JP2002508166A - ヒトＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ - Google Patents
ヒトＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、Ｂｒａｉｎｉａｃファミリーのメンバーである、新規なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび新規なＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドに関する。特に、ヒトＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする、単離された核酸を提供する。ＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドはまた、ベクター、宿主細胞およびそれらを産生する組換え方法として提供される。本発明はさらに、Ｄｅｎｄｒｉａｃ活性およびＢｒａｉｎｉａｃ−３活性のアゴニストまたはアンタゴニストを同定するためのスクリーニング方法に関する。免疫系関連障害および神経系関連障害の検出のための診断方法、ならびに免疫系関連障害および神経系関連障害の処置のための治療方法もまた提供される。
Description
【０００１】 （発明の分野） 本発明は、ノッチ（Ｎｏｔｃｈ）ファミリーに関するポリペプチドをコードす
る２つの新規なヒト遺伝子に関する。より詳細には、Ｄｅｎｄｒｉａｃ（デンド
リアック）（Ｂｒａｉｎｉａｃ−２（ブレイニアック−２）とも称する）および
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３（ブレイニアック−３）と名付けられる２つのヒトポリペ
プチドをコードする単離された核酸分子が提供される。Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドも、ベクター、宿主細胞および産生する組換
え方法もまた同様に提供される。免疫系および神経系に関する障害を検出するた
めの診断方法ならびにこのような障害を処置するための処置方法もまた提供され
る。
る２つの新規なヒト遺伝子に関する。より詳細には、Ｄｅｎｄｒｉａｃ（デンド
リアック）（Ｂｒａｉｎｉａｃ−２（ブレイニアック−２）とも称する）および
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３（ブレイニアック−３）と名付けられる２つのヒトポリペ
プチドをコードする単離された核酸分子が提供される。Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドも、ベクター、宿主細胞および産生する組換
え方法もまた同様に提供される。免疫系および神経系に関する障害を検出するた
めの診断方法ならびにこのような障害を処置するための処置方法もまた提供され
る。
【０００２】 本発明はさらに、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３活性
のアゴニストおよびアンタゴニストを同定するためのスクリーニング方法に関す
る。
のアゴニストおよびアンタゴニストを同定するためのスクリーニング方法に関す
る。
【０００３】 （発明の背景） 細胞分裂の制御は、プログラムされた連続の事象に依存する多細胞生物の基礎
的な局面である。細胞増殖およびその制御における１つの因子は、種々のポリペ
プチドの成長因子の存在である。成長因子は、インビトロの細胞培養の増殖培地
の必須の成分であり、そしてインビボでの細胞生存に関与する。現在までに同定
されている成長因子の部分的なリストとしては、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ
；インビボでの脈管系の修復に関係する）；上皮成長因子（ＥＧＦ；外胚葉およ
び中胚葉起源の細胞に分裂促進因子として作用する）；トランスフォーミング成
長因子（ＴＧＦ）−α（それが正常細胞を軟寒天上で成長させ得ることを除いて
、ＥＧＦと同様に分裂促進因子として作用する）；トランスフォーミング成長因
子（ＴＧＦ）−β（ある細胞に対する分裂促進因子および別の細胞に対する増殖
インヒビター）；および神経成長因子（ＮＧＦ；交感神経および胚神経の発生お
よび維持に関与する）が挙げられる。（Ｗａｔｓｏｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ、９７５頁；Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕ
ｍｍｉｎｇｓ（１９８７））。
的な局面である。細胞増殖およびその制御における１つの因子は、種々のポリペ
プチドの成長因子の存在である。成長因子は、インビトロの細胞培養の増殖培地
の必須の成分であり、そしてインビボでの細胞生存に関与する。現在までに同定
されている成長因子の部分的なリストとしては、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ
；インビボでの脈管系の修復に関係する）；上皮成長因子（ＥＧＦ；外胚葉およ
び中胚葉起源の細胞に分裂促進因子として作用する）；トランスフォーミング成
長因子（ＴＧＦ）−α（それが正常細胞を軟寒天上で成長させ得ることを除いて
、ＥＧＦと同様に分裂促進因子として作用する）；トランスフォーミング成長因
子（ＴＧＦ）−β（ある細胞に対する分裂促進因子および別の細胞に対する増殖
インヒビター）；および神経成長因子（ＮＧＦ；交感神経および胚神経の発生お
よび維持に関与する）が挙げられる。（Ｗａｔｓｏｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ、９７５頁；Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕ
ｍｍｉｎｇｓ（１９８７））。
【０００４】 特定の細胞型は、正常な増殖および維持のために特定の成長因子を必要とする
ことは明らかである。ペプチド成長因子は、種々の組織から産生され、そして分
泌される。標的細胞は、代表的に成長因子の放出部位の近隣に位置される（パラ
クリン応答）。成長促進活性および分化誘導活性に加えて、成長因子は、それら
の標的細胞に対して広範な種々の効果を誘発し、そして炎症、免疫応答、および
創傷修復のようなプロセスに関与する（Ｐｉｍｅｎｔｅｌ、Ｅ．Ｈａｎｄｂｏｏ
ｋ ｏｆ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ、第１巻：Ｇｅｎｅｒａｌ Ｂａｓｉ
ｃｓ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９９４）を参照のこと）。
ことは明らかである。ペプチド成長因子は、種々の組織から産生され、そして分
泌される。標的細胞は、代表的に成長因子の放出部位の近隣に位置される（パラ
クリン応答）。成長促進活性および分化誘導活性に加えて、成長因子は、それら
の標的細胞に対して広範な種々の効果を誘発し、そして炎症、免疫応答、および
創傷修復のようなプロセスに関与する（Ｐｉｍｅｎｔｅｌ、Ｅ．Ｈａｎｄｂｏｏ
ｋ ｏｆ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ、第１巻：Ｇｅｎｅｒａｌ Ｂａｓｉ
ｃｓ（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９９４）を参照のこと）。
【０００５】 心筋肥大は、心臓の限局性のまたは全体的な拡大をいう。正常な肥大は、心臓
のポンプ運動を維持するように機能する代償性作用である。異常な肥大は、高血
圧、心筋梗塞、弁疾患、および心筋症を含む多くの状況で起こる（Ｓｉｍｐｓｏ
ｎ，Ｐ．Ｃ．ＨｅａｒｔＦａｉｌｕｒｅ ５：１１３（１９８９））。心筋細胞
のペプチド成長因子の効果は、遺伝子発現の区別されるパターンに反映される。
例えば、α−アドレナリン作用性レセプターの刺激は、培養された心筋細胞の肥
大を誘導し、そして転写レベルで遺伝子発現に特異的な変化を生成する（Ｓｉｍ
ｐｓｏｎ，Ｐ．Ｃ．「Ｃａｒｄｉａｃ Ｍｙｏｃｙｔｅ Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈ
ｙ」Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃａｒｄｉｏｖａｓ
ｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍ 、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．ら編：１２５−１３３（１
９９０））。心筋細胞において、成長因子ＴＧＦ−β１および塩基性ＦＧＦは、
同時に複合的および異種の応答を誘発する：特定の成体翻訳産物の選択的阻害、
それと同時の「胎児」の収縮性のタンパク質遺伝子のアップレギュレーション（
Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら、「Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｍｙｏｇｅｎｅｓｉｓ
」Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ
ｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．ら編：６３−７１（１９９０）
）。
のポンプ運動を維持するように機能する代償性作用である。異常な肥大は、高血
圧、心筋梗塞、弁疾患、および心筋症を含む多くの状況で起こる（Ｓｉｍｐｓｏ
ｎ，Ｐ．Ｃ．ＨｅａｒｔＦａｉｌｕｒｅ ５：１１３（１９８９））。心筋細胞
のペプチド成長因子の効果は、遺伝子発現の区別されるパターンに反映される。
例えば、α−アドレナリン作用性レセプターの刺激は、培養された心筋細胞の肥
大を誘導し、そして転写レベルで遺伝子発現に特異的な変化を生成する（Ｓｉｍ
ｐｓｏｎ，Ｐ．Ｃ．「Ｃａｒｄｉａｃ Ｍｙｏｃｙｔｅ Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈ
ｙ」Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃａｒｄｉｏｖａｓ
ｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍ 、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．ら編：１２５−１３３（１
９９０））。心筋細胞において、成長因子ＴＧＦ−β１および塩基性ＦＧＦは、
同時に複合的および異種の応答を誘発する：特定の成体翻訳産物の選択的阻害、
それと同時の「胎児」の収縮性のタンパク質遺伝子のアップレギュレーション（
Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒら、「Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｍｙｏｇｅｎｅｓｉｓ
」Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ
ｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．ら編：６３−７１（１９９０）
）。
【０００６】 心筋細胞および心臓の他の細胞（結合組織を含む）における成長因子の遺伝子
発現のモニタリングは、インビトロおよびインビボの両方における異常な肥大の
検出および研究に有用である。器官およびクローン細胞系は、心筋の分化の分析
のために開発されてきた（例えば、Ｂａｄｅｒ，Ｄ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍ
、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．ら編：４１−４９（１９９０）を参照のこと）。これら
の系における分化は、心筋細胞、および筋特異的タンパク質に対して惹起された
モノクローナル抗体のインビトロでの分析によりモニターされ得る。
発現のモニタリングは、インビトロおよびインビボの両方における異常な肥大の
検出および研究に有用である。器官およびクローン細胞系は、心筋の分化の分析
のために開発されてきた（例えば、Ｂａｄｅｒ，Ｄ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｓｙｓｔｅｍ
、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．ら編：４１−４９（１９９０）を参照のこと）。これら
の系における分化は、心筋細胞、および筋特異的タンパク質に対して惹起された
モノクローナル抗体のインビトロでの分析によりモニターされ得る。
【０００７】 さらに、ポリペプチド成長因子は、細胞増殖の刺激およびインビトロでの細胞
の生存を助けるための、非常に重要な細胞培養試薬である。
の生存を助けるための、非常に重要な細胞培養試薬である。
【０００８】 この探索は、インビトロおよびインビボの両方での使用のための特定の細胞増
殖を刺激および／または阻害するポリペプチドを存在させるために続けられる。
さらに、この探索は、特定の細胞型または組織型の同定を助けるために定性的に
使用され得る、そして細胞、組織、または器官が、特定のポリペプチドの発現に
ついて異常であるか否かを評価するために定性的に使用され得る新規な組織特異
的マーカーについて続けられる。
殖を刺激および／または阻害するポリペプチドを存在させるために続けられる。
さらに、この探索は、特定の細胞型または組織型の同定を助けるために定性的に
使用され得る、そして細胞、組織、または器官が、特定のポリペプチドの発現に
ついて異常であるか否かを評価するために定性的に使用され得る新規な組織特異
的マーカーについて続けられる。
【０００９】 （発明の要旨） 本発明は、配列番号２に示される完全なアミノ酸配列、または１９９８年７月
９日にＡＴＣＣ受託番号２０３０５６として、プラスミドＤＮＡとして寄託され
たｃＤＮＡクローンによりコードされる完全なアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒ
ｉａｃポリペプチドの少なくとも一部分をコードするポリヌクレオチドを含む単
離された核酸分子を提供する。寄託されたＤｅｎｄｒｉａｃクローンの配列決定
により決定されたヌクレオチド配列（これは、図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ（
配列番号１）で示される）は、３１９アミノ酸残基の完全なポリペプチドをコー
ドするオープンリーディングフレーム(これは、ヌクレオチド４２６位〜４２８ 位でＮ末端のメチオニンをコードする開始コドンを含む)、および約３８，１９ ７ダルトンの推定分子量を含む。本発明の核酸分子は、配列番号２で示されるＮ
末端のメチオニンを除く完全なアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ受託番号２０３０
５６のｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端のメチオニンを除く完全な
アミノ酸配列をコードする核酸分子を含み、この分子はまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
アミノ酸配列のＮ末端に融合される、さらなるアミノ酸をコードし得る。
９日にＡＴＣＣ受託番号２０３０５６として、プラスミドＤＮＡとして寄託され
たｃＤＮＡクローンによりコードされる完全なアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒ
ｉａｃポリペプチドの少なくとも一部分をコードするポリヌクレオチドを含む単
離された核酸分子を提供する。寄託されたＤｅｎｄｒｉａｃクローンの配列決定
により決定されたヌクレオチド配列（これは、図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ（
配列番号１）で示される）は、３１９アミノ酸残基の完全なポリペプチドをコー
ドするオープンリーディングフレーム(これは、ヌクレオチド４２６位〜４２８ 位でＮ末端のメチオニンをコードする開始コドンを含む)、および約３８，１９ ７ダルトンの推定分子量を含む。本発明の核酸分子は、配列番号２で示されるＮ
末端のメチオニンを除く完全なアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ受託番号２０３０
５６のｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端のメチオニンを除く完全な
アミノ酸配列をコードする核酸分子を含み、この分子はまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
アミノ酸配列のＮ末端に融合される、さらなるアミノ酸をコードし得る。
【００１０】 本発明は、配列番号１０に示される完全なアミノ酸配列、または１９９８年２
月１２日にＡＴＣＣ受託番号２０９６２７として、５０の異なるプラスミドＤＮ
Ａ分子のプール中のプラスミドＤＮＡとして寄託されたｃＤＮＡクローンにより
コードされる完全なアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの少な
くとも一部分をコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供す
る。寄託されたＤｅｎｄｒｉａｃクローンの配列決定により決定されたヌクレオ
チド配列（これは、配列番号９で示される）は、３１９アミノ酸残基の完全なポ
リペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(これは、ヌクレオチド ２１位〜２３位のＮ末端のメチオニンをコードする開始コドンを含む)、および 約３８，１９７ダルトンの推定分子量を含む。本発明の核酸分子は、配列番号１
０で示されるＮ末端のメチオニンを除く完全なアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ受
託番号２０９６２７のｃＤＮＡクローンによりコードされるＮ末端のメチオニン
を除く完全なアミノ酸配列をコードする核酸分子を含み、この分子はまた、Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃアミノ酸配列のＮ末端に融合される、さらなるアミノ酸をコードし
得る。
月１２日にＡＴＣＣ受託番号２０９６２７として、５０の異なるプラスミドＤＮ
Ａ分子のプール中のプラスミドＤＮＡとして寄託されたｃＤＮＡクローンにより
コードされる完全なアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの少な
くとも一部分をコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供す
る。寄託されたＤｅｎｄｒｉａｃクローンの配列決定により決定されたヌクレオ
チド配列（これは、配列番号９で示される）は、３１９アミノ酸残基の完全なポ
リペプチドをコードするオープンリーディングフレーム(これは、ヌクレオチド ２１位〜２３位のＮ末端のメチオニンをコードする開始コドンを含む)、および 約３８，１９７ダルトンの推定分子量を含む。本発明の核酸分子は、配列番号１
０で示されるＮ末端のメチオニンを除く完全なアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ受
託番号２０９６２７のｃＤＮＡクローンによりコードされるＮ末端のメチオニン
を除く完全なアミノ酸配列をコードする核酸分子を含み、この分子はまた、Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃアミノ酸配列のＮ末端に融合される、さらなるアミノ酸をコードし
得る。
【００１１】 本発明はまた、配列番号４に示される完全なアミノ酸配列、または１９９８年
１１月９日にＡＴＣＣ受託番号２０３４５１として、プラスミドＤＮＡとして寄
託されたｃＤＮＡクローンによりコードされる完全なアミノ酸配列を有するＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの少なくとも一部分をコードするポリヌクレオチ
ドを含む単離された核酸分子を提供する。寄託されたＢｒａｉｎｉａｃ−３クロ
ーンの配列決定により決定されたヌクレオチド配列（これは、図２Ａおよび２Ｂ
（配列番号３）で示される）は、３５２アミノ酸残基の完全なポリペプチドをコ
ードするオープンリーディングフレーム(これは、ヌクレオチド４７位〜４９位 のＮ末端のメチオニンをコードする開始コドンを含む)、および約３９，５２１ ダルトンの推定分子量を含む。本発明の核酸分子は、配列番号４で示されるＮ末
端のメチオニンを除く完全なアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ受託番号２０３４５
１のｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端のメチオニンを除く完全なア
ミノ酸配列をコードする核酸分子を含み、この分子はまた、Ｂｒａｉｎｉａｃ−
３アミノ酸配列のＮ末端に融合される、さらなるアミノ酸をコードし得る。
１１月９日にＡＴＣＣ受託番号２０３４５１として、プラスミドＤＮＡとして寄
託されたｃＤＮＡクローンによりコードされる完全なアミノ酸配列を有するＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの少なくとも一部分をコードするポリヌクレオチ
ドを含む単離された核酸分子を提供する。寄託されたＢｒａｉｎｉａｃ−３クロ
ーンの配列決定により決定されたヌクレオチド配列（これは、図２Ａおよび２Ｂ
（配列番号３）で示される）は、３５２アミノ酸残基の完全なポリペプチドをコ
ードするオープンリーディングフレーム(これは、ヌクレオチド４７位〜４９位 のＮ末端のメチオニンをコードする開始コドンを含む)、および約３９，５２１ ダルトンの推定分子量を含む。本発明の核酸分子は、配列番号４で示されるＮ末
端のメチオニンを除く完全なアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ受託番号２０３４５
１のｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端のメチオニンを除く完全なア
ミノ酸配列をコードする核酸分子を含み、この分子はまた、Ｂｒａｉｎｉａｃ−
３アミノ酸配列のＮ末端に融合される、さらなるアミノ酸をコードし得る。
【００１２】 本発明はまた、配列番号１２に示される完全なアミノ酸配列、または１９９７
年１１月１４日にＡＴＣＣ受託番号２０９４６３として、５０の異なる分子をコ
ードする５０の異なるプラスミドＤＮＡ分子のプール中のプラスミドＤＮＡとし
て寄託されたｃＤＮＡクローンによりコードされる完全なアミノ酸配列を有する
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの少なくとも一部分をコードするポリヌクレ
オチドを含む単離された核酸分子を提供する。寄託されたＢｒａｉｎｉａｃ−３
クローンの配列決定により決定されたヌクレオチド配列（これは、配列番号１１
で示される）は、３５２アミノ酸残基の完全なポリペプチドをコードするオープ
ンリーディングフレーム(これは、ヌクレオチド４７位〜４９位でＮ末端のメチ オニンをコードする開始コドンを含む)、および約３９，５２１ダルトンの推定 分子量を含む。本発明の核酸分子は、配列番号１２で示される、Ｎ末端のメチオ
ニンを除く完全なアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ受託番号２０９４６３のｃＤＮ
ＡクローンによりコードされるＮ末端のメチオニンを除く完全なアミノ酸配列を
コードする核酸分子を含み、この分子はまた、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸配
列のＮ末端に融合される、さらなるアミノ酸をコードし得る。
年１１月１４日にＡＴＣＣ受託番号２０９４６３として、５０の異なる分子をコ
ードする５０の異なるプラスミドＤＮＡ分子のプール中のプラスミドＤＮＡとし
て寄託されたｃＤＮＡクローンによりコードされる完全なアミノ酸配列を有する
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの少なくとも一部分をコードするポリヌクレ
オチドを含む単離された核酸分子を提供する。寄託されたＢｒａｉｎｉａｃ−３
クローンの配列決定により決定されたヌクレオチド配列（これは、配列番号１１
で示される）は、３５２アミノ酸残基の完全なポリペプチドをコードするオープ
ンリーディングフレーム(これは、ヌクレオチド４７位〜４９位でＮ末端のメチ オニンをコードする開始コドンを含む)、および約３９，５２１ダルトンの推定 分子量を含む。本発明の核酸分子は、配列番号１２で示される、Ｎ末端のメチオ
ニンを除く完全なアミノ酸配列、またはＡＴＣＣ受託番号２０９４６３のｃＤＮ
ＡクローンによりコードされるＮ末端のメチオニンを除く完全なアミノ酸配列を
コードする核酸分子を含み、この分子はまた、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸配
列のＮ末端に融合される、さらなるアミノ酸をコードし得る。
【００１３】 コードされるＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドは、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃに
下線で示される２５アミノ酸の推定リーダー配列を有し；そして推定成熟Ｄｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列はまた、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ、な
らびに配列番号２および配列番号１０に、アミノ酸残基２６〜３１９として示さ
れる。
下線で示される２５アミノ酸の推定リーダー配列を有し；そして推定成熟Ｄｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列はまた、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ、な
らびに配列番号２および配列番号１０に、アミノ酸残基２６〜３１９として示さ
れる。
【００１４】 コードされるＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、図２Ａおよび２Ｂに下線
で示される２８アミノ酸の推定リーダー配列を有し；そして推定成熟Ｂｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列はまた、図２Ａおよび２Ｂ、ならびに配
列番号４および配列番号１２に、アミノ酸残基２９〜３５２として示される。
で示される２８アミノ酸の推定リーダー配列を有し；そして推定成熟Ｂｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列はまた、図２Ａおよび２Ｂ、ならびに配
列番号４および配列番号１２に、アミノ酸残基２９〜３５２として示される。
【００１５】 従って、本発明の１つの実施態様は、以下からなる群から選択されるヌクレオ
チド配列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する：（ａ
）配列番号２および配列番号１０の完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号２お
よび配列番号１０の−２５〜２９４位）を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列；（ｂ））Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号２
および配列番号１０の完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号２および配列番号
１０の−２４〜２９４位）を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列；（ｃ）配列番号２および配列番号１０の１〜２９４位でのア
ミノ酸配列を有する推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌクレ
オチド配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０
９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列を有
するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）ＡＴ
ＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９０５６に含まれるｃＤ
ＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端メチオニンを除く完全アミノ酸配列を
有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）Ａ
ＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９０５６に含まれるｃ
ＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；ならびに（ｇ）上記の（ａ）、（
ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、または（ｆ）の任意のヌクレオチド配列に相補
的なヌクレオチド配列。
チド配列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する：（ａ
）配列番号２および配列番号１０の完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号２お
よび配列番号１０の−２５〜２９４位）を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列；（ｂ））Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号２
および配列番号１０の完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号２および配列番号
１０の−２４〜２９４位）を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列；（ｃ）配列番号２および配列番号１０の１〜２９４位でのア
ミノ酸配列を有する推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌクレ
オチド配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０
９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列を有
するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）ＡＴ
ＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９０５６に含まれるｃＤ
ＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端メチオニンを除く完全アミノ酸配列を
有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）Ａ
ＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９０５６に含まれるｃ
ＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；ならびに（ｇ）上記の（ａ）、（
ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、または（ｆ）の任意のヌクレオチド配列に相補
的なヌクレオチド配列。
【００１６】 本発明のさらなる実施態様は、以下からなる群から選択されるヌクレオチド配
列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する：（ａ）配列
番号４および配列番号１２の完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号４の−２８
〜３２４位）を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列；（ｂ）Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号４および配列番号１２の完
全アミノ酸配列（すなわち、配列番号４および配列番号１２の−２７〜３２４位
）を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号４および配列番号１２の１〜３２４位のアミノ酸配列を有する推
定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｄ
）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれ
るｃＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉ
ａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号
２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローン
によりコードされるＮ末端メチオニンを除く、完全アミノ酸配列を有するＢｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）ＡＴＣＣ受
託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡク
ローンよりにコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリ
ペプチドをコードするヌクレオチド配列；ならびに（ｇ）上記の（ａ）、（ｂ）
、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、または（ｆ）の任意のヌクレオチド配列に相補的な
ヌクレオチド配列。
列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する：（ａ）配列
番号４および配列番号１２の完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号４の−２８
〜３２４位）を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列；（ｂ）Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号４および配列番号１２の完
全アミノ酸配列（すなわち、配列番号４および配列番号１２の−２７〜３２４位
）を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号４および配列番号１２の１〜３２４位のアミノ酸配列を有する推
定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｄ
）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれ
るｃＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉ
ａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号
２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローン
によりコードされるＮ末端メチオニンを除く、完全アミノ酸配列を有するＢｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）ＡＴＣＣ受
託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡク
ローンよりにコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリ
ペプチドをコードするヌクレオチド配列；ならびに（ｇ）上記の（ａ）、（ｂ）
、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、または（ｆ）の任意のヌクレオチド配列に相補的な
ヌクレオチド配列。
【００１７】 本発明のさらなる実施態様は、上記のＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３に関する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）または（ｇ）
のヌクレオチド配列のいずれかに対して、または上記のＤｅｎｄｒｉａｃおよび
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３に関する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ
）または（ｇ）のポリヌクレオチドに対してストリンジェントなハイブリダイゼ
ーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに対して、少なくとも９
０％同一であり、そしてより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９
８％、または９９％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含
む単離された核酸分子を含む。このハイブリダイズするポリヌクレオチドは、Ａ
残基のみからなるヌクレオチド配列、またはＴ残基のみからなるヌクレオチド配
列を有するポリヌクレオチドに対しストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件下でハイブリダイズしない。
ｃ−３に関する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）または（ｇ）
のヌクレオチド配列のいずれかに対して、または上記のＤｅｎｄｒｉａｃおよび
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３に関する（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ
）または（ｇ）のポリヌクレオチドに対してストリンジェントなハイブリダイゼ
ーション条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドに対して、少なくとも９
０％同一であり、そしてより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９
８％、または９９％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含
む単離された核酸分子を含む。このハイブリダイズするポリヌクレオチドは、Ａ
残基のみからなるヌクレオチド配列、またはＴ残基のみからなるヌクレオチド配
列を有するポリヌクレオチドに対しストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件下でハイブリダイズしない。
【００１８】 本発明のさらなる核酸の実施態様は、上記のＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３に関する、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）
のアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドのエピトープ保有部分のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む
、単離された核酸分子に関する。本発明のさらなる核酸の実施態様は、少なくと
も１つの保存的アミノ酸置換を含むが、５０以下の保存的アミノ酸置換、さらに
より好ましくは、４０以下の保存的アミノ酸置換、なおより好ましくは、３０以
下の保存的アミノ酸置換、そして、なおさらにより好ましくは、２０以下のアミ
ノ酸置換を含むアミノ酸配列を有する、ＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む、単離
された核酸分子に関する。もちろん、さらに増して好ましくあるためには、Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列をコード
するポリヌクレオチドが、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以
下の保存的アミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有することは、非常に好ましい。
ｎｉａｃ−３に関する、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）
のアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドのエピトープ保有部分のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む
、単離された核酸分子に関する。本発明のさらなる核酸の実施態様は、少なくと
も１つの保存的アミノ酸置換を含むが、５０以下の保存的アミノ酸置換、さらに
より好ましくは、４０以下の保存的アミノ酸置換、なおより好ましくは、３０以
下の保存的アミノ酸置換、そして、なおさらにより好ましくは、２０以下のアミ
ノ酸置換を含むアミノ酸配列を有する、ＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む、単離
された核酸分子に関する。もちろん、さらに増して好ましくあるためには、Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列をコード
するポリヌクレオチドが、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以
下の保存的アミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有することは、非常に好ましい。
【００１９】 本発明はまた、本発明の単離された核酸分子を含む組換えベクター、および組
換えベクターを含む宿主細胞、ならびにこのようなベクターおよび宿主細胞の作
製方法、および組換え技術によるＤｅｎｄｒｉａｃもしくはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチドまたはペプチドの産生にこれらを使用する方法に関する。
換えベクターを含む宿主細胞、ならびにこのようなベクターおよび宿主細胞の作
製方法、および組換え技術によるＤｅｎｄｒｉａｃもしくはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチドまたはペプチドの産生にこれらを使用する方法に関する。
【００２０】 本発明はまた、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離された
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを提供する：（ａ）配列番号２および配列番号１
０に示される完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号２および配列番号１０の１
〜３１９位）を有する全長Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列；（ｂ
）Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号２および配列番号１０に示される完全アミ
ノ酸配列（すなわち、配列番号２および配列番号１０の２〜３１９位）を有する
全長Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列；（ｃ）配列番号２および配
列番号１０の２６〜３１９位のアミノ酸配列を有する推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴ
ＣＣ受託番号２０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全
アミノ酸配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２
０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端メチオニン
を除く完全アミノ酸配列；および（ｆ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡ
ＴＣＣ受託番号２０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる推
定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの完全アミノ酸配列。
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを提供する：（ａ）配列番号２および配列番号１
０に示される完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号２および配列番号１０の１
〜３１９位）を有する全長Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列；（ｂ
）Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号２および配列番号１０に示される完全アミ
ノ酸配列（すなわち、配列番号２および配列番号１０の２〜３１９位）を有する
全長Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列；（ｃ）配列番号２および配
列番号１０の２６〜３１９位のアミノ酸配列を有する推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴ
ＣＣ受託番号２０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全
アミノ酸配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２
０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端メチオニン
を除く完全アミノ酸配列；および（ｆ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡ
ＴＣＣ受託番号２０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる推
定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの完全アミノ酸配列。
【００２１】 さらに、本発明は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離さ
れたＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを提供する：（ａ）配列番号４および配
列番号１２に示される完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号４および配列番号
１２の１〜３５２位）を有する全長Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ
酸配列；（ｂ）Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号４および配列番号１２に示さ
れる完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号４および配列番号１２の２〜３５２
位）を有する全長Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｃ）配
列番号４および配列番号１２の２９〜３５２位のアミノ酸配列を有する推定成熟
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２
０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローンに
よりコードされる完全アミノ酸配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およ
びＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされ
る、Ｎ末端メチオニンを除く完全アミノ酸配列；および（ｆ）ＡＴＣＣ受託番号
２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローン
によりコードされる推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの完全アミノ酸
配列。
れたＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを提供する：（ａ）配列番号４および配
列番号１２に示される完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号４および配列番号
１２の１〜３５２位）を有する全長Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ
酸配列；（ｂ）Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号４および配列番号１２に示さ
れる完全アミノ酸配列（すなわち、配列番号４および配列番号１２の２〜３５２
位）を有する全長Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｃ）配
列番号４および配列番号１２の２９〜３５２位のアミノ酸配列を有する推定成熟
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２
０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローンに
よりコードされる完全アミノ酸配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およ
びＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされ
る、Ｎ末端メチオニンを除く完全アミノ酸配列；および（ｆ）ＡＴＣＣ受託番号
２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローン
によりコードされる推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの完全アミノ酸
配列。
【００２２】 本発明のポリペプチドはまた、上記のＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）に記載されるポ
リペプチドに対し、少なくとも８０％同一であり、より好ましくは少なくとも９
０％同一であり、そしてなおより好ましくは９５％、９６％、９７％、９８％、
または９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド、ならびに上記のＤ
ｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３に対して少なくとも９０％の類似性
、そしてより好ましくは少なくとも９５％の類似性を有するアミノ酸配列を有す
るポリペプチドを含む。
ｃ−３の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）に記載されるポ
リペプチドに対し、少なくとも８０％同一であり、より好ましくは少なくとも９
０％同一であり、そしてなおより好ましくは９５％、９６％、９７％、９８％、
または９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド、ならびに上記のＤ
ｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３に対して少なくとも９０％の類似性
、そしてより好ましくは少なくとも９５％の類似性を有するアミノ酸配列を有す
るポリペプチドを含む。
【００２３】 本発明のさらなる実施態様は、上記のＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３に関する、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）に記載
されるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ
−３ポリペプチドのエピトープ保有部分のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポ
リペプチドに関する。本発明のＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３ポリペプチドのエピトープ保有部分のアミノ酸配列を有するペプチドまた
はポリペプチドは、少なくとも６個または７個、好ましくは少なくとも９個、そ
してより好ましくは少なくとも約３０アミノ酸〜約５０アミノ酸のこのようなポ
リペプチドの部分を含むが、任意の長さまでのエピトープ保有ポリペプチド、お
よび上記に記載された本発明のポリペプチドの完全なアミノ酸配列を含むエピト
ープ保有ポリペプチドもまた、本発明に含まれる。
ｃ−３に関する、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）に記載
されるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ
−３ポリペプチドのエピトープ保有部分のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポ
リペプチドに関する。本発明のＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３ポリペプチドのエピトープ保有部分のアミノ酸配列を有するペプチドまた
はポリペプチドは、少なくとも６個または７個、好ましくは少なくとも９個、そ
してより好ましくは少なくとも約３０アミノ酸〜約５０アミノ酸のこのようなポ
リペプチドの部分を含むが、任意の長さまでのエピトープ保有ポリペプチド、お
よび上記に記載された本発明のポリペプチドの完全なアミノ酸配列を含むエピト
ープ保有ポリペプチドもまた、本発明に含まれる。
【００２４】 本発明のさらなる実施態様は、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含むが
、５０以下の保存的アミノ酸置換、さらにより好ましくは、４０以下の保存的ア
ミノ酸置換、なおより好ましくは、３０以下の保存的アミノ酸置換、そして、な
おさらにより好ましくは、２０以下のアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有する
、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ
酸配列を含む、ペプチドまたはポリペプチドに関する。もちろん、さらに増して
好ましくあるためには、ペプチドまたはポリペプチドが、少なくとも１つの保存
的アミノ酸置換を含むが、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以
下の保存的アミノ酸置換を含む、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉ
ａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有することは、非常
に好ましい。
、５０以下の保存的アミノ酸置換、さらにより好ましくは、４０以下の保存的ア
ミノ酸置換、なおより好ましくは、３０以下の保存的アミノ酸置換、そして、な
おさらにより好ましくは、２０以下のアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有する
、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ
酸配列を含む、ペプチドまたはポリペプチドに関する。もちろん、さらに増して
好ましくあるためには、ペプチドまたはポリペプチドが、少なくとも１つの保存
的アミノ酸置換を含むが、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以
下の保存的アミノ酸置換を含む、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉ
ａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列を含むアミノ酸配列を有することは、非常
に好ましい。
【００２５】 別の実施態様において、本発明は、上記のＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３に関する、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）に
記載されるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドに対して特異的に結合する単離された抗体を提供する。本発明はさ
らに、本明細書中に記載されるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃおよび／
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドに対して特異的に結合する抗体を単離
する方法を提供する。このような抗体は、以下に記載されるように診断上または
治療上有用である。
ｉａｃ−３に関する、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）に
記載されるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドに対して特異的に結合する単離された抗体を提供する。本発明はさ
らに、本明細書中に記載されるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃおよび／
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドに対して特異的に結合する抗体を単離
する方法を提供する。このような抗体は、以下に記載されるように診断上または
治療上有用である。
【００２６】 本発明はまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチド、特にヒトＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドを含む薬学的組成物を提供し、これは、例えば、免疫系および／または神
経系の疾患および障害に対して処置するために使用され得る。Ｄｅｎｄｒｉａｃ
および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを必要とする個体を処置する
方法もまた、提供され得る。
プチド、特にヒトＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドを含む薬学的組成物を提供し、これは、例えば、免疫系および／または神
経系の疾患および障害に対して処置するために使用され得る。Ｄｅｎｄｒｉａｃ
および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを必要とする個体を処置する
方法もまた、提供され得る。
【００２７】 本発明はさらに、インビトロでの細胞、エキソビボでの細胞、およびインビボ
での細胞または多細胞生物への投与のためのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリヌクレオチドまたはＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを含む組成物を提供する。本発明のこの局面に
おける特定の特に好ましい実施態様において、組成物は、疾患の処置のために、
宿主生物中でのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドの発現のためのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリ
ヌクレオチドを含む。この点において特に好ましいのは、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよ
び／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチ
ドの異所内在性活性に関連する機能障害の処置のためのヒト患者における発現で
ある。
での細胞または多細胞生物への投与のためのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリヌクレオチドまたはＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを含む組成物を提供する。本発明のこの局面に
おける特定の特に好ましい実施態様において、組成物は、疾患の処置のために、
宿主生物中でのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドの発現のためのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリ
ヌクレオチドを含む。この点において特に好ましいのは、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよ
び／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３のポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチ
ドの異所内在性活性に関連する機能障害の処置のためのヒト患者における発現で
ある。
【００２８】 本発明はまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドの生物学的活性を増強または阻害し得る化合物を同定するためのスクリー
ニング方法を提供する。この方法は、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチド存在下で、候補化合物と、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドによりその活性が阻害または増強され
るレセプターとを接触する工程、候補化合物およびＤｅｎｄｒｉａｃおよび／ま
たはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの存在下で、レセプターの細胞分割活性
をアッセイする工程、およびそのレセプター活性と標準レベルの活性とを比較す
る工程（この標準は、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチド存在および候補化合物の非存在下でレセプターとの間で接触がなされ
る場合にアッセイされる）を含む。このアッセイでは、標準を超えるレセプター
活性の上昇は、候補化合物がＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ
−３活性のアゴニストであることを示し、そして標準と比較したレセプター活性
の減少は、その化合物がＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
活性のアンタゴニストであることを示す。
プチドの生物学的活性を増強または阻害し得る化合物を同定するためのスクリー
ニング方法を提供する。この方法は、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチド存在下で、候補化合物と、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドによりその活性が阻害または増強され
るレセプターとを接触する工程、候補化合物およびＤｅｎｄｒｉａｃおよび／ま
たはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの存在下で、レセプターの細胞分割活性
をアッセイする工程、およびそのレセプター活性と標準レベルの活性とを比較す
る工程（この標準は、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチド存在および候補化合物の非存在下でレセプターとの間で接触がなされ
る場合にアッセイされる）を含む。このアッセイでは、標準を超えるレセプター
活性の上昇は、候補化合物がＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ
−３活性のアゴニストであることを示し、そして標準と比較したレセプター活性
の減少は、その化合物がＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
活性のアンタゴニストであることを示す。
【００２９】 別の局面では、アゴニストおよびアンタゴニストについてのスクリーニングア
ッセイが提供され、このアッセイは、候補化合物がノッチファミリーの別のメン
バーへのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３の結合に対して
有する効果を決定する工程を含む。特に、この方法は、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドおよび候補化合物をノッチファミリ
ーのメンバーと接触させる工程、および候補化合物の存在に起因してノッチファ
ミリーのメンバーへのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチドの結合が増加するか減少するかを決定する工程を含む。このアッセイ
では、標準の結合を超えるＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−
３の結合の増加は、候補化合物がＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉ
ａｃ−３結合活性のアゴニストであることを示し、そして標準と比較したＤｅｎ
ｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３結合の減少は、その化合物がＤ
ｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３結合活性のアンタゴニスト
であることを示す。 さらに別の局面において、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチドは、ウイルスレセプターまたはコレセプターとしても機能する細
胞表面ポリペプチドに結合し得る。従って、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３、あるいは、それらのアゴニストまたはアンタゴニストは、
ウイルス結合のレベルまたはＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ
−３のレセプターまたはコレセプターとの相互作用のレベルで、あるいはウイル
スの細胞への内部移行または侵入の過程でウイルスの感染力を調節するために使
用され得る。
ッセイが提供され、このアッセイは、候補化合物がノッチファミリーの別のメン
バーへのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３の結合に対して
有する効果を決定する工程を含む。特に、この方法は、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドおよび候補化合物をノッチファミリ
ーのメンバーと接触させる工程、および候補化合物の存在に起因してノッチファ
ミリーのメンバーへのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチドの結合が増加するか減少するかを決定する工程を含む。このアッセイ
では、標準の結合を超えるＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−
３の結合の増加は、候補化合物がＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉ
ａｃ−３結合活性のアゴニストであることを示し、そして標準と比較したＤｅｎ
ｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３結合の減少は、その化合物がＤ
ｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３結合活性のアンタゴニスト
であることを示す。 さらに別の局面において、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチドは、ウイルスレセプターまたはコレセプターとしても機能する細
胞表面ポリペプチドに結合し得る。従って、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３、あるいは、それらのアゴニストまたはアンタゴニストは、
ウイルス結合のレベルまたはＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ
−３のレセプターまたはコレセプターとの相互作用のレベルで、あるいはウイル
スの細胞への内部移行または侵入の過程でウイルスの感染力を調節するために使
用され得る。
【００３０】 Ｄｅｎｄｒｉａｃは、樹状細胞のみならず、（ＨＧＳ ＥＳＴデータベースの
ＢＬＡＳＴ分析を使用して）ＮＴＥＲＡ２細胞、成体肺組織、唾液腺、卵巣、Ｃ
ａｃｏ−２大腸腺癌細胞株、平滑筋、小脳、８週齢全ヒト胚、血管外皮細胞腫、
扁桃、黒質、および全脳で発現されることが発見された。
ＢＬＡＳＴ分析を使用して）ＮＴＥＲＡ２細胞、成体肺組織、唾液腺、卵巣、Ｃ
ａｃｏ−２大腸腺癌細胞株、平滑筋、小脳、８週齢全ヒト胚、血管外皮細胞腫、
扁桃、黒質、および全脳で発現されることが発見された。
【００３１】 さらに、（ノーザンブロット解析を使用して）Ｄｅｎｄｒｉａｃのメッセージ
は、脳、腎臓、膵臓、精巣、胎児肝臓、および甲状腺で、大量に検出される。さ
らにノーザンブロット実験により、以下の組織においてＤｅｎｄｒｉａｃの、よ
り低いが、明白なレベルの発現が示される；肺、肝臓、扁桃、尾状核、脳梁、海
馬、全脳、黒質、視床下核、視床、副腎皮質、小腸、胃、脾臓、リンパ節、およ
び大腸腺癌ＳＷ４８０。最後に、非常に低いレベルのＤｅｎｄｒｉａｃ発現が、
ノーザンブロットにより以下の組織で発現される：前立腺、子宮、肺癌Ａ５４９
、および黒色腫Ｇ３６１。従って、本発明の核酸は、生物学サンプルでの組織ま
たは細胞型に存在する差異を同定するためのハイブリダイゼーションプローブと
して有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに指向され
る抗体は、組織または細胞型の差異を同定するための免疫学的プローブを提供す
るために有用である。さらに、上記の組織または細胞、特に免疫系の多数の障害
について、有意により高いレベル、またはより低いレベルのＤｅｎｄｒｉａｃ遺
伝子発現が、「標準的な」Ｄｅｎｄｒｉａｃ遺伝子発現レベル（すなわち、免疫
系障害を有さない個体由来の健常組織のＤｅｎｄｒｉａｃ発現レベル）と比較し
て、このような障害を有する個体から採取した特定の組織（例えば、癌組織およ
び創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液または髄液）において
検出され得る。
は、脳、腎臓、膵臓、精巣、胎児肝臓、および甲状腺で、大量に検出される。さ
らにノーザンブロット実験により、以下の組織においてＤｅｎｄｒｉａｃの、よ
り低いが、明白なレベルの発現が示される；肺、肝臓、扁桃、尾状核、脳梁、海
馬、全脳、黒質、視床下核、視床、副腎皮質、小腸、胃、脾臓、リンパ節、およ
び大腸腺癌ＳＷ４８０。最後に、非常に低いレベルのＤｅｎｄｒｉａｃ発現が、
ノーザンブロットにより以下の組織で発現される：前立腺、子宮、肺癌Ａ５４９
、および黒色腫Ｇ３６１。従って、本発明の核酸は、生物学サンプルでの組織ま
たは細胞型に存在する差異を同定するためのハイブリダイゼーションプローブと
して有用である。同様に、ポリペプチドおよびこれらのポリペプチドに指向され
る抗体は、組織または細胞型の差異を同定するための免疫学的プローブを提供す
るために有用である。さらに、上記の組織または細胞、特に免疫系の多数の障害
について、有意により高いレベル、またはより低いレベルのＤｅｎｄｒｉａｃ遺
伝子発現が、「標準的な」Ｄｅｎｄｒｉａｃ遺伝子発現レベル（すなわち、免疫
系障害を有さない個体由来の健常組織のＤｅｎｄｒｉａｃ発現レベル）と比較し
て、このような障害を有する個体から採取した特定の組織（例えば、癌組織およ
び創傷組織）または体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液または髄液）において
検出され得る。
【００３２】 従って、本発明は、このような障害の診断において有用な診断方法を提供し、
この方法は以下を含む：（ａ）個体の細胞または体液でのＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝
子発現レベルをアッセイする工程；（ｂ）そのＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子発現レベ
ルを標準のＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子発現レベルと比較する工程、これにより、ア
ッセイしたＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子発現レベルの、標準発現レベルと比較した増
加または減少は、免疫系の障害の指標となる。
この方法は以下を含む：（ａ）個体の細胞または体液でのＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝
子発現レベルをアッセイする工程；（ｂ）そのＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子発現レベ
ルを標準のＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子発現レベルと比較する工程、これにより、ア
ッセイしたＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子発現レベルの、標準発現レベルと比較した増
加または減少は、免疫系の障害の指標となる。
【００３３】 Ｂｒａｉｎｉａｃ−３は、胎児脳のみならず、てんかん性前頭、および１２週
齢の初期段階ヒトにおいて発現されることが発見された。さらに、（ノーザンブ
ロット解析を使用して）Ｂｒａｉｎｉａｃ−３のメッセージは、胎児脳および胎
児腎臓で大量に検出される。さらに、ノーザンブロット実験により、肺および肝
臓でのＢｒａｉｎｉａｃ−３のより低いが、明白なレベルの発現がまた示される
。さらに、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３のノーザンブロット発現研究により、全てのポ
ジティブな組織で約１．３５ｋｂのバンド、胎児腎臓および胎児脳で約２．０ｋ
ｂのバンド、ならびに胎児脳で約４．０ｋｂのバンドが同定される。従って、本
発明の核酸は、生物学サンプルでの組織または細胞型の差異を同定するためのハ
イブリダイゼーションプローブとして有用である。同様に、ポリペプチドおよび
これらのポリペプチドに指向される抗体は、組織または細胞型の差異を同定する
ための免疫学的プローブを提供するために有用である。さらに、上記の組織また
は細胞、特に免疫系および神経系の多数の障害について、有意により高いレベル
、またはより低いレベルのＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現が、「標準的な」Ｂ
ｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現レベル（すなわち、免疫系障害を有さない個体由
来の健常組織のＢｒａｉｎｉａｃ−３発現レベル）と比較して、このような障害
を有する個体から採取した特定の組織（例えば、癌組織および創傷組織）または
体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液または髄液）において検出され得る。
齢の初期段階ヒトにおいて発現されることが発見された。さらに、（ノーザンブ
ロット解析を使用して）Ｂｒａｉｎｉａｃ−３のメッセージは、胎児脳および胎
児腎臓で大量に検出される。さらに、ノーザンブロット実験により、肺および肝
臓でのＢｒａｉｎｉａｃ−３のより低いが、明白なレベルの発現がまた示される
。さらに、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３のノーザンブロット発現研究により、全てのポ
ジティブな組織で約１．３５ｋｂのバンド、胎児腎臓および胎児脳で約２．０ｋ
ｂのバンド、ならびに胎児脳で約４．０ｋｂのバンドが同定される。従って、本
発明の核酸は、生物学サンプルでの組織または細胞型の差異を同定するためのハ
イブリダイゼーションプローブとして有用である。同様に、ポリペプチドおよび
これらのポリペプチドに指向される抗体は、組織または細胞型の差異を同定する
ための免疫学的プローブを提供するために有用である。さらに、上記の組織また
は細胞、特に免疫系および神経系の多数の障害について、有意により高いレベル
、またはより低いレベルのＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現が、「標準的な」Ｂ
ｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現レベル（すなわち、免疫系障害を有さない個体由
来の健常組織のＢｒａｉｎｉａｃ−３発現レベル）と比較して、このような障害
を有する個体から採取した特定の組織（例えば、癌組織および創傷組織）または
体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液または髄液）において検出され得る。
【００３４】 従って、本発明は、このような障害の診断において有用な診断方法を提供し、
この方法は以下を含む：（ａ）個体の細胞または体液でのＢｒａｉｎｉａｃ−３
遺伝子発現レベルをアッセイする工程；（ｂ）そのＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子
発現レベルを標準のＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現レベルと比較する工程、こ
れにより、アッセイしたＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現レベルの、標準発現レ
ベルと比較した増加または減少は、免疫系および神経系の障害の指標となる。
この方法は以下を含む：（ａ）個体の細胞または体液でのＢｒａｉｎｉａｃ−３
遺伝子発現レベルをアッセイする工程；（ｂ）そのＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子
発現レベルを標準のＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現レベルと比較する工程、こ
れにより、アッセイしたＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現レベルの、標準発現レ
ベルと比較した増加または減少は、免疫系および神経系の障害の指標となる。
【００３５】 本発明の別の実施態様は、体内でのＤｅｎｄｒｉａｃ活性レベルの増加を必要
とする個体を処置するための方法に関し、このような個体に、治療的有効量の本
発明の単離されたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドまたはそのアゴニストを含む組
成物を投与する工程を含む。
とする個体を処置するための方法に関し、このような個体に、治療的有効量の本
発明の単離されたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドまたはそのアゴニストを含む組
成物を投与する工程を含む。
【００３６】 本発明のさらなる実施態様は、体内でのＤｅｎｄｒｉａｃ活性レベルの減少を
必要とする個体を処置するための方法に関し、このような個体に、治療的有効量
のＤｅｎｄｒｉａｃアンタゴニストを含む組成物を投与する工程を含む。本発明
の使用のための好ましいアンタゴニストは、Ｄｅｎｄｒｉａｃ特異的抗体である
。
必要とする個体を処置するための方法に関し、このような個体に、治療的有効量
のＤｅｎｄｒｉａｃアンタゴニストを含む組成物を投与する工程を含む。本発明
の使用のための好ましいアンタゴニストは、Ｄｅｎｄｒｉａｃ特異的抗体である
。
【００３７】 本発明のよりさらなる実施態様は、体内でのＢｒａｉｎｉａｃ−３活性レベル
の増加を必要とする個体を処置するための方法に関し、このような個体に、治療
的有効量の本発明の単離されたＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはそのア
ゴニストを含む組成物を投与する工程を含む。
の増加を必要とする個体を処置するための方法に関し、このような個体に、治療
的有効量の本発明の単離されたＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはそのア
ゴニストを含む組成物を投与する工程を含む。
【００３８】 本発明のなおさらなる実施態様は、体内でのＢｒａｉｎｉａｃ−３活性レベル
の減少を必要とする個体を処置するための方法に関し、このような個体に、治療
的有効量のＢｒａｉｎｉａｃ−３アンタゴニストを含む組成物を投与する工程を
含む。本発明の使用のための好ましいアンタゴニストは、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３
特異的抗体である。
の減少を必要とする個体を処置するための方法に関し、このような個体に、治療
的有効量のＢｒａｉｎｉａｃ−３アンタゴニストを含む組成物を投与する工程を
含む。本発明の使用のための好ましいアンタゴニストは、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３
特異的抗体である。
【００３９】 （発明の詳細な説明） 本発明は、クローン化されたｃＤＮＡを配列決定することにより決定された、
配列番号２で示されるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する。図１Ａ、１Ｂ
