JP2002238350A - シイタケ子実体、レンチヌラ・エドデス並びにその育種及び栽培方法 - Google Patents
シイタケ子実体、レンチヌラ・エドデス並びにその育種及び栽培方法Info
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 新規なシイタケ子実体、レンチヌラ・エドデ
ス並びにその育種及び栽培方法を提供する。 【解決手段】 集団交配育種によって、菌傘部にエリタ
デニンを１７０ｍｇ／１００ｇＤＷ以上含有するシイタ
ケ子実体産生能を有するレンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎ
ｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）を育種し、また、該レン
チヌラ・エドデスを培養栽培し、又は高温でレンチヌラ
・エドデスを栽培し、菌傘部に高含有量のエリタデニン
を含むシイタケ子実体を得る。
ス並びにその育種及び栽培方法を提供する。 【解決手段】 集団交配育種によって、菌傘部にエリタ
デニンを１７０ｍｇ／１００ｇＤＷ以上含有するシイタ
ケ子実体産生能を有するレンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎ
ｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）を育種し、また、該レン
チヌラ・エドデスを培養栽培し、又は高温でレンチヌラ
・エドデスを栽培し、菌傘部に高含有量のエリタデニン
を含むシイタケ子実体を得る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、血清コレステロ
ール低下作用を示す、シイタケ固有の成分エリタデニン
を高含量に含むシイタケ子実体、及びエリタデニン産生
能の高いレンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ
ｅｄｏｄｅｓ）並びにその育種及び栽培方法に関するも
ので、シイタケ栽培技術に属するものである。
ール低下作用を示す、シイタケ固有の成分エリタデニン
を高含量に含むシイタケ子実体、及びエリタデニン産生
能の高いレンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ
ｅｄｏｄｅｓ）並びにその育種及び栽培方法に関するも
ので、シイタケ栽培技術に属するものである。
【０００２】
【従来の技術】シイタケに、血清コレステロール濃度を
低下させる物質があることが見出され（Kaneda, T., To
kuda, S., J Nutr 90(4) 371-376(1966)Dec）、有効成
分も単離され（Chibata, I., Okumura, K., Kmeyama,
S., Kotera, K.,Experientia 25(12)1237-1238(1969)De
c 15）、エリタデニンという名称が付されている。
低下させる物質があることが見出され（Kaneda, T., To
kuda, S., J Nutr 90(4) 371-376(1966)Dec）、有効成
分も単離され（Chibata, I., Okumura, K., Kmeyama,
S., Kotera, K.,Experientia 25(12)1237-1238(1969)De
c 15）、エリタデニンという名称が付されている。
【０００３】エリタデニンは、アデニンにヒドロキシ酪
酸が付加した化合物であって、マッシュルーム（ツクリ
タケ）に微量検出される以外、他のキノコには存在せ
ず、シイタケ固有の成分である。
酸が付加した化合物であって、マッシュルーム（ツクリ
タケ）に微量検出される以外、他のキノコには存在せ
ず、シイタケ固有の成分である。
【０００４】このエリタデニンは、その上昇が動脈硬化
の危険因子である血清コレステロール値を下げる働きが
あるとされ、乾燥シイタケ９ｇ又は生シイタケ９０ｇを
１週間毎日食べ続けると、コレステロール濃度がおよそ
６〜１２％低下することが報告されている（Suzuki S.,
Ohshima, S., Mushroom Science IX (Part I) Proceed
ings of the Ninth International Scientific Congres
s on the Cultivationof Edible Fungi, Tokyo, 1974,
463-467）。
の危険因子である血清コレステロール値を下げる働きが
あるとされ、乾燥シイタケ９ｇ又は生シイタケ９０ｇを
１週間毎日食べ続けると、コレステロール濃度がおよそ
６〜１２％低下することが報告されている（Suzuki S.,
Ohshima, S., Mushroom Science IX (Part I) Proceed
ings of the Ninth International Scientific Congres
s on the Cultivationof Edible Fungi, Tokyo, 1974,
463-467）。
【０００５】また、アミノ酸代謝の中間体、ホモシステ
インの濃度は、脳梗塞の危険因子として知られていると
ともに、エリタデニンは、そのホモシステインの合成を
阻害することも報告されている(A.M. Svardal, R. Djur
huns, H. Refsum, P.M. Ueland, Cancer Research 46,
