JP2002521062A - ヒトニューロキニン１レセプター遺伝子における遺伝子多形性および疾病の診断および処置におけるその使用 - Google Patents

ヒトニューロキニン１レセプター遺伝子における遺伝子多形性および疾病の診断および処置におけるその使用

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、ヒトＮＫ１Ｒ遺伝子における９個(制御領域に１個、コード領域に２個、フランキングイントロン配列に２個、３'UTR領域に４個)の単一ヌクレオチド多形性、およびそれによりコードされる対応する新規対立性ポリペプチドに関する。本発明はまたＮＫ１Ｒ遺伝子における対立性変異の分析のための方法および材料、および喘息のようなＮＫ１Ｒリガンド介在疾患の診断および処置における該多形性の使用も関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、ヒトＮＫ１Ｒ遺伝子の多形性およびそれによりコードされる対応す
る新規対立遺伝子性ポリペプチドに関する。本発明はまたＮＫ１Ｒ遺伝子におけ
る対立性変化の分析のための方法および材料、および該多形性の、喘息のような
ＮＫ１Ｒリガンド介在疾患の診断および処置における使用に関する。
【０００２】 読者は、バックグラウンドの情報として以下の刊行物を言及する：ヒトサブス
タンスＰおよびニューロメディンＫレセプターの１次構造および遺伝子組織化、
、K Takahashi et al Eur J Biochem 204, 1025-1033(1992); ヒトニューロキニ
ン１レセプターの二つのイソ形による細胞内エフェクターの特異な活性化、TM F
ong et al Molecular Pharmacology 41, 24-30 (1992); ヒトサブスタンスＰレ
セプター(ＮＫ−１)；遺伝子の組織化、染色体局在、およびｃＤＮＡクローンの
機能的発現、Gerard et al Biochemistry 30, 10640-10646 (1991); ヒト肺ＮＫ
−１レセプターｃＤＮＡの単離および特徴付け、Hopkins et al, Biochem Bioph
ys Res Commun 180, 110-1117 (1991); ニューロキニンレセプター機能の変異分
析。TM Fong et al Can J Physiol Pharmacol 73, 860-865 (1995); Ｇプロテイ
ン結合レセプターの構造および機能、CD Strader et al Annual Reviews Bioche
mistry 63, 101-132 (1994); アミン作動性Ｇプロテイン結合レセプターの評価
および構造、D Donnelley et al Receptors and Channels 2, 61-78 (1994)。
【０００３】 ＮＫ１Ｒポリペプチドは、２つのイソ形で存在することが既知であり、それは
恐らく一つのＮＫ１Ｒ遺伝子の別にスプライスされた変異体である、TM Fong et
al Molecular Pharmacology 41, 24-30 (1992)参照。ＮＫ１Ｒをコードするｃ
ＤＮＡは、国際特許出願WO92/16547、Children's Medical Center; および欧州
特許出願EP510878、Merckにより公開されている。
【０００４】 ＮＫ１Ｒの完全なゲノム配列は現在既知ではないが、エクソン１、３および５
を含む領域は、下記のようにEMBLにより公開されている：エクソン１, Accessio
n Number X65177, 2472bp; エクソン３, Accession Number X65179, 373bp; エ
クソン５, Accession Number X65181, 3292bp。Accession Number X65177とは別
に、本明細書に記載の全ての位置は、別に記載しない限り、または内容とは別で
ない限り、その中に示される位置に関連する。発明者らは、EMBL Accession Num
ber X65177に示される配列の一部が不正確であることを発見している。本発明者
らによるゲノムPCR生産物の配列決定は、EMBL Accession Number X65177の２６
２−７５８位が不正確であり、データベースのBlastサーチは、ヒトc-myc前ガン
遺伝子と類似の遺伝子をコードするEMBL Accession Number U37688の１２３１−
１７２９位に実際対応する誤った配列を示すことを示している。
【０００５】 ヒトＮＫ１Ｒ遺伝子のプロモーター領域を含む配列は、“Structure, express
ion and second messenger-mediated regulation of the human and rat substa
nce P receptors and their genes”, JE Krause et al Regulatory Peptides 4
6, 59-66 (1993), (図２参照 − ヒトおよびラットサブスタンスＰレセプター
遺伝子推定プロモーター領域の保存)。本発明者らは、この配列が正しいことを
確認している。この公開された配列には受託番号は付けられていない。EMBL X65
177の配列の誤りの観点から、正確な配列を本明細書に配列番号１として包含さ
せる。この配列は、本明細書で同定したＮＫ１Ｒ遺伝子の新規プロモーターおよ
びエクソン１(＋イントロンジャンクション領域)多形性変異体の位置に関する参
照配列として使用する。
【０００６】 配列番号１に関して、ヌクレオチド１−２６１はX65177の配列１−２６１に対
応し、配列２６２−８３３はX65177の配列２６２−７５８を置き換え(完全配列
長に７５ヌクレオチドの付加をもたらす)、配列８３４−２５４７はX65177の配
列７５９−２４７２に対応する。エクソン１ ATGは２０２９で開始し、２４１７
位で停止する。
【０００７】 一つの試みは、特定の薬剤での治療が最も適するかを同定することを助けるた
めに多形成の知識を使用する(これはしばしば“薬理遺伝学”と呼ばれる)。薬理
遺伝学はまた薬剤選択過程を助けるための薬学的研究にも使用できる。多形性は
ヒトゲノムの地図作成に使用し、疾患の遺伝的素因を解明する。読者は、薬理遺
伝学および多形性検出の他の使用の詳細のバックグラウンドとして以下の参考文
献を指標とする：Linger et al. (1997), Clinical Chemistry, 43, 254; Marsh
all (1997), Nature Biotechnology, 15, 1249; 国際特許出願WO97/40462, Spec
tra Biomedical; およびSchager et al. (1998), Nature Biotechnology, 16, 3
3。
【０００８】 単模式種は、一つの(父系または母系)染色体上の結合した多形の部位(遺伝子
内のような)として見つけられる対立遺伝子のセットである。遺伝子内の組換え
が無作為である場合、２ｎ(式中、２は各SNPにおける対立遺伝子の数およびｎは
ＳＮＰの数)程多い単模式種が存在する。臨床的応答に関連する変異または多形
性の同定のための一つの試みは、目的の集団で同定できる全ての単模式種を使用
した関連実験で行われる。各単模式種の頻度は、その最も稀な対立遺伝子の頻度
により制限され、低い頻度の対立遺伝子のSNPは、低い頻度の単模式種のマーカ
ーとして特に有用である。有害なまたは異常な事象のような特定の臨床的性質と
関連する特定の変異または多形性が集団内の低い頻度である可能性のため、低頻
度ＳＮＰは特にこれらの変異の同定に有用であり得る(例えば：Linkage disequi
librium at the cystathionine beta synthase (CBS) locus and the associati
on between genetic variation at the CBS locus and plasma levels of homoc
ystein. Ann Hum Genet (1998) 62:481-90, De Stefano V, Dekow V, Nicaud V,
Chasse JF, London J, Stansbie D, Humphries SE and Gudnason V; およびVar
iation at the von willebrand factor (cWF) gene lofus is associated with
plasma vWF:Ag levels: identification of three novel single nucleotide po
lymorphisms in the vWF gene promoter. Blood (1999) 93:4277-83, Keightley
AM, Lam YM, Brady JN, Cameron CL, Lillicrap D)、
【０００９】 臨床試験は、医薬に対する患者の応答が、しばしば異質であることを示してい
る。したがって、薬剤設計および治療のための改善された試験の必要性がある。
