JP2002176994A - ヒトａｂｈ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】ヒトｈＡＢＨのポリペプチド、およびこのよう
なポリペプチドをコードするＤＮＡ（ＲＮＡ）ならびに
組換え技術によるこのようなポリペプチドを産生する手
順。変異の処置および損傷したＤＮＡから生じる疾患
（例えば癌）の処置のためにこのようなポリペプチドを
使用する方法。このようなポリペプチドに対するアンタ
ゴニストおよび癌細胞の化学療法を増強する治療として
のその使用。 【解決手段】以下からなる群から選択される単離された
ポリヌクレオチド； （ａ）図１の推定アミノ酸配列を有するｈＡＢＨポリペ
プチド、あるいは該ポリペプチドのフラグメント、アナ
ログまたは誘導体をコードするポリヌクレオチド； （ｂ）ＡＴＣＣ寄託番号７５８５５中に含まれるｃＤＮ
Ａによりコードされるアミノ酸配列を有するｈＡＢＨポ
リペプチド、あるいは該ポリペプチドのフラグメント、
アナログまたは誘導体をコードするポリヌクレオチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規に同定したポ
リヌクレオチド、このようなポリヌクレオチドによりコ
ードされるポリペプチド、このようなポリヌクレオチド
およびポリペプチドの使用、ならびにこのようなポリヌ
クレオチドおよびポリペプチドの産生に関する。より詳
細には、本発明のポリペプチドは、細菌ＡｌｋＢ遺伝子
のヒトホモログであり、本明細書中において以下ｈＡＢ
Ｈと呼ばれることがある。本発明はまた、このようなポ
リペプチドの作用を阻害することに関する。

【０００２】

【従来の技術】アルキル化剤は、変異および癌の誘導ま
たは細胞死のいずれかを引き起こし得るＤＮＡ損傷を誘
導する。このような損傷の大部分は、切除修復および複
製後修復のような一般の細胞内ＤＮＡ修復機構を受ける
（Ｈａｎａｗａｌｔ，Ｐ．Ｃ．ら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．、４８：７８３−８３６（１９７９）
およびＷｉｔｋｅｍ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．Ｒｅｖ．、
４０：８６９−９０７（１９７６）。修復機構は、ヒト
ＤＮＡミスマッチ修復タンパク質によって行われる機構
である。

【０００３】特定のＥ．Ｃｏｌｉ変異体株が、特にアル
キル化剤に感受性であることが見出されている。このよ
うな変異体の二つのタイプ、ａｌｋＡおよびｔａｇＡが
単離された（Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．ら、Ｊ．Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ、１３５：１４４−１５２（１９７
８）およびＫａｒｒａｎ，Ｐら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．，４０：１０１−１２７（１９８０））。これらの
遺伝子は、損傷を受けたＤＮＡからの特定のアルキル化
された塩基の遊離を触媒する酵素の形成を制御する（Ｋ
ａｒｒａｎ，Ｐ．、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）、２
９６：７７０−７７３（１９８２））。さらに、アルキ
ル化剤に対する適応応答を誘導する制御機構に欠陥のあ
るａｄａおよびａｄｃ変異体が単離された（Ｊｅｇｇ
ｏ，Ｐ．、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．、１３９：７８３
−７９１（１９８２））。

【０００４】ｔａｇＡ遺伝子は、Ｅ．Ｃｏｌｉ染色体に
マップされており、そしてアルキル化ＤＮＡから３−メ
チルアデニンを遊離する構成的な酵素である３−メチル
アデニンＤＮＡグリコシラーゼＩを制御している（Ｋａ
ｒｒａｎ，Ｐ．ら、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）、２
９６：７７０−７７３（１９８２））。ａｌｋＡ遺伝子
はまた、染色体にマップされている。そして、ａｌｋＡ
もアルキル化ＤＮＡから３−メチルアデニン、３−メチ
ルグアニンおよび７−メチルグアニンの遊離を触媒する
誘導酵素である３−メチルアデニンＤＮＡグリコシラー
ゼＩＩを制御している（Ｅｖｅｎｓｅｎ，Ｇ．およびＳ
ｅｅｂｅｒｇ，Ｅ．、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）、
２９６：７７３−７７５（１９８２））。

【０００５】Ｅ．Ｃｏｌｉの別の遺伝子であるＡｌｋＢ
はまた、メタンスルホン酸メチル（ＭＭＳ）に対する感
受性を制御することが見出された。ＡｌｋＢ遺伝子は、
ａｄａおよびａｄｃ近傍の染色体の領域に位置していた
が、これらの遺伝子に対する対立遺伝子であるとみなさ
れない（Ｓｅｄｇｗｉｃｋ，Ｂ．、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌ．、１５０：９８４−９８８（１９８２））。

【０００６】従って、ＡｌｋＢは、ｎａｌＡ遺伝子の近
傍にある新しい遺伝子に属する。ＡｌｋＢ変異体はｎ−
メチル−ｎ’−ニトロ−ｎ−ニトロソグアニジンに対し
て通常の適応応答を示すので、ＡｌｋＢ表現型は、ａｄ
ａの表現型とは異なる（Ｋａｔａｏｋａ，Ｈ．ら、Ｊ．
Ｂａｃｔ．、１５３：１３０１−１３０７（１９８
３））。Ｅ．ＣｏｌｉのＡｌｋＢ遺伝子は、アルキル化
ＤＮＡの修復を担っていることが見出された（Ｋｏｎｄ
ｏ，Ｈ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１５：１−
６，（１９８６））。

【０００７】Ｅ．Ｃｏｌｉ由来のＡｌｋＢ間のアミノ酸
配列によって、本ポリヌクレオチドおよび推定ポリペプ
チドが、Ｅ．Ｃｏｌｉ ＡｌｋＢタンパク質のヒトホモ
ログとして推定的に同定された。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】ヒトｈＡＢＨのポリペ
プチド、およびこのようなポリペプチドをコードするＤ
ＮＡ（ＲＮＡ）ならびに組換え技術によるこのようなポ
リペプチドを産生する手順。変異の処置および損傷した
ＤＮＡから生じる疾患（例えば癌）の処置のためにこの
ようなポリペプチドを使用する方法。このようなポリペ
プチドに対するアンタゴニストおよび癌細胞の化学療法
を増強する治療としてのその使用。

【０００９】

【課題を解決しようとするための手段】本発明は、以下
からなる群から選択される単離されたポリヌクレオチ
ド； （ａ）図１の推定アミノ酸配列を有するｈＡＢＨポリペ
プチド、あるいはこのポリペプチドのフラグメント、ア
ナログまたは誘導体をコードするポリヌクレオチド； （ｂ）ＡＴＣＣ寄託番号７５８５５中に含まれるｃＤＮ
Ａによりコードされるアミノ酸配列を有するｈＡＢＨポ
リペプチド、あるいはこのポリペプチドのフラグメン
ト、アナログまたは誘導体をコードするポリヌクレオチ
ド、を提供する。

【００１０】本発明の好ましい実施形態では、上記ポリ
ヌクレオチドがＤＮＡである、上記のポリヌクレオチ
ド、を提供する。

【００１１】本発明の好ましい実施形態では、上記ポリ
ヌクレオチドがＲＮＡである、上記のポリヌクレオチド
を提供する。

【００１２】本発明の好ましい実施形態では、上記ポリ
ヌクレオチドがゲノムＤＮＡである、上記のポリヌクレ
オチド、を提供する。

【００１３】本発明の好ましい実施形態では、上記ポリ
ヌクレオチドが図１の推定アミノ酸配列を有するｈＡＢ
Ｈをコードする、上記のポリヌクレオチドを提供する。

【００１４】本発明の好ましい実施形態では、上記ポリ
ヌクレオチドがＡＴＣＣ寄託番号７５８５５のｃＤＮＡ
によってコードされるｈＡＢＨポリペプチドをコードす
る、上記のポリヌクレオチドを提供する。

【００１５】本発明の好ましい実施形態では、図１に示
されるｈＡＢＨのコード配列を有する、上記のポリヌク
レオチドを提供する。

【００１６】本発明の好ましい実施形態では、ＡＴＣＣ
寄託番号７５８５５として寄託されたｈＡＢＨのコード
配列を有する、上記のポリヌクレオチドを提供する。

【００１７】本発明の好ましい実施形態では、上記のＤ
ＮＡを含むベクター、を提供する。

【００１８】本発明の好ましい実施形態では、上記のベ
クターで遺伝子操作された宿主細胞、を提供する。

【００１９】本発明の好ましい実施形態では、ポリペプ
チドを産生させる方法であって、上記ＤＮＡによってコ
ードされるポリペプチドを上記の宿主細胞から発現させ
る工程を包含する、方法、を提供する。

【００２０】本発明の好ましい実施形態では、ポリペプ
チドを発現し得る細胞を生成する方法であって、上記の
ベクターで細胞を遺伝子操作する工程を包含する、方
法、を提供する。