、および１Ｃ（配列番号１）で示されるヌクレオチド配列は、ＨＦＶＩＦ４０
ｃＤＮＡクローン（アメリカンタイプカルチャーコレクション １０８０１ Ｕ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉ
ａ ２０１１０−２２０９に１９９８年７月９日に寄託され、そして、ＡＴＣＣ
受託番号２０３０５６が与えられた）を配列決定することにより得られた。寄託
されたクローンは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ（−）プラスミド（Ｓｔｒａ
ｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）に含まれる。このクローンのヌクレオ
チド配列およびアミノ酸配列は、米国仮特許取得出願番号６０／０７７，６８７
において提供され、そしてそれぞれ配列番号９および配列番号１０として本願に
おいて示される。
配列番号２で示されるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する。図１Ａ、１Ｂ
、および１Ｃ（配列番号１）で示されるヌクレオチド配列は、ＨＦＶＩＦ４０
ｃＤＮＡクローン（アメリカンタイプカルチャーコレクション １０８０１ Ｕ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉ
ａ ２０１１０−２２０９に１９９８年７月９日に寄託され、そして、ＡＴＣＣ
受託番号２０３０５６が与えられた）を配列決定することにより得られた。寄託
されたクローンは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ（−）プラスミド（Ｓｔｒａ
ｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）に含まれる。このクローンのヌクレオ
チド配列およびアミノ酸配列は、米国仮特許取得出願番号６０／０７７，６８７
において提供され、そしてそれぞれ配列番号９および配列番号１０として本願に
おいて示される。
【００４０】 本発明のＤｅｎｄｒｉａｃをコードするｍＲＮＡについて決定されたヌクレオ
チド配列は翻訳され、配列番号１０として示される決定されたアミノ酸配列を提
供する。配列番号１０として示されるＤｅｎｄｒｉａｃの決定されたアミノ酸配
列は、配列番号９として示される決定されたヌクレオチド配列を、タンパク質の
翻訳開始（「開始」）コドンまたはその付近で開始し、そして最初の翻訳終止（
「停止」）コドンまで続けることによりコードされた。配列番号９において示さ
れる決定されたヌクレオチド配列の翻訳は、同一オープンリーディングフレーム
内の最初のアミノ酸コドンから最初の停止コドンまで（すなわち、このオープン
リーディングフレームの中の最後のアミノ酸として同定された配列番号１０にお
ける位置でアミノ酸をコードする、配列番号９の位置まで）のオープンリーディ
ングフレームにおいて持続される。
チド配列は翻訳され、配列番号１０として示される決定されたアミノ酸配列を提
供する。配列番号１０として示されるＤｅｎｄｒｉａｃの決定されたアミノ酸配
列は、配列番号９として示される決定されたヌクレオチド配列を、タンパク質の
翻訳開始（「開始」）コドンまたはその付近で開始し、そして最初の翻訳終止（
「停止」）コドンまで続けることによりコードされた。配列番号９において示さ
れる決定されたヌクレオチド配列の翻訳は、同一オープンリーディングフレーム
内の最初のアミノ酸コドンから最初の停止コドンまで（すなわち、このオープン
リーディングフレームの中の最後のアミノ酸として同定された配列番号１０にお
ける位置でアミノ酸をコードする、配列番号９の位置まで）のオープンリーディ
ングフレームにおいて持続される。
【００４１】 本発明はさらに、クローン化されたｃＤＮＡを配列決定することにより決定さ
れた、配列番号４において示されるアミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供す
る。図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）において示されるヌクレオチド配列は、Ｈ
ＦＣＣＱ５０ ｃＤＮＡクローン（アメリカンタイプカルチャーコレクション
１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，
Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０９に１９９８年１１月９日に寄託され、
そして、ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１が与えられた）を配列決定することによ
り得られた。寄託されたクローンは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ（−）プラ
スミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）に含まれる。このク
ローンのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、米国仮特許取得出願番号６０
／０６８，００６において提供され、そしてそれぞれ配列番号１１および配列番
号１２として本願において示される。
れた、配列番号４において示されるアミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供す
る。図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）において示されるヌクレオチド配列は、Ｈ
ＦＣＣＱ５０ ｃＤＮＡクローン（アメリカンタイプカルチャーコレクション
１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，
Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０９に１９９８年１１月９日に寄託され、
そして、ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１が与えられた）を配列決定することによ
り得られた。寄託されたクローンは、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ（−）プラ
スミド（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）に含まれる。このク
ローンのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、米国仮特許取得出願番号６０
／０６８，００６において提供され、そしてそれぞれ配列番号１１および配列番
号１２として本願において示される。
【００４２】 本発明のＢｒａｉｎｉａｃ−３をコードするｍＲＮＡについて決定されたヌク
レオチド配列は翻訳され、配列番号１２として示される決定されたアミノ酸配列
を提供する。配列番号１２として示されるＢｒａｉｎｉａｃ−３の決定されたア
ミノ酸配列は、配列番号１１として示される決定されたヌクレオチド配列をタン
パク質の翻訳開始（「開始」）コドンまたはその付近で開始し、そして最初の翻
訳終止（「停止」）コドンまで続けることによりコードされた。配列番号１１に
おいて示される決定されたヌクレオチド配列の翻訳は、同一オープンリーディン
グフレーム内の最初のアミノ酸コドンから最初の停止コドンまで（すなわち、こ
のオープンリーディングフレームの中の最後のアミノ酸として同定された配列番
号１２における位置でアミノ酸をコードする、配列番号１１の位置まで）の読み
取り枠において持続される。
レオチド配列は翻訳され、配列番号１２として示される決定されたアミノ酸配列
を提供する。配列番号１２として示されるＢｒａｉｎｉａｃ−３の決定されたア
ミノ酸配列は、配列番号１１として示される決定されたヌクレオチド配列をタン
パク質の翻訳開始（「開始」）コドンまたはその付近で開始し、そして最初の翻
訳終止（「停止」）コドンまで続けることによりコードされた。配列番号１１に
おいて示される決定されたヌクレオチド配列の翻訳は、同一オープンリーディン
グフレーム内の最初のアミノ酸コドンから最初の停止コドンまで（すなわち、こ
のオープンリーディングフレームの中の最後のアミノ酸として同定された配列番
号１２における位置でアミノ酸をコードする、配列番号１１の位置まで）の読み
取り枠において持続される。
【００４３】 本発明のＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、Ｂｒ
ａｉｎｉａｃをコードするＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ
ｍＲＮＡの翻訳産物と配列相同性を共有する（図３；配列番号５）。Ｂｒａｉｎ
ｉａｃ−３は、神経性分泌シグナルタンパク質と相同性を共有する。Ｄｒｏｓｏ
ｐｈｉｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃは、胚形成細胞のニューロンへの分化において役
割を果たすと考えられる、重要な神経性分泌分子であることが考えられる。従っ
て、ＤｅｎｄｒｉａｃポリヌクレオチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリヌクレ
オチドならびに本発明のポリペプチドは、細胞の初期ステージにおける細胞分化
および組織発生に効力を発揮し、そして樹状細胞、または他の免疫系細胞、また
はニューロン、または神経系の他の細胞への胚形成細胞の分化において補助する
ために供され得ることが意図される。
ａｉｎｉａｃをコードするＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ
ｍＲＮＡの翻訳産物と配列相同性を共有する（図３；配列番号５）。Ｂｒａｉｎ
ｉａｃ−３は、神経性分泌シグナルタンパク質と相同性を共有する。Ｄｒｏｓｏ
ｐｈｉｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃは、胚形成細胞のニューロンへの分化において役
割を果たすと考えられる、重要な神経性分泌分子であることが考えられる。従っ
て、ＤｅｎｄｒｉａｃポリヌクレオチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリヌクレ
オチドならびに本発明のポリペプチドは、細胞の初期ステージにおける細胞分化
および組織発生に効力を発揮し、そして樹状細胞、または他の免疫系細胞、また
はニューロン、または神経系の他の細胞への胚形成細胞の分化において補助する
ために供され得ることが意図される。
【００４４】 （核酸分子） 他に示されない限り、本明細書中でＤＮＡ分子を配列決定することによって決
定されたすべてのヌクレオチド配列は、自動化ＤＮＡ配列決定機（例えば、Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ
のＭｏｄｅｌ ３７３）を用いて決定され、そして本明細書中で決定されるＤＮ
Ａ分子によってコードされるポリペプチドのすべてのアミノ酸配列は、上記のよ
うに決定されるＤＮＡ配列の翻訳によって推定された。従って、この自動化アプ
ローチによって決定された任意のＤＮＡ配列について当該分野において公知のよ
うに、本明細書中で決定される任意のヌクレオチド配列はいくつかの誤りを含み
得る。自動化によって決定されるヌクレオチド配列は、配列決定されるＤＮＡ分
子の実際のヌクレオチド配列に対して、代表的には少なくとも約９０％同一、よ
り代表的には少なくとも約９５％から少なくとも約９９．９％同一である。実際
の配列は、当該分野において周知の手動ＤＮＡ配列決定方法を含む他のアプロー
チによってさらに正確に決定され得る。当該分野においてまた公知のように、実
際の配列と比較した、決定されるヌクレオチド配列における単一の挿入または欠
失は、ヌクレオチド配列の翻訳においてフレームシフトを引き起こし、その結果
、決定されたヌクレオチド配列によってコードされる推定アミノ酸配列は、配列
決定されたＤＮＡ分子によって実際にコードされるアミノ酸配列とは完全に異な
り、このような挿入または欠失の点にて始まる。
定されたすべてのヌクレオチド配列は、自動化ＤＮＡ配列決定機（例えば、Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ
のＭｏｄｅｌ ３７３）を用いて決定され、そして本明細書中で決定されるＤＮ
Ａ分子によってコードされるポリペプチドのすべてのアミノ酸配列は、上記のよ
うに決定されるＤＮＡ配列の翻訳によって推定された。従って、この自動化アプ
ローチによって決定された任意のＤＮＡ配列について当該分野において公知のよ
うに、本明細書中で決定される任意のヌクレオチド配列はいくつかの誤りを含み
得る。自動化によって決定されるヌクレオチド配列は、配列決定されるＤＮＡ分
子の実際のヌクレオチド配列に対して、代表的には少なくとも約９０％同一、よ
り代表的には少なくとも約９５％から少なくとも約９９．９％同一である。実際
の配列は、当該分野において周知の手動ＤＮＡ配列決定方法を含む他のアプロー
チによってさらに正確に決定され得る。当該分野においてまた公知のように、実
際の配列と比較した、決定されるヌクレオチド配列における単一の挿入または欠
失は、ヌクレオチド配列の翻訳においてフレームシフトを引き起こし、その結果
、決定されたヌクレオチド配列によってコードされる推定アミノ酸配列は、配列
決定されたＤＮＡ分子によって実際にコードされるアミノ酸配列とは完全に異な
り、このような挿入または欠失の点にて始まる。
【００４５】 核酸分子またはポリヌクレオチドの「ヌクレオチド配列」によって、ＤＮＡ分
子またはポリヌクレオチドについてはデオキシリボヌクレオチドの配列が、そし
てＲＮＡ分子またはポリヌクレオチドについてはリボヌクレオチド（Ａ，Ｇ，Ｃ
，およびＵ）の対応する配列（ここで、特定されるデオキシリボヌクレオチド配
列における各チミジンデオキシリボヌクレオチド（Ｔ）は、リボヌクレオチドの
ウリジン（Ｕ）によって置き換えられる）が意図される。
子またはポリヌクレオチドについてはデオキシリボヌクレオチドの配列が、そし
てＲＮＡ分子またはポリヌクレオチドについてはリボヌクレオチド（Ａ，Ｇ，Ｃ
，およびＵ）の対応する配列（ここで、特定されるデオキシリボヌクレオチド配
列における各チミジンデオキシリボヌクレオチド（Ｔ）は、リボヌクレオチドの
ウリジン（Ｕ）によって置き換えられる）が意図される。
【００４６】 図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番号９におけるヌクレ
オチド配列のような、本明細書中で提供される情報を使用して、Ｄｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドをコードする本発明の核酸分子は、出発物質としてｍＲＮＡを使
用してｃＤＮＡをクローニングするための手順のような標準的なクローニングお
よびスクリーニング手順を使用して得られ得る。本発明の実例となる、図１Ａ、
１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番号９に記載される核酸分子は、
樹状細胞由来のｃＤＮＡライブラリーから発見された。同じ遺伝子のさらなるク
ローンは、以下の組織由来のｃＤＮＡライブラリーにおいてもまた同定された：
ＮＴＥＲＡ２細胞、成人肺組織、唾液腺、卵巣、Ｃａｃｏ−２結腸腺癌細胞株、
平滑筋、小脳、８週齢全ヒト胚、血管外皮細胞腫（ｈｅｍａｇｉｏｐｅｒｉｃｙ
ｔｏｍａ）、扁桃、黒質、および全脳。
オチド配列のような、本明細書中で提供される情報を使用して、Ｄｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドをコードする本発明の核酸分子は、出発物質としてｍＲＮＡを使
用してｃＤＮＡをクローニングするための手順のような標準的なクローニングお
よびスクリーニング手順を使用して得られ得る。本発明の実例となる、図１Ａ、
１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番号９に記載される核酸分子は、
樹状細胞由来のｃＤＮＡライブラリーから発見された。同じ遺伝子のさらなるク
ローンは、以下の組織由来のｃＤＮＡライブラリーにおいてもまた同定された：
ＮＴＥＲＡ２細胞、成人肺組織、唾液腺、卵巣、Ｃａｃｏ−２結腸腺癌細胞株、
平滑筋、小脳、８週齢全ヒト胚、血管外皮細胞腫（ｈｅｍａｇｉｏｐｅｒｉｃｙ
ｔｏｍａ）、扁桃、黒質、および全脳。
【００４７】 図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１におけるヌクレオチド
配列のような、本明細書中で提供される情報を使用して、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドをコードする本発明の核酸分子は、出発物質としてｍＲＮＡを使用
してｃＤＮＡをクローニングするための手順のような標準的なクローニングおよ
びスクリーニング手順を使用して得られ得る。本発明の実例となる、図２Ａおよ
び２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１に記載される核酸分子は、胎児脳由
来のｃＤＮＡライブラリーから発見された。同じ遺伝子のさらなるクローンは、
以下の組織由来のｃＤＮＡライブラリーにおいてもまた同定された：てんかん性
前頭皮質、および１２週齢の初期ステージのヒト。
配列のような、本明細書中で提供される情報を使用して、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドをコードする本発明の核酸分子は、出発物質としてｍＲＮＡを使用
してｃＤＮＡをクローニングするための手順のような標準的なクローニングおよ
びスクリーニング手順を使用して得られ得る。本発明の実例となる、図２Ａおよ
び２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１に記載される核酸分子は、胎児脳由
来のｃＤＮＡライブラリーから発見された。同じ遺伝子のさらなるクローンは、
以下の組織由来のｃＤＮＡライブラリーにおいてもまた同定された：てんかん性
前頭皮質、および１２週齢の初期ステージのヒト。
【００４８】 図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）のＤｅｎｄｒｉａｃ ｃＤＮＡの決
定されたヌクレオチド配列は、３１９アミノ酸残基のポリペプチド（これは、図
１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）におけるヌクレオチド配列のヌクレオチ
ド４２６〜４２８位での開始コドン、および約３８，１９７ダルトンの推定分子
量を有する）をコードするオープンリーディングフレームを含む。配列番号９の
Ｄｅｎｄｒｉａｃ ｃＤＮＡの決定されたヌクレオチド配列は、３１９アミノ酸
残基のポリペプチド（これは、配列番号９におけるヌクレオチド配列のヌクレオ
チド２１〜２３位での開始コドン、および約３８，１９７ダルトンの推定分子量
を有する）をコードするオープンリーディングフレームを含む。配列番号２およ
び配列番号１０に示されるＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列は、Ｂ
ｒａｉｎｉａｃについてのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ
ｍＲＮＡ（図３）（これは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ４１４４９としてアクセ
スされ得る）に約２９．７％同一である。
定されたヌクレオチド配列は、３１９アミノ酸残基のポリペプチド（これは、図
１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）におけるヌクレオチド配列のヌクレオチ
ド４２６〜４２８位での開始コドン、および約３８，１９７ダルトンの推定分子
量を有する）をコードするオープンリーディングフレームを含む。配列番号９の
Ｄｅｎｄｒｉａｃ ｃＤＮＡの決定されたヌクレオチド配列は、３１９アミノ酸
残基のポリペプチド（これは、配列番号９におけるヌクレオチド配列のヌクレオ
チド２１〜２３位での開始コドン、および約３８，１９７ダルトンの推定分子量
を有する）をコードするオープンリーディングフレームを含む。配列番号２およ
び配列番号１０に示されるＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列は、Ｂ
ｒａｉｎｉａｃについてのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ
ｍＲＮＡ（図３）（これは、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ４１４４９としてアクセ
スされ得る）に約２９．７％同一である。
【００４９】 図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１のＢｒａｉｎｉａｃ−
３ ｃＤＮＡの決定されたヌクレオチド配列は、３５２アミノ酸残基のポリペプ
チド（これは、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１における
ヌクレオチド配列のヌクレオチド４７〜４９位での開始コドン、および約３９，
５２１ダルトンの推定分子量を有する）をコードするオープンリーディングフレ
ームを含む。配列番号４および配列番号１２に示されるＢｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチドのアミノ酸配列は、ＢｒａｉｎｉａｃについてのＤｒｏｓｏｐｈｉｌ
ａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ ｍＲＮＡ（図３）（これは、ＧｅｎＢａｎｋ登
録番号Ｕ４１４４９としてアクセスされ得る）に約３７．３％同一である。
３ ｃＤＮＡの決定されたヌクレオチド配列は、３５２アミノ酸残基のポリペプ
チド（これは、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１における
ヌクレオチド配列のヌクレオチド４７〜４９位での開始コドン、および約３９，
５２１ダルトンの推定分子量を有する）をコードするオープンリーディングフレ
ームを含む。配列番号４および配列番号１２に示されるＢｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチドのアミノ酸配列は、ＢｒａｉｎｉａｃについてのＤｒｏｓｏｐｈｉｌ
ａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ ｍＲＮＡ（図３）（これは、ＧｅｎＢａｎｋ登
録番号Ｕ４１４４９としてアクセスされ得る）に約３７．３％同一である。
【００５０】 当業者が理解するように、上記で議論された配列決定誤差の可能性によって、
約３１９アミノ酸（Ｄｅｎｄｒｉａｃ）および約３５２アミノ酸（Ｂｒａｉｎｉ
ａｃ−３）を含む、それぞれの寄託されたｃＤＮＡクローンによりコードされる
実際の完全なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドは、いくらか長いかもしれないし、短いかもしれない。さらに一般的には
、ＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３を含む実際のオープンリーディ
ングフレームは、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番号９
（すなわち、Ｄｅｎｄｒｉａｃ）、そして図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）なら
びに配列番号１１（すなわち、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３）において示されるＮ末端
からのメチオニンコドンから推定されるものの、±２０アミノ酸の範囲、よりお
そらくは±１０アミノ酸の範囲のいずれかにあり得る。種々の機能ドメインを同
定するために使用される分析基準に依存して、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのシグナル配列の正確な「所在
地」は、上記の推定位置からわずかに異なり得ることがさらに理解される。
約３１９アミノ酸（Ｄｅｎｄｒｉａｃ）および約３５２アミノ酸（Ｂｒａｉｎｉ
ａｃ−３）を含む、それぞれの寄託されたｃＤＮＡクローンによりコードされる
実際の完全なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドは、いくらか長いかもしれないし、短いかもしれない。さらに一般的には
、ＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３を含む実際のオープンリーディ
ングフレームは、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番号９
（すなわち、Ｄｅｎｄｒｉａｃ）、そして図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）なら
びに配列番号１１（すなわち、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３）において示されるＮ末端
からのメチオニンコドンから推定されるものの、±２０アミノ酸の範囲、よりお
そらくは±１０アミノ酸の範囲のいずれかにあり得る。種々の機能ドメインを同
定するために使用される分析基準に依存して、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのシグナル配列の正確な「所在
地」は、上記の推定位置からわずかに異なり得ることがさらに理解される。
【００５１】 （リーダー配列および成熟配列） 完全ＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド
の各アミノ酸配列は、配列番号２および配列番号１０、ならびに配列番号４およ
び配列番号１２においてそれぞれ示されるようなリーダー配列および成熟ポリペ
プチドを含む。より詳細には、本発明は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドまたは
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのいずれかの成熟形態をコードする核酸分子
を提供する。従って、シグナル仮説によれば、粗面小胞体を通して伸長しつつあ
るポリペプチド鎖の輸送が一旦開始されると、哺乳動物細胞から分泌されるポリ
ペプチドは、ポリペプチドの分泌される「成熟」形態を生成するために完全なポ
リペプチドから切断されるシグナルまたは分泌リーダー配列を有する。ほとんど
の哺乳動物細胞および昆虫細胞もなお、同じ特異性で、分泌されるポリペプチド
を切断する。しかし、いくつかの場合、分泌されるポリペプチドの切断は、完全
には均一ではなく、これによってポリペプチドの２つ以上の成熟種が生じる。さ
らに、分泌されるポリペプチドの切断特異性が、完全なポリペプチドの一次構造
によって究極的に決定されること、すなわち、切断特異性はポリペプチドのアミ
ノ酸配列に固有であることが長い間知られている。従って、本発明は、ＡＴＣＣ
受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤＮＡクロー
ンによってコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドをコードするヌクレオチド配列を提供する。従って本発明はまた、ＡＴＣＣ受
託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれるｃＤＮＡクローン
によってコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドをコードするヌクレオチド配列を提供する。「ＡＴＣＣ受託番号第２０３０
５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされ
るアミノ酸配列を有する成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド」により、寄託され
たクローンのヒトＤＮＡ配列によりコードされる完全なオープンリーディングフ
レームを哺乳動物細胞（例えば、以下に記載されるようなＣＯＳ細胞）で発現さ
せることにより産生されるＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの成熟形態が意味され
る。さらに、「ＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｂｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチド」により、寄託されたクローンのヒトＤＮＡ配列に
よりコードされる完全なオープンリーディングフレームを哺乳動物細胞（例えば
、以下に記載されるようなＣＯＳ細胞）で発現させることにより産生されるＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの成熟形態が意味される。
の各アミノ酸配列は、配列番号２および配列番号１０、ならびに配列番号４およ
び配列番号１２においてそれぞれ示されるようなリーダー配列および成熟ポリペ
プチドを含む。より詳細には、本発明は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドまたは
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのいずれかの成熟形態をコードする核酸分子
を提供する。従って、シグナル仮説によれば、粗面小胞体を通して伸長しつつあ
るポリペプチド鎖の輸送が一旦開始されると、哺乳動物細胞から分泌されるポリ
ペプチドは、ポリペプチドの分泌される「成熟」形態を生成するために完全なポ
リペプチドから切断されるシグナルまたは分泌リーダー配列を有する。ほとんど
の哺乳動物細胞および昆虫細胞もなお、同じ特異性で、分泌されるポリペプチド
を切断する。しかし、いくつかの場合、分泌されるポリペプチドの切断は、完全
には均一ではなく、これによってポリペプチドの２つ以上の成熟種が生じる。さ
らに、分泌されるポリペプチドの切断特異性が、完全なポリペプチドの一次構造
によって究極的に決定されること、すなわち、切断特異性はポリペプチドのアミ
ノ酸配列に固有であることが長い間知られている。従って、本発明は、ＡＴＣＣ
受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤＮＡクロー
ンによってコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドをコードするヌクレオチド配列を提供する。従って本発明はまた、ＡＴＣＣ受
託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれるｃＤＮＡクローン
によってコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドをコードするヌクレオチド配列を提供する。「ＡＴＣＣ受託番号第２０３０
５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされ
るアミノ酸配列を有する成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド」により、寄託され
たクローンのヒトＤＮＡ配列によりコードされる完全なオープンリーディングフ
レームを哺乳動物細胞（例えば、以下に記載されるようなＣＯＳ細胞）で発現さ
せることにより産生されるＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの成熟形態が意味され
る。さらに、「ＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｂｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチド」により、寄託されたクローンのヒトＤＮＡ配列に
よりコードされる完全なオープンリーディングフレームを哺乳動物細胞（例えば
、以下に記載されるようなＣＯＳ細胞）で発現させることにより産生されるＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの成熟形態が意味される。
【００５２】 さらに、分泌リーダーおよびそのリーダー配列のための切断点をポリペプチド
が有するか否かを推定する方法が利用可能である。例えば、ＭｃＧｅｏｃｈ（Ｖ
ｉｒｕｓ Ｒｅｓ． ３：２７１−２８６（１９８５））の方法は、完全（切断
されていない）ポリペプチドの短いＮ末端荷電領域および続く非荷電領域からの
情報を使用する。ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
． １４：４６８３−４６９０（１９８６））の方法は、切断部位、代表的には
残基−１３〜＋２（ここで、＋１は成熟ポリペプチドのアミノ末端を示す）の周
囲の残基からの情報を使用する。これらの各方法についての公知の哺乳動物分泌
ポリペプチドの切断点を推定することの精度は、７５〜８０％の範囲である（ｖ
ｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ、前出）。しかし、この２つの方法は、所定のポリペプチド
について同じ推定切断点を常に生じるわけではない。
が有するか否かを推定する方法が利用可能である。例えば、ＭｃＧｅｏｃｈ（Ｖ
ｉｒｕｓ Ｒｅｓ． ３：２７１−２８６（１９８５））の方法は、完全（切断
されていない）ポリペプチドの短いＮ末端荷電領域および続く非荷電領域からの
情報を使用する。ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
． １４：４６８３−４６９０（１９８６））の方法は、切断部位、代表的には
残基−１３〜＋２（ここで、＋１は成熟ポリペプチドのアミノ末端を示す）の周
囲の残基からの情報を使用する。これらの各方法についての公知の哺乳動物分泌
ポリペプチドの切断点を推定することの精度は、７５〜８０％の範囲である（ｖ
ｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ、前出）。しかし、この２つの方法は、所定のポリペプチド
について同じ推定切断点を常に生じるわけではない。
【００５３】 この場合、完全ＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチドの推定アミノ酸配列は、コンピュータープログラム「ＳｉｇｎａｌＰ
」（Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｈ．ら、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：１−６（１９９７）を
参照のこと）（このプログラムは、アミノ酸配列に基づいてポリペプチドの細胞
位置を推定するためのエキスパートシステムである）により分析される。位置決
めについてのこのコンピューター推定の一部として、ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅの方
法が組み込まれている。従って、上記のコンピューター使用の分析は配列番号２
および配列番号１０に示される完全なアミノ酸配列内の単一のシグナルペプチド
切断部位、ならびに配列番号４および配列番号１２に示される完全なアミノ酸配
列内の単一のシグナルペプチド切断部位を推定した。
リペプチドの推定アミノ酸配列は、コンピュータープログラム「ＳｉｇｎａｌＰ
」（Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｈ．ら、Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．１０：１−６（１９９７）を
参照のこと）（このプログラムは、アミノ酸配列に基づいてポリペプチドの細胞
位置を推定するためのエキスパートシステムである）により分析される。位置決
めについてのこのコンピューター推定の一部として、ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅの方
法が組み込まれている。従って、上記のコンピューター使用の分析は配列番号２
および配列番号１０に示される完全なアミノ酸配列内の単一のシグナルペプチド
切断部位、ならびに配列番号４および配列番号１２に示される完全なアミノ酸配
列内の単一のシグナルペプチド切断部位を推定した。
【００５４】 Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの推定シグナルペプチド配列は、配列番号１０
として示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１〜２７であることが本発明者らに
よって推定された。引き続いて、このシグナルペプチド配列が、配列番号２およ
び配列番号１０として示されるアミノ酸配列のアミノ酸１〜２５であることが、
ＳｉｇｎａｌＰコンピュータープログラムより推定された。従って、この推定シ
グナルペプチド配列は、２０〜３０の間の範囲であると推定される。従って、本
発明の好ましいポリペプチドは、任意の以下のポリペプチドを含む：配列番号２
および配列番号１０のＭｅｔ−２１〜Ｔｙｒ−３１９；Ｔｒｐ−２２〜Ｔｙｒ−
３１９；Ｔｙｒ−２３〜Ｔｙｒ−３１９；Ｌｅｕ−２４〜Ｔｙｒ−３１９；Ｓｅ
ｒ−２５〜Ｔｙｒ−３１９；Ｌｅｕ−２６〜Ｔｙｒ−３１９；Ｐｒｏ−２７〜Ｔ
ｙｒ−３１９；Ｈｉｓ−２８〜Ｔｙｒ−３１９；Ｔｙｒ−２９〜Ｔｙｒ−３１９
；およびＡｓｎ−３０〜Ｔｙｒ−３１９。これらのポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドはまた、好ましい。
として示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１〜２７であることが本発明者らに
よって推定された。引き続いて、このシグナルペプチド配列が、配列番号２およ
び配列番号１０として示されるアミノ酸配列のアミノ酸１〜２５であることが、
ＳｉｇｎａｌＰコンピュータープログラムより推定された。従って、この推定シ
グナルペプチド配列は、２０〜３０の間の範囲であると推定される。従って、本
発明の好ましいポリペプチドは、任意の以下のポリペプチドを含む：配列番号２
および配列番号１０のＭｅｔ−２１〜Ｔｙｒ−３１９；Ｔｒｐ−２２〜Ｔｙｒ−
３１９；Ｔｙｒ−２３〜Ｔｙｒ−３１９；Ｌｅｕ−２４〜Ｔｙｒ−３１９；Ｓｅ
ｒ−２５〜Ｔｙｒ−３１９；Ｌｅｕ−２６〜Ｔｙｒ−３１９；Ｐｒｏ−２７〜Ｔ
ｙｒ−３１９；Ｈｉｓ−２８〜Ｔｙｒ−３１９；Ｔｙｒ−２９〜Ｔｙｒ−３１９
；およびＡｓｎ−３０〜Ｔｙｒ−３１９。これらのポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドはまた、好ましい。
【００５５】 同様に、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの推定シグナルペプチド配列は、
配列番号１２として示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１〜２０であることが
本発明者らによって推定された。引き続いて、このシグナルペプチド配列が、配
列番号４および配列番号１２として示されるアミノ酸配列のアミノ酸１〜２８で
あることが、ＳｉｇｎａｌＰコンピュータープログラムより推定された。従って
、この推定シグナルペプチド配列は、１５〜３５の間の範囲であることが推定さ
れる。従って、本発明の好ましいポリペプチドは、任意の以下のポリペプチドを
含む：配列番号４および配列番号１２のＶａｌ−１５〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｅｕ
−１６〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｅｕ−１７〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｅｕ−１８〜Ａｒ
ｇ−３５２；Ｇｌｙ−１９〜Ａｒｇ−３５２；Ｃｙｓ−２０〜Ａｒｇ−３５２；
Ｌｅｕ−２１〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｅｕ−２２〜Ａｒｇ−３５２；Ｐｈｅ−２３
〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｅｕ−２４〜Ａｒｇ−３５２；Ａｒｇ−２５〜Ａｒｇ−３
５２；Ｌｙｓ−２６〜Ａｒｇ−３５２；Ａｌａ−２７〜Ａｒｇ−３５２；Ａｌａ
−２８〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｙｓ−２９〜Ａｒｇ−３５２；Ｐｒｏ−３０〜Ａｒ
ｇ−３５２；Ａｌａ−３１〜Ａｒｇ−３５２；Ｇｌｕ−３２〜Ａｒｇ−３５２；
Ｔｈｒ−３３〜Ａｒｇ−３５２；Ｐｒｏ−３４〜Ａｒｇ−３５２；およびＡｒｇ
−３５〜Ａｒｇ−３５２。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
はまた、好ましい。
配列番号１２として示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基１〜２０であることが
本発明者らによって推定された。引き続いて、このシグナルペプチド配列が、配
列番号４および配列番号１２として示されるアミノ酸配列のアミノ酸１〜２８で
あることが、ＳｉｇｎａｌＰコンピュータープログラムより推定された。従って
、この推定シグナルペプチド配列は、１５〜３５の間の範囲であることが推定さ
れる。従って、本発明の好ましいポリペプチドは、任意の以下のポリペプチドを
含む：配列番号４および配列番号１２のＶａｌ−１５〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｅｕ
−１６〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｅｕ−１７〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｅｕ−１８〜Ａｒ
ｇ−３５２；Ｇｌｙ−１９〜Ａｒｇ−３５２；Ｃｙｓ−２０〜Ａｒｇ−３５２；
Ｌｅｕ−２１〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｅｕ−２２〜Ａｒｇ−３５２；Ｐｈｅ−２３
〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｅｕ−２４〜Ａｒｇ−３５２；Ａｒｇ−２５〜Ａｒｇ−３
５２；Ｌｙｓ−２６〜Ａｒｇ−３５２；Ａｌａ−２７〜Ａｒｇ−３５２；Ａｌａ
−２８〜Ａｒｇ−３５２；Ｌｙｓ−２９〜Ａｒｇ−３５２；Ｐｒｏ−３０〜Ａｒ
ｇ−３５２；Ａｌａ−３１〜Ａｒｇ−３５２；Ｇｌｕ−３２〜Ａｒｇ−３５２；
Ｔｈｒ−３３〜Ａｒｇ−３５２；Ｐｒｏ−３４〜Ａｒｇ−３５２；およびＡｒｇ
−３５〜Ａｒｇ−３５２。これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
はまた、好ましい。
【００５６】 示されるように、本発明の核酸分子は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の形態、
またはＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ、およびクローニングによって得られるか、ま
たは合成的に生成されるゲノムＤＮＡを含む）の形態で存在し得る。ＤＮＡは、
二本鎖または一本鎖であり得る。一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡは、コード鎖（セン
ス鎖としてもまた知られる）であり得るか、または非コード鎖（また、アンチセ
ンス鎖とも呼ばれる）であり得る。
またはＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ、およびクローニングによって得られるか、ま
たは合成的に生成されるゲノムＤＮＡを含む）の形態で存在し得る。ＤＮＡは、
二本鎖または一本鎖であり得る。一本鎖ＤＮＡまたはＲＮＡは、コード鎖（セン
ス鎖としてもまた知られる）であり得るか、または非コード鎖（また、アンチセ
ンス鎖とも呼ばれる）であり得る。
【００５７】 特定の実施態様において、本発明のポリヌクレオチドは、３００ｋｂ、２００
ｋｂ、１００ｋｂ、５０ｋｂ、１５ｋｂ、１０ｋｂまたは７．５ｋｂ未満の長さ
である。さらなる実施態様において、本発明のポリヌクレオチドは、Ｄｅｎｄｒ
ｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３コード配列の少なくとも１５の隣接するヌク
レオチドを含むが、いずれのＤｅｎｄｒｉａｃもしくはＢｒａｉｎｉａｃ−３の
イントロンの全体も部分も含まない。別の実施態様において、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３コード配列を含む核酸は、ゲノム隣接遺伝子のコー
ド配列（すなわち、ゲノムにおけるＤｅｎｄｒｉａｃもしくはＢｒａｉｎｉａｃ
−３コード配列の５’または３’）を含まない。
ｋｂ、１００ｋｂ、５０ｋｂ、１５ｋｂ、１０ｋｂまたは７．５ｋｂ未満の長さ
である。さらなる実施態様において、本発明のポリヌクレオチドは、Ｄｅｎｄｒ
ｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３コード配列の少なくとも１５の隣接するヌク
レオチドを含むが、いずれのＤｅｎｄｒｉａｃもしくはＢｒａｉｎｉａｃ−３の
イントロンの全体も部分も含まない。別の実施態様において、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３コード配列を含む核酸は、ゲノム隣接遺伝子のコー
ド配列（すなわち、ゲノムにおけるＤｅｎｄｒｉａｃもしくはＢｒａｉｎｉａｃ
−３コード配列の５’または３’）を含まない。
【００５８】 「単離された」核酸分子によって、ネイティブな環境から取り出された核酸分
子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が意図される。例えば、ベクター中に含まれる組換え
ＤＮＡ分子は、本発明の目的のために単離されていると考えられる。単離された
ＤＮＡ分子のさらなる例は、異種の宿主細胞において維持される組換えＤＮＡ分
子、または溶液中の（部分的または実質的に）精製されたＤＮＡ分子を含む。単
離されたＲＮＡ分子は、本発明のＤＮＡ分子のインビボまたはインビトロでのＲ
ＮＡ転写物を含む。本発明に従う単離された核酸分子は、合成的に生成されたそ
のような分子をさらに含む。別の実施態様において、「単離された」核酸分子は
、細胞もしくは細胞溶解産物から単離または取り出された染色体（例えば、核型
におけるような、「染色体拡散（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｓｐｒｅａｄ）」）を
含まない。
子（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が意図される。例えば、ベクター中に含まれる組換え
ＤＮＡ分子は、本発明の目的のために単離されていると考えられる。単離された
ＤＮＡ分子のさらなる例は、異種の宿主細胞において維持される組換えＤＮＡ分
子、または溶液中の（部分的または実質的に）精製されたＤＮＡ分子を含む。単
離されたＲＮＡ分子は、本発明のＤＮＡ分子のインビボまたはインビトロでのＲ
ＮＡ転写物を含む。本発明に従う単離された核酸分子は、合成的に生成されたそ
のような分子をさらに含む。別の実施態様において、「単離された」核酸分子は
、細胞もしくは細胞溶解産物から単離または取り出された染色体（例えば、核型
におけるような、「染色体拡散（ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｓｐｒｅａｄ）」）を
含まない。
【００５９】 本発明の単離された核酸分子は、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）に
示されるヌクレオチド配列の４２６〜４２８位の開始コドンを伴うオープンリー
ディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＤＮＡ分子を含む。さらに、本発明の単離さ
れた核酸分子は、配列番号９に示されるヌクレオチド配列の２１〜２３位の開始
コドンを伴うオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＤＮＡ分子を含む
。また、配列番号２および配列番号１０の１〜２９４位で示される推定成熟Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドについてのコード配列を含むＤＮＡ分子が含まれる。
示されるヌクレオチド配列の４２６〜４２８位の開始コドンを伴うオープンリー
ディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＤＮＡ分子を含む。さらに、本発明の単離さ
れた核酸分子は、配列番号９に示されるヌクレオチド配列の２１〜２３位の開始
コドンを伴うオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＤＮＡ分子を含む
。また、配列番号２および配列番号１０の１〜２９４位で示される推定成熟Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドについてのコード配列を含むＤＮＡ分子が含まれる。
【００６０】 本発明の単離された核酸分子はまた、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）ならび
に配列番号１１に示されるヌクレオチド配列の４７〜４９位の開始コドンを伴う
オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＤＮＡ分子を含む。また、配列
番号２および配列番号１２の１〜３２４位で示される推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ
−３ポリペプチドについてのコード配列を含むＤＮＡ分子が含まれる。
に配列番号１１に示されるヌクレオチド配列の４７〜４９位の開始コドンを伴う
オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含むＤＮＡ分子を含む。また、配列
番号２および配列番号１２の１〜３２４位で示される推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ
−３ポリペプチドについてのコード配列を含むＤＮＡ分子が含まれる。
【００６１】 さらに、本発明の単離された核酸分子は、実質的に上記される配列とは異なる
配列を含むが、遺伝子コードの縮重に起因し、なお本発明のＤｅｎｄｒｉａｃま
たはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする、ＤＮＡ分子を含む。特定
の実施態様において、Ｄｅｎｄｒｉａｃ改変体またはＢｒａｉｎｉａｃ−３改変
体（これは、５〜１０、１〜５、または１〜２アミノ酸が、任意の組み合わせに
おいて置換、欠失、または付加される改変体）は、好ましい。もちろんのことな
がら、遺伝コードおよび種特異的コドン選好性は当該分野において周知である。
従って、当業者にとって、上記の縮重型改変体を生成する、例えば、特定の宿主
のためにコドン発現を最適化すること（例えば、ヒトｍＲＮＡのコドンをＥ．ｃ
ｏｌｉのような細菌宿主に好まれるコドンに変更すること）は慣用的である。
配列を含むが、遺伝子コードの縮重に起因し、なお本発明のＤｅｎｄｒｉａｃま
たはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする、ＤＮＡ分子を含む。特定
の実施態様において、Ｄｅｎｄｒｉａｃ改変体またはＢｒａｉｎｉａｃ−３改変
体（これは、５〜１０、１〜５、または１〜２アミノ酸が、任意の組み合わせに
おいて置換、欠失、または付加される改変体）は、好ましい。もちろんのことな
がら、遺伝コードおよび種特異的コドン選好性は当該分野において周知である。
従って、当業者にとって、上記の縮重型改変体を生成する、例えば、特定の宿主
のためにコドン発現を最適化すること（例えば、ヒトｍＲＮＡのコドンをＥ．ｃ
ｏｌｉのような細菌宿主に好まれるコドンに変更すること）は慣用的である。
【００６２】 別の実施態様において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号第２０３０５６号として
１９９８年７月９日に寄託されたプラスミド中に含まれるｃＤＮＡクローンによ
りコードされるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードす
る単離された核酸分子を提供する。好ましくは、この核酸分子は上記の寄託され
たｃＤＮＡクローンによってコードされる、成熟ポリペプチドをコードする。
１９９８年７月９日に寄託されたプラスミド中に含まれるｃＤＮＡクローンによ
りコードされるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードす
る単離された核酸分子を提供する。好ましくは、この核酸分子は上記の寄託され
たｃＤＮＡクローンによってコードされる、成熟ポリペプチドをコードする。
【００６３】 なお別の実施態様において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号第２０９６２７号と
して１９９８年２月１２日に寄託されたプールされたプラスミド中に含まれるｃ
ＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。好ましくは、この核酸分
子は上記の寄託されたｃＤＮＡクローンによってコードされる、成熟ポリペプチ
ドをコードする。
して１９９８年２月１２日に寄託されたプールされたプラスミド中に含まれるｃ
ＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドをコードする単離された核酸分子を提供する。好ましくは、この核酸分
子は上記の寄託されたｃＤＮＡクローンによってコードされる、成熟ポリペプチ
ドをコードする。
【００６４】 本発明はさらに、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）に示されるヌクレ
オチド配列、もしくは上記の寄託されたクローン中に含まれるＤｅｎｄｒｉａｃ
ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子、または上記配列の
１つに相補的な配列を有する核酸分子を提供する。本発明はなおさらに、配列番
号９に示されるヌクレオチド配列、もしくは上記の寄託されたクローン中に含ま
れるＤｅｎｄｒｉａｃ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を有する単離された核酸分
子、または上記配列の１つに相補的な配列を有する核酸分子を提供する。このよ
うな単離された分子（特にＤＮＡ分子）は、染色体とのインサイチュハイブリダ
イゼーションによる遺伝子マッピングのため、および例えば、ノーザンブロット
分析によるヒト組織におけるＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子の発現を検出するためのプ
ローブとして有用である。
オチド配列、もしくは上記の寄託されたクローン中に含まれるＤｅｎｄｒｉａｃ
ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子、または上記配列の
１つに相補的な配列を有する核酸分子を提供する。本発明はなおさらに、配列番
号９に示されるヌクレオチド配列、もしくは上記の寄託されたクローン中に含ま
れるＤｅｎｄｒｉａｃ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を有する単離された核酸分
子、または上記配列の１つに相補的な配列を有する核酸分子を提供する。このよ
うな単離された分子（特にＤＮＡ分子）は、染色体とのインサイチュハイブリダ
イゼーションによる遺伝子マッピングのため、および例えば、ノーザンブロット
分析によるヒト組織におけるＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子の発現を検出するためのプ
ローブとして有用である。
【００６５】 別の実施態様において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号として
１９９８年１１月８日に寄託されたプラスミド中に含まれるｃＤＮＡクローンに
よりコードされるアミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコ
ードする単離された核酸分子を提供する。好ましくは、この核酸分子は上記の寄
託されたｃＤＮＡクローンによってコードされる、成熟ポリペプチドをコードす
る。
１９９８年１１月８日に寄託されたプラスミド中に含まれるｃＤＮＡクローンに
よりコードされるアミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコ
ードする単離された核酸分子を提供する。好ましくは、この核酸分子は上記の寄
託されたｃＤＮＡクローンによってコードされる、成熟ポリペプチドをコードす
る。
【００６６】 なお別の実施態様において、本発明は、ＡＴＣＣ受託番号第２０９４６３号と
して１９９７年１１月１４日に寄託されたプラスミド中に含まれるｃＤＮＡクロ
ーンによりコードされるアミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ドをコードする単離された核酸分子を提供する。好ましくは、この核酸分子は上
記の寄託されたｃＤＮＡクローンによってコードされる、成熟ポリペプチドをコ
ードする。
して１９９７年１１月１４日に寄託されたプラスミド中に含まれるｃＤＮＡクロ
ーンによりコードされるアミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ドをコードする単離された核酸分子を提供する。好ましくは、この核酸分子は上
記の寄託されたｃＤＮＡクローンによってコードされる、成熟ポリペプチドをコ
ードする。
【００６７】 本発明はさらに、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１に示
されるヌクレオチド配列、もしくは上記の寄託されたクローン中に含まれるＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子、
または上記配列の１つに相補的な配列を有する核酸分子を提供する。このような
単離された分子（特にＤＮＡ分子）は、染色体とのインサイチュハイブリダイゼ
ーションによる遺伝子マッピングのため、および例えば、ノーザンブロット分析
によるヒト組織におけるＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の発現を検出するためのプ
ローブとして有用である。
されるヌクレオチド配列、もしくは上記の寄託されたクローン中に含まれるＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を有する単離された核酸分子、
または上記配列の１つに相補的な配列を有する核酸分子を提供する。このような
単離された分子（特にＤＮＡ分子）は、染色体とのインサイチュハイブリダイゼ
ーションによる遺伝子マッピングのため、および例えば、ノーザンブロット分析
によるヒト組織におけるＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の発現を検出するためのプ
ローブとして有用である。
【００６８】 本発明はさらに、本明細書中に記載されるヌクレオチド配列の一部分をコード
する核酸分子、および本明細書中に記載される単離された核酸分子のフラグメン
トに関する。特に、本発明は配列番号１の一部分（これは、配列番号１の１〜１
３９１位からなる）を表すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供す
る。また特に、本発明は、配列番号９の一部分（これは、配列番号９の１〜１７
７３位からなる）を表すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する
。さらに、本発明は配列番号１の１〜１３９１位からの配列番号１の、少なくと
も約３０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５０ヌクレオチドの任意の部分
を含み、以下の関連するｃＤＮＡクローン、およびその中の任意のサブフラグメ
ント：（ＨＣＥＰＭ９２ＲＢ（配列番号６））の配列を除外するポリヌクレオチ
ドを含む。また、本発明はさらに、配列番号９の１〜１７７３位からの配列番号
９の、少なくとも約３０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５０ヌクレオチ
ドの任意の部分を含み、以下の関連するｃＤＮＡクローン、およびその中の任意
のフラグメント：（ＨＣＥＰＭ９２ＲＢ（配列番号６））の配列を除外するポリ
ヌクレオチドを含む。
する核酸分子、および本明細書中に記載される単離された核酸分子のフラグメン
トに関する。特に、本発明は配列番号１の一部分（これは、配列番号１の１〜１
３９１位からなる）を表すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供す
る。また特に、本発明は、配列番号９の一部分（これは、配列番号９の１〜１７
７３位からなる）を表すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する
。さらに、本発明は配列番号１の１〜１３９１位からの配列番号１の、少なくと
も約３０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５０ヌクレオチドの任意の部分
を含み、以下の関連するｃＤＮＡクローン、およびその中の任意のサブフラグメ
ント：（ＨＣＥＰＭ９２ＲＢ（配列番号６））の配列を除外するポリヌクレオチ
ドを含む。また、本発明はさらに、配列番号９の１〜１７７３位からの配列番号
９の、少なくとも約３０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５０ヌクレオチ
ドの任意の部分を含み、以下の関連するｃＤＮＡクローン、およびその中の任意
のフラグメント：（ＨＣＥＰＭ９２ＲＢ（配列番号６））の配列を除外するポリ
ヌクレオチドを含む。
【００６９】 さらに、本発明は１〜２１６８残基からの配列番号１の、少なくとも約２５ヌ
クレオチド、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、より好ましくは少なく
とも約４０ヌクレオチド、そしてなおより好ましくは少なくとも約５０ヌクレオ
チドの任意の部分を含むポリヌクレオチドを含む。より詳細には、本発明は、配
列番号１のうちの以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを含む：
クレオチド、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、より好ましくは少なく
とも約４０ヌクレオチド、そしてなおより好ましくは少なくとも約５０ヌクレオ
チドの任意の部分を含むポリヌクレオチドを含む。より詳細には、本発明は、配
列番号１のうちの以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを含む：
【００７０】
【数１】 さらに、本発明は、配列番号９の残基１〜１７７３のうちの、少なくとも約２
５ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、より好ましくは少
なくとも約４０ヌクレオチド、そしてさらにより好ましくは少なくとも約５０ヌ
クレオチドの任意の部分を含むポリヌクレオチドを含有する。より好ましくは、
本発明は、配列番号９のうちの以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを包
含する：
５ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、より好ましくは少
なくとも約４０ヌクレオチド、そしてさらにより好ましくは少なくとも約５０ヌ
クレオチドの任意の部分を含むポリヌクレオチドを含有する。より好ましくは、
本発明は、配列番号９のうちの以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを包
含する：
【００７１】
【数２】 またより好ましくは、本発明は、配列番号９または寄託クローンにおけるｃＤ
ＮＡのヌクレオチド１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００
、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４０１
〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６０１〜６５０
、６５１〜７００、または７０１〜末端を含むポリヌクレオチドを包含する。こ
の状況において「約」は、いずれかの末端または両方の末端において、いくつか
の（５、４、３、２、または１）ヌクレオチドが大きいかまたは小さい、具体的
に記載される範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、生物学的活性
を有するポリペプチドをコードする。
ＮＡのヌクレオチド１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００
、２０１〜２５０、２５１〜３００、３０１〜３５０、３５１〜４００、４０１
〜４５０、４５１〜５００、５０１〜５５０、５５１〜６００、６０１〜６５０
、６５１〜７００、または７０１〜末端を含むポリヌクレオチドを包含する。こ
の状況において「約」は、いずれかの末端または両方の末端において、いくつか
の（５、４、３、２、または１）ヌクレオチドが大きいかまたは小さい、具体的
に記載される範囲を含む。好ましくは、これらのフラグメントは、生物学的活性
を有するポリペプチドをコードする。
【００７２】 本発明は、さらに、本明細書中で記載されるヌクレオチド配列の部分をコード
する核酸分子、ならびに本明細書中で記載される単離された核酸分子のフラグメ
ントに関する。特に、本発明は、配列番号３の１〜１１０２位からなる、配列番
号３の部分を表すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。また
特に、本発明は、配列番号１１の１〜１２７１位からなる配列番号１１の部分を
表すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。さらに、本発明は
、以下の関連ｃＤＮＡクローン（ＨＥ２ＥＪ６６Ｒ（配列番号７）およびＨＦＣ
ＣＱ５０Ｒ（配列番号８））、およびその中の任意のサブフラグメントの配列を
除く、配列番号３の１〜１１０２位の、配列番号３の少なくとも約３０ヌクレオ
チド、好ましくは少なくとも約５０ヌクレオチドの任意の部分を含むポリヌクレ
オチドを包含する。また、本発明は、以下の関連ｃＤＮＡクローン（ＨＥ２ＥＪ
６６Ｒ（配列番号７）およびＨＦＣＣＱ５０Ｒ（配列番号８））、およびその中
の任意のサブフラグメントの配列を除く、配列番号１１の１〜１２７１位の配列
番号１１のうちの、少なくとも約３０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５
０ヌクレオチドの任意の部分を含むポリヌクレオチドを包含する。
する核酸分子、ならびに本明細書中で記載される単離された核酸分子のフラグメ
ントに関する。特に、本発明は、配列番号３の１〜１１０２位からなる、配列番
号３の部分を表すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。また
特に、本発明は、配列番号１１の１〜１２７１位からなる配列番号１１の部分を
表すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを提供する。さらに、本発明は
、以下の関連ｃＤＮＡクローン（ＨＥ２ＥＪ６６Ｒ（配列番号７）およびＨＦＣ
ＣＱ５０Ｒ（配列番号８））、およびその中の任意のサブフラグメントの配列を
除く、配列番号３の１〜１１０２位の、配列番号３の少なくとも約３０ヌクレオ
チド、好ましくは少なくとも約５０ヌクレオチドの任意の部分を含むポリヌクレ
オチドを包含する。また、本発明は、以下の関連ｃＤＮＡクローン（ＨＥ２ＥＪ
６６Ｒ（配列番号７）およびＨＦＣＣＱ５０Ｒ（配列番号８））、およびその中
の任意のサブフラグメントの配列を除く、配列番号１１の１〜１２７１位の配列
番号１１のうちの、少なくとも約３０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５
０ヌクレオチドの任意の部分を含むポリヌクレオチドを包含する。
【００７３】 さらに、本発明は、配列番号３の残基１〜１２５３のうちの、少なくとも約２
５ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、より好ましくは少
なくとも約４０ヌクレオチド、そしてさらにより好ましくは少なくとも約５０ヌ
クレオチドの任意の部分を含むポリヌクレオチドを包含する。より好ましくは、
本発明は、配列番号３のうちの以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを包
含する：
５ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、より好ましくは少
なくとも約４０ヌクレオチド、そしてさらにより好ましくは少なくとも約５０ヌ
クレオチドの任意の部分を含むポリヌクレオチドを包含する。より好ましくは、
本発明は、配列番号３のうちの以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを包
含する：
【００７４】
【数３】 さらに、本発明は、配列番号３の残基１〜１２５３のうちの、少なくとも約２
５ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、より好ましくは少
なくとも約４０ヌクレオチド、そしてさらにより好ましくは少なくとも約５０ヌ
クレオチドの任意の部分を含むポリヌクレオチドを包含する。より好ましくは、
本発明は、配列番号１１のうちの以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを
包含する：
５ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約３０ヌクレオチド、より好ましくは少
なくとも約４０ヌクレオチド、そしてさらにより好ましくは少なくとも約５０ヌ
クレオチドの任意の部分を含むポリヌクレオチドを包含する。より好ましくは、
本発明は、配列番号１１のうちの以下のヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを
包含する：
【００７５】
【数４】 より一般的には、寄託されたｃＤＮＡのヌクレオチド配列、または図１Ａ、図
１Ｂ、および図１Ｃ（配列番号１）および配列番号９に示される、ならびに図２
Ａおよび図２Ｂ（配列番号３）および配列番号１１に示されるようなヌクレオチ
ド配列を有する単離された核酸分子のフラグメントとは、少なくとも約１５ｎｔ
、そしてより好ましくは少なくとも約２０ｎｔ、さらにより好ましくは少なくと
も約３０ｎｔ、そしてさらにより好ましくは少なくとも約４０ｎｔ、５０ｎｔ、
６０ｎｔ、７０ｎｔ、８０ｎｔ、９０ｎｔ、１００ｎｔ、１５０ｎｔ、２００ｎ
ｔ、２５０ｎｔ、３００ｎｔ、４００ｎｔ、または５００ｎｔの長さのフラグメ
ントを意図し、これらは本明細書中に記載されるように、診断用プローブおよび
プライマーとして有用である。当然ながら、５０〜３００ｎｔの長さのより長い
フラグメントもまた、寄託されたｃＤＮＡ、または図１Ａ、図１Ｂ、および図１
Ｃ（配列番号１）および配列番号９に示される、ならびに図２Ａおよび図２Ｂ（
配列番号３）および配列番号１１に示されるようなヌクレオチド配列の、全てで
はないにしろ、そのほとんどに対応するフラグメントのように、本発明に従って
有用である。例えば、少なくとも２０ｎｔ長のフラグメントとは、寄託されたｃ
ＤＮＡのヌクレオチド配列または図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ（配列番号１）
および配列番号９に示されるような、ならびに図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３
）および配列番号１１に示されるようなヌクレオチド配列由来の２０以上の連続
した塩基を含むフラグメントを意図する。「少なくとも約」の表現における「約
」とは、いくつかの、少数の、小さい数、５、４、３、２または１を意味する。
本発明の好ましい核酸フラグメントは、図４および図５でそれぞれ同定される、
ならびに以下で詳細に記載されるような、ＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉ
ａｃ−３ポリペプチドのエピトープ保有部分をコードする核酸分子を含む。
１Ｂ、および図１Ｃ（配列番号１）および配列番号９に示される、ならびに図２
Ａおよび図２Ｂ（配列番号３）および配列番号１１に示されるようなヌクレオチ
ド配列を有する単離された核酸分子のフラグメントとは、少なくとも約１５ｎｔ
、そしてより好ましくは少なくとも約２０ｎｔ、さらにより好ましくは少なくと
も約３０ｎｔ、そしてさらにより好ましくは少なくとも約４０ｎｔ、５０ｎｔ、
６０ｎｔ、７０ｎｔ、８０ｎｔ、９０ｎｔ、１００ｎｔ、１５０ｎｔ、２００ｎ
ｔ、２５０ｎｔ、３００ｎｔ、４００ｎｔ、または５００ｎｔの長さのフラグメ
ントを意図し、これらは本明細書中に記載されるように、診断用プローブおよび
プライマーとして有用である。当然ながら、５０〜３００ｎｔの長さのより長い
フラグメントもまた、寄託されたｃＤＮＡ、または図１Ａ、図１Ｂ、および図１
Ｃ（配列番号１）および配列番号９に示される、ならびに図２Ａおよび図２Ｂ（
配列番号３）および配列番号１１に示されるようなヌクレオチド配列の、全てで
はないにしろ、そのほとんどに対応するフラグメントのように、本発明に従って
有用である。例えば、少なくとも２０ｎｔ長のフラグメントとは、寄託されたｃ
ＤＮＡのヌクレオチド配列または図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ（配列番号１）
および配列番号９に示されるような、ならびに図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３
）および配列番号１１に示されるようなヌクレオチド配列由来の２０以上の連続
した塩基を含むフラグメントを意図する。「少なくとも約」の表現における「約
」とは、いくつかの、少数の、小さい数、５、４、３、２または１を意味する。
本発明の好ましい核酸フラグメントは、図４および図５でそれぞれ同定される、
ならびに以下で詳細に記載されるような、ＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉ
ａｃ−３ポリペプチドのエピトープ保有部分をコードする核酸分子を含む。
【００７６】 さらなる実施態様において、本発明のポリヌクレオチドは、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３の機能的な特性をコードする。このことについて本
発明の好ましい実施態様は、ＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３の、
αヘリックスおよびαヘリックス形成領域（「α領域」）、βシートおよびβシ
ート形成領域（「β領域」）、ターンおよびターン形成領域（「ターン領域」）
、コイルおよびコイル形成領域（「コイル領域」）、親水性領域、疎水性領域、
α両親媒性領域、β両親媒性領域、可撓性（ｆｌｅｘｉｂｌｅ）領域、表面形成
領域および高抗原性指数領域を含むフラグメントを包含する。
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３の機能的な特性をコードする。このことについて本
発明の好ましい実施態様は、ＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３の、
αヘリックスおよびαヘリックス形成領域（「α領域」）、βシートおよびβシ
ート形成領域（「β領域」）、ターンおよびターン形成領域（「ターン領域」）
、コイルおよびコイル形成領域（「コイル領域」）、親水性領域、疎水性領域、
α両親媒性領域、β両親媒性領域、可撓性（ｆｌｅｘｉｂｌｅ）領域、表面形成
領域および高抗原性指数領域を含むフラグメントを包含する。
【００７７】 上記のような、図４および図５ならびに／あるいは表Ｉおよび表ＩＩに示され
るＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３の構造的または機能的な特性を
表すデータを、デフォールトパラメーターで設定されたＤＮＡ*ＳＴＡＲの種々 のモジュールおよびアルゴリズムを使用して生成した。好ましい実施態様におい
て、表Ｉおよび表ＩＩの第ＶＩＩＩ欄、第ＩＸ欄、第ＸＩＩＩ欄、および第ＸＩ
Ｖ欄に提示されるデータを使用し、抗原性について高い程度の可能性を示すＤｅ
ｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３の領域を決定し得る。高抗原性の領域
は、第ＶＩＩＩ欄、第ＩＸ欄、第ＸＩＩＩ欄、および／または第ＩＶ欄に提示さ
れたデータから値を選択することによって決定される。これらの値は、抗原認識
が免疫応答の開始プロセスにおいて生じ得る環境におけるポリペプチドの表面に
曝露されるようであるポリペプチドの領域を表す。
るＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３の構造的または機能的な特性を
表すデータを、デフォールトパラメーターで設定されたＤＮＡ*ＳＴＡＲの種々 のモジュールおよびアルゴリズムを使用して生成した。好ましい実施態様におい
て、表Ｉおよび表ＩＩの第ＶＩＩＩ欄、第ＩＸ欄、第ＸＩＩＩ欄、および第ＸＩ
Ｖ欄に提示されるデータを使用し、抗原性について高い程度の可能性を示すＤｅ
ｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３の領域を決定し得る。高抗原性の領域
は、第ＶＩＩＩ欄、第ＩＸ欄、第ＸＩＩＩ欄、および／または第ＩＶ欄に提示さ
れたデータから値を選択することによって決定される。これらの値は、抗原認識
が免疫応答の開始プロセスにおいて生じ得る環境におけるポリペプチドの表面に
曝露されるようであるポリペプチドの領域を表す。
【００７８】 これらに関する特定の好ましい領域は、図４および図５で示されるが、表Ｉお
よび表ＩＩでそれぞれ示されるように、図４および図５で提示されるデータの表
の表示を使用することによって表されるかまたは同定され得る。図４および図５
を生成するために使用されるＤＮＡ*ＳＴＡＲコンピューターアルゴリズム（最 初のデフォールトパラメーターで設定）は、表の形式の図４および図５における
データを提示するために使用された（表Ｉおよび表ＩＩをそれぞれ参照のこと）
。図４または図５のデータの表の形式は、好ましい領域の特定の境界を容易に決
定するために使用され得る。
よび表ＩＩでそれぞれ示されるように、図４および図５で提示されるデータの表
の表示を使用することによって表されるかまたは同定され得る。図４および図５
を生成するために使用されるＤＮＡ*ＳＴＡＲコンピューターアルゴリズム（最 初のデフォールトパラメーターで設定）は、表の形式の図４および図５における
データを提示するために使用された（表Ｉおよび表ＩＩをそれぞれ参照のこと）
。図４または図５のデータの表の形式は、好ましい領域の特定の境界を容易に決
定するために使用され得る。
【００７９】 図４および図５ならびに表Ｉおよび表ＩＩに示される上記の好ましい領域は、
図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ、ならびに図２Ａおよび図２Ｂに示されるアミノ
酸配列の分析によって同定される上述の型の領域を含むがこれらに限定されない
。図４および図５ならびに表Ｉおよび表ＩＩに示されるように、このような好ま
しい領域は、高抗原性指数の、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ α領域、β領域
、ターン領域、およびコイル領域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ α領域、β領域、
およびコイル領域、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ親水性領域および疎水性領域
、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ α両親媒性領域およびβ両親媒性領域、Ｋａｒｐｌｕｓ
−Ｓｃｈｕｌｚ可撓性領域、Ｅｍｉｎｉ表面形成領域およびＪａｍｅｓｏｎ−Ｗ
ｏｌｆ領域を含む。
図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ、ならびに図２Ａおよび図２Ｂに示されるアミノ
酸配列の分析によって同定される上述の型の領域を含むがこれらに限定されない
。図４および図５ならびに表Ｉおよび表ＩＩに示されるように、このような好ま
しい領域は、高抗原性指数の、Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ α領域、β領域
、ターン領域、およびコイル領域、Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ α領域、β領域、
およびコイル領域、Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ親水性領域および疎水性領域
、Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ α両親媒性領域およびβ両親媒性領域、Ｋａｒｐｌｕｓ
−Ｓｃｈｕｌｚ可撓性領域、Ｅｍｉｎｉ表面形成領域およびＪａｍｅｓｏｎ−Ｗ
ｏｌｆ領域を含む。
【００８０】
【表１】
【００８１】
【表２】 なかでも、このことについて非常に好ましいフラグメントは、上記のいくつか
の特性のような、いくつかの構造的特性を組み合わせる、Ｄｅｎｄｒｉａｃまた
はＢｒａｉｎｉａｃ−３の領域を含むフラグメントである。
の特性のような、いくつかの構造的特性を組み合わせる、Ｄｅｎｄｒｉａｃまた
はＢｒａｉｎｉａｃ−３の領域を含むフラグメントである。
【００８２】 別の実施態様において、本発明は、ストリンジェントなハイブリダイゼーショ
ン条件下で、上記の本発明の核酸分子（例えば、ＡＴＣＣ受託番号第２０３０５
６号および同第２０９６２７号に含まれるＤｅｎｄｒｉａｃ ｃＤＮＡクローン
、またはＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれ
るＢｒａｉｎｉａｃ−３ ｃＤＮＡクローン）中のポリヌクレオチドの部分にハ
イブリダイズするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する。「ス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、以下：５０％ホルムアミ
ド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５
０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫酸デキ
ストラン、および２０μｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡ、を含む溶液中での
４２℃での一晩のインキュベーション、続いて約６５℃での０．１×ＳＳＣ中で
フィルターの洗浄を意図する。
ン条件下で、上記の本発明の核酸分子（例えば、ＡＴＣＣ受託番号第２０３０５
６号および同第２０９６２７号に含まれるＤｅｎｄｒｉａｃ ｃＤＮＡクローン
、またはＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれ
るＢｒａｉｎｉａｃ−３ ｃＤＮＡクローン）中のポリヌクレオチドの部分にハ
イブリダイズするポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する。「ス
トリンジェントなハイブリダイゼーション条件」とは、以下：５０％ホルムアミ
ド、５×ＳＳＣ（７５０ｍＭ ＮａＣｌ、７５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５
０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デンハルト溶液、１０％硫酸デキ
ストラン、および２０μｇ／ｍｌの変性剪断サケ精子ＤＮＡ、を含む溶液中での
４２℃での一晩のインキュベーション、続いて約６５℃での０．１×ＳＳＣ中で
フィルターの洗浄を意図する。
【００８３】 ポリヌクレオチドの「部分」にハイブリダイズするポリヌクレオチドとは、参
照ポリヌクレオチドの少なくとも約１５ヌクレオチド（ｎｔ）、そしてより好ま
しくは少なくとも約２０ｎｔ、さらにより好ましくは少なくとも約３０ｎｔ、そ
してさらにより好ましくは約３０〜７０（例えば、５０）ｎｔにハイブリダイズ
するポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれか）を意図する。これらは
、上記で考察され、そして以下でより詳細に考察されるように、診断用プローブ
およびプライマーとして有用である。
照ポリヌクレオチドの少なくとも約１５ヌクレオチド（ｎｔ）、そしてより好ま
しくは少なくとも約２０ｎｔ、さらにより好ましくは少なくとも約３０ｎｔ、そ
してさらにより好ましくは約３０〜７０（例えば、５０）ｎｔにハイブリダイズ
するポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡのいずれか）を意図する。これらは
、上記で考察され、そして以下でより詳細に考察されるように、診断用プローブ
およびプライマーとして有用である。
【００８４】 例えば、「少なくとも２０ｎｔ長」のポリヌクレオチドの部分とは、参照ポリ
ヌクレオチドのヌクレオチド配列（例えば、寄託されたｃＤＮＡ、または図１Ａ
、図１Ｂおよび図１Ｃ（配列番号１）および配列番号９、ならびに図２Ａおよび
図２Ｂ（配列番号３）および配列番号１１に示されるようなヌクレオチド配列）
由来の２０以上の連続したヌクレオチドを意図する。当然のことながら、ポリＡ
配列（例えば、図１Ａ、図１Ｂおよび図１Ｃ（配列番号１）および配列番号９、
ならびに図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３）および配列番号１１にそれぞれ示さ
れるＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ ｃＤＮＡの３’末端ポリ（
Ａ）付加物）にのみ、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的なストレッチにのみ
ハイブリダイズするポリヌクレオチドは、本発明の核酸の一部分にハイブリダイ
ズさせるために使用される本発明のポリヌクレオチドに含まれない。なぜなら、
このようなポリヌクレオチドは、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体（例え
ば、実際には、任意の二本鎖ｃＤＮＡクローン）を含む任意の核酸分子にハイブ
リダイズするからである。
ヌクレオチドのヌクレオチド配列（例えば、寄託されたｃＤＮＡ、または図１Ａ
、図１Ｂおよび図１Ｃ（配列番号１）および配列番号９、ならびに図２Ａおよび
図２Ｂ（配列番号３）および配列番号１１に示されるようなヌクレオチド配列）
由来の２０以上の連続したヌクレオチドを意図する。当然のことながら、ポリＡ
配列（例えば、図１Ａ、図１Ｂおよび図１Ｃ（配列番号１）および配列番号９、
ならびに図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３）および配列番号１１にそれぞれ示さ
れるＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ ｃＤＮＡの３’末端ポリ（
Ａ）付加物）にのみ、またはＴ（もしくはＵ）残基の相補的なストレッチにのみ
ハイブリダイズするポリヌクレオチドは、本発明の核酸の一部分にハイブリダイ
ズさせるために使用される本発明のポリヌクレオチドに含まれない。なぜなら、
このようなポリヌクレオチドは、ポリ（Ａ）ストレッチまたはその相補体（例え
ば、実際には、任意の二本鎖ｃＤＮＡクローン）を含む任意の核酸分子にハイブ
リダイズするからである。
【００８５】 示されるように、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードする本発明の核酸分
子は、単独で成熟ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子；ならびに
成熟ポリペプチドおよび付加的配列（例えば、約２５アミノ酸残基のリーダー配
列または分泌配列をコードする配列）のコード配列（例えば、プレタンパク質配
列またはプロタンパク質配列またはプレプロタンパク質配列）；上記の付加的コ
ード配列を含むかまたは含まない、成熟ポリペプチドのコード配列、を含み得る
がこれらに限定されない。
子は、単独で成熟ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子；ならびに
成熟ポリペプチドおよび付加的配列（例えば、約２５アミノ酸残基のリーダー配
列または分泌配列をコードする配列）のコード配列（例えば、プレタンパク質配
列またはプロタンパク質配列またはプレプロタンパク質配列）；上記の付加的コ
ード配列を含むかまたは含まない、成熟ポリペプチドのコード配列、を含み得る
がこれらに限定されない。
【００８６】 また、示されるように、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする本発
明の核酸分子は、単独で成熟ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子
；ならびに成熟ポリペプチドおよび付加的配列（例えば、約２８アミノ酸残基の
リーダー配列または分泌配列をコードする配列）のコード配列（例えば、プレタ
ンパク質配列またはプロタンパク質配列またはプレプロタンパク質配列のような
約２８アミノ酸残基のリーダー配列または分泌配列をコードする配列）；上記の
付加的コード配列を含むかまたは含まない、成熟ポリペプチドのコード配列、を
含み得るがこれらに限定されない。
明の核酸分子は、単独で成熟ポリペプチドのアミノ酸配列をコードする核酸分子
；ならびに成熟ポリペプチドおよび付加的配列（例えば、約２８アミノ酸残基の
リーダー配列または分泌配列をコードする配列）のコード配列（例えば、プレタ
ンパク質配列またはプロタンパク質配列またはプレプロタンパク質配列のような
約２８アミノ酸残基のリーダー配列または分泌配列をコードする配列）；上記の
付加的コード配列を含むかまたは含まない、成熟ポリペプチドのコード配列、を
含み得るがこれらに限定されない。
【００８７】 本発明の核酸によってまた、付加的な非コード配列を有する上記ポリペプチド
配列がコードされ、付加的なコード配列は、例えばイントロンおよび非コード５
’および３’配列（例えば、転写、ｍＲＮＡプロセシング（スプライシングシグ
ナルおよびポリアデニル化シグナルを含む）において役割（例えば、ｍＲＮＡの
リボソーム結合および安定性）を演ずる、転写される非翻訳配列）；さらなる機
能性を提供するアミノ酸のような付加的アミノ酸をコードする付加的コード配列
を含むがこれらに限定されない。
配列がコードされ、付加的なコード配列は、例えばイントロンおよび非コード５
’および３’配列（例えば、転写、ｍＲＮＡプロセシング（スプライシングシグ
ナルおよびポリアデニル化シグナルを含む）において役割（例えば、ｍＲＮＡの
リボソーム結合および安定性）を演ずる、転写される非翻訳配列）；さらなる機
能性を提供するアミノ酸のような付加的アミノ酸をコードする付加的コード配列
を含むがこれらに限定されない。
【００８８】 従って、ポリペプチドをコードする配列は、融合されたポリペプチドの精製を
容易にするペプチドをコードする配列のようなマーカー配列と融合され得る。本
発明のこの局面の特定の好ましい実施態様において、マーカーアミノ酸配列は、
とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａ
ｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）中に提供されるタグの
ような、ヘキサヒスチジンペプチドであり、これらの多くは市販されている。例
えば、Ｇｅｎｔｚおよび共同研究者（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９））によって記載されるように、ヘキ
サヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。「ＨＡ」タグは、イ
ンフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する、精製のため
に有用な別のペプチドであり、それは、Ｗｉｌｓｏｎおよび共同研究者（Ｃｅｌ
ｌ ３７：７６７（１９８４））によって記載されている。以下で考察したよう
に、他のそのような融合タンパク質には、Ｎ末端またはＣ末端にてＦｃに融合さ
れたＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドが含まれる。
容易にするペプチドをコードする配列のようなマーカー配列と融合され得る。本
発明のこの局面の特定の好ましい実施態様において、マーカーアミノ酸配列は、
とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａ
ｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）中に提供されるタグの
ような、ヘキサヒスチジンペプチドであり、これらの多くは市販されている。例
えば、Ｇｅｎｔｚおよび共同研究者（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ ８６：８２１−８２４（１９８９））によって記載されるように、ヘキ
サヒスチジンは、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。「ＨＡ」タグは、イ
ンフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに対応する、精製のため
に有用な別のペプチドであり、それは、Ｗｉｌｓｏｎおよび共同研究者（Ｃｅｌ
ｌ ３７：７６７（１９８４））によって記載されている。以下で考察したよう
に、他のそのような融合タンパク質には、Ｎ末端またはＣ末端にてＦｃに融合さ
れたＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドが含まれる。
【００８９】 （改変体および変異体ポリヌクレオチド） 本発明は、さらに、ＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ドの部分、アナログ、または誘導体をコードする、本発明の核酸分子の改変体に
関する。改変体は、天然の対立遺伝子改変体のように、天然に生じ得る。「対立
遺伝子改変体」とは、生物の染色体上の所定の遺伝子座を占める遺伝子のいくつ
かの代わりの形態の１つを意図する（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ， Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．編
、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８５））。天
然に生じない改変体は、当該分野で公知の変異誘発技術を用いて生成され得る。
ドの部分、アナログ、または誘導体をコードする、本発明の核酸分子の改変体に
関する。改変体は、天然の対立遺伝子改変体のように、天然に生じ得る。「対立
遺伝子改変体」とは、生物の染色体上の所定の遺伝子座を占める遺伝子のいくつ
かの代わりの形態の１つを意図する（Ｇｅｎｅｓ ＩＩ， Ｌｅｗｉｎ，Ｂ．編
、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８５））。天
然に生じない改変体は、当該分野で公知の変異誘発技術を用いて生成され得る。
【００９０】 このような改変体には、ヌクレオチドの置換、欠失、または付加により生じる
改変体が含まれる。この置換、欠失、または付加には１つ以上のヌクレオチドが
含まれ得る。改変体は、コード領域、非コード領域、または両方において変更さ
れ得る。コード領域における変更は、保存的または非保存的なアミノ酸の置換、
欠失、または付加を生じ得る。これらの間で特に好ましいのは、サイレントな置
換、付加、および欠失であり、これらの変異はＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチド、またはそれらの部分の特性および活性を変化させな
い。また、このことについて特に好ましいのは、保存的な置換である。
改変体が含まれる。この置換、欠失、または付加には１つ以上のヌクレオチドが
含まれ得る。改変体は、コード領域、非コード領域、または両方において変更さ
れ得る。コード領域における変更は、保存的または非保存的なアミノ酸の置換、
欠失、または付加を生じ得る。これらの間で特に好ましいのは、サイレントな置
換、付加、および欠失であり、これらの変異はＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチド、またはそれらの部分の特性および活性を変化させな
い。また、このことについて特に好ましいのは、保存的な置換である。
【００９１】 最も非常に好ましくは、配列番号２および配列番号１０に示されるアミノ酸配
列を有する成熟ポリペプチドをコードする核酸分子、または寄託されたｃＤＮＡ
クローンによりコードされる成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配列である。
列を有する成熟ポリペプチドをコードする核酸分子、または寄託されたｃＤＮＡ
クローンによりコードされる成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配列である。
【００９２】 また、最も非常に好ましくは、配列番号４および配列番号１２に示されるアミ
ノ酸配列を有する成熟ポリペプチドをコードする核酸分子、または寄託されたｃ
ＤＮＡクローンによりコードされる成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸配列であ
る。
ノ酸配列を有する成熟ポリペプチドをコードする核酸分子、または寄託されたｃ
ＤＮＡクローンによりコードされる成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸配列であ
る。
【００９３】 従って、本発明の１つの実施態様は、以下からなる群から選択されるヌクレオ
チド配列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する：（ａ
）配列番号２および配列番号１０の完全アミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２および配列
番号１０の−２５〜２９４位）；（ｂ）Ｎ末端メチオニン以外の、配列番号２お
よび配列番号１０の完全アミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列（すなわち配列番号２および配列番号１０の−２４
〜２９４位）；（ｃ）配列番号２および配列番号１０における位置１〜２９４の
アミノ酸配列を有する推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌク
レオチド配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２
７号に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされる完全アミノ酸配列を有す
るＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）ＡＴＣ
Ｃ受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤＮＡクロ
ーンによってコードされる、Ｎ末端メチオニン以外の完全アミノ酸配列を有する
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）ＡＴＣＣ
受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤＮＡクロー
ンによってコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドをコードするヌクレオチド配列；ならびに（ｇ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ
）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）のヌクレオチド配列のいずれかに相補的なヌク
レオチド配列。
チド配列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する：（ａ
）配列番号２および配列番号１０の完全アミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号２および配列
番号１０の−２５〜２９４位）；（ｂ）Ｎ末端メチオニン以外の、配列番号２お
よび配列番号１０の完全アミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列（すなわち配列番号２および配列番号１０の−２４
〜２９４位）；（ｃ）配列番号２および配列番号１０における位置１〜２９４の
アミノ酸配列を有する推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌク
レオチド配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２
７号に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされる完全アミノ酸配列を有す
るＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｅ）ＡＴＣ
Ｃ受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤＮＡクロ
ーンによってコードされる、Ｎ末端メチオニン以外の完全アミノ酸配列を有する
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；（ｆ）ＡＴＣＣ
受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤＮＡクロー
ンによってコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドをコードするヌクレオチド配列；ならびに（ｇ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ
）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）のヌクレオチド配列のいずれかに相補的なヌク
レオチド配列。
【００９４】 本発明のさらなる実施態様は、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ
）、（ｆ）、または（ｇ）のヌクレオチド配列のいずれかに対して、少なくとも
９０％同一、そしてより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％
、または９９％同一なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、あるいは上
記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、または（ｇ）のポリヌ
クレオチドにストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイ
ズするポリヌクレオチド、を含む単離された核酸分子を含む。このハイブリダイ
ズするポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基のみからなるヌクレオチド
配列を有するポリヌクレオチドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件下でハイブリダイズしない。本発明のさらなる核酸の実施態様は、上記の（
ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）のアミノ酸配列を有するＤ
ｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのエピトープ保有部分のアミノ酸配列をコードする
ポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子に関する。本発明のさらなる核酸の
実施態様は、５０の保存的アミノ酸置換を超えず、さらにより好ましくは、４０
の保存的アミノ酸置換を超えず、なおより好ましくは、３０の保存的アミノ酸置
換を超えず、そしてなおさらにより好ましくは２０の保存的アミノ酸置換を超え
ないが、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有するＤｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む
単離された核酸分子に関する。当然ではあるが、増えつづける好ましさのために
、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド
は、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つを超えない保存的なアミ
ノ酸置換を含むアミノ酸配列を有することが非常に好ましい。
）、（ｆ）、または（ｇ）のヌクレオチド配列のいずれかに対して、少なくとも
９０％同一、そしてより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％
、または９９％同一なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、あるいは上
記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、または（ｇ）のポリヌ
クレオチドにストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイ
ズするポリヌクレオチド、を含む単離された核酸分子を含む。このハイブリダイ
ズするポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基のみからなるヌクレオチド
配列を有するポリヌクレオチドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件下でハイブリダイズしない。本発明のさらなる核酸の実施態様は、上記の（
ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）のアミノ酸配列を有するＤ
ｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのエピトープ保有部分のアミノ酸配列をコードする
ポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子に関する。本発明のさらなる核酸の
実施態様は、５０の保存的アミノ酸置換を超えず、さらにより好ましくは、４０
の保存的アミノ酸置換を超えず、なおより好ましくは、３０の保存的アミノ酸置
換を超えず、そしてなおさらにより好ましくは２０の保存的アミノ酸置換を超え
ないが、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有するＤｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドを含む
単離された核酸分子に関する。当然ではあるが、増えつづける好ましさのために
、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド
は、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つを超えない保存的なアミ
ノ酸置換を含むアミノ酸配列を有することが非常に好ましい。
【００９５】 本発明はまた、本発明の単離された核酸分子を含む組換えベクター、および組
換えベクターを含む宿主細胞、ならびにこのようなベクターおよび宿主細胞の作
製方法、および組換え技術によってＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドまたはペプチ
ドを産生するためのこれらの使用方法に関する。
換えベクターを含む宿主細胞、ならびにこのようなベクターおよび宿主細胞の作
製方法、および組換え技術によってＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドまたはペプチ
ドを産生するためのこれらの使用方法に関する。
【００９６】 さらに、本発明のさらなる実施態様は、以下からなる群から選択されるヌクレ
オチド配列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する：（
ａ）配列番号４および配列番号１２の完全アミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号４およ
び配列番号１２の−２８〜３２４位）；（ｂ）Ｎ末端メチオニン以外の配列番号
４および配列番号１２の完全アミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち配列番号４および配列番号１２
の−２７〜３２４位）；（ｃ）配列番号４および配列番号１２における１〜３２
４位のアミノ酸配列を有する推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコー
ドするヌクレオチド配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第
２０９４６３号に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされる完全アミノ酸
配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれ
るｃＤＮＡクローンによってコードされる、Ｎ末端メチオニン以外の完全アミノ
酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配
列；（ｆ）ＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含ま
れるｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；ならびに（ｇ）上記
の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）のヌクレオチド配列の
いずれかに相補的なヌクレオチド配列。
オチド配列を有するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子を提供する：（
ａ）配列番号４および配列番号１２の完全アミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち、配列番号４およ
び配列番号１２の−２８〜３２４位）；（ｂ）Ｎ末端メチオニン以外の配列番号
４および配列番号１２の完全アミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドをコードするヌクレオチド配列（すなわち配列番号４および配列番号１２
の−２７〜３２４位）；（ｃ）配列番号４および配列番号１２における１〜３２
４位のアミノ酸配列を有する推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコー
ドするヌクレオチド配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第
２０９４６３号に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされる完全アミノ酸
配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれ
るｃＤＮＡクローンによってコードされる、Ｎ末端メチオニン以外の完全アミノ
酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配
列；（ｆ）ＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含ま
れるｃＤＮＡクローンによってコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列；ならびに（ｇ）上記
の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）のヌクレオチド配列の
いずれかに相補的なヌクレオチド配列。
【００９７】 本発明のさらなる実施態様は、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ
）、（ｆ）、または（ｇ）のヌクレオチド配列のいずれかに対して、少なくとも
９０％同一、そしてより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％
、または９９％同一なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、あるいは上
記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、または（ｇ）のポリヌ
クレオチドにストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイ
ズするポリヌクレオチド、を含む単離された核酸分子を含む。このハイブリダイ
ズするポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基のみからなるヌクレオチド
配列を有するポリヌクレオチドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件下でハイブリダイズしない。本発明のさらなる核酸の実施態様は、上記の（
ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）のアミノ酸配列を有するＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのエピトープ保有部分のアミノ酸配列をコード
するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子に関する。本発明のさらなる核
酸の実施態様は、５０の保存的アミノ酸置換を超えず、さらにより好ましくは、
４０の保存的アミノ酸置換を超えず、なおより好ましくは、３０の保存的アミノ
酸置換を超えず、そしてなおさらにより好ましくは２０の保存的アミノ酸置換を
超えないが、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有する
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチ
ドを含む単離された核酸分子に関する。当然ではあるが、増えつづける好ましさ
のために、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリ
ヌクレオチドは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つを超えない
保存的なアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有することが非常に好ましい。
）、（ｆ）、または（ｇ）のヌクレオチド配列のいずれかに対して、少なくとも
９０％同一、そしてより好ましくは少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％
、または９９％同一なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド、あるいは上
記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、または（ｇ）のポリヌ
クレオチドにストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイ
ズするポリヌクレオチド、を含む単離された核酸分子を含む。このハイブリダイ
ズするポリヌクレオチドは、Ａ残基のみまたはＴ残基のみからなるヌクレオチド
配列を有するポリヌクレオチドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件下でハイブリダイズしない。本発明のさらなる核酸の実施態様は、上記の（
ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）のアミノ酸配列を有するＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのエピトープ保有部分のアミノ酸配列をコード
するポリヌクレオチドを含む単離された核酸分子に関する。本発明のさらなる核
酸の実施態様は、５０の保存的アミノ酸置換を超えず、さらにより好ましくは、
４０の保存的アミノ酸置換を超えず、なおより好ましくは、３０の保存的アミノ
酸置換を超えず、そしてなおさらにより好ましくは２０の保存的アミノ酸置換を
超えないが、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有する
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチ
ドを含む単離された核酸分子に関する。当然ではあるが、増えつづける好ましさ
のために、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポリ
ヌクレオチドは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１つを超えない
保存的なアミノ酸置換を含むアミノ酸配列を有することが非常に好ましい。
【００９８】 本発明はまた、本発明の単離された核酸分子を含む組換えベクター、および組
換えベクターを含む宿主細胞、ならびにこのようなベクターおよび宿主細胞の作
製方法、および組換え技術によってＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはペ
プチドの産生のためのこれらの使用方法に関する。
換えベクターを含む宿主細胞、ならびにこのようなベクターおよび宿主細胞の作
製方法、および組換え技術によってＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはペ
プチドの産生のためのこれらの使用方法に関する。
【００９９】 ＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする参照
ヌクレオチド配列に、例えば、少なくとも９５％「同一な」ヌクレオチド配列を
有するポリヌクレオチドとは、このポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、Ｄ
ｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする参照ヌク
レオチド配列の各１００ヌクレオチドあたり５つまでの点変異をポリヌクレオチ
ド配列が含み得ることを除いて、参照配列に同一であることを意図する。言い換
えれば、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列
を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列における５％までのヌクレオ
チドが欠失され得るか、もしくは別のヌクレオチドで置換され得るか、または参
照配列において全ヌクレオチドの５％までのある数のヌクレオチドが、参照配列
中に挿入され得る。参照配列のこれらの変異は、参照ヌクレオチド配列の５’も
しくは３’末端位置において、または参照配列中のヌクレオチド間で個々に、も
しくは参照配列内の１つ以上の連続した基のいずれかに散在されて、これらの末
端位置の間のどこかで生じ得る。
ヌクレオチド配列に、例えば、少なくとも９５％「同一な」ヌクレオチド配列を
有するポリヌクレオチドとは、このポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が、Ｄ
ｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする参照ヌク
レオチド配列の各１００ヌクレオチドあたり５つまでの点変異をポリヌクレオチ
ド配列が含み得ることを除いて、参照配列に同一であることを意図する。言い換
えれば、参照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列
を有するポリヌクレオチドを得るために、参照配列における５％までのヌクレオ
チドが欠失され得るか、もしくは別のヌクレオチドで置換され得るか、または参
照配列において全ヌクレオチドの５％までのある数のヌクレオチドが、参照配列
中に挿入され得る。参照配列のこれらの変異は、参照ヌクレオチド配列の５’も
しくは３’末端位置において、または参照配列中のヌクレオチド間で個々に、も
しくは参照配列内の１つ以上の連続した基のいずれかに散在されて、これらの末
端位置の間のどこかで生じ得る。
【０１００】 実際には、任意の特定の核酸分子が、例えば、図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ
または図２Ａおよび図２Ｂに示されるヌクレオチド配列または寄託されたｃＤＮ
Ａクローンのヌクレオチド配列に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、または９９％同一であるかどうかは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉ
ｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ， Ｖ
ｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ
Ｇｒｏｕｐ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ， ５７
５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ ５３７１１）の
ような公知のコンピュータープログラムを用いて従来通りに決定され得る。Ｂｅ
ｓｔｆｉｔは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎの局所的相同性アルゴリズム
を用いて、２つの配列間の最も相同性のセグメントを見出す（Ａｄｖａｎｃｅｓ
ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２：４８２−４８９ （１
９８１））。Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列整列プログラムを使用して、
特定の配列が、本発明による参照配列に例えば９５％同一であるか否かを決定す
る場合、パラメーターは、もちろん、同一性の百分率が、参照ヌクレオチド配列
の全長にわたって計算されるように、そして参照配列の総ヌクレオチド数の５％
までの相同性におけるギャップが許容されるように、設定される。問い合わせ配
列（本発明の配列）と対象配列との間の最適な全長の適合を決定するための好ま
しい方法はまた、全体的な配列整列と呼ばれ、Ｂｒｕｔｌａｇおよび共同研究者
らのアルゴリズム（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７〜２４５（１
９９０））に基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定され
得る。配列整列において、この問い合わせ配列および対象配列は、両方ともＤＮ
Ａ配列である。ＲＮＡ配列は、ＵをＴに変換することによって比較され得る。上
記の全体的な配列整列の結果は、同一性％である。同一性％を計算するためのＤ
ＮＡ配列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用される好ましいパラメーターは、以下
である：Ｍａｔｒｉｘ＝Ｕｎｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉｓｍａｔｃ
ｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、Ｒａｎｄｏ
ｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ
＝１、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ０．
０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００または対象ヌクレオチド配列の長さのい
ずれか短い方。
または図２Ａおよび図２Ｂに示されるヌクレオチド配列または寄託されたｃＤＮ
Ａクローンのヌクレオチド配列に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、
９８％、または９９％同一であるかどうかは、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉ
ｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ， Ｖ
ｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ
Ｇｒｏｕｐ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ， ５７
５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ ５３７１１）の
ような公知のコンピュータープログラムを用いて従来通りに決定され得る。Ｂｅ
ｓｔｆｉｔは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎの局所的相同性アルゴリズム
を用いて、２つの配列間の最も相同性のセグメントを見出す（Ａｄｖａｎｃｅｓ
ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２：４８２−４８９ （１
９８１））。Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列整列プログラムを使用して、
特定の配列が、本発明による参照配列に例えば９５％同一であるか否かを決定す
る場合、パラメーターは、もちろん、同一性の百分率が、参照ヌクレオチド配列
の全長にわたって計算されるように、そして参照配列の総ヌクレオチド数の５％
までの相同性におけるギャップが許容されるように、設定される。問い合わせ配
列（本発明の配列）と対象配列との間の最適な全長の適合を決定するための好ま
しい方法はまた、全体的な配列整列と呼ばれ、Ｂｒｕｔｌａｇおよび共同研究者
らのアルゴリズム（Ｃｏｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７〜２４５（１
９９０））に基づくＦＡＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定され
得る。配列整列において、この問い合わせ配列および対象配列は、両方ともＤＮ
Ａ配列である。ＲＮＡ配列は、ＵをＴに変換することによって比較され得る。上
記の全体的な配列整列の結果は、同一性％である。同一性％を計算するためのＤ
ＮＡ配列のＦＡＳＴＤＢ整列において使用される好ましいパラメーターは、以下
である：Ｍａｔｒｉｘ＝Ｕｎｉｔａｒｙ、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝４、Ｍｉｓｍａｔｃ
ｈ Ｐｅｎａｌｔｙ＝１、Ｊｏｉｎｉｎｇ Ｐｅｎａｌｔｙ＝３０、Ｒａｎｄｏ
ｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、Ｃｕｔｏｆｆ Ｓｃｏｒｅ
＝１、Ｇａｐ Ｐｅｎａｌｔｙ＝５、Ｇａｐ Ｓｉｚｅ Ｐｅｎａｌｔｙ ０．
０５、Ｗｉｎｄｏｗ Ｓｉｚｅ＝５００または対象ヌクレオチド配列の長さのい
ずれか短い方。
【０１０１】 対象配列が、内部欠失のためではなく、５’または３’欠失のために問い合わ
せ配列よりも短い場合、手動の補正が、その結果に対してなされなければならな
い。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが同一性のパーセントを計算する場合に、
対象配列の５’および３’短縮化を計算しないためである。５’または３’末端
で短縮化された対象配列について、問い合わせ配列と比較して、パーセント同一
性は、対象配列の５’および３’にある、一致／整列しない、問い合わせ配列の
塩基の数を、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして計算することによって
補正される。ヌクレオチドが一致／整列されるか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列
化の結果によって決定される。次いで、このパーセンテージは、パーセント同一
性から減算され、特定のパラメーターを使用して上記のＦＡＳＴＤＢによって計
算されて、最終的なパーセント同一性スコアに到達される。この補正されたスコ
アは、本発明の目的のために使用されるものである。ＦＡＳＴＤＢ整列化によっ
て示されるように、対象配列の５’および３’塩基の外側の塩基のみ（これは、
問い合わせ配列に一致／整列されない）が、パーセント同一性スコアを手動で調
整する目的のために計算される。
せ配列よりも短い場合、手動の補正が、その結果に対してなされなければならな
い。これは、ＦＡＳＴＤＢプログラムが同一性のパーセントを計算する場合に、
対象配列の５’および３’短縮化を計算しないためである。５’または３’末端
で短縮化された対象配列について、問い合わせ配列と比較して、パーセント同一
性は、対象配列の５’および３’にある、一致／整列しない、問い合わせ配列の
塩基の数を、問い合わせ配列の総塩基のパーセントとして計算することによって
補正される。ヌクレオチドが一致／整列されるか否かは、ＦＡＳＴＤＢ配列整列
化の結果によって決定される。次いで、このパーセンテージは、パーセント同一
性から減算され、特定のパラメーターを使用して上記のＦＡＳＴＤＢによって計
算されて、最終的なパーセント同一性スコアに到達される。この補正されたスコ
アは、本発明の目的のために使用されるものである。ＦＡＳＴＤＢ整列化によっ
て示されるように、対象配列の５’および３’塩基の外側の塩基のみ（これは、
問い合わせ配列に一致／整列されない）が、パーセント同一性スコアを手動で調
整する目的のために計算される。
【０１０２】 例えば、９０塩基の対象配列が、パーセント同一性を決定するために、１００
塩基の問い合わせ配列に対して整列される。欠失は、対象配列の５’末端で起こ
り、従って、ＦＡＳＴＤＢ整列化は、５’において最初の１０塩基の一致／整列
を示さない。１０個の不対塩基は、配列の１０％を表し（５’および３’末端の
一致しない塩基数／問い合わせ配列における塩基の総数）、従って、１０％は、
ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算されたパーセント同一性スコアから減数さ
れない。残りの９０個の塩基が完全に一致した場合、最終パーセント同一性は、
９０％である。別の例において、９０塩基の対象配列が、１００塩基の問い合わ
せ配列と比較される。このとき、問い合わせと一致／整列しない対象配列の５’
または３’に塩基がないように、欠失は内部の欠失である。この場合、ＦＡＳＴ
ＤＢによって計算されたパーセント同一性は、手動で補正されない。再度、問い
合わせ配列に一致／整列されない対象配列の５’および３’の塩基のみが、手動
で補正される。どんな他の手動補正も、本発明の目的のためになされない。
塩基の問い合わせ配列に対して整列される。欠失は、対象配列の５’末端で起こ
り、従って、ＦＡＳＴＤＢ整列化は、５’において最初の１０塩基の一致／整列
を示さない。１０個の不対塩基は、配列の１０％を表し（５’および３’末端の
一致しない塩基数／問い合わせ配列における塩基の総数）、従って、１０％は、
ＦＡＳＴＤＢプログラムによって計算されたパーセント同一性スコアから減数さ
れない。残りの９０個の塩基が完全に一致した場合、最終パーセント同一性は、
９０％である。別の例において、９０塩基の対象配列が、１００塩基の問い合わ
せ配列と比較される。このとき、問い合わせと一致／整列しない対象配列の５’
または３’に塩基がないように、欠失は内部の欠失である。この場合、ＦＡＳＴ
ＤＢによって計算されたパーセント同一性は、手動で補正されない。再度、問い
合わせ配列に一致／整列されない対象配列の５’および３’の塩基のみが、手動
で補正される。どんな他の手動補正も、本発明の目的のためになされない。
【０１０３】 本出願は、核酸がＤｅｎｄｒｉａｃ活性を有するポリペプチドをコードするか
否かに関わらず、図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番
号９で示される核酸配列、または寄託されたｃＤＮＡの核酸配列に少なくとも９
０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一である核酸分子に
関する。これは、特定の核酸分子がＤｅｎｄｒｉａｃ活性を有するポリペプチド
をコードしない場合でさえ、当業者が、核酸分子をいかに使用するかをなお理解
するためである（例えば、ハイブリダイゼーションプローブまたはポリメラーゼ
連鎖反応（ＰＣＲ）プライマーとして）。Ｄｅｎｄｒｉａｃ活性を有するポリペ
プチドをコードしない本発明の核酸分子の使用としては、とりわけ、（１）ｃＤ
ＮＡライブラリー中のＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子またはその対立遺伝子改変体を単
離すること；（２）Ｖｅｒｍａおよび共同研究者（Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓ
ｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｐｅ
ｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８））に記載されるよう
な、Ｄｅｎｄｒｉａｃ遺伝子の正確な染色体位置を提供するための、中期染色体
スプレッドに対するインサイチュハイブリダイゼーション（例えば、「ＦＩＳＨ
」）；および特定の組織におけるＤｅｎｄｒｉａｃ ｍＲＮＡ発現を検出するた
めのノーザンブロット分析が挙げられる。
否かに関わらず、図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番
号９で示される核酸配列、または寄託されたｃＤＮＡの核酸配列に少なくとも９
０％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一である核酸分子に
関する。これは、特定の核酸分子がＤｅｎｄｒｉａｃ活性を有するポリペプチド
をコードしない場合でさえ、当業者が、核酸分子をいかに使用するかをなお理解
するためである（例えば、ハイブリダイゼーションプローブまたはポリメラーゼ
連鎖反応（ＰＣＲ）プライマーとして）。Ｄｅｎｄｒｉａｃ活性を有するポリペ
プチドをコードしない本発明の核酸分子の使用としては、とりわけ、（１）ｃＤ
ＮＡライブラリー中のＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子またはその対立遺伝子改変体を単
離すること；（２）Ｖｅｒｍａおよび共同研究者（Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏｓ
ｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ、Ｐｅ
ｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８））に記載されるよう
な、Ｄｅｎｄｒｉａｃ遺伝子の正確な染色体位置を提供するための、中期染色体
スプレッドに対するインサイチュハイブリダイゼーション（例えば、「ＦＩＳＨ
」）；および特定の組織におけるＤｅｎｄｒｉａｃ ｍＲＮＡ発現を検出するた
めのノーザンブロット分析が挙げられる。
【０１０４】 本出願は、核酸がＢｒａｉｎａｃ−３活性を有するポリペプチドをコードする
か否かに関わらず、図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１で
示される核酸配列、または寄託されたｃＤＮＡの核酸配列に少なくとも９０％、
９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一である核酸分子に関する
。これは、特定の核酸分子がＢｒａｉｎｉａｃ−３活性を有するポリペプチドを
コードしない場合でさえ、当業者が、核酸分子をいかに使用するかをなお理解す
るためである（例えば、ハイブリダイゼーションプローブまたはポリメラーゼ連
鎖反応（ＰＣＲ）プライマーとして）。Ｂｒａｉｎｉａｃ−３活性を有するポリ
ペプチドをコードしない本発明の核酸分子の使用としては、とりわけ、（１）ｃ
ＤＮＡライブラリー中のＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子またはその対立遺伝子改変
体を単離すること；（２）Ｖｅｒｍａおよび共同研究者（Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏ
ｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８））に記載され
るような、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の正確な染色体位置を提供するための、
中期染色体スプレッドに対するインサイチュハイブリダイゼーション（例えば、
「ＦＩＳＨ」）；および特定の組織におけるＢｒａｉｎｉａｃ−３ ｍＲＮＡ発
現を検出するためのノーザンブロット分析が挙げられる。
か否かに関わらず、図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１で
示される核酸配列、または寄託されたｃＤＮＡの核酸配列に少なくとも９０％、
９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一である核酸分子に関する
。これは、特定の核酸分子がＢｒａｉｎｉａｃ−３活性を有するポリペプチドを
コードしない場合でさえ、当業者が、核酸分子をいかに使用するかをなお理解す
るためである（例えば、ハイブリダイゼーションプローブまたはポリメラーゼ連
鎖反応（ＰＣＲ）プライマーとして）。Ｂｒａｉｎｉａｃ−３活性を有するポリ
ペプチドをコードしない本発明の核酸分子の使用としては、とりわけ、（１）ｃ
ＤＮＡライブラリー中のＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子またはその対立遺伝子改変
体を単離すること；（２）Ｖｅｒｍａおよび共同研究者（Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏ
ｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ
、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８））に記載され
るような、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の正確な染色体位置を提供するための、
中期染色体スプレッドに対するインサイチュハイブリダイゼーション（例えば、
「ＦＩＳＨ」）；および特定の組織におけるＢｒａｉｎｉａｃ−３ ｍＲＮＡ発
現を検出するためのノーザンブロット分析が挙げられる。
【０１０５】 しかし、実際には、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド活性を有するポリペプチド
をコードする、図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番号
９に示される核酸配列、または寄託されたｃＤＮＡの核酸配列に少なくとも９０
％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一である配列を有する
核酸分子が好ましい。「Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド活性を有するポリペプチ
ド」によって、特定の生物学的アッセイにおいて測定される場合に、本発明の成
熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの活性に類似するが必ずしも同一ではない活性
を示すポリペプチドが意図される。
をコードする、図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番号
９に示される核酸配列、または寄託されたｃＤＮＡの核酸配列に少なくとも９０
％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一である配列を有する
核酸分子が好ましい。「Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド活性を有するポリペプチ
ド」によって、特定の生物学的アッセイにおいて測定される場合に、本発明の成
熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの活性に類似するが必ずしも同一ではない活性
を示すポリペプチドが意図される。
【０１０６】 また、実際には、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド活性を有するポリペプチ
ドをコードする、図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１に示
される核酸配列、または寄託されたｃＤＮＡの核酸配列に少なくとも９０％、９
５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一である配列を有する核酸分
子が好ましい。「Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド活性を有するポリペプチド
」によって、特定の生物学的アッセイにおいて測定される場合に、本発明の成熟
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの活性に類似するが必ずしも同一ではない活
性を示すポリペプチドが意図される。
ドをコードする、図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１に示
される核酸配列、または寄託されたｃＤＮＡの核酸配列に少なくとも９０％、９
５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一である配列を有する核酸分
子が好ましい。「Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド活性を有するポリペプチド
」によって、特定の生物学的アッセイにおいて測定される場合に、本発明の成熟
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの活性に類似するが必ずしも同一ではない活
性を示すポリペプチドが意図される。
【０１０７】 例えば、本発明のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドは、細胞の成長および分化を調節する。従って、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの生物学的活性
は、器官培養物アッセイもしくはアガロース培養物中のコロニーアッセイ系にお
いて試験され得る。細胞の増殖の刺激または阻害は、種々のアッセイによって測
定され得る。細胞成長の阻害の観察のために、固体培地または液体培地を使用し
得る。固体培地において、成長阻害を受ける細胞は、形成されたコロニーの大き
さを比較することによって対象細胞群から容易に選択され得る。液体培地におい
て、成長の阻害は、培養物ブイヨンの濁度（ｔｕｒｂｉｔｙ）またはＤＮＡ中の
標識されたチミジン取り込みの測定によってスクリーニングされ得る。代表的に
、新規に合成されたＤＮＡ中へのヌクレオシドアナログの取り込みを使用して、
細胞の集団における増殖（すなわち、活性な細胞成長）を測定する。例えば、ブ
ロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）は、ＤＮＡ標識試薬として使用され得、そし
て抗ＢｒｄＵマウスモノクローナル抗体（クローン ＢＭＣ ９３１８ ＩｇＧ 1 ）は、検出試薬として使用され得る。この抗体は、ブロモデオキシウリジンを 取り込んだＤＮＡを含む細胞のみに結合する。多くの検出方法（免疫蛍光検査、
免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、および比色定量法を含む）が、アッセイと組み合わ
せて使用され得る。ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）および抗ＢｒｄＵマウ
スモノクローナル抗体を含むキットは、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉ
ｍ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）から市販されている。
ポリペプチドは、細胞の成長および分化を調節する。従って、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの生物学的活性
は、器官培養物アッセイもしくはアガロース培養物中のコロニーアッセイ系にお
いて試験され得る。細胞の増殖の刺激または阻害は、種々のアッセイによって測
定され得る。細胞成長の阻害の観察のために、固体培地または液体培地を使用し
得る。固体培地において、成長阻害を受ける細胞は、形成されたコロニーの大き
さを比較することによって対象細胞群から容易に選択され得る。液体培地におい
て、成長の阻害は、培養物ブイヨンの濁度（ｔｕｒｂｉｔｙ）またはＤＮＡ中の
標識されたチミジン取り込みの測定によってスクリーニングされ得る。代表的に
、新規に合成されたＤＮＡ中へのヌクレオシドアナログの取り込みを使用して、
細胞の集団における増殖（すなわち、活性な細胞成長）を測定する。例えば、ブ
ロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）は、ＤＮＡ標識試薬として使用され得、そし
て抗ＢｒｄＵマウスモノクローナル抗体（クローン ＢＭＣ ９３１８ ＩｇＧ 1 ）は、検出試薬として使用され得る。この抗体は、ブロモデオキシウリジンを 取り込んだＤＮＡを含む細胞のみに結合する。多くの検出方法（免疫蛍光検査、
免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、および比色定量法を含む）が、アッセイと組み合わ
せて使用され得る。ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）および抗ＢｒｄＵマウ
スモノクローナル抗体を含むキットは、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉ
ｍ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）から市販されている。
【０１０８】 細胞の分化に対する効果は、種々の量のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドと胚細胞を接触させ、そして胚細胞
の分化に対する効果を観察することによって測定され得る。組織特異的抗体およ
び顕微鏡検査を使用して、得られる細胞を同定し得る。
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドと胚細胞を接触させ、そして胚細胞
の分化に対する効果を観察することによって測定され得る。組織特異的抗体およ
び顕微鏡検査を使用して、得られる細胞を同定し得る。
【０１０９】 Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドは、上記のアッセイにおいて用量依存的な様式
で、免疫系および／または神経系の細胞の増殖ならびに分化を調節する。従って
、「Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド活性を有するポリペプチド」は、上記のアッ
セイにおいて用量依存的な様式で、同様の増殖および分化調節活性のいずれかを
また示すポリペプチドを含む。用量依存的活性の程度はＤｅｎｄｒｉａｃポリペ
プチドの活性と同一である必要はないが、好ましくは、「Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチド活性を有するポリペプチド」は、所定の活性において、Ｄｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドと比較した場合に実質的に類似の用量依存を示す（すなわち、候
補ポリペプチドは参照Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドに対してより高い活性を示
すか、または約１／２５以下、および好ましくは約１／１０以下の活性を示す）
。
で、免疫系および／または神経系の細胞の増殖ならびに分化を調節する。従って
、「Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド活性を有するポリペプチド」は、上記のアッ
セイにおいて用量依存的な様式で、同様の増殖および分化調節活性のいずれかを
また示すポリペプチドを含む。用量依存的活性の程度はＤｅｎｄｒｉａｃポリペ
プチドの活性と同一である必要はないが、好ましくは、「Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチド活性を有するポリペプチド」は、所定の活性において、Ｄｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドと比較した場合に実質的に類似の用量依存を示す（すなわち、候
補ポリペプチドは参照Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドに対してより高い活性を示
すか、または約１／２５以下、および好ましくは約１／１０以下の活性を示す）
。
【０１１０】 Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、上記のアッセイにおいて用量依存的な
様式で、免疫系および／または神経系の細胞の増殖ならびに分化を調節する。従
って、「Ｂｒａｉｎｉａｃ−３活性を有するポリペプチド」は、上記のアッセイ
において用量依存的な様式で、同様の増殖および分化調節活性のいずれかをまた
示すポリペプチドを含む。用量依存的活性の程度はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドの活性と同一である必要はないが、好ましくは、「Ｂｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチド活性を有するポリペプチド」は、所定の活性において、Ｂｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドと比較した場合に実質的に類似の用量依存を示す（すな
わち、候補ポリペプチドは参照Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドと比較してよ
り高い活性を示すか、または約１／２５以下、および好ましくは約１／１０以下
の活性を示す）。
様式で、免疫系および／または神経系の細胞の増殖ならびに分化を調節する。従
って、「Ｂｒａｉｎｉａｃ−３活性を有するポリペプチド」は、上記のアッセイ
において用量依存的な様式で、同様の増殖および分化調節活性のいずれかをまた
示すポリペプチドを含む。用量依存的活性の程度はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドの活性と同一である必要はないが、好ましくは、「Ｂｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチド活性を有するポリペプチド」は、所定の活性において、Ｂｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドと比較した場合に実質的に類似の用量依存を示す（すな
わち、候補ポリペプチドは参照Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドと比較してよ
り高い活性を示すか、または約１／２５以下、および好ましくは約１／１０以下
の活性を示す）。
【０１１１】 もちろん、遺伝子コードの縮重のために、当業者は、寄託されたｃＤＮＡの核
酸配列、または図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番号
９に示される核酸配列に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、
または９９％同一である配列を有する多数の核酸分子が「Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチド活性を有する」ポリペプチドをコードすることを直ちに認識する。実際
に、これらのヌクレオチド配列の縮重改変体の全てが同じポリペプチドをコード
するので、このことは、たとえ上記の比較アッセイを行わないとしても、当業者
に明らかである。縮重改変体ではないそのような核酸分子について、妥当な数が
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド活性を有するポリペプチドをコードすることもま
た、当該分野でさらに認識される。当業者はまた、寄託されたｃＤＮＡの核酸配
列、または図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１に示される
核酸配列に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％
同一である配列を有する多数の核酸分子が「Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド
活性を有する」ポリペプチドをコードすることを直ちに認識する。実際に、これ
らのヌクレオチド配列の縮重改変体の全てが同じポリペプチドをコードするので
、このことは、たとえ上記の比較アッセイを行わないとしても、当業者に明らか
である。縮重改変体ではないそのような核酸分子について、妥当な数がＤｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチド活性またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド活性のいず
れかを有するポリペプチドをコードすることもまた、当該分野でさらに認識され
る。これは、当業者が、以下にさらに記載されるように、ポリペプチドの機能に
有意に影響する可能性が低いか、またはその可能性がないかのいずれかのアミノ
酸置換（例えば、１つの脂肪族アミノ酸の第二の脂肪族アミノ酸での置換）を十
分に知っているからである。
酸配列、または図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ（配列番号１）ならびに配列番号
９に示される核酸配列に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、
または９９％同一である配列を有する多数の核酸分子が「Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチド活性を有する」ポリペプチドをコードすることを直ちに認識する。実際
に、これらのヌクレオチド配列の縮重改変体の全てが同じポリペプチドをコード
するので、このことは、たとえ上記の比較アッセイを行わないとしても、当業者
に明らかである。縮重改変体ではないそのような核酸分子について、妥当な数が
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド活性を有するポリペプチドをコードすることもま
た、当該分野でさらに認識される。当業者はまた、寄託されたｃＤＮＡの核酸配
列、または図２Ａおよび図２Ｂ（配列番号３）ならびに配列番号１１に示される
核酸配列に少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％
同一である配列を有する多数の核酸分子が「Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド
活性を有する」ポリペプチドをコードすることを直ちに認識する。実際に、これ
らのヌクレオチド配列の縮重改変体の全てが同じポリペプチドをコードするので
、このことは、たとえ上記の比較アッセイを行わないとしても、当業者に明らか
である。縮重改変体ではないそのような核酸分子について、妥当な数がＤｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチド活性またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド活性のいず
れかを有するポリペプチドをコードすることもまた、当該分野でさらに認識され
る。これは、当業者が、以下にさらに記載されるように、ポリペプチドの機能に
有意に影響する可能性が低いか、またはその可能性がないかのいずれかのアミノ
酸置換（例えば、１つの脂肪族アミノ酸の第二の脂肪族アミノ酸での置換）を十
分に知っているからである。
【０１１２】 （ベクターおよび宿主細胞） 本発明はまた、本発明の単離されたＤＮＡ分子を含むベクター、この組換えベ
クターで遺伝子操作された宿主細胞、および組換え技術によるＤｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドもしくはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはそのフラグメン
トの産生に関する。ベクターは、例えば、ファージベクター、プラスミドベクタ
ー、ウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターであり得る。レトロウイル
スベクターは複製適格または複製欠損であり得る。後者の場合、ウイルス増殖は
一般的に相補体宿主細胞においてのみ生じる。
クターで遺伝子操作された宿主細胞、および組換え技術によるＤｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドもしくはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはそのフラグメン
トの産生に関する。ベクターは、例えば、ファージベクター、プラスミドベクタ
ー、ウイルスベクターまたはレトロウイルスベクターであり得る。レトロウイル
スベクターは複製適格または複製欠損であり得る。後者の場合、ウイルス増殖は
一般的に相補体宿主細胞においてのみ生じる。
【０１１３】 ポリヌクレオチドは、宿主における増殖のために、選択マーカーを含むベクタ
ーに結合され得る。一般的に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈澱物
のような沈澱物中か、または荷電された脂質との複合体中に導入される。ベクタ
ーがウイルスである場合、ベクターは、適切なパッケージング細胞株を用いてイ
ンビトロでパッケージングされ得、次いで宿主細胞に形質導入され得る。
ーに結合され得る。一般的に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈澱物
のような沈澱物中か、または荷電された脂質との複合体中に導入される。ベクタ
ーがウイルスである場合、ベクターは、適切なパッケージング細胞株を用いてイ
ンビトロでパッケージングされ得、次いで宿主細胞に形質導入され得る。
【０１１４】 ＤＮＡインサートは、適切なプロモーター（例えば、少し名を挙げると、ファ
ージλＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモー
ター、ｐｈｏＡプロモーターおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期プロモー
ターおよび後期プロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲのプロモーター）
に作動可能に連結されるべきである。他の適切なプロモーターは、当業者に公知
である。発現構築物は、さらに、転写開始、転写終結のための部位、および、転
写領域中に翻訳のためのリボゾーム結合部位を含む。構築物によって発現される
転写物のコード部分は、好ましくは、翻訳されるべきポリペプチドの始めに翻訳
開始コドンを含み、そして終わりに適切に位置される終止コドン（ＵＡＡ、ＵＧ
Ａ、またはＵＡＧ）を含む。
ージλＰＬプロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃプロモーター、ｔｒｐプロモー
ター、ｐｈｏＡプロモーターおよびｔａｃプロモーター、ＳＶ４０初期プロモー
ターおよび後期プロモーター、ならびにレトロウイルスＬＴＲのプロモーター）
に作動可能に連結されるべきである。他の適切なプロモーターは、当業者に公知
である。発現構築物は、さらに、転写開始、転写終結のための部位、および、転
写領域中に翻訳のためのリボゾーム結合部位を含む。構築物によって発現される
転写物のコード部分は、好ましくは、翻訳されるべきポリペプチドの始めに翻訳
開始コドンを含み、そして終わりに適切に位置される終止コドン（ＵＡＡ、ＵＧ
Ａ、またはＵＡＧ）を含む。
【０１１５】 示されるように、発現ベクターは、好ましくは、少なくとも１つの選択マーカ
ーを含む。このようなマーカーとしては、真核生物細胞培養についてはジヒドロ
葉酸レダクターゼ、Ｇ４１８またはネオマイシン耐性、ならびにＥ．ｃｏｌｉお
よび他の細菌における培養についてはテトラサイクリン耐性遺伝子、カナマイシ
ン耐性遺伝子またはアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。適切な宿主の代表的
な例としては、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ細胞、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ細胞）；真菌細
胞（例えば酵母細胞）；昆虫細胞（例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２細胞お
よびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｓｆ９細胞）；動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、Ｃ
ＯＳ細胞、２９３細胞、およびＢｏｗｅｓ黒色腫細胞）；ならびに植物細胞が挙
げられるが、これらに限定されない。上記の宿主細胞のための適切な培養培地お
よび条件は当該分野で公知である。
ーを含む。このようなマーカーとしては、真核生物細胞培養についてはジヒドロ
葉酸レダクターゼ、Ｇ４１８またはネオマイシン耐性、ならびにＥ．ｃｏｌｉお
よび他の細菌における培養についてはテトラサイクリン耐性遺伝子、カナマイシ
ン耐性遺伝子またはアンピシリン耐性遺伝子が挙げられる。適切な宿主の代表的
な例としては、細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ細胞、およびＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ細胞）；真菌細
胞（例えば酵母細胞）；昆虫細胞（例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ Ｓ２細胞お
よびＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ Ｓｆ９細胞）；動物細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、Ｃ
ＯＳ細胞、２９３細胞、およびＢｏｗｅｓ黒色腫細胞）；ならびに植物細胞が挙
げられるが、これらに限定されない。上記の宿主細胞のための適切な培養培地お
よび条件は当該分野で公知である。
【０１１６】 細菌における使用に好ましいベクターの中には、ｐＨＥ４−５（ＡＴＣＣ受託
番号第２０９３１１号；およびその改変体）、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０、および
ｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．（前述））；ｐＢＳベクター、Ｐｈａｇｅ
ｓｃｒｉｐｔベクター、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１
６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）;ならびにｐｔｒ ｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（
