JP2002504933A - 皮膚の老化及び傷の治療に用いられる細胞移動剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 細胞移動剤は、線維芽細胞を傷の周辺部から遠ざかる方向に移動させる作用を有し、この作用によって傷の治癒を促進する。この細胞移動剤は、インドール-3-酢酸と、インドール-3-アセチル-L-フェニルアラニンの如きその誘導体を含むことができる。適用開始５日後に、線維芽細胞の移動量の増加が観察された。投与量が０.１〜２５０ppmのとき、健康な人間の線維芽細胞の無細胞領域への移動は、細胞移動剤なしの場合と比べて、より迅速に行われることを示した。この結果、皮膚は充実し、傷が治癒する。細胞移動剤の供給は、表面塗布又は体内投与により行われる。

Description

【発明の詳細な説明】 皮膚の老化及び傷の治療に用いられる細胞移動剤発明の技術分野 本発明は、細胞を移動させる作用を有する植物製の細胞移動剤(cell migratio n agent)に関し、例えばインドール-3-酢酸のように、皮膚等の組織の治癒を促 進する細胞移動剤に関する。細胞移動剤は、皮膚の皺の治療に有用であり、単独 使用、又はαヒドロキシン酸(AHA)、レチノイン酸又はその他の化学剥皮剤(chem ical peel agents)との組合せ使用により、皮膚に及ぼすフォトエージング(phot o aging)の影響を最少にすることができる。発明の背景 人間の組織は、いろんな方法で損なわれる。例えば、皮膚は、太陽により、又 はαヒドロキシ酸(AHA)等の酸の適用によりバーニング(burning)を起こすことが ある。筋肉組織は、酸素の不足又は外傷により損なわれることがある。どちらの 場合にも、体は、何らかの治癒反応を起こす。組織損傷の治癒速度は、細胞移動 剤の適用によって向上することが提案されている。細胞移動剤は一般的に、線維 芽細胞(fibroblast cells)が、傷組織の周辺部から傷部の内部へ移動するのを促 進する。この線維芽細胞は、結合組織(connective tissue)を生じさせる間葉細 胞である。説明の都合上、傷(wound)は、如何なる原因であれ、組織に対する全 てのダメージ(damage)を含むものとする。通常の治癒の段階では、皮膚のような 組織は、傷の周辺部から内側の方に向かって治癒する。線維芽細胞が傷の中央部 へ移行し、周辺部から内側に向けて外側から治癒を進行させるときに、治癒速度 の向上が観察される。 植物ホルモンや生長因子(growth factors)もまた、動物の傷組織の治癒に重要 な役割を果たすことが報告されている。ジベレリン、インドール酢酸及びカイネ チンを含む化合物の中には、植物細胞の生長を促進する作用を有するものもある 。例えば、ジョーンズらに付与された米国特許第５１８８６５５号には、(a)ジ ベレリン、(b)ヘテロオキシンインドール-3-酢酸及びサイトカイニン6-(4-ヒド ロキシ-3-メチル-2トランス−ベテニルアミノ(betenylamino))プリンの協同混合 物(synergistic mixture)を有効成分として含む植物生長促進物質が開示されて いる。これらの植物生長促進剤の分子量は非常に小さく、その代表的な量は１７ ５〜３４６である。ヒトの細胞研究では、植物生長ホルモンの使用と傷の治癒と の間に、相関関係は全くなかった。 植物から得られ、動物組織の治療を改善するのに用いることのできる細胞移動 剤が必要とされている。そのような細胞移動剤は、人体への適用が可能で、皮膚 の治癒 作用に特有の利点をもたらすものであらねばならない。皮膚のダメージには、太 陽又は化学剤に曝されて生ずるエージングも含まれる。それ故、適当な細胞移動 剤とは、太陽又は化学剤に曝されたときに起こる老化(aging)に関係のある皮膚 のダメージをできるだけ少なくするか又は治癒させるのに有用なものであらねば ならない。発明の概要 人間の細胞と植物生長促進剤に関する研究によれば、インドール-3-酢酸(オー キシン(Auxin)と称されることもある)とその誘導体(derivatives)は、処理を開 始して５日後に、線維芽細胞の移動を実質的に増大させることが判った。インド ール-3-アセチル-L-フェニルアラニンのような誘導体も、細胞の移動を促進させ ることが判った。同じ様に、インドール-3-酢酸メチルエステル、インドール-3- アセチル-L-アスパラギン酸及びインドール-3-アセチルグリシンなどの誘導体も また、有用な結果をもたらす。 オーキシンとその誘導体のインドール-3-アセチル-L-フェニルアラニンは、研 究が行われている間、移動速度の向上が維持されることを示した。これら化合物 の投与量が０.