JP2001520995A - 神経再生を促進するための非免疫抑制化合物の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 本発明は、ステロイド受容体複合体の破壊により、神経突起伸展及び神経再生が促進されるという所見を利用している。この破壊は、成熟複合体又は成熟複合体の組立てに必要な成熟複合体の前駆体のようなステロイド受容体複合体の物理的組立て又は機能の破壊という形態をとりうる。ゲルダナマイシン及びそのアナログ、並びにFKBP-52抗体が、複合体を破壊し、神経成長を促進することが示されている。これらの化合物に加え、本発明は、神経栄養化合物を見出すためのアッセイ、並びにこれらのアッセイにより見出された化合物、それらが取り込まれた薬学的組成物、及び損傷又は疾患により引き起こされたニューロン機能異常を有する被験者を治療する方法を含む。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野 本発明は、神経学的損傷及び疾患の治療に有用な神経栄養化合物に関する。

【０００２】発明の背景 外傷による、又は機械的に誘発された末梢神経系における軸索変性の後には、
軸索の再生が起こり、機能が回復することが多い。しかし、軸索伸長の速度（3 〜4mm/日）は遅く、完全に神経学的機能が回復しないこともある。神経学的機能
が修復される場合には、損傷部位と標的組織との距離に応じて、数週間又は数ヶ
月以内に回復が起こる。遠距離にわたる再生の速度を高める療法は、患者にとっ
て極めて有益で、医療費を大いに減少させると思われる。

【０００３】 他の神経学的状態は、慢性的な疾患又は損傷により引き起こされる、末梢神経
系又は中枢神経系におけるニューロンの機能異常より生じる。慢性疾患過程は、
神経系に永久に進行性の傷害を与え、通常（特に中枢神経系においては）永久的
な機能の欠損をもたらす。そのような神経学的機能の欠損は、世界中で、身体能
力低下及び死亡の主要な原因となっている。

【０００４】 免疫抑制剤FK506（USANタクロリムス；プログラフ（Prograf）（登録商標））
は、イムノフィリンFKBP-12と結合することにより免疫抑制を誘導する。この結 合により、カルシニューリンによる転写因子NF/AT（活性化T細胞の核内因子）の
脱リン酸化が抑制され、カルシニューリンの核内への移行が遮断され、T細胞増 殖にとって必要なインターロイキン-2（IL-2）のようなサイトカインの合成及び
分泌の受容体媒介性の増加が抑制される。FK506は、座骨神経の挫傷の後、用量 依存的に、ラットにおける機能回復及び軸索再生の速度を高めることも見出され
ている。

【０００５】 米国特許第5,654,332号（アーミステッド（Armistead）ら）は、FKBP-12と結 合し、NGFの存在下で神経突起伸展を刺激すると言われる免疫抑制性FK506アナロ
グについて論じている。これらのFKBP-12結合化合物の神経栄養活性は、「FKBP-
12に対する親和性及びFKBP-12のロータマーゼ活性を阻害する能力に直接的に関 連している」（同上、第7カラム第47〜50行）と言及された。ロータマーゼ活性 は、ペプチジルイソメラーゼによるシス・トランス異性化の尺度となり、この活
性の阻害は治療剤の免疫抑制及び神経栄養の活性の指標として受け入れられてい
る。米国特許第5,614,547号（ハミルトン（Hamilton）ら）を参照のこと。

【０００６】 FKBP-12に結合するが、カルシニューリン活性は阻害しない（および免疫抑制 剤ではない）2つの合成FK506アナログの全身投与により、有髄線維のサイズが増
加することが報告されている（ゴールド（Gold）ら、Exp.Neurol.147:269-278,1
997；スタイナー（Steiner）ら、Nature Medicine 3:1-8,1997；スタイナー（St
einer）ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:2019-2024,1997）。アンドロゲン及び エストロゲンがハムスターにおいて顔面神経再生を刺激することも報告されてい
る（例えば、タンザー（Tanzer）及びジョーンズ（Jones）、Exp.Neurol.146:25
8-264,1997）。

【０００７】 神経再生を刺激することが以前より示されている化合物の多くは、免疫抑制（
FK506及び免疫抑制活性を保持しているアナログ）又はアンドロゲンもしくはエ ストロゲンの刺激のような、望ましくない副作用を有している。従って、投与を
受ける被験者に十分に許容される神経成長刺激化合物のクラスを提供する必要性
が存在する。

【０００８】発明の概要 FK506及び他のアナログが神経成長刺激を誘導するメカニズムは以前より誤解 されており、それがこの目的のための新薬開発にとって障壁となっていた。

【０００９】 本発明は、神経成長刺激が、従来考えられていたようなFKBP-12との相互作用 によってではなく、成熟ステロイド受容体複合体の破壊により促進されるという
驚くべき発見を利用している。複合体の破壊には、ステロイド受容体複合体、例
えば成熟ステロイド受容体複合体又は成熟複合体の前駆体である比較的未成熟な
型の複合体の、物理的組立ての阻害、分解の促進、又は機能の阻害が含まれうる
。神経突起伸展を促進する生化学的メカニズムの発見を考慮して、本発明は、神
経成長の促進において活性を有する可能性のある新規化合物を選択するためのア
ッセイを含む。そのようなアッセイは、アンドロゲン又はエストロゲンのような
ステロイド・リガンド以外の被検化合物がステロイド受容体複合体の組立てを破
壊するか否かを決定すること、及びステロイド受容体複合体の組立てを破壊する
化合物を選択することを含む。スクリーニングされうる特定のクラスの化合物の
例には、ゲルダナマイシン及びその構造的アナログ、ラパマイシン及びその構造
的アナログ、並びにFK506及びその構造的アナログが含まれる。このアッセイに より選択される化合物は、さらなる調査のため、化合物により誘導される実際の
神経突起伸展を測定するための付加的なアッセイにおいて試験することができる
。本発明は、ステロイド受容体複合体の破壊のための、アッセイにより同定され
た神経栄養化合物も含む。

【００１０】 本発明はまた、（例えば会合の阻害又は分解の促進により）例えば成熟ステロ
イド受容体複合体のような、ステロイド受容体複合体の組立て又は機能を破壊す
る化合物（アッセイにより発見された化合物を含む）を被験者に投与することに
より、被験者の神経細胞成長を刺激する方法を含む。ここで、化合物は、（アン
ドロゲン又はエストロゲンのような）ステロイド受容体複合体のステロイド・ホ
ルモン結合部位に対するリガンド以外の化合物であり、いくつかの特定の態様に
おいてFKBP-12と高親和性で結合しない。特定の態様において、ステロイド受容 体複合体のp23構成要素とhsp-90構成要素との会合を破壊するため、又はFKBP-52
とhsp-90との会合を破壊するための化合物が投与される。他の態様において、AT
Pと競合してhsp-90のアミノ末端ATP結合部位、例えばステロイド受容体複合体の
ゲルダナマイシン結合部位に結合する化合物が投与される。これらの方法は、ゲ
ルダナマイシン又はその構造的なアナログもしくは疑似体のようなベンゾキノン
・アンサマイシン、又は抗FKBP-52抗体の投与を含む。本方法は、ステロイド受 容体複合体の会合を破壊する化合物以外の第二の神経栄養因子の投与も含みうる
。

【００１１】 本方法は、中枢神経系又は末梢神経系いずれかのニューロンに対する疾患又は
損傷により引き起こされるニューロン機能異常に関連した神経学的状態を有する
動物（ヒトのような哺乳動物を含む）の治療において有用である。本発明の化合
物又は組成物は、成熟ステロイド受容体複合体（例えば、hsp-90のゲルダナマイ
シン結合部位）に結合して成熟ステロイド受容体複合体の会合を破壊し、ニュー
ロンからの神経突起伸展を促進するために、治療に有効な神経栄養量を動物に投
与する。本方法はまた、外科的神経移植又はその他の神経学的組織の移植のよう
な操作と関連して、移植片又は埋没物の治癒を促進し、移植片又は埋没物の隣接
組織への取り込みを促進するためにも使用されうる。

【００１２】 本発明はまた、ステロイド受容体複合体の組立てを破壊する薬学的化合物であ
って、ステロイド受容体複合体のステロイド・ホルモン結合部位に対するリガン
ドではない化合物を含む。これらの化合物は、ラパマイシン又はFK-506のアナロ
グでありうるが、さらに特定の態様において、化合物は、低いロータマーゼ阻害
活性を有するか、FK-506又はラパマイシンのアナログ以外であるか、高親和性で
FKBP-12と結合しないか、又は免疫抑制性でない。特定の態様において、化合物 は、ステロイド受容体複合体の会合の阻害又は解離の促進のいずれかにより、ス
テロイド受容体複合体（例えば、成熟ステロイド受容体複合体）の形成を特異的
に破壊する；例えばステロイド受容体複合体のp23構成要素とhsp-90との会合の 破壊、又はFKBP-52とhsp-90との会合の破壊、又はp23、FKBP-52、もしくはhsp-9
0と複合体との相互作用の阻害による。

【００１３】 いくつかの化合物の態様では、化合物は、ゲルダナマイシンとステロイド受容
体複合体との結合部位でもある、hsp-90のアミノ末端ATP結合部位に、ATPと競合
して結合する。特定の態様において、化合物は、ゲルダナマイシン又はその構造
的なアナログもしくは疑似体のような、hsp-90のゲルダナマイシン結合部位に結
合するベンゾキノン・アンサマイシンである。他の態様において、化合物は、抗
FKBP-52抗体、又はステロイド受容体複合体のhsp-90からのFKBP-52の解離を特異
的に引き起こす他の薬剤である。

【００１４】 化合物は、NGF、IGF-1、αFGF、βFGF、PDGF、BDNF、CNTF、GDNF、NT-3、NT4/
5、及びそれらの混合物のような他の神経栄養因子、又はステロイド受容体複合 体のリガンドであるステロイド・ホルモン（エストロゲン、アンドロゲン、又は
デキサメタゾンのようなコルチコステロイド）も含むことのできる薬学的組成物
に取り込まれうる。

