JP2002138098A - ペプチド化合物及びそれを含有する医薬組成物 - Google Patents
ペプチド化合物及びそれを含有する医薬組成物Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 オキシトシン受容体に対し強力、且つ選択的
な拮抗作用を有する化合物、及びこれを有効成分とする
切迫早産予防用または治療用の医薬組成物を提供するこ
と。 【解決手段】 化学式（Ｉ）で表されるペプチド化合物
またはその薬理学的に許容される塩、並びにそれを有効
成分とする切迫早産の予防用または治療用の医薬組成
物。 【化１】
な拮抗作用を有する化合物、及びこれを有効成分とする
切迫早産予防用または治療用の医薬組成物を提供するこ
と。 【解決手段】 化学式（Ｉ）で表されるペプチド化合物
またはその薬理学的に許容される塩、並びにそれを有効
成分とする切迫早産の予防用または治療用の医薬組成
物。 【化１】
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ペプチド化合物に
関する。詳しくは選択的なオキシトシン受容体拮抗作用
を有するペプチド化合物またはその薬理学的に許容され
る塩、及びこれを有効成分とする医薬組成物に関する。
なお、本発明で提供されるペプチド化合物は、切迫早産
の予防または治療に特に有用である。
関する。詳しくは選択的なオキシトシン受容体拮抗作用
を有するペプチド化合物またはその薬理学的に許容され
る塩、及びこれを有効成分とする医薬組成物に関する。
なお、本発明で提供されるペプチド化合物は、切迫早産
の予防または治療に特に有用である。
【０００２】
【従来の技術】切迫早産は出生前での羅患および死亡の
主な原因であるが、現存の早産防止する方法は成功して
いるとは言えず、また顕著な副作用をもたらすことがあ
る。
主な原因であるが、現存の早産防止する方法は成功して
いるとは言えず、また顕著な副作用をもたらすことがあ
る。
【０００３】この切迫早産の一つ大きな原因として、オ
キシトシンによる子宮収縮作用が考えられている。この
オキシトシンの作用は細胞膜上のオキシトシン受容体を
介していると考えられるため、オキシトシンとその受容
体の結合に拮抗する物質は、切迫早産の予防または治療
薬として有用である。
キシトシンによる子宮収縮作用が考えられている。この
オキシトシンの作用は細胞膜上のオキシトシン受容体を
介していると考えられるため、オキシトシンとその受容
体の結合に拮抗する物質は、切迫早産の予防または治療
薬として有用である。
【０００４】またオキシトシン受容体拮抗剤は、オキシ
トシンと構造が類似する抗利尿ホルモンであるバゾプレ
シンの受容体とも拮抗することが多い。このためオキシ
トシン受容体を選択的に拮抗することは血圧降下等の副
作用の少ない切迫早産の予防または治療薬として必須の
条件である。
トシンと構造が類似する抗利尿ホルモンであるバゾプレ
シンの受容体とも拮抗することが多い。このためオキシ
トシン受容体を選択的に拮抗することは血圧降下等の副
作用の少ない切迫早産の予防または治療薬として必須の
条件である。
【０００５】従来オキシトシン受容体拮抗剤がいくつか
報告されている。実例を示せば、Endocrinology、81、1
267(1967)をはじめ、Endocrinology、106、81(1980)や
J.Med.Chem.、26、1607(1983)、またEndocrinology、8
8、173(1981)さらにObstet.andGynecol.Scand.、64、49
9(1985)にオキシトシン拮抗剤の報告がある。しかしな
がらこれらは活性及びオキシトシン受容体に対する選択
性の面で十分であるとは言い難い。
報告されている。実例を示せば、Endocrinology、81、1
267(1967)をはじめ、Endocrinology、106、81(1980)や
J.Med.Chem.、26、1607(1983)、またEndocrinology、8
8、173(1981)さらにObstet.andGynecol.Scand.、64、49
9(1985)にオキシトシン拮抗剤の報告がある。しかしな
がらこれらは活性及びオキシトシン受容体に対する選択
性の面で十分であるとは言い難い。
【０００６】またPept.1994,Proc.Eur.Pept.Symp.,23rd
(1995)では、下記化学式で示されるオキシトシンアンタ
ゴニストが掲載されている。
(1995)では、下記化学式で示されるオキシトシンアンタ
ゴニストが掲載されている。
【０００７】
【化２】
【０００８】さらに特表平１０−５０７９９５号公報に
は、本発明化合物と同等のオキシトシン受容体拮抗活性
を有する下記化学式で示される化合物（III）が報告さ
れている。
は、本発明化合物と同等のオキシトシン受容体拮抗活性
を有する下記化学式で示される化合物（III）が報告さ
れている。
【０００９】
【化３】
【００１０】しかしながら、本発明で提供されうるペプ