【００２１】本発明の好ましい実施形態では、上記のＤ
ＮＡとハイブリダイズし得、かつｈＡＢＨ活性を有する
ポリペプチドをコードする単離されたＤＮＡ、を提供す
る。

【００２２】本発明は、以下からなる群から選択される
ポリペプチド、（ｉ）図１の推定アミノ酸配列有するｈ
ＡＢＨポリペプチド、ならびにそのフラグメント、アナ
ログおよび誘導体、および（ｉｉ）ＡＴＣＣ寄託番号７
５８５５のｃＤＮＡによりコードされるｈＡＢＨポリペ
プチド、およびこのポリペプチドのフラグメント、アナ
ログおよび誘導体、を提供する。

【００２３】本発明の好ましい実施形態では、上記ポリ
ペプチドが図１の推定アミノ酸配列を有するｈＡＢＨで
ある、上記のポリペプチド、を提供する。

【００２４】本発明の好ましい実施形態では、上記のポ
リペプチドに対する抗体、を提供する。

【００２５】本発明の好ましい実施形態では、上記のポ
リペプチドに対するアンタゴニスト、を提供する。

【００２６】本発明の好ましい実施形態では、ｈＡＢＨ
の必要性を有する患者の処置のための方法であって、上
記のポリペプチドの薬学的有効量をこの患者に投与する
工程を含む、方法、を提供する。

【００２７】本発明の好ましい実施形態では、ｈＡＢＨ
を阻害する必要性を有する患者の処置のための方法であ
って、上記のアンタゴニストの薬学的有効量をこの患者
に投与する工程を含む、方法、を提供する。

【００２８】本発明の好ましい実施形態では、上記のポ
リペプチドおよび薬学的に受容可能なキャリアーを含む
薬学的組成物、を提供する。

【００２９】本発明の好ましい実施形態では、上記薬学
的有効量の上記ポリペプチドを、このポリペプチドをコ
ードし、かつインビボでこのポリペプチドを発現するＤ
ＮＡを上記患者に提供することにより投与する、上記の
方法、を提供する。

【００３０】本発明は、宿主におけるＤＮＡの変異に対
する感受性を測定するための方法であって、この宿主由
来のｈＡＢＨポリヌクレオチド配列における変異を同定
する工程を包含する、方法を提供する。

【００３１】本発明の１つの局面によれば、ｈＡＢＨで
ある新規の成熟ポリペプチド、ならびにそのフラグメン
ト、アナログ、およびそれらの誘導体が提供される。本
発明のポリペプチドは、ヒト起源である。

【００３２】本発明の別の局面によれば、このようなポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡまた
はＲＮＡ）が提供される。

【００３３】本発明のなおさらなる局面によれば、この
ようなポリペプチドを組換え技術により産生させるため
のプロセスが提供される。

【００３４】本発明のなおさらなる局面によれば、治療
目的のために（例えば、アルキル化ＤＮＡの修復、従っ
て細胞死および癌の防止または処置のために）、このよ
うなポリペプチドまたはこのようなポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドを使用するためのプロセスが提
供される。

【００３５】本発明のなおさらなる局面によれば、この
ようなポリペプチドに対する抗体が提供される。

【００３６】本発明のなおさらなる局面によれば、この
ようなポリペプチドの作用を阻害するために（例えば、
アルキル化剤を使用した化学療法の間、このポリペプチ
ドが腫瘍細胞ＤＮＡの修復を妨げるために）使用され得
る、このようなポリペプチドに対するアンタゴニストが
提供される。

【００３７】本発明のこれらの局面および他の局面は、
本明細書中の教示から当業者には明らかであるはずであ
る。

【００３８】本発明の局面によれば、図１の推定のアミ
ノ酸配列を有する成熟ポリペプチド、またはＡＴＣＣ寄
託番号７５８５５として１９９４年８月９日に寄託され
たクローンのｃＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプ
チドをコードする単離された核酸（ポリヌクレオチド）
が提供される。

【００３９】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチドは、ヒト前立腺、精巣、胎盤および
心臓から得られ得る。本発明のポリヌクレオチドが、ヒ
ト滑膜肉腫（ｓｙｎｏｖｉａｌ ｓａｒｃｏｍａ）由来
のｃＤＮＡライブラリーにおいて発見された。これは、
Ｅ．Ｃｏｌｉ ＡｌｋＢに構造的に関係する。これは、
３０７アミノ酸残基のタンパク質をコードするオープン
リーディングフレームを含む。このタンパク質は、Ｅ．
Ｃｏｌｉ ＡｌｋＢに対して、２８３アミノ酸長にわた
り２３％の同一性および５２％の類似性により、最も高
い程度の相同性を示す。

【００４０】本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形
態またはＤＮＡの形態であり得る。ＤＮＡは、ｃＤＮ
Ａ、ゲノムＤＮＡおよび合成ＤＮＡを包含する。ＤＮＡ
は二本鎖または一本鎖であり得る。そして、一本鎖の場
合、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり
得る。成熟ポリペプチドをコードするコード配列は、図
１に示すコード配列と同一であり得るか、または寄託し
たクローンのコード配列と同一であり得る。あるいは、
コード配列は、遺伝コードの重複または縮重の結果とし
て、図１のＤＮＡまたは寄託したｃＤＮＡと同じ成熟ポ
リペプチドをコードする異なるコード配列であり得る。

【００４１】図１の成熟ポリペプチドまたは寄託したｃ
ＤＮＡによりコードされる成熟ポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチドは、次のものを包含し得る：成熟ポ
リペプチドのコード配列のみ；成熟ポリペプチドのコー
ド配列および付加的なコード配列（例えば、リーダー配
列または分泌配列もしくはプロタンパク質配列）；成熟
ポリペプチドのコード配列（および必要に応じて付加的
なコード配列）ならびに非コード配列（例えば、イント
ロン、または成熟ポリペプチドのコード配列の５’およ
び／または３’の非コード配列）。

【００４２】従って、用語「ポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチド」は、ポリペプチドのコード配列のみ
を含むポリヌクレオチド、ならびに付加的なコード配列
および／または非コード配列を含むポリヌクレオチドを
包含する。

【００４３】本発明はさらに、図１の推定アミノ酸配列
を有するポリペプチドまたは寄託したクローンのｃＤＮ
Ａによりコードされるポリペプチドのフラグメント、ア
ナログ、および誘導体をコードする本明細書中上記のポ
リヌクレオチドの変異体に関する。ポリヌクレオチドの
変異体は、ポリヌクレオチドの天然に存在する対立遺伝
子変異体またはポリヌクレオチドの天然に存在しない変
異体であり得る。

【００４４】従って、本発明は、図１に示すものと同じ
成熟ポリペプチドまたは寄託したクローンのｃＤＮＡに
よりコードされる同じ成熟ポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチド、ならびにこのようなポリヌクレオチド
の変異体を包含する。これらの変異体は、図１のポリペ
プチドまたは寄託したクローンのｃＤＮＡによりコード
されるポリペプチドのフラグメント、誘導体、またはア
ナログをコードする。このようなヌクレオチド変異体
は、欠失変異体、置換変異体、および付加または挿入変
異体を包含する。

【００４５】本明細書中上記で示したように、ポリヌク
レオチドは、図１に示すコード配列または寄託したクロ
ーンのコード配列の天然に存在する対立遺伝子変異体で
あるコード配列を有し得る。当該分野で公知であるよう
に、対立遺伝子変異体は、１以上のヌクレオチドの置
換、欠失、または付加を有し得るポリヌクレオチド配列
の別の形態であり、これによってコードされるポリペプ
チドの機能は実質的に変化しない。

【００４６】本発明はまた、成熟ポリペプチドをコード
する配列がポリヌクレオチド配列に対して同じリーディ
ングフレームで融合され得るポリヌクレオチドを包含す
る。このポリヌクレオチド配列は、宿主細胞からのポリ
ペプチドの発現および分泌を助ける（例えば、細胞から
のポリペプチドの移行を制御するための分泌配列として
機能するリーダー配列）。リーダー配列を有するポリペ
プチドはプレタンパク質であり、そして成熟形態のポリ
ペプチドを形成するために、宿主細胞によりこのリーダ
ー配列は切断され得る。ポリヌクレオチドはまた、成熟
タンパク質およびさらなる５’アミノ酸残基であるプロ
タンパク質をコードし得る。プロ配列を有する成熟タン
パク質は、プロタンパク質であり、そして不活性型のタ
ンパク質である。一旦プロ配列が切断されると、活性な
成熟タンパク質が残る。

【００４７】従って、例えば、本発明のポリヌクレオチ
ドは、成熟タンパク質、あるいはプロ配列、またはプロ
配列およびプレ配列（リーダー配列）の両方を有するタ
ンパク質をコードし得る。