【００１５】 本発明のさらに特定の局面において、化合物は、複合体からのp23又はFKBP-52
の解離を引き起こすこと、又はp23もしくはFKBP-52と複合体との会合を阻害する
こと、又はp23、FKBP-52もしくはhsp-90と複合体との相互作用を阻害することに
より、ステロイド受容体複合体の組立てを破壊するか、又は機能を妨害する、低
いFKBP-12結合親和性及び低いロータマーゼ活性を有するFK506アナログからなる
群より選択される、複合体のステロイド・ホルモン結合部位以外のステロイド受
容体複合体のポリペプチドに結合する、神経成長を刺激する量の薬剤、例えば、
ベンゾキノン・アンサマイシン及びそれらの構造的アナログ、複合体の選択され
た構成要素ともう一つのポリペプチド構成要素との相互作用の部位に、複合体の
選択されたポリペプチド構成要素の配列を含むペプチド、抗体、並びにそれらの
組み合わせである。

【００１６】 本発明の化合物は、有意なカルシニューリン阻害又はロータマーゼ阻害を有し
ている必要がない。化合物は、ロータマーゼ阻害に関して、1nMより大きい、例 えば10nM、25nMより大きいIC_５０を有していてもよく、さらには50〜100nMのIC _５０ を有していてもよい。

【００１７】 前述の様々な本発明の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び添付の図面より
さらに明らかとなると思われる。

【００１８】好ましい態様の詳細な説明 ステロイド受容体は、特定の構造遺伝子の上流領域との直接的な相互作用によ
り遺伝子発現を制御する分子のスーパーファミリーに属する。受容体が活性状態
及び不活性状態の両方をとることができることが、ホルモンの作用にとって重要
である。この制御は、ステロイド受容体複合体（SRC）を形成する、受容体（ス テロイド・リガンド結合構成要素）、ならびに熱ショック・タンパク質（hsp-90
）、p23、及びFKBP-52のようなシャペロン・タンパク質の多構成要素複合体との
会合により達成される。ステロイド受容体がそのリガンドと結合すると、受容体
は活性化され、SRCのシャペロン・タンパク質が解離し、受容体のDNA結合ドメイ
ンが遺伝子調節配列との相互作用のため露出する。この様式で制御されているス
テロイド受容体ファミリーのメンバーには、（アルドステロンのような）鉱質コ
ルチコイド、（デキサメタゾンのような）糖質コルチコイド、（プロゲステロン
のような）プロゲスチン、（テストステロンのような）アンドロゲン、並びにエ
ストロゲン（エストロゲン、-エストリオール、及び-エストラジオールを含む）
が含まれる。

【００１９】 ステロイド受容体複合体組立てのモデルを図1に示す。ステロイド受容体SRとh
sp-90/p-60/hsp-70折り畳み複合体（フォールドソーム（foldosome））とのATP 依存性の会合により、p23又はモリブデン酸塩の非存在下で不安定な中間（SR/hs
p-90/p-60/hsp-70）複合体が生じる。p23が複合体と会合し、hsp-90がイムノフ ィリン（例えば、FKBP-52及びCyP40）のようなテトラトリコペプチド・リピート
（tetratricopeptide repeat）（TPR）ドメイン・タンパク質と結合すると、準 成熟準安定SRCが形成される（SR/hsp-90/p23/FKBP-52）。図1において、TPRドメ
インは、FKBP-52が結合している黒塗りの三日月形により示されている。成熟ス テロイド受容体複合体の組立ては、図1に示されている最終段階であり、シャペ ロン・タンパク質の複合体hsp-90/p23/FKBP-52がステロイド受容体SRと共に組立
てられる。

【００２０】 イムノフィリンとは、免疫抑制剤活性の媒介因子であることが知られている高
度に保存されたシャペロン・タンパク質のファミリーである。最もよく特徴づけ
られているイムノフィリンはFKBP-12であり、FKBP-12は、Tリンパ球において免 疫抑制剤FK-506と相互作用して、カルシニューリンが活性化T細胞の核内因子（N
F/AT）の脱リン酸化を抑制し、それにより免疫機能にとって必要なサイトカイン
の合成及び分泌を遮断する。イムノフィリンはペプチジルイソメラーゼ（PPIア ーゼ）活性を有し、この活性の阻害剤は、ペプチジルプロピルのシス・トランス
異性化の阻害を測定するロータマーゼ・アッセイで検出されうる。しかし、FKBP
-12による免疫抑制は、ロータマーゼ活性を阻害する能力により媒介されるので はない。免疫抑制を実際には媒介していないカルシニューリン活性の脱リン酸化
を測定しているにもかかわらず、ロータマーゼ活性はイムノフィリンの免疫抑制
活性の指標として受け入れられている。従来の研究者らは、（FK506がそうであ ることが見出されていたため）神経再生を促進すると考えられるFKBP-12結合薬 を検索するため、ロータマーゼ・アッセイを利用していた。

【００２１】 本発明は、神経再生を促進するものが、FKBP-12と結合するのではなく、SRCの
組立ての破壊であるという驚くべき所見を利用する。したがって、ロータマーゼ
又は免疫抑制の活性を測定することにより神経再生を促進するFKBP-12アナログ を見出そうという従来の努力は見当違いであり、（免疫抑制及び心筋症のような
）望ましくない副作用を有する薬物を見出す可能性が高かった。本発明は、神経
再生を促進する実際の生化学的メカニズムの発見を利用して先行技法におけるア
ッセイよりも優れた、新規な神経栄養薬を見出すための優れたアッセイを提供す
る。

【００２２】 そのような新規化合物の一つが、ベンゾキノン・アンサマイシン抗生物質であ
るゲルダナマイシンであり、これは薬学的に特異的にhsp-90に結合し（Whitesel
lら,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:8324-8328,1994）、ヘテロ複合体アセンブリ系
のp23構成要素とhsp-90との会合を阻害する（Johnson及びToft,Mol.Endocrinol.
9:670-678,1995）。それにより、ゲルダナマイシンはステロイド受容体複合体の
解離を促進し、複合体のホルモン反応型の再組立てを遮断することにより、ホル
モン活性化を抑制し、最終的にホルモン受容体の分解をもたらす。ゲルダナマイ
シンは、組立ての中間段階において、プロゲステロン受容体（PR）複合体（Smit
hら,Mol.Cell.Biol.15:6804-6812,1995）及び糖質コルチコイド（GR）複合体（C
zarら,Biochem.36:7776-7785,1997）の組立てを遮断するため、ホルモン結合ド メインが適切に折り畳まれず、従ってステロイドと高親和性で結合することがで
きない（例えば、約10nM未満の濃度で存在するステロイド・リガンドに結合でき
ない）。ゲルダナマイシンはまた、エストロゲン及びアンドロゲンのホルモン受
容体にも作用することが知られている（Smithら,Mol.Cell.Biol.15:6804-6812,1
995;Nairら,Cell Stress and Chaperones 1:237-250,1996）。9Sから4Sへの変換
、又はDNA結合活性の獲得のいずれかにより測定されるGR及びPRの形質転換は、h
sp-90からのステロイド受容体の解離と相関している（例えば、Meshinchiら,J.B
iol.Chem.265:4863-4870,1990;Kostら,Mol.Cell.Biol.9:3829-3838,1989を参照 のこと）。

【００２３】 本発明に従い見出されたもう一つのクラスの神経栄養剤は、SRCのFKBP-52構成
要素に作用するものである。驚くべきことに、神経栄養免疫抑制剤FK506の作用 は、hsp-90のコンフォメーション変化を誘導し、FKBP-52との相互作用を介して いることが見出され、hsp-90からのp23の解離を可能にし、それにより成熟SRCの
組立てを妨害する。本発明はまた、やはり成熟SRCの組立てを阻害する抗FKBP-52
抗体も含む。FK506とGR関連FKBP-52との結合により、デキサメタゾン反応性のGR
の核内移行の増加、及びGR媒介性遺伝子発現の増強が引き起こされる（Sanchez 及びNing、METHODS:A Companion to Meth.Enzymol.9:188-200,1996）。

【００２４】 FKBP-52及びCyP40はhsp-90に直接的に結合し、FKBP-52とCyP40はhsp-90との結
合を相互に競合する。CyP40は、サイクロスポリンA（CsA）が標的とするタンパ ク質及びそのアナログの一例である。これらのイムノフィリンは、互いに排他的
な様式でhsp-90に結合し、別々にCyP40-hsp-90複合体及びFKBP-52-hsp-90複合体
を形成させる（Ratajczak及びCarrello,J.Biol.Chem.271:2961-2965,1996）。FK
BP-52、CyP40、及びPP5のようなイムノフィリン、並びにp60及びMas70pのような
非イムノフィリン・タンパク質は、一つ又は複数のテトラトリコペプチド・リピ
ート（TPR）ドメイン（Ratajczakら,J.Biol.Chem.268:13187-13192,1993）を有 し、hsp-90のTPR結合ドメインと結合する。タンパク質におけるTPRドメイン数の
増加は、hsp-90結合親和性の増加と相関していると考えられる。従って、一つ又
は複数のTPRドメインを有しているペプチドは、hsp-90結合親和性を増加してい ることが予想され、成熟ステロイド受容体複合体の組立てに必要なFKBP-52とhsp
-90との会合を妨害すると考えられる。

【００２５】 例えば、FKBP-52及びCyP40両方とhsp-90との結合は、3つのTPRドメインを含む
ヒトCyP40の精製された断片によって、及び4つのTPRドメインを含むラットPP5の
断片により競合的に阻害される（Pratt及びToft,Endocrine Rev.18:306-360,199
7の総説による）。従って、そのような精製された断片、又は一つもしくは複数 のTPRドメイン（特に、2つ、3つ、もしくはそれ以上のTPRドメイン）を含むPP5 、p60、及びMas70のような他のペプチドは、ステロイド受容体複合体の組立て又
は機能の妨害に適しており、本発明の範囲に含まれる。

