JP2002114709A

JP2002114709A - 虫歯予防剤

Info

Publication number: JP2002114709A
Application number: JP2000304889A
Authority: JP
Inventors: Kazuo Fukushima; 和雄福島
Original assignee: Nihon University
Current assignee: Nihon University
Priority date: 2000-10-04
Filing date: 2000-10-04
Publication date: 2002-04-16

Abstract

(57)【要約】【課題】ストレプトコッカス・ミュータンスのＧＴＦ
−Ｂに結合しそのＷＩＧ合成活性を阻害するマウスモノ
クロ−ナル抗体を用いて、バイオフィルム形成阻害およ
び虫歯発生抑制を可能とする。【解決手段】ストレプトコッカス・ミュ−タンスが産
生するＧＴＦ−ＢのＷＩＧ合成活性を阻害する作用を有
する該酵素に対するモノクロ−ナル抗体を有効成分とし
て含有することを特徴とする虫歯予防剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】虫歯原因菌ストレプトコッカ
ス・ミュ−タンスの主要な病原因子であるグルコシルト
ランスフェラ−ゼ−Ｂの非水溶性グルカン合成活性を強
く阻害するモノクロ−ナル抗体を使用して虫歯誘発性の
バイオフィルム（歯垢）形成の抑制を図る受動免疫によ
る虫歯予防剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】ヒトが歯を失う２大原因は虫歯（dental
caries）と歯周炎である。世界中で最も蔓延している
疾患である虫歯は、人類が確実な予防法を持たないため
現在でもほとんどのヒトに発症し、身体や生活に多大な
影響を及ぼし続けている。本疾患は、歯垢(dental plaq
ue) という歯面上に形成される細菌膜（バイオフィル
ム）中のミュ−タンスレンサ球菌（mutans streptococc
i）により人体中で最も硬い組織である歯質が不可逆的
に侵される特異な細菌感染症である。

【０００３】ミュ−タンスレンサ球菌は、1. マンニト
−ル等の糖アルコ−ルを発酵できる、2. ショ糖から付
着性の非水溶性グルカン(water-insoluble glucan，以
下ＷＩＧ)を合成できる、3. ＷＩＧ合成を介して歯面上
に固着・集落化し、そこに虫歯誘発性のバイオフィルム
を形成できる、4. 動物に虫歯を誘発できる、等の共通
の性質をもつストレプトコッカス・クリセツス(Strepto
coccus cricetus)、ストレプトコッカス・ラッタス(Str
eptococcus rattus)、ストレプトコッカス・ミュ−タン
ス(Streptococcus mutans)、ストレプトコッカス・ソブ
リヌス(Streptococcus sobrinus)、ストレプトコッカス
・ダウネイ(Streptococcus downei)等の７菌種８血清型
からなる一群の口腔連鎖球菌の総称である。

【０００４】これらの中でヒトの口腔に棲息し虫歯発症
に深く関わるのは、ストレプトコッカス・ミュ−タンス
とストレプトコッカス・ソブリヌスの２菌種であり、ヒ
ト口腔からの検出頻度の高いストレプトコッカス・ミュ
−タンスが虫歯の主要原因菌と考えられている。これら
２菌種は、染色体ＤＮＡのＧＣ含量、細胞壁多糖の構
造、溶血性、糖の発酵性、菌体内多糖やフルクタン合成
能等、細菌学的性状を全く異にする別種の細菌であり、
共通の特性である付着性ＷＩＧ合成とそれを介した歯面
への固着・集落化も、全く異なる酵素系及びメカニズム
により行われる。

【０００５】ストレプトコッカス・ミュ−タンスは、染
色体上にｇｔｆＢ, ｇｔｆＣ及びｇｔｆＤという３種の
グルコシルトランスフェラ−ゼ(glucosyltransferase)
遺伝子を持っており、それらの発現により各々グルコシ
ルトランスフェラ−ゼ−Ｂ（以下ＧＴＦ−Ｂ）、グルコ
シルトランスフェラ−ゼ−Ｃ（以下ＧＴＦ−Ｃ）、グル
コシルトランスフェラ−ゼ−Ｄ（以下ＧＴＦ−Ｄ）と呼
ばれるグルカン合成酵素を主として菌体表層上に産生分
泌する。ｇｔｆＢとｇｔｆＣの遺伝子産物であるＧＴＦ
−ＢとＧＴＦ−Ｃは共にショ糖からＷＩＧとイソマルト
オリゴ糖を合成する類似した構造のイソ酵素であるが、
ＷＩＧ合成能はＧＴＦ−Ｂが、オリゴ糖合成能はＧＴＦ
−Ｃが勝る。ｇｔｆＤ遺伝子産物であるＧＴＦ−Ｄはシ
ョ糖から水溶性グルカン（water-soluble glucan :以下
ＷＳＧ）を合成する酵素である。本菌種がＧＴＦ作用を
介して歯面に固着・集落化し、そこに虫歯誘発性のバイ
オフィルムを形成するメカニズムに関しては、最近、遺
伝子サイドからのアプロ−チが進み、ＰＡｃ等と呼ばれ
る高分子量の菌体表層タンパク抗原とｇｔｆＣ遺伝子産
物であるＧＴＦ−Ｃが重要因子としてクロ−ズアップさ
れている。ストレプトコッカス・ミュ−タンスによる虫
歯誘発性バイオフィルムの形成は、1. 唾液タンパクの
選択的吸着により歯面上にペリクルと呼ばれる薄膜が形
成される、2.ペリクル面に本菌がＰＡｃタンパクを介し
て初期付着する、3. 付着菌体はＧＴＦ−ＣのＷＩＧ合
成作用によりその場に強固に固着する、4. 固着菌体に
他の菌体が主にＧＴＦ−Ｃ作用を介して固着・集落化
し、本菌に富む細菌膜(虫歯誘発性バイオフィルム)が形
成される、という過程で進行するとの見解が現在一般化
しつつある。

【０００６】一方、ストレプトコッカス・ソブリヌス
は、染色体上にｇｔｆＩ，ｇｔｆＵ，ｇｔｆＴ及びｇｔ
ｆＳという４種のＧＴＦ遺伝子を持っており、それらの
発現によりグルコシルトランスフェラ−ゼ−Ｉ（以下Ｇ
ＴＦ−Ｉ）という１種類のＷＩＧ合成酵素と、グルコシ
ルトランスフェラ−ゼ−Ｕ、−Ｔ、−Ｓ（以下ＧＴＦ−
Ｕ、−Ｔ、−Ｓ）と呼ばれる３種のＷＳＧ合成酵素を菌
体外に産生分泌する。本菌種における付着性ＷＩＧ合成
と菌体の固着・集落化は、ストレプトコッカス・ミュ−
タンスの場合と異なって、ＧＴＦ−Ｉ酵素と３種のＷＳ
Ｇ合成酵素（未特定）の共同作用によりなされることが
示唆されている。

【０００７】虫歯病因論研究の進展に伴って、原因菌サ
イドから虫歯予防を図ろうとの応用研究、例えば、選択
的殺菌剤、ＧＴＦ阻害剤、バイオフィルム形成抑制剤、
シ−ラント剤等の開発研究や原因菌及び病原因子に対す
る特異抗体を用いた受動免疫や能動免疫による虫歯予防
研究等がこれまでにも数多く行われ、ＧＴＦによるショ
糖からのＷＩＧ合成や菌体固着作用を阻害したり、表層
タンパク抗原の初期付着作用を阻止する手段により、虫
歯予防が可能であることが動物実験等で立証されてい
る。しかし、ＧＴＦ阻害剤やシ−ラント剤など一部実用
化されてはいるものの、歯磨きに替わりうる効果的で実
用的な予防手段は未だ開発されていない。これからの虫
歯予防手段として最も有望視されているのは、安全性と
有用性の点から、虫歯菌のＧＴＦや菌体表層タンパクの
機能を阻害するモノクロ−ナル抗体を使用した受動免疫
法である。目的に合った機能阻害抗体をポリクロ−ナル
に作製することは比較的容易であり、実際、動物モデル
実験で虫歯予防効果を示すストレプトコッカス・ミュ−
タンスの菌体結合性ＧＴＦ（主にＧＴＦ−ＢとＧＴＦ−
Ｃからなる）に対する鶏卵抗体（ＩｇＹ）が得られてい
る。しかしながら、この種の抗体をモノクロ−ナルに作
製することは極めて難しい。一旦、有用なモノクロ−ナ
ル抗体を産生するハイブリド−マを樹立できれば、同質
のものを大量かつ安定に供給でき、バイオテクノロジ−
技法を駆使した大量生産化も可能である。

【０００８】実際に、英国の研究グル−プは、ストレプ
トコッカス・ミュ−タンスの歯面ペリクルへの初期付着
を阻害するＰＡｃに対するＩｇＧタイプのマウスモノク
ロ−ナル抗体を作成し、その虫歯予防効果をサルを用い
た動物モデル実験で実証している。さらに彼らは、その
抗体遺伝子を植物細胞に導入して大量調製したリコンビ
ナント抗体をヒトの歯面に塗布する手段により、口腔か
ら３ケ月間以上もの間、ストレプトコッカス・ミュ−タ
ンスを完全除菌することに成功したと最近報告している
（Nature medicine, 4:601-606, 1998) 。しかしなが
ら、彼らが作製した抗ＰＡｃモノクロ−ナル抗体は特異
性に問題があり、主要な歯垢構成細菌であるストレプト
コッカス・サングイスなどの表層タンパク抗原とも反応
性を示すため、その大量使用は口腔常在菌叢を大きく変
える危険性がある。従って、受動免疫に使用する予防用
抗体としては、特異性の高い虫歯菌ＧＴＦに対する抗体
が最適と思われる。