１ppm以上のとき、健康な人間の線維芽細胞の無細胞領域への移動 は、植物移動剤なしの場合と比べて、より迅速に行われることを示した。投与量 レベルが２ppm〜２５０ppmのとき、さらに好ましい結果を示した。細 胞移動が一旦行われると、健康細胞は次に通常の速度で分裂するため、無細胞領 域は、速やかに且つ効果的に健康細胞で一杯になる。この結果、皮膚の充実(plu mping)又は傷の治癒がもたらされる。化合物は、表面塗布又は体内投与等の方法 によって供給される。図面の簡単な説明 本発明の理解をより完全にし、また、その詳細及び利点をさらに詳しく理解で きるようにするために、図面を参照しながら以下に詳細に説明する。 図１は、実験３日後において３種の化合物の影響の下で観察された相対的な細 胞移動距離を示す棒グラフである。 図２は、実験５日後において３種の化合物の影響の下で観察された相対的な細 胞移動距離を示す棒グラフである。 図３は、実験１０日後において３種の化合物の影響の下で観察された相対的な 細胞移動距離を示す棒グラフである。 図４は、実験１４日後において３種の化合物の影響の下で観察された相対的な 細胞移動距離を示す棒グラフである。及び、 図５は、線維芽細胞生長因子に対する調製剤Ｂの細胞移動反応を示す棒グラフ である。発明の詳細な説明 インドール-3-アセチル-L-フェニルアラニン及びインドール-3-酢酸を用いる ことにより、傷治療の改善が観察された。これらの観察結果を検証するための実 験を行なった。これら実験の当初の目的は、小規模な予備実験で傷治療の促進作 用を有することが判った３種類の植物製剤(plant-derived agents)について、細 胞生長促進(分裂促進)作用を有するかどうかを判定することであった。これら植 物製の調製剤にＡ、Ｂ及びＣのラベルを無作為に貼り、種々の濃度にて、何らか の分裂促進作用を有するかどうかを調べた。濃度は、０.１ppm、１ppm、１０ppm 、２５ppm、５０ppm、１００ppm及び２５０ppmのものを準備した。Ａ剤は、イン ドール-3-酢酸を含む化合物である。Ｂ剤は、インドール-3-アセチル-L-フェニ ルアラニンを含む化合物である。Ｃ剤は、ジベレリン酸を含む化合物である。線 維芽細胞の生長に関しては、Ａ剤は生長の抑制が顕著であり、Ｂ剤の生長抑制は 緩やかであった。線維芽細胞は、傷治療において中心的役割を果たすため、これ らの実験において最も重要な細胞である。Ｃ剤は、細胞の生長に及ぼす影響は実 質的に認められなかった。調製剤の投与は、注射、表面塗布、摂取(ingestion) 又は吸入(inhalation)によって行なうことができる。 これらの知見により、調製剤は、細胞生長を促進するよりもむしろ、傷領域へ の細胞移動を促進するという仮説を立てた。この仮説は、皮膚又は血管の傷治療 の初期 段階では、欠損又は損傷した細胞と置換するための細胞分裂よりはむしろ、傷領 域への細胞移動が行われるという事実に基づいている。これら調製剤の何れか一 種以上が細胞移動を刺激することによって傷治癒に貢献するという可能性を調べ るために、インビトロの創傷モデルを開発した。皮膚の線維芽細胞は、まず最初 に、直径６０mmの丸い培養皿の中で接種し(seeded)、標準の増殖培地(normal gr owth medium)の存在下でプレート底部を覆うまで培養した。このような集まり(c onfluence)が形成されると、各プレートの中心から掻き取って、直径約２５mmの 小円形の領域を取り除いた。この時点で、残りの細胞には、（細胞の移動を刺激 する作用を有する）生長因子が何ら加えられていない栄養培地(nutrient cultur e medium)を供給した。この培地に対しては、エタノール(投薬の際に媒体(vehic le)として用いられるもの)単独(対照)か、或いはＡ,Ｂ又はＣの何れかを２５０p pm含むエタノールを少量加えた。培地内の調製剤の量を相対的に一定に保つため 、細胞には、３日毎に夫々の培地を再供給した。傷領域の正確な境界を黒でマー クし、倒立型位相光学顕微鏡を用いて、その境界から傷領域内の最も遠い位置の 細胞までの距離を測定し、これを細胞移動距離として求めた。３日目、５日目、 １０日目及び１４日目に、各々の傷領域の周囲を５回ずつ測定した。Ａ剤、Ｂ剤 及びＣ剤に反応した線維芽細胞の移動距離の比較を、 図１、図２、図３及び図４に示している。図示された平均の多くは、２５個(ｎ ＝２５)の平均を表している。処理を施したグルーブは、スチューデントの不対( unpaired)ｔ分析を用いて、統計的に比較した。図１乃至図４に示された結果は 、次の通りである。処理開始５日後に、Ｂ剤は、対照培地(control media)のみ で処理した細胞と比べて、一定の且つ明確な線維芽細胞の移動の増加を示した。 