JP2002223759A - 新規タンパク質およびそのｄｎａ - Google Patents
新規タンパク質およびそのｄｎａInfo
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- JP2002223759A JP2002223759A JP2001021013A JP2001021013A JP2002223759A JP 2002223759 A JP2002223759 A JP 2002223759A JP 2001021013 A JP2001021013 A JP 2001021013A JP 2001021013 A JP2001021013 A JP 2001021013A JP 2002223759 A JP2002223759 A JP 2002223759A
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- salt
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 薬物排出トランスポータ活性を有する新規タ
ンパク質、該タンパク質をコードするＤＮＡ、該タンパ
ク質の活性を促進又は阻害する化合物のスクリーニング
方法、該スクリーニング方法で得られる化合物等の提
供。 【解決手段】 ヒト由来の特定のアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク
質。 【効果】該タンパク質は抗ガン剤等の薬剤耐性の診断マ
ーカー等として有用であり、該タンパク質を用いるスク
リーニング法により得られる該タンパク質の活性を促進
又は阻害する化合物は、例えば、ガン、感染症、喘息、
炎症性疾患などの疾病の予防・治療剤として使用するこ
とができる。
ンパク質、該タンパク質をコードするＤＮＡ、該タンパ
ク質の活性を促進又は阻害する化合物のスクリーニング
方法、該スクリーニング方法で得られる化合物等の提
供。 【解決手段】 ヒト由来の特定のアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク
質。 【効果】該タンパク質は抗ガン剤等の薬剤耐性の診断マ
ーカー等として有用であり、該タンパク質を用いるスク
リーニング法により得られる該タンパク質の活性を促進
又は阻害する化合物は、例えば、ガン、感染症、喘息、
炎症性疾患などの疾病の予防・治療剤として使用するこ
とができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規な薬物排出ト
ランスポータ蛋白質、該蛋白質をコードするＤＮＡ、該
蛋白質の活性を促進または阻害する化合物のスクリーニ
ング方法、該スクリーニング方法で得られる化合物など
を提供する。
ランスポータ蛋白質、該蛋白質をコードするＤＮＡ、該
蛋白質の活性を促進または阻害する化合物のスクリーニ
ング方法、該スクリーニング方法で得られる化合物など
を提供する。
【０００２】
【従来の技術】肝臓、腎臓、膵臓、腸管粘膜および血液
脳関門は多種多様な生態異物や薬剤を解毒、抱合し排出
する重要な機能を持っている。この機能を担っているの
が薬物排出トランスポータである。ヒトの薬物排出トラ
ンスポータはMDR1ファミリー、MRPファミリーに大別で
きる。薬物排出トランスポータは、多くの抗ガン剤を排
出する機能も有しており、細胞の薬剤耐性の獲得に深く
関与している。これらのタンパク質はいずれもATPのエ
ネルギーに依存して作動する排出ポンプであり、進化上
よく保存されたATP結合領域を有する遺伝子ファミリー
（ABCトランスポータ・スーパーファミリー）を形成し
ている。この中で、多剤耐性の原因遺伝子として同定さ
れたMDR1は6回膜貫通ドメインが２回繰り返された１２
回膜貫通構造の膜タンパク質であり、２つのATP結合領
域を有している。MDR1はアントラサイクリン系、ビンカ
アルカロイド系、抗微小管系などの抗ガン剤の薬剤耐性
に関与していることが示されている（Annual Rev. Bioc
hem. 62: 385-427, 1993）。臨床的には、急性骨髄性白
血病における抗ガン剤に対する感受性とMDR1の発現レベ
ルは逆相関することが報告されている（Cancer Res. 5
6: 3010-3020, 1996）。また、腎臓、大腸、副腎由来の
固形腫瘍では抗ガン剤に対する抵抗性が高いが、これは
MDR1の発現レベルがこれらの組織において高いことに起
因していると考えられている。MDR1の生理的な役割は、
疎水性薬物などの排出による生態防御と考えられる。MD
R1のノックアウトマウスでは、抗がん剤に体する感受性
が亢進するのとともに、脳において薬剤の蓄積が上昇し
ていることから、MDR1は血液脳関門における異物進入阻
止に重要な働きをしていることが示唆されている（Cell
77: 491-502、1994）。MRPファミリーとしては、これ
までMRP1からMRP6まで6種類のタンパク質が報告されて
いる。MRP1は、上記のMDR1と同様に多くの抗ガン剤の薬
剤耐性に関与しているとともに、グルタチオン抱合体を
排出するトランスポータでもある。さらに、MRP1は炎症
反応の重要なメディエーターであるロイコトリエンＣ4
（LTC4）の輸送に関係しており、MRP1ノックアウトマウ
スではアラキドン酸刺激による血管透過性の上昇が認め
られない（Nat. Mad. 3: 1275-1279, 1997）。MRP2はと
くにシスプラチンやメソトレキセートの耐性獲得に関与
していると言われている。MRP3やMRP4も薬剤耐性に関与
しているという報告があるが、MRP6は薬剤耐性に関する
機能は確認されていない。最近、MRP5は核酸アナログの
薬剤耐性に関与していると報告された（PNAS. 97: 7476
-7481, 2000）。
脳関門は多種多様な生態異物や薬剤を解毒、抱合し排出
する重要な機能を持っている。この機能を担っているの
が薬物排出トランスポータである。ヒトの薬物排出トラ
ンスポータはMDR1ファミリー、MRPファミリーに大別で
きる。薬物排出トランスポータは、多くの抗ガン剤を排
出する機能も有しており、細胞の薬剤耐性の獲得に深く
関与している。これらのタンパク質はいずれもATPのエ
ネルギーに依存して作動する排出ポンプであり、進化上
よく保存されたATP結合領域を有する遺伝子ファミリー
（ABCトランスポータ・スーパーファミリー）を形成し
ている。この中で、多剤耐性の原因遺伝子として同定さ
れたMDR1は6回膜貫通ドメインが２回繰り返された１２
回膜貫通構造の膜タンパク質であり、２つのATP結合領
域を有している。MDR1はアントラサイクリン系、ビンカ
アルカロイド系、抗微小管系などの抗ガン剤の薬剤耐性
に関与していることが示されている（Annual Rev. Bioc
hem. 62: 385-427, 1993）。臨床的には、急性骨髄性白
血病における抗ガン剤に対する感受性とMDR1の発現レベ
ルは逆相関することが報告されている（Cancer Res. 5
6: 3010-3020, 1996）。また、腎臓、大腸、副腎由来の
固形腫瘍では抗ガン剤に対する抵抗性が高いが、これは
MDR1の発現レベルがこれらの組織において高いことに起
因していると考えられている。MDR1の生理的な役割は、
疎水性薬物などの排出による生態防御と考えられる。MD
R1のノックアウトマウスでは、抗がん剤に体する感受性
が亢進するのとともに、脳において薬剤の蓄積が上昇し
ていることから、MDR1は血液脳関門における異物進入阻
止に重要な働きをしていることが示唆されている（Cell
77: 491-502、1994）。MRPファミリーとしては、これ
までMRP1からMRP6まで6種類のタンパク質が報告されて
いる。MRP1は、上記のMDR1と同様に多くの抗ガン剤の薬
剤耐性に関与しているとともに、グルタチオン抱合体を
排出するトランスポータでもある。さらに、MRP1は炎症
反応の重要なメディエーターであるロイコトリエンＣ4
（LTC4）の輸送に関係しており、MRP1ノックアウトマウ
スではアラキドン酸刺激による血管透過性の上昇が認め
られない（Nat. Mad. 3: 1275-1279, 1997）。MRP2はと
くにシスプラチンやメソトレキセートの耐性獲得に関与
していると言われている。MRP3やMRP4も薬剤耐性に関与
しているという報告があるが、MRP6は薬剤耐性に関する
機能は確認されていない。最近、MRP5は核酸アナログの
薬剤耐性に関与していると報告された（PNAS. 97: 7476
-7481, 2000）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】抗ガン剤を患者に投与
すると、次第に効果が減少してくること多い。これは抗
ガン剤に対して耐性を示すガン細胞が出現してくるため
であり、この薬剤耐性に薬物排出トランスポータが関与
している。よって、薬剤耐性のガン細胞の出現を抑制す
ることが、抗癌剤の感受性を高めることになり、さらに
ガン治療の効果を飛躍的に高めることにつながる。その
ために薬物排出トランスポータを抑制することが重要で
ある。また、MRP1の活性を抑制することにより、LTC4な
どの炎症メディエーターの産生を抑制し、炎症反応を特
製することが出来る。また、薬物排出トランスポータを
賦活化することにより、生体にとって有害な物質の排出
能力が高まり、生体防御機能の向上につながる。
すると、次第に効果が減少してくること多い。これは抗
ガン剤に対して耐性を示すガン細胞が出現してくるため
であり、この薬剤耐性に薬物排出トランスポータが関与
している。よって、薬剤耐性のガン細胞の出現を抑制す
ることが、抗癌剤の感受性を高めることになり、さらに
ガン治療の効果を飛躍的に高めることにつながる。その
ために薬物排出トランスポータを抑制することが重要で
ある。また、MRP1の活性を抑制することにより、LTC4な
どの炎症メディエーターの産生を抑制し、炎症反応を特
製することが出来る。また、薬物排出トランスポータを
賦活化することにより、生体にとって有害な物質の排出
能力が高まり、生体防御機能の向上につながる。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、新規薬物排
出トランスポータ蛋白質（ヒトMRP5ホモログ）を見出し
た。該ヒトMRP5ホモログはアミノ酸レベルで、MRP5と３
０%の相同性を示し、薬物排出トランスポータとして機
能し得るものである。MRP5ホモログを抑制する方法とし
ては、例えば、薬物排出トランスポータ機能を阻害した
り、MRP5ホモログの転写を抑制して発現レベルを低下さ
せることが考えられる。MRP5ホモログを賦活化する方法
としては、例えばMRP5ホモログのプロモーターを活性化
したり、mRNAを安定化することで発現レベルを亢進する
ことが考えられる。本発明者らは、これらの知見に基づ
いて、さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至
った。
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、新規薬物排
出トランスポータ蛋白質（ヒトMRP5ホモログ）を見出し
た。該ヒトMRP5ホモログはアミノ酸レベルで、MRP5と３
０%の相同性を示し、薬物排出トランスポータとして機
能し得るものである。MRP5ホモログを抑制する方法とし
ては、例えば、薬物排出トランスポータ機能を阻害した
り、MRP5ホモログの転写を抑制して発現レベルを低下さ
せることが考えられる。MRP5ホモログを賦活化する方法
としては、例えばMRP5ホモログのプロモーターを活性化
したり、mRNAを安定化することで発現レベルを亢進する
ことが考えられる。本発明者らは、これらの知見に基づ
いて、さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至
った。
【０００５】すなわち、本発明は、（１）配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩、
（２）上記（１）項記載のタンパク質の部分ペプチドま
たはその塩、（３）上記（１）項記載のタンパク質また
は上記（２）項記載の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
を含有するＤＮＡ、（４）配列番号：２で表わされる塩
基配列を有する上記（３）項記載のＤＮＡ、（５）上記
（４）項記載のＤＮＡを含有する組換えベクター、
（６）上記（５）項記載の組換えベクターで形質転換さ
れた形質転換体、（７）上記（６）項記載の形質転換体
を培養し、上記（１）項記載のタンパク質または上記
（２）項記載の部分ペプチドを生成、蓄積せしめ、これ
を採取することを特徴とする上記（１）項記載のタンパ
ク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはそ
の塩の製造法、（８）上記（１）項記載のタンパク質も
しくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはその塩を
含有してなる医薬、（９）上記（３）項記載のＤＮＡを
含有してなる医薬、（１０）上記（１）項記載のタンパ
ク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはそ
の塩に対する抗体、（１１）上記（１）項記載のタンパ
ク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはそ
の塩を用いることを特徴とする、上記（１）項記載のタ
ンパク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドまた
はその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその
塩のスクリーニング方法、（１２）上記（１）項記載の
タンパク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドま
たはその塩を含有してなる、上記（１）項記載のタンパ
ク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはそ
の塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩の
スクリーニング用キット、（１３）上記（１１）項記載
のスクリーニング方法または上記（１２）項記載のスク
リーニング用キットを用いて得られる、上記（１）項記
載のタンパク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチ
ドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物また
はその塩、（１４）上記（１１）項記載のスクリーニン
グ方法または上記（１２）項記載のスクリーニング用キ
ットを用いて得られる上記（１）項記載のタンパク質も
しくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはその塩の
活性を促進または阻害する化合物またはその塩を含有し
てなる医薬、（１５）ガン、感染症、喘息、炎症性疾患
の予防・治療剤である上記（８）項または（９）項記載
の医薬、（１６）ガン、感染症、喘息、炎症性疾患の予
防・治療剤である上記（１４）項記載の医薬などを提供
する。
で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩、
（２）上記（１）項記載のタンパク質の部分ペプチドま
たはその塩、（３）上記（１）項記載のタンパク質また
は上記（２）項記載の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
を含有するＤＮＡ、（４）配列番号：２で表わされる塩
基配列を有する上記（３）項記載のＤＮＡ、（５）上記
（４）項記載のＤＮＡを含有する組換えベクター、
（６）上記（５）項記載の組換えベクターで形質転換さ
れた形質転換体、（７）上記（６）項記載の形質転換体
を培養し、上記（１）項記載のタンパク質または上記
（２）項記載の部分ペプチドを生成、蓄積せしめ、これ
を採取することを特徴とする上記（１）項記載のタンパ
ク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはそ
の塩の製造法、（８）上記（１）項記載のタンパク質も
しくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはその塩を
含有してなる医薬、（９）上記（３）項記載のＤＮＡを
含有してなる医薬、（１０）上記（１）項記載のタンパ
ク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはそ
の塩に対する抗体、（１１）上記（１）項記載のタンパ
ク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはそ
の塩を用いることを特徴とする、上記（１）項記載のタ
ンパク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドまた
はその塩の活性を促進または阻害する化合物またはその
塩のスクリーニング方法、（１２）上記（１）項記載の
タンパク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドま
たはその塩を含有してなる、上記（１）項記載のタンパ
ク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはそ
の塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩の
スクリーニング用キット、（１３）上記（１１）項記載
のスクリーニング方法または上記（１２）項記載のスク
リーニング用キットを用いて得られる、上記（１）項記
載のタンパク質もしくは上記（２）項記載の部分ペプチ
ドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物また
はその塩、（１４）上記（１１）項記載のスクリーニン
グ方法または上記（１２）項記載のスクリーニング用キ
ットを用いて得られる上記（１）項記載のタンパク質も
しくは上記（２）項記載の部分ペプチドまたはその塩の
活性を促進または阻害する化合物またはその塩を含有し
てなる医薬、（１５）ガン、感染症、喘息、炎症性疾患
の予防・治療剤である上記（８）項または（９）項記載
の医薬、（１６）ガン、感染症、喘息、炎症性疾患の予
防・治療剤である上記（１４）項記載の医薬などを提供
する。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明で用いられる配列番号：１
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質（以下、本発明のタ
ンパク質または本発明で用いられるタンパク質と称する
こともある）は、ヒトや温血動物（例えば、モルモッ
ト、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツ
ジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、肝細胞、脾細
胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メ
サンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮
細胞、杯細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、繊維芽細胞、繊
維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファ
ージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細
胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜
細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細
胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆
細胞、幹細胞もしくはガン細胞など）もしくはそれらの
細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位
（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下
部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵
臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副
腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血
管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾
丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋などに由来す
るタンパク質であってもよく、合成タンパク質であって
もよい。
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質（以下、本発明のタ
ンパク質または本発明で用いられるタンパク質と称する
こともある）は、ヒトや温血動物（例えば、モルモッ
ト、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツ
ジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、肝細胞、脾細
胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メ
サンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮
細胞、杯細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、繊維芽細胞、繊
維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファ
ージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細
胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜
細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細
胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆
細胞、幹細胞もしくはガン細胞など）もしくはそれらの
細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位
（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下
部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵
臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副
腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血
管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾
丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋などに由来す
るタンパク質であってもよく、合成タンパク質であって
もよい。
【０００７】配列番号：１で表されるアミノ酸配列と実
質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：１で表
わされるアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約６
０％以上、より好ましくは約７０％以上、特に好ましく
は約８０％以上、最も好ましくは約９０％以上の相同性
を有するアミノ酸配列などが挙げられる。配列番号：１
で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質としては、例えば、前記の配列番
号：１で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ
酸配列を含有し、配列番号：１で表されるアミノ酸配列
を有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタン
パク質などが好ましい。実質的に同質の活性としては、
例えば、薬物排出トランスポータ活性などが挙げられ
る。実質的に同質とは、それらの性質が性質的に（例、
生理学的に、または薬理学的に）同質であることを示
す。したがって、薬物排出トランスポータ活性が同等
（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．１〜１
０倍、より好ましくは０．５〜２倍）であることが好ま
しいが、これらの活性の程度、タンパク質の分子量など
の量的要素は異なっていてもよい。薬物排出トランスポ
ータ活性などの活性の測定は、公知の方法に準じて行う
ことが出来るが、例えば、J. Biol. Chem. 271: 1708-1
716, 1996 に記載の方法またはそれに準じる方法に従っ
て測定することができる。
質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：１で表
わされるアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約６
０％以上、より好ましくは約７０％以上、特に好ましく
は約８０％以上、最も好ましくは約９０％以上の相同性
を有するアミノ酸配列などが挙げられる。配列番号：１
で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質としては、例えば、前記の配列番
号：１で表されるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ
酸配列を含有し、配列番号：１で表されるアミノ酸配列
を有するタンパク質と実質的に同質の活性を有するタン
パク質などが好ましい。実質的に同質の活性としては、
例えば、薬物排出トランスポータ活性などが挙げられ
る。実質的に同質とは、それらの性質が性質的に（例、
生理学的に、または薬理学的に）同質であることを示
す。したがって、薬物排出トランスポータ活性が同等
（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．１〜１
０倍、より好ましくは０．５〜２倍）であることが好ま
しいが、これらの活性の程度、タンパク質の分子量など
の量的要素は異なっていてもよい。薬物排出トランスポ
ータ活性などの活性の測定は、公知の方法に準じて行う
ことが出来るが、例えば、J. Biol. Chem. 271: 1708-1
716, 1996 に記載の方法またはそれに準じる方法に従っ
て測定することができる。
【０００８】また、本発明で用いられるタンパク質とし
ては、例えば、配列番号：１で表されるアミノ酸配列
中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、
好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜
５）個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番
号：１で表されるアミノ酸配列に１または２個以上（好
ましくは、１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程
度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が付
加したアミノ酸配列、配列番号：１で表されるアミノ
酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程
度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数
（１〜５）個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、
配列番号：１で表されるアミノ酸配列中の１または２
個以上（好ましくは、１〜３０個程度、好ましくは１〜
１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミ
ノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または
それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質などのいわゆるムテインも含まれる。上記のように
アミノ酸配列が挿入、欠失または置換されている場合、
その挿入、欠失または置換の位置は、とくに限定されな
い。
ては、例えば、配列番号：１で表されるアミノ酸配列
中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程度、
好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜
５）個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番
号：１で表されるアミノ酸配列に１または２個以上（好
ましくは、１〜３０個程度、好ましくは１〜１０個程
度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が付
加したアミノ酸配列、配列番号：１で表されるアミノ
酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程
度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数
（１〜５）個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、
配列番号：１で表されるアミノ酸配列中の１または２
個以上（好ましくは、１〜３０個程度、好ましくは１〜
１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）のアミ
ノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または
それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質などのいわゆるムテインも含まれる。上記のように
アミノ酸配列が挿入、欠失または置換されている場合、
その挿入、欠失または置換の位置は、とくに限定されな
い。
【０００９】本明細書におけるタンパク質は、ペプチド
標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端
がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をはじめ
とする、本発明で用いられるタンパク質は、Ｃ末端が通
常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレー
ト(−ＣＯＯ-）であるが、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ
2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。こ
こでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エ
チル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチルなどの
Ｃ1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘ
キシルなどのＣ3-8シクロアルキル基、例えば、フェニ
ル、α−ナフチルなどのＣ6-12アリール基、例えば、ベ
ンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ1-2アルキル基
もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ
1-2アルキル基などのＣ7-14アラルキル基、ピバロイル
オキシメチル基などが用いられる。本発明で用いられる
タンパク質がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカル
ボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がア
ミド化またはエステル化されているものも本発明で用い
られるタンパク質に含まれる。この場合のエステルとし
ては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられ
る。さらに、本発明で用いられるタンパク質には、Ｎ末
端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が
保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ 1-6
アルカノイルなどのＣ1-6アシル基など）で保護されて
いるもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグルタ
ミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミ
ノ酸の側鎖上の置換基（例えば−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ
基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基な
ど）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基
などのＣ1-6アルカノイル基などのＣ1-6アシル基など）
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆ
る糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれる。
本発明で用いられるタンパク質の具体例としては、例え
ば、配列番号：１で表されるアミノ酸配列を含有するヒ
ト肝臓由来のタンパク質などがあげられる。
標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端
がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をはじめ
とする、本発明で用いられるタンパク質は、Ｃ末端が通
常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレー
ト(−ＣＯＯ-）であるが、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ
2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。こ
こでエステルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エ
チル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチルなどの
Ｃ1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘ
キシルなどのＣ3-8シクロアルキル基、例えば、フェニ
ル、α−ナフチルなどのＣ6-12アリール基、例えば、ベ
ンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ1-2アルキル基
もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ
1-2アルキル基などのＣ7-14アラルキル基、ピバロイル
オキシメチル基などが用いられる。本発明で用いられる
タンパク質がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカル
ボキシレート）を有している場合、カルボキシル基がア
ミド化またはエステル化されているものも本発明で用い
られるタンパク質に含まれる。この場合のエステルとし
ては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられ
る。さらに、本発明で用いられるタンパク質には、Ｎ末
端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が
保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ 1-6
アルカノイルなどのＣ1-6アシル基など）で保護されて
いるもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグルタ
ミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミ
ノ酸の側鎖上の置換基（例えば−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ
基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基な
ど）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基
などのＣ1-6アルカノイル基などのＣ1-6アシル基など）
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆ
る糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれる。
本発明で用いられるタンパク質の具体例としては、例え
ば、配列番号：１で表されるアミノ酸配列を含有するヒ
ト肝臓由来のタンパク質などがあげられる。
【００１０】本発明で用いられるタンパク質の部分ペプ
チドとしては、前記した本発明で用いられるタンパク質
の部分ペプチドであって、好ましくは、前記した本発明
で用いられるタンパク質と同様の性質を有するものであ
ればいずれのものでもよい。例えば、本発明で用いられ
るタンパク質の構成アミノ酸配列のうち少なくとも２０
個以上、好ましくは５０個以上、さらに好ましくは７０
個以上、より好ましくは１００個以上、最も好ましくは
２００個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが用
いられる。また、本発明で用いられる部分ペプチドは、
そのアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、
１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）の
アミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１また
は２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より好まし
くは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）
個）のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列に
１または２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より
好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜
５）個）のアミノ酸が挿入され、または、そのアミノ酸
配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程
度、より好ましくは数個、さらに好ましくは１〜５個程
度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよ
い。本発明の部分ペプチドとしては、配列番号：１で表
されるアミノ酸配列において例えば第176番目〜201番
目、第471番目〜491番目のアミノ酸配列が好ましい。
チドとしては、前記した本発明で用いられるタンパク質
の部分ペプチドであって、好ましくは、前記した本発明
で用いられるタンパク質と同様の性質を有するものであ
ればいずれのものでもよい。例えば、本発明で用いられ
るタンパク質の構成アミノ酸配列のうち少なくとも２０
個以上、好ましくは５０個以上、さらに好ましくは７０
個以上、より好ましくは１００個以上、最も好ましくは
２００個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが用
いられる。また、本発明で用いられる部分ペプチドは、
そのアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、
１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）の
アミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１また
は２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より好まし
くは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）
個）のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列に
１または２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より
好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜
５）個）のアミノ酸が挿入され、または、そのアミノ酸
配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程
度、より好ましくは数個、さらに好ましくは１〜５個程
度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよ
い。本発明の部分ペプチドとしては、配列番号：１で表
されるアミノ酸配列において例えば第176番目〜201番
目、第471番目〜491番目のアミノ酸配列が好ましい。
【００１１】また、本発明で用いられる部分ペプチドは
Ｃ末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカル
ボキシレート（−ＣＯＯ-）であるが、前記した本発明
で用いられるタンパク質のごとく、Ｃ末端がアミド（−
ＣＯＮＨ2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であっても
よい。さらに、本発明で用いられる部分ペプチドには、
前記した本発明で用いられるタンパク質と同様に、Ｃ末
端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を
有しているもの、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニ
ン残基）のアミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ
端側が生体内で切断され生成したグルタミン残基がピロ
グルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の
置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは
糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチド
なども含まれる。本発明で用いられる部分ペプチドは抗
体作成のための抗原としても用いることができる。たと
えば、後述する本発明の抗体を調製する目的には、例え
ば配列番号：１で表されるアミノ酸配列において第399
〜417番目, 第500〜649番目のアミノ酸配列を有するペ
プチドなどがあげられる。
Ｃ末端が通常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカル
ボキシレート（−ＣＯＯ-）であるが、前記した本発明
で用いられるタンパク質のごとく、Ｃ末端がアミド（−
ＣＯＮＨ2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であっても
よい。さらに、本発明で用いられる部分ペプチドには、
前記した本発明で用いられるタンパク質と同様に、Ｃ末
端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を
有しているもの、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニ
ン残基）のアミノ基が保護基で保護されているもの、Ｎ
端側が生体内で切断され生成したグルタミン残基がピロ
グルタミン酸化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の
置換基が適当な保護基で保護されているもの、あるいは
糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなどの複合ペプチド
なども含まれる。本発明で用いられる部分ペプチドは抗
体作成のための抗原としても用いることができる。たと
えば、後述する本発明の抗体を調製する目的には、例え
ば配列番号：１で表されるアミノ酸配列において第399
〜417番目, 第500〜649番目のアミノ酸配列を有するペ
プチドなどがあげられる。
【００１２】本発明で用いられるタンパク質または部分
ペプチドの塩としては、生理学的に許容される酸（例、
無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属塩）などと
の塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加
塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸
（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、
あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、
フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、
リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼ
ンスルホン酸）との塩などが用いられる。本発明で用い
られるタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその
塩は、前述したヒトや温血動物の細胞または組織から公
知のタンパク質の精製方法によって製造することもでき
るし、タンパク質をコードするＤＮＡを含有する形質転
換体を培養することによっても製造することができる。
また、後述のペプチド合成法に準じて製造することもで
きる。ヒトや哺乳動物の組織または細胞から製造する場
合、ヒトや哺乳動物の組織または細胞をホモジナイズし
た後、酸などで抽出を行ない、該抽出液を逆相クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィーなどのクロ
マトグラフィーを組み合わせることにより精製単離する
ことができる。
ペプチドの塩としては、生理学的に許容される酸（例、
無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属塩）などと
の塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加
塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸
（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、
あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、
フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、
リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼ
ンスルホン酸）との塩などが用いられる。本発明で用い
られるタンパク質もしくはその部分ペプチドまたはその
塩は、前述したヒトや温血動物の細胞または組織から公
知のタンパク質の精製方法によって製造することもでき
るし、タンパク質をコードするＤＮＡを含有する形質転
換体を培養することによっても製造することができる。
また、後述のペプチド合成法に準じて製造することもで
きる。ヒトや哺乳動物の組織または細胞から製造する場
合、ヒトや哺乳動物の組織または細胞をホモジナイズし
た後、酸などで抽出を行ない、該抽出液を逆相クロマト
グラフィー、イオン交換クロマトグラフィーなどのクロ
マトグラフィーを組み合わせることにより精製単離する
ことができる。
【００１３】本発明で用いられるタンパク質もしくは部
分ペプチドまたはその塩、またはそのアミド体の合成に
は、通常市販のタンパク質合成用樹脂を用いることがで
きる。そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル
樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹
脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジルア
ルコール樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、
PAM樹脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセト
アミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−
（2',4'-ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチル）フェ
ノキシ樹脂、４−（2',4'-ジメトキシフェニル−Fmocア
ミノエチル）フェノキシ樹脂などを挙げることができ
る。このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基
を適当に保護したアミノ酸を、目的とするタンパク質の
配列通りに、公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合
させる。反応の最後に樹脂からタンパク質または部分ペ
プチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、さらに
高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実施
し、目的のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはそれ
らのアミド体を取得する。上記した保護アミノ酸の縮合
に関しては、タンパク質合成に使用できる各種活性化試
薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類が
よい。カルボジイミド類としては、DCC、N,N'-ジイソプ
ロピルカルボジイミド、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミ
ノプロリル）カルボジイミドなどが用いられる。これら
による活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、HOBt,
HOOBt)とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかま
たは、対称酸無水物またはHOBtエステルあるいはHOOBt
エステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行な
った後に樹脂に添加することができる。
分ペプチドまたはその塩、またはそのアミド体の合成に
は、通常市販のタンパク質合成用樹脂を用いることがで
きる。そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル
樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹
脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジルア
ルコール樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、
PAM樹脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセト
アミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−
（2',4'-ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチル）フェ
ノキシ樹脂、４−（2',4'-ジメトキシフェニル−Fmocア
ミノエチル）フェノキシ樹脂などを挙げることができ
る。このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基
を適当に保護したアミノ酸を、目的とするタンパク質の
配列通りに、公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合
させる。反応の最後に樹脂からタンパク質または部分ペ
プチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、さらに
高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実施
し、目的のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはそれ
らのアミド体を取得する。上記した保護アミノ酸の縮合
に関しては、タンパク質合成に使用できる各種活性化試
薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類が
よい。カルボジイミド類としては、DCC、N,N'-ジイソプ
ロピルカルボジイミド、N-エチル-N'-(3-ジメチルアミ
ノプロリル）カルボジイミドなどが用いられる。これら
による活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、HOBt,
HOOBt)とともに保護アミノ酸を直接樹脂に添加するかま
たは、対称酸無水物またはHOBtエステルあるいはHOOBt
エステルとしてあらかじめ保護アミノ酸の活性化を行な
った後に樹脂に添加することができる。
【００１４】保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用
いられる溶媒としては、タンパク質縮合反応に使用しう
ることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例え
ば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ，Ｎ−ジメチル
アセトアミド，Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド
類、塩化メチレン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化
水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、
ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジ
ン，ジオキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル
類、アセトニトリル，プロピオニトリルなどのニトリル
類、酢酸メチル，酢酸エチルなどのエステル類あるいは
これらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はタ
ンパク質結合形成反応に使用され得ることが知られてい
る範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範
囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は
通常１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応
を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基
の脱離を行なうことなく縮合反応を繰り返すことにより
十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても
十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセ
チルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化
することによって、後の反応に影響を与えないようにす
ることができる。
いられる溶媒としては、タンパク質縮合反応に使用しう
ることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例え
ば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ，Ｎ−ジメチル
アセトアミド，Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド
類、塩化メチレン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化
水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、
ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジ
ン，ジオキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル
類、アセトニトリル，プロピオニトリルなどのニトリル
類、酢酸メチル，酢酸エチルなどのエステル類あるいは
これらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はタ
ンパク質結合形成反応に使用され得ることが知られてい
る範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範
囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は
通常１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応
を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基
の脱離を行なうことなく縮合反応を繰り返すことにより
十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても
十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセ
チルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化
することによって、後の反応に影響を与えないようにす
ることができる。
【００１５】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、Ｚ、Boc、ｔ−ペンチルオキシカルボニル、イソボ
ルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシ
カルボニル、Cl-Z、Br-Z、アダマンチルオキシカルボニ
ル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、２
−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノ
チオイル、Fmocなどが用いられる。カルボキシル基は、
例えば、アルキルエステル化（例えば、メチル、エチ
ル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シクロペンチル、
シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２
−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もしくは環状アル
キルエステル化）、アラルキルエステル化（例えば、ベ
ンジルエステル、４−ニトロベンジルエステル、４−メ
トキシベンジルエステル、４−クロロベンジルエステ
ル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシルエステル
化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、ｔ−ブト
キシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒドラジド化な
どによって保護することができる。セリンの水酸基は、
例えば、エステル化またはエーテル化によって保護する
ことができる。このエステル化に適する基としては、例
えば、アセチル基などの低級（Ｃ1-6）アルカノイル
基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジルオキシカ
ルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭酸から誘導
される基などが用いられる。また、エーテル化に適する
基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒドロピラニ
ル基、t-ブチル基などである。チロシンのフェノール性
水酸基の保護基としては、例えば、Bzl、Cl2-Bzl、２−
ニトロベンジル、Br-Z、ｔ−ブチルなどが用いられる。
ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えば、
Tos、４-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼンスルホニ
ル、DNP、ベンジルオキシメチル、Bum、Boc、Trt、Fmoc
などが用いられる。
ば、Ｚ、Boc、ｔ−ペンチルオキシカルボニル、イソボ
ルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシ
カルボニル、Cl-Z、Br-Z、アダマンチルオキシカルボニ
ル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、２
−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノ
チオイル、Fmocなどが用いられる。カルボキシル基は、
例えば、アルキルエステル化（例えば、メチル、エチ
ル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シクロペンチル、
シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、２
−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もしくは環状アル
キルエステル化）、アラルキルエステル化（例えば、ベ
ンジルエステル、４−ニトロベンジルエステル、４−メ
トキシベンジルエステル、４−クロロベンジルエステ
ル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシルエステル
化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド化、ｔ−ブト
キシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒドラジド化な
どによって保護することができる。セリンの水酸基は、
例えば、エステル化またはエーテル化によって保護する
ことができる。このエステル化に適する基としては、例
えば、アセチル基などの低級（Ｃ1-6）アルカノイル
基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジルオキシカ
ルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭酸から誘導
される基などが用いられる。また、エーテル化に適する
基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒドロピラニ
ル基、t-ブチル基などである。チロシンのフェノール性
水酸基の保護基としては、例えば、Bzl、Cl2-Bzl、２−
ニトロベンジル、Br-Z、ｔ−ブチルなどが用いられる。
ヒスチジンのイミダゾールの保護基としては、例えば、
Tos、４-メトキシ-2,3,6-トリメチルベンゼンスルホニ
ル、DNP、ベンジルオキシメチル、Bum、Boc、Trt、Fmoc
などが用いられる。
【００１６】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、2,4,5-トリクロロフェノール、2,4-ジニトロフェノ
ール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノー
ル、HONB、N-ヒドロキシスクシミド、N-ヒドロキシフタ
ルイミド、HOBt）とのエステル〕などが用いられる。原
料のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対
応するリン酸アミドが用いられる。保護基の除去（脱
離）方法としては、例えば、Ｐｄ−黒あるいはＰｄ-炭
素などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、
また、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオ
ロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれら
の混合液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルア
ミン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなど
による塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによ
る還元なども用いられる。上記酸処理による脱離反応
は、一般に約−２０℃〜４０℃の温度で行なわれるが、
酸処理においては、例えば、アニソール、フェノール、
チオアニソール、メタクレゾール、パラクレゾール、ジ
メチルスルフィド、1,4-ブタンジチオール、1,2-エタン
ジチオールなどのようなカチオン捕捉剤の添加が有効で
ある。また、ヒスチジンのイミダゾール保護基として用
いられる2,4-ジニトロフェニル基はチオフェノール処理
により除去され、トリプトファンのインドール保護基と
して用いられるホルミル基は上記の1,2-エタンジチオー
ル、1,4-ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による
脱保護以外に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニア
などによるアルカリ処理によっても除去される。
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、2,4,5-トリクロロフェノール、2,4-ジニトロフェノ
ール、シアノメチルアルコール、パラニトロフェノー
ル、HONB、N-ヒドロキシスクシミド、N-ヒドロキシフタ
ルイミド、HOBt）とのエステル〕などが用いられる。原
料のアミノ基の活性化されたものとしては、例えば、対
応するリン酸アミドが用いられる。保護基の除去（脱
離）方法としては、例えば、Ｐｄ−黒あるいはＰｄ-炭
素などの触媒の存在下での水素気流中での接触還元や、
また、無水フッ化水素、メタンスルホン酸、トリフルオ
ロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸あるいはこれら
の混合液などによる酸処理や、ジイソプロピルエチルア
ミン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピペラジンなど
による塩基処理、また液体アンモニア中ナトリウムによ
る還元なども用いられる。上記酸処理による脱離反応
は、一般に約−２０℃〜４０℃の温度で行なわれるが、
酸処理においては、例えば、アニソール、フェノール、
チオアニソール、メタクレゾール、パラクレゾール、ジ
メチルスルフィド、1,4-ブタンジチオール、1,2-エタン
ジチオールなどのようなカチオン捕捉剤の添加が有効で
ある。また、ヒスチジンのイミダゾール保護基として用
いられる2,4-ジニトロフェニル基はチオフェノール処理
により除去され、トリプトファンのインドール保護基と
して用いられるホルミル基は上記の1,2-エタンジチオー
ル、1,4-ブタンジチオールなどの存在下の酸処理による
脱保護以外に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニア
などによるアルカリ処理によっても除去される。
【００１７】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関
与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段
から適宜選択しうる。タンパク質または部分ペプチドの
アミド体を得る別の方法としては、例えば、まず、カル
ボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をアミド化し
て保護した後、アミノ基側にペプチド（タンパク質）鎖
を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖のＮ末端の
α−アミノ基の保護基のみを除いたタンパク質または部
分ペプチドとＣ末端のカルボキシル基の保護基のみを除
去したタンパク質または部分ペプチドとを製造し、これ
らのタンパク質またはペプチドを上記したような混合溶
媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については上記と同
様である。縮合により得られた保護タンパク質またはペ
プチドを精製した後、上記方法によりすべての保護基を
除去し、所望の粗タンパク質またはペプチドを得ること
ができる。この粗タンパク質またはペプチドは既知の各
種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥する
ことで所望のタンパク質またはペプチドのアミド体を得
ることができる。タンパク質またはペプチドのエステル
体を得るには、例えば、カルボキシ末端アミノ酸のα−
カルボキシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸
エステルとした後、タンパク質またはペプチドのアミド
体と同様にして、所望のタンパク質またはペプチドのエ
ステル体を得ることができる。
護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関
与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段
から適宜選択しうる。タンパク質または部分ペプチドの
アミド体を得る別の方法としては、例えば、まず、カル
ボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をアミド化し
て保護した後、アミノ基側にペプチド（タンパク質）鎖
を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖のＮ末端の
α−アミノ基の保護基のみを除いたタンパク質または部
分ペプチドとＣ末端のカルボキシル基の保護基のみを除
去したタンパク質または部分ペプチドとを製造し、これ
らのタンパク質またはペプチドを上記したような混合溶
媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については上記と同
様である。縮合により得られた保護タンパク質またはペ
プチドを精製した後、上記方法によりすべての保護基を
除去し、所望の粗タンパク質またはペプチドを得ること
ができる。この粗タンパク質またはペプチドは既知の各
種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥する
ことで所望のタンパク質またはペプチドのアミド体を得
ることができる。タンパク質またはペプチドのエステル
体を得るには、例えば、カルボキシ末端アミノ酸のα−
カルボキシル基を所望のアルコール類と縮合しアミノ酸
エステルとした後、タンパク質またはペプチドのアミド
体と同様にして、所望のタンパク質またはペプチドのエ
ステル体を得ることができる。
【００１８】本発明で用いられる部分ペプチドまたはそ
れらの塩は、公知のペプチドの合成法に従って、あるい
は本発明で用いられるタンパク質を適当なペプチダーゼ
で切断することによって製造することができる。ペプチ
ドの合成法としては、例えば、固相合成法、液相合成法
のいずれによっても良い。すなわち、本発明で用いられ
る部分ペプチドを構成し得る部分ペプチドもしくはアミ
ノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する
場合は保護基を脱離することにより目的のペプチドを製
造することができる。公知の縮合方法や保護基の脱離と
しては、例えば、以下の〜に記載された方法が挙げ
られる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptid
e), Academic Press, NewYork (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タン
パク質の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発、第14巻、ペプチド合
成、広川書店 また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留
・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー
・再結晶などを組み合わせて本発明で用いられる部分ペ
プチドを精製単離することができる。上記方法で得られ
る部分ペプチドが遊離体である場合は、公知の方法ある
いはそれに準じる方法によって適当な塩に変換すること
ができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法ある
いはそれに準じる方法によって遊離体または他の塩に変
換することができる。
れらの塩は、公知のペプチドの合成法に従って、あるい
は本発明で用いられるタンパク質を適当なペプチダーゼ
で切断することによって製造することができる。ペプチ
ドの合成法としては、例えば、固相合成法、液相合成法
のいずれによっても良い。すなわち、本発明で用いられ
る部分ペプチドを構成し得る部分ペプチドもしくはアミ
ノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物が保護基を有する
場合は保護基を脱離することにより目的のペプチドを製
造することができる。公知の縮合方法や保護基の脱離と
しては、例えば、以下の〜に記載された方法が挙げ
られる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptid
e), Academic Press, NewYork (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タン
パク質の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発、第14巻、ペプチド合
成、広川書店 また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留
・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー
・再結晶などを組み合わせて本発明で用いられる部分ペ
プチドを精製単離することができる。上記方法で得られ
る部分ペプチドが遊離体である場合は、公知の方法ある
いはそれに準じる方法によって適当な塩に変換すること
ができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方法ある
いはそれに準じる方法によって遊離体または他の塩に変
換することができる。
【００１９】本発明で用いられるタンパク質をコードす
るＤＮＡとしては、前述した本発明で用いられるタンパ
ク質をコードする塩基配列を含有するものであればいか
なるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノム
ＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮ
Ａ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、
合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに使用する
ベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミ
ド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前
記した細胞・組織よりtotalＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分
を調製したものを用いて直接Reverse Transcriptase Po
lymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-ＰＣＲ法と略称
する）によって増幅することもできる。本発明で用いら
れるタンパク質をコードするＤＮＡとしては、例えば、
配列番号：２で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、ま
たは配列番号：２で表される塩基配列とハイストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、
本発明で用いられるタンパク質と実質的に同質の性質を
有するタンパク質をコードするＤＮＡであれば何れのも
のでもよい。
るＤＮＡとしては、前述した本発明で用いられるタンパ
ク質をコードする塩基配列を含有するものであればいか
なるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノム
ＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮ
Ａ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、
合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに使用する
ベクターは、バクテリオファージ、プラスミド、コスミ
ド、ファージミドなどいずれであってもよい。また、前
記した細胞・組織よりtotalＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分
を調製したものを用いて直接Reverse Transcriptase Po
lymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-ＰＣＲ法と略称
する）によって増幅することもできる。本発明で用いら
れるタンパク質をコードするＤＮＡとしては、例えば、
配列番号：２で表される塩基配列を含有するＤＮＡ、ま
たは配列番号：２で表される塩基配列とハイストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、
本発明で用いられるタンパク質と実質的に同質の性質を
有するタンパク質をコードするＤＮＡであれば何れのも
のでもよい。
【００２０】配列番号：２で表される塩基配列とハイス
トリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡ
としては、例えば、配列番号：２で表される塩基配列と
約５０％以上、好ましくは約６０％以上、さらに好まし
くは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、特に
好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上
の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用い
られる。ハイブリダイゼーションは、公知の方法あるい
はそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニ
ング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al.,
Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法
などに従って行なうことができる。また、市販のライブ
ラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法
に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイス
トリンジェントな条件に従って行なうことができる。ハ
イストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃
度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭ
で、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃
の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温
度が約６５℃の場合が最も好ましい。より具体的には、
配列番号：１で表されるアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表さ
れる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
トリンジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡ
としては、例えば、配列番号：２で表される塩基配列と
約５０％以上、好ましくは約６０％以上、さらに好まし
くは約７０％以上、より好ましくは約８０％以上、特に
好ましくは約９０％以上、最も好ましくは約９５％以上
の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡなどが用い
られる。ハイブリダイゼーションは、公知の方法あるい
はそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・クローニ
ング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al.,
Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法
などに従って行なうことができる。また、市販のライブ
ラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法
に従って行なうことができる。より好ましくは、ハイス
トリンジェントな条件に従って行なうことができる。ハ
イストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリウム濃
度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０ｍＭ
で、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６５℃
の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭで温
度が約６５℃の場合が最も好ましい。より具体的には、
配列番号：１で表されるアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質をコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表さ
れる塩基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。
【００２１】本発明で用いられる部分ペプチドをコード
するＤＮＡとしては、前述した本発明で用いられる部分
ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであれば
いかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲ
ノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃ
ＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリ
ー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。本発明で用いられる
部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば、配
列番号：２で表される塩基配列を有するＤＮＡの一部分
を有するＤＮＡ、または配列番号：２で表される塩基配
列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズす
る塩基配列を含有し、本発明のタンパク質と実質的に同
質の活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡの一部
分を含有するＤＮＡなどが用いられる。配列番号：２で
表される塩基配列とハイブリダイズできるＤＮＡは、前
記と同意義を示す。ハイブリダイゼーションの方法およ
びハイストリンジェントな条件は前記と同様のものが用
いられる。
するＤＮＡとしては、前述した本発明で用いられる部分
ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであれば
いかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲ
ノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由来のｃ
ＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライブラリ
ー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。本発明で用いられる
部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば、配
列番号：２で表される塩基配列を有するＤＮＡの一部分
を有するＤＮＡ、または配列番号：２で表される塩基配
列とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズす
る塩基配列を含有し、本発明のタンパク質と実質的に同
質の活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡの一部
分を含有するＤＮＡなどが用いられる。配列番号：２で
表される塩基配列とハイブリダイズできるＤＮＡは、前
記と同意義を示す。ハイブリダイゼーションの方法およ
びハイストリンジェントな条件は前記と同様のものが用
いられる。
【００２２】本発明で用いられるタンパク質、部分ペプ
チド（以下、これらをコードするＤＮＡのクローニング
および発現の説明においては、これらを単に本発明のタ
ンパク質と略記する場合がある）を完全にコードするＤ
ＮＡのクローニングの手段としては、本発明のタンパク
質をコードする塩基配列の一部分を有する合成ＤＮＡプ
ライマーを用いてＰＣＲ法によって増幅するか、または
適当なベクターに組み込んだＤＮＡを本発明のタンパク
質の一部あるいは全領域をコードするＤＮＡ断片もしく
は合成ＤＮＡを用いて標識したものとのハイブリダイゼ
ーションによって選別することができる。ハイブリダイ
ゼーションの方法は、例えば、モレキュラー・クローニ
ング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al.,
Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法
などに従って行なうことができる。また、市販のライブ
ラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法
に従って行なうことができる。ＤＮＡの塩基配列の変換
は、ＰＣＲや公知のキット、例えば、MutanTM-superExp
ress Km（宝酒造（株））、MutanTM-K（宝酒造（株））
等を用いて、ODA-LAPCR法やGapped duplex法やKunkel法
等の公知の方法あるいはそれらに準じる方法に従って行
なうことができる。クローン化されたタンパク質をコー
ドするＤＮＡは目的によりそのまま、または所望により
制限酵素で消化したり、リンカーを付加したりして使用
することができる。該ＤＮＡはその５’末端側に翻訳開
始コドンとしてのＡＴＧを有し、また３’末端側には翻
訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有
していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コ
ドンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加する
こともできる。本発明のタンパク質の発現ベクターは、
例えば、（イ）本発明のタンパク質をコードするＤＮＡ
から目的とするＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ
断片を適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連
結することにより製造することができる。
チド（以下、これらをコードするＤＮＡのクローニング
および発現の説明においては、これらを単に本発明のタ
ンパク質と略記する場合がある）を完全にコードするＤ
ＮＡのクローニングの手段としては、本発明のタンパク
質をコードする塩基配列の一部分を有する合成ＤＮＡプ
ライマーを用いてＰＣＲ法によって増幅するか、または
適当なベクターに組み込んだＤＮＡを本発明のタンパク
質の一部あるいは全領域をコードするＤＮＡ断片もしく
は合成ＤＮＡを用いて標識したものとのハイブリダイゼ
ーションによって選別することができる。ハイブリダイ
ゼーションの方法は、例えば、モレキュラー・クローニ
ング（Molecular Cloning）２nd（J. Sambrook et al.,
Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の方法
などに従って行なうことができる。また、市販のライブ
ラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方法
に従って行なうことができる。ＤＮＡの塩基配列の変換
は、ＰＣＲや公知のキット、例えば、MutanTM-superExp
ress Km（宝酒造（株））、MutanTM-K（宝酒造（株））
等を用いて、ODA-LAPCR法やGapped duplex法やKunkel法
等の公知の方法あるいはそれらに準じる方法に従って行
なうことができる。クローン化されたタンパク質をコー
ドするＤＮＡは目的によりそのまま、または所望により
制限酵素で消化したり、リンカーを付加したりして使用
することができる。該ＤＮＡはその５’末端側に翻訳開
始コドンとしてのＡＴＧを有し、また３’末端側には翻
訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有
していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コ
ドンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加する
こともできる。本発明のタンパク質の発現ベクターは、
例えば、（イ）本発明のタンパク質をコードするＤＮＡ
から目的とするＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ
断片を適当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連
結することにより製造することができる。
【００２３】ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミ
ド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐ
ＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐ
Ａ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳ
Ｖ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。本発明で
用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用い
る宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなる
ものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場
合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、Ｌ
ＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ-ＴＫ
プロモーターなどが挙げられる。これらのうち、ＣＭＶ
（サイトメガロウイルス）プロモーター、ＳＲαプロモ
ーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア
属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモ
ーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロモーター、
ｌｐｐプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが、宿主が
バチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモーター、Ｓ
ＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主
が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプ
ロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーター
などが好ましい。宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘ
ドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーターなどが好まし
い。
ド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐ
ＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐ
Ａ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳ
Ｖ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。本発明で
用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用い
る宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなる
ものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場