【０００９】虫歯ペプチドワクチンの開発研究を行って
いる米国の研究グル−プは、ストレプトコッカス・ミュ
−タンスのＧＴＦ−ＢやＧＴＦ−Ｃのショ糖結合領域
（活性基の１つ）と同一配列のペプチドを化学合成し、
それをマウスに免疫してＧＴＦ活性阻害能をもつＩｇＭ
タイプのモノクロ−ナル抗体の作製に成功している。し
かし、彼らが作製した抗体は、活性部位のアミノ酸配列
が僅かながら異なるストレプトコッカス・ミュ−タンス
のＧＴＦ−ＤのＷＳＧ合成活性とストレプトコッカス・
ソブリヌスＧＴＦ−ＩのＷＩＧ合成活性に対しては阻害
作用を示すものの、同一アミノ配列をもつ本命のＧＴＦ
−Ｂ及びＧＴＦ−ＣのＷＩＧ合成活性に対しては全く阻
害作用を示さない（Infec.Immun. 62:5470-5476,199
4）。従って、その種の抗体にストレプトコッカス・ミ
ュ−タンスの除菌効果を期待することはできない。スト
レプトコッカス・ソブリヌスの除菌用に使用できる可能
性はあるが、効果が認められたとしてもＩｇＭタイプの
抗体であるため、大量調製化は容易ではない。

【００１０】先に、本発明者らの研究グル−プは、スト
レプトコッカス・ミュ−タンスの３種のＧＴＦを分別定
量する方法を確立する目的で、それぞれのＧＴＦと特異
的に反応する数多くのマウスモノクロ−ナル抗体を作製
し、それら特異抗体の識別試薬としての有用性を明らか
にした。さらに、ＧＴＦ−Ｂと反応性を示す抗体のうち
の幾つかは該酵素のＷＩＧ合成活性に対して強い阻害作
用を示すことを見出した。（Infec.Immun. 61:323-328,
1993）。また、ストレプトコッカス・ソブリヌスの４種
のＧＴＦを識別する特異モノクロ−ナル抗体を同様の方
法で作製し、ＧＴＦ−Ｉと反応する１抗体が当該酵素の
ＷＩＧ合成活性を明らかに阻害することを見ている（FE
MS Immunol.Microbiol. 27:9-15,2000）。しかしなが
ら、それらの活性阻害抗体が、虫歯誘発性のバイオフィ
ルム形成を抑制できるか否か、虫歯菌を感染させた動物
の虫歯発生を抑制できるか否か、ヒトにおいて虫歯予防
効果を示すか否か、等については不明である。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明は、ス
トレプトコッカス・ミュータンスのＧＴＦ−Ｂに結合し
そのＷＩＧ合成活性を阻害するマウスモノクロ−ナル抗
体を用いて、バイオフィルム形成阻害および虫歯発生抑
制を可能とする受動免疫用の虫歯予防剤を提供すること
を目的とする。

【００１２】

【課題を解決するための手段】これまで、虫歯誘発性の
バイオフィルム形成に最も重要な働きをするストレプト
コッカス・ミュータンスの因子は、前述したように、本
菌が産生するＧＴＦ−Ｃであると考えられてきた。この
見解は、ＧＴＦ−Ｃのみを発現する遺伝子組換え体或い
は変異株が、無処理及び唾液処理したガラス等の平滑面
にショ糖存在下で固着し集落化できるのに対し、ＧＴＦ
−Ｂ発現株は固着・集落化できない事実が根拠になって
いる。しかし、本発明者らは、既得の形質転換株と抗Ｇ
ＴＦ−Ｂモノクローナル抗体を用いたバイオフィルム形
成試験およびラット使用の虫歯誘発実験により、実際の
口腔内における虫歯誘発性バイオフィルム形成過程にお
いてはＧＴＦ−Ｂが最も重要な病原因子であることを明
らかにし、本発明を完成するに至った。

【００１３】即ち、本発明はストレプトコッカス・ミュ
−タンスが産生するＧＴＦ−ＢのＷＩＧ合成活性を阻害
する作用を有する該酵素に対するモノクロ−ナル抗体を
有効成分として含有することを特徴とする虫歯予防剤で
ある。さらに、本発明はストレプトコッカス・ミュ−タ
ンスが産生するＧＴＦ−ＢのＷＩＧ合成活性を阻害し、
本菌がショ糖存在下で平滑歯面に固着・集落化し虫歯誘
発性バイオフィルムを形成するのを抑制する作用を有す
る該酵素に対するモノクロ−ナル抗体を有効成分として
含有することを特徴とする虫歯予防剤である。

【００１４】そして、前記ＧＴＦ−Ｂとしては、以下の
（ａ）又は（ｂ）に示すアミノ酸配列からなるものが挙
げられる。（ａ）配列番号１記載のアミノ酸配列（ｂ）配列番号１記載のアミノ酸配列において、１又は
複数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加され、かつＧＴ
Ｆ−Ｂ活性を有するアミノ酸配列

【００１５】また、上記モノクロ−ナル抗体としては、
ＧＴＦ−Ｂの活性部位の１つである配列番号２記載のア
ミノ酸配列で表されるデキストラン結合領域を認識し結
合するモノクロ−ナル抗体、或いはＧＴＦ−Ｂの他の活
性部位である配列番号３記載で表されるショ糖結合部位
を含むペプチド断片を認識し結合するモノクロ−ナル抗
体が挙げられる。

【００１６】さらに、上記モノクロ−ナル抗体として、
マウス−マウスハイブリド−マＭＨＰ１２６（ＦＥＲ
ＭＰ−１７５６６）により産生されるモノクロ−ナル
抗体、又はマウス−マウスハイブリド−マＭＨＰ１３６
（ＦＥＲＭＰ−１７５６７）により産生されるモノク
ロ−ナル抗体が挙げられる。

【００１７】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、既得のＧＴＦ−Ｂ、−Ｃ及び−Ｄを各
々単独発現するストレプトコッカス・ミレリ形質転換株
を用いるショ糖依存性菌体固着・集落化試験を行なっ
て、虫歯誘発性バイオフィルム形成における３種のＧＴ
Ｆの役割につき再検討を行った。その結果、ＧＴＦ−Ｂ
を発現する株は、無処理又は唾液で被覆した平滑面には
固着できないが、グルカンで被覆した表面には顕著に固
着・集落化できることを見出した。通常のヒトの口腔内
では、ペリクル面へ最初に付着する菌はストレプトコッ
カス・サングイスの仲間と考えられている。この菌群は
主要なバイオフィルム構成菌の１つであり、菌体表層上
に非付着性のグルカンを合成する能力があるため、スト
レプトコッカス・ミュ−タンスは、ＧＴＦ−Ｂの単独作
用のみでその表面に固着・集落化できることになる。従
って、実際の口腔内における虫歯誘発性バイオフィルム
形成に最も重要な働きをする因子はＧＴＦ−Ｃではな
く、ＧＴＦ−Ｂであると考えられる。

【００１８】従って、本発明の虫歯予防剤は、ストレプ
トコッカス・ミュータンスの最重要病原因子であるＧＴ
Ｆ−Ｂに特異的に反応し、該ＧＴＦ−ＢのＷＩＧ合成活
性を阻害するモノクローナル抗体を有効成分として含有
することを特徴とする。「ストレプトコッカス・ミュー
タンスが産生するＧＴＦ−Ｂ」には、ストレプトコッカ
ス・ミュータンスに属する微生物が産生する限り、いか
なる菌株が産生するＧＴＦ−Ｂも含まれる。

【００１９】「ストレプトコッカス・ミュータンスが産
生するＧＴＦ−Ｂ」の具体例としては、以下の（ａ）又
は（ｂ）に示すアミノ酸配列からなるＧＴＦ−Ｂを例示
できる。（ａ）配列番号１記載のアミノ酸配列（ｂ）配列番号１記載のアミノ酸配列において、１又は
複数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加され、かつＧＴ
Ｆ−Ｂ活性を有するアミノ酸配列

【００２０】ここで、配列番号１記載のアミノ酸配列に
おいて欠失、置換又は付加されるアミノ酸の個数は、欠
失、置換又は付加されたアミノ酸配列からなるタンパク
質がＧＴＦ−Ｂ活性を有する限り特に限定されないが、
好ましくは１又は数個である。「１又は数個」とは、通
常、本願の出願時において常用される技術、例えば、部
位特異的変異誘発法(Nucleic Acids Res.10, 6487‐650
0, 1982)により生じさせることができる個数を意味す
る。

【００２１】本発明の虫歯予防剤の有効成分であるモノ
クローナル抗体には、ストレプトコッカス・ミュータン
スが産生するＧＴＦ−Ｂに特異的に反応し、該ＧＴＦ−
Ｂの非水溶性グルカン合成活性を阻害する限り、いかな
るモノクローナル抗体も含まれる。

【００２２】その中でも、以下の〜に示すモノクロ
ーナル抗体を好ましいものとして例示できる。以下の（ａ）又は（ｂ）に示すアミノ酸配列からな
るＧＴＦ−Ｂに特異的に反応し、該ＧＴＦ−ＢのＷＩＧ
合成活性を阻害するモノクローナル抗体。（ａ）配列番号１記載のアミノ酸配列（ｂ）配列番号１記載のアミノ酸配列において、１又は
複数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加され、かつＧＴ
Ｆ−Ｂの活性を有するアミノ酸配列前記ＧＴＦ−Ｂの活性部位の１つである配列番号２
記載のアミノ酸配列で表されるデキストラン結合領域を
認識し結合するモノクロ−ナル抗体。

