JP2002365272A - 液体クロマトグラフ及び分析システム - Google Patents
液体クロマトグラフ及び分析システムInfo
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 溶離液のより高精度なグラジエント変化を可
能にし、高感度の検出又は分析ができるように工夫され
た液体クロマトグラフ、分析システム及びグラジェント
溶離方法を提供すること。 【解決手段】 溶離液Ｅを所定流量で流す送液手段１
と、前記溶離液Ｅに試料Ｓｍを注入する試料注入手段９
と、試料Ｓｍ中に含まれる溶質Ｓｏを分離する分離カラ
ム手段１３と、を少なくとも備えた液体クロマトグラフ
において、前記送液手段１から送られてくる溶離液Ｅの
流路３を分岐させて所定容量の分岐流路７,７…を形成
し、該分岐流路７,７…に組成の異なる溶離液Ｅ１，Ｅ
２…を一時格納し、この一時格納された溶離液Ｅ１，Ｅ
２…を選択する溶離液選択手段８と、前記試料注入手段
９により、選択された溶離液Ｅ１，Ｅ２…に試Ｓｍを注
入して分離カラム１３に流し、溶質Ｓｏをグラジエント
溶出する手段と、が設けられた液体クロマトグラフとこ
の液体クロマトグラフを質量分析計に接続した分析シス
テム並びにこの液体クロマトグラフを用いたグラジエン
ト溶離方法を提供する。
能にし、高感度の検出又は分析ができるように工夫され
た液体クロマトグラフ、分析システム及びグラジェント
溶離方法を提供すること。 【解決手段】 溶離液Ｅを所定流量で流す送液手段１
と、前記溶離液Ｅに試料Ｓｍを注入する試料注入手段９
と、試料Ｓｍ中に含まれる溶質Ｓｏを分離する分離カラ
ム手段１３と、を少なくとも備えた液体クロマトグラフ
において、前記送液手段１から送られてくる溶離液Ｅの
流路３を分岐させて所定容量の分岐流路７,７…を形成
し、該分岐流路７,７…に組成の異なる溶離液Ｅ１，Ｅ
２…を一時格納し、この一時格納された溶離液Ｅ１，Ｅ
２…を選択する溶離液選択手段８と、前記試料注入手段
９により、選択された溶離液Ｅ１，Ｅ２…に試Ｓｍを注
入して分離カラム１３に流し、溶質Ｓｏをグラジエント
溶出する手段と、が設けられた液体クロマトグラフとこ
の液体クロマトグラフを質量分析計に接続した分析シス
テム並びにこの液体クロマトグラフを用いたグラジエン
ト溶離方法を提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、グラジェント溶出
分析に適した液体クロマトグラフ、該液体クロマトグラ
フを備える分析検出器、該液体クロマトグラフを用いた
グラジェント溶離方法に関する。
分析に適した液体クロマトグラフ、該液体クロマトグラ
フを備える分析検出器、該液体クロマトグラフを用いた
グラジェント溶離方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】高速液体クロマトグラフ（以下、「ＨＰ
ＬＣ」と称する。）を用いて、溶離液の組成（組成比）
を順次変化させて分離カラムに流し、分離カラムに保持
された溶質の溶出強度を変化させる、いわゆるグラジエ
ント溶離法（グラジエント溶出法）を利用した分析技術
がある。
ＬＣ」と称する。）を用いて、溶離液の組成（組成比）
を順次変化させて分離カラムに流し、分離カラムに保持
された溶質の溶出強度を変化させる、いわゆるグラジエ
ント溶離法（グラジエント溶出法）を利用した分析技術
がある。
【０００３】この分析技術は、多大な溶出時間を要する
分離が短時間で可能になる、類似の構造の分子を分離す
ることが可能となる等の利点があるので普及している。
分離が短時間で可能になる、類似の構造の分子を分離す
ることが可能となる等の利点があるので普及している。
【０００４】現在、この分析技術においては、溶離液を
１ｍＬ／ｍｉｎ程度の流速で送液するのが一般的である
が、溶離液の流速をより低速化して、試料の検出精度を
より高めようとする技術的傾向を背景に、近年、５μＬ
／ｍｉｎ程度の低流速条件で溶離液を送液できるように
工夫されたＨＰＬＣも提案され始めている。
１ｍＬ／ｍｉｎ程度の流速で送液するのが一般的である
が、溶離液の流速をより低速化して、試料の検出精度を
より高めようとする技術的傾向を背景に、近年、５μＬ
／ｍｉｎ程度の低流速条件で溶離液を送液できるように
工夫されたＨＰＬＣも提案され始めている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、低流速
向けに設計されたＨＰＬＣは、装置構造が非常に複雑で
あって、操作が難しいという基本的な技術的課題があっ
た。
向けに設計されたＨＰＬＣは、装置構造が非常に複雑で
あって、操作が難しいという基本的な技術的課題があっ
た。
【０００６】そして、溶離液が５μＬ／ｍｉｎの流速よ
りも遅い条件で、グラジエント溶離を行おうとする場合
は、溶離液が搬送される流路を本流路と内口径の小さな
支流路に分岐（スプリット）させて、支流路側に分析カ
ラムを接続し、支流路を低流速で流れる溶離液を用いて
グラジエント溶離分析を行うという技術を採用すること
が可能である。
りも遅い条件で、グラジエント溶離を行おうとする場合
は、溶離液が搬送される流路を本流路と内口径の小さな
支流路に分岐（スプリット）させて、支流路側に分析カ
ラムを接続し、支流路を低流速で流れる溶離液を用いて
グラジエント溶離分析を行うという技術を採用すること
が可能である。
【０００７】しかし、この技術では、支流路において目
詰り等が発生しやすく、所定（ｓｕｂ−ｕＬ／ｍｉｎ）
の所望の低流速条件を安定に保つことが困難で、しかも
設定流量で流れているか否かの確認さえ困難となるた
め、高精度のグラジエント溶離を行うことができないと
いう技術的課題があった。
詰り等が発生しやすく、所定（ｓｕｂ−ｕＬ／ｍｉｎ）
の所望の低流速条件を安定に保つことが困難で、しかも
設定流量で流れているか否かの確認さえ困難となるた
め、高精度のグラジエント溶離を行うことができないと
いう技術的課題があった。