【００４８】本発明のポリヌクレオチドはまた、本発明
のポリペプチドの精製を可能にするマーカー配列にイン
フレームで融合されたコード配列を有し得る。マーカー
配列は、細菌宿主の場合、マーカーに融合された成熟ポ
リペプチドの精製を提供するｐＱＥ−９ベクターにより
供給されるヘキサヒスチジンタグであり得る。あるい
は、例えば、マーカー配列は、哺乳動物宿主（例えば、
ＣＯＳ−７細胞）が使用される場合、ヘマグルチニン
（ＨＡ）タグであり得る。ＨＡタグは、インフルエンザ
ヘマグルチニンタンパク質由来のエピトープに対応する
（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｉ．ら、Ｃｅｌｌ、３７：７６７（１
９８４））。

【００４９】本発明はさらに、配列間に少なくとも５０
％、そして好ましくは７０％の同一性が存在する場合、
本明細書中上記の配列にハイブリダイズするポリヌクレ
オチドに関する。本発明は特に、本明細書中上記のポリ
ヌクレオチドにストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズするポリヌクレオチドに関する。本明細書中で用い
られる用語「ストリンジェントな条件」は、配列間に少
なくとも９５％、そして好ましくは少なくとも９７％の
同一性が存在する場合のみ、ハイブリダイゼーションが
生じることをいう。好ましい実施態様において、本明細
書中上記のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリ
ヌクレオチドは、図１のｃＤＮＡまたは寄託したｃＤＮ
Ａによりコードされる成熟ポリペプチドと実質的に同じ
生物学的機能または生物学的活性を保持するポリペプチ
ドをコードする。

【００５０】本明細書中でいう寄託物（単数または複
数）は、特許手続きの目的のための微生物の寄託の国際
的承認に関するブダペスト条約の条項下に維持される。
これらの寄託物は、当業者に便宜上のみ提供され、そし
て米国特許法第１１２条の下で寄託が必要とされること
を容認するものではない。寄託物に含まれるポリヌクレ
オチドの配列、ならびにそれによりコードされるポリペ
プチドのアミノ酸配列は、本明細書中に参考として援用
されており、そして本明細書中の配列のいかなる記載と
のいかなる矛盾の場合も制御している。寄託物を製造、
使用、または販売するためには実施許諾が必要とされ
得、そしてこのような実施許諾は本明細書によって与え
られるわけではない。

【００５１】本発明はさらに、図１の推定アミノ酸配列
を有するか、または寄託したｃＤＮＡによりコードされ
るアミノ酸配列を有するｈＡＢＨポリペプチド、ならび
にこのようなポリペプチドのフラグメント、アナログ、
および誘導体に関する。

【００５２】用語「フラグメント」、「誘導体」、およ
び「アナログ」は、図１のポリペプチド、または寄託し
たｃＤＮＡによりコードされるポリペプチドをいう場
合、このようなポリペプチドと実質的に同じ生物学的機
能または生物学的活性を保持するポリペプチドを意味す
る。従って、アナログは、プロタンパク質部分の切断に
より活性化されて活性な成熟ポリペプチドを産生し得る
プロタンパク質を包含する。

【００５３】本発明のポリペプチドは、組換えポリペプ
チド、天然のポリペプチド、または合成ポリペプチドで
あり得、好ましくは組換えポリペプチドであり得る。

【００５４】図１のポリペプチド、または寄託したｃＤ
ＮＡによりコードされるポリペプチドのフラグメント、
誘導体、またはアナログは、（ｉ）１以上のアミノ酸残
基が保存または非保存のアミノ酸残基（好ましくは保存
アミノ酸残基）で置換され、そしてこのような置換され
たアミノ酸残基が、遺伝コードによりコードされるアミ
ノ酸残基であってもよく、またはなくてもよいもの、あ
るいは（ｉｉ）１以上のアミノ酸残基が置換基を含有す
るもの、あるいは（ｉｉｉ）成熟ポリペプチドが、ポリ
ペプチドの半減期を増加させる化合物（例えば、ポリエ
チレングリコール）のような別の化合物に融合されてい
るもの、あるいは（ｉｖ）付加的アミノ酸（リーダー配
列または分泌配列あるいは成熟ポリペプチドまたはプロ
タンパク質配列の精製に用いられる配列）が成熟ポリペ
プチドに融合されるものであり得る。このようなフラグ
メント、誘導体、およびアナログは、本明細書中の教示
から、当業者の範囲内にあると考えられる。

【００５５】本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオ
チドは、好ましくは単離された形態で提供され、そして
好ましくは均質に精製される。

【００５６】用語「単離された」は、物質がその本来の
環境（例えば、天然に存在する場合は、天然の環境）か
ら取り出されていることを意味する。例えば、生きてい
る動物中に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドは単離されていないが、天然系において共存す
る物質の幾らかまたは全部から分離されたその同じポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されている。こ
のようなポリヌクレオチドはベクターの一部であり得、
そして／またはこのようなポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドは組成物の一部であり得、そしてさらに、この
ようなベクターまたは組成物がその天然の環境の一部で
はない点で単離され得る。

【００５７】本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド
を含むベクター、本発明のベクターを用いて遺伝子操作
される宿主細胞、および組換え技術による本発明のポリ
ペプチドの産生に関する。

【００５８】宿主細胞は、本発明のベクター（これは例
えば、クローニングベクターまたは発現ベクターであり
得る）を用いて遺伝子操作（形質導入または形質転換ま
たはトランスフェクト）される。ベクターは、例えば、
プラスミド、ウイルス粒子、ファージなどの形態であり
得る。操作された宿主細胞は、プロモーターを活性化す
るか、形質転換体を選択するか、またはｈＡＢＨ遺伝子
を増幅するために適切に改変された従来の栄養培地中で
培養され得る。培養条件（例えば、温度、ｐＨなど）
は、発現のために選択される宿主細胞で以前に使用され
た条件であり、そして当業者には明らかである。

【００５９】本発明のポリヌクレオチドは、組換え技術
によりポリペプチドを産生するために用いられ得る。従
って、例えば、ポリヌクレオチドは、ポリペプチドを発
現するための種々の発現ベクターのいずれか１つに含ま
れ得る。このようなベクターは、染色体、非染色体、お
よび合成ＤＮＡ配列を含有し、例えば、ＳＶ４０の誘導
体；細菌性プラスミド；ファージＤＮＡ；バキュロウイ
ルス；酵母プラスミド；プラスミドおよびファージＤＮ
Ａの組み合わせに由来するベクター、ワクシニア、アデ
ノウイルス、鶏痘ウイルス、および仮性狂犬病のような
ウイルスＤＮＡである。しかし、宿主内で複製可能で、
そして存続可能である限り、任意の他のベクターが使用
され得る。

【００６０】適切なＤＮＡ配列は、種々の手順によりベ
クターに挿入され得る。一般に、ＤＮＡ配列は当該分野
で公知の手順により適切な制限エンドヌクレアーゼ部位
（単数または複数）に挿入される。このような手順およ
び他の手順は、当業者に公知の範囲内にあると考えられ
る。

【００６１】発現ベクター中のＤＮＡ配列は、ｍＲＮＡ
の合成を指示するための適切な発現制御配列（単数また
は複数）（プロモーター）に作動可能に連結される。こ
のようなプロモーターの代表的な例としては、以下が挙
げられ得る：ＬＴＲまたはＳＶ４０プロモーター、Ｅ．
ｃｏｌｉ ｌａｃまたはｔｒｐ、λファージＰ_Lプロモ
ーター、および原核生物細胞または真核生物細胞あるい
はそれらのウイルス内で遺伝子の発現を制御することが
公知である他のプロモーター。発現ベクターはまた、翻
訳開始のためのリボソーム結合部位および転写ターミネ
ーターを含有し得る。ベクターはまた、遺伝子のコピー
数を増幅するための適切な配列を含み得る。

【００６２】さらに、発現ベクターは、好ましくは、１
つ以上の選択マーカー遺伝子を含有し、形質転換された
宿主細胞の選択のための表現型特性（例えば、真核生物
細胞培養物についてはジヒドロ葉酸レダクターゼまたは
ネオマイシン耐性、またはＥ． ｃｏｌｉにおけるテト
ラサイクリン耐性またはアンピシリン耐性）を提供す
る。

【００６３】本明細書中上記のような適切なＤＮＡ配列
ならびに適切なプロモーター配列または制御配列を含有
するベクターは、適切な宿主を形質転換して宿主にタン
パク質を発現させるために用いられ得る。

【００６４】適切な宿主の代表的な例としては、以下が
挙げられ得る：細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐ
ｈｉｍｕｒｉｕｍ）；真菌細胞（例えば酵母）；昆虫細
胞（例えば、ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａおよびＳｆ９）；動
物細胞（例えば、ＣＨＯ、ＣＯＳまたはＢｏｗｅｓ黒色
腫）；植物細胞など。適切な宿主の選択は、本明細書中
の教示から当業者の範囲内であると考えられる。