Ｐｈａｒｍａｃｉａ）が含まれる。好ましい真核生物ベクターの中には、ｐＷＬ
ＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１、およびｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ）;ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、およびｐＳＶＬ（Ｐｈ ａｒｍａｃｉａ）がある。他の適切なベクターは、当業者に容易に明らかである
。
番号第２０９３１１号；およびその改変体）、ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０、および
ｐＱＥ−９（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．（前述））；ｐＢＳベクター、Ｐｈａｇｅ
ｓｃｒｉｐｔベクター、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクター、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１
６ａ、ｐＮＨ１８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）;ならびにｐｔｒ ｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４０、ｐＲＩＴ５（
Ｐｈａｒｍａｃｉａ）が含まれる。好ましい真核生物ベクターの中には、ｐＷＬ
ＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１、およびｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａ
ｇｅｎｅ）;ならびにｐＳＶＫ３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、およびｐＳＶＬ（Ｐｈ ａｒｍａｃｉａ）がある。他の適切なベクターは、当業者に容易に明らかである
。
【０１１７】 宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥ
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染または他の方法によって
もたらされ得る。このような方法は、多くの標準的な研究室マニュアルに記載さ
れている（例えば、Ｄａｖｉｓら, Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８６））。
ＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフ
ェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染または他の方法によって
もたらされ得る。このような方法は、多くの標準的な研究室マニュアルに記載さ
れている（例えば、Ｄａｖｉｓら, Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（１９８６））。
【０１１８】 ポリペプチドは、融合タンパク質のような改変された形態で発現され得、そし
て分泌シグナルだけでなく、さらなる異種の機能的領域も含み得る。例えば、さ
らなるアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域が、精製の間の、または続く取り扱い
および保存の間の、宿主細胞における安定性および持続性を改善するために、ポ
リペプチドのＮ末端に付加され得る。また、ペプチド部分が、精製を容易にする
ためにポリペプチドへ付加され得る。このような領域は、ポリペプチドの最終調
製の前に除去され得る。とりわけ、分泌または排出を生じるため、安定性を改善
するため、および精製を容易にするためのペプチド部分のポリペプチドへの付加
は、当該分野でよく知られており、そして慣用的な技術である。好ましい融合タ
ンパク質は、ポリペプチドを安定化および精製するために有用な免疫グロブリン
由来の異種領域を含む。例えば、ＥＰ−Ａ−Ｏ ４６４５３３（カナダ対応出願
第２０４５８６９号）は、別のヒトタンパク質、またはその一部とともに免疫グ
ロブリン分子の定常領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。多くの
場合、融合タンパク質中のＦｃ部分は、治療および診断における使用に十分に有
利であり、従って、例えば改善された薬物動態学的特性を生じる（ＥＰ−Ａ ０
２３２ ２６２）。一方、いくつかの使用のために、融合タンパク質が、記載さ
れる有利な様式で、発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分を欠
失し得ることが望ましい。これは、Ｆｃ部分が、治療および診断における使用に
対して障害となると判明する場合（例えば、融合タンパク質が免疫のための抗原
として使用されるべき場合）である。薬物探索では、例えば、ｈＩＬ−５のよう
なヒトタンパク質が、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するための高処理能力
スクリーニングアッセイの目的でＦｃ部分と融合されている。（Ｂｅｎｎｅｔｔ
，Ｄ．ら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ８：５２〜５８
（１９９５）；Ｊｏｈａｎｓｏｎ，Ｋ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：
９４５９〜９４７１（１９９５））。
て分泌シグナルだけでなく、さらなる異種の機能的領域も含み得る。例えば、さ
らなるアミノ酸、特に荷電アミノ酸の領域が、精製の間の、または続く取り扱い
および保存の間の、宿主細胞における安定性および持続性を改善するために、ポ
リペプチドのＮ末端に付加され得る。また、ペプチド部分が、精製を容易にする
ためにポリペプチドへ付加され得る。このような領域は、ポリペプチドの最終調
製の前に除去され得る。とりわけ、分泌または排出を生じるため、安定性を改善
するため、および精製を容易にするためのペプチド部分のポリペプチドへの付加
は、当該分野でよく知られており、そして慣用的な技術である。好ましい融合タ
ンパク質は、ポリペプチドを安定化および精製するために有用な免疫グロブリン
由来の異種領域を含む。例えば、ＥＰ−Ａ−Ｏ ４６４５３３（カナダ対応出願
第２０４５８６９号）は、別のヒトタンパク質、またはその一部とともに免疫グ
ロブリン分子の定常領域の種々の部分を含む融合タンパク質を開示する。多くの
場合、融合タンパク質中のＦｃ部分は、治療および診断における使用に十分に有
利であり、従って、例えば改善された薬物動態学的特性を生じる（ＥＰ−Ａ ０
２３２ ２６２）。一方、いくつかの使用のために、融合タンパク質が、記載さ
れる有利な様式で、発現され、検出され、そして精製された後に、Ｆｃ部分を欠
失し得ることが望ましい。これは、Ｆｃ部分が、治療および診断における使用に
対して障害となると判明する場合（例えば、融合タンパク質が免疫のための抗原
として使用されるべき場合）である。薬物探索では、例えば、ｈＩＬ−５のよう
なヒトタンパク質が、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定するための高処理能力
スクリーニングアッセイの目的でＦｃ部分と融合されている。（Ｂｅｎｎｅｔｔ
，Ｄ．ら、Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ８：５２〜５８
（１９９５）；Ｊｏｈａｎｓｏｎ，Ｋ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：
９４５９〜９４７１（１９９５））。
【０１１９】 本発明のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドは、硫酸アンモニウム沈澱またはエタノール沈澱、酸抽出、陰イオンもしく
は陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎
水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロ
キシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーを含
む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収され、そして精製され得る。最
も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）が精製のために用
いられる。本発明のポリペプチドは以下を含む：直接単離されたか、または培養
された、体液、組織および細胞を含む天然の供給源からの精製産物；化学合成手
順の産物；ならびに原核生物宿主または真核生物宿主（例えば、細菌細胞、酵母
細胞、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を含む）から組換え技術に
よって産生された産物。組換え産生手順において用いられる宿主に依存して、本
発明のポリペプチドは、グリコシル化されていても、またはグリコシル化されて
いなくてもよい。さらに、本発明のポリペプチドはまた、いくつかの場合、宿主
媒介プロセスの結果として、改変された開始メチオニン残基を含み得る。従って
、一般的に翻訳開始コドンによってコードされるＮ末端メチオニンは、全ての真
核生物細胞において、翻訳の後に任意のタンパク質から高い効率で除去されるこ
とが、当該分野で周知である。また、ほとんどの原核生物において、ほとんどの
タンパク質上のＮ末端メチオニンが効率よく除去されるが、いくつかのタンパク
質については、この原核生物除去プロセスは、Ｎ末端メチオニンが共有結合され
ているアミノ酸の性質に依存して、非効率的である。
チドは、硫酸アンモニウム沈澱またはエタノール沈澱、酸抽出、陰イオンもしく
は陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎
水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロ
キシルアパタイトクロマトグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーを含
む周知の方法によって組換え細胞培養物から回収され、そして精製され得る。最
も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）が精製のために用
いられる。本発明のポリペプチドは以下を含む：直接単離されたか、または培養
された、体液、組織および細胞を含む天然の供給源からの精製産物；化学合成手
順の産物；ならびに原核生物宿主または真核生物宿主（例えば、細菌細胞、酵母
細胞、高等植物細胞、昆虫細胞、および哺乳動物細胞を含む）から組換え技術に
よって産生された産物。組換え産生手順において用いられる宿主に依存して、本
発明のポリペプチドは、グリコシル化されていても、またはグリコシル化されて
いなくてもよい。さらに、本発明のポリペプチドはまた、いくつかの場合、宿主
媒介プロセスの結果として、改変された開始メチオニン残基を含み得る。従って
、一般的に翻訳開始コドンによってコードされるＮ末端メチオニンは、全ての真
核生物細胞において、翻訳の後に任意のタンパク質から高い効率で除去されるこ
とが、当該分野で周知である。また、ほとんどの原核生物において、ほとんどの
タンパク質上のＮ末端メチオニンが効率よく除去されるが、いくつかのタンパク
質については、この原核生物除去プロセスは、Ｎ末端メチオニンが共有結合され
ているアミノ酸の性質に依存して、非効率的である。
【０１２０】 （ポリペプチドおよびフラグメント） 本発明はさらに、寄託されたｃＤＮＡによってコードされるアミノ酸配列、ま
たは配列番号２および配列番号１０のアミノ酸配列を有する、単離されたＤｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチド、あるいは上記ポリペプチドの部分を含むペプチドまた
はポリペプチドを提供する。本発明はまた、寄託されたｃＤＮＡによってコード
されるアミノ酸配列、または配列番号４および配列番号１２のアミノ酸配列を有
する、単離されたＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド、あるいは上記ポリペプチ
ドの部分を含むペプチドまたはポリペプチドを提供する。
たは配列番号２および配列番号１０のアミノ酸配列を有する、単離されたＤｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチド、あるいは上記ポリペプチドの部分を含むペプチドまた
はポリペプチドを提供する。本発明はまた、寄託されたｃＤＮＡによってコード
されるアミノ酸配列、または配列番号４および配列番号１２のアミノ酸配列を有
する、単離されたＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド、あるいは上記ポリペプチ
ドの部分を含むペプチドまたはポリペプチドを提供する。
【０１２１】 （改変体および変異体ポリペプチド） ＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの特
徴を改良または改変するために、タンパク質工学が使用され得る。当業者に公知
の組換えＤＮＡ技術は、単一もしくは複数のアミノ酸置換、欠失、付加、もしく
は融合ポリペプチドを含む、新規の変異体タンパク質またはムテインを作製する
ために使用され得る。このような改変されたポリペプチドは、例えば、増強され
た活性または増加した安定性を示し得る。さらに、少なくとも特定の精製条件お
よび保存条件のもとでは、これらはより高い収率で精製され得、そして対応する
天然のポリペプチドより良好な溶解性を示し得る。
徴を改良または改変するために、タンパク質工学が使用され得る。当業者に公知
の組換えＤＮＡ技術は、単一もしくは複数のアミノ酸置換、欠失、付加、もしく
は融合ポリペプチドを含む、新規の変異体タンパク質またはムテインを作製する
ために使用され得る。このような改変されたポリペプチドは、例えば、増強され
た活性または増加した安定性を示し得る。さらに、少なくとも特定の精製条件お
よび保存条件のもとでは、これらはより高い収率で精製され得、そして対応する
天然のポリペプチドより良好な溶解性を示し得る。
【０１２２】 （Ｎ末端欠失変異体およびＣ末端欠失変異体） 例えば、膜結合タンパク質の細胞外ドメインまたは分泌タンパク質の成熟形態
を含む多くのタンパク質について、１つ以上のアミノ酸が生物学的機能の実質的
な損失なしでＮ末端またはＣ末端から欠失され得ることは当該分野で公知である
。例えば、Ｒｏｎおよび共同研究者（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６８：２９
８４〜２９８８（１９９３））は、３個、８個または２７個のＮ末端のアミノ酸
残基を失った場合でさえ、ヘパリン結合活性を有する改変ＫＧＦタンパク質を報
告している。
を含む多くのタンパク質について、１つ以上のアミノ酸が生物学的機能の実質的
な損失なしでＮ末端またはＣ末端から欠失され得ることは当該分野で公知である
。例えば、Ｒｏｎおよび共同研究者（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６８：２９
８４〜２９８８（１９９３））は、３個、８個または２７個のＮ末端のアミノ酸
残基を失った場合でさえ、ヘパリン結合活性を有する改変ＫＧＦタンパク質を報
告している。
【０１２３】 本発明の場合、本発明のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドはＢｒａｉｎｉａｃポ
リペプチドファミリーのメンバーであるので、配列番号２および配列番号１０の
５７位のアルギニンまでのＮ末端アミノ酸の欠失は、いくつかの生物学的活性（
例えば、細胞の成長および分化を調節する能力）を維持し得る。さらに、配列番
号２および配列番号１０のアルギニン−５７残基を含むさらなるＮ末端欠失をさ
らに有するポリペプチドは、このような生物学的活性を保持するとは期待されな
い。なぜなら、Ｂｒａｉｎｉａｃ関連ポリペプチド中のこの残基が、生物学的活
性のために必要であると考えられる保存的ドメインの最初であるからである。
リペプチドファミリーのメンバーであるので、配列番号２および配列番号１０の
５７位のアルギニンまでのＮ末端アミノ酸の欠失は、いくつかの生物学的活性（
例えば、細胞の成長および分化を調節する能力）を維持し得る。さらに、配列番
号２および配列番号１０のアルギニン−５７残基を含むさらなるＮ末端欠失をさ
らに有するポリペプチドは、このような生物学的活性を保持するとは期待されな
い。なぜなら、Ｂｒａｉｎｉａｃ関連ポリペプチド中のこの残基が、生物学的活
性のために必要であると考えられる保存的ドメインの最初であるからである。
【０１２４】 しかし、タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、タンパク質
の１つ以上の生物学的機能の改変または損失を生じ得る場合でさえ、他の生物学
的活性はなお維持され得る。従って、このポリペプチドの完全形態または成熟形
態を認識する抗体を誘発し、そして／または抗体に結合する短縮型ポリペプチド
の能力は、一般に、ポリペプチドの完全形態または成熟形態の大部分より少ない
残基がＮ末端から除去される場合、維持される。完全ポリペプチドのＮ末端残基
を欠く特定のポリペプチドが、このような免疫的活性を維持するかどうかは、本
明細書に記載される慣用的な方法およびそうでなければ当該分野で公知の別の方
法により容易に決定され得る。
の１つ以上の生物学的機能の改変または損失を生じ得る場合でさえ、他の生物学
的活性はなお維持され得る。従って、このポリペプチドの完全形態または成熟形
態を認識する抗体を誘発し、そして／または抗体に結合する短縮型ポリペプチド
の能力は、一般に、ポリペプチドの完全形態または成熟形態の大部分より少ない
残基がＮ末端から除去される場合、維持される。完全ポリペプチドのＮ末端残基
を欠く特定のポリペプチドが、このような免疫的活性を維持するかどうかは、本
明細書に記載される慣用的な方法およびそうでなければ当該分野で公知の別の方
法により容易に決定され得る。
【０１２５】 従って、本発明はさらに、配列番号２および配列番号１０に示されるＤｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端から１つ以上の残基が欠失さ
れたポリペプチド、番号５７位のアルギニン残基までのポリペプチド、ならびに
このようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、
本発明は、配列番号２および配列番号１０の残基ｎ1〜２９４のアミノ酸配列を 含むポリペプチドを提供する。ここで、ｎ1は、−２５から５６の範囲の整数で あり、そして５７は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの細胞成長活性および細胞
分化活性の調節に必要であると考えられる、完全Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド
（配列番号２および配列番号１０に示される）のＮ末端から最初の残基の位置で
ある。
ｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端から１つ以上の残基が欠失さ
れたポリペプチド、番号５７位のアルギニン残基までのポリペプチド、ならびに
このようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、
本発明は、配列番号２および配列番号１０の残基ｎ1〜２９４のアミノ酸配列を 含むポリペプチドを提供する。ここで、ｎ1は、−２５から５６の範囲の整数で あり、そして５７は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの細胞成長活性および細胞
分化活性の調節に必要であると考えられる、完全Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド
（配列番号２および配列番号１０に示される）のＮ末端から最初の残基の位置で
ある。
【０１２６】 より詳細には、本発明は、配列番号２および配列番号１０の以下の残基のアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：
ノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：
【０１２７】
【数５】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、提供される。
【０１２８】 同様に、生物学的に機能的なＣ末端欠失ムテインの多くの例が公知である。例
えば、インターフェロンγは、タンパク質のカルボキシ末端から８〜１０アミノ
酸残基を欠失させることにより１０倍まで高い活性を示す（Ｄｏｂｅｌｉら、Ｊ
．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９〜２１６（１９８８））。
えば、インターフェロンγは、タンパク質のカルボキシ末端から８〜１０アミノ
酸残基を欠失させることにより１０倍まで高い活性を示す（Ｄｏｂｅｌｉら、Ｊ
．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ７：１９９〜２１６（１９８８））。
【０１２９】 本発明の場合では、本発明のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドは、Ｂｒａｉｎｉ
ａｃポリペプチドファミリーのメンバーであるので、配列番号２および配列番号
１０の２９２位のシステインまでのＣ末端アミノ酸までの欠失が、いくらかの生
物学的活性（例えば、細胞の成長および分化を調節する能力）を維持し得る。さ
らに、配列番号２および配列番号１０の２９２位のシステイン残基を含むさらな
るＣ末端の欠失を有するポリペプチドは、このような生物学的活性を保持すると
は期待されない。なぜなら、この残基は、生物学的活性のために必要とされる保
存的ドメインの最初にあるからである。
ａｃポリペプチドファミリーのメンバーであるので、配列番号２および配列番号
１０の２９２位のシステインまでのＣ末端アミノ酸までの欠失が、いくらかの生
物学的活性（例えば、細胞の成長および分化を調節する能力）を維持し得る。さ
らに、配列番号２および配列番号１０の２９２位のシステイン残基を含むさらな
るＣ末端の欠失を有するポリペプチドは、このような生物学的活性を保持すると
は期待されない。なぜなら、この残基は、生物学的活性のために必要とされる保
存的ドメインの最初にあるからである。
【０１３０】 しかし、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠失が、タンパク質
の１つ以上の生物学的機能の損失という改変を生じる場合でさえ、他の生物学的
活性はそれでも維持され得る。従って、短縮型のタンパク質の完全または成熟形
態のポリペプチドを認識する抗体を誘発および／または結合する能力は一般に、
完全または成熟な形態のタンパク質の決して大部分ではない残基がＣ末端から除
去されている場合、維持される。完全なタンパク質のＣ末端残基を欠失した特定
のポリペプチドがこのような免疫活性を維持するかどうかは、本明細書で記載さ
れる慣用的な方法およびそうでなければ当該分野で公知の慣用的な方法により容
易に決定され得る。
の１つ以上の生物学的機能の損失という改変を生じる場合でさえ、他の生物学的
活性はそれでも維持され得る。従って、短縮型のタンパク質の完全または成熟形
態のポリペプチドを認識する抗体を誘発および／または結合する能力は一般に、
完全または成熟な形態のタンパク質の決して大部分ではない残基がＣ末端から除
去されている場合、維持される。完全なタンパク質のＣ末端残基を欠失した特定
のポリペプチドがこのような免疫活性を維持するかどうかは、本明細書で記載さ
れる慣用的な方法およびそうでなければ当該分野で公知の慣用的な方法により容
易に決定され得る。
【０１３１】 従って、本発明はさらに、配列番号２および配列番号１０に示されるＤｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列のカルボキシ末端から配列番号２および配
列番号１０の２９２位のシステイン残基までの１つ以上の残基を有するポリペプ
チド、ならびにこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供す
る。詳細には、本発明は、配列番号２および配列番号１０のアミノ酸配列の残基
−２５〜ｍ1のアミノ酸配列を有するポリペプチドを提供する。ここで、ｍ1は、
２９２から２９４の範囲の任意の整数であり、そして残基２９２は、Ｄｅｎｄｒ
ｉａｃポリペプチドの細胞成長調節活性および細胞分化調節活性に必要であると
考えられる、完全Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド（配列番号２および配列番号１
０に示される）のＣ末端からの最初の残基の位置である。
ｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列のカルボキシ末端から配列番号２および配
列番号１０の２９２位のシステイン残基までの１つ以上の残基を有するポリペプ
チド、ならびにこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供す
る。詳細には、本発明は、配列番号２および配列番号１０のアミノ酸配列の残基
−２５〜ｍ1のアミノ酸配列を有するポリペプチドを提供する。ここで、ｍ1は、
２９２から２９４の範囲の任意の整数であり、そして残基２９２は、Ｄｅｎｄｒ
ｉａｃポリペプチドの細胞成長調節活性および細胞分化調節活性に必要であると
考えられる、完全Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチド（配列番号２および配列番号１
０に示される）のＣ末端からの最初の残基の位置である。
【０１３２】 より詳細には、本発明は、配列番号２および配列番号１０の以下の残基のアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：−２
５〜２９２、−２５〜２９３、および−２５〜２９４。これらのポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドもまた、提供される。
ノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：−２
５〜２９２、−２５〜２９３、および−２５〜２９４。これらのポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドもまた、提供される。
【０１３３】 本発明はまた、１つ以上のアミノ酸をアミノ末端およびカルボキシル末端の両
方から欠失させたポリペプチドを提供し、これらは一般には、配列番号２および
配列番号１０のｎ1〜ｍ1位の残基（ここで、ｎ1およびｍ1は上記のような整数）
を有するとして記載され得る。
方から欠失させたポリペプチドを提供し、これらは一般には、配列番号２および
配列番号１０のｎ1〜ｍ1位の残基（ここで、ｎ1およびｍ1は上記のような整数）
を有するとして記載され得る。
【０１３４】 ＡＴＣＣ受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤ
ＮＡクローンによりコードされる完全Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配列の部分から
なるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列もまた含まれ、ここで、この部
分はＡＴＣＣ受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃ
ＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列のアミノ末端からの１〜約
８１のアミノ酸、またはカルボキシ末端からの１〜約３のアミノ酸、あるいはＡ
ＴＣＣ受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤＮＡ
クローンによりコードされる完全アミノ酸配列の上記のアミノ末端およびカルボ
キシ末端欠失の任意の組合せを含まない。
ＮＡクローンによりコードされる完全Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配列の部分から
なるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列もまた含まれ、ここで、この部
分はＡＴＣＣ受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃ
ＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列のアミノ末端からの１〜約
８１のアミノ酸、またはカルボキシ末端からの１〜約３のアミノ酸、あるいはＡ
ＴＣＣ受託番号第２０３０５６号および同第２０９６２７号に含まれるｃＤＮＡ
クローンによりコードされる完全アミノ酸配列の上記のアミノ末端およびカルボ
キシ末端欠失の任意の組合せを含まない。
【０１３５】 また本発明の場合、本発明のＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドはＢｒａｉｎ
ｉａｃポリペプチドファミリーのメンバーであるので、配列番号４および配列番
号１２の８１位のアルギニンまでのＮ末端アミノ酸の欠失は、いくらかの生物学
的活性（例えば、細胞の成長および分化を調節する能力）を維持し得る。さらに
、配列番号４および配列番号１２のアルギニン−８１残基を含むさらなるＮ末端
欠失を有するポリペプチドは、このような生物学的活性を維持しない。なぜなら
、Ｂｒａｉｎｉａｃ関連ポリペプチド中のこの残基が、生物学的活性のために必
要であると考えられる保存的ドメインの最初にあるからである。
ｉａｃポリペプチドファミリーのメンバーであるので、配列番号４および配列番
号１２の８１位のアルギニンまでのＮ末端アミノ酸の欠失は、いくらかの生物学
的活性（例えば、細胞の成長および分化を調節する能力）を維持し得る。さらに
、配列番号４および配列番号１２のアルギニン−８１残基を含むさらなるＮ末端
欠失を有するポリペプチドは、このような生物学的活性を維持しない。なぜなら
、Ｂｒａｉｎｉａｃ関連ポリペプチド中のこの残基が、生物学的活性のために必
要であると考えられる保存的ドメインの最初にあるからである。
【０１３６】 従って、本発明はさらに、配列番号４および配列番号１２に示されるＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端から番号８１位のアルギ
ニン残基までの１つ以上の残基が欠失されたポリペプチド、ならびにこのような
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明は、
配列番号４および配列番号１２の残基ｎ2〜３２４のアミノ酸配列を含むポリペ プチドを提供する。ここで、ｎ2は、−２８から８０の範囲の整数であり、そし て８１は、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの細胞成長活性および細胞分化活
性の調節に必要であると考えられる、完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド（
配列番号４および配列番号１２に示される）のＮ末端から最初の残基の位置であ
る。
ｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列のアミノ末端から番号８１位のアルギ
ニン残基までの１つ以上の残基が欠失されたポリペプチド、ならびにこのような
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳細には、本発明は、
配列番号４および配列番号１２の残基ｎ2〜３２４のアミノ酸配列を含むポリペ プチドを提供する。ここで、ｎ2は、−２８から８０の範囲の整数であり、そし て８１は、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの細胞成長活性および細胞分化活
性の調節に必要であると考えられる、完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド（
配列番号４および配列番号１２に示される）のＮ末端から最初の残基の位置であ
る。
【０１３７】 より詳細には、本発明は、配列番号４および配列番号１２の以下の残基のアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：
ノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：
【０１３８】
【数６】 これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、提供される。
【０１３９】 本発明の場合ではまた、本発明のＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、Ｂｒ
ａｉｎｉａｃポリペプチドファミリーのメンバーであるので、配列番号４および
配列番号１２の３１６位のシステインまでのＣ末端アミノ酸までの欠失が、いく
らかの生物学的活性（例えば、細胞の成長および分化を調節する能力）を維持し
得る。さらに、配列番号４および配列番号１２の３１６位のシステイン残基を含
むさらなるＣ末端欠失を含むポリペプチドは、このような生物学的活性を保持す
ると期待されない。なぜなら、この残基が、生物学的活性のために必要とされる
保存的ドメインの最初にあるからである。
ａｉｎｉａｃポリペプチドファミリーのメンバーであるので、配列番号４および
配列番号１２の３１６位のシステインまでのＣ末端アミノ酸までの欠失が、いく
らかの生物学的活性（例えば、細胞の成長および分化を調節する能力）を維持し
得る。さらに、配列番号４および配列番号１２の３１６位のシステイン残基を含
むさらなるＣ末端欠失を含むポリペプチドは、このような生物学的活性を保持す
ると期待されない。なぜなら、この残基が、生物学的活性のために必要とされる
保存的ドメインの最初にあるからである。
【０１４０】 従って、本発明はさらに、配列番号４および配列番号１２に示されるＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列のカルボキシ末端から配列番号４およ
び配列番号１２の３１６位のシステイン残基までの１つ以上の残基を有するポリ
ペプチド、ならびにこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提
供する。詳細には、本発明は、配列番号４および配列番号１２のアミノ酸配列の
残基−２８〜ｍ2のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。ここで、ｍ2は
、３１６から３２４の範囲の任意の整数であり、そして残基３１６は、Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドの細胞成長調節活性および細胞分化調節活性に必要で
あると考えられる、完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド（配列番号４および
配列番号１２に示される）のＣ末端からの最初の残基の位置である。
ｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列のカルボキシ末端から配列番号４およ
び配列番号１２の３１６位のシステイン残基までの１つ以上の残基を有するポリ
ペプチド、ならびにこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提
供する。詳細には、本発明は、配列番号４および配列番号１２のアミノ酸配列の
残基−２８〜ｍ2のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。ここで、ｍ2は
、３１６から３２４の範囲の任意の整数であり、そして残基３１６は、Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドの細胞成長調節活性および細胞分化調節活性に必要で
あると考えられる、完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド（配列番号４および
配列番号１２に示される）のＣ末端からの最初の残基の位置である。
【０１４１】 より詳細には、本発明は、配列番号４および配列番号１２の以下の残基のアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：−２
８〜３２４、−２８〜３２３、−２８〜３２２、−２８〜３２１、−２８〜３２
０、−２８〜３１９、−２８〜３１８、および−２８〜３１７。これらのポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドもまた、提供される。
ノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する：−２
８〜３２４、−２８〜３２３、−２８〜３２２、−２８〜３２１、−２８〜３２
０、−２８〜３１９、−２８〜３１８、および−２８〜３１７。これらのポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチドもまた、提供される。
【０１４２】 本発明はまた、１つ以上のアミノ酸をアミノ末端およびカルボキシル末端の両
方から欠失させたポリペプチドを提供し、これらは一般には、配列番号４および
配列番号１２のｎ2〜ｍ2位の残基（ここで、ｎ2およびｍ2は上記のような整数）
を有するとして記載され得る。
方から欠失させたポリペプチドを提供し、これらは一般には、配列番号４および
配列番号１２のｎ2〜ｍ2位の残基（ここで、ｎ2およびｍ2は上記のような整数）
を有するとして記載され得る。
【０１４３】 ＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれるｃＤ
ＮＡクローンによりコードされる完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸配列の部分
からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列もまた含まれ、ここで、こ
の部分はＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれ
るｃＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列のアミノ末端からの１
〜約１０８のアミノ酸、またはカルボキシ末端からの１〜約８のアミノ酸、ある
いはＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれるｃ
ＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列の上記のアミノ末端および
カルボキシ末端欠失の任意の組合せを含まない。上記の欠失変異体ポリペプチド
形態の全てをコードするポリヌクレオチドもまた提供される。
ＮＡクローンによりコードされる完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸配列の部分
からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列もまた含まれ、ここで、こ
の部分はＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれ
るｃＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列のアミノ末端からの１
〜約１０８のアミノ酸、またはカルボキシ末端からの１〜約８のアミノ酸、ある
いはＡＴＣＣ受託番号第２０３４５１号および同第２０９４６３号に含まれるｃ
ＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列の上記のアミノ末端および
カルボキシ末端欠失の任意の組合せを含まない。上記の欠失変異体ポリペプチド
形態の全てをコードするポリヌクレオチドもまた提供される。
【０１４４】 上述したように、タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠損が、そ
のタンパク質の１つ以上の生物学的機能の損失という改変を生じる場合でさえ、
他の生物学的活性はなお保持され得る。従って、完全または成熟形態のポリぺプ
チドを認識する抗体を誘発および／または結合する、短縮型のＤｅｎｄｒｉａｃ
およびＢｒａｉｎｉａｃ−３ムテインの能力は一般に、完全または成熟ポリぺプ
チドの決して大部分ではない残基がＮ末端から除去されている場合、維持される
。完全なポリぺプチドのＮ末端残基を欠失した特定のポリペプチドがこのような
免疫活性を維持するかどうかは、本明細書で記載される日常的な方法、およびそ
うでなければ当該分野で公知の日常的な方法により容易に決定され得る。多数の
Ｎ末端アミノ酸残基を除去されたＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ムテインは、おそらく、いくつかの生物学的活性または免疫学的活性を保持し得
る。事実、ＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３のアミノ酸残基のわず
か６つからなるペプチドは、しばしば免疫応答を誘起し得る。
のタンパク質の１つ以上の生物学的機能の損失という改変を生じる場合でさえ、
他の生物学的活性はなお保持され得る。従って、完全または成熟形態のポリぺプ
チドを認識する抗体を誘発および／または結合する、短縮型のＤｅｎｄｒｉａｃ
およびＢｒａｉｎｉａｃ−３ムテインの能力は一般に、完全または成熟ポリぺプ
チドの決して大部分ではない残基がＮ末端から除去されている場合、維持される
。完全なポリぺプチドのＮ末端残基を欠失した特定のポリペプチドがこのような
免疫活性を維持するかどうかは、本明細書で記載される日常的な方法、およびそ
うでなければ当該分野で公知の日常的な方法により容易に決定され得る。多数の
Ｎ末端アミノ酸残基を除去されたＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ムテインは、おそらく、いくつかの生物学的活性または免疫学的活性を保持し得
る。事実、ＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３のアミノ酸残基のわず
か６つからなるペプチドは、しばしば免疫応答を誘起し得る。
【０１４５】 従って、本発明はさらに、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（すなわち、配列番号２
および配列番号１０）に示されるＤｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配列のアミノ末端か
ら１つ以上の残基が欠失されたポリペプチド、番号３１４位のアスパラギン残基
までのポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドを提供する。詳細には、本発明は、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号２
および配列番号１０）の残基ｎ3−３１４のアミノ酸配列を含むポリペプチドを 提供する。ここで、ｎ3は、２から３１４の範囲の整数であり、そして３１５は 、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドの免疫原性活性に少なくとも必要とされると考
えられる、完全ＤｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドのＮ末端の最初の残基の位置であ
る。
および配列番号１０）に示されるＤｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配列のアミノ末端か
ら１つ以上の残基が欠失されたポリペプチド、番号３１４位のアスパラギン残基
までのポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドを提供する。詳細には、本発明は、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号２
および配列番号１０）の残基ｎ3−３１４のアミノ酸配列を含むポリペプチドを 提供する。ここで、ｎ3は、２から３１４の範囲の整数であり、そして３１５は 、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドの免疫原性活性に少なくとも必要とされると考
えられる、完全ＤｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドのＮ末端の最初の残基の位置であ
る。
【０１４６】 さらに詳細には、本発明は、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃに示されるＤｅｎｄｒ
ｉａｃ配列の以下の残基のアミノ酸配列を含む（あるいは、からなる）ポリぺプ
チドをコードするポリヌクレオチドを提供する（図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ中の
アミノ酸残基は、Ｎ末端からＣ末端の１から３１９まで連続して番号を付けられ
るが、配列番号２および配列番号１０のアミノ酸残基は、推定シグナルペプチド
の位置を反映するように−２５から２９４まで連続して番号を付けられることを
除いて、この配列は、配列番号２に示される配列ならびに配列番号１０に示され
る配列と同一である）：
ｉａｃ配列の以下の残基のアミノ酸配列を含む（あるいは、からなる）ポリぺプ
チドをコードするポリヌクレオチドを提供する（図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ中の
アミノ酸残基は、Ｎ末端からＣ末端の１から３１９まで連続して番号を付けられ
るが、配列番号２および配列番号１０のアミノ酸残基は、推定シグナルペプチド
の位置を反映するように−２５から２９４まで連続して番号を付けられることを
除いて、この配列は、配列番号２に示される配列ならびに配列番号１０に示され
る配列と同一である）：
【０１４７】
【数７】 これらのポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明に包含され
る。
る。
【０１４８】 上述したように、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠損が、そ
のタンパク質の１つ以上の生物学的機能の欠損という改変を生じる場合でさえ、
他の生物学的活性は、なお保持され得る。従って、完全または成熟な形態のポリ
ぺプチドを認識する抗体を誘発および／または結合する、短縮型のＤｅｎｄｒｉ
ａｃムテインの能力は一般に、完全または成熟ポリぺプチドの決して大部分では
ない残基がＣ末端から除去されている場合、保持される。完全なポリぺプチドの
Ｃ末端残基を欠失した特定のポリペプチドがこのような免疫活性を保持するかど
うかは、本明細書で記載される日常的な方法およびそうでなければ当該分野で公
知の日常的な方法により容易に決定され得る。多数のＣ末端アミノ酸残基を除去
されたＤｅｎｄｒｉａｃムテインは、おそらく、いくつかの生物学的活性または
免疫学的活性を保持し得る。事実、Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸残基のわずか６つ
からなるペプチドは、しばしば免疫応答を誘起し得る。
のタンパク質の１つ以上の生物学的機能の欠損という改変を生じる場合でさえ、
他の生物学的活性は、なお保持され得る。従って、完全または成熟な形態のポリ
ぺプチドを認識する抗体を誘発および／または結合する、短縮型のＤｅｎｄｒｉ
ａｃムテインの能力は一般に、完全または成熟ポリぺプチドの決して大部分では
ない残基がＣ末端から除去されている場合、保持される。完全なポリぺプチドの
Ｃ末端残基を欠失した特定のポリペプチドがこのような免疫活性を保持するかど
うかは、本明細書で記載される日常的な方法およびそうでなければ当該分野で公
知の日常的な方法により容易に決定され得る。多数のＣ末端アミノ酸残基を除去
されたＤｅｎｄｒｉａｃムテインは、おそらく、いくつかの生物学的活性または
免疫学的活性を保持し得る。事実、Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸残基のわずか６つ
からなるペプチドは、しばしば免疫応答を誘起し得る。
【０１４９】 従って、本発明はさらに、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号２および配列
番号１０）に示されるＤｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドのアミノ酸配列のカルボキ
シ末端から１つ以上の残基が欠失されたポリペプチド、番号６位のロイシン残基
までのポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドを提供する。詳細には、本発明は、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（すなわち、
配列番号２および配列番号１０）の残基１−ｍ3のアミノ酸配列を含むポリペプ チドを提供する。ここで、ｍ3は、６から３１９の範囲の整数であり、そして６ は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドの免疫原性活性に少なくとも必要とされると
考えられる、完全ＤｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドのＣ末端の最初の残基の位置で
ある。
番号１０）に示されるＤｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドのアミノ酸配列のカルボキ
シ末端から１つ以上の残基が欠失されたポリペプチド、番号６位のロイシン残基
までのポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チドを提供する。詳細には、本発明は、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（すなわち、
配列番号２および配列番号１０）の残基１−ｍ3のアミノ酸配列を含むポリペプ チドを提供する。ここで、ｍ3は、６から３１９の範囲の整数であり、そして６ は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドの免疫原性活性に少なくとも必要とされると
考えられる、完全ＤｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドのＣ末端の最初の残基の位置で
ある。
【０１５０】 さらに詳細には、本発明は、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃに示されるＤｅｎｄｒ
ｉａｃ配列の以下の残基のアミノ酸配列を含む（あるいは、からなる）ポリぺプ
チドをコードするポリヌクレオチドを提供する（図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ中の
アミノ酸残基は、Ｎ末端からＣ末端の１から３１９まで連続して番号を付けられ
るが、配列番号２および配列番号１０のアミノ酸残基は、推定シグナルペプチド
の位置を反映するように−２５から２９４まで連続して番号を付けられることを
除いて、この配列は、配列番号２に示される配列ならびに配列番号１０に示され
る配列と同一である）：
ｉａｃ配列の以下の残基のアミノ酸配列を含む（あるいは、からなる）ポリぺプ
チドをコードするポリヌクレオチドを提供する（図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ中の
アミノ酸残基は、Ｎ末端からＣ末端の１から３１９まで連続して番号を付けられ
るが、配列番号２および配列番号１０のアミノ酸残基は、推定シグナルペプチド
の位置を反映するように−２５から２９４まで連続して番号を付けられることを
除いて、この配列は、配列番号２に示される配列ならびに配列番号１０に示され
る配列と同一である）：
【０１５１】
【数８】 これらのポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、提供される。
【０１５２】 本発明はまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリぺプチドのアミノ末端およびカルボキシ
ル末端の両方から１つ以上のアミノ酸を欠失させたポリぺプチドを提供し、これ
らは一般的には、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（すなわち、配列番号２および配列
番号１０）のｎ3−ｍ3位の残基（ここで、上記のようにｎ3およびｍ3は整数であ
る）を有するように記載され得る。
ル末端の両方から１つ以上のアミノ酸を欠失させたポリぺプチドを提供し、これ
らは一般的には、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（すなわち、配列番号２および配列
番号１０）のｎ3−ｍ3位の残基（ここで、上記のようにｎ3およびｍ3は整数であ
る）を有するように記載され得る。
【０１５３】 上述したように、さらに、タンパク質のＮ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠
損が、そのタンパク質の１つ以上の生物学的機能の欠損という改変を生じる場合
でさえ、他の生物学的活性はなお保持され得る。従って、完全または成熟形態ポ
リぺプチドを認識する抗体を誘発および／または結合する、短縮型のＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３ムテインの能力は一般に、完全または成熟ポリぺプチドの決して大部
分ではない残基がＮ末端から除去されている場合、維持される。完全ポリぺプチ
ドのＮ末端残基を欠失した特定のポリペプチドがこのような免疫活性を維持する
かどうかは、本明細書で記載される日常的な方法およびそうでなければ当該分野
で公知の日常的な方法により容易に決定され得る。多数のＮ末端アミノ酸残基を
除去されたＢｒａｉｎｉａｃ−３ムテインは、おそらく、いくつかの生物学的活
性または免疫原性活性を保持し得る。事実、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３のアミノ酸残
基のわずか６つからなるペプチドは、しばしば免疫応答を誘起し得る。
損が、そのタンパク質の１つ以上の生物学的機能の欠損という改変を生じる場合
でさえ、他の生物学的活性はなお保持され得る。従って、完全または成熟形態ポ
リぺプチドを認識する抗体を誘発および／または結合する、短縮型のＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３ムテインの能力は一般に、完全または成熟ポリぺプチドの決して大部
分ではない残基がＮ末端から除去されている場合、維持される。完全ポリぺプチ
ドのＮ末端残基を欠失した特定のポリペプチドがこのような免疫活性を維持する
かどうかは、本明細書で記載される日常的な方法およびそうでなければ当該分野
で公知の日常的な方法により容易に決定され得る。多数のＮ末端アミノ酸残基を
除去されたＢｒａｉｎｉａｃ−３ムテインは、おそらく、いくつかの生物学的活
性または免疫原性活性を保持し得る。事実、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３のアミノ酸残
基のわずか６つからなるペプチドは、しばしば免疫応答を誘起し得る。
【０１５４】 従って、本発明はさらに、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号４および配列番号１２
）に示されるＢｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸配列のアミノ末端から１つ以上の残
基が欠失されたポリペプチド、番号３４７位のグリシン残基までのポリペプチド
、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳
細には、本発明は、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号４および配列番号１２）のｎ4 −３５２残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。ここで、ｎ4は、 ２から３４７の範囲の整数であり、そして３４８は、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリ
ぺプチドの免疫原性活性に少なくとも必要とされると考えられる、完全Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリぺプチドのＮ末端の最初の残基の位置である。
）に示されるＢｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸配列のアミノ末端から１つ以上の残
基が欠失されたポリペプチド、番号３４７位のグリシン残基までのポリペプチド
、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供する。詳
細には、本発明は、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号４および配列番号１２）のｎ4 −３５２残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。ここで、ｎ4は、 ２から３４７の範囲の整数であり、そして３４８は、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリ
ぺプチドの免疫原性活性に少なくとも必要とされると考えられる、完全Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリぺプチドのＮ末端の最初の残基の位置である。
【０１５５】 さらに詳細には、本発明は、図２Ａおよび２Ｂに示されるＢｒａｉｎｉａｃ−
３配列の以下の残基のアミノ酸配列を含む（あるいは、からなる）ポリぺプチド
をコードするポリヌクレオチドを提供する（図２Ａおよび２Ｂのアミノ酸残基は
、Ｎ末端からＣ末端の１から３５２まで連続して番号を付けられるが、配列番号
４および配列番号１２のアミノ酸残基は、推定シグナルペプチドの位置を反映す
るように−２８から３２４まで連続して番号を付けられることを除いて、この配
列は、配列番号４に示される配列ならびに配列番号１２に示される配列と同一で
ある）：
３配列の以下の残基のアミノ酸配列を含む（あるいは、からなる）ポリぺプチド
をコードするポリヌクレオチドを提供する（図２Ａおよび２Ｂのアミノ酸残基は
、Ｎ末端からＣ末端の１から３５２まで連続して番号を付けられるが、配列番号
４および配列番号１２のアミノ酸残基は、推定シグナルペプチドの位置を反映す
るように−２８から３２４まで連続して番号を付けられることを除いて、この配
列は、配列番号４に示される配列ならびに配列番号１２に示される配列と同一で
ある）：
【０１５６】
【数９】 これらのポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドもまた、本発明によって包
含される。
含される。
【０１５７】 上述したように、タンパク質のＣ末端からの１つ以上のアミノ酸の欠損が、タ
ンパク質の１つ以上の生物学的機能の欠損という改変を生じる場合でさえ、他の
生物学的活性はなお保持され得る。従って、完全または成熟形態のポリぺプチド
を認識する抗体を誘発および／または結合する、短縮型のＢｒａｉｎｉａｃ−３
ムテインの能力は一般に、完全または成熟ポリぺプチドの決して大部分ではない
残基がＣ末端から除去されている場合、保持される。完全なポリぺプチドのＣ末
端残基を欠失した特定のポリペプチドがこのような免疫活性を保持するかどうか
は、本明細書で記載される日常的な方法およびそうでなければ当該分野で公知の
日常的な方法により容易に決定され得る。多数のＣ末端アミノ酸残基を欠損され
たＢｒａｉｎｉａｃ−３ムテインは、おそらく、いくつかの生物学的活性または
免疫原性活性を保持し得る。事実、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３のアミノ酸残基のわず
か６つからなるペプチドは、しばしば免疫応答を誘起し得る。
ンパク質の１つ以上の生物学的機能の欠損という改変を生じる場合でさえ、他の
生物学的活性はなお保持され得る。従って、完全または成熟形態のポリぺプチド
を認識する抗体を誘発および／または結合する、短縮型のＢｒａｉｎｉａｃ−３
ムテインの能力は一般に、完全または成熟ポリぺプチドの決して大部分ではない
残基がＣ末端から除去されている場合、保持される。完全なポリぺプチドのＣ末
端残基を欠失した特定のポリペプチドがこのような免疫活性を保持するかどうか
は、本明細書で記載される日常的な方法およびそうでなければ当該分野で公知の
日常的な方法により容易に決定され得る。多数のＣ末端アミノ酸残基を欠損され
たＢｒａｉｎｉａｃ−３ムテインは、おそらく、いくつかの生物学的活性または
免疫原性活性を保持し得る。事実、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３のアミノ酸残基のわず
か６つからなるペプチドは、しばしば免疫応答を誘起し得る。
【０１５８】 従って、本発明はさらに、図２Ａおよび２Ｂ（すなわち、配列番号４および配
列番号１２）に示されるＢｒａｉｎｉａｃ−３のアミノ酸配列のカルボキシ末端
から１つ以上の残基が欠失されたポリペプチド、番号６位のシステイン残基まで
のポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
を提供する。詳細には、本発明は、図２Ａおよび２Ｂ（すなわち、配列番号４お
よび配列番号１２）の１−ｍ4残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供す る。ここで、ｍ4は、６から３５１の範囲の整数であり、そして６は、Ｂｒａｉ ｎｉａｃ−３ポリぺプチドの免疫原性活性に少なくとも必要とされると考えられ
る、完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリぺプチドのＣ末端の最初の残基の位置である
。
列番号１２）に示されるＢｒａｉｎｉａｃ−３のアミノ酸配列のカルボキシ末端
から１つ以上の残基が欠失されたポリペプチド、番号６位のシステイン残基まで
のポリペプチド、およびこのようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
を提供する。詳細には、本発明は、図２Ａおよび２Ｂ（すなわち、配列番号４お
よび配列番号１２）の１−ｍ4残基のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供す る。ここで、ｍ4は、６から３５１の範囲の整数であり、そして６は、Ｂｒａｉ ｎｉａｃ−３ポリぺプチドの免疫原性活性に少なくとも必要とされると考えられ
る、完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリぺプチドのＣ末端の最初の残基の位置である
。
【０１５９】 さらに詳細には、本発明は、図２Ａおよび２Ｂに示されるＢｒａｉｎｉａｃ−
３配列の配列の以下の残基のアミノ酸配列を含む（あるいは、からなる）ポリぺ
プチドをコードするポリヌクレオチドを提供する（図２Ａおよび２Ｂのアミノ酸
残基は、Ｎ末端からＣ末端の１から３５２まで連続して番号を付けられるが、配
列番号４および配列番号１２のアミノ酸残基は、推定シグナルペプチドの位置を
反映するように−２８から３２４まで連続して番号を付けられることを除いて、
この配列は、配列番号４に示される配列ならびに配列番号１２に示される配列と
同一である）：
３配列の配列の以下の残基のアミノ酸配列を含む（あるいは、からなる）ポリぺ
プチドをコードするポリヌクレオチドを提供する（図２Ａおよび２Ｂのアミノ酸
残基は、Ｎ末端からＣ末端の１から３５２まで連続して番号を付けられるが、配
列番号４および配列番号１２のアミノ酸残基は、推定シグナルペプチドの位置を
反映するように−２８から３２４まで連続して番号を付けられることを除いて、
この配列は、配列番号４に示される配列ならびに配列番号１２に示される配列と
同一である）：
【０１６０】
【数１０】 これらのポリぺプチドをコードするポリヌクレオチドもまた提供される。
【０１６１】 本発明はまた、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリぺプチドのアミノ末端およびカルボ
キシル末端の両方から１つ以上のアミノ酸を欠失させたポリぺプチドを提供し、
これらは一般的には、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号４および配列番号１２）のｎ 4 −ｍ4位の残基（ここで、上記のようにｎ4およびｍ4は整数である）のアミノ酸
配列を有するように記載され得る。
キシル末端の両方から１つ以上のアミノ酸を欠失させたポリぺプチドを提供し、
これらは一般的には、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号４および配列番号１２）のｎ 4 −ｍ4位の残基（ここで、上記のようにｎ4およびｍ4は整数である）のアミノ酸
配列を有するように記載され得る。
【０１６２】 （他の変異体） 上記で議論されたタンパク質の末端欠失形態に加えて、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよ
びＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの幾つかのアミノ酸配列を、タンパク質の
構造または機能に有意な影響なしに変化し得ることもまた、当業者により認識さ
れる。配列中でのこのような差違を意図する場合、活性を決定するタンパク質の
決定的な領域が存在することに留意すべきである。
びＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの幾つかのアミノ酸配列を、タンパク質の
構造または機能に有意な影響なしに変化し得ることもまた、当業者により認識さ
れる。配列中でのこのような差違を意図する場合、活性を決定するタンパク質の
決定的な領域が存在することに留意すべきである。
【０１６３】 従って、本発明は、実質的なＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３の
ポリペプチド活性を示すＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドの改変体、または以下で議論されるポリぺプチド部分のようなＤｅｎｄｒｉ
ａｃおよびのＢｒａｉｎｉａｃ−３のポリペプチド領域を含むＤｅｎｄｒｉａｃ
およびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの改変体をさらに含む。このような変
異体は、欠失、挿入、転化、反復、および、当該分野で公知である一般的な規則
に従って、活性にほとんど影響しないように選択される型置換を含む。例えば、
表現型的にサイレントなアミノ酸置換をいかにして作製するかに関するガイダン
スが提供され、ここで著者らは、変化に対するアミノ酸配列の寛容性を研究する
ための２つの主だったアプローチが存在すると示している（Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ
．，ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６−１３１０（１９９０））。最初の
方法は進化のプロセスに依存し、ここで変異は天然の選択により受け入れられる
か、または拒絶されるかのどちらかである。第２のアプローチは、クローン化さ
れた遺伝子の特定部位でのアミノ酸変化を導入するための遺伝子工学ならびに機
能的に維持する配列を同定するための選択もしくはスクリーニングを使用する。
ポリペプチド活性を示すＤｅｎｄｒｉａｃおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドの改変体、または以下で議論されるポリぺプチド部分のようなＤｅｎｄｒｉ
ａｃおよびのＢｒａｉｎｉａｃ−３のポリペプチド領域を含むＤｅｎｄｒｉａｃ
およびＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの改変体をさらに含む。このような変
異体は、欠失、挿入、転化、反復、および、当該分野で公知である一般的な規則
に従って、活性にほとんど影響しないように選択される型置換を含む。例えば、
表現型的にサイレントなアミノ酸置換をいかにして作製するかに関するガイダン
スが提供され、ここで著者らは、変化に対するアミノ酸配列の寛容性を研究する
ための２つの主だったアプローチが存在すると示している（Ｂｏｗｉｅ，Ｊ．Ｕ
．，ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６−１３１０（１９９０））。最初の
方法は進化のプロセスに依存し、ここで変異は天然の選択により受け入れられる
か、または拒絶されるかのどちらかである。第２のアプローチは、クローン化さ
れた遺伝子の特定部位でのアミノ酸変化を導入するための遺伝子工学ならびに機
能的に維持する配列を同定するための選択もしくはスクリーニングを使用する。
【０１６４】 著者らが述べるように、これらの研究は、タンパク質がアミノ酸置換に驚くほ
ど寛容性であることを明らかにしてきた。著者らは、タンパク質の特定の部位で
どのアミノ酸変化が許容性であると思われるかをさらに示している。例えば、ほ
とんどの包理したアミノ酸残基は非極性側鎖を必要とし、一方で表面側鎖のほと
んどの特徴は一般に保存されない。他のこのような表現型的にサイレントな置換
は、Ｂｏｗｉｅおよびその共同研究者ら（前出）およびその中で引用される参考
文献に記載される。代表的には、保存的置換として見出されるのは、それぞれ、
脂肪性アミノ酸のＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの間の置き換え；ヒド
ロキシル残基ＳｅｒおよびＴｈｒの交換、酸性残基ＡｓｐおよびＧｌｕの交換、
アミド残基ＡｓｎおよびＧｌｎ間の置換、塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇの交換
、ならびに芳香族残基Ｐｈｅ、Ｔｙｒの間の置き換えである。
ど寛容性であることを明らかにしてきた。著者らは、タンパク質の特定の部位で
どのアミノ酸変化が許容性であると思われるかをさらに示している。例えば、ほ
とんどの包理したアミノ酸残基は非極性側鎖を必要とし、一方で表面側鎖のほと
んどの特徴は一般に保存されない。他のこのような表現型的にサイレントな置換
は、Ｂｏｗｉｅおよびその共同研究者ら（前出）およびその中で引用される参考
文献に記載される。代表的には、保存的置換として見出されるのは、それぞれ、
脂肪性アミノ酸のＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅの間の置き換え；ヒド
ロキシル残基ＳｅｒおよびＴｈｒの交換、酸性残基ＡｓｐおよびＧｌｕの交換、
アミド残基ＡｓｎおよびＧｌｎ間の置換、塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇの交換
、ならびに芳香族残基Ｐｈｅ、Ｔｙｒの間の置き換えである。
【０１６５】 従って、配列番号２、配列番号４、配列番号１０、配列番号１２のポリペプチ
ドのフラグメント、誘導体もしくはアナログ、または寄託されたｃＤＮＡにより
コードされるフラグメント、誘導体もしくはアナログは、（ｉ）１つ以上のアミ
ノ酸残基が、保存されたまたは保存されていないアミノ酸残基（好ましくは保存
されたアミノ酸）で置換され、そしてこのような置換されたアミノ酸残基が遺伝
コードによりコードされてもよくされていなくてもよいもの；または（ｉｉ）１
つ以上のアミノ酸残基が置換基を含むもの、または（ｉｉｉ）Ｄｅｎｄｒｉａｃ
成熟ポリペプチドまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３成熟ポリペプチドのいずれかが、
ポリペプチドの半減期を増加させるための化合物（例えば、ポリエチレングリコ
ール）のような別の化合物と融合したもの、または（ｉｖ）さらなるアミノ酸が
上記の形態のポリペプチド（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチド配列もしく
はリーダー配列もしくは分泌配列または上記の形態のポリペプチド配列もしくは
プロタンパク質配列の精製のために使用される配列）と融合したものであり得る
。このようなフラグメント、誘導体およびアナログは、本明細書の教示より当業
者の範囲内であると見なされる。
ドのフラグメント、誘導体もしくはアナログ、または寄託されたｃＤＮＡにより
コードされるフラグメント、誘導体もしくはアナログは、（ｉ）１つ以上のアミ
ノ酸残基が、保存されたまたは保存されていないアミノ酸残基（好ましくは保存
されたアミノ酸）で置換され、そしてこのような置換されたアミノ酸残基が遺伝
コードによりコードされてもよくされていなくてもよいもの；または（ｉｉ）１
つ以上のアミノ酸残基が置換基を含むもの、または（ｉｉｉ）Ｄｅｎｄｒｉａｃ
成熟ポリペプチドまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３成熟ポリペプチドのいずれかが、
ポリペプチドの半減期を増加させるための化合物（例えば、ポリエチレングリコ
ール）のような別の化合物と融合したもの、または（ｉｖ）さらなるアミノ酸が
上記の形態のポリペプチド（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ融合領域ペプチド配列もしく
はリーダー配列もしくは分泌配列または上記の形態のポリペプチド配列もしくは
プロタンパク質配列の精製のために使用される配列）と融合したものであり得る
。このようなフラグメント、誘導体およびアナログは、本明細書の教示より当業
者の範囲内であると見なされる。
【０１６６】 従って、本発明のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよびＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドは、天然の変異もしくは人工操作のいずれかに由来する１つ以上の
アミノ酸置換、欠失、または付加を含み得る。示されるように、タンパク質の折
り畳みまたは活性に有意に影響しない保存的アミノ酸置換のような、小さな性質
の変化が好ましい（表ＩＩＩを参照のこと）。
ポリペプチドは、天然の変異もしくは人工操作のいずれかに由来する１つ以上の
アミノ酸置換、欠失、または付加を含み得る。示されるように、タンパク質の折
り畳みまたは活性に有意に影響しない保存的アミノ酸置換のような、小さな性質
の変化が好ましい（表ＩＩＩを参照のこと）。
【０１６７】
【表３】 機能に必須である本発明のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドにおけるアミノ酸は、当該分野で公知の方法（例
えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャン変異誘発（Ｃｕｎｎｉｎｇｈ
ａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５（１９８
９））により同定され得る。後者の手順は、分子のすべての残基に単一のアラニ
ン変異を導入する。次いで、得られた変異体分子は生物学活性（例えば、レセプ
ター結合またはインビトロまたはインビトロでの増殖活性）について試験される
。
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドにおけるアミノ酸は、当該分野で公知の方法（例
えば、部位特異的変異誘発またはアラニンスキャン変異誘発（Ｃｕｎｎｉｎｇｈ
ａｍおよびＷｅｌｌｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５（１９８
９））により同定され得る。後者の手順は、分子のすべての残基に単一のアラニ
ン変異を導入する。次いで、得られた変異体分子は生物学活性（例えば、レセプ
ター結合またはインビトロまたはインビトロでの増殖活性）について試験される
。
【０１６８】 特に興味深いのは、荷電したアミノ酸の、荷電した別のアミノ酸または中性の
アミノ酸での置換である。この置換によって、凝集しにくいなどのような、非常
に望ましい改善された特性を有するタンパク質が産生され得る。凝集は活性を減
少させるだけではなく、凝集体が免疫原性であり得るため、薬学的処方物を調製
する場合にも問題であり得る（Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．２：３３１−３４０（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔ
ｅｓ ３６：８３８−８４５（１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅ
ｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｔｅｍｓ １０
：３０７−３７７（１９９３））。
アミノ酸での置換である。この置換によって、凝集しにくいなどのような、非常
に望ましい改善された特性を有するタンパク質が産生され得る。凝集は活性を減
少させるだけではなく、凝集体が免疫原性であり得るため、薬学的処方物を調製
する場合にも問題であり得る（Ｐｉｎｃｋａｒｄら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．２：３３１−３４０（１９６７）；Ｒｏｂｂｉｎｓら、Ｄｉａｂｅｔ
ｅｓ ３６：８３８−８４５（１９８７）；Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅ
ｖ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｔｅｍｓ １０
：３０７−３７７（１９９３））。
【０１６９】 アミノ酸の置換はまた、細胞表面のレセプターに対するリガンドの結合選択性
を変化させ得る。例えば、Ｏｓｔａｄｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３６１：２６６−２
６８（１９９３）は、ＴＮＦレセプターの２つの公知の型の１つのみに対するＴ
ＮＦ−αの選択的な結合を生じる特定の変異体を記載する。リガンド−レセプタ
ー結合について決定的である部位はまた、構造解析（例えば、結晶化、核磁気共
鳴法または光親和性標識）により決定され得る（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂ
ｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ Ｖｏｓら、Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２５５：３０６−３１２（１９９２））。
を変化させ得る。例えば、Ｏｓｔａｄｅら、Ｎａｔｕｒｅ ３６１：２６６−２
６８（１９９３）は、ＴＮＦレセプターの２つの公知の型の１つのみに対するＴ
ＮＦ−αの選択的な結合を生じる特定の変異体を記載する。リガンド−レセプタ
ー結合について決定的である部位はまた、構造解析（例えば、結晶化、核磁気共
鳴法または光親和性標識）により決定され得る（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂ
ｉｏｌ．２２４：８９９−９０４（１９９２）およびｄｅ Ｖｏｓら、Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ ２５５：３０６−３１２（１９９２））。
【０１７０】 本発明のポリペプチドは、好ましくは単離された形態で提供され、そして好ま
しくは実質的に精製される。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの組換え産生バージョンは、ＳｍｉｔｈおよびＪ
ｏｈｎｓｏｎ（Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０（１９８８））に記載される一工程
法により実質的に精製され得る。本発明のポリペプチドはまた、タンパク質精製
の分野で周知である方法で、本発明の抗Ｄｅｎｄｒｉａｃ抗体および／または抗
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３抗体を使用して、天然または組換えの供給源から精製され
得る。
しくは実質的に精製される。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの組換え産生バージョンは、ＳｍｉｔｈおよびＪ
ｏｈｎｓｏｎ（Ｇｅｎｅ ６７：３１−４０（１９８８））に記載される一工程
法により実質的に精製され得る。本発明のポリペプチドはまた、タンパク質精製
の分野で周知である方法で、本発明の抗Ｄｅｎｄｒｉａｃ抗体および／または抗
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３抗体を使用して、天然または組換えの供給源から精製され
得る。
【０１７１】 本発明はまた、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離された
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを提供する：（ａ）配列番号２および配列番号１
０（すなわち、配列番号２および配列番号１０の１〜３１９位）に示される完全
アミノ酸配列を有する全長Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列；（ｂ
）配列番号２および配列番号１０に示される、Ｎ末端メチオニン（すなわち、配
列番号２および配列番号１０の２〜３１９位）を除く、完全アミノ酸配列を有す
る全長Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列；（ｃ）配列番号２および
配列番号１０の２６〜３１９位のアミノ酸配列を有する推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドのアミノ酸配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡ
ＴＣＣ受託番号２０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされる
完全アミノ酸配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番
号２０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされる、Ｎ末端メチ
オニンを除く完全アミノ酸配列；および（ｆ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６お