【０００８】そこで、本発明は、組成の異なる溶離液を
順次安定した低流速条件で確実に送液することによっ
て、溶離液のより高精度なグラジエント変化を可能に
し、高感度の検出又は分析ができるように工夫された液
体クロマトグラフ、分析検出器及びグラジェント溶離方
法を提供することを目的とする。
順次安定した低流速条件で確実に送液することによっ
て、溶離液のより高精度なグラジエント変化を可能に
し、高感度の検出又は分析ができるように工夫された液
体クロマトグラフ、分析検出器及びグラジェント溶離方
法を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】上記技術課題を解決する
ために、本発明では、以下の手段を採用する。
ために、本発明では、以下の手段を採用する。
【００１０】まず、流路中を順次搬送されてくる組成の
異なる溶離液（ｅｌｕｅｎｔ）によって試料を分離カラ
ムに導入し、前記溶離液の溶出強度に基づいて試料中の
溶質（ｓｏｌｕｔｅ）をグラジエント溶離する構成の液
体クロマトグラフにおいて、前記溶離液の流路を分岐さ
せて所定容量の分岐流路を形成し、この分岐流路に組成
の異なる溶離液を一時格納する溶離液格納手段と、前記
分岐流路に一時格納された溶離液を順次選択して前記分
離カラム側に搬送する溶離液選択手段と、が設けられた
液体クロマトグラフを提供する。
異なる溶離液（ｅｌｕｅｎｔ）によって試料を分離カラ
ムに導入し、前記溶離液の溶出強度に基づいて試料中の
溶質（ｓｏｌｕｔｅ）をグラジエント溶離する構成の液
体クロマトグラフにおいて、前記溶離液の流路を分岐さ
せて所定容量の分岐流路を形成し、この分岐流路に組成
の異なる溶離液を一時格納する溶離液格納手段と、前記
分岐流路に一時格納された溶離液を順次選択して前記分
離カラム側に搬送する溶離液選択手段と、が設けられた
液体クロマトグラフを提供する。
【００１１】より具体的には、（１）一定の流量で溶離
液を流す高圧送液手段と、（２）この高圧送液手段によ
って搬送される溶離液の流路を分岐させて、有機溶媒
比、ｐＨ、塩濃度その他の組成が異なる溶離液をそれぞ
れ各分岐流路中に所定量一時格納する溶離液格納手段
と、（３）前記分岐流路に一時格納された溶離液を順次
選択して分離カラム側に搬送する溶離液選択手段と、
（４）順次搬送されてくる溶離液に試料を注入する試料
注入手段と、（５）分離カラムを用いて試料中に含まれ
る溶質を溶離液の溶出強度に基づいてグラジエント溶離
する手段と、を少なくとも備えた液体クロマトグラフを
提供する。
液を流す高圧送液手段と、（２）この高圧送液手段によ
って搬送される溶離液の流路を分岐させて、有機溶媒
比、ｐＨ、塩濃度その他の組成が異なる溶離液をそれぞ
れ各分岐流路中に所定量一時格納する溶離液格納手段
と、（３）前記分岐流路に一時格納された溶離液を順次
選択して分離カラム側に搬送する溶離液選択手段と、
（４）順次搬送されてくる溶離液に試料を注入する試料
注入手段と、（５）分離カラムを用いて試料中に含まれ
る溶質を溶離液の溶出強度に基づいてグラジエント溶離
する手段と、を少なくとも備えた液体クロマトグラフを
提供する。
【００１２】この液体クロマトグラフは、まず、５００
ｎＬ／ｍｉｎ以下レベルの極めて低流量条件で、溶離液
を順次一定流量で安定かつ確実に流すことができるとい
う基本特性を備えているので、試料中に含まれる溶質成
分を高精度にグラジエント溶離することが可能となる。
また、溶離液を低流量で流す構成によって、溶離液中の
溶質を確実に濃縮させることができるようになる。
ｎＬ／ｍｉｎ以下レベルの極めて低流量条件で、溶離液
を順次一定流量で安定かつ確実に流すことができるとい
う基本特性を備えているので、試料中に含まれる溶質成
分を高精度にグラジエント溶離することが可能となる。
また、溶離液を低流量で流す構成によって、溶離液中の
溶質を確実に濃縮させることができるようになる。
【００１３】また、試料注入手段前の流路位置におい
て、組成が異なる溶離液を、所定量分一時格納しておく
溶離液格納手段を設けたことによって、必要な組成の溶
離液を、必要に応じて、必要なタイミングで、段階的又
は連続的に、容易に搬送させることができるグラジェン
ト溶離方法を提供できる。
て、組成が異なる溶離液を、所定量分一時格納しておく
溶離液格納手段を設けたことによって、必要な組成の溶
離液を、必要に応じて、必要なタイミングで、段階的又
は連続的に、容易に搬送させることができるグラジェン
ト溶離方法を提供できる。
【００１４】次に、本発明に係る液体クロマトグラフで
は、送液手段後に設けられる各分岐流路に、バルブの切
り替えにより、シリンジで溶離液を充填できる手段を備
えるように工夫したので、溶離液の交換又は補充を簡単
に行うことができる。
は、送液手段後に設けられる各分岐流路に、バルブの切
り替えにより、シリンジで溶離液を充填できる手段を備
えるように工夫したので、溶離液の交換又は補充を簡単
に行うことができる。
【００１５】ここで、前記分岐流路に対する組成の異な
る溶離液の充填を、自動制御で行うようにしてもよい。
この手段を採用すると、溶離液の充填精度を高めること
ができる。
る溶離液の充填を、自動制御で行うようにしてもよい。
この手段を採用すると、溶離液の充填精度を高めること
ができる。
【００１６】また、分析開始時において、前記分岐流路
の吐出口から前記分離カラム手段に至る流路中に、予め
組成の異なる溶離液を前記分岐流路から順番に送液し、
貯留しておく手段を採用することもできる。この手段に
よれば、分析開始からより短時間でグラジエント溶離を
行うことが可能となるので、分析時間の短縮を達成でき
る。
の吐出口から前記分離カラム手段に至る流路中に、予め
組成の異なる溶離液を前記分岐流路から順番に送液し、
貯留しておく手段を採用することもできる。この手段に
よれば、分析開始からより短時間でグラジエント溶離を
行うことが可能となるので、分析時間の短縮を達成でき
る。
【００１７】続いて、本発明では、上記した液体クロマ