【００６５】さらに詳細には、本発明はまた、上記で広
範に記載した１つ以上の配列を含む組換え構築物を包含
する。構築物は、ベクター（例えば、プラスミドベクタ
ーまたはウイルスベクター）を包含し、このベクター中
に本発明の配列が正方向または逆方向に挿入されてい
る。この実施態様の好ましい局面によれば、構築物はさ
らに、配列に作動可能に連結された調節配列（例えば、
プロモーターを包含する）を含む。多数の適切なベクタ
ーおよびプロモーターが当業者には公知であり、そして
市販されている。以下のベクターが例として提供され
る。細菌性：ｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０、ｐＱＥ−９（Ｑ
ｉａｇｅｎ）、ｐＢＳ、ｐＤ１０、ｐｈａｇｅｓｃｒｉ
ｐｔ、ｐｓｉＸ１７４、ｐｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓ
Ｋ、ｐｂｓｋｓ、ｐＮＨ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１
８Ａ、ｐＮＨ４６Ａ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）；ｐｔｒ
ｃ９９ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤ
Ｒ５４０、ｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）。真核生
物性：ｐＷＬＮＥＯ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐ
ＸＴ１、ｐＳＧ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）；ｐＳＶＫ
３、ｐＢＰＶ、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＬ（Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ）。しかし、宿主内で複製可能で、そして存続可能で
ある限り、任意の他のプラスミドまたはベクターも使用
され得る。

【００６６】プロモーター領域は、ＣＡＴ（クロラムフ
ェニコールトランスフェラーゼ）ベクターまたは選択マ
ーカーを有する他のベクターを使用して、任意の所望の
遺伝子から選択され得る。２つの適切なベクターは、ｐ
ＫＫ２３２−８およびＰＣＭ７である。特によく知られ
た細菌プロモーターは、ｌａｃＩ、ｌａｃＺ、Ｔ３、Ｔ
７、ｇｐｔ，λＰ_R、Ｐ_L、およびｔｒｐを含む。真核生
物プロモーターは、ＣＭＶ即時初期型、ＨＳＶチミジン
キナーゼ、初期ＳＶ４０および後期ＳＶ４０、レトロウ
イルス由来のＬＴＲ、およびマウスメタロチオネインＩ
を包含する。適切なベクターおよびプロモーターの選択
は、十分に当業者のレベルの範囲内にある。

【００６７】さらなる実施態様では、本発明は上記の構
築物を含有する宿主細胞に関する。宿主細胞は、高等真
核生物細胞（例えば、哺乳動物細胞）または下等真核生
物細胞（例えば、酵母細胞）であり得るか、または宿主
細胞は原核生物細胞（例えば、細菌細胞）であり得る。
構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムトラン
スフェクション、ＤＥＡＥデキストラン媒介トランスフ
ェクションまたはエレクトロポレーションにより達成さ
れ得る（Ｄａｖｉｓ，Ｌ．、Ｄｉｂｎｅｒ，Ｍ．、Ｂａ
ｔｔｅｙ，Ｉ．、Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９８６）。

【００６８】宿主細胞内の構築物は、組換え配列により
コードされる遺伝子産物を産生させるために、従来の方
法で使用され得る。あるいは、本発明のポリペプチド
は、従来のペプチド合成機により合成的に生成され得
る。

【００６９】成熟タンパク質は、適切なプロモーターの
制御下で、哺乳動物細胞、酵母、細菌、または他の細胞
中で発現され得る。無細胞翻訳系もまた、本発明のＤＮ
Ａ構築物に由来するＲＮＡを使用して、このようなタン
パク質を産生させ得るために用いられ得る。原核生物宿
主および真核生物宿主で使用される適切なクローニング
ベクターおよび発現ベクターは、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、
ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８９）（この開
示は、本明細書中に参考として援用されている）に記載
されている。

【００７０】本発明のポリペプチドをコードするＤＮＡ
の高等真核生物による転写は、ベクターにエンハンサー
配列を挿入することにより増大される。エンハンサーは
ＤＮＡのシス作用因子であり、通常は約１０〜約３００
ｂｐであり、これはプロモーターに作用してその転写を
増大させる。例としては、複製起点の１００〜２７０ｂ
ｐの後期側のＳＶ４０エンハンサー、サイトメガロウイ
ルスの初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後期
側のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイルスエ
ンハンサーを包含する。

【００７１】一般に、組換え発現ベクターは、複製起点
および宿主細胞の形質転換を可能とする選択マーカー
（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉのアンピシリン耐性遺伝子およ
びＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＴＲＰ１遺伝子）および
下流の構造配列の転写を指示する高発現遺伝子に由来す
るプロモーターを含有する。このようなプロモーター
は、解糖酵素（例えば、３−ホスホグリセリン酸キナー
ゼ（ＰＧＫ）、α因子、酸性ホスファターゼ、または熱
ショックタンパク質など）をコードするオペロンに由来
し得る。異種構造配列は、翻訳開始配列および翻訳終止
配列、および好ましくは翻訳されたタンパク質を細胞周
辺腔または細胞外培地へ分泌することを指示し得るリー
ダー配列と適切な相で組立てられる。必要に応じて、異
種配列は、所望の特徴（例えば、発現された組換え産物
の安定化または簡略化された精製）を与えるＮ末端同定
ペプチドを含有する融合タンパク質をコードし得る。

【００７２】細菌の使用に有用な発現ベクターは、機能
的なプロモーターと作動可能な読みとり相で、所望のタ
ンパク質をコードする構造ＤＮＡ配列を適切な翻訳開始
シグナルおよび翻訳終止シグナルと共に挿入することに
より構築される。ベクターは、１以上の表現型選択マー
カー、ならびに、ベクターの維持を保証するため、およ
び所望により宿主内での増幅を提供するために複製起点
を含有する。形質転換に適切な原核生物宿主は、Ｅ．ｃ
ｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ，Ｓａｌ
ｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、ならびにＰ
ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
属、およびＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ属の種々の種
を包含するが、他の種もまた選択対象として用いられ得
る。

【００７３】代表的な、しかし限定されない例として、
細菌の使用に有用な発現ベクターは、周知のクローニン
グベクターｐＢＲ３２２（ＡＴＣＣ ３７０１７）の遺
伝エレメントを含む市販のプラスミドに由来する選択マ
ーカーおよび細菌の複製起点を含有し得る。このような
市販のベクターは、例えば、ｐＫＫ２２３−３（Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｕｐｐ
ｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）およびＧＥＭ１（Ｐｒｏｍｅ
ｇａ Ｂｉｏｔｅｃ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡ）
を包含する。これらのｐＢＲ３２２「骨格」部分は、適
切なプロモーターおよび発現されるべき構造配列と組み
合わされる。

【００７４】適切な宿主株の形質転換および適切な細胞
密度への宿主株の増殖に続いて、選択されたプロモータ
ーは、適切な手段（例えば、温度シフトまたは化学的誘
導）により誘導され、そして細胞はさらなる期間培養さ
れる。

【００７５】細胞は、代表的には遠心分離により収集さ
れ、物理的手段または化学的手段により破砕され、そし
て得られた粗抽出物はさらなる精製のために保持され
る。

【００７６】タンパク質の発現において用いられる微生
物細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破
砕、または細胞溶解剤の使用を包含する任意の便利な方
法により破砕され得る。このような方法は、当業者に周
知である。

【００７７】種々の哺乳動物細胞の培養系もまた、組換
えタンパク質を発現するために用いられ得る。哺乳動物
発現系の例は、Ｇｌｕｚｍａｎ、Ｃｅｌｌ、２３： １
７５（１９８１）に記載されているサル腎臓繊維芽細胞
のＣＯＳ−７株、および適合性のベクターを発現し得る
他の細胞株（例えば、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、Ｈｅ
Ｌａ、およびＢＨＫ細胞株）を包含する。哺乳動物発現
ベクターは、複製起点、適切なプロモーターおよびエン
ハンサー、およびさらに任意の必要なリボソーム結合部
位、ポリアデニル化部位、スプライスドナー部位および
スプライスアクセプター部位、転写終止配列、および
５’フランキング非転写配列を含有し得る。ＳＶ４０ス
プライスおよびポリアデニル化部位に由来するＤＮＡ配
列は、必要な非転写遺伝エレメントを提供するために使
用され得る。

【００７８】ｈＡＢＨポリペプチドは、以下に挙げる方
法により組換え細胞培養物から回収され、そして精製さ
れ得る。これらの方法には、硫安沈殿またはエタノール
沈澱、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグ
ラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水
性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマ
トグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフ
ィー、およびレクチンクロマトグラフィーが包含され
る。必要に応じて、タンパク質の再折りたたみ（ｒｅｆ
ｏｌｄｉｎｇ）工程が、成熟タンパク質の配置を完全に
するために使用され得る。最終的に、高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）が最終的な精製工程に用いられ
得る。