【００１０】 ポリペプチドにおける点変異は、以下のように言及される：天然アミノ酸(１
または３文字表記を使用する)、位置、新規アミノ酸。(仮説の)例として、“Ｄ
２５Ｋ”または“Asp25Lys”は、２５位のアスパラギン酸(Ｄ)がリジン(Ｋ)に代
わったことを意味する。一つのポリペプチド内の複数の変異は、コンマで分けた
個々の変異の角括弧の中に示す。
【００１１】 本発明は、ＮＫ１Ｒ遺伝子内の単一ヌクレオチド多形性(ＳＮＰ)の発見に基づ
く。本明細書で定義するように、ＮＫ１Ｒ遺伝子はエクソンコード配列、エクソ
ン配列を中断するイントロン配列および、ＮＫ１Ｒ遺伝子のプロモーター要素を
含む３'および５'非翻訳領域(３'UTRおよび５'UTR)配列を含む。
【００１２】 本発明の態様にしたがって、 EMBL ACCESSION NO. X65177における位置により定義されるエクソン１中の２２
８６； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； の１個またはそれ以上の位置でヒトの核酸の配列を決定し、ＮＫ１Ｒ遺伝子にお
ける多形性を参照してヒトの状態を決定することを含む： ヒトのＮＫ１Ｒにおける単一ヌクレオチド多形性の設計のための方法を提供する
。
【００１３】 本発明の他の態様により、 EMBL ACCESSION NO. X65177における位置により定義されるエクソン１中の２２
８６； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置でヒトの核酸の配列を決定し、ＮＫ１Ｒ遺伝子また
はその３'非翻訳領域における多形性を参照してヒトの状態を決定することを含
む： ヒトにおけるＮＫ１Ｒにおける単一ヌクレオチド多形性の診断の方法が提供され
る。
【００１４】 本発明の他の態様において、 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の２３６１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１； の１個またはそれ以上の位置でヒトの核酸の配列を決定し、ＮＫ１Ｒ遺伝子にお
ける多形性を参照してヒトの状態を決定することを含む： ヒトにおけるＮＫ１Ｒ遺伝子の１個またはそれ以上の単一遺伝子多形性の診断の
方法が提供される。
【００１５】 ヒトなる用語は、ＮＫ１Ｒリガンド介在疾患に罹患している、または罹患して
いることが疑われるヒト、およびこのような疾患の素因または感染性を試験し得
る無症状ヒトの両方を含む。各位置において、ヒトは対立遺伝子に関して同型接
合体であり得、またはヒトは異型接合体であり得る。
【００１６】 本発明の一つの態様において、好ましくは、本明細書に記載の診断法は、エク
ソン１における２３６１位での単一ヌクレオチド多形性が、Ｃおよび／またはＴ
の存在であるものである。
【００１７】 本発明の他の態様において、好ましくは、本明細書に記載の診断法は、エクソ
ン３近くの２７１位での単一ヌクレオチド多形性が、Ｇおよび／またはＴの存在
であるものである。
【００１８】 本発明の他の態様において、好ましくは、本明細書に記載の診断法は、エクソ
ン３近くの２７２位での単一ヌクレオチド多形性が、Ｇおよび／またはこの位置
での一つの塩基の欠失の存在であるものである
【００１９】 本発明の他の態様において、好ましくは、本明細書に記載の診断法は、エクソ
ン５における２４５位での単一ヌクレオチド多形性がＣおよび／またはこの位置
での一つの塩基の欠失の存在であるものである。これは前成熟停止およびＣ−末
端２６アミノ酸の欠失をもたらす(下記実施例１参照)。この多形性の存在に関す
る試験は、理論的な考慮に縛られることなく、特に、好ましくはその明白なアミ
ノ酸との関連によるものである。
【００２０】 本発明の他の態様において、好ましくは、本明細書に記載する診断法は、３'U
TRにおける４６１位の単一ヌクレオチド多形性がＧおよび／またはＣの存在であ
るものである。
【００２１】 本発明の他の態様において、好ましくは、本明細書に記載の診断法は、３'UTR
における４９５位の単一ヌクレオチド多形性がＴおよび／またはこの位置でのＡ
の単一遺伝子の挿入の存在であるものである。
【００２２】 本発明の他の態様において、好ましくは、本明細書に記載する診断法は、３'U
TRにおける６００位の単一ヌクレオチド多形性がＡおよび／またはＧの存在であ
るものである。
【００２３】 本発明の他の態様において、好ましくは、本明細書に記載する診断法は、３'U
TRにおける８０９位の単一ヌクレオチド多形性がＣおよび／またはＴの存在であ
るものである。
【００２４】 本発明の他の態様において、好ましくは、本明細書に記載する診断法は、プロ
モーター要素における１３７１位の単一ヌクレオチド多形性がＡおよび／または
Ｇの存在であるものである。
【００２５】 単一塩基欠失または挿入の存在における位置的関連を考慮したとき、適当なギ
ャップの存在が確立された方法にしたがって必要である。
【００２６】 本発明の他の態様において、我々は、 １)個体からのサンプル核酸の獲得、 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の２３６１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１； の１個またはそれ以上の位置の変異ヌクレオチドの存在または不存在の検出、お
よびＮＫ１Ｒにおける多形性をＮＫ１Ｒ遺伝子における多形性を参照したヒトの
状態の決定を含む： ＮＫ１Ｒリガンド介在疾患の診断法を提供する。
【００２７】 診断法は、好ましくは、配列が対立遺伝子特異的増幅(即ち、ARMS(登録商標)
−対立遺伝子特異的増幅；ARMSは、増幅不応変異系に関する)、対立遺伝子特異
的ハイブリダイゼーション(ＡＳＨ)、オリゴヌクレオチドライゲーションアッセ
イ(ＯＬＡ)および制限フラグメント長多形性(ＲＦＬＰ)により決定されるもので
ある。
【００２８】 ヒトの状態は、任意の１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個また
は全９個の位置における対立遺伝子変異を参照して決定し得る。ヒトの状態はま
た本明細書で１個またはそれ以上の他のＳＰＮと組合わせて同定した１個または
それ以上の特異的多形性により決定し得る。
【００２９】 ＮＫ１アンタゴニストは、Glaxo、Pfizer、Merck、Parke-Davis、Lilly、RPR
およびSanofiにより、主にＣＮＳ指標のために研究されている。近年の臨床試験
において、Pfizer CP-122,712の１回投与量が化学療法に付随する嘔吐を阻害し
、不利な作用無しに十分耐性であることが報告された(Kris et al, JNCI, 89, 8
17, 1997)。最も最近、Merckが鬱／不安におけるＮＫ１アンタゴニストの陽II相
試験を発表している。
【００３０】 ２重ＮＫ１／ＮＫ２レセプターアンタゴニストが、ある臨床的有用性を、特に
喘息に対して有することが考えられている。慣用の治療と比較して、２重ＮＫ１
／ＮＫ２レセプターアンタゴニストは、両方とも喘息の特徴的徴候である気道過
剰反応および神経性炎症(管外遊出および分泌過多)を良好にコントロールする。
この多面性実験は、疾患の一つの臨床的徴候のみの処置に設計されている他の治
療よりも改善する。ＮＫ１／ＮＫ２アンタゴニストの他の治療的機会は、疼痛、
偏頭痛、不安、鬱、尿失禁および炎症性大腸疾患に存在する。
【００３１】 ４つの会社が、混合ＮＫ１／ＮＫ２レセプターアンタゴニストを公開している
。二つの会社はペプチドである：ＦＫ−２２４(藤沢)およびＳ１６４７４(Servi
er)。他の二つ、MDL-105,212(Marion Merrell Dow)およびMerckからの最近の化
合物は、選択的ＮＫ２アンタゴニストであるSR48968(Sanofi)に構造的に関連す
る。ニューロキニンレセプターアンタゴニストは、C J Swain (1996), Exp. Opi
n. Ther. Patents, 6, 367-368; およびElliot & Seward (1997) Exp. Opin. Th
er. Patents, 7, 43-54にレビューされている。
【００３２】 核酸の試験サンプルは、簡便には個体から得た血液、気管支肺胞洗浄液、唾液
、尿または他の体液または組織である。試験サンプルが、均一に試験サンプルに
おける配列に対応した核酸配列であり得、即ち、サンプル核酸の全体または一部
が最初に対立性変化の分析前に、慣用法、例えばPCRを使用して増幅し得ること
は認められる。
【００３３】 本発明の一つまたはそれ以上の多形性位置における変異ヌクレオチドの存在ま
たは不存在の検出に使用し得る多くの分析的方法が存在することは当業者には明
白である。一般に、対立性変化の検出は、変異識別法、所望により増幅反応およ
び所望によりシグナル産生システムを必要とする。表１は、多くの変異検出法を
挙げ、幾つかはポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に基づく。これらは多くのシグナル