チド化合物（Ｉ）は、その構造中に塩基性アミノ酸のＡ
ｒｇ残基を有しておらず、前述の化合物（II）および化
合物（III）とは大きく構造を異にする。この構造上の
違いがオキシトシンおよびバゾプレシン受容体との親和
性に大きく寄与しており、本発明化合物はオキシトシン
受容体に対し選択的に拮抗する。
チド化合物（Ｉ）は、その構造中に塩基性アミノ酸のＡ
ｒｇ残基を有しておらず、前述の化合物（II）および化
合物（III）とは大きく構造を異にする。この構造上の
違いがオキシトシンおよびバゾプレシン受容体との親和
性に大きく寄与しており、本発明化合物はオキシトシン
受容体に対し選択的に拮抗する。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、オキ
シトシン受容体に対し強力、且つ選択的な拮抗作用を有
する化合物（Ｉ）、及びこれを有効成分とする切迫早産
予防用または治療用の医薬組成物を提供することにあ
る。
シトシン受容体に対し強力、且つ選択的な拮抗作用を有
する化合物（Ｉ）、及びこれを有効成分とする切迫早産
予防用または治療用の医薬組成物を提供することにあ
る。
【００１２】
【問題を解決するための手段】本発明者らは上述の目的
を達成するため鋭意研究を重ねた結果、特定のペプチド
化合物またはその薬理学的に許容される塩を見出し、本
発明を完成するに至った。
を達成するため鋭意研究を重ねた結果、特定のペプチド
化合物またはその薬理学的に許容される塩を見出し、本
発明を完成するに至った。
【００１３】すなわち、本発明の第１によれば、下記化
学式（Ｉ）で表されるペプチド化合物またはその薬理学
的に許容される塩が提供される。
学式（Ｉ）で表されるペプチド化合物またはその薬理学
的に許容される塩が提供される。
【００１４】
【化４】
【００１５】また本発明の第２によれば、化合物（Ｉ）
またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とするオ
キシトシン受容体拮抗剤が提供される。
またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とするオ
キシトシン受容体拮抗剤が提供される。
【００１６】また本発明の第３によれば、化合物（Ｉ）
またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とする切
迫早産の予防用または治療用の医薬組成物が提供され
る。
またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とする切
迫早産の予防用または治療用の医薬組成物が提供され
る。
【００１７】
【発明の実施の形態】以下に化合物（Ｉ）の製造方法に
ついて、いくつかの略語を使用しつつ説明するが、略語
の内容は以下の通りである。 （光学異性体）本明細書で使用するアミノ酸等において
光学異性体が存在する場合は、Ｄ体を使用する場合のみ
「Ｄ−」を付して示し、特に明示しない場合はＬ体を示
す。 （アミノ酸残基）Ａｓｎ：アスパラギン、Ｉｌｅ：イソ
ロイシン、Ｇｌｎ：グルタミン、Ｐｒｏ：プロリン、Ｔ
ｒｐ：トリプトファン、Ｐｅｎ：ペニシラミン （保護基）Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシカルボニル、ＭＢｚ
ｌ：４−メトキシベンジル、Ｍｔｓ：メシチレンスルフ
ォニル （脱水縮合カップリング試薬）ＨＯＢｔ：１−ヒドロキ
シベンゾトリアゾール、ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカル
ボジイミド （溶媒）ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣ
Ｍ：ジクロロメタン、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、ＤＭ
Ｆ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド （その他）ＥＭ：エチルメルカプタン、ＰＡＭ：フェニ
ルアセトアミドメチル、ＴＰＡ（ＭＢｚｌ）：下記構造
の化合物
ついて、いくつかの略語を使用しつつ説明するが、略語
の内容は以下の通りである。 （光学異性体）本明細書で使用するアミノ酸等において
光学異性体が存在する場合は、Ｄ体を使用する場合のみ
「Ｄ−」を付して示し、特に明示しない場合はＬ体を示
す。 （アミノ酸残基）Ａｓｎ：アスパラギン、Ｉｌｅ：イソ
ロイシン、Ｇｌｎ：グルタミン、Ｐｒｏ：プロリン、Ｔ
ｒｐ：トリプトファン、Ｐｅｎ：ペニシラミン （保護基）Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシカルボニル、ＭＢｚ
ｌ：４−メトキシベンジル、Ｍｔｓ：メシチレンスルフ
ォニル （脱水縮合カップリング試薬）ＨＯＢｔ：１−ヒドロキ