合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、Ｌ
ＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ-ＴＫ
プロモーターなどが挙げられる。これらのうち、ＣＭＶ
（サイトメガロウイルス）プロモーター、ＳＲαプロモ
ーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア
属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモ
ーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロモーター、
ｌｐｐプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが、宿主が
バチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモーター、Ｓ
ＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主
が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプ
ロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーター
などが好ましい。宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘ
ドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーターなどが好まし
い。
【００２４】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（Ｍ
ＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐ
rと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子
（以下、Ｎｅｏrと略称する場合がある、Ｇ４１８耐
性）等が挙げられる。特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイ
ニーズハムスター細胞を用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マ
ーカーとして使用する場合、目的遺伝子をチミジンを含
まない培地によっても選択できる。また、必要に応じ
て、宿主に合ったシグナル配列を、本発明のタンパク質
のＮ端末側に付加する。宿主がエシェリヒア属菌である
場合は、PhoＡ・シグナル配列、OmpＡ・シグナル配列な
どが、宿主がバチルス属菌である場合は、α−アミラー
ゼ・シグナル配列、サブチリシン・シグナル配列など
が、宿主が酵母である場合は、ＭＦα・シグナル配列、
ＳＵＣ２・シグナル配列など、宿主が動物細胞である場
合には、インシュリン・シグナル配列、α−インターフ
ェロン・シグナル配列、抗体分子・シグナル配列などが
それぞれ利用できる。このようにして構築された本発明
のタンパク質をコードするＤＮＡを含有するベクターを
用いて、形質転換体を製造することができる。
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（Ｍ
ＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐ
rと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子
（以下、Ｎｅｏrと略称する場合がある、Ｇ４１８耐
性）等が挙げられる。特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイ
ニーズハムスター細胞を用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マ
ーカーとして使用する場合、目的遺伝子をチミジンを含
まない培地によっても選択できる。また、必要に応じ
て、宿主に合ったシグナル配列を、本発明のタンパク質
のＮ端末側に付加する。宿主がエシェリヒア属菌である
場合は、PhoＡ・シグナル配列、OmpＡ・シグナル配列な
どが、宿主がバチルス属菌である場合は、α−アミラー
ゼ・シグナル配列、サブチリシン・シグナル配列など
が、宿主が酵母である場合は、ＭＦα・シグナル配列、
ＳＵＣ２・シグナル配列など、宿主が動物細胞である場
合には、インシュリン・シグナル配列、α−インターフ
ェロン・シグナル配列、抗体分子・シグナル配列などが
それぞれ利用できる。このようにして構築された本発明
のタンパク質をコードするＤＮＡを含有するベクターを
用いて、形質転換体を製造することができる。
【００２５】宿主としては、例えば、エシェリヒア属
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞な
どが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、
例えば、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１
２・ＤＨ１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユー
エスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６０
巻，１６０(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・
アシッズ・リサーチ，（Nucleic Acids Research），９
巻，３０９(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オ
ブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal of Molecul
ar Biology）〕，１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ
１０１〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジ
ー，４１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネテ
ィックス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕な
どが用いられる。バチルス属菌としては、例えば、バチ
ルス・サブチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４
〔ジーン，２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１
〔ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal of
Biochemistry），９５巻，８７(１９８４)〕などが用
いられる。酵母としては、例えば、サッカロマイセス
セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，Ａ
Ｈ２２Ｒ-，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ
−１２、シゾサッカロマイセス ポンベ（Schizosaccha
romyces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３
６、ピキア パストリス（Pichia pastoris）ＫＭ７１
などが用いられる。
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞な
どが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、
例えば、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１
２・ＤＨ１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユー
エスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６０
巻，１６０(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・
アシッズ・リサーチ，（Nucleic Acids Research），９
巻，３０９(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オ
ブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal of Molecul
ar Biology）〕，１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ
１０１〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジ
ー，４１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネテ
ィックス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕な
どが用いられる。バチルス属菌としては、例えば、バチ
ルス・サブチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４
〔ジーン，２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１
〔ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal of
Biochemistry），９５巻，８７(１９８４)〕などが用
いられる。酵母としては、例えば、サッカロマイセス
セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，Ａ
Ｈ２２Ｒ-，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ
−１２、シゾサッカロマイセス ポンベ（Schizosaccha
romyces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３
６、ピキア パストリス（Pichia pastoris）ＫＭ７１
などが用いられる。
【００２６】昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡ
ｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodop
tera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia ni
の中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来のH
igh FiveTM細胞、Mamestra brassicae由来の細胞または
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイル
スがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（Bombyx mor
i N 細胞；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞
としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ
２１細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ（In V
ivo）,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。昆虫と
しては、例えば、カイコの幼虫などが用いられる〔前田
ら、ネイチャー（Nature），３１５巻，５９２(１９８
５)〕。動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ−
７，Ｖero，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以
下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニ
ーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆ
ｒ-）細胞と略記），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２
０，マウスミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細
胞などが用いられる。エシェリヒア属菌を形質転換する
には、例えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンジイズ・オブ・ザ・ユ
ーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６９
巻，２１１０(１９７２)やジーン（Gene），１７巻，１
０７(１９８２)などに記載の方法に従って行なうことが
できる。
ｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodop
tera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia ni
の中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来のH
igh FiveTM細胞、Mamestra brassicae由来の細胞または
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイル
スがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来株化細胞（Bombyx mor
i N 細胞；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ細胞
としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、Ｓｆ
２１細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ（In V
ivo）,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。昆虫と
しては、例えば、カイコの幼虫などが用いられる〔前田
ら、ネイチャー（Nature），３１５巻，５９２(１９８
５)〕。動物細胞としては、例えば、サル細胞ＣＯＳ−
７，Ｖero，チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以
下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニ
ーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆ
ｒ-）細胞と略記），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２
０，マウスミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細
胞などが用いられる。エシェリヒア属菌を形質転換する
には、例えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンジイズ・オブ・ザ・ユ
ーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６９
巻，２１１０(１９７２)やジーン（Gene），１７巻，１
０７(１９８２)などに記載の方法に従って行なうことが
できる。
【００２７】バチルス属菌を形質転換するには、例え
ば、モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティッ
クス（Molecular ＆ General Genetics），１６８巻，
１１１(１９７９)などに記載の方法に従って行なうこと
ができる。酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ
・イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymolog
y），１９４巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシ
ージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Na
tl. Acad. Sci. ＵＳＡ），７５巻，１９２９(１９７
８）などに記載の方法に従って行なうことができる。昆
虫細胞または昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ
／テクノロジー（Bio/Technology）,6, 47-55(1988)）
などに記載の方法に従って行なうことができる。動物細
胞を形質転換するには、例えば、細胞工学別冊８ 新細
胞工学実験プロトコール．２６３−２６７（１９９５）
（秀潤社発行）、ヴィロロジー（Virology），５２巻，
４５６(１９７３)に記載の方法に従って行なうことがで
きる。このようにして、タンパク質をコードするＤＮＡ
を含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体を
得ることができる。宿主がエシェリヒア属菌、バチルス
属菌である形質転換体を培養する際、培養に使用される
培地としては液体培地が適当であり、その中には該形質
転換体の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が
含有せしめられる。炭素源としては、例えば、グルコー
ス、デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源と
しては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーン
スチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大
豆粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物質、無
機物としては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素
ナトリウム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。ま
た、酵母エキス、ビタミン類、生長促進因子などを添加
してもよい。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。
ば、モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティッ
クス（Molecular ＆ General Genetics），１６８巻，
１１１(１９７９)などに記載の方法に従って行なうこと
ができる。酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ
・イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymolog
y），１９４巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシ
ージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Na
tl. Acad. Sci. ＵＳＡ），７５巻，１９２９(１９７
８）などに記載の方法に従って行なうことができる。昆
虫細胞または昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ
／テクノロジー（Bio/Technology）,6, 47-55(1988)）
などに記載の方法に従って行なうことができる。動物細
胞を形質転換するには、例えば、細胞工学別冊８ 新細
胞工学実験プロトコール．２６３−２６７（１９９５）
（秀潤社発行）、ヴィロロジー（Virology），５２巻，
４５６(１９７３)に記載の方法に従って行なうことがで
きる。このようにして、タンパク質をコードするＤＮＡ
を含有する発現ベクターで形質転換された形質転換体を
得ることができる。宿主がエシェリヒア属菌、バチルス
属菌である形質転換体を培養する際、培養に使用される
培地としては液体培地が適当であり、その中には該形質
転換体の生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が
含有せしめられる。炭素源としては、例えば、グルコー
ス、デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源と
しては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーン
スチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大
豆粕、バレイショ抽出液などの無機または有機物質、無
機物としては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素
ナトリウム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。ま
た、酵母エキス、ビタミン類、生長促進因子などを添加
してもよい。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。
【００２８】エシェリヒア属菌を培養する際の培地とし
ては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics），４３１−
４３３，Cold Spring Harbor Laboratory, New York１
９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを
効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリルア
クリル酸のような薬剤を加えることができる。宿主がエ
シェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約
３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加える
こともできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常
約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通
気や撹拌を加えることもできる。宿主が酵母である形質
転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホ
ールダー（Burkholder）最小培地〔Bostian, K. L.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），７７巻，４５０
５(１９８０)〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培
地〔Bitter, G. A. ら、プロシージングズ・オブ・ザ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ
・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳ
Ａ），８１巻，５３３０（１９８４）〕が挙げられる。
培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は
通常約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要
に応じて通気や撹拌を加える。宿主が昆虫細胞または昆
虫である形質転換体を培養する際、培地としては、Grac
e's Insect Medium（Grace, T.C.C.,ネイチャー（Natur
e）,195,788(1962)）に非動化した１０％ウシ血清等の
添加物を適宜加えたものなどが用いられる。培地のｐＨ
は約６．２〜６．４に調整するのが好ましい。培養は通
常約２７℃で約３〜５日間行ない、必要に応じて通気や
撹拌を加える。宿主が動物細胞である形質転換体を培養
する際、培地としては、例えば、約５〜２０％の胎児牛
血清を含むＭＥＭ培地〔サイエンス（Science），１２
２巻，５０１(１９５２)〕，ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジ
ー（Virology），８巻，３９６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ
１６４０培地〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・
メディカル・アソシエーション（The Journal of the A
merican Medical Association）１９９巻，５１９(１９
６７)〕，１９９培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソ
サイエティ・フォー・ザ・バイオロジカル・メディスン
（Proceeding ofthe Society for the Biological Medi
cine），７３巻，１(１９５０)〕などが用いられる。ｐ
Ｈは約６〜８であるのが好ましい。培養は通常約３０℃
〜４０℃で約１５〜６０時間行ない、必要に応じて通気
や撹拌を加える。以上のようにして、形質転換体の細胞
内、細胞膜または細胞外に本発明のタンパク質を生成せ
しめることができる。
ては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics），４３１−
４３３，Cold Spring Harbor Laboratory, New York１
９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを
効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリルア
クリル酸のような薬剤を加えることができる。宿主がエ
シェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約
３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加える
こともできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常
約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通
気や撹拌を加えることもできる。宿主が酵母である形質
転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホ
ールダー（Burkholder）最小培地〔Bostian, K. L.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），７７巻，４５０
５(１９８０)〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培
地〔Bitter, G. A. ら、プロシージングズ・オブ・ザ・
ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ
・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳ
Ａ），８１巻，５３３０（１９８４）〕が挙げられる。
培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は
通常約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要
に応じて通気や撹拌を加える。宿主が昆虫細胞または昆
虫である形質転換体を培養する際、培地としては、Grac
e's Insect Medium（Grace, T.C.C.,ネイチャー（Natur
e）,195,788(1962)）に非動化した１０％ウシ血清等の
添加物を適宜加えたものなどが用いられる。培地のｐＨ
は約６．２〜６．４に調整するのが好ましい。培養は通
常約２７℃で約３〜５日間行ない、必要に応じて通気や
撹拌を加える。宿主が動物細胞である形質転換体を培養
する際、培地としては、例えば、約５〜２０％の胎児牛
血清を含むＭＥＭ培地〔サイエンス（Science），１２
２巻，５０１(１９５２)〕，ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジ
ー（Virology），８巻，３９６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ
１６４０培地〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・
メディカル・アソシエーション（The Journal of the A
merican Medical Association）１９９巻，５１９(１９
６７)〕，１９９培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソ
サイエティ・フォー・ザ・バイオロジカル・メディスン
（Proceeding ofthe Society for the Biological Medi
cine），７３巻，１(１９５０)〕などが用いられる。ｐ
Ｈは約６〜８であるのが好ましい。培養は通常約３０℃
〜４０℃で約１５〜６０時間行ない、必要に応じて通気
や撹拌を加える。以上のようにして、形質転換体の細胞
内、細胞膜または細胞外に本発明のタンパク質を生成せ
しめることができる。
【００２９】上記培養物から本発明のタンパク質を分離
精製するには、例えば、下記の方法により行なうことが
できる。本発明のタンパク質を培養菌体あるいは細胞か
ら抽出するに際しては、培養後、公知の方法で菌体ある
いは細胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音
波、リゾチームおよび／または凍結融解などによって菌
体あるいは細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過により
タンパク質の粗抽出液を得る方法などが適宜用いられ
る。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどの蛋白質変
性剤や、トリトンＸ−１００TMなどの界面活性剤が含ま
れていてもよい。培養液中にタンパク質が分泌される場
合には、培養終了後、公知の方法で菌体あるいは細胞と
上清とを分離し、上清を集める。このようにして得られ
た培養上清、あるいは抽出液中に含まれるタンパク質の
精製は、公知の分離・精製法を適切に組み合わせて行な
うことができる。これらの公知の分離、精製法として
は、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法、透
析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差
を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーなどの
荷電の差を利用する方法、アフィニティークロマトグラ
フィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液
体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方
法、等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法
などが用いられる。
精製するには、例えば、下記の方法により行なうことが
できる。本発明のタンパク質を培養菌体あるいは細胞か
ら抽出するに際しては、培養後、公知の方法で菌体ある
