JP2002281989A - Ｆｒｉｚｚｌｅｄ−３ポリペプチドおよびポリヌクレオチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 Frizzled-3ポリペプチドおよびポリヌクレオ
チドを提供する。 【解決手段】 特定のアミノ酸配列に対して少なくとも
９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるFriz
zled-3ポリペプチド、および特定のヌクレオチド配列に
対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド
配列を含んでなるFrizzled-3ポリヌクレオチドを得る。
Frizzled-3ポリペプチドおよびポリヌクレオチドは精神
分裂病等の神経系疾患を含む機能障害または疾病の治療
と、このような疾病の診断アッセイに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリペプチド、該ポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチド、該ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの治療
の際のまたは治療に有効でありうるアゴニスト、アンタ
ゴニストおよび／またはインヒビターである化合物を同
定する際の使用、並びに該ポリペプチドおよびポリヌク
レオチドの生産方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】薬物探索プロセスには目下根本的な大変
化が生じている。というのは、それが「機能性遺伝子科
学」(functional genomics)、すなわちハイスループッ
ト(高効率)のゲノムまたは遺伝子ベースの生物学に及ん
でいるからである。治療の標的として遺伝子及び遺伝子
産物を同定する手段であるこのアプローチは「ポジショ
ナルクローニング」に基づいた比較的初期のアプローチ
に急速に取って代わりつつある。表現型、つまり生物学
的機能または遺伝病、が同定され、続いてその遺伝子地
図の位置を手がかりとして病因遺伝子が突き止められる
だろう。

【０００３】機能性遺伝子科学は、ハイスループットＤ
ＮＡ配列決定技術および現在入手できる多くの分子生物
学データベースから興味のもてそうな遺伝子配列を同定
するための生物情報科学(bioinformatics)の様々なツー
ルに大きく依存している。依然として、まだ未解明の遺
伝子およびその関連ポリペプチド／タンパク質を薬物探
索の標的として同定し特性づける必要性が存在してい
る。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、Frizzled-
3、特にFrizzled-3ポリペプチドおよびFrizzled-3ポリ
ヌクレオチド、組換え物質、並びにその生産方法に関す
る。もう一つの態様において、本発明は、神経系障害、
特に精神分裂病、また双極性／単極性障害、アルツハイ
マー病、癲癇および強直性対麻痺−５Ａ、癌、心血管系
疾患、卒中、ウェルネル症候群等の発達性障害（以後ま
とめて「前記疾患」という）の治療をはじめとする、前
記ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関
する。他の態様では、本発明は、本発明により提供され
る物質を用いてアゴニストおよびアンタゴニスト／イン
ヒビターを同定する方法、並びに同定された化合物を用
いてFrizzled-3平衡異常と関連した症状を治療すること
に関する。さらに他の態様において、本発明は不適当な
Frizzled-3活性またはFrizzled-3レベルと関連した疾病
を検出するための診断アッセイに関する。

【０００５】

【課題を解決するための手段】一つの態様において、本
発明はFrizzled-3ポリペプチドに関する。この種のペプ
チドには、配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミ
ノ酸配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するア
ミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチドが含ま
れる。こうしたポリペプチドとしては配列番号２のアミ
ノ酸配列からなるものがある。

【０００６】本発明の他のペプチドには、そのアミノ酸
配列が配列番号２の全長にわたる配列番号２のアミノ酸
配列に対して少なくとも９９％の同一性を有する単離さ
れたポリペプチドが含まれる。こうしたポリペプチドと
しては配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチド
がある。

【０００７】本発明の更なるペプチドには、配列番号１
に含まれるヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオ
チドによりコードされる単離されたポリペプチドが含ま
れる。

【０００８】本発明のポリペプチドはFrizzled受容体フ
ァミリーのメンバーであると考えられる。それゆえ、そ
れらには興味がもてる。なぜなら、これらのタンパク質
はWntシグナル伝達中の発達過程のための伝達分子とし
て機能するからである。これは多様な組織における正常
な形態発生および／または分化機能にとって必須のこと
である。ヒトFrizzled-3は8p12-p21にマップされる。精
神分裂病の分子疫学研究から、最も顕著に関連する遺伝
子座の一つとして8p21が同定された。Kendlerら（Am.
J. Psychiatry. 153(12):1534-1540, 1996）は、精神分
裂病と265 Irishファミリーの8p21との間に非常に顕著
な関連を見出した。そのマップ上の位置の他にも、多く
の証拠によって精神分裂病候補としてFrizzled-3が支持
されている。Frizzled-3は、ほとんど脳および中枢神経
系でのみ発現している。神経系障害におけるWntシグナ
ルカスケードの関与は既に確立されている。dishevelle
d-1（Wntシグナリングの下流トランスデューサ）のノッ
クアウトマウスは、ヒト精神分裂病と密接に相関する明
らかな精神医学的、および社会的相互作用異常を有する
表現型を示す（Lijamら, 1997, Cell 90:895-905）。更
に最近、Cotterら（Neuroreport. 9:1379-1383, 1998）
は、健康人および精神分裂病患者のβおよびγカテニン
分布の顕著な差異に基づいて、精神分裂病におけるWnt
シグナリングの異常を報告した。ツメガエルでの実験か
ら、Frizzled-3は、（Wnt-4、Wnt-5a、Wnt-5b、Wnt-6お
よびWnt-11等の）WntリガンドのWnt-5aクラスの1以上の
メンバーの受容体として機能しているように思われる。
Wntリガンドのこのクラスは形質転換せず、細胞軸の重
複を引き起こさないことから、これらは（Wnt-1、Wnt-3
aおよびWnt-8等の）Wntsの形質転換クラスのシグナルを
ブロックするシグナルを伝達すると考えられ、これがdi
shvelledを阻害するように作用するであろう。従って異
常なFrizzled-3活性はdishvelledノックアウトのものと
同様の表現型を引き起こす可能性がある。かくしてFriz
zled-3は精神分裂病、および双極性疾患のような関連神
経系障害の強力な病因候補である。これらの特性を以後
「Frizzled-3活性」または「Frizzled-3ポリペプチド活
性」または「Frizzled-3の生物学的活性」という。これ
らの活性の中には、前記Frizzled-3ポリペプチドの抗原
性および免疫原性活性、特に配列番号２のポリペプチド
の抗原性および免疫原性活性も含まれる。本発明のポリ
ペプチドはFrizzled-3の少なくとも１つの生物学的活性
を示すことが好ましい。

【０００９】本発明のポリペプチドは「成熟」タンパク
質の形であっても、前駆体または融合タンパク質のよう
な、より大きいタンパク質の一部であってもよい。しば
しば、追加のアミノ酸配列を含めることが有利であり、
このようなアミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダ
ー配列、プロ配列、多重ヒスチジン残基のような精製に
役立つ配列、または組換え生産の間の安定性を確保する
付加的配列などがある。

【００１０】また、前記ポリペプチドの変異体、すなわ
ち同類アミノ酸置換（ある残基が性質の似ている他の残
基により置換される）により基準ポリペプチドと相違し
ているポリペプチドも本発明に含まれる。典型的なこう
した置換は、Ala, Val, Leuおよび Ileの間；Ser とThr
の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；塩
基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr
の間で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個、１
〜３個、１〜２個または１個のアミノ酸が任意の組合せ
で置換、欠失または付加されている変異体が好適であ
る。

【００１１】本発明のポリペプチドは任意の適当な方法
で製造することができる。このようなポリペプチドに
は、単離された天然のポリペプチド、組換え的に生産さ
れたポリペプチド、合成的に製造されたポリペプチド、
またはこれらの方法の組合せにより製造されたポリペプ
チドが含まれる。こうしたポリペプチドを製造するため
の手段は当業界でよく理解されている。

【００１２】本発明の更なる態様において、本発明は、
Frizzled-3ポリヌクレオチドに関する。このようなポリ
ヌクレオチドには、配列番号２の全長にわたる配列番号
２のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％の同一性を
有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含
んでなる単離されたポリヌクレオチドが含まれる。かか
るポリヌクレオチドとして、配列番号２のポリペプチド
をコードする配列番号１に含まれるヌクレオチド配列を
含んでなるポリヌクレオチドが挙げられる。

【００１３】本発明の更なるポリヌクレオチドには、配
列番号２のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
に対して、その全コード領域にわたって、少なくとも９
５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなる単
離されたポリヌクレオチドが含まれる。これに関して、
少なくとも９７％の同一性を有するポリヌクレオチドが
一層好ましいが、少なくとも９８〜９９％の同一性を有
するものがより一層好ましく、少なくとも９９％の同一
性を有するポリヌクレオチドが最も好ましいものであ
る。

【００１４】本発明の更なるポリヌクレオチドには、配
列番号１の全長にわたる配列番号１のポリヌクレオチド
に対して少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチ
ド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチドが含ま
れる。これに関して、少なくとも９７％の同一性を有す
るポリヌクレオチドが一層好ましいが、少なくとも９８
〜９９％の同一性を有するものがより一層好ましく、少
なくとも９９％の同一性を有するポリヌクレオチドが最
も好ましいものである。かかるポリヌクレオチドとし
て、配列番号１のポリヌクレオチドを含んでなるポリヌ
クレオチドおよび配列番号１のポリヌクレオチドが挙げ
られる。

【００１５】本発明はまた、上記の全てのポリヌクレオ
チドに対して相補的なポリヌクレオチドを提供する。

【００１６】配列番号１のヌクレオチド配列はマウスFr
izzled-3：GenBank：U43205（Wangら, 1996. J. Biol.
Chem. 271:4468-4476）との相同性を示す。配列番号１
のヌクレオチド配列はｃＤＮＡ配列であり、配列番号２
のポリペプチドである666個のアミノ酸のポリペプチド
をコードするポリペプチドコード配列（ヌクレオチド３
４４−２３４４）を含む。配列番号２のポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列は、配列番号１に含まれる
ポリペプチドコード配列と同一であっても、遺伝子コー
ドの重複性（縮重）のため、やはり配列番号２のポリペ
プチドをコードする、配列番号１に含まれる配列以外の
配列であってもよい。配列番号２のポリペプチドはFriz
zled受容体ファミリーの他のタンパク質と構造的に関連
しており、マウスFrizzled-3：GenBank：g1151180（Wan
gら, 1996. J. Biol. Chem. 271:4468-4476）との相同
性および／または構造類似性を有する。