5095-5100, October 1986)。
インの濃度は、脳梗塞の危険因子として知られていると
ともに、エリタデニンは、そのホモシステインの合成を
阻害することも報告されている(A.M. Svardal, R. Djur
huns, H. Refsum, P.M. Ueland, Cancer Research 46,
5095-5100, October 1986)。
【０００６】これら薬効の認められるエリタデニンは、
シイタケ中にデオキシエリタデニンとともに存在し、シ
イタケ子実体、特に菌傘部に多く含まれているが、それ
ぞれの存在量は、５０．７〜９２．７ｍｇ／１００ｇＤ
Ｗ、７．７〜１３．６ｍｇ／１００ｇＤＷである（青柳
康夫，正田悦子，菅原龍幸著「栄養と食糧」Ｖｏｌ．２
９； Ｎｏ．８、４６０−４６１（１９７６））ので、
日本人一人あたりのシイタケ平均摂取量（０．５ｇ乾物
量／１日）を考慮すると、その薬効を期待するには含量
が低いものである。
シイタケ中にデオキシエリタデニンとともに存在し、シ
イタケ子実体、特に菌傘部に多く含まれているが、それ
ぞれの存在量は、５０．７〜９２．７ｍｇ／１００ｇＤ
Ｗ、７．７〜１３．６ｍｇ／１００ｇＤＷである（青柳
康夫，正田悦子，菅原龍幸著「栄養と食糧」Ｖｏｌ．２
９； Ｎｏ．８、４６０−４６１（１９７６））ので、
日本人一人あたりのシイタケ平均摂取量（０．５ｇ乾物
量／１日）を考慮すると、その薬効を期待するには含量
が低いものである。
【０００７】一方、シイタケ新菌株の開発目標の多く
は、多収性、耐病性、作型など種菌として販売すること
を目的とするもので、かかる観点からみれば、これまで
に優れた品種が開発されてきたが、食用となる子実体に
含まれる、このような生体調節機能に関する成分や栄養
価に関して、品種を開発し、育種し、また栽培すること
はこれまでに殆どなされていないのが現状である。
は、多収性、耐病性、作型など種菌として販売すること
を目的とするもので、かかる観点からみれば、これまで
に優れた品種が開発されてきたが、食用となる子実体に
含まれる、このような生体調節機能に関する成分や栄養
価に関して、品種を開発し、育種し、また栽培すること
はこれまでに殆どなされていないのが現状である。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】このような現状に鑑
み、発明者等は、生体調節機能に関する成分や栄養価の
高い、特にエリタデニン含有量の多いシイタケの品種を
開発し、育種し、またエリタデニン含有量の多いシイタ
ケを栽培する方法を求めて検討を行った。
み、発明者等は、生体調節機能に関する成分や栄養価の
高い、特にエリタデニン含有量の多いシイタケの品種を
開発し、育種し、またエリタデニン含有量の多いシイタ
ケを栽培する方法を求めて検討を行った。
【０００９】その結果、発明者等は、エリタデニン含量
に品種間差異があると推測し、まず、市販されているシ
イタケ菌株、保存されている野生シイタケ菌株を集め、
それらを空調栽培し、エリタデニン産生能の高い菌株を
選択した。
に品種間差異があると推測し、まず、市販されているシ
イタケ菌株、保存されている野生シイタケ菌株を集め、
それらを空調栽培し、エリタデニン産生能の高い菌株を
選択した。
【００１０】一方、連続的変異を示す形質は、収量と同
じくポリジーン支配のものと考え、エリタデニン含量関
連遺伝子の集積を図るため、それら選択されたエリタデ
ニン産生能の高い菌株の複数を集団交配、すなわち、選
定した交配親から分離した胞子を交配し、その中から高
含量菌株を選抜し、それらの間でさらに交配を繰り返し
たところ、二世代目の菌株に、空調栽培（温度１７℃、
ＲＨ９０％）することによって、従来の２〜４倍量のエ
リタデニンを含むシイタケを収穫することが可能である
ことを見出すとともに、多収量性（４００ｇ／１．３ｋ
ｇ菌床以上）であって、かつ、傘の色、形態等に優れた
特徴を有するシイタケ子実体が得られることを見出し、
さらに、原基形成後、高温下に培養して子実体を形成さ
せると、エリタデニンの含有量の多いシイタケ子実体が
得られることを見出し、この発明を完成したのである。
じくポリジーン支配のものと考え、エリタデニン含量関
連遺伝子の集積を図るため、それら選択されたエリタデ
ニン産生能の高い菌株の複数を集団交配、すなわち、選
定した交配親から分離した胞子を交配し、その中から高
含量菌株を選抜し、それらの間でさらに交配を繰り返し
たところ、二世代目の菌株に、空調栽培（温度１７℃、
ＲＨ９０％）することによって、従来の２〜４倍量のエ
リタデニンを含むシイタケを収穫することが可能である
ことを見出すとともに、多収量性（４００ｇ／１．３ｋ
ｇ菌床以上）であって、かつ、傘の色、形態等に優れた
特徴を有するシイタケ子実体が得られることを見出し、
さらに、原基形成後、高温下に培養して子実体を形成さ
せると、エリタデニンの含有量の多いシイタケ子実体が
得られることを見出し、この発明を完成したのである。
【００１１】この発明の目的は、より多くのエリタデニ
ンを含むシイタケを育成栽培することによって、従来の
摂取量、さらにはより少ない摂取量で健康維持に寄与す
ることのできるシイタケを提供することである。
ンを含むシイタケを育成栽培することによって、従来の
摂取量、さらにはより少ない摂取量で健康維持に寄与す
ることのできるシイタケを提供することである。
【００１２】この発明の他の目的は、このように栽培し
て得たシイタケを、健康食品素材として利用することで
