JP2001523113A

JP2001523113A - ナトリウムチャンネルレセプター

Info

Publication number: JP2001523113A
Application number: JP50016999A
Authority: JP
Inventors: ルナール，ステファン; ベスナール，フランソワ; グラハム，ダビッド
Original assignee: Sanofi Synthelabo SA
Current assignee: Sanofi Aventis France
Priority date: 1997-05-30
Filing date: 1998-05-15
Publication date: 2001-11-20
Also published as: EP0985038A1; EP0884386A1; WO1998054316A1

Abstract

(57)【要約】 hSLNAC1ポリペプチド及びポリヌクレオチド及び組換え技術によりこのようなポリペプチドを製造する方法を開示する。また、一定の疾患の治療方法のデザイン及びそのような症状の診断アッセイでのhSLNAC1ポリペプチド及びポリヌクレオチドの利用方法を開示する。

Description

【発明の詳細な説明】ナトリウムチャンネルレセプター発明の分野この発明は、新たに同定されたポリヌクレオチド、それらをエンコードしたポリペプチド及びこのようなポリヌクレオチドならびにポリペプチドの使用、及びそれらの製造に関する。さらに詳細には、本発明のポリペプチドは、以下でhSLN AC1として示すナトリウムチャンネルレセプターである。発明の背景 mdeg及び上皮のナトリウムチャンネルファミリーは、２つのトランスメンブレンドメインポリペプチドのホモマー又はマルチマー集合体からなるタンパク質の新しいファミリーで、ナトリウムチャンネルを形成する[Renard S.ら、（1994） J.Biol.Chem.269/17 pp12981-12986；Lingueglia E.ら、(1994)J.Biol.Chem.269 /19,13736-13739；Renard S.ら、(1995)Pflugers Archiv-Eur.J.Physiol 430,29 9-307；Linguegliaら、(1995)Nature 378,730-733；Waldmannら、(1996)J.Biol. Chem.271,10433-10436]。このファミリーのものは、線虫からヒトまでの多くの組織でナトリウムチャンネル又は仮想のメカノ感受性(mecanosensitive)チャンネルとして記載されている。このタンパク質群に大きな細胞外ドメインが存在することにより、それらが、幾つかの内因性伝達物質レセプターの役割を果たしている可能性が示唆される。チャンネルの開口は、このレセプターの機能に関連しているかもしれない。このようなレセプターの薬理特性は依然として大部分が未知であるが、利尿剤アミロライドは、このファミリーのほとんどのナトリウムチャンネルを阻害することが知られている。アゴニスト又はアンタゴニストは、例えば神経性変性問題、痛覚過敏症、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患、舞踏病、筋肉痙攣、癲癇、卒中、心臓疾患、精神分裂病、うつ病、ニコチン依存症、モルヒネ依存症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、炎症、疼痛、癌、肥満症の治療；中枢又は末梢神経系での幾つかの内因性伝達ペプチド（例えば、オピオイド又は抗オピオイド）の作用の模倣もしくは拮抗、味覚認知の変更、痛覚消失もしくは感覚消失の発生、又はこのタンパク質の異常発現に関するいずれかの疾患の診断もしくは治療に用いることができる。発明の要約本発明者は、新規なナトリウムチャンネルタンパク質の群が見出した。この新規なサブユニットは、幾つかの神経系伝達、疾患の原因であるか、又は様々な病状に関連する幾つかの伝達を調節するためのターゲットである。本発明の一つの観点によれば、ナトリウムチャンネルである新規の成熟ポリペプチドならびにフラグメント、類似体又は誘導体が提供される。本発明のポリペプチドは、ヒト由来である。本発明の別の観点によれば、このようなポリペプチドをエンコードするポリヌクレオチドが提供される。本発明のさらに別の観点によれば、組換え技術でこのようなポリペプチドを産生する方法が提供される。さらに別の観点では、本発明は、本発明で提供される物質を用いてアゴニスト及びアンタゴニストを同定する方法、及び該同定された化合物を用いるアンバランスなhSLNAC1に関連した症状の治療に関する。さらに別の本発明の観点は、不適切なhSLNAC1活性又はレベルに関連した疾患を見出すための診断アッセイに関する。本発明のこれら及び他の観点は、ここでの記載から当業者に明らかであるべきである。図面の簡単な説明以下の図は本発明の具体例を示すもので、請求の範囲によって含まれる本発明の範囲の限定を意図しない。図１は、hSLNAC1と、このナトリウムチャンネルファミリーの他のものの系統発生関係を示す。各対の枝の長さは、配列対間の距離を示す。アラインメントは、DNASTARのMEGALIGNのクラスターアルゴリズム(バージョン3.10a)を用いて行った。図２は、hSLNAC1レセプターと、図１の系統樹のナトリウムチャンネルファミリーの他のものとのアミノ酸配列の比較を示す。アラインメントは、DNASTARのM EGALIGNのクラスターアルゴリズム(バージョン3.10a)を用いて行った。SLNAC1に相同な領域は、黒色で囲む。図１及び２において、用いた用語は以下の意味を有する： hNACHA：上皮ナトリウムチャンネルαサブユニット（アクセスSW SCAA HUMAN） hNACHB：上皮ナトリウムチャンネルβサブユニット（アクセスPIR I38203） hNACHC：上皮ナトリウムチャンネルγサブユニット（アクセスPIR I38204） hNACHD：ナトリウムチャンネルΔサブユニット（アクセスPIR I39196） ASIC：ASICナトリウムチャンネル（Nature 368,173-177に記載-アクセスRNU94403） MDEG：MDEGナトリウムチャンネル（アクセスgi 1280439） HAFANACH：FRMF-アミドでゲート(gate)されるアプリシア(aplysia) のナトリウムチャンネルタンパク質（アクセスgi 1149511）図３は、親水性、疎水性、αヘリックス、βシート、ターン又はコイル領域を生じるプロペンシー(propency)、タンパク質表面にあるプロペンシー及び可変性領域を有するこのhSLNAC1タンパク質の二次的な構造特徴を示す。ボックス範囲は、示した領域に相当する範囲である。疎水性プロットは、脂質二重層にあるタンパク質配列の疎水性領域と脂質二重層外の親水性領域を示す。タンパク質フラグメントの抗原性は表面にさらされている領域で高く、親水性の可変領域である。分析は、DANSTARのProtean(バージョン3.08a)を用いて行った。発明の詳細な記載定義以下の定義は、ここに頻繁に用いられる一定の用語の理解を容易にするために示す。「レセプター活性」又は「レセプターの生物活性」は、同様の活性又は改良された活性又は望ましくない副作用を減じたこれらの活性を含むhSLNAC1の代謝もしくは生理的機能を意味する。また、hSLNAC1の抗原性及び免疫原性活性が含まれる。「hSLNAC1ポリペプチド」は、特に、SEQ ID NO:２に記載のアミノ酸配列又はそのアレリック変異体からなるポリペプチドを意味する。「hSLNAC1遺伝子」又は「hSLNAC1ポリヌクレオチド」は、SEQ ID NO:１に記載のヌクレオチド配列又はそのアレリック変異体及び/又はそれらの相補体からなるポリヌクレオチドを意味する。ここで用いられる「抗体」は、ポリクローナル及びモノクローナル抗体、キメラ、単一鎖(single chain)、及びヒト化抗体ならびにFab又は他の免疫グロブリン発現ライブラリー産物を含むFabフラグメントを含む。「単離された」は、天然状態からの「ヒトの手による」変化を意味する。「単離された」組成物又は物質が天然にある場合、それは、その最初の環境から変更もしくは除去され、又はその両方がなされる。例えば、生きた動物に天然に存在するポリヌクレオチド又はポリペプチドは「単離され」ていないが、天然状態で同時に存在する物質から分離した同じポリヌクレオチド又はポリペプチドは、語がここで用いられているように「単離され」ている。「ポリヌクレオチド」は、一般にポリリボヌクレオチド又はポリデオキシリボヌクレオチドのいずれかを意味し、未修飾のRNAもしくはDNA又は修飾されたRNAもしくはDNAであってもよい。「ポリヌクレオチド」は、一本鎖及び二本鎖DNAに限定されず、一本鎖と二本鎖領域の混合体であるDNA、一本鎖RNAならびに二本鎖RN A、及び一本鎖と二本鎖領域の混合体であるRNA、DNAとRNAからなるハイブリッド分子(一本鎖、又はより一般的には二本鎖、又は一本鎖と二本鎖領域の混合体であってもよい)を含む。さらに、「ポリヌクレオチド」は、RNA又はDNA又はRNAとDN Aの両方からなる三本鎖領域を意味する。また、ポリヌクレオチドの語は、１以上の修飾塩基を含むDNA又はRNA、及び安定性又はその他の理由のために修飾された骨格を有するDNA又はRNAを含む。「修飾」塩基は、例えばトリチル化塩基及びイノシンのような異常な塩基を含む。種々の修飾が、DNAとRNAになされる。したがって、「ポリヌクレオチド」は、天然に一般的に見出されるようなポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は代謝的に修飾された形態、ならびにウイルス及び細胞に特徴的なDNAとRNAの化学形態を包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドとして言及される比較的短いポリヌクレオチドを含む。「ポリペプチド」は、ペプチド結合又は修飾されたペプチド結合で互いに結合された２以上のアミノ酸からなるいずれかのペプチド又はタンパク質、つまりアイソスターペプチドを意味する。「ポリペプチド」は、一般的にペプチド、オリゴペプチド又はオリゴマーとして表される短鎖と、一般的にタンパク質として表される長鎖の両方を意味する。ポリペプチドは、20遺伝子をエンコードするアミノ酸以外のアミノ酸を含んでいてもよい。「ポリペプチド」は、翻訳後プロセシングのような自然のプロセス又は当該分野で周知の化学的な修飾技術のいずれかによって修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾は、基本書及び詳細な研究論文ならびに豊富な研究文献に十分に記載されている。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖及びアミノ又はカルボキシル末端を含むポリペプチドのいずれで生じてもよい。