【００７９】本発明のポリペプチドは、天然の精製され
た産物、または化学合成手順の産物であり得るか、ある
いは原核生物宿主または真核生物宿主（例えば、培養物
中の細菌、酵母、高等植物、昆虫、および哺乳動物細胞
により）から組換え技術により産生され得る。組換え産
生手順に用いられる宿主に依存して、本発明のポリペプ
チドは、グリコシル化され得るか、あるいはグリコシル
化され得ない。本発明のポリペプチドはまた、開始メチ
オニンアミノ酸残基を含み得る。

【００８０】本発明のｈＡＢＨポリペプチドは、化学変
異原にさらされた結果として生じる細胞内ＤＮＡ損傷に
対する保護に使用され得る。さらに詳細には、ｈＡＢＨ
は、細胞ＤＮＡ修復（例えば、除去修復、置換、アルキ
ル化塩基部分の除去または複製後修復による）に使用さ
れ得る。

【００８１】このように、本発明のｈＡＢＨポリペプチ
ドは、異常な細胞分化により特徴付けられる疾患（例え
ば癌）を処置するために使用され得る。さらに、変異が
起きたＤＮＡは、他の既知および未知の疾患の宿主に導
入され、その疾患は本発明のｈＡＢＨポリペプチドで治
療され得る。

【００８２】本発明のポリペプチドはまた、類似の生物
学的活性を有する他の分子の同定に有用である。このス
クリーン（ｓｃｒｅｅｎ）の例は、既知のＤＮＡ配列を
使用し、オリゴヌクレオチドプローブを合成することに
よって、ｈＡＢＨ遺伝子のコード領域を単離することで
ある。本発明のｈＡＢＨ遺伝子の配列と相補的な配列を
有する標識されたオリゴヌクレオチドを、ヒトｃＤＮＡ
ライブラリー、ゲノムＤＮＡライブラリーまたはｍＲＮ
Ａライブラリーをスクリーニングするために使用して、
プローブがライブラリーのどのメンバーとハイブリダイ
ズするかを決定する。

【００８３】本発明はまた、変異したｈＡＢＨ遺伝子を
検出するための診断アッセイを提供し、本診断アッセイ
は、化学変異のような多様な薬品によるＤＮＡ変異に対
する感受性を示す。このようなアッセイの１つの例は、
ＲＴ−ＰＣＲ法である。ＲＴ−ＰＣＲ（逆転写酵素ポリ
メラーゼ連鎖反応）のために、ｈＡＢＨをコードするｍ
ＲＮＡが、細胞サンプルから分離された総細胞ＲＮＡか
ら単離される。次に、ＲＴ−ＰＣＲ産物のコード領域を
配列決定し、そして変異を検出するためにｈＡＢＨ遺伝
子と比較する。あるいは、検出すべきｍＲＮＡに高度に
特異的なオリゴヌクレオチドプローブを調製し得る。こ
のようなオリゴヌクレオチドプローブは、１０塩基対と
４０塩基対の間、そして好ましくは１０塩基対と３０塩
基対との間の塩基対を有する。オリゴヌクレオチドプロ
ーブは、例えば、放射能によって標識され得る。プロー
ブを、例えばインサイチュ（ｉｎ ｓｉｔｕ）ハイブリ
ダイゼーションにおいて、宿主由来の細胞サンプル中の
総ｍＲＮＡから調製したｃＤＮＡライブラリーとハイブ
リダイズさせる。ハイブリダイゼーションが存在すれ
ば、プローブを除き、そしてハイブリダイズする遺伝子
を配列決定して変異を決定する。

【００８４】本発明はまた、化学変異原およびアルキル
化剤に曝されることの影響に対する保護のためのｈＡＢ
Ｈ遺伝子の生物学的な活性を示すアッセイに関する。こ
のアッセイタイプの例は、三つの異なるグループのＥ．
Ｃｏｌｉ細胞を異なる濃度のアルキル化剤（例えばＭＭ
Ｓ）に曝すことを包含する。一番目の細胞型は、ａｌｋ
Ｂ遺伝子が野生型であるＥ．ＣｏｌｉＨＫ８１株であ
る。二番目の細胞型は、ａｌｋＢ遺伝子の変異体株であ
るＥ．ＣｏｌｉＫＨ８２株である。三番目のグループ
は、ｈＡＢＨを含むベクターでトランスフェクトされた
ＨＫ８２株である。次に、これらのＥ．Ｃｏｌｉ細胞グ
ループの生存率を計算し、そしてその結果を図２に示
す。変異体株（ｍｔ）は最も低い生存率を有していた
が、野生型（ｗｔ）株は最も高い生存率を有していたこ
とは、図２から明白である。この結果は、ｈＡＢＨ遺伝
子は、変異体株の生存率を増加させ得、従って、ＤＮＡ
修復によりアルキル化剤に対して効果的に保護できたこ
とをさらに示す。

【００８５】あるいは、哺乳動物細胞が使用され得る。
この場合、野生型およびａｌｋＢ遺伝子の変異体である
細胞が使用され得る。次に、変異体株をｈＡＢＨ遺伝子
でトランスフェクトし、そして生存細胞の割合を算出し
得る。別の実施様態において、ノックアウトマウスが使
用され得る。この場合、ａｌｋＢ遺伝子は、当業者に公
知の遺伝子操作技術により取り除かれた。

【００８６】上記のアッセイを、アゴニスト化合物また
はアンタゴニスト化合物を同定するために使用し得る。
このようなアッセイの例は、Ｅ．Ｃｏｌｉまたは哺乳動
物の細胞グループを調製する方法を包含する。ここで、
一方の細胞群は野生型であり、そしてもう一方の細胞群
はａｌｋＢ遺伝子の変異体である。次に、上記のよう
に、細胞に異なる量のＭＭＳを投与した。しかし、この
アッセイにおいて、化合物をその反応に加え、そして変
異株の生存率を増加または減少させる化合物の能力を、
コントロールとしていずれの化合物の非存在下で行われ
たアッセイを使用して決定し得る。

【００８７】ｈＡＢＨに対する潜在的アンタゴニストの
例は、ｈＡＢＨと結合しｈＡＢＨの機能を除去する抗
体、またはいくつかの場合においてオリゴヌクレオチド
を含む。潜在的なアンタゴニストはまた、ＤＮＡの損傷
塩基を認識してそれに結合するが、損傷塩基を修復しな
いような、ｈＡＢＨに密接に関連するタンパク質を含
む。

【００８８】別の潜在的アンタゴニストはまた、アンチ
センス技術の使用により調製されるアンチセンス構築物
を含む。アンチセンス技術は、三重らせん形成またはア
ンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡを介して遺伝子発現を
制御するために用いられ得る。これらの方法の両方は、
ポリヌクレオチドがＤＮＡまたはＲＮＡに結合すること
に基づいている。例えば、本発明の成熟ポリペプチドを
コードするポリヌクレオチド配列の５’コード部分は、
長さ約１０〜４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌ
クレオチドを設計するために用いられる。ＤＮＡオリゴ
ヌクレオチドは、転写に関与する遺伝子領域に相補的に
設計され（三重らせん−Ｌｅｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ
ｓ Ｒｅｓ．，６：３０７３（１９７９）； Ｃｏｏｎ
ｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４１：４５６（１９８
８）；およびＤｅｒｖａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５
１： １３６０（１９９１）を参照のこと）、それによ
り、ｈＡＢＨの転写および産生を妨げる。アンチセンス
ＲＮＡオリゴヌクレオチドはインビボでｍＲＮＡとハイ
ブリダイズし、そしてｍＲＮＡ分子のｈＡＢＨへの翻訳
を阻止する（アンチセンスーＯｋａｎｏ、Ｊ．Ｎｅｕｒ
ｏｃｈｅｍ．，５６：５６０（１９９１）； Ｏｌｉｇ
ｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｓ Ａｎｔｉ
ｓｅｎｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ
Ｒａｔｏｎ，ＦＬ（１９８８））。上記のオリゴヌク
レオチドはまた、細胞に送達され得、その結果、アンチ
センスＲＮＡまたはＤＮＡがインビボで発現されてｈＡ
ＢＨの産生を阻害し得る。

【００８９】潜在的アンタゴニストはまた、ｈＡＢＨが
損傷ＤＮＡに接近できないようにｈＡＢＨポリペプチド
の有効部位と結合して、その部位を占める小分子を含
む。小分子の例は、小ペプチドまたはペプチド様分子を
含むが、これらに限定されない。

【００９０】アンタゴニストは、特に腫瘍細胞を標的に
し、そしてｈＡＢＨが腫瘍細胞のＤＮＡ修復を妨げるた
めに使用され得、その結果、アルキル化剤を使用した化
学療法の結果は相殺しない。しかし、正常細胞が、ｈＡ
ＢＨによって修復されるアルキル化塩基を有することは
望ましい。従って、上記のアンタゴニストは、特に腫瘍
細胞、または化学療法の対象である他の細胞を標的にし
た場合、唯一効果的なものである。アンタゴニストは、
薬学的に受容可能なキャリア、例えば以下に述べるよう
なものを有する組成物中に用いられ得る。