【００２３】前記ＧＴＦ−Ｂの他の活性部位である
配列番号３記載で表されるショ糖結合部位を含むペプチ
ド断片を認識し結合するモノクロ−ナル抗体。マウス−マウスハイブリド−マＭＨＰ１２６（ＦＥ
ＲＭＰ−１７５６６）により産生されるモノクロ−ナ
ル抗体、又はマウス−マウスハイブリド−マＭＨＰ１
３６（ＦＥＲＭＰ−１７５６７）により産生されるモ
ノクロ−ナル抗体である。

【００２４】ここで、ＧＴＦ−Ｂが上記（ａ）に示すア
ミノ酸配列からなる場合、上記に示すモノクローナル
抗体が特異的に反応する領域は配列番号２に示すアミノ
酸配列で表される領域、或いは上記に示すモノクロー
ナル抗体が特異的に反応する領域は配列番号３に示すア
ミノ酸配列で表される領域である。

【００２５】本発明の虫歯予防剤の有効成分であるモノ
クローナル抗体は、ストレプトコッカス・ミュータンス
が産生するＧＴＦ−Ｂに特異的に反応し、該ＧＴＦ−Ｂ
の非水溶性グルカン合成活性を阻害するという性質に加
え、ストレプトコッカス・ミュータンスが産生するＧＴ
Ｆ−Ｄに反応しないという性質を併せ持つことが好まし
く、ストレプトコッカス・ミュータンスが産生するＧＴ
Ｆ−Ｃに反応しないという性質をさらに併せ持つことが
さらに好ましい。

【００２６】ストレプトコッカス・ミュータンスが産生
するＧＴＦ−Ｄ及びＧＴＦ−Ｃには、ストレプトコッカ
ス・ミュータンスに属する微生物が産生する限り、いか
なる微生物が産生するＧＴＦ−Ｄ及びＧＴＦ−Ｃも含ま
れる。

【００２７】ストレプトコッカス・ミュータンスが産生
するＧＴＦ−Ｄの具体例としては、以下の（ｃ）又は
（ｄ）に示すアミノ酸配列からなるＧＴＦ−Ｄを例示で
きる。（ｃ）配列番号４記載のアミノ酸配列（ｄ）配列番号４記載のアミノ酸配列において、１又は
複数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸
配列また、ストレプトコッカス・ミュータンスが産生するＧ
ＴＦ−Ｃの具体例としては、以下の（ｅ）又は（ｆ）に
示すアミノ酸配列からなるＧＴＦ−Ｃを例示できる。

【００２８】（ｅ）配列番号５記載のアミノ酸配列（ｆ）配列番号５記載のアミノ酸配列において、１又は
複数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸
配列ここで、配列番号４及び５記載のアミノ酸配列において
欠失、置換又は付加されるアミノ酸の個数の意義は、上
記と同義である。

【００２９】ストレプトコッカス・ミュータンスが産生
するＧＴＦ−Ｄに反応しないという性質と、ストレプト
コッカス・ミュータンスが産生するＧＴＦ−Ｃに反応し
ないという性質とを併せ持つモノクローナル抗体として
は、上記に示すモノクローナル抗体及び上記に示す
モノクローナル抗体を例示できる。

【００３０】ストレプトコッカス・ミュータンスが産生
するＧＴＦ−Ｂに特異的に反応し、該ＧＴＦ−ＢのＷＩ
Ｇ合成活性を阻害するモノクローナル抗体は、例えば、
次の各工程により作成することができる。（１）抗原の調製（２）免疫及び抗体産生細胞の採取（３）細胞融合（４）ハイブリドーマの選択及びクローニング（５）モノクローナル抗体の採取

【００３１】以下、各工程について説明する。（１）抗原の調製抗原として使用するＧＴＦ−Ｂ標品は、ストレプトコッ
カス・ミュータンスの野生株や変異株（不活性化遺伝子
挿入法によりｇｔｆＣやｇｔｆＤをノックアウトしたＵ
Ａ１３０ＣＤ株など）、全ｇｔｆＢを発現する形質転換
株（大腸菌ＳＵ２０株やストレプトコッカス・ミレリＫ
ＳＢ８株など）、或いはｇｔｆＢの活性部位領域を発現
する形質転換株の培養上清または菌体表層抽出物より精
製することにより調製する。また活性部位領域と同一配
列のペプチド断片を化学合成し、これを血清アルブミン
等と結合させたものを抗原として用いる。

【００３２】（２）免疫及び抗体産生細胞の採取抗原をマウス、ラット、ハムスター、モルモット又はウ
サギ等の哺乳動物（ヒト抗体を産生するように遺伝子工
学的に作出されたヒト抗体産生マウスのようなトランス
ジェニック動物も含む）、好ましくはマウス、ラット又
はハムスターの皮下内、筋肉内、静脈内、フットパッド
内あるいは腹腔内に１〜数回注射することにより免疫感
作を施し、通常、初回免疫から約１〜１４日毎に１〜４
回免疫を行い、最終免疫より約１〜５日後に脾臓、リン
パ節、骨髄あるいは扁桃等、好ましくは脾臓を摘出する
ことにより行う。

【００３３】（３）細胞融合モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマの調製
は、ケーラー及びミルシュタインらの方法（Nature，25
6：495-497，1975）及びそれに準じる修飾方法に従って
行うことができるが、抗体産生細胞と、マウス、ラッ
ト、モルモット、ハムスター、ウサギ又はヒト等の哺乳
動物、より好ましくはマウス、ラット又はヒトに由来す
る自己抗体産生能のないミエローマ細胞とを細胞融合す
ることにより調製される。ミエローマ細胞としては、例
えばマウス由来ミエローマＰ３／Ｘ６３−ＡＧ８．６５
３（６５３）、Ｐ３／ＮＳ１／１−Ａｇ４−１（ＮＳ−
１）、Ｐ３／Ｘ６３−Ａｇ８．Ｕ１（Ｐ３Ｕ１）、ＳＰ
２／Ｏ−Ａｇ１４（Ｓｐ２／Ｏ、Ｓｐ２）、ＰＡ１、Ｆ
ＯあるいはＢＷ５１４７、ラット由来ミエローマ２１０
ＲＣＹ３−Ａｇ．２．３．、ヒト由来ミエローマＵ−２
６６ＡＲ１、ＧＭ１５００−６ＴＧ−Ａ１−２、ＵＣ７
２９−６、ＣＥＭ−ＡＧＲ、Ｄ１Ｒ１１あるいはＣＥＭ
−Ｔ１５等を使用することができる。

【００３４】（４）ハイブリドーマの選択及びクロー
ニングハイブリドーマの選択方法は通常の方法に従えばよく、
例えば、選択培地（ＨＡＴ培地など）を入れたマイクロ
タイタープレート中で培養し、増殖の見られたウェルの
培養上清の前述の免疫感作で用いた抗原に対する反応性
を、ＲＩＡやＥＬＩＳＡ等の酵素免疫測定法によって測
定することにより行うことができる。ＧＴＦ−Ｂに特異
的に反応するモノクローナル抗体を産生するハイブリド
ーマは、例えば、ＧＴＦ−Ｂを用いたＥＬＩＳＡによっ
てスクリーニングできる。また、ＧＴＦ−ＢのＷＩＧ合
成活性を阻害するモノクローナル抗体を産生するハイブ
リドーマは、例えば、次のようにスクリーニングでき
る。ＧＴＦ−Ｂ、ハイブリドーマ培養上清、リン酸カリ
ウム緩衝液（pH６.０）及びアジ化ナトリウムを含有す
る混合物１００〜１５０μlを９６穴マイクロプレート
のウェルに入れ、３７℃で１０〜３０分間プレインキュ
ベーション後、ショ糖含有リン酸カリウム緩衝液（pH
６.０）２０〜５０μｌを加え、３７℃で１６〜２４時
間インキュベーションする。インキュベーション後、反
応プレートを黒紙上に置いてＷＩＧ合成による白濁形成
の有無を判定することにより、活性阻害抗体を産生する
ハイブリドーマをスクリーニングする。目的のモノクロ
ーナル抗体を産生するハイブリドーマをクローニングす
る方法は、通常の方法に従えば良く、特に限定されな
い。ハイブリドーマのクローニングは、例えば、限界希
釈法、軟寒天法、フィブリンゲル法、蛍光励起セルソー
ター法等により行なうことができる。

【００３５】（５）モノクローナル抗体の採取取得したハイブリドーマからのモノクローナル抗体の採
取は、ハイブリドーマをインビトロ又はインビボ（マウ
ス、ラット、モルモット、ハムスター若しくはウサギ等
の腹水中等）で培養し、得られた培養上清又は哺乳動物
の腹水から単離することにより行うことができる。イン
ビトロで培養する場合には、培養する細胞種の特性、試
験研究の目的及び培養方法等の種々条件に合わせて、ハ
イブリドーマを増殖、維持及び保存させ、培養上清中に
モノクローナル抗体を産生させるために用いられるよう
な既知栄養培地あるいは既知の基本培地から誘導調製さ
れるあらゆる栄養培地を用いて実施することができる。
基本培地としては、例えば、Ｈａｍ'Ｆ１２培地、ＭＣ
ＤＢ１５３培地あるいは低カルシウムＭＥＭ培地等の低
カルシウム培地及びＭＣＤＢ１０４培地、ＭＥＭ培地、
Ｄ−ＭＥＭ培地、ＲＰＭＩ１６４０培地、ＡＳＦ１０４
培地あるいはＲＤ培地等の高カルシウム培地等が挙げら
れ、該基本培地は、目的に応じて、例えば血清、ホルモ
ン、サイトカイン及び／又は種々の無機若しくは有機物
質等を含有することができる。モノクローナル抗体の単
離及び精製は、上述の培養上清あるいは腹水を、飽和硫
酸アンモニウム、ユーグロブリン沈殿法、カプロイン酸
法、カプリル酸法、イオン交換クロマトグラフィー（Ｄ
ＥＡＥ又はＤＥ５２等）、抗イムノグロブリンカラム又
はプロテインＡカラム等のアフィニティカラムクロマト
グラフィーに供すること等により行うことができる。採
取したモノクローナル抗体が目的とするモノクローナル
抗体であることの確認は、例えば精製ＧＴＦ−Ｂに対す
るＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット法及びＷＩＧ合成活
性阻害測定（後述）により行うことができる。