よびＡＴＣＣ受託番号２０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによってコード
される推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの完全アミノ酸配列。本発明のポ
リペプチドはまた、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ
）に記載されるポリペプチドに対して少なくとも８０％の同一、より好ましくは
少なくとも９０％の同一、そしてなおより好ましくは９５％、９６％、９７％、
９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、ならび
に上記配列に対して少なくとも９０％の類似性、およびより好ましくは少なくと
も９５％の類似性のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを提供する：（ａ）配列番号２および配列番号１
０（すなわち、配列番号２および配列番号１０の１〜３１９位）に示される完全
アミノ酸配列を有する全長Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列；（ｂ
）配列番号２および配列番号１０に示される、Ｎ末端メチオニン（すなわち、配
列番号２および配列番号１０の２〜３１９位）を除く、完全アミノ酸配列を有す
る全長Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列；（ｃ）配列番号２および
配列番号１０の２６〜３１９位のアミノ酸配列を有する推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドのアミノ酸配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡ
ＴＣＣ受託番号２０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされる
完全アミノ酸配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番
号２０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによってコードされる、Ｎ末端メチ
オニンを除く完全アミノ酸配列；および（ｆ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６お
よびＡＴＣＣ受託番号２０９６２７に含まれるｃＤＮＡクローンによってコード
される推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの完全アミノ酸配列。本発明のポ
リペプチドはまた、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）または（ｆ
）に記載されるポリペプチドに対して少なくとも８０％の同一、より好ましくは
少なくとも９０％の同一、そしてなおより好ましくは９５％、９６％、９７％、
９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、ならび
に上記配列に対して少なくとも９０％の類似性、およびより好ましくは少なくと
も９５％の類似性のアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。
【０１７２】 本発明のさらなるポリペプチドは、上記の配列に対して少なくとも９０％の類
似性、より好ましくは少なくとも９５％の類似性、そしてなおより好ましくは少
なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％の類似性を有するポリペプチド
を含む。本発明のポリペプチドはまた、寄託されたｃＤＮＡによってコードされ
るポリペプチドまたは配列番号２および配列番号１０のポリペプチドに対して少
なくとも８０％同一、より好ましくは少なくとも９０％または９５％同一、なお
より好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるポ
リペプチドを含む、ならびに少なくとも１５のアミノ酸、より好ましくは少なく
とも３０のアミノ酸、さらにより好ましくは少なくとも４０のアミノ酸、なおさ
らに好ましくは少なくとも５０のアミノ酸、なおより好ましくは少なくとも６０
のアミノ酸、そしてなおさらにより好ましくは少なくとも７５のアミノ酸を有す
るポリペプチドの一部を含む。
似性、より好ましくは少なくとも９５％の類似性、そしてなおより好ましくは少
なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％の類似性を有するポリペプチド
を含む。本発明のポリペプチドはまた、寄託されたｃＤＮＡによってコードされ
るポリペプチドまたは配列番号２および配列番号１０のポリペプチドに対して少
なくとも８０％同一、より好ましくは少なくとも９０％または９５％同一、なお
より好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるポ
リペプチドを含む、ならびに少なくとも１５のアミノ酸、より好ましくは少なく
とも３０のアミノ酸、さらにより好ましくは少なくとも４０のアミノ酸、なおさ
らに好ましくは少なくとも５０のアミノ酸、なおより好ましくは少なくとも６０
のアミノ酸、そしてなおさらにより好ましくは少なくとも７５のアミノ酸を有す
るポリペプチドの一部を含む。
【０１７３】 さらに、本発明は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離さ
れたＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを提供する：（ａ）配列番号４および配
列番号１２（すなわち、配列番号４および配列番号１２の１〜３５２位）に示さ
れる完全アミノ酸配列を有する全長Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ
酸配列；（ｂ）配列番号４および配列番号１２に示される、Ｎ末端メチオニン（
すなわち、配列番号４および配列番号１２の２〜３５２位）を除く、完全アミノ
酸配列を有する全長Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｃ）
配列番号４および配列番号１２の２９〜３５２位のアミノ酸配列を有する推定成
熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号
２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローン
によってコードされる完全アミノ酸配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１
およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローンによってコー
ドされる、Ｎ末端メチオニンを除く完全アミノ酸配列；および（ｆ）ＡＴＣＣ受
託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡク
ローンによってコードされる推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの完全
アミノ酸配列。本発明のポリペプチドはまた、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、
（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）に記載されるポリペプチドに対して少なくとも８０
％の同一、より好ましくは少なくとも９０％の同一、そしてなおより好ましくは
９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を有するポ
リペプチドを含み、ならびに上記配列に対して少なくとも９０％の類似性、およ
びより好ましくは少なくとも９５％の類似性のアミノ酸配列を有するポリペプチ
ドを含む。
れたＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを提供する：（ａ）配列番号４および配
列番号１２（すなわち、配列番号４および配列番号１２の１〜３５２位）に示さ
れる完全アミノ酸配列を有する全長Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ
酸配列；（ｂ）配列番号４および配列番号１２に示される、Ｎ末端メチオニン（
すなわち、配列番号４および配列番号１２の２〜３５２位）を除く、完全アミノ
酸配列を有する全長Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｃ）
配列番号４および配列番号１２の２９〜３５２位のアミノ酸配列を有する推定成
熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列；（ｄ）ＡＴＣＣ受託番号
２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローン
によってコードされる完全アミノ酸配列；（ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１
およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローンによってコー
ドされる、Ｎ末端メチオニンを除く完全アミノ酸配列；および（ｆ）ＡＴＣＣ受
託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡク
ローンによってコードされる推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの完全
アミノ酸配列。本発明のポリペプチドはまた、上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、
（ｄ）、（ｅ）または（ｆ）に記載されるポリペプチドに対して少なくとも８０
％の同一、より好ましくは少なくとも９０％の同一、そしてなおより好ましくは
９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を有するポ
リペプチドを含み、ならびに上記配列に対して少なくとも９０％の類似性、およ
びより好ましくは少なくとも９５％の類似性のアミノ酸配列を有するポリペプチ
ドを含む。
【０１７４】 本発明のさらなるポリペプチドは、上記の配列に対して少なくとも９０％の類
似性、より好ましくは少なくとも９５％の類似性、そしてなおより好ましくは少
なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％の類似性を有するポリペプチド
を含む。本発明のポリペプチドはまた、寄託されたｃＤＮＡによってコードされ
るポリペプチドまたは配列番号４および配列番号１２のポリペプチドに対して少
なくとも８０％同一、より好ましくは少なくとも９０％または９５％同一、なお
より好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるポ
リペプチドを含み、ならびに少なくとも１５のアミノ酸、より好ましくは少なく
とも３０のアミノ酸、さらにより好ましくは少なくとも４０のアミノ酸、なおさ
らに好ましくは少なくとも５０のアミノ酸、なおより好ましくは少なくとも６０
のアミノ酸、そしてなおさらにより好ましくは少なくとも７５のアミノ酸を有す
るポリペプチドの一部もまた含む。
似性、より好ましくは少なくとも９５％の類似性、そしてなおより好ましくは少
なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％の類似性を有するポリペプチド
を含む。本発明のポリペプチドはまた、寄託されたｃＤＮＡによってコードされ
るポリペプチドまたは配列番号４および配列番号１２のポリペプチドに対して少
なくとも８０％同一、より好ましくは少なくとも９０％または９５％同一、なお
より好ましくは少なくとも９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるポ
リペプチドを含み、ならびに少なくとも１５のアミノ酸、より好ましくは少なく
とも３０のアミノ酸、さらにより好ましくは少なくとも４０のアミノ酸、なおさ
らに好ましくは少なくとも５０のアミノ酸、なおより好ましくは少なくとも６０
のアミノ酸、そしてなおさらにより好ましくは少なくとも７５のアミノ酸を有す
るポリペプチドの一部もまた含む。
【０１７５】 本発明のさらなる実施態様は、少なくとも１つの保存的アミノ酸の置換を含み
、しかし、５０以下の保存的アミノ酸の置換、さらにより好ましくは、４０以下
の連続するアミノ酸の置換、なおより好ましくは３０以下の保存的アミノ酸の置
換、およびなおさらにより好ましくは２０以下の保存的アミノ酸置換を含むアミ
ノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの
アミノ酸配列を含む、ペプチドまたはポリペプチドに関する。もちろん、さらに
大きな優先順では、ペプチドまたはポリペプチドが、少なくとも１つであるが１
０、９、８、７、６、５、４、３、２または１以下の保存的アミノ酸の置換を含
むＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列を
含むアミノ酸を有することは、非常に好ましい。
、しかし、５０以下の保存的アミノ酸の置換、さらにより好ましくは、４０以下
の連続するアミノ酸の置換、なおより好ましくは３０以下の保存的アミノ酸の置
換、およびなおさらにより好ましくは２０以下の保存的アミノ酸置換を含むアミ
ノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの
アミノ酸配列を含む、ペプチドまたはポリペプチドに関する。もちろん、さらに
大きな優先順では、ペプチドまたはポリペプチドが、少なくとも１つであるが１
０、９、８、７、６、５、４、３、２または１以下の保存的アミノ酸の置換を含
むＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列を
含むアミノ酸を有することは、非常に好ましい。
【０１７６】 本発明のポリペプチドのフラグメントの代表的な例は、例えば、配列番号２、
配列番号４、配列番号１０、配列番号１２のアミノ酸番号約１〜２０、２１〜４
０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜１００、１０１〜１２０、１２１〜１４０
、１４１〜１６０、または１６１〜末端のコード領域までのフラグメント、また
はＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３を発現する寄託されたｃＤＮＡ
クローンのいずれかから発現されるポリペプチドまでを含む。さらに、ポリペプ
チドフラグメントは、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１
００、１１０、１２０、１３０、１４０または１５０アミノ酸の長さであり得る
。この状況において、「約」は、特定の引用される範囲（これは、極度または両
方の極度のいずれかにおいていくつかの（５、４、３、２または１）アミノ酸よ
り大きなまたは小さな範囲である）を含む。本発明はまた、配列番号２、配列番
号４、配列番号１０、または配列番号１２のアミノ酸中の、少なくとも約１０、
３０または１００の連続するアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸
配列を含む単離されたポリペプチドも含む。
配列番号４、配列番号１０、配列番号１２のアミノ酸番号約１〜２０、２１〜４
０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜１００、１０１〜１２０、１２１〜１４０
、１４１〜１６０、または１６１〜末端のコード領域までのフラグメント、また
はＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３を発現する寄託されたｃＤＮＡ
クローンのいずれかから発現されるポリペプチドまでを含む。さらに、ポリペプ
チドフラグメントは、約２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１
００、１１０、１２０、１３０、１４０または１５０アミノ酸の長さであり得る
。この状況において、「約」は、特定の引用される範囲（これは、極度または両
方の極度のいずれかにおいていくつかの（５、４、３、２または１）アミノ酸よ
り大きなまたは小さな範囲である）を含む。本発明はまた、配列番号２、配列番
号４、配列番号１０、または配列番号１２のアミノ酸中の、少なくとも約１０、
３０または１００の連続するアミノ酸の配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸
配列を含む単離されたポリペプチドも含む。
【０１７７】 ２つのポリペプチドについての「類似性％」によって、Ｂｅｓｔｆｉｔプログ
ラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａ
ｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕ
ｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５
７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１１）およ
び類似性を決定するためのデフォルト設定を使用して２つのポリペプチドのアミ
ノ酸配列を比較することによって生じる類似性スコアが意図される。Ｂｅｓｔｆ
ｉｔは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズム（Ａｄｖ
ａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２：４８２−４８
９，１９８１）を用いて、２つの配列の間の類似性について最良のセグメントを
見出す。
ラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａ
ｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕ
ｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５
７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７１１）およ
び類似性を決定するためのデフォルト設定を使用して２つのポリペプチドのアミ
ノ酸配列を比較することによって生じる類似性スコアが意図される。Ｂｅｓｔｆ
ｉｔは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎの局所相同性アルゴリズム（Ａｄｖ
ａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ２：４８２−４８
９，１９８１）を用いて、２つの配列の間の類似性について最良のセグメントを
見出す。
【０１７８】 例えば、ＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの参照ア
ミノ酸配列に少なくとも、９５％「同一の」アミノ酸配列を有するポリペプチド
により、そのポリペプチド配列が、ＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチドの参照アミノ酸配列の各１００アミノ酸毎に５つまでのアミノ酸
改変を含み得ることを除いて、そのポリペプチドのアミノ酸配列は参照配列と同
一であることが意図される。言い換えれば、参照アミノ酸配列に対して少なくと
も９５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るために、参照配列にお
いて５％までのアミノ酸残基が、欠失され得るかもしくは別のアミノ酸で置換さ
れ得るか、または参照配列における総アミノ酸残基の５％までの多数のアミノ酸
が参照配列に挿入され得る。これらの参照配列の改変は、参照アミノ酸配列のア
ミノ末端位置もしくはカルボキシ末端位置で、または参照配列の残基間で個々に
、もしくは参照配列内で１つ以上の連続した基内のいずれかに散在した、これら
の末端位置の間のどこかで起こり得る。
ミノ酸配列に少なくとも、９５％「同一の」アミノ酸配列を有するポリペプチド
により、そのポリペプチド配列が、ＤｅｎｄｒｉａｃまたはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチドの参照アミノ酸配列の各１００アミノ酸毎に５つまでのアミノ酸
改変を含み得ることを除いて、そのポリペプチドのアミノ酸配列は参照配列と同
一であることが意図される。言い換えれば、参照アミノ酸配列に対して少なくと
も９５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るために、参照配列にお
いて５％までのアミノ酸残基が、欠失され得るかもしくは別のアミノ酸で置換さ
れ得るか、または参照配列における総アミノ酸残基の５％までの多数のアミノ酸
が参照配列に挿入され得る。これらの参照配列の改変は、参照アミノ酸配列のア
ミノ末端位置もしくはカルボキシ末端位置で、または参照配列の残基間で個々に
、もしくは参照配列内で１つ以上の連続した基内のいずれかに散在した、これら
の末端位置の間のどこかで起こり得る。
【０１７９】 実際に、任意の特定のポリペプチドが、例えば、図１Ａ、図１Ｂ、および図１
Ｃ（配列番号２）ならびに配列番号１０に示されるアミノ酸配列、図２Ａおよび
図２Ｂ（配列番号４）ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列、寄託され
たｃＤＮＡクローンのＨＦＶＩＦ４０およびＨＦＣＣＱ５０によりコードされる
アミノ酸配列、またはそれらのフラグメントに対して、少なくとも９０％、９５
％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるかどうかは、Ｂｅｓｔｆ
ｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐ
ａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７
１１）のような公知のコンピュータープログラムを使用して従来通りに決定され
得る。特定の配列が、例えば、本発明の参照配列に９５％同一であるかどうかを
決定するために、Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列アラインメントプログラ
ムを使用する場合、当然のことながら、同一性のパーセンテージが参照アミノ酸
配列の全長にわたって計算され、そして参照配列内のアミノ酸残基の総数の５％
までの相同性におけるギャップが許容されるようにパラメーターが設定される。
Ｃ（配列番号２）ならびに配列番号１０に示されるアミノ酸配列、図２Ａおよび
図２Ｂ（配列番号４）ならびに配列番号１２に示されるアミノ酸配列、寄託され
たｃＤＮＡクローンのＨＦＶＩＦ４０およびＨＦＣＣＱ５０によりコードされる
アミノ酸配列、またはそれらのフラグメントに対して、少なくとも９０％、９５
％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一であるかどうかは、Ｂｅｓｔｆ
ｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ
Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐ
ａｒｋ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ ５３７
１１）のような公知のコンピュータープログラムを使用して従来通りに決定され
得る。特定の配列が、例えば、本発明の参照配列に９５％同一であるかどうかを
決定するために、Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列アラインメントプログラ
ムを使用する場合、当然のことながら、同一性のパーセンテージが参照アミノ酸
配列の全長にわたって計算され、そして参照配列内のアミノ酸残基の総数の５％
までの相同性におけるギャップが許容されるようにパラメーターが設定される。
【０１８０】 特定の実施態様において、参照（問い合わせ）配列（本発明の配列）および対
象配列（全配列アライメント（ｇｌｏｂａｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍ
ｅｎｔ）ともいう）との間の同一性は、Ｂｒｕｔｌａｇらのアルゴリズム（Ｃｏ
ｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））に基づくＦＡ
ＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定される。ＦＡＳＴＤＢアミノ
酸アライメントで使用される好ましいパラメーターは：マトリックス＝ＰＡＭ
０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、ミスマッチペナルティ＝１、ジョイニングペナルティ
＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、カット
オフスコア＝１、ウィンドウサイズ＝配列長、Ｇａｐペナルティ＝５、Ｇａｐサ
イズペナルティ＝０．０５、ウィンドウサイズ＝５００または、対象のアミノ酸
配列の長さ（どちらかより短い方）である。この実施態様に従って、対象配列が
、内部欠失ではなくＮまたはＣ末端欠失のため、問い合わせ配列より短い場合、
手動補正は、ＦＡＳＴＤＢプログラムが全パーセント同一性を算出する際、対象
配列のＮ末端およびＣ末端切断の原因とはならないという事実を考慮した結果に
なる。Ｎ末端およびＣ末端での切断される対象配列について、問い合わせ配列に
比べ、同一性％は、対象配列のＮ末端およびＣ末端である問い合わせ配列の残基
（対応する対象残基と一致／整列しない）の数を、問い合わせ配列の全塩基の割
合として算出することによって補正される。残基が一致／整列するかどうかの決
定は、ＦＡＳＴＤＢ配列アライメントの結果によって決定される。次いでこの百
分率を、同一性％から引き、特定のパラメーターを使用して上記ＦＡＳＴＤＢプ
ログラムによって算出し、最終同一性％スコアが求まる。この最終同一性％スコ
アは、何がこの実施態様の目的に使用されるものかである。対象配列のＮ末端お
よびＣ末端に対する残基（これは、問い合わせ配列と一致／整列されない）のみ
、同一性％スコアの手動調節の目的とみなす。すなわち、問い合わせ残基のみが
対象配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基の外側に位置する。例えば、９０ア
ミノ酸残基対象配列は、同一性％を決定する１００残基の問い合わせ配列と整列
される。従って、対象配列のＮ末端で欠失が生じると、ＦＡＳＴＤＢアライメン
トは、Ｎ末端で最初の１０残基の一致／整列を示さない。１０の対でない残基は
、１０％の配列（一致しないＮ末端およびＣ末端の残基の数／問い合わせ配列中
の残基の総数）を表わす。そのため、ＦＡＳＴＤＢプログラムより算出される同
一性％スコアから１０％を引き算する。残っている９０残基が完全に一致する場
合、最終同一性％は、９０％になる。別の例では、９０残基対象配列は、１００
残基問い合わせ配列と比較される。欠失が内部欠失である場合、問い合わせ配列
と一致／整列しない対象配列のＮ末端またはＣ末端で残基は存在しない。この場
合、ＦＡＳＴＤＢによって算出される同一性％は、手動で補正されない。もう一
度、対象配列のＮ末端およびＣ末端の外側に位置する残基（問い合わせ配列と一
致／整列しない）のみが、ＦＡＳＴＤＢアライメントに提示されるように、手動
で補正される。他の手動補正は、この実施態様の目的のため行われない。
象配列（全配列アライメント（ｇｌｏｂａｌ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍ
ｅｎｔ）ともいう）との間の同一性は、Ｂｒｕｔｌａｇらのアルゴリズム（Ｃｏ
ｍｐ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．６：２３７−２４５（１９９０））に基づくＦＡ
ＳＴＤＢコンピュータープログラムを使用して決定される。ＦＡＳＴＤＢアミノ
酸アライメントで使用される好ましいパラメーターは：マトリックス＝ＰＡＭ
０、ｋ−ｔｕｐｌｅ＝２、ミスマッチペナルティ＝１、ジョイニングペナルティ
＝２０、Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ Ｇｒｏｕｐ Ｌｅｎｇｔｈ＝０、カット
オフスコア＝１、ウィンドウサイズ＝配列長、Ｇａｐペナルティ＝５、Ｇａｐサ
イズペナルティ＝０．０５、ウィンドウサイズ＝５００または、対象のアミノ酸
配列の長さ（どちらかより短い方）である。この実施態様に従って、対象配列が
、内部欠失ではなくＮまたはＣ末端欠失のため、問い合わせ配列より短い場合、
手動補正は、ＦＡＳＴＤＢプログラムが全パーセント同一性を算出する際、対象
配列のＮ末端およびＣ末端切断の原因とはならないという事実を考慮した結果に
なる。Ｎ末端およびＣ末端での切断される対象配列について、問い合わせ配列に
比べ、同一性％は、対象配列のＮ末端およびＣ末端である問い合わせ配列の残基
（対応する対象残基と一致／整列しない）の数を、問い合わせ配列の全塩基の割
合として算出することによって補正される。残基が一致／整列するかどうかの決
定は、ＦＡＳＴＤＢ配列アライメントの結果によって決定される。次いでこの百
分率を、同一性％から引き、特定のパラメーターを使用して上記ＦＡＳＴＤＢプ
ログラムによって算出し、最終同一性％スコアが求まる。この最終同一性％スコ
アは、何がこの実施態様の目的に使用されるものかである。対象配列のＮ末端お
よびＣ末端に対する残基（これは、問い合わせ配列と一致／整列されない）のみ
、同一性％スコアの手動調節の目的とみなす。すなわち、問い合わせ残基のみが
対象配列の最も遠いＮ末端およびＣ末端残基の外側に位置する。例えば、９０ア
ミノ酸残基対象配列は、同一性％を決定する１００残基の問い合わせ配列と整列
される。従って、対象配列のＮ末端で欠失が生じると、ＦＡＳＴＤＢアライメン
トは、Ｎ末端で最初の１０残基の一致／整列を示さない。１０の対でない残基は
、１０％の配列（一致しないＮ末端およびＣ末端の残基の数／問い合わせ配列中
の残基の総数）を表わす。そのため、ＦＡＳＴＤＢプログラムより算出される同
一性％スコアから１０％を引き算する。残っている９０残基が完全に一致する場
合、最終同一性％は、９０％になる。別の例では、９０残基対象配列は、１００
残基問い合わせ配列と比較される。欠失が内部欠失である場合、問い合わせ配列
と一致／整列しない対象配列のＮ末端またはＣ末端で残基は存在しない。この場
合、ＦＡＳＴＤＢによって算出される同一性％は、手動で補正されない。もう一
度、対象配列のＮ末端およびＣ末端の外側に位置する残基（問い合わせ配列と一
致／整列しない）のみが、ＦＡＳＴＤＢアライメントに提示されるように、手動
で補正される。他の手動補正は、この実施態様の目的のため行われない。
【０１８１】 本発明のポリペプチドは、当業者に周知の方法を用いるＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル
、または分子ふるいゲル濾過カラム上で分子量マーカーとして使用され得る。
、または分子ふるいゲル濾過カラム上で分子量マーカーとして使用され得る。
【０１８２】 以下に詳細に示されるように、本発明のポリペプチドを用いて、ポリクローナ
ル抗体およびモノクローナル抗体もまた惹起し得る。これらの抗体は、以下に記
載のようにＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド
発現を検出するためのアッセイに有用であり、あるいはＤｅｎｄｒｉａｃおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド機能を増強または阻害し得るアゴニ
ストおよびアンタゴニストとして有用である。さらにこのようなポリペプチドは
酵母ツーハイブリッドシステムを使用して、本発明による候補アゴニストおよび
アンタゴニストでもあるＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチド結合タンパク質を「捕獲」し得る。酵母ツーハイブリッドシステム
は、ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ、Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２４５−２４６（１
９８９）に記載される。
ル抗体およびモノクローナル抗体もまた惹起し得る。これらの抗体は、以下に記
載のようにＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド
発現を検出するためのアッセイに有用であり、あるいはＤｅｎｄｒｉａｃおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド機能を増強または阻害し得るアゴニ
ストおよびアンタゴニストとして有用である。さらにこのようなポリペプチドは
酵母ツーハイブリッドシステムを使用して、本発明による候補アゴニストおよび
アンタゴニストでもあるＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチド結合タンパク質を「捕獲」し得る。酵母ツーハイブリッドシステム
は、ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ、Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２４５−２４６（１
９８９）に記載される。
【０１８３】 （エピトープ保有部分） 別の局面において、本発明は、本発明のポリペプチドのエピトープ保有部分を
含むペプチドまたはポリペプチドを提供する。このポリペプチド部分のエピトー
プは、本発明のポリペプチドの免疫原性または抗原性エピトープである。「免疫
原性エピトープ」は、完全または全体のポリペプチドが免疫原である場合、抗体
応答を誘発するポリペプチドの一部として定義される。一方では、抗体が結合し
得るタンパク質分子の領域は、「抗原性エピトープ」として定義される。タンパ
ク質の免疫原性エピトープの数は、一般には、抗原性エピトープの数よりも少な
い。例えば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８１：３９９８−４００２（１９８３）を参照のこと。
含むペプチドまたはポリペプチドを提供する。このポリペプチド部分のエピトー
プは、本発明のポリペプチドの免疫原性または抗原性エピトープである。「免疫
原性エピトープ」は、完全または全体のポリペプチドが免疫原である場合、抗体
応答を誘発するポリペプチドの一部として定義される。一方では、抗体が結合し
得るタンパク質分子の領域は、「抗原性エピトープ」として定義される。タンパ
ク質の免疫原性エピトープの数は、一般には、抗原性エピトープの数よりも少な
い。例えば、Ｇｅｙｓｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８１：３９９８−４００２（１９８３）を参照のこと。
【０１８４】 抗原性エピトープを保有する（すなわち、抗体が結合し得るポリペプチド分子
の領域を含む）ペプチドまたはポリペプチドの選択に関して、ポリペプチド配列
の一部を模倣する比較的短い合成ペプチドが、部分的に模倣されたポリペプチド
と反応する抗血清を慣用的に誘発し得ることが当該分野で周知である（例えば、
Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ，Ｊ．Ｇ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９：６６０−６６６（
１９８３）を参照のこと）。タンパク質反応性血清を誘発し得るペプチドは、ポ
リペプチドの一次配列で頻繁に示され、一連の単純な化学的法則により特徴付け
られ得、そしてインタクトなポリペプチドの免疫優性領域（すなわち、免疫原性
エピトープ）にも、アミノ末端またはカルボキシル末端にも、制限されない。そ
れゆえ本発明の抗原性エピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、本発明の
ポリペプチドに特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）を惹起する
ために有用である（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７−７７８
（１９８４）を参照のこと）。
の領域を含む）ペプチドまたはポリペプチドの選択に関して、ポリペプチド配列
の一部を模倣する比較的短い合成ペプチドが、部分的に模倣されたポリペプチド
と反応する抗血清を慣用的に誘発し得ることが当該分野で周知である（例えば、
Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅ，Ｊ．Ｇ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１９：６６０−６６６（
１９８３）を参照のこと）。タンパク質反応性血清を誘発し得るペプチドは、ポ
リペプチドの一次配列で頻繁に示され、一連の単純な化学的法則により特徴付け
られ得、そしてインタクトなポリペプチドの免疫優性領域（すなわち、免疫原性
エピトープ）にも、アミノ末端またはカルボキシル末端にも、制限されない。そ
れゆえ本発明の抗原性エピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、本発明の
ポリペプチドに特異的に結合する抗体（モノクローナル抗体を含む）を惹起する
ために有用である（例えば、Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｅｌｌ ３７：７６７−７７８
（１９８４）を参照のこと）。
【０１８５】 本発明の抗原性エピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、本発明のポリ
ペプチドのアミノ酸配列内に含まれる、好ましくは少なくとも７個、より好まし
くは少なくとも９個、そして最も好ましくは約１５〜約３０個の間のアミノ酸の
配列を含む。Ｄｅｎｄｒｉａｃ特異的抗体を産生するために使用され得る抗原性
ポリペプチドまたはペプチドの例は以下を含むが、これらに限定されない：配列
番号２および配列番号１０のほぼＬｅｕ−３０〜ほぼＨｉｓ−３８までのアミノ
酸残基を含むポリペプチド；配列番号２および配列番号１０のほぼＨｉｓ−５０
〜ほぼＡｌａ−５９までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号２および
配列番号１０のほぼＴｒｐ−６４〜ほぼＴｒｐ−７０までのアミノ酸残基を含む
ポリペプチド；配列番号２および配列番号１０のほぼＭｅｔ−２０８〜ほぼＶａ
ｌ−２１３までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号２および配列番号
１０のほぼＬｙｓ−２２４〜ほぼＡｓｐ−２３０までのアミノ酸残基を含むポリ
ペプチド；および配列番号２および配列番号１０のほぼＩｌｅ−２４６〜ほぼＬ
ｅｕ−２５２までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；および配列番号２および
配列番号１０のほぼＧｌｙ−２７３〜ほぼＧｌｕ−２７８までのアミノ酸残基を
含むポリペプチド。図４および表Ｉに示されるように、上記のＪａｍｅｓｏｎ−
Ｗｏｌｆ抗原性指数の分析により、これらのポリペプチドフラグメントがＤｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチドの抗原エピトープを保有することを決定した。
ペプチドのアミノ酸配列内に含まれる、好ましくは少なくとも７個、より好まし
くは少なくとも９個、そして最も好ましくは約１５〜約３０個の間のアミノ酸の
配列を含む。Ｄｅｎｄｒｉａｃ特異的抗体を産生するために使用され得る抗原性
ポリペプチドまたはペプチドの例は以下を含むが、これらに限定されない：配列
番号２および配列番号１０のほぼＬｅｕ−３０〜ほぼＨｉｓ−３８までのアミノ
酸残基を含むポリペプチド；配列番号２および配列番号１０のほぼＨｉｓ−５０
〜ほぼＡｌａ−５９までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号２および
配列番号１０のほぼＴｒｐ−６４〜ほぼＴｒｐ−７０までのアミノ酸残基を含む
ポリペプチド；配列番号２および配列番号１０のほぼＭｅｔ−２０８〜ほぼＶａ
ｌ−２１３までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号２および配列番号
１０のほぼＬｙｓ−２２４〜ほぼＡｓｐ−２３０までのアミノ酸残基を含むポリ
ペプチド；および配列番号２および配列番号１０のほぼＩｌｅ−２４６〜ほぼＬ
ｅｕ−２５２までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；および配列番号２および
配列番号１０のほぼＧｌｙ−２７３〜ほぼＧｌｕ−２７８までのアミノ酸残基を
含むポリペプチド。図４および表Ｉに示されるように、上記のＪａｍｅｓｏｎ−
Ｗｏｌｆ抗原性指数の分析により、これらのポリペプチドフラグメントがＤｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチドの抗原エピトープを保有することを決定した。
【０１８６】 本発明の抗原性エピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、本発明のポリ
ペプチドのアミノ酸配列内に含まれる、好ましくは少なくとも７個、より好まし
くは少なくとも９個、そして最も好ましくは約１５〜約３０個の間のアミノ酸の
配列を含む。Ｂｒａｉｎｉａｃ−３特異的抗体を産生するために使用され得る抗
原性ポリペプチドまたはペプチドの例は以下を含むが、これらに限定されない：
配列番号４および配列番号１２のほぼＬｙｓ−１〜ほぼＳｅｒ−１２までのアミ
ノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号４および配列番号１２のほぼＰｒｏ−１
６〜ほぼＰｒｏ−２５までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号４およ
び配列番号１２のほぼＬｅｕ−３６〜ほぼＡｒｇ−４１までのアミノ酸残基を含
むポリペプチド；配列番号４および配列番号１２のほぼＰｒｏ−５８〜ほぼＡｓ
ｐ−６４までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号４および配列番号１
２のほぼＳｅｒ−７３〜ほぼＩｌｅ−８４までのアミノ酸残基を含むポリペプチ
ド；および配列番号４および配列番号１２のほぼＴｈｒ−８７〜ほぼＰｒｏ−９
７までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；および配列番号４および配列番号１
２のほぼＬｅｕ−１６１〜ほぼＶａｌ−１６７までのアミノ酸残基を含むポリペ
プチド；配列番号４および配列番号１２のほぼＡｓｐ−１７９〜ほぼＧｌｎ−１
８５；配列番号４および配列番号１２のほぼＬｅｕ−１９７〜ほぼＬｙｓ−２０
３；配列番号４および配列番号１２のほぼＧｌｙ−２７５〜ほぼＡｓｐ−２８４
までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；および配列番号４および配列番号１２
のほぼＡｒｇ−２９６〜ほぼＧｌｕ−３０１までのアミノ酸残基を含むポリペプ
チド。図５および表ＩＩに示されるように、上記のＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗
原性指数の分析により、これらのポリペプチドフラグメントがＢｒａｉｎｉａｃ
−３ポリペプチドの抗原エピトープを保有することを決定した。
ペプチドのアミノ酸配列内に含まれる、好ましくは少なくとも７個、より好まし
くは少なくとも９個、そして最も好ましくは約１５〜約３０個の間のアミノ酸の
配列を含む。Ｂｒａｉｎｉａｃ−３特異的抗体を産生するために使用され得る抗
原性ポリペプチドまたはペプチドの例は以下を含むが、これらに限定されない：
配列番号４および配列番号１２のほぼＬｙｓ−１〜ほぼＳｅｒ−１２までのアミ
ノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号４および配列番号１２のほぼＰｒｏ−１
６〜ほぼＰｒｏ−２５までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号４およ
び配列番号１２のほぼＬｅｕ−３６〜ほぼＡｒｇ−４１までのアミノ酸残基を含
むポリペプチド；配列番号４および配列番号１２のほぼＰｒｏ−５８〜ほぼＡｓ
ｐ−６４までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；配列番号４および配列番号１
２のほぼＳｅｒ−７３〜ほぼＩｌｅ−８４までのアミノ酸残基を含むポリペプチ
ド；および配列番号４および配列番号１２のほぼＴｈｒ−８７〜ほぼＰｒｏ−９
７までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；および配列番号４および配列番号１
２のほぼＬｅｕ−１６１〜ほぼＶａｌ−１６７までのアミノ酸残基を含むポリペ
プチド；配列番号４および配列番号１２のほぼＡｓｐ−１７９〜ほぼＧｌｎ−１
８５；配列番号４および配列番号１２のほぼＬｅｕ−１９７〜ほぼＬｙｓ−２０
３；配列番号４および配列番号１２のほぼＧｌｙ−２７５〜ほぼＡｓｐ−２８４
までのアミノ酸残基を含むポリペプチド；および配列番号４および配列番号１２
のほぼＡｒｇ−２９６〜ほぼＧｌｕ−３０１までのアミノ酸残基を含むポリペプ
チド。図５および表ＩＩに示されるように、上記のＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ抗
原性指数の分析により、これらのポリペプチドフラグメントがＢｒａｉｎｉａｃ
−３ポリペプチドの抗原エピトープを保有することを決定した。
【０１８７】 本発明のエピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、任意の従来の手段に
より産生され得る（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５（１９８５）；およ
びＨｏｕｇｈｔｅｎら（１９８６）の米国特許第４，６３１，２１１号を参照の
こと）。
より産生され得る（例えば、Ｈｏｕｇｈｔｅｎ，Ｒ．Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：５１３１−５１３５（１９８５）；およ
びＨｏｕｇｈｔｅｎら（１９８６）の米国特許第４，６３１，２１１号を参照の
こと）。
【０１８８】 本発明のエピトープ保有ペプチドおよびポリペプチドは、抗体を誘導するため
に当該分野で周知の方法に従って使用される（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら（
前出）；Ｗｉｌｓｏｎら（前出）；Ｃｈｏｗ，Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅ，Ｆ．Ｊ
．ら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６６：２３４７−２３５４（１９８５）を参照
のこと）。本発明の免疫原性のエピトープ保有ペプチド（すなわち、全てのタン
パク質が免疫源である場合に、抗体応答を誘発するタンパク質の部分）は、当該
分野で公知の方法に従って同定される（例えばＧｅｙｓｅｎら（前出）を参照の
こと）。さらになお、Ｇｅｙｓｅｎの米国特許第５，１９４，３９２号は、目的
の抗体の特定のパラトープ（抗原結合部位）に対して相補的なエピトープ（すな
わち「ミモトープ」）の位相幾何学的等価物であるモノマー（アミノ酸または他
の化合物）の配列を検出または決定する一般的な方法を記載する。より一般的に
は、Ｇｅｙｓｅｎの米国特許第４，４３３，０９２号は、目的の特定のレセプタ
ーのリガンド結合部位に相補的であるリガンドの位相幾何学的等価物であるモノ
マーの配列を検出または決定する方法を記載する。同様に、Ｐｅｒａｌｋｙｌａ
ｔｅｄ Ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅ Ｍｉｘｔｕｒｅｓに関するＨｏｕｇｈｔｅ
ｎらの米国特許第５，４８０，９７１号は、直鎖Ｃ１-Ｃ７-アルキル過アルキル
化オリゴペプチドならびにこのようなペプチドのセットおよびライブラリー、な
らびに目的のアクセプター分子に、優先的に結合する過アルキル化オリゴペプチ
ドの配列を決定するために、このようなオリゴペプチドのセットおよびライブラ
リーを使用する方法を開示する。従って、本発明のエピトープ保有ペプチドの非
ペプチドアナログはまた、これらの方法により慣用的に作製され得る。
に当該分野で周知の方法に従って使用される（例えば、Ｓｕｔｃｌｉｆｆｅら（
前出）；Ｗｉｌｓｏｎら（前出）；Ｃｈｏｗ，Ｍ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：９１０−９１４；およびＢｉｔｔｌｅ，Ｆ．Ｊ
．ら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６６：２３４７−２３５４（１９８５）を参照
のこと）。本発明の免疫原性のエピトープ保有ペプチド（すなわち、全てのタン
パク質が免疫源である場合に、抗体応答を誘発するタンパク質の部分）は、当該
分野で公知の方法に従って同定される（例えばＧｅｙｓｅｎら（前出）を参照の
こと）。さらになお、Ｇｅｙｓｅｎの米国特許第５，１９４，３９２号は、目的
の抗体の特定のパラトープ（抗原結合部位）に対して相補的なエピトープ（すな
わち「ミモトープ」）の位相幾何学的等価物であるモノマー（アミノ酸または他
の化合物）の配列を検出または決定する一般的な方法を記載する。より一般的に
は、Ｇｅｙｓｅｎの米国特許第４，４３３，０９２号は、目的の特定のレセプタ
ーのリガンド結合部位に相補的であるリガンドの位相幾何学的等価物であるモノ
マーの配列を検出または決定する方法を記載する。同様に、Ｐｅｒａｌｋｙｌａ
ｔｅｄ Ｏｌｉｇｏｐｅｐｔｉｄｅ Ｍｉｘｔｕｒｅｓに関するＨｏｕｇｈｔｅ
ｎらの米国特許第５，４８０，９７１号は、直鎖Ｃ１-Ｃ７-アルキル過アルキル
化オリゴペプチドならびにこのようなペプチドのセットおよびライブラリー、な
らびに目的のアクセプター分子に、優先的に結合する過アルキル化オリゴペプチ
ドの配列を決定するために、このようなオリゴペプチドのセットおよびライブラ
リーを使用する方法を開示する。従って、本発明のエピトープ保有ペプチドの非
ペプチドアナログはまた、これらの方法により慣用的に作製され得る。
【０１８９】 （融合タンパク質） 当業者が理解するように、本発明のＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドならびにその上記のエピトープ保有フラグメントは、
免疫グロブリン（ＩｇＧ）の定常ドメインの部分と結合し得、キメラポリペプチ
ドを生じる。これらの融合タンパク質は、精製を容易にし、そしてインビボで半
減期の増加を示す。これは、例えば、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つの
ドメインおよび哺乳動物免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のド
メインからなるキメラタンパク質について示されている（ＥＰ Ａ ３９４，８
２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４−８６（１９８８
））。ＩｇＧ部分によるジスルフィド結合二量体構造を有する融合タンパク質は
また、単量体Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ドまたはポリペプチドフラグメント単独よりも、他の分子の結合および中和にお
いてより効率的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．２７０：３９５８−３９６４（１９９５））。
ｎｉａｃ−３ポリペプチドならびにその上記のエピトープ保有フラグメントは、
免疫グロブリン（ＩｇＧ）の定常ドメインの部分と結合し得、キメラポリペプチ
ドを生じる。これらの融合タンパク質は、精製を容易にし、そしてインビボで半
減期の増加を示す。これは、例えば、ヒトＣＤ４−ポリペプチドの最初の２つの
ドメインおよび哺乳動物免疫グロブリンの重鎖または軽鎖の定常領域の種々のド
メインからなるキメラタンパク質について示されている（ＥＰ Ａ ３９４，８
２７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３３１：８４−８６（１９８８
））。ＩｇＧ部分によるジスルフィド結合二量体構造を有する融合タンパク質は
また、単量体Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ドまたはポリペプチドフラグメント単独よりも、他の分子の結合および中和にお
いてより効率的であり得る（Ｆｏｕｎｔｏｕｌａｋｉｓら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．２７０：３９５８−３９６４（１９９５））。
【０１９０】 （抗体） 本発明で使用されるＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチド特異的抗体は、インタクトなＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはその抗原性ポリペプチドフラグメントに対し
て惹起され得、これはキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）を用いて、あ
るいは十分に長い場合では（少なくともほぼ２５アミノ酸）キャリアを用いずに
動物の系（例えば、ウサギまたはマウス）に提示され得る。
リペプチド特異的抗体は、インタクトなＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはその抗原性ポリペプチドフラグメントに対し
て惹起され得、これはキャリアタンパク質（例えば、アルブミン）を用いて、あ
るいは十分に長い場合では（少なくともほぼ２５アミノ酸）キャリアを用いずに
動物の系（例えば、ウサギまたはマウス）に提示され得る。
【０１９１】 本明細書で使用される用語「抗体」（Ａｂ）または「モノクローナル抗体」（
Ｍａｂ）は、インタクトな分子ならびにＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチドに対し特異的に結合し得る抗体フラグメント（例え
ば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント）を含むことを意味する。Ｆａｂ
およびＦ（ａｂ’）２フラグメントはインタクトな抗体のＦｃフラグメントを欠
落し、循環からより迅速に除去され、そしてインタクトな抗体の非特異的な組織
へのより少ない結合を有し得る（Ｗａｈｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３
１６−３２５（１９８３））。従って、これらのフラグメントは好ましい。
Ｍａｂ）は、インタクトな分子ならびにＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチドに対し特異的に結合し得る抗体フラグメント（例え
ば、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメント）を含むことを意味する。Ｆａｂ
およびＦ（ａｂ’）２フラグメントはインタクトな抗体のＦｃフラグメントを欠
落し、循環からより迅速に除去され、そしてインタクトな抗体の非特異的な組織
へのより少ない結合を有し得る（Ｗａｈｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．２４：３
１６−３２５（１９８３））。従って、これらのフラグメントは好ましい。
【０１９２】 本発明の抗体は、種々の方法のいずれかにより調製され得る。例えば、Ｄｅｎ
ｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはその抗原性
フラグメントを発現する細胞は、ポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導す
るために動物に対して投与され得る。好ましい方法では、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよ
び／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの調製は、それを天然の混入物を
実質的に皆無にするために調製および精製される。次いで、このような調製物は
、より特異的な活性のポリクローナル抗血清を産生するために動物に導入される
。
ｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはその抗原性
フラグメントを発現する細胞は、ポリクローナル抗体を含む血清の産生を誘導す
るために動物に対して投与され得る。好ましい方法では、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよ
び／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの調製は、それを天然の混入物を
実質的に皆無にするために調製および精製される。次いで、このような調製物は
、より特異的な活性のポリクローナル抗血清を産生するために動物に導入される
。
【０１９３】 最も好ましい方法においては、本発明の抗体はモノクローナル抗体（またはそ
れらのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド結合
フラグメント）である。このようなモノクローナル抗体はハイブリドーマ技術（
Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）；Ｋｏｈｌｅｒら
、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１（１９７６）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅ
ｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２９２（１９７６）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら
：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙ
ｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８１）５６３−６８１
頁中）を使用して調製され得る。一般には、このような手順はＤｅｎｄｒｉａｃ
および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド抗原、またはより好ましくは
Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド発現細胞で
の動物（好ましくはマウス）の免疫を含む。適切な細胞は、抗Ｄｅｎｄｒｉａｃ
および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド抗体に結合するそれらの能力
により認識され得る。このような細胞は任意の適切な組織培養培地で培養され得
るが、１０％のウシ胎児血清（約５６℃で不活化）を補充し、ならびに約１０μ
ｇ／ｌの非必須アミノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００
μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変Ｅａｇｌｅ培地中で
細胞を培養することが好ましい。このようなマウスの脾細胞は抽出され、そして
適切なミエローマ細胞株と融合される。任意の適切なミエローマ細胞株が本発明
に従って使用され得る。しかし、ミエローマ細胞の親細胞株（ＳＰ２Ｏ）(アメ リカンタイプカルチャーコレクション（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ
）より入手可能）を使用することが好ましい。融合後、得られたハイブリドーマ
細胞はＨＡＴ培地中で選択的に維持され、次いで、Ｗａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏ
ｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２５−２３２（１９８１））により記載される
ような限界希釈によりクローン化される。次いで、このような選択を通じて得ら
れたハイブリドーマ細胞は、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ
−３ポリペプチド抗原に結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するためにア
ッセイされる。
れらのＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド結合
フラグメント）である。このようなモノクローナル抗体はハイブリドーマ技術（
Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５（１９７５）；Ｋｏｈｌｅｒら
、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１（１９７６）；Ｋｏｈｌｅｒら、Ｅ
ｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：２９２（１９７６）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら
：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙ
ｂｒｉｄｏｍａｓ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，（１９８１）５６３−６８１
頁中）を使用して調製され得る。一般には、このような手順はＤｅｎｄｒｉａｃ
および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド抗原、またはより好ましくは
Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド発現細胞で
の動物（好ましくはマウス）の免疫を含む。適切な細胞は、抗Ｄｅｎｄｒｉａｃ
および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド抗体に結合するそれらの能力
により認識され得る。このような細胞は任意の適切な組織培養培地で培養され得
るが、１０％のウシ胎児血清（約５６℃で不活化）を補充し、ならびに約１０μ
ｇ／ｌの非必須アミノ酸、約１，０００Ｕ／ｍｌのペニシリン、および約１００
μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＥａｒｌｅ改変Ｅａｇｌｅ培地中で
細胞を培養することが好ましい。このようなマウスの脾細胞は抽出され、そして
適切なミエローマ細胞株と融合される。任意の適切なミエローマ細胞株が本発明
に従って使用され得る。しかし、ミエローマ細胞の親細胞株（ＳＰ２Ｏ）(アメ リカンタイプカルチャーコレクション（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ
）より入手可能）を使用することが好ましい。融合後、得られたハイブリドーマ
細胞はＨＡＴ培地中で選択的に維持され、次いで、Ｗａｎｄｓら（Ｇａｓｔｒｏ
ｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ ８０：２２５−２３２（１９８１））により記載される
ような限界希釈によりクローン化される。次いで、このような選択を通じて得ら
れたハイブリドーマ細胞は、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ
−３ポリペプチド抗原に結合し得る抗体を分泌するクローンを同定するためにア
ッセイされる。
【０１９４】 あるいは、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ド抗原に結合し得るさらなる抗体は、抗イディオタイプの抗体の使用を通じて２
段階の手順で産生され得る。このような方法は、抗体がそれ自体の抗原であると
いう事実を使用し、しかもそれゆえに、第２の抗体に結合する抗体を入手するこ
とが可能である。この方法に従って、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチド特異的抗体は、動物（好ましくはマウス）を免疫する
ために使用される。次いで、このような動物の脾細胞は、ハイブリドーマ細胞を
産生するために使用され、そしてハイブリドーマ細胞は、そのＤｅｎｄｒｉａｃ
および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド特異的抗体に結合する能力が
、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド抗原によ
りブロックされ得る抗体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングさ
れる。このような抗体は、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチド特異的抗体に対する抗イディオタイプ抗体を含み、そしてさらな
るＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド特異的抗
体の形成を誘導するための、動物の免疫に使用され得る。
ド抗原に結合し得るさらなる抗体は、抗イディオタイプの抗体の使用を通じて２
段階の手順で産生され得る。このような方法は、抗体がそれ自体の抗原であると
いう事実を使用し、しかもそれゆえに、第２の抗体に結合する抗体を入手するこ
とが可能である。この方法に従って、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチド特異的抗体は、動物（好ましくはマウス）を免疫する
ために使用される。次いで、このような動物の脾細胞は、ハイブリドーマ細胞を
産生するために使用され、そしてハイブリドーマ細胞は、そのＤｅｎｄｒｉａｃ
および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド特異的抗体に結合する能力が
、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド抗原によ
りブロックされ得る抗体を産生するクローンを同定するためにスクリーニングさ
れる。このような抗体は、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチド特異的抗体に対する抗イディオタイプ抗体を含み、そしてさらな
るＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド特異的抗
体の形成を誘導するための、動物の免疫に使用され得る。
【０１９５】 本発明のＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２ならびに他の抗体のフラグメントは、本
明細書で開示される方法に従って使用され得ることが理解される。代表的には、
このようなフラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生するため）ま
たはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生するため）のような酵素を使
用して、タンパク質分解切断により産生される。あるいは、Ｄｅｎｄｒｉａｃお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド結合フラグメントは、組換えＤ
ＮＡ技術の適用によって、または合成化学によって産生され得る。
明細書で開示される方法に従って使用され得ることが理解される。代表的には、
このようなフラグメントは、パパイン（Ｆａｂフラグメントを産生するため）ま
たはペプシン（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生するため）のような酵素を使
用して、タンパク質分解切断により産生される。あるいは、Ｄｅｎｄｒｉａｃお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド結合フラグメントは、組換えＤ
ＮＡ技術の適用によって、または合成化学によって産生され得る。
【０１９６】 ヒトにおける、インビボでの抗Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉ
ａｃ−３の使用については、「ヒト化」キメラモノクローナル抗体を使用するこ
とが好ましくあり得る。このような抗体は、上述されたモノクローナル抗体を産
生するハイブリドーマ細胞に由来する遺伝的構築物を使用して産生され得る。キ
メラ抗体を産生するための方法は、当該分野で公知である（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉ
ｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６
，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、ＥＰ １７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら
、ＥＰ １７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ ８６０１５３３；Ｒｏｂ
ｉｎｓｏｎら、ＷＯ ８７０２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ
３１２：６４３（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：
２６８（１９８５））。
ａｃ−３の使用については、「ヒト化」キメラモノクローナル抗体を使用するこ
とが好ましくあり得る。このような抗体は、上述されたモノクローナル抗体を産
生するハイブリドーマ細胞に由来する遺伝的構築物を使用して産生され得る。キ
メラ抗体を産生するための方法は、当該分野で公知である（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２（１９８５）；Ｏｉら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｉ
ｑｕｅｓ ４：２１４（１９８６）；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６
，５６７号；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、ＥＰ １７１４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら
、ＥＰ １７３４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、ＷＯ ８６０１５３３；Ｒｏｂ
ｉｎｓｏｎら、ＷＯ ８７０２６７１；Ｂｏｕｌｉａｎｎｅら、Ｎａｔｕｒｅ
３１２：６４３（１９８４）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４：
２６８（１９８５））。
【０１９７】 （免疫系および神経系関連障害） （診断法） 本発明者らは、Ｄｅｎｄｒｉａｃが、樹状細胞だけではなく、ＨＧＳ ＥＳＴ
データベースのＢＬＡＳＴ分析を用いて、ＮＴＥＲＡ２細胞、成人肺組織、唾液
腺、卵巣、Ｃａｃｏ−２結腸腺癌細胞株、平滑筋、小脳、８週齢の全ヒト胚、血
管周囲細胞腫（ｈｅｍａｇｉｏｐｅｒｉｃｙｔｏｍａ）、扁桃、黒質、および全
脳においても発現していることを発見した。さらに、本発明者らは、Ｂｒａｉｎ
ｉａｃ−３が、胎児脳においてだけではなく、てんかん前頭皮質および１２週齢
の初期のヒトにおいても発現されていることを発見した。多くの免疫系および／
または神経系関連および／または発達障害のための、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の発現レベルの実質的な変化（増加または減
少）を、「標準的な」Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺
伝子の発現レベル（すなわち、免疫系および／または神経系の障害を有さない個
体由来の免疫系および／または神経系の組織または体液におけるＤｅｎｄｒｉａ
ｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３の発現レベルに比較して、そのような障
害を有する個体から得た免疫系および／または神経系の組織または他の細胞また
は体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液または髄液）において検出し得る。従っ
て、本発明は、免疫系障害および／または神経系障害の診断の間に有用な診断方
法を提供する。この方法は、個体からの免疫系および／または神経系の組織また
は他の細胞または体液におけるＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３ポリペプチドをコードする遺伝子の発現レベルを測定する工程、および標
準的なＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現レベル
と測定した遺伝子発現レベルとを比較する工程であって、それによって、標準と
比較しての遺伝子発現レベルの増加または減少が、免疫系および／または神経系
の障害の指標となる工程を包含する。
データベースのＢＬＡＳＴ分析を用いて、ＮＴＥＲＡ２細胞、成人肺組織、唾液
腺、卵巣、Ｃａｃｏ−２結腸腺癌細胞株、平滑筋、小脳、８週齢の全ヒト胚、血
管周囲細胞腫（ｈｅｍａｇｉｏｐｅｒｉｃｙｔｏｍａ）、扁桃、黒質、および全
脳においても発現していることを発見した。さらに、本発明者らは、Ｂｒａｉｎ
ｉａｃ−３が、胎児脳においてだけではなく、てんかん前頭皮質および１２週齢
の初期のヒトにおいても発現されていることを発見した。多くの免疫系および／
または神経系関連および／または発達障害のための、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の発現レベルの実質的な変化（増加または減
少）を、「標準的な」Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺
伝子の発現レベル（すなわち、免疫系および／または神経系の障害を有さない個
体由来の免疫系および／または神経系の組織または体液におけるＤｅｎｄｒｉａ
ｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３の発現レベルに比較して、そのような障
害を有する個体から得た免疫系および／または神経系の組織または他の細胞また
は体液（例えば、血清、血漿、尿、滑液または髄液）において検出し得る。従っ
て、本発明は、免疫系障害および／または神経系障害の診断の間に有用な診断方
法を提供する。この方法は、個体からの免疫系および／または神経系の組織また
は他の細胞または体液におけるＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３ポリペプチドをコードする遺伝子の発現レベルを測定する工程、および標
準的なＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現レベル
と測定した遺伝子発現レベルとを比較する工程であって、それによって、標準と
比較しての遺伝子発現レベルの増加または減少が、免疫系および／または神経系
の障害の指標となる工程を包含する。
【０１９８】 特に、免疫系および神経系の癌を有する哺乳動物の特定の組織は、対応する「
標準的な」レベルと比較する場合、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／また
はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド、およびＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの有意に
増強されたまたは減少されたレベルを発現すると考えられる。さらに、Ｄｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの増強
されたレベルが、癌を有さない同じ種の哺乳動物由来の血清と比較される場合、
このような癌を有する哺乳動物由来の特定の体液（例えば、血清、血漿、尿およ
び髄液）で、検出され得ると考えられる。
標準的な」レベルと比較する場合、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／また
はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド、およびＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの有意に
増強されたまたは減少されたレベルを発現すると考えられる。さらに、Ｄｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの増強
されたレベルが、癌を有さない同じ種の哺乳動物由来の血清と比較される場合、
このような癌を有する哺乳動物由来の特定の体液（例えば、血清、血漿、尿およ
び髄液）で、検出され得ると考えられる。
【０１９９】 従って、本発明は、免疫系障害および／または神経系障害（これらの系の癌を
含む）の診断の間に有用な診断方法を提供し、この方法は、個体からの免疫系組
織および／または神経系組織または他の細胞または体液のＤｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする遺伝子
の発現レベルを測定する工程、およびこの測定された遺伝子発現レベルを標準的
なＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現レベ
ルと比較する工程であって、これによって、標準と比較した遺伝子発現レベルの
増加または減少が、免疫系障害および／または神経系障害の指標となる、工程を
包含する。
含む）の診断の間に有用な診断方法を提供し、この方法は、個体からの免疫系組
織および／または神経系組織または他の細胞または体液のＤｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする遺伝子
の発現レベルを測定する工程、およびこの測定された遺伝子発現レベルを標準的
なＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子発現レベ
ルと比較する工程であって、これによって、標準と比較した遺伝子発現レベルの
増加または減少が、免疫系障害および／または神経系障害の指標となる、工程を
包含する。
【０２００】 免疫系および／または神経系の障害の診断（腫瘍の診断を含む）が従来の方法
に従って既に行なわれているところで、本発明は、予後指標として有用である。
これによって、増強されたまたは抑制されたＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子および／ま
たはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の発現を示す患者は、標準的レベルに近い遺伝
子レベルで、遺伝子を発現する患者と比較して、より悪い診療結果を経験する。
に従って既に行なわれているところで、本発明は、予後指標として有用である。
これによって、増強されたまたは抑制されたＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子および／ま
たはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の発現を示す患者は、標準的レベルに近い遺伝
子レベルで、遺伝子を発現する患者と比較して、より悪い診療結果を経験する。
【０２０１】 「Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドをコードする遺伝子の発現レベルをアッセイする」により、Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのレベル、
またはＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリ
ペプチドをコードするｍＲＮＡのレベルを、第１の生物学的サンプルで、直接（
例えば、タンパク質の絶対レベルまたはｍＲＮＡの絶対レベルの決定または推定
によって）か、または相対的に（例えば、第２の生物学的サンプル中のＤｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのレベ
ルまたはｍＲＮＡレベルとの比較による）のいずれかで、定性的または定量的に
測定または推定することを意図する。好ましくは、第１の生物学的サンプル中の
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ドのレベルまたはｍＲＮＡレベルは、測定および推定され、そして標準的なＤｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの
レベルまたはｍＲＮＡレベルと比較され、この標準は、障害を有さない個体から
得た第２の生物学的サンプルから得られるか、または免疫系および／または神経
系の障害を有さない個体集団からのレベルを平均して決定される。当該分野で理
解されるように、一旦、標準のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのレベルまたはｍＲＮＡレベルが判明すると、
比較のための標準として繰り返し使用され得る。
プチドをコードする遺伝子の発現レベルをアッセイする」により、Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのレベル、
またはＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリ
ペプチドをコードするｍＲＮＡのレベルを、第１の生物学的サンプルで、直接（
例えば、タンパク質の絶対レベルまたはｍＲＮＡの絶対レベルの決定または推定
によって）か、または相対的に（例えば、第２の生物学的サンプル中のＤｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのレベ
ルまたはｍＲＮＡレベルとの比較による）のいずれかで、定性的または定量的に
測定または推定することを意図する。好ましくは、第１の生物学的サンプル中の