【００２６】 ゲルダナマイシン及び本発明の他の神経栄養剤の効果は、これらの化合物とス
テロイド受容体複合体の構成要素との結合により生じ、直接的（hsp-90との結合
、もしくはhsp-90とステロイド受容体との結合の妨害により）、又は間接的（そ
れ自体がhsp-90と結合するFKBP-52のようなポリペプチド、もしくはp23と結合す
るポリペプチドとの結合により）に、又はhsp-90もしくはp23とステロイド受容 体複合体との会合を抑制することにより、ステロイド受容体複合体からのhsp-90
の解離が引き起こされると考えられる。hsp-90が複合体を形成し、他のhsp-90基
質タンパク質のためにそのシャペロン機能を実行する能力の妨害もまた、FK506 及び／又はゲルダナマイシンによる観察されている神経再生刺激の原因であるか
、又はそれに寄与していると考えられる。成熟ステロイド受容体複合体の機能を
妨害する薬剤（準成熟複合体又はフォールドソームのような、成熟複合体の前駆
体の妨害を含む）も、本発明の範囲に含まれる。

【００２７】 本発明の神経栄養化合物の特定の態様は、カルシニューリン阻害を実質的に含
まず、低いロータマーゼ阻害、例えば、約1nMより大きい、又はさらには5もしく
は10nMより大きいIC_５０を有しうる。

【００２８】略語及び定義 AR：アンドロゲン受容体。

【００２９】 ER：エストロゲン受容体。

【００３０】 GR：糖質コルチコイド受容体。

【００３１】 PR：プロゲステロン受容体。

【００３２】 SRC：ステロイド受容体複合体。これらに限定されないが、プロゲステロン受 容体、糖質コルチコイド受容体、エストロゲン受容体、アンドロゲン受容体、及
び鉱質コルチコイド受容体を含む、任意のステロイド受容体に関連した多重タン
パク質複合体。

【００３３】 TPR：テトラトリコペプチド・リピートは、FKBP-52のドメインIIIである。TPR
は、34アミノ酸からなる縮重コンセンサス配列であることが、シコルスキ（Siko
rski）ら（Cell 60:307-317,1990）により最初に同定された。

【００３４】 疑似体：医薬品と類似の効果を有する（ペプチドのような）生物学的化合物、
例えば、hsp-90のゲルダナマイシン結合部位に結合することにより、ベンゾキノ
ン・アンサマイシンと類似の効果を有するペプチド。

【００３５】 ステロイド受容体複合体のステロイド・ホルモン結合部位に対するリガンド：
受容体サブタイプに対する既に認識されたリガンド。例えば、GRに対するデキサ
メタゾン、ERに対するエストロゲン、ARに対するテストステロン、PRに対するプ
ロゲステロン。

【００３６】 イムノフィリン：シス・トランス異性化を生じるPPIアーゼ活性を有するシャ ペロン・タンパク質の高度に保存されたファミリー。イムノフィリンは、低分子
量イムノフィリン（40kD未満）と高分子量イムノフィリン（40〜65kD）とに分類
される。高分子量イムノフィリン（例えば、FKBP-52）は、FKBP-12とは対照的に
、hsp-90との結合を媒介するテトラトリコペプチド・リピート（TPR）を3つ又は
それ以上含む。イムノフィリンは、サイクロスポリンA（シクロフィリン）又はF
K506及びラパマイシン（FK結合タンパク質、FKBP）のいずれかに結合する能力に
基づき、さらに2つのクラスに分類されうる。イムノフィリンのFKBPファミリー のメンバーには、FKBP-12、FKBP-13、FKBP-25、FKBP-52（FKBP-59とも呼ばれる ）及びFKBP-65が含まれる。PP5も、シルバーステイン（Silverstein）ら（J.Bio
l.Chem.272:16224-16230,1997）により報告されたように、FK506に弱く結合する
ため、このファミリーのメンバーであると見なされる。

【００３７】 NGPA：神経成長促進剤。「神経成長促進剤」又はNGPAは、特定の作用メカニズ
ムに限定されることなく、hsp-90及びFKBP-52（これらに限定されない）を含む 構成要素のような、ステロイド受容体複合体のポリペプチド構成要素に結合し、
神経再生を促進する物質として定義される。特定の態様において、NGPAは、FKBP
-12に結合せず（又は低親和性で、もしくは1μMより大きいKdで結合し）、低い ロータマーゼ阻害活性（2500nMより大きい見かけKi）を有し、カルシニューリン
に低親和性で結合し（結合に30μMより大きい濃度を必要とし）、又は薬剤が投 与された被験者において総血液リンパ球数の減少が実質的に存在しないことによ
り測定される非免疫抑制性を有する。NGPAには、これらに限定されないが、以下
の化合物が含まれる：非FKBP-12結合性（「非結合性」）又は低親和性FKBP-12結
合性のFK506アナログ；ゲルダナマイシン、ゲルダナマイシンの天然に存在する アナログ（これらに限定されないが、ハービマイシンA及びマクベシン（DeBoer ら,J.Antibiot.(Tokyo)23:442-447,1970;Omuraら,J.Antibiot.(Tokyo)32:255-26
1,1979;Onoら,Gann.73:938-944,1992）を含む）、並びにゲルダンピシン（gelda
mpicin）、ツニカマイシン、及びジヒドロゲルダナマイシンのようなそれらの構
造的なアナログ及び誘導体、さらに実施例12に列挙された化合物を含むベンゾキ
ノン・アンサマイシン；SRCの構成要素を妨害するか、又は競合的に結合する、 （TPRドメインのような）複合体の構成要素間の相互作用部位に、ステロイド受 容体複合体の特定のポリペプチド構成要素のアミノ酸配列を含むペプチド；並び
にステロイド受容体複合体のポリペプチド間の相互作用を妨害する、ステロイド
受容体複合体のポリペプチド構成要素に特異的に結合する抗体、例えば抗hsp-90
、抗FKBP-52など。神経栄養剤には、（SRCの会合の阻害もしくは解離の促進のい
ずれかにより）成熟SRCの会合を物理的に破壊するか、又はSRCの（p23、FKBP-52
、もしくはhsp-90のような）構成要素の相互作用を阻害する化合物が含まれる。

【００３８】 神経栄養性：神経成長の促進。

【００３９】 形質転換：9S非DNA結合型ステロイド受容体複合体から4S DNA結合型への変換 。「活性化」という用語は、ステロイド・リガンド非結合型からステロイドリガ
ンド結合型へのステロイド受容体の変換をさす。

【００４０】 ロータマーゼ活性：ロータマーゼ（PPIアーゼ）活性は、例えば国際公開公報 第92/04370号のようにして決定され、K_ｉとして表されうる。モデル基質、N-ス クシニル-Ala-Ala-Pro-Phe-4-ニトロアナリド（nitroanalide）におけるアラニ ン−プロリン・ペプチド結合のシス・トランス異性化を、基質のトランス型から
4-ニトロアナリドを放出させるキモトリプシンを用いたカップル・アッセイにお
いて分光学的にモニターすることができる。異なる濃度の阻害剤の添加による、
反応の程度に対する阻害効果が決定され、阻害剤濃度の関数としての一次速度定
数の変化の解析により見かけK_ｉの推定値が得られる。本発明のアッセイにおい て、ロータマーゼ活性は、化合物の神経栄養活性とは関連がなく、決定される必
要がないことが見出された。

【００４１】 （FKBP-12結合化合物又はFK506アナログのような）「公知の」又は「認識され
た」化合物とは、特許又は文献において従来報告されているもの、又は報告され
ていないが先行技術として認可されるものである。

【００４２】 実施例1 神経成長促進剤を同定するためのアッセイ 神経再生を刺激する候補化合物の一次スクリーニングとして用いられうる、hs
p-90、FKBP-52、及びステロイド受容体複合体の他のポリペプチド構成要素に結 合する化合物を解析するための周知の方法が多数存在する。化合物は、続いて、
神経再生刺激における活性についてインビトロ又はインビボで試験されうる。

【００４３】 実施例は、被検化合物とステロイド受容体複合体の構成要素であるポリペプチ
ドとの結合に関するアッセイを含む。hsp-90との結合を検出するためのアッセイ
は、例えば、ホワイトセル（Whitesell）ら（Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:8324-
8328,1994）により記載されている。20μg/mLのTNESV緩衝液（50mM Tris-HCl,pH
7.4/1％ Nonidet P-40/2mM EDTA/100mM NaCl/1mM オルトバナジン酸塩/1mM フェ
ニルメチルスルホニルフルオリド/1mL当たり20μgのロイペプチン/1ml当たり20 μgのアプロチニン）に溶解した市販品のhsp-90（StressGen Biotechnologies,V
ictoria,BC）及び被検化合物を、一般的な固体支持体に固定化されたゲルダナマ
イシン、例えばゲルダナマイシンがカップリングしたアガロース・ビーズ（Whit
esellら,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:8324-8328,1994）と共に、4℃で45分間イ ンキュベートする。次に、TNESV緩衝液でビーズを洗浄し、還元ローディング緩 衝液中で加熱することにより結合したhsp-90を溶出させる。それを、SDS/PAGE及
び銀染色（Bio-Rad）により解析することができる。又は、hsp-90が標識されて いる場合には、非結合標識ではなく結合標識に関してアッセイを行うことができ
る。ゲルダナマイシンと競合してhsp-90に結合する被検化合物は、可溶化hsp-90
とビーズとの結合を阻害する。

【００４４】 他のステロイド受容体複合体ポリペプチド構成要素に結合する化合物を同定す
るため、類似のアッセイ法を行うことができる。FKBP-52との結合は、組換えFKB
P-52（Peattieら,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10974-10978,1992）を用いてアッ
セイされうる。p23との結合は、組換えヒトp23（Johnsonら,Mol.Cell.Biol.14:1
956-1963,1994）及び固定化hsp-90を用いてアッセイされうる。精製されたhsp70
及び組換えp60（Dittmarら,J.Biol.Chem.271:12833-12839,1996）も、そのよう な結合アッセイにおいて利用可能である。