トグラフの分離カラム手段に、質量分析計（ＭＡＳＳ）
を接続した分析検出器、即ちＬＣ／ＭＳ（liquid chrom
atography/mass spectrometry）を提供する。
トグラフの分離カラム手段に、質量分析計（ＭＡＳＳ）
を接続した分析検出器、即ちＬＣ／ＭＳ（liquid chrom
atography/mass spectrometry）を提供する。
【００１８】この手段では、溶離液の組成を段階的に変
えていく階段溶離法又は連続的に変化させていく勾配溶
離法のいずれも自在に選択して簡単に行うことができる
ようになることから、単一組成の溶離液では、溶離が難
しいとされた多成分系の試料でも、低速少流量で、短時
間で効率よく、分離・検出を行うことができるようにな
る。
えていく階段溶離法又は連続的に変化させていく勾配溶
離法のいずれも自在に選択して簡単に行うことができる
ようになることから、単一組成の溶離液では、溶離が難
しいとされた多成分系の試料でも、低速少流量で、短時
間で効率よく、分離・検出を行うことができるようにな
る。
【００１９】本発明に係る分析検出器は、少流量、低流
速で溶離液を搬送して、高精度に溶質をグラジエント溶
離できるように構成された液体クロマトグラフを備えて
いるので、溶質成分の検出を高感度で行うことができる
とともに、検出のための積算時間をより長くすることが
できる。
速で溶離液を搬送して、高精度に溶質をグラジエント溶
離できるように構成された液体クロマトグラフを備えて
いるので、溶質成分の検出を高感度で行うことができる
とともに、検出のための積算時間をより長くすることが
できる。
【００２０】この結果、質量分析計の試料分離データの
ピークの濃度をより高くすることが可能となるので、高
感度の質量分析を行うことができるようになる。
ピークの濃度をより高くすることが可能となるので、高
感度の質量分析を行うことができるようになる。
【００２１】
【発明の実施の形態】本発明の好適な実施形態につい
て、添付図面に基づいて説明する。
て、添付図面に基づいて説明する。
【００２２】まず、図１は、本発明に係る液体クロマト
グラフと該液体クロマトグラフを備えた分析検出器の構
成を簡易に表すブロック図である。以下、この図１に基
づいて、本発明に係る液体クロマトグラフ及び分析検出
器の基本構成について説明する。
グラフと該液体クロマトグラフを備えた分析検出器の構
成を簡易に表すブロック図である。以下、この図１に基
づいて、本発明に係る液体クロマトグラフ及び分析検出
器の基本構成について説明する。
【００２３】まず、本発明に係る液体クロマトグラフ
は、図１中符号Ｅで示された溶離液を、ｎｌ／ｍｉｎレ
ベルの低流速で安定して送液できる高圧送液ポンプ１を
備えている。この高圧送液ポンプ１としては、プランジ
ャー型ポンプ、マイクロシリンジ型ポンプ等を採用する
ことができるが、低流速安定送液により適しているマイ
クロシリンジ型の送液ポンプ（ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｐｕ
ｍｐ）を採用するのが好ましい。
は、図１中符号Ｅで示された溶離液を、ｎｌ／ｍｉｎレ
ベルの低流速で安定して送液できる高圧送液ポンプ１を
備えている。この高圧送液ポンプ１としては、プランジ
ャー型ポンプ、マイクロシリンジ型ポンプ等を採用する
ことができるが、低流速安定送液により適しているマイ
クロシリンジ型の送液ポンプ（ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｐｕ
ｍｐ）を採用するのが好ましい。
【００２４】例えば、この送液ポンプ１として、米国・
Ｈａｍｉｌｔｏｎ社製の２５０μｌ容量のマイクロシリ
ンジを備える送液ポンプＰＨＤ２０００（米国・ＨＡＲ
ＶＥＲＤ ＡＰＰＡＲＡＴＵＳ社製）を採用することが
できる。
Ｈａｍｉｌｔｏｎ社製の２５０μｌ容量のマイクロシリ
ンジを備える送液ポンプＰＨＤ２０００（米国・ＨＡＲ
ＶＥＲＤ ＡＰＰＡＲＡＴＵＳ社製）を採用することが
できる。
【００２５】なお、本発明に係る液体クロマトグラフの
溶離液の送液手段としては、分離カラム１３の後に質量
分析計が接続される場合を除き、分離カラム１３の後方
から負圧吸引する手段も採用することも可能である。
溶離液の送液手段としては、分離カラム１３の後に質量
分析計が接続される場合を除き、分離カラム１３の後方
から負圧吸引する手段も採用することも可能である。
【００２６】図１に示す符号２は、溶離液Ｅの圧力を監
視・測定するための圧力計である。
視・測定するための圧力計である。
【００２７】次に、高圧送液ポンプ１から圧送されてく
る溶離Ｅが通過する流路３は、内径０．２５ｍｍのステ
ンレス製鋼管で形成することができる。この流路３は、
バルブ４の所定のポート４１を通過した後、１０ポート
の多岐管（マニホルド）６に接続され、この多岐管６を
介して合計１０本の分岐流路７,７…に枝分かれされて
いる。
る溶離Ｅが通過する流路３は、内径０．２５ｍｍのステ
ンレス製鋼管で形成することができる。この流路３は、
バルブ４の所定のポート４１を通過した後、１０ポート
の多岐管（マニホルド）６に接続され、この多岐管６を
介して合計１０本の分岐流路７,７…に枝分かれされて
いる。
【００２８】なお、分岐流路７,７…の数は、１０本に
限定するものではなく、分析目的に応じて適宜選択する
ことができる。多岐管６は、ＶＩＣＩ社製のＺ１０Ｍ１
等を採用することができる。
限定するものではなく、分析目的に応じて適宜選択する
ことができる。多岐管６は、ＶＩＣＩ社製のＺ１０Ｍ１
等を採用することができる。
【００２９】本実施形態において、グラジエント発生流
路として機能する分岐流路７,７…は、それぞれ内径
０．２５ｍｍ、長さ１５０ｍｍ、容量７．５μＬのステ
ンレス製鋼管で形成されており、有機溶媒比、ｐＨ、塩
濃度その他の組成が異なる溶離液Ｅ,Ｅ,Ｅ…を所定量分
一時格納しておく溶離液格納手段として機能する。な
お、分岐流路７,７,７…の長さ、容量等は、目的に応じ