シベンゾトリアゾール、ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカル
ボジイミド （溶媒）ＤＩＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン、ＤＣ
Ｍ：ジクロロメタン、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、ＤＭ
Ｆ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド （その他）ＥＭ：エチルメルカプタン、ＰＡＭ：フェニ
ルアセトアミドメチル、ＴＰＡ（ＭＢｚｌ）：下記構造
の化合物
【００１８】
【化５】
【００１９】化合物（Ｉ）は、一般的なペプチド合成法
である固相法あるいは液相法にて合成できる。固相法ま
たは液相法の選択に一般則等はなく、目的としたペプチ
ドの物性や必要量等で合成法を選択することになる。
である固相法あるいは液相法にて合成できる。固相法ま
たは液相法の選択に一般則等はなく、目的としたペプチ
ドの物性や必要量等で合成法を選択することになる。
【００２０】固相法による化合物（Ｉ）の合成は、後記
実施例に示すように、ＰＡＭ樹脂上に保護アミノ酸を活
性エステル法またはＴＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリ
アゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチル
ウロニウム テトラフルオロボレート）法を繰り返して
導入したペプチド鎖を構築できる。液体フッ化水素処理
によりＤ−Ｔｒｐ残基側鎖のＣＨＯ（ホルミル）基以外
の全保護基と樹脂からペプチドを解離させた後、ＣＨＯ
基を酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ９．４７）で除去
し、さらにフェリシアン化カリウムで環化させることが
できる。こうして得られる粗ペプチドを，逆相ＨＰＬＣ
を用いて分取精製し、本発明化合物を得ることができ
る。
実施例に示すように、ＰＡＭ樹脂上に保護アミノ酸を活
性エステル法またはＴＢＴＵ（２−（１Ｈ−ベンゾトリ
アゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチル
ウロニウム テトラフルオロボレート）法を繰り返して
導入したペプチド鎖を構築できる。液体フッ化水素処理
によりＤ−Ｔｒｐ残基側鎖のＣＨＯ（ホルミル）基以外
の全保護基と樹脂からペプチドを解離させた後、ＣＨＯ
基を酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ９．４７）で除去
し、さらにフェリシアン化カリウムで環化させることが
できる。こうして得られる粗ペプチドを，逆相ＨＰＬＣ
を用いて分取精製し、本発明化合物を得ることができ
る。
【００２１】本発明において、化合物（Ｉ）の「薬理学
的に許容される塩」とは、慣用の無毒性の塩すなわち酸
付加塩及び各種塩基との塩を挙げることができる。より
具体的には、塩酸、硝酸、硫酸等の無機酸塩、酢酸、ク
エン酸、フマル酸、酒石酸等の有機酸塩、メタンスルホ
ン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等のスルホン酸塩及びア
ラニン、ロイシン、グルタミン酸等のアミノ酸塩並びに
アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩
等）、アルカリ土類金属塩（例えばマグネシウム塩、カ
ルシウム塩等）等の無機塩基塩及びトリエチルアミン
塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、ト
リエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、
Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等の有機アミ
ン塩が挙げられる。
的に許容される塩」とは、慣用の無毒性の塩すなわち酸
付加塩及び各種塩基との塩を挙げることができる。より
具体的には、塩酸、硝酸、硫酸等の無機酸塩、酢酸、ク
エン酸、フマル酸、酒石酸等の有機酸塩、メタンスルホ
ン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等のスルホン酸塩及びア
ラニン、ロイシン、グルタミン酸等のアミノ酸塩並びに
アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩、カリウム塩
等）、アルカリ土類金属塩（例えばマグネシウム塩、カ
ルシウム塩等）等の無機塩基塩及びトリエチルアミン
塩、ピリジン塩、ピコリン塩、エタノールアミン塩、ト
リエタノールアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、
Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩等の有機アミ
ン塩が挙げられる。
【００２２】化合物（Ｉ）は、水和物若しくは溶媒和物
または結晶多形の物質として単離されることがあるが、
これらもまた本発明に包含される。
または結晶多形の物質として単離されることがあるが、
これらもまた本発明に包含される。
【００２３】化合物（Ｉ）は、オキシトシン受容体に対
し拮抗作用が強力なので、切迫早産予防または治療薬と
して使用することができる。
し拮抗作用が強力なので、切迫早産予防または治療薬と
して使用することができる。
【００２４】化合物（Ｉ）の投与形態としては、注射
剤、点鼻剤、点眼剤、パップ剤、軟膏剤、クリーム剤も
しくは坐剤等による非経口投与または錠剤、カプセル
剤、顆粒剤、散剤、吸入剤若しくはシロップ剤等による
経口投与を挙げることができる。これらの製剤を調製す
るに当たっては、医薬として許容される担体を用いて、
常法により製造することができる。
剤、点鼻剤、点眼剤、パップ剤、軟膏剤、クリーム剤も
しくは坐剤等による非経口投与または錠剤、カプセル
剤、顆粒剤、散剤、吸入剤若しくはシロップ剤等による
経口投与を挙げることができる。これらの製剤を調製す
るに当たっては、医薬として許容される担体を用いて、
常法により製造することができる。
【００２５】化合物（Ｉ）の薬剤としての投与量は、症
状の程度、患者の全身状態、年齢、体重、投与経路や剤
形等を考慮して適宜決定されるものであるが、有効成分
である化合物（Ｉ）の量に換算して、非経口投与の場合
は、通常一日当たり２μｇ〜２０ｍｇ／ｋｇであり、好
ましくは２０μｇ〜２ｍｇ／ｋｇである。また、通常一
回当たり１μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは１
０μｇ〜１ｍｇ／ｋｇである。また、経口投与の場合
は、通常一日当たり１０μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであ
り、好ましくは１００μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。ま
た、通常一回当たり５μｇ〜５０ｍｇ／ｋｇであり、好
ましくは５０μｇ〜５ｍｇ／ｋｇである。
状の程度、患者の全身状態、年齢、体重、投与経路や剤
形等を考慮して適宜決定されるものであるが、有効成分
である化合物（Ｉ）の量に換算して、非経口投与の場合
は、通常一日当たり２μｇ〜２０ｍｇ／ｋｇであり、好
ましくは２０μｇ〜２ｍｇ／ｋｇである。また、通常一
回当たり１μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは１
０μｇ〜１ｍｇ／ｋｇである。また、経口投与の場合
は、通常一日当たり１０μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであ
り、好ましくは１００μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。ま
た、通常一回当たり５μｇ〜５０ｍｇ／ｋｇであり、好
ましくは５０μｇ〜５ｍｇ／ｋｇである。
【００２６】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれにより何ら限定されるものではな
い。
するが、本発明はこれにより何ら限定されるものではな
い。
【００２７】本発明化合物は、ペプチド合成機(ABI 430
A型)を用い、Ｂｏｃアミノ酸を用いる固相法により樹脂
上にペプチド鎖を構築した。その際の逆相ＨＰＬＣ分析
条件は以下に示した。
A型)を用い、Ｂｏｃアミノ酸を用いる固相法により樹脂
上にペプチド鎖を構築した。その際の逆相ＨＰＬＣ分析
条件は以下に示した。
【００２８】カラム：ＴＳＫ ｇｅｌ ＯＤＳ−１２０
Ｔ（４．６×２５０ｍｍ，東ソー社製） 溶出液：０．１％ ＴＦＡaq.／ＣＨ3ＣＮ７０／３０→
５０／５０（ｖ／ｖ，３０ｍｉｎ．） 検出波長：２１４ｍｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ． また合成に用いた担体樹脂、保護アミノ酸、試薬を以下
に示す。
Ｔ（４．６×２５０ｍｍ，東ソー社製） 溶出液：０．１％ ＴＦＡaq.／ＣＨ3ＣＮ７０／３０→
５０／５０（ｖ／ｖ，３０ｍｉｎ．） 検出波長：２１４ｍｍ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ． また合成に用いた担体樹脂、保護アミノ酸、試薬を以下
に示す。
【００２９】Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＣＨ2−ＰＡＭ樹脂
（Ｂｏｃ−Ｐｒｏ：０．６４ｍｍｏｌ／ｇ，０．５ｍｍ
ｏｌ），Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｅｎ（ＭＢｚｌ）−ＯＨ，Ｂｏ