ある。
て得たシイタケを、健康食品素材として利用することで
ある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】この発明の請求項１に記
載の発明は、菌傘部に、エリタデニンを１７０ｍｇ／１
００ｇＤＷ以上含有することを特徴とするシイタケ子実
体である。
載の発明は、菌傘部に、エリタデニンを１７０ｍｇ／１
００ｇＤＷ以上含有することを特徴とするシイタケ子実
体である。
【００１４】また、この発明の請求項２に記載の発明
は、菌傘部のエリタデニン含量が１７０ｍｇ／１００ｇ
ＤＷ以上である子実体を、温度１５〜２０℃の条件下で
培養により産生する能力を有することを特徴とするレン
チヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅ
ｓ）である。
は、菌傘部のエリタデニン含量が１７０ｍｇ／１００ｇ
ＤＷ以上である子実体を、温度１５〜２０℃の条件下で
培養により産生する能力を有することを特徴とするレン
チヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅ
ｓ）である。
【００１５】さらに、請求項３に記載の発明は、寄託番
号ＦＥＲＭＰ−１８０７３を有するレンチヌラ・エドデ
ス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）に属する新規
な菌株Ｈ４４である。
号ＦＥＲＭＰ−１８０７３を有するレンチヌラ・エドデ
ス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）に属する新規
な菌株Ｈ４４である。
【００１６】また、請求項４に記載の発明は、公知のレ
ンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅ
ｓ）の中から、エリタデニン産生能の高いものを複数選
択し、集団交配育種して、菌傘部のエリタデニン含量
が、１７０ｍｇ／１００ｇＤＷ以上である子実体を、常
温培養により産生する能力を有するレンチヌラ・エドデ
ス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）を取得するこ
と、を特徴とするレンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎ
ｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）の育種方法である。
ンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅ
ｓ）の中から、エリタデニン産生能の高いものを複数選
択し、集団交配育種して、菌傘部のエリタデニン含量
が、１７０ｍｇ／１００ｇＤＷ以上である子実体を、常
温培養により産生する能力を有するレンチヌラ・エドデ
ス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）を取得するこ
と、を特徴とするレンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎ
ｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）の育種方法である。
【００１７】さらに、請求項５に記載の発明は、レンチ
ヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）
を原基形成後、温度２５〜３４℃の条件下に培養して、
子実体を形成させること、を特徴とするレンチヌラ・エ
ドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）の栽培方
法である。
ヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）
を原基形成後、温度２５〜３４℃の条件下に培養して、
子実体を形成させること、を特徴とするレンチヌラ・エ
ドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）の栽培方
法である。
【００１８】
【発明の実施の形態】以下、この発明のシイタケ子実
体、レンチヌラ・エドデス並びに育種及び栽培方法を、
具体的な実施例に基づいて詳述する。
体、レンチヌラ・エドデス並びに育種及び栽培方法を、
具体的な実施例に基づいて詳述する。
【００１９】＜育種方法＞市販されているシイタケ菌
株、及び出願人が保存している野生シイタケ菌株合計６
７菌株を集め、空調栽培によるスクリーニングを行っ
た。まず、ブナとコーンプランを重量比４：１で混合
し、水分を６５％に調製した培地をプラスチック製の培
養袋に１．３ｋｇ詰め込み、温度１２１℃で９０分間殺
菌したのち、スクリーニング用のシイタケ菌を接種し、
温度を２２〜２３℃に維持しながら、湿度７０％の条件
下で９０〜１２０日培養したのち、培養袋を取り除き、
温度１７℃、湿度９０％、明条件下で子実体を発生させ
た。発生した子実体は、収穫後直ちに凍結乾燥し、粉末
化してエリタデニン定量の試料とした。
株、及び出願人が保存している野生シイタケ菌株合計６
７菌株を集め、空調栽培によるスクリーニングを行っ
た。まず、ブナとコーンプランを重量比４：１で混合
し、水分を６５％に調製した培地をプラスチック製の培
養袋に１．３ｋｇ詰め込み、温度１２１℃で９０分間殺
菌したのち、スクリーニング用のシイタケ菌を接種し、
