JP2002136299A - 耐熱性好酸性菌検出用選択培地及び検出方法 - Google Patents
耐熱性好酸性菌検出用選択培地及び検出方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 果汁中や果汁を含む飲料中等に存在する耐熱
性好酸性菌を高感度且つ短時間に検出するために用いら
れる選択培地及び前記選択培地を用いた耐熱性好酸性菌
の検出方法を提供することを目的とする。 【解決手段】 耐熱性好酸性菌検出用の選択培地であっ
て、該選択培地が溶媒と栄養成分としての酵母エキス、
グルコース及びペプトンとを含有し、酵母エキス、グル
コース及びペプトンの合計量が該選択培地に含まれる全
栄養成分の総重量の９０重量％以上であり、且つ該選択
培地のｐHが４．０±０．１であることを特徴とする選
択培地、及び、前記の選択培地に検査試料を供給する第
１の工程と、前記検査試料が供給された選択培地を耐熱
性好酸性菌が繁殖可能な条件下で静置する第２の工程
と、前記静置された選択培地中の耐熱性好酸性菌の有無
を検出する第３の工程と、を含むことを特徴とする耐熱
性好酸性菌の検出方法。
性好酸性菌を高感度且つ短時間に検出するために用いら
れる選択培地及び前記選択培地を用いた耐熱性好酸性菌
の検出方法を提供することを目的とする。 【解決手段】 耐熱性好酸性菌検出用の選択培地であっ
て、該選択培地が溶媒と栄養成分としての酵母エキス、
グルコース及びペプトンとを含有し、酵母エキス、グル
コース及びペプトンの合計量が該選択培地に含まれる全
栄養成分の総重量の９０重量％以上であり、且つ該選択
培地のｐHが４．０±０．１であることを特徴とする選
択培地、及び、前記の選択培地に検査試料を供給する第
１の工程と、前記検査試料が供給された選択培地を耐熱
性好酸性菌が繁殖可能な条件下で静置する第２の工程
と、前記静置された選択培地中の耐熱性好酸性菌の有無
を検出する第３の工程と、を含むことを特徴とする耐熱
性好酸性菌の検出方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、耐熱性好酸性菌を
検出するための選択培地に関するものであり、より詳し
くは、果汁中または果汁を含む飲料中等で増殖性を有す
る耐熱性好酸性菌を検出するための選択培地に関するも
のである。
検出するための選択培地に関するものであり、より詳し
くは、果汁中または果汁を含む飲料中等で増殖性を有す
る耐熱性好酸性菌を検出するための選択培地に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】果実から得られた果汁を利用した飲料に
おいては、その液性が酸性領域にあるため、一般的には
細菌が生育し難い。しかしながら、このような酸性条件
下においても生育することができる細菌種が存在するこ
とが知られていた。
おいては、その液性が酸性領域にあるため、一般的には
細菌が生育し難い。しかしながら、このような酸性条件
下においても生育することができる細菌種が存在するこ
とが知られていた。
【０００３】また、前述したような酸性条件下において
生育する細菌であって、且つ高温条件下であっても生育
可能な細菌が存在することが知られており、耐熱性好酸
性菌と総称されている。耐熱性好酸性菌は果実飲料を加
熱処理したとしても死滅しないため、果実飲料の製造過
程や製造後の品質管理の際にこのような細菌種の有無を
高感度に検出する方法が望まれていた。
生育する細菌であって、且つ高温条件下であっても生育
可能な細菌が存在することが知られており、耐熱性好酸
性菌と総称されている。耐熱性好酸性菌は果実飲料を加
熱処理したとしても死滅しないため、果実飲料の製造過
程や製造後の品質管理の際にこのような細菌種の有無を
高感度に検出する方法が望まれていた。
【０００４】これまでに、前述したような細菌を検出す
る方法としては、検査すべき溶液（果実飲料等）を予め
熱処理（通常７０〜８０℃）した後、好酸性菌用培地に
て４５℃程度の比較的高温で生育を確認し、さらに果汁
または果汁を含む飲料中での増殖性を確認するためにこ
のような果汁または果汁を含む飲料等に植菌し、増殖の
有無を確認するという方法が採られていた。しかしなが
ら、この方法は手間と時間がかかり、耐熱性好酸性菌の
迅速な検出は困難であった。
る方法としては、検査すべき溶液（果実飲料等）を予め
熱処理（通常７０〜８０℃）した後、好酸性菌用培地に
て４５℃程度の比較的高温で生育を確認し、さらに果汁
または果汁を含む飲料中での増殖性を確認するためにこ
のような果汁または果汁を含む飲料等に植菌し、増殖の
有無を確認するという方法が採られていた。しかしなが
ら、この方法は手間と時間がかかり、耐熱性好酸性菌の
迅速な検出は困難であった。
【０００５】これに対して、特開平８−１４０６９７号
公報には、耐熱性好酸性菌を検出するための酵母エキ