ｃ−Ａｓｎ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｉ
ｌｅ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ）−ＯＨ，Ｔ
ＰＡ（ＭＢｚｌ） さらに縮合反応には活性エステル法またはＴＢＴＵ法を
用いた。それぞれの方法については以下に記す。
（Ｂｏｃ−Ｐｒｏ：０．６４ｍｍｏｌ／ｇ，０．５ｍｍ
ｏｌ），Ｂｏｃ−Ｌ−Ｐｅｎ（ＭＢｚｌ）−ＯＨ，Ｂｏ
ｃ−Ａｓｎ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｉ
ｌｅ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ｄ−Ｔｒｐ（ＣＨＯ）−ＯＨ，Ｔ
ＰＡ（ＭＢｚｌ） さらに縮合反応には活性エステル法またはＴＢＴＵ法を
用いた。それぞれの方法については以下に記す。
【００３０】（ＨＯＢｔを用いる活性エステル法）導入
する保護アミノ酸、ＨＯＢｔおよびＤＣＣはいずれも２
ｍｍｏｌ用い、縮合反応時間は１２０分間に設定した。
する保護アミノ酸、ＨＯＢｔおよびＤＣＣはいずれも２
ｍｍｏｌ用い、縮合反応時間は１２０分間に設定した。
【００３１】（ＴＢＴＵ法）導入する保護アミノ酸、Ｈ
ＯＢｔおよびＴＢＴＵはいずれも２ｍｍｏ１用い、ＤＩ
ＥＡは４ｍｍｏ１用い、縮合反応時間は１２０分間に設
定した。さらに各アミノ酸導入時の反応の完結度はカイ
ザーテスト（（Ｐｅｎ（ＭＢｚｌ）残基導入時はイサチ
ンテスト）で確認した。
ＯＢｔおよびＴＢＴＵはいずれも２ｍｍｏ１用い、ＤＩ
ＥＡは４ｍｍｏ１用い、縮合反応時間は１２０分間に設
定した。さらに各アミノ酸導入時の反応の完結度はカイ
ザーテスト（（Ｐｅｎ（ＭＢｚｌ）残基導入時はイサチ
ンテスト）で確認した。
【００３２】[１]固相合成 （１）Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＣＨ2−ＰＡＭ樹脂（０．５
ｍｍｏｌ）を合成機の反応槽に添加し、ＤＣＭ１０ｍｌ
で３回洗浄後、ＤＣＭ中で一夜放置、樹脂を充分に膨潤
させた。濾過後、上記樹脂に５０％ＴＦＡ／ＤＣＭ溶液
１０ｍ１を添加し、約２分間攪拌した。濾過後さらに５
０％ＴＦＡ／ＤＣＭ溶液１０ｍ１を加え３０分間攪拌処
理し、脱Ｂｏｃ反応を行った。反応終了後ＴＦＡ溶液を
濾過し、ＤＣＭ各１０ｍ１で３回洗浄、濾過した。
ｍｍｏｌ）を合成機の反応槽に添加し、ＤＣＭ１０ｍｌ
で３回洗浄後、ＤＣＭ中で一夜放置、樹脂を充分に膨潤
させた。濾過後、上記樹脂に５０％ＴＦＡ／ＤＣＭ溶液
１０ｍ１を添加し、約２分間攪拌した。濾過後さらに５
０％ＴＦＡ／ＤＣＭ溶液１０ｍ１を加え３０分間攪拌処
理し、脱Ｂｏｃ反応を行った。反応終了後ＴＦＡ溶液を
濾過し、ＤＣＭ各１０ｍ１で３回洗浄、濾過した。
【００３３】（２）１０％ＤＩＥＡ／ＤＭＦ溶液各１０
ｍｌで２回中和処理して残存するＴＦＡを除去、アミノ
基を遊離させた。さらにＤＭＦ各１０ｍ１で６回洗浄、
濾過を繰り返し、残存するＤＩＥＡを除去した。
ｍｌで２回中和処理して残存するＴＦＡを除去、アミノ
基を遊離させた。さらにＤＭＦ各１０ｍ１で６回洗浄、
濾過を繰り返し、残存するＤＩＥＡを除去した。
【００３４】（３）次に、ここまでの操作と並行してＢ
ｏｃ−Ｐｅｎ（ＭＢｚｌ）−ＯＨを活性化させた。すな
わち、Ｂｏｃ−Ｐｅｎ（ＭＢｚｌ）−ＯＨ（４３１ｍ
ｇ，２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（３０６ｍｇ，２ｍｍ
ｏｌ）をＤＭＦ ４ｍｌに溶解させ、別の反応槽に加え
てさらに０．５Ｍ ＤＣＣ／ＤＣＭ溶液４ｍｌを添加し
窒素気流下、約４０分間攪拌させて活性エステルに導い
た。
ｏｃ−Ｐｅｎ（ＭＢｚｌ）−ＯＨを活性化させた。すな
わち、Ｂｏｃ−Ｐｅｎ（ＭＢｚｌ）−ＯＨ（４３１ｍ
ｇ，２ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（３０６ｍｇ，２ｍｍ
ｏｌ）をＤＭＦ ４ｍｌに溶解させ、別の反応槽に加え
てさらに０．５Ｍ ＤＣＣ／ＤＣＭ溶液４ｍｌを添加し
窒素気流下、約４０分間攪拌させて活性エステルに導い
た。
【００３５】（４）得られた活性化溶液を先の樹脂の入
っている反応槽に添加、攪拌して縮合反応を開始した。
反応時間は１２０分間とし、縮合反応終了後、ＤＭＦ各
１０ｍ１で３回、さらにＤＣＭ各１０ｍｌで６回洗浄、
濾過した。洗浄濾過後、樹脂の一部をカイザーテストに
供した。１個のアミノ酸の導入につき、カイザーテスト
（Ｐｅｎ（ＭＢｚｌ）導入時にはイサチンテスト）が陰
性になるまで縮合反応を操り返した。２回目以降の縮合
反応（リカップリング）では上記の（１）を除くステッ
プを繰り返し実施するのであるが、活性エステル法の場
合は上記（２）で１０％ＤＩＥＡ／ＤＭＦ溶液の洗浄を
１回だけとし、ＴＢＴＵ法では上記（２）の操作は実施
しなかった。
っている反応槽に添加、攪拌して縮合反応を開始した。