て適宜選択することができる。
路として機能する分岐流路７,７…は、それぞれ内径
０．２５ｍｍ、長さ１５０ｍｍ、容量７．５μＬのステ
ンレス製鋼管で形成されており、有機溶媒比、ｐＨ、塩
濃度その他の組成が異なる溶離液Ｅ,Ｅ,Ｅ…を所定量分
一時格納しておく溶離液格納手段として機能する。な
お、分岐流路７,７,７…の長さ、容量等は、目的に応じ
て適宜選択することができる。
【００３０】ここで、本発明に係る液体クロマトグラフ
では、バルブ４のポート４１の開閉切り替えによって、
各分岐流路７,７,７…に対して、シリンジ５から直接溶
離液Ｅを充填できるように工夫してもよい。これによ
り、配管をその都度調整して溶離液の交換又は補充を行
う手間が解消される。
では、バルブ４のポート４１の開閉切り替えによって、
各分岐流路７,７,７…に対して、シリンジ５から直接溶
離液Ｅを充填できるように工夫してもよい。これによ
り、配管をその都度調整して溶離液の交換又は補充を行
う手間が解消される。
【００３１】符合８は、各分岐流路７,７…の各端部が
接続された１０箇所のポート８１を備えるロータリー型
のバルブを示している。このバルブ８は、各分岐流路７
に一時格納された組成の異なる溶離液を選択するための
手段として機能し、手動操作で、所定のポート８１を順
次開放することによって、所望の組成の溶離液Ｅ１,Ｅ
２,Ｅ３…を、順次後続の装置側に向けて、流すことが
できる構成とされている。なお、バルブ８の出口部分に
は、図示しないコントローラが接続されており、電気信
号により、バルブの選択と開閉を制御している。
接続された１０箇所のポート８１を備えるロータリー型
のバルブを示している。このバルブ８は、各分岐流路７
に一時格納された組成の異なる溶離液を選択するための
手段として機能し、手動操作で、所定のポート８１を順
次開放することによって、所望の組成の溶離液Ｅ１,Ｅ
２,Ｅ３…を、順次後続の装置側に向けて、流すことが
できる構成とされている。なお、バルブ８の出口部分に
は、図示しないコントローラが接続されており、電気信
号により、バルブの選択と開閉を制御している。
【００３２】ここで、前記分岐流路に対する組成の異な
る溶離液の充填を、自動制御で行うようにしてもよい。
具体的には、各分岐流路７に対して、所定組成の溶離液
Ｅ１,Ｅ２,Ｅ３…を自動調合作成し、順次自動で各分岐
流路７に送液及び格納するようにする。この手段を採用
すると、溶離液の充填精度を高めることができるので、
分析精度を向上させることが可能となる。
る溶離液の充填を、自動制御で行うようにしてもよい。
具体的には、各分岐流路７に対して、所定組成の溶離液
Ｅ１,Ｅ２,Ｅ３…を自動調合作成し、順次自動で各分岐
流路７に送液及び格納するようにする。この手段を採用
すると、溶離液の充填精度を高めることができるので、
分析精度を向上させることが可能となる。
【００３３】バルブ８の操作によって選択された溶離液
Ｅは、再び上記バルブ４の所定のポート４１'を通過し
て、試料注入部９に向かうことになる。この試料注入部
９においては、予め前調整された試料Ｓｍをインジェク
ター（試料注入装置）１０を溶離液Ｅ'に注入する。
Ｅは、再び上記バルブ４の所定のポート４１'を通過し
て、試料注入部９に向かうことになる。この試料注入部
９においては、予め前調整された試料Ｓｍをインジェク
ター（試料注入装置）１０を溶離液Ｅ'に注入する。
【００３４】試料Ｓｍの注入方法としては、インジェク
ター１０から直接、流路３'中に注入する方法、インジ
ェクター１０からトラップカラム１１に注入し、このト
ラップカラム１１で濃縮されて試料Ｓｍを溶離液Ｅ中に
送り込む方法のいずれも選択することができる。試料Ｓ
ｍは溶離液Ｅによって分離カラム１３に搬送される。
ター１０から直接、流路３'中に注入する方法、インジ
ェクター１０からトラップカラム１１に注入し、このト
ラップカラム１１で濃縮されて試料Ｓｍを溶離液Ｅ中に
送り込む方法のいずれも選択することができる。試料Ｓ
ｍは溶離液Ｅによって分離カラム１３に搬送される。
【００３５】インジェクター１０は、耐圧性、耐薬品
性、試料Ｓｍへの気泡混入がないように密着性を備える
等の条件を満たしているものであれば、適宜選択するこ
とができる。図１の符号１２は、試料残液槽を示してい
る。
性、試料Ｓｍへの気泡混入がないように密着性を備える
等の条件を満たしているものであれば、適宜選択するこ
とができる。図１の符号１２は、試料残液槽を示してい
る。
【００３６】なお、試料注入部９には、図示しないミキ
シング装置を付設し、溶離液Ｅと試料Ｓの混合処理を行
うようにしてもよい。このミキシング装置を導入するこ
とによって、グラジエントがスムーズにかかり、ピーク
の巾をほぼ一定にすることができる。また、組成の異な
る溶離液Ｅ１，Ｅ２…を拡散し、より直線的なベースラ
インを形成することができる。
シング装置を付設し、溶離液Ｅと試料Ｓの混合処理を行
うようにしてもよい。このミキシング装置を導入するこ
とによって、グラジエントがスムーズにかかり、ピーク
の巾をほぼ一定にすることができる。また、組成の異な
る溶離液Ｅ１，Ｅ２…を拡散し、より直線的なベースラ
インを形成することができる。
【００３７】ここで、図２に示すように、分析開始時に
おいて、前記バルブ８の吐出口８２から後述する分離カ
ラムに至る流路３’中に、予め、組成の異なる溶離液Ｅ
１，Ｅ２…を各分岐流路７から濃度勾配の順番に送液
し、貯留しておくことも可能である。このように工夫す
ると、分析開始からより短時間でグラジエント溶離を行
うことが可能となるので、分析時間を短縮することがで
きる。
おいて、前記バルブ８の吐出口８２から後述する分離カ
ラムに至る流路３’中に、予め、組成の異なる溶離液Ｅ
１，Ｅ２…を各分岐流路７から濃度勾配の順番に送液
し、貯留しておくことも可能である。このように工夫す
ると、分析開始からより短時間でグラジエント溶離を行
うことが可能となるので、分析時間を短縮することがで
きる。