ス、グルコース及び澱粉からなる培地、及び、前記培地
を用いた耐熱性好酸性菌の検出方法が記載されている。
公報には、耐熱性好酸性菌を検出するための酵母エキ
ス、グルコース及び澱粉からなる培地、及び、前記培地
を用いた耐熱性好酸性菌の検出方法が記載されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、特開平
８−１４０６９７号公報に記載の培地を用いた場合でも
耐熱性好酸性菌の検出感度は必ずしも十分ではなく、ま
た、培養日数が約３日間と時間がかかるという問題があ
った。
８−１４０６９７号公報に記載の培地を用いた場合でも
耐熱性好酸性菌の検出感度は必ずしも十分ではなく、ま
た、培養日数が約３日間と時間がかかるという問題があ
った。
【０００７】本発明は、上記従来技術の有する課題に鑑
みてなされたものであり、果汁中や果汁を含む飲料中に
存在する耐熱性好酸性菌を高感度且つ短時間に検出する
ために用いられる選択培地及び前記選択培地を用いた耐
熱性好酸性菌の検出方法を提供することを目的とする。
みてなされたものであり、果汁中や果汁を含む飲料中に
存在する耐熱性好酸性菌を高感度且つ短時間に検出する
ために用いられる選択培地及び前記選択培地を用いた耐
熱性好酸性菌の検出方法を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、栄養成分が実質的
に酵母エキス、グルコース及びペプトンのみからなり且
つｐＨが４．０±０．１に調整された選択培地を用いる
ことにより、比較的短時間の培養で耐熱性好酸性菌を高
感度に検出することが可能であることを見出し、本発明
を完成するに至った。
を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、栄養成分が実質的
に酵母エキス、グルコース及びペプトンのみからなり且
つｐＨが４．０±０．１に調整された選択培地を用いる
ことにより、比較的短時間の培養で耐熱性好酸性菌を高
感度に検出することが可能であることを見出し、本発明
を完成するに至った。
【０００９】すなわち、本発明の選択培地は、耐熱性好
酸性菌検出用の選択培地であって、前記選択培地が溶媒
と栄養成分としての酵母エキス、グルコース及びペプト
ンとを含有し、酵母エキス、グルコース及びペプトンの
合計量が前記選択培地に含まれる全栄養成分の総重量の
９０重量％以上であり、且つ前記選択培地のｐHが４．
０±０．１であることを特徴とする選択培地である。本
発明の選択培地においては、前記選択培地が実質的に酵
母エキス、グルコース及びペプトンのみからなることが
好ましい。
酸性菌検出用の選択培地であって、前記選択培地が溶媒
と栄養成分としての酵母エキス、グルコース及びペプト
ンとを含有し、酵母エキス、グルコース及びペプトンの
合計量が前記選択培地に含まれる全栄養成分の総重量の
９０重量％以上であり、且つ前記選択培地のｐHが４．
０±０．１であることを特徴とする選択培地である。本
発明の選択培地においては、前記選択培地が実質的に酵
母エキス、グルコース及びペプトンのみからなることが
好ましい。
【００１０】また、本発明の耐熱性好酸性菌の検出方法
は、上記の選択培地に検査試料を供給する第１の工程
と、前記検査試料が供給された選択培地を耐熱性好酸性
菌が繁殖可能な条件下で静置する第２の工程と、前記静
置された選択培地中の耐熱性好酸性菌の有無を検出する
第３の工程と、を含むことを特徴とするものである。
は、上記の選択培地に検査試料を供給する第１の工程
と、前記検査試料が供給された選択培地を耐熱性好酸性
菌が繁殖可能な条件下で静置する第２の工程と、前記静
置された選択培地中の耐熱性好酸性菌の有無を検出する
第３の工程と、を含むことを特徴とするものである。
【００１１】
【発明の実施の形態】以下、本発明の好適な実施形態に
ついて詳細に説明する。
ついて詳細に説明する。
【００１２】本発明の選択培地は、耐熱性好酸性菌検出
用の選択培地であって、前記選択培地が溶媒と栄養成分
としての酵母エキス、グルコース及びペプトンとを含有
し、酵母エキス、グルコース及びペプトンの合計量が前
記選択培地に含まれる全栄養成分の総重量の９０重量％
以上であり、且つ前記選択培地のｐHが４．０±０．１
であることを特徴とする選択培地である。ここで、選択
培地とは、微生物の集団の中からある特定の性質を示す
細胞を選択的に増殖させる培地をいい、特定の微生物以
外の増殖を抑える物質を添加したり、栄養要求性の違い
を利用したりすることによって目的とする微生物のみを
選択的に増殖させることを可能とするものである。
用の選択培地であって、前記選択培地が溶媒と栄養成分
としての酵母エキス、グルコース及びペプトンとを含有
し、酵母エキス、グルコース及びペプトンの合計量が前
記選択培地に含まれる全栄養成分の総重量の９０重量％
以上であり、且つ前記選択培地のｐHが４．０±０．１