いは細胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音
波、リゾチームおよび／または凍結融解などによって菌
体あるいは細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過により
タンパク質の粗抽出液を得る方法などが適宜用いられ
る。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどの蛋白質変
性剤や、トリトンＸ−１００TMなどの界面活性剤が含ま
れていてもよい。培養液中にタンパク質が分泌される場
合には、培養終了後、公知の方法で菌体あるいは細胞と
上清とを分離し、上清を集める。このようにして得られ
た培養上清、あるいは抽出液中に含まれるタンパク質の
精製は、公知の分離・精製法を適切に組み合わせて行な
うことができる。これらの公知の分離、精製法として
は、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方法、透
析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−ポリア
クリルアミドゲル電気泳動法などの主として分子量の差
を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィーなどの
荷電の差を利用する方法、アフィニティークロマトグラ
フィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相高速液
体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用する方
法、等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する方法
などが用いられる。
【００３０】かくして得られるタンパク質が遊離体で得
られた場合には、公知の方法あるいはそれに準じる方法
によって塩に変換することができ、逆に塩で得られた場
合には公知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊
離体または他の塩に変換することができる。なお、組換
え体が産生するタンパク質を、精製前または精製後に適
当な蛋白修飾酵素を作用させることにより、任意に修飾
を加えたり、ポリペプチドを部分的に除去することもで
きる。蛋白修飾酵素としては、例えば、トリプシン、キ
モトリプシン、アルギニルエンドペプチダーゼ、プロテ
インキナーゼ、グリコシダーゼなどが用いられる。かく
して生成する本発明のタンパク質の存在は、特異抗体を
用いたエンザイムイムノアッセイやウエスタンブロッテ
ィングなどにより測定することができる。
られた場合には、公知の方法あるいはそれに準じる方法
によって塩に変換することができ、逆に塩で得られた場
合には公知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊
離体または他の塩に変換することができる。なお、組換
え体が産生するタンパク質を、精製前または精製後に適
当な蛋白修飾酵素を作用させることにより、任意に修飾
を加えたり、ポリペプチドを部分的に除去することもで
きる。蛋白修飾酵素としては、例えば、トリプシン、キ
モトリプシン、アルギニルエンドペプチダーゼ、プロテ
インキナーゼ、グリコシダーゼなどが用いられる。かく
して生成する本発明のタンパク質の存在は、特異抗体を
用いたエンザイムイムノアッセイやウエスタンブロッテ
ィングなどにより測定することができる。
【００３１】本発明で用いられるタンパク質もしくは部
分ペプチドまたはその塩に対する抗体は、本発明で用い
られるタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩を
認識し得る抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体の何れであってもよい。本発明で用いられ
るタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩（以
下、抗体の説明においては、これらを単に本発明のタン
パク質と略記する場合がある）に対する抗体は、本発明
のタンパク質を抗原として用い、公知の抗体または抗血
清の製造法に従って製造することができる。 〔モノクローナル抗体の作製〕 （ａ）モノクロナール抗体産生細胞の作製 本発明のタンパク質は、温血動物に対して投与により抗
体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤と
ともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるた
め、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントア
ジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜６週毎に
１回ずつ、計２〜１０回程度行われる。用いられる温血
動物としては、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモッ
ト、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリが挙げら
れるが、マウスおよびラットが好ましく用いられる。モ
ノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、抗原で免
疫された温血動物、例えばマウスから抗体価の認められ
た個体を選択し最終免疫の２〜５日後に脾臓またはリン
パ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を同種ま
たは異種動物の骨髄腫細胞と融合させることにより、モ
ノクローナル抗体産生ハイブリドーマを調製することが
できる。抗血清中の抗体価の測定は、例えば、後記の標
識化タンパク質と抗血清とを反応させたのち、抗体に結
合した標識剤の活性を測定することにより行なうことが
できる。融合操作は既知の方法、例えば、ケーラーとミ
ルスタインの方法〔ネイチャー（Nature)、256、495 (1
975)〕に従い実施することができる。融合促進剤として
は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やセン
ダイウィルスなどが挙げられるが、好ましくはＰＥＧが
用いられる。
分ペプチドまたはその塩に対する抗体は、本発明で用い
られるタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩を
認識し得る抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体の何れであってもよい。本発明で用いられ
るタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩（以
下、抗体の説明においては、これらを単に本発明のタン
パク質と略記する場合がある）に対する抗体は、本発明
のタンパク質を抗原として用い、公知の抗体または抗血
清の製造法に従って製造することができる。 〔モノクローナル抗体の作製〕 （ａ）モノクロナール抗体産生細胞の作製 本発明のタンパク質は、温血動物に対して投与により抗
体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤と
ともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるた
め、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントア
ジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜６週毎に
１回ずつ、計２〜１０回程度行われる。用いられる温血
動物としては、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモッ
ト、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリが挙げら
れるが、マウスおよびラットが好ましく用いられる。モ
ノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、抗原で免
疫された温血動物、例えばマウスから抗体価の認められ
た個体を選択し最終免疫の２〜５日後に脾臓またはリン
パ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を同種ま
たは異種動物の骨髄腫細胞と融合させることにより、モ
ノクローナル抗体産生ハイブリドーマを調製することが
できる。抗血清中の抗体価の測定は、例えば、後記の標
識化タンパク質と抗血清とを反応させたのち、抗体に結
合した標識剤の活性を測定することにより行なうことが
できる。融合操作は既知の方法、例えば、ケーラーとミ
ルスタインの方法〔ネイチャー（Nature)、256、495 (1
975)〕に従い実施することができる。融合促進剤として
は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やセン
ダイウィルスなどが挙げられるが、好ましくはＰＥＧが
用いられる。
【００３２】骨髄腫細胞としては、例えば、ＮＳ−１、
Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−１などの温血動物の骨髄
腫細胞が挙げられるが、Ｐ３Ｕ１が好ましく用いられ
る。用いられる抗体産生細胞（脾臓細胞）数と骨髄腫細
胞数との好ましい比率は１：１〜２０：１程度であり、
ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００〜ＰＥＧ６０００）
が１０〜８０％程度の濃度で添加され、２０〜４０℃、
好ましくは３０〜３７℃で１〜１０分間インキュベート
することにより効率よく細胞融合を実施できる。モノク
ローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには
種々の方法が使用できるが、例えば、タンパク質抗原を
直接あるいは担体とともに吸着させた固相（例、マイク
ロプレート）にハイブリドーマ培養上清を添加し、次に
放射性物質や酵素などで標識した抗免疫グロブリン抗体
（細胞融合に用いられる細胞がマウスの場合、抗マウス
免疫グロブリン抗体が用いられる）またはプロテインＡ
を加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する
方法、抗免疫グロブリン抗体またはプロテインＡを吸着
させた固相にハイブリドーマ培養上清を添加し、放射性
物質や酵素などで標識したタンパク質を加え、固相に結
合したモノクローナル抗体を検出する方法などが挙げら
れる。モノクローナル抗体の選別は、公知あるいはそれ
に準じる方法に従って行なうことができる。通常ＨＡＴ
（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加
した動物細胞用培地で行なうことができる。選別および
育種用培地としては、ハイブリドーマが生育できるもの
ならばどのような培地を用いても良い。例えば、１〜２
０％、好ましくは１０〜２０％の牛胎児血清を含むＲＰ
ＭＩ １６４０培地、１〜１０％の牛胎児血清を含むＧ
ＩＴ培地（和光純薬工業（株））あるいはハイブリドー
マ培養用無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬
（株））などを用いることができる。培養温度は、通常
２０〜４０℃、好ましくは約３７℃である。培養時間
は、通常５日〜３週間、好ましくは１週間〜２週間であ
る。培養は、通常５％炭酸ガス下で行なうことができ
る。ハイブリドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清
中の抗体価の測定と同様にして測定できる。
Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−１などの温血動物の骨髄
腫細胞が挙げられるが、Ｐ３Ｕ１が好ましく用いられ
る。用いられる抗体産生細胞（脾臓細胞）数と骨髄腫細
胞数との好ましい比率は１：１〜２０：１程度であり、
ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００〜ＰＥＧ６０００）
が１０〜８０％程度の濃度で添加され、２０〜４０℃、
好ましくは３０〜３７℃で１〜１０分間インキュベート
することにより効率よく細胞融合を実施できる。モノク
ローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには
種々の方法が使用できるが、例えば、タンパク質抗原を
直接あるいは担体とともに吸着させた固相（例、マイク
ロプレート）にハイブリドーマ培養上清を添加し、次に
放射性物質や酵素などで標識した抗免疫グロブリン抗体
（細胞融合に用いられる細胞がマウスの場合、抗マウス
免疫グロブリン抗体が用いられる）またはプロテインＡ
を加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する
方法、抗免疫グロブリン抗体またはプロテインＡを吸着
させた固相にハイブリドーマ培養上清を添加し、放射性
物質や酵素などで標識したタンパク質を加え、固相に結
合したモノクローナル抗体を検出する方法などが挙げら
れる。モノクローナル抗体の選別は、公知あるいはそれ
に準じる方法に従って行なうことができる。通常ＨＡＴ
（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加
した動物細胞用培地で行なうことができる。選別および
育種用培地としては、ハイブリドーマが生育できるもの
ならばどのような培地を用いても良い。例えば、１〜２
０％、好ましくは１０〜２０％の牛胎児血清を含むＲＰ
ＭＩ １６４０培地、１〜１０％の牛胎児血清を含むＧ
ＩＴ培地（和光純薬工業（株））あるいはハイブリドー
マ培養用無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬
（株））などを用いることができる。培養温度は、通常
２０〜４０℃、好ましくは約３７℃である。培養時間
は、通常５日〜３週間、好ましくは１週間〜２週間であ
る。培養は、通常５％炭酸ガス下で行なうことができ
る。ハイブリドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清
中の抗体価の測定と同様にして測定できる。
【００３３】（ｂ）モノクロナール抗体の精製 モノクローナル抗体の分離精製は、公知の方法、例え
ば、免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アルコ
ール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換体
（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ過
法、抗原結合固相あるいはプロテインＡあるいはプロテ
インＧなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結合
を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行なう
ことができる。
ば、免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アルコ
ール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換体
（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ過
法、抗原結合固相あるいはプロテインＡあるいはプロテ
インＧなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結合
を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行なう
ことができる。
【００３４】〔ポリクローナル抗体の作製〕本発明のポ
リクローナル抗体は、公知あるいはそれに準じる方法に
従って製造することができる。例えば、免疫抗原（タン
パク質抗原）自体、あるいはそれとキャリアー蛋白質と
の複合体をつくり、上記のモノクローナル抗体の製造法
と同様に温血動物に免疫を行ない、該免疫動物から本発
明のタンパク質に対する抗体含有物を採取して、抗体の
分離精製を行なうことにより製造することができる。温
血動物を免疫するために用いられる免疫抗原とキャリア
ー蛋白質との複合体に関し、キャリアー蛋白質の種類お
よびキャリアーとハプテンとの混合比は、キャリアーに
架橋させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良くで
きれば、どの様なものをどの様な比率で架橋させてもよ
いが、例えば、ウシ血清アルブミンやウシサイログロブ
リン、ヘモシアニン等を重量比でハプテン１に対し、約
０．１〜２０、好ましくは約１〜５の割合でカプルさせ
る方法が用いられる。また、ハプテンとキャリアーのカ
プリングには、種々の縮合剤を用いることができるが、
グルタルアルデヒドやカルボジイミド、マレイミド活性
エステル、チオール基、ジチオビリジル基を含有する活
性エステル試薬等が用いられる。縮合生成物は、温血動
物に対して、抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは
担体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産
生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完
全フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は、
通常約２〜６週毎に１回ずつ、計約３〜１０回程度行な
われる。ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫され
た温血動物の血液、腹水など、好ましくは血液から採取
することができる。抗血清中のポリクローナル抗体価の
測定は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測
定できる。ポリクローナル抗体の分離精製は、上記のモ
ノクローナル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの
分離精製法に従って行なうことができる。
リクローナル抗体は、公知あるいはそれに準じる方法に
従って製造することができる。例えば、免疫抗原（タン
パク質抗原）自体、あるいはそれとキャリアー蛋白質と
の複合体をつくり、上記のモノクローナル抗体の製造法
と同様に温血動物に免疫を行ない、該免疫動物から本発
明のタンパク質に対する抗体含有物を採取して、抗体の
分離精製を行なうことにより製造することができる。温
血動物を免疫するために用いられる免疫抗原とキャリア
ー蛋白質との複合体に関し、キャリアー蛋白質の種類お
よびキャリアーとハプテンとの混合比は、キャリアーに
架橋させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良くで
きれば、どの様なものをどの様な比率で架橋させてもよ
いが、例えば、ウシ血清アルブミンやウシサイログロブ
リン、ヘモシアニン等を重量比でハプテン１に対し、約
０．１〜２０、好ましくは約１〜５の割合でカプルさせ
る方法が用いられる。また、ハプテンとキャリアーのカ
プリングには、種々の縮合剤を用いることができるが、
グルタルアルデヒドやカルボジイミド、マレイミド活性
エステル、チオール基、ジチオビリジル基を含有する活
性エステル試薬等が用いられる。縮合生成物は、温血動
物に対して、抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは
担体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産
生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完
全フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は、
通常約２〜６週毎に１回ずつ、計約３〜１０回程度行な
われる。ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫され
た温血動物の血液、腹水など、好ましくは血液から採取
することができる。抗血清中のポリクローナル抗体価の
測定は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測
定できる。ポリクローナル抗体の分離精製は、上記のモ
ノクローナル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの
分離精製法に従って行なうことができる。
【００３５】本発明で用いられるタンパク質または部分
ペプチドをコードするＤＮＡ（以下、アンチセンスヌク
レオチドの説明においては、これらのＤＮＡを本発明の
ＤＮＡと略記する場合がある）の塩基配列に相補的な、
または実質的に相補的な塩基配列を有するアンチセンス
ヌクレオチドとしては、本発明のＤＮＡの塩基配列に相
補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有し、該Ｄ
ＮＡの発現を抑制し得る作用を有するものであれば、い
ずれのアンチセンスヌクレオチドであってもよいが、ア
ンチセンスＤＮＡが好ましい。本発明のＤＮＡに実質的
に相補的な塩基配列とは、例えば、本発明のＤＮＡに相
補的な塩基配列（すなわち、本発明のＤＮＡの相補鎖）
の全塩基配列あるいは部分塩基配列と約７０％以上、好
ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、
最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列
などが挙げられる。特に、本発明のＤＮＡの相補鎖の全
塩基配列うち、本発明のタンパク質のＮ末端部位をコー
ドする部分の塩基配列（例えば、開始コドン付近の塩基
配列など）の相補鎖と約７０％以上、好ましくは約８０
％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは
約９５％以上の相同性を有するアンチセンスヌクレオチ
ドが好適である。具体的には、配列番号：２で表わされ
る塩基配列を有するＤＮＡの塩基配列に相補的な、もし
くは実質的に相補的な塩基配列、またはその一部分を有
するアンチセンスヌクレオチド、好ましくは例えば、配
列番号：２で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの塩基
配列に相補な塩基配列、またはその一部分を有するアン
チセンスヌクレオチドなどが挙げられる。アンチセンス
ヌクレオチドは通常、１０〜４０個程度、好ましくは１
５〜３０個程度の塩基から構成される。ヌクレアーゼな
どの加水分解酵素による分解を防ぐために、アンチセン
スＤＮＡを構成する各ヌクレオチドのりん酸残基（ホス
フェート）は、例えば、ホスホロチオエート、メチルホ
スホネート、ホスホロジチオネートなどの化学修飾りん
酸残基に置換されていてもよい。これらのアンチセンス
ヌクレオチドは、公知のＤＮＡ合成装置などを用いて製
造することができる。
ペプチドをコードするＤＮＡ（以下、アンチセンスヌク
レオチドの説明においては、これらのＤＮＡを本発明の
ＤＮＡと略記する場合がある）の塩基配列に相補的な、
または実質的に相補的な塩基配列を有するアンチセンス
ヌクレオチドとしては、本発明のＤＮＡの塩基配列に相
補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有し、該Ｄ
ＮＡの発現を抑制し得る作用を有するものであれば、い
ずれのアンチセンスヌクレオチドであってもよいが、ア
ンチセンスＤＮＡが好ましい。本発明のＤＮＡに実質的
に相補的な塩基配列とは、例えば、本発明のＤＮＡに相
補的な塩基配列（すなわち、本発明のＤＮＡの相補鎖）
の全塩基配列あるいは部分塩基配列と約７０％以上、好
ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、
最も好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列
などが挙げられる。特に、本発明のＤＮＡの相補鎖の全
塩基配列うち、本発明のタンパク質のＮ末端部位をコー
ドする部分の塩基配列（例えば、開始コドン付近の塩基
配列など）の相補鎖と約７０％以上、好ましくは約８０
％以上、より好ましくは約９０％以上、最も好ましくは
約９５％以上の相同性を有するアンチセンスヌクレオチ
ドが好適である。具体的には、配列番号：２で表わされ
る塩基配列を有するＤＮＡの塩基配列に相補的な、もし
くは実質的に相補的な塩基配列、またはその一部分を有
するアンチセンスヌクレオチド、好ましくは例えば、配
列番号：２で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの塩基
配列に相補な塩基配列、またはその一部分を有するアン
チセンスヌクレオチドなどが挙げられる。アンチセンス
ヌクレオチドは通常、１０〜４０個程度、好ましくは１
５〜３０個程度の塩基から構成される。ヌクレアーゼな
どの加水分解酵素による分解を防ぐために、アンチセン
スＤＮＡを構成する各ヌクレオチドのりん酸残基（ホス
フェート）は、例えば、ホスホロチオエート、メチルホ
スホネート、ホスホロジチオネートなどの化学修飾りん
酸残基に置換されていてもよい。これらのアンチセンス
ヌクレオチドは、公知のＤＮＡ合成装置などを用いて製
造することができる。
【００３６】以下に、本発明のタンパク質もしくは部分
ペプチドまたはその塩（以下、本発明のタンパク質と略
記する場合がある）、本発明のタンパク質または部分ペ
プチドをコードするＤＮＡ（以下、本発明のＤＮＡと略
記する場合がある）、本発明のタンパク質もしくは部分
ペプチドまたはその塩に対する抗体（以下、本発明の抗
体と略記する場合がある）、および本発明のＤＮＡのア
ンチセンスヌクレオチド（以下、本発明のアンチセンス
ヌクレオチドと略記する場合がある）の用途を説明す
る。
ペプチドまたはその塩（以下、本発明のタンパク質と略
記する場合がある）、本発明のタンパク質または部分ペ
プチドをコードするＤＮＡ（以下、本発明のＤＮＡと略
記する場合がある）、本発明のタンパク質もしくは部分
ペプチドまたはその塩に対する抗体（以下、本発明の抗
体と略記する場合がある）、および本発明のＤＮＡのア
ンチセンスヌクレオチド（以下、本発明のアンチセンス
ヌクレオチドと略記する場合がある）の用途を説明す
る。
【００３７】本発明のタンパク質の活性を阻害する化合
物もしくはその塩を含有する医薬は、薬物排出を抑制す
ることで、ガン細胞の薬剤耐性獲得を抑制することがで
きるので例えば、ガンなどの治療・予防剤として使用す
ることができる。また、本発明のタンパク質の活性を阻
害する化合物もしくはその塩を含有する医薬は、炎症メ
ディエーターの産生を抑制することができるので、喘息
や炎症性疾患などの治療・予防剤として使用することが
できる。一方、本発明のタンパク質の活性を促進する化
合物もしくはその塩を含有する医薬は、例えば毒物や異
物の排出や炎症メディエーターの産生を促進することが
できるので生体防御能を向上につながり、例えば、感染
症などの治療・予防剤として使用することができる。
物もしくはその塩を含有する医薬は、薬物排出を抑制す
ることで、ガン細胞の薬剤耐性獲得を抑制することがで
きるので例えば、ガンなどの治療・予防剤として使用す
ることができる。また、本発明のタンパク質の活性を阻
害する化合物もしくはその塩を含有する医薬は、炎症メ
ディエーターの産生を抑制することができるので、喘息
や炎症性疾患などの治療・予防剤として使用することが
できる。一方、本発明のタンパク質の活性を促進する化
合物もしくはその塩を含有する医薬は、例えば毒物や異
物の排出や炎症メディエーターの産生を促進することが
できるので生体防御能を向上につながり、例えば、感染
症などの治療・予防剤として使用することができる。
【００３８】〔１〕本発明のタンパク質が関与する各種
疾病の治療・予防剤 本発明のタンパク質は、薬物排出トランスポータとして
ガン細胞の薬剤耐性の獲得に寄与するとともに、薬物や
異物の排泄による生体防御機構の維持、さらにLTC4など
の炎症性メディエーターの産生に重要な役割を果たして
いる。したがって、本発明のタンパク質をコードするＤ
ＮＡに異常があったり、欠損している場合あるいは本発
明のタンパク質の発現量が減少している場合には、例え
ば、感染症などの種々の疾患が発症する。したがって、
本発明のタンパク質および本発明のＤＮＡは、例えば、
感染症などの疾患の治療・予防剤などの医薬として使用
することができる。例えば、生体内において本発明のタ
ンパク質が減少あるいは欠損しているために、薬物や異
物の排泄による生体防御機構が十分に、あるいは正常に
発揮されない患者がいる場合に、（イ）本発明のＤＮＡ
を該患者に投与し、生体内で本発明のタンパク質を発現
させることによって、（ロ）細胞に本発明のＤＮＡを挿
入し、本発明のタンパク質を発現させた後に、該細胞を
患者に移植することによって、または（ハ）本発明のタ
ンパク質を該患者に投与することなどによって、該患者
における本発明のタンパク質の役割を十分に、あるいは
正常に発揮させることができる。本発明のＤＮＡを上記
の治療・予防剤として使用する場合は、該ＤＮＡを単独
あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベク
ター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクタ
ーなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従っ
て、ヒトまたは温血動物に投与することができる。本発
明のＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のための
補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化
し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテー
テルによって投与できる。本発明のタンパク質を上記の
治療・予防剤として使用する場合は、少なくとも９０
％、好ましくは９５％以上、より好ましくは９８％以
上、さらに好ましくは９９％以上に精製されたものを使
用するのが好ましい。
疾病の治療・予防剤 本発明のタンパク質は、薬物排出トランスポータとして
ガン細胞の薬剤耐性の獲得に寄与するとともに、薬物や
異物の排泄による生体防御機構の維持、さらにLTC4など
の炎症性メディエーターの産生に重要な役割を果たして
いる。したがって、本発明のタンパク質をコードするＤ
ＮＡに異常があったり、欠損している場合あるいは本発
明のタンパク質の発現量が減少している場合には、例え
ば、感染症などの種々の疾患が発症する。したがって、
本発明のタンパク質および本発明のＤＮＡは、例えば、
感染症などの疾患の治療・予防剤などの医薬として使用
することができる。例えば、生体内において本発明のタ
ンパク質が減少あるいは欠損しているために、薬物や異
物の排泄による生体防御機構が十分に、あるいは正常に
発揮されない患者がいる場合に、（イ）本発明のＤＮＡ
を該患者に投与し、生体内で本発明のタンパク質を発現
させることによって、（ロ）細胞に本発明のＤＮＡを挿
入し、本発明のタンパク質を発現させた後に、該細胞を
患者に移植することによって、または（ハ）本発明のタ
ンパク質を該患者に投与することなどによって、該患者
における本発明のタンパク質の役割を十分に、あるいは
正常に発揮させることができる。本発明のＤＮＡを上記
の治療・予防剤として使用する場合は、該ＤＮＡを単独
あるいはレトロウイルスベクター、アデノウイルスベク
ター、アデノウイルスアソシエーテッドウイルスベクタ
ーなどの適当なベクターに挿入した後、常套手段に従っ
て、ヒトまたは温血動物に投与することができる。本発
明のＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進のための
補助剤などの生理学的に認められる担体とともに製剤化