【００４５】 一般的なイムノアッセイ法、及びステロイド受容体複合体構成要素に特異的な
抗体、例えば、FKBP-52（Taiら,Biochem.25:5269-5275,1986）、hsp-90（Sanche
zら,J.Biol.Chem.260:12398-12401,1985;Catelliら,EMBO J.4:3131-3135,1985;S
chuhら,J.Biol.Chem.260:14292-14296,1985）、hsp70（hsp-90も認識する血清）
（Erhartら,Oncogene 3:595-603,1988）、及びp23（Johnsonら,Mol.Cell.Biol.1
4:1956-1963,1994）に対する抗体を用いて、イムノアッセイを行うこともできる
。

【００４６】 受容体複合体からのhsp-90の解離を含む、受容体形質転換に関する通常行われ
ている定量解析は、ホスフォセルロース（Kalimiら,J.Biol.Chem.250:1080-1086
,1975;Atger及びMilgrom,Biochem.15:4298-4304,1976）、ATP−セファロース（T
oftら,J.Steroid Biochem.7:1053-1059,1976;Miller及びToft,Biochem.17:173-1
77,1978）、及びカルボキシメトール−セファデックス（Milgromら,Biochem.12:
5198-5205,1973;Parchman及びLitwack,Arch.Biochem.Biophys.183:374-382,1977
）のようなポリアニオンに結合する状態へ受容体複合体を変換する。

【００４７】 神経細胞成長（神経突起伸展）に関するインビトロ・アッセイは、実施例2及 びゴールド（Gold）ら（Exp.Neurol.147:269-278,1997）によって提供されてい る。ラット座骨神経に対する挫傷の後の神経再生及び機能回復に対する被検化合
物の全身投与の効果を検査する、神経再生に関するインビボ・アッセイは、例え
ば、ゴールド（Gold）ら（Restor.Neurol.Neurosci,6:287-296,1994）、ゴール ド（Gold）ら（J.Neurosci.15:7505-7516,1995）、ワング（Wang）ら（J.Pharma
col.Exp.Therapeutics 282:1084-1093,1997）、ゴールド（Gold）ら（Exp.Neuro
l.147:269-278,1997）、及びゴールド（Gold）ら（Soc.Neurosci.Abst.23:1131,
1997）において論じられている。麻酔を受けたラットの座骨神経を露出させ、股
関節部のレベルで鉗子を用いて神経に挫傷を与える。座骨神経挫傷の後、例えば
皮下注射又は経口投与により被検化合物をラットに投与する。機能回復を、動物
が脚を立て爪先を動かすことができるようになるまでの神経挫傷からの日数、及
び動物が後肢及び爪先で歩行することができるようになるまでの日数を決定する
ことにより調べる。

【００４８】 神経再生は、挫傷部位からの既知の距離（0.5cm）の座骨神経から組織を採取 し、光学顕微鏡により有髄線維の数を計数することによっても調べられる。軸索
のサイズを電子顕微鏡により計測する。適当なソフトウェアを有するコンピュー
タに接続されたデジタル化タブレットを用いて軸索鞘を追跡することにより、有
髄線維及び無髄線維両方の軸索域を決定する。これらのデータから累積ヒストグ
ラムを構築し、被検化合物投与の軸索域に対する効果を調べるため、平均値及び
標準誤差を計算する。

【００４９】 実施例2 FK506及びゲルダナマイシンは共通のメカニズムにより神経再生を促進する 本実施例は、FK506及びゲルダナマイシンが共通のメカニズムにより神経再生 を促進することを例示する。SH-SY5Yヒト神経芽腫細胞を、10％ウシ胎児血清（S
IGMA）、50IU/mLペニシリン、及び50mg/mLストレプトマイシン（GIBCO）が添加 されたDMEM培地（GIBCO）中で、37℃、7％CO_２で維持した。細胞を、1×10^６個 ／ウェルで6穴プレートに播き、0.4mMアフィジコリン（SIGMA）で処理した。5日
目、細胞を洗浄し、DMEM培地に溶解したFK506（1及び10nM）（Calbiochem-Novab
iochem Int'l.,La Jolla,CA）及び／もしくはゲルダナマイシン（0.1、1、及び1
0nM）（Calbiochem-Novabiochem,La Jolla,CA）の存在下又は非存在下で、（突 起伸展を誘導するため）10ng/mLの神経成長因子（NGF）（Boehringer Mannheim,
Indianapolis,IN）で処理した。培地を96時間後に交換し、さらに72時間（総時 間168時間）後に、化合物（NGFとFK506及び／又はゲルダナマイシンとの混合物 ）を含む新鮮培地と交換した。軸索長の上位50％を統計解析用に選択した。全て
の実験を2連ウェルで行い、再現性のため少なくとも2回反復した。

【００５０】 細胞の神経突起長の解析のため、72時間目及び168時間目に、1ウェル当たり20
視野を無作為に撮影した。適当なソフトウェア（Bioquant IV,R&M Biometrics,N
ashville,TN）を有するIBM XTコンピュータに接続されたヒューストン・インス トルメントHI-PAD（Houston Instrument HI-PAD）デジタル化タブレットを用い て写真上で神経突起長を測定し、細胞体の長さの2倍よりも長い突起のみを測定 した。同一の処理を受けたウェルからのデータは差がなかったことからそれらを
合わせた。これらのデータから平均値及びヒストグラムを構築した。分布の形状
を仮定しないマン・ホイトニー（Mann-Whitney）U検定を用いてヒストグラムを 比較した。

【００５１】 未処理の細胞及び処理を受けた細胞の神経突起の平均長を表1に示す。

【００５２】

【表１】 NGF存在下でのゲルダナマイシン処理168時間後の神経突起における上位50％の平
均長

【００５３】 ゲルダナマイシン及びFK506は、各々、濃度依存的に神経突起伸展を刺激する 。ゲルダナマイシン及びFK506の類似の神経栄養効果、極めて低い濃度（例えば 、0.1nM；データは示していない）での相加的な効果、及び高濃度での阻害効果 （高濃度の単独の各化合物など）から、2つの化合物が、共通のメカニズムによ り神経細胞に作用して神経突起を促進することを証明された。以下の実施例に例
示されるように、そのメカニズムは、両化合物とステロイド受容体複合体の構成
要素との相互作用を含むことがここで見出された。FKBP-12は、ゲルダナマイシ ン又はFK506のいずれかによる神経突起伸展の刺激において役割を果たさないよ うである。

【００５４】 SH-SY5Yヒト神経芽腫細胞以外の細胞系が、神経成長アッセイにおいて用いら れうる。適当な他の細胞系の例には、PC-12（ラットクロム親和細胞腫）、LA-N-
5細胞（SH-SY5Yよりも分化の程度が低いヒト神経芽腫細胞）、及びNeuro-2a細胞
及びNS20Y細胞（マウス神経芽腫）が含まれる。

【００５５】 実施例3 FKBP-12ノックアウト・マウスはFKBP-12が神経栄養活性に関与していないこと
を証明する FK506が神経伸長を増加させる能力にとってFKBP-12が必要であるか否かを試験
するため、FKBP-12ノックアウト・マウス（Shou.ら,Nature 391:489,1998）を用
いた。そのようなマウスは、通常、胚期14.5日目（E14.5）から出生の間に重篤 な心筋症により死亡し、これはFKBP-12とカルシウム放出チャンネルとの既知の 関係と一致している。これらのマウスの脳には、著しい病理は認められていない
。E18.5ホモ接合性FKBP-12ノックアウト・マウス及び野生型マウスから、一次ニ
ューロン海馬培養物を調製した。FKBP-12ノックアウト・マウス及び野生型マウ スにおける、FK506によるニューロンの再生促進反応には、違いが見出されなか った。海馬ニューロンの平均軸索長は、薬物無添加の細胞培養物において（それ
ぞれ203±9.5及び219±8.0；平均値±S.E.M.）［二元配置ANOVA及び最小有意差 のシェフェ試験；p＝0.68、df＝230］又はFK506処理培養物において（それぞれ2
64±18.2及び276±11.1）［二元配置ANOVA及び最小有意差のシェフェ試験；p＝0
.94、df＝112］、FKBP-12ノックアウトマウスと野生型マウスとで有意に異なら なかった。

【００５６】 FK506は、FKBP-12ノックアウト・マウス［二元配置ANOVA及び最小有意差のシ ェフェ試験；p＜0.006、df＝144］及び野生型マウス［二元配置ANOVA及び最小有
意差のシェフェ試験；p＜0.002、df＝198］由来の細胞において、同様に、未処 理の値よりも大きな有意な増加、即ちそれぞれ30％及び26％の増加を誘発した。
このように、FKBP-12ノックアウト・マウス由来のニューロン細胞は、FK506の神
経突起伸展促進特性に対する反応性を保持している。従って、FKBP-12は、FK506
が神経突起伸展をインビトロで促進するために必要ではない。

【００５７】 実施例4 FKBP-52はFK506の神経栄養活性を遮断する ヒト神経突起伸展をインビトロで検査し、いずれのニューロイムノフィリンが
効果を媒介するのかを探究するため、神経芽腫SH-SY5Y細胞を用いた。SH-SY5Y細
胞は、外因性の神経成長因子（NGF）の非存在下では突起を伸長させず、10ng/ml
NGFにおいて神経栄養活性が最適となる。初期研究により、図3に示されている ように、FK506が濃度依存的にSH-SY5Y細胞の神経突起伸展を増加させることが示
された。神経突起長の累積ヒストグラムより、10pM〜10nMのFK506が有意に［マ ン・ホイトニーU検定（α＝0.05）］神経突起伸展を増加させることが示された 。しかし、100nMでは効果が低く、1000nM又はそれ以上の濃度では神経突起伸展 が阻害された。

