JP2002238571A - １型糖尿病感受性遺伝子同定用プライマー - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 １型糖尿病の発症に関与する遺伝子の同定方
法。 【解決手段】 Ｔ−ｂｅｔ遺伝子中のＧＴリピート多型
（多型１）、ＣＡリピート多型（多型２）又はアミノ酸
３３位のヒスチジンのコドン中の塩基置換多型（多型
３）により、１型糖尿病に関与する遺伝子が同定され
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、１型糖尿病感受性
遺伝子又は１型糖尿病にかかりやすい個体の同定のため
のプライマーに関する。

【０００２】

【従来の技術】１型糖尿病の発症に関与する遺伝的背景
因子の同定に関しては、その発生頻度の高いコーカサス
人集団を中心に研究が進められており、これまでに証明
された遺伝子座位はＩＤＤＭ１−１５のほかいくつかの
染色体上の位置が報告されている。しかしながらそれぞ
れの座位における疾患感受性遺伝子についてはＩＤＤＭ
１（ＨＬＡ遺伝子）とＩＤＤＭ２のインスリン遺伝子を
除きまだ証明されていない。

【０００３】一方、１型糖尿病発症に関連する候補遺伝
子疾患関連研究に関しては、これまで多くの遺伝子につ
いて報告がある。ＩＮＦ−γ、インターフェロン１受容
体、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ２８、ＴＮＦα、ケモカイン受
容体などの関連性の報告があるが、民族集団により結果
の相違を見るケースもある。Ｔリンパ球には、そのサブ
セットとしてＴｈ１とＴｈ２という異なった２つのタイ
プが存在することが証明されており、１型糖尿病や多発
性硬化症などの疾患はＴｈ１、アレルギーや全身性ルー
ブスエリテマトーデスなどはＴｈ２優位の疾患であると
考えられている。

【０００４】Ｔ−ｂｅｔ遺伝子は、最近同定された転写
因子でＴｈ１系の細胞に特異的に発現し、かつＴｈ２系
細胞に強制的にＴ−ｂｅｔ遺伝子を発現させるとＴｈ１
の性質を持つようになることから、Ｔｈ１系への分化に
重要な働きを有することが示唆されている（O'Garra
A., Nature. 404 : 719-720 ; Szabo SJ, Klm ST, Cosn
GL, et al. ; Cell. 100 : 655-669）。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、Ｔ−ｂ
ｅｔ遺伝子と１型糖尿病感受性との関係は知られていな
い。従って、本発明は、Ｔ−ｂｅｔ遺伝子の領域と１型
糖尿病感受性との関連を解明し、１型糖尿病感受性に関
連する遺伝子又は１型糖尿病にかかりやすい個体を同定
するためのプライマーを提供しようとするものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記の課題
を解決すべくゲノムＴ−ｂｅｔ遺伝子をクローニング
し、その配列を決定した結果、ヒトＴ−ｂｅｔ遺伝子は
６個のエキソンと５個のイントロンを有し、エキソン１
にＧＴリピート（多型１と称する）が存在し、３’−非
翻訳領域にＣＡリピート（多型２と称する）、そしてエ
キソン１のアミノ酸番号３３のコドン中に１塩基遺伝子
多型が存在し、これらの多型が日本人集団における１型
糖尿病と関連することを見出し、本発明を完成した。

【０００７】従って本発明は、配列番号：１に示す第６
００位の塩基から第６７１位の塩基までに存在する「ｇ
ｔ」リピート領域より上流に存在するヌクレオチド配列
中連続する１０〜５０個のヌクレオチドに対応するオリ
ゴヌクレオチド又はその相補体、と前記リピート領域よ
り下流に存在するヌクレオチド配列中連続する１０〜５
０個のヌクレオチドに対応するオリゴヌクレオチドとか
らなる、１型糖尿病感受性遺伝子同定用プライマー対を
提供する。

【０００８】上記のプライマー対の具体例として、次の
ヌクレオチド配列： フォワードプライマー：5'-AAGTTTCCTTTCCGGTCTTA（配
列番号：２） リバーズプライマー：5'-CTACAAGCTTTACTGCACTAGC（配
列番号：３） を有する２個のオリゴヌクレオチドから成る、請求項５
に記載のプライマー対が挙げられる。

【０００９】本発明はまた、配列番号：４に示す第６３
５位の塩基から第６６６位の塩基までに存在する「ｃ
ａ」リピート領域より上流に存在するヌクレオチド配列
中連続する１０〜５０個のヌクレオチドに対応するオリ
ゴヌクレオチド又はその相補体、と前記リピート領域よ
り下流に存在するヌクレオチド配列中連続する１０〜５
０個のヌクレオチドに対応するオリゴヌクレオチドとか
らなる、１型糖尿病感受性遺伝子同定用プライマー対が
挙げられる。