し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテー
テルによって投与できる。本発明のタンパク質を上記の
治療・予防剤として使用する場合は、少なくとも９０
％、好ましくは９５％以上、より好ましくは９８％以
上、さらに好ましくは９９％以上に精製されたものを使
用するのが好ましい。
【００３９】本発明のタンパク質等は、例えば、必要に
応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、
マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水も
しくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶
液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用
できる。例えば、本発明のタンパク質等を生理学的に認
められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安
定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に
要求される単位用量形態で混和することによって製造す
ることができる。これら製剤における有効成分量は指示
された範囲の適当な用量が得られるようにするものであ
る。錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加
剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラ
ガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロー
スのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギ
ン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムの
ような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような
甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのよ
うな香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセル
である場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のよう
な液状担体を含有することができる。注射のための無菌
組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻
油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解また
は懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方するこ
とができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食
塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例え
ば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリ
ウムなど）などが挙げられ、適当な溶解補助剤、例え
ば、アルコール（例えば、エタノールなど）、ポリアル
コール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレン
グリコールなど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポ
リソルベート８０TM、ＨＣＯ−５０など）などと併用し
てもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油な
どが挙げられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベ
ンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤
（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液な
ど）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸
プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、
ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤な
どと配合してもよい。調製された注射液は、通常、適当
なアンプルに充填される。本発明のＤＮＡが挿入された
ベクターも上記と同様に製剤化され、通常、非経口的に
使用される。
応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、
マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水も
しくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶
液、または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用
できる。例えば、本発明のタンパク質等を生理学的に認
められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安
定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に
要求される単位用量形態で混和することによって製造す
ることができる。これら製剤における有効成分量は指示
された範囲の適当な用量が得られるようにするものであ
る。錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加
剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラ
ガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロー
スのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギ
ン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムの
ような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような
甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのよ
うな香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセル
である場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のよう
な液状担体を含有することができる。注射のための無菌
組成物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻
油、椰子油などのような天然産出植物油などを溶解また
は懸濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方するこ
とができる。注射用の水性液としては、例えば、生理食
塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例え
ば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリ
ウムなど）などが挙げられ、適当な溶解補助剤、例え
ば、アルコール（例えば、エタノールなど）、ポリアル
コール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレン
グリコールなど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポ
リソルベート８０TM、ＨＣＯ−５０など）などと併用し
てもよい。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油な
どが挙げられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベ
ンジルアルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤
（例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液な
ど）、無痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸
プロカインなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコールなど）、保存剤（例えば、
ベンジルアルコール、フェノールなど）、酸化防止剤な
どと配合してもよい。調製された注射液は、通常、適当
なアンプルに充填される。本発明のＤＮＡが挿入された
ベクターも上記と同様に製剤化され、通常、非経口的に
使用される。
【００４０】このようにして得られる製剤は、安全で低
毒性であるので、例えば、温血動物（例えば、ヒト、ラ
ット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブ
タ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーな
ど）に対して投与することができる。本発明のタンパク
質等の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなど
により差異はあるが、例えば、ガンの治療目的で本発明
のタンパク質等を経口投与する場合、一般的に成人（６
０ｋｇとして）においては、一日につき該タンパク質等
を約０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５
０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。
非経口的に投与する場合は、該タンパク質等の１回投与
量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例え
ば、ガンの治療目的で本発明のタンパク質等を注射剤の
形で成人（体重６０ｋｇとして）に投与する場合、一日
につき該タンパク質等を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好
ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約
０．１〜１０ｍｇ程度を患部に注射することにより投与
するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当
たりに換算した量を投与することができる。
毒性であるので、例えば、温血動物（例えば、ヒト、ラ
ット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブ
タ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーな
ど）に対して投与することができる。本発明のタンパク
質等の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなど
により差異はあるが、例えば、ガンの治療目的で本発明
のタンパク質等を経口投与する場合、一般的に成人（６
０ｋｇとして）においては、一日につき該タンパク質等
を約０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５
０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。
非経口的に投与する場合は、該タンパク質等の１回投与
量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例え
ば、ガンの治療目的で本発明のタンパク質等を注射剤の
形で成人（体重６０ｋｇとして）に投与する場合、一日
につき該タンパク質等を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好
ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約
０．１〜１０ｍｇ程度を患部に注射することにより投与
するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当
たりに換算した量を投与することができる。
【００４１】〔２〕疾病に対する医薬候補化合物のスク
リーニング 本発明のタンパク質は、本発明のタンパク質の活性を促
進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング
のための試薬として有用である。すなわち、本発明は、
（１）本発明のタンパク質を用いることを特徴とする本
発明のタンパク質の活性（例えば、薬物排出活性など）
を促進または阻害する化合物またはその塩（以下、それ
ぞれ促進剤、阻害剤と略記する場合がある）のスクリー
ニング方法を提供し、より具体的には、例えば、（２）
（ｉ）本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞
の薬物排出活性と（ii）本発明のタンパク質を産生する
能力を有する細胞と試験化合物の混合物の薬物排出活性
の比較を行なうことを特徴とする促進剤または阻害剤の
スクリーニング方法を提供する。具体的には、上記スク
リーニング方法においては、例えば、（ｉ）と（ii）の
場合において、薬物排出活性をビンクリスチンあるいは
コルヒチンなどの細胞内への蓄積を細胞障害活性で測定
し、薬物排出活性の指標として比較することを特徴とす
るものである。
リーニング 本発明のタンパク質は、本発明のタンパク質の活性を促
進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング
のための試薬として有用である。すなわち、本発明は、
（１）本発明のタンパク質を用いることを特徴とする本
発明のタンパク質の活性（例えば、薬物排出活性など）
を促進または阻害する化合物またはその塩（以下、それ
ぞれ促進剤、阻害剤と略記する場合がある）のスクリー
ニング方法を提供し、より具体的には、例えば、（２）
（ｉ）本発明のタンパク質を産生する能力を有する細胞
の薬物排出活性と（ii）本発明のタンパク質を産生する
能力を有する細胞と試験化合物の混合物の薬物排出活性
の比較を行なうことを特徴とする促進剤または阻害剤の
スクリーニング方法を提供する。具体的には、上記スク
リーニング方法においては、例えば、（ｉ）と（ii）の
場合において、薬物排出活性をビンクリスチンあるいは
コルヒチンなどの細胞内への蓄積を細胞障害活性で測定
し、薬物排出活性の指標として比較することを特徴とす
るものである。
【００４２】試験化合物としては、例えば、ペプチド、
タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産
物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが挙
げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよい
し、公知の化合物であってもよい。上記のスクリーニン
グ方法を実施するには、本発明のタンパク質を産生する
能力を有する細胞をスクリーニングに適したバッファー
に浮遊して調製する。バッファーには、ｐＨ約４〜１０
（望ましくは、ｐＨ約６〜８）のリン酸バッファー、ほ
う酸バッファーなどの、本発明のタンパク質のＮａ+イ
オンチャネル活性を阻害しないバッファーであればいず
れでもよい。本発明のタンパク質を産生する能力を有す
る細胞としては、例えば、前述した本発明のタンパク質
をコードするＤＮＡを含有するベクターで形質転換され
た宿主（形質転換体）が用いられる。宿主としては、例
えば、ＣＨＯ細胞などの動物細胞が好ましく用いられ
る。該スクリーニングには、例えば、前述の方法で培養
することによって、本発明のタンパク質を細胞膜上に発
現させた形質転換体が好ましく用いられる。
タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産
物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが挙
げられ、これら化合物は新規な化合物であってもよい
し、公知の化合物であってもよい。上記のスクリーニン
グ方法を実施するには、本発明のタンパク質を産生する
能力を有する細胞をスクリーニングに適したバッファー
に浮遊して調製する。バッファーには、ｐＨ約４〜１０
（望ましくは、ｐＨ約６〜８）のリン酸バッファー、ほ
う酸バッファーなどの、本発明のタンパク質のＮａ+イ
オンチャネル活性を阻害しないバッファーであればいず
れでもよい。本発明のタンパク質を産生する能力を有す
る細胞としては、例えば、前述した本発明のタンパク質
をコードするＤＮＡを含有するベクターで形質転換され
た宿主（形質転換体）が用いられる。宿主としては、例
えば、ＣＨＯ細胞などの動物細胞が好ましく用いられ
る。該スクリーニングには、例えば、前述の方法で培養
することによって、本発明のタンパク質を細胞膜上に発
現させた形質転換体が好ましく用いられる。
【００４３】本発明のタンパク質の薬物排出活性は、公
知の方法、例えば、J. Biol. Chem.271: 1708-1716, 19
96 に記載の方法あるいはそれに準じる方法に従って測
定することができる。例えば、上記（ii）の場合におけ
る薬物排出活性を、上記（ｉ）の場合に比べて、約２０
％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０
％以上促進する試験化合物を本発明のタンパク質の活性
を促進する化合物またはその塩として選択することがで
きる。また、例えば、上記（ii）の場合における薬物排
出活性を、上記（ｉ）の場合に比べて、約２０％以上、
好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻
害（または抑制）する試験化合物を本発明のタンパク質
の活性を阻害する化合物またはその塩として選択するこ
とができる。また、本発明のタンパク質MRP5ホモログ遺
伝子のプロモーター下流に分泌型アルカリホスファター
ゼ、ルシフェラーゼなどの遺伝子を挿入し、上記の各種
細胞に発現させ、該細胞に上記試験化合物を接触させた
場合における酵素活性を賦活化または阻害する化合物ま
たはその塩を探索することによって本発明のタンパク質
（MRP5ホモログ）の発現を促進または抑制（すなわち、
本発明のタンパク質の活性を促進または阻害）する化合
物またはその塩をスクリーニングすることができる。
知の方法、例えば、J. Biol. Chem.271: 1708-1716, 19
96 に記載の方法あるいはそれに準じる方法に従って測
定することができる。例えば、上記（ii）の場合におけ
る薬物排出活性を、上記（ｉ）の場合に比べて、約２０
％以上、好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０
％以上促進する試験化合物を本発明のタンパク質の活性
を促進する化合物またはその塩として選択することがで
きる。また、例えば、上記（ii）の場合における薬物排
出活性を、上記（ｉ）の場合に比べて、約２０％以上、
好ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻
害（または抑制）する試験化合物を本発明のタンパク質
の活性を阻害する化合物またはその塩として選択するこ
とができる。また、本発明のタンパク質MRP5ホモログ遺
伝子のプロモーター下流に分泌型アルカリホスファター
ゼ、ルシフェラーゼなどの遺伝子を挿入し、上記の各種
細胞に発現させ、該細胞に上記試験化合物を接触させた
場合における酵素活性を賦活化または阻害する化合物ま
たはその塩を探索することによって本発明のタンパク質
（MRP5ホモログ）の発現を促進または抑制（すなわち、
本発明のタンパク質の活性を促進または阻害）する化合
物またはその塩をスクリーニングすることができる。
【００４４】本発明のスクリーニング用キットは、本発
明で用いられるタンパク質もしくは部分ペプチドまたは
その塩、または本発明で用いられるタンパク質もしくは
部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を含有するも
のである。
明で用いられるタンパク質もしくは部分ペプチドまたは
その塩、または本発明で用いられるタンパク質もしくは
部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を含有するも
のである。
【００４５】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、上記した試験化合物、例えば、ペプチド、タンパ
ク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細
胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから
選ばれた化合物またはその塩であり、本発明のタンパク
質の活性（例、薬物排出活性など）を促進または阻害す
る化合物またはその塩である。該化合物の塩としては、
前記した本発明のタンパク質の塩と同様のものが用いら
れる。本発明のタンパク質の活性を促進する化合物また
はその塩は、例えば、感染症に対する治療・予防剤など
の医薬として有用である。また、本発明のタンパク質の
活性を阻害する化合物またはその塩は、例えば、ガンに
対する治療・予防剤などの医薬として有用である。
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、上記した試験化合物、例えば、ペプチド、タンパ
ク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細
胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから
選ばれた化合物またはその塩であり、本発明のタンパク
質の活性（例、薬物排出活性など）を促進または阻害す
る化合物またはその塩である。該化合物の塩としては、
前記した本発明のタンパク質の塩と同様のものが用いら
れる。本発明のタンパク質の活性を促進する化合物また
はその塩は、例えば、感染症に対する治療・予防剤など
の医薬として有用である。また、本発明のタンパク質の
活性を阻害する化合物またはその塩は、例えば、ガンに
対する治療・予防剤などの医薬として有用である。
【００４６】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
を上述の治療・予防剤として使用する場合、常套手段に
従って製剤化することができる。例えば、錠剤、カプセ
ル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶
液、懸濁液剤などとすることができる。このようにして
得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒト
または温血動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒ
ツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チ
ンパンジーなど）に対して経口的にまたは非経口的に投
与することができる。該化合物またはその塩の投与量
は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどに
より差異はあるが、例えば、ガン治療の目的で本発明の
タンパク質の活性を促進する化合物またはその塩を経口
投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）に
おいては、一日につき該化合物またはその塩を約０.１
〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好
ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与
する場合は、該化合物またはその塩の１回投与量は投与
対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、ガン
治療の目的で本発明のタンパク質の活性を促進する化合
物またはその塩を注射剤の形で通常成人（体重６０ｋｇ
として）に投与する場合、一日につき該化合物またはそ
の塩を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１
〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程
度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動
物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与す
ることができる。
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
を上述の治療・予防剤として使用する場合、常套手段に
従って製剤化することができる。例えば、錠剤、カプセ
ル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶
液、懸濁液剤などとすることができる。このようにして
得られる製剤は安全で低毒性であるので、例えば、ヒト
または温血動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒ
ツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チ
ンパンジーなど）に対して経口的にまたは非経口的に投
与することができる。該化合物またはその塩の投与量
は、その作用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどに
より差異はあるが、例えば、ガン治療の目的で本発明の
タンパク質の活性を促進する化合物またはその塩を経口
投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）に
おいては、一日につき該化合物またはその塩を約０.１
〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好
ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与
する場合は、該化合物またはその塩の１回投与量は投与
対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、ガン
治療の目的で本発明のタンパク質の活性を促進する化合
物またはその塩を注射剤の形で通常成人（体重６０ｋｇ
として）に投与する場合、一日につき該化合物またはそ
の塩を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１
〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程
度を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動
物の場合も、体重６０ｋｇ当たりに換算した量を投与す
ることができる。
【００４７】〔３〕本発明のタンパク質、その部分ペプ
チドまたはその塩の定量 本発明のタンパク質に対する抗体（以下、本発明の抗体
と略記する場合がある）は、本発明のタンパク質を特異
的に認識することができるので、被検液中の本発明のタ
ンパク質の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定
量などに使用することができる。すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化された本発
明のタンパク質とを競合的に反応させ、該抗体に結合し
た標識化された本発明のタンパク質の割合を測定するこ
とを特徴とする被検液中の本発明のタンパク質の定量
法、および（ii）被検液と担体上に不溶化した本発明の
抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時ある
いは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の
活性を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタ
ンパク質の定量法を提供する。上記（ii）の定量法にお
いては、一方の抗体が本発明のタンパク質のＮ端部を認
識する抗体で、他方の抗体が本発明のタンパク質のＣ端
部に反応する抗体であることが望ましい。
チドまたはその塩の定量 本発明のタンパク質に対する抗体（以下、本発明の抗体
と略記する場合がある）は、本発明のタンパク質を特異
的に認識することができるので、被検液中の本発明のタ
ンパク質の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定
量などに使用することができる。すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化された本発
明のタンパク質とを競合的に反応させ、該抗体に結合し
た標識化された本発明のタンパク質の割合を測定するこ
とを特徴とする被検液中の本発明のタンパク質の定量
法、および（ii）被検液と担体上に不溶化した本発明の
抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時ある
いは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の
活性を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタ
ンパク質の定量法を提供する。上記（ii）の定量法にお
いては、一方の抗体が本発明のタンパク質のＮ端部を認
識する抗体で、他方の抗体が本発明のタンパク質のＣ端
部に反応する抗体であることが望ましい。
【００４８】また、本発明のタンパク質に対するモノク
ローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体と称
する場合がある）を用いて本発明のタンパク質の定量を
行なえるほか、組織染色等による検出を行なうこともで
きる。これらの目的には、抗体分子そのものを用いても
よく、また、抗体分子のＦ(ａｂ')2 、Ｆａｂ'、あるい
はＦａｂ画分を用いてもよい。本発明の抗体を用いる本
発明のタンパク質の定量法は、特に制限されるべきもの
ではなく、被測定液中の抗原量（例えば、タンパク質
量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の
量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知
量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算
出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよ
い。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリッ
ク法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感
度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるの
が特に好ましい。標識物質を用いる測定法に用いられる
標識剤としては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光
物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素とし
ては、例えば、〔125Ｉ〕、〔131Ｉ〕、〔3Ｈ〕、〔14
Ｃ〕などが用いられる。上記酵素としては、安定で比活
性の大きなものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダ
ーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファター
ゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用い
られる。蛍光物質としては、例えば、フルオレスカミ
ン、フルオレッセンイソチオシアネートなどが用いられ
る。発光物質としては、例えば、ルミノール、ルミノー
ル誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられ
る。さらに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオ
チン−アビジン系を用いることもできる。
ローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体と称
する場合がある）を用いて本発明のタンパク質の定量を
行なえるほか、組織染色等による検出を行なうこともで
きる。これらの目的には、抗体分子そのものを用いても
よく、また、抗体分子のＦ(ａｂ')2 、Ｆａｂ'、あるい
はＦａｂ画分を用いてもよい。本発明の抗体を用いる本
発明のタンパク質の定量法は、特に制限されるべきもの
ではなく、被測定液中の抗原量（例えば、タンパク質
量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の
量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知
量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算
出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよ
い。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリッ
ク法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感
度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるの
が特に好ましい。標識物質を用いる測定法に用いられる
標識剤としては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光
物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素とし
ては、例えば、〔125Ｉ〕、〔131Ｉ〕、〔3Ｈ〕、〔14
Ｃ〕などが用いられる。上記酵素としては、安定で比活
性の大きなものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダ
ーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファター
ゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用い
られる。蛍光物質としては、例えば、フルオレスカミ
ン、フルオレッセンイソチオシアネートなどが用いられ
る。発光物質としては、例えば、ルミノール、ルミノー
ル誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられ
る。さらに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオ
チン−アビジン系を用いることもできる。
【００４９】抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物
理吸着を用いてもよく、また通常タンパク質あるいは酵
素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用
いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキス
トラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレ
ン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、ある
いはガラス等が挙げられる。サンドイッチ法においては
不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応
させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノ
クローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化
担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の
本発明のタンパク質量を定量することができる。１次反
応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行な
ってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤
および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができ
る。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、
固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ず
しも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等
の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。本
発明のサンドイッチ法による本発明のタンパク質の測定
法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明
のモノクローナル抗体は、本発明のタンパク質の結合す
る部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわ
ち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例え
ば、２次反応で用いられる抗体が、本発明のタンパク質
のＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体
は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗
体が用いられる。
理吸着を用いてもよく、また通常タンパク質あるいは酵
素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用
いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキス
トラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレ
ン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、ある
いはガラス等が挙げられる。サンドイッチ法においては
不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応
させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノ
クローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化
担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の
本発明のタンパク質量を定量することができる。１次反
応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行な
ってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤
および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができ
る。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、
固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ず
しも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等
の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。本
発明のサンドイッチ法による本発明のタンパク質の測定
法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明
のモノクローナル抗体は、本発明のタンパク質の結合す
る部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわ
ち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例え
ば、２次反応で用いられる抗体が、本発明のタンパク質
のＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体
は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗
体が用いられる。
【００５０】本発明のモノクローナル抗体をサンドイッ
チ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメト
リック法あるいはネフロメトリーなどに用いることがで
きる。競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体
に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原
(Ｆ)と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ
／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液
中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶
性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコール、
前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、およ
び、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるいは、
第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗
体を用いる固相化法とが用いられる。イムノメトリック
法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識
化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離する
か、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体と
を反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体
を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。次
に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を
定量する。また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは
溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の量
を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈
降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用する
レーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。
チ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメト
リック法あるいはネフロメトリーなどに用いることがで
きる。競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体
に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原
(Ｆ)と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し（Ｂ
／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被検液
中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として可溶
性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコール、
前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、およ
び、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるいは、
第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相化抗
体を用いる固相化法とが用いられる。イムノメトリック
法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の標識
化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離する
か、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗体と
を反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化抗体
を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。次
に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量を
定量する。また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるいは
溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の量
を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の沈
降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用する
レーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。
【００５１】これら個々の免疫学的測定法を本発明の定
量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明のタンパク質の測定系を構築すればよい。これらの一
般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参
照することができる。例えば、入江 寛編「ラジオイム
ノアッセイ〕（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛編
「続ラジオイムノアッセイ〕（講談社、昭和５４年発
行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭
和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第
２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunochem
ical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochem
ical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mono
clonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie
s))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照する
ことができる。以上のようにして、本発明の抗体を用い
ることによって、本発明のタンパク質を感度良く定量す
ることができる。さらには、本発明の抗体を用いて本発
明のタンパク質の濃度を定量することによって、（１）
本発明のタンパク質の濃度の減少が検出された場合、例
えば、感染症などに対する抵抗性が低いと診断すること
ができる。（２）反対に、例えば、ガン患者において、
本発明のタンパク質の濃度の上昇が検出された場合、ガ
ンの薬物治療に耐性を示す可能性が高いと診断すること
が出来る。また、本発明の抗体は、体液や組織などの被
検体中に存在する本発明のタンパク質を検出するために
使用することができる。また、本発明のタンパク質を精
製するために使用する抗体カラムの作製、精製時の各分
画中の本発明のタンパク質の検出、被検細胞内における
本発明のタンパク質の挙動の分析などのために使用する
ことができる。
量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明のタンパク質の測定系を構築すればよい。これらの一
般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参
照することができる。例えば、入江 寛編「ラジオイム
ノアッセイ〕（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛編
「続ラジオイムノアッセイ〕（講談社、昭和５４年発
行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭
和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第
２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunochem
ical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochem
ical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mono
clonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie
s))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照する
ことができる。以上のようにして、本発明の抗体を用い
ることによって、本発明のタンパク質を感度良く定量す
ることができる。さらには、本発明の抗体を用いて本発
明のタンパク質の濃度を定量することによって、（１）
本発明のタンパク質の濃度の減少が検出された場合、例
えば、感染症などに対する抵抗性が低いと診断すること
ができる。（２）反対に、例えば、ガン患者において、
本発明のタンパク質の濃度の上昇が検出された場合、ガ
ンの薬物治療に耐性を示す可能性が高いと診断すること
が出来る。また、本発明の抗体は、体液や組織などの被
検体中に存在する本発明のタンパク質を検出するために
使用することができる。また、本発明のタンパク質を精
製するために使用する抗体カラムの作製、精製時の各分
画中の本発明のタンパク質の検出、被検細胞内における
本発明のタンパク質の挙動の分析などのために使用する
ことができる。
【００５２】〔４〕遺伝子診断剤 本発明のＤＮＡは、例えば、プローブとして使用するこ
とにより、ヒトまたは温血動物（例えば、ラット、マウ
ス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、
ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）における
本発明のタンパク質またはその部分ペプチドをコードす
るＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出す
ることができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡ
の損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたは
ｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤と
して有用である。本発明のＤＮＡを用いる上記の遺伝子
診断は、例えば、公知のノーザンハイブリダイゼーショ
ンやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Genomics），
第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プロシージ
ングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サ
イエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Proceedings of t
heNational Academy of Sciences of the United State
s of America），第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１
９８９年））などにより実施することができる。例え
ば、ガン患者において、ノーザンハイブリダイゼーショ
ンにより発現増加が検出された場合、ガンの薬物治療に
耐性を示す可能性が高いと診断することが出来る。反対
に、発現低下が検出された場合やＰＣＲ−ＳＳＣＰ法に
よりＤＮＡの突然変異が検出された場合は、例えば、感
染症などに対する抵抗性が低いと診断することができ
る。
とにより、ヒトまたは温血動物（例えば、ラット、マウ
ス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、
ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）における
本発明のタンパク質またはその部分ペプチドをコードす
るＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出す
ることができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡ
の損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたは
ｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤と
して有用である。本発明のＤＮＡを用いる上記の遺伝子
診断は、例えば、公知のノーザンハイブリダイゼーショ
ンやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Genomics），
第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プロシージ
ングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サ
イエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Proceedings of t
heNational Academy of Sciences of the United State
s of America），第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１
９８９年））などにより実施することができる。例え
ば、ガン患者において、ノーザンハイブリダイゼーショ
ンにより発現増加が検出された場合、ガンの薬物治療に
耐性を示す可能性が高いと診断することが出来る。反対
に、発現低下が検出された場合やＰＣＲ−ＳＳＣＰ法に
よりＤＮＡの突然変異が検出された場合は、例えば、感
染症などに対する抵抗性が低いと診断することができ
る。
【００５３】〔５〕アンチセンスヌクレオチドを含有す
る医薬 本発明のＤＮＡに相補的に結合し、該ＤＮＡの発現を抑
制することができる本発明のアンチセンスヌクレオチド
は低毒性であり、生体内における本発明のタンパク質ま
たは本発明のＤＮＡの機能（例、薬物排出活性）を抑制
することができるので、例えば、ガン、炎症性疾患など
の治療・予防剤として使用することができる。上記アン
チセンスヌクレオチドを上記の治療・予防剤として使用
する場合、公知の方法に従って製剤化し、投与すること
ができる。例えば、該アンチセンスヌクレオチドを用い
る場合、該アンチセンスヌクレオチドを単独あるいはレ
トロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデ
ノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適
当なベクターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトま
たは哺乳動物（例、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウ
シ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して経口的または非経
口的に投与することができる。該アンチセンスヌクレオ
チドは、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤
などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺
伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルに
よって投与できる。該アンチセンスヌクレオチドの投与
量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異
はあるが、例えば、ガンの治療の目的で本発明のアンチ
センスヌクレオチドを肝臓に局所投与する場合、一般的
に成人（体重６０ｋｇ）においては、一日につき該アン
チセンスヌクレオチドを約０．１〜１００ｍｇ投与す
る。さらに、該アンチセンスヌクレオチドは、組織や細
胞における本発明のＤＮＡの存在やその発現状況を調べ
るための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用
することもできる。
る医薬 本発明のＤＮＡに相補的に結合し、該ＤＮＡの発現を抑
制することができる本発明のアンチセンスヌクレオチド
は低毒性であり、生体内における本発明のタンパク質ま
たは本発明のＤＮＡの機能（例、薬物排出活性）を抑制
することができるので、例えば、ガン、炎症性疾患など
の治療・予防剤として使用することができる。上記アン
チセンスヌクレオチドを上記の治療・予防剤として使用
する場合、公知の方法に従って製剤化し、投与すること
ができる。例えば、該アンチセンスヌクレオチドを用い
る場合、該アンチセンスヌクレオチドを単独あるいはレ
トロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデ
ノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適
当なベクターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトま
たは哺乳動物（例、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウ
シ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して経口的または非経
口的に投与することができる。該アンチセンスヌクレオ
チドは、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤
などの生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺
伝子銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルに
よって投与できる。該アンチセンスヌクレオチドの投与
量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異
はあるが、例えば、ガンの治療の目的で本発明のアンチ
センスヌクレオチドを肝臓に局所投与する場合、一般的
に成人（体重６０ｋｇ）においては、一日につき該アン
チセンスヌクレオチドを約０．１〜１００ｍｇ投与す
る。さらに、該アンチセンスヌクレオチドは、組織や細
胞における本発明のＤＮＡの存在やその発現状況を調べ
るための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用
することもできる。
【００５４】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Commission on Biochemical Nomenclature による略号
あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであ
り、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体
があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すもの
とする。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Commission on Biochemical Nomenclature による略号
あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであ
り、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体
があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すもの
とする。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸
【００５５】また、本明細書中で繁用される置換基、保
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキサミド基 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Cl2-Bzl ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ− １,２,３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド ＤＣＣ ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキサミド基 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Cl2-Bzl ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ− １,２,３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド ＤＣＣ ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
【００５６】本願明細書の配列表の配列番号は、以下の
配列を示す。 〔配列番号：１〕ヒトTCH002タンパク質のアミノ酸配列
を示す。 〔配列番号：２〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列
を有するTCH002タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配