温度を２２〜２３℃に維持しながら、湿度７０％の条件
下で９０〜１２０日培養したのち、培養袋を取り除き、
温度１７℃、湿度９０％、明条件下で子実体を発生させ
た。発生した子実体は、収穫後直ちに凍結乾燥し、粉末
化してエリタデニン定量の試料とした。
【００２０】＜エリタデニンの定量＞エリタデニンの定
量は、以下の手順で行った。２００ｍｇのシイタケ乾燥
粉末に４ｍｌの５％過塩素酸を加え、遠心分離で抽出液
を回収し、得た抽出液をＫＯＨで中和したのち、活性炭
カラムに添加し、蒸留水で洗浄後、１．４％アンモニア
含有５０％エタノールでエリタデニン画分を溶出し、遠
心エバポレーターで濃縮乾固した。
量は、以下の手順で行った。２００ｍｇのシイタケ乾燥
粉末に４ｍｌの５％過塩素酸を加え、遠心分離で抽出液
を回収し、得た抽出液をＫＯＨで中和したのち、活性炭
カラムに添加し、蒸留水で洗浄後、１．４％アンモニア
含有５０％エタノールでエリタデニン画分を溶出し、遠
心エバポレーターで濃縮乾固した。
【００２１】かくして得られたエリタデニン画分を、５
ｍＭ臭化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム、２０ｍＭリ
ン酸水素二カリウム含有アセトニトリルに溶解し、液体
クロマトグラフィー（Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＲＰ Ａｑ
ｕｅｏｕｓ ４．５×２５0ｍｍ装着、流速１．０ｍｌ／
分）で、検出波長２６０ｎｍで定量する。
ｍＭ臭化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム、２０ｍＭリ
ン酸水素二カリウム含有アセトニトリルに溶解し、液体
クロマトグラフィー（Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ ＲＰ Ａｑ
ｕｅｏｕｓ ４．５×２５0ｍｍ装着、流速１．０ｍｌ／
分）で、検出波長２６０ｎｍで定量する。
【００２２】このスクリーニングで、子実体の発生収量
及びその形態、エリタデニン含量の３項目について調
べ、出願人（財団法人日本きのこ研究所）が保管する
「菌株番号８１２３、Ｃ−０４、Ａ−１２３株」を交配
親として選定した。
及びその形態、エリタデニン含量の３項目について調
べ、出願人（財団法人日本きのこ研究所）が保管する
「菌株番号８１２３、Ｃ−０４、Ａ−１２３株」を交配
親として選定した。
【００２３】選定した「菌株番号８１２３、Ｃ−０４、
Ａ−１２３株」のそれぞれの子実体から、担子胞子を採
取して滅菌した蒸留水に懸濁した。胞子濃度をヘマトメ
ーターで計測し、約１×１０6ｓｐｏｒｅｓ／ｍｌにな
るよう希釈してから、同じ割合（１：１：１）で混合し
て寒天平板培地に播種（集団交配）し、温度２５℃で１
〜２週間培養した後、寒天平板培地（直径９ｃｍのシャ
ーレ）に生育した菌糸を切り取り、寒天斜面培地に接種
した。
Ａ−１２３株」のそれぞれの子実体から、担子胞子を採
取して滅菌した蒸留水に懸濁した。胞子濃度をヘマトメ
ーターで計測し、約１×１０6ｓｐｏｒｅｓ／ｍｌにな
るよう希釈してから、同じ割合（１：１：１）で混合し
て寒天平板培地に播種（集団交配）し、温度２５℃で１
〜２週間培養した後、寒天平板培地（直径９ｃｍのシャ
ーレ）に生育した菌糸を切り取り、寒天斜面培地に接種
した。
【００２４】このような操作を、１つの寒天平板培地に
ついて約１０本の寒天斜面培地（試験管）に接種して、
約１０枚の寒天培地から１００本の試験管に接種して培
養したのち、培養した菌糸の成長先端を、新しい寒天斜
面培地（試験管）に移してさらに培養した。この操作を
数回繰り返すことによって、均一な二核菌糸（ｄｉｋａ
ｒｙｏｎ）を得た。
ついて約１０本の寒天斜面培地（試験管）に接種して、
約１０枚の寒天培地から１００本の試験管に接種して培
養したのち、培養した菌糸の成長先端を、新しい寒天斜
面培地（試験管）に移してさらに培養した。この操作を
数回繰り返すことによって、均一な二核菌糸（ｄｉｋａ
ｒｙｏｎ）を得た。
【００２５】得た二核菌糸は、菌床培地で栽培して子実
体を収穫し、その担子細胞を採取すると同時に、エリタ
デニン含量を測定した。
体を収穫し、その担子細胞を採取すると同時に、エリタ
デニン含量を測定した。
【００２６】以上のように、「菌株番号８１２３、Ｃ−
０４、Ａ−１２３株」の集団交配によって、約１００菌
株の二核菌糸を栽培し、子実体を形成した８１株につい
てエリタデニン含量を測定した。
０４、Ａ−１２３株」の集団交配によって、約１００菌
株の二核菌糸を栽培し、子実体を形成した８１株につい
てエリタデニン含量を測定した。
【００２７】子実体発生量が多く、なおかつエリタデニ
ン含量の高かった１０株の胞子を、さらに前述の操作の
ように集団交配して、エリタデニン含量関連遺伝子の集
積と形質の安定化を図った。
ン含量の高かった１０株の胞子を、さらに前述の操作の
ように集団交配して、エリタデニン含量関連遺伝子の集
積と形質の安定化を図った。
【００２８】このようにしてＦ２世代で、菌傘部のエリ
タデニン含量が１７０ｍｇ／１００ｇＤＷ以上である子
実体産生能を有する菌株を３株得、それらを「Ｈ４４」
「Ｈ７８」「Ｃ１８」と命名した。
タデニン含量が１７０ｍｇ／１００ｇＤＷ以上である子
実体産生能を有する菌株を３株得、それらを「Ｈ４４」
「Ｈ７８」「Ｃ１８」と命名した。
【００２９】なお、それらの菌株を、後述する培養条件