同じタイプの修飾は、所定のポリペプチドの幾つかの部位で同程度又は異なる程度で存在していることが好ましい。また、所定のポリペプチドは、何タイプもの修飾を含んでいてもよい。ポリペプチドは、ユビキチン化の結果として分枝していてもよく、分枝するか、又はせずに環状であってもよい。環状、分枝状及び分枝環状ポリペプチドは、翻訳後の自然プロセスから生じてもよく、又は合成方法により作製してもよい。修飾は、アセチル化、アシル化、ADP-リボシル化、アミド化、フラビンの共有付着、ヘム分子の共有付着、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有付着、脂質又は脂質誘導体の共有付着、ホスホチジルイノシトールの共有付着、架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、γ-カルボキシル化、グリコシル化、GPIアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセス、ホスホリル化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、転移-RNAが媒介するタンパク質へのアミノ酸の付加（例えば、アルギニル化及びユビキチン化）を含む[例えば、 PROTEINS-STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES，第2版、T.E.Creighton,W.H.Fr eeman and Company，New York，1993及びWold.F.，Posttranslational Protein Modifications：Perspectives and Prospects，POSTTRANSLATIONAL COVALENT MO DIFICATION OF PROTEINS 1〜12頁、B.C.Johnson編集、Academic Press，New Yor k，1983；Seifterら、“Analysis for protein modifications and nonprotein cofactors”,Meth Enzymol(1990)182：626-646及びRattanら、“Protein Synthe sis:Posttranslational Modifications and Aging”，Ann NY Acad Sci(1992)66 3：48-62参照]。ここで用いられる用語「変異体」は、基準のポリヌクレオチド又はポリペプチドとそれぞれ異なるポリヌクレオチド又はポリペプチドであるが、本質的な特性を保有する。ポリヌクレオチドの一般的な変異体は、基準のポリヌクレオチドと互いのヌクレオチド配列において異なる。変異体のヌクレオチド配列の変化は、基準のポリヌクレオチドでエンコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変えてもよく、変えなくてもよい。ヌクレオチドの変化は、以下に述べるように、基準の配列でエンコードされるポリペプチドでのアミノ酸の置換、付加、欠失、融合及びトランケーション(truncation)であってもよい。ポリペプチドの代表的な変異体は、基準のポリペプチドと互いにアミノ酸配列において異なる。一般的には違いは限られており、基準のポリペプチドと変異体の配列は全体的にかなり類似し、多くの領域で同一である。変異体と基準のポリペプチドは、１以上の置換、付加、欠損によるいずれかの組合わせによりアミノ酸配列が異なっていてもよい。置換又は挿入されたアミノ酸残基は、遺伝子コードでエンコードされたものであってもよく、そうでなくてもよい。ポリヌクレオチド又はポリペプチドの変異体は、アレリック変異体のような天然に生じるものであってもよく、天然には生じることが知られていない変異体であってもよい。天然には生じないポリヌクレオチドとポリペプチドの変異体は、突然変異技術又は直接合成によって作製してもよい。「同一性」は、ヌクレオチド配列又はアミノ酸配列の同一性の目安である。一般に、配列は、もっとも高度な順序マッチ(order match)が得られるように調整される。「同一性」それ自体は当該分野で認識される意味を有し、文献の技術を用いて算出できる[例えば、（COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY,Lesk,A,M.編集、Oxford University Press,New York,1988；BIOCOMPUTING：INFORMATICS AND G ENO-ME PROJECTS,Smith,D.W.編集、Academic Press,New York,1993；COMPUTER A NALYSIS OF SEQUENCE DATA,PART I,Griffin,A.M.及びGriffin,H.G.,編集、Human a Press,New Jersey,1994；SEQUENCE ANALYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY,von Hein je,G.,Academic Press,1987；及びSEQUENCE ANALYSIS PRIMER,Gribskov,M．及び Devereux,J.編集、M.Stockton Press,New York,1991)参照]。２つのポリヌクレオチド又はポリペプチド配列間の同一性を測定する方法は幾つかあるが、「同一性」の語は当業者に周知である[Carillo,H.及びLipton,D.,SIAM J Applied Math (1988)48:1073]。２つの配列間の同一性又は類似性決定に一般的に用いられる方法は、Guide to Huge Computers,Martin J.Bishop,編集、Academic Press,San D iego,1994及びCarillo,H.及びLipton,D.,SIAM J Applied Math(1988)48:1073に開示されるものを含むが、これらに限定されない。同一性と類似性を決定する方法は、コンピュータープログラムに体系化されている。２つの配列間の同一性と類似性を決定する好ましいコンピュータープログラム法はGCSプログラムパッケージ[Devereux,J.ら、Nucleic Acids Research(1984)12(1):387,BLASTP,BLASTN, FASTA [Atschul,S.F.ら、J.Molec Biol(1990)215:403]を含むが、これらに限定されない。一例として、ポリヌクレオチド配列がSEQ ID NO:１の基準のヌクレオチド配列の各100ヌクレオチド当たり５つまでの点突然変異を含んでいてもよいことを除いては、例えばポリヌクレオチドが、SEQ ID NO:１の基準のヌクレオチド配列との「同一性」が少なくとも95％のヌクレオチド配列を有することにより、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が基準の配列と同一であることが意味される。つまり、基準のヌクレオチド配列と少なくとも95％が同一なヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドを得るためには、基準配列中５％までのヌクレオチドが欠失もしくは別のヌクレオチドで置換されていてもよく、又は基準配列中の全ヌクレオチドの５％までのヌクレオチドが基準配列中に挿入されていてもよい。基準配列のこれらの変異は、基準ヌクレオチド配列の５もしくは３末端の位置又はそれらの末端位置間のいずれかに生じてもよく、基準配列中のヌクレオチド間もしくは基準配列内の１以上の隣り合う群のいずれかに個々に挿入されていてもよい。同様に、図３の基準のアミノ酸配列との「同一性」は、例えば少なくとも95％のアミノ酸配列を有するポリペプチドによって、ポリペプチド配列がSEQ ID NO: １の基準のアミノ酸の各100アミノ酸当たり５つまでのアミノ酸変化を含んでいてもよいことを除いては、ポリペプチドのアミノ酸配列が基準配列と同一であることが意味される。つまり、基準のアミノ酸配列と少なくとも95％が同一なアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るためには、基準配列中５％までのアミノ酸残基が欠失もしくは別のアミノ酸で置換されていてもよく、又は基準配列中の全アミノ酸残基の５％までのアミノ酸が基準配列に挿入されていてもよい。基準配列のこれらの変化は、基準アミノ酸配列のアミノもしくカルボキシ末端の位置又はそれらの末端位置間のいずれで生じてもよく、基準配列中の残基間もしくは基準配列内の１以上の隣り合う群のいずれかに個々に挿入されていてもよい。本発明のポリペプチド一つの観点において、本発明は、hSLNAC1ポリペプチドに関する。hSLNAC1ポリペプチドは、SEQ ID NO:２のポリペプチドならびにSEQ ID NO:２のアミノ酸配列からなるポリペプチド、及びその全体的な長さにわたってSEQ ID NO:２と少なくとも80％の同一性、さらに好ましくは少なくとも90％の同一性、さらに好ましくはSEQ ID NO:２と少なくとも95％の同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。さらに、少なくとも97〜99％の同一性を有するポリペプチドが、より好ましい。また、hSLNAC1ポリペプチドには、アミノ酸配列が、その全体的な長さにわたってSEQ ID NO:２のアミノ酸配列を有するポリペプチドと少なくとも80％の同一性、さらに好ましくは少なくとも90％の同一性、さらに好ましくは SEQ ID NO:２と少なくとも95％の同一性を有するポリペプチドが含まれる。さらに、少なくとも97〜99％の同一性を有するポリペプチドが、より好ましい。ATCC 97987に含まれるcDNAでエンコードされるアミノ酸配列と少なくとも80％の同一性、好ましくは少なくとも90％の同一性、さらに好ましくは少なくとも95％の同一性を有するアミノ酸配列からなるhSLNAC1ポリペプチドも本発明の範囲に含まれる。hSLNAC1ポリペプチドは、レセプターの生物活性を少なくとも１つ示すことが好ましい。 hSLNAC1ポリペプチドは、「成熟」タンパク質の形態であってもよく、又は融合タンパク質のような大きいタンパク質の一部であってもよい。分泌又はリーダー配列を含む付加的なアミノ酸配列、プロ-シーケンス、精製を助ける配列（例えば、多くのヒスチジン残基）又は組換え体の製造の間、安定的にするための付加配列を含むことが、しばしば有利である。また、hSLNAC1ポリペプチドフラグメントが本発明に含まれる。フラグメントは、上記hSLNAC1ポリペプチドのアミノ酸配列の一部と完全に同じであるが、全体が同じではないアミノ酸配列を有するポリペプチドである。hSLNAC1ポリペプチドに関し、フラグメントは「遊離状態(free-standing)」であってもよく、又は、もっとも好ましくは一つの連続領域として、その一部又は領域を形成している大きなポリペプチドからなっていてもよい。