であることを特徴とする選択培地である。ここで、選択
培地とは、微生物の集団の中からある特定の性質を示す
細胞を選択的に増殖させる培地をいい、特定の微生物以
外の増殖を抑える物質を添加したり、栄養要求性の違い
を利用したりすることによって目的とする微生物のみを
選択的に増殖させることを可能とするものである。
【００１３】本発明の選択培地は、培養する耐熱性好酸
性菌の栄養成分として酵母エキス、グルコース及びペプ
トンを含有するものである。ここで、前記酵母エキス、
グルコース及びペプトンの合計量は本発明の選択培地に
含まれる全栄養成分の総重量の９０重量％以上を占める
ものであり、９５重量％以上を占めることがより好まし
く、本発明の選択培地に含有される栄養成分が実質的に
酵母エキス、グルコース及びペプトンのみからなること
が特に好ましい。
性菌の栄養成分として酵母エキス、グルコース及びペプ
トンを含有するものである。ここで、前記酵母エキス、
グルコース及びペプトンの合計量は本発明の選択培地に
含まれる全栄養成分の総重量の９０重量％以上を占める
ものであり、９５重量％以上を占めることがより好まし
く、本発明の選択培地に含有される栄養成分が実質的に
酵母エキス、グルコース及びペプトンのみからなること
が特に好ましい。
【００１４】また、本発明の選択培地は、前記酵母エキ
ス、グルコース及びペプトン以外にこれらの成分を溶解
する溶媒が含まれる。このような溶媒としては、例え
ば、水や緩衝液が挙げられるが、水を用いることが好ま
しい。
ス、グルコース及びペプトン以外にこれらの成分を溶解
する溶媒が含まれる。このような溶媒としては、例え
ば、水や緩衝液が挙げられるが、水を用いることが好ま
しい。
【００１５】また、前記酵母エキスとは、ビール酵母ま
たはパン酵母の自己消化または低温浸出によって得た水
溶性成分を低温乾燥して粉末化したもので、アミノ酸、
ビタミン、その他の栄養成分を豊富に含み、多くの種類
の培地に栄養素を補うために添加される。本発明の選択
培地において、酵母エキスの配合量は特に制限されない
が、１０００ｍｌの溶媒に対して２．０〜３．０ｇであ
ることが好ましく、２．５ｇであることがより好まし
い。前記酵母エキスの配合量が２．０ｇより少ない場
合、栄養分が不足し、耐熱性好酸性菌の増殖性が低くな
る傾向にあり、３．０ｇより多い場合、栄養分が過剰と
なり耐熱性好酸性菌以外の一般細菌等が増殖可能となる
傾向にある。
たはパン酵母の自己消化または低温浸出によって得た水
溶性成分を低温乾燥して粉末化したもので、アミノ酸、
ビタミン、その他の栄養成分を豊富に含み、多くの種類
の培地に栄養素を補うために添加される。本発明の選択
培地において、酵母エキスの配合量は特に制限されない
が、１０００ｍｌの溶媒に対して２．０〜３．０ｇであ
ることが好ましく、２．５ｇであることがより好まし
い。前記酵母エキスの配合量が２．０ｇより少ない場
合、栄養分が不足し、耐熱性好酸性菌の増殖性が低くな
る傾向にあり、３．０ｇより多い場合、栄養分が過剰と
なり耐熱性好酸性菌以外の一般細菌等が増殖可能となる
傾向にある。
【００１６】また、グルコースは、微生物培養用培地の
炭素源として用いられる。本発明の選択培地において、
グルコースの配合量は特に制限されないが、１０００ｍ
ｌの溶媒に対して０．５〜１．５ｇであることが好まし
く、１．０ｇであることがより好ましい。前記グルコー
スの配合量が０．５ｇより少ない場合、栄養分が不足
し、耐熱性好酸性菌の増殖性が低くなる傾向にあり、
１．５ｇより多い場合、栄養分が過剰となり耐熱性好酸
性菌以外の一般細菌等が増殖可能となる傾向にある。
炭素源として用いられる。本発明の選択培地において、
グルコースの配合量は特に制限されないが、１０００ｍ
ｌの溶媒に対して０．５〜１．５ｇであることが好まし
く、１．０ｇであることがより好ましい。前記グルコー
スの配合量が０．５ｇより少ない場合、栄養分が不足
し、耐熱性好酸性菌の増殖性が低くなる傾向にあり、
１．５ｇより多い場合、栄養分が過剰となり耐熱性好酸
性菌以外の一般細菌等が増殖可能となる傾向にある。
【００１７】さらに、ペプトンとは、牛乳カゼイン、獣
肉、大豆タンパク質等をペプシン、トリプシン、パパイ
ン等のプロテアーゼまたは酸で加水分解して乾燥、粉末
化したものであり、オリゴペプチドやアミノ酸を主な成
分とするものである。ペプトンの中でもカゼインペプト
ンと獣肉ペプトンの混合物はポリペプトンと呼ばれ、一
般的な微生物培養用培地において窒素源として使用され
る。本発明の選択培地において、ペプトンはポリペプト
ンであることが好ましい。また、ペプトンの配合量は特
に制限されないが、１０００ｍｌの溶媒に対して４．５
〜５．５ｇであることが好ましく、５．０ｇであること
がより好ましい。前記ペプトンの配合量が４．５ｇより
少ない場合、栄養分が不足し、耐熱性好酸性菌の増殖性
が低くなる傾向にあり、５．５ｇより多い場合、栄養分