【００１７】本発明の好適なポリペプチドおよびポリヌ
クレオチドは、とりわけ、それと相同なポリペプチドお
よびポリヌクレオチドと同様の生物学的機能／性質をも
つことが期待される。さらに、本発明の好ましいポリペ
プチドおよびポリヌクレオチドは少なくとも１つのFriz
zled-3活性を有する。

【００１８】また、本発明は、配列番号１および配列番
号２の対応する全長配列の決定に先立って最初に同定さ
れた部分的なまたは他のポリヌクレオチドおよびポリペ
プチドに関する。

【００１９】したがって、更なる態様において、本発明
は、(a) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌクレ
オチド配列に対して少なくとも９０％の同一性、好まし
くは少なくとも９５％の同一性、より好ましくは９７〜
９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んでなる
ポリヌクレオチド、(b) 配列番号３のヌクレオチド配列
を含んでなるポリヌクレオチド、(c) 配列番号３のヌク
レオチド配列からなるポリヌクレオチド、または(d) 配
列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対
して少なくとも９８％の同一性、より好ましくは９９％
の同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオ
チド、を提供する。

【００２０】さらに、本発明は、(a) 配列番号４の全長
にわたる配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも
９８％の同一性、より好ましくは少なくとも９９％の同
一性を有するアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド、
(b) 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチ
ド、(c) 配列番号４のアミノ酸配列からなるポリペプチ
ド、または(d) 配列番号３に含まれるヌクレオチド配列
を含んでなるポリヌクレオチドによりコードされるポリ
ペプチド、を提供する。

【００２１】配列番号３のヌクレオチド配列およびそれ
によりコードされるペプチド配列はエクスプレスド・シ
ーケンス・タグ（Expressed Sequence Tag：ＥＳＴ）配
列から誘導される。当業者であれば、ＥＳＴ配列中に若
干のヌクレオチド配列読み取り誤差が必然的に存在する
ことを理解するであろう（Adams, M.D.ら, Nature 377
(supp)3, 1995を参照のこと）。したがって、配列番号
３のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるペ
プチド配列は配列精度において同一の固有限界を受け
る。さらに、配列番号３によりコードされるペプチド配
列は、相同性または構造類似性が最も高いタンパク質と
同一の領域、または相同性および／または構造類似性
（例えば、同類アミノ酸の差異）が高い領域を含んでい
る。

【００２２】本発明のポリヌクレオチドは、標準的なク
ローニングおよびスクリーニングにより、ヒトニューロ
ンの細胞中のｍＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡライブラ
リーから、ＥＳＴ分析（Adams, M.D.ら, Science (199
1) 252:1651-1656; Adams, M.D.ら, Nature (1992) 35
5:632-634; Adams, M.D.ら, Nature (1995) 377 Supp:3
-174）を用いて得ることができる。また、本発明のポリ
ヌクレオチドはゲノムＤＮＡライブラリーのような天然
源から得ることができ、商業的に入手可能な公知の技法
を用いて合成することもできる。

【００２３】本発明のポリヌクレオチドを本発明のポリ
ペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリヌ
クレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列単独、
または他のコード配列（例えば、リーダーもしくは分泌
配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タンパク質配
列、または他の融合ペプチド部分をコードするもの）と
同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペプチドの
コード配列が含まれる。例えば、融合ポリペプチドの精
製を容易にするマーカー配列がコードされ得る。本発明
のこの態様の好ましい具体例として、マーカー配列は、
ｐＱＥベクター(Qiagen, Inc.)により提供されかつ Gen
tzら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1989) 86:821-824
に記載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチド、ま
たはＨＡタグである。また、このポリヌクレオチドは5'
および3'非コード配列、例えば、転写されるが翻訳され
ない配列、スプライシングおよびポリアデニル化シグナ
ル、リボソーム結合部位、およびｍＲＮＡ安定化配列を
含んでいてもよい。

【００２４】本発明の更なる具体例としては、数個、例
えば５〜１０個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、また
は１個のアミノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失また
は付加されている、配列番号２のアミノ酸配列を含んで
なるポリペプチド変異体をコードするポリヌクレオチド
がある。

【００２５】配列番号１に含まれるヌクレオチド配列と
同一であるか実質的に同一であるポリヌクレオチドは、
本発明のポリペプチドをコードする全長ｃＤＮＡおよび
ゲノムクローンを単離するために、また、配列番号１に
対して高い配列類似性を有する他の遺伝子（ヒトに由来
するパラログ体(paralog)、およびヒト以外の種に由来
するオーソログ体(ortholog)およびパラログ体をコード
する遺伝子を含む）のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを
単離するために、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイ
ブリダイゼーションプローブとして、または核酸増幅
（ＰＣＲ）反応用のプライマーとして用いることができ
る。一般的に、これらのヌクレオチド配列は基準のヌク
レオチド配列と７０％、好ましくは８０％、より好まし
くは９０％、最も好ましくは９５％同一である。プロー
ブまたはプライマーはたいてい１５個以上のヌクレオチ
ドを含み、好ましくは３０個以上を含み、５０個以上の
ヌクレオチドを有していてもよい。特に好ましいプロー
ブは３０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するもので
ある。特に好ましいプライマーは２０〜２５個の範囲の
ヌクレオチドを有するものである。

【００２６】本発明のポリペプチド（ヒト以外の種に由
来する相同体を含む）をコードするポリヌクレオチド
は、配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を有
する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリ
ーニングし、該ポリヌクレオチド配列を含む全長ｃＤＮ
Ａおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んでなる
方法により得られる。このようなハイブリダイゼーショ
ン技法は当業者に公知である。好ましいストリンジェン
トなハイブリダイゼーション条件は、50% ホルムアミ
ド、５×SSC (150mMNaCl, 15mM クエン酸三ナトリウム)
、50mMリン酸ナトリウム (pH7.6)、５×Denhardt溶
液、10% デキストラン硫酸および20μg/mlの変性し剪断
したサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中４２℃で一夜イン
キュベートし、次いでフィルターを 0.1×SSC 中約６５
℃で洗浄することを含む。かくして、本発明は、配列番
号１のヌクレオチド配列またはその断片を有する標識プ
ローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件下で適当なライブラリーをスクリーニングす
ることにより得られるポリヌクレオチドをも包含する。

【００２７】当業者には理解されるように、多くの場
合、ポリペプチドをコードする領域がそのｃＤＮＡの5'
末端が短いことから、単離されたｃＤＮＡ配列は不完全
であるだろう。それは逆転写酵素のためであり、この酵
素はもともと「プロセシビティ」（processivity：重合
中に鋳型に結合した状態でいる該酵素の能力の尺度）が
低く、第一鎖ｃＤＮＡ合成の間にｍＲＮＡ鋳型のＤＮＡ
コピーを完成させることができない。

【００２８】全長ｃＤＮＡを得るための、または短鎖ｃ
ＤＮＡを伸長させるための、当業者に公知で利用可能な
方法がいくつかあり、例えば、ｃＤＮＡ末端高速増幅法
（ＲＡＣＥ）に基づいた方法がある（例えば、Frohman
ら, PNAS USA 85, 8998-9002,1988を参照のこと）。例
えばMarathonＴＭ技術(Clontech Laboratories Inc.)に
より示されるような、上記技法の最近の改良により、よ
り長いｃＤＮＡの検索が大いに簡便化された。Marathon
ＴＭ技術では、所定の組織より抽出されたｍＲＮＡから
ｃＤＮＡを作製し、各末端に「アダプター」配列を連結
する。続いて、遺伝子特異的およびアダプター特異的な
オリゴヌクレオチドプライマーの組合せを用いて核酸増
幅（ＰＣＲ）を行い、ｃＤＮＡの「欠失」5'末端を増幅
する。次に、「nested」プライマー、すなわち増幅産物
の内部にアニールするように設計されたプライマー（典
型的には、アダプター配列のさらに3'側にアニールする
アダプター特異的プライマーおよび既知遺伝子配列のさ
らに5'側にアニールする遺伝子特異的プライマー）を用
いてＰＣＲ反応を繰り返す。その後、この反応の産物を
ＤＮＡ塩基配列決定により解析し、この産物を既存のｃ
ＤＮＡに直接結合するか、または5'プライマー設計用の
新たな配列情報を用いて別の全長ＰＣＲを行うことによ
り、全長ｃＤＮＡを構築することができる。

【００２９】本発明の組換え体ポリペプチドは、当業界
で公知の方法を用いて、発現系を含有する遺伝子操作宿
主細胞から生産することができる。したがって、更なる
態様において、本発明は、本発明の１以上のポリヌクレ
オチドを含有する発現系、該発現系により遺伝子操作さ
れた宿主細胞、および組換え技法による本発明ポリペプ
チドの生産に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導さ
れたＲＮＡを用いてこの種のタンパク質を生産するため
に、無細胞翻訳系を使用することもできる。

【００３０】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み込むために宿
主細胞を遺伝子操作する。宿主細胞へのポリヌクレオチ
ドの導入は、Davisら, Basic Methods in Molecular Bi
ology (1986) および Sambrookら, Molecular Cloning:
A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor
Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)
などの多くの標準的な実験室マニュアルに記載された方
法により行うことができる。好適なこうした方法とし
て、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、
ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、ト
ランスベクション(transvection)、マイクロインジェク
ション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エ
レクトロポレーション、形質導入、スクレープローディ
ング(scrape loading)、弾丸導入(ballistic introduct
ion)または感染などがある。