産生系と組合わせて使用し得、その選択は表２に挙げる。更なる増幅法は表３に
挙げる。対立性変化の検出のための多くの現法は、Nollau et al., Clin. Chem.
43, 1114-1120, 1997; および標準テキスト、例えば、“Laboratory Protocols
for Mutation Detection”, Ed. by U. Landegren, Oxford University Press,
1996および“PCR”, 2nd Edition by Newton & Graham, BIOS Scientific Publ
ishers Limited, 1997にレビューされている。
【００３４】
【表１】
【表２】
【００３５】 表１ − 変異検出法 一般：ＤＮＡ配列決定、ハイブリダイゼーションによる配列決定 スキャンニング：PTT＊、SSCP、DGGE、TGGE、開裂、ヘテロ二本鎖分析、CMC、酵
素的ミスマッチ開裂＊ 注：プロモーター多形性の検出には有用でない。
【００３６】 ハイブリダイゼーションベースの 固相ハイブリダイゼーション：ドットブロット、MASDA、逆ドットブロット、
オリゴヌクレオチドアレイ(DNAチップ) 溶液相ハイブリダイゼーション：Taqman(登録商標) − US- 5210015 & US-548
7972 (Hoffmann-La Roche), Molecular Beacons − Tyagi et al (1996), Natur
e Biotechnology, 14, 303; WO95/13399 (Public Health Inst., New York)
【００３７】 伸張ベースの：ARMS(登録商標)-対立遺伝子特異的増幅(欧州特許第EP-B-332435
および米国特許第5,595,890に記載のような)、ALEX(登録商標) − 欧州特許第33
2435B1号(Zeneca Limited)、COPS − Gibbs et al (1989), Nucleic Acids Rese
arch, 17, 2347。
【００３８】 包含ベースの：ミニ配列決定、APEX 制限酵素ベースの：RFLP、制限酵素部位産生PCR ライゲーションベースの：OLA 他：侵入体アッセイ
【００３９】 表２−シグナル産生または検出システム 蛍光：FRET、蛍光停止、蛍光偏光−英国特許第2228998号(Zeneca Limited) 他：化学ルミネッセンス、電気化学ルミネッセンス、ラマン、放射活性、比色、
ハイブリダイゼーション保護アッセイ、マススペクトル、SERRS − WO97/05280(
University of Strathclyde)。 表３−更なる増幅法 SSR、NASBA、LCR、SDA、b-DNA
【００４０】 好ましい変異検出法は、ARMS(登録商標)−対立遺伝子特異的増幅、ALEX(登録
商標)、COPS、Taqman、Molecular Beacons、RFLP、OLA、制限部位ベースのPCRお
よびFRET法を含む。
【００４１】 特に好ましい方法は、ARMS(登録商標)−対立遺伝子特異的増幅、OLAおよびRFL
Pベースの方法を含む。ARMS(登録商標)−対立遺伝子特異的増幅が特に好ましい
方法である。
【００４２】 ARMS(登録商標)−対立遺伝子特異的増幅(欧州特許第EP-B-332435号、米国特許
第5,595,890号およびNewton et al.(Nucleic Acids Research, Vol. 17, p.2503
; 1989)に記載)は、プライマーおよびその鋳型の３'末端ヌクレオチドの相補性
による。プライマーの３'末端ヌクレオチドは、検出する特異的変異、対立遺伝
子または多形性に相補的または非相補的である。３'末端ヌクレオチドが、塩基
変異、対立遺伝子または多形性に相補的であるプライマーから伸びたプライマー
に選択的利点がある。鋳型配列を伴う３'末端ミスマッチを有するこれらのプラ
イマー、酵素的プライマー伸張を選択的に阻害するか防止する。ポリメラーゼ連
鎖反応または単一方向プライマー伸張反応は、したがって、プライマーの３'末
端ヌクレオチドが鋳型の相補物である場合、生産物増幅をもたらすが、３'末端
ヌクレオチドが鋳型のものと相補的でない場合、もたらさないか、少なくとも効
率的ではない。
【００４３】 例示の方法でエクソン１における２３６１“Ｔ”多形性の検出／診断ができる
、適当な対立遺伝子特異的プライマー(ARMSプライマー)は：5'-GCAAGTTCCACAACT
TCTTT-3'(配列番号２)である。アンチセンス鋳型鎖における“Ａ”多形性を補う
３'末端ヌクレオチドは、適当な酵素(好ましくは、３'−５'エキソヌクレアーゼ
活性を核もの)でのプライマー伸張の効率を促進する。
【００４４】 更なる態様において、本発明の診断法は、喘息のようなＮＫ１Ｒリガンド介在
疾患の処置における治療的化合物の効率の評価に使用する。 イントロン領域またはプロモーター領域で起こる本発明で同定される多形性が
ＮＫ１レセプターのアミノ酸配列を変えることは予測されないが、配列の転写お
よび／またはメッセージ安定性に影響し得、したがって細胞内のレセプターのレ
ベルに影響する。
【００４５】 アッセイ、例えば、レポーターベースのアッセイは、１個またはそれ以上の上
記多形性が転写レベルおよび／またはメッセージ安定性に影響するか否かを検出
するための発明であり得る。 ＮＫ１Ｒ遺伝子の特定の対立性変異を担持する個体は、したがって、異なる生
理学的条件下でタンパク質生合成の調節の能力の差異が存在し得、異なる疾患に
対する反応の異なった能力を示す。加えて、対立性変異によるタンパク質調節に
おける差異は、薬剤治療における個々の応答に直接作用し得る。本発明の診断法
は、このような薬剤の臨床的応答の予測および治療的投与量の予測の両方に有用
であり得る。
【００４６】 更なる態様において、本発明の診断法は、ＮＫ１Ｒリガンドにより介在される
疾患に対する個体の素因および／または感受性を評価するために使用する。本発
明は、特にこれらの状態を発症する危険のある個体の認識に使用し得る。
【００４７】 更なる態様において、本発明の診断法はＮＫ１Ｒ遺伝子の１個またはそれ以上
の対立性変異を選択的に標的にする新規医薬治療の開発に使用する。特定の対立
性変異体と疾患発症、または医薬治療に対する応答の間の結合の同定は、新規薬
剤の設計に有意な影響力を有し得る。医薬は、疾患過程に含まれる変異体の生理
学的活性を調節するが、他の変異における効果を最小にするために設計し得る。
【００４８】 本発明の更なる診断的態様において、変異ヌクレオチドの存在または非存在は
、制限酵素により認識される部位の損失、または獲得、または所望により操作に
関して検出する。エクソン３における位置２７１および２７２での多形性は、制
限酵素RsaIおよびCac8Iによる消化により各々検出できる。操作された部位は、
標的配列の増幅に使用されるプライマー配列が、制限部位を作るためにヌクレオ
チド多形性に関与するものを含む(例えば、３'UTRの８０９多形性における実施
例２、セクション２参照(配列番号６))。
【００４９】 本発明の他の態様により、以下の多形性： EMBL ACCESSION NO. X65177における位置により定義されるエクソン１中の２２
８６位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65177の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65179の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65179の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； またはこれらの相補鎖もしくは少なくとも一つの多形性を含む、少なくとも２０
塩基のフラグメント の１個またはそれ以上を含む核酸が提供される。
【００５０】 本発明の他の態様により、以下の多形性： EMBL ACCESSION NO. X65177における位置により定義されるエクソン１中の２２
８６位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65177の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65179の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65179の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１位
にＣを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５位
に挿入されたＡを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００位
にＧを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９位
にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； またはこれらの相補鎖もしくは少なくとも一つの多形性を含む、少なくとも２０
塩基のフラグメント の１個またはそれ以上を含む核酸が提供される。
【００５１】 本発明の他の態様により、以下の多形性： 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の２３６１位にＴを有す
る配列番号１の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65179の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65179の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１位
にＣを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５位
に挿入されたＡを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００位
にＧを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９位
にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１位
にＧを有する配列番号１の核酸配列； またはこれらの相補鎖もしくは少なくとも一つの多形性を含む、少なくとも２０
塩基のフラグメント の１個またはそれ以上を含む核酸が提供される。
【００５２】 フラグメントは少なくとも１７塩基、より好ましくは少なくとも２０塩基、よ
り好ましくは少なくとも３０塩基である。 本発明は、更に本発明の多形性を検出できるヌクレオチドプライマーを提供す
る。 本発明の他の態様において、本発明のＮＫ１Ｒ遺伝子多形成の検出ができる対
立遺伝子特異的プライマーを提供する。
【００５３】 対立遺伝子特異的プライマーは、一般的に、一定プライマーと共に、特定の配
列位置における一つの対立遺伝子の選択的増幅を介した対立遺伝子の間の区別を
提供するＰＣＲ反応のような増幅反応において、使用する。対立遺伝子特異的プ
ライマーは、好ましくは１７−５０ヌクレオチド、より好ましくは約１７−３５
ヌクレオチド、より好ましくは約１７−３０ヌクレオチドである。
【００５４】 対立遺伝子特異的プライマーは、正確に検出する対立遺伝子に対応するが、３
'末端のヌクレオチドの約６−８個が検出する対立遺伝子に対応し、１０個まで
、例えば、８個、６個、４個、２個または１個までの残りのヌクレオチドをプラ
イマーの性質に明白な影響をすることなく変え得る、その誘導体も考慮する。し
ばしば−２および／または−３位(３'末端に対して)のヌクレオチドは、差異的
プライマー結合の最適化および正確な対立遺伝子区別的プライマーのみからの優
先的伸張のためにミスマッチである。
【００５５】 プライマーは、合成の慣用法を使用して製造し得る。このような方法の例は、
標準テキスト、例えば、“Protocols for Oligonucleotides and Analogues; Sy
nthesis and Properties”, Methods in Molecular Biology Series; Volume 20
; Ed. Sudhir Agrawal, Humana ISBN: 0-89603-247-7; 1993; 1st Editionに見
ることができる。必要ならば、プライマーを検出を容易にするために標識し得る
。
【００５６】 本発明の他の態様により、本発明のＮＫ１Ｒ遺伝子多形性を検出できる対立遺
伝子特異的プローブを提供する。 対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドプローブは、好ましくは１７−５０ヌク
レオチド、より好ましくは約１７−３０ヌクレオチド、より好ましくは約１７−
３０ヌクレオチドである。
【００５７】 このようなプローブの設計は、通常技術の分子生物学者には明白である。この
ようなプローブは、簡便には５０塩基まで、４０塩基まで、より簡便には３０塩
基までの長さであり、例えば、８−２５塩基または８−１５塩基長である。一般
に、このようなプローブは遺伝子の対応する野生型または変異体位置座位に完全
に相補的な塩基配列を含む。しかし、必要な場合、１個またはそれ以上のミスマ
ッチを挿入し得るが、ただしオリゴヌクレオチドプローブの差異的力は不当に影
響されない。本発明のプローブは、１個またはそれ以上のプローブを担持し得、
Molecular Beaconにおけるような検出を容易にする。
【００５８】 本発明の他の態様により、１個またはそれ以上の本発明の診断プローブおよび
／または本発明の診断プライマー、特に対立遺伝子−特異的オリゴヌクレオチド
プライマーを含む診断キットを提供する。
【００５９】 診断キットは、適当なパッケージングおよび本発明における使用のための指示
書を含み得る。このようなキットは、更に適当な緩衝剤および熱安定性ポリメラ
ーゼ、例えばtaqポリメラーゼのようなポリメラーゼを含み得る。このようなキ
ットはまた随伴／一定プライマーおよび／またはコントロールプライマーまたは
プローブを含み得る。随伴／一定プライマーはＰＣＲを行うのに使用するプライ
マーの対の一部である。このようなプライマーは、通常正確に鋳型鎖を補う。
【００６０】 本発明の他の態様において、本発明の単一ヌクレオチド多形性は、結合実験に
おける遺伝的マーカーとして使用し得る。これは、特にエクソン１(配列番号１
の２３６１位)に、その総体的に高い頻度のため適応される(下記参照)。高頻度
の更に好ましい多形性は、3'UTRにおける４６１位および８０９位である(下記実
施例２参照)。総体的に稀に起こるこれらの多形性は、低頻度単模式種のマーカ
ーとして有用である。
【００６１】 本発明の他の態様により、２６アミノ酸のＣ末端欠失を有するヒトNK1Rポリペ
プチドの対立遺伝子変異体が提供される。
【００６２】 本発明の他の態様により、 ｉ)EMBL ACCESSION NO. X65177における位置により定義されるエクソン１中の２
２８６； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； の１個またはそれ以上の位置でヒトの核酸の配列を決定し、ＮＫ１Ｒ遺伝子にお
ける多形性を参照してヒトの状態を決定することを含む、ヒトにおけるＮＫ１Ｒ
遺伝子の単一ヌクレオチド多形性の診断；および ii)有効量のＮＫ１Ｒリガンドの投与： を含む、ＮＫ１Ｒリガンドアンタゴニストでの処置を必要とするヒトの処置法が
提供される。
【００６３】 本発明の他の態様により、 (ｉ)EMBL ACCESSION NO. X65177における位置により定義されるエクソン１中の
２２８６； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置でヒトの核酸の配列を決定し、ＮＫ１Ｒ遺伝子また
はその３'非翻訳領域における多形性を参照してヒトの状態を決定することを含
む、ヒトにおけるＮＫ１Ｒ遺伝子の単一ヌクレオチド多形性の診断：および (ii)有効量のＮＫ１Ｒリガンドの投与： を含む、ＮＫ１Ｒリガンドアンタゴニストでの処置を必要とするヒトの処置法が
提供される。
【００６４】 本発明の他の態様により、 (ｉ)配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の２３６１； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置でヒトの核酸の配列を決定し、ＮＫ１Ｒ遺伝子また
はその３'非翻訳領域における多形性を参照してヒトの状態を決定することを含
む、ヒトにおけるＮＫ１Ｒ遺伝子の単一ヌクレオチド多形性の診断：および (ii)有効量のＮＫ１Ｒリガンドの投与： を含む、ＮＫ１Ｒリガンドアンタゴニストでの処置を必要とするヒトの処置法が
提供される。
【００６５】 好ましくは、ヒトの状態の決定は、臨床的に有用である。臨床的有用性の例は
、アンタゴニスト医薬の中のどの医薬を投与するかの決定および／または医薬(
複数もある)の有効量の決定を含む。ＮＫ１Ｒリガンドアンタゴニストは、所望
によりＮＫ２Ｒでまた活性を有する。
【００６６】 本発明の他の態様により、 EMBL ACCESSION NO. X65177における位置により定義されるエクソン１中の２２
８６； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； の１個またはそれ以上の位置における単一ヌクレオチド多形性であると診断され
たヒトのＮＫ１Ｒリガンド介在疾患の処置のための医薬の製造におけるＮＫ１Ｒ
リガンドアンタゴニストの使用を提供する。
【００６７】 本発明の他の態様において、 EMBL ACCESSION NO. X65177における位置により定義されるエクソン１中の２２
８６； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置における単一ヌクレオチド多形性であると診断され
たヒトのＮＫ１Ｒリガンド介在疾患の処置のための医薬の製造におけるＮＫ１Ｒ