【００３８】ここで、符号１３は、所定の固定相（オク
タデシルシラン化学結合型シリカゲル）が充填されてい
る分離カラムを示している。本発明においては、この分
離カラム１３は、低流速で溶離液Ｅを流すことに対応し
て、内口径０．５ｍｍ以下のものを採用する。
タデシルシラン化学結合型シリカゲル）が充填されてい
る分離カラムを示している。本発明においては、この分
離カラム１３は、低流速で溶離液Ｅを流すことに対応し
て、内口径０．５ｍｍ以下のものを採用する。
【００３９】分離カラム１においては、溶離液Ｅ'中に
注入された試料Ｓｍに含まれる溶質成分Ｓｏを、固定相
に対する親和力の差に基づいて分離するとともに、組成
の異なる溶離液Ｅ１，Ｅ２…の溶出強度の変化に基づい
て溶出させる。
注入された試料Ｓｍに含まれる溶質成分Ｓｏを、固定相
に対する親和力の差に基づいて分離するとともに、組成
の異なる溶離液Ｅ１，Ｅ２…の溶出強度の変化に基づい
て溶出させる。
【００４０】即ち、この分離・溶出手順と同じ手順を、
上記各分岐流路７に格納された組成の異なる溶離液
Ｅ１，Ｅ２…を順次選択して流すことによって、試料成
分Ｓｏの高精度なグラジエント溶離を行うことができ
る。
上記各分岐流路７に格納された組成の異なる溶離液
Ｅ１，Ｅ２…を順次選択して流すことによって、試料成
分Ｓｏの高精度なグラジエント溶離を行うことができ
る。
【００４１】グラジエント溶離された溶質成分Ｓｏは、
吸収光度（ＵＶ／ＶＩＳ）検出器、蛍光（ＦＬ）検出
器、示差屈折率検出器、電気化学検出器、化学発光検出
器、質量分析計その他の検出器１４を適宜選択して使用
することで、定量、定性その他の分析を行うことができ
る。
吸収光度（ＵＶ／ＶＩＳ）検出器、蛍光（ＦＬ）検出
器、示差屈折率検出器、電気化学検出器、化学発光検出
器、質量分析計その他の検出器１４を適宜選択して使用
することで、定量、定性その他の分析を行うことができ
る。
【００４２】例えば、検出器１４に質量分析計を採用す
る場合は、高精度のグラジエント溶離が可能な液体クロ
マトグラフに基づいて、試料成分の高感度検出が可能な
ＬＣ／ＭＳを提供することができる。なお、液体クロマ
トグラフと質量分析計とのインターフェースは、ＥＳＩ
（エレクトロスプレー）法、ＡＰＣＩ（大気圧化学イオ
ン化法）のいずれも採用することが可能である。
る場合は、高精度のグラジエント溶離が可能な液体クロ
マトグラフに基づいて、試料成分の高感度検出が可能な
ＬＣ／ＭＳを提供することができる。なお、液体クロマ
トグラフと質量分析計とのインターフェースは、ＥＳＩ
（エレクトロスプレー）法、ＡＰＣＩ（大気圧化学イオ
ン化法）のいずれも採用することが可能である。
【００４３】なお、図１の符号１５は、検出器１４に接
続される記録計、符号１６は検出器１４に接続されるデ
ータ処理装置である。符号１７は、溶質成分Ｓｏを分取
する場合において、検出器１４に接続されるフラクショ
ンコレクター、符号１８は、廃液槽である。
続される記録計、符号１６は検出器１４に接続されるデ
ータ処理装置である。符号１７は、溶質成分Ｓｏを分取
する場合において、検出器１４に接続されるフラクショ
ンコレクター、符号１８は、廃液槽である。
【００４４】
【実施例】実施例１。 溶離液としてアセトンのメタノール溶液を使用して、メ
タノール中のアセトン濃度を１０％ずつ変化させたとき
のグラジエント変化を５００ｎＬ／ｍｉｎ、３００ｎＬ
／ｍｉｎ、１００ｎＬ／ｍｉｎの各流量別に、紫外線検
出器を用いて検証した。なお、本実験では、トラップカ
ラム１１、分離カラム１３、ミキシング装置は使用して
いない。
タノール中のアセトン濃度を１０％ずつ変化させたとき
のグラジエント変化を５００ｎＬ／ｍｉｎ、３００ｎＬ
／ｍｉｎ、１００ｎＬ／ｍｉｎの各流量別に、紫外線検
出器を用いて検証した。なお、本実験では、トラップカ
ラム１１、分離カラム１３、ミキシング装置は使用して
いない。
【００４５】図３は、実施例２における、記録計１５に
より描かれたベースラインを示す図（グラフ）である。
このグラジエントラインに示すように、５００ｎＬ／ｍ
ｉｎ、３００ｎＬ／ｍｉｎ、１００ｎＬ／ｍｉｎの各流
速において安定したグラジエント変化が示され、特に、
１００ｎＬ／ｍｉｎの低流速条件においても、リニアな
ベースラインを形成できるので、溶離液のリニアなグラ
ジエント変化を達成するのに充分である。
より描かれたベースラインを示す図（グラフ）である。
このグラジエントラインに示すように、５００ｎＬ／ｍ
ｉｎ、３００ｎＬ／ｍｉｎ、１００ｎＬ／ｍｉｎの各流
速において安定したグラジエント変化が示され、特に、
１００ｎＬ／ｍｉｎの低流速条件においても、リニアな
ベースラインを形成できるので、溶離液のリニアなグラ
ジエント変化を達成するのに充分である。
【００４６】実施例２。 ミキシング装置を使用し、溶離液としてアセトンのメタ
ノール溶液を使用して、メタノール中のアセトン濃度を
変化させたときのグラジエント変化を３００ｎＬ／ｍｉ
ｎ、１００ｎＬ／ｍｉｎの流量別に、紫外線検出器を用
いて検証した。
ノール溶液を使用して、メタノール中のアセトン濃度を
変化させたときのグラジエント変化を３００ｎＬ／ｍｉ
ｎ、１００ｎＬ／ｍｉｎの流量別に、紫外線検出器を用
いて検証した。
【００４７】図４は、実施例３における、記録計１５に
より描かれたベースラインを示す図（グラフ）である。
このベースラインに示すように、３００ｎＬ／ｍｉｎ、
１００ｎＬ／ｍｉｎの各低流速条件でも、安定したベー
スラインを形成でき、低流速条件で、溶離液のリニアな
グラジエント変化を達成するのに充分である。
より描かれたベースラインを示す図（グラフ）である。
このベースラインに示すように、３００ｎＬ／ｍｉｎ、
１００ｎＬ／ｍｉｎの各低流速条件でも、安定したベー
スラインを形成でき、低流速条件で、溶離液のリニアな
グラジエント変化を達成するのに充分である。
【００４８】実施例３。 本発明に係る分析検出器によってペプチドの高感度分析
が可能となることを実証するために、実験を行った。使