【００１０】上記プライマー対の具体例として、次のヌ
クレオチド配列： フォワードプライマー：5'-AGGTGGGTTAGACAGAAATAG（配
列番号：５） リバーズプライマー：5'-GAGAGGTTTTGCTTGTCTT（配列番
号：６） を有する２個のオリゴヌクレオチドから成る、請求項３
に記載のプライマー対が挙げられる。

【００１１】本発明はさらに、配列番号：７に示す３３
位のヒスチジンのコドンＣＡＣ（塩基番号１９００〜１
９０２）より上流に存在するヌクレオチド配列中連続す
る１０〜５０個の連続するヌクレオチドに対応するオリ
ゴヌクレオチド又はその相補体と、前記ヒスチジンのコ
ドンより下流に存在するヌクレオチド配列中１０〜５０
個の連続するヌクレオチドに対応するオリゴヌクレオチ
ド又はその相補体とから成る、１型糖尿病感受性遺伝子
同定用プライマー対を提供する。

【００１２】上記プライマー対の具体例として、次のヌ
クレオチド配列： フォワードプライマー：5'-CAGTCTATGGATGAGGCAC（配列
番号：８） リバーズプライマー：5'-AAACTTGGACCACAACAGGTG（配列
番号：９） を有する２個のオリゴヌクレオチドから成る、請求項５
に記載のプライマー対が挙げられる。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明においては、まず、ヒトT-
bet遺伝子はそのcDNA情報しか登録されておらずゲノム
情報は未発表のため、GenBankに登録されているクロー
ンをT-bet遺伝子cDNA情報を用いてスクリーニングした
結果、ゲノムクローンを同定し（clonehCIT.211#P#7, a
ccession no.AC003665）この中にヒトt-bet遺伝子が存
在することを確認した。その結果、遺伝子の構造として
は、６個のエキソンと５つのイントロンからなると推定
された。イントロン領域にはいくつかのマイクロサテラ
イトの可能性があるリピート配列が存在し、我々はそれ
らの解析の結果、エキソン1にGTリピート（多型１）と
3'UTR領域にCAリピート（多型２）マイクロサテライト
多型が存在することを同定した。

【００１４】またエキソン１内のアミノ酸番号３３のヒ
スチジンはグルタミンに置換した１塩基遺伝子多型（多
型３）があることが同定された。これらt-bet遺伝子内
の３カ所を遺伝子多型を日本人集団における１型糖尿病
への関与を疾患関連研究法で解析し、その結果、３カ所
の遺伝子多型のそれぞれ特定の遺伝子多型が１型糖尿病
患者において統計学的に有意に多く、疾患感受性遺伝子
であることが強く示唆された。すなわち疾患感受性遺伝
子と同定された。

【００１５】従って、本発明における多型１のＧＴリピ
ート数を決定するための増幅用プライマーとしては、Ｇ
Ｔリピートの上流の任意の位置にあるヌクレオチド配列
に対応するホワードプライマーとＧＴリピートの下流の
任意の位置にあるヌクレオチド配列に対応するリバーズ
プライマーとから成るプライマー対が使用される。同様
に、多型２のＣＡリピート数を決定するための増幅用プ
ライマーとしては、ＣＡリピートの上流の任意の位置に
あるヌクレオチド配列に対応するホワードプライマー
と、ＡＣリピートの下流の任意の位置にあるヌクレオチ
ド配列に対応するリバーズプライマーとから成るプライ
マー対が使用される。

【００１６】さらに、多型３の検出用プライマーとして
は、塩基置換多型部位であるＣＡＣ（Ｈｉｓ）／ＣＡＧ
（Ｇｌｎ）部位より上流の任意の位置のヌクレオチド配
列に対応するホワードプライマーと、前記多型部位より
下流にあるヌクレオチド配列に対応するリバーズプライ
マーとから成るプライマー対が使用される。

【００１７】多型１及び多型２のリピート数を決定する
ためのホワードプライマーが対応するゲノム配列の位置
としては、リピートの上流末端からおよそ６００塩基の
位置にある塩基と、リピートの上流末端からすぐ上流の
塩基との間にある任意の配列であることができる。ま
た、多型１及び多型２のリピート数を決定するためのリ
バーズプライマーが対応するゲノム配列の位置として
は、リピートの下流末端からおよそ６００塩基の位置に
ある塩基と、リピートの下流末端のすぐ下流の塩基との
間にある任意の配列であることができる。