【００３６】本発明の虫歯予防剤の形態は、虫歯予防効
果を発揮し得る限り特に限定されない。本発明の虫歯予
防剤の形態としては、例えば、ハイブリドーマの培養上
清、腹水抗体、精製抗体の凍結乾燥標品又はこれらを製
剤化したものを例示できる。製剤化したものの具体例と
しては、散剤、顆粒剤、錠剤（例えばトローチ剤）、液
剤、カプセル剤等を例示でき、これらの製剤化は常法に
従って行なうことができる。散剤、顆粒剤及び錠剤は、
例えば、凍結乾燥させた抗体をそのまま、又はこれに賦
形剤、結合剤、崩壊剤等の適当な添加剤を加えて（さら
に必要に応じて着色剤、芳香剤、矯味剤等を加えて）均
等に混和した後、それぞれ適当な方法により粉末化、粒
状化、圧縮成型することにより調製できる。液剤は、例
えば、凍結乾燥させた抗体を溶剤に溶解し、必要に応じ
て安定剤、緩衝剤、矯味剤、ゲル化剤、保存剤等の適当
な添加剤を加えることにより調製できる。液剤に使用す
る溶剤は、通常精製水又は常水（例えば、水道水、井
水）である。本発明の虫歯予防剤は、対象動物の口内に
投与する。本発明の虫歯予防剤は、単独で口内へ投与し
てもよいし、食物や食餌等に混合して口内へ投与しても
よい。

【００３７】本発明の虫歯予防剤の投与回数は特に限定
されないが、通常１〜３回/日であり、好ましくは１回/
日である。本発明の虫歯予防剤の対象となる動物は、歯
を有する動物である限り特に限定されず、例えば、ヒ
ト、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ハムスター、ウマ、
ウシ、ブタ、等の多くの動物に対して虫歯予防効果を発
揮し得る。

【００３８】

【実施例】次に、実施例を挙げて本発明を更に詳しく説
明する。実施例１最重要GTFの特定（１）形質転換株の調製既報（Infect. Immun. 60：2815-2822,1992）に準じて
作製したストレプトコッカス・ミレリＫＳＢ８形質転換
株（ＧＴＦ−Ｂ発現株）、ＫＳＣ４３形質転換株（ＧＴ
Ｆ−Ｃ発現株）及びＮＨ５形質転換株（ＧＴＦ−Ｄ発現
株）の凍結保存菌株より、発現量が高くかつ発現が安定
なそれぞれの形質転換株を再分離して使用した。ＧＴＦ
蛋白の発現量と安定性は、先に本発明者らがモノクロー
ナル抗体を使用して開発した各ＧＴＦの産生レベルをセ
ミ分別定量するための免疫学的手法（FEMS Microbiol.
Lett. 145:427-432,1996）を用いて検定した。

【００３９】（２）固着・集落化試験ガラス製とポリスチレン製の非被覆、唾液被覆、及びグ
ルカン被覆試験管（9×7５mm）を用いて形質転換株の固
着・集落化能を下記の方法で比較検討した。成人５名か
らの加熱処理（６０℃、３０分間）混合唾液３mlを試験
管に入れ、室温下で３０分間インキュベーション後、唾
液を除去し、十分に水洗したものを唾液被覆試験管とし
て用いた。グルカン被覆試験管は次のようにして調製し
た。ストレプトコッカス・ソブリヌスＢ１３Ｎ株の培養
上清から分離精製した純化ＧＴＦ−Ｉの０．５μｇと純
化ＧＴＦ−Ｓ２の0.２５μｇ、５０ｍＭショ糖,、酢酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）からなる反応液３ｍｌ
を試験管に入れ、３７℃、３０度傾斜下で１６時間ロー
ソク培養を行って付着性ＷＩＧを試験管壁上に形成させ
た後、バイブレーター処理により弱く付着したグルカン
を洗浄除去した。

【００４０】このようにして調製した唾液及びグルカン
被覆試験管及び非被覆試験管に５％ショ糖添加ＴＨＢ培
地２ｍｌを入れ、オートクレーブ滅菌後、供試菌株の全
培養菌1白金耳を植菌し、３７℃、１６時間、３０度傾
斜下でローソク培養を行った。培養後、試験管をタッチ
ミキサーを用いてボルテックス処理（最大スピード、10
秒間）して非・弱付着菌体と固着菌体に分別し、それぞ
れの菌体量を５５０ｎｍにおける濁度測定により求め、
下記の式に従って固着率を算出した。

【００４１】

【化1】

【００４２】結果を表1に示す。

【００４３】

【表１】

【００４４】表1の結果は、ＧＴＦ−Ｂを発現するＫＳ
Ｂ８株は無処理又は唾液で被覆した平滑面には固着でき
ないものの、グルカンで被覆した表面には顕著に固着・
集落化できることを示している。一方、ＧＴＦ−Ｃを発
現するＫＳＣ４３株はいずれの平滑面にも遜色なく固着
・集落化できるのに対し、ＧＴＦ−Ｄを発現するＮＨ５
株はいずれの平滑面にも全く固着できないことを示し
た。通常のヒト口腔内では、ペリクル面へ最初に付着す
る菌はストレプトコッカス・サングイスの仲間と考えら
れている。主要なバイオフィルム構成菌の１つである本
菌群は、ショ糖から水溶性グルカン(ＷＳＧ)を合成する
一種類のＧＴＦを菌体外及び菌体表層上に産生分泌す
る。従って、ストレプトコッカス・サングイスが初期
付着した固層表面にはショ糖存在下でストレプトコッカ
ス・ミュ−タンスがＧＴＦ−Ｂの作用のみで固着・集落
化できることになる。かくして、表１の結果は、実際の
口腔内における虫歯誘発性バイオフィルム形成過程にお
いて最も重要な働きをする因子はＧＴＦ−Ｃではなく、
ＧＴＦ−Ｂであることを強く示唆している。

【００４５】実施例２モノクローナル抗体の作製以下の方法に従って、抗ＧＴＦ−Ｂモノクローナル抗体
を調製した。（１）ＧＴＦ−Ｂの調製ストレプトコッカス・ミュータンスＰＳ１４株（血清型
Ｃ）（以下、単に「ＰＳ１４株」という）からＧＴＦ−
Ｂを以下のように調製した。ＰＳ１４株を、１％硫酸ア
ンモニウム及び１０μM ｐ−アミノフェニルメチルスル
ホニルフルオライドを添加したＭ４培地の８Ｌ中で３７
℃にて１８時間培養した後、培養液を遠心分離（8,000r
pm, 10min）して、培養上清を回収した。この培養上清
をPellicon cassette system（Millipore, Tokyo, Japa
n）で濃縮した後、硫酸アンモニウムを加えて飽和濃度
を６０％とした。一晩放置後、沈殿物を回収し、５０mM
リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）に溶解し、同緩衝
液に対し透析した。ガラスカラム（２．９×１３cm）に
充填後、５０mMリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）で
平衡化したカルボキシメチルセルロースのカラムに、得
られた粗酵素を添加した。吸着した酵素を５０mMリン酸
カリウム緩衝液（ｐＨ７．５）で十分洗浄後、０〜１Ｍ
の塩化ナトリウムを含む５０mMリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ７．５）で濃度勾配溶出させた。溶出パターンを
波長２８０nmでの吸光度とＷＩＧ合成活性により観察し
た。約０．７Ｍの塩化ナトリウム濃度で溶出したフラク
ションがＷＩＧ合成活性を有しており、このフラクショ
ンを回収し、精製ＧＴＦ−Ｂを取得した。

【００４６】非水溶性グルカン合成活性は、フラクショ
ンにショ糖含有リン酸カリウム緩衝液を加え、３７℃で
１６時間インキュベーション後、反応混合物を超音波処
理し、生成したＷＩＧを分散させ、５５０nmの吸光度を
分光光度計で測定した。測定された吸光度からＷＩＧ合
成活性を算出した。

【００４７】（２）免疫及び細胞融合（ｉ）免疫動物脾臓細胞の調製免疫方法は８〜１０週令のＢＡＬＢ／ｃマウスの皮下あ
るいは、静脈内あるいは腹腔内に、精製ＧＴＦ−Ｂを適
当なアジュバンド、例えば、フロインドアジュバンドあ
るいは、リビアジュバンドシステム（Ribi Ajuvant Sys
tem、RIBI IMMUNOCHEM RESEARC, INC社（製）、販売：
フナコシ（株））とともに注射することにより初回（０
日）免疫した。初回免疫から１４日目、２８日目、４２
日目に精製ＧＴＦ−Ｂを皮下あるいは腹腔内に注射する
ことにより追加免疫し、更に下記に述べるモノクローナ
ル抗体産生ハイブリドーマ調製の前々日及び前日にも同
様にして最終免疫し、マウスから脾細胞を調製して細胞
融合に用いた。