【００３１】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００３２】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入因子由来、酵母染色体要素由
来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ４０のよう
なパポバウイルス、ワクシニアウイルス、アデノウイル
ス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レトロウイル
ス）由来のベクター、およびこれらの組合せに由来する
ベクター、例えば、コスミドやファージミドのようなプ
ラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素に由来する
ものがある。これらの発現系は発現を起こさせるだけで
なく発現を調節する制御配列を含んでいてもよい。一般
的に、宿主内でのポリペプチドの産生のためにポリヌク
レオチドを維持し、増やし、発現することができる系ま
たはベクターはどれも使用しうる。Sambrookら, Molecu
lar Cloning: A Laboratory Manual (前掲) に記載され
るような、日常的に用いられる公知の技法のいずれかに
より、適当なヌクレオチド配列を発現系に挿入すること
ができる。翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、細
胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるために、
適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込むこ
とができる。これらのシグナルは目的のポリペプチドに
対して内因性であっても、異種シグナルであってもよ
い。

【００３３】スクリーニングアッセイで使用するため本
発明のポリペプチドを発現させようとする場合、一般に
そのポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適
である。その場合は、スクリーニングアッセイでの使用
に先立って細胞を回収する。該ポリペプチドが培地に分
泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製するた
めに培地を回収する。細胞内に産生される場合は、その
細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する必
要がある。

【００３４】組換え細胞培養物から本発明のポリペプチ
ドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタ
ノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロ
マトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高性能液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポ
リペプチドが細胞内合成、単離および／または精製中に
変性されるときは、タンパク質を再生させるための公知
の技法を用いて、活性のあるコンフォメーションを復元
することが可能である。

【００３５】本発明はまた、診断薬としての本発明のポ
リヌクレオチドの使用に関する。機能障害と関連した、
配列番号１のポリヌクレオチドにより特徴づけられる遺
伝子の変異型の検出は、該遺伝子の過少発現、過剰発現
または空間的もしくは時間的に変化した発現により生ず
る疾病またはその疾病への罹りやすさの診断に追加しう
る、またはその診断を下しうる診断用ツールを提供する
だろう。該遺伝子に突然変異がある個体を、さまざまな
技法によりＤＮＡレベルで見つけ出すことができる。

【００３６】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料由来の細胞か
ら得ることができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接
使用してもよいし、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を
使ってゲノムＤＮＡを酵素的に増幅してもよい。同様の
方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを使用することもできる。
欠失および挿入突然変異は、正常な遺伝子型と比較した
ときの増幅産物のサイズの変化により検出できる。点突
然変異は増幅ＤＮＡを標識Frizzled-3ヌクレオチド配列
とハイブリダイズさせることで同定できる。完全にマッ
チした配列とミスマッチの二重鎖とはＲＮアーゼ消化に
より、または融解温度の差異により区別できる。また、
ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を含むもしくは含まないゲ
ルでのＤＮＡ断片の電気泳動の移動度の変化により、ま
たは直接ＤＮＡ塩基配列決定によっても検出できる（例
えば、Myersら, Science (1985) 230:1242 を参照のこ
と）。特定位置での配列変化はヌクレアーゼプロテクシ
ョンアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよびＳ１プロテク
ション）または化学的開裂法によっても確認できる（Co
ttonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1985) 85:4397-
4401を参照のこと）。別の実施態様では、例えば、遺伝
子変異の効率のよいスクリーニングを行うため、Frizzl
ed-3ヌクレオチド配列またはその断片を含むオリゴヌク
レオチドプローブのアレイ(array)を構築することがで
きる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性を有
し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含め
た分子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために用い
られている（例えば、M. Cheeら,Science, Vol.274, p
p.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００３７】診断アッセイは、前記の方法によりFrizzl
ed-3遺伝子の変異を検出することで、前記疾患への罹り
やすさを診断または判定する方法を提供する。さらに、
被験者から得られたサンプルからポリペプチドまたはｍ
ＲＮＡのレベルの異常な低下または増加を測定する方法
により、前記疾患の診断を下すことができる。発現の低
下または増加は、当業界で公知のポリヌクレオチドの定
量法、例えば核酸増幅（例：ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ）、
ＲＮアーゼプロテクション、ノーザンブロッティング、
その他のハイブリダイゼーション法のいずれかによりＲ
ＮＡレベルで測定することができる。宿主から得られた
サンプル中の本発明ポリペプチドのようなタンパク質の
レベルを測定するアッセイ法は当業者によく知られてい
る。こうしたアッセイ法として、ラジオイムノアッセ
イ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、ＥＬ
ＩＳＡアッセイなどがある。

【００３８】かくして、もう一つの態様において、本発
明は、(a) 本発明のポリヌクレオチド（好ましくは、配
列番号１のヌクレオチド配列）もしくはその断片、(b)
(a) のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、
(c) 本発明のポリペプチド（好ましくは、配列番号２の
ポリペプチド）もしくはその断片、または(d) 本発明の
ポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチ
ド）に対する抗体、を含んでなる診断用キットに関す
る。

【００３９】このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、
(c) または (d)が実質的な構成成分であることが理解さ
れよう。かかるキットは疾患または疾患への罹りやす
さ、特に神経系障害、特に精神分裂病、また双極性／単
極性障害、アルツハイマー病、癲癇および強直性体麻痺
-5A、癌、心血管系疾患、卒中、ウェルネル症候群等の
発達性障害を診断するうえで有用である。

【００４０】また、本発明のヌクレオチド配列は染色体
の位置決定にも有用である。この配列は個々のヒト染色
体上の特定の位置をターゲッティングし、その特定位置
とハイブリダイズすることができる。本発明に従って関
連配列の染色体地図を作成することは、これらの配列と
遺伝子関連疾患とを相関させるうえで重要な第一段階で
ある。ひとたび配列が正確な染色体位置にマップされた
ら、その染色体上のその配列の物理的位置を遺伝地図デ
ータと相関させることができる。この種のデータは、例
えば、V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man (J
ohns Hopkins University Welch Medical Library から
オンラインで入手可能) 中に見いだせる。その後、同一
の染色体領域にマップされた遺伝子と疾患との関係を連
鎖解析（物理的に隣接した遺伝子の共遺伝）により確認
する。

【００４１】罹患個体と非罹患個体とのｃＤＮＡまたは
ゲノム配列の差異も調べることができる。罹患個体の一
部または全部に突然変異が観察されるが、どの正常個体
にも観察されない場合は、その突然変異が疾患の原因で
ある可能性がある。

【００４２】本発明の遺伝子はヒト染色体8p12-p21にマ
ップされる。分子疫学研究から、精神分裂病感受性遺伝
子の潜在的な位置としてこの遺伝子座が強く支持されて
いる（Kendlerら, 1996. Am. J. Psychiatry. 153(12):
1534-1540）。先に本発明者らは精神分裂病および双極
性障害のような類似の神経系障害におけるFrizzled-3の
関与についての明瞭な疾患仮説を提示した。

【００４３】また、本発明のヌクレオチド配列は、組織
の位置決定にも有用である。こうした技術によって、組
織におけるヒトFrizzled-3ポリペプチドの発現パターン
を、これらをコードするｍＲＮＡを検出することで決定
することができる。これらの技術には、in situのハイ
ブリダイゼーション技術、およびヌクレオチド増幅技
術、例えばＰＣＲが挙げられる。こうした技術は当該技
術分野で公知である。これらの研究の結果から、生物に
おけるポリペプチドの正常な機能の指標が得られる。更
に、ヒトFrizzled-3ｍＲＮＡの正常な発現パターンとヒ
トFrizzled-3遺伝子によってコードされるｍＲＮＡの発
現パターンとを比較研究した結果、疾患状態における突
然変異体ヒトFrizzled-3ポリペプチドの役割、あるいは
正常なヒトFrizzled-3ポリペプチドの不適切な発現の役
割についての貴重な知見が得られる。そうした不適切な
発現は、時間的、空間的または単に量的な性質のもので
もあり得る。

【００４４】本発明のポリペプチド、その断片もしくは
類似体、またはそれらを発現する細胞は、本発明のポリ
ペプチドに免疫特異的な抗体を生産するための免疫原と
しても使用することができる。「免疫特異的」とは、そ
の抗体が従来技術における他の関連ポリペプチドに対す
るその親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質
的に高い親和性を示すことを意味する。

【００４５】本発明のポリペプチドに対する抗体は、慣
用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以外
の動物）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断
片、類似体もしくは細胞を投与することにより得られ
る。モノクローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養
物から抗体を産生させる任意の技法を用いることができ
る。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.お
よびMilstein, C., Nature(1975) 256:495-497)、トリ
オーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法 (Kozbor
ら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハ
イブリドーマ技法 (Coleら, Monoclonal Antibodies an
d Cancer Therapy, pp.77-96, Alan R. Liss,Inc., 198
5) などがある。

【００４６】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、米国特許第4,946,778 号に記載される
ような一本鎖抗体の調製法を適応させることができる。
また、ヒト化抗体を発現させるために、トランスジェニ
ックマウスまたは他の哺乳動物を含む他の生物を利用す
ることができる。

【００４７】前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを
発現するクローンを単離・同定したり、アフィニティー
クロマトグラフィーでそのポリペプチドを精製すること
もできる。

【００４８】本発明のポリペプチドに対する抗体は、と
りわけ、前記疾患の治療に使用できる可能性がある。

【００４９】本発明の更なる態様において、本発明は、
本発明のポリペプチドまたはその断片と、各種サブクラ
ス（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）の免疫グロブリ
ンのＨ鎖またはＬ鎖の定常領域の様々な部分と、を含ん
でなる遺伝子工学的に作製された可溶性融合タンパク質
に関する。免疫グロブリンとしてはヒトＩｇＧ、特にＩ
ｇＧ１のＨ鎖の定常部が好ましく、その場合は融合がヒ
ンジ領域で起こる。特定例では、血液凝固因子Ｘａで開
裂され得る開裂配列を組み込むことで、Ｆｃ部分を簡単
に除去できる。さらに、本発明は、これら融合タンパク
質の遺伝子工学的作製方法、並びに薬物スクリーニン
グ、診断および治療におけるそれらの使用に関する。ま
た、本発明の更なる態様はこのような融合タンパク質を
コードするポリヌクレオチドに関する。融合タンパク質
技術の例は国際特許出願 WO94/29458 およびWO94/22914
に見いだせる。