用した試料は、カルモジュリンのトリプシン酵素消化物
（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ ｔｒｙｐｓｉｃ ｄｉｇｅｓ
ｔ）であり、量は１５０ｆｍｏｌｅである。使用した溶
離液は、水、アセトニトリル、ギ酸から構成されたもの
である。試料注入量は６０ｎＬ。試料は、分離カラムに
直接導入した。流速は３００ｎＬ／ｍｉｎである。な
お、質量分析計の測定分子量範囲は６００から１５００
ドルトンである。
が可能となることを実証するために、実験を行った。使
用した試料は、カルモジュリンのトリプシン酵素消化物
（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ ｔｒｙｐｓｉｃ ｄｉｇｅｓ
ｔ）であり、量は１５０ｆｍｏｌｅである。使用した溶
離液は、水、アセトニトリル、ギ酸から構成されたもの
である。試料注入量は６０ｎＬ。試料は、分離カラムに
直接導入した。流速は３００ｎＬ／ｍｉｎである。な
お、質量分析計の測定分子量範囲は６００から１５００
ドルトンである。
【００４９】図５は、カルモジュリンのトリプシン酵素
消化物に含まれる各質量成分のクロマトグラムを示した
図（グラフ）である。様々な質量成分がシャープなピー
クを形成していることから、明らかに各試料成分が分離
されていることがわかる。
消化物に含まれる各質量成分のクロマトグラムを示した
図（グラフ）である。様々な質量成分がシャープなピー
クを形成していることから、明らかに各試料成分が分離
されていることがわかる。
【００５０】図６は、分離されたトータル質量が最も多
い成分をシングルイオンモニター検出した結果、６００
ａｔｔｏｍｏｌ（Ｓ／Ｎ＝２）のペプチドを検出できた
ことを示す図（クロマトグラム）である。
い成分をシングルイオンモニター検出した結果、６００
ａｔｔｏｍｏｌ（Ｓ／Ｎ＝２）のペプチドを検出できた
ことを示す図（クロマトグラム）である。
【００５１】以上から、本発明に係る分析検出器（ＬＣ
／ＭＳ）では、グラジエント溶離によって、試料成分が
高精度で分離されているとともに、分離された成分が高
感度に検出できたことがわかる。
／ＭＳ）では、グラジエント溶離によって、試料成分が
高精度で分離されているとともに、分離された成分が高
感度に検出できたことがわかる。
【００５２】
【発明の効果】本発明により奏される主な効果は次のと
おりである。
おりである。
【００５３】（１）本発明に係る液体クロマトグラフ
は、５００ｎＬ／ｍｉｎ以下レベルのごく低流速の溶離
液を、順次一定流量で安定かつ確実に流すことができる
ので、試料中に含まれる溶質成分を高精度にグラジエン
ト溶離することが可能となる。
は、５００ｎＬ／ｍｉｎ以下レベルのごく低流速の溶離
液を、順次一定流量で安定かつ確実に流すことができる
ので、試料中に含まれる溶質成分を高精度にグラジエン
ト溶離することが可能となる。
【００５４】（２）本発明に係るグラジェント溶離方法
は、試料注入手段前の流路位置において、組成が異なる
溶離液を、所定量分一時格納しておく溶離液格納するよ
うに工夫したことによって、必要な組成の溶離液を、必
要に応じて、必要なタイミングで、段階的又は連続的
に、容易に搬送させることができる。
は、試料注入手段前の流路位置において、組成が異なる
溶離液を、所定量分一時格納しておく溶離液格納するよ
うに工夫したことによって、必要な組成の溶離液を、必
要に応じて、必要なタイミングで、段階的又は連続的
に、容易に搬送させることができる。
【００５５】（３）一つの高圧送液ポンプのみを使用
し、バルブの切り替えで各分岐流路に溶離液を送り込む
ことができるように構成されているので、複数の高圧送
液ポンプを用いて各分岐流路に送液する構成と比べて装
置をコンパクト化でき、溶離液の送量に関する制御が単
純化し、圧縮率による溶媒の逆流も起こらないので正確
なグラジエントを達成できる。
し、バルブの切り替えで各分岐流路に溶離液を送り込む
ことができるように構成されているので、複数の高圧送
液ポンプを用いて各分岐流路に送液する構成と比べて装
置をコンパクト化でき、溶離液の送量に関する制御が単
純化し、圧縮率による溶媒の逆流も起こらないので正確
なグラジエントを達成できる。
【００５６】（４）本発明に係る分析検出器では、低流
速で溶離液を搬送して、高精度に溶質をグラジエント溶
離できるように構成された液体クロマトグラフを備えて
いるので、溶質成分の分離を高精度に行うことができる
とともに、分離成分を高感度に検出できる。
速で溶離液を搬送して、高精度に溶質をグラジエント溶
離できるように構成された液体クロマトグラフを備えて
いるので、溶質成分の分離を高精度に行うことができる
とともに、分離成分を高感度に検出できる。
【図１】本発明に係る液体クロマトグラフと該液体クロ
マトグラフを備えた分析検出器の構成を簡易に表すブロ
ック
マトグラフを備えた分析検出器の構成を簡易に表すブロ
ック
【図２】溶離液Ｅ１，Ｅ２・・が流路３’に貯留された
様子を簡略に示す図
様子を簡略に示す図
【図３】実施例３における、記録計１５により描かれた
ベースラインを示す図（グラフ）
ベースラインを示す図（グラフ）
【図４】実施例３における、記録計１５により描かれた
グラジエントライン（ベースライン）を示す図（グラ
フ）
グラジエントライン（ベースライン）を示す図（グラ
フ）
【図５】カルモジュリンのトリプシン酵素消化物に含ま
れる各質量成分のクロマトグラムを示した図（グラフ）
れる各質量成分のクロマトグラムを示した図（グラフ）
【図６】分離されたトータル質量が最も多い成分をシン
グルイオンモニター検出した結果、６００ａｔｔｏｍｏ
ｌ（Ｓ／Ｎ＝２）のペプチドを検出できたことを示す図
（クロマトグラム）
グルイオンモニター検出した結果、６００ａｔｔｏｍｏ
ｌ（Ｓ／Ｎ＝２）のペプチドを検出できたことを示す図
（クロマトグラム）
３,３' （溶離液Ｅが搬送される）流路 ４ （分岐流路７に溶離液Ｅを充填するときに使用され