反応時間は１２０分間とし、縮合反応終了後、ＤＭＦ各
１０ｍ１で３回、さらにＤＣＭ各１０ｍｌで６回洗浄、
濾過した。洗浄濾過後、樹脂の一部をカイザーテストに
供した。１個のアミノ酸の導入につき、カイザーテスト
（Ｐｅｎ（ＭＢｚｌ）導入時にはイサチンテスト）が陰
性になるまで縮合反応を操り返した。２回目以降の縮合
反応（リカップリング）では上記の（１）を除くステッ
プを繰り返し実施するのであるが、活性エステル法の場
合は上記（２）で１０％ＤＩＥＡ／ＤＭＦ溶液の洗浄を
１回だけとし、ＴＢＴＵ法では上記（２）の操作は実施
しなかった。
【００３６】本合成で導入した保護アミノ酸および試薬
等の使用量は以下のとおりである。
等の使用量は以下のとおりである。
【００３７】
【表１】
【００３８】アミノ酸をすべて導入後、得られた保護ペ
プチド樹脂は、ＤＣＭ適量で充分洗浄後、減圧乾燥し
（収量：１２７０ｍｇ）全量をＨＦ処理に供した。
プチド樹脂は、ＤＣＭ適量で充分洗浄後、減圧乾燥し
（収量：１２７０ｍｇ）全量をＨＦ処理に供した。
【００３９】［２］液体ＨＦ処理 樹脂からのペプチドの解離とＴｒｐ（ＣＨＯ）残基のＣ
ＨＯ基を除く全保護基の除去を液体ＨＦ処理により行っ
た。 液体ＨＦ処理：［１］で得られた保護ペプチド樹脂１２
７０ｍｇとテフロン被膜マグネットをＨＦ反応容器に添
加し、アニソール１．３ｍｌおよびＥＭ１．３ｍｌを加
えて室温減圧下で３０分間放置した。反応容器を冷媒で
冷却し、再蒸留ＨＦ１３ｍｌを添加、−２０℃で１２０
分間攪拌した。ＨＦを減圧下留去し(アスピレーターで
１時間、真空ポンプで２時間)、残渣にジエチルエーテ
ル３０ｍｌを加えてサラサラになるまで攪拌した。吸引
濾過後、ジエチルエーテル各３０ｍｌで３回洗浄して減
圧乾燥した。
ＨＯ基を除く全保護基の除去を液体ＨＦ処理により行っ
た。 液体ＨＦ処理：［１］で得られた保護ペプチド樹脂１２
７０ｍｇとテフロン被膜マグネットをＨＦ反応容器に添
加し、アニソール１．３ｍｌおよびＥＭ１．３ｍｌを加
えて室温減圧下で３０分間放置した。反応容器を冷媒で
冷却し、再蒸留ＨＦ１３ｍｌを添加、−２０℃で１２０
分間攪拌した。ＨＦを減圧下留去し(アスピレーターで
１時間、真空ポンプで２時間)、残渣にジエチルエーテ
ル３０ｍｌを加えてサラサラになるまで攪拌した。吸引
濾過後、ジエチルエーテル各３０ｍｌで３回洗浄して減
圧乾燥した。
【００４０】［３］抽出および脱ＣＨＯ処理 ［２］で得られたペプチド−樹脂混合物を充分に脱気し
冷却した１Ｍ酢酸３０ｍｌに添加、攪拌してペプチド成
分を溶解させた。吸引濾過後、濾液を素早く１５００ｍ
ｌの純水中に投じた。グラスフィルター上の濾取物をさ
らに冷１Ｍ酢酸各３０ｍｌで３回洗浄し、先の純水中に
素早く添加した。この希釈水溶液に、２８％アンモ二ア
水１３ｍｌを滴下して、ｐＨ９．４７とした。２４．５
℃で約２４時間攪拌して脱ＣＨＯ反応を行った。
冷却した１Ｍ酢酸３０ｍｌに添加、攪拌してペプチド成
分を溶解させた。吸引濾過後、濾液を素早く１５００ｍ
ｌの純水中に投じた。グラスフィルター上の濾取物をさ
らに冷１Ｍ酢酸各３０ｍｌで３回洗浄し、先の純水中に
素早く添加した。この希釈水溶液に、２８％アンモ二ア
水１３ｍｌを滴下して、ｐＨ９．４７とした。２４．５
℃で約２４時間攪拌して脱ＣＨＯ反応を行った。
【００４１】［４］環化反応 ［３］で脱ＣＨＯ反応終了確認後、反応液にＫ3［Ｆｅ
（ＣＮ）6］２５０ｍｇ／７５ｍｌＨ2Ｏを滴下して２
４．５℃で１時間攪拌した。原料消失確認後、ＢＩＯ−
ＲＡＤ社製強陰イオン交換樹脂「ＡＧ１−Ｘ２樹脂 Ｃ
Ｉ型ドライメッシュ２００−４００」１５ｇを添加して
さらに１時間攪拌した。反応液が黄色から無色に変化し
たことを確認し、１Ｍ酢酸７５ｍｌを添加してｐＨ６．
３とした。樹脂を吸引濾過で除去し純水各５０ｍｌで３
回洗浄した。
（ＣＮ）6］２５０ｍｇ／７５ｍｌＨ2Ｏを滴下して２
４．５℃で１時間攪拌した。原料消失確認後、ＢＩＯ−
ＲＡＤ社製強陰イオン交換樹脂「ＡＧ１−Ｘ２樹脂 Ｃ
Ｉ型ドライメッシュ２００−４００」１５ｇを添加して
さらに１時間攪拌した。反応液が黄色から無色に変化し
たことを確認し、１Ｍ酢酸７５ｍｌを添加してｐＨ６．
３とした。樹脂を吸引濾過で除去し純水各５０ｍｌで３
回洗浄した。
【００４２】［５］脱塩 ［４］で得られた濾液および洗液を逆相ＯＤＳカラムに
添加して、０．１％ＴＦＡaq.で洗浄して脱塩した。さ
らに０．１％ＴＦＡaq.／ＣＨ3ＣＮ（５０／５０）で溶
出させて溶離してくる画分を分取した。ＣＨ3ＣＮを減
圧留去後、凍結乾燥して粗製ペプチド１２４ｍｇを得
た。
添加して、０．１％ＴＦＡaq.で洗浄して脱塩した。さ
らに０．１％ＴＦＡaq.／ＣＨ3ＣＮ（５０／５０）で溶
出させて溶離してくる画分を分取した。ＣＨ3ＣＮを減
圧留去後、凍結乾燥して粗製ペプチド１２４ｍｇを得
た。
【００４３】［６］逆相ＨＰＬＣによる精製 ［５］で得た粗製ペプチド１０ｍｇを０．１％ＴＦＡa
q.３００μＬに溶解させ、逆相カラムに添加し、下記の