【００１８】しかしながら、ホワードプライマーに対応
するゲノム上の位置としては、リピートの上流末端から
上流方向に３００塩基以内にあることが好ましく、１５
０塩基以内にあることがさらに好ましく、例えば５０塩
基以内にあることが好ましい。また、リバーズプライマ
ーに対応するゲノム上の位置としては、リピートの下流
末端から下流方向に３００塩基以内にあることが好まし
く、１５０塩基以内にあることがさらに好ましく、例え
ば５０塩基以内にあることが好ましい。

【００１９】多型３検出用のホワードプライマーに対応
するゲノム上の位置としては、多型部位から上流１５０
０ヌクレオチドの範囲内が好ましく、１０００ヌクレオ
チドの塩基がさらに好ましく、例えば５００ヌクレオチ
ド以内にあるのが好ましい。多型３検出用のリバーズプ
ライマーに対応するゲノム上の位置としては、多型部位
から下流１５００ヌクレオチドの範囲内が好ましく、１
０００ヌクレオチドの範囲内がさらに好ましく、例えば
５００ヌクレオチドの範囲内が好ましい。

【００２０】プライマーの長さは、常用のＰＣＲ技術に
関する知見に基いて定められ、通常１０〜５０ヌクレオ
チドの長さ、より一般的には１５〜４０ヌクレオチドの
長さ、例えば１５〜３０ヌクレオチドの長さである。プ
ライマーの塩基配列としては、対応するゲノム上の配列
と完全に同一であるか、又は正確な相補体であることが
好ましいが、完全に一致しなくても特定の配列を増幅す
るためのプライマーとして機能し得ることは明らかであ
る。従って、ゲノム配列のある領域に「対応する」プラ
イマーの配列としては、ゲノム配列の対応領域と完全に
同一の配列及び正確な相補体である配列（これらを含め
て、完全に一致する配列と称する）のほかに、これらの
完全に一致する配列に対して１０ヌクレオチド当たり、
１〜３ヌクレオチド異る程度の相同性ヌクレオチド配列
も含まれる。

【００２１】

【実施例】次に、実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。実施例 （１）多型１を同定するために、ゲノムクローンの塩基
配列をもとにして、PCRプライマーセットの塩基配列を
決定し、PCRでこの多型を含む領域を増幅後にアプライ
ドバイオシステム社の310 PRISM装置並びに解析ソフトG
eneScanを用いて、各個人のマイクロサテライトマーカ
ーの長さを同定した。

【００２２】（２）多型２を同定するために、多型１と
同様にゲノムクローンの塩基配列をもとにして、PCRプ
ライマーセットの塩基配列を決定し、PCRでこの多型を
含む領域を増幅後各個人のマイクロサテライトマーカー
の長さを同定した。 （３）多型３を同定するため、この多型を含む領域を増
幅するPCRプライマーセット塩基配列を決定し、PCRで増
幅後に制限酵素Eco47 IIIで処理することで多型を同定
した。

【００２３】まず、各試料から鋳型ＤＮＡを次のように
して調製した。末梢血約０．５mlより、ＤＮＡ抽出キッ
ト（QIAamp blood kit、キアゲン社）を用いてＤＮＡを
抽出した。得られたＤＮＡ量は、吸光度を測定（Spectr
ophotometer 、島津社製）することで定量した。 （１）多型１を解析するためのPCRプライマーセットの
塩基配列 ホワードプライマー：5'-AAGTTTCCTTTCCGGTCTTA（配列
番号：２） リバーズプライマー：5'-CTACAAGCTTTACTGCACTAGC（配
列番号：３） 上記のプライマーにより増幅されたPCR産物は、GTリピ
ートの繰り返し数により、日本人集団では配列番号：１
に示す多型を含めて26種類の多型性を有していた。

【００２４】結果を次の表１及び表２に示す。

【表１】

【００２５】

【表２】

【００２６】表１及び表２は、正常者からの試料２００
個（対立遺伝子数４００個）、１型糖尿病患者からの全
試料１５３個（対立遺伝子数３０６個）、及び発病が１
０歳以下の１型糖尿病患者からの試料１０９個（対立遺
伝子数２１８個）について、多型１の各対立遺伝子型
（ＧＴ反復数）に属する対立遺伝子の個数及び頻度分布
（％）、並びにこれらを正常者からの試料と１型糖尿病
患者からの試料について比較したＰ値を示す。なお、検
定は、カイ自乗検定にて行い、Ｐ値が０．０５以下を有
意と判定した。

【００２７】以上の結果から、対立遺伝子１４における
対立遺伝子頻度において、正常者と１型糖尿病者間、ま
た正常者と１０歳以下の発症の１型糖尿病者間で統計学
的に有意な差異を認めた。