で発生させた子実体中のエリタデニン含量は、それぞれ Ｈ４４；２１４ｍｇ／１００ｇＤＷ Ｈ７８；１８６ｍｇ／１００ｇＤＷ Ｃ１８；１８４ｍｇ／１００ｇＤＷ である。
で発生させた子実体中のエリタデニン含量は、それぞれ Ｈ４４；２１４ｍｇ／１００ｇＤＷ Ｈ７８；１８６ｍｇ／１００ｇＤＷ Ｃ１８；１８４ｍｇ／１００ｇＤＷ である。
【００３０】これら３株のなかでも、Ｈ４４株は、子実
体の発生量及び発生期間で優れたもので、「Ｌｅｎｔｉ
ｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ Ｈ４４」と表示し、工業技術
院生命工学技術研究所に、「寄託番号ＦＥＲＭＰ−１８
０７３」として寄託した。以下に、Ｈ４４株の特性を示
す。
体の発生量及び発生期間で優れたもので、「Ｌｅｎｔｉ
ｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ Ｈ４４」と表示し、工業技術
院生命工学技術研究所に、「寄託番号ＦＥＲＭＰ−１８
０７３」として寄託した。以下に、Ｈ４４株の特性を示
す。
【００３１】Ｈ４４株の特性 Ｈ４４株の菌学的諸性質並びに生化学的性質は、以下の
とおりである。 傘色：茶褐色 形 ：円形で肉厚 鱗皮：繊維状 ひだ：密 柄色：肌色
とおりである。 傘色：茶褐色 形 ：円形で肉厚 鱗皮：繊維状 ひだ：密 柄色：肌色
【００３２】１）ポテト・デキストロース寒天培地（Ｐ
ＤＡ，Ｄｉｆｃｏ）における生育状態 温度２５℃での菌糸成長は４．５ｍｍ／１日、菌糸は白
色で放射状に伸びる。裏面は一様で変色はない。
ＤＡ，Ｄｉｆｃｏ）における生育状態 温度２５℃での菌糸成長は４．５ｍｍ／１日、菌糸は白
色で放射状に伸びる。裏面は一様で変色はない。
【００３３】２）グルコース・麦芽エキス・酵母エキス
寒天培地（ＧＭＹ、１％グルコース、１％麦芽エキス、
０．４％酵母エキス）における生育状態。 温度２５℃での菌糸成長は３．５ｍｍ／１日、菌糸は白
色で放射状に伸びる。裏面は一様で変色はない。
寒天培地（ＧＭＹ、１％グルコース、１％麦芽エキス、
０．４％酵母エキス）における生育状態。 温度２５℃での菌糸成長は３．５ｍｍ／１日、菌糸は白
色で放射状に伸びる。裏面は一様で変色はない。
【００３４】３）フェノールオキシダーゼ検定用培地 没食子酸０．１％添加により裏面が褐色になり、白色腐
朽菌の特徴を示す。
朽菌の特徴を示す。
【００３５】４）最適生育温度ならびに各温度における
生育速度 ＧＭＹ寒天培地で予め前培養した菌糸をコルクボーラー
で打ち抜き、ＰＤＡ培地およびＧＭＹ培地に接種して３
日間培養したのち、温度勾配培養装置を使用して各温度
で５日間培養し、その間の菌糸伸長を測定した。その結
果、温度１５〜３０℃の範囲で良く生育し、最適の温度
は、温度２５〜２６℃であった。
生育速度 ＧＭＹ寒天培地で予め前培養した菌糸をコルクボーラー
で打ち抜き、ＰＤＡ培地およびＧＭＹ培地に接種して３
日間培養したのち、温度勾配培養装置を使用して各温度
で５日間培養し、その間の菌糸伸長を測定した。その結
果、温度１５〜３０℃の範囲で良く生育し、最適の温度
は、温度２５〜２６℃であった。
【００３６】５）最適生育ｐＨ 各ｐＨに調整したＧＭＹ液体培地に、コルクポーラーで
打ち抜いた菌糸片を接種し、温度２５℃で３０日間培養
した。集菌後、乾燥重量から最適ｐＨは４〜５付近で、
生育範囲は４〜７であった。
打ち抜いた菌糸片を接種し、温度２５℃で３０日間培養
した。集菌後、乾燥重量から最適ｐＨは４〜５付近で、
生育範囲は４〜７であった。
【００３７】６）ＤＮＡによる菌株識別 液体培地（グルコース１％、マルツエキス１％、酵母エ
キス０．４％）で培養し、凍結乾燥して粉末化した５０
〜１００ｍｇの菌糸を、１．５ｍｌ遠心チューブに入
れ、約０．１ｍｌの抽出用緩衝液（１％ＳＤＳを含む５
０ｍＭトリス塩酸緩衝液：pＨ＝８．０、５ｍＭ ＥＤ
ＴＡ、以下ＴＥという。）を加え、同量のフェノール／
クロロフォルム混合液（１：１）を加えて混合し、１
２，０００回転で遠心分離したのち、下層は捨て、上層
の液を回収して２．５倍量のエタノールを加えてＤＮＡ
を沈殿させた。７０％エタノールでよく洗浄した後、Ｔ
Ｅに溶かし、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ ２０μｇ
／ｍｌ）処理してフェノールで蛋白を除去した。
キス０．４％）で培養し、凍結乾燥して粉末化した５０
〜１００ｍｇの菌糸を、１．５ｍｌ遠心チューブに入
れ、約０．１ｍｌの抽出用緩衝液（１％ＳＤＳを含む５
０ｍＭトリス塩酸緩衝液：pＨ＝８．０、５ｍＭ ＥＤ
ＴＡ、以下ＴＥという。）を加え、同量のフェノール／
クロロフォルム混合液（１：１）を加えて混合し、１
２，０００回転で遠心分離したのち、下層は捨て、上層
の液を回収して２．５倍量のエタノールを加えてＤＮＡ
を沈殿させた。７０％エタノールでよく洗浄した後、Ｔ
Ｅに溶かし、リボヌクレアーゼ（ＲＮａｓｅ ２０μｇ
／ｍｌ）処理してフェノールで蛋白を除去した。
【００３８】このようにして調整したＤＮＡは、２５ｎ
ｇ／μｌ濃度になるように希釈した（参照：Ａｎｎｅ
R．Ｋｕｂｅｌｉｃ、Ｌｅｓ Ｊ．Ｓｚａｂｏ、Ｃｕｒ
ｒＧｅｎｅｔ（１９９５）２８、３８４−３８９）。
ｇ／μｌ濃度になるように希釈した（参照：Ａｎｎｅ
R．Ｋｕｂｅｌｉｃ、Ｌｅｓ Ｊ．Ｓｚａｂｏ、Ｃｕｒ
ｒＧｅｎｅｔ（１９９５）２８、３８４−３８９）。
【００３９】ＰＣＲ法によるＤＮＡの増殖には、株式会
社サワデーテクノロジーの「Ｓｕｐｅｒ Ｔａｑ Ｐｒ