【００４８】（ii）マウス骨髄腫細胞の調製８−アザグアニン耐性マウス骨髄細胞Ｐ３−Ｕ１を正常
培地「ＲＰＭＩ−１６４０にグルタミン１．５mM及び牛
胎児血清１０％を加えた培地」に培養（３７℃、Ｃ
Ｏ₂、５％通気）し、４日後に２×１０7以上の細胞を得
た。

【００４９】（iii）ハイブリドーマの作製ＲＰＭＩ−１６４０（日本製薬社（製））でよく洗浄し
た免疫マウス脾細胞１×１０⁸個とマウス骨髄腫細胞２
×１０⁷個を混合し、１５００rpmで５分間遠心分離し
た。沈殿として得られた脾細胞とＰ３−Ｕ１の混合した
細胞群をほぐした後、攪拌しながら５０％ポリエチレン
グリコール、１０％ＤＭＳＯ溶液１mlを加え、２分後に
ＲＰＭＩ−１６４０を徐々に加え、全容量が５０mlとな
るようにした。１０００rpmで５分間遠心分離後、上清
を捨て、ゆるやかに細胞をほぐした後、ＨＡＴ培地「上
記正常培地にヒポキサンチン１０^-4Ｍ、チミジン１．５
×１０^-5Ｍ、及びアミノプテリン４×１０^-7Ｍを加えた
培地」３０mlを加え、５ml溶メスピペットでゆるやかに
細胞を懸濁し、５％ＣＯ₂インキュベーター中３７℃で
２時間培養した。１５００rpmで５分間遠心分離後、上
清を捨て、ゆるやかに細胞をほぐした後、ＨＡＴ培地に
懸濁し、９６穴培養プレートに２００μｌ／穴ずつ分注
し、５％ＣＯ₂インキュベーター中３７℃で１０〜１４
日間培養した。

【００５０】（３）ハイブリドーマのスクリーニング抗ＧＴＦ−Ｂモノクローナル抗体を産生するバイブリド
ーマのスクリーニングは、抗原を固相化したＥＬＩＳＡ
（Enzyme-linked immuneoabsorbent assay）を用いて行
った。また、得られた抗体産生ハイブリドーマの中から
ＧＴＦ−ＢのＷＩＧ合成活性を阻害するモノクローナル
抗体を産生するハイブリドーマのスクリーニングは、９
６穴ＥＩＡプレートを用いてＷＩＧ合成阻害に伴う濁度
減少を調べることにより行った。

【００５１】精製ＧＴＦ−Ｂを１５０mMのＮａＣｌを含
む２０mMリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、以下「ＰＢＳ」と
いう）に２μｇ／mlの濃度で調製後、９６穴ＥＩＡプレ
ートに５０μl／穴ずつ分注し、室温で２時間放置し抗
原をプレートに固相化した。０．０５％のＴｗｅｅｎ２
０を含むＰＢＳ（以下「Ｔ−ＰＢＳ」という）を３５０
μl／穴ずつ分注し、室温で１時間放置し底面上の蛋白
結合性残基をブロックした。９６穴ＥＩＡをＴ−ＰＢＳ
により２回洗浄後、Ｔ−ＰＢＳをプレートに５０μｌ／
穴、さらに１次抗体としてハイブリドーマ培養上清を１
００μｌ/穴ずつ添加し、４℃で一晩又は室温で２時間
放置した。ＥＩＡプレートをＴ−ＰＢＳにより２回洗浄
後、第２抗体としてヤギの抗マウスイムノグロブリン−
ペルオキシダーゼ結合物（ＴＡＧＯ社（製）、販売：コ
スモバイオ（株））の５０００倍希釈液を５０μｌ／穴
ずつ分注し、室温で１時間放置した。ＥＩＡプレートを
Ｔ−ＰＢＳにより２回洗浄後、ＯＰＤ基質液（ｏ−フェ
ニレンジアミン２塩酸塩６０mgをクエン酸-リン酸緩衝
液（ｐＨ５．２）２０mlに溶かした溶液に、３０％の過
酸化水素２０μｌを加えた溶液）を５０μｌ／穴ずつ分
注し、発色後、１Ｎの硫酸溶液を５０μｌ／穴ずつ分注
し反応を停止させた。プレートリーダーにて吸光度を主
波長４９２nm、副波長６２０nmで測定した。

【００５２】次に、上記ＥＬＩＳＡ反応に強陽性を示す
培養上清についてＧＴＦ-ＢのＷＩＧ合成活性に対する
阻害能の有無を、ストレプトコッカス・ミレリKSB8形質
転換株の培養上清から調製したＧＴＦ−Ｂの粗酵素標品
（調製法は後述）を用いて調べた。９６穴ＥＩＡプレー
トの各穴に粗酵素５０μl（約１mU）とハイブリドーマ
上清５０μｌを添加し、室温に２０分間放置後、３００
ｍＭショ糖２５μlと０．６Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．
０）２５μｌを加え、３７℃のインキュベーター中で１
６時間反応させた。ＷＩＧ合成に伴う濁度形成の認めら
れない透明穴形成を指標にしてスクリーニングし、ＷＩ
Ｇ合成阻害能を持つ抗体産生ハイブリドーマを数種取得
した。

【００５３】これらハイブリドーマについて限外希釈法
によるクローニングを２〜４回繰り返し、安定して抗体
産生の認められた２株を抗ＧＴＦ−Ｂモノクローナル抗
体産生ハイブリドーマ株として選択し、通産省工業技術
院生命工学工業技術研究所に、寄託番号ＦＥＲＭＰ−
１７５６６及びＦＥＲＭＰ−１７５６７として寄託し
た。

【００５４】（４）モノクローナル抗体の調製このようにして得られたハイブリドーマＦＥＲＭＰ−
１７５６６及びＦＥＲＭＰ−１７５６７を１０％牛胎児
血清加ＲＰＭＩ１６４０培地に４〜６日間培養した。そ
の培養上清を集め、０．１％アジ化ナトリウム存在下で
冷蔵、或いは直ちに凍結乾燥したものを調製し、培養上
清画分として用いた。さらに、冷蔵保蔵した培養上清画
分(約１リットル)に硫酸アンモニウムを５０％飽和にな
るよう添加し、一晩放置後、生じた沈殿物を遠心分離に
て回収した。この沈殿物を生理食塩水に溶解し、同液に
対して４℃下で２日間透析後、凍結乾燥し、これを粗免
疫グロブリン画分として用いた。なお、ＦＥＲＭＰ−
１７５６６から得られたモノクローナル抗体をＭＨＰ１
２６と命名し、ＦＥＲＭＰ−１７５６７から得られた
モノクローナル抗体をＭＨＰ１３６と命名した。

【００５５】実施例３モノクローナル抗体の反応性（１）ＧＴＦ−Ｂ、ＧＴＦ−Ｃ及びＧＴＦ−Ｄに対する
反応性得られた２種のハイブリドーマが産生するモノクローナ
ル抗体について、ＧＴＦ−Ｂ、ＧＴＦ−Ｃ及びＧＴＦ−
Ｄとの反応性をＥＬＩＳＡ及びウエスタンブロッティン
グによって調べた。反応性試験及び次の活性阻害試験に
使用するＧＴＦ‐Ｂ抗原及び反応性試験に使用するＧＴ
Ｆ-Ｃ抗原は、ストレプトコッカス・ミレリＫＳＢ８株
及びＫＳＣ４３株の培養上清より部分精製したリコンビ
ナント酵素標品を下記のように調製し使用した。既報(I
nfect.Immun．60：2815-2822, 1992)の方法で作製した
ＫＳＢ８株及びＫＳＣ４３株をエリスロマイシン(10μg
/ml)及び１０μM p‐ＡＰＭＳＦを添加したＴＨＢ培地
中で３７℃にて１８時間嫌気培養し、遠心分離によりそ
れぞれの培養上清を回収後、リコンビナントＧＴＦ-Ｂ
は硫酸アンモニウム沈殿、ハイドロキシルアパタイト及
びトヨパールＨＷ５５のカラムクロマトグラフィー処理
により、リコンビナントＧＴＦ-Ｃは硫酸アンモニウム
沈殿及びトヨパールＨＷ６５の疎水カラムクロマトグラ
フィー処理により部分精製した。また、反応性試験に使
用するＧＴＦ−Ｄ抗原は、ストレプトコッカス・ミュー
タンスＰＳ1４株の透析ＢＨＩ培地培養上清より、馬場
らの方法（Carbohydr. Res．158:147-155，1986）に準
じて、硫酸アンモニウム沈殿、ＤＥＡＥセルロース及び
ＣＭセルロースのカラムクロマトグラフィー処理を行な
って得た純化標品を使用した。このようにして調製した
ＧＴＦ−ＢとＧＴＦ−Ｃのリコンビナント酵素、及びＧ
ＴＦ−Ｄの純化酵素に対するモノクローナル抗体ＭＨＰ
１２６とＭＨＰ１３６の反応性を、上記と同様の方法で
調べたＥＬＩＳＡの結果を表２に示す。

【００５６】

【表２】

【００５７】表２中の「＋＋＋」は吸光度が１．５以
上、「＋＋」は吸光度が０．７以上、「−」は吸光度が
０．２未満であったことを示す。吸光度が大きい値であ
るほど、抗体のＧＴＦ−Ｂに対する反応性が大きい。従
って、モノクローナル抗体のＧＴＦ−Ｂに対する反応性
は「＋＋＋」＞「＋＋」＞「＋」＞「−」という関係で
表される。

【００５８】表２の結果は、モノクローナル抗体ＭＨＰ
１２６とＭＨＰ１３６とは、ＧＴＦ−Ｂのみと強く反応
し、ＧＴＦ−Ｃ及びＧＴＦ−Ｄには全く反応しないこと
を示している。なお、両抗体のＧＴＦ−Ｂに対する反応
特異性はウエスタンブロッティングによっても確認され
た。