条件で溶出させて化合物（Ｉ）を含む画分を分取した。
以下にＨＰＬＣの条件を記す。
q.３００μＬに溶解させ、逆相カラムに添加し、下記の
条件で溶出させて化合物（Ｉ）を含む画分を分取した。
以下にＨＰＬＣの条件を記す。
【００４４】カラム：ＴＳＫ ｇｅｌ ＯＤＳ−１２０
Ｔ（２１．５×３００ｍｍ，東ソー社製） 溶出液：０．１％ ＴＦＡaq.／ＣＨ3ＣＮ＝６５／３５
（ｖ／ｖ） 検出波長：２１４ｍｍ、流速：８．０ｍｌ／ｍｉｎ．
Ｔ（２１．５×３００ｍｍ，東ソー社製） 溶出液：０．１％ ＴＦＡaq.／ＣＨ3ＣＮ＝６５／３５
（ｖ／ｖ） 検出波長：２１４ｍｍ、流速：８．０ｍｌ／ｍｉｎ．
【００４５】上記操作を繰り返し、分取した画分を集め
てＣＨ3ＣＮを減圧留去後、凍結乾燥して目的とする精
製ペプチド（Ｎ−［（４−メルカプトチアン−４−イ
ル）アセチル］−Ｄ−トリプトフィリル−Ｌ−イソロイ
シル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−アスパラギニル−３−メ
ルカプト−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリン（Ｓ，Ｓ）−ジス
ルフィド）４７．５ｍｇ（収率：５９．４％）を得た。
てＣＨ3ＣＮを減圧留去後、凍結乾燥して目的とする精
製ペプチド（Ｎ−［（４−メルカプトチアン−４−イ
ル）アセチル］−Ｄ−トリプトフィリル−Ｌ−イソロイ
シル−Ｌ−グルタミニル−Ｌ−アスパラギニル−３−メ
ルカプト−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリン（Ｓ，Ｓ）−ジス
ルフィド）４７．５ｍｇ（収率：５９．４％）を得た。
【００４６】 ＦＡＢＭＳ：９６０．３（Ｃ43Ｈ61Ｎ9Ｏ10Ｓ3） アミノ酸組成分析：Ａｓｐ（１）０．９４、Ｇｌｎ
（１）１．００、Ｐｒｏ（１）０．９９、Ｉｌｅ（１）
０．９６、Ｐｅｎ（１）０．３０、Ｔｒｐ（１）０．８
３． ＴＬＣ分析（使用担体：９６−ＧＦ−２４５）：Ｒｆ値
０．７２（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ2Ｏ＝３：１：
１）、Ｒｆ値０．７８（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ2
Ｏ：Ｐｙｒｉｄｉｎｅ＝４：１：１：１）
（１）１．００、Ｐｒｏ（１）０．９９、Ｉｌｅ（１）
０．９６、Ｐｅｎ（１）０．３０、Ｔｒｐ（１）０．８
３． ＴＬＣ分析（使用担体：９６−ＧＦ−２４５）：Ｒｆ値
０．７２（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ2Ｏ＝３：１：
１）、Ｒｆ値０．７８（ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ2
Ｏ：Ｐｙｒｉｄｉｎｅ＝４：１：１：１）
【００４７】（試験例） １．発情ラット子宮筋を用いたオキシトシン誘発子宮収
縮反応に対する作用［オキシトシン（ＯＴ）受容体に対
する作用］ ＳＤ雌性ラットにエストラジオール１ｍｇ／ｋｇを皮下
投与した。２４時間後に子宮角を摘出し、小切片を作製
し、直ちにマグヌス装置に懸垂した。オーガンバスに１
０ｍｌの栄養液（Munsick soln.)を満たし、３７℃で９
５％ Ｏ2−５％ ＣＯ2の混合ガスを持続通気した。標
本には１ｇの懸垂負荷をかけ、１−２時間放置した後、
１０-9Ｍ ＯＴをオーガンバス内に投与した。ＯＴによ
る安定した収縮波形を観察した後、本発明化合物あるい
は対照化合物をそれぞれ終濃度１０-10〜１０-6Ｍを累
積投与した。薬物投与後、５分間収縮波形を観察し、５
分間の振幅と頻度を測定した。本発明化合物（Ｉ）と化
合物（III）の結果を表２に示す。本発明化合物（Ｉ）
はオキシトシン誘発子宮収縮反応を用量依存的に抑制
し、ＩＣ50値は２．５０×１０-8Ｍであった。一方化合
物（III）のＩＣ50値は３．０８×１０-8Ｍであった。
縮反応に対する作用［オキシトシン（ＯＴ）受容体に対
する作用］ ＳＤ雌性ラットにエストラジオール１ｍｇ／ｋｇを皮下
投与した。２４時間後に子宮角を摘出し、小切片を作製
し、直ちにマグヌス装置に懸垂した。オーガンバスに１
０ｍｌの栄養液（Munsick soln.)を満たし、３７℃で９
５％ Ｏ2−５％ ＣＯ2の混合ガスを持続通気した。標
本には１ｇの懸垂負荷をかけ、１−２時間放置した後、
１０-9Ｍ ＯＴをオーガンバス内に投与した。ＯＴによ
る安定した収縮波形を観察した後、本発明化合物あるい
は対照化合物をそれぞれ終濃度１０-10〜１０-6Ｍを累
積投与した。薬物投与後、５分間収縮波形を観察し、５
分間の振幅と頻度を測定した。本発明化合物（Ｉ）と化
合物（III）の結果を表２に示す。本発明化合物（Ｉ）
はオキシトシン誘発子宮収縮反応を用量依存的に抑制
し、ＩＣ50値は２．５０×１０-8Ｍであった。一方化合
物（III）のＩＣ50値は３．０８×１０-8Ｍであった。