が過剰となり耐熱性好酸性菌以外の一般細菌等が増殖可
能となる傾向にある。
肉、大豆タンパク質等をペプシン、トリプシン、パパイ
ン等のプロテアーゼまたは酸で加水分解して乾燥、粉末
化したものであり、オリゴペプチドやアミノ酸を主な成
分とするものである。ペプトンの中でもカゼインペプト
ンと獣肉ペプトンの混合物はポリペプトンと呼ばれ、一
般的な微生物培養用培地において窒素源として使用され
る。本発明の選択培地において、ペプトンはポリペプト
ンであることが好ましい。また、ペプトンの配合量は特
に制限されないが、１０００ｍｌの溶媒に対して４．５
〜５．５ｇであることが好ましく、５．０ｇであること
がより好ましい。前記ペプトンの配合量が４．５ｇより
少ない場合、栄養分が不足し、耐熱性好酸性菌の増殖性
が低くなる傾向にあり、５．５ｇより多い場合、栄養分
が過剰となり耐熱性好酸性菌以外の一般細菌等が増殖可
能となる傾向にある。
【００１８】また、本発明の選択培地には、酵母エキ
ス、グルコース及びペプトン以外に微量成分として有機
栄養成分または無機栄養成分（硫酸マグネシウム等）を
含有していてもよい本発明の選択培地は、そのｐＨが
４．０±０．１の範囲にあることを特徴とする。前記培
地のｐＨがこの範囲にある場合には、果汁中または果汁
を含む飲料中等に存在する耐熱性好酸性菌の増殖性が顕
著に高い。一方、前記培地のｐＨが上記下限より低い場
合及び上記上限より高い場合には耐熱性好酸性菌の増殖
性が著しく低下する傾向にある。
ス、グルコース及びペプトン以外に微量成分として有機
栄養成分または無機栄養成分（硫酸マグネシウム等）を
含有していてもよい本発明の選択培地は、そのｐＨが
４．０±０．１の範囲にあることを特徴とする。前記培
地のｐＨがこの範囲にある場合には、果汁中または果汁
を含む飲料中等に存在する耐熱性好酸性菌の増殖性が顕
著に高い。一方、前記培地のｐＨが上記下限より低い場
合及び上記上限より高い場合には耐熱性好酸性菌の増殖
性が著しく低下する傾向にある。
【００１９】また、本発明の選択培地の形状としては液
体、半流動体、固体のいずれであってもよいが、耐熱性
好酸性菌の検出が容易である固体、中でも平板固形培地
であることが好ましい。前記選択培地の形状が液体の場
合、上記の酵母エキス、グルコース及びペプトンを水等
の溶媒に溶解し、ｐＨを調整した後、オートクレーブ滅
菌等により滅菌し、使用すればよい。
体、半流動体、固体のいずれであってもよいが、耐熱性
好酸性菌の検出が容易である固体、中でも平板固形培地
であることが好ましい。前記選択培地の形状が液体の場
合、上記の酵母エキス、グルコース及びペプトンを水等
の溶媒に溶解し、ｐＨを調整した後、オートクレーブ滅
菌等により滅菌し、使用すればよい。
【００２０】前記のｐＨの調整は微生物培養用培地のｐ
Ｈ調整に使用される酸であれば特に制限されないが、例
えば、塩酸または硫酸が挙げられ、中でも塩酸であるこ
とが好ましい。この場合、前記選択培地のｐＨが４．０
±０．１に調節可能であれば用いられる塩酸の濃度は特
に制限されない。
Ｈ調整に使用される酸であれば特に制限されないが、例
えば、塩酸または硫酸が挙げられ、中でも塩酸であるこ
とが好ましい。この場合、前記選択培地のｐＨが４．０
±０．１に調節可能であれば用いられる塩酸の濃度は特
に制限されない。
【００２１】また、前記選択培地の形状が固体の場合、
前記液体の選択培地に固化剤、例えば寒天、ゼラチン、
アガロースを添加した後、滅菌、固化し、使用すればよ
い。この場合、前記固化剤は寒天であることが好まし
く、添加量は１０００ｍｌの溶媒に対して１３〜２０ｇ
であることが好ましい。
前記液体の選択培地に固化剤、例えば寒天、ゼラチン、
アガロースを添加した後、滅菌、固化し、使用すればよ
い。この場合、前記固化剤は寒天であることが好まし
く、添加量は１０００ｍｌの溶媒に対して１３〜２０ｇ
であることが好ましい。
【００２２】また、前記選択培地の形状が半流動体の場
合、前記液体の選択培地に固化剤、例えば寒天、ゼラチ
ン、アガロースを添加した後、滅菌、固化し、使用すれ
ばよい。この場合、前記固化剤は寒天であることが好ま
しく、添加量は１０００ｍｌの溶媒に対して８〜１２ｇ
であることが好ましい。
合、前記液体の選択培地に固化剤、例えば寒天、ゼラチ
ン、アガロースを添加した後、滅菌、固化し、使用すれ
ばよい。この場合、前記固化剤は寒天であることが好ま
しく、添加量は１０００ｍｌの溶媒に対して８〜１２ｇ
であることが好ましい。
【００２３】次に、前述した本発明の選択培地を用いて
耐熱性好酸性菌を検出する方法について説明する。
耐熱性好酸性菌を検出する方法について説明する。
【００２４】本発明の耐熱性好酸性菌の検出方法は、前
述の選択培地に検査試料を塗抹または添加する第１の工
程と、前記検査試料が塗抹または添加された選択培地を
静置する第２の工程と、前記静置された選択培地中の耐
