してマウスにおいてＥＡＥを予防す
る実験の結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ファーリン，ウォルターフランス国エフ−06600 アンティーブシェミンデモレ， 520，バティメンデー，アパルトマン 422，レジデンスアドリアナ (72)発明者アリミリ，サブハシンアメリカ合衆国カリフォルニア 94555，フレモント，リッジウッドドライブ 4789 Ｆターム(参考） 4C085 AA03 BB11 CC21 EE06 FF01 GG01

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】患者においてケモカインレセプター分子に対する免疫応答を
誘導する方法であって、該方法は、アジュバントおよびケモカインレセプター分
子の細胞外領域由来の免疫原性ケモカインレセプターポリペプチドを含む、免疫
学的有効量の薬学的組成物を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】前記ケモカインレセプターが、ＣＸＣＲ３である、請求項１
に記載の方法。
【請求項３】前記免疫原性ペプチドが、立体配置的に拘束される、請求項
１に記載の方法。
【請求項４】前記免疫原性ペプチドが、環化される、請求項１に記載の方
法。
【請求項５】前記免疫原性ケモカインレセプターペプチドが、約１０〜約
５０の残基からなる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】前記免疫原性ケモカインレセプターペプチドが、約１５〜約
３０の残基からなる、請求項１に記載の方法。
【請求項７】前記免疫原性ケモカインレセプターポリペプチドが、以下【化１】からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項８】前記投与が、非経口的である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】前記アジュバントが、ミョウバンである、請求項１に記載の
方法。
【請求項１０】患者において炎症部位へのＴ細胞の補充を阻害する方法で
あって、該方法は、アジュバントおよびケモカインレセプター分子の細胞外領域
由来の免疫原性ケモカインレセプターペプチドを含む、免疫学的有効量の薬学的
組成物を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１】前記ケモカインレセプターが、ＣＸＣＲ３である、請求項
１０に記載の方法。
【請求項１２】前記免疫原性ペプチドが、立体配置的に拘束される、請求
項１０に記載の方法。
【請求項１３】前記免疫原性ペプチドが、環化される、請求項１０に記載
の方法。
【請求項１４】前記免疫原性ケモカインレセプターペプチドが、約１０〜
約５０の残基からなる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】前記免疫原性ケモカインレセプターペプチドが、約１５〜
約３０の残基からなる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１６】前記免疫原性ケモカインレセプターポリペプチドが、以下【化２】からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１７】前記炎症応答が、多発性硬化症に関連する、請求項１０に
記載の方法。
【請求項１８】アジュバントおよびケモカインレセプター分子の細胞外領
域由来の単離された免疫原性ケモカインレセプターポリペプチドを含む、薬学的
組成物。
【請求項１９】前記ケモカインレセプターが、ＣＸＣＲ３である、請求項
１８に記載の組成物。
【請求項２０】前記免疫原性ペプチドが、立体配置的に拘束される、請求
項１８に記載の組成物。
【請求項２１】前記免疫原性ペプチドが、環化される、請求項１８に記載
の組成物。
【請求項２２】前記免疫原性ケモカインレセプターペプチドが、約１０〜
約５０の残基からなる、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２３】前記免疫原性ケモカインレセプターペプチドが、約１５〜
約３０の残基からなる、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２４】前記免疫原性ケモカインレセプターポリペプチドが、以下【化３】からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する、請求項１８に記載の組成物。