【００４８】２．ラット摘出大動脈を用いたバゾプレシ
ン刺激による血管収縮反応に対する作用［バゾプレシン
Ｖ１a（Ｖ１a）受容体に対する作用］ ラット腹大動脈を摘出した後、リング標本を作製し、直
ちにマグヌス装置に懸垂した。オーガンバスに１０ｍｌ
の栄養液（Munsick soln.)を満たし、３７℃で９５％
Ｏ2−５％ ＣＯ2の混合ガスを持続通気した。標本には
０．５ｇの懸垂負荷をかけ、１０-8Ｍのアルギニンバゾ
プレシン（ＡＶＰ）をオーガンバス内に投与し、血管収
縮反応を観察した。本発明化合物（Ｉ）および化合物
（III）をそれぞれ終濃度１０-9〜１０-5Ｍを累積投与
した。ＡＶＰによる血管収縮反応に対して、各薬物によ
る弛緩反応を測定した。結果を表２に示す。本発明化合
物（Ｉ）はＡＶＰ刺激による血管収縮反応を１０-5Ｍで
約３０％阻害した。一方化合物（III）はＡＶＰ刺激に
よる血管収縮反応を用量依存的に抑制し、ＩＣ50値は
３．０８×１０-7Ｍであった。
ン刺激による血管収縮反応に対する作用［バゾプレシン
Ｖ１a（Ｖ１a）受容体に対する作用］ ラット腹大動脈を摘出した後、リング標本を作製し、直
ちにマグヌス装置に懸垂した。オーガンバスに１０ｍｌ
の栄養液（Munsick soln.)を満たし、３７℃で９５％
Ｏ2−５％ ＣＯ2の混合ガスを持続通気した。標本には
０．５ｇの懸垂負荷をかけ、１０-8Ｍのアルギニンバゾ
プレシン（ＡＶＰ）をオーガンバス内に投与し、血管収
縮反応を観察した。本発明化合物（Ｉ）および化合物
（III）をそれぞれ終濃度１０-9〜１０-5Ｍを累積投与
した。ＡＶＰによる血管収縮反応に対して、各薬物によ
る弛緩反応を測定した。結果を表２に示す。本発明化合
物（Ｉ）はＡＶＰ刺激による血管収縮反応を１０-5Ｍで
約３０％阻害した。一方化合物（III）はＡＶＰ刺激に
よる血管収縮反応を用量依存的に抑制し、ＩＣ50値は
３．０８×１０-7Ｍであった。
【００４９】
【表２】
【００５０】
【発明の効果】以上のように本発明化合物は従来の化合
物と比較し、バゾプレシン受容体よりオキシトシン受容
体に対し極めて選択的な拮抗作用を有しているため、循
環器への作用がより弱い切迫早産治療薬を提供できる。
物と比較し、バゾプレシン受容体よりオキシトシン受容
体に対し極めて選択的な拮抗作用を有しているため、循
環器への作用がより弱い切迫早産治療薬を提供できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 大野 徳雄 東京都中央区日本橋本町二丁目２番６号 三菱東京製薬株式会社内 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 AA07 BA01 BA08 BA17 BA32 MA01 NA14 ZA812 ZC422 4H045 AA10 AA30 BA14 EA26 FA40 FA44 FA58 GA25 HA02
Claims (3)
- 【請求項１】 化学式（Ｉ）で表されるペプチド化合物
またはその薬理学的に許容される塩。 【化１】 - 【請求項２】 請求項１記載の化合物またはその薬理学
的に許容される塩を有効成分とするオキシトシン受容体
拮抗剤。 - 【請求項３】 請求項１記載の化合物またはその薬理学
的に許容される塩を有効成分とする切迫早産の予防用ま
たは治療用の医薬組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000331448A JP2002138098A (ja) | 2000-10-30 | 2000-10-30 | ペプチド化合物及びそれを含有する医薬組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000331448A JP2002138098A (ja) | 2000-10-30 | 2000-10-30 | ペプチド化合物及びそれを含有する医薬組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002138098A true JP2002138098A (ja) | 2002-05-14 |
Family
ID=18807789
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP2000331448A Pending JP2002138098A (ja) | 2000-10-30 | 2000-10-30 | ペプチド化合物及びそれを含有する医薬組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002138098A (ja) |
-
2000
- 2000-10-30 JP JP2000331448A patent/JP2002138098A/ja active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20070427 |