【００９１】ポリペプチドならびにアゴニストおよびア
ンタゴニストは、適切な薬学的キャリアと組み合わせて
用いられ得る。このような組成物は、治療有効量のポリ
ペプチド、および薬学的に受容可能なキャリアまたは賦
形剤を含む。このようなキャリアとしては、生理食塩
液、緩衝化生理食塩液、デキストロース、水、グリセロ
ール、エタノール、およびそれらの組み合わせが挙げら
れるが、これらに限定されない。処方は、投与の態様に
合わせるべきである。

【００９２】本発明はまた、本発明の薬学的組成物の１
以上の成分で満たされた１以上の容器を含む薬学的パッ
クまたはキットを提供する。このような容器に関して、
薬剤または生物学的製品の製造、使用、または販売を統
制する政府機関により規定された形式の表示をし得、こ
の製品はヒトへの投与についての製造、使用、または販
売における機関による認可を表す。さらに、本発明のポ
リペプチドは、他の治療化合物と併用して用いられ得
る。

【００９３】薬学的組成物は、経口、局所、静脈内、腹
膜内、筋肉内、皮下、鼻腔内、または皮内経路によるよ
うな簡便な様式で投与され得る。薬学的組成物は、特異
症状の処置および／または予防に効果的な量で投与され
る。一般に、薬学的組成物は、少なくとも約１０μｇ／
ｋｇ体重の量で投与され、そして多くの場合、それらは
１日に約８ｍｇ／ｋｇ体重を超えない量で投与される。
多くの場合、投薬量は、投与経路、症状などを考慮し
て、１日に約１０μｇ／ｋｇ体重から約１ｍｇ／ｋｇ体
重量である。

【００９４】ｈＡＢＨポリペプチドおよびアゴニストま
たはアンタゴニストはまた、本発明に従って、インビボ
でのこのようなポリペプチドの発現により用いられ得
る。これは、しばしば「遺伝子治療」と呼ばれる。

【００９５】従って、例えば、患者由来の細胞は、ポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡまたは
ＲＮＡ）を用いてエキソビボで操作され得、次いで、操
作された細胞はこのポリペプチドで処置されるべき患者
に提供される。このような方法は当該分野で周知であ
る。例えば、細胞は、本発明のポリペプチドをコードす
るＲＮＡを含有するレトロウイルス粒子の使用により、
当該分野で公知の手順によって操作され得る。

【００９６】同様に、細胞は、インビボでのポリペプチ
ドの発現のために、例えば、当該分野で公知の手順によ
りインビボで操作され得る。当該分野で公知のように、
本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含有するレ
トロウイルス粒子を産生するための産生細胞は、インビ
ボで細胞を操作するためおよびインビボでのポリペプチ
ドの発現のために患者に投与され得る。このような方法
によって本発明のポリペプチドを投与するためのこれら
の方法および他の方法は、本発明の教示から当業者には
明らかである。例えば、細胞を操作するための発現ビヒ
クルは、レトロウイルス以外のもの（例えば、アデノウ
イルス）であり得る。これは、適切な送達ビヒクルと組
み合わせた後、インビボで細胞を操作するために使用さ
れ得る。

【００９７】ｃＤＮＡクローンの中期染色体展開物への
蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）
は、１工程で正確な染色体位置を提供するために使用さ
れ得る。この技術は、５００または６００塩基ほどの短
いｃＤＮＡで使用され得る；しかし、２，０００塩基対
よりも大きいクローンの方が、簡便な検出に十分なシグ
ナル強度で特徴的な染色体位置に結合しやすい。ＦＩＳ
Ｈは、遺伝子が由来するクローンの使用を必要とし、そ
してこのクローンは長いほど好ましい。例えば、２，０
００塩基対が良好であり、４，０００塩基対はより良好
であり、そして４，０００塩基対を超える長さは、合理
的な割合の時間で（ａ ｒｅｓｏｎａｂｌｅ ｐｅｒｃ
ｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｔｈｅ ｔｉｍｅ）良好な結果を
得るためにはおそらく必ずしも必要でない。この技術の
総説として、Ｖｅｒｍａら、Ｈｕｍａｎ Ｃｈｒｏｍｏ
ｓｏｍｅｓ： ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓ
ｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）を参照のこと。本発
明のｈＡＢＨ遺伝子は、ヒト染色体１４ｑ ２４−３１
にマップされた。

【００９８】一旦配列が正確な染色体位置にマップされ
ると、染色体上での配列の物理的な位置を遺伝的地図の
データと相関させ得る。このようなデータは、例えば、
Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋ、Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ Ｉｎｈｅ
ｒｉｔａｎｃｅ ｉｎ Ｍａｎに見出される（Ｊｏｈｎ
ｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｗｅｌｃ
ｈ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙからオンラインで
入手可能である）。次いで、同一の染色体領域にマップ
されている遺伝子と疾患との関係が、連鎖解析（物理的
に隣接した遺伝子の同時遺伝）により同定される。

【００９９】次に、罹患個体と非罹患個体との間のｃＤ
ＮＡまたはゲノム配列の差異を決定する必要がある。変
異がいくつかまたはすべての罹患個体に観察されるが、
正常な個体には観察されない場合、この変異は疾患の原
因因子であると思われる。

【０１００】物理的マッピングおよび遺伝的マッピング
の技術の現在の解像度では、疾患に関連する染色体領域
に正確に位置決めされたｃＤＮＡは、５０と５００との
間の潜在的原因遺伝子の１つであり得る。（これは、１
メガ塩基のマッピング解像度で、そして２０ｋｂあたり
１遺伝子と仮定する。） このポリペプチド、そのフラグメントもしくは他の誘導
体、またはそれらのアナログ、あるいはそれらを発現す
る細胞は、それらに対する抗体を産生させるための免疫
原として使用され得る。これらの抗体は、例えば、ポリ
クローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得る。
本発明はまた、キメラ抗体、単鎖抗体およびヒト化抗
体、ならびにＦａｂフラグメント、またはＦａｂ発現ラ
イブラリーの産物を包含する。当該分野で公知の種々の
手順が、このような抗体およびフラグメントの生成のた
めに使用され得る。

【０１０１】本発明の配列に対応するポリペプチドに対
して生成される抗体は、動物へのポリペプチドの直接注
射により、または動物へのポリペプチドの投与により得
られ得る。この動物は、好ましくはヒトではない。次い
で、このようにして得られた抗体は、ポリペプチド自体
に結合する。このように、ポリペプチドのフラグメント
のみをコードする配列でさえも、天然のポリペプチド全
体に結合する抗体を生成するために使用され得る。次い
で、このような抗体は、そのポリペプチドを発現する組
織からそのポリペプチドを単離するために使用され得
る。

【０１０２】モノクローナル抗体の調製のために、連続
的な細胞株培養により産生される抗体を提供する任意の
技術が使用され得る。例としては、ハイブリドーマ技術
（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌＳｔｅｉｎ、１９７５、Ｎ
ａｔｕｒｅ、２５６： ４９５−４９７）、トリオーマ
技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒ
ら、１９８３、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ
４：７２）、およびヒトモノクローナル抗体を生成する
ためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、１９８
５、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａ
ｎｄ ＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌ
ｉｓｓ，Ｉｎｃ．、７７−９６頁）が挙げられる。

【０１０３】単鎖抗体を生成するために記載された技術
（米国特許第４，９４６，７７８号）を、本発明の免疫
原性ポリペプチド産物に対する単鎖抗体を生成するため
に適合させ得る。

【０１０４】本発明を以下の実施例を参照にしてさらに
記載する；しかし、本発明はこのような実施例に限定さ
れないことを理解されたい。すべての部または量は、他
に明記しない限り重量基準である。

【０１０５】以下の実施例の理解を容易にするために、
現れる頻度の高い特定の方法および／または用語を記載
する。

【０１０６】「プラスミド」は、小文字のｐの前および
／または後の大文字および／または数字により示され
る。本明細書中の出発プラスミドは、市販であるか、制
限基準なく公的に入手可能であるか、または公表された
手順に従って入手可能なプラスミドから構築され得るか
のいずれかである。さらに、記載されるプラスミドと等
価なプラスミドは、当該分野で公知であり、そして当業
者には明らかである。

【０１０７】ＤＮＡの「消化」は、ＤＮＡ中の特定の配
列でのみ作用する制限酵素でそのＤＮＡを触媒反応的に
切断することをいう。本明細書中で使用される種々の制
限酵素は、市販されており、そしてそれらの反応条件、
補因子、および他の必要条件は当業者に公知のものが使
用された。分析目的には、代表的には１μｇのプラスミ
ドまたはＤＮＡフラグメントを、約２単位の酵素ととも
に約２０μｌの緩衝溶液中で使用する。プラスミド構築
のためのＤＮＡフラグメントを単離する目的のために、
代表的には５〜５０μｇのＤＮＡを２０〜２５０単位の
酵素で、より大きな容量中で消化する。特定の制限酵素
のための適切な緩衝液および基質量は、製造者により特
定される。３７℃での約１時間のインキュベーション時
間が通常使用されるが、これは供給者の説明書に従って
変化し得る。消化の後、目的のフラグメントを単離する
ために、反応物を直接ポリアクリルアミドゲルで電気泳
動した。