【００５９】（２）ＧＴＦ-ＢのＷＩＧ合成活性の阻害
能リコンビナントＧＴＦ−Ｂの部分精製標品（6 mU）、粗
免疫グロブリン画分(10〜50μg)、100ｍMリン酸緩衝液
(pH 6.0)及び0．01％アジ化ナトリウムからなる反応液
（625μl）を37℃で10分間プレインキュベーションした
後、300mMショ糖含有100mMリン酸緩衝液(pH6.0)を125μ
l加えた。37℃下で16時間インキュベーションした後、
反応液を超音波処理（50W、3秒間）し、生成したＷＩＧ
を分散させ、550nｍの濁度を分光光度計で測定した。未
培養の培地50μlを添加した反応液の濁度に対する百分
率を求め、それを阻害率とした。その結果を表３に示
す。

【００６０】

【表３】

【００６１】表３の結果が示すように、ＭＨＰ１２６及
びＭＨＰ１３６モノクローナル抗体はいずれもＧＴＦ−
ＢのＷＩＧ合成活性を著明に阻害することが確認され
た。（３）抗原認識部位の推定ＭＨＰ１２６及びＭＨＰ１３６モノクローナル抗体の抗
原認識部位を推定する目的で、ＧＴＦ−ＢのＣ末端領域
（デキストラン結合領域）を欠落した不完全ＧＴＦに対
する両モノクローナル抗体の反応性を上記と同様にＥＬ
ＩＳＡにより調べた。Ｃ末端領域を欠落したＧＴＦタン
パク抗原は、加藤ら（FEBS Microbiol.Let. 72:298-30
2, 1990）が構築した大腸菌クローンｐＣＫ４１の培養
菌体からの菌体抽出物を調製し使用した。また、ＫＳＢ
8株培養上清から部分精製したリコンビナントＧＴＦ-Ｂ
標品を対照抗原として用いた。結果を表４に示す

【００６２】

【表４】

【００６３】表４中の「＋＋＋」は吸光度が１．５以
上、「＋＋」は吸光度が０．７以上、「−」は吸光度が
０．２未満であったことを示す。表４の結果から、モノ
クローナル抗体ＭＨＰ１２６は、ｐＣＫ４１抽出物及び
精製ＧＴＦ−Ｂの両抗原と反応したので、ＭＨＰ１２６
の抗原認識部位はＮ末端側活性部位、すなわち配列番号
２記載のアミノ酸で表される領域に存在することが推測
された。一方、モノクローナル抗体ＭＨＰ１３６は、ｐ
ＣＫ４１とは全く反応せず、精製ＧＴＦ−Ｂとのみ反応
した。ＭＨＰ１３６の抗原認識部位はデキストラン結合
部位、すなわち配列番号３記載のアミノ酸配列で表され
る領域に存在することが推測された。

【００６４】（４）アイソタイプの決定マウスモノクローナル抗体アイソタイプ決定キット（Ｚ
ＹＭＥＤ社（製）、販売：コスモバイオ（株））を用
い、該キット添付の実験操作プロトコールに従って操作
を行い、モノクローナル抗体ＭＨＰ１２６及びＭＨＰ１
３６のアイソタイプを決定した。ＭＨＰ１２６及びＭＨ
Ｐ１３６抗体のアイソタイプは共にIgG₁であった。

【００６５】実施例４モノクローナル抗体ＭＨＰ１２
６及びＭＨＰ１３６の虫歯予防効果（１）虫歯誘発性バイオフィルムの形成阻害能上述の固着・集落化試験法に準じた方法で、ＭＨＰ１２
６及びＭＨＰ１３６の培養上清抗体を用いて虫歯誘発性
バイオフィルム形成に対する阻害能を評価した。即ち、
生食水に対し一夜透析し、ろ過滅菌した培養上清抗体を
50〜４00μl、0.5％ショ糖および0.5％ブドウ糖を含む
ＴＨＢ培地2mlを小ガラス試験管に入れ、ストレプトコ
ッカス・ミュータンスＰＳ１４株の前培養菌を1白金耳
を植菌し、３７℃、１６時間、３０度傾斜下でローソク
培養を行った。培養後、試験管をタッチミキサーを用い
てボルテックス処理（10秒間）し、非・弱付着菌体と固
着菌体に分別後、それぞれの菌体量を５５０ｎｍにおけ
る濁度測定した。上述した計算式により固着率を求め、
ストレプトコッカス・ソブリヌスのＧＴＦ-Ｔに対する
マウスモノクローナル抗体（Ｂ１９）を産生するハイブ
リドーマ培養上清添加の培養系（対照）の固着率との比
より阻害率を算出した。結果を表５に示す。

【００６６】

【表５】

【００６７】表５の結果は、ＭＨＰ１２６及びＭＨＰ１
３６の両モノクローナル抗体が、ストレプトコッカス・
ミュータンスＰＳ１４株の平滑面への固着・集落化、即
ち虫歯誘発性バイオフィルム形成を著明に阻害する作用
を持つことを強く示唆する.。

【００６８】（２）感染ラットに対する虫歯発生抑制能ＧＴＦ−ＢのＷＩＧ合成活性を阻害するモノクローナル
抗体の口腔内投与で虫歯発生を抑制出来るか否かを、ス
トレプトコッカス・ミュータンスＰＳ１４株、モノクロ
ーナル抗体ＭＨＰ１２６の粗免疫グロブリン画分、３５
％ショ糖含有虫歯誘発食及びＳＤ系ラットを用いた下記
の動物実験により調べた。その目的のため、以下のよう
な実験群を設定した。

【００６９】グループＡストレプトコッカス・ミュータンスに感染していない２
０日令ラット（６匹）に、モノクローナル抗体を含まな
い３５％ショ糖食を与えて飼育する。グループＢストレプトコッカス・ミュータンスＰ１４株を２０日令
ラット（６匹）に感染させ、モノクローナル抗体を含ま
ない３５％ショ糖食を与えて飼育する。

【００７０】グループＣストレプトコッカス・ミュータンスＰＳ１４株を２０日
令ラット（６匹）に感染させ、モノクローナル抗体ＭＨ
Ｐ１２６(凍結乾燥標品)を０.０１％(w/w)濃度に添加し
た３５％ショ糖食を与えて飼育する。グループＡ〜Ｃの
実験群において、上記の食餌を自由摂取にて５７日間与
えて飼育後、７７日令で屠殺し、下顎に発生した虫歯の
程度をカイズの方法(J.Dent.Res.23:439-444，1944)に
よりスコアー化し、比較した。グループＡ〜Ｃにおける
結果をそれぞれ表６〜８に示す。

【００７１】

【表６】

【００７２】

【表７】

【００７３】

【表８】

【００７４】表６及び表７に示されるように、グループ
ＢではグループＡよりもスコアー（虫歯の発生率）が有
意に高かった。グループＡ及びグループＢで与えられた
食餌は同じであるので、このようなスコアーの違いは、
ストレプトコッカス・ミュータンスＰＳ１４株の感染の
有無に基づく。すなわち、グループＡではＰＳ１４株を
感染させていないので虫歯の発生率は低いが、グループ
ＢではＰＳ１４株を感染させているので虫歯の発生率が
グループＡよりも有意（Ｐ＜０．０１）に高い。このこ
とから、ストレプトコッカス・ミュータンス株が虫歯を
誘発する原因であることは明らかである。

【００７５】一方、表７及び表８に示されるように、グ
ループＣではグループＢよりも虫歯の発生率、特に平滑
面虫歯の発生率が有意(Ｐ＜０．０１)に低かった。グル
ープＢ及びグループＣではともにストレプトコッカス・
ミュータンスＰＳ１４株を感染させているので、このよ
うな虫歯発生率の相違は、与えられた食餌の相違に基づ
く。グループＢでは、モノクローナル抗体ＭＨＰ１２６
を含まない食餌が与えられたので虫歯の発生率が高い
が、グループＣでは、モノクローナル抗体ＭＨＰ１２６
を含む食餌が与えられたので虫歯の発生率がグループＢ
よりも有意に低くなっている。このことは、モノクロー
ナル抗体ＭＨＰ１２６にストレプトコッカス・ミュータ
ンスによる虫歯の発生を予防する効果があることを示し
ている。すなわち、モノクローナル抗体ＭＨＰ１２６や
ＭＨＰ１３６のように、ストレプトコッカス・ミュータ
ンスが産生するＧＴＦ−Ｂに特異的に反応し、該ＧＴＦ
−ＢのＷＩＧ合成活性を阻害するモノクローナル抗体が
虫歯予防効果を有することが明らかとなった。

【００７６】

【発明の効果】本発明により、ストレプトコッカス・ミ
ュータンスが産生するＧＴＦ−Ｂに特異的に反応し、該
ＧＴＦ−ＢのＷＩＧ合成活性を阻害するモノクローナル
抗体を有効成分として含有することを特徴とする虫歯予
防剤が提供される。