リガンドアンタゴニストの使用を提供する。
【００６８】 本発明の他の態様において、 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の２３６１； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置における単一ヌクレオチド多形性であると診断され
たヒトのＮＫ１Ｒリガンド介在疾患の処置のための医薬の製造におけるＮＫ１Ｒ
リガンドアンタゴニストの使用を提供する。
【００６９】 本発明の他の態様により、 EMBL ACCESSION NO. X65177における位置により定義されるエクソン１中の２２
８６； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； の１個またはそれ以上の位置における単一ヌクレオチド多形性を診断的に試験の
ための、ＮＫ１Ｒアンタゴニスト医薬および医薬のヒトへの投与のための指示書
を含む、医薬パックを提供する。
【００７０】 本発明の他の態様において、 EMBL ACCESSION NO. X65177における位置により定義されるエクソン１中の２２
８６； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置における単一ヌクレオチド多形性を診断的に試験の
ための、ＮＫ１Ｒアンタゴニスト医薬および医薬のヒトへの投与のための指示書
を含む、医薬パックを提供する。
【００７１】 本発明の他の態様において、 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の２３６１； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置における単一ヌクレオチド多形性を診断的に試験の
ための、ＮＫ１Ｒアンタゴニスト医薬および医薬のヒトへの投与のための指示書
を含む、医薬パックを提供する。
【００７２】 エクソン５における多形成の存在の試験は、理論的な考慮に縛られることなく
、ＮＫ１Ｒポリペプチドにおける明白なアミノ酸変化をもたらすことのため、特
に好ましい(本明細書で説明のように)。
【００７３】 本発明の核酸、特に本明細書で同定した単一ヌクレオチド多形性に関するおよ
び同定するものは、例えば、その同一性、単模式種および他のサブグループ化、
例えば、特定の医薬での処置に対する感受性などの観点から、類似の同一性およ
び特徴のある配列の同定をする、価値のある情報源である。これらの試みは、コ
ンピューター読取媒体に配列情報を保存し、情報を標準の巨大分子構造プログラ
ム、またはGCG(Genetics Computer Group)、BlastX BlastP、BlastN、FASTA(Alt
schul et al. J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990に引用)のような当分野で標準
的な研究用ツールを使用した配列の研究で使用する。このように、本発明の核酸
は、配列同一性、ゲノム地図作成、薬理遺伝学および他の研究分析のための有用
なデータベースにおける成分として特に有用である。一般に、本発明の核酸配列
および多形性に関する配列情報は、コンピューターディスクのような有形媒体に
、好ましくはコンピューター読取可能な形に変形し、変換し、または保存し得る
。例えば、クロマトグラフスキャンデータまたはピークデータ、写真スキャンま
たはピークデータ、マススペクトルデータ、配列ゲル(または他)データ。
【００７４】 本発明は、本発明の１個またはそれ以上の核酸配列が保存されたコンピュータ
ー読取可能媒体を提供する。例えば、コンピューター読取可能媒体は：本発明の
核酸の配列を含む核酸、本発明の配列から成る核酸、本発明の核酸の一部を含む
核酸(その一部は本発明の少なくとも一つの多形性を含む)、少なくとも一つの本
発明の核酸配列を含む核酸配列のセット、本発明の核酸配列または本明細書で同
定された少なくとも一つの多形性を含む部分を含む、またはそれから成るデータ
セットからなる群から選択されるメンバーを含み、保存されている。
【００７５】 本発明の特定の態様において：配列番号１を含む核酸；少なくとも一つの配列
が配列番号１を含む核酸のセット；配列番号１を含む核酸配列を示すデータのセ
ット；配列番号１から成る核酸；少なくとも一つの配列が配列番号１の配列から
成る核酸のセット；配列番号１、EMBL ACCESSION NO. X65177、EMBL ACCESSION
NO. X65179、EMBL ACCESSION NO. X65179からなる群から選択される配列の任意
の部分(即ち、少なくとも２０塩基のフラグメント)(この部分は本明細書で同定
された少なくとも一つの多形性を含む)を含む核酸からなる群から選択されるメ
ンバーが保存されている。
【００７６】 コンピューターをベースにした方法は、また配列同定の実行のために提供され
、該方法は本発明の多形性を含む核酸配列のコンピューター読取可能媒体への提
供；および同一性(相同性)の同定のための該多形性含有核酸配列と、少なくとも
一つの他の核酸またはポリペプチド配列の比較、即ち、多形性の存在のスクリー
ニングの段階を含む。このような方法は、特に薬理遺伝学実験およびゲノム地図
作成実験で有用である。
【００７７】 本発明の特定の態様において： 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の２３６１位にＴを有す
る配列番号１の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義
されるエクソン３の近くの２７１位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65179の
核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン
３の近くの２７２位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65179の
核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン
５中の２４５位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸
配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４
６１位にＣを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO
. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５位に挿入されたＡを有
するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181におけ
る位置により定義される３'UTR中の６００位にＧを有するEMBL ACCESSION NO. X
65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３
'UTR中の８０９位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列；配列番
号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１位にＧを
有する配列番号１の核酸配列；またはこれらの相補鎖もしくは少なくとも一つの
多形性を含む、少なくとも２０塩基のフラグメントからなる群から選択される配
列を含む核酸配列の提供；および同一性の同定のための該核酸配列と少なくとも
一つの他の核酸またはポリペプチド配列の比較の段階を含む、配列同定の実施法
が提供される。
【００７８】 本発明の他の態様において： 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の２３６１位にＴを有す
る配列番号１の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義
されるエクソン３の近くの２７１位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65179の
核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン
３の近くの２７２位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65179の
核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン
５中の２４５位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸
配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４
６１位にＣを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO
. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５位に挿入されたＡを有
するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181におけ
る位置により定義される３'UTR中の６００位にＧを有するEMBL ACCESSION NO. X
65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３
'UTR中の８０９位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列；配列番
号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１位にＧを
有する配列番号１の核酸配列；またはこれらの相補鎖もしくは少なくとも一つの
多形性を含む、少なくとも２０塩基のフラグメントからなる群から選択される配
列を含む核酸配列のコンピューター読取可能媒体への提供；および同一性の決定
のための該核酸配列と少なくとも一つの他の核酸またはポリペプチド配列の比較
の段階を含む、配列同定実施法が提供される。
【００７９】 本発明を、以下の実施例を参照にするが、限定することなく、説明する。全て
の温度は摂氏である。 下記の実施例において、特記しない限り、以下の方法および材料を使用する。 Perkin-Elmer Cetusから入手可能なAMPLITAQ(登録商標)を、熱安定性DNAポリ
メラーゼの源として使用する。 一般の分子生物学的方法は、“Molecular Cloning - A Laboratory Manula”S
econd Edition, Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Labora
tory, 1989)に記載の方法に従うことができる。 電気泳動図は標準法で得た：データをABI377データ回収ソフトウエアおよびAB
I Prism配列決定分析(2.1.2)により産生される波の形で回収した。
【００８０】 実施例 実施例１ 多形性の同定 １．方法 ＤＮＡ調製 ＤＮＡを、以下の変形をしたプロトコールＩ(Molecular Cloning: A Laborato
ry Manual, p.392, Sambrook, Fritsch and Maniatis, 2nd Edition, Cold Spri
ng Harbor Press, 1989)に従ってＥＤＴＡ中に回収した凍結血液サンプルから調
製した。融解血液を、リン酸緩衝化食塩水の代わりに当量の標準食塩水クエン酸
中に希釈して融解赤血球細胞を除いた。サンプルを３回のフェノール抽出よりむ
しろフェノール、次いでフェノール／クロロホルムおよび次いでクロロホルムで
抽出した。ＤＮＡを脱イオン水に溶解した。
【００８１】 鋳型調製 鋳型を、オリゴヌクレオチドプライマーを使用したＰＣＲにより調製し、下記
のようにアニーリング温度を設定した。伸張温度は７２°であり、変性温度は９
７°であった。一般に、５０ngのゲノムＤＮＡを各反応に使用し、３５サイクル
のＰＣＲに付した。
【００８２】 エクソン１ 配列番号１ ２５４７bp
【表３】
【００８３】 エクソン３ Accession Number X65179 ３７３bp
【表４】
【００８４】 エクソン５ Accession Number X65181 ３９２９bp
【表５】
【００８５】 色素プライマー配列決定のために、これらのプライマーを、Ｍ１３前および逆
プライマー配列(ABIプロトコールP/N 402114, Applied Biosystems)を各々前お
よび逆オリゴヌクレオチドの５'末端に含むように修飾した。
【００８６】 色素プライマー配列決定 Ｍ１３前および逆プライマーを使用した色素プライマー配列決定は、ABIプロ
トコールP/N 402114に、ABI Prism(登録商標)色素プライマー配列決定コアキッ
トに関して記載の通り、“AmpliTaq FS”(登録商標)ＤＮＡポリメラーゼと共に
、アニーリング温度を４５°にし、DMSOを循環配列混合物に５％の最終濃度で添
加した修飾をして行った。
【００８７】 各塩基の伸張反応物を貯蔵し、エタノール／酢酸ナトリウム沈殿し、洗浄し、
ホルムアミド充填緩衝液に再懸濁した。 ４.２５％アクリルアミドゲルを自動シークエンサーで流した(ABI377, Applie
d Biosystems)。
【００８８】 ２．結果 エキソン１ 配列番号１ Ａ) ヌクレオチド２３６１ Ｃ／Ｔ Phe(111)TTC/TTT 対立遺伝子頻度 ＴＴＣ ４７％ ＴＴＴ ５３％ ２３６１の多形性を正確に同定するために、配列番号１内のその総体的位置は
下の通りである： TGCAAGTTCCACAACTTCTTCCCCATCGCCGCTGTCTTCGC(配列番号３) 2341 2361 2381
【００８９】 Ｂ)ヌクレオチド１３７１ Ａ／Ｇ 対立遺伝子頻度(３７個体) Ａ ９８.６％ Ｇ １.４％ 多形性は制限酵素、Sau96I(New England Biolabs)のための認識配列(ＧＧＣＣ
Ｃ)を形成する。野生型配列(ＡＧＣＣＣ)を含むＰＣＲ生産物(１１６８−１７１
２位、５４４bp)はSau96I(New England Biolabs)により開裂されない。ヘテロ接
合型生産物(Ａ／ＧＧＣＣＣ)は、２０３p、３４１bpおよび５４４０bpの生産物
を産生する。ヘテロ接合型変異体(ＧＧＣＣＣ)の消化は、２０３bpおよび３４１
bpの生産物を産生する。
【００９０】 エクソン３ Accession Number X65179 フランキングイントロン ヌクレオチド２７１ Ｇ／Ｔ 対立遺伝子頻度 Ｇ ９８.５％ Ｔ １.５％ ヌクレオチド２７２ΔＡ(注“Δ”は欠失を示す) 頻度 ΔＡ ４.５％
【００９１】 ２７１および２７２の位置の多形性を正確に同定するために、X65179野生型配
列内のその総体的位置は下の通りである： AAGTCTCTGCCAAGCGCAAGGTGAGCAGGGGACAGGCAGA(配列番号４) 241 271 280 AAGTCTCTGCCAAGCGCAAGGTGAGCAGGGGACAGGCAGA(配列番号５) 241 272 280
【００９２】 G271T多形性は、RsaI(ＧＴＡＣ)制限酵素認識部位を産生する。野生型配列を
含むＰＣＲ生産物(３０４bp)はRasIにより消化されない。ヘテロ接合体生産物は
、３０４bp、２５７bpおよび４７bpのバンドを提供する。ヘテロ接合変異生産物
の消化は、２５７bp、４７bpのバンドを産生する。 ２７２ΔＡ多形性は、Cac8I(ＧＣＮＮＧＣ)制限酵素認識部位を産生する。野
生型配列を含むＰＣＲ生産物はCac8Iにより消化されない。ヘテロ接合生産物の
消化は、３０４bp、２５８bpおよび４６bpのバンドを提供する。ヘテロ接合変異
生産物の消化は、２５８bp、４６bpのバンドを産生する。
【００９３】 エクソン５ Accession Number X65181 ヌクレオチド２４５ΔＣ 頻度 ΔＣ １.５％ これは前成熟停止およびＣ−末端２６アミノ酸の欠失をもたらす。 ...379 380 381 382 379 S L D L S W T 停止 TCC CTG GAC CTG.... → ...TCC TGG ACC TGA 特記しない限り、全ての対立遺伝子頻度は、３４個体の分析に基づく。
【００９４】 実施例２ 多形性の同定 １．方法 全てのＰＣＲ条件および配列決定プロトコールは実施例１に記載の通りである
。対立遺伝子頻度は、３７個体パネルで決定した。
【００９５】 鋳型調製 ３'UTR Accession Number X65181
【表６】
【００９６】 ２．結果 ３'UTR Accession Number:X65181 ヌクレオチド４６１ Ｇ／Ｃ 対立遺伝子頻度 Ｇ ７２％ Ｃ ２８％ この多形性は、制限酵素DdeIの消化により検出できる ＧＴＴＡＧ... DdeI陰性 ....ＣＴＴＡＧ... DdeI陽性 ＣＡＡＣ... ....ＧＡＡＴＣ...
【００９７】 ヌクレオチド４９５ Ａ挿入 対立遺伝子頻度 １.４％ ヌクレオチド６００ Ａ／Ｇ 対立遺伝子頻度 Ａ ９２％ Ｇ ８％ この多形性は、制限酵素BanIIの消化により検出できる ....ＡＡＧＣＣＣ.. BanII陰性 ...ＧＡＧＣＣＣ....BanII陽性 ....ＴＴＣＧＧＧ.. ...ＣＴＣＧＧＧ..
【００９８】 ヌクレオチド８０９ Ｃ／Ｔ 対立遺伝子頻度 Ｃ ５５％ Ｔ ４５％ この多形性は、制限酵素部位Psp146I(ＡＡＣＧＴＴ)により検出できる。 操作プライマー７８７−８０８ GGGTGAACAAAAGAAGGAACGT (配列番号６)は、“Ｔ
”多形性が標的配列に存在する場合のみ、Pst1406I(ＡＡＣＧＴＴ)部位を産生す