【００２８】（２）多型２を解析するためのPCRプライ
マーセットの塩基配列 ホワードプライマー：5'-AGGTGGGTTAGACAGAAATAG（配列
番号：４） リバーズプライマー：5'-GAGAGGTTTTGCTTGTCTT（配列番
号：５） 上記のプライマーにより増幅されたPCR産物は、CAリピ
ートの繰り返し数により、日本人集団では配列番号：３
に示す多型を含めて６種類の多型性を有する。結果を次
の表３に示す。

【００２９】

【表３】

【００３０】表３は、正常者からの試料２００個（対立
遺伝子数４００個）、１型糖尿病患者からの全試料１５
３個（対立遺伝子数３０６個）、及び発病が１０歳以下
の１型糖尿病患者からの試料１０９個（対立遺伝子数２
１８個）について、多型２の各対立遺伝子型（ＡＣ反復
数）に属する対立遺伝子の個数及び頻度分布（％）、並
びにそれらを正常者からの試料と１型糖尿病患者からの
試料について比較したＰ位を示す。以上の結果から、対
立遺伝子２における対立遺伝子頻度において、正常者と
１型糖尿病者間、また正常者と１０歳以下の発症の１型
糖尿病者間で統計学的に有意な差異を認めた。

【００３１】（３）多型３を同定のPCRプライマーセッ
トの塩基配列 ホワードプライマー：5'-CAGTCTATGGATGAGGCAC（配列番
号：８） リバーズプライマー：5'-AAACTTGGACCACAACAGGTG（配列
番号：９） 上記のプライマーにより増幅されたPCR産物は、ヒスチ
ジン対立遺伝子型はEco47 IIIで消化されないがグルタ
ミン対立遺伝子型は２本に消化される。このことを利用
して、アミノ酸番号３３のヒスチジン・グルタミン遺伝
子多型の区別が可能である。

【００３２】ＰＣＲ法にて上記の下線の塩基配列で増幅
される1484塩基対のフラグメントは、制限酵素Eco47 II
I処理にて、His対立遺伝子は680塩基対と804塩基対に消
化されたが、Gln対立遺伝子は新たなEco47 III消化部位
の出現により330塩基対、350塩基対と804塩基対に消化
された。

【００３３】

【表４】 Ｈｉｓ（３３）型対立遺伝子及びＧｌｎ（３３）型対立
遺伝子のヌクレオチド配列の例を配列番号：１０及び配
列番号：１１に示す。結果を、表５に示す。

【００３４】

【表５】 表５は、正常者からの試料２００個（対立遺伝子数４０
０個）、１型糖尿病患者からの全試料１５３個（対立遺
伝子数３０６個）、発病が１０歳以下の１型糖尿病患者
からの試料１０９個（対立遺伝子数２１８個）及び発病
が１０歳以上の糖尿病患者からの試料４４個（対立遺伝
子数８８個）について、遺伝子型Ｈｉｓ３３／Ｈｉｓ３
３、Ｈｉｓ３３／Ｇｌｎ３３、及びＧｌｎ３３／Ｇｌｎ
３３に属する遺伝子型の数及び頻度（％）、並びにそれ
らの比較により得られるＰ値を示す。検定は、カイ自乗
検定にて行い、Ｐ値が０．０５以下を有意と判定した。

【００３５】上記の表より、正常患者に比べて１型糖尿
病患者において、Ｈｉｓ３３／Ｇｌｎ３３の比率が高い
ことがわかる。以上の結果から、多型１においてＧＴ反
復数が４９の個体、多型２においてＡＣ反復数が１２の
個体、及び多型３において遺伝子型Ｇｌｎ３３を有する
個体は、１型糖尿病にかかる可能性が高いと予想され
る。