本発明のポリペプチドフラグメントの代表的な例は、例えば、およそ1〜20、21〜40、41〜60、61〜80、81〜100番目及び101番目からhSLNAC1ポリペプチドの末端までのアミノ酸由来のフラグメントを含む。この明細書において、「およそ」は片端又は両端のいずれかにある数個、５個、４個、３個、２個又は１個のアミノ酸により特定される大きな又は小さな範囲を含む。アミノ末端を含む一連の連続的な残基もしくはカルボキシル末端を含む一連の連続的な残基の欠失、又はアミノ末端を含み、かつカルボキシル末端を含む２つの連続的な一連の残基の欠失を除いては、好ましいフラグメントは、例えばhSLN AC1ポリペプチドのアミノ酸配列を有するトランケーションポリペプチドを含む。また、構造又は機能によって特徴付けられるフラグメント、例えばα-ヘリックスとα-ヘリックス形成領域、β-シートとβ-シート形成領域、ターン及びターン形成領域、コイル及びコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、β両親媒性領域、可変性領域、表面形成領域、基質結合領域及び高抗原性な指標(index)領域からなるフラグメントが好ましい。他の好ましいフラグメントは、生物活性フラグメントである。生物活性フラグメントはレセプター活性を媒介するフラグメントで、同様の活性もしくは改良された活性、又は望ましくない活性を減じたフラグメントを含む。また、動物、特にヒトで抗原性又は免疫原性のフラグメントが含まれる。これらのポリペプチドフラグメントは、全て抗原活性を含むレセプター生物活性を保持することが好ましい。また、定義される配列とフラグメントの変異体は、本発明の一部を形成する。好ましい変異体は、保存アミノ酸の置換で意図した物とは異なる変異体、つまり別の特徴的な残基を置換する変異体である。代表的なこのような置換には、Ala、Val、Leu及びIle；Ser及びThr；酸性残基Asp及びG lu；Asn及びGln；及び塩基性残基Lys及びArg；又は芳香族残基Phe及びTyrがある。特に好ましいのは、数個、５〜10個、１〜５個又は１〜２個のアミノ酸がいずれかの組み合わせで置換、欠失又は付加されている変異体である。本発明のhSLNAC1ポリペプチドは、いずれかの適切な方法で製造できる。このようなポリペプチドは、単離された天然に存在するポリペプチド、組換え産生されたポリペプチド、合成して産生されたポリペプチド又はこれらの方法の組合わせで産生されたポリペプチドを含む。このようなポリペプチドの製造手段は、当該分野で十分理解されている。本発明のポリヌクレオチド本発明の別の観点は、hSLNAC1ポリヌクレオチドに関する。hSLNAC1ポリヌクレオチドは、hSLNAC1ポリペプチドとフラグメントをエンコードする単離されたポリヌクレオチド、及びそれらに密接に関連したポリヌクレオチドを含む。より詳細には、本発明のhSLNAC1ポリヌクレオチドは、SEQ ID NO:２のhSLNAC1ポリペプチドをエンコードするSEQ ID NO:１に記載のヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド、及びSEQ ID NO:１の特定の配列を有するポリヌクレオチドを含む。さらに、hSLNAC1ポリヌクレオチドは、その全体的な長さにわたってSEQ ID NO:２のhSLNAC1ポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列と少なくとも80％の同一性を有するヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド、及びその全体的な長さにわたってSEQ ID NO:１を有する配列と少なくとも80％の同一性を有するポリヌクレオチドを含む。これに関し、同一性が少なくとも90％のポリヌクレオチドが特に好ましく、同一性が少なくとも95％のポリヌクレオチドが特に好ましい。さらに、同一性が少なくとも97％のポリヌクレオチドがさらに好ましく、少なくとも98〜99％のポリヌクレオチドがさらに好ましく、少なくとも同一性が99％のポリヌクレオチドがもっとも好ましい。また、hSLNAC1ポリヌクレオチドには、SEQ ID NO:１、又は増幅又はプローブもしくはマーカーとしての用途に使用可能な条件下でハイブリダイズするATCC寄託番号97987(後述)のプラスミド中のcDNAインサートに含まれるヌクレオチド配列と十分な同一性を有するヌクレオチド配列が含まれる。このような配列は、例えば本発明の別の対象を構成するヌクレオチド配列SEQ ID NO:３、ならびにその推定されるポリペプチド配列SEQ ID NO:４、及び配列SE Q ID NO:３及びSEQ ID NO:４との同一性が少なくとも80％、好ましくは90％の同一性、さらに好ましくは97％の同一性、さらに好ましくは少なくとも99％の同一性を有するポリヌクレオチドならびにポリペプチド配列からなっていてもよい。寄託番号97987でATCCに寄託されるcDNAは、SEQ ID NO:３と同一である。SEQ ID NO:３は、診断用プローブとして用いることができる。したがって、本発明によれば、hSLNAC1ポリヌクレオチドは、寄託番号97987で ATCCに寄託されたcDNAインサートと少なくとも80％の同一性を有するヌクレオチド配列、及びこのようなCDNAインサートの少なくとも15個の連続的なヌクレオチドからなるヌクレオチド配列を含む。また、本発明は、上記hSLNAC1ポリヌクレオチドの全てに相補的なポリヌクレオチドを提供するものである。 hSLNAC1 cDNAを含む寄託物は、1997年４月16日付けでAmerican Type Culture Collection(ATCC、合衆国、Maryland 20852、Rockville，Park Lawn Drive 1230 1)に寄託され、ATCC寄託番号97987が付された。寄託物質(クローン)は、hSLNAC1 cDNAの全長をさらに含み、寄託によりp3SLNAC1と称されるプラスミドpcDNA3(In vitrogen Inc.から入手可能)である。cDNAインサートは、ベクターのKpnI-NotI 部位内にある。寄託物質に含まれるポリヌクレオチドのヌクレオチド配列、ならびにそれによりエンコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、ここに記載する配列のいずれかの記載と矛盾する場合には確かめられる。寄託は、特許手続のための微生物の寄託に関する国際認識におけるブダペスト条約下でなされている。本発明のhSLNAC1は、SEQ ID NO:１のcDNAのシーケンスの結果として示されるように、ナトリウムチャンネルファミリーの他のタンパク質に構造的に関連している。SEQ ID NO:１のcDNA配列は、SEQ ID NO:２の518個のアミノ酸ポリペプチドをエンコードするオープンリーディングフレーム（ヌクレオチド番号76〜1629 ）を含む。 SEQ ID NO:２のアミノ酸配列は、ASICタンパク質(gi/2039366)の518個のアミノ酸残基と、およそ52.1％の同一性及び71.8％の類似性（GCGギャップアルゴリズムを使用）を有する[Waldmann R.ら、Nature，(1997)386:173-177]。SEQ ID N O:１のヌクレオチド配列は、ASICタンパク質(gi/2039365)の1554個のヌクレオチド残基と、およそ60.7％の同一性（GCGギャップアルゴリズムを使用）を有する。 hSLNAC1をエンコードする本発明のポリヌクレオチドの１つは、発現されるtag 配列（EST）解析を用いるヒト小脳細胞のmRNA由来cDNAライブラリーから標準的なクローニング及びスクリーニングを用いて得られる[Adams,M.D.ら、Science（1991）252:1651-1656；Adams,M.D.ら、N ature,(1992)355:632-634；Adams,M.D.ら、Nature,(1995)377補稿:3-174]。また、本発明のポリヌクレオチドは、ゲノムDNAライブラリーのような天然源から得ることができ、又は周知かつ市場で入手可能な技術を用いて合成できる。 SEQ ID NO:２のhSLNAC1ポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列は、S EQ ID NO:１に含まれる配列をエンコードするポリペプチド（ヌクレオチド番号1 3〜1641）と同一であってもよく、又は遺伝コードの重複(縮重)の結果としてSEQ ID NO:２のポリペプチドをエンコードする配列であってもよい。本発明のポリヌクレオチドがhSLNAC1ポリペプチドの組み換え産生に用いられる際、ポリヌクレオチドは、成熟ポリペプチドのコード配列又はそれらの単独のフラグメント；成熟ポリペプチドのコード配列又は他のコード配列(例えば、リーダー又は分泌配列をエンコードする配列)を有するリーディングフレーム中のフラグメント、プレ-、もしくはプロ-、もしくはプレプロ-タンパク質配列、又は他の融合ペプチド部分を含んでいてもよい。例えば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列が、エンコードできる。本発明のこの観点の好ましい具体例において、マーカー配列は、pQEベクター[Qiagen,Inc.]で提供され、Gent zらに記載［Proc.Natl.Acad.Sci.USA（1989）86:821-824］されているようなヘキサ-化スチジンペプチド、又はHA標識である。また、ポリヌクレオチドは、5’ 及び3’をコードしない配列、例えば転写され、翻訳されない配列、mRNAを安定化するスプライシング、ポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位及び配列を含むものであってもよい。さらに好ましい具体例は、数個、５〜10個、１〜５個、１〜３個、１〜２個又は１個のアミノ酸残基が、いずれかの組合わせで置換、欠失又は付加されているSEQ ID NO:２のhSLNAC1ポリペプチドのアミノ酸配列からなるh SLNAC1変異体をエンコードするポリヌクレオチドである。さらに、本発明は、上記配列とハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。これに関し、本発明は、特にストリンジェントな条件下で上記ポリヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。ここで用いられる用語「ストリンジェントな条件」により、配列間に少なくとも95％、好ましくは少なくとも97％の同一性がある場合にのみハイブリダイゼーションが生じることが意味される。 