熱性好酸性菌の有無を検出する第３の工程と、からなる
ことを特徴とする耐熱性好酸性菌の検出方法である。
述の選択培地に検査試料を塗抹または添加する第１の工
程と、前記検査試料が塗抹または添加された選択培地を
静置する第２の工程と、前記静置された選択培地中の耐
熱性好酸性菌の有無を検出する第３の工程と、からなる
ことを特徴とする耐熱性好酸性菌の検出方法である。
【００２５】先ず、本発明にかかる検査対象である果汁
または果汁を含む飲料について説明する。
または果汁を含む飲料について説明する。
【００２６】前記検査対象となる検査試料は、果汁、例
えば、アップル果汁、レモン果汁、グレープ果汁、パイ
ナップル果汁及びグレープフルーツ果汁や、これらを含
む飲料であり、中でもアップル果汁であることが好まし
い。ここで、このような果汁を含む飲料とは、例えば、
果汁を水または無機塩類溶液等で希釈した飲料の他、野
菜汁、発酵乳、乳類が含有された飲料であってもよい。
えば、アップル果汁、レモン果汁、グレープ果汁、パイ
ナップル果汁及びグレープフルーツ果汁や、これらを含
む飲料であり、中でもアップル果汁であることが好まし
い。ここで、このような果汁を含む飲料とは、例えば、
果汁を水または無機塩類溶液等で希釈した飲料の他、野
菜汁、発酵乳、乳類が含有された飲料であってもよい。
【００２７】前記検査試料は、本発明の選択培地に供給
し、耐熱性好酸性菌が繁殖可能な条件下で静置すればよ
いが、耐熱性菌のみを効率よく分離するために前記検査
試料を予め熱処理しておいてもよい。前記熱処理の条件
としては、７０〜８０℃で５〜１５分間行うことが好ま
しい。
し、耐熱性好酸性菌が繁殖可能な条件下で静置すればよ
いが、耐熱性菌のみを効率よく分離するために前記検査
試料を予め熱処理しておいてもよい。前記熱処理の条件
としては、７０〜８０℃で５〜１５分間行うことが好ま
しい。
【００２８】また、このような果汁または果汁を含む飲
料等から耐熱性好酸性菌を検出するにあたり、これらの
原液を検査試料として用いることができるが、前記検査
試料に含まれる菌類の濃度が低い場合等には必要に応じ
てメンブランフィルターを用いて前記検査試料をろ過す
ることにより前記検査試料に含有される細菌をメンブラ
ンフィルター上に捕捉した後、検査試料としてもよい。
また、前記検査試料を遠心分離することにより前記検査
試料に含有される細菌を集菌し、検査試料としてもよ
い。
料等から耐熱性好酸性菌を検出するにあたり、これらの
原液を検査試料として用いることができるが、前記検査
試料に含まれる菌類の濃度が低い場合等には必要に応じ
てメンブランフィルターを用いて前記検査試料をろ過す
ることにより前記検査試料に含有される細菌をメンブラ
ンフィルター上に捕捉した後、検査試料としてもよい。
また、前記検査試料を遠心分離することにより前記検査
試料に含有される細菌を集菌し、検査試料としてもよ
い。
【００２９】次に、本発明にかかる第１の工程について
説明する。本発明にかかる第１の工程は、前述の選択培
地に検査試料を供給する工程である。
説明する。本発明にかかる第１の工程は、前述の選択培
地に検査試料を供給する工程である。
【００３０】本発明にかかる第１の工程において、用い
る選択培地が液体である場合には選択培地に前記の検査
試料をそのまま、またはメンブランフィルターや遠心分
離によって濃縮した検査試料を少量の培地や水に懸濁し
て前記選択培地に添加すればよい。また、用いる選択培
地が固形である場合には、検査試料をそのまま、または
濃縮したものを白金耳等で塗抹すればよい。
る選択培地が液体である場合には選択培地に前記の検査
試料をそのまま、またはメンブランフィルターや遠心分
離によって濃縮した検査試料を少量の培地や水に懸濁し
て前記選択培地に添加すればよい。また、用いる選択培
地が固形である場合には、検査試料をそのまま、または
濃縮したものを白金耳等で塗抹すればよい。
【００３１】次に、本発明にかかる第２の工程について
説明する。本発明にかかる第２の工程は、前記検査試料
が供給された選択培地を耐熱性好酸性菌が繁殖可能な条
件下で静置する工程である。静置する際の条件は、検出
対象である耐熱性好酸性菌が増殖可能である条件であれ
ば特に制限されないが、温度が３０〜７０℃であること
が好ましく、４０〜６０℃であることがより好ましい。
温度が前記下限より低い場合、または前記上限より高い
場合には耐熱性好酸性菌の増殖速度が低下する傾向にあ
る。また、静置する時間は、検出対象である耐熱性好酸
性菌が検出可能であれば特に制限されないが、１０〜５
０時間であることが好ましく、２０〜４０時間であるこ
とがより好ましい。静置する時間が１０時間より短い場
合には耐熱性好酸性菌が検出可能なまで増殖せず、検出
が困難な傾向にあり、５０時間より長い場合には耐熱性
好酸性菌が増殖しすぎ、正確な菌体数の測定が困難にな
る傾向にある。
説明する。本発明にかかる第２の工程は、前記検査試料