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ドのレベルまたはｍＲＮＡレベルは、測定および推定され、そして標準的なＤｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの
レベルまたはｍＲＮＡレベルと比較され、この標準は、障害を有さない個体から
得た第２の生物学的サンプルから得られるか、または免疫系および／または神経
系の障害を有さない個体集団からのレベルを平均して決定される。当該分野で理
解されるように、一旦、標準のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのレベルまたはｍＲＮＡレベルが判明すると、
比較のための標準として繰り返し使用され得る。
【０２０２】 「生物学的サンプル」によって、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／また
はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはｍＲＮＡを含有する、個体、体液、
細胞株、組織培養物、またはその他の供給源から得られた、任意の生物学的サン
プルが意図される。示されるように、生物学的サンプルは、遊離Ｄｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを含む体液（
例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、免疫系組織および／または神経
系組織、および完全もしくは成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／または
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはＤｅｎｄｒｉａｃレセプターまたはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３レセプターを発現することが見出されているその他の組織供
給源を含む。哺乳動物から組織生検および体液を得る方法は、当該分野で周知で
ある。生物学的サンプルが、ｍＲＮＡを含む場合、組織生検は、好ましい供給源
である。
はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはｍＲＮＡを含有する、個体、体液、
細胞株、組織培養物、またはその他の供給源から得られた、任意の生物学的サン
プルが意図される。示されるように、生物学的サンプルは、遊離Ｄｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを含む体液（
例えば、血清、血漿、尿、滑液、および髄液）、免疫系組織および／または神経
系組織、および完全もしくは成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／または
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドまたはＤｅｎｄｒｉａｃレセプターまたはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３レセプターを発現することが見出されているその他の組織供
給源を含む。哺乳動物から組織生検および体液を得る方法は、当該分野で周知で
ある。生物学的サンプルが、ｍＲＮＡを含む場合、組織生検は、好ましい供給源
である。
【０２０３】 本発明は、哺乳動物、好ましくはヒトの種々の免疫系および／または神経系に
関連する障害の診断または処置に有用である。好ましい哺乳動物の非独占的なリ
ストは、サル（ｍｏｎｋｅｙ）、サル（ａｐｅ）、ネコ、イヌ、ウシ、ブタ、ウ
マ、ウサギおよびヒトを含む。ヒトは特に好ましい哺乳動物である。このような
免疫系および／または神経系の細胞および／または組織の機能の任意の調節不全
を含む障害には、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティングトン病、ツ
レット症候群、てんかん、精神分裂症、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、
恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉症および行動変化（栄養、睡眠パ
ターン、平衡および知覚の障害を含む）、神経細胞の生存；シナプス形成；伝導
力（ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ）；神経の分化、自己免疫性、関節炎、白血病、リ
ンパ腫、免疫抑制、免疫、体液性免疫、炎症性腸疾患、骨髄抑制、リンパ球増殖
性障害、初期の造血性幹細胞および方向付けられた前駆体細胞由来の種々の造血
性系統の維持または分化、貧血、汎白血球減少症、白血球減少症、血小板減少症
または白血病、骨髄細胞のエキソビボ培養物、骨髄移植、骨髄の再構成、新形成
の放射線治療および化学治療、ぜん息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、慢性関
節リウマチ、敗血症、挫瘡、乾癬、グレーヴス病、リンパ球性甲状腺炎、甲状腺
機能亢進症、甲状腺機能低下症、対宿主性移植片反応、対宿主性移植片病、移殖
片に対する拒絶、骨髄性白血病、骨髄線維症、および骨髄増殖性の疾患：ハンテ
ィングトン病の遺伝子、ならびにＩ型およびＩＩＩ型の脊髄小脳性運動失調、ｄ
ｅｎｔａｔｏｒｕｂｒｏｐａｌｌｉｄｏｌｕｙｓｉａｎおよび脊髄性延髄性筋性
萎縮などを含むその他の神経変性疾患が含まれるが、これらに限定されない。
関連する障害の診断または処置に有用である。好ましい哺乳動物の非独占的なリ
ストは、サル（ｍｏｎｋｅｙ）、サル（ａｐｅ）、ネコ、イヌ、ウシ、ブタ、ウ
マ、ウサギおよびヒトを含む。ヒトは特に好ましい哺乳動物である。このような
免疫系および／または神経系の細胞および／または組織の機能の任意の調節不全
を含む障害には、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティングトン病、ツ
レット症候群、てんかん、精神分裂症、躁病、痴呆、パラノイア、強迫性障害、
恐慌性障害、学習障害、ＡＬＳ、精神病、自閉症および行動変化（栄養、睡眠パ
ターン、平衡および知覚の障害を含む）、神経細胞の生存；シナプス形成；伝導
力（ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ）；神経の分化、自己免疫性、関節炎、白血病、リ
ンパ腫、免疫抑制、免疫、体液性免疫、炎症性腸疾患、骨髄抑制、リンパ球増殖
性障害、初期の造血性幹細胞および方向付けられた前駆体細胞由来の種々の造血
性系統の維持または分化、貧血、汎白血球減少症、白血球減少症、血小板減少症
または白血病、骨髄細胞のエキソビボ培養物、骨髄移植、骨髄の再構成、新形成
の放射線治療および化学治療、ぜん息、ＡＩＤＳのような免疫不全疾患、慢性関
節リウマチ、敗血症、挫瘡、乾癬、グレーヴス病、リンパ球性甲状腺炎、甲状腺
機能亢進症、甲状腺機能低下症、対宿主性移植片反応、対宿主性移植片病、移殖
片に対する拒絶、骨髄性白血病、骨髄線維症、および骨髄増殖性の疾患：ハンテ
ィングトン病の遺伝子、ならびにＩ型およびＩＩＩ型の脊髄小脳性運動失調、ｄ
ｅｎｔａｔｏｒｕｂｒｏｐａｌｌｉｄｏｌｕｙｓｉａｎおよび脊髄性延髄性筋性
萎縮などを含むその他の神経変性疾患が含まれるが、これらに限定されない。
【０２０４】 全細胞ＲＮＡが、ＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉおよびＳａｃｃｈｉ（Ａｎａｌ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ． １６２：１５６−１５９（１９８７））に記載の１工程のグ
アニジウム−チオシアネート−フェノール−クロロホルム法のような任意の適切
な技術を使用して、生物学的サンプルから単離され得る。次いで、Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードす
るｍＲＮＡのレベルが、任意の適切な方法を使用してアッセイされる。これらの
方法には、ノーザンブロット分析、Ｓｌヌクレアーゼマッピング、ポリメラーゼ
連鎖反応（ＰＣＲ）、ポリメラーゼ連鎖反応と組み合わせた逆転写（ＲＴ−ＰＣ
Ｒ）、およびリガーゼ連鎖反応と組み合わせた逆転写（ＲＴ−ＬＣＲ）が挙げら
れる。
Ｂｉｏｃｈｅｍ． １６２：１５６−１５９（１９８７））に記載の１工程のグ
アニジウム−チオシアネート−フェノール−クロロホルム法のような任意の適切
な技術を使用して、生物学的サンプルから単離され得る。次いで、Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードす
るｍＲＮＡのレベルが、任意の適切な方法を使用してアッセイされる。これらの
方法には、ノーザンブロット分析、Ｓｌヌクレアーゼマッピング、ポリメラーゼ
連鎖反応（ＰＣＲ）、ポリメラーゼ連鎖反応と組み合わせた逆転写（ＲＴ−ＰＣ
Ｒ）、およびリガーゼ連鎖反応と組み合わせた逆転写（ＲＴ−ＬＣＲ）が挙げら
れる。
【０２０５】 生物学的サンプル中のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドのレベルのアッセイは、抗体に基づく技術を用いて実
施され得る。例えば、組織でのＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの発現は、古典的な免疫組織学的方法によって
研究され得る（Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：
９７６−９８５（１９８５）；Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉ
ｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（１９８７））。Ｄｅｎｄｒｉａｃ遺伝子お
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の発現を検出するために有用なその他
の抗体に基づく方法は、イムノアッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（Ｅ
ＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））を包含する。適切な抗体ア
ッセイ標識は、当該分野で公知であり、グルコースオキシダーゼのような酵素標
識、およびヨウ素（125Ｉ、121Ｉ）、炭素（14Ｃ）、イオウ（35Ｓ）、トリチウ
ム（3Ｈ）、インジウム（112Ｉｎ）、およびテクネチウム（99mＴｃ）のような ラジオアイソトープ、およびフルオレセインおよびローダミンのような蛍光標識
、およびビオチンを包含する。
ｎｉａｃ−３ポリペプチドのレベルのアッセイは、抗体に基づく技術を用いて実
施され得る。例えば、組織でのＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの発現は、古典的な免疫組織学的方法によって
研究され得る（Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０１：
９７６−９８５（１９８５）；Ｊａｌｋａｎｅｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉ
ｏｌ．１０５：３０８７−３０９６（１９８７））。Ｄｅｎｄｒｉａｃ遺伝子お
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の発現を検出するために有用なその他
の抗体に基づく方法は、イムノアッセイ（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（Ｅ
ＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））を包含する。適切な抗体ア
ッセイ標識は、当該分野で公知であり、グルコースオキシダーゼのような酵素標
識、およびヨウ素（125Ｉ、121Ｉ）、炭素（14Ｃ）、イオウ（35Ｓ）、トリチウ
ム（3Ｈ）、インジウム（112Ｉｎ）、およびテクネチウム（99mＴｃ）のような ラジオアイソトープ、およびフルオレセインおよびローダミンのような蛍光標識
、およびビオチンを包含する。
【０２０６】 個体から得た生物学的サンプル中のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／ま
たはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのレベルのアッセイに加えて、Ｄｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドはまた
、画像診断によってインビボで検出され得る。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのインビボ画像診断のための抗
体標識またはマーカーは、Ｘ線撮影、ＮＭＲ、またはＥＳＲによって検出可能な
ものを包含する。Ｘ線撮影については、適切な標識は、バリウムまたはセシウム
のようなラジオアイソトープを包含し、これは検出可能な放射線を放射するが、
被験体に対して明らかに有害ではない。ＮＭＲおよびＥＳＲのための適切なマー
カーは、ジュウテリウムのような検出可能な特徴的なスピンを有するものを包含
し、関連ハイブリドーマのための栄養物の標識によって、抗体へ組み込まれ得る
。
たはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのレベルのアッセイに加えて、Ｄｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドはまた
、画像診断によってインビボで検出され得る。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのインビボ画像診断のための抗
体標識またはマーカーは、Ｘ線撮影、ＮＭＲ、またはＥＳＲによって検出可能な
ものを包含する。Ｘ線撮影については、適切な標識は、バリウムまたはセシウム
のようなラジオアイソトープを包含し、これは検出可能な放射線を放射するが、
被験体に対して明らかに有害ではない。ＮＭＲおよびＥＳＲのための適切なマー
カーは、ジュウテリウムのような検出可能な特徴的なスピンを有するものを包含
し、関連ハイブリドーマのための栄養物の標識によって、抗体へ組み込まれ得る
。
【０２０７】 ラジオアイソトープ（例えば、131Ｉ、112Ｉｎ、99mＴｃ）、放射線不透過性 物質、または核磁気共鳴によって検出可能な物質のような、適切な検出可能イメ
ージング部分で標識された、Ｄｅｎｄｒｉａｃ特異的抗体または抗体フラグメン
ト、あるいはＢｒａｉｎｉａｃ−３特異的抗体または抗体フラグメントが、免疫
系障害について試験されるべき哺乳動物へ導入される（例えば、非経口的、皮下
的または腹腔内に）。被験体の大きさおよび使用される画像診断システムが、診
断画像を作製するために必要な画像部分の量を決定することは、当該分野で理解
される。ラジオアイソープ部分の場合には、ヒト被験体について、注入される放
射活性の量は、通常、約５〜２０ミリキュリーの99mＴｃの範囲である。次いで 、標識抗体または抗体フラグメントは、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを含有する細胞の位置に、優先的に蓄
積する。インビボ腫瘍画像診断は、Ｂｕｒｃｈｉｅｌおよび共同研究者らよって
（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇの第１３章： Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｂｕｒｃｈｉｅｌ、Ｓ．Ｗ．
およびＲｈｏｄｅｓ、Ｂ．Ａ．編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎ
ｃ． （１９８２））に記載されている。
ージング部分で標識された、Ｄｅｎｄｒｉａｃ特異的抗体または抗体フラグメン
ト、あるいはＢｒａｉｎｉａｃ−３特異的抗体または抗体フラグメントが、免疫
系障害について試験されるべき哺乳動物へ導入される（例えば、非経口的、皮下
的または腹腔内に）。被験体の大きさおよび使用される画像診断システムが、診
断画像を作製するために必要な画像部分の量を決定することは、当該分野で理解
される。ラジオアイソープ部分の場合には、ヒト被験体について、注入される放
射活性の量は、通常、約５〜２０ミリキュリーの99mＴｃの範囲である。次いで 、標識抗体または抗体フラグメントは、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを含有する細胞の位置に、優先的に蓄
積する。インビボ腫瘍画像診断は、Ｂｕｒｃｈｉｅｌおよび共同研究者らよって
（Ｔｕｍｏｒ Ｉｍａｇｉｎｇの第１３章： Ｔｈｅ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃ
ａｌ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｂｕｒｃｈｉｅｌ、Ｓ．Ｗ．
およびＲｈｏｄｅｓ、Ｂ．Ａ．編、Ｍａｓｓｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎ
ｃ． （１９８２））に記載されている。
【０２０８】 （処置） 上記のように、Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３のポリ
ヌクレオチドおよびポリペプチドは、Ｄｅｎｄｒｉａｃ活性および／またはＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３活性の異常に高いかまたは低い発現の関与する症状の診断に有
用である。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドならびにＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドにより調節された活性が、発現された所定の細胞および
組織では、病理学的症状を引き起こす標準的または「通常の」レベルと比較して
、個体の実質的に変化（増加または減少）したＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの発現レベル、Ｄｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドが発現され、
そして／またはそれらが活性である身体のシステムに関連することが容易に明ら
かである。
ヌクレオチドおよびポリペプチドは、Ｄｅｎｄｒｉａｃ活性および／またはＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３活性の異常に高いかまたは低い発現の関与する症状の診断に有
用である。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドならびにＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドにより調節された活性が、発現された所定の細胞および
組織では、病理学的症状を引き起こす標準的または「通常の」レベルと比較して
、個体の実質的に変化（増加または減少）したＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの発現レベル、Ｄｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドが発現され、
そして／またはそれらが活性である身体のシステムに関連することが容易に明ら
かである。
【０２０９】 さらに、特定の細胞の機能に加えて、細胞レセプター分子がまた、しばしば、
潜在的な宿主細胞への侵入を開始する手段としてのウイルスにより開発され得る
ことが当該分野で周知である。例えば、細胞のケモカインレセプターＣＣＲ５が
、細胞のケモカインレセプターとしてだけではなく、マクロファージトロピック
（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｔｒｏｐｉｃ）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）−１
のレセプターとしても機能することが、最近Ｗｕおよび共同研究者（Ｊ．Ｅｘｐ
．Ｍｅｄ．１８５：１６８１−１６９１（１９９７））によって、見出された。
さらに、細胞のケモカインレセプターＣＣＲ５のアゴニストであるＲＡＮＴＥＳ
、ＭＩＰ−１ａおよびＭＩＰ−１ｂが、ＨＩＶ−１の種々の系統の感受性細胞株
への侵入を阻害する（Ｃｏｃｃｈｉ、Ｆ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：１８１
１−１８１５（１９９５））。従って、本発明はまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃレセプ
ターおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３レセプターとのウイルス粒子の相互作
用をブロックまたは破壊するためのＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／また
はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド、あるいはそれらのアゴニストまたはアン
タゴニストの予防的または治療的投与を通して、ウイルスに曝露または感染した
個体を処置し、そして結果としてウイルスの感染の開始および継続をブロックす
る方法を提供する。
潜在的な宿主細胞への侵入を開始する手段としてのウイルスにより開発され得る
ことが当該分野で周知である。例えば、細胞のケモカインレセプターＣＣＲ５が
、細胞のケモカインレセプターとしてだけではなく、マクロファージトロピック
（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｔｒｏｐｉｃ）ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）−１
のレセプターとしても機能することが、最近Ｗｕおよび共同研究者（Ｊ．Ｅｘｐ
．Ｍｅｄ．１８５：１６８１−１６９１（１９９７））によって、見出された。
さらに、細胞のケモカインレセプターＣＣＲ５のアゴニストであるＲＡＮＴＥＳ
、ＭＩＰ−１ａおよびＭＩＰ−１ｂが、ＨＩＶ−１の種々の系統の感受性細胞株
への侵入を阻害する（Ｃｏｃｃｈｉ、Ｆ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７０：１８１
１−１８１５（１９９５））。従って、本発明はまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃレセプ
ターおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３レセプターとのウイルス粒子の相互作
用をブロックまたは破壊するためのＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／また
はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド、あるいはそれらのアゴニストまたはアン
タゴニストの予防的または治療的投与を通して、ウイルスに曝露または感染した
個体を処置し、そして結果としてウイルスの感染の開始および継続をブロックす
る方法を提供する。
【０２１０】 本発明のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドは、Ｄｅｎｄｒｉａｃレセプターと結
合し、そしてイムノトロピック（ｉｍｍｕｎｅ−ｔｒｏｐｉｃ）ウイルスの感染
を阻害するようである。Ｄｅｎｄｒｉａｃ−Ｄｅｎｄｒｉａｃレセプター相互作
用のアゴニストおよびアンタゴニストはまた、イムノトロピックイルスの感染に
干渉するようである。結果として、そのような相互作用は、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ
−２、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２などのような１つ以上のイム
ノトロピックイルスの感染生活環に干渉するようである。さらに、本発明のＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３レセプターに結合し、
そしてニューロトロピック（ｎｅｕｒｏ−ｔｒｏｐｉｃ）ウイルス感染をブロッ
クするようである。Ｂｒａｉｎｉａｃ−３−Ｂｒａｉｎｉａｃ−３レセプター相
互作用のアゴニストおよびアンタゴニストはまた、ニューロトロピックウイルス
の感染に干渉するようである。結果として、そのような相互作用は、ＨＩＶ−１
、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２などのような１つ以
上のニューロトロピックウイルスの感染生活環に干渉するようである。
合し、そしてイムノトロピック（ｉｍｍｕｎｅ−ｔｒｏｐｉｃ）ウイルスの感染
を阻害するようである。Ｄｅｎｄｒｉａｃ−Ｄｅｎｄｒｉａｃレセプター相互作
用のアゴニストおよびアンタゴニストはまた、イムノトロピックイルスの感染に
干渉するようである。結果として、そのような相互作用は、ＨＩＶ−１、ＨＩＶ
−２、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２などのような１つ以上のイム
ノトロピックイルスの感染生活環に干渉するようである。さらに、本発明のＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３レセプターに結合し、
そしてニューロトロピック（ｎｅｕｒｏ−ｔｒｏｐｉｃ）ウイルス感染をブロッ
クするようである。Ｂｒａｉｎｉａｃ−３−Ｂｒａｉｎｉａｃ−３レセプター相
互作用のアゴニストおよびアンタゴニストはまた、ニューロトロピックウイルス
の感染に干渉するようである。結果として、そのような相互作用は、ＨＩＶ−１
、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２などのような１つ以
上のニューロトロピックウイルスの感染生活環に干渉するようである。
【０２１１】 ウイルスの感染を予防的または治療的にブロックするための、本発明のＤｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド、あ
るいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニストの能力は、当業者によって容易
に試験され得る。例えば、Ｓｉｍｍｏｎｓおよび共同研究者ら（Ｓｃｉｅｎｃｅ
２７６：２７６−２７９（１９９７））ならびにＡｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓ
ｄｅｄｏｓおよび共同研究者ら（Ｎａｔｕｒｅ３８３：４００（１９９６））は
各々、末梢血単核細胞の培養細胞中におけるＣＣＲ５ケモカインレセプターおよ
びＣＣケモカインＲＡＮＴＥＳそれぞれのアンタゴニストによるＨＩＶ−１感染
の抑制の観察の方法の概要を示す。上記の両方の場合において、細胞は培養され
、そしてＨＩＶ−１ウイルスに感染される。次いで、ＣＣケモカインまたはその
レセプターのアゴニストまたはアンタゴニストを、すぐに培養培地に加える。ケ
モカインまたは細胞レセプターのアゴニストまたはアンタゴニストの能力の証拠
を、感染の３、６、および９日後のウイルス感染の相対的な成功の評価により決
定する。
ｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド、あ
るいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニストの能力は、当業者によって容易
に試験され得る。例えば、Ｓｉｍｍｏｎｓおよび共同研究者ら（Ｓｃｉｅｎｃｅ
２７６：２７６−２７９（１９９７））ならびにＡｒｅｎｚａｎａ−Ｓｅｉｓ
ｄｅｄｏｓおよび共同研究者ら（Ｎａｔｕｒｅ３８３：４００（１９９６））は
各々、末梢血単核細胞の培養細胞中におけるＣＣＲ５ケモカインレセプターおよ
びＣＣケモカインＲＡＮＴＥＳそれぞれのアンタゴニストによるＨＩＶ−１感染
の抑制の観察の方法の概要を示す。上記の両方の場合において、細胞は培養され
、そしてＨＩＶ−１ウイルスに感染される。次いで、ＣＣケモカインまたはその
レセプターのアゴニストまたはアンタゴニストを、すぐに培養培地に加える。ケ
モカインまたは細胞レセプターのアゴニストまたはアンタゴニストの能力の証拠
を、感染の３、６、および９日後のウイルス感染の相対的な成功の評価により決
定する。
【０２１２】 本発明の単離されたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドのある量、またはそれらのアゴニストまたはアンタゴニ
ストのある量を含む薬学的組成物の、ウイルスに感染したかまたはウイルスに感
染する危険があるかのいずれかの個体に対する投与が、以下に記載される。
ｉａｃ−３ポリペプチドのある量、またはそれらのアゴニストまたはアンタゴニ
ストのある量を含む薬学的組成物の、ウイルスに感染したかまたはウイルスに感
染する危険があるかのいずれかの個体に対する投与が、以下に記載される。
【０２１３】 本発明のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドがＢｒａｉｎｉａｃファミリーのメンバーであるので、そのポリペ
プチドの成熟した分泌形態は、タンパク質分解切断によってＤｅｎｄｒｉａｃポ
リペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを発現する細胞か
ら可溶性形態で放出され得ることもまた、当業者によって理解される。それゆえ
、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チド成熟形態が、外来の供給源から個体の細胞、組織、または身体に添加される
場合、このポリペプチドは、その個体のその標的細胞についてその生理学的活性
を発揮する。
ポリペプチドがＢｒａｉｎｉａｃファミリーのメンバーであるので、そのポリペ
プチドの成熟した分泌形態は、タンパク質分解切断によってＤｅｎｄｒｉａｃポ
リペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを発現する細胞か
ら可溶性形態で放出され得ることもまた、当業者によって理解される。それゆえ
、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チド成熟形態が、外来の供給源から個体の細胞、組織、または身体に添加される
場合、このポリペプチドは、その個体のその標的細胞についてその生理学的活性
を発揮する。
【０２１４】 それゆえ、個体のＤｅｎｄｒｉａｃ活性および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
活性の標準的または通常のレベルの減少によって引き起こされる症状、特に免疫
系および／または神経系の障害は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／また
はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド（好ましくは、そのポリペプチドの成熟形
態で）の投与によって処置され得ることが理解され得る。従って、本発明はまた
、増加したレベルのＤｅｎｄｒｉａｃ活性および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
活性を必要とする個体の処置の方法であって、そのような個体のＤｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの活性レベル
を増加させるために有効な量の、本発明の単離されたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプ
チドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド、特に、本発明の成熟形
態のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドを含む薬学的組成物を個体に投与する工程を含む、方法を提供する。
活性の標準的または通常のレベルの減少によって引き起こされる症状、特に免疫
系および／または神経系の障害は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／また
はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド（好ましくは、そのポリペプチドの成熟形
態で）の投与によって処置され得ることが理解され得る。従って、本発明はまた
、増加したレベルのＤｅｎｄｒｉａｃ活性および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
活性を必要とする個体の処置の方法であって、そのような個体のＤｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの活性レベル
を増加させるために有効な量の、本発明の単離されたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプ
チドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド、特に、本発明の成熟形
態のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペ
プチドを含む薬学的組成物を個体に投与する工程を含む、方法を提供する。
【０２１５】 （処方） Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チド組成物は、個々の患者の臨床状態（特に、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド単独での処置の副作用）、Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド組
成物の送達部位、投与方法、投与計画、および当業者に公知のその他のファクタ
ーを考慮して、良好な医療処置と一致した様式で処方および調薬（ｄｏｓｅｄ）
される。従って、本明細書での目的のためのＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよ
び／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの「有効量」は、このような考慮
によって決定される。
チド組成物は、個々の患者の臨床状態（特に、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド単独での処置の副作用）、Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド組
成物の送達部位、投与方法、投与計画、および当業者に公知のその他のファクタ
ーを考慮して、良好な医療処置と一致した様式で処方および調薬（ｄｏｓｅｄ）
される。従って、本明細書での目的のためのＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよ
び／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの「有効量」は、このような考慮
によって決定される。
【０２１６】 一般的な提案として、用量あたり非経口的に投与されるＤｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの薬学的に有効な総
量は、患者の体重あたり約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である
が、上記に示されているように、これは治療上の裁量に委ねられる。より好まし
くは、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も好ましくは
、ヒトに対して、ホルモンについて約０．０１と１ｍｇ／ｋｇ／日との間の範囲
である。継続的に投与される場合、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／また
はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、代表的には、約１μｇ／ｋｇ／時間〜
約５０μｇ／ｋｇ／時間の用量率で、１日あたり１〜４回注入によって、または
、例えば、ミニポンプを使用した継続的皮下注入によってのいずれかで投与され
る。静脈内点滴用バッグ溶液もまた使用され得る。変化を観察するのに必要な処
置の長さ、および応答が生じる処置後の間隔は、所望の効果に依存して変化する
ようである。
ペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの薬学的に有効な総
量は、患者の体重あたり約１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である
が、上記に示されているように、これは治療上の裁量に委ねられる。より好まし
くは、この用量は、少なくとも０．０１ｍｇ／ｋｇ／日、そして最も好ましくは
、ヒトに対して、ホルモンについて約０．０１と１ｍｇ／ｋｇ／日との間の範囲
である。継続的に投与される場合、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／また
はＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、代表的には、約１μｇ／ｋｇ／時間〜
約５０μｇ／ｋｇ／時間の用量率で、１日あたり１〜４回注入によって、または
、例えば、ミニポンプを使用した継続的皮下注入によってのいずれかで投与され
る。静脈内点滴用バッグ溶液もまた使用され得る。変化を観察するのに必要な処
置の長さ、および応答が生じる処置後の間隔は、所望の効果に依存して変化する
ようである。
【０２１７】 本発明のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドを含有する薬学的組成物は、経口、直腸内、非経口、槽内（ｉｎｔ
ｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、腟内、腹腔内、局所（粉末、軟膏、液滴、または
経皮パッチによるように）、口腔に（ｂｕｃａｌｌｙ）、または経口スプレーも
しくは経鼻スプレーとして、投与され得る。「薬学的に受容可能なキャリア」に
よって、任意の型の非毒性固体、半固体をもしくは液状の充填剤、希釈物、カプ
セル化材料、または処方補助剤を意味する。本明細書で使用されているように、
用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨下（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａ
ｌ）、皮下、および関節内の注射および注入を包含する、投与様式をいう。
ポリペプチドを含有する薬学的組成物は、経口、直腸内、非経口、槽内（ｉｎｔ
ｒａｃｉｓｔｅｍａｌｌｙ）、腟内、腹腔内、局所（粉末、軟膏、液滴、または
経皮パッチによるように）、口腔に（ｂｕｃａｌｌｙ）、または経口スプレーも
しくは経鼻スプレーとして、投与され得る。「薬学的に受容可能なキャリア」に
よって、任意の型の非毒性固体、半固体をもしくは液状の充填剤、希釈物、カプ
セル化材料、または処方補助剤を意味する。本明細書で使用されているように、
用語「非経口」は、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨下（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａ
ｌ）、皮下、および関節内の注射および注入を包含する、投与様式をいう。
【０２１８】 Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドはまた、持続放出システムにより適切に投与される。持続放出組成物の適切
な例は、成形物品（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル（ｍｉｒｏｃａｐ
ｓｕｌｅ））の形態での半透過性ポリマーマトリックスを包含する。持続放出マ
トリックスは、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ ５８，
４８１）、Ｌ−グルタミン酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー
（Ｓｉｄｍａｎ，Ｕ．ら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５５６（１
９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート；Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．
ら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１
）、およびＬａｎｇｅｒ，Ｒ．、Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５（１
９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．ら、同書）または
ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ １３３，９８８）を包含する。
持続放出Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチド組成物はまた、リポソーム封入Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを包含する。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド含有リポソームは、
当該分野で公知の方法によって調製される（ＤＥ ３，２１８，１２１；Ｅｐｓ
ｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８２：３６８
８−３６９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．（ＵＳＡ）７７：４０３０−４０３４（１９８０）；ＥＰ ５２，３２２
；ＥＰ ３６，６７６；ＥＰ ８８，０４６；ＥＰ １４３，９４９；ＥＰ １
４２，６４１；日本国特許出願８３−１１８００８；米国特許第４，４８５，０
４５号および同第４，５４４，５４５号；および、ＥＰ １０２，３２４）。通
常、リポソームは、脂質含有量が約３０モル％コレステロールより多い、小さな
（約２００〜８００オングストローム）単層型であり、選択される割合は、最適
なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チド治療について調整される。
チドはまた、持続放出システムにより適切に投与される。持続放出組成物の適切
な例は、成形物品（例えば、フィルムまたはマイクロカプセル（ｍｉｒｏｃａｐ
ｓｕｌｅ））の形態での半透過性ポリマーマトリックスを包含する。持続放出マ
トリックスは、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号、ＥＰ ５８，
４８１）、Ｌ−グルタミン酸およびγ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー
（Ｓｉｄｍａｎ，Ｕ．ら、Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７−５５６（１
９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート；Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．
ら、Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７−２７７（１９８１
）、およびＬａｎｇｅｒ，Ｒ．、Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８−１０５（１
９８２））、エチレンビニルアセテート（Ｌａｎｇｅｒ，Ｒ．ら、同書）または
ポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ １３３，９８８）を包含する。
持続放出Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチド組成物はまた、リポソーム封入Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを包含する。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド含有リポソームは、
当該分野で公知の方法によって調製される（ＤＥ ３，２１８，１２１；Ｅｐｓ
ｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８２：３６８
８−３６９２（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．（ＵＳＡ）７７：４０３０−４０３４（１９８０）；ＥＰ ５２，３２２
；ＥＰ ３６，６７６；ＥＰ ８８，０４６；ＥＰ １４３，９４９；ＥＰ １
４２，６４１；日本国特許出願８３−１１８００８；米国特許第４，４８５，０
４５号および同第４，５４４，５４５号；および、ＥＰ １０２，３２４）。通
常、リポソームは、脂質含有量が約３０モル％コレステロールより多い、小さな
（約２００〜８００オングストローム）単層型であり、選択される割合は、最適
なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チド治療について調整される。
【０２１９】 非経口投与については、１つの実施態様で、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、一般的に、単位投与量の注
入可能形態（溶液、懸濁液、または乳濁液）の所望の純度で、薬学的に受容可能
なキャリア（すなわち、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して非
毒性であり、かつ処方物のその他の成分と適合性であるもの）と混合することに
より、処方される。例えば、処方物は、好ましくは、酸化剤、およびポリペプチ
ドに対して有害なことが公知であるその他の化合物を含有しない。
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、一般的に、単位投与量の注
入可能形態（溶液、懸濁液、または乳濁液）の所望の純度で、薬学的に受容可能
なキャリア（すなわち、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して非
毒性であり、かつ処方物のその他の成分と適合性であるもの）と混合することに
より、処方される。例えば、処方物は、好ましくは、酸化剤、およびポリペプチ
ドに対して有害なことが公知であるその他の化合物を含有しない。
【０２２０】 一般的に、処方物は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドを均一および密接に、液体キャリアまたは細分割固体
キャリアまたは両方と接触させることによって、調製される。次いで、必要に応
じて、産物は、所望の処方物に成形される。好ましくは、キャリアは、非経口キ
ャリアであり、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。こ
のようなキャリアビヒクルの例は、水、生理食塩水、リンゲル液、およびデキス
トロース溶液を包含する。固定油およびオレイン酸エチルのような、非水性ビヒ
クルもまた、リポソームと同様に、本明細書において有用である。
ｎｉａｃ−３ポリペプチドを均一および密接に、液体キャリアまたは細分割固体
キャリアまたは両方と接触させることによって、調製される。次いで、必要に応
じて、産物は、所望の処方物に成形される。好ましくは、キャリアは、非経口キ
ャリアであり、より好ましくはレシピエントの血液と等張である溶液である。こ
のようなキャリアビヒクルの例は、水、生理食塩水、リンゲル液、およびデキス
トロース溶液を包含する。固定油およびオレイン酸エチルのような、非水性ビヒ
クルもまた、リポソームと同様に、本明細書において有用である。
【０２２１】 キャリアは、等張性および化学安定性を増強する物質のような、微量の添加物
を適切に含有する。このような材料は、使用される投与量および濃度でレシピエ
ントに対して非毒性であり、そしてリン酸、クエン酸、コハク酸、酢酸、および
その他の有機酸またはその塩類のような、緩衝剤；アスコルビン酸のような、抗
酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、例えば、ポリアルギニンま
たはトリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンのような
、タンパク質；ポリビニルピロリドンのような、親水性ポリマー；グリシン、グ
ルタミン酸、アスパラギン酸、またはアルギニンのような、アミノ酸；セルロー
スまたはその誘導体、グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖
類、二糖類、およびその他の炭水化物；ＥＤＴＡのような、キレート剤；マンニ
トールまたはソルビトールのような、糖アルコール；ナトリウムのような、対イ
オン；および／またはポリソルベート、ポリオキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）
、またはＰＥＧのような、非イオン界面活性剤を包含する。
を適切に含有する。このような材料は、使用される投与量および濃度でレシピエ
ントに対して非毒性であり、そしてリン酸、クエン酸、コハク酸、酢酸、および
その他の有機酸またはその塩類のような、緩衝剤；アスコルビン酸のような、抗
酸化剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、例えば、ポリアルギニンま
たはトリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンのような
、タンパク質；ポリビニルピロリドンのような、親水性ポリマー；グリシン、グ
ルタミン酸、アスパラギン酸、またはアルギニンのような、アミノ酸；セルロー
スまたはその誘導体、グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖
類、二糖類、およびその他の炭水化物；ＥＤＴＡのような、キレート剤；マンニ
トールまたはソルビトールのような、糖アルコール；ナトリウムのような、対イ
オン；および／またはポリソルベート、ポリオキサマー（ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）
、またはＰＥＧのような、非イオン界面活性剤を包含する。
【０２２２】 Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドは、代表的には、約０．１ ｍｇ／ｍｌ〜１００ ｍｇ／ｍｌ、好ましくは
１〜１０ ｍｇ／ｍｌの濃度で、ｐＨ約３〜８でこのようなビヒクル中に処方さ
れる。特定の前記賦形剤、キャリア、または安定剤の使用が、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチド塩および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド塩の形成をも
たらすことは、理解される。
チドは、代表的には、約０．１ ｍｇ／ｍｌ〜１００ ｍｇ／ｍｌ、好ましくは
１〜１０ ｍｇ／ｍｌの濃度で、ｐＨ約３〜８でこのようなビヒクル中に処方さ
れる。特定の前記賦形剤、キャリア、または安定剤の使用が、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチド塩および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド塩の形成をも
たらすことは、理解される。
【０２２３】 治療投与に使用されるＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドは、無菌でなければならない。無菌は、滅菌濾過膜（
例えば、０．２ミクロン膜）を通す濾過によって、容易に達成される。治療Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド組
成物は、一般的に、無菌出入口を有する容器（例えば、皮下注射針によって刺し
通し得る栓を有する静脈内点滴用溶液バッグまたはバイアル）へ入れられる。
ｎｉａｃ−３ポリペプチドは、無菌でなければならない。無菌は、滅菌濾過膜（
例えば、０．２ミクロン膜）を通す濾過によって、容易に達成される。治療Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド組
成物は、一般的に、無菌出入口を有する容器（例えば、皮下注射針によって刺し
通し得る栓を有する静脈内点滴用溶液バッグまたはバイアル）へ入れられる。
【０２２４】 通常は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドは、単回または多数回用量容器（例えば、密封アンプルまたはバイ
アル）中に、水溶液または再構成用の凍結乾燥処方物として、貯蔵される。凍結
乾燥処方物の例として、１０ ｍｌバイアルは、滅菌濾過された１％（ｗ／ｖ）
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ド水溶液（５ｍｌ）で満たされ、得られた混合物は、凍結乾燥される。注入溶液
は、注射用静菌蒸留水（ＷＦＩ）を用いて、凍結乾燥Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプ
チドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを再構成することによっ
て、調製される。
ポリペプチドは、単回または多数回用量容器（例えば、密封アンプルまたはバイ
アル）中に、水溶液または再構成用の凍結乾燥処方物として、貯蔵される。凍結
乾燥処方物の例として、１０ ｍｌバイアルは、滅菌濾過された１％（ｗ／ｖ）
Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ド水溶液（５ｍｌ）で満たされ、得られた混合物は、凍結乾燥される。注入溶液
は、注射用静菌蒸留水（ＷＦＩ）を用いて、凍結乾燥Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプ
チドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを再構成することによっ
て、調製される。
【０２２５】 本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１つ以上の成分で満たされた、１つ以
上の容器を含む、薬学的パックまたはキットを提供する。このような容器には、
薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって
規定された形式の注意書が伴われ得、この注意書は、ヒト投与に対する製造、使
用または販売の機関による認可を反映する。さらに、本発明のポリペプチドは、
その他の治療化合物と併用して使用され得る。
上の容器を含む、薬学的パックまたはキットを提供する。このような容器には、
薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関によって
規定された形式の注意書が伴われ得、この注意書は、ヒト投与に対する製造、使
用または販売の機関による認可を反映する。さらに、本発明のポリペプチドは、
その他の治療化合物と併用して使用され得る。
【０２２６】 （アゴニストおよびアンタゴニスト−アッセイおよび分子） 本発明はまた、細胞に対するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの作用（例えば、レセプター分子のようなＤｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド結
合分子とのその相互作用）を増強するかまたはブロックする化合物を同定するた
めの化合物のスクリーニング方法を提供する。アゴニストは、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの天然の生物学
的機能を増加させるか、またはＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドと類似の様式で機能する化合物であるが、アン
タゴニストはこのような機能を減少させるかまたは消失させる。
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの作用（例えば、レセプター分子のようなＤｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド結
合分子とのその相互作用）を増強するかまたはブロックする化合物を同定するた
めの化合物のスクリーニング方法を提供する。アゴニストは、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの天然の生物学
的機能を増加させるか、またはＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドと類似の様式で機能する化合物であるが、アン
タゴニストはこのような機能を減少させるかまたは消失させる。
【０２２７】 本発明のこの実施態様の別の局面において、本発明は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドに特異的に結合する
、レセプタータンパク質または他のリガンド結合タンパク質を同定するための方
法を提供する。例えば、細胞区画（例えば、膜またはその調製物）は、Ｄｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドに結合
する分子を発現する細胞から調製され得る。調製物は、標識されたＤｅｎｄｒｉ
ａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドとともにイ
ンキュベートされ、そしてレセプターまたは他の結合タンパク質に結合したＤｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの
複合体は、当該分野で公知の日常的方法に従って、単離および特徴付けられる。
あるいは、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドは、細胞から可溶化された結合分子がカラムに結合されるように固
体支持体へ結合され得、次いで、日常的な方法に従って溶出および特徴付けられ
得る。
ペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドに特異的に結合する
、レセプタータンパク質または他のリガンド結合タンパク質を同定するための方
法を提供する。例えば、細胞区画（例えば、膜またはその調製物）は、Ｄｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドに結合
する分子を発現する細胞から調製され得る。調製物は、標識されたＤｅｎｄｒｉ
ａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドとともにイ
ンキュベートされ、そしてレセプターまたは他の結合タンパク質に結合したＤｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの
複合体は、当該分野で公知の日常的方法に従って、単離および特徴付けられる。
あるいは、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３
ポリペプチドは、細胞から可溶化された結合分子がカラムに結合されるように固
体支持体へ結合され得、次いで、日常的な方法に従って溶出および特徴付けられ
得る。
【０２２８】 アゴニストまたはアンタゴニストについての本発明のアッセイにおいて、細胞
区画（例えば、膜またはその調製物）は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを結合する分子（例えば、Ｄｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドにより
調節されるシグナル伝達経路または調節経路の分子）を発現する細胞から調製さ
れ得る。調製物は、候補分子（Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドアゴニストまたはＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドアンタゴニストであり得る
）の非存在下または存在下で、標識されたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドとともにインキュベートされる。結
合分子に結合する候補分子の能力は、標識されたリガンドの結合の減少に反映さ
れる。不必要に（すなわち、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド結合分子を結合することに対してＤｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの効果を誘導
することなく）結合する分子は、良好なアンタゴニストである可能性が最も高い
。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドとうまく結合し、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドと同じ効果またはそれらと密接に関連する効果を誘発す
る分子は、アゴニストである。
区画（例えば、膜またはその調製物）は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドを結合する分子（例えば、Ｄｅｎｄ
ｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドにより
調節されるシグナル伝達経路または調節経路の分子）を発現する細胞から調製さ
れ得る。調製物は、候補分子（Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドアゴニストまたはＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドアンタゴニストであり得る
）の非存在下または存在下で、標識されたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドとともにインキュベートされる。結
合分子に結合する候補分子の能力は、標識されたリガンドの結合の減少に反映さ
れる。不必要に（すなわち、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒ
ａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド結合分子を結合することに対してＤｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの効果を誘導
することなく）結合する分子は、良好なアンタゴニストである可能性が最も高い
。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドとうまく結合し、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドと同じ効果またはそれらと密接に関連する効果を誘発す
る分子は、アゴニストである。
【０２２９】 潜在的なアゴニストおよびアンタゴニストのＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド様の効果は、例えば、細胞また
は適切な細胞調製物と候補分子の相互作用後に、二次メッセンジャーシステムの
活性を決定すること、およびこの効果を、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドと同じ効果を誘発するＤｅｎｄｒｉ
ａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３のポリペプチドまたは分子の効果と比
較することにより測定され得る。この点で有用であり得る二次メッセンジャーシ
ステムは、ＡＭＰグアニル酸シクラーゼ、イオンチャンネルまたはホスホイノシ
チド加水分解二次メッセンジャーシステムを含むが、これらに限定されない。
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド様の効果は、例えば、細胞また
は適切な細胞調製物と候補分子の相互作用後に、二次メッセンジャーシステムの
活性を決定すること、およびこの効果を、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドと同じ効果を誘発するＤｅｎｄｒｉ
ａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３のポリペプチドまたは分子の効果と比
較することにより測定され得る。この点で有用であり得る二次メッセンジャーシ
ステムは、ＡＭＰグアニル酸シクラーゼ、イオンチャンネルまたはホスホイノシ
チド加水分解二次メッセンジャーシステムを含むが、これらに限定されない。
【０２３０】 Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプ
チドアンタゴニストについてのアッセイの別の例は、競合阻害アッセイに適切な
条件下で、膜結合Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３ポリペプチドのレセプター分子または組換えＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのレセプター分子と、Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドお
よび潜在的なアンタゴニストを組み合わせる競合アッセイである。Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、潜在的
なアンタゴニストの有効性を評価するために、レセプター分子に結合したＤｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチド分子および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド
分子の数が正確に決定され得るように、（例えば、放射能により）標識され得る
。
チドアンタゴニストについてのアッセイの別の例は、競合阻害アッセイに適切な
条件下で、膜結合Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａ
ｃ−３ポリペプチドのレセプター分子または組換えＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのレセプター分子と、Ｄｅ
ｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドお
よび潜在的なアンタゴニストを組み合わせる競合アッセイである。Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドは、潜在的
なアンタゴニストの有効性を評価するために、レセプター分子に結合したＤｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチド分子および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド
分子の数が正確に決定され得るように、（例えば、放射能により）標識され得る
。
【０２３１】 潜在的なアンタゴニストは、本発明のポリペプチドに結合し、それによりその
ポリペプチドの活性を阻害するかまたは失わせる、有機低分子、ペプチド、ポリ
ペプチドおよび抗体を含む。潜在的なアンタゴニストはまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド誘導性活性を誘
導することなく、結合分子（例えば、レセプター分子）上の同じ部位に結合し、
それにより、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチドを結合から除外することによりＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの作用を妨害する、密接に関連
したタンパク質または抗体のような、有機低分子、ペプチド、ポリペプチドであ
り得る。
ポリペプチドの活性を阻害するかまたは失わせる、有機低分子、ペプチド、ポリ
ペプチドおよび抗体を含む。潜在的なアンタゴニストはまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド誘導性活性を誘
導することなく、結合分子（例えば、レセプター分子）上の同じ部位に結合し、
それにより、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチドを結合から除外することによりＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドお
よび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの作用を妨害する、密接に関連
したタンパク質または抗体のような、有機低分子、ペプチド、ポリペプチドであ
り得る。
【０２３２】 他の潜在的なアンタゴニストはアンチセンス分子を含む。アンチセンス技術は
、アンチセンスＤＮＡまたはアンチセンスＲＮＡによって、または三重らせん形
成によって、遺伝子発現を制御するために使用され得る。アンチセンス技術は、
多くの研究において議論されている（例えば，Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈ
ｅｍ．５６：５６０（１９９１）；「Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄ
ｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅ
ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．」ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１
９８８）。三重らせん形成が、同様に多くの研究において議論されている（例え
ば、Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３
（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）
；Ｄｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３６０（１９９１））。この方
法は相補的なＤＮＡまたはＲＮＡにポリヌクレオチドを結合させることに基づく
。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’コー
ド部分は、約１０〜４０塩基対の長さのアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチド
を設計するために使用され得る。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関係する
遺伝子領域に相補的であり、それにより、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの転写および産生が防止されるよう
に設計される。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、インビボでｍＲＮＡ
にハイブリダイズし、ｍＲＮＡ分子のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／ま
たはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドへの翻訳をブロックする。上記のオリゴ
ヌクレオチドはまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドの産生を阻害するためにアンチセンスＲＮＡまたはアン
チセンスＤＮＡがインビボで発現され得るように細胞へ送達され得る。
、アンチセンスＤＮＡまたはアンチセンスＲＮＡによって、または三重らせん形
成によって、遺伝子発現を制御するために使用され得る。アンチセンス技術は、
多くの研究において議論されている（例えば，Ｏｋａｎｏ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈ
ｅｍ．５６：５６０（１９９１）；「Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄ
ｅｓ ａｓ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｅ
ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．」ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１
９８８）。三重らせん形成が、同様に多くの研究において議論されている（例え
ば、Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６：３０７３
（１９７９）；Ｃｏｏｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：４５６（１９８８）
；Ｄｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３６０（１９９１））。この方
法は相補的なＤＮＡまたはＲＮＡにポリヌクレオチドを結合させることに基づく
。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの５’コー
ド部分は、約１０〜４０塩基対の長さのアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチド
を設計するために使用され得る。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、転写に関係する
遺伝子領域に相補的であり、それにより、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの転写および産生が防止されるよう
に設計される。アンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドは、インビボでｍＲＮＡ
にハイブリダイズし、ｍＲＮＡ分子のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／ま
たはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドへの翻訳をブロックする。上記のオリゴ
ヌクレオチドはまた、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドおよび／またはＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドの産生を阻害するためにアンチセンスＲＮＡまたはアン
チセンスＤＮＡがインビボで発現され得るように細胞へ送達され得る。
【０２３３】 アゴニストおよびアンタゴニストは、薬学的に受容可能なキャリア（例えば、
上記のもの）を有する組成物において使用され得る。
上記のもの）を有する組成物において使用され得る。
【０２３４】 （遺伝子マッピング） 本発明の核酸分子はまた、染色体同定のために役立つ。配列は、個々のヒト染
色体上の特定の位置へ特異的に標的化されそしてハイブリダイズし得る。さらに
、現在、染色体上の特定の部位を同定する必要性がある。染色体位置をマーキン
グするために現在利用可能な、実際の配列データ（反復多型）に基づく染色体マ
ーキング試薬は、ほとんどない。本発明による染色体へのＤＮＡのマッピングは
、それらの配列を、疾患に関連した遺伝子と相関づけることにおいて重要な第一
歩である。
色体上の特定の位置へ特異的に標的化されそしてハイブリダイズし得る。さらに
、現在、染色体上の特定の部位を同定する必要性がある。染色体位置をマーキン
グするために現在利用可能な、実際の配列データ（反復多型）に基づく染色体マ
ーキング試薬は、ほとんどない。本発明による染色体へのＤＮＡのマッピングは
、それらの配列を、疾患に関連した遺伝子と相関づけることにおいて重要な第一
歩である。
【０２３５】 この点についての特定の好ましい実施態様において、本明細書中で開示される
ｃＤＮＡは、Ｄｅｎｄｒｉａｃ遺伝子および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝
子のゲノムＤＮＡをクローニングするために用いられる。これは、一般的に市販
される、種々の周知の技術およびライブラリーを用いて達成され得る。次いで、
ゲノムＤＮＡが、この目的のために周知の技術を用いて、インサイチュ染色体マ
ッピングのために用いられる。
ｃＤＮＡは、Ｄｅｎｄｒｉａｃ遺伝子および／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝
子のゲノムＤＮＡをクローニングするために用いられる。これは、一般的に市販
される、種々の周知の技術およびライブラリーを用いて達成され得る。次いで、
ゲノムＤＮＡが、この目的のために周知の技術を用いて、インサイチュ染色体マ
ッピングのために用いられる。
【０２３６】 さらに、いくつかの場合において、配列は、ｃＤＮＡからＰＣＲプライマー（
好ましくは、１５〜２５ｂｐ）を調製することにより、染色体にマッピングされ
得る。遺伝子の３’非翻訳領域のコンピューター分析を用いて、ゲノムＤＮＡに
おいて１つを超えるエキソンにまたがらないプライマーを迅速に選択し、従って
、増幅プロセスを複雑化する。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色
体を含有する体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために用いられる。
中期染色体展開物に対するｃＤＮＡクローンの蛍光インサイチュハイブリダイゼ
ーション（「ＦＩＳＨ」）は、一工程で、正確な染色体位置を提供するために用
いられ得る。この技術は、５０または６０ｂｐ程度の短さのｃＤＮＡ由来のプロ
ーブと共に用いられ得る（この技術の概説については、Ｖｅｒｍａら、Ｈｕｍａ
ｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ Ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈ
ｎｉｑｕｅｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）
を参照のこと）。
好ましくは、１５〜２５ｂｐ）を調製することにより、染色体にマッピングされ
得る。遺伝子の３’非翻訳領域のコンピューター分析を用いて、ゲノムＤＮＡに
おいて１つを超えるエキソンにまたがらないプライマーを迅速に選択し、従って
、増幅プロセスを複雑化する。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色
体を含有する体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングのために用いられる。
中期染色体展開物に対するｃＤＮＡクローンの蛍光インサイチュハイブリダイゼ
ーション（「ＦＩＳＨ」）は、一工程で、正確な染色体位置を提供するために用
いられ得る。この技術は、５０または６０ｂｐ程度の短さのｃＤＮＡ由来のプロ
ーブと共に用いられ得る（この技術の概説については、Ｖｅｒｍａら、Ｈｕｍａ
ｎ Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ：Ａ Ｍａｎｕａｌ Ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈ
ｎｉｑｕｅｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）
を参照のこと）。
【０２３７】 一旦、配列が正確な染色体位置にマッピングされると、染色体上の配列の物理
的な位置は、遺伝地図データと相関づけられ得る。このようなデータは、例えば
、ワールドワイドウェブ上で（ＭｃＫｕｓｉｃｋ Ｖ．Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ Ｉ
ｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ Ｉｎ Ｍａｎ、Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖ
ｅｒｓｉｔｙ、Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通してオンライ
ンで入手可能）見出される。次いで、同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子
と疾患との間の関連が、連鎖分析（物理的に隣接した遺伝子の同時遺伝）によっ
て同定される。
的な位置は、遺伝地図データと相関づけられ得る。このようなデータは、例えば
、ワールドワイドウェブ上で（ＭｃＫｕｓｉｃｋ Ｖ．Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ Ｉ
ｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ Ｉｎ Ｍａｎ、Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖ
ｅｒｓｉｔｙ、Ｗｅｌｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙを通してオンライ
ンで入手可能）見出される。次いで、同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子
と疾患との間の関連が、連鎖分析（物理的に隣接した遺伝子の同時遺伝）によっ
て同定される。
【０２３８】 次に、罹患個体と非罹患個体との間でのｃＤＮＡまたはゲノム配列における差
異を決定することが必要である。変異が罹患個体のいくらかまたは全てにおいて
認められるが、いずれの正常個体でも認められない場合、変異は、疾患の原因因
子である可能性がある。
異を決定することが必要である。変異が罹患個体のいくらかまたは全てにおいて
認められるが、いずれの正常個体でも認められない場合、変異は、疾患の原因因
子である可能性がある。
【０２３９】 本発明を一般的に記載してきたが、本発明は、以下の実施例を参照することに
より、より容易に理解される。以下の実施例は、例示のために提供され、限定す