【００５０】本発明の更なる態様は哺乳動物において免
疫学的応答を引き出す方法に関し、この方法は、特に前
記疾患から該動物を防御するための抗体および／または
Ｔ細胞免疫応答を生ずるのに十分な本発明のポリペプチ
ドを哺乳動物に接種することを含んでなる。本発明のさ
らに別の態様は、哺乳動物を前記疾患から防御する抗体
を産生させるような免疫学的応答を引き出すために、in
vivo で本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレ
オチドの発現を指令するベクターを介して該ポリペプチ
ドを供給することを含んでなる、哺乳動物において免疫
学的応答を引き出す方法に関する。

【００５１】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物において本発明のポリペプチ
ドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン
製剤（組成物）に関し、この組成物は本発明のポリペプ
チドまたはポリヌクレオチドを含有する。ワクチン製剤
は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ポリペプチド
は胃の中で分解される可能性があるので、非経口的に
（例えば、皮下、筋肉内、静脈内または皮内注射によ
り）投与することが好ましい。非経口投与に適した製剤
としては、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤およびこの製剤
を受容者の血液と等張にする溶質を含みうる水性および
非水性の無菌注射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含
みうる水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした
製剤は１回量容器または数回量容器（例えば、密閉アン
プルおよびバイアル）で提供することができ、また、使
用直前に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥
状態で保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤
の免疫原性を増強するためのアジュバント系、例えば水
中油型のアジュバント系や当業界で公知の他のアジュバ
ント系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性
により変化するが、ルーチンな実験操作により簡単に決
定できる。

【００５２】本発明のポリペプチドは、1種以上の病的
状態、特に前記疾患を含めて、1種以上の生物学的機能
に関与している。それゆえ、このポリペプチドの機能を
刺激または抑制する化合物を同定するスクリーニング法
を開発することが望ましい。したがって、更なる態様に
おいて、本発明は、このポリペプチドを刺激または抑制
する化合物を同定するための化合物のスクリーニング法
を提供する。一般的には、前記疾患の治療および予防目
的のためにアゴニストまたはアンタゴニストが使用され
る。種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学
物質ライブラリーおよび天然産物の混合物から化合物を
同定することができる。このように同定されたアゴニス
ト、アンタゴニストまたはインヒビターは、場合によ
り、該ポリペプチドの天然のまたは修飾された基質、リ
ガンド、受容体、酵素などであってよく、また、その構
造的または機能的なミメティックであってもよい（Coli
ganら,Current Protocols in Immunology 1(2): Chapte
r 5 (1991)を参照のこと）。

【００５３】スクリーニング法では、本発明のポリペプ
チド、または該ポリペプチドを担持する細胞もしくは
膜、またはその融合タンパク質への候補化合物の結合
を、候補化合物に直接または間接的に結合された標識を
用いて簡単に測定できる。あるいはまた、スクリーニン
グ法では標識した競合物質との競合を用いることもあ
る。さらに、こうしたスクリーニング法では、候補化合
物がポリペプチドの活性化または抑制により生ずるシグ
ナルを結果的にもたらすか否かを、該ポリペプチドを担
持する細胞に適した検出系を用いて試験することができ
る。一般的には、既知のアゴニストの存在下で活性化の
インヒビターをアッセイして、アゴニストによる活性化
に候補化合物の存在が与える影響を調べる。アゴニスト
またはインヒビターの不在下で、候補化合物がポリペプ
チドの活性化を抑制するか否かを調べることによる逆ア
ゴニストまたはインヒビターのスクリーニング法では、
構成的に活性のあるポリペプチドが用いられる。さら
に、これらのスクリーニング法は、候補化合物と本発明
のポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混合物をつ
くり、この混合物中のFrizzled-3活性を測定し、そして
この混合物のFrizzled-3活性をスタンダードと比較する
各ステップを単に含むだけでよい。本発明のポリペプチ
ドのアンタゴニストを同定するハイスループットスクリ
ーニングアッセイでは、上記のようなＦｃ部分とFrizzl
ed-3ポリペプチドから作製されるような融合タンパク質
も使用することができる(D. Bennettら, J. Mol. Recog
nition, 8:52-58 (1995) およびK. Johansonら, J. Bio
l. Chem., 270(16):9459-9471 (1995)を参照のこと）。

【００５４】また、本発明のポリヌクレオチド、ポリペ
プチドまたは該ポリペプチドに対する抗体を用いて、細
胞内でのｍＲＮＡまたはポリペプチドの産生に及ぼす添
加化合物の作用を検出するためのスクリーニング法を組
み立てることができる。例えば、当業界で公知の標準方
法によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用
いて、ポリペプチドの分泌レベルまたは細胞結合レベル
を測定するためのＥＬＩＳＡアッセイを構築することが
でき、これは適切に操作された細胞または組織からのポ
リペプチドの産生を抑制または増強する物質（それぞれ
アンタゴニストまたはアゴニストともいう）の探索に用
いることができる。

【００５５】膜に結合した受容体または可溶性の受容体
が存在するのであれば、当業界で公知の標準的な受容体
結合法によりこの種の受容体を同定するために本発明の
ポリペプチドを用いることができる。こうした受容体結
合法には、限定するものではないが、リガンド結合アッ
セイおよび架橋アッセイがあり、これらのアッセイで
は、ポリペプチドを放射性アイソトープ（例：１２５
I）で標識するか、化学的に修飾（例：ビオチン化）す
るか、または検出や精製に適したペプチド配列に融合さ
せ、そして推定上の受容体源（細胞、細胞膜、細胞上
清、組織抽出物、体液など）とインキュベートする。そ
の他の方法としては、表面プラズモン共鳴および分光学
のような生物物理的方法がある。これらのスクリーニン
グ法は、該ポリペプチドまたは（存在するのであれば）
その受容体への結合と競合する該ポリペプチドのアゴニ
ストまたはアンタゴニストを同定するために用いること
もできる。スクリーニングアッセイを行うための標準的
な方法は当業界でよく理解されている。

【００５６】本発明のポリペプチドの潜在的なアンタゴ
ニストの例としては、抗体、ある場合には、該ポリペプ
チドのリガンド、基質、受容体、酵素などと密接な関係
があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質（例え
ば、リガンド、基質、受容体、酵素などの断片）、また
は本発明のポリペプチドと結合するが応答を誘導しない
（それゆえ該ポリペプチドの活性を妨げる）小分子など
がある。

【００５７】かくして、他の態様において、本発明は、
本発明のポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニスト、
リガンド、受容体、基質、酵素など、またはこの種のポ
リペプチドの産生を低下または増加させる化合物を同定
するためのスクリーニングキットに関し、このキット
は、(a) 本発明のポリペプチド、(b) 本発明のポリペプ
チドを発現している組換え細胞、(c) 本発明のポリペプ
チドを発現している細胞膜、または(d) 本発明のポリペ
プチドに対する抗体、を含んでなり、前記ポリペプチド
は好ましくは配列番号２のポリペプチドである。このよ
うなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実
質的な構成成分であることが理解されよう。

【００５８】当業者であれば、本発明のポリペプチド
は、その構造に基づいて該ポリペプチドのアゴニスト、
アンタゴニストまたはインヒビターを設計する方法にも
使用できることが容易に理解されよう。この方法は、
(a) 最初に該ポリペプチドの三次元構造を解析し、(b)
アゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターの確実
と思われる反応部位または結合部位の三次元構造を想定
し、(c) 想定された反応部位または結合部位と結合また
は反応すると予想される候補化合物を合成し、そして
(d) その候補化合物が実際にアゴニスト、アンタゴニス
トまたはインヒビターであるか否かを調べる、ことを含
んでなる。これは通常反復プロセスであることがさらに
理解されよう。

【００５９】更なる態様において、本発明は、Frizzled
-3ポリペプチド活性の過剰量と不足量のいずれかに関係
した、例えば神経系障害、特に精神分裂病、また双極性
／単極性障害、アルツハイマー病、癲癇および強直性体
麻痺-5A、癌、心血管系疾患、卒中、ウェルネル症候群
等の発達性障害などの異常な状態の治療法を提供する。

【００６０】該ポリペプチドの活性が過剰である場合
は、いくつかのアプローチが利用可能である。一つのア
プローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、酵素な
どの結合をブロックすることにより、または第２のシグ
ナルを抑制することで異常な状態を軽減することによ
り、該ポリペプチドの機能を抑制するのに有効な量で、
上記のインヒビター化合物（アンタゴニスト）を製剤学
上許容される担体とともに患者に投与することを含んで
なる。もう一つのアプローチでは、内因性のポリペプチ
ドとの競合状態でリガンド、基質、酵素、受容体などと
結合する能力がまだある可溶性形態のポリペプチドを投
与することができる。このような競合物質の典型的な例
はFrizzled-3ポリペプチドの断片である。

【００６１】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性Frizzled-3ポリペプチドをコードする遺伝
子の発現を抑制することができる。こうした公知技術
は、体内で産生されるか外部から投与されるアンチセン
ス配列の使用を必要とする（例えば、Oligodeoxynucleo
tides as Antisense Inhibitors of Gene Expression
(遺伝子発現のアンチセンスインヒビターとしてのオリ
ゴデオキシヌクレオチド),CRC Press, Boca Raton, FL
(1988) 中のO'Connor, J. Neurochem (1991) 56:560を
参照のこと）。あるいはまた、この遺伝子と共に三重ら
せん（“トリプレックス”）を形成するオリゴヌクレオ
チドを供給することもできる（例えば、Leeら, Nucleic
Acids Res (1979) 6:3073; Cooneyら, Science (1988)
241:456; Dervanら, Science (1991) 251:1360 を参照
のこと）。これらのオリゴマーはそれ自体を投与するこ
ともできるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させる
こともできる。合成アンチセンスまたはトリプレックス
オリゴヌクレオチドは、修飾された塩基または修飾され
た骨格を含んだものでも良い。後者の例として、メチル
ホスホネート、ホスホロチオエート、またはペプチド核
酸骨格が挙げられる。こうした骨格はヌクレアーゼによ
る分解から保護するためにアンチセンスまたはトリプレ
ックスオリゴヌクレオチド内に組み込まれ、これは公知
のものである。これらの、または他の修飾骨格を使用し
て合成したアンチセンスおよびトリプレックス分子はま
た、本発明の一部を構成する。