が供給された選択培地を耐熱性好酸性菌が繁殖可能な条
件下で静置する工程である。静置する際の条件は、検出
対象である耐熱性好酸性菌が増殖可能である条件であれ
ば特に制限されないが、温度が３０〜７０℃であること
が好ましく、４０〜６０℃であることがより好ましい。
温度が前記下限より低い場合、または前記上限より高い
場合には耐熱性好酸性菌の増殖速度が低下する傾向にあ
る。また、静置する時間は、検出対象である耐熱性好酸
性菌が検出可能であれば特に制限されないが、１０〜５
０時間であることが好ましく、２０〜４０時間であるこ
とがより好ましい。静置する時間が１０時間より短い場
合には耐熱性好酸性菌が検出可能なまで増殖せず、検出
が困難な傾向にあり、５０時間より長い場合には耐熱性
好酸性菌が増殖しすぎ、正確な菌体数の測定が困難にな
る傾向にある。
【００３２】本発明にかかる第３の工程は、前記静置さ
れた選択培地中の耐熱性好酸性菌の有無を検出する工程
である。
れた選択培地中の耐熱性好酸性菌の有無を検出する工程
である。
【００３３】前述した静置後の選択培地が液体である場
合、選択培地中に増殖した耐熱性好酸性菌の検出方法は
特に制限されないが、例えば、静置後の選択培地の濁度
を吸光光度計等で測定すればよい。また、選択培地が固
体である場合、選択培地上に増殖した耐熱性好酸性菌の
検出方法は特に制限されないが、例えば、コロニーの有
無を目視で検出すればよい。
合、選択培地中に増殖した耐熱性好酸性菌の検出方法は
特に制限されないが、例えば、静置後の選択培地の濁度
を吸光光度計等で測定すればよい。また、選択培地が固
体である場合、選択培地上に増殖した耐熱性好酸性菌の
検出方法は特に制限されないが、例えば、コロニーの有
無を目視で検出すればよい。
【００３４】
【実施例】以下、実施例及び比較例により本発明の内容
を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定さ
れるものではない。
を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定さ
れるものではない。
【００３５】実施例１及び比較例１〜３ 先ず、本発明の選択培地（ＹＰＧ培地）を調製した。Ｙ
ＰＧ培地の組成を表１に示す。表１の組成物を混合し、
塩酸を用いてｐＨを４．０に調整した。混合した溶液は
オートクレーブ滅菌（１２１℃、１５分）し、以下の実
験に用いた。
ＰＧ培地の組成を表１に示す。表１の組成物を混合し、
塩酸を用いてｐＨを４．０に調整した。混合した溶液は
オートクレーブ滅菌（１２１℃、１５分）し、以下の実
験に用いた。
【００３６】
【表１】
【００３７】本発明の選択培地（ＹＰＧ培地）（実施例
１）、ＹＳＧ培地（特開平８−１４０６９７号公報に記
載の培地）（比較例１）、ＰＤＢ培地（比較例２）及び
ＴＡ基礎培地（比較例３）を準備した（全て液体培
地）。ここで、ＴＡ基礎培地は表２に示す組成を有し、
ｐＨは塩酸を用いて４．０に調整した。また、ＰＤＢ培
地は表３に示す組成を有し、ｐＨは塩酸を用いて４．０
に調整した。さらに、ＹＳＧ培地は表４に示す組成を有
し、ｐＨは塩酸を用いて４．０に調整した。
１）、ＹＳＧ培地（特開平８−１４０６９７号公報に記
載の培地）（比較例１）、ＰＤＢ培地（比較例２）及び
ＴＡ基礎培地（比較例３）を準備した（全て液体培
地）。ここで、ＴＡ基礎培地は表２に示す組成を有し、
ｐＨは塩酸を用いて４．０に調整した。また、ＰＤＢ培
地は表３に示す組成を有し、ｐＨは塩酸を用いて４．０
に調整した。さらに、ＹＳＧ培地は表４に示す組成を有
し、ｐＨは塩酸を用いて４．０に調整した。
【００３８】
【表２】
【００３９】
【表３】
【００４０】
【表４】
【００４１】このようにして調製した培地を準備し、そ
れぞれに１×１０2個の耐熱性好酸性菌４種類（ＳＡ−
６(Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．（サッ
ポロビール飲料（株）保有株）、ＪＣＭ５２６０（＝Ａ
ＴＣＣ２７００９）（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）、ＤＳＭ２４９８
（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅ
ｒｒｅｓｔｒｉｓ）及びＩＦＯ１５３１０（＝ＤＳＭ４
００６）（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓｃｙｃｌ
ｏｈｅｐｔａｎｉｃｕｓ））を接種した。５０℃で２４
時間静置培養後、それぞれの菌体数をカウントした。得
られた結果を表５に示す。
れぞれに１×１０2個の耐熱性好酸性菌４種類（ＳＡ−
６(Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．（サッ