SEQ ID NO:１もしくはそれらのフラグメントのヌクレオチド配列、又は寄託番号97987でATCCに寄託されたプラスミド中のcDNAインサートもしくはそれらのフラグメントと同一であるか、又は十分同一な本発明のポリヌクレオチドは、cDNA 及びゲノムDNA用のハイブリダイゼーションプローブとして用いることができ、c DNAの全長及びhSLNAC1をエンコードするゲノムクローンを単離し、hSLNAC1遺伝子に高度に類似な配列を有する他の遺伝子のcDNA及びゲノムクローンを単離できる。このようなハイブリダイゼーション技術は、当業者に公知である。一般的に、これらのヌクレオチド配列は、基準の配列と80％同一で、好ましくは90％同一で、より好ましくは95％同一である。プローブは、一般的に少なくとも15個のヌクレオチドからなる。好ましくは、このようなプローブは少なくとも30個のヌクレオチドを有し、少なくとも50個のヌクレオチドを有していてもよい。特に好ましいプローブのヌクレオチドの範囲は、30〜50個である。一つの具体例において、hSLNAC1ポリペプチドをエンコードするポリヌクレオチドを得ることは、SEQ ID NO:１を有する標識プローブ又はそれらのフラグメントを用いてストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で適切なライブラリーをスクリーニングし；ポリヌクレオチド配列を含むcDNA全長及びゲノムクローンを単離する工程からなる。このようなハイブリダイゼーション技法は、当業者に周知である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は上記のとおりであるか、又は代替的に50％ホルムアミド、5xSS C(150mM NaCl、15mMクエン酸三ナトリウム)、50mMリン酸ナトリウム(pH7.6)、5x デンハルト溶液、10％硫酸デキストラン、及び20μg/mlの変性した剪断サケ精子 DNAからなる溶液中42℃で一晩インキュベーションし、その後約65℃の0.1xSSCでろ過物を洗浄する条件である。本発明のポリヌクレオチドとポリペプチドは、動物ならびにヒトの疾患に対する治療及び診断の研究試薬及び発見用材料として用いることができる。ベクター及び宿主細胞また、本発明は、本発明の単離されたDNA分子を含むベクター、組み換えベクターで遺伝子的に設計された宿主細胞、及び組換え技術によるhSLNAC1ポリペプチド又はそれらのフラグメントの産生に関する。ポリヌクレオチドは、宿主での増殖に選択可能なマーカーを含むベクターに連結できる。一般的に、プラスミドベクターは、リン酸カルシウム沈殿のような沈殿物、又は電荷した脂質との複合体中に導入される。ベクターがウイルスの場合、適当なパッケージ細胞系を用いて生体外でパッケージし、次いで宿主細胞に導入してもよい。 DNAインサートは、適当なプロモーター（例えば、２、３の例を挙げるならばラムダファージPLプロモーター、大腸菌のlac、trp及びtacプロモーター、SV40 の初期ならびに後期プロモーター、及びレトロウイルスLTR類のプロモーター）に操作可能に連結される。他の適切なプロモーターは、当業者に公知である。発現構築物は、さらに転写の開始、末端部位及び転写領域、翻訳用のリボソーム結合部位を含む。構築物で発現される成熟転写物のコーディング領域は、開始コドンで始まる翻訳と翻訳すべきポリペプチド末端に適切に位置する終結コドン(UAA、UGA又はUAG)を含むことが好ましい。記載しているように、発現ベクターは、少なくとも一つの選択可能なマーカーを含むことが好ましい。このようなマーカーは、真核細胞の培養についてジヒドロホレートリダクターゼ、ゼオシン、ヒグロマイシン又はネオマイシン耐性、及び大腸菌と他の細菌の培養にはテトラサイクリン又はアンピシリン耐性遺伝子を含む。適切な異種宿主の代表例には、大腸菌のような細菌細胞、ストレプトマイセス及びサルモネラ・ティフィムリウムの細胞；酵母細胞のような真菌細胞；ドロソフィラ(Drosophila)S2ならびにスポドプテラ(Spodoptera)Sf9細胞のような昆虫細胞；CHO、COS及びボウエス(Bowes)メラノーマ細胞のような動物細胞；及び植物細胞が含まれるが、これらに限定されない。上記宿主細胞に適切な培養培地及び条件は、当該分野で公知である。細菌での使用に好ましいベクターには、pQE70、pQE60及びpQE-9(Qiagenより入手可能);pBSベクター、ファージスクリプト(Phagescript)ベクター、ブルースクリプトベクター、pNH8A、pNH16a、pNH18A、pNH46A(Stratageneより入手可能)；及びptrc99a、pKK223-3、pKK233-3、pDR540、pRIT5（Pharmaciaより入手可能）が含まれる。好ましい真核ベクターには、pWLNEO、pSV2CAT、pOG44、pXT1及びpS G(Stratageneより入手可能)；及びpSVK3、pBPV、pMSG及びpSVL（Pharmaciaより入手可能）がある。他の適切なベクターは、当業者に容易に明らかであろう。宿主細胞への構築物の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、DEAE -デキストラン媒介性トランスフェクション、カチオン性脂質- 媒介性トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染又は他の方法で行うことができる。このような方法は、多くの標準的な研究室マニュアル（例えば、Davisら、Basic Methods In Molecular Biology(1986)）に記載されている。ポリペプチドは、融合タンパク質のような修飾形態で発現されてもよく、又は分泌シグナルならびに付加的な異種の機能領域を含むものであってもよい。例えば、付加的なアミノ酸、特に電荷したアミノ酸領域は、ポリペプチドのN-末端に付加されて、精製又はその後の処理及び保存の間、宿主細胞での安定性と持続性を改善する。また、ペプチド分子はポリペプチドに付加され、精製を容易にする。このような領域は、ポリペプチドの最終的な調製前に除いてもよい。ポリペプチドへペプチド分子を付加して分泌又は排出をさせ、安定性を改善し、かつ精製を容易にすることは、特に当該分野で熟知され、かつ慣例的な技法である。融合タンパク質は、タンパク質を可溶化するのに有用な免疫グロブリンとは異種の領域からなることが好ましい。例えば、EP-A-0 464 533号(カナダ係属中2045869号 )は、免疫グロブリン分子の一定領域の様々な部分と、別のヒトタンパク質もしくはその一部からなる融合タンパク質を開示している。多くの場合、融合タンパク質中のFc部分は治療と診断での使用に全く有利であり、それ故に、例えば薬物動態特性を改善する(EP-A 0232 262号)。他方、後にFc部分を欠失できることが望ましい場合には、融合タンパク質は、記載される有利な手段で発現、検出され、精製される。これは、Fc部分のプローブが治療と診断での使用を妨げる場合、例えば融合タンパク質が免疫化用抗原として用いられる場合である。ドラッグデリバリーにおいて、例えばhIL5-のようなヒトタンパク質は高速スクリーニングアッセイのためにFc部分と融合され、hIL-5のアンタゴニストを同定する[D.Benn ettら、Journal of Molecular Recognition, Vol.8:52-58（1995）及びK.Johansonら、The Journal of Biological Chemistry ,Vol.270,No.16:9459-9471(1995)参照]。 hSLNAC1レセプターは、硫酸アンモニウム又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン又はカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水相互作用クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーを含む周知の方法で、組み換え細胞の培養から回収し、精製できる。もっとも好ましくは、高速液体クロマトグラフィー(「HPLC」)が精製に用いられる。本発明のポリペプチドは、天然に精製した生成物、化学合成法の生成物、及び原核又は真核宿主（例えば、細菌、酵母、高等植物、昆虫及び哺乳類細胞含む）由来の組み換え技法により産生した生成物を含む。組み換え産生方法で用いられる宿主によって、本発明のポリペプチドはグリコシル化されてもよく、又はグリコシル化されなくてもよい。さらに、本発明のポリペプチドは、宿主媒介性プロセスの結果として、最初の修飾メチオニン残基を含むものであってもよい。診断アッセイこの発明は、診断試薬として用いるためのhSLNAC1ポリヌクレオチドの使用にも関する。機能不全に関連するhSLNAC1遺伝子の変異型の検出は、発現中か、過剰発現し又は発現の変化したhSLNAC1から生じる疾患又は疾患に対する罹病性の診断に付加、もしくはこれを定義できる診断手段を提供する。hSLNAC1遺伝子に変異を有する個体は、種々の技術によってDNAレベルで検出され得る。診断用の核酸は、血液、尿、唾液、組織の生検又は解剖材料のような患者の細胞から得ることができる。ゲノムDNAは、直接検出用に用いることができ、又は分析前にPCRもしくは他の増幅技法を用いて酵素的に増幅してもよい。RNA又はcDNAも、同様の様式で用いることができる。欠失と挿入は、増幅産物の大きさの変化を通常の遺伝子型と比較して見出すことができる。点突然変異は、標識したhSLNAC1ヌクレオチド配列に増幅DNAをハイブリダイズさせて同定できる。完全に対合した配列は、リボヌクレアーゼ消化又は融点の違いによって、対合していない二重らせんと区別できる。また、DNA配列の相違は、変性剤の存在下もしくは非存在下でのゲル中でのDNAフラグメントの電気泳動移動度の変化、又は直接的なDNAシークエンスによって見出すことができる(例えば、Myersら、Science（1985）230:1242参照)。特異的な位置での配列の変化は、リボヌクレアーゼ及びS1保護又は化学切断法のようなヌクレアーゼ保護アッセイで示すこともできる[Cottonら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1985)85:4397-4401 参照]。別の具体例で、hSLNAC1ヌクレオチド配列又はそのフラグメントからなるオリゴヌクレオチドプローブのアレイは、例えば遺伝子変異のスクリーニングを効率的にするように構築できる。アレイ技法は周知で一般的な応用性を有しており、遺伝子発現、遺伝子結合及び遺伝子変化を含む分子遺伝学の種々の問題に用いることができる(例えば、M.Cheeら、Science,vol.274,pp610-613(1996)参照) 。診断アッセイは、記載の方法でhSLNAC1遺伝子の変異を見出すことによる疾患の診断方法、又は疾患の治療に対する感受性の決定方法を提供する。