Ａ剤で処理した細胞もまた、５日後及び１４日後に、対照細胞と比べて、僅かで あるが明確な細胞移動の増加を示した。 次に、Ｂ剤に対する反応の一定性及びそのレベルについて、線維芽細胞の移動 を刺激する作用が最も大きいとされている公知の調製剤と比較することにした。 このため、線維芽細胞生長因子(Fibroblast Growth Factor;ＦＧＦ)とＢ剤との 比較を行なった。ＦＧＦは、処方通りに使用して、線維芽細胞の移動を刺激させ た。図５を参照すると、Ｂ剤は再び細胞移動を増加させたが、その程度はＦＧＦ (２０ng/ml)程強くなかった。具体的には、Ｂ剤で処理された細胞の７日間の平 均移動量は４.１±０.３７mmであり、対照細胞の移動量は５.３±０.２４mmであ った。このデータを比較すると、Ｂ剤は、ＦＧＦに対して観察された細胞移動反 応の約３分の１を引き出した(elicited)ことを示している。 結論として、これら調製剤の中で細胞分裂誘起作用(m itogenic)を有するものはなく、２種類の調製剤は、実際に細胞分裂(又は細胞生 長)を抑制する作用を示している。これに対し、供試剤Ａと供試剤Ｂは、線維芽 細胞の移動を刺激する効果をはっきりと示した。これらの供試剤が分裂誘起作用 を有しないという事実から、これら調製剤は治療用の薬剤として適用できるとい う特徴を有する。分裂誘起作用を有する調製剤は、発癌作用を潜在的に有するの ではないかという不安を引き起こす。Ａ剤とＢ剤は細胞の移動を刺激する作用を 有するので、これら調製剤は傷治癒を促進するのに効果的な薬剤となりうる。Ａ 剤とＢ剤は、皮膚の老化現象を減少させる。 本発明の望ましい実施例を、詳細な説明の中で記載し、添付図面の中で示した けれども、本発明は、開示された化合物に限定されるものではなく、発明の精神 から逸脱することなく、組成の種々の変更は可能である。それゆえ、本発明は、 請求の範囲内にあるそれら変更も含むものと理解されるべきである。

【手続補正書】 【提出日】平成１３年９月２０日（２００１．９．２０） 【補正内容】 請求の範囲 １．組織傷の治癒促進に用いられる薬剤であって、損傷した細胞領域への細胞移 動を促進するインドール-3-酢酸又はその誘導体を、治療上有効な量含んでいる 薬剤。 ２．インドール-3-酢酸の誘導体は、インドール-3-アセチル-L-フェニルアラニ ン、インドール-3-アセチル−Ｌ−アセチルグリシン、インドール-3-アセチル-L -アスパラギン酸、インドール-3-アセチル-L-アラニン及びインドール-3-酢酸メ チルエステルからなる群から選択される請求項１に記載の薬剤。 ３．インドール-3-酢酸又はその誘導体の治療上有効な量は０.１ppm〜１０００p pmである請求項１又は請求項２に記載の薬剤。 ４．インドール-3-酢酸又はその誘導体の治療上有効な量は０.１０ppm〜２５０p pmである請求項３に記載の薬剤。 ５．化学剥皮剤をさらに含んでいる請求項１乃至請求項４の何れかに記載の薬剤 。 ６．損傷した細胞領域は皺又は傷である請求項１乃至請求項５の何れかに記載の 薬剤。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｄ 209/18 Ｃ０７Ｄ 209/18 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 治療上有効な量のインドール-3-酢酸及びその誘導体を含んでいる細胞移 動剤。 ２． 誘導体はインドール-3-アセチル-L−フェニルアラニンを含んでいる請求 項１の細胞移動剤。 ３． 誘導体はインドール-3-アセチルグリシンを含んでいる請求項１の細胞移 動剤。 ４． 誘導体はインドール-3-アセチル-L-アスパラギン酸を含んでいる請求項１ の細胞移動剤。 ５． 誘導体はインドール-3-アセチル-L-アラニンを含んでいる請求項１の細胞 移動剤。 ６． 誘導体はインドール-3-酢酸メチルエステルを含んでいる請求項１の細胞 移動剤。 ７． ０．１ppm〜１０００ppmのインドール-3-酢酸又はその誘導体を含んでい る請求項１の細胞移動剤。 ８． ０．１０ppm〜２５０ppmのインドール-3-酢酸又はその誘導体を含んでい る請求項１の細胞移動剤。 ９． 化学剥皮剤をさらに含んでいる請求項１の細胞移動剤。 １０．治療上有効な量のインドール-3-酢酸又はその誘導体を組織へ供給するこ とにより組織傷の治癒を促進する傷治癒促進方法。 １１．供給は表面塗布により行われる請求項１０の方法。 １２．供給は注射により行われる請求項１０の方法。 １３．供給は摂取により行われる請求項１０の方法。 １４．供給は吸入により行われる請求項１０の方法。 １５．皮膚の老化を治療することをさらに含んでいる請求項１０の方法。