【００５８】 FKBP-52の関与は、FKBP-12と相互作用しないマウス・モノクローナル抗体FKBP
-52Ab（StressGen Biotechnologies Corp.,British Columbia,Canada）を用いて
証明された。抗体を細胞内に導入するため、抗体の存在下で10分間サポニン（30
μg/μl）を処理してSH-SY5Y細胞を透過性化した。予備実験で、サポニン処理に
よりNGF単独に対する細胞の反応性は変化しないことが示された。図4に示されて
いるように、FKBP-52抗体は、50nMと100nMの間で濃度依存的に、FK506（1及び10
nM）がSH-SY5Y細胞の神経突起伸展を促進する能力を有意に［マン・ホイトニーU
検定（α＝0.05）］遮断した。神経突起長の累積ヒストグラムより、100nMのFKB
P-52抗体はこれらの濃度におけるFK506の作用を完全に遮断することが示された 。驚くべきことに、抗体は、FK506の作用のみならずNGFの作用も遮断した。この
ことから、おそらくMAPキナーゼ経路（ERK2）が関わるシグナル伝達経路の収束 が示唆される。関与している基本メカニズムに関わらず、FK506の神経突起伸展 促進特性は、イムノフィリンFKBP-52との相互作用に完全に依存している。

【００５９】 実施例5 FKBP-52抗体は神経突起伸展を促進する FKBP-52抗体（FKBP-52Ab）自体は、神経突起伸展に対してアゴニスト特性を有
する。図5の神経突起長の累積ヒストグラムより、FKBP-52Abが、有意に［マン・
ホイトニーU検定（α＝0.05）］、濃度依存的に、神経突起長の分布をより長い 突起を示す右方向にシフトさせたことが示されている。実際、FKBP-52Abは、FK5
06（10nM）で観察される最大の神経突起よりも長い神経突起を単位時間当たりに
誘導し、現在までのところ見出された最も速く成長するいくつかの神経突起を生
成させた（最大長880m）。これらの所見は、神経突起伸展を増加させる能力を維
持しつつ、FKBP-52とFKBP-12とを区別することができる（即ち、両イムノフィリ
ンに実質的に結合しない）化合物を開発できる可能性があることを証明している
。この所見より、新規なクラスのニューロイムノフィリン・リガンド、すなわち
FKBP-12結合親和性が低いか、もしくは存在せず、SRCの構成要素に特異的に結合
し、FKBP-52（又は、p23もしくはhsp-90のようなSRCの他の構成要素）と選択的 に相互作用することにより神経再生を増加させる、ニューロイムノフィリン化合
物の開発が可能となる。

【００６０】 合成糖質コルチコイド、デキサメタゾン（図6）及びβ-エストラジオール（図
7）はいずれも、濃度依存的に、SH-SY5Y細胞における神経突起伸展を有意に増加
させた。β-エストラジオール（50nM）は、神経突起伸展においてデキサメタゾ ン（50nM）よりも有意に［マン・ホイトニーU検定（α＝0.05）］より顕著な陽 性効果を生じ、SH-SY5Y細胞におけるエストロゲン受容体複合体の関与がより顕 著であることが示唆された。このことは、β-エストラジオールとFK506との組み
合わせがさらに有意な［マン・ホイトニーU検定（α＝0.05）］神経突起伸展の 増加を生じず、これらの化合物が同一のステロイド受容体サブタイプに作用する
ことが示唆された、図7に示されたデータによっても裏付けられた。対照的に、 デキサメタゾンとFK506との組み合わせは、FKBP-52抗体調節下の場合より速くは
ないにしても、少なくとも同等の速さで成長する神経突起（最大長960μm）を生
じ、デキサメタゾンとFK506が異なるステロイド受容体サブタイプに作用するこ とが示唆された。以上を考え合わせると、FK506及びβ-エストラジオールにより
誘発される最大神経突起伸展が相加的でないという所見から、FK506によるヒトS
H-SY5Y神経突起伸展促進において、エストロゲン受容体複合体が糖質コルチコイ
ド受容体複合体よりも大きな役割を果たしていることが示唆される。

【００６１】 実施例6 ゲルダナマイシンはステロイド受容体複合体の破壊により神経突起伸展を促進
する 成熟ステロイド複合体（FKBP-52及びp23を含む）の再会合を遮断し、それによ
りステロイド反応要素の核内移行及び活性化を抑制する、ベンゾキノン抗生物質
であるゲルダナマイシンで、SH-SY5Y細胞を処理した。図8に示されているように
、単独のゲルダナマイシン（0.1〜10nM）は、濃度依存的な様式で有意に［マン ・ホイトニーU検定（α＝0.05）］神経突起伸展を増加させた。このように、ス テロイド受容体複合体の破壊は、神経突起伸展を増加させるのに充分である。ゲ
ルダナマイシン及びステロイド・ホルモンはステロイド受容体リガンド構成要素
の核への移行に逆の効果を有しているため、これらの結果は、これらの化合物の
神経突起伸展に対する促進効果が、ステロイド受容体リガンド結合構成要素の核
内移行及びステロイド反応要素の活性化以外のメカニズムにより媒介されている
ことを証明している。そこで、この情報を用いて、神経再生において使用できる
新規なクラスのhsp-90結合化合物を開発するため、ゲルダナマイシンの構造を活
用することが可能である。

【００６２】 ステロイド受容体複合体の破壊を決定するためのアッセイ法は、実施例10に記
載されている。

【００６３】 実施例7 他の化合物と組み合わせたゲルダナマイシンの神経栄養効果 他の神経栄養物質とゲルダナマイシンとの相互作用を探究するため、SH-SY5Y 細胞を1nM（示されていない）又は10nMのゲルダナマイシン及び様々な他の化合 物で共処理した（図9〜12）。一方で、ゲルダナマイシン（10nM）は、有意に［ マン・ホイトニーU検定（α＝0.05）］、FK506（図9）、デキサメタゾン（図10 ）又はβ−エストラジオール（図11）による神経突起伸展促進を阻害した。0.1n
Mのゲルダナマイシンは、これらの化合物全ての神経突起伸展促進の阻害効果が 低かった（示されていない）。他方、ゲルダナマイシン（10nM）は、有意に［マ
ン・ホイトニーU検定（α＝0.05）］、FKBP-52抗体の神経突起伸展促進効果を増
強した（図12）。FKBP-52抗体とゲルダナマイシンとの組み合わせ効果は、hsp-9
0におけるそれらの結合部位が異なっていることと一致している。ゲルダナマイ シンはhsp-90のN末端部分に結合し、FKBP-52はC末端部分に結合する（Scheigel ら,J.Bio.Chem.272:8007,1997）。この所見は、ステロイド・レベルにおける相 互作用が試験された化合物全てについて複合的であることを示しているが、抗体
が多少異なって作用することを明らかにしている。

【００６４】 これらの所見は、ゲルダナマイシンがhsp-90の（解離ではなく）コンフォメー
ション変化を生じさせ、それによるアデノシントリホスファターゼ活性を介して
p23が複合体から解離する活性化（アデノシンジホスフェート）状態がもたらさ れる、図2に示されたモデルにより説明されうる。対照的に、FKBP-52がFK506と 結合している場合にはFK506は複合体からFKBP-52を解離させないため、このコン
フォメーション変化は遮断され、これによりp23の放出が抑制される。ステロイ ド・ホルモンの存在下では、hsp-90のコンフォメーション変化を抑制するための
類似の相互作用が生じうる。このモデルは、FKBP-52抗体が、おそらくリン酸化 の程度を変化させ、それによりhsp-90との結合を減少させることにより、複合体
からFKBP-52を解離させ、p23の放出をもたらすhsp-90のコンフォメーション変化
が起こることを示している。したがって、hsp-90からのFKBP-52の解離が、ゲル ダナマイシンにより誘導され、p23を放出させるコンフォメーション変化を妨げ ないため、ゲルダナマイシンとFKBP-52抗体との組み合わせは（阻害的ではなく ）相加的である。

【００６５】 さらに、hsp-90からの解離後のFKBP-52と微小管（Czarら,Mol.Endocrinol 8:1
731,1994）及びおそらくアクチンのようなミクロフィラメント（Taiら,Biochem.
32:8842,1993）との会合は、FKBP-52抗体を用いた場合に、FK506を用いた場合よ
りも顕著に神経突起伸展を促進すると思われる。微小管は、神経突起伸展及び軸
索伸長に関与しており、従って（SRCからの解離後の）FKBP-52とこれらの要素と
の会合は神経突起成長を促進する特に効果的なメカニズムである。

【００６６】 実施例8 ステロイド受容体複合体の安定化は神経突起伸展を阻害する 本実施例は、図2に示されたモデルにより予測されるように、ステロイド受容 体複合体の解離の抑制により神経突起伸展が阻害されることを示す。SH-SY5Y細 胞を、20mMの濃度で無傷の細胞における複合体の解離を抑制する遷移金属オキシ
アニオン（oxyanion）である、モリブデン酸ナトリウムで処理した。驚くべきこ
とに、モリブデン酸塩（20mM）自体は、神経突起伸展に対して穏和ではあるが有
意な［マン・ホイトニーU検定（α＝0.05）］アゴニスト効果を示した（図13） 。予測通り、モリブデン酸塩（20mM）は、FK506により誘発される神経突起伸展 促進を減少させ、モリブデン酸塩の存在下でFK506により生成される神経突起長 の分布はモリブデン酸塩単独の場合と有意な差はなかった［マン・ホイトニーU 検定（α＝0.05）］（図13）。さらに、モリブデン酸塩（20mM）は、有意に［マ
ン・ホイトニーU検定（α＝0.05）］、FKBP-52抗体の神経突起伸展促進効果を阻
害した（図14）。

【００６７】 デキサメタゾンの存在下でのモリブデン酸塩（20mM）の神経突起伸展促進効果
は、モリブデン酸塩単独の場合と比較して有意に［マン・ホイトニーU検定（α ＝0.05）］減少した（図15）。さらに、モリブデン酸塩（20mM）はβ−エストラ
ジオール（図16）及びゲルダナマイシン（図17）の神経突起伸展促進効果を完全
に［マン・ホイトニーU検定（α＝0.05）］阻害した。モリブデン酸塩とβ−エ ストラジオールとの相互作用の程度がモリブデン酸塩とデキサメタゾンとの相互
作用の程度よりも大きいのは、ヒトSH-SY5Y神経突起伸展におけるエストロゲン 受容体複合体の関与がより大きいことと一致している。モリブデン酸塩は、比較
的低い（2mM）濃度では、類似の、しかし比較的顕著でない効果を生じた（示し ていない）。