【００７７】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> NIHON UNIVERSITY <120> A medicament for dental prophylaxis <130> P99-0389 <140> <141> <160> 6 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 1476 <212> PRT <213> Streptococcus mutans <400> 1 Met Asp Lys Lys Val Arg Tyr Lys Leu Arg Lys Val Lys Lys Arg Trp 1 5 10 15 Val Thr Val Ser Val Ala Ser Ala Val Met Thr Leu Thr Thr Leu Ser 20 25 30 Gly Gly Leu Val Lys Ala Asp Ser Asn Glu Ser Lys Ser Gln Ile Ser 35 40 45 Asn Asp Ser Asn Thr Ser Val Val Thr Ala Asn Glu Glu Ser Asn Val 50 55 60 Ile Thr Glu Ala Thr Ser Lys Gln Glu Ala Ala Ser Ser Gln Thr Asn 65 70 75 80 His Thr Val Thr Thr Ser Ser Ser Ser Thr Ser Val Val Asn Pro Lys 85 90 95 Glu Val Val Ser Asn Pro Tyr Thr Val Gly Glu Thr Ala Ser Asn Gly 100 105 110 Glu Lys Leu Gln Asn Gln Thr Thr Thr Val Asp Lys Thr Ser Glu Ala 115 120 125 Ala Ala Asn Asn Ile Ser Lys Gln Thr Thr Glu Ala Asp Thr Asp Val 130 135 140 Ile Asp Asp Ser Asn Ala Ala Asn Leu Gln Ile Leu Glu Lys Leu Pro 145 150 155 160 Asn Val Lys Glu Ile Asp Gly Lys Tyr Tyr 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Asp Lys Ala Ala Asn Asp His Leu Ser 500 505 510 Ile Leu Glu Ala Trp Ser Tyr Asn Asp Thr Pro Tyr Leu His Asp Asp 515 520 525 Gly Asp Asn Met Ile Asn Met Asp Asn Arg Leu Arg Leu Ser Leu Leu 530 535 540 Tyr Ser Leu Ala Lys Pro Leu Asn Gln Arg Ser Gly Met Asn Pro Leu 545 550 555 560 Ile Thr Asn Ser Leu Val Asn Arg Thr Asp Asp Asn Ala Glu Thr Ala 565 570 575 Ala Val Pro Ser Tyr Ser Phe Ile Arg Ala His Asp Ser Glu Val Gln 580 585 590 Asp Leu Ile Arg Asn Ile Ile Arg Thr Glu Ile Asn Pro Asn Val Val 595 600 605 Gly Tyr Ser Phe Thr Thr Glu Glu Ile Lys Lys Ala Phe Glu Ile Tyr 610 615 620 Asn Lys Asp Leu Leu Ala Thr Glu Lys Lys Tyr Thr His Tyr Asn Thr 625 630 635 640 Ala Leu Ser Tyr Ala Leu Leu Leu Thr Asn Lys Ser Ser Val Pro Arg 645 650 655 Val Tyr Tyr Gly Asp Met Phe Thr Asp Asp Gly Gln Tyr Met Ala His 660 665 670 Lys Thr Ile Asn Tyr Glu Ala Ile Glu Thr Leu Leu Lys Ala Arg Ile 675 680 685 Lys Tyr Val Ser Gly Gly Gln Ala Met Arg Asn Gln Gln Val Gly Asn 690 695 700 Ser Glu Ile Ile Thr Ser Val Arg 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Arg Tyr Asp Leu Gly Ile Ser Lys 915 920 925 Pro Asn Lys Tyr Gly Thr Ala Asp Asp Leu Val Lys Ala Ile Lys Ala 930 935 940 Leu His Ser Lys Gly Ile Lys Val Met Ala Asp Trp Val Pro Asp Gln 945 950 955 960 Met Tyr Ala Leu Pro Glu Lys Glu Val Val Thr Ala Thr Arg Val Asp 965 970 975 Lys Tyr Gly Thr Pro Val Ala Gly Ser Gln Ile Lys Asn Thr Leu Tyr 980 985 990 Val Val Asp Gly Lys Ser Ser Gly Lys Asp Gln Gln Ala Lys Tyr Gly 995 1000 1005 Gly Ala Phe Leu Glu Glu Leu Gln Ala Lys Tyr Pro Glu Leu Phe Ala 1010 1015 1020 Arg Lys Gln Ile Ser Thr Gly Val Pro Met Asp Pro Ser Val Lys Ile 1025 1030 1035 1040 Lys Gln Trp Ser Ala Lys Tyr Phe Asn Gly Thr Asn Ile Leu Gly Arg 1045 1050 1055 Gly Ala Gly Tyr Val Leu Lys Asp Gln Ala Thr Asn Thr Tyr Phe Ser 1060 1065 1070 Leu Val Ser Asp Asn Thr Phe Leu Pro Lys Ser Leu Val Asn Pro Asn 1075 1080 1085 His Gly Thr Ser Ser Ser Val Thr Gly Leu Val Phe Asp Gly Lys Gly 1090 1095 1100 Tyr Val Tyr Tyr Ser Thr Ser Gly Asn Gln Ala Lys Asn Ala Phe Ile 1105 1110 1115 1120 Ser Leu Gly Asn Asn Trp Tyr Tyr Phe Asp Asn Asn Gly Tyr Met Val 1125 1130 1135 Thr Gly Ala Gln Ser Ile Asn Gly Ala Asn Tyr Tyr Phe Leu Ser Asn 1140 1145 1150 Gly Ile Gln Leu Arg Asn Ala Ile Tyr Asp Asn Gly Asn Lys Val Leu 1155 1160 1165 Ser Tyr Tyr Gly Asn Asp Gly Arg Arg Tyr Glu Asn Gly Tyr Tyr Leu 1170 1175 1180 Phe Gly Gln Gln Trp Arg Tyr Phe Gln Asn Gly Ile Met Ala Val Gly 1185 1190 1195 1200 Leu Thr Arg Val His Gly Ala Val Gln Tyr Phe Asp Ala Ser Gly Phe 1205 1210 1215 Gln Ala Lys Gly Gln Phe Ile Thr Thr Ala Asp Gly Lys Leu Arg Tyr 1220 1225 1230 Phe Asp Arg Asp Ser Gly Asn Gln Ile Ser Asn Arg Phe Val Arg Asn 1235 1240 1245 Ser Lys Gly Glu Trp Phe Leu Phe Asp His Asn Gly Val Ala Val Thr 1250 1255 1260 Gly Thr Val Thr Phe Asn Gly Gln Arg Leu Tyr Phe Lys Pro Asn Gly 1265 1270 1275 1280 Val Gln Ala Lys Gly Glu Phe Ile Arg Asp Ala Asn Gly Tyr Leu Arg 1285 1290 1295 Tyr Tyr Asp Pro Asn Ser Gly Asn Glu Val Arg Asn Arg Phe Val Arg 1300 1305 1310 Asn Ser Lys Gly Glu Trp Phe Leu Phe Asp His Asn Gly Ile Ala Val 1315 1320 1325 Thr Gly Ala Arg Val Val Asn Gly His Ala Ser Ile Leu Ser Leu Met 1330 1335 1340 Val Phe Arg Leu Arg Glu Ser Ser Leu Gln Ser Val Lys Val Val Ser 1345 1350 1355 1360 Asn Thr Met Ile Leu Ile Pro Glu Met Lys Phe Val Ile Val Met 1365 1370 1375 <210> 6 <211> 5684 <212> DNA <213> Streptococcus mutans <400> 6 gcatgcctat tgaggttatg gccaagcggg gcattaaaac attgctttat gggcccatga 60 aaccagttgg tctggaatac ccacaagact acaaggggcc gcgagatggt gattataagg 120 ctccctatgc tgttgtgcag cttcgacaag ataatgcagc tggcagcctt tacaatattg 180 ttggttttca gacccatctt aagtggagtg aacaaaaacg tgtcttttcc atgattccag 240 gtctggagca agcacatttc gttcgttatg gcgtcatgca tcgcaactct tacattgact 300 cccctaatct tcttgctcct acctttgcaa cgtgtaaaaa tccaaatcta ttctttgctg 360 gacaaatgac aggtgtagag ggttatgttg aatctgcagc ttctgggctt gttgctggaa 420 tcaatgctgt tcgtcgtttc aaagatgaag aagcagtaat ctttccgcaa acaacagcta 480 ttggtgcttt accgtattat attacacata caaaaagtaa gcattttcaa ccaatgaata 540 ttaattttgg tatcatcaaa gatttgggtg gaccacgtat tcgtgataag aagaaacgtt 600 atgagaagat tgctgagcga tcacttaaag atctacagca atttttaact gtttaaataa 660 gatttttaaa aatattggtt ttattaaata ttgagataga aaataactat attagatttg 720 tttggaagcc tatttcatct attgattggc ttttttgcta atcagtttta agaggacggc 780 acgcaagtaa ctaactctgt cgtttcattg ctaaagttgg agtttgtaat ctccaacttt 840 gccagatgct gtaagcagcg acaattgtgg tgggtactcc ctgtagataa tgtaaaaaac 900 gacagcaatt agactgttgt ttttttgtgg gatagttttg tttttatcat gttgtcataa 960 taaataaaat aaaaaatttg aatattcttt tttattttta aagaaaaaag aatttttgtt 1020 gcaaaaagat tgttttatta ttagaaaggt gttacaatta taacgttttg aataaaacag 1080 tttaaaattt ggaggttcct aatggacaag aaagtgcgtt ataaactgcg caaagttaaa 1140 aaaagatggg tgacagtatc tgttgcatct gctgtgatga ctttaactac actttcgggt 1200 ggcttggtta aagcagattc taatgaatcg aaatcccaaa tttctaatga ttctaatacc 1260 agtgttgtta ctgctaatga agaatctaat gtaacaaccg aagcgacatc taagcaagaa 1320 gctgctagta gtcaaactaa tcatacagta acgacaagca