【００６２】さらに、ヒトFrizzled-3ポリペプチドの発
現はヒトFrizzled-3ｍＲＮＡ配列に特異的なリボザイム
を用いることにより阻止することができる。リボザイム
は天然または合成のもので良い触媒活性のあるＲＮＡで
ある（例えばUsman,Nら, Curr. Opin. Struct. Biol.
(1996)6(4), 527-33を参照すること。）。合成リボザイ
ムは選択された位置でヒトFrizzled-3ｍＲＮＡを特異的
に切断するように設計でき、これによってヒトFrizzled
-3ｍＲＮＡが機能性ポリペプチドに翻訳されるのを阻止
する。リボザイムは、ＲＮＡ分子中に通常見られる天然
のリボースリン酸骨格および天然の塩基で合成しても良
い。あるいはまた、リボヌクレアーゼ分解から保護する
ために、非天然の骨格でリボザイム、例えば２'−Ｏ−
メチルＲＮＡを合成しても良く、該リボザイムは修飾し
た塩基を有していても良い。

【００６３】Frizzled-3およびその活性の過少発現に関
係した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロ
ーチを取ることができる。一つのアプローチは、治療に
有効な量の本発明ポリペプチドを活性化する化合物（す
なわち、前記アゴニスト）を製剤学上許容される担体と
ともに患者に投与して、異常な状態を緩和することを含
んでなる。別法として、患者の関連細胞においてFrizzl
ed-3を内因的に産生させるために遺伝子治療を用いるこ
とができる。例えば、上で述べたような複製欠損レトロ
ウイルスベクターによる発現のために本発明のポリヌク
レオチドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス発現構
築物を単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮ
Ａを含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質
導入されたパッケージング細胞に導入する。その結果、
パッケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感染性の
ウイルス粒子を産生するようになる。in vivo 細胞操作
およびin vivo ポリペプチド発現のために、これらの産
生細胞を患者に投与する。遺伝子治療の概論に関して
は、Human Molecular Genetics, T Strachan and A PRe
ad, BIOS Scientific Publishers Ltd (1996)中のChapt
er 20, Gene Therapyand other Molecular Genetic-bas
ed Therapeutic Approaches(およびその中の引用文献)
を参照のこと。もう一つのアプローチは治療量の本発明
のポリペプチドを適当な製剤学上の担体とともに投与す
ることである。

【００６４】更なる態様において、本発明は、治療に有
効な量のポリペプチド（例えば、可溶性形態の本発明ポ
リペプチド）、アゴニストもしくはアンタゴニストペプ
チド、または小分子化合物を製剤学上許容される担体ま
たは賦形剤と共に含有する医薬組成物を提供する。この
種の担体としては、食塩水、生理食塩水、デキストロー
ス、水、グリセロール、エタノール、およびこれらの組
合せがあるが、これらに限らない。本発明はさらに、上
記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容
器を含んでなる医薬パックおよびキットに関する。本発
明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用して
も、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使用して
もよい。

【００６５】医薬組成物は投与経路、例えば全身または
経口による投与経路に適合させることができる。全身投
与に適した形態は、注入（注射）、典型的には静注であ
る。皮下、筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も
使用できる。全身投与の別の手段には、胆汁酸塩、フシ
ジン酸、その他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘
膜および経皮投与がある。さらに、本発明のポリペプチ
ドまたは他の化合物を腸溶剤またはカプセル剤として製
剤化し得るのであれば、経口投与も可能である。これら
の化合物を軟膏、ペースト、ゲルなどの剤形で局所に投
与しても、かつ／または局在化させてもよい。

【００６６】必要な投与量範囲は、本発明のペプチドま
たは他の化合物の選択、投与経路、製剤の性質、患者の
状態、そして医師の判断に左右される。しかし、適当な
投与量は患者の体重１kgあたり0.1〜100μgの範囲であ
る。入手可能な化合物が多様であること、投与経路の効
率が異なることを考慮すれば、必要とされる投与量は広
範に変動することが予測される。例えば、経口投与は静
注による投与よりも高い投与量を必要とすると予想され
よう。こうした投与量レベルの変動は、当業界でよく理
解されているような、標準的経験的な最適化手順を用い
て調整することができる。

【００６７】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのよ
うなポリヌクレオチドにより、例えばレトロウイルスプ
ラスミドベクターを用いて、ex vivo で遺伝子工学的に
操作する。その後、これらの細胞を患者に導入する。

【００６８】ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配
列は、類似の相同性を有する別の配列を同定する際の価
値ある情報源を提供する。これは、こうした配列をコン
ピュータ読み取り可能媒体中に保存し、次に保存したデ
ータを用いてＧＣＧおよびレーザージーン（Lasergen
e）ソフトウェアパッケージのような公知の検索ツール
により配列データベースを検索することで最大限促進さ
れる。したがって、更なる態様において、本発明は、配
列番号１の配列を含んでなるポリヌクレオチドおよび／
またはそれによりコードされるポリペプチドを保存した
コンピュータ読み取り可能媒体を提供する。

【００６９】以下の定義は上記の説明中でしばしば用い
られた用語を理解しやすくするためのものである。本明
細書中で用いる「抗体」には、ポリクローナルおよびモ
ノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗
体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブ
ラリーの産物を含むＦａｂフラグメントが含まれる。
「単離された」とは、天然の状態から「人間の手によっ
て」改変されたことを意味する。「単離された」組成物
または物質が天然に存在するのであれば、それはそのも
との環境から変化しているか分離されており、またはそ
の両方である。例えば、生存している動物の体内に自然
界で存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは
「単離された」ものではないが、その天然状態の共存物
質から分離されたポリヌクレオチドまたはポリペプチド
は、本明細書中で用いられるように、「単離された」も
のである。

【００７０】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾を行う
ことができる。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自
然界に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵
素的または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスお
よび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を
包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオ
リゴヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチ
ドも包含する。

【００７１】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含むペ
プチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプチド」
は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴ
マーという）と長鎖（一般的にはタンパク質という）の
両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コード化
アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリペプチ
ド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロセス
で、または当業界で公知の化学的修飾法のいずれかで修
飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾は基本的
な教科書、より詳細な学術論文および研究文献に詳述さ
れている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノ
またはカルボキシル末端を含めてポリペプチドのどこで
も行うことができる。同じタイプの修飾が所定のポリペ
プチドのいくつかの部位に同程度でまたはさまざまに異
なる程度で存在してもよい。また、所定のポリペプチド
が多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。ポリペプチ
ドはユビキチン化のために分枝していても、分枝のある
又はない環状であってもよい。環状の、分枝した、また
は分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天然プロセス
から生じることがあり、また、合成法によって製造する
こともできる。修飾としては、アセチル化、アシル化、
ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、ビオチン化、フラビン
の共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたは
ヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体
の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、
架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共
有結合架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメート
の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル
化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、
メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロ
セシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイ
ル化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質へのア
ミノ酸の転移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある
（例えば、Proteins - Structure and Molecular Prope
rties, 2nd Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and C
ompany, New York, 1993; Posttranslational Covalent
Modification of Proteins, B.C. Johnson編, Academi
c Press, New York, 1983中のWold, F., Post-translat
ional Protein Modifications:Perspectives and Prosp
ects, pgs. 1-12; Seifterら, “Analysis for protein
modifications and nonprotein cofactors", Meth Enz
ymol (1990) 182:626-646;および Rattanら, “Protein
Synthesis: Post-translational Modifications and A
ging", Ann NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこ
と）。

【００７２】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドのアミノ酸の置換、欠失、付
加、融合および末端切断（トランケーション）をもたら
しうる。典型的なポリペプチドの変異体は基準ポリペプ
チドとアミノ酸配列の点で相違する。一般的には、基準
ポリペプチドの配列と変異体の配列が全般的によく類似
しており、多くの領域で同一となるような相違に限られ
る。変異体と基準ポリペプチドは任意に組み合わせた１
以上の置換、欠失、付加によりアミノ酸配列が相違して
いてよい。置換または付加されるアミノ酸残基は遺伝子
コードによりコードされるものであっても、なくてもよ
い。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体はア
レル変異体のように天然に存在するものでも、天然に存
在することが知られていない変異体であってもよい。ポ
リヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に存在しない
変異体は、突然変異誘発法または直接合成により作製す
ることができる。

【００７３】当技術分野で知られた「同一性」とは、ポ
リペプチド配列またはポリヌクレオチド配列の比較によ
り決定された、２以上のかかる配列間の関係のことであ
る。当技術分野ではまた、「同一性」はポリペプチド配
列またはポリヌクレオチド配列の鎖間のマッチ(match)
により決定された、このような配列間の配列関係の程度
を意味する。「同一性」および「類似性」は公知の方法
により難なく算出することができ、こうした方法とし
て、例えば Computational Molecular Biology,Lesk,
A.M.編, Oxford University Press, New York, 1988; B
iocomputing: Informatics and Genome Projects, Smit
h, D.W. 編, Academic Press, New York,1993; Compute
r Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M.
and Griffin, H.G. 編, Humana Press, New Jersey, 1
994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von H
einje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis
Primer, Gribskov, M. and Devereux, J. 編, M Stock
ton Press, New York, 1991; および Carillo, H. and
Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 (1988)
に記載された方法があるが、これらに限らない。同一
性を決定するための好ましい方法は、検討する配列間で
最大級のマッチが得られるように設計される。さらに、
同一性および類似性を決定する方法は一般に入手可能な
コンピュータプログラムに編集されている。２配列間の
同一性および類似性を決定する好適なコンピュータプロ
グラム法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ (Deve
reux, J.ら, Nucleic Acids Research 12(1):387 (198
4))、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮおよびＦＡＳＴＡ (A
tschul, S.F.ら, J. Molec. Biol. 215:403-410 (199
0))があるが、これらに限らない。ＢＬＡＳＴＸプログ
ラムはＮＣＢＩおよび他のソースから一般に入手可能で
ある (BLAST Manual, Altschul, S.ら, NCBI NLM NIHBe
thesda, MD 20894; Altschul, S.ら, J. Mol. Biol. 21
5: 403-410 (1990))。公知のSmith Watermanアルゴリズ
ムも同一性の決定に使用することができる。