ポロビール飲料（株）保有株）、ＪＣＭ５２６０（＝Ａ
ＴＣＣ２７００９）（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕ
ｓ ａｃｉｄｏｃａｌｄａｒｉｕｓ）、ＤＳＭ２４９８
（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅ
ｒｒｅｓｔｒｉｓ）及びＩＦＯ１５３１０（＝ＤＳＭ４
００６）（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓｃｙｃｌ
ｏｈｅｐｔａｎｉｃｕｓ））を接種した。５０℃で２４
時間静置培養後、それぞれの菌体数をカウントした。得
られた結果を表５に示す。
【００４２】
【表５】
【００４３】表５に示された結果より、ＹＰＧ培地を用
いた場合、ＴＡ基礎培地、ＰＤＢ培地またはＹＳＧ培地
を用いた場合と比較して耐熱性好酸性菌の増殖性が高い
ことが確認された。特に、果汁中での増殖能が非常に高
く、検出の必要性が高い菌株であるＤＳＭ２４９８（Ａ
ｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒ
ｅｓｔｒｉｓ）においては、本発明の選択培地を用いた
場合にＹＳＧ培地の１０倍以上の感度で検出可能である
ことが確認された。従って、本発明の選択培地が果汁中
または果汁を含む飲料中において高い増殖性を示す耐熱
性好酸性菌を選択的に検出するために非常に有効である
ことが確認された。
いた場合、ＴＡ基礎培地、ＰＤＢ培地またはＹＳＧ培地
を用いた場合と比較して耐熱性好酸性菌の増殖性が高い
ことが確認された。特に、果汁中での増殖能が非常に高
く、検出の必要性が高い菌株であるＤＳＭ２４９８（Ａ
ｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒ
ｅｓｔｒｉｓ）においては、本発明の選択培地を用いた
場合にＹＳＧ培地の１０倍以上の感度で検出可能である
ことが確認された。従って、本発明の選択培地が果汁中
または果汁を含む飲料中において高い増殖性を示す耐熱
性好酸性菌を選択的に検出するために非常に有効である
ことが確認された。
【００４４】実施例２ （ｐＨ調整に用いる塩酸及び硫酸の耐熱性好酸性菌の増
殖に及ぼす影響）ＹＰＧ培地に耐熱性好酸性菌であるＳ
Ａ−６(Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．
（サッポロビール飲料（株）保有株）、ＪＣＭ５２６０
（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｃａ
ｌｄａｒｉｕｓ）、ＤＳＭ２４９８（Ａｌｉｃｙｃｌｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）
及びＩＦＯ１５３１０（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｎｉｃｕｓ）の４種類をそ
れぞれ１×１０2菌体ずつ接種し、５０℃で１２時間静
置培養後、菌体数をカウントした。得られた結果を表６
に示す。
殖に及ぼす影響）ＹＰＧ培地に耐熱性好酸性菌であるＳ
Ａ−６(Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．
（サッポロビール飲料（株）保有株）、ＪＣＭ５２６０
（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｃａ
ｌｄａｒｉｕｓ）、ＤＳＭ２４９８（Ａｌｉｃｙｃｌｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ）
及びＩＦＯ１５３１０（Ａｌｉｃｙｃｌｏｂａｃｉｌｌ
ｕｓ ｃｙｃｌｏｈｅｐｔａｎｉｃｕｓ）の４種類をそ
れぞれ１×１０2菌体ずつ接種し、５０℃で１２時間静
置培養後、菌体数をカウントした。得られた結果を表６
に示す。
【００４５】
【表６】
【００４６】実施例３ （ｐＨ調整に用いる塩酸及び硫酸の耐熱性好酸性菌の増
殖に及ぼす影響）ｐＨの調整に硫酸を用いた以外は実施
例２と同様にして４種類の耐熱性好酸性菌の菌体数をカ
ウントした。得られた結果を表６に示す。
殖に及ぼす影響）ｐＨの調整に硫酸を用いた以外は実施
例２と同様にして４種類の耐熱性好酸性菌の菌体数をカ
ウントした。得られた結果を表６に示す。
【００４７】表６に示された結果より、本発明の選択培
地のｐＨ調製に塩酸を用いた場合、硫酸を用いた場合よ
り耐熱性好酸性菌の増殖性は１．５〜３倍程度高いこと
が確認された。
地のｐＨ調製に塩酸を用いた場合、硫酸を用いた場合よ
り耐熱性好酸性菌の増殖性は１．５〜３倍程度高いこと
が確認された。
【００４８】
【発明の効果】以上説明したように、本発明の選択培地
及び検出方法によれば、果汁中や果汁を含む飲料中等に