特に、疾患は、神経性変性問題、痛覚過敏症、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患、舞踏病、筋肉痙攣、癲癇、卒中、心疾患、精神分裂病、うつ病、ニコチン依存症、モルヒネ依存症、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、炎症、疼痛、癌、肥満症、中枢又は末梢神経系での幾つかの内因性伝達ペプチドの模倣又は拮抗作用(例えば、オピオイド又は抗オピオイド)、味覚変化、hSLNAC1タンパク質の異常発現に関する疾患から選択される。さらに、同様の疾患は、異常に減少又は増加したレベルのhSLNAC1ポリペプチド又はhSLNAC1 mRNAを患者由来のサンプルから決定することからなる方法で診断できる。発現の減少又は増加は、ポリヌクレオチドの定量法として当該分野で周知の方法のいずれか、例えばPCR、RT-PCR、リボヌクレアーゼ保護、ノーザンブロッティング及び他のハイブリダイゼーション法を用いてRNAレベルで測定できる。宿主由来のサンプルでhSLNAC1のようなタンパク質のレベルを測定するのに使用できるアッセイ技法は、当業者に周知である。このようなアッセイ法は、ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析及びELISAアッセイを含む。hSLNAC1 遺伝子発現の検出 hSLNAC1遺伝子の発現レベルは、当業者により容易にアッセイできる。「hSLNA C1ポリペプチドをエンコードする遺伝予の発現レベルのアッセイ」は、生体サンプル中のhSLNAC1ポリペプチドのレベル又はhSLNAC1ポリペプチドをエンコードするmRNAのレベルを（例えば、絶対的なタンパク質レベル又はmRNAレベルの測定もしくは見積もりにより）定性的又は定量的に測定もしくは見積もることを意味する。「生体サンプル」によって、hSLNAC1ポリペプチド又はhSLNAC1 mRNAを含む個体、細胞系、組織培養物又は他の由来源から得られるいずれかの生体サンプルが意味される。このような組織は、小脳、脳、中脳、脊髄、神経末端、網膜、胸部、下垂体、心臓、胎盤、肺、骨格筋肉、腎臓及び膵臓を含む。生体サンプルは、 hSLNAC1ポリペプチドを含む哺乳類組織を含む。好ましい哺乳類は、有尾のサル、無尾のサル、ネコ、イヌ、ウシ、ブタ、馬、ウサギ及びヒトを含む。特に、ヒトが好ましい。全体的な細胞のRNAは、単一工程のグアニジニウム-チオシアネート-フェノール-クロロホルム法（Chomczynski及びSacchi,Anal.Biochem. 162:156-159(1987)に記載）を用いて生体サンプルから単離できる。hSLNAC1レセプターをエンコードするmRNAレベルは、次いでいずれかの適切な方法を用いてアッセイされる。これらは、ノーザンブロット分析[Haradaら、Cell 63:303-312(1 990)],S1ヌクレアーゼマッピング[Haradaら、Cell 63:303-312(1990)]、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)、ポリメラーゼ連鎖反応と組合わせた逆転写(RT-PCR)[Fuji taら、Cell 49:35-36(1990)]，及びリガーゼ連鎖反応と組合わせた逆転写(RT-LC R)を含む。上記に述べたとおり、抗体ベースの技法を用いて生体サンプル中のhSLNAC1ポリペプチドレベルをアッセイできる。例えば、組織でのhSLNAC1ポリペプチドの発現は、伝統的な免疫組織法［Ja1kanen,M．ら、J.Cell．Biol．101:976-985(19 85)；Jalkanen,M.ら、J.Cell．Biol．105:3087-3096(1987)］を用いて研究できる。hSLNAC1ポリペプチド遺伝子発現の検出に有用な抗体ベースの他の方法は、酵素結合イムノソルベントアッセイ(ELISA)及びラジオイムノアッセイ(RIA)のようなイムノアッセイを含む。適切な標識は当該分野で公知であり、グルコースオキシダーゼのような酵素標識及びヨウ素(¹²⁵I、¹²¹I)、炭素(¹4C)、硫黄(³⁵S)、トリチウム(³H)、インジウム(¹¹²In)とテクネチウム(^99mTc)のようなラジオアイソトープ、ビオチン及びフルオレセインならびにローダミンのような蛍光標識を含む。染色体アッセイ本発明の核酸分子は、染色体の同定にも貴重である。配列は特定して標識化され、個々のヒト染色体上の特定位置とハイブリダイズできる。本発明による染色体へのDNAのマッピングは、疾患に関連した遺伝子とそれらの配列を相関させることにおいて重要な第一段階である。この点の好ましい具体例において、ここで開示するcDNAは、 hSLNAC1ポリペプチド遺伝子のゲノムDNAをクローンするのに用いられる。これは、種々の周知の技術と、一般に市場で入手可能なライブラリーを用いてなすことができる。次いで、ゲノムDNAは、この目的に周知の技術を用いてインサイトゥ染色体マッピングに用いられる。さらに、配列は、cDNAからPCRプライマー（好ましくは15〜25bp）を調製して染色体にマッピングできる場合がある。遺伝子の３'非翻訳領域のコンピューター解析は、ゲノムDNAに１以上のエキソンが及び、このために増幅処理を複雑にするということがないプライマーを迅速に選択するのに用いられる。次いで、これらのプライマーは、個々のヒト染色体を含む体細胞ハイブリッドをPCRスクリーニングするのに用いられる。中期染色体の広がりに対するcDNAクローンの蛍光インサイトゥハイブリダイゼーション(“FISH”)は、一工程で正確な染色体位置を提示するのに用いることができる。この技術は、50又は60bpと同じくらい短い cDNA由来のプローブを用いて用いることができる(この技術の参考として、Verma ら、Human Chromosomes：A Manual Of Basic Techniques,Pergamon Press,New Y ork(1988)参照)。配列が正確な染色体の位置にマッピングされると、染色体上の配列の物理的位置を遺伝的なマップデータと関連付けることができる。このようなデータは、例えばJohns Hopkins大学、Welch Medical Library [V.McKusick,Mendelian Inher itance In Man]を通してオンラインで入手可能である。遺伝子と同じ染色体領域にマッピングされる疾患との関係は、次いで連鎖解析（物理的に隣り合う遺伝子の同時遺伝）により同定される。次に、影響を受けた個体と受けていない個体間のcDNAとゲノム配列の相違点を決定する必要がある。影響を受けた個体の幾つか又は全てで変異が認められるが、通常の個体に全く変異が認められないならば、変異は、疾患の原因である可能性がある。本発明に一般的に記載されているように、例示として示され、限定は意図しない以下の実施例を参照することにより、同様のことが、より容易に理解されるであろう。抗体本発明のポリペプチド又はそれらのフラグメント又はそれらの類似体、又はそれらを発現する細胞は、hSLNAC1ポリペプチドに免疫特異的な抗体を産生する免疫原としても用いることができる。用語「免疫特異的」は、抗体が、従来技術の他の関連するポリペプチドに対する親和性よりも、本発明のポリペプチドに対する親和性が実質的に大きいことを意味する。 hSLNAC1ポリペプチドに対して生じた抗体は、ポリペプチド又はエピトープを持つフラグメント、類似体又は細胞を、動物、好ましくはヒトでない動物に通常の方法を用いて投与することにより得ることができる。モノクローナル抗体の製造には、細胞系の継代培養で抗体を生じるいずれの技術も用いることができる。例えば、ハイブリドーマ技術[Kohler,G.及びMilstein,C.,Nature（1975）256:49 5-497]、トリオーマ(trioma)技術、ヒトB-細胞ハイブリドーマ技術[Kozborら、I mmunology Today（1983）4:72]及びEBV-ハイブリドーマ技術[Coleら、MONOCLONA L ANTIBODIES AND CANCER THERAPY,pp.76-96,AlanR.Liss.Inc.,1985]が含まれる。この発明のポリペプチドに対する単鎖抗体を生じるために、単鎖抗体の製造技術[米国特許第4,946,778号]も用いることができる。また、トランスジェニックマウス又は他の哺乳類を含む他の生物は、ヒト化抗体を発現するのに用いることができる。 hSLNAC1ポリペプチドに特異的な抗体を産生するのに用いることができるポリペプチド又はペプチドの限定されない例は、SEQ ID NO:２の約75〜約81アミノ酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO:２の約96〜106アミノ酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO:２の約130〜137アミノ酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO:２の約215〜234アミノ酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO:２の約240〜250アミノ酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO:２の約287〜297アミン酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO:２の約302〜310アミノ酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO:２の約341〜352アミノ酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO:２の約394〜405アミノ酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO:２の約419〜430アミノ酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO: ２の約471〜489アミノ酸残基からなるポリペプチド；SEQ ID NO:２の約517〜525 アミノ酸残基からなるポリペプチド；及びSEQ ID NO:２の約535〜545アミノ酸残基からなるポリペプチドを含む。上記のとおり、本発明者らは、上記ポリペプチドフラグメントがhSLNAC1ポリペプチドの抗原性領域であることを決定した。上記抗体は、ポリペプチドを発現するクローンを単離もしくは同定し、又はアフィニティクロマトグラフィーでポリペプチドを精製するのに用いることができる。 hSLNAC1ポリペプチドに対する抗体は、特に神経系疾患患者の治療、神経性変性問題、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患、舞踏病、筋肉痙攣、癲癇、卒中、心疾患、精神分裂病、うつ病、ニコチン依存症、モルヒネ依存症、筋萎縮性側索硬化症、炎症、疼痛、多発性硬化症、癌、肥満症の治療、中枢又は末梢神経系の幾つかの内因性伝達ペプチド（例えば、オピオイド又は抗オピオイド）の作用の模倣又は拮抗、味覚認知の変化、痛覚消失又は感覚消失の発生、又はhSLNAC 1ポリペプチドの異常発現に関連するいずれかの疾患の治療に用いることができる。