【０１０８】切断フラグメントのサイズ分離を、Ｇｏｅ
ｄｄｅｌ，Ｄら，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ Ｒｅ
ｓ．，８：４０５７（１９８０）に記載の８％ポリアク
リルアミドゲルを用いて行った。

【０１０９】「オリゴヌクレオチド」は、１本鎖ポリデ
オキシヌクレオチドまたは２つの相補的なポリデオキシ
ヌクレオチド鎖のいずれかを言い、これらは化学的に合
成され得る。このような合成オリゴヌクレオチドは、
５’リン酸を有さず、従ってキナーゼの存在下でＡＴＰ
とともにリン酸を添加しなければ別のオリゴヌクレオチ
ドに連結しない。合成オリゴヌクレオチドは、脱リン酸
化されていないフラグメントに連結する。

【０１１０】「連結」は、２つの２本鎖核酸フラグメン
トの間でリン酸ジエステル結合を形成するプロセスをい
う（Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．ら、前出、１４６頁）。他
に提供しない限り、連結は、ほぼ等モル量の連結される
べきＤＮＡフラグメント０．５μｇあたり１０単位のＴ
４ ＤＮＡリガーゼ（「リガーゼ」）とともに、公知の
緩衝液および条件を用いて達成され得る。

【０１１１】他に記載しない限り、形質転換はＧｒａｈ
ａｍ，Ｆ．およびＶａｎ ｄｅｒＥｂ，Ａ．、Ｖｉｒｏ
ｌｏｇｙ、５２：４５６−４５７（１９７３）の方法に
記載されるように行った。

【０１１２】

【実施例】（実施例１） （ｈＡＢＨの細菌発現および機能相補性）ｈＡＢＨをコ
ードするＤＮＡ配列（ＡＴＣＣ寄託番号第７５８５５
号）を、ｈＡＢＨタンパク質の５’および３’配列に対
応するＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーを用いて最
初に増幅する。５’オリゴヌクレオチドプライマーは、
配列５’ＧＣＧＣＧＴＣＧＡＣＡＴＧＴＧＴＣＴＴＣＴ
ＧＴＣＡＧＴＧを有し、ＳａｌＩ制限酵素部位（ＧＴＣ
ＧＡＣ）、続いてタンパク質コドンの推定Ｎ末端アミノ
酸から開始する１８ヌクレオチドのｈＡＢＨコード配列
を含む。３’プライマーは、５’ＧＣＧＣＡＡＧＣＴＴ
ＴＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＧＣＡＧＡＡＡＣＣ３’は、Ｈ
ｉｎｄＩＩＩ制限酵素部位（ＡＡＧＣＴＴ）に相補的な
配列を含み、続いてｈＡＢＨの２０ヌクレオチドを含
む。制限酵素部位は、細菌発現ベクターｐＱＥ−９（Ｑ
ｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕ
ｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）の制限
酵素部位に対応する。ｐＱＥ−９は、抗生物質耐性（Ａ
ｍｐ^r）、細菌の複製起点（ｏｒｉ）、ＩＰＴＧ調節可
能プロモーターオペレーター（Ｐ／Ｏ）、リボソーム結
合部位（ＲＢＳ）、６−Ｈｉｓタグ、および制限酵素部
位をコードする。次いで、ｐＱＥ−９をＳａｌＩおよび
ＨｉｎｄＩＩＩで消化した。増殖配列をｐＱＥ−９に連
結し、そしてヒスチジンタグおよびＲＢＳをコードする
配列にインフレームに挿入した。次いで、連結混合物を
用いて、Ｅ．ｃｏｌｉ変異体株ＨＫ８２をＳａｍｂｒｏ
ｏｋ，Ｊ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：
Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，
（１９８９）に記載の手順により形質転換した。形質転
換体はＬＢプレート上で増殖するそれらの能力により同
定され、そしてアンピシリン耐性コロニーが選択され
た。プラスミドＤＮＡを単離して、制限分析により確認
した。

【０１１３】次に、ＡｌｋＢ変異体株ＨＫ８２は、Ａｌ
ｋＢ変異体を相補する能力について試験された。ｐＱＥ
−９ベクターを有する野生型Ｅ．Ｃｏｌｉ株ＨＫ８１お
よびベクターｐＱＥ−９ｈＡＢＨを含むＥ．Ｃｏｌｉ変
異体株ＨＫ８２を３７℃でＬＢアンピシリン培地中で２
Ｘ１０⁸細胞／ｍｌまで生育させた。次に、細胞をＭ９
塩を用いて希釈し、そして０、０．００１、０．０２お
よび０．０３％ＭＭＳを含むＬＢアンピシリンプレート
に播種した。プレートを一晩３７℃でインキュベートし
た。結果を図２に示す。

【０１１４】（実施例２） （ＣＯＳ細胞における組換えｈＡＢＨの発現）プラスミ
ド（ｈＡＢＨ ＨＡ）の発現を、ベクターｐｃＤＮＡＩ
／Ａｍｐ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により誘導する。ベ
クターｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐは：１）ＳＶ４０複製起
点、２）アンピシリン耐性遺伝子、３）Ｅ．ｃｏｌｉ複
製起点、４）ポリリンカー領域、ＳＶ４０イントロンそ
してポリアデニル化部位が続くＣＭＶプロモーター、を
含有する。完全なｈＡＢＨ前駆体、およびその３’末端
にインフレームで融合されたＨＡタグをコードするＤＮ
Ａフラグメントを、ベクターのポリリンカー領域にクロ
ーン化した。それゆえ、組換えタンパク質発現はＣＭＶ
プロモーター下で支配される。ＨＡタグは、以前に記載
されたようなインフルエンザヘマグルチニンタンパク質
由来のエピトープに対応する（Ｉ．Ｗｉｌｓｏｎ、Ｈ．
Ｎｉｍａｎ、Ｒ．Ｈｅｉｇｈｔｅｎ、Ａ Ｃｈｅｒｅｎ
ｓｏｎ、Ｍ．Ｃｏｎｎｏｌｌｙ、およびＲ．Ｌｅｒｎｅ
ｒ、１９８４，Ｃｅｌｌ ３７，７６７）。本発明者ら
の標的タンパク質に対するＨＡタグ融合物は、ＨＡエピ
トープを認識する抗体を用いて組換えタンパク質の容易
な検出を可能にする。

【０１１５】プラスミド構築戦略を以下に記述する：ｈ
ＡＢＨをコードするＤＮＡ配列（ＡＴＣＣ寄託番号第７
５８５５号）を、２つのプライマーを用いて、クローン
化された元来のＥＳＴに対するＰＣＲにより構築した：
５’プライマー５’ＧＣＧＣＡＡＧＣＴＴＡＴＧＴＧＴ
ＣＴＴＣＴＧＴＣＡＧＴＧ ３’は、ＨｉｎｄＩＩＩ部
位（ＡＡＧＣＴＴ）、続いて開始コドンから開始する１
８ヌクレオチドのｈＡＢＨコード配列を含む；３’プラ
イマー配列５’ＧＣＧＣＧＡＡＴＴＣＴＣＡＡＧＣＧＴ
ＡＧＴＣＴＧＧＧＡＣＧＴＣＧＴＡＴＧＧＧＴＡＴＣＣ
ＡＧＡＴＧＧＣＡＧＡＡＡＣＣ ３’は、ＥｃｏＲＩ部
位、翻訳停止コドンに相補的な配列、ＨＡタグに相補的
な配列、およびｈＡＢＨコード配列の最後の１７ヌクレ
オチド（停止コドンは含まない）に相補的な配列を含
む。それゆえ、ＰＣＲ産物は、ＨｉｎｄＩＩＩ部位、イ
ンフレーム融合のＨＡタグが続くｈＡＢＨコード配列、
ＨＡタグに隣接する翻訳終止停止コドン、およびＥｃｏ
ＲＩ部位を含む。ＰＣＲ増幅ＤＮＡフラグメントおよび
ベクター（ｐｃＤＮＡＩ／Ａｍｐ）を、ＨｉｎｄＩＩＩ
およびＥｃｏＲＩ制限酵素により消化し、そして連結し
た。連結混合物を、Ｅ．Ｃｏｌｉ ＳＵＲＥ株（Ｓｔｒ
ａｔａｇｅｎｅ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１
１０９９ Ｎｏｒｔｈ Ｔｏｒｒｅｙ Ｐｉｎｅｓ Ｒ
ｏａｄ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ ９２０３７より入手
可能）に形質転換し、形質転換培養物をアンピシリン培
地プレートに播種し、そして耐性コロニーを選択した。
プラスミドＤＮＡを形質転換体より単離し、そして正し
いフラグメントの存在を制限分析で試験した。組換えｈ
ＡＢＨの発現のために、ＣＯＳ細胞をＤＥＡＥ−ＤＥＸ
ＴＲＡＮ法により発現ベクターでトランスフェクトした
（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ、Ｅ．Ｆｒｉｔｓｃｈ、Ｔ．Ｍ
ａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓ
ｓ，（１９８９））。ｈＡＢＨ ＨＡタンパク質の発現
を放射標識および免疫沈澱法により検出した。（Ｅ．Ｈ
ａｒｌｏｗ，Ｄ．Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐ
ｒｅｓｓ，（１９８８））。細胞を、トランスフェクシ
ョンの２日後、³⁵Ｓ−システインで８時間標識した。次
いで培養培地を回収し、そして細胞を界面活性剤（ＲＩ
ＰＡ緩衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１％ ＮＰ−４
０、０．１％ ＳＤＳ、１％ ＮＰ−４０、０．５％
ＤＯＣ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５））で溶解し
た。（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｉ．ら、同上３７：７６７（１９
８４））。細胞溶解物および培養培地の両方を、ＨＡ特
異的モノクローナル抗体により沈殿させた。沈澱したタ
ンパク質を１５％ ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で分析し
た。