るために、多形性Ｃ／Ｔと協同する。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｔ Ｇ０１Ｎ 33/50 33/53 Ｍ 33/53 33/566 33/566 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (72)発明者 ジョン・エドワード・ノリス・モーテン イギリス、エスケイ10・４ティジー、チェ シャー、マックルズフィールド、アルダー リー・パーク Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA35 AA40 DA12 DA13 DA14 DA77 FB01 FB02 4B024 AA01 AA11 CA03 CA04 CA09 EA04 GA11 HA14 HA19 4B029 AA23 CC03 CC08 FA12 4B063 QA01 QQ43 QQ58 QR32 QR55 QR62 QS25 QS34 4C084 AA02 AA07 AA16 BA50 CA18 NA14 ZA59

Claims (18)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の２
    ３６１； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
    ２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
    ２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
    ５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置でヒトの核酸の配列を決定し、ＮＫ１Ｒ遺伝子にお
    ける多形性を参照してヒトの状態を決定することを含む： ヒトにおけるＮＫ１Ｒ遺伝子の１個またはそれ以上の単一遺伝子多形性の診断法
    。
  2. 【請求項２】 エクソン１における２３６１位での単一ヌクレオチド多形性
    がＣおよび／またはＴの存在である、プロモーター要素における１３７１位の単
    一ヌクレオチド多形性がＡおよび／またはＧの存在である、エクソン３近くの２
    ７１位での単一ヌクレオチド多形性がＧおよび／またはＴの存在である、エクソ
    ン３近くの２７２位での単一ヌクレオチド多形性がＡおよび／またはこの位置で
    の一つの塩基の欠失の存在である、エクソン５における２４５位での単一ヌクレ
    オチド多形性がＣおよび／またはこの位置での一つの塩基の欠失の存在である、
    ３'UTRにおける４６１位の単一ヌクレオチド多形性がＧおよび／またはＣの存在
    である、３'UTRにおける４９５位の単一ヌクレオチド多形性がＴおよび／または
    この位置でのＡの単一遺伝子の挿入の存在である、３'UTRにおける６００位の単
    一ヌクレオチド多形性がＡおよび／またはＧの存在である、３'UTRにおける８０
    ９位の単一ヌクレオチド多形性がＣおよび／またはＴの存在である、請求項１記
    載の方法。
  3. 【請求項３】 多形性の可能性のある領域を、配列を決定する前にポリメラ
    ーゼ連鎖反応で増幅する、請求項１または２に記載の方法。
  4. 【請求項４】 多形性の存在または不存在を、制限酵素により認識される部
    位の損失、または獲得、または所望により操作に関して検出する、請求項１から
    ３のいずれかに記載の方法。
  5. 【請求項５】 配列が、ARMS−対立遺伝子特異的増幅、対立遺伝子特異的ハ
    イブリダイゼーション、オリゴヌクレオチドライゲーションアッセイおよび制限
    フラグメント長多形性(ＲＦＬＰ)により決定されるものである、請求項１または
    ２に記載の方法。
  6. 【請求項６】 ＮＫ１Ｒリガンドにより介在される疾患に対する個体の素因
    および／または感受性を評価するために使用する、請求項１から５のいずれかに
    記載の方法。
  7. 【請求項７】 以下の多形性： 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の２３６１位にＴを有す
    る配列番号１の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
    ２７１位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65179の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
    ２７２位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65179の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
    ５位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１位
    にＣを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５位
    に挿入されたＡを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００位
    にＧを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９位
    にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１位
    にＧを有する配列番号１の核酸配列； またはこれらの相補鎖もしくは少なくとも一つの多形性を含む、少なくとも２０
    塩基のフラグメント の１個またはそれ以上を含む、核酸。
  8. 【請求項８】 ＮＲ１Ｒ遺伝子中の配列番号１における位置により定義され
    るエクソン１中の２３６１；配列番号１における位置により定義されるプロモー
    ター要素における１３７１；EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定
    義されるエクソン３の近くの２７１；EMBL ACCESSION NO. X65179における位置
    により定義されるエクソン３の近くの２７２；EMBL ACCESSION NO. X65181にお
    ける位置により定義されるエクソン５中の２４５；EMBL ACCESSION NO. X65181
    における位置により定義される３'UTR中の４６１；EMBL ACCESSION NO. X65181
    における位置により定義される３'UTR中の４９５；EMBL ACCESSION NO. X65181
    における位置により定義される３'UTR中の６００；EMBL ACCESSION NO. X65181
    における位置により定義される３'UTR中の８０９；の１個またはそれ以上の位置
    でのＮＫ１Ｒ遺伝子における変異ヌクレオチドの存在または不存在の検出ができ
    る、診断的核酸プライマー。
  9. 【請求項９】 ＡＲＭＳで使用するために適合させた対立遺伝子特異的プラ
    イマーである、請求項８記載の診断的プライマー。
  10. 【請求項１０】 ＮＲ１Ｒ遺伝子中の配列番号１における位置により定義さ
    れるエクソン１中の２３６１；配列番号１における位置により定義されるプロモ
    ーター要素における１３７１；EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により
    定義されるエクソン３の近くの２７１；EMBL ACCESSION NO. X65179における位
    置により定義されるエクソン３の近くの２７２；EMBL ACCESSION NO. X65181に
    おける位置により定義されるエクソン５中の２４５；EMBL ACCESSION NO. X6518
    1における位置により定義される３'UTR中の４６１；EMBL ACCESSION NO. X65181
    における位置により定義される３'UTR中の４９５；EMBL ACCESSION NO. X65181
    における位置により定義される３'UTR中の６００；EMBL ACCESSION NO. X65181
    における位置により定義される３'UTR中の８０９；の１個またはそれ以上の位置
    でのＮＫ１Ｒ遺伝子における変異ヌクレオチドの存在または不存在の検出ができ
    る、対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドプローブ。
  11. 【請求項１１】 １個またはそれ以上の請求項８または９で定義の診断的プ
    ライマーおよび／または１個またはそれ以上の請求項１０で定義の対立遺伝子特
    異的オリゴヌクレオチドプローブを含む、診断的キット。
  12. 【請求項１２】 Ｃ−末端に２６アミノ酸欠失を有する、ヒトＮＫ１Ｒ多形
    性の対立遺伝子変異体。
  13. 【請求項１３】 (ｉ)配列番号１における位置により定義されるエクソン１
    中の２３６１； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
    ２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