ワクチン本発明の別の観点は、hSLNAC1ポリペプチド又はそれらのフラグメントを哺乳類に接種し、特に神経系疾患、神経初期変性問題、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患、舞踏病、筋肉痙攣、癲癇、卒中、心疾患、精神分裂病、うつ病、ニコチン依存症、モルヒネ依存症、筋萎縮性側索硬化症、炎症、疼痛、多発性硬化症、癌、肥満症から動物を保護し、中枢又は末梢神経系の幾つかの内因性伝達ペプチド（例えば、オピオイド又は抗オピオイド）の作用を模倣又は拮抗し、痛覚消失又は感覚消失を発生させ、又はhSLNAC1ポリペプチドの異常発現に関連するいずれかの疾患を治療するのに十分な抗体及び/又はＴ細胞免疫応答を生じることからなる、哺乳類での免疫学的応答を誘導する方法に関する。本発明のさらに別の観点は、免疫学的応答を誘導して疾患から動物を保護する抗体を産生するために、hSLNAC1ポリヌクレオチドの発現に関するベクターを介してhSLNAC1ポリペプチドを生体内で導き出すことからなる、哺乳類で免疫学的応答を誘導する方法に関する。本発明のさらなる観点は、哺乳類の宿主に導入される際にhSLNAC1ポリペプチドへの免疫学的応答を哺乳類で誘導する免疫学的/ワクチン製剤（組成物）(hSLN AC1ポリペプチド又はhSLNAC1遺伝子からなる）に関する。ワクチン製剤は、さらに適切な担体を含むことができる。hSLNAC1ポリペプチドは胃で分解されるので、非経口（皮下、筋肉内、静脈又は経皮の注射含む）で投与することが好ましい。非経口投与に適切な製剤は、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬及び受容者の血液で製剤を等張にする溶質を含み得る水性及び非水性の殺菌注射溶液；及び懸濁剤又は粘稠剤を含み得る水性及び非水性の殺菌懸濁液を含む。製剤は、単位用量又は複用量の容器、例えば密封したアンプル及びバイアルとすることができ、使用直前に殺菌性の液状担体の添加のみを要する凍結乾燥条件下で保存してもよい。ワクチン製剤は、製剤の免疫原性を高めるアジュバント系、例えば水中油系及び当該分野で公知の他の系を含んでいてもよい。用量はワクチンの特異的な活性によっており、通常の実験で容易に決定できる。スクリーニングアッセイ本発明のhSLNAC1ポリペプチドは、レセプターに結合し、本発明のレセプターポリペプチドの活性を活性化する化合物(アゴニスト)又は阻害する化合物(アンタゴニスト)のスクリーニング方法に用いることができる。したがって、本発明のポリペプチドは、小分予の基質、及び例えば細胞、無細胞調製物、化学ライブラリー及び天然の混合生成物中のリガンドの結合を利用するのに用いることができる。これらの基質とリガンドは天然の基質とリガンドであってもよく、又は構造的もしくは機能的な模倣物であってもよい[Coliganら、Current Protocols in Immunology 1(2);第５章(1991)参照]。 hSLNAC1ポリペプチドは、多くの病因を含む多くの生物学的機能の原因である可能性がある。したがって、一方でhSLNAC1を刺激し、他方でhSLNAC1の機能を阻害できる化合物と薬剤を見出すことが望ましい。一般に、アゴニストは、特に神経系疾患のような症状の治療及び予防目的、神経初期変性問題、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患、舞踏病、筋肉痙攣、癲癇、卒中、心疾患、精神分裂病、うつ病、ニコチン依存症、モルヒネ依存症、筋萎縮性側索硬化症、炎症、疼痛、多発性硬化症、癌、肥満症の治療、中枢又は末梢神経系の幾つかの内因性伝達ペプチド（例えば、オピオイド又は抗オピオイド）の作用の模倣又は拮抗、味覚認知の変化、痛覚消失又は感覚消失の発生、又はhSLNAC1ポリペプチドの異常発現に関連するいずれかの疾患の治療に用いられる。アンタゴニストは、特に神経系疾患のような症状の種々の治療及び予防目的、神経初期変性問題、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患、舞踏病、筋肉痙攣、癲癇、卒中、心疾患、精神分裂病、うつ病、ニコチン依存症、モルヒネ依存症、筋萎縮性側索硬化症、炎症、疼痛、多発性硬化症、癌、肥満症の治療、中枢又は末梢神経系の幾つかの内因性伝達ペプチド（例えば、オピオイド又は抗オピオイド）の作用の模倣又は拮抗、味覚認知の変化、痛覚消失又は感覚消失の発生、又はhSLNAC1ポリペプチドの異常発現に関連するいずれかの疾患の治療に用いてもよい。一般に、このようなスクリーニング方法は、本発明のレセプターポリペプチドをその表面で発現する適切な細胞の産生を含む。このような細胞は、哺乳類、酵母、ドロソフィラ又は大腸菌由来の細胞を含む。次いで、レセプターを発現する細胞(又は発現されたレセプターを含む細胞膜)を試験化合物が接触され、機能的な応答の結合又は刺激もしくは阻害が観察される。アッセイにより候補化合物の結合を簡単に試験することができ、候補化合物での直接又は間接的な標識によって、もしくは標識競合物との競合に関連するアッセイで、レセプターを有する細胞への付着が見出される。さらに、これらのアッセイは、表面にレセプターを有する細胞に適切な検出系を用いて、候補化合物がレセプターの活性化でシグナルを生じさせるかどうかを試験することができる。活性阻害剤は、一般に公知のアゴニストの存在下でアッセイされ、候補化合物の存在でアゴニストによる活性作用が認められる。このようなスクリーニングアッセイを行う標準的な方法は、当該分野で十分理解されている。また、連続的に活性なナトリウムチャンネルを生じるために、hSLNAC1 cDNAを突然変異させることもできる[Waldmannら、J.Biol.Chem.271.pp 10433-10436；H uang及びChalfie,Nature 367,467-470]。突然変異は、例えばグリシン411をフェニルアラニンに変える変えることからなっていてもよい。次いで、連続的に活性なナトリウムチャンネルを宿主細胞で発現させて、ナトリウムチャンネル活性が永続的なスクリーニングアッセイを生じることができる。チャンネル活性の記録は、直接的 (例えば、パッチクランプ)又は間接的(例えば、蛍光プローブ、乳酸デヒドロゲナーゼ放出の測定による細胞死)な膜電圧分析、又はナトリウム流入測定(例えば、ラジオ活性ナトリウムの流入、蛍光プローブ又はレポーター遺伝子)のいずれかで行うことができる。潜在的なhSLNAC1アンタゴニストの例には、抗体、又はある場合にはhSLNAC1のリガンドに密接に関連するオリゴヌクレオチド又はタンパク質(例えば、リガンドのフラグメント)又は、レセプターに結合するが、レセプター活性が妨げられるように応答を誘導しない小分子が含まれる。予防及び治療方法この発明は、過剰量及び十分量のhSLNAC1活性の両方に関連した異常状態の治療方法を提供する。 hSLNAC1活性が過剰である場合、幾つかの方法が利用可能である。一つの方法は、hSLNAC1へのリガンドの結合をブロックすることによって、又は二次シグナルを阻害することによって、活性阻害に有効な量の医薬的に受容な担体とともに上記した阻害化合物(アンタゴニスト)を患者に投与し、異常状態を緩和することからなる。別の観点では、内因性hSLNAC1と競合しているリガンドに依然として結合しうるhSLNAC1ポリペプチドの可溶性形態を投与してもよい。このような競合物の一般的な例は、hSLNAC1ポリペプチドフラグメントからなる。さらに別の方法において、内因性hSLNAC1をエンコードする遺伝子の発現は、発現阻害技術を用いて阻害できる。このような公知の技術は、内部に生じているか、又は別々に投与されるアンチセンス配列の使用を含む[例えば、O'Connor,J Neurochem（1991）56:560 Oligo deoxy -nucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression,CRCプレス、Boca Raton,FL(1988)参照]。また、遺伝子と三重ヘリックスを形成するオリゴヌクレオチドを生じることができる[例えば、Leeら、Nucleic Acids Res（1979）6:307 3;Cooneyら、Science（1988）241:456;Dervanら、Science(1991)251:1360参照] 。これらのオリゴマーは、それ自体投与でき、又は関連オリゴマーを生体内で発現させることができる。発現中のhSLNAC1とその活性に関連した異常状態の治療にも、幾つかの方法が利用できる。一つの方法は、hSLNAC1を活性化する化合物、つまり上記のアゴニストの治療上の有効量を、医薬的に受容な担体と組み合わせて患者に投与し、それにより異常状態を緩和することからなる。また、遺伝子治療は、患者において関連する細胞によりhSLNAC1を内因性で産生させるのに用いることができる。例えば、本発明のポリヌクレオチドは、上記したような複製欠損性のレトロウイルスベクターで発現させるために設計してもよい。レトロウイルスの発現構築物は、単離されてもよく、パッケージ細胞が対象の遺伝子を含む感染性のウイルス粒子を産生するように、本発明のポリペプチドをエンコードするRNAを含むレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入したパッケージ細胞に導入してもよい。これらの産生細胞は、生体内で細胞を設計し、生体内でポリペプチドを発現させるように患者に投与してもよい[遺伝子治療の概要については、Gene Therapy an d other Molecular Genetic-based Therapeutic Approaches,第20章（及びそのなかで参照されている）Human Molecular Genetics,T.Strachan及びA.P.Read.,B IOS Scientific Publishers Ltd(1996)参照]。製剤化及び投与 hSLNAC1ポリペプチドの可溶性形態のようなペプチド、及びアゴニスト及びアンタゴニストペプチド又は小分子は、適切な医薬の担体と組み合わせて製剤化することができる。このような製剤は、治療上の有効量のポリペプチド又は化合物、及び医薬的に受容な担体又は賦形剤からなる。このような担体は、生理食塩水、緩衝生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール及びそれらの組み合わせを含むが、これらに限定されない。製剤は投与方法に適合すべきであり、当業者に周知である。さらに、本発明は、本発明の上記組成物の１以上の活性成分で充填した１以上の容器からなる医薬袋及びキットに関する。