【００７４】ポリペプチド配列を比較するための好適な
パラメーターは次のものを含む： １）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J. Mol. Bi
ol. 48: 443-453 (1970)； 比較マトリックス：BLOSSU
M62 、Hentikoff and Hentikoff, Proc. Natl. Acad. S
ci. USA, 89: 10915-10919 (1992) ギャップペナルティー：１２ ギャップ長ペナルティー：４ これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Gen
etics Computer Group(Madison WI)から「ｇａｐ」プロ
グラムとして一般に入手可能である。前記のパラメータ
ーはペプチド比較のためのデフォルトパラメーター(def
ault parameter) である（末端ギャップのペナルティー
は無し）。

【００７５】ポリヌクレオチド配列を比較するための好
適なパラメーターは次のものを含む： １）アルゴリズム：Needleman and Wunsch, J. Mol. Bi
ol. 48: 443-453 (1970)； 比較マトリックス：マッチ
＝＋１０、ミスマッチ＝０ ギャップペナルティー：５０ ギャップ長ペナルティー：３ これらのパラメーターと共に役に立つプログラムは Gen
etics Computer Group(Madison WI)から「ｇａｐ」プロ
グラムとして入手可能である。前記のパラメーターはポ
リヌクレオチド比較のためのデフォルトパラメーターで
ある。

【００７６】例として、本発明のポリヌクレオチド配列
は配列番号１の基準配列と同一、すなわち１００％同一
であっても、該基準配列に対して、ある整数個までのヌ
クレオチド変異を含んでいてもよい。前記変異は少なく
とも１個のヌクレオチドの欠失、置換（トランジション
およびトランスバージョンを含む）または付加よりなる
群から選択され、こうした変異は基準ヌクレオチド配列
の5'もしくは3'末端位置、またはこれらの末端位置の間
のどこに存在してもよく、基準配列中のヌクレオチドの
間に個々に、または基準配列内に１以上の連続するグル
ープとして介在することができる。ヌクレオチド変異の
数は、配列番号１のヌクレオチドの総数に、それぞれの
（１００で割った）同一性％値を掛け、その積を配列番
号１のヌクレオチドの総数から差し引くことにより、す
なわち、次式： ｎ_ｎ ≦ｘ_ｎ −（ｘ_ｎ・ｙ） により求めることができる。式中、ｎ_ｎはヌクレオチド
変異の数であり、ｘ_ｎは配列番号１のヌクレオチドの総
数であり、ｙは例えば70％については0.70、80％につい
ては0.80、85％については0.85、90％については0.90、
95％については0.95などであり、ｘ_ｎとｙの非整数の積
は、その積をｘ_ｎから引く前に、最も近似する整数に切
り下げる。配列番号２のポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチド配列の改変は、そのコード配列にナンセン
ス、ミスセンスまたはフレームシフト突然変異を生じさ
せ、それにより、こうした変異後に該ポリヌクレオチド
によりコードされたポリペプチドを改変させることがで
きる。

【００７７】同様に、本発明のポリペプチド配列は配列
番号２の基準配列と同一、すなわち１００％の同一性で
あっても、該基準配列に対して、ある整数個までのアミ
ノ酸変異を含み、同一性％が１００％未満であってもよ
い。前記変異は少なくとも１個のアミノ酸の欠失、置換
（同類および非同類アミノ酸置換を含む）または付加よ
りなる群から選択され、こうした変異は基準ポリペプチ
ド配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、またはこ
れらの末端位置の間のいずれに存在してもよく、基準配
列中のアミノ酸の間に個々に、または基準配列内に１以
上の連続するグループとして介在することができる。所
定の同一性％についてのアミノ酸変異の数は、配列番号
２のアミノ酸の総数に、それぞれの（１００で割った）
同一性％値を掛け、その積を配列番号２のアミノ酸の総
数から差し引くことにより、すなわち、次式： ｎ_ａ ≦ｘ_ａ −（ｘ_ａ・ｙ） により求めることができる。式中、ｎ_ａはアミノ酸変異
の数であり、ｘ_ａは配列番号２中のアミノ酸の総数であ
り、ｙは例えば70％については0.70、80％については0.
80、85％については0.85などであり、ｘ_ａとｙの非整数
の積は、その積をｘ_ａから引く前に、最も近似する整数
に切り下げる。

【００７８】「相同体」とは、対象の配列に対して高度
の配列関連性を有するポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドを示すための当技術分野で使用される一般的な用語
である。こうした関連性は、上記のような比較すべき配
列間の同一性および／または類似性の程度を決定するこ
とにより定量化できる。別の種におけるポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドの機能的等価物であるポリヌクレ
オチドまたはポリペプチドを意味する「オーソログ体」
(ortholog)、および同一の種内で考えるときに機能的に
類似した配列を意味する「パラログ体」(paralog) とい
う用語はこの一般的な用語に含まれる。

【００７９】「融合タンパク質」とは、２つの、しばし
ば無関係の、融合された遺伝子またはその断片によりコ
ードされるタンパク質のことである。一例として、EP-A
-0 464には、免疫グロブリン分子の定常領域の様々な部
分と他のヒトタンパク質またはその一部とを含んでなる
融合タンパク質が記載されている。多くの場合、治療お
よび診断における使用には、融合タンパク質の一部とし
て免疫グロブリンＦｃ領域を使用することが有利であ
り、これにより例えば薬物速度論的性質が向上する（例
えば、EP-A- 0232 262を参照のこと）。一方、いくつか
の使用にとっては、その融合タンパク質を発現させ、検
出し、精製した後でＦｃ部分を除去することが望ましい
だろう。