る）バルブ ５ （分岐流路７に溶離液Ｅを充填するときに使用され
る）シリンジ ７ 分岐流路 ８ （溶離液選択手段である）バルブ １３ 分離カラム １４ 検出器（質量分析計） Ｅ' 溶離液 Ｓｍ 試料 Ｓｏ 溶質（成分）
る）バルブ ５ （分岐流路７に溶離液Ｅを充填するときに使用され
る）シリンジ ７ 分岐流路 ８ （溶離液選択手段である）バルブ １３ 分離カラム １４ 検出器（質量分析計） Ｅ' 溶離液 Ｓｍ 試料 Ｓｏ 溶質（成分）
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１３年６月７日（２００１．６．７）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】符号の説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【符号の説明】 ３,３' （溶離液Ｅが搬送される）流路 ４ （分岐流路７に溶離液Ｅを充填するときに使用され
る）バルブ ５ （分岐流路７に溶離液Ｅを充填するときに使用され
る）シリンジ ７ 分岐流路 ８ （溶離液選択手段である）バルブ １３ 分離カラム １４ 検出器（質量分析計）Ｅ 溶離液 Ｓｍ 試料 Ｓｏ 溶質（成分） ─────────────────────────────────────────────────────
る）バルブ ５ （分岐流路７に溶離液Ｅを充填するときに使用され
る）シリンジ ７ 分岐流路 ８ （溶離液選択手段である）バルブ １３ 分離カラム １４ 検出器（質量分析計）Ｅ 溶離液 Ｓｍ 試料 Ｓｏ 溶質（成分） ─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成１３年６月１４日（２００１．６．１
４）
４）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項３
【補正方法】変更
【補正内容】
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、グラジェント溶出
分析に適した液体クロマトグラフ、該液体クロマトグラ
フを備える分析システム、該液体クロマトグラフを用い
たグラジェント溶離方法に関する。
分析に適した液体クロマトグラフ、該液体クロマトグラ
フを備える分析システム、該液体クロマトグラフを用い
たグラジェント溶離方法に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正内容】
【０００８】そこで、本発明は、組成の異なる溶離液を
順次安定した低流速条件で確実に送液することによっ
て、溶離液のより高精度なグラジエント変化を可能に
し、高感度の検出又は分析ができるように工夫された液
体クロマトグラフ、分析システム及びグラジェント溶離
方法を提供することを目的とする。
順次安定した低流速条件で確実に送液することによっ
て、溶離液のより高精度なグラジエント変化を可能に
し、高感度の検出又は分析ができるように工夫された液
体クロマトグラフ、分析システム及びグラジェント溶離
方法を提供することを目的とする。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１７】続いて、本発明では、上記した液体クロマ
トグラフの分離カラム手段に、質量分析計（ＭＡＳＳ）
を接続した分析システム、即ちＬＣ／ＭＳ（liquid chr
omatography/mass spectrometry）を提供する。
トグラフの分離カラム手段に、質量分析計（ＭＡＳＳ）
を接続した分析システム、即ちＬＣ／ＭＳ（liquid chr
omatography/mass spectrometry）を提供する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１９】本発明に係る分析システムは、少流量、低
流速で溶離液を搬送して、高精度に溶質をグラジエント
溶離できるように構成された液体クロマトグラフを備え
ているので、溶質成分の検出を高感度で行うことができ
るとともに、検出のための積算時間をより長くすること
ができる。
流速で溶離液を搬送して、高精度に溶質をグラジエント
溶離できるように構成された液体クロマトグラフを備え
ているので、溶質成分の検出を高感度で行うことができ
るとともに、検出のための積算時間をより長くすること
ができる。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正内容】
【００２２】まず、図１は、本発明に係る液体クロマト
グラフと該液体クロマトグラフを備えた分析システムの
構成を簡易に表すブロック図である。以下、この図１に
基づいて、本発明に係る液体クロマトグラフ及び分析シ
ステムの基本構成について説明する。
グラフと該液体クロマトグラフを備えた分析システムの
構成を簡易に表すブロック図である。以下、この図１に
基づいて、本発明に係る液体クロマトグラフ及び分析シ
ステムの基本構成について説明する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３３
【補正方法】変更
【補正内容】
【００３３】バルブ８の操作によって選択された溶離液
Ｅは、再び上記バルブ４の所定のポート４１'を通過し
て、試料注入部９に向かうことになる。この試料注入部
９においては、予め前調整された試料Ｓｍをインジェク
ター（試料注入装置）１０を介して溶離液Ｅに注入す
る。
Ｅは、再び上記バルブ４の所定のポート４１'を通過し
て、試料注入部９に向かうことになる。この試料注入部
９においては、予め前調整された試料Ｓｍをインジェク
ター（試料注入装置）１０を介して溶離液Ｅに注入す
る。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正内容】
【００４８】実施例３。本発明に係る分析システムによ
ってペプチドの高感度分析が可能となることを実証する