    ２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
    ５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置でヒトの核酸の配列を決定し、ＮＫ１Ｒ遺伝子また
    はその３'非翻訳領域における多形性を参照してヒトの状態を決定することを含
    む、ヒトにおけるＮＫ１Ｒ遺伝子の単一ヌクレオチド多形性の診断：および (ii)有効量のＮＫ１Ｒリガンドの投与： を含む、ＮＫ１Ｒリガンドアンタゴニストでの処置を必要とするヒトの処置法。
  14. 【請求項１４】 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の
    ２３６１； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
    ２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
    ２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
    ５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置における単一ヌクレオチド多形性であると診断され
    たヒトのＮＫ１Ｒリガンド介在疾患、特に喘息の処置のための医薬の製造におけ
    るＮＫ１Ｒリガンドアンタゴニストの使用。
  15. 【請求項１５】 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の
    ２３６１； 配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１３７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
    ２７１； EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により定義されるエクソン３の近くの
    ２７２； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義されるエクソン５中の２４
    ５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４６１； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の６００； EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の８０９； の１個またはそれ以上の位置における単一ヌクレオチド多形性を診断的に試験の
    ための、ＮＫ１Ｒアンタゴニスト医薬および医薬のヒトへの投与のための指示書
    を含む、医薬パック。
  16. 【請求項１６】 配列番号１を含む核酸；少なくとも一つの配列が配列番号
    １を含む核酸のセット；配列番号１を含む核酸配列を示すデータのセット；配列
    番号１から成る核酸；少なくとも一つの配列が配列番号１の配列から成る核酸の
    セット；配列番号１、EMBL ACCESSION NO. X65177、EMBL ACCESSION NO. X65179
    、EMBL ACCESSION NO. X65179からなる群から選択される配列の、少なくとも一
    つの請求項１に示す多形性を含む任意の部分を含む核酸からなる群から選択され
    るメンバーが保存された、コンピューター読取可能媒体。
  17. 【請求項１７】 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の
    ２３６１位にＴを有する配列番号１の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65179に
    おける位置により定義されるエクソン３の近くの２７１位にＴを有するEMBL ACC
    ESSION NO. X65179の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により
    定義されるエクソン３の近くの２７２位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCES
    SION NO. X65179の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定
    義されるエクソン５中の２４５位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION N
    O. X65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義され
    る３'UTR中の４６１位にＣを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列；EMB
    L ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５位に挿
    入されたＡを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO
    . X65181における位置により定義される３'UTR中の６００位にＧを有するEMBL A
    CCESSION NO. X65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置によ
    り定義される３'UTR中の８０９位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核
    酸配列；配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１
    ３７１位にＧを有する配列番号１の核酸配列；またはこれらの相補鎖もしくは少
    なくとも一つの多形性を含む、少なくとも２０塩基のフラグメントからなる群か
    ら選択される配列を含む核酸配列の提供；および同一性の同定のための該核酸配
    列と少なくとも一つの他の核酸またはポリペプチド配列の比較の段階を含む、配
    列同定の実施法。
  18. 【請求項１８】 配列番号１における位置により定義されるエクソン１中の
    ２３６１位にＴを有する配列番号１の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65179に
    おける位置により定義されるエクソン３の近くの２７１位にＴを有するEMBL ACC
    ESSION NO. X65179の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65179における位置により
    定義されるエクソン３の近くの２７２位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCES
    SION NO. X65179の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定
    義されるエクソン５中の２４５位に一つの塩基の欠失を有するEMBL ACCESSION N
    O. X65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置により定義され
    る３'UTR中の４６１位にＣを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列；EMB
    L ACCESSION NO. X65181における位置により定義される３'UTR中の４９５位に挿
    入されたＡを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO
    . X65181における位置により定義される３'UTR中の６００位にＧを有するEMBL A
    CCESSION NO. X65181の核酸配列；EMBL ACCESSION NO. X65181における位置によ
    り定義される３'UTR中の８０９位にＴを有するEMBL ACCESSION NO. X65181の核
    酸配列；配列番号１における位置により定義されるプロモーター要素における１
    ３７１位にＧを有する配列番号１の核酸配列；またはこれらの相補鎖もしくは少
    なくとも一つの多形性を含む、少なくとも２０塩基のフラグメントからなる群か
    ら選択される配列を含む核酸配列のコンピューター読取可能媒体への提供；およ
    び同一性の決定のための該核酸配列と少なくとも一つの他の核酸またはポリペプ
    チド配列の比較の段階を含む、配列同定実施法。
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