【００６８】 単独のモリブデン酸塩が、どのようにして伸展を増加させるのかは明らかでな
いが、データ（モリブデン酸塩がFKBP-52抗体を含む全ての薬剤の活性を阻害す ることを示している）は、受容体複合体の解離が神経突起発達経路の活性化にと
って重要な段階であることを示している。モリブデン酸塩によるこの解離の抑制
は、ゲルダナマイシン、及び複合体の会合を破壊することにより作用する他の神
経栄養剤の神経栄養活性を阻害する。従って、アッセイにモリブデン酸塩を添加
することによって引き起こされる神経栄養活性の阻害は、神経栄養剤が構造的又
は機能的にSRCを破壊しているか否かを決定するための試験を構成しうる。

【００６９】 実施例9 ロータマーゼ阻害活性の決定 本発明のいくつかの態様は、ペプチジルプロピルイソメラーゼ（ロータマーゼ
）活性の阻害が低いか、または存在しない。この活性の阻害は、米国特許第5,61
4,547号に記載されているような、当技術分野において既知の方法により評価さ れうる。阻害は、モデル基質N-スクシニル-Ala-Ala-Pro-Phe-p-ニトロアニリド 内のアラニン−プロリン・ペプチド結合のシス・トランス異性化に関する見かけ
Kiとして表され、これは、基質のトランス型からパラ-ニトロアニリドを放出す るキモトリプシン・カップル・アッセイにおいて分光学的にモニターされる。異
なる濃度の阻害剤の添加により引き起こされるこの反応の阻害を決定し、阻害剤
濃度の関数の一次速度定数の変化としてデータが解析され、見かけK_ｉ値が得ら れる。

【００７０】 950mlの氷冷アッセイ緩衝液（25mM HEPES、pH7.8、100nM NaCl）、10mlのFKBP
（10mM Tris-HCl pH7.5,100mM NaCl,1mMジチオスレイトール中2.5mM）、25mlの キモトリプシン（1mM HCl中50mg/ml）、及び10mlの様々な濃度の被検化合物を含
むジメチルスルフォキシドを、プラスティック・キュベットに添加する。5mlの 基質（2.35mM LiClを含むトリフルオロエタノール中に5mg/mlのスクシニル-Ala-
Phe-Pro-Phe-パラ-ニトロアニリドを含む）を添加することにより反応を開始さ せる。

【００７１】 分光光度計を用いて390nmにおける吸光度を経時的に90秒間モニターし、経時 吸光度データ・ファイルから速度定数を決定する。2500又はそれ以上、例えば50
00より大きい、もしくはさらに10,000より大きい見かけKiを有する阻害剤を、「
低い」ロータマーゼ阻害を有していると見なす。

【００７２】 実施例10 薬剤がSRCに結合し機能を破壊するか否かを決定するためのアッセイ SRCの構成要素との結合を検出するためのアッセイが実施例1に示されている。
SRCの破壊の検出は、付加的なアッセイにより検査されうる。

【００７３】 p23の放出によるSRCの破壊は、ホワイトセル（Whitesell）及びクック（Cook ）（1996）に開示された技法により調べることができ、ベンゾキノン・アンサマ
イシンとhsp-90との結合によって、デキサメタゾン結合活性の急速な非競合的な
消失に関連する糖質コルチコイド受容体免疫沈降物からのp23タンパク質が完全 な消失すること、及び糖質コルチコイド受容体タンパク質の細胞レベルにおける
遅い（2〜8時間）顕著な減少をもたらすことを示している。この方法を用いたと
ころ、hsp-90と糖質コルチコイド受容体との共沈降、及び糖質コルチコイド受容
体沈降物からの検出可能なp23の完全な消失は、薬物処理により破壊されなかっ た。

【００７４】 ホワイトセル（Whitesell）及びクック（Cook）は、TNESV緩衝液（50mM Tris-
HCl,pH7.4％/1％ Nonidet P-40/2mM EDTA/100mM NaCl/1mMオルトバナジン酸/1mM
フェニルメチルスルフォニルフルオリド/2μg/mlロイペプチン/20μg/mlアプロ チニン）で細胞を溶解し、溶解物（1回の沈降当たり0.75mgの全タンパク質）を ゲルダナマイシンがカップリングしたビーズと共にインキュベートすることによ
りアフィニティ沈降を行った。還元ローディング緩衝液中での加熱により結合タ
ンパク質を溶出させ、SDS-PAGE及びその後のクーマシーブルー染色により解析す
る。細胞溶解物からの免疫沈降を、特異的なモノクローナル抗体BuGR-2及びプロ
テインGセファロース・ビーズ（Pharmacia）を用いて実行する。GRとヘテロタン
パク質複合体構成要素との共沈降を含む実験のため、細胞を、10mMモリブデン酸
ナトリウムを含む界面活性剤を含まない低張緩衝液中に溶解する。SDS-PAGE及び
タンパク質のニトロセルロースへの電気泳動転写の後、全細胞溶解物、ゲルダナ
マイシン・アフィニティ沈降物、及び糖質コルチコイド受容体免疫沈降物におけ
るタンパク質のイムノブロット検出を行った。齧歯動物由来GRの検出にはBuGR-2
ハイブリドーマ上清（1：40）を用い、ヒトGRにはペプチド由来ウサギ・ポリク ローナル抗体（1：250；PAI-512、Affinity Bioreagents；Golden,CO）を用いる
。hsp-90及びhsp-70は、それぞれAC88抗体及びN27F3-4抗体（1：5000；StressGe
n;Victoria,BC,Canada）により検出される。p23のブロットには抗体JJ3（1：100
0）を含む腹水が用いられる。ユビキチン化タンパク質を完全に変性させ、その 検出が増強されるようブロットを20分間オートクレーブ処理した後、ユビキチン
化タンパク質を検出するため、ポリクローナル・ウサギ抗ユビキチン抗血清（1 ：500；Sigma Chemical Co.）が用いられる。検出は、適当なペルオキシダーゼ 結合二次抗体（1:20,000）及び化学発光基質（Kierkegaard and Perry Laborato
ries,Gaithersburg,MD）を用いて行われる。

【００７５】 デキサメタゾン結合活性の欠失は、HeLa細胞（2×10^５／ウェル、24穴プレー ト）を、37℃、完全培地中で、様々な時間、様々な濃度のゲルダナマイシンで処
理する、結合アッセイを用いて決定されうる。処理期の最後に、培地を吸引し、
単層を1％BSA及び0.1％アジ化ナトリウムを含む氷冷PBS（結合緩衝液）で2回洗 浄する。次に、単層を、5mM非放射性デキサメタゾンを含む、又は含まない結合 緩衝液中に1.0μCi/ウェル（48nM）の［^３H］デキサメタゾン（Amersham、82Ci/
mmol）と共に、氷上で60分間インキュベートする。この結合期の後、ウェルを冷
却結合緩衝液で4回洗浄し、次に0.5mlエタノールで30分間抽出する。エタノール
溶液をシンチレーション・バイアルに移し、蒸発乾燥させた後、標準的な液体シ
ンチレーション計数を行う。特異的な結合を、過剰の非放射性デキサメタゾンの
非存在下で結合した1分間当たりのカウントから、その存在下で結合した1分間当
たりのカウントを減じたものとして計算する。デキサメタゾンをエストロゲン及
び他のステロイドに置き換えることにより、これらのステロイドの受容体を用い
て類似の測定を行い、リガンド結合の破壊を検出することができる。

【００７６】 受容体免疫沈降物からの検出可能なp23の消失（p23バンドの消滅）は、SRCの 破壊に関連したp23の消失を示している可能性がある。

【００７７】 実施例11 抗体の調製 本発明は、SRCの構成要素に対する抗体の調製も考案している。SRCの構成要素
は、免疫沈降のような、当技術分野において既知の技法により精製されうる。モ
ノクローナル抗体又はポリクローナル抗体は、SRC構成要素タンパク質、ペプチ ド断片、又はこれらのタンパク質の変異型のいずれかに対して作製されうる。最
適には、タンパク質に対して作製された抗体は、タンパク質を特異的に検出する
と考えられる。即ち、タンパク質に対して作製された抗体は、そのタンパク質を
認識し結合し、ヒト細胞において見出される他のタンパク質を実質的に認識又は
結合しないと考えられる。抗体がタンパク質を特異的に検出することについては
、多数の標準的なイムノアッセイ法のうちのいずれか、例えばウェスタンブロッ
ティング法（Sambrookら,1989）により決定される。

【００７８】 特定の抗体調製物がタンパク質を特異的に検出することをウェスタンブロッテ
ィングにより決定するため、ヒト細胞（例えば、リンパ球）から全細胞タンパク
質を抽出し、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動す
る。次に、ウェスタンブロッティングによりタンパク質をメンブレン（例えば、
ニトロセルロース）に転写し、抗体調製物をメンブレンと共にインキュベートす
る。非特異的に結合した抗体を除去するためメンブレンを洗浄した後、特異的に
結合した抗体の存在をアルカリホスファターゼのような酵素に結合した抗マウス
抗体を用いることにより検出する。基質5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリルホスフ
ェート／ニトロブルーテトラゾリウムの適用により、免疫学的に局在化したアル
カリホスファターゼによる濃青色化合物が生成される。

【００７９】 タンパク質を特異的に検出する抗体は、この技法により、（その分子量により
決定されるゲル上の特定の位置に位置すると考えられる）タンパク質バンドに結
合することが示されると考えられる。抗体と他のタンパク質との非特異的な結合
は、ウェスタンブロット上で弱いシグナルとして起こり、検出されうる。この結
合の非特異的な性質は、特異的タンパク質結合から生じた強い主要なシグナルと
比較して、ウェスタンブロット上に得られた弱いシグナルとして当業者には認識
される。