ることは意図されない。
より、より容易に理解される。以下の実施例は、例示のために提供され、限定す
ることは意図されない。
【０２４０】 （実施例） （実施例１：Ｅ．ｃｏｌｉにおける「Ｈｉｓタグ化」Ｄｅｎｄｒｉａｃの発現
および精製） 細菌性発現ベクターの新規のｐＨＥ４系列、特にｐＨＥ４−５ベクターを、本
実施例の細菌性発現のために使用し得る（ＱＩＡＧＥＮ、Ｉｎｃ．，９２５９
Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ、９１３１１）。ｐＨＥ
４−５／ＭＰＩＦＤ２３ベクターのプラスミドＤＮＡは、別のＯＲＦをコードす
るインサートを含む。この構築物は、アメリカンタイプカルチャーコレクション
、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ
、Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０９に、１９９７年９月３０日に寄託さ
れ、登録番号２０９３１１を得た。無関係なＭＰＩＦ ＯＲＦインサートに隣接
する制限酵素部位ＮｄｅＩおよびＡｓｐ７１８を用いて、当業者は、現在の分子
生物学的技術を容易に用いて、ｐＨＥ４−５ベクター中の無関係なＯＲＦを本発
明のＤｅｎｄｒｉａｃＯＲＦまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ＯＲＦにおきかえ得る
。
および精製） 細菌性発現ベクターの新規のｐＨＥ４系列、特にｐＨＥ４−５ベクターを、本
実施例の細菌性発現のために使用し得る（ＱＩＡＧＥＮ、Ｉｎｃ．，９２５９
Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ、９１３１１）。ｐＨＥ
４−５／ＭＰＩＦＤ２３ベクターのプラスミドＤＮＡは、別のＯＲＦをコードす
るインサートを含む。この構築物は、アメリカンタイプカルチャーコレクション
、１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ、Ｍａｎａｓｓａｓ
、Ｖｉｒｇｉｎｉａ ２０１１０−２２０９に、１９９７年９月３０日に寄託さ
れ、登録番号２０９３１１を得た。無関係なＭＰＩＦ ＯＲＦインサートに隣接
する制限酵素部位ＮｄｅＩおよびＡｓｐ７１８を用いて、当業者は、現在の分子
生物学的技術を容易に用いて、ｐＨＥ４−５ベクター中の無関係なＯＲＦを本発
明のＤｅｎｄｒｉａｃＯＲＦまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ＯＲＦにおきかえ得る
。
【０２４１】 ｐＨＥ４−５細菌性発現ベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉの複製起点、Ｔ５ファージ
プロモーター配列、２つのｌａｃオペレーター配列、Ｓｈｉｎｅ−Ｄｅｌｇａｒ
ｎｏ配列およびラクトースオペロンリプレッサー遺伝子（ｌａｃＩｑ）選択のた
めのネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子を含む。これらのエレメント
は、ポリペプチドをコードする挿入されたＤＮＡフラグメントが、そのポリペプ
チドのアミノ末端に共有結合的に結合した６つのＨｉｓ残基（すなわち、「６Ｘ
Ｈｉｓ ｔａｇ」）を有するポリペプチドを発現するように配列される。ｐＨ
Ｅ４−５ベクターのプロモーターおよびオペレーター配列を、合成的に作製した
。核酸配列の合成産物は、当該分野において周知である（ＣＬＯＮＥＴＥＣＨ
９５／９６ カタログ、２１５−２１６頁、ＣＬＯＮＥＴＥＣＨ、１０２０ Ｅ
ａｓｔ Ｍｅａｄｏｗ Ｃｉｒｃｌｅ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ ９４３０３
）。
プロモーター配列、２つのｌａｃオペレーター配列、Ｓｈｉｎｅ−Ｄｅｌｇａｒ
ｎｏ配列およびラクトースオペロンリプレッサー遺伝子（ｌａｃＩｑ）選択のた
めのネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子を含む。これらのエレメント
は、ポリペプチドをコードする挿入されたＤＮＡフラグメントが、そのポリペプ
チドのアミノ末端に共有結合的に結合した６つのＨｉｓ残基（すなわち、「６Ｘ
Ｈｉｓ ｔａｇ」）を有するポリペプチドを発現するように配列される。ｐＨ
Ｅ４−５ベクターのプロモーターおよびオペレーター配列を、合成的に作製した
。核酸配列の合成産物は、当該分野において周知である（ＣＬＯＮＥＴＥＣＨ
９５／９６ カタログ、２１５−２１６頁、ＣＬＯＮＥＴＥＣＨ、１０２０ Ｅ
ａｓｔ Ｍｅａｄｏｗ Ｃｉｒｃｌｅ、Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ、ＣＡ ９４３０３
）。
【０２４２】 Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配列の成熟形態を含むＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドの所望の部分をコードするＤＮＡ配列は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの所
望の部分のアミノ末端配列、および寄託された構築物におけるｃＤＮＡコード配
列に対して３’側の配列にアニーリングするＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマ
ーを用いて、寄託されたｃＤＮＡクローンから増幅される。ｐＨＥ４−５ベクタ
ーにおけるクローニングを容易にする制限部位を含むさらなるヌクレオチドは、
それぞれ、５’および３’プライマー配列に付加される。
ドの所望の部分をコードするＤＮＡ配列は、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの所
望の部分のアミノ末端配列、および寄託された構築物におけるｃＤＮＡコード配
列に対して３’側の配列にアニーリングするＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマ
ーを用いて、寄託されたｃＤＮＡクローンから増幅される。ｐＨＥ４−５ベクタ
ーにおけるクローニングを容易にする制限部位を含むさらなるヌクレオチドは、
それぞれ、５’および３’プライマー配列に付加される。
【０２４３】 成熟形態のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをクローニングするために、５’プ
ライマーは、下線を付したＢａｍＨＩ制限部位、続いて配列番号２および配列番
号１０の成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃ配列のアミノ末端コード配列の１８ヌクレオチド
を含む、配列５’ＣＡＡＴＴＧＧＡＴＣＣＣＴＴＣＣＣＣＡＣＴＡＣＡＡＴＧＴ
Ｇ３’（配列番号１３）を有する。当然、タンパク質コード配列において、５’
プライマーが始まる点は、このポリペプチドの成熟形態より短いかまたは長い、
完全なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの任意の所望の部分をコードするＤＮＡセ
グメントを増幅するために変動し得ることを、当業者は理解する。３’プライマ
ーは、下線を付したＨｉｎｄ ＩＩＩ制限部位、続いて図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃ
（および配列番号１中のそして配列番号９中の）に示したＤｅｎｄｒｉａｃ Ｄ
ＮＡ配列のコード配列の３’末端の配列に相補的な１７ヌクレオチドを含む、配
列５’ＧＴＡＣＧＣＡＡＧＡＴＡＡＴＧＧＣＡＴＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣ３’（配
列番号１４）を有する。
ライマーは、下線を付したＢａｍＨＩ制限部位、続いて配列番号２および配列番
号１０の成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃ配列のアミノ末端コード配列の１８ヌクレオチド
を含む、配列５’ＣＡＡＴＴＧＧＡＴＣＣＣＴＴＣＣＣＣＡＣＴＡＣＡＡＴＧＴ
Ｇ３’（配列番号１３）を有する。当然、タンパク質コード配列において、５’
プライマーが始まる点は、このポリペプチドの成熟形態より短いかまたは長い、
完全なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの任意の所望の部分をコードするＤＮＡセ
グメントを増幅するために変動し得ることを、当業者は理解する。３’プライマ
ーは、下線を付したＨｉｎｄ ＩＩＩ制限部位、続いて図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃ
（および配列番号１中のそして配列番号９中の）に示したＤｅｎｄｒｉａｃ Ｄ
ＮＡ配列のコード配列の３’末端の配列に相補的な１７ヌクレオチドを含む、配
列５’ＧＴＡＣＧＣＡＡＧＡＴＡＡＴＧＧＣＡＴＧＴＧＧＴＧＴＴＣＣ３’（配
列番号１４）を有する。
【０２４４】 増幅されたＤｅｎｄｒｉａｃ ＤＮＡフラグメントおよびｐＨＥ４−５ベクタ
ーは、ＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄ ＩＩＩで消化され、次いで消化されたＤＮＡ
は、一緒に連結される。制限処理されたｐＨＥ４−５ベクターへＤｅｎｄｒｉａ
ｃ ＤＮＡを挿入することによって、ＩＰＴＧ誘導性プロモーターの下流および
開始ＡＵＧおよび６つのヒスチジンコドンにインフレームに、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドコード領域を配置する。
ーは、ＢａｍＨＩおよびＨｉｎｄ ＩＩＩで消化され、次いで消化されたＤＮＡ
は、一緒に連結される。制限処理されたｐＨＥ４−５ベクターへＤｅｎｄｒｉａ
ｃ ＤＮＡを挿入することによって、ＩＰＴＧ誘導性プロモーターの下流および
開始ＡＵＧおよび６つのヒスチジンコドンにインフレームに、Ｄｅｎｄｒｉａｃ
ポリペプチドコード領域を配置する。
【０２４５】 当業者は、同様のアプローチが、Ｅ．ｃｏｌｉでのＢｒａｉｎｉａｃ−３の発
現のために、ｐＨＥ４−５に基づいた細菌性発現構築物を作製するために容易に
設計および利用し得ることを理解する。これは、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３に対する
遺伝子特異的配列が結合された同様の制限エンドヌクレアーゼ認識配列を含む、
ＰＣＲプライマーを設計することによって行なわれ、そして前述のＤｅｎｄｒｉ
ａｃについて述べたように進められる。
現のために、ｐＨＥ４−５に基づいた細菌性発現構築物を作製するために容易に
設計および利用し得ることを理解する。これは、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３に対する
遺伝子特異的配列が結合された同様の制限エンドヌクレアーゼ認識配列を含む、
ＰＣＲプライマーを設計することによって行なわれ、そして前述のＤｅｎｄｒｉ
ａｃについて述べたように進められる。
【０２４６】 連結混合物を、Ｓａｍｂｒｏｏｋおよび共同研究者ら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版；Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９８９））に記載される手順のような
標準的な手順を用いて、コンピテントなＥ．ｃｏｌｉ細胞に形質転換する。複数
のプラスミドｐＲＥＰ４のコピー（これは、ｌａｃリプレッサーを発現し、そし
てカナマイシン耐性（「Ｋａｎｒ」）を付与する）を含有するＥ．ｃｏｌｉ株Ｍ
１５／ｒｅｐ４を本明細書中に記載の例示的実施例を行うにあたって使用する。
この株（これは、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを発現するために適切である多
くの株の内の唯一の株である）は、市販されている（ＱＩＡＧＥＮ Ｉｎｃ．（
前出））。形質転換体を、アンピシリンおよびカナマイシンの存在下でＬＢプレ
ート上で増殖するそれらの能力により同定する。プラスミドＤＮＡを耐性コロニ
ーから単離し、そしてクローニングされたＤＮＡの同一性を、制限分析、ＰＣＲ
およびＤＮＡ配列決定により確認する。
Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版；Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９８９））に記載される手順のような
標準的な手順を用いて、コンピテントなＥ．ｃｏｌｉ細胞に形質転換する。複数
のプラスミドｐＲＥＰ４のコピー（これは、ｌａｃリプレッサーを発現し、そし
てカナマイシン耐性（「Ｋａｎｒ」）を付与する）を含有するＥ．ｃｏｌｉ株Ｍ
１５／ｒｅｐ４を本明細書中に記載の例示的実施例を行うにあたって使用する。
この株（これは、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを発現するために適切である多
くの株の内の唯一の株である）は、市販されている（ＱＩＡＧＥＮ Ｉｎｃ．（
前出））。形質転換体を、アンピシリンおよびカナマイシンの存在下でＬＢプレ
ート上で増殖するそれらの能力により同定する。プラスミドＤＮＡを耐性コロニ
ーから単離し、そしてクローニングされたＤＮＡの同一性を、制限分析、ＰＣＲ
およびＤＮＡ配列決定により確認する。
【０２４７】 所望の構築物を含むクローンを、アンピシリン（１００μｇ／ｍｌ）およびカ
ナマイシン（２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養物中
で一晩（「Ｏ／Ｎ」）増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を用いて約１：２５〜１：２５
０の希釈で大規模培養物に接種する。細胞を、６００ｎｍでの光学密度（「ＯＤ
６００」）が、０．４と０．６との間になるまで増殖させる。次いで、イソプロ
ピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（「ＩＰＴＧ」）を１ｍＭの最終濃度で
加えて、ｌａｃＩリプレッサーを不活化することにより、ｌａｃリプレッサー感
受性プロモーターからの転写を誘導する。細胞をさらに３時間から４時間の間、
引き続きインキュベートする。次いで細胞を遠心分離により採集する。
ナマイシン（２５μｇ／ｍｌ）の両方を補充したＬＢ培地における液体培養物中
で一晩（「Ｏ／Ｎ」）増殖させる。Ｏ／Ｎ培養物を用いて約１：２５〜１：２５
０の希釈で大規模培養物に接種する。細胞を、６００ｎｍでの光学密度（「ＯＤ
６００」）が、０．４と０．６との間になるまで増殖させる。次いで、イソプロ
ピル−β−Ｄ−チオガラクトピラノシド（「ＩＰＴＧ」）を１ｍＭの最終濃度で
加えて、ｌａｃＩリプレッサーを不活化することにより、ｌａｃリプレッサー感
受性プロモーターからの転写を誘導する。細胞をさらに３時間から４時間の間、
引き続きインキュベートする。次いで細胞を遠心分離により採集する。
【０２４８】 次いで、細胞を６Ｍグアニジン−ＨＣｌ（ｐＨ８）中で、４℃にて３〜４時間
撹拌する。細胞細片を遠心分離により除去し、そしてＤｅｎｄｒｉａｃポリペプ
チドを含む上清をニッケル−ニトリロ−三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニテ
ィー樹脂カラム（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．前出）にロードする。６×Ｈｉｓ タ
グを有するタンパク質は、高い親和性でＮｉ−ＮＴＡ樹脂に結合し、そして、単
純な一工程手順で精製され得る（詳細については、Ｔｈｅ ＱＩＡｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎｉｓｔ，１９９５，ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．前出を参照のこと）。簡単
にいうと、この上清を６Ｍグアニジン−ＨＣｌ（ｐＨ８）中のカラムにロードす
る。このカラムを、最初に１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ（ｐＨ８）で洗浄
し、次いで１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ（ｐＨ６）で洗浄し、そして最終
的に、このＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを６Ｍグアニジン−ＨＣｌ（ｐＨ５）
で溶出する。
撹拌する。細胞細片を遠心分離により除去し、そしてＤｅｎｄｒｉａｃポリペプ
チドを含む上清をニッケル−ニトリロ−三酢酸（「Ｎｉ−ＮＴＡ」）アフィニテ
ィー樹脂カラム（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．前出）にロードする。６×Ｈｉｓ タ
グを有するタンパク質は、高い親和性でＮｉ−ＮＴＡ樹脂に結合し、そして、単
純な一工程手順で精製され得る（詳細については、Ｔｈｅ ＱＩＡｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎｉｓｔ，１９９５，ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．前出を参照のこと）。簡単
にいうと、この上清を６Ｍグアニジン−ＨＣｌ（ｐＨ８）中のカラムにロードす
る。このカラムを、最初に１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ（ｐＨ８）で洗浄
し、次いで１０容量の６Ｍグアニジン−ＨＣｌ（ｐＨ６）で洗浄し、そして最終
的に、このＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを６Ｍグアニジン−ＨＣｌ（ｐＨ５）
で溶出する。
【０２４９】 次いで、この精製ポリペプチドを、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）または
５０ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６）および２００ｍＭ ＮａＣｌに対し
てそのポリペプチドを透析することにより再生する。あるいは、タンパク質をＮ
ｉ−ＮＴＡカラムに固定する間に、首尾良く再び折り畳みさせ得る。推奨する条
件は次のようである：プロテアーゼインヒビターを含む、５００ｍＭ ＮａＣｌ
、２０％グリセロール、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ７．４）中で、６Ｍ
〜１Ｍ尿素への直線勾配を使用する再生。再生は１．５時間以上の期間にわたり
実施すべきである。再生後、このタンパク質を２５０ｍＭのイミダゾールの添加
により溶出し得る。イミダゾールを、ＰＢＳまたは５０ｍＭ 酢酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ６）および２００ｍＭ ＮａＣｌに対する最終透析工程により除去す
る。精製タンパク質は４℃で保存するかまたは−８０℃で凍結する。
５０ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６）および２００ｍＭ ＮａＣｌに対し
てそのポリペプチドを透析することにより再生する。あるいは、タンパク質をＮ
ｉ−ＮＴＡカラムに固定する間に、首尾良く再び折り畳みさせ得る。推奨する条
件は次のようである：プロテアーゼインヒビターを含む、５００ｍＭ ＮａＣｌ
、２０％グリセロール、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ７．４）中で、６Ｍ
〜１Ｍ尿素への直線勾配を使用する再生。再生は１．５時間以上の期間にわたり
実施すべきである。再生後、このタンパク質を２５０ｍＭのイミダゾールの添加
により溶出し得る。イミダゾールを、ＰＢＳまたは５０ｍＭ 酢酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ６）および２００ｍＭ ＮａＣｌに対する最終透析工程により除去す
る。精製タンパク質は４℃で保存するかまたは−８０℃で凍結する。
【０２５０】 次の代替方法は、封入体の形態で存在する場合、Ｅ ｃｏｌｉ中に発現したＤ
ｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを精製するために使用され得る。他に明記されない
限り、以下の全ての工程は４〜１０℃で実施される。
ｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを精製するために使用され得る。他に明記されない
限り、以下の全ての工程は４〜１０℃で実施される。
【０２５１】 Ｅ．ｃｏｌｉ発酵の産生相の完了に際して、細胞培養物を４〜１０℃まで冷却
し、そして細胞を、１５，０００ｒｐｍの連続的な遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ
Ｓｅｐａｔｅｃｈ）により採集する。細胞ペーストの単位重量あたりで期待され
るタンパク質の収量および要求される精製タンパク質量に基づいて、適切な量（
重量）の細胞ペーストを、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ７
．４）を含む緩衝溶液中で懸濁する。細胞を高剪断ミキサーを使用して、均一な
懸濁液になるまで分散させる。
し、そして細胞を、１５，０００ｒｐｍの連続的な遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ
Ｓｅｐａｔｅｃｈ）により採集する。細胞ペーストの単位重量あたりで期待され
るタンパク質の収量および要求される精製タンパク質量に基づいて、適切な量（
重量）の細胞ペーストを、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ７
．４）を含む緩衝溶液中で懸濁する。細胞を高剪断ミキサーを使用して、均一な
懸濁液になるまで分散させる。
【０２５２】 次いで細胞を、４０００〜６０００ｐｓｉで２回、マイクロフルイダイザー（
Ｍｉｃｒｏｆｕｉｄｉｃｓ，Ｃｏｒｐ．またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ．
）を介して溶液を通過させることにより溶解した。次いで、ホモジネートを、０
．５Ｍ ＮａＣｌの最終濃度までＮａＣｌ溶液と混合し、次いで、１５分間、７
０００×ｇで遠心分離する。得られたペレットを０．５Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）を使用して、再び洗浄する。
Ｍｉｃｒｏｆｕｉｄｉｃｓ，Ｃｏｒｐ．またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ．
）を介して溶液を通過させることにより溶解した。次いで、ホモジネートを、０
．５Ｍ ＮａＣｌの最終濃度までＮａＣｌ溶液と混合し、次いで、１５分間、７
０００×ｇで遠心分離する。得られたペレットを０．５Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）を使用して、再び洗浄する。
【０２５３】 生じた洗浄封入体を、２〜４時間、１．５Ｍの塩酸グアニジン（ＧｕＨＣｌ）
を用いて可溶化する。１５分間の７０００×ｇでの遠心分離後、ペレットを捨て
、そして、さらなるＧｕＨＣｌ抽出を可能にするために、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドを含む上清を一晩４℃でインキュベートする。
を用いて可溶化する。１５分間の７０００×ｇでの遠心分離後、ペレットを捨て
、そして、さらなるＧｕＨＣｌ抽出を可能にするために、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドを含む上清を一晩４℃でインキュベートする。
【０２５４】 不溶性粒子を除去するための高速遠心分離（３０，０００×ｇ）に続いて、Ｇ
ｕＨＣｌ抽出物を５０ｍＭナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴ
Ａを含む２０容量の緩衝液（ｐＨ４．５）と激しい撹拌によって迅速に混合する
ことにより、ＧｕＨＣｌ可溶化タンパク質を、再び折り畳む。再び折り畳まれ、
希釈されたタンパク質溶液を、さらなる精製工程前の１２時間、混合することな
く４℃に保つ。
ｕＨＣｌ抽出物を５０ｍＭナトリウム、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴ
Ａを含む２０容量の緩衝液（ｐＨ４．５）と激しい撹拌によって迅速に混合する
ことにより、ＧｕＨＣｌ可溶化タンパク質を、再び折り畳む。再び折り畳まれ、
希釈されたタンパク質溶液を、さらなる精製工程前の１２時間、混合することな
く４℃に保つ。
【０２５５】 再び折り畳まれたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチド溶液を明澄化するために、予
め調製した、適切な表面積を有する０．１６μｍ膜フィルターを備え、４０ｍＭ
の酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）で平衡化した接線（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ）濾
過ユニット（例えば、Ｆｉｌｔｒｏｎ）を使用する。濾過サンプルを陽イオン交
換樹脂（例えば、Ｐｏｒｏｓ ＨＳ−５０、Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ）にロードする。カラムを４０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）
で洗浄し、そして段階的な様式で、同じ緩衝液中の２５０ｍＭ、５００ｍＭ、１
０００ｍＭ、および１５００ｍＭ ＮａＣｌで溶出した。溶出物の２８０ｎｍの
吸光度を連続的にモニタリングした。画分を採集し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりさ
らに分析した。
め調製した、適切な表面積を有する０．１６μｍ膜フィルターを備え、４０ｍＭ
の酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）で平衡化した接線（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ）濾
過ユニット（例えば、Ｆｉｌｔｒｏｎ）を使用する。濾過サンプルを陽イオン交
換樹脂（例えば、Ｐｏｒｏｓ ＨＳ−５０、Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ）にロードする。カラムを４０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）
で洗浄し、そして段階的な様式で、同じ緩衝液中の２５０ｍＭ、５００ｍＭ、１
０００ｍＭ、および１５００ｍＭ ＮａＣｌで溶出した。溶出物の２８０ｎｍの
吸光度を連続的にモニタリングした。画分を採集し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりさ
らに分析した。
【０２５６】 次いで、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを含む画分をプールし、そして４容量
の水と混合する。次いで、希釈サンプルを強陰イオン交換樹脂（Ｐｏｒｏｓ Ｈ
Ｑ−５０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および弱陰イオン交
換樹脂（Ｐｏｒｏｓ ＣＭ−２０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ
ｓ）の予め調製した１組の直列型カラムにロードする。カラムを４０ｍＭの酢酸
ナトリウム（ｐＨ６．０）で平衡化する。両方のカラムを４０ｍＭの酢酸ナトリ
ウム（ｐＨ６．０）、２００ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いで、ＣＭ−２０カ
ラムを、０．２Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）〜１．０
Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ６．５）の範囲で、１０カラム容
量の直線勾配を使用して溶出する。画分を、溶出物の一定のＡ280モニター下で 採集する。次いで、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを含む画分（例えば、１６％
ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより決定した）をプールする。
の水と混合する。次いで、希釈サンプルを強陰イオン交換樹脂（Ｐｏｒｏｓ Ｈ
Ｑ−５０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および弱陰イオン交
換樹脂（Ｐｏｒｏｓ ＣＭ−２０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ
ｓ）の予め調製した１組の直列型カラムにロードする。カラムを４０ｍＭの酢酸
ナトリウム（ｐＨ６．０）で平衡化する。両方のカラムを４０ｍＭの酢酸ナトリ
ウム（ｐＨ６．０）、２００ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いで、ＣＭ−２０カ
ラムを、０．２Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）〜１．０
Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ６．５）の範囲で、１０カラム容
量の直線勾配を使用して溶出する。画分を、溶出物の一定のＡ280モニター下で 採集する。次いで、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを含む画分（例えば、１６％
ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより決定した）をプールする。
【０２５７】 生じたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドは、上記の再折り畳み工程および精製工
程後、９５％を超える純度を示す。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合
、主な夾雑物のバンドは、クーマーシーブルー染色した１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅゲルから観察されない。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ夾雑
について試験され、そして代表的にＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイによれば０．１
ｎｇ／ｍｌ未満である。
程後、９５％を超える純度を示す。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合
、主な夾雑物のバンドは、クーマーシーブルー染色した１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅゲルから観察されない。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ夾雑
について試験され、そして代表的にＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイによれば０．１
ｎｇ／ｍｌ未満である。
【０２５８】 次の代替方法は、封入体の形態で存在する場合、Ｅ ｃｏｌｉ中に発現したＤ
ｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを精製するために使用され得る。他に明記されない
限り、以下の全ての工程は４〜１０℃で実施される。
ｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを精製するために使用され得る。他に明記されない
限り、以下の全ての工程は４〜１０℃で実施される。
【０２５９】 Ｅ．ｃｏｌｉ発酵の産生相の完了に際して、細胞培養物を４〜１０℃まで冷却
し、そして細胞を、１５，０００ｒｐｍの連続的な遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ
Ｓｅｐａｔｅｃｈ）により採集する。細胞ペーストの単位重量あたりで期待され
るタンパク質の収量、および要求される精製タンパク質量に基づいて、適切な量
（重量）の細胞ペーストを、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ
７．４）を含む緩衝溶液中で懸濁する。細胞を高剪断ミキサーを使用して、均一
な懸濁液になるまで分散させる。
し、そして細胞を、１５，０００ｒｐｍの連続的な遠心分離（Ｈｅｒａｅｕｓ
Ｓｅｐａｔｅｃｈ）により採集する。細胞ペーストの単位重量あたりで期待され
るタンパク質の収量、および要求される精製タンパク質量に基づいて、適切な量
（重量）の細胞ペーストを、１００ｍＭ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ
７．４）を含む緩衝溶液中で懸濁する。細胞を高剪断ミキサーを使用して、均一
な懸濁液になるまで分散させる。
【０２６０】 次いで細胞を、４０００〜６０００ｐｓｉで２回、マイクロフルイダイザー（
Ｍｉｃｒｏｆｕｉｄｉｃｓ，Ｃｏｒｐ．またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ．
）を介して溶液を通過させることにより溶解した。次いで、ホモジネートを、０
．５Ｍ ＮａＣｌの最終濃度までＮａＣｌ溶液と混合し、次いで、１５分間、７
０００×ｇで遠心分離する。得られたペレットを０．５Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）を使用して、再び洗浄する。
Ｍｉｃｒｏｆｕｉｄｉｃｓ，Ｃｏｒｐ．またはＡＰＶ Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ．
）を介して溶液を通過させることにより溶解した。次いで、ホモジネートを、０
．５Ｍ ＮａＣｌの最終濃度までＮａＣｌ溶液と混合し、次いで、１５分間、７
０００×ｇで遠心分離する。得られたペレットを０．５Ｍ ＮａＣｌ、１００ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ、５０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）を使用して、再び洗浄する。
【０２６１】 生じた洗浄封入体を、２〜４時間、１．５Ｍの塩酸グアニジン（ＧｕＨＣｌ）
を用いて可溶化する。１５分間の７０００×ｇでの遠心分離後、ペレットを捨て
、そして、さらなるＧｕＨＣｌ抽出を可能にするために、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドを含む上清を一晩４℃でインキュベートする。
を用いて可溶化する。１５分間の７０００×ｇでの遠心分離後、ペレットを捨て
、そして、さらなるＧｕＨＣｌ抽出を可能にするために、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリ
ペプチドを含む上清を一晩４℃でインキュベートする。
【０２６２】 不溶性粒子を除去するための高速遠心分離（３０，０００×ｇ）に続いて、Ｇ
ｕＨＣｌ抽出物を５０ｍＭナトリウム（ｐＨ４．５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、
２ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０容量の緩衝液と激しい撹拌によって迅速に混合する
ことにより、ＧｕＨＣｌ可溶化タンパク質を、再び折り畳む。再び折り畳まれ、
希釈されたタンパク質溶液を、さらなる精製工程前の１２時間、混合することな
く４℃に保つ。
ｕＨＣｌ抽出物を５０ｍＭナトリウム（ｐＨ４．５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、
２ｍＭ ＥＤＴＡを含む２０容量の緩衝液と激しい撹拌によって迅速に混合する
ことにより、ＧｕＨＣｌ可溶化タンパク質を、再び折り畳む。再び折り畳まれ、
希釈されたタンパク質溶液を、さらなる精製工程前の１２時間、混合することな
く４℃に保つ。
【０２６３】 再び折り畳まれたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチド溶液を明澄化するために、予
め調製した、適切な表面積を有する０．１６μｍ膜フィルターを備え、４０ｍＭ
の酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）で平衡化した接線（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ）濾
過ユニット（例えば、Ｆｉｌｔｒｏｎ）を使用する。濾過サンプルを陽イオン交
換樹脂（例えば、Ｐｏｒｏｓ ＨＳ−５０、Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ）にロードする。カラムを４０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）
で洗浄し、そして段階的な様式で、同じ緩衝液中の２５０ｍＭ、５００ｍＭ、１
０００ｍＭ、および１５００ｍＭ ＮａＣｌで溶出した。溶出物の２８０ｎｍの
吸光度を連続的にモニタリングした。画分を採集し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりさ
らに分析した。
め調製した、適切な表面積を有する０．１６μｍ膜フィルターを備え、４０ｍＭ
の酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）で平衡化した接線（ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ）濾
過ユニット（例えば、Ｆｉｌｔｒｏｎ）を使用する。濾過サンプルを陽イオン交
換樹脂（例えば、Ｐｏｒｏｓ ＨＳ−５０、Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ）にロードする。カラムを４０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）
で洗浄し、そして段階的な様式で、同じ緩衝液中の２５０ｍＭ、５００ｍＭ、１
０００ｍＭ、および１５００ｍＭ ＮａＣｌで溶出した。溶出物の２８０ｎｍの
吸光度を連続的にモニタリングした。画分を採集し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによりさ
らに分析した。
【０２６４】 次いで、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを含む画分をプールし、４容量の水と
混合する。次いで、希釈サンプルを強陰イオン交換樹脂（Ｐｏｒｏｓ ＨＱ−５
０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および弱陰イオン交換樹脂
（Ｐｏｒｏｓ ＣＭ−２０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の
予め調製した１組の直列型カラムにロードする。カラムを４０ｍＭの酢酸ナトリ
ウム（ｐＨ６．０）で平衡化する。両方のカラムを４０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐ
Ｈ６．０）、２００ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いで、ＣＭ−２０カラムを、
０．２Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）〜１．０Ｍ Ｎａ
Ｃｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ６．５）の範囲で、１０カラム容量の直線
勾配を使用して溶出する。画分を、溶出物の一定のＡ280モニター下で採集する 。次いで、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを含む画分（例えば、１６％ ＳＤＳ
−ＰＡＧＥにより決定した）をプールする。
混合する。次いで、希釈サンプルを強陰イオン交換樹脂（Ｐｏｒｏｓ ＨＱ−５
０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）および弱陰イオン交換樹脂
（Ｐｏｒｏｓ ＣＭ−２０，Ｐｅｒｓｅｐｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の
予め調製した１組の直列型カラムにロードする。カラムを４０ｍＭの酢酸ナトリ
ウム（ｐＨ６．０）で平衡化する。両方のカラムを４０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐ
Ｈ６．０）、２００ｍＭ ＮａＣｌで洗浄する。次いで、ＣＭ−２０カラムを、
０．２Ｍ ＮａＣｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ６．０）〜１．０Ｍ Ｎａ
Ｃｌ、５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ６．５）の範囲で、１０カラム容量の直線
勾配を使用して溶出する。画分を、溶出物の一定のＡ280モニター下で採集する 。次いで、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを含む画分（例えば、１６％ ＳＤＳ
−ＰＡＧＥにより決定した）をプールする。
【０２６５】 生じたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドは、上記の再折り畳み工程および精製工
程後、９５％を超える純度を示す。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合
、主な夾雑物のバンドは、クーマーシーブルー染色した１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅゲルから観察されない。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ夾雑
について試験され、そして代表的にＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイによれば０．１
ｎｇ／ｍｌ未満である。
程後、９５％を超える純度を示す。５μｇの精製タンパク質がロードされる場合
、主な夾雑物のバンドは、クーマーシーブルー染色した１６％ ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅゲルから観察されない。精製タンパク質はまた、エンドトキシン／ＬＰＳ夾雑
について試験され、そして代表的にＬＰＳ含量はＬＡＬアッセイによれば０．１
ｎｇ／ｍｌ未満である。
【０２６６】 （実施例２：バキュロウイルス発現系におけるＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチド
のクローニングおよび発現） この例示的実施例において、プラスミドシャトルベクターｐＡ２を用いて、そ
の天然で会合している分泌シグナル（リーダー）配列を含む、完全なポリペプチ
ドをコードするクローニングされたＤＮＡを、成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドを発現するために、バキュロウイルスに、Ｓｕｍｍｅｒｓら、および同僚（Ａ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖ
ｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅ
ｄｕｒｅｓ、Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ 第１５５５号（１９８７））によって
記載されたような標準的な方法を用いて挿入する。この発現ベクターは、Ａｕｔ
ｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）
の強力なポリヘドリンプロモーターを含み、続いて、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、お
よびＡｓｐ７１８のような都合良い制限部位を含む。シミアンウイルス４０（「
ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のために用いる
。組換えウイルスの平易な選択のために、プラスミドは、同じ方向で、弱いＤｒ
ｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下において、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のβ−ガラ
クトシダーゼ遺伝子を含み、次いで、ポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグ
ナルを含む。挿入遺伝子は、野生型ウイルスのＤＮＡとの細胞媒介性相同組換え
のために両側にウイルス配列を隣接し、クローニングされたポリヌクレオチドを
発現する生存ウイルスを生成する。
のクローニングおよび発現） この例示的実施例において、プラスミドシャトルベクターｐＡ２を用いて、そ
の天然で会合している分泌シグナル（リーダー）配列を含む、完全なポリペプチ
ドをコードするクローニングされたＤＮＡを、成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチ
ドを発現するために、バキュロウイルスに、Ｓｕｍｍｅｒｓら、および同僚（Ａ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｂａｃｕｌｏｖｉｒｕｓ Ｖ
ｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｉｎｓｅｃｔ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｒｏｃｅ
ｄｕｒｅｓ、Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａ
ｌ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ 第１５５５号（１９８７））によって
記載されたような標準的な方法を用いて挿入する。この発現ベクターは、Ａｕｔ
ｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）
の強力なポリヘドリンプロモーターを含み、続いて、ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、お
よびＡｓｐ７１８のような都合良い制限部位を含む。シミアンウイルス４０（「
ＳＶ４０」）のポリアデニル化部位を、効率的なポリアデニル化のために用いる
。組換えウイルスの平易な選択のために、プラスミドは、同じ方向で、弱いＤｒ
ｏｓｏｐｈｉｌａプロモーターの制御下において、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のβ−ガラ
クトシダーゼ遺伝子を含み、次いで、ポリヘドリン遺伝子のポリアデニル化シグ
ナルを含む。挿入遺伝子は、野生型ウイルスのＤＮＡとの細胞媒介性相同組換え
のために両側にウイルス配列を隣接し、クローニングされたポリヌクレオチドを
発現する生存ウイルスを生成する。
【０２６７】 当業者に容易に理解されるように、構築物が、必要に応じて、シグナルペプチ
ドおよびインフレームのＡＵＧを含む、転写、翻訳、分泌などのための適切に配
置されたシグナルを提供する限り、多くの他のバキュロウイルスベクターを、上
記のベクター（例えば、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１、およびｐＡｃＩＭ１）の
代わりに用い得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃｋｏｗおよび共同研
究者（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１〜３９（１９８９））によってに記載さ
れる。
ドおよびインフレームのＡＵＧを含む、転写、翻訳、分泌などのための適切に配
置されたシグナルを提供する限り、多くの他のバキュロウイルスベクターを、上
記のベクター（例えば、ｐＡｃ３７３、ｐＶＬ９４１、およびｐＡｃＩＭ１）の
代わりに用い得る。このようなベクターは、例えば、Ｌｕｃｋｏｗおよび共同研
究者（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：３１〜３９（１９８９））によってに記載さ
れる。
【０２６８】 寄託されたクローン中の、全長のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードする
ｃＤＮＡ配列（ＡＵＧ開始コドン、ならびに配列番号２および配列番号１０に示
される天然に付随するリーダー配列を含む）を、この遺伝子の５’配列および３
’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅する。この
５’プライマーは、真核生物細胞における翻訳を開始するための効率的なシグナ
ルである下線を付したＢａｍＨＩ制限酵素部位を含む配列５’ＣＧＣ ＧＧＡ ＴＣＣ ＧＣＣ ＡＴＣ ＡＴＧ ＴＣＡ ＣＴＧ ＡＧＡ ＴＣＣ Ｃ ３’
（配列番号１５）を有し（（イタリックで示される）；Ｋｏｚａｋ，Ｍ．，Ｊ．
Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９４７〜９５０（１９８７）を参照のこと）、次い
で図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ、ならびに配列番号２および配列番号１０に示
されるＡＵＧ開始コドンで始まる完全Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの配列の１
６ヌクレオチドを含む。３’プライマーは、下線を付したＡｓｐ ７１８制限部
位、次いで図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃにおいて（ならびに配列番号２および
配列番号１０において）３’非コード配列に相補的な１７ヌクレオチドを含む、
配列５’ＣＡＣ ＴＴＡ ＧＧＴ ＡＣＣ ＡＴＡ ＡＴＧ ＧＣＡ ＴＧＴ
ＧＧＴ ＧＧＴ ＣＣ ３’（配列番号１６）を有する。
ｃＤＮＡ配列（ＡＵＧ開始コドン、ならびに配列番号２および配列番号１０に示
される天然に付随するリーダー配列を含む）を、この遺伝子の５’配列および３
’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて増幅する。この
５’プライマーは、真核生物細胞における翻訳を開始するための効率的なシグナ
ルである下線を付したＢａｍＨＩ制限酵素部位を含む配列５’ＣＧＣ ＧＧＡ ＴＣＣ ＧＣＣ ＡＴＣ ＡＴＧ ＴＣＡ ＣＴＧ ＡＧＡ ＴＣＣ Ｃ ３’
（配列番号１５）を有し（（イタリックで示される）；Ｋｏｚａｋ，Ｍ．，Ｊ．
Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９４７〜９５０（１９８７）を参照のこと）、次い
で図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃ、ならびに配列番号２および配列番号１０に示
されるＡＵＧ開始コドンで始まる完全Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの配列の１
６ヌクレオチドを含む。３’プライマーは、下線を付したＡｓｐ ７１８制限部
位、次いで図１Ａ、図１Ｂ、および図１Ｃにおいて（ならびに配列番号２および
配列番号１０において）３’非コード配列に相補的な１７ヌクレオチドを含む、
配列５’ＣＡＣ ＴＴＡ ＧＧＴ ＡＣＣ ＡＴＡ ＡＴＧ ＧＣＡ ＴＧＴ
ＧＧＴ ＧＧＴ ＣＣ ３’（配列番号１６）を有する。
【０２６９】 増幅されたフラグメントを、市販のキット（「Ｇｅｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ
１０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を用いて１％アガロースゲルから
単離する。次いで、このフラグメントを、ＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化
し、そして再度１％アガロースゲル上で精製する。このフラグメントを、本明細
書中において、Ｆ１と称する。
１０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を用いて１％アガロースゲルから
単離する。次いで、このフラグメントを、ＢａｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化
し、そして再度１％アガロースゲル上で精製する。このフラグメントを、本明細
書中において、Ｆ１と称する。
【０２７０】 プラスミドを、制限酵素ＢａｍＨＩおよび制限酵素Ａｓｐ７１８で消化し、そ
して必要に応じて、当該分野で公知の日常的な手順を用いて、仔ウシ腸ホスファ
ターゼを用いて脱リン酸化し得る。次いで、このＤＮＡを市販のキット（「Ｇｅ
ｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を用い
て１％アガロースゲルから単離する。このベクターＤＮＡを本明細書中において
、「Ｖ１」と称する。
して必要に応じて、当該分野で公知の日常的な手順を用いて、仔ウシ腸ホスファ
ターゼを用いて脱リン酸化し得る。次いで、このＤＮＡを市販のキット（「Ｇｅ
ｎｅｃｌｅａｎ」ＢＩＯ １０１ Ｉｎｃ．，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，Ｃａ）を用い
て１％アガロースゲルから単離する。このベクターＤＮＡを本明細書中において
、「Ｖ１」と称する。
【０２７１】 フラグメントＦ１および脱リン酸化プラスミドＶ１を、一緒に、Ｔ４ ＤＮＡ
リガーゼで連結する。Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞
（Ｓｔａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，
ＣＡ）のような他の適切なＥ．ｃｏｌｉ宿主を、連結混合物で形質転換し、そし
て培養プレートに塗布する。個々のコロニー由来のＤＮＡを消化すること（Ｂａ
ｍＨＩおよびＡｓｐ７１８）、および次いでゲル電気泳動により消化産物を分析
することによって、ヒトＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子を有するプラスミドを含む細菌
を同定する。クローニングされたフラグメントの配列を、ＤＮＡ配列決定によっ
て確認する。このプラスミドを、本明細書中で、ｐＡ２ Ｄｅｎｄｒｉａｃと称
する。
リガーゼで連結する。Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞
（Ｓｔａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，
ＣＡ）のような他の適切なＥ．ｃｏｌｉ宿主を、連結混合物で形質転換し、そし
て培養プレートに塗布する。個々のコロニー由来のＤＮＡを消化すること（Ｂａ
ｍＨＩおよびＡｓｐ７１８）、および次いでゲル電気泳動により消化産物を分析
することによって、ヒトＤｅｎｄｒｉａｃ遺伝子を有するプラスミドを含む細菌
を同定する。クローニングされたフラグメントの配列を、ＤＮＡ配列決定によっ
て確認する。このプラスミドを、本明細書中で、ｐＡ２ Ｄｅｎｄｒｉａｃと称
する。
【０２７２】 ５μｇのプラスミドｐＡ２ Ｄｅｎｄｒｉａｃを、Ｆｅｌｇｎｅｒおよび同僚
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７
（１９８７）によって記載されるリポフェクション法を用いて、１．０μｇの
市販の線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTM ｂａｃｕｌ
ｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ」，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．
）と同時トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTMウイルスＤＮ
Ａおよび５μｇのプラスミドｐＡ２ Ｄｅｎｄｒｉａｃを、５０μｌの無血清グ
レース培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒ
ｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を含むマイクロタイタープレートの無菌ウェル中で混合する
。その後、１０μｌのリポフェクチンおよび９０μｌのグレース培地を添加し、
混合し、そして室温にて１５分間インキュベートする。次いで、このトランスフ
ェクション混合物を、無血清グレース培地１ｍｌを有する３５ｍｍ組織培養プレ
ートに播種されたＳｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に滴下して加
える。次いでプレートを、２７℃で５時間インキュベートする。次いで、トラン
スフェクション溶液をプレートから除去し、そして１０％ウシ胎児血清を補充し
た１ｍｌのグレース昆虫培地を添加する。次いで、２７℃で４日間培養を続ける
。
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７
（１９８７）によって記載されるリポフェクション法を用いて、１．０μｇの
市販の線状化バキュロウイルスＤＮＡ（「ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTM ｂａｃｕｌ
ｏｖｉｒｕｓ ＤＮＡ」，Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．
）と同時トランスフェクトする。１μｇのＢａｃｕｌｏＧｏｌｄTMウイルスＤＮ
Ａおよび５μｇのプラスミドｐＡ２ Ｄｅｎｄｒｉａｃを、５０μｌの無血清グ
レース培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒ
ｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を含むマイクロタイタープレートの無菌ウェル中で混合する
。その後、１０μｌのリポフェクチンおよび９０μｌのグレース培地を添加し、
混合し、そして室温にて１５分間インキュベートする。次いで、このトランスフ
ェクション混合物を、無血清グレース培地１ｍｌを有する３５ｍｍ組織培養プレ
ートに播種されたＳｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １７１１）に滴下して加
える。次いでプレートを、２７℃で５時間インキュベートする。次いで、トラン
スフェクション溶液をプレートから除去し、そして１０％ウシ胎児血清を補充し
た１ｍｌのグレース昆虫培地を添加する。次いで、２７℃で４日間培養を続ける
。
【０２７３】 ４日後、上清を回収し、そしてＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ（前出）に記
載されるようにプラークアッセイを行う。青く染色されたプラークを産生するｇ
ａｌ発現クローンの容易な同定および単離を可能にするために、「Ｂｌｕｅ Ｇ
ａｌ」（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂ
ｕｒｇ）を有するアガロースゲルを用いる。（このタイプの「プラークアッセイ
」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｇａ
ｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、で配布される昆虫細胞培養およびバキュロウイルス学の
使用者ガイド（９〜１０頁）においても見い出され得る）。適切なインキュベー
ションの後、青く染色されたプラークをマイクロピペッターの（例えば、エッペ
ンドルフ）チップで拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒天を、２００μｌの
グレース培地を含む微小遠心管中に再懸濁する。そして、組換えバキュロウイル
スを含む懸濁液を用いて、３５ｍｍディッシュに播種されたＳｆ９細胞に感染さ
せる。４日後、これらの培養ディッシュの上清を回収し、次いでそれらを４℃で
保存する。この組換えウイルスをＶ−Ｄｅｎｄｒｉａｃと称する。
載されるようにプラークアッセイを行う。青く染色されたプラークを産生するｇ
ａｌ発現クローンの容易な同定および単離を可能にするために、「Ｂｌｕｅ Ｇ
ａｌ」（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂ
ｕｒｇ）を有するアガロースゲルを用いる。（このタイプの「プラークアッセイ
」の詳細な説明はまた、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．、Ｇａ
ｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、で配布される昆虫細胞培養およびバキュロウイルス学の
使用者ガイド（９〜１０頁）においても見い出され得る）。適切なインキュベー
ションの後、青く染色されたプラークをマイクロピペッターの（例えば、エッペ
ンドルフ）チップで拾う。次いで、組換えウイルスを含む寒天を、２００μｌの
グレース培地を含む微小遠心管中に再懸濁する。そして、組換えバキュロウイル
スを含む懸濁液を用いて、３５ｍｍディッシュに播種されたＳｆ９細胞に感染さ
せる。４日後、これらの培養ディッシュの上清を回収し、次いでそれらを４℃で
保存する。この組換えウイルスをＶ−Ｄｅｎｄｒｉａｃと称する。
【０２７４】 Ｄｅｎｄｒｉａｃ遺伝子の発現を確認するために、Ｓｆ９細胞を、１０％熱不
活性化ＦＢＳを補充したグレース培地中で増殖させる。細胞を、約２の感染多重
度（「ＭＯＩ」）で組換えバキュロウイルスＶ−Ｄｅｎｄｒｉａｃに感染させる
。放射性標識タンパク質が所望される場合、６時間後、その培地を除去し、そし
てメチオニンおよびシステインを除いたＳＦ９００ ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能）に
置き換える。４２時間後、５μＣｉの35Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの35Ｓ−
システイン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を添加する。細胞をさらに１６時
間インキュベートし、次いで細胞を遠心分離により収集する。上清中のポリペプ
チドおよび細胞内のポリペプチドをＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いで（放射性標識され
た場合）オートラジオグラフィーにより分析する。
活性化ＦＢＳを補充したグレース培地中で増殖させる。細胞を、約２の感染多重
度（「ＭＯＩ」）で組換えバキュロウイルスＶ−Ｄｅｎｄｒｉａｃに感染させる
。放射性標識タンパク質が所望される場合、６時間後、その培地を除去し、そし
てメチオニンおよびシステインを除いたＳＦ９００ ＩＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手可能）に
置き換える。４２時間後、５μＣｉの35Ｓ−メチオニンおよび５μＣｉの35Ｓ−
システイン（Ａｍｅｒｓｈａｍから入手可能）を添加する。細胞をさらに１６時
間インキュベートし、次いで細胞を遠心分離により収集する。上清中のポリペプ
チドおよび細胞内のポリペプチドをＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いで（放射性標識され
た場合）オートラジオグラフィーにより分析する。
【０２７５】 精製ポリペプチドのアミノ末端のアミノ酸配列の微小配列決定を用いて、成熟
形態のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ末端配列を決定し得、従って切断
点および天然に結合する分泌シグナルペプチドの長さを決定し得る。
形態のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ末端配列を決定し得、従って切断
点および天然に結合する分泌シグナルペプチドの長さを決定し得る。
【０２７６】 当業者は、同様のアプローチが、容易に設計および利用され、昆虫細胞中のＢ
ｒａｉｎｉａｃ−３の発現のための、ｐＡ−２に基づくバキュロウイルスの発現
構築物を生成し得ることを認識する。これは、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３に関する遺
伝子特異的配列と組み合わせた制限エンドヌクレアーゼ認識配列を含むＰＣＲプ
ライマーを設計することにより、および上記Ｄｅｎｄｒｉａｃに関して記載され
るような処置によって行われる。
ｒａｉｎｉａｃ−３の発現のための、ｐＡ−２に基づくバキュロウイルスの発現
構築物を生成し得ることを認識する。これは、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３に関する遺
伝子特異的配列と組み合わせた制限エンドヌクレアーゼ認識配列を含むＰＣＲプ
ライマーを設計することにより、および上記Ｄｅｎｄｒｉａｃに関して記載され
るような処置によって行われる。
【０２７７】 （実施例３：哺乳動物細胞におけるＤｅｎｄｒｉａｃのクローニングおよび発
現） 代表的な哺乳動物発現ベクターは、プロモーターエレメント（これは、ｍＲＮ
Ａの転写の開始を媒介する）、ポリペプチドコード配列、ならびに転写の終結お
よび転写物のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。さらなるエレメントとし
ては、エンハンサー、Ｋｏｚａｋ配列、ならびにＲＮＡスプライシングのための
ドナー部位およびアクセプター部位に隣接する介在配列が挙げられる。非常に効
率的な転写を、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、レトロウイルス由
来の長末端反復（ＬＴＲ）（例えば、ＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶ−Ｉ）ならび
にサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成し得る。し
かし、細胞性エレメント（例えば、ヒトアクチンプロモーター）もまた使用され
得る。本発明の実施における使用に適切な発現ベクターとしては、例えば、ｐＳ
ＶＬおよびｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、
ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７
１４６）、ならびにｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）のようなベクター
が挙げられる。使用され得る哺乳動物宿主細胞としては、ヒトＨｅｌａ細胞、２
９３細胞、Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ
１２７細胞、Ｃｏｓ１細胞、Ｃｏｓ７細胞およびＣＶ１細胞、ウズラＱＣ１−３
細胞、マウスＬ細胞、ならびにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙
げられる。
現） 代表的な哺乳動物発現ベクターは、プロモーターエレメント（これは、ｍＲＮ
Ａの転写の開始を媒介する）、ポリペプチドコード配列、ならびに転写の終結お
よび転写物のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。さらなるエレメントとし
ては、エンハンサー、Ｋｏｚａｋ配列、ならびにＲＮＡスプライシングのための
ドナー部位およびアクセプター部位に隣接する介在配列が挙げられる。非常に効
率的な転写を、ＳＶ４０由来の初期および後期プロモーター、レトロウイルス由
来の長末端反復（ＬＴＲ）（例えば、ＲＳＶ、ＨＴＬＶＩ、ＨＩＶ−Ｉ）ならび
にサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の初期プロモーターを用いて達成し得る。し
かし、細胞性エレメント（例えば、ヒトアクチンプロモーター）もまた使用され
得る。本発明の実施における使用に適切な発現ベクターとしては、例えば、ｐＳ
ＶＬおよびｐＭＳＧ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）、
ｐＲＳＶｃａｔ（ＡＴＣＣ ３７１５２）、ｐＳＶ２ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ ３７
１４６）、ならびにｐＢＣ１２ＭＩ（ＡＴＣＣ ６７１０９）のようなベクター
が挙げられる。使用され得る哺乳動物宿主細胞としては、ヒトＨｅｌａ細胞、２
９３細胞、Ｈ９細胞およびＪｕｒｋａｔ細胞、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＣ
１２７細胞、Ｃｏｓ１細胞、Ｃｏｓ７細胞およびＣＶ１細胞、ウズラＱＣ１−３
細胞、マウスＬ細胞、ならびにチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙
げられる。
【０２７８】 あるいは、遺伝子は、染色体に組み込まれた遺伝子を含む安定な細胞株におい
て発現され得る。選択マーカー（例えば、ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、ハ
イグロマイシン）との同時トランスフェクションは、トランスフェクトされた細
胞の同定および単離を可能にする。
て発現され得る。選択マーカー（例えば、ｄｈｆｒ、ｇｐｔ、ネオマイシン、ハ
イグロマイシン）との同時トランスフェクションは、トランスフェクトされた細
胞の同定および単離を可能にする。
【０２７９】 トランスフェクトされた遺伝子はまた、増幅されて大量のコードされたタンパ
ク質を発現し得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）マーカーは、目的の
遺伝子の数百または数千ものコピーを有する細胞株を開発するのに有用である。
別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕｒ
ｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂ
ｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９−１７５（１
９９２））。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地において増
殖させ、そして最も高い耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞株は染色体
に組み込まれた増幅された遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ
）細胞およびＮＳＯ細胞は、ポリペプチドの産生にしばしば使用される。
ク質を発現し得る。ＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）マーカーは、目的の
遺伝子の数百または数千ものコピーを有する細胞株を開発するのに有用である。
別の有用な選択マーカーは、酵素グルタミンシンターゼ（ＧＳ）である（Ｍｕｒ
ｐｈｙら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２２７：２７７−２７９（１９９１）；Ｂｅｂ
ｂｉｎｇｔｏｎら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６９−１７５（１
９９２））。これらのマーカーを使用して、哺乳動物細胞を選択培地において増
殖させ、そして最も高い耐性を有する細胞を選択する。これらの細胞株は染色体
に組み込まれた増幅された遺伝子を含む。チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ
）細胞およびＮＳＯ細胞は、ポリペプチドの産生にしばしば使用される。
【０２８０】 発現ベクターｐＣ１およびｐＣ４は、ラウス肉腫ウイルスの強力なプロモータ
ー（ＬＴＲ）（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４
７（１９８５））およびＣＭＶエンハンサーのフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔら
、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５））を含む。複数のクローニング
部位（例えば、制限酵素切断部位ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８を
有する）は、目的の遺伝子のクローニングを容易にする。ベクターはさらに、ラ
ットプレプロインシュリン遺伝子の３'イントロン、ポリアデニル化シグナル、 および終結シグナルを含む。
ー（ＬＴＲ）（Ｃｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４
７（１９８５））およびＣＭＶエンハンサーのフラグメント（Ｂｏｓｈａｒｔら
、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５））を含む。複数のクローニング
部位（例えば、制限酵素切断部位ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８を
有する）は、目的の遺伝子のクローニングを容易にする。ベクターはさらに、ラ
ットプレプロインシュリン遺伝子の３'イントロン、ポリアデニル化シグナル、 および終結シグナルを含む。
【０２８１】 以下の実施例（３（ａ）および３（ｂ））は、サブクローニングおよび哺乳動
物細胞におけるＤｅｎｄｒｉａｃの発現を教示するが、当業者は同様のアプロー
チが、容易に設計および利用され、哺乳動物細胞におけるＢｒａｉｎｉａｃ−３
の発現のための哺乳動物発現構築物を生成し得ることを認識する。これは、Ｂｒ
ａｉｎｉａｃ−３に関する遺伝子特異的配列と組み合わせて同様の制限エンドヌ
クレアーゼ認識配列を含むＰＣＲプライマーを設計することにより、および上記
Ｄｅｎｄｒｉａｃに関して記載されるような処置によって行われる。
物細胞におけるＤｅｎｄｒｉａｃの発現を教示するが、当業者は同様のアプロー
チが、容易に設計および利用され、哺乳動物細胞におけるＢｒａｉｎｉａｃ−３
の発現のための哺乳動物発現構築物を生成し得ることを認識する。これは、Ｂｒ
ａｉｎｉａｃ−３に関する遺伝子特異的配列と組み合わせて同様の制限エンドヌ
クレアーゼ認識配列を含むＰＣＲプライマーを設計することにより、および上記
Ｄｅｎｄｒｉａｃに関して記載されるような処置によって行われる。
【０２８２】 （実施例３（ａ）：ＣＯＳ細胞におけるクローニングおよび発現） 発現プラスミドｐＤｅｎｄｒｉａｃＨＡを、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの
成熟型をコードするｃＤＮＡの一部を発現ベクターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐまたは
ｐｃＤＮＡＩＩＩ（これは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．から入手し得る）
にクローニングすることによって作製する。
成熟型をコードするｃＤＮＡの一部を発現ベクターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐまたは
ｐｃＤＮＡＩＩＩ（これは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．から入手し得る）
にクローニングすることによって作製する。
【０２８３】 発現ベクターｐｃＤＮＡＩ／ａｍｐは以下を含む：（１）Ｅ．ｃｏｌｉおよび
他の原核生物細胞における増殖に有効なＥ．ｃｏｌｉ複製起点；（２）プラスミ
ド含有原核生物細胞の選択のためのアンピシリン耐性遺伝子；（３）真核生物細
胞における増殖のためのＳＶ４０複製起点；（４）ＣＭＶプロモーター、ポリリ
ンカー、ＳＶ４０イントロン；（５）ｃＤＮＡが都合良くＣＭＶプロモーターの
発現制御下におかれ、そしてポリリンカーにおける制限部位によってＳＶ４０イ
ントロンおよびポリアデニル化シグナルに作動可能に連結され得るように配置さ
れた、赤血球凝集素フラグメント（すなわち、精製を容易にするための「ＨＡ」
タグ）をコードするいくつかのコドン、次いで終止コドン、およびポリアデニル
化シグナル。ＨＡタグは、Ｗｉｌｓｏｎ、および同僚（Ｃｅｌｌ ３７：７６７
（１９８４））によって記載されたインフルエンザ赤血球凝集素タンパク質に由
来するエピトープに対応する。標的ポリペプチドへのＨＡタグの融合は、ＨＡエ
ピトープを認識する抗体を用いる、組換えタンパク質の容易な検出および回収を
可能にする。ｐｃＤＮＡＩＩＩはさらに、ネオマイシン選択マーカーを含む。
他の原核生物細胞における増殖に有効なＥ．ｃｏｌｉ複製起点；（２）プラスミ
ド含有原核生物細胞の選択のためのアンピシリン耐性遺伝子；（３）真核生物細
胞における増殖のためのＳＶ４０複製起点；（４）ＣＭＶプロモーター、ポリリ
ンカー、ＳＶ４０イントロン；（５）ｃＤＮＡが都合良くＣＭＶプロモーターの
発現制御下におかれ、そしてポリリンカーにおける制限部位によってＳＶ４０イ
ントロンおよびポリアデニル化シグナルに作動可能に連結され得るように配置さ
れた、赤血球凝集素フラグメント（すなわち、精製を容易にするための「ＨＡ」
タグ）をコードするいくつかのコドン、次いで終止コドン、およびポリアデニル
化シグナル。ＨＡタグは、Ｗｉｌｓｏｎ、および同僚（Ｃｅｌｌ ３７：７６７
（１９８４））によって記載されたインフルエンザ赤血球凝集素タンパク質に由
来するエピトープに対応する。標的ポリペプチドへのＨＡタグの融合は、ＨＡエ
ピトープを認識する抗体を用いる、組換えタンパク質の容易な検出および回収を
可能にする。ｐｃＤＮＡＩＩＩはさらに、ネオマイシン選択マーカーを含む。
【０２８４】 成熟形態のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするＤＮＡフラグメントを
、組換えポリペプチド発現がＣＭＶプロモーターによって導かれるように、ベク
ターのポリリンカー領域にクローン化する。プラスミド構築ストラテジーは以下
の通りである。寄託されたクローンのＤｅｎｄｒｉａｃ ｃＤＮＡを、Ｅ．ｃｏ
ｌｉにおけるＤｅｎｄｒｉａｃの発現のためのベクターの構築について先に記載
されるのとほとんど同じように、都合の良い制限部位を含むプライマーを用いて
増幅する。適切なプライマーは、以下の本実施例に使用されたプライマーを含む
。下線を付したＢａｍＨＩ制限酵素部位、Ｋｏｚａｋ配列(イタリック体）、Ａ ＵＧ開始コドン、および成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの５’をコードする
領域の１６ヌクレオチドを含む５’プライマーは、以下の配列を有する：５’Ｃ
ＧＣ ＧＧＡ ＴＣＣ ＧＣＣ ＡＴＣ ＡＴＧ ＴＣＡ ＣＴＧ ＡＧＡ Ｔ
ＣＣ Ｃ３’（配列番号１５）。下線を付したＡｓｐ７１８部位、および終始コ
ドンの直前の３’コード配列に相補的な１７ヌクレオチドを含む、３’プライマ
ーは、以下の配列を有する：５’ＣＡＣ ＴＴＡ ＧＧＴ ＡＣＣ ＡＴＡ Ａ
ＴＧ ＧＣＡ ＴＧＴ ＧＧＴ ＧＴＴ ＣＣ ３’（配列番号１６）。
、組換えポリペプチド発現がＣＭＶプロモーターによって導かれるように、ベク
ターのポリリンカー領域にクローン化する。プラスミド構築ストラテジーは以下
の通りである。寄託されたクローンのＤｅｎｄｒｉａｃ ｃＤＮＡを、Ｅ．ｃｏ
ｌｉにおけるＤｅｎｄｒｉａｃの発現のためのベクターの構築について先に記載
されるのとほとんど同じように、都合の良い制限部位を含むプライマーを用いて
増幅する。適切なプライマーは、以下の本実施例に使用されたプライマーを含む
。下線を付したＢａｍＨＩ制限酵素部位、Ｋｏｚａｋ配列(イタリック体）、Ａ ＵＧ開始コドン、および成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの５’をコードする
領域の１６ヌクレオチドを含む５’プライマーは、以下の配列を有する：５’Ｃ
ＧＣ ＧＧＡ ＴＣＣ ＧＣＣ ＡＴＣ ＡＴＧ ＴＣＡ ＣＴＧ ＡＧＡ Ｔ
ＣＣ Ｃ３’（配列番号１５）。下線を付したＡｓｐ７１８部位、および終始コ
ドンの直前の３’コード配列に相補的な１７ヌクレオチドを含む、３’プライマ
ーは、以下の配列を有する：５’ＣＡＣ ＴＴＡ ＧＧＴ ＡＣＣ ＡＴＡ Ａ
ＴＧ ＧＣＡ ＴＧＴ ＧＧＴ ＧＴＴ ＣＣ ３’（配列番号１６）。
【０２８５】 ＰＣＲ増幅ＤＮＡフラグメントおよびベクターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐを、Ｂａ
ｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化し、次いで連結する。連結混合物を、Ｅ．ｃｏ
ｌｉ株ＳＵＲＥ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌ
ａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ ９２０３７より入手可能）へ形質転換し、そして形質転
換培養物を、アンピシリン培地プレートへプレーティングし、次いでこれをイン
キュベートしてアンピシリン耐性コロニーの増殖を可能にする。プラスミドＤＮ
Ａを耐性コロニーから単離し、そして完全なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコ
ードするフラグメントの存在について制限分析または他の手段によって試験する
。
ｍＨＩおよびＡｓｐ７１８で消化し、次いで連結する。連結混合物を、Ｅ．ｃｏ
ｌｉ株ＳＵＲＥ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌ
ａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ ９２０３７より入手可能）へ形質転換し、そして形質転
換培養物を、アンピシリン培地プレートへプレーティングし、次いでこれをイン
キュベートしてアンピシリン耐性コロニーの増殖を可能にする。プラスミドＤＮ
Ａを耐性コロニーから単離し、そして完全なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコ
ードするフラグメントの存在について制限分析または他の手段によって試験する