【０１１６】（実施例３） （ヒト組織におけるｈＡＢＨの発現パターン）ヒト組織
におけるｈＡＢＨの発現レベルを調べるためにノーザン
ブロット分析を行った。総細胞ＲＮＡサンプルをＲＮＡ
ｚｏｌ^TMＢシステムを用いて単離した（Ｂｉｏｔｅｃｘ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．６０２３ Ｓｏ
ｕｔｈＬｏｏｐ Ｅａｓｔ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ７７
０３３）。特定のヒト組織のそれぞれから単離した約１
０μｇの総ＲＮＡを１％アガロースゲルで分離し、そし
てナイロンフィルター上にブロットした（Ｓａｍｂｒｏ
ｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ，Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎ
ｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，（１９８９））。標識
反応をＳｔｒａｔａｇｅｎｅ ＰｒｉｍｅＩｔキットに
従って５０ｎｇＤＮＡのフラグメントを用いて行った。
標識されたＤＮＡをＳｅｌｅｃｔ−Ｇ−５０カラムを用
いて精製した。（５Ｐｒｉｍｅ−３Ｐｒｉｍｅ，Ｉｎ
ｃ．５６０３ ＡｒａｐａｈｏｅＲｏａｄ， Ｂｏｕｌ
ｄｅｒ，ＣＯ ８０３０３）。次に、フィルターを０．
５Ｍ ＮａＰＯ₄、ｐＨ ７．４および７％ ＳＤＳ中
で６５℃で一晩、１，０００，０００ｃｐｍ／ｍｌで放
射標識された全長ｈＡＢＨ遺伝子とハイブリダイズし
た。０．５ＸＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳを用いて室温で
二回、および６０℃で二回洗浄した後、フィルターを増
強スクリーンとともに−７０℃で一晩さらした。ｈＡＢ
ＨのメッセージＲＮＡは、胸腺、精巣、胆嚢、肝臓、前
立腺、心臓および胎盤で多量に存在していた。

【０１１７】ヒトｈＡＢＨのポリペプチド、およびこの
ようなポリペプチドをコードするＤＮＡ（ＲＮＡ）なら
びに組換え技術によるこのようなポリペプチドを産生す
る手順を開示する。変異の処置および損傷したＤＮＡか
ら生じる疾患（例えば癌）の処置のためにこのようなポ
リペプチドを使用する方法もまた開示する。このような
ポリペプチドに対するアンタゴニストおよび癌細胞の化
学療法を増強する治療としてのその使用もまた開示す
る。

【０１１８】本発明の多くの改変および変化は、上記の
教示に照らして可能である。従って、添付された請求の
範囲内で、本発明は特に記載されたもの以外にも実施さ
れ得る。

【０１１９】

【発明の効果】ヒトｈＡＢＨのポリペプチド、およびこ
のようなポリペプチドをコードするＤＮＡ（ＲＮＡ）な
らびに組換え技術によるこのようなポリペプチドを産生
する手順を提供する。変異の処置および損傷したＤＮＡ
から生じる疾患（例えば癌）の処置のためにこのような
ポリペプチドを使用する方法もまた提供する。このよう
なポリペプチドに対するアンタゴニストおよび癌細胞の
化学療法を増強する治療としてのその使用もまた提供す
る。

【０１２０】

【配列表】

【０１２１】

【表１】

【図面の簡単な説明】

以下の図面は、本発明の実施態様の例示であり、そして
請求の範囲に含まれる本発明の範囲を限定することを意
図しない。

【図１Ａ】図１Ａは、ｈＡＢＨのｃＤＮＡ配列および対
応する推定のアミノ酸配列を示す。示されたアミノ酸配
列は推定の成熟ポリペプチドを含む。アミノ酸の標準的
な１文字略記が用いられている。

【図１Ｂ】図１Ｂは、ｈＡＢＨのｃＤＮＡ配列および対
応する推定のアミノ酸配列を示す。示されたアミノ酸配
列は推定の成熟ポリペプチドを含む。アミノ酸の標準的
な１文字略記が用いられている。

【図１Ｃ】図１Ｃは、ｈＡＢＨのｃＤＮＡ配列および対
応する推定のアミノ酸配列を示す。示されたアミノ酸配
列は推定の成熟ポリペプチドを含む。アミノ酸の標準的
な１文字略記が用いられている。

【図１Ｄ】図１Ｄは、ｈＡＢＨのｃＤＮＡ配列および対
応する推定のアミノ酸配列を示す。示されたアミノ酸配
列は推定の成熟ポリペプチドを含む。アミノ酸の標準的
な１文字略記が用いられている。

【図１Ｅ】図１Ｅは、ｈＡＢＨのｃＤＮＡ配列および対
応する推定のアミノ酸配列を示す。示されたアミノ酸配
列は推定の成熟ポリペプチドを含む。アミノ酸の標準的
な１文字略記が用いられている。

【図１Ｆ】図１Ｆは、ｈＡＢＨのｃＤＮＡ配列および対
応する推定のアミノ酸配列を示す。示されたアミノ酸配
列は推定の成熟ポリペプチドを含む。アミノ酸の標準的
な１文字略記が用いられている。

【図１Ｇ】図１Ｇは、ｈＡＢＨのｃＤＮＡ配列および対
応する推定のアミノ酸配列を示す。示されたアミノ酸配
列は推定の成熟ポリペプチドを含む。アミノ酸の標準的
な１文字略記が用いられている。

【図２】図２は、ＭＭＳ（メタンスルホン酸メチル）の
増加濃度存在下における細胞の生存率の概略図である。
ＡｌｋＢの野生型である細胞は、ＭＭＳ濃度が増加する
に従い生存率の減少を示さない。変異体（ＭＴ）は、Ｍ
ＭＳ濃度が増加するに従い、生存率の急激な減少を示
す。本明細書中のｈＡＢＨを有する細胞は、変異体細胞
と比較して、生存率の増加を示す。

【図３】図３は、ｈＡＢＨ（上）とＥ．Ｃｏｌｉ由来の
ＡｌｋＢ（下）との間のアミノ酸の相同性を示す。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 35/00 48/00 43/00 １０５ Ａ６１Ｐ 35/00 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 43/00 １０５ Ａ６１Ｋ 37/02 (71)出願人 597018381 9410 Ｋｅｙ Ｗｅｓｔ Ａｖｅｎｕｅ, Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， Ｍａｒｙｌａｎ ｄ 20850， Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅ ｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ (72)発明者 ウェイ イン−フェイ アメリカ合衆国 メリーランド 20878, ダーネスタウン， ストロー ベール レーン 13524 (72)発明者 グランガー ジー． サットン ザ サー ド アメリカ合衆国 メリーランド 21045, コロンビア， スノーマン コート 6409 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA21 CA04 DA06 EA04 FA02 FA10 GA11 GA13 HA01 HA17 4C084 AA02 AA13 AA17 BA01 BA08 BA22 BA23 MA01 NA14 ZB212 ZB262 4C085 AA13 AA14 CC32 EE01 GG01 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA16 MA01 MA04 NA14 ZB21 ZB26

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下からなる群から選択される単離され
   たポリヌクレオチド； （ａ）図１の推定アミノ酸配列を有するｈＡＢＨポリペ
   プチド、あるいは該ポリペプチドのフラグメント、アナ
   ログまたは誘導体をコードするポリヌクレオチド； （ｂ）ＡＴＣＣ寄託番号７５８５５中に含まれるｃＤＮ
   Ａによりコードされるアミノ酸配列を有するｈＡＢＨポ
   リペプチド、あるいは該ポリペプチドのフラグメント、
   アナログまたは誘導体をコードするポリヌクレオチド。