ｅｍｉｘ」に、鋳型となる菌糸のＤＮＡを２０ｎｇと、
０．４μＭプライマーを加え（反応液量２５μｌ）、パ
ーキンエルマー アプライド バイオシステムス（ＰＥ
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製の「Ｇ
ｅｎｅＡｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ９７００」でＤ
ＮＡを増殖した。
社サワデーテクノロジーの「Ｓｕｐｅｒ Ｔａｑ Ｐｒ
ｅｍｉｘ」に、鋳型となる菌糸のＤＮＡを２０ｎｇと、
０．４μＭプライマーを加え（反応液量２５μｌ）、パ
ーキンエルマー アプライド バイオシステムス（ＰＥ
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製の「Ｇ
ｅｎｅＡｍｐ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ ９７００」でＤ
ＮＡを増殖した。
【００４０】増幅条件（ＰＣＲ）は、以下のとおりであ
る。また、ＰＡＰＤ法（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉ
ｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ）には、オペロ
ン（Ｏｐｅｒｏｎ）社製のＯＰＡ−０４（５’−ＡＡＴ
ＣＧＧＧＣＴＧ）をプライマーにして、また、リボゾー
ムＲＮＡ遺伝子の非翻訳領域（Ｉｎｔｅｒ Ｇｅｎｉｃ
Ｒｅｇｉｏｎ；以下、「ＩＧＲ２」と略す。）の一部
（上流側５’−ＡＴＴＧＧＡＡＡＡＴＡＧＡＴＧＧＡＡ
ＴＴＧＣＣＣＴＴ、下流側（５’−ＧＡＧＡＡＡＧＴＣ
ＴＴＴＣＡＴＴＧＴＴＣＴＴＣＴＴＣＡＴＧ）を、プラ
イマーにしてＤＮＡを増殖した。
る。また、ＰＡＰＤ法（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉ
ｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ）には、オペロ
ン（Ｏｐｅｒｏｎ）社製のＯＰＡ−０４（５’−ＡＡＴ
ＣＧＧＧＣＴＧ）をプライマーにして、また、リボゾー
ムＲＮＡ遺伝子の非翻訳領域（Ｉｎｔｅｒ Ｇｅｎｉｃ
Ｒｅｇｉｏｎ；以下、「ＩＧＲ２」と略す。）の一部
（上流側５’−ＡＴＴＧＧＡＡＡＡＴＡＧＡＴＧＧＡＡ
ＴＴＧＣＣＣＴＴ、下流側（５’−ＧＡＧＡＡＡＧＴＣ
ＴＴＴＣＡＴＴＧＴＴＣＴＴＣＴＴＣＡＴＧ）を、プラ
イマーにしてＤＮＡを増殖した。
【００４１】＜ＲＡＰＤ法＞ （温度９４℃× ５min）１cycle （（温度９４℃× １min）＋（温度３６℃× １min）
＋（温度７２℃× ４min））４５cycle （温度７２℃×１０min）１cycle
＋（温度７２℃× ４min））４５cycle （温度７２℃×１０min）１cycle
【００４２】＜ＩＧＲ２法＞ （温度９４℃× ５min）１cycle （（温度９４℃× １min）＋（温度５５℃× １min）
＋（温度７２℃×２．５min））３０cycle （温度７２℃× ５min）１cycle
＋（温度７２℃×２．５min））３０cycle （温度７２℃× ５min）１cycle
【００４３】増幅産物は１．５％寒天ゲルで泳動し、エ
チヂウムブロミドで染色した。その結果、ＯＰＡ−０４
をプライマーにして、ＲＡＰＤ法では、０．４，０．６
５，１．０５ｋｂの３本の増幅ＤＮＡ断片（図１参照）
が、ＩＧＲ法では、１．１，０．８８，０．６４ｋｂの
３本の増幅ＤＮＡ断片（図２参照）が検出されたが、そ
の電気泳動パターンで、いずれも既存のシイタケ栽培種
とも、識別が可能であった。
チヂウムブロミドで染色した。その結果、ＯＰＡ−０４
をプライマーにして、ＲＡＰＤ法では、０．４，０．６
５，１．０５ｋｂの３本の増幅ＤＮＡ断片（図１参照）
が、ＩＧＲ法では、１．１，０．８８，０．６４ｋｂの
３本の増幅ＤＮＡ断片（図２参照）が検出されたが、そ
の電気泳動パターンで、いずれも既存のシイタケ栽培種
とも、識別が可能であった。
【００４４】７）子実体形成における最適温度 ブナとコーンブランを重量比４：１で混合し、水分を６
５％に調整した１．３ｋｇの菌床を１２０日間培養（温
度２２〜２３℃）したのち、温度１０〜２８℃の条件下
で子実体を発生させたところ、その結果、いずれの範囲
でも初回の発生で５７〜２０４ｇの子実体を発生し、適
応温度は広い特性を有していた。
５％に調整した１．３ｋｇの菌床を１２０日間培養（温
度２２〜２３℃）したのち、温度１０〜２８℃の条件下
で子実体を発生させたところ、その結果、いずれの範囲
でも初回の発生で５７〜２０４ｇの子実体を発生し、適
応温度は広い特性を有していた。
【００４５】＜培養例１＞ブナとコーンブランを重量比
４：１で混合し、水分を６５％に調整した培地をプラス
チック製の培養袋に１．３ｋｇ詰め込み、温度１２１℃
で９０分間殺菌したのち、培地に菌株Ｈ４４を接種し
た。比較のため、従来菌を同時に接種し、接種後は温度
２２〜２３℃、湿度７０％の条件下で９０〜１２０日間
培養した。その後、培養袋を取り除き温度１７℃、湿度
９０％、明条件下で子実体を発生させた。その結果を表
１に示す。
４：１で混合し、水分を６５％に調整した培地をプラス
チック製の培養袋に１．３ｋｇ詰め込み、温度１２１℃
で９０分間殺菌したのち、培地に菌株Ｈ４４を接種し
た。比較のため、従来菌を同時に接種し、接種後は温度
２２〜２３℃、湿度７０％の条件下で９０〜１２０日間