。
【０２８６】 組換えＤｅｎｄｒｉａｃの発現のために、ＣＯＳ細胞を、例えば、Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋおよび共同研究者（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（
１９８９））に記載のようにＤＥＡＥ−デキストランを用いて、上記のように発
現ベクターでトランスフェクトする。細胞を、ベクターによるＤｅｎｄｒｉａｃ
の発現のための条件下でインキュベートする。
ｏｏｋおよび共同研究者（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（
１９８９））に記載のようにＤＥＡＥ−デキストランを用いて、上記のように発
現ベクターでトランスフェクトする。細胞を、ベクターによるＤｅｎｄｒｉａｃ
の発現のための条件下でインキュベートする。
【０２８７】 Ｄｅｎｄｒｉａｃ−ＨＡ融合ポリペプチドの発現を、例えば、Ｈａｒｌｏｗお
よび同僚（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
，第２版； Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９
８８））に記載された方法を用いて、放射標識化および免疫沈降法によって検出
する。この目的のため、トランスフェクションの２日後に、細胞を、35Ｓ−シス
テインを含む培地中で８時間インキュベートすることによって標識する。細胞お
よび培地を採取し、そして細胞を洗浄し、そしてＷｉｌｓｏｎおよび同僚（前出
）に記載されるように、界面活性剤含有ＲＩＰＡ緩衝液：１５０ｍＭ ＮａＣｌ
、１％ ＮＰ−４０、０．１％ ＳＤＳ、１％ ＮＰ−４０、０．５％ ＤＯＣ
、５０ｍＭ ＴＲＩＳ（ｐＨ ７．５）で溶解する。ポリペプチドを、ＨＡ特異
的モノクローナル抗体を用いて細胞溶解物および培養培地から沈降させる。次い
で、沈降させたポリペプチドを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィ
ーによって分析する。期待されるサイズの発現産物は、細胞溶解物において観察
され、これはネガティブコントロールにおいては見られない。
よび同僚（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
，第２版； Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９
８８））に記載された方法を用いて、放射標識化および免疫沈降法によって検出
する。この目的のため、トランスフェクションの２日後に、細胞を、35Ｓ−シス
テインを含む培地中で８時間インキュベートすることによって標識する。細胞お
よび培地を採取し、そして細胞を洗浄し、そしてＷｉｌｓｏｎおよび同僚（前出
）に記載されるように、界面活性剤含有ＲＩＰＡ緩衝液：１５０ｍＭ ＮａＣｌ
、１％ ＮＰ−４０、０．１％ ＳＤＳ、１％ ＮＰ−４０、０．５％ ＤＯＣ
、５０ｍＭ ＴＲＩＳ（ｐＨ ７．５）で溶解する。ポリペプチドを、ＨＡ特異
的モノクローナル抗体を用いて細胞溶解物および培養培地から沈降させる。次い
で、沈降させたポリペプチドを、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびオートラジオグラフィ
ーによって分析する。期待されるサイズの発現産物は、細胞溶解物において観察
され、これはネガティブコントロールにおいては見られない。
【０２８８】 （実施例３（ｂ）：ＣＨＯ細胞におけるクローニングおよび発現） ベクターｐＣ４を、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの発現のために使用する。
プラスミドｐＣ４は、プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１
４６）の誘導体である。このプラスミドは、ＳＶ４０初期プロモーターの制御下
で、マウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。これらのプラスミドでトランスフェクトされ
るジヒドロ葉酸活性を欠如するチャイニーズハムスター卵巣細胞または他の細胞
は、化学療法剤メトトレキサートを補充した選択培地（αマイナスＭＥＭ、Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で細胞を増殖させることによって選択され
得る。メトトレキサート（ＭＴＸ）に耐性である細胞におけるＤＨＦＲ遺伝子の
増幅は、よく考証されている（例えば、Ａｌｔ，Ｆ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（１９７８）；Ｈａｍｌｉｎ，Ｊ．Ｌ．お
よびＭａ，Ｃ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１０９７
：１０７−１４３（１９９０）；Ｐａｇｅ，Ｍ．Ｊ．およびＳｙｄｅｎｈａｍ，
Ｍ．Ａ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６４−６８（１９９１）を参照の
こと）。漸増濃度のＭＴＸにおいて増殖した細胞は、ＤＨＦＲ遺伝子の増幅の結
果として、標的酵素ＤＨＦＲを過剰産生することによって薬物に対する耐性を発
達させる。第２の遺伝子がＤＨＦＲ遺伝子と連鎖する場合、通常、同時増幅され
、そして過剰発現される。増幅した遺伝子の１，０００を超えるコピーを有する
細胞株を開発するためにこのアプローチを使用し得ることは、当該分野において
公知である。続いて、メトトレキサートが取り除かれる場合、宿主細胞の１つ以
上の染色体に組み込まれた増幅遺伝子を含む細胞株が得られる。
プラスミドｐＣ４は、プラスミドｐＳＶ２−ｄｈｆｒ（ＡＴＣＣ受託番号３７１
４６）の誘導体である。このプラスミドは、ＳＶ４０初期プロモーターの制御下
で、マウスＤＨＦＲ遺伝子を含む。これらのプラスミドでトランスフェクトされ
るジヒドロ葉酸活性を欠如するチャイニーズハムスター卵巣細胞または他の細胞
は、化学療法剤メトトレキサートを補充した選択培地（αマイナスＭＥＭ、Ｌｉ
ｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で細胞を増殖させることによって選択され
得る。メトトレキサート（ＭＴＸ）に耐性である細胞におけるＤＨＦＲ遺伝子の
増幅は、よく考証されている（例えば、Ａｌｔ，Ｆ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．２５３：１３５７−１３７０（１９７８）；Ｈａｍｌｉｎ，Ｊ．Ｌ．お
よびＭａ，Ｃ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１０９７
：１０７−１４３（１９９０）；Ｐａｇｅ，Ｍ．Ｊ．およびＳｙｄｅｎｈａｍ，
Ｍ．Ａ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：６４−６８（１９９１）を参照の
こと）。漸増濃度のＭＴＸにおいて増殖した細胞は、ＤＨＦＲ遺伝子の増幅の結
果として、標的酵素ＤＨＦＲを過剰産生することによって薬物に対する耐性を発
達させる。第２の遺伝子がＤＨＦＲ遺伝子と連鎖する場合、通常、同時増幅され
、そして過剰発現される。増幅した遺伝子の１，０００を超えるコピーを有する
細胞株を開発するためにこのアプローチを使用し得ることは、当該分野において
公知である。続いて、メトトレキサートが取り除かれる場合、宿主細胞の１つ以
上の染色体に組み込まれた増幅遺伝子を含む細胞株が得られる。
【０２８９】 プラスミドｐＣ４は、目的の遺伝子の発現のために、ラウス肉腫ウイルス（Ｃ
ｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５）
）の長末端反復（ＬＴＲ）の強力なプロモーター、およびヒトサイトメガロウイ
ルス（ＣＭＶ：Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５
））の前初期遺伝子のエンハンサーから単離されたフラグメントを含む。プロモ
ーターの下流には、遺伝子の組み込みを可能にする以下の単一の制限酵素切断部
位が存在する：ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８。プラスミドは、こ
れらのクローニング部位の後ろに、ラットプレプロインスリン遺伝子の３’イン
トロンおよびポリアデニル化部位を含む。他の高効率プロモーター（例えば、ヒ
トβアクチンプロモーター、ＳＶ４０初期もしくは後期プロモーター、または他
のレトロウイルス（例えば、ＨＩＶおよびＨＴＬＶＩ）由来の長末端反復）もま
た、発現のために使用され得る。ＣｌｏｎｔｅｃｈのＴｅｔ−ＯｆｆおよびＴｅ
ｔ−Ｏｎ遺伝子発現系および同様の系は、哺乳動物細胞において調節された方法
でＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを発現するために使用され得る（Ｇｏｓｓｅｎ
，Ｍ．，およびＢｕｊａｒｄ，Ｈ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ８９：５５４７−５５５１（１９９２））。ｍＲＮＡのポリアデニル化の
ために、他のシグナル（例えば、ヒト成長ホルモンまたはグロビン遺伝子由来）
もまた、使用され得る。染色体に組み込まれた目的の遺伝子を含む安定な細胞株
もまた、選択マーカー（例えば、ｇｐｔ、Ｇ４１８、またはハイグロマイシン）
との同時トランスフェクションに際して選択され得る。最初は、１つより多い選
択マーカー（例えば、Ｇ４１８およびメトトレキサート）を使用することが、有
利である。
ｕｌｌｅｎら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：４３８−４４７（１９８５）
）の長末端反復（ＬＴＲ）の強力なプロモーター、およびヒトサイトメガロウイ
ルス（ＣＭＶ：Ｂｏｓｈａｒｔら、Ｃｅｌｌ ４１：５２１−５３０（１９８５
））の前初期遺伝子のエンハンサーから単離されたフラグメントを含む。プロモ
ーターの下流には、遺伝子の組み込みを可能にする以下の単一の制限酵素切断部
位が存在する：ＢａｍＨＩ、ＸｂａＩ、およびＡｓｐ７１８。プラスミドは、こ
れらのクローニング部位の後ろに、ラットプレプロインスリン遺伝子の３’イン
トロンおよびポリアデニル化部位を含む。他の高効率プロモーター（例えば、ヒ
トβアクチンプロモーター、ＳＶ４０初期もしくは後期プロモーター、または他
のレトロウイルス（例えば、ＨＩＶおよびＨＴＬＶＩ）由来の長末端反復）もま
た、発現のために使用され得る。ＣｌｏｎｔｅｃｈのＴｅｔ−ＯｆｆおよびＴｅ
ｔ−Ｏｎ遺伝子発現系および同様の系は、哺乳動物細胞において調節された方法
でＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドを発現するために使用され得る（Ｇｏｓｓｅｎ
，Ｍ．，およびＢｕｊａｒｄ，Ｈ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
ＳＡ ８９：５５４７−５５５１（１９９２））。ｍＲＮＡのポリアデニル化の
ために、他のシグナル（例えば、ヒト成長ホルモンまたはグロビン遺伝子由来）
もまた、使用され得る。染色体に組み込まれた目的の遺伝子を含む安定な細胞株
もまた、選択マーカー（例えば、ｇｐｔ、Ｇ４１８、またはハイグロマイシン）
との同時トランスフェクションに際して選択され得る。最初は、１つより多い選
択マーカー（例えば、Ｇ４１８およびメトトレキサート）を使用することが、有
利である。
【０２９０】 プラスミドｐＣ４を、制限酵素ＢａｍＨＩおよび制限酵素Ａｓｐ７１８で消化
し、次いでウシ腸ホスファターゼを用いて、当該分野で公知の手順によって脱リ
ン酸化する。次いで、ベクターを、１％アガロースゲルから単離する。
し、次いでウシ腸ホスファターゼを用いて、当該分野で公知の手順によって脱リ
ン酸化する。次いで、ベクターを、１％アガロースゲルから単離する。
【０２９１】 完全なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を、所望の遺伝
子部分の５’配列および３’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマ
ーを用いて、増幅する。下線を付したＢａｍＨＩ部位、Ｋｏｚａｋ配列、ＡＵＧ
開始コドン、および完全なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの５’をコードする領
域の１６ヌクレオチドを含む５’プライマーは、以下の配列を有する：５’ＣＧ
Ｃ ＧＧＡ ＴＣＣ ＧＣＣ ＡＴＣ ＡＴＧ ＴＣＡ ＣＴＧ ＡＧＡ ＴＣ
Ｃ Ｃ３’（配列番号１５）。下線を付したＡｓｐ７１８部位、および図１（配
列番号１）に示すような終始コドンの直前の３’コード配列に相補的な１７ヌク
レオチドを含む、３’プライマーは、以下の配列を有する：５’ＣＡＣ ＴＴＡ
ＧＧＴ ＡＣＣ ＡＴＡ ＡＴＧ ＧＣＡ ＴＧＴ ＧＧＴ ＧＴＴ ＣＣ
３’（配列番号１６）。
子部分の５’配列および３’配列に対応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマ
ーを用いて、増幅する。下線を付したＢａｍＨＩ部位、Ｋｏｚａｋ配列、ＡＵＧ
開始コドン、および完全なＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの５’をコードする領
域の１６ヌクレオチドを含む５’プライマーは、以下の配列を有する：５’ＣＧ
Ｃ ＧＧＡ ＴＣＣ ＧＣＣ ＡＴＣ ＡＴＧ ＴＣＡ ＣＴＧ ＡＧＡ ＴＣ
Ｃ Ｃ３’（配列番号１５）。下線を付したＡｓｐ７１８部位、および図１（配
列番号１）に示すような終始コドンの直前の３’コード配列に相補的な１７ヌク
レオチドを含む、３’プライマーは、以下の配列を有する：５’ＣＡＣ ＴＴＡ
ＧＧＴ ＡＣＣ ＡＴＡ ＡＴＧ ＧＣＡ ＴＧＴ ＧＧＴ ＧＴＴ ＣＣ
３’（配列番号１６）。
【０２９２】 増幅させたフラグメントを、ＢａｍＨＩエンドヌクレアーゼおよびＡｓｐ７１
８エンドヌクレアーゼで消化し、次いで１％アガロースゲルで再び精製する。次
いで、単離したフラグメントおよび脱リン酸化ベクターをＴ４ ＤＮＡリガーゼ
で連結する。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞
を形質転換し、そして例えば制限酵素分析を用いてプラスミドｐＣ４に挿入され
たフラグメントを含む細菌を同定する。
８エンドヌクレアーゼで消化し、次いで１％アガロースゲルで再び精製する。次
いで、単離したフラグメントおよび脱リン酸化ベクターをＴ４ ＤＮＡリガーゼ
で連結する。次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１またはＸＬ−１ Ｂｌｕｅ細胞
を形質転換し、そして例えば制限酵素分析を用いてプラスミドｐＣ４に挿入され
たフラグメントを含む細菌を同定する。
【０２９３】 活性なＤＨＦＲ遺伝子を欠失するチャイニーズハムスター卵巣細胞を、トラン
スフェクションのために使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ４を、リポフェ
クチン（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）を用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎ
ｅｏと同時トランスフェクトする。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優性選択マ
ーカー（Ｇ４１８を含む一群の抗生物質に対する耐性を与える酵素をコードする
Ｔｎ５由来のｎｅｏ遺伝子）を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を補充し
たαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、細胞をトリプシン処理し、そして１０
、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１
８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプレート（Ｇｒ
ｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に播種する。約１０〜１４日後、単一のクローン
をトリプシン処理し、次いで異なる濃度のメトトレキサート（５０ｎＭ、１００
ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を用いて、６ウェルペトリ皿また
は１０ｍｌフラスコに播種する。次いで、最高濃度のメトトレキサートで増殖す
るクローンを、さらに高濃度のメトトレキサート（１μＭ、２μＭ、５μＭ、１
０ｍＭ、２０ｍＭ）を含む新たな６ウェルプレートに移す。同じ手順を、１００
〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで繰り返す。所望の遺伝子
産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによって、
または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。
スフェクションのために使用する。５μｇの発現プラスミドｐＣ４を、リポフェ
クチン（Ｆｅｌｇｎｅｒら、前出）を用いて、０．５μｇのプラスミドｐＳＶｎ
ｅｏと同時トランスフェクトする。プラスミドｐＳＶ２−ｎｅｏは、優性選択マ
ーカー（Ｇ４１８を含む一群の抗生物質に対する耐性を与える酵素をコードする
Ｔｎ５由来のｎｅｏ遺伝子）を含む。細胞を、１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を補充し
たαマイナスＭＥＭに播種する。２日後、細胞をトリプシン処理し、そして１０
、２５、または５０ｎｇ／ｍｌのメトトレキサートおよび１ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１
８を補充したαマイナスＭＥＭ中のハイブリドーマクローニングプレート（Ｇｒ
ｅｉｎｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に播種する。約１０〜１４日後、単一のクローン
をトリプシン処理し、次いで異なる濃度のメトトレキサート（５０ｎＭ、１００
ｎＭ、２００ｎＭ、４００ｎＭ、８００ｎＭ）を用いて、６ウェルペトリ皿また
は１０ｍｌフラスコに播種する。次いで、最高濃度のメトトレキサートで増殖す
るクローンを、さらに高濃度のメトトレキサート（１μＭ、２μＭ、５μＭ、１
０ｍＭ、２０ｍＭ）を含む新たな６ウェルプレートに移す。同じ手順を、１００
〜２００μＭの濃度で増殖するクローンが得られるまで繰り返す。所望の遺伝子
産物の発現を、例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタンブロットによって、
または逆相ＨＰＬＣ分析によって分析する。
【０２９４】 （実施例４：Ｄｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ ｍＲＮ
Ａ発現の組織分布） ノーザンブロット分析を、とりわけＳａｍｂｒｏｏｋおよび同僚（前出）によ
って記載される方法を用いて行って、ヒト組織におけるＤｅｎｄｒｉａｃおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の発現を調べる。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペ
プチドまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの全ヌクレオチド配列（配列番
号１）を含むｃＤＮＡプローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅTM ＤＮＡ標識システム
（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を製造者の説明書に従って用
いて32Ｐで標識した。標識後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１００TM カラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を製造者の
プロトコル番号ＰＴ１２００−１に従って用いて精製した。次いで、精製した標
識プローブを用いて、種々のヒト組織をＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａ
ｉｎｉａｃ−３ ｍＲＮＡについて調べた。
Ａ発現の組織分布） ノーザンブロット分析を、とりわけＳａｍｂｒｏｏｋおよび同僚（前出）によ
って記載される方法を用いて行って、ヒト組織におけるＤｅｎｄｒｉａｃおよび
／またはＢｒａｉｎｉａｃ−３遺伝子の発現を調べる。Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペ
プチドまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの全ヌクレオチド配列（配列番
号１）を含むｃＤＮＡプローブを、ｒｅｄｉｐｒｉｍｅTM ＤＮＡ標識システム
（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を製造者の説明書に従って用
いて32Ｐで標識した。標識後、プローブを、ＣＨＲＯＭＡ ＳＰＩＮ−１００TM カラム（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）を製造者の
プロトコル番号ＰＴ１２００−１に従って用いて精製した。次いで、精製した標
識プローブを用いて、種々のヒト組織をＤｅｎｄｒｉａｃおよび／またはＢｒａ
ｉｎｉａｃ−３ ｍＲＮＡについて調べた。
【０２９５】 種々のヒト組織（Ｈ）またはヒト免疫系組織（ＩＭ）を含む多重組織ノーザン
（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ）（ＭＴＮ）ブロットを
、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手し、そしてＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂTMハイブリダイゼ
ーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を製造者のプロトコル番号ＰＴ１１９０−１
に従って用いて標識プローブで調べた。ハイブリダイゼーションおよび洗浄後、
ブロットをマウントし、そして−７０℃にて一晩フィルムに曝露した。そしてフ
ィルムを標準的な手順に従って現像する。
（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｔｉｓｓｕｅ Ｎｏｒｔｈｅｒｎ）（ＭＴＮ）ブロットを
、Ｃｌｏｎｔｅｃｈから入手し、そしてＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂTMハイブリダイゼ
ーション溶液（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を製造者のプロトコル番号ＰＴ１１９０−１
に従って用いて標識プローブで調べた。ハイブリダイゼーションおよび洗浄後、
ブロットをマウントし、そして−７０℃にて一晩フィルムに曝露した。そしてフ
ィルムを標準的な手順に従って現像する。
【０２９６】 本質的にＤｅｎｄｒｉａｃ ｍＲＮＡの発現を試験するために上記のように行
ったノーザンブロット実験の結果は、以下を含む。ノーザンブロット分析を使用
して、Ｄｅｎｄｒｉａｃのメッセージを、脳、腎臓、膵臓、精巣、胎児肝臓、お
よび甲状腺中に豊富に検出した。さらに、ノーザンブロット実験は、以下の組織
においてＤｅｎｄｒｉａｃの低いが、明瞭な、レベルの発現を示した：肺、肝臓
、扁桃、尾状核、脳梁、海馬、脳全体、黒質、視床下核、視床、副腎皮質、小腸
、胃、脾臓、リンパ節、および大腸腺癌ＳＷ４８０。最後に、非常に低いレベル
のＤｅｎｄｒｉａｃ発現を、以下の組織においてノーザンブロットにより観察し
た：前立腺、子宮、肺癌腫Ａ５４９、および黒色腫Ｇ３６１。さらに、Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３のメッセージを、胎児脳、胎児腎臓中に豊富に検出し、そして、低
いが、明瞭な、レベルの発現を肺および肝臓中に検出した。さらに、Ｂｒａｉｎ
ｉａｃ−３のノーザンブロット発現研究は、全ての陽性の組織中で約１．３５ｋ
ｂのバンド、胎児腎臓および胎児脳中で約２．０ｋｂのバンド、ならびに胎児脳
中で約４．０ｋｂのバンドを同定した。
ったノーザンブロット実験の結果は、以下を含む。ノーザンブロット分析を使用
して、Ｄｅｎｄｒｉａｃのメッセージを、脳、腎臓、膵臓、精巣、胎児肝臓、お
よび甲状腺中に豊富に検出した。さらに、ノーザンブロット実験は、以下の組織
においてＤｅｎｄｒｉａｃの低いが、明瞭な、レベルの発現を示した：肺、肝臓
、扁桃、尾状核、脳梁、海馬、脳全体、黒質、視床下核、視床、副腎皮質、小腸
、胃、脾臓、リンパ節、および大腸腺癌ＳＷ４８０。最後に、非常に低いレベル
のＤｅｎｄｒｉａｃ発現を、以下の組織においてノーザンブロットにより観察し
た：前立腺、子宮、肺癌腫Ａ５４９、および黒色腫Ｇ３６１。さらに、Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３のメッセージを、胎児脳、胎児腎臓中に豊富に検出し、そして、低
いが、明瞭な、レベルの発現を肺および肝臓中に検出した。さらに、Ｂｒａｉｎ
ｉａｃ−３のノーザンブロット発現研究は、全ての陽性の組織中で約１．３５ｋ
ｂのバンド、胎児腎臓および胎児脳中で約２．０ｋｂのバンド、ならびに胎児脳
中で約４．０ｋｂのバンドを同定した。
【０２９７】 本発明が、前述の説明および実施例に詳細に記載される以外の方法で実施され
得ることは明白である。本発明の多くの改変および変更が、上記の教示を考慮し
て可能であり、従って添付の請求の範囲の範囲内である。
得ることは明白である。本発明の多くの改変および変更が、上記の教示を考慮し
て可能であり、従って添付の請求の範囲の範囲内である。
【０２９８】 本明細書中に引用される全ての刊行物（特許、特許出願、学術論文、実験室マ
ニュアル、書籍、または他の文書を含む）の開示の全体が、これによって本明細
書中で参考として援用される。
ニュアル、書籍、または他の文書を含む）の開示の全体が、これによって本明細
書中で参考として援用される。
【０２９９】 さらに、コンピューターおよび紙面の両方において本明細書と共に提出された
配列リスト、ならびに米国仮出願番号第６０／１０８，９２８号（１９９８年１
１月１７日提出）；米国仮出願番号第６０／０６８，００６号（１９９７年１２
月１８日提出）；および米国仮特許番号第６０／０７７，６８７号（１９９８年
３月１２日提出）と共に提出された配列リスト（これらの各々に対して本願は、
米国特許法１１９条（ｅ）下で出願日の利益を主張する）は、本明細書でその全
体が参考として援用される。
配列リスト、ならびに米国仮出願番号第６０／１０８，９２８号（１９９８年１
１月１７日提出）；米国仮出願番号第６０／０６８，００６号（１９９７年１２
月１８日提出）；および米国仮特許番号第６０／０７７，６８７号（１９９８年
３月１２日提出）と共に提出された配列リスト（これらの各々に対して本願は、
米国特許法１１９条（ｅ）下で出願日の利益を主張する）は、本明細書でその全
体が参考として援用される。
【０３００】
【表４】
【０３０１】
【表５】
【０３０２】
【表６】
【０３０３】
【表７】
【配列表】
【図１Ａ】 図１Ａは、Ｄｅｎｄｒｉａｃのヌクレオチド配列（配列番号１）および推定ア
ミノ酸配列（配列番号２）を示す。約２５アミノ酸の推定リーダー配列に下線を
付した。５つの潜在的なアスパラギン結合型グリコシル化部位を、Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃのアミノ酸配列において印付けした。グリコシル化の潜在的部位は、図１Ａ
のアスパラギン−６０、アスパラギン−１４２、アスパラギン−１８６、アスパ
ラギン−２００、およびアスパラギン−３１４（これらの位置は、配列番号２お
よび配列番号１０におけるアスパラギン−３５、アスパラギン−１１７、アスパ
ラギン−１６０、アスパラギン−１７５、およびアスパラギン−２８９に位置し
た、同一の配列に対応する）で開始する。潜在的グリコシル化部位は、図１Ａの
アミノ酸配列において、ヌクレオチド配列の上部にボールド打ち込み記号（＃）
が、アスパラギンについてのボールドの１文字略記（Ｎ）と対になって印付けら
れる。 ＤｅｎｄｒｉａｃとＢｒａｉｎｉａｃ−３と密接に関連したＤｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃとの間の高度な同一性領域（図３において提示されるこ
れらの配列のアラインメント）は、図１Ａにおいて二重線を付して示される。こ
れらの領域は限定的でなく、そして図１Ａにおいて保存性ドメイン（ＣＤ）−Ｉ
、ＣＤ−ＩＩ、ＣＤ−ＩＩＩ、ＣＤ−ＩＶ、ＣＤ−Ｖ、ＣＤ−ＶＩ、ＣＤ−ＶＩ
Ｉ、ＣＤ−ＶＩＩＩ、ＣＤ−ＩＸ、ＣＤ−Ｘ、およびＣＤ−ＸＩとして標記され
る。
ミノ酸配列（配列番号２）を示す。約２５アミノ酸の推定リーダー配列に下線を
付した。５つの潜在的なアスパラギン結合型グリコシル化部位を、Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃのアミノ酸配列において印付けした。グリコシル化の潜在的部位は、図１Ａ
のアスパラギン−６０、アスパラギン−１４２、アスパラギン−１８６、アスパ
ラギン−２００、およびアスパラギン−３１４（これらの位置は、配列番号２お
よび配列番号１０におけるアスパラギン−３５、アスパラギン−１１７、アスパ
ラギン−１６０、アスパラギン−１７５、およびアスパラギン−２８９に位置し
た、同一の配列に対応する）で開始する。潜在的グリコシル化部位は、図１Ａの
アミノ酸配列において、ヌクレオチド配列の上部にボールド打ち込み記号（＃）
が、アスパラギンについてのボールドの１文字略記（Ｎ）と対になって印付けら
れる。 ＤｅｎｄｒｉａｃとＢｒａｉｎｉａｃ−３と密接に関連したＤｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃとの間の高度な同一性領域（図３において提示されるこ
れらの配列のアラインメント）は、図１Ａにおいて二重線を付して示される。こ
れらの領域は限定的でなく、そして図１Ａにおいて保存性ドメイン（ＣＤ）−Ｉ
、ＣＤ−ＩＩ、ＣＤ−ＩＩＩ、ＣＤ−ＩＶ、ＣＤ−Ｖ、ＣＤ−ＶＩ、ＣＤ−ＶＩ
Ｉ、ＣＤ−ＶＩＩＩ、ＣＤ−ＩＸ、ＣＤ−Ｘ、およびＣＤ−ＸＩとして標記され
る。
【図１Ｂ】 図１Ｂは、Ｄｅｎｄｒｉａｃのヌクレオチド配列（配列番号１）および推定ア
ミノ酸配列（配列番号２）を示す。約２５アミノ酸の推定リーダー配列に下線を
付した。５つの潜在的なアスパラギン結合型グリコシル化部位を、Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃのアミノ酸配列において印付けした。グリコシル化の潜在的部位は、図１Ｂ
のアスパラギン−６０、アスパラギン−１４２、アスパラギン−１８６、アスパ
ラギン−２００、およびアスパラギン−３１４（これらの位置は、配列番号２お
よび配列番号１０におけるアスパラギン−３５、アスパラギン−１１７、アスパ
ラギン−１６０、アスパラギン−１７５、およびアスパラギン−２８９に位置し
た、同一の配列に対応する）で開始する。潜在的グリコシル化部位は、図１Ｂの
アミノ酸配列において、ヌクレオチド配列の上部にボールド打ち込み記号（＃）
が、アスパラギンについてのボールドの１文字略記（Ｎ）と対になって印付けら
れる。 ＤｅｎｄｒｉａｃとＢｒａｉｎｉａｃ−３と密接に関連したＤｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃとの間の高度な同一性領域（図３において提示されるこ
れらの配列のアラインメント）は、図１Ｂにおいて二重線を付して示される。こ
れらの領域は限定的でなく、そして図１Ｂにおいて保存性ドメイン（ＣＤ）−Ｉ
、ＣＤ−ＩＩ、ＣＤ−ＩＩＩ、ＣＤ−ＩＶ、ＣＤ−Ｖ、ＣＤ−ＶＩ、ＣＤ−ＶＩ
Ｉ、ＣＤ−ＶＩＩＩ、ＣＤ−ＩＸ、ＣＤ−Ｘ、およびＣＤ−ＸＩとして標記され
る。
ミノ酸配列（配列番号２）を示す。約２５アミノ酸の推定リーダー配列に下線を
付した。５つの潜在的なアスパラギン結合型グリコシル化部位を、Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃのアミノ酸配列において印付けした。グリコシル化の潜在的部位は、図１Ｂ
のアスパラギン−６０、アスパラギン−１４２、アスパラギン−１８６、アスパ
ラギン−２００、およびアスパラギン−３１４（これらの位置は、配列番号２お
よび配列番号１０におけるアスパラギン−３５、アスパラギン−１１７、アスパ
ラギン−１６０、アスパラギン−１７５、およびアスパラギン−２８９に位置し
た、同一の配列に対応する）で開始する。潜在的グリコシル化部位は、図１Ｂの
アミノ酸配列において、ヌクレオチド配列の上部にボールド打ち込み記号（＃）
が、アスパラギンについてのボールドの１文字略記（Ｎ）と対になって印付けら
れる。 ＤｅｎｄｒｉａｃとＢｒａｉｎｉａｃ−３と密接に関連したＤｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃとの間の高度な同一性領域（図３において提示されるこ
れらの配列のアラインメント）は、図１Ｂにおいて二重線を付して示される。こ
れらの領域は限定的でなく、そして図１Ｂにおいて保存性ドメイン（ＣＤ）−Ｉ
、ＣＤ−ＩＩ、ＣＤ−ＩＩＩ、ＣＤ−ＩＶ、ＣＤ−Ｖ、ＣＤ−ＶＩ、ＣＤ−ＶＩ
Ｉ、ＣＤ−ＶＩＩＩ、ＣＤ−ＩＸ、ＣＤ−Ｘ、およびＣＤ−ＸＩとして標記され
る。
【図１Ｃ】 図１Ｃは、Ｄｅｎｄｒｉａｃのヌクレオチド配列（配列番号１）および推定ア
ミノ酸配列（配列番号２）を示す。約２５アミノ酸の推定リーダー配列に下線を
付した。５つの潜在的なアスパラギン結合型グリコシル化部位を、Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃのアミノ酸配列において印付けした。グリコシル化の潜在的部位は、図１Ｃ
のアスパラギン−６０、アスパラギン−１４２、アスパラギン−１８６、アスパ
ラギン−２００、およびアスパラギン−３１４（これらの位置は、配列番号２お
よび配列番号１０におけるアスパラギン−３５、アスパラギン−１１７、アスパ
ラギン−１６０、アスパラギン−１７５、およびアスパラギン−２８９に位置し
た、同一の配列に対応する）で開始する。潜在的グリコシル化部位は、図１Ｃの
アミノ酸配列において、ヌクレオチド配列の上部にボールド打ち込み記号（＃）
が、アスパラギンについてのボールドの１文字略記（Ｎ）と対になって印付けら
れる。 ＤｅｎｄｒｉａｃとＢｒａｉｎｉａｃ−３と密接に関連したＤｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃとの間の高度な同一性領域（図３において提示されるこ
れらの配列のアラインメント）は、図１Ｃにおいて二重線を付して示される。こ
れらの領域は限定的でなく、そして図１Ｃにおいて保存性ドメイン（ＣＤ）−Ｉ
、ＣＤ−ＩＩ、ＣＤ−ＩＩＩ、ＣＤ−ＩＶ、ＣＤ−Ｖ、ＣＤ−ＶＩ、ＣＤ−ＶＩ
Ｉ、ＣＤ−ＶＩＩＩ、ＣＤ−ＩＸ、ＣＤ−Ｘ、およびＣＤ−ＸＩとして標記され
る。
ミノ酸配列（配列番号２）を示す。約２５アミノ酸の推定リーダー配列に下線を
付した。５つの潜在的なアスパラギン結合型グリコシル化部位を、Ｄｅｎｄｒｉ
ａｃのアミノ酸配列において印付けした。グリコシル化の潜在的部位は、図１Ｃ
のアスパラギン−６０、アスパラギン−１４２、アスパラギン−１８６、アスパ
ラギン−２００、およびアスパラギン−３１４（これらの位置は、配列番号２お
よび配列番号１０におけるアスパラギン−３５、アスパラギン−１１７、アスパ
ラギン−１６０、アスパラギン−１７５、およびアスパラギン−２８９に位置し
た、同一の配列に対応する）で開始する。潜在的グリコシル化部位は、図１Ｃの
アミノ酸配列において、ヌクレオチド配列の上部にボールド打ち込み記号（＃）
が、アスパラギンについてのボールドの１文字略記（Ｎ）と対になって印付けら
れる。 ＤｅｎｄｒｉａｃとＢｒａｉｎｉａｃ−３と密接に関連したＤｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃとの間の高度な同一性領域（図３において提示されるこ
れらの配列のアラインメント）は、図１Ｃにおいて二重線を付して示される。こ
れらの領域は限定的でなく、そして図１Ｃにおいて保存性ドメイン（ＣＤ）−Ｉ
、ＣＤ−ＩＩ、ＣＤ−ＩＩＩ、ＣＤ−ＩＶ、ＣＤ−Ｖ、ＣＤ−ＶＩ、ＣＤ−ＶＩ
Ｉ、ＣＤ−ＶＩＩＩ、ＣＤ−ＩＸ、ＣＤ−Ｘ、およびＣＤ−ＸＩとして標記され
る。
【図２Ａ】 図２Ａは、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３のヌクレオチド配列（配列番号３）および推
定アミノ酸配列（配列番号４）を示す。約２８アミノ酸の推定リーダー配列に下
線を付した。３つの潜在的なアスパラギン結合型グリコシル化部位を、Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３のアミノ酸配列において印付けした。グリコシル化の潜在的部位は
、図２Ａのアスパラギン−５４、アスパラギン−７９、およびアスパラギン−１
６６（これらの位置は、配列番号４および配列番号１２におけるアスパラギン−
２６、アスパラギン−５１、およびアスパラギン−１３８に位置した、同一の配
列に対応する）で開始する。潜在的なグリコシル化部位は、図２Ａのアミノ酸配
列において、ヌクレオチド配列の上部にボールド打ち込み記号（＃）が、アスパ
ラギンについてのボールドの１文字略記（Ｎ）と対になって印付けられる。 ＤｅｎｄｒｉａｃとＢｒａｉｎｉａｃ−３と密接に関連したＤｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃとの間の高度な同一性領域（図３において提示されるこ
れらの配列のアラインメント）は、図２Ａにおいて二重線を付して示される。こ
れらの領域は限定的でなく、そして図２Ａにおいて保存性ドメイン（ＣＤ）−Ｉ
、ＣＤ−ＩＩ、ＣＤ−ＩＩＩ、ＣＤ−ＩＶ、ＣＤ−Ｖ、ＣＤ−ＶＩ、ＣＤ−ＶＩ
Ｉ、ＣＤ−ＶＩＩＩ、ＣＤ−ＩＸ、ＣＤ−Ｘ、およびＣＤ−ＸＩとして標記され
る。
定アミノ酸配列（配列番号４）を示す。約２８アミノ酸の推定リーダー配列に下
線を付した。３つの潜在的なアスパラギン結合型グリコシル化部位を、Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３のアミノ酸配列において印付けした。グリコシル化の潜在的部位は
、図２Ａのアスパラギン−５４、アスパラギン−７９、およびアスパラギン−１
６６（これらの位置は、配列番号４および配列番号１２におけるアスパラギン−
２６、アスパラギン−５１、およびアスパラギン−１３８に位置した、同一の配
列に対応する）で開始する。潜在的なグリコシル化部位は、図２Ａのアミノ酸配
列において、ヌクレオチド配列の上部にボールド打ち込み記号（＃）が、アスパ
ラギンについてのボールドの１文字略記（Ｎ）と対になって印付けられる。 ＤｅｎｄｒｉａｃとＢｒａｉｎｉａｃ−３と密接に関連したＤｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃとの間の高度な同一性領域（図３において提示されるこ
れらの配列のアラインメント）は、図２Ａにおいて二重線を付して示される。こ
れらの領域は限定的でなく、そして図２Ａにおいて保存性ドメイン（ＣＤ）−Ｉ
、ＣＤ−ＩＩ、ＣＤ−ＩＩＩ、ＣＤ−ＩＶ、ＣＤ−Ｖ、ＣＤ−ＶＩ、ＣＤ−ＶＩ
Ｉ、ＣＤ−ＶＩＩＩ、ＣＤ−ＩＸ、ＣＤ−Ｘ、およびＣＤ−ＸＩとして標記され
る。
【図２Ｂ】 図２Ｂは、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３のヌクレオチド配列（配列番号３）および推
定アミノ酸配列（配列番号４）を示す。約２８アミノ酸の推定リーダー配列に下
線を付した。３つの潜在的なアスパラギン結合型グリコシル化部位を、Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３のアミノ酸配列において印付けした。グリコシル化の潜在的部位は
、図２Ｂのアスパラギン−５４、アスパラギン−７９、およびアスパラギン−１
６６（これらの位置は、配列番号４および配列番号１２におけるアスパラギン−
２６、アスパラギン−５１、およびアスパラギン−１３８に位置した、同一の配
列に対応する）で開始する。潜在的なグリコシル化部位は、図２Ｂのアミノ酸配
列において、ヌクレオチド配列の上部にボールド打ち込み記号（＃）が、アスパ
ラギンについてのボールドの１文字略記（Ｎ）と対になって印付けられる。 ＤｅｎｄｒｉａｃとＢｒａｉｎｉａｃ−３と密接に関連したＤｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃとの間の高度な同一性領域（図３において提示されるこ
れらの配列のアラインメント）は、図２Ｂにおいて二重線を付して示される。こ
れらの領域は限定的でなく、そして図２Ｂにおいて保存性ドメイン（ＣＤ）−Ｉ
、ＣＤ−ＩＩ、ＣＤ−ＩＩＩ、ＣＤ−ＩＶ、ＣＤ−Ｖ、ＣＤ−ＶＩ、ＣＤ−ＶＩ
Ｉ、ＣＤ−ＶＩＩＩ、ＣＤ−ＩＸ、ＣＤ−Ｘ、およびＣＤ−ＸＩとして標記され
る。
定アミノ酸配列（配列番号４）を示す。約２８アミノ酸の推定リーダー配列に下
線を付した。３つの潜在的なアスパラギン結合型グリコシル化部位を、Ｂｒａｉ
ｎｉａｃ−３のアミノ酸配列において印付けした。グリコシル化の潜在的部位は
、図２Ｂのアスパラギン−５４、アスパラギン−７９、およびアスパラギン−１
６６（これらの位置は、配列番号４および配列番号１２におけるアスパラギン−
２６、アスパラギン−５１、およびアスパラギン−１３８に位置した、同一の配
列に対応する）で開始する。潜在的なグリコシル化部位は、図２Ｂのアミノ酸配
列において、ヌクレオチド配列の上部にボールド打ち込み記号（＃）が、アスパ
ラギンについてのボールドの１文字略記（Ｎ）と対になって印付けられる。 ＤｅｎｄｒｉａｃとＢｒａｉｎｉａｃ−３と密接に関連したＤｒｏｓｏｐｈｉ
ｌａ Ｂｒａｉｎｉａｃとの間の高度な同一性領域（図３において提示されるこ
れらの配列のアラインメント）は、図２Ｂにおいて二重線を付して示される。こ
れらの領域は限定的でなく、そして図２Ｂにおいて保存性ドメイン（ＣＤ）−Ｉ
、ＣＤ−ＩＩ、ＣＤ−ＩＩＩ、ＣＤ−ＩＶ、ＣＤ−Ｖ、ＣＤ−ＶＩ、ＣＤ−ＶＩ
Ｉ、ＣＤ−ＶＩＩＩ、ＣＤ−ＩＸ、ＣＤ−Ｘ、およびＣＤ−ＸＩとして標記され
る。
【図３Ａ】 図３Ａは、ＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドとＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ドとＢｒａｉｎｉａｃについてのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔ
ｅｒ ｍＲＮＡ（配列番号５；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ４１４４９）の翻訳産
物のアミノ酸配列の間の同一性領域を示す。これは、コンピュータープログラム
ＭｅｇＡｌｉｇｎ（ＤＮＡ*ＳＴＡＲ ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列分 析パッケージ）を、初期設定のパラメータを使用することにより決定された。
ドとＢｒａｉｎｉａｃについてのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔ
ｅｒ ｍＲＮＡ（配列番号５；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ４１４４９）の翻訳産
物のアミノ酸配列の間の同一性領域を示す。これは、コンピュータープログラム
ＭｅｇＡｌｉｇｎ（ＤＮＡ*ＳＴＡＲ ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列分 析パッケージ）を、初期設定のパラメータを使用することにより決定された。
【図３Ｂ】 図３Ｂは、ＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドとＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチ
ドとＢｒａｉｎｉａｃについてのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔ
ｅｒ ｍＲＮＡ（配列番号５；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ４１４４９）の翻訳産
物のアミノ酸配列の間の同一性領域を示す。これは、コンピュータープログラム
ＭｅｇＡｌｉｇｎ（ＤＮＡ*ＳＴＡＲ ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列分 析パッケージ）を、初期設定のパラメータを使用することにより決定された。
ドとＢｒａｉｎｉａｃについてのＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔ
ｅｒ ｍＲＮＡ（配列番号５；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ４１４４９）の翻訳産
物のアミノ酸配列の間の同一性領域を示す。これは、コンピュータープログラム
ＭｅｇＡｌｉｇｎ（ＤＮＡ*ＳＴＡＲ ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列分 析パッケージ）を、初期設定のパラメータを使用することにより決定された。
【図４】 図４は、Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配列の分析を示す。α、β、ターン、およ
びコイル領域；親水性および疎水性；両親媒性領域；可撓性領域；抗原性指数、
ならびに表面確率を示す。「抗原性指数またはＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ」のグ
ラフでは、正のピークが、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの高い抗原性の領域（
すなわち、本発明のエピトープ保有ペプチドが得られ得る領域）の位置を示す。
びコイル領域；親水性および疎水性；両親媒性領域；可撓性領域；抗原性指数、
ならびに表面確率を示す。「抗原性指数またはＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ」のグ
ラフでは、正のピークが、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの高い抗原性の領域（
すなわち、本発明のエピトープ保有ペプチドが得られ得る領域）の位置を示す。
【図５】 図５は、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸配列の分析を示す。α、β、ターン、
およびコイル領域；親水性および疎水性；両親媒性領域；可撓性領域；抗原性指
数、ならびに表面確率を示す。「抗原性指数またはＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ」
のグラフでは、正のピークが、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの高い抗原性
の領域（すなわち、本発明のエピトープ保有ペプチドが得られ得る領域）の位置
を示す。 図４および５において示されたデータはまた、それぞれ表ＩおよびＩＩにおい
て表の形式で表現される。各表のカラムは、表題「残基」、「位置」、およびロ
ーマ数字Ｉ−ＸＩＶで標識される。カラムの表題は、図４および５ならびに表Ｉ
およびＩＩにおいてそれぞれ提示される、アミノ酸配列の以下の特徴をいう：「
残基」：それぞれ、配列番号２および４、または図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ、な
らびに図２Ａおよび２Ｂのアミノ酸残基；「位置」：それぞれ、配列番号２およ
び配列番号４、または図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ、ならびに図２Ａおよび２Ｂ内
の対応する残基の位置；Ｉ：α、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＩＩ：
α、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；ＩＩＩ：β、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏ
ｂｓｏｎ；ＩＶ：β、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；Ｖ：ターン、領域−Ｇａ
ｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＶＩ：ターン、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；Ｖ
ＩＩ：コイル、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＶＩＩＩ：親水性プロッ
ト−Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ；ＩＸ：疎水性プロット−Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏ
ｄｓ；Ｘ：α、両親媒性領域−Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ；ＸＩ：β、両親媒性領域−
Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ；ＸＩＩ：可撓性領域−Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚ；Ｘ
ＩＩＩ：抗原性指数−Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ；およびＸＩＶ：表面確率プロ
ット−Ｅｍｉｎｉ。
およびコイル領域；親水性および疎水性；両親媒性領域；可撓性領域；抗原性指
数、ならびに表面確率を示す。「抗原性指数またはＪａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ」
のグラフでは、正のピークが、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの高い抗原性
の領域（すなわち、本発明のエピトープ保有ペプチドが得られ得る領域）の位置
を示す。 図４および５において示されたデータはまた、それぞれ表ＩおよびＩＩにおい
て表の形式で表現される。各表のカラムは、表題「残基」、「位置」、およびロ
ーマ数字Ｉ−ＸＩＶで標識される。カラムの表題は、図４および５ならびに表Ｉ
およびＩＩにおいてそれぞれ提示される、アミノ酸配列の以下の特徴をいう：「
残基」：それぞれ、配列番号２および４、または図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ、な
らびに図２Ａおよび２Ｂのアミノ酸残基；「位置」：それぞれ、配列番号２およ
び配列番号４、または図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ、ならびに図２Ａおよび２Ｂ内
の対応する残基の位置；Ｉ：α、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＩＩ：
α、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；ＩＩＩ：β、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏ
ｂｓｏｎ；ＩＶ：β、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；Ｖ：ターン、領域−Ｇａ
ｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＶＩ：ターン、領域−Ｃｈｏｕ−Ｆａｓｍａｎ；Ｖ
ＩＩ：コイル、領域−Ｇａｒｎｉｅｒ−Ｒｏｂｓｏｎ；ＶＩＩＩ：親水性プロッ
ト−Ｋｙｔｅ−Ｄｏｏｌｉｔｔｌｅ；ＩＸ：疎水性プロット−Ｈｏｐｐ−Ｗｏｏ
ｄｓ；Ｘ：α、両親媒性領域−Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ；ＸＩ：β、両親媒性領域−
Ｅｉｓｅｎｂｅｒｇ；ＸＩＩ：可撓性領域−Ｋａｒｐｌｕｓ−Ｓｃｈｕｌｚ；Ｘ
ＩＩＩ：抗原性指数−Ｊａｍｅｓｏｎ−Ｗｏｌｆ；およびＸＩＶ：表面確率プロ
ット−Ｅｍｉｎｉ。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ａ６１Ｐ 1/00 Ｃ１２Ｐ 21/02 7/00 // Ａ６１Ｋ 38/00 7/04 Ａ６１Ｐ 1/00 7/06 7/00 19/02 7/04 25/00 7/06 25/08 19/02 25/14 25/00 25/16 25/08 25/18 25/14 25/28 25/16 29/00 １０１ 25/18 35/00 25/28 35/02 29/00 １０１ 37/06 35/00 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 35/02 5/00 Ａ 37/06 Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号 ６０／１０８，９２８ (32)優先日 平成10年11月17日(1998．11．17) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｓ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 9410 Ｋｅｙ Ｗｅｓｔ Ａｖｅｎｕｅ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， Ｍａｒｙｌａｎ ｄ 20850， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅ ｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ (72)発明者 ローゼン， クレイグ エイ． アメリカ合衆国 メリーランド 20882， レイトンズビル， ローリング ヒル ロード 22400 (72)発明者 エブナー， レインハード アメリカ合衆国 メリーランド 20878， ゲイザーズバーグ， シェルバーン テ ラス ナンバー316 9906 (72)発明者 ソペット， ダニエル アール． アメリカ合衆国 バージニア 22020， センタービル， スティルフィールド プ レイス 15050 (72)発明者 エンドレス， グレゴリー エイ． アメリカ合衆国 メリーランド 20854， ポトマック， クラゲット ファーム ドライブ 9729 (72)発明者 フローレンス， キンバリー エイ． アメリカ合衆国 メリーランド 20851， ロックビル， アトランティック アベ ニュー 12805 (72)発明者 ユ， ガオ−リャン アメリカ合衆国 カリフォルニア 94403， サン マテオ， マリーナ コート 1714シー Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA21 BA41 BA80 CA04 CA09 DA02 DA06 EA02 EA04 FA18 GA11 HA01 HA12 4B064 AG01 AG27 CA02 CA10 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AA26X AA90X AA93Y AB01 AC14 AC15 BA02 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA07 BA01 BA08 BA22 BA23 NA14 ZA012 ZA062 ZA122 ZA152 ZA162 ZA182 ZA592 ZA892 ZA962 ZB022 ZB052 ZB072 ZB152 ZB212 ZB262 ZB272 ZC062 4H045 AA10 AA11 AA20 BA10 CA40 DA01 DA75 DA76 EA21 EA22 FA72 FA73 FA74 HA05
Claims (26)
- 【請求項１】 以下からなる群から選択される配列に対して少なくとも９５
％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核
酸分子： （ａ）配列番号２および配列番号１０における完全アミノ酸配列（すなわち、
配列番号２および配列番号１０の−２５位〜２９４位）を有するＤｅｎｄｒｉａ
ｃポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列； （ｂ）Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号２および配列番号１０における完全
アミノ酸配列（すなわち、配列番号２および配列番号１０の−２４位〜２９４位
）を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列； （ｃ）配列番号２および配列番号１０における１位〜２９４位のアミノ酸配列
を有する推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配
列； （ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９０５６に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列を有するＤｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列； （ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９０５６に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端メチオニンを除く完全ア
ミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコードする、ヌクレオチド
配列； （ｆ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９０５６に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｄｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列； （ｇ）配列番号４および配列番号１２における完全アミノ酸配列（すなわち、
配列番号４の−２８位〜３２４位）を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド
をコードする、ヌクレオチド配列； （ｈ）Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号４および配列番号１２における完全
アミノ酸配列（すなわち、配列番号４および配列番号１２の−２７位〜３２４位
）を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列
； （ｉ）配列番号４および配列番号１２における１位〜３２４位のアミノ酸配列
を有する推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする、ヌクレオチ
ド配列； （ｊ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列を有するＢｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列； （ｋ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端メチオニンを除く完全ア
ミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする、ヌクレオ
チド配列； （ｌ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミノ酸配列を有する成熟Ｂｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列；ならびに （ｍ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（
ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、（ｋ）または（ｌ）におけるヌクレオチド配列のいずれ
かに相補的な、ヌクレオチド配列。 - 【請求項２】 前記ポリヌクレオチドが、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列
番号１）、配列番号９、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）、または配列番号１１
における完全ヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の核酸分子。 - 【請求項３】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号２および配列番号１０の
−２５位〜２９４位のアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコ
ードする、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）、または配列番号９におけ
るヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の核酸分子。 - 【請求項４】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号４および配列番号１２の
−２８位〜３２４位のアミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド
をコードする、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）、または配列番号１１における
ヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の核酸分子。 - 【請求項５】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号２および配列番号１０の
−２４位〜２９４位のアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドをコ
ードする、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）、または配列番号９におけ
るヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の核酸分子。 - 【請求項６】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号４および配列番号１２の
−２７位〜３２４位のアミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチド
をコードする、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）、または配列番号１１における
ヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の核酸分子。 - 【請求項７】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号２および配列番号１０の
約１〜約２９４のアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの成熟形
態をコードする、図１Ａ、１Ｂ、および１Ｃ（配列番号１）、または配列番号９
におけるヌクレオチド配列を有する、請求項１に記載の核酸分子。 - 【請求項８】 前記ポリヌクレオチドが、配列番号４および配列番号１２の
約１〜約３２４のアミノ酸配列を有するＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドの成
熟形態をコードする、図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）におけるヌクレオチド配
列を有する、請求項１に記載の核酸分子。 - 【請求項９】 以下からなる群から選択される配列に対して少なくとも９５
％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核
酸分子： （ａ）配列番号２および配列番号１０の残基ｎ1〜２９４のアミノ酸配列を含 むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここでｎ1は、−２５ 〜５６の範囲の整数である、ヌクレオチド配列； （ｂ）配列番号２および配列番号１０の残基−２５〜ｍ1のアミノ酸配列を含 むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここでｍ1は、２９２ 〜２９４の範囲の整数である、ヌクレオチド配列； （ｃ）配列番号２および配列番号１０の残基ｎ1〜ｍ1からなるアミノ酸配列を
有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここでｎおよびｍ
は、上記の（ａ）および（ｂ）にそれぞれ規定される整数である、ヌクレオチド
配列； （ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９６２７に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配
列の部分からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここで
、該部分は、ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９６２
７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる該完全アミノ酸配列のアミノ
末端から１〜約８１のアミノ酸を除く、ヌクレオチド配列； （ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９６２７に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配
列の部分からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここで
、該部分は、ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９６２
７に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる該完全アミノ酸配列のカルボ
キシ末端から１〜約３のアミノ酸を除く、ヌクレオチド配列； （ｆ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９６２７に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全Ｄｅｎｄｒｉａｃアミノ酸配
列の部分からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここで
、該部分は、上記の（ｄ）および（ｅ）のアミノ末端欠失およびカルボキシ末端
欠失の任意の組み合わせを含む、ヌクレオチド配列； （ｇ）配列番号４および配列番号１２の残基ｎ2〜３２４のアミノ酸配列を含 むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここでｎ2は、−２８ 〜８０の範囲の整数である、ヌクレオチド配列； （ｈ）配列番号４および配列番号１２の残基−２８〜ｍ2のアミノ酸配列を含 むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここでｍ2は、３１６ 〜３２４の範囲の整数である、ヌクレオチド配列； （ｉ）配列番号４および配列番号１２の残基ｎ2〜ｍ2からなるアミノ酸配列を有
するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここでｎ2およびｍ2 は、上記の（ａ）〜（ｄ）にそれぞれ規定される整数である、ヌクレオチド配列
； （ｊ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含
まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸
配列の部分からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここ
で、該部分は、ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４
６３に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる該完全アミノ酸配列のアミ
ノ末端から１〜約１０８アミノ酸を除く、ヌクレオチド配列； （ｋ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含
まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸
配列の部分からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここ
で、該部分は、ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４
６３に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる該完全アミノ酸配列のカル
ボキシ末端から１〜約８アミノ酸を除く、ヌクレオチド配列；ならびに （ｌ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に含
まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全Ｂｒａｉｎｉａｃ−３アミノ酸
配列の部分からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列であって、ここ
で、該部分は、上記の（ｄ）および（ｅ）のアミノ末端欠失およびカルボキシ末
端欠失の任意の組み合わせを含む、ヌクレオチド配列。 - 【請求項１０】 前記ポリヌクレオチドが、ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６
、ＡＴＣＣ受託番号２０９６２７、ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１、またはＡＴ
ＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローンの完全ヌクレオチド配列
を有する、請求項１に記載の核酸分子。 - 【請求項１１】 前記ポリヌクレオチドが、ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６
、ＡＴＣＣ受託番号２０９６２７、ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１、またはＡＴ
ＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ
末端メチオニンを除く完全アミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチド
またはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有す
る、請求項１に記載の核酸分子。 - 【請求項１２】 前記ポリヌクレオチドが、ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６
、ＡＴＣＣ受託番号２０９６２７、ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１、またはＡＴ
ＣＣ受託番号２０９４６３に含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされるアミ
ノ酸配列を有する、Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドの成熟形態またはＢｒａｉｎ
ｉａｃ−３ポリペプチドの成熟形態をコードするヌクレオチド配列を有する、請
求項１に記載の核酸分子。 - 【請求項１３】 単離された核酸分子であって、請求項１に記載の（ａ）、
（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、
（ｋ）、（ｌ）または（ｍ）のヌクレオチド配列に対して同一なヌクレオチド配
列を有するポリヌクレオチドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーションの
条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドを含み、ここで、ハイブリダイズ
する該ポリヌクレオチドが、Ａ残基のみ、またはＴ残基のみからなるヌクレオチ
ド配列を有するポリヌクレオチドに、ストリンジェントなハイブリダイゼーショ
ンの条件下でハイブリダイズしない、核酸分子。 - 【請求項１４】 単離された核酸分子であって、請求項１に記載の（ａ）、
（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）、（ｆ）、（ｇ）、（ｈ）、（ｉ）、（ｊ）、
（ｋ）、（ｌ）または（ｍ）のアミノ酸配列を有するＤｅｎｄｒｉａｃポリペプ
チドまたはＢｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのエピトープ保有部分のアミノ酸
配列をコードするポリヌクレオチドを含む、核酸分子。 - 【請求項１５】 請求項１４に記載の単離された核酸分子であって、Ｄｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチドのエピトープ保有部分をコードし、ここで、該部分のア
ミノ酸配列が、約Ｌｅｕ−３０〜約Ｈｉｓ−３８；約Ｈｉｓ−５０〜約Ａｌａ−
５９；約Ｔｒｐ−６４〜約Ｔｒｐ−７０；約Ｍｅｔ−２０８〜約Ｖａｌ−２１３
；約Ｌｙｓ−２２４〜約Ａｓｐ−２３０；約Ｉｌｅ−２４６〜約Ｌｅｕ−２５２
；および約Ｇｌｙ−２７３〜Ｇｌｕ−２７８からなる配列番号２および配列番号
１０の配列の群から選択される、核酸分子。 - 【請求項１６】 請求項１４に記載の単離された核酸分子であって、Ｂｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのエピトープ保有部分をコードし、ここで、該部分
のアミノ酸配列が、約Ｌｙｓ−１〜約Ｓｅｒ−１２；約Ｐｒｏ−１６〜約Ｐｒｏ
−２５；約Ｌｅｕ−３６〜約Ａｒｇ−４１；約Ｐｒｏ−５８〜約Ａｓｐ−６４；
約Ｓｅｒ−７３〜約Ｉｌｅ−８４；約Ｔｈｒ−８７〜約Ｐｒｏ−９７；約Ｌｅｕ
−１６１〜約Ｖａｌ〜１６７；約Ａｓｐ−１７９〜約Ｇｌｎ−１８５；約Ｌｅｕ
−１９７〜約Ｌｙｓ−２０３；約Ｇｌｙ−２７５〜約Ａｓｐ−２８４；および約
Ａｒｇ−２９６〜約Ｇｌｕ−３０１からなる配列番号４および配列番号１２の配
列の群から選択される、核酸分子。 - 【請求項１７】 請求項１に記載の単離された核酸分子をベクターへ挿入す
る工程を包含する、組換えベクターの作製のための方法。 - 【請求項１８】 請求項１７に記載の方法により作製される、組換えベクタ
ー。 - 【請求項１９】 請求項１８に記載の組換えベクターを宿主細胞へ導入する
工程を包含する、組換え宿主細胞の作製方法。 - 【請求項２０】 請求項１９に記載の方法により産生される、組換え宿主細
胞。 - 【請求項２１】 ＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドまたはＢｒａｉｎｉａｃ−
３ポリペプチドを産生するための組換え方法であって、該ポリペプチドが発現さ
れるような条件下で請求項２０に記載の前記組換え宿主細胞を培養する工程、お
よび該ポリペプチドを回収する工程を包含する、組換え方法。 - 【請求項２２】 単離されたＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドまたはＢｒａｉ
ｎｉａｃ−３ポリペプチドであって、以下からなる群から選択される配列に対し
て少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、ポリペプチド： （ａ）配列番号２および配列番号１０に示される完全アミノ酸配列（すなわち
、配列番号２および配列番号１０の−２５位〜２９４位）を有する完全長Ｄｅｎ
ｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列； （ｂ）Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号２および配列番号１０に示される完
全アミノ酸配列（すなわち、配列番号２および配列番号１０の−２４位〜２９４
位）を有する完全長Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列； （ｃ）配列番号２および配列番号１０の１位〜２９４位のアミノ酸配列を有す
る推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペプチドのアミノ酸配列； （ｄ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９６２７に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列； （ｅ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９６２７に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端メチオニンを除く完全ア
ミノ酸配列； （ｆ）ＡＴＣＣ受託番号２０３０５６およびＡＴＣＣ受託番号２０９６２７に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる推定成熟Ｄｅｎｄｒｉａｃポリペ
プチドの完全アミノ酸配列； （ｇ）配列番号４および配列番号１２に示される完全アミノ酸配列（すなわち
、配列番号４および配列番号１２の−２８位〜３２４位）を有する完全長Ｂｒａ
ｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列； （ｈ）Ｎ末端メチオニンを除く、配列番号４および配列番号１２に示される完
全アミノ酸配列（すなわち、配列番号４および配列番号１２の−２７位〜３２４
位）を有する完全長Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列； （ｉ）配列番号４および配列番号１２の１位〜３２４位のアミノ酸配列を有す
る推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドのアミノ酸配列； （ｊ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる完全アミノ酸配列； （ｋ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる、Ｎ末端メチオニンを除く完全ア
ミノ酸配列；ならびに （ｌ）ＡＴＣＣ受託番号２０３４５１およびＡＴＣＣ受託番号２０９４６３に
含まれるｃＤＮＡクローンによりコードされる推定成熟Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポ
リペプチドの完全アミノ酸配列。 - 【請求項２３】 単離されたポリペプチドであって、Ｄｅｎｄｒｉａｃタン
パク質のエピトープ保有部分を含み、ここで、該部分が、以下からなる群から選
択される、ポリペプチド：配列番号２および配列番号１０のアミノ酸残基約Ｌｅ
ｕ−３０〜約Ｈｉｓ−３８を含むポリペプチド；配列番号２および配列番号１０
のアミノ酸残基約Ｈｉｓ−５０〜約Ａｌａ−５９を含むポリペプチド；配列番号
２および配列番号１０のアミノ酸残基約Ｔｒｐ−６４〜約Ｔｒｐ−７０を含むポ
リペプチド；配列番号２および配列番号１０のアミノ酸残基約Ｍｅｔ−２０８〜
約Ｖａｌ−２１３を含むポリペプチド；配列番号２および配列番号１０のアミノ
酸残基約Ｌｙｓ−２２４〜約Ａｓｐ−２３０を含むポリペプチド；配列番号２お
よび配列番号１０のアミノ酸残基約Ｉｌｅ−２４６〜約Ｌｅｕ−２５２を含むポ
リペプチド；配列番号２および配列番号１０のアミノ酸残基約Ｇｌｙ−２７３〜
約Ｇｌｕ−２７８を含むポリペプチド。 - 【請求項２４】 単離されたポリペプチドであって、Ｂｒａｉｎｉａｃ−３
タンパク質のエピトープ保有部分を含み、ここで、該部分が、以下からなる群か
ら選択される、ポリペプチド：配列番号４および配列番号１２のアミノ酸残基約
Ｌｙｓ−１〜約Ｓｅｒ−１２を含むポリペプチド；配列番号４および配列番号１
２のアミノ酸残基約Ｐｒｏ−１６〜約Ｐｒｏ−２５を含むポリペプチド；配列番
号４および配列番号１２のアミノ酸残基約Ｌｅｕ−３６〜約Ａｒｇ−４１を含む
ポリペプチド；配列番号４および配列番号１２のアミノ酸残基約Ｐｒｏ−５８〜
約Ａｓｐ−６４を含むポリペプチド；配列番号４および配列番号１２のアミノ酸
残基約Ｓｅｒ−７３〜約Ｉｌｅ−８４を含むポリペプチド；配列番号４および配
列番号１２のアミノ酸残基約Ｔｈｒ−８７〜約Ｐｒｏ−９７を含むポリペプチド
；配列番号４および配列番号１２のアミノ酸残基約Ｌｅｕ−１６１〜約Ｖａｌ−
１６７を含むポリペプチド；配列番号４および配列番号１２のアミノ酸残基約Ａ
ｓｐ−１７９〜約Ｇｌｎ−１８５を含むポリペプチド；配列番号４および配列番
号１２のアミノ酸残基約Ｌｅｕ−１９７〜約Ｌｙｓ−２０３を含むポリペプチド
；配列番号４および配列番号１２のアミノ酸残基約Ｇｌｙ−２７５〜約Ａｓｐ−
２８４を含むポリペプチド；配列番号４および配列番号１２のアミノ酸残基約Ａ
ｒｇ−２９６〜約Ｇｌｕ−３０１を含むポリペプチド。 - 【請求項２５】 請求項２２に記載のＤｅｎｄｒｉａｃポリペプチドまたは
Ｂｒａｉｎｉａｃ−３ポリペプチドに特異的に結合する、単離された抗体。 - 【請求項２６】 以下からなる群から選択される配列に対して少なくとも９
５％同一である配列を有するポリヌクレオチドを含む、単離された核酸分子： （ａ）配列番号６のヌクレオチド配列 （ｂ）配列番号７のヌクレオチド配列 （ｃ）配列番号８のヌクレオチド配列 （ｄ）図２Ａおよび２Ｂ（配列番号３）に示される配列の部分のヌクレオチド
配列であって、ここで、該部分は、ヌクレオチド１５０〜６５０の少なくとも５
０連続するヌクレオチドを含む、ヌクレオチド配列； （ｅ）上記の（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、および（ｄ）の任意のヌクレオチド配
列に対して相補的なヌクレオチド配列。
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