【００８０】 SRCのタンパク質構成要素に特異的に結合する抗体は、本明細書において「特 異的結合剤」と呼ばれる分子クラスに属する。SRCタンパク質に特異的に結合す ることができる特異的結合剤には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（
ヒト化モノクローナル抗体を含む）、並びにFab断片、F(ab')2断片及びFv断片の
ようなモノクローナル抗体の断片、さらにSRCのタンパク質構成要素に特異的に 結合することができる任意の他の薬剤が含まれうる。

【００８１】 記載のようにして同定され単離されたSRCタンパク質構成要素のエピトープに 対するモノクローナル抗体は、コーラー（Kohler）及びミルスタイン（Milstein
）（1975）の古典的な方法又はそれらの変法に従いマウスのハイブリドーマから
調製されうる。簡単に述べると、数週間にわたり数マイクログラムの選択された
タンパク質を繰り返しマウスに接種する。次に、マウスを屠殺し、抗体産生脾細
胞を単離する。ポリエチレングリコール法を用いて脾細胞をマウス骨髄腫細胞と
融合させ、アミノプテリンを含む選択培地（HAT培地）での系の増殖により過剰 の未融合細胞を破壊する。融合に成功した細胞を希釈し、希釈液の一部をマイク
ロタイター・プレートのウェル内に置き、培養を継続する。エングバル（Engval
l）（1980）により最初に記載されたようなELISA、及びそれらの変法のようなイ
ムノアッセイ操作により、ウェルの上清液中の抗体を検出することにより抗体産
生クローンを同定する。選択された陽性クローンを増殖させ、それらのモノクロ
ーナル抗体産物を用いるために回収する。モノクローナル抗体作製のための詳細
な操作は、ハーロー（Harlow）及びレーン（Lane）(1988)に記載されている。さ
らに、（治療適用のための）ヒト化型モノクローナル抗体、及びモノクローナル
抗体の断片を作製するためのプロトコルは、当技術分野において既知である。

【００８２】 単一のタンパク質の異種エピトープに対する抗体を含むポリクローナル抗血清
は、発現タンパク質で適当な動物を免疫することにより調製することができ、こ
の発現タンパク質は、修飾されていなくても、又は免疫原性を増強させるため修
飾されていてもよい。効果的なポリクローナル抗体産生は、抗原及び宿主種の両
方に関連した多くの因子によって影響を受ける。例えば、小分子は、他よりも免
疫原性が低い傾向があり、担体及びアジュバントの使用を必要とするかもしれな
い。また、宿主動物は、接種部位及び用量に反応して変化し、不適切又は過剰の
抗原量は低力価の抗血清をもたらす。複数の皮内部位に投与された少量（ngレベ
ル）の抗原が最も信頼できる。ウサギのための効果的な免疫プロトコルは、バイ
ツカイティス（Vaitukaitis）ら（1971）に見出される。

【００８３】 一定の間隔で追加注射を与え、例えば既知の濃度の抗原に対する寒天内二重免
疫拡散により半定量的に決定される抗体力価が減少し始めたとき、抗血清は回収
されうる。例えば、オクタロニー（Ouchterlony）ら（1973）を参照のこと。抗 体のプラトー濃度は、通常、血清（約12μMで）0.1から0.2mg/mlまでの範囲であ
る。抗血清の抗原に対する親和性は、例えばフィッシャー（Fisher）(1980)によ
り記載されているような、競合結合曲線を作製することにより決定される。

【００８４】 SRCタンパク質に対する抗体を作製するための第三の手段は、SRCのタンパク質
構成要素の推定アミノ酸配列に基づき、市販のペプチド合成機で合成された合成
ペプチドを使用することである。

【００８５】 実施例12 ゲルダナマイシンのアナログ及び誘導体 「ゲルダナマイシン誘導体」という用語は、神経突起伸展を刺激する能力にお
いてゲルダナマイシンと構造的に類似している化合物をさす。ゲルダナマイシン
は、平面ベンゾキノンが埋め込まれた、閉環したアンサ環からなる。

【００８６】 アンサ環は、その骨格に平面アミド及び3個の炭素−炭素二重結合（それらの うちの2個は1,3-ジエンで配置している）が含まれており、その16個の骨格原子 のうちの9個が1個のカルボニル基、1個のカルバメート基（-OC(O)NH_２）、1個の
水酸基、2個のメトキシ基、及び4個のメチル基のような非水素置換体を保有して
いるため、立体障害を受けている。ゲルダナマイシンの結晶構造は公開されてお
り、ベンゾキノン・アンサマイシンの構造／活性相関はステビンス（Stebbins）
ら（Cell 89:239-250,1997）、シュナー（Schnur）ら（J.Med.Chem.38:3813-382
0,1995）、及びシュナー（Schnur）ら（J.Med.Chem.38:3806-3812,1995）に記載
されている。ゲルダナマイシン誘導体は、ゲルダナマイシンのカルバメート基及
びアンサ環を有していてもよく（Schurら,J.Med.Chem.38:3806-3812,1995）、な
らびに／又は官能基にC23メトキシ基及びC22メチル基のような修飾を有していて
もよい（Stebbinsら,Cell 89:239-250,1997）。ゲルダナマイシン誘導体は、米 国特許第5,3877,584号、第4,261,989号、及び第3,987,035号、並びに日本特許出
願第88041885号、第56100766号、及び第89002593号などにも論じられている。

【００８７】 ゲルダナマイシンの構造的アナログであるいくつかのベンゾキノン・アンサマ
イシンの構造を表2に公開する。

【００８８】

【表２】 ゲルダナマイシンのいくつかの構造的アナログ

【００８９】 ゲルダナマイシンのさらなるベンゾキノン・アンサマイシン・アナログを表3 及び4に示す。表3は、ゲルダナマイシン誘導体のいくつかの合成スキームを例示
しており、表4は、シュナー（Schnur）ら（J.Med.Chem.38:3813-3820,1995）に 、より完全に記載されている、誘導体のための置換を公開している。

【００９０】

【表３】 アンサ環修飾によるゲルダナマイシン誘導体の合成スキーム スキーム1 スキーム2

【００９１】

【表４】 表3に示された化合物のための置換

【００９２】

【表５】 アミノゲルダナマイシン誘導体のいくつかの合成スキーム（スキーム1）及びキ ノン修飾を有するゲルダナマイシン（スキーム2） スキーム1 スキーム2

【００９３】 表5の誘導体のためのいくつかの置換パターンを表6に示す。

【００９４】

【表６】 表5に示された化合物のためのいくつかの置換

【００９５】 アナログはまた、以下の目的のために、周知の方法により、適当な官能基を付
加することによって修飾されうる：特定の細胞画分（例えば、血液、リンパ系、
中枢神経系など）へのアナログの浸透の増加を含めた選択された生物学的特性を
増強するため、経口利用可能性を増加させるため、可溶性を増加させて注射によ
る投与を可能にするため、代謝を変化させるため、及び排出の速度を変化させる
ため。

【００９６】 いくつかの特定の態様において、アナログは約750原子量単位（a.m.u.）未満 の分子量を有する（親化合物としての量であり、そのような化合物の塩は、より
高い分子量を有していてもよい）。

【００９７】 実施例13 FK506及びラパマイシンのアナログ 「FK506アナログ」という語は、神経突起伸展を刺激する能力においてFK506に
構造的に類似している化合物をさす。V-10,367のようないくつかのFK506アナロ グは、FKBP12結合ドメインを保持しているが、カルシニューリンと相互作用する
エフェクター・ドメインの構造成分を欠いている。FK506アナログは、低い又は 高い親和性でFKBP12に結合しうる。例えば、V-10,367は、高親和性（K_ｄ＜1nM）
でFKBP12に結合する（Armisteadら,Acta.Crystallogr.51:522-528,1995）。

【００９８】 FK506と構造的に関連しており、かつFKBP12を阻害し、それにより免疫抑制を 引き起こすFK506の能力を有する化合物を設計するため、多大な努力がなされて いる。例えば、ビーラー（Bierer）ら（Science 250;556-559,1990）、バン・デ
ュイン（Van Duyne）ら（Science 252:839-842,1991）、バン・デュイン（Van D
uyne）ら（J.Mol.Biol.229:105-124,1993）、ハウスケ（Hauske）ら（J.Med.Che
m.35:4284-4296,1992）、ホルト（Holt）ら（J.Am.Chem.Soc.115:9925-9938、 1
993）、ホルト（Holt）ら（Bioorg.Med.Chem.Lett.3:1977-1980,1993）、ティー
グ（Teague）及びストックス（Stocks）（Bioorg.Med.Chem.Lett.3:1947-1950,1
993）、ワング（Wang）ら（Bioorg.Med.Chem.Lett.4:1161-1166,1994）、ヤマシ
タ（Yamashita）ら（Bioorg.Med.Chem.Lett.4:325-328,1994）、ストックス（St
ocks）（Bioorg.Med.Chem.Lett.4:1457-1460,1994）、ゴウレット（Goulet）ら （Perspect.Drug Disc.Design 2:145-162,1994）、ウィルソン（Wilson）ら（Ac
ta Cryst.D51:511-521,1995）、アーミステッド（Armistead）ら（Acta Cryst.D
51:522-528,1995）、米国特許第5,192,773号、第5,330,993号、第5,516,797号、
第5,612,350号、第5,614,547号、第5,622,970号、第5,654,332号、並びに公開さ
れた国際特許出願第92/00278号、第92/04370号、第92/19593号、第92/21313号、
第94/07858号、及び第96/40633号を参照のこと。これらの参照は、FK506、及び カルシニューリンを阻害するエフェクター・ドメイン（括弧内に示されている）
を欠いているV-10,367のようなその既知のアナログのうちのいくつかの構造を公
開している。「公知の」又は「認識された」化合物とは、先行技法として認可さ
れる特許又は文献において従来報告されている（FK506アナログのような）化合 物である。