存在する耐熱性好酸性菌を高感度且つ短時間に検出する
ことが可能となる。
及び検出方法によれば、果汁中や果汁を含む飲料中等に
存在する耐熱性好酸性菌を高感度且つ短時間に検出する
ことが可能となる。
フロントページの続き (72)発明者 大畑 一美 東京都渋谷区恵比寿西１−12−14 サッポ ロビール飲料株式会社内 Ｆターム(参考） 4B063 QA01 QA18 QQ06 QR69 QS24 QX01
Claims (4)
- 【請求項１】 耐熱性好酸性菌検出用の選択培地であっ
て、該選択培地が溶媒と栄養成分としての酵母エキス、
グルコース及びペプトンとを含有し、酵母エキス、グル
コース及びペプトンの合計量が該選択培地に含まれる全
栄養成分の総重量の９０重量％以上であり、且つ該選択
培地のｐHが４．０±０．１であることを特徴とする選
択培地。 - 【請求項２】 前記選択培地に含有される栄養成分が実
質的に酵母エキス、グルコース及びペプトンのみからな
ることを特徴とする請求項１に記載の選択培地。 - 【請求項３】 請求項１または２に記載の選択培地に検
査試料を供給する第１の工程と、 前記検査試料が供給された選択培地を耐熱性好酸性菌が
繁殖可能な条件下で静置する第２の工程と、 前記静置された選択培地中の耐熱性好酸性菌の有無を検
出する第３の工程と、を含むことを特徴とする耐熱性好
酸性菌の検出方法。 - 【請求項４】 前記静置する際の温度が３０〜７０℃で
あり、且つ前記静置する時間が１０〜５０時間であるこ
とを特徴とする請求項３に記載の耐熱性好酸性菌の検出
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000336272A JP4601148B2 (ja) | 2000-11-02 | 2000-11-02 | 耐熱性好酸性菌検出用選択培地及び検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000336272A JP4601148B2 (ja) | 2000-11-02 | 2000-11-02 | 耐熱性好酸性菌検出用選択培地及び検出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002136299A true JP2002136299A (ja) | 2002-05-14 |
| JP4601148B2 JP4601148B2 (ja) | 2010-12-22 |
Family
ID=18811875
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000336272A Expired - Fee Related JP4601148B2 (ja) | 2000-11-02 | 2000-11-02 | 耐熱性好酸性菌検出用選択培地及び検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4601148B2 (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08140697A (ja) * | 1994-11-17 | 1996-06-04 | Kirin Beverage Kk | 耐熱性好酸性菌の検出用選択培地およびその検出法 |
| JPH08140696A (ja) * | 1994-11-17 | 1996-06-04 | Kirin Beverage Kk | 果汁中で増殖性をもつ耐熱性好酸性菌の検出法 |
| JPH11243945A (ja) * | 1998-03-03 | 1999-09-14 | Kirin Beverage Corp | 新規アリサイクロバチルス属細菌 |
-
2000
- 2000-11-02 JP JP2000336272A patent/JP4601148B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08140697A (ja) * | 1994-11-17 | 1996-06-04 | Kirin Beverage Kk | 耐熱性好酸性菌の検出用選択培地およびその検出法 |
| JPH08140696A (ja) * | 1994-11-17 | 1996-06-04 | Kirin Beverage Kk | 果汁中で増殖性をもつ耐熱性好酸性菌の検出法 |
| JPH11243945A (ja) * | 1998-03-03 | 1999-09-14 | Kirin Beverage Corp | 新規アリサイクロバチルス属細菌 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4601148B2 (ja) | 2010-12-22 |
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