培養した。その後、培養袋を取り除き温度１７℃、湿度
９０％、明条件下で子実体を発生させた。その結果を表
１に示す。
【００４６】表１から明らかなように、初回の子実体体
発生量は１３５ｇ／１．３ｋｇ菌床で、エリタデニン含
量は２１４ｍｇ／１００ｇＤＷと、従来品に比べ約２．
４倍であった。
発生量は１３５ｇ／１．３ｋｇ菌床で、エリタデニン含
量は２１４ｍｇ／１００ｇＤＷと、従来品に比べ約２．
４倍であった。
【００４７】
【表１】
【００４８】＜培養例２＞また、空調発生室の温度を、
温度１７℃、温度２５℃、温度２８℃及び温度３０℃と
して栽培試験を行い、子実体を発生させ、その子実体中
のエリタデニン含量を測定したところ、表２に示される
ように、子実体生育時の温度が高いほど、その値は高く
なり、温度３０℃では３９３ｍｇ／１００ｇＤＷで、温
度１７℃で栽培した子実体の約２倍の含量であった。
温度１７℃、温度２５℃、温度２８℃及び温度３０℃と
して栽培試験を行い、子実体を発生させ、その子実体中
のエリタデニン含量を測定したところ、表２に示される
ように、子実体生育時の温度が高いほど、その値は高く
なり、温度３０℃では３９３ｍｇ／１００ｇＤＷで、温
度１７℃で栽培した子実体の約２倍の含量であった。
【００４９】
【表２】
【００５０】＜培養例３＞培養例２において、子実体生
育時の温度が高いほど、子実体中のエリタデニン含量が
多くなることが見出されたため、栽培品種として市販さ
れている菌株（森産業株式会社「活活」）について、温
度１７℃で子実体原基を形成させた後、空調発生室の温
度を、温度１７℃、温度２５℃、温度２８℃、温度３０
℃、温度３２℃及び温度３５℃として、子実体を生育さ
せ、その子実体中のエリタデニン含量を測定したとこ
ろ、表２に示されるように、温度が高くなるに伴い含量
も高くなり、子実体生育の上限温度３２℃で最高に達
し、その時の含量は１７℃で栽培した子実体の約６．２
倍であった。
育時の温度が高いほど、子実体中のエリタデニン含量が
多くなることが見出されたため、栽培品種として市販さ
れている菌株（森産業株式会社「活活」）について、温
度１７℃で子実体原基を形成させた後、空調発生室の温
度を、温度１７℃、温度２５℃、温度２８℃、温度３０
℃、温度３２℃及び温度３５℃として、子実体を生育さ
せ、その子実体中のエリタデニン含量を測定したとこ
ろ、表２に示されるように、温度が高くなるに伴い含量
も高くなり、子実体生育の上限温度３２℃で最高に達
し、その時の含量は１７℃で栽培した子実体の約６．２
倍であった。
【００５１】
【表３】
【００５２】
【発明の効果】この発明で得られるシイタケ子実体は、
コレステロール低下作用をもつエリタデニンを多く含
み、なおかつ収量性がきわめて良好で、滋養食品とし
て、さらには健康食品素材として、新規需要が期待され
るという優れた効果を奏するものである。
コレステロール低下作用をもつエリタデニンを多く含
み、なおかつ収量性がきわめて良好で、滋養食品とし
て、さらには健康食品素材として、新規需要が期待され
るという優れた効果を奏するものである。
【図１】菌株Ｈ４４のＤＮＡのＲＡＰＤ法による電気泳
動を示す写真で、左側から２００ｂｐラダーＤＮＡから
なるサイズマーカー（下から２００ｂｐ、４００ｂｐと
順次上昇）、Ｈ４４菌株、Ｈ７８菌株で、右４本は市販
品の菌株のものである。
動を示す写真で、左側から２００ｂｐラダーＤＮＡから
なるサイズマーカー（下から２００ｂｐ、４００ｂｐと
順次上昇）、Ｈ４４菌株、Ｈ７８菌株で、右４本は市販
品の菌株のものである。
【図２】菌株Ｈ４４のＤＮＡのＩＧＲ２法による電気泳
動を示す写真で、左側から２００ｂｐラダーＤＮＡから
なるサイズマーカー（下から２００ｂｐ、４００ｂｐと
順次上昇）、Ｈ４４菌株、Ｈ７８菌株で、右４本は市販
品の菌株のものである。
動を示す写真で、左側から２００ｂｐラダーＤＮＡから
なるサイズマーカー（下から２００ｂｐ、４００ｂｐと
順次上昇）、Ｈ４４菌株、Ｈ７８菌株で、右４本は市販
品の菌株のものである。
なし
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 豊増 哲郎 群馬県桐生市平井町８番１号 財団法人 日本きのこ研究所内 (72)発明者 村岡 眞治郎 群馬県桐生市平井町８番１号 森産業 株 式会社研究開発部内 Ｆターム(参考） 2B011 AA04 BA06 BA13 CA12 EA01 GA08 HA01 4B065 AA71X AC12 AC14 BA30 BC32 BC33 CA02 CA41 4C088 AA08 BA05 ZA45 ZC33
Claims (5)
- 【請求項１】 菌傘部に、エリタデニンを１７０ｍｇ／
１００ｇＤＷ以上含有することを特徴とするシイタケ子
実体。 - 【請求項２】 菌傘部のエリタデニン含量が１７０ｍｇ
／１００ｇＤＷ以上である子実体を、温度１５〜２０℃
の条件下で培養により産生する能力を有することを特徴
とするレンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅ
ｄｏｄｅｓ）。 - 【請求項３】 寄託番号ＦＥＲＭＰ−１８０７３を有す
るレンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏ
ｄｅｓ）に属する新規な菌株Ｈ４４。 - 【請求項４】 公知のレンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔ
ｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）の中から、エリタデニン産
生能の高いものを複数選択し、集団交配育種して、菌傘
部のエリタデニン含量が１７０ｍｇ／１００ｇＤＷ以上
である子実体を、常温培養により産生する能力を有する
レンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄ
ｅｓ）を取得することを特徴とするレンチヌラ・エドデ
ス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ）の育種方法。 - 【請求項５】 レンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕ
ｌａ ｅｄｏｄｅｓ）を原基形成後、温度２５〜３４℃
の条件下に培養して子実体を形成させることを特徴とす
るレンチヌラ・エドデス（Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏ
ｄｅｓ）の栽培方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001037020A JP2002238350A (ja) | 2001-02-14 | 2001-02-14 | シイタケ子実体、レンチヌラ・エドデス並びにその育種及び栽培方法 |
| PCT/JP2002/001031 WO2002063947A1 (fr) | 2001-02-14 | 2002-02-07 | Carporphore de lentinula edodes et procede de selection et de culture correspondants |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001037020A JP2002238350A (ja) | 2001-02-14 | 2001-02-14 | シイタケ子実体、レンチヌラ・エドデス並びにその育種及び栽培方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002238350A true JP2002238350A (ja) | 2002-08-27 |
Family
ID=18900207
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001037020A Pending JP2002238350A (ja) | 2001-02-14 | 2001-02-14 | シイタケ子実体、レンチヌラ・エドデス並びにその育種及び栽培方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002238350A (ja) |
| WO (1) | WO2002063947A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004242563A (ja) * | 2003-02-13 | 2004-09-02 | Mori Sangyo Kk | 高エリタデニン含有シイタケ子実体およびその生産方法 |
| KR101035898B1 (ko) | 2010-12-16 | 2011-05-23 | 김영찬 | 신균주 표고버섯 ｇｎａ01 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5534062A (en) * | 1978-08-31 | 1980-03-10 | Isamu Hiroe | Plant belonged to *shiitake* new species |
-
2001
- 2001-02-14 JP JP2001037020A patent/JP2002238350A/ja active Pending
-
2002
- 2002-02-07 WO PCT/JP2002/001031 patent/WO2002063947A1/ja active Application Filing
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004242563A (ja) * | 2003-02-13 | 2004-09-02 | Mori Sangyo Kk | 高エリタデニン含有シイタケ子実体およびその生産方法 |
| KR101035898B1 (ko) | 2010-12-16 | 2011-05-23 | 김영찬 | 신균주 표고버섯 ｇｎａ01 |
| WO2012081851A3 (ko) * | 2010-12-16 | 2012-11-01 | Kim Young Chan | 신균주 표고버섯 gna01 |
| CN103327805A (zh) * | 2010-12-16 | 2013-09-25 | 金永燦 | 新型香菇菌株gna01 |
| US9565829B2 (en) | 2010-12-16 | 2017-02-14 | Young Chan Kim | Strain of Lentinula edodes GNA01 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2002063947A1 (fr) | 2002-08-22 |
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