本発明のポリペプチド及び他の化合物は、単独で、又は治療化合物のような他の化合物と組み合わせて用いてもよい。医薬組成物の好ましい全身投与形態は、注射、一般的には静脈注射を含む。皮下、筋肉内又は腹腔内のような他の注射経路を用いることができる。また、全身投与手段には、胆汁酸塩又はフシジン酸又は他の洗浄剤のような浸透剤を用いる経粘膜及び経皮投与が含まれる。さらに、腸用又はカプセル化した製剤に適切に製剤化される場合、経口投与も可能である。これらの化合物の投与は、軟膏、ペースト、ゲル等の形態で局所化及び/又は局在化させてもよい。必要な用量範囲は、ペプチドの選択、投与経路、製剤の性質、患者の症状の性質及びかかりつけの医者の判断による。しかし、適切な用量は、0.1〜100μg/kg 患者の範囲である。ただし、必要な用量での広範囲な変動は、利用可能な化合物の多様性、及び種々の投与経路の効率の相違を考慮して予期すべきである。例えば、経口投与は、静脈注射による投与より多い用量を要することが考えられる。これらの用量レベルの変動は、当該分野で十分理解されているように、最適化のための標準的な経験則を用いて調整することができる。また、治療で用いられるポリペプチドは、上記した「遺伝子治療」としてしばしば示される治療様相で、患者に内生的に発生させることができる。したがって、例えば患者由来の細胞は、例えばレトロウイルスプラスミドベクターを用いることにより、半ビボでポリペプチドをエンコードするようにDN A又はRNAのようなポリヌクレオチドを用いて設計してもよい。細胞は、次いで患者に導入される。スプライス変異体対象の幾つかの組織でのSEQ ID NO:１及び３のスプライス変異体の存在を確かめるために、配列がSEQ ID NO:１から推測されたオリゴヌクレオチドを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行った。これらのヌクレオチドは、GGCGGCCGCTCTAGAACTAG ；GCTGCTGGCAAGAAACAAAG；ATTTAACTCTGGCGCTGATGG；GTCTAGGATCTCGAGGATGＧ;ATG CTTCGCAAGGACTCGTG；GAAAAGCTACGTGCAGGCTAGである。オリゴヌクレオチドの最後の対は、79ヌクレオチドが異なる配列の背根神経節(dorsal root of ganglia)から増幅させた。これらの79ヌクレオチドは、コーディング配列の3'部分に挿入し、SEQ ID NO:５とした。この挿入で導入されたリーディングフレームの変化により、推定されるタンパク質配列SEQ ID NO:６は、そのＣ末端でSEQ ID NO:４と異なる。背根神経節は痛覚認知に関与するので、SEQ ID NO:５は、機能が痛覚過敏又は痛覚消失に関与するタンパク質をエンコードしているものと考えられる。別の観点によれば、本発明は、その全長にわたって、SEQ ID NO:６のポリペプチド配列をエンコードするヌクレオチド配列と、少なくとも80％、好ましくは90 ％、さらに好ましくは97％、さらに好ましくは99％同一なヌクレオチド配列、又はそのヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列からなる単離されたポリヌクレオチドにも関する。さらに別の観点によれば、本発明は、その全長にわたって、SEQ ID NO:６のアミノ酸配列と少なくとも80％、好ましくは90％、さらに好ましくは97％、さらに好ましくは99％同一なアミノ酸配列からなるポリペプチドにも関する。実施例以下の実施例は、詳細に記載した部分以外は、当業者に周知の標準的な技術と方法を用いて行う。実施例は例示であり、本発明を限定するものではない。実施例１：ヒトナトリウムチャンネルのクローニングまず、hSLNAC1配列は、ランダムに選択したヒトcDNAクローンに高速自動DNA配列解析機を用いて得た約100万のヒトEST類を含むデータベースを検索して同定した[Adams,M.D.ら、Nature 377:3-174(1995);Adams,M.D.ら、Nature 355:632-634 (1992);及びAdams,M.D.ら、Science 252:1651-1656(1991)]。各ESTと相同な配列の比較は、ブラストン(blastn)及びテブラストン(tblastn)アルゴリズムを用いてGenBankデータベースについて行った[Altschul,S.F.ら、J.Mol.Biol.215:403- 410(1990)]。このヒトESTデータベースに対する既知のヒトMDEGアミノ酸配列を用いる特異的なホモロジー検索により、MDEGと約50％類似している１つのEST(HG S826465)が、小脳cDNAライブラリーから示された。HGS826465は1710bpを含み、配列の比較から、新規のタンパク質の完全なオープンリーディングフレームを含むことが示唆された。遺伝子配列はTaqFs(Perkin Elmer)を用いて二本鎖DNAをシーケンスすることにより確認し、Genbank release 98にブラスト検索することにより、その遺伝子が完全に新規であることが分かった。発現ベクター構築物は、完全なhSLNAC1コーディング領域を有するKpnI-NotIフラグメントを発現ベクター pcDNA3(-)［Invitrogen,Inc.］のKpnI-NmotI部位に挿入して作製した。この構築物をp3 SLNAC1と命名した。実施例２：哺乳類細胞でのhSLNAC1のクローニングと発現一般的な哺乳類発現ベクターは、mRNAの転写開始を媒介するプロモーター、タンパク質コーディング配列及び転写終結ならびに転写物のポリアデニル化に必要なシグナルを含む。別のものは、エンハンサー、ドナーにフランク(flank)されたKozak配列及び介在配列及びRNAスプライシングのための受容部位を含む。高度な効率の転写は、SV40由来の初期及び後期プロモーター、レトロウイルス(例えば、RSV、HTLV1、HIVI)由来の長末端反復(LTRS)、及びサイトメガロウイルス(CM V)の初期プロモーターを用いてなし得る。しかし、細胞のもの(例えば、ヒトアクチンプロモーター)を用いることもできる。本発明の実際での使用に適切な発現ベクターは、例えばPSVL及びPMSGのようなベクター[Pharmacia,Uppsala,Swede n]、pRSVcat(ATC C37152)、pSV2dhfr(ATCC 37146)及びpBC12MI(ATCC 67109)及び pcDNA3(-)[Invitrogen]が含まれる。使用できる哺乳類宿主細胞は、ヒトヒーラー293、H9及びジャーカット(Jurkat)細胞、マウスNIH3T3及びC127細胞、Cos1、C os7及びCV1、キュイル(quail)QC1-3細胞、マウスＬ細胞及びチャイニーズハムスター卵巣細胞(CHO)を含む。また、遺伝子は、染色体に組み込まれた遺伝子を含む安定な細胞系で発現できる。dhfr、gpt、ネオマイシン、ゼオシン又はヒグロマイシンのような選択マーカーと同時にトランスフェクションさせることで、トランスフェクトした細胞を同定し、単離できる。また、トランスフェクトした遺伝子を増幅して、エンコードされたタンパク質を大量に発現させることができる。DHFR(ジヒドロフォレートレダクターゼ)マーカーは、対象の遺伝子の数百又は数千のコピーを有する細胞系を発育させるのに有用である。別の有用なマーカーは、グルタミンシンセターゼ(GS)酵素[Murphy ら、Biochem.J．227:277-279 (1991)；Bebbingtonら、Bio/Technology 10:169-175(1992)]である。これらのマーカーを用いることにより、哺乳類細胞が選択培地で成長し、もっとも耐性を有する細胞が選択される。これらの細胞系は、染色体に組み込まれた増幅遺伝子( 類)を含む。チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞及びNSO細胞は、しばしばタンパク質の産生に用いられる。発現ベクターpcDNA3(-)は、サイトメガロウイルスの強力なプロモーター(CMV) を含む。マルチクローニング部位、例えば制限酵素KpnI、NotIの切断部位は、対象の遺伝子のクローニングを容易にする。ベクターは、さらにウシ成長ホルモン遺伝子の3'イントロン、ポリアデニル化及び末端シグナルを含む。実施例2(a)：COS細胞でのクローニングと発現発現プラスミドp3SLNAC1は、発現ベクターpcDNA3(-)(Invitrogen，Inc.から入手できる)にhSLNAC1をエンコードするcDNAをクローニングして作製する。発現ベクターpcDNA3(-)は、(1)大腸菌及び他の原核細胞の増殖に有効な大腸菌複製起点;(2)プラスミドを含有する原核細胞を選択するためのアンピシリン耐性遺伝子;(3)真核細胞を増殖させるためのSV40複製起点;(4)CMVプロモーター、ポリリンカー;(5)cDNAがCMVプロモーター発現制御下に適切に置かれ、ポリリンカーの制限部位によってポリアデニル化シグナルに操作可能に連結されるようにアレンジされたウシ成長ホルモン遺伝予由来のポリアデニル化を含む。さらに、pc DNA3(-)は、選択可能なネオマイシンマーカーを含む。 hSLNAC1ポリペプチドをエンコードするDNAフラグメントは、ベクターのポリリンカー領域にクローンされ、組換えタンパク質がCMVプロモーターにより発現される。プラスミドの構築方法は、以下のとおりである。寄託したクローンのhSLN AC1 cDNAは、ブルースクリプトベクター[Stratagene]にあり、KpnIとNotIを用いてブルースクリプトベクターから切り出される。ベクターpcDNA3(-)は、KpnIとNotIを用いて消化する。次いで、P CR増幅したDNAフラグメントと線状化したベクターを連結する。連結混合物は大腸菌株DH5α[GIBCO BRLから入手可能]に形質転換し、形質転換した培養液をアンピシリン培地プレートに入れ、次いで培養してアンピシリン耐性コロニーを成長させる。プラスミドDNAは耐性コロニーから単離し、hSLNAC1-エンコードフラグメントの存在について制限分析又は他の手段で調べる。組換えhSLNAC1ポリペプチドの発現については、COS細胞は、例えばSambrookら、Molecular Cloning：a Laboratory Manual,Cold Spring Laboratory Press,Co ld Spring Harbor,New York(1989)に記載されているように、DEAE-デキストランを用いて上記の発現ベクターでトランスフェクトされる。細胞は、ベクターによるhSLNAC1の発現条件下で培養する。実施例２(b)：HEK293細胞でのクローニングと発現ベクターp3SLNAC1は、hSLNAC1タンパク質の発現に用いる。プラスミドp3SLNAC 1は、実施例１に記載する。プラスミドは、SV40初期プロモーター制御下でマウスネオマイシン耐性遺伝子を含む。