ために、実験を行った。使用した試料は、カルモジュリ
ンのトリプシン酵素消化物（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ ｔ
ｒｙｐｓｉｃ ｄｉｇｅｓｔ）であり、量は１５０ｆｍ
ｏｌｅである。使用した溶離液は、水、アセトニトリ
ル、ギ酸から構成されたものである。試料注入量は６０
ｎＬ。試料は、分離カラムに直接導入した。流速は３０
０ｎＬ／ｍｉｎである。なお、質量分析計の測定分子量
範囲は６００から１５００ドルトンである。
ってペプチドの高感度分析が可能となることを実証する
ために、実験を行った。使用した試料は、カルモジュリ
ンのトリプシン酵素消化物（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ ｔ
ｒｙｐｓｉｃ ｄｉｇｅｓｔ）であり、量は１５０ｆｍ
ｏｌｅである。使用した溶離液は、水、アセトニトリ
ル、ギ酸から構成されたものである。試料注入量は６０
ｎＬ。試料は、分離カラムに直接導入した。流速は３０
０ｎＬ／ｍｉｎである。なお、質量分析計の測定分子量
範囲は６００から１５００ドルトンである。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正内容】
【００５１】以上から、本発明に係る分析システム（Ｌ
Ｃ／ＭＳ）では、グラジエント溶離によって、試料成分
が高精度で分離されているとともに、分離された成分が
高感度に検出できたことがわかる。
Ｃ／ＭＳ）では、グラジエント溶離によって、試料成分
が高精度で分離されているとともに、分離された成分が
高感度に検出できたことがわかる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正内容】
【００５６】（４）本発明に係る分析システムでは、低
流速で溶離液を搬送して、高精度に溶質をグラジエント
溶離できるように構成された液体クロマトグラフを備え
ているので、溶質成分の分離を高精度に行うことができ
るとともに、分離成分を高感度に検出できる。
流速で溶離液を搬送して、高精度に溶質をグラジエント
溶離できるように構成された液体クロマトグラフを備え
ているので、溶質成分の分離を高精度に行うことができ
るとともに、分離成分を高感度に検出できる。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に係る液体クロマトグラフと該液体クロ
マトグラフを備えた分析システムの構成を簡易に表すブ
ロック図
マトグラフを備えた分析システムの構成を簡易に表すブ
ロック図
【図２】溶離液Ｅ１，Ｅ２・・が流路３’に貯留された
様子を簡略に示す図
様子を簡略に示す図
【図３】実施例３における、記録計１５により描かれた
ベースラインを示す図（グラフ）
ベースラインを示す図（グラフ）
【図４】実施例３における、記録計１５により描かれた
グラジエントライン（ベースライン）を示す図（グラ
フ）
グラジエントライン（ベースライン）を示す図（グラ
フ）
【図５】カルモジュリンのトリプシン酵素消化物に含ま
れる各質量成分のクロマトグラムを示した図（グラフ）
れる各質量成分のクロマトグラムを示した図（グラフ）
【図６】分離されたトータル質量が最も多い成分をシン
グルイオンモニター検出した結果、６００ａｔｔｏｍｏ
ｌ（Ｓ／Ｎ＝２）のペプチドを検出できたことを示す図
（クロマトグラム）
グルイオンモニター検出した結果、６００ａｔｔｏｍｏ
ｌ（Ｓ／Ｎ＝２）のペプチドを検出できたことを示す図
（クロマトグラム）
【手続補正書】
【提出日】平成１３年６月１４日（２００１．６．１
４）
４）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正内容】
【発明の名称】 液体クロマトグラフ及び分析システム
Claims (4)
- 【請求項１】 流路中を順次搬送されてくる組成の異な
る溶離液によって試料を分離カラムに導入し、前記溶離
液の溶出強度に基づいて試料中の溶質をグラジエント溶
離する構成の液体クロマトグラフにおいて、 前記溶離液の流路を分岐させて所定容量の分岐流路を形
成し、該分岐流路に組成の異なる溶離液を一時格納する
溶離液格納手段と、 前記分岐流路に一時格納された溶離液を順次選択し、前
記分離カラム側に流す溶離液選択手段と、 が設けられたことを特徴とする液体クロマトグラフ。 - 【請求項２】 バルブの切り替えにより、インジェクタ
ーから前記分岐流路のそれぞれに溶離液を充填する手段
を備えたことを特徴とする請求項１記載の液体クロマト
グラフ。 - 【請求項３】 請求項１又は請求項２に記載の液体クロ
マトグラフに質量分析計を接続したことを特徴とする分
析検出器。 - 【請求項４】 請求項１又は請求項２に記載の液体クロ
マトグラフを用いることを特徴とするグラジェント溶離
方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10/479,412 US7066011B2 (en) | 2001-06-07 | 2001-04-08 | Liquid chromatograph and analysis system |
| JP2001171917A JP3536074B2 (ja) | 2001-06-07 | 2001-06-07 | 液体クロマトグラフ及び分析システム |
| PCT/JP2002/003476 WO2002101381A1 (fr) | 2001-06-07 | 2002-04-08 | Chromatographe liquide et systeme d'analyse |
| AU2002246375A AU2002246375B2 (en) | 2001-06-07 | 2002-04-08 | Liquid chromatograph and analyzing system |
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