【００８０】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。

【００８１】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> SmithKline Beecham plc <120> Frizzled-3 Polypeptides and Polynucleotides <130> PA01-638 <150> U.K. application No.9805194.9 <151> 1998-3-10 <150> U.K. application No.9814628.5 <151> 1998-7-6 <160> 4 <170> FastSEQ for Windows（登録商標） Version 3.0 <210> 1 <211> 2429 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 agttgaagga agaaatagct cttctcctaa gatggaatct gtggtttggg aatgtggttg 60 atcaacttga tatgttggcc aaatgtgccc catgtaataa aatgaaaaga agagacaaga 120 tgatgtcatt ttcccatatt gtgaaaccaa aaacaaacgc cttttgtgag accaagctaa 180 caaacctctg acggtgcgaa gaagtattta actgtttgaa gaatttaaca gtaagataca 240 gaagaagtac ccttcgagct gagacctgca ggtgtataaa atatctaaaa tacatatttg 300 aatagggcct gatcatcctg aatctccttc agacccagga aggatggcta tgacttggat 360 tgtcttctct ctttggccct tgactgtgtt catggggcat ataggtgggc acagtttgtt 420 ttcttgtgaa cctattacct tgaggatgtg ccaagatttg ccttataata ctaccttcat 480 gcctaatctt ctgaatcatt atgaccaaca gacagcagct ttggcaatgg agccattcca 540 cccnatggtg aatctggatt gttctcggga tttccggcct tttctttgtg cactctacgc 600 tcctatttgt atggaatatg gacgtgtcac acttccctgt cgtaggctgt gtcagcgggc 660 ttacagtgag tgttcgaagc tcatggagat gtttggtgtt ccttggcctg aagatatgga 720 atgcagtagg ttcccagatt gtgatgagcc atatcctcga cttgtggatc tgaatttggc 780 tggagaacca actgaaggag ccccagtggc agtgcagaga gactatggtt tttggtgtcc 840 ccgagagtta aaaattgatc ctgatctggg ttattctttt ctgcatgtgc gtgattgttc 900 acctccttgt ccaaatatgt acttcagaag agaagaactg tcatttgctc gctatttcat 960 aggattgatt tcaatcattt gcctctcggc cacattgttt acttttttaa cttttttgat 1020 tgatgtcaca agattccgtt atcctgaaag gcctattata ttttatgcag tctgctacat 1080 gatggtatcc ttaattttct tcattggatt tttgcttgaa gatcgagtag cctgcaatgc 1140 atccatccct gcacaatata aggcttccac agtgacacaa ggatctcata ataaagcctg 1200 taccatgctt tttatgatac tctatttttt tactatggct ggcagtgtat ggtgggtaat 1260 tcttaccatc acatggtttt tagcagctgt gccaaagtgg ggtagtgaag ctattgagaa 1320 gaaagcattg ctgtttcacg ccagtgcatg gggcatcccc ggaactctaa ccatcatcct 1380 tttagcgatg aataaaattg aaggtgacaa tattagtggc gtgtgttttg ttggcctcta 1440 cgatgttgat gcattgagat attttgttct tgctcccctc tgcctgtatg tggtagttgg 1500 ggtttctctc ctcttagctg gcattatatc cctaaacaga gttcgaattg agattccatt 1560 agaaaaggag aaccaagata aattagtgaa gtttatgatc cggatcggtg ttttcagcat 1620 tctttatctc gtaccactct tggttgtaat tggatgctac ttttatgagc aagcttaccg 1680 gggcatctgg gaaacaacgt ggatacaaga acgctgcaga gaatatcaca ttccatgtcc 1740 atatcaggtt actcaaatga gtcgtccaga cttgattctc tttctgatga aatacctgat 1800 ggctctcata gttggcattc cctctgtatt ttgggttgga agcaaaaaga catgctttga 1860 atgggccagt ttttttcatg gtcgtaggaa aaaagagata gtgaatgaga gccgacaggt 1920 actccaggaa cctgattttg ctcagtctct cctgagggat ccaaatactc ctatcataag 1980 aaagtcaagg ggaacttcca ctcaaggaac atccacccat gcttcttcaa ctcagctggc 2040 tatggtggat gatcaaagaa gcaaagcagg aagcatccac agcaaagtga gcagctacca 2100 cggcagcctc cacagatcac gtgatggcag gtacacgccc tgcagttaca gaggaatgga 2160 ggagagacta cctcatggca gcatgtcacg actaacagat cactccaggc atagtagttc 2220 tcatcggctc aatgaacagt cacgacatag cagcatcaga gatctcagta ataatcccat 2280 gactcatatc acacatggca ccagcatgaa tcgggttatt gaagaagatg gaaccagtgc 2340 ttaatttgtc ttgtctaagg tggaaatctt gtgctgttta aaaagcagat tttattcttt 2400 gccttttgca tgactgatag ctgtaactc 2429 <210> 2 <211> 666 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Ala Met Thr Trp Ile Val Phe Ser Leu Trp Pro Leu Thr Val Phe 1 5 10 15 Met Gly His Ile Gly Gly His Ser Leu Phe Ser Cys Glu Pro Ile Thr 20 25 30 Leu Arg Met Cys Gln Asp Leu Pro Tyr Asn Thr Thr Phe Met Pro Asn 35 40 45 Leu Leu Asn His Tyr Asp Gln Gln Thr Ala Ala Leu Ala Met Glu Pro 50 55 60 Phe His Pro Met Val Asn Leu Asp Cys Ser Arg Asp Phe Arg Pro Phe 65 70 75 80 Leu Cys Ala Leu Tyr Ala Pro Ile Cys Met Glu Tyr Gly Arg Val Thr 85 90 95 Leu Pro Cys Arg Arg Leu Cys Gln Arg Ala Tyr Ser Glu Cys Ser Lys 100 105 110 Leu Met Glu Met Phe Gly Val Pro Trp Pro Glu Asp Met Glu Cys Ser 115 120 125 Arg Phe Pro Asp Cys Asp Glu Pro Tyr Pro Arg Leu Val Asp Leu Asn 130 135 140 Leu Ala Gly Glu Pro Thr Glu Gly Ala Pro Val Ala Val Gln Arg Asp 145 150 155 160 Tyr Gly Phe Trp Cys Pro Arg Glu Leu Lys Ile Asp Pro Asp Leu Gly 165 170 175 Tyr Ser Phe Leu His Val Arg Asp Cys Ser Pro Pro Cys Pro Asn Met 180 185 190 Tyr Phe Arg Arg Glu Glu Leu Ser Phe Ala Arg Tyr Phe Ile Gly Leu 195 200 205 Ile Ser Ile Ile Cys Leu Ser Ala Thr Leu Phe Thr Phe Leu Thr Phe 210 215 220 Leu Ile Asp Val Thr Arg Phe Arg Tyr Pro Glu Arg Pro Ile Ile Phe 225 230 235 240 Tyr Ala Val Cys Tyr Met Met Val Ser Leu Ile Phe Phe Ile Gly Phe 245 250 255 Leu Leu Glu Asp Arg Val Ala Cys Asn Ala Ser Ile Pro Ala Gln Tyr 260 265 270 Lys Ala Ser Thr Val Thr Gln Gly Ser His Asn Lys Ala Cys Thr Met 275 280 285 Leu Phe Met Ile Leu Tyr Phe Phe Thr Met Ala Gly Ser Val Trp Trp 290 295 300 Val Ile Leu Thr Ile Thr Trp Phe Leu Ala Ala Val Pro Lys Trp Gly 305 310 315 320 Ser Glu Ala Ile Glu Lys Lys Ala Leu Leu Phe His Ala Ser Ala Trp 325 330 335 Gly Ile Pro Gly Thr Leu Thr Ile Ile Leu Leu Ala Met Asn Lys Ile 340 345 350 Glu Gly Asp Asn Ile Ser Gly Val Cys Phe Val Gly Leu Tyr Asp Val 355 360 365 Asp Ala Leu Arg Tyr Phe Val Leu Ala Pro Leu Cys Leu Tyr Val Val 370 375 380 Val Gly Val Ser Leu Leu Leu Ala Gly Ile Ile Ser Leu Asn Arg Val 385 390 395 400 Arg Ile Glu Ile Pro Leu Glu Lys Glu Asn Gln Asp Lys Leu Val Lys 405 410 415 Phe Met Ile Arg Ile Gly Val Phe Ser Ile Leu Tyr Leu Val Pro Leu 420 425 430 Leu Val Val Ile Gly Cys Tyr Phe Tyr Glu Gln Ala Tyr Arg Gly Ile 435 440 445 Trp Glu Thr Thr Trp Ile Gln Glu Arg Cys Arg Glu Tyr His Ile Pro 450 455 460 Cys Pro Tyr Gln Val Thr Gln Met Ser Arg Pro Asp Leu Ile Leu Phe 465 470 475 480 Leu Met Lys Tyr Leu Met Ala Leu Ile Val Gly Ile Pro Ser Val Phe 485 490 495 Trp Val Gly Ser Lys Lys Thr Cys Phe Glu Trp Ala Ser Phe Phe His 500 505 510 Gly Arg Arg Lys Lys Glu Ile Val Asn Glu Ser Arg Gln Val Leu Gln 515 520 525 Glu Pro Asp Phe Ala Gln Ser Leu Leu Arg Asp Pro Asn Thr Pro Ile 530 535 540 Ile Arg Lys Ser Arg Gly Thr Ser Thr Gln Gly Thr Ser Thr His Ala 545 550 555 560 Ser Ser Thr Gln Leu Ala Met Val Asp Asp Gln Arg Ser Lys Ala Gly 565 570 575 Ser Ile His Ser Lys Val Ser Ser Tyr His Gly Ser Leu His Arg Ser 580 585 590 Arg Asp Gly Arg Tyr Thr Pro Cys Ser Tyr Arg Gly Met Glu Glu Arg 595 600 605 Leu Pro His Gly Ser Met Ser Arg Leu Thr Asp His Ser Arg His Ser 610 615 620 Ser Ser His Arg Leu Asn Glu Gln Ser Arg His Ser Ser Ile Arg Asp 625 630 635 640 Leu Ser Asn Asn Pro Met Thr His Ile Thr His Gly Thr Ser Met Asn 645 650 655 Arg Val Ile Glu Glu Asp Gly Thr Ser Ala 660 665 <210> 3 <211> 1359 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 agttgaagga agaaatagct cttctcctaa gatggaatct gtggtttggg aatgtggttg 60 atcaacttga tatgttggcc aaatgtgccc catgtaataa aatgaaaaga agagacaaga 120 tgatgtcatt ttcccatatt gtgaaaccaa aaacaaacgc cttttgtgag accaagctaa 180 caaacctctg acggtgcgaa gaagtattta actgtttgaa gaatttaaca gtaagataca 240 gaagaagtac ccttcgagct gagacctgca ggtgtataaa atatctaaaa tacatatttg 300 aatagggcct gatcatcctg aatctccttc agacccagga aggatggcta tgacttggat 360 tgtcttctct ctttggccct tgactgtgtt catggggcat ataggtgggc acagtttgtt 420 ttcttgtgaa cctattacct tgaggatgtg ccaagatttg ccttataata ctaccttcat 480 gcctaatctt ctgaatcatt atgaccaaca gacagcagct ttggcaatgg agccattcca 540 cccnatggtg aatctggatt gttctcggga tttccggcct tttctttgtg cactctacgc 600 tcctatttgt atggaatatg gacgtgtcac acttccctgt cgtaggctgt gtcagcgggc 660 ttacagtgag tgttcgaagc tcatggagat gtttggtgtt ccttggcctg aagatatgga 720 atgcagtagg ttcccagatt gtgatgagcc atatcctcga cttgtggatc tgaatttggc 780 tggagaacca actgaaggag ccccagtggc agtgcagaga gactatggtt tttggtgtcc 840 ccgagagtta aaaattgatc cygatctggg ttattctttt ctgcatgtgc gtgattgttc 900 acctccttgt ccaaatatgt acttcagaag agaagaactg tcatttgctc gctatttcat 960 aggattgatt tcaatcattt gcctctcggc cacattgttt acttttttaa cttttttgat 1020 tgatgtcaca agattccgtt atcctgaaag gcctattata ttttatgcag tctgctacat 1080 gatggtatcc ttaattttct tcattggatt tttgcttgaa gatcgagtag cctgcaatgc 1140 atccatccct gcacaatata aggcttccac agtgacacaa ggatctcata ataaagcctg 1200 taccatgctt tttatgatac tctatttttt tactatggct ggcagtgtat ggtgggtaat 1260 tcttaccatc acatggtttt tagcagctgt gccaaagtgg ggtagtgaag ctattgagaa 1320 gaaagcattg ctgtttcacg ccagtgcatg gggcatccc 1359 <210> 4 <211> 338 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ala Met Thr Trp Ile Val Phe Ser Leu Trp Pro Leu Thr Val Phe 1 5 10 15 Met Gly His Ile Gly Gly His Ser Leu Phe Ser Cys Glu Pro Ile Thr 20 25 30 Leu Arg Met Cys Gln Asp Leu Pro Tyr Asn Thr Thr Phe Met Pro Asn 35 40 45 Leu Leu Asn His Tyr Asp Gln Gln Thr Ala Ala Leu Ala Met Glu Pro 50 55 60 Phe His Pro Met Val Asn Leu Asp Cys Ser Arg Asp Phe Arg Pro Phe 65 70 75 80 Leu Cys Ala Leu Tyr Ala Pro Ile Cys Met Glu Tyr Gly Arg Val Thr 85 90 95 Leu Pro Cys Arg Arg Leu Cys Gln Arg Ala Tyr Ser Glu Cys Ser Lys 100 105 110 Leu Met Glu Met Phe Gly Val Pro Trp Pro Glu Asp Met Glu Cys Ser 115 120 125 Arg Phe Pro Asp Cys Asp Glu Pro Tyr Pro Arg Leu Val Asp Leu Asn 130 135 140 Leu Ala Gly Glu Pro Thr Glu Gly Ala Pro Val Ala Val Gln Arg Asp 145 150 155 160 Tyr Gly Phe Trp Cys Pro Arg Glu Leu Lys Ile Asp Pro Asp Leu Gly 165 170 175 Tyr Ser Phe Leu His Val Arg Asp Cys Ser Pro Pro Cys Pro Asn Met 180 185 190 Tyr Phe Arg Arg Glu Glu Leu Ser Phe Ala Arg Tyr Phe Ile Gly Leu 195 200 205 Ile Ser Ile Ile Cys Leu Ser Ala Thr Leu Phe Thr Phe Leu Thr Phe 210 215 220 Leu Ile Asp Val Thr Arg Phe Arg Tyr Pro Glu Arg Pro Ile Ile Phe 225 230 235 240 Tyr Ala Val Cys Tyr Met Met Val Ser Leu Ile Phe Phe Ile Gly Phe 245 250 255 Leu Leu Glu Asp Arg Val Ala Cys Asn Ala Ser Ile Pro Ala Gln Tyr 260 265 270 Lys Ala Ser Thr Val Thr Gln Gly Ser His Asn Lys Ala Cys Thr Met 275 280 285 Leu Phe Met Ile Leu Tyr Phe Phe Thr Met Ala Gly Ser Val Trp Trp 290 295 300 Val Ile Leu Thr Ile Thr Trp Phe Leu Ala Ala Val Pro Lys Trp Gly 305 310 315 320 Ser Glu Ala Ile Glu Lys Lys Ala Leu Leu Phe His Ala Ser Ala Trp 325 330 335 Gly Ile