【００３６】

【配列表】 <110> Ihara Kenji <120> Primers for identification or Type 1 diabetes-revsitive genes <160> 11 <210> 1 <211> <212> DNA <213> Homo sapiens <223> Nucleotide sequence comprising polymorphism 1 <400> 1 cgcgccggcc cttggggcct ctgtgcccgc gccggaacaa gaacgtctcg tctgtttttc 60 tggctcgaca atgcttctga ctccgtgtcc ctcactgctt tggcttcagc gtagggagac 120 aggggaatgg ggttgttagg aggacaggga aagctccgga ggggcgtctg tgcccaggct 180 gttgcaccaa cagccagagg actcacaagg gagacgggtg agtgcgggac agtgagaagt 240 caccttgatt taggggaagg gtgactgtgg cttcacctag aattggtgtg cgcccctgcc 300 ccactctcta ctgtagagga gtcgcagcgg gcagtgaaag cctgtgctct gggcggacag 360 gacgcctggg cctcctgtgt gggaaactgg aggggaaggg agccccttat ctccgggccc 420 cctgcgccca cctcccccgg ctcctttgct gctggtgtgc tcaggtcagc tttagtggtg 480 gtagtggtgg tggtagcggt ggtggtggtg tgtgtgtacg gggggagatt gggatttggt 540 gacatggaga agcagtcgcc aagtttcctt tccggtctta ctttgagatc atatgtctgg 600 tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgta tgtgtgtgtg 660 ggtgtgtgtg tatgggggct agtgcagtaa agcttgtagg gggcacagat cccttccagg 720 cacaaatgcc cacgggctgg gcagatgaag ctcacccagg ggtccagcct ggtagccagc 780 cccacactgc accctttgag gctggtccag tgaaaacctt ccccacactc ctgtccagaa 840 attcaccggt tcagcctgga gaagtgggga aggggtgtcc catggcttca tggctcaggg 900 ttcctgagcc ccgtgcgtga tggggagagt ttggggctga gggtgctgct tccggataga 960 gcctcctgcg caaggaaaga aacagaaacc tgtgacttgt gtggtatttg tttagtaagc 1020 aacccccgga gtggactgtg tctgatgtgg gctgtgcgca cccacccttc ccagtgcggc 1080 ccatgtgagc aggggaccag cgaggaccag tgtggaaggg ctgttgtcat tggtggacct 1140 gggatgctgg gtcccaggtc cgagaggtgt ggataccaaa cgtggggctt ggggtggagg 1200 ggagagggag aaggccatgt tggaccccag aggttggta 1239

【００３７】 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for polymorphism 1 <400> 2 aagtttcctt tccggtctta 20

【００３８】 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for polymorphism 1 <400> 3 ctacaagctt tactgcacta gc 22

【００３９】 <210> 4 <211> <212> <213> Homo sapiens <223> Nucleotide sequence comprising polymorphism 2 <400> 4 taatacatgt aaagggttta agaacattgc ctgacaaaca gtaagcactc actgtgtaag 60 ctactgttac caacagtttc tagctgtttc tgtctgtctt tttatacaca ctgaattgtg 120 tttgtaaaat aatacatact tttttttttt ttttttgaga cagagttttg ctcttgttgc 180 ccaggctgga atgcaatggt gcgatctcag ctcactgaaa ccttcgcctc ccaggttcaa 240 gtgattctcc tgcctcaccc tcctgagtag ctgggattac agatgtgcac caccatgcct 300 ggctaatttt tgtattttta gtagagacgg tgtttcgcca tattggccag gctggtctcg 360 aactcctgac gtcaggtgat ctacccacct tggcttccca aagtgctggg attacaggcg 420 tgcgtcacca cactcagcct atacatgctt cttttaaata attcaagcaa ggaagaaaag 480 tataaagaca acaataaatt atctcaaatc ttacccatca agaattatca ttaacattag 540 gtgggttaga cagaaatagt tttataaatt ggaaccatac tgaaaaggct ttttcttaat 600 gaaaatggtt aaattttagc ttatagaatt tagtcacaca cacacacaca cacacacaca 660 cacacatcaa gacaagcaaa acctctcaaa ctctcaagtg aaatgaaggg agttgctaaa 720 cttaagataa atttttcttc actacaagaa atattttctt ggtttttttt ttttttgaga 780 cagagtctcg ctctgttgcc caggctggag tgcagtggca cgatctcagc tcactgcaac 840 ctccacctcc tgggttcaag cagttctcct gcctcagcct cccgagtagc tgagactaca 900 ggcgtgtgcc accacgcccg gctttttttg tgtttttggt agagacgggg ttttcaccat 960 attagccagg atggtctcga tctcttgacc tcgtgatctg tctgcctcgg cctcccaaag 1020 tgctaggatt ataggcgtga gccaccgtgc ccaggcaaga aatagtt 1067

【００４０】 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for polymorphism 2 <400> 5 aggtgggtta gacagaaata g 21

【００４１】 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for polymorphism 2 <400> 6 gagaggtttt gcttgtctt 19