列を示す。
配列を示す。 〔配列番号：１〕ヒトTCH002タンパク質のアミノ酸配列
を示す。 〔配列番号：２〕配列番号：１で表されるアミノ酸配列
を有するTCH002タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配
列を示す。
【００５７】
【発明の効果】配列番号：１で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するタン
パク質は抗ガン剤等の薬剤耐性の診断マーカー等として
有用であり、該タンパク質を用いるスクリーニング法に
より得られる該タンパク質の活性を促進または阻害する
化合物は、例えば、ガン、感染症、喘息、炎症性疾患な
どの疾病の予防・治療剤として使用することができる。
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を有するタン
パク質は抗ガン剤等の薬剤耐性の診断マーカー等として
有用であり、該タンパク質を用いるスクリーニング法に
より得られる該タンパク質の活性を促進または阻害する
化合物は、例えば、ガン、感染症、喘息、炎症性疾患な
どの疾病の予防・治療剤として使用することができる。
【００５８】
【配列表】 <110> Takeda Chemical Industries, Ltd. <120> Novel Protein and its DNA <130> P2001-009 <160> 2 <210> 1 <211> 1238 <212> PRT <213> Human <400> 1 Met Thr Arg Lys Arg Thr Tyr Trp Val Pro Asn Ser Ser Gly Gly Leu 5 10 15 Val Asn Arg Gly Ile Asp Ile Gly Asp Asp Met Val Ser Gly Leu Ile 20 25 30 Tyr Pro Leu Asp Asn Ala Gly Leu Phe Ser Tyr Leu Thr Val Ser Trp 35 40 45 Leu Thr Pro Leu Met Ile Gln Ser Leu Arg Ser Arg Leu Asp Glu Asn 50 55 60 Thr Ile Pro Pro Leu Ser Val His Asp Ala Ser Asp Lys Asn Val Gln 65 70 75 80 Arg Leu His Arg Leu Trp Glu Glu Glu Val Ser Arg Arg Gly Ile Glu 85 90 95 Lys Ala Ser Val Leu Leu Val Met Leu Arg Phe Gln Arg Thr Arg Leu 100 105 110 Ile Phe Asp Ala Leu Leu Gly Ile Cys Phe Cys Ile Ala Ser Val Leu 115 120 125 Gly Pro Ile Leu Ile Ile Pro Lys Ile Leu Glu Tyr Ser Glu Glu Gln 130 135 140 Leu Gly Asn Val Val His Gly Val Gly Leu Cys Phe Ala Leu Phe Leu 145 150 155 160 Ser Glu Cys Val Lys Ser Leu Ser Phe Ser Ser Ser Trp Ile Ile Asn 165 170 175 Gln Arg Thr Ala Ile Arg Phe Arg Ala Ala Val Ser Ser Phe Ala Phe 180 185 190 Glu Lys Leu Ile Gln Phe Lys Ser Val Ile His Ile Thr Ser Gly Glu 195 200 205 Gly Gly Asp Ile Cys Ala His Gln Leu Ala Val Leu Gln Ala Ile Ser 210 215 220 Phe Phe Thr Gly Asp Val Asn Tyr Leu Phe Glu Gly Val Phe Met Thr 225 230 235 240 Arg Met Ala Val Lys Ala Gln His His Thr Ser Glu Val Ser Asp Gln 245 250 255 Arg Ile Arg Val Thr Ser Glu Val Leu Thr Cys Ile Lys Leu Ile Lys 260 265 270 Met Tyr Thr Trp Glu Lys Pro Phe Ala Lys Ile Ile Glu Gly Met Glu 275 280 285 Ser Leu Thr Phe Cys Ser Lys Pro Gly Asp Gly Met Ala Phe Ser Met 290 295 300 Leu Ala Ser Leu Asn Leu Leu Arg Leu Ser Val Phe Phe Val Pro Ile 305 310 315 320 Ala Val Lys Gly Leu Thr Asn Ser Lys Ser Ala Val Met Arg Phe Lys 325 330 335 Lys Phe Phe Leu Gln Glu Ser Pro Val Phe Tyr Val Gln Thr Leu Gln 340 345 350 Asp Pro Ser Lys Ala Leu Val Phe Glu Glu Ala Thr Leu Ser Trp Gln 355 360 365 Gln Thr Cys Pro Gly Ile Val Asn Gly Ala Leu Glu Leu Glu Arg Asn 370 375 380 Gly His Ala Ser Glu Gly Met Thr Arg Pro Arg Asp Ala Leu Gly Pro 385 390 395 400 Glu Glu Glu Gly Asn Ser Leu Gly Pro Glu Leu His Lys Ile Asn Leu 405 410 415 Val Val Ser Lys Gly Met Met Leu Gly Val Cys Gly Asn Thr Gly Ser 420 425 430 Gly Lys Ser Ser Leu Leu Ser Ala Ile Leu Glu Glu Met His Leu Leu 435 440 445 Glu Gly Ser Val Gly Val Gln Gly Ser Leu Ala Tyr Val Pro Gln Gln 450 455 460 Ala Trp Ile Val Ser Gly Asn Ile Arg Glu Asn Ile Leu Met Gly Gly 465 470 475 480 Ala Tyr Asp Lys Ala Arg Tyr Leu Gln Val Leu His Cys Cys Ser Leu 485 490 495 Asn Arg Asp Leu Glu Leu Leu Pro Phe Gly Asp Met Thr Glu Ile Gly 500 505 510 Glu Arg Gly Leu Asn Leu Ser Gly Gly Gln Lys Gln Arg Ile Ser Leu 515 520 525 Ala Arg Ala Val Tyr Ser Asp Arg Gln Ile Tyr Leu Leu Asp Asp Pro 530 535 540 Leu Ser Ala Val Asp Ala His Val Gly Lys His Ile Phe Glu Glu Cys 545 550 555 560 Ile Lys Lys Thr Leu Arg Gly Lys Thr Val Val Leu Val Thr His Gln 565 570 575 Leu Gln Tyr Leu Glu Phe Cys Gly Gln Ile Ile Leu Leu Glu Asn Gly 580 585 590 Lys Ile Cys Glu Asn Gly Thr His Ser Glu Leu Met Gln Lys Lys Gly 595 600 605 Lys Tyr Ala Gln Leu Ile Gln Lys Met His Lys Glu Ala Thr Ser Asp 610 615 620 Met Leu Gln Asp Thr Ala Lys Ile Ala Glu Lys Pro Lys Val Glu Ser 625 630 635 640 Gln Ala Leu Ala Thr Ser Leu Glu Glu Ser Leu Asn Gly Asn Ala Val 645 650 655 Pro Glu His Gln Leu Thr Gln Glu Glu Glu Met Glu Glu Gly Ser Leu 660 665 670 Ser Trp Arg Val Tyr His His Tyr Ile Gln Ala Ala Gly Gly Tyr Met 675 680 685 Val Ser Cys Ile Ile Phe Phe Phe Val Val Leu Ile Val Phe Leu Thr 690 695 700 Ile Phe Ser Phe Trp Trp Leu Ser Tyr Trp Leu Glu Gln Gly Ser Gly 705 710 715 720 Thr Asn Ser Ser Arg Glu Ser Asn Gly Thr Met Ala Asp Leu Gly Asn 725 730 735 Ile Ala Asp Asn Pro Gln Leu Ser Phe Tyr Gln Leu Val Tyr Gly Leu 740 745 750 Asn Ala Leu Leu Leu Ile Cys Val Gly Val Cys Ser Ser Gly Ile Phe 755 760 765 Thr Lys Val Thr Arg Lys Ala Ser Thr Ala Leu His Asn Lys Leu Phe 770 775 780 Asn Lys Val Phe Arg Cys Pro Met Ser Phe Phe Asp Thr Ile Pro Ile 785 790 795 800 Gly Arg Leu Leu Asn Cys Phe Ala Gly Asp Leu Glu Gln Leu Asp Gln 805 810 815 Leu Leu Pro Ile Phe Ser Glu Gln Phe Leu Val Leu Ser Leu Met Val 820 825 830 Ile Ala Val Leu Leu Ile Val Ser Val Leu Ser Pro Tyr Ile Leu Leu 835 840 845 Met Gly Ala Ile Ile Met Val Ile Cys Phe Ile Tyr Tyr Met Met Phe 850 855 860 Lys Lys Ala Ile Gly Val Phe Lys Arg Leu Glu Asn Tyr Ser Arg Ser 865 870 875 880 Pro Leu Phe Ser His Ile Leu Asn Ser Leu Gln Gly Leu Ser Ser Ile 885 890 895 His Val Tyr Gly Lys Thr Glu Asp Phe Ile Ser Gln Phe Lys Arg Leu 900 905 910 Thr Asp Ala Gln Asn Asn Tyr Leu Leu Leu Phe Leu Ser Ser Thr Arg 915 920 925 Trp Met Ala Leu Arg Leu Glu Ile Met Thr Asn Leu Val Thr Leu Ala 930 935 940 Val Ala Leu Phe Val Ala Phe Gly Ile Ser Ser Thr Pro Tyr Ser Phe 945 950 955 960 Lys Val Met Ala Val Asn Ile Val Leu Gln Leu Ala Ser Ser Phe Gln 965 970 975 Ala Thr Ala Arg Ile Gly Leu Glu Thr Glu Ala Gln Phe Thr Ala Val 980 985 990 Glu Arg Ile Leu Gln Tyr Met Lys Asp Tyr His Met Lys Tyr Arg Asp 995 1000 1005 Asn Thr Pro Thr Val Leu His Gly Ile Asn Leu Thr Ile Arg Gly His 1010 1015 1020 Glu Val Val Gly Ile Val Gly Arg Thr Gly Ser Gly Lys Ser Ser Leu 1025 1030 1035 1040 Gly Met Ala Leu Phe Arg Leu Val Glu Pro Met Ala Gly Arg Ile Leu 1045 1050 1055 Ile Asp Gly Val Asp Ile Cys Ser Ile Gly Leu Glu Asp Leu Arg Ser 1060 1065 1070 Lys Leu Ser Val Ile Pro Gln Asp Pro Val Leu Leu Ser Gly Thr Ile 1075 1080 1085 Arg Phe Asn Leu Asp Pro Phe Asp Arg His Thr Asp Gln Gln Ile Trp 1090 1095 1100 Asp Ala Leu Glu Arg Thr Phe Leu Thr Lys Ala Ile Ser Lys Phe Pro 1105 1110 1115 1120 Lys Lys Leu His Thr Asp Val Val Glu Asn Gly Gly Asn Phe Ser Val 1125 1130 1135 Gly Glu Arg Gln Leu Leu Cys Ile Ala Arg Ala Val Leu Arg Asn Ser 1140 1145 1150 Lys Ile Ile Leu Ile Asp Glu Ala Thr Ala Ser Ile Asp Met Glu Thr 1155 1160 1165 Asp Thr Leu Ile Gln Arg Thr Ile Arg Glu Ala Phe Gln Gly Cys Thr 1170 1175 1180 Val Leu Val Ile Ala His Arg Val Thr Thr Val Leu Asn Cys Asp His 1185 1190 1195 1200 Ile Leu Val Met Gly Asn Gly Lys Val Val Glu Phe Asp Arg Pro Glu 1205 1210 1215 Val Leu Arg Lys Lys Pro Gly Ser Leu Phe Ala Ala Leu Met Ala Thr 1220 1225 1230 Ala Thr Ser Ser Leu Arg 1235 <210> 2 <211> 3714 <212> DNA <213> Human <400> 2 ATGACTAGGA AGAGGACATA CTGGGTGCCC AACTCTTCTG GTGGCCTCGT GAATCGTGGC 60 ATCGACATAG GCGATGACAT GGTTTCAGGA CTTATTTATC CCCTGGACAA TGCTGGCCTG 120 TTCTCCTACC TCACCGTGTC ATGGCTCACC CCGCTCATGA TCCAAAGCTT ACGGAGTCGC 180 TTAGATGAGA ACACCATCCC TCCACTGTCA GTCCATGATG CCTCAGACAA AAATGTCCAA 240 AGGCTTCACC GCCTTTGGGA AGAAGAAGTC TCAAGGCGAG GGATTGAAAA AGCTTCAGTG 300 CTTCTGGTGA TGCTGAGGTT CCAGAGAACA AGGTTGATTT TCGATGCACT TCTGGGCATC 360 TGCTTCTGCA TTGCCAGTGT ACTCGGGCCA ATATTGATTA TACCAAAGAT CCTGGAATAT 420 TCAGAAGAGC AGTTGGGGAA TGTTGTCCAT GGAGTGGGAC TCTGCTTTGC CCTTTTTCTC 480 TCCGAATGTG TGAAGTCTCT GAGTTTCTCC TCCAGTTGGA TCATCAACCA ACGCACAGCC 540 ATCAGGTTCC GAGCAGCTGT TTCCTCCTTT GCCTTTGAGA AGCTCATCCA ATTTAAGTCT 600 GTAATACACA TCACCTCAGG AGAGGGAGGT GACATCTGTG CCCATCAACT TGCTGTCTTG 660 CAGGCCATCA GCTTCTTCAC CGGTGATGTA AACTACCTGT TTGAAGGGGT ATTCATGACA 720 AGAATGGCTG TGAAGGCTCA GCATCACACA TCTGAGGTCA GCGACCAGCG CATCCGTGTG 780 ACCAGTGAAG TTCTCACTTG CATTAAGCTG ATTAAAATGT ACACATGGGA GAAACCATTT 840 GCAAAAATCA TTGAAGGTAT GGAAAGTCTG ACTTTCTGCT CCAAACCTGG TGATGGCATG 900 GCCTTCAGCA TGCTGGCCTC CTTGAATCTC CTTCGGCTGT CAGTGTTCTT TGTGCCTATT 960 GCAGTCAAAG GTCTCACGAA TTCCAAGTCT GCAGTGATGA GGTTCAAGAA GTTTTTCCTC 1020 CAGGAGAGCC CTGTTTTCTA TGTCCAGACA TTACAAGACC CCAGCAAAGC TCTGGTCTTT 1080 GAGGAGGCCA CCTTGTCATG GCAACAGACC TGTCCCGGGA TCGTCAATGG GGCACTGGAG 1140 CTGGAGAGGA ACGGGCATGC TTCTGAGGGG ATGACCAGGC CTAGAGATGC CCTCGGGCCA 1200 GAGGAAGAAG GGAACAGCCT GGGCCCAGAG TTGCACAAGA TCAACCTGGT GGTGTCCAAG 1260 GGGATGATGT TAGGGGTCTG CGGCAACACG GGGAGTGGTA AGAGCAGCCT GTTGTCAGCC 1320 ATCCTGGAGG AGATGCACTT GCTCGAGGGC TCGGTGGGGG TGCAGGGAAG CCTGGCCTAT 1380 GTCCCCCAGC AGGCCTGGAT CGTCAGCGGG AACATCAGGG AGAACATCCT CATGGGAGGC 1440 GCATATGACA AGGCCCGATA CCTCCAGGTG CTCCACTGCT GCTCCCTGAA TCGGGACCTG 1500 GAACTTCTGC CCTTTGGAGA CATGACAGAG ATTGGAGAGC GGGGCCTCAA CCTCTCTGGG 1560 GGGCAGAAAC AGAGGATCAG CCTGGCCCGC GCCGTCTATT CCGACCGTCA GATCTACCTG 1620 CTGGACGACC CCCTGTCTGC TGTGGACGCC CACGTGGGGA AGCACATTTT TGAGGAGTGC 1680 ATTAAGAAGA CACTCAGGGG GAAGACGGTC GTCCTGGTGA CCCACCAGCT GCAGTACTTA 1740 GAATTTTGTG GCCAGATCAT TTTGTTGGAA AATGGGAAAA TCTGTGAAAA TGGAACTCAC 1800 AGTGAGTTAA TGCAGAAAAA GGGGAAATAT GCCCAACTTA TCCAGAAGAT GCACAAGGAA 1860 GCCACTTCGG ACATGTTGCA GGACACAGCA AAGATAGCAG AGAAGCCAAA GGTAGAAAGT 1920 CAGGCTCTGG CCACCTCCCT GGAAGAGTCT CTCAACGGAA ATGCTGTGCC GGAGCATCAG 1980 CTCACACAGG AGGAGGAGAT GGAAGAAGGC TCCTTGAGTT GGAGGGTCTA CCACCACTAC 2040 ATCCAGGCAG CTGGAGGTTA CATGGTCTCT TGCATAATTT TCTTCTTCGT GGTGCTGATC 2100 GTCTTCTTAA CGATCTTCAG CTTCTGGTGG CTGAGCTACT GGTTGGAGCA GGGCTCGGGG 2160 ACCAATAGCA GCCGAGAGAG CAATGGAACC ATGGCAGACC TGGGCAACAT TGCAGACAAT 2220 CCTCAACTGT CCTTCTACCA GCTGGTGTAC GGGCTCAACG CCCTGCTCCT CATCTGTGTG 2280 GGGGTCTGCT CCTCAGGGAT TTTCACCAAA GTCACGAGGA AGGCATCCAC GGCCCTGCAC 2340 AACAAGCTCT TCAACAAGGT TTTCCGCTGC CCCATGAGTT TCTTTGACAC CATCCCAATA 2400 GGCCGGCTTT TGAACTGCTT CGCAGGGGAC TTGGAACAGC TGGACCAGCT CTTGCCCATC 2460 TTTTCAGAGC AGTTCCTGGT CCTGTCCTTA ATGGTGATCG CCGTCCTGTT GATTGTCAGT 2520 GTGCTGTCTC CATATATCCT GTTAATGGGA GCCATAATCA TGGTTATTTG CTTCATTTAT 2580 TATATGATGT TCAAGAAGGC CATCGGTGTG TTCAAGAGAC TGGAGAACTA TAGCCGGTCT 2640 CCTTTATTCT CCCACATCCT CAATTCTCTG CAAGGCCTGA GCTCCATCCA TGTCTATGGA 2700 AAAACTGAAG ACTTCATCAG CCAGTTTAAG AGGCTGACTG ATGCGCAGAA TAACTACCTG 2760 CTGTTGTTTC TATCTTCCAC ACGATGGATG GCATTGAGGC TGGAGATCAT GACCAACCTT 2820 GTGACCTTGG CTGTTGCCCT GTTCGTGGCT TTTGGCATTT CCTCCACCCC CTACTCCTTT 2880 AAAGTCATGG CTGTCAACAT CGTGCTGCAG CTGGCGTCCA GCTTCCAGGC CACTGCCCGG 2940 ATTGGCTTGG AGACAGAGGC ACAGTTCACG GCTGTAGAGA GGATACTGCA GTACATGAAG 3000 GATTATCACA TGAAATACAG AGACAACACA CCCACCGTGC TTCACGGCAT CAACCTGACC 3060 ATCCGCGGCC ACGAAGTGGT GGGCATCGTG GGAAGGACGG GCTCTGGGAA GTCCTCCTTG 3120 GGCATGGCTC TCTTCCGCCT GGTGGAGCCC ATGGCAGGCC GGATTCTCAT TGACGGCGTG 3180 GACATTTGCA GCATCGGCCT GGAGGACTTG CGGTCCAAGC TCTCAGTGAT CCCTCAAGAT 3240 CCAGTGCTGC TCTCAGGAAC CATCAGATTC AACCTAGATC CCTTTGACCG TCACACTGAC 3300 CAGCAGATCT GGGATGCCTT GGAGAGGACA TTCCTGACCA AGGCCATCTC AAAGTTCCCC 3360 AAAAAGCTGC ATACAGATGT GGTGGAAAAC GGTGGAAACT TCTCTGTGGG GGAGAGGCAG 3420 CTGCTCTGCA TTGCCAGGGC TGTGCTTCGC AACTCCAAGA TCATCCTTAT CGATGAAGCC 3480 ACAGCCTCCA TTGACATGGA GACAGACACC CTGATCCAGC GCACAATCCG TGAAGCCTTC 3540 CAGGGCTGCA CCGTGCTCGT CATTGCCCAC CGTGTCACCA CTGTGCTGAA CTGTGACCAC 3600 ATCCTGGTTA TGGGCAATGG GAAGGTGGTA GAATTTGATC GGCCGGAGGT ACTGCGGAAG 3660 AAGCCTGGGT CATTGTTCGC AGCCCTCATG GCCACAGCCA CTTCTTCACT GAGA 3714
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 11/06 ４Ｃ０８４ 48/00 29/00 ４Ｃ０８５ Ａ６１Ｐ 11/06 31/00 ４Ｃ０８６ 29/00 35/00 ４Ｈ０４５ 31/00 43/00 １１１ 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 43/00 １１１ 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/18 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/42 5/10 1/66 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/42 33/50 Ｚ 1/66 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/50 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 AA40 BB20 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 DA78 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 DA02 EA04 GA11 HA11 HA15 4B063 QA01 QA19 QQ22 QQ33 QQ79 QR66 QS03 QS05 QX02 4B064 AG01 AG27 CA10 CA19 CA20 CC24 DA01 DA13 4B065 AA01X AA57X AA72X AA90X AA93Y AB01 BA02 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA13 AA17 BA01 BA08 BA22 CA18 CA19 CA20 CA21 CA22 CA23 CA25 CA28 CA29 CA31 CA32 CA33 CA34 CA59 DC50 NA14 ZA591 ZA592 ZB111 ZB112 ZB261 ZB262 ZB321 ZB322 ZC022 4C085 AA13 AA14 BB11 CC02 CC04 CC05 DD22 DD34 DD35 DD38 DD39 DD42 DD43 EE01 FF03 FF20 4C086 AA01 AA03 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA59 ZB11 ZB26 ZB32 ZC02 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA76 EA50 EA51 FA72 FA74
Claims (16)
- 【請求項１】 配列番号：１で表わされるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質またはその塩。 - 【請求項２】 請求項１記載のタンパク質の部分ペプチ
ドまたはその塩。 - 【請求項３】 請求項１記載のタンパク質または請求項
２記載の部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有するＤ
ＮＡ。 - 【請求項４】 配列番号：２で表わされる塩基配列を有
する請求項３記載のＤＮＡ。 - 【請求項５】 請求項４記載のＤＮＡを含有する組換え
ベクター。 - 【請求項６】 請求項５記載の組換えベクターで形質転
換された形質転換体。 - 【請求項７】 請求項６記載の形質転換体を培養し、請
求項１記載のタンパク質または請求項２記載の部分ペプ
チドを生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴と
する請求項１記載のタンパク質もしくは請求項２記載の
部分ペプチドまたはその塩の製造法。 - 【請求項８】 請求項１記載のタンパク質もしくは請求
項２記載の部分ペプチドまたはその塩を含有してなる医
薬。 - 【請求項９】 請求項３記載のＤＮＡを含有してなる医
薬。 - 【請求項１０】 請求項１記載のタンパク質もしくは請
求項２記載の部分ペプチドまたはその塩に対する抗体。 - 【請求項１１】 請求項１記載のタンパク質もしくは請
求項２記載の部分ペプチドまたはその塩を用いることを
特徴とする、請求項１記載のタンパク質もしくは請求項
２記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または
阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法。 - 【請求項１２】 請求項１記載のタンパク質もしくは請
求項２記載の部分ペプチドまたはその塩を含有してな
る、請求項１記載のタンパク質もしくは請求項２記載の
部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻害する
化合物またはその塩のスクリーニング用キット。 - 【請求項１３】 請求項１１記載のスクリーニング方法
または請求項１２記載のスクリーニング用キットを用い
て得られる、請求項１記載のタンパク質もしくは請求項
２記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または
阻害する化合物またはその塩。 - 【請求項１４】 請求項１１記載のスクリーニング方法
または請求項１２記載のスクリーニング用キットを用い
て得られる請求項１記載のタンパク質もしくは請求項２
記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻
害する化合物またはその塩を含有してなる医薬。 - 【請求項１５】 ガン、感染症、喘息、炎症性疾患の予
防・治療剤である請求項８または請求項９記載の医薬。 - 【請求項１６】 ガン、感染症、喘息、炎症性疾患の予
防・治療剤である請求項１４記載の医薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001021013A JP2002223759A (ja) | 2001-01-30 | 2001-01-30 | 新規タンパク質およびそのｄｎａ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001021013A JP2002223759A (ja) | 2001-01-30 | 2001-01-30 | 新規タンパク質およびそのｄｎａ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002223759A true JP2002223759A (ja) | 2002-08-13 |
Family
ID=18886633
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001021013A Withdrawn JP2002223759A (ja) | 2001-01-30 | 2001-01-30 | 新規タンパク質およびそのｄｎａ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002223759A (ja) |
-
2001
- 2001-01-30 JP JP2001021013A patent/JP2002223759A/ja not_active Withdrawn
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| JPH1143499A (ja) | 新規タンパク質およびそのｄｎａ |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20080401 |