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 9/08 ４Ｃ０８４ 48/00 9/10 ４Ｃ０８５ Ａ６１Ｐ 9/08 25/00 ４Ｃ０８６ 9/10 25/08 ４Ｈ０４５ 25/00 25/18 25/08 25/28 25/18 35/00 25/28 43/00 １０５ 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 43/00 １０５ 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/18 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 5/10 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 33/50 Ｚ 1/68 33/53 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/50 5/00 Ａ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 マイケル アール．バーネス イギリス国 シー エム19 ５エー ダブ ル エセックス，ハーロウ，サード アベ ニュー， ニュー フロンティアーズ サ イエンス パーク サウス スミス クラ イン ビーチャム ファーマシューティカ ルズ (72)発明者 タニア タムソン テスタ イギリス国 シー エム19 ５エー ダブ ル エセックス，ハーロウ，サード アベ ニュー， ニュー フロンティアーズ サ イエンス パーク サウス スミス クラ イン ビーチャム ファーマシューティカ ルズ Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 DA13 DA36 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 CA04 HA12 HA14 HA17 4B063 QA01 QA07 QA18 QQ03 QQ08 QQ58 QR56 QR62 QS25 QS33 QS34 4B064 AG01 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AB01 BA01 CA24 CA44 CA46 4C084 AA01 AA02 AA06 AA07 AA13 AA17 BA01 BA08 BA22 BA23 MA01 NA14 ZA012 ZA062 ZA162 ZA182 ZA392 ZA402 ZB212 ZB262 4C085 AA03 AA13 AA14 CC32 DD62 EE01 GG01 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA01 ZA06 ZA16 ZA18 ZA39 ZA40 ZB21 ZB26 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 CA40 EA21 EA50 FA74

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２の全長にわたる配列番号２の
   アミノ酸配列に対して少なくとも９９％の同一性を有す
   るアミノ酸配列を含んでなる、単離されたポリペプチ
   ド。
2. 【請求項２】 配列番号２のアミノ酸配列を含んでな
   る、請求項１に記載のポリペプチド。
3. 【請求項３】 配列番号２のアミノ酸配列からなる、単
   離されたポリペプチド。
4. 【請求項４】 配列番号２の全長にわたる配列番号２の
   アミノ酸配列に対して少なくとも９９％の同一性を有す
   るポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んで
   なる単離されたポリヌクレオチド、または該ポリヌクレ
   オチドに相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
   オチド。
5. 【請求項５】 配列番号２のアミノ酸配列からなるポリ
   ペプチドをコードするヌクレオチド配列に対して少なく
   とも９５％の同一性を有するヌクレオチド配列を含んで
   なる単離されたポリヌクレオチド、または該ポリヌクレ
   オチドに相補的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
   オチド。
6. 【請求項６】 配列番号１の全長にわたる配列番号１の
   ヌクレオチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を
   有するヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌ
   クレオチド、または該ポリヌクレオチドに相補的なヌク
   レオチド配列からなるポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 前記の同一性が少なくとも９８％であ
   る、請求項４〜６のいずれか１項に記載のポリヌクレオ
   チド。
8. 【請求項８】 以下の(a)〜(c)から選択される単離され
   たポリヌクレオチド、または該ポリヌクレオチドに相補
   的なヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド： (a) 配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドを
   コードするヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオ
   チド、 (b) 配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
   オチド、および (c) 適当なライブラリーを、ストリンジェントなハイブ
   リダイゼーション条件下で、配列番号１のヌクレオチド
   配列またはその断片を有する標識プローブを用いてスク
   リーニングすることにより得られるポリヌクレオチド。
9. 【請求項９】 下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在
   するとき請求項１に記載のポリペプチドを産生し得るポ
   リヌクレオチドを含有する発現系。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の発現系を含有する宿
    主細胞、または請求項１に記載のポリペプチドを発現し
    ているその膜。
11. 【請求項１１】 請求項１に記載のポリペプチドを産生
    させるのに十分な条件下で請求項１０に記載の宿主細胞
    を培養し、この培養培地から該ポリペプチドを回収する
    ことを含んでなる、請求項１に記載のポリペプチドの生
    産方法。
12. 【請求項１２】 請求項１に記載のポリペプチドに対し
    て免疫特異的な抗体。
13. 【請求項１３】 請求項１に記載のポリペプチドの機能
    を刺激または抑制する化合物を同定するためのスクリー
    ニング法であって、 (a) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプ
    チドを担持している細胞もしくはその膜）またはその融
    合タンパク質と、の結合を、該候補化合物に直接または
    間接的に結合させた標識により測定すること、 (b) 候補化合物と、該ポリペプチド（または該ポリペプ
    チドを担持している細胞もしくはその膜）またはその融
    合タンパク質と、の結合を、標識競合物質の存在下で測
    定すること、 (c) 候補化合物が該ポリペプチドの活性化または抑制に
    より生ずるシグナルをもたらすか否かを、該ポリペプチ
    ドを担持している細胞または細胞膜に適した検出系を用
    いて調べること、 (d) 候補化合物と、請求項１に記載のポリペプチドを含
    有する溶液と、を一緒にして混合物を調製し、該混合物
    中の該ポリペプチドの活性を測定し、該混合物の活性を
    スタンダードと比較すること、および (e) 候補化合物が細胞における該ポリペプチドをコード
    するｍＲＮＡおよび該ポリペプチドの産生に及ぼす効果
    を、例えばＥＬＩＳＡアッセイを使用して検出するこ
    と、よりなる群から選択される方法を含んでなるスクリ
    ーニング法。
14. 【請求項１４】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の
    ポリペプチドに対するアンタゴニスト。
15. 【請求項１５】 治療に用いるための以下の(a)〜(c)か
    ら選択される化合物： (a) 請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチド
    に対するアゴニストまたはアンタゴニスト、 (b) 請求項４〜８のいずれか１項に記載のポリヌクレオ
    チド、および (c) 請求項１に記載のポリペプチドをコードするヌクレ
    オチド配列の発現をモジュレートする核酸分子。
16. 【請求項１６】 被験者における請求項１に記載のポリ
    ペプチドの発現または活性に関連した疾病または該疾病
    への罹りやすさを検査する方法であって、 (a) 該被験者のゲノム内の該ポリペプチドをコードする
    ヌクレオチド配列に突然変異があるか否かを調べるこ
    と、および／または (b) 該被験者から得られたサンプルにおける該ポリペプ
    チド発現の存在または量を分析すること、を含んでなる
    方法。
17. 【請求項１７】 以下の(a)〜(d)から選択される単離さ
    れたポリヌクレオチド： (a) 配列番号３の全長にわたる配列番号３のヌクレオチ
    ド配列に対して少なくとも９０％の同一性を有するヌク
    レオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、 (b) 配列番号３のヌクレオチド配列を含んでなるポリヌ
    クレオチド、 (c) 配列番号３のヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
    オチド、および (d) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配
    列に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸
    配列からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配
    列を含んでなるポリヌクレオチド。
18. 【請求項１８】 以下の(a)〜(e)から選択される単離さ
    れたポリペプチド： (a) 配列番号４の全長にわたる配列番号４のアミノ酸配
    列に対して少なくとも９８％の同一性を有するアミノ酸
    配列を含んでなるポリペプチド、 (b) アミノ酸配列が配列番号４の全長にわたる配列番号
    ４のアミノ酸配列に対して少なくとも９８％の同一性を
    有するポリペプチド、 (c) 配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチ
    ド、 (d) 配列番号４のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
    および (e) 配列番号３に含まれるヌクレオチド配列を含んでな
    るポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド。
19. 【請求項１９】 以下の(a)または(b)の単離されたポリ
    ペプチド： (a) 配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチド、
    または (b) 配列番号２のアミノ酸配列において、少なくとも１
    個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
    配列からなり、かつFrizzled-3活性を有するポリペプチ
    ド。
20. 【請求項２０】 請求項１９に記載のポリペプチドをコ
    ードするポリヌクレオチド。
21. 【請求項２１】 以下の(a)または(b)の単離されたポリ
    ヌクレオチド： (a) 配列番号１のヌクレオチド配列からなるポリヌクレ
    オチド、または (b) (a) のポリヌクレオチドとストリンジェントな条件
    下でハイブリダイズしかつFrizzled-3活性を有するポリ
    ペプチドをコードするポリヌクレオチド。