【００４２】 <210> 7 <211> <212> DNA <213> Homo sapiens <223> Nucleotide sequence comprising polymorphism 3 <400> 7 gtccccatag gcccctaagg gtgaagccct gtcaggctgg gacagaaatg tagagctggg 60 gccagttccc aggggagaac tggggaggac tggggtgaag gtagagagag gagaagttaa 120 actttaacat gacaaaaata ttaaagtatt tttcaaagta ctcttaaaaa tgtaaatctt 180 tatctatata ctgatatgca aaatattcca tgacaccttg tggagtgaaa aaaaagtaca 240 cattataaag cagcatgtgt agtgtttata taaattatat atttgtgcat gtgtgcaaaa 300 gacagagaca gagagtatat aaggagtgag gtctcagagg gtgttcactg aaatgttaat 360 cctgtttggc tttagggggt ggaatttggg gtgatttata cagtcttgtt tttacttttc 420 tgtgctgctt aaatttccta tataagtatg tttcatcttt atacacagga aaactcccaa 480 tgatgctatt ttcaattggg gggggggaaa cggatagttt tcatcataaa aggagtctaa 540 tacattagtt aacataaaag gaaaatggag aaagaaaagc ctccatcgtc ctatctccga 600 ggcagccctt cagagcatgt ggtgggtttc cttcctgtca gccggctctg aatctgttca 660 aagcagcttt tccatccagg tataataata gattggaaag tgctgcacac gtacaccctc 720 tcatgtaagg cttgcagccc ccctgaaaag tagatctgtt tatttccccc agtctatgga 780 tgaggcacgt gaggttgact ttcaggcaag gaaaatgact tgcctgggtc acatatacct 840 ggcaggcaga gccagacctg ggactctcag cactggcagc ccaatgctac ttccagtgcc 900 catgactgcc atgcagggta ggggagcttt tgtgggccct gccaggccca gctcagggcc 960 ctgcaaaccc ctggctgctg ctgatgcagt gcgctttaag gaacatttcc tgttgtccat 1020 caggttccag gtctgccccc agggctagag ctacaagatg cagccaactc agcacatgtg 1080 gacctctggt ggggagaaag agggcaaccc gaaaggtcac ttagcacaga gtctgggcac 1140 acagtaggta tcaataaaga tcgattgaat gttcatggtc aaagttgctt ctagtgtgcc 1200 cgtgctccga gcctctgagt gccaggagaa tgcccagcga gtcccacttg ggccatctcg 1260 gaaggcttcc tgtaggagag ggcctttgag ctgagacttc aaagctgggc tgaatttccc 1320 cgagggtcca gaagagagcc acgggctggt gtgtcaggca gcggagctga cactcccaga 1380 aagcaagatc ttcgaactac agggtgcgcg caggctctcg cttctctcca ccatgggggg 1440 ccctgcagta ctcgccaaga gcgtagaatt tgcctagtat tagccacgag agggcggggt 1500 ggggcgaggc ggagcagggc cgaggtggcg gagtgggggg gagccggaga gcttcataaa 1560 gccacagcaa agcgctgcga ctctagtgac agcggcccgc tggagaggaa gcccgagagc 1620 tgccgcgcgc ctgccggacg agggcgtaga agccaggcgt cagagcccgg gctccggtgg 1680 ggtcccccac ccggccctcg ggtcccccgc cccctgctcc ctgcccatcc cagcccacgc 1740 gaccctctcg cgcgcggagg ggcgggtcct cgacggctac gggaaggtgc cagcccgccc 1800 cggatgggca tcgtggagcc gggttgcgga gacatgctga cgggcaccga gccgatgccg 1860 gggagcgacg agggccgggc gcctggcgcc gacccgcagc accgctactt ctacccggag 1920 ccgggcgcgc aggacgcgga cgagcgtcgc gggggcggca gcctggggtc tccctacccg 1980 gggggcgcct tggtgcccgc cccgccgagc cgcttccttg gagcctacgc ctacccgccg 2040 cgaccccagg cggccggctt ccccggcgcg ggcgagtcct tcccgccgcc cgcggacgcc 2100 gagggctacc agccgggcga gggctacgcc gccccggacc cgcgcgccgg gctctacccg 2160 gggccgcgtg aggactacgc gctacccgcg ggactggagg tgtcggggaa actgagggtc 2220 gcgctcaaca accacctgtt gtggtccaag tttaatcagc accagacaga gatgatcatc 2280 accaagcagg gacggtgagt gcggcgcgcc ggcccttggg gcctctgtgc ccgcgccgga 2340 acaagaacgt ctcgtctgtt tttctggctc gacaatgctt ctgactccgt gtccctcact 2400 gctttggctt cagcgtaggg agacagggga atggggttgt taggaggaca gggaaagctc 2460 cggaggggcg tctgtgccca ggctgttgca ccaacagcca gaggactcac aagggagacg 2520 ggtgagtgcg ggacagtgag aagtcacctt gatttagggg aagggtgact gtggcttcac 2580 ctagaattgg tgtgcgcccc tgccccactc tctactgtag aggagtcgca gcgggcagtg 2640 aaagcctgtg ctctgggcgg acaggacgcc tgggcctcct gtgtgggaaa ctggagggga 2700 agggagcccc ttatctccgg gccccctgcg cccacctccc ccggctcctt tgctgctggt 2760 gtgctcaggt cagctttagt ggtggtagtg gtggtggta 2799