gtagctctac ttcggtagtt 1380 aatcccaaag aggttgtaag taatccttat actgttgggg aaacagcttc taatggtgaa 1440 aagcttcaaa atcaaacaac tacagttgac aaaacttctg aagctgctgc taataatatt 1500 agtaaacaaa caaccgaagc tgatacagat gttattgatg atagcaatgc agccaatcta 1560 caaatattgg aaaaacttcc caatgtaaaa gaaattgatg gtaagtatta ttattatgac 1620 aataacggca aagttcgtac taattttaca ttaattgctg atggcaaaat tttacatttt 1680 gatgaaactg gcgcttatac tgatacatca attgacactg taaataaaga tatcgtcaca 1740 acaagaagta atctatacaa aaaatataat caagtttatg atcgctctgc acagagcttt 1800 gagcatgttg atcattattt gacagctgag agttggtatc gtcctaagta catcttgaag 1860 gatggcaaaa catggacaca gtcaacagaa aaagatttcc gtcccttatt gatgacatgg 1920 tggcctgacc aagaaacgca gcgtcaatat gttaactaca tgaatgcaca gcttggcatt 1980 aacaagactt atgatgatac aagtaatcaa ttgcaattaa atattgcagc tgcaactatt 2040 caagcaaaaa ttgaggccaa aattacaact ttaaagaata ctgattggct gcgtcagact 2100 atttccgcat ttgttaagac acagtcagct tggaacagtg acagcgaaaa accgtttgat 2160 gatcatttac aaaatggagc agtgctttac gataatgaag gaaaattaac gccttatgct 2220 aattccaact accgtatctt aaatcgcacc ccgaccaatc aaaccggaaa gaaagatcca 2280 aggtatacag ctgataacac tatcggcggt tatgaattcc ttttggccaa cgatgtggat 2340 aattctaatc ctgtcgtgca ggccgaacaa ttgaactggc tacattttct catgaacttt 2400 ggtaacattt atgccaatga tccggatgct aactttgatt ccattcgtgt tgatgcggta 2460 gataatgtgg atgctgactt gctccaaatt gctggggatt acctcaaagc tgctaagggg 2520 atccataaaa atgataaagc tgctaatgat catttgtcta ttttagaggc atggagtgac 2580 aacgacactc cttaccttca tgatgatggc gacaatatga ttaatatgga taataagctg 2640 cgtttgtctc tattattttc attagctaaa cccttaaatc aacgttcagg catgaatcct 2700 ctcatcacta acagtttggt gaatcgaact gatgataatg ctgaaactgc cgcagtccct 2760 tcttattcct tcatccgtgc ccatgacagt gaagtgcagg atttgattcg tgatatcatc 2820 aaggcagaaa tcaatcctaa tgttgtcggg tattcattca ctatggagga aatcaagaag 2880 gctttcgaga tttacaacaa agacttatta gctacagaga agaaatacac acactataat 2940 acggcacttt cttatgccct gcttttaacc aacaaatcca gtgtgccgcg tgtctattat 3000 ggggatatgt ttacagatga cgggcaatac atggctcata agacgatcaa ttacgaagcc 3060 atcgaaaccc tgcttaaagc tcgtattaag tatgtttcag gcggtcaagc catgcgcaat 3120 caacaggttg gcaattctga aatcattacg tctgtccgct atggtaaagg tgctttgaaa 3180 gcaacggata caggggaccg caccacacgg acttcaggag tggccgtgat tgaaggcaat 3240 aacccttctt tacgtttgaa ggcttctgat cgcgtggttg tcaatatggg agcagcccat 3300 aagaaccaag cttaccgacc tttactcttg accacagata acggtatcaa ggcttatcat 3360 tccgatcaag aagcggctgg tttggtgcgc tacaccaatg acagagggga attgatcttc 3420 acagcggctg atattaaagg ctatgccaac cctcaagttt ctggctattt aggtgtctgg 3480 gttccagtag gcgctgccgc tgatcaagat gttcgcgttg cggctagcac ggccccatca 3540 acagatggca agtctgtgca tcaaaatgcg gcccttgatt cacgcgtcat gtttgaaggt 3600 ttctctaatt tccaagcttt cgccactaaa aaagaggaat ataccaatgt tgtgattgct 3660 aagaatgtgg ataagtttgc ggaatggggg gtcacagact ttgaaatggc accgcagtat 3720 gtgtcttcaa cggatggttc tttcttggat tctgtgatcc aaaacggcta tgcttttacg 3780 gaccgttatg atttgggaat ttccaaacct aataaatacg ggacagccga tgatttggtg 3840 aaagccatca aagcgttaca cagcaagggc attaaggtaa tggctgactg ggtgcctgat 3900 caaatgtatg ctttccctga aaaagaagtg gtaactgcaa cccgtgttga taagtatggg 3960 actcctgttg caggaagtca gatcaaaaac accctttatg tagttgatgg taagagttct 4020 ggtaaagatc aacaagccaa gtatggggga gctttcttag aggagctgca agcgaagtat 4080 ccggagcttt ttgcgagaaa acaaatttcc acaggggttc cgatggatcc ttctgttaag 4140 attaagcaat ggtctgccaa gtactttaat gggacaaata ttttagggcg cggagcaggc 4200 tatgtcttaa aagatcaggc aactaatact tactttaata tttcagataa taaagaaata 4260 aacttccttc ctaaaacatt gttaaaccaa gatagtcaag ttggtttctc ttatgacggt 4320 aaaggttatg tttattattc aacgagtggt taccaagcca aaaatacttt catcagcgaa 4380 ggtgataaat ggtattattt tgataataac ggttatatgg tcactggtgc tcaatcaatt 4440 aacggtgtta attattattt cttatcaaat ggcctacagc tcagagatgc tattcttaag 4500 aatgaagatg gaacttacgc ttattatgga aatgacggtc gccgttatga aaatggttat 4560 tatcaattca tgagtggtgt atggcgtcac ttcaataatg gtgaaatgag tgttggatta 4620 actgtaattg atggtcaggt tcaatacttt gatgaaatgg gctatcaagc caaaggaaaa 4680 tttgtaacaa ctgccgatgg taaaataaga tattttgata agcaatctgg gaacatgtac 4740 cgtaatcgtt ttattgaaaa cgaagaaggt aaatggctgt atctcggtga agatggtgca 4800 gcagtgacag gatctcaaac cattaacggt caacacctgt actttagagc aaacggtgtt 4860 caggtcaagg gtgaatttgt cactgaccac cacggccgta tcagctatta cgacggcaat 4920 tcaggggatc aaatccgcaa ccgctttgtc cgcaatgctc agggtcaatg gttctacttt 4980 gataacaatg gctatgccgt aaccggtgcc agaaccatta acggtcaaca cctatacttt 5040 agagcaaacg gtgttcaggt caagggtgaa tttgtcactg accgctacgg ccgtatcagc 5100 tattacgacg gcaattcagg ggatcaaatc cgcaaccgct ttgtccgcaa tgctcagggt 5160 caatggttct actttgataa caatggctat gccgtaaccg gtgccagaac cattaacggt 5220 caacacctat actttagagc aaacggtgtt caggtcaagg gtgaatttgt cactgaccgc 5280 cacggccgta tcagctatta cgacggcaat tcaggggatc aaatccgcaa ccgctttgtc 5340 cgcaatgctc agggtcaatg gttctacttt gataacaatg gctatgccgt aaccggtgcc 5400 agaaccatta acggtcaaca cctatacttt agagcaaacg gtgttcaggt caagggtgaa 5460 tttgtcactg accgccacgg ccgtatcagt tattacgatg ctaactctgg agaacgagtt 5520 cggattaact aattgaaaaa acgctctctt aagttaatta agagggcgtt tctagggtta 5580 ggagttttaa atattattta ttatttttct aaaaaatgaa 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フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｐ 21/08 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ストレプトコッカス・ミュ−タンスが産
生するグルコシルトランスフェラ−ゼ−Ｂの非水溶性グ
ルカン合成活性を阻害する作用を有する該酵素に対する
モノクロ−ナル抗体を有効成分として含有することを特
徴とする虫歯予防剤。
【請求項２】ストレプトコッカス・ミュ−タンスが産
生するグルコシルトランスフェラ−ゼ−Ｂの非水溶性グ
ルカン合成活性を阻害し、本菌がショ糖存在下で平滑歯
面に固着・集落化するのを抑制する作用を有する該酵素
に対するモノクロ−ナル抗体を有効成分として含有する
ことを特徴とする虫歯予防剤。
【請求項３】前記グルコシルトランスフェラ−ゼ−Ｂ
が、以下の（ａ）又は（ｂ）に示すアミノ酸配列からな
ることを特徴とする請求項１或は請求項２記載の虫歯予
防剤。（ａ）配列番号１記載のアミノ酸配列（ｂ）配列番号１記載のアミノ酸配列において、１又は
複数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加され、かつグル
コシルトランスフェラ−ゼ−Ｂ活性を有するアミノ酸配
列
【請求項４】前記モノクロ−ナル抗体が、前記グルコ
シルトランスフェラ−ゼ−Ｂの活性部位の１つである配
列番号２記載のアミノ酸配列で表されるデキストラン結
合領域を認識し結合するモノクロ−ナル抗体であること
を特徴とする請求項３記載の虫歯予防剤。
【請求項５】前記モノクロ−ナル抗体が、前記グルコ
シルトランスフェラ−ゼ−Ｂの他の活性基である配列番
号３記載で表されるショ糖結合部位を含むペプチド断片
を認識し結合するモノクロ−ナル抗体であることを特徴
とする請求項３記載の虫歯予防剤。
【請求項６】前記モノクロ−ナル抗体が、マウス−マ
ウスハイブリド−マＭＨＰ１２６（ＦＥＲＭＰ−１７
５６６）により産生されるモノクロ−ナル抗体、又はマ
ウス−マウスハイブリド−マＭＨＰ１３６（ＦＥＲＭ
Ｐ−１７５６７）により産生されるモノクロ−ナル抗体
であることを特徴とする請求項１記載の虫歯予防剤。