これらのプラスミドでトランスフェクトされるHEK293細胞は、選択培地中(ジェネティシン(Geneticin)1mg/ml含有、Life Tec hnologies)で細胞を成長させることで選択できる。ジェネティシン1mg/ml濃度の存在下で成長した細胞は、標的酵素を産生することで薬剤耐性、ネオマイシン耐性を生じる。二番目の遺伝子がネオマイシン耐性遺伝子に連結されると、通常同時に発現される。この方法が、大量の対象タンパク質(レセプターの場合には、1 pmol/細胞膜mgまで)を発現する細胞系を成長させるのに使用できることは当該分野で公知である。次いで、ジェネティシンの使用を止めると、宿主細胞の１以上の染色体に組み込まれた増幅遺伝子を含む細胞系が得られる。 ClontechのTet-Off及びTet-On遺伝子発現系及び同様の系は、哺乳類細胞で制御された方法でhSLNAC1を発現するのに使用できる[Gossen,M.及びBujard,H.,Pro c.Natl.Acad.Sci.USA 89:5547-5551(1992)]。mRNAの他のシグナルのポリアデニル化には、例えばヒト成長ホルモン遺伝子又はグロビン遺伝子由来を用いることもできる。染色体に対象の遺伝子を組み込んだ安定な細胞系は、gpt、G418又はヒグロマイシンのような選択マーカーを用いて同時にトランスフェクションさせることによっても選択できる。 HEK293細胞は、トランスフェクションに用いられる。20μgの発現プラスミドp 3SLNAC1は、リン酸カルシウムを用いてトランスフェクトさせる[Chen C,Okayama H,(1987)Mol.Cell.Biol.;7:2745-2752]。プラスミドpcDNA3(-)は、優性な選択マーカー、つまりジェネティシンを含む抗生物質群に耐性を与える酵素をエンコードするTn5由来のネオマイシン耐性遺伝子を含む。細胞は、ジェネティシン1mg /mlを補足したMEMに撒く。２日後、細胞をトリプシン処理し、ジェネティシン1m g/mlを補足したMEMにクローニングプレートを撒く。約10〜14日後、シングルコロニーをトリプシン処理し、次いで６ウェルのペトリ皿又は10mlのフラスコに撒く。次いで、成長した細胞を新しい６ウェルのプレートに移す。所望の遺伝子産物の発現は、例えばノーザンブロットにより分析する。実施例３：hSLNAC1 mRNA発現の組織分布ノーザンブロット解析は、上記したSambrookらにより記載される方法を用いてヒト組織でのhSLNAC1遺伝子発現を調べるために行った。hSLNAC1タンパク質の全ヌクレオチド配列(SEQ ID NO:１)を含む cDNAプローブは、製品の説明書にしたがってRediprime^TMDNAラベルシステム[Ame rsham Life Science,Arlington,IL]を用いて32Pで標識できる。標識後、製品の方法PT1200-1にしたがって、CHROMASPIN-100^TMカラム[Clontech Laboratories,I nc.]を用いてプローブを精製することができる。精製した標識プローブは、次いでhSLNAC1 mRNAについての種々のヒト組織を調べるのに用いた。種々のヒト組織を含む複組織ノーザン(MTN)ブロットはClontechから入手でき、製品の方法PT1190-1にしたがってExpressHyb^TMハイブリダイゼーション溶液[C lontech]を用いて標識プローブで調べることができる。ハイブリダイゼーション及び洗浄後、ブロットを固定し、一晩-70℃でフィルムにさらし、標準的な方法にしたがってフィルムを焼き付けた。本発明が、前述の記載及び実施例に詳細に記載される以外にも実用され得ることは明らかである。上記技術の観点、及び別紙の請求の範囲の範囲内で、本発明の多くの改変及び変更が可能である。ここで引用する全ての文献(特許、特許出願、文献の要約、研究室マニュアル、書籍又は他の書類を含む)の全開示は、参照により導入する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 9/10 Ａ６１Ｐ 21/02 21/00 25/04 21/02 25/08 25/04 25/14 25/08 25/16 25/14 25/18 25/16 25/24 25/18 25/28 25/24 25/34 25/28 25/36 25/34 29/00 25/36 35/00 29/00 43/00 １１１ 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/705 43/00 １１１ 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 16/18 Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＣ１２Ｎ 5/10 33/50 ＺＣ１２Ｐ 21/02 33/53 ＤＧ０１Ｎ 33/15 33/566 33/50 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/53 5/00 Ｂ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02

Claims

【特許請求の範囲】１．（a）その全体的な長さにわたってSEQ ID NO:２のhSLNAC1ポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列と少なくとも80％の同一性を有するヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；又は該ヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、（b）寄託番号97987でATCCに寄託されたcDNAインサートと少なくとも80％の同一性を有するヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチド；又は該ヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列からなる群から選択される単離されたポリヌクレオチド。２． DNA又はRNAである請求項１に記載のポリヌクレオチド。３．ヌクレオチド配列が、SEQ ID NO:１に含まれる配列と少なくとも80％同一である請求項１及び２の１つに記載のポリヌクレオチド。４．ヌクレオチド配列が、SEQ ID NO:１に含まれる配列をエンコードするhSLN AC1ポリペプチドからなる請求項３に記載のポリヌクレオチド。５． SEQ ID NO:１のポリヌクレオチドである請求項３に記載のポリヌクレオチド。６．発現系が和合性宿主細胞に存在する際に、SEQ ID NO:２のポリペプチドと少なくとも80％の同一性を有するアミノ酸配列からなるhSLNAC1ポリペプチドを産生し得る発現系からなるDNA又はRNA分子。７．請求項６に記載の発現系からなる宿主細胞。８． hSLNAC1ポリペプチドの産生に十分な条件下で請求項７に記載の宿主を培養し、培養液からポリペプチドを回収することからなるhSLNAC1ポリペプチドの産生方法。９．適切な培養条件下で宿主細胞がhSLNAC1ポリペプチドを産生するように、請求項６に記載の発現系で宿主細胞を形質転換又はトランスフェクトすることからなるhSLNAC1ポリペプチドを産生する細胞の調製方法。１０．その全体的な長さにわたってSEQ ID NO:２のアミノ酸配列と少なくとも 80％同一なアミノ酸配列からなるhSLNAC1ポリペプチド。１１． SEQ ID NO:２のアミノ酸配列からなる請求項１０に記載のポリペプチド。１２． ATCC 97987に含まれるcDNAでエンコードされるアミノ酸配列と少なくとも80％同一なアミノ酸配列からなるhSLNAC1ポリペプチド。１３．請求項１０〜１２の１つに記載のhSLNAC1ポリペプチドに免疫特異的な抗体。１４． hSLNAC1ポリペプチドの活性又は発現の促進が要される患者の治療用薬剤を製造するための、（a）請求項１０〜１２のhSLNAC1ポリペプチドの治療上有効量のアゴニスト、及び/又は(b)生体内でhSLNAC1ポリペプチド活性が生じるような形態の請求項１〜６の１つに記載のポリヌクレオチドの使用。１５． hSLNAC1ポリペプチドの活性又は発現の阻害が必要な患者の治療用薬剤を製造するための、（a）請求項１０〜１２のhSLNAC1ポリペプチドの治療上有効量のアンタゴニスト、及び/又は(b)hSLNAC1ポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列の発現を阻害する核酸分子、及び/又は（c）hSLNAC1ポリペプチドに匹敵する治療上有効量のポリペプチドの使用。１６．（a）患者のゲノム中のhSLNAC1ポリペプチドをエンコードするヌクレオチド配列の変異の有無を決定し、かつ/又は（b）患者由来のサンプルでhSLNAC1ポリペプチド発現の存在又は量を分析することからなる、請求項１０〜１２の１つのhSLNAC1ポリペプチドの発現又は活性に関連した患者の疾患又は疾患に対する罹病性を診断する方法。１７．（a）請求項９で産生される細胞を候補化合物と接触させ、かつ（b）候補化合物がhSLNAC1ポリペプチドの活性化でシグナルを生じさせるかどうかを決定することからなる、請求項１０〜１２の１つに記載のhSLNAC1ポリペプチドに対するアゴニストを同定する方法。１８．請求項１７の方法で同定されるアゴニスト。１９．（a）請求項９で産生される細胞をアゴニストと接触させ、かつ（b）候補化合物の存在下で、該アゴニストにより生じたシグナルが減少されるかどうかを決定することからなる、請求項１０〜１２の１つに記載のhSLNAC1ポリペプチドに対するアンタゴニストを同定する方法。２０．請求項１９の方法で同定されるアンタゴニスト。２１．その全体的な長さにわたってSEQ ID NO:４のポリペプチド配列をエンコードするヌクレオチド配列と少なくとも80％の同一性を有するヌクレオチド配列；又は該ヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列からなる単離されたポリヌクレオチド。２２． SEQ ID NO:３のポリヌクレオチド配列。２３．その全体的な長さにわたってSEQ ID NO:４のアミノ酸配列と少なくとも 80％同一なアミノ酸配列からなるポリペプチド。２４． SEQ ID NO:４のポリペプチド配列。２５．その全体的な長さにわたってSEQ ID NO:６のポリペプチド配列をエンコードするヌクレオチド配列と少なくとも80％同一性を有するヌクレオチド配列；又は該ヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列からなる単離されたポリヌクレオチド。２６． SEQ ID NO:５のポリヌクレオチド配列。２７．その全体的な長さにわたってSEQ ID NO:６のアミノ酸配列と少なくとも 80％同一なアミノ酸配列からなるポリペプチド。２８． SEQ ID NO:６のポリペプチド配列。