【００４３】 <210> 8 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for polymorphism 3 <400> 8 cagtctatgg atgaggcac 19

【００４４】 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for polymorphism 3 <400> 9 aaacttggac cacaacaggt g 21

【００４５】 <210> 10 <211> <212> DNA <213> Homo sapiens <223> Nucleotide sequence comprising polymorphism 3 genotype His33 <400> 10 cagtctatgg atgaggcacg tgaggttgac tttcaggcaa ggaaaatgac ttgcctgggt 60 cacatatacc tggcaggcag agccagacct gggactctca gcactggcag cccaatgcta 120 cttccagtgc ccatgactgc catgcagggt aggggagctt ttgtgggccc tgccaggccc 180 agctcagggc cctgcaaacc cctggctgct gctgatgcag tgcgctttaa ggaacatttc 240 ctgttgtcca tcaggttcca ggtctgcccc cagggctaga gctacaagat gcagccaact 300 cagcacatgt ggacctctgg tggggagaaa gagggcaacc cgaaaggtca cttagcacag 360 agtctgggca cacagtaggt atcaataaag atcgattgaa tgttcatggt caaagttgct 420 tctagtgtgc ccgtgctccg agcctctgag tgccaggaga atgcccagcg agtcccactt 480 gggccatctc ggaaggcttc ctgtaggaga gggcctttga gctgagactt caaagctggg 540 ctgaatttcc ccgagggtcc agaagagagc cacgggctgg tgtgtcaggc agcggagctg 600 acactcccag aaagcaagat cttcgaacta cagggtgcgc gcaggctctc gcttctctcc 660 accatggggg gccctgcagt actcgccaag agcgtagaat ttgcctagta ttagccacga 720 gagggcgggg tggggcgagg cggagcaggg ccgaggtggc ggagtggggg ggagccggag 780 agcttcataa agccacagca aagcgctgcg actctagtga cagcggcccg ctggagagga 840 agcccgagag ctgccgcgcg cctgccggac gagggcgtag aagccaggcg tcagagcccg 900 ggctccggtg gggtccccca cccggccctc gggtcccccg ccccctgctc cctgcccatc 960 ccagcccacg cgaccctctc gcgcgcggag gggcgggtcc tcgacggcta cgggaaggtg 1020 ccagcccgcc ccggatgggc atcgtggagc cgggttgcgg agacatgctg acgggcaccg 1080 agccgatgcc ggggagcgac gagggccggg cgcctggcgc cgacccgcag caccgctact 1140 tctacccgga gccgggcgcg caggacgcgg acgagcgtcg cgggggcggc agcctggggt 1200 ctccctaccc ggggggcgcc ttggtgcccg ccccgccgag ccgcttcctt ggagcctacg 1260 cctacccgcc gcgaccccag gcggccggct tccccggcgc gggcgagtcc ttcccgccgc 1320 ccgcggacgc cgagggctac cagccgggcg agggctacgc cgccccggac ccgcgcgccg 1380 ggctctaccc ggggccgcgt gaggactacg cgctacccgc gggactggag gtgtcgggga 1440 aactgagggt cgcgctcaac aaccacctgt tgtggtccaa gttt 1484

【００４６】 <210> 11 <211> <212> DNA <213> Homo sapiens <223> Nucleotide sequence comprising polymorphism 3 genotype Gln33 <400> 11 cagtctatgg atgaggcacg tgaggttgac tttcaggcaa ggaaaatgac ttgcctgggt 60 cacatatacc tggcaggcag agccagacct gggactctca gcactggcag cccaatgcta 120 cttccagtgc ccatgactgc catgcagggt aggggagctt ttgtgggccc tgccaggccc 180 agctcagggc cctgcaaacc cctggctgct gctgatgcag tgcgctttaa ggaacatttc 240 ctgttgtcca tcaggttcca ggtctgcccc cagggctaga gctacaagat gcagccaact 300 cagcacatgt ggacctctgg tggggagaaa gagggcaacc cgaaaggtca cttagcacag 360 agtctgggca cacagtaggt atcaataaag atcgattgaa tgttcatggt caaagttgct 420 tctagtgtgc ccgtgctccg agcctctgag tgccaggaga atgcccagcg agtcccactt 480 gggccatctc ggaaggcttc ctgtaggaga gggcctttga gctgagactt caaagctggg 540 ctgaatttcc ccgagggtcc agaagagagc cacgggctgg tgtgtcaggc agcggagctg 600 acactcccag aaagcaagat cttcgaacta cagggtgcgc gcaggctctc gcttctctcc 660 accatggggg gccctgcagt actcgccaag agcgtagaat ttgcctagta ttagccacga 720 gagggcgggg tggggcgagg cggagcaggg ccgaggtggc ggagtggggg ggagccggag 780 agcttcataa agccacagca aagcgctgcg actctagtga cagcggcccg ctggagagga 840 agcccgagag ctgccgcgcg cctgccggac gagggcgtag aagccaggcg tcagagcccg 900 ggctccggtg gggtccccca cccggccctc gggtcccccg ccccctgctc cctgcccatc 960 ccagcccacg cgaccctctc gcgcgcggag gggcgggtcc tcgacggcta cgggaaggtg 1020 ccagcccgcc ccggatgggc atcgtggagc cgggttgcgg agacatgctg acgggcaccg 1080 agccgatgcc ggggagcgac gagggccggg cgcctggcgc cgacccgcag cagcgctact 1140 tctacccgga gccgggcgcg caggacgcgg acgagcgtcg cgggggcggc agcctggggt 1200 ctccctaccc ggggggcgcc ttggtgcccg ccccgccgag ccgcttcctt ggagcctacg 1260 cctacccgcc gcgaccccag gcggccggct tccccggcgc gggcgagtcc ttcccgccgc 1320 ccgcggacgc cgagggctac cagccgggcg agggctacgc cgccccggac ccgcgcgccg 1380 ggctctaccc ggggccgcgt gaggactacg cgctacccgc gggactggag gtgtcgggga 1440 aactgagggt cgcgctcaac aaccacctgt tgtggtccaa gttt 1484

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号：１に示す第６００位の塩基か
   ら第６７１位の塩基までに存在する「ｇｔ」リピート領
   域より上流に存在するヌクレオチド配列中連続する１０
   〜５０個のヌクレオチドに対応するオリゴヌクレオチド
   又はその相補体、と前記リピート領域より下流に存在す
   るヌクレオチド配列中連続する１０〜５０個のヌクレオ
   チドに対応するオリゴヌクレオチドとからなる、１型糖
   尿病感受性遺伝子同定用プライマー対。
2. 【請求項２】 次のヌクレオチド配列： フォワードプライマー：5'-AAGTTTCCTTTCCGGTCTTA（配
   列番号：２） リバーズプライマー：5'-CTACAAGCTTTACTGCACTAGC（配
   列番号：３） を有する２個のオリゴヌクレオチドから成る、請求項１
   に記載のプライマー対。
3. 【請求項３】 １型糖尿病にかかりやすい個体を同定す
   るための請求項１又は２に記載のプライマー対。
4. 【請求項４】 配列番号：４に示す第６３５位の塩基か
   ら第６６６位の塩基までに存在する「ｃａ」リピート領
   域より上流に存在するヌクレオチド配列中連続する１０
   〜５０個のヌクレオチドに対応するオリゴヌクレオチド
   又はその相補体、と前記リピート領域より下流に存在す
   るヌクレオチド配列中連続する１０〜５０個のヌクレオ
   チドに対応するオリゴヌクレオチドとからなる、１型糖
   尿病感受性遺伝子同定用プライマー対。
5. 【請求項５】 次のヌクレオチド配列： フォワードプライマー：5'-AGGTGGGTTAGACAGAAATAG（配
   列番号：５） リバーズプライマー：5'-GAGAGGTTTTGCTTGTCTT（配列番
   号：６） を有する２個のオリゴヌクレオチドから成る、請求項３
   に記載のプライマー対。
6. 【請求項６】 １型糖尿病にかかりやすい個体を同定す
   るための請求項４又は５に記載のプライマー対。
7. 【請求項７】 配列番号：７に示す３３位のヒスチジン
   のコドンＣＡＣ（塩基番号１９００〜１９０２）より上
   流に存在するヌクレオチド配列中連続する１０〜５０個
   の連続するヌクレオチドに対応するオリゴヌクレオチド
   又はその相補体と、前記ヒスチジンのコドンより下流に
   存在するヌクレオチド配列中１０〜５０個の連続するヌ
   クレオチドに対応するオリゴヌクレオチド又はその相補
   体とから成る、１型糖尿病感受性遺伝子同定用プライマ
   ー対。
8. 【請求項８】 次のヌクレオチド配列： フォワードプライマー：5'-CAGTCTATGGATGAGGCAC（配列
   番号：８） リバーズプライマー：5'-AAACTTGGACCACAACAGGTG（配列
   番号：９） を有する２個のオリゴヌクレオチドから成る、請求項５
   に記載のプライマー対。
9. 【請求項９】 １型糖尿病にかかりやすい個体の同定の
   ための請求項７又は８に記載のプライマー対。