【００９９】

【０１００】 FK506アナログは、FKBP-12に対する広範囲の結合親和性を有している。本明細
書において提示されたFK506の神経栄養活性のメカニズムより、神経細胞成長の 刺激におけるFK506及びFK506アナログの有効性はFKBP-12結合能とは関連がない ことが示唆された。それよりむしろ、神経細胞成長の刺激におけるそれらの有効
性は、そのような化合物が、例えばステロイド受容体複合体におけるFKBP-52とh
sp-90との相互作用を妨害することにより、又は複合体からのp23の解離を促進す
ることにより、物理的又は機能的にステロイド受容体複合体を破壊する能力に関
連している。

【０１０１】 「非結合性FK506アナログ」とは、FKBP-12と実質的に結合しないFK506アナロ グと定義される。低いFKBP-12結合親和性を有するFK506アナログとは、10μMよ り大きい、好ましくは30μMより大きい、より好ましくは100μMより大きい、周 知のアッセイを用いて測定される見かけK_ｄでFKBP-12と結合するアナログをさす
。見かけK_ｄは、例えば、ハーディング（Harding）ら（Nature 341:758-760,198
9）（レポーティング・リガンドとして32-[1-^１４C]-ベンゾイルFK506を使用） 、シエキエルカ（Siekierka）ら（Nature 341:755-757,1989）（レポーティング
・リガンドとして[^３H]ジヒドロ-FK506を使用）、及び米国特許第5,654,332号の
記載のようにして実行される、競合LH-20結合アッセイにより決定されうる。

【０１０２】 代替的に、又はさらに、アナログは約0.01から約100mg/kg体重/日の用量レベ ルで患者に投与された場合、FKBP-12ロータマーゼ活性を実質的に阻害しないも のであってもよい。FKBP-12ロータマーゼ活性の阻害のアッセイは実施例9に記載
されている。

【０１０３】 非結合性FK506アナログは、例えば米国特許第5,516,797号、国際公開公報第92
/21313号、第92/19593号、及び第92/04370号に論じられているような、周知のア
ッセイにより証明されうるように、非免疫抑制性である。

【０１０４】 「ラパマイシン・アナログ」には、ラパマイシンに構造的に類似している化合
物、例えばオケイン（Ocain）ら（Biochem.Biophys.Res.Commun.192-1340-1346,
1993）に示されているようなWAY-124,466が含まれる。このアナログは、トリエ ン領域が修飾されている以外はラパマイシンと同一であり、該参照に示されてい
る方法により決定される、12.5nMのPPIアーゼ活性に対するKiを有する。このア ナログはまた、非免疫抑制性であることが、マウス胸腺細胞の増殖を阻害する能
力がないことにより該参照において決定された。他のラパマイシン・アナログに
は、他の大環状トリエン、31位及び42位がエステル化されたモノアシル化誘導体
及びジアシル化誘導体（米国特許第4,313,885号）、並びにラパマイシンの水溶 性プロドラッグ（米国特許第4,650,803号）、1位、3位、もしくは5位の二重結合
のうちの1個、2個、もしくは3個が対応するアルカンに還元されている水素化誘 導体、又は薬学的に許容されるそれらの塩（米国特許第5,023,262号）、（42位 の基のような）水酸基が対応するケトンに酸化されている酸化誘導体（例えば、
米国特許第5,023,263号に記載されている42-オキソラパマイシン又は薬学的に許
容される塩）、7,29-ビスデスメチルラパマイシン（米国特許第5,093,338号）、
並びに逆アルドール反応による塩基分解によりC-31炭素とC-32炭素との間が切断
されたラパマイシン（米国特許第5,138,051号）が含まれる。

【０１０５】 実施例14 使用法 本発明の神経栄養化合物は、対照と比較して神経成長又は神経再生を刺激する
ために十分な有効量で投与される。神経細胞成長又は神経再生にとって適当な局
所濃度は、インビトロ・アッセイ、例えば実施例1に記載のアッセイを用いて容 易に調べることができる。又は、神経細胞成長又は再生は、インビボ・アッセイ
により、又は被験者における神経細胞成長及び再生の直接的もしくは間接的な徴
候（例えば、過去に離断された正中神経の神経支配域における手の運動及び／も
しくは感覚機能の回復）により、決定できる。好ましくは、神経細胞成長又は再
生速度の増加は、対照と比較して少なくとも10％、好ましくは少なくとも30％、
最も好ましくは50％又はそれ以上である。皮下輸送の場合、FK506アナログの好 ましい用量レベルは、1日当たり約0.1から約400mg/kgの間である。経口投与の場
合、用量レベルの例は、約0.01から約40mg/kg/日の間である。又は、用量はイン
ビトロで神経栄養性であることが示された組織濃度に達するために十分なもので
ありうる。

【０１０６】 本発明に係る薬学的組成物は、神経再生及び機能回復を促進し、神経突起伸展
を刺激し、それにより、様々な神経病理学的状態を治療するため、そのような治
療を必要とする哺乳動物被験者（例えば、ヒト患者）に定期的に投与することが
できる。神経病理学的状態とは、以下の疾患を含む：物理的損傷（例えば、脊髄
の損傷及び外傷、座骨神経又は顔面神経の病変又は損傷、切断後の肢移植）、疾
患（例えば、糖尿病性ニューロパシー）、癌化学療法（例えば、アクリルアミド
、タキソール、ビンカアルカロイド、及びドキソルビシンにより誘導されるニュ
ーロパシー）、発作及び虚血に関連した脳損傷、並びに神経学的疾患（これらに
限定されないが、様々な末梢ニューロパシー疾患及び神経変性に関連した神経学
的疾患（これらに限定されないが、三叉神経痛、舌咽神経痛、ベル麻痺、重症筋
無力症、筋ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、進行性筋萎縮、進行性延髄遺
伝性筋萎縮、ヘルニア性、破裂性、もしくは脱出性の脊髄椎間板症候群、頸椎症
、神経叢障害、胸郭出口破壊症候群、鉛、アクリルアミド、ガンマ−ジケトン（
グルー・スニファー・ニューロパシー）、二硫化炭素、ダプソン、ダニ、ポルフ
ィリン症、ギヤン・バレー症候群、アルツハイマー病、パーキンソン病、及びハ
ンティングトン舞踏病により引き起こされる末梢ニューロパシーを含む）を含む
）により引き起こされる、末梢神経及び中枢神経系に対する傷害。

【０１０７】 さらに、本発明に係る薬学的組成物は、発作（例えば、Sharkey及びButcher,N
ature 371:336-339,1994,Vagitaら,Life Sciences 59:1643-1650,1996;Tokimeら
,Neurosci.Lett.206:81-84,1996;Drakeら,Acta.Physiol.Scand.158:155-159,199
6;及びKurodaら,Neurosci.Res.Comm.19:83-90,1996を参照のこと）、エイズ痴呆
（例えば、Dawson及びDawson,Adv.Neuroimmunol.4:167-173,1994;及びSekigawa ら,J.Clin.Immunol.15:312-317,1995を参照のこと）、育毛（Yamamotoら,J.Inve
stig.Dermatol.102:160-164,1994;Jiangら, J.Investig.Dermatol.104:523-525,
1995）、及び結合組織疾患（例えば、Steinmannら,J.Biol.Chem.266:1299-1303,
1991を参照のこと）の治療を含み、ならびに男性避妊薬（例えば、Hisatomiら,T
oxicology 109:75-83,1996を参照のこと）としての広範囲の他の治療的又は予防
的な特性を示す。

【０１０８】 末梢神経の離断又は脊髄損傷は、神経成長を刺激する量の薬剤を哺乳動物に投
与すること、及び末梢神経又は脊髄に同種異系移植片（Osawaら,J.Neurocytol.1
9:833-849,1990;Buttemeyerら,Ann.Plastic Surgery 35:396-401,1995）又は人 工神経移植片（Madison及びArchibald,Exp.Neurol.128:266-275,1994;Wellsら,E
xp.Neurol.146:395-402,1997）のような神経移植片を移植することにより治療さ
れうる。末梢神経又は脊髄の離断された末端の間の空間は、好ましくは、コラー
ゲン、メチルセルロースなどのような非細胞性間隙充填材料、又はスワン細胞（
Xuら,J.Neurocytol.26:1-16,1997）、嗅細胞、及び鞘細胞（Liら,Science 277:2
000-2002,1997）のような神経細胞成長を促進する細胞懸濁液で充填される。神 経成長促進剤は、そのような細胞性もしくは非細胞性の間隙充填材料と共に含ま
れてもよいし、又は神経移植操作の前、間、もしくは後に全身投与されてもよい
。

【０１０９】 実施例15 薬学的製剤 本発明に係る薬学的製剤は、ある量（例えば、単位用量）の神経栄養剤を、担
体、希釈剤、及び／又は補助剤を含む一つ又は複数の非毒性の薬学的に許容され
る賦形剤と、場合により生物学的活性を有する他の成分と共に含む処方を包含す
る。レミントンの製剤学（Remington's Pharmaceutical Sciences）（Mack Publ
ishing Co.,Easton,PA（第19版））に開示されている技法のような標準的な薬学
的処方技法が用いられる。

【０１１０】 本発明に係る薬学的製剤は、一つ又は複数の本発明の神経栄養剤を含み、例え
ばFK506又はFKBP-12結合性FK506アナログ、NGF、IGF-1、FGF、FGF、PDGF、BDNF 、CNTF、GDNF、NT-3、及びNT4/5のような生物学的活性を有する一つ又は複数の 他の成分も含んでいてもよい。本発明のSRC破壊剤を第二の神経栄養剤と組み合 わせる場合、2つの薬剤は、理想的には異なるSRC構成要素に作用することにより
SRCを構造的又は機能的に破壊するものとなるよう選択される。例えば、第一薬 剤は（p23の解離を促進する）ゲルダナマイシンであってよく、第二薬剤は（FKB
P-52とhsp-90との会合を妨害する）FKBP52-Abであってよい。特定の態様におい て、組成物は、NGF、又はSRC破壊複合体と組み合わせられて神経成長を刺激する
か、もしくはSRC破壊剤との組み合わせ投与により増強される神経栄養作用を有 する、他の薬剤を含む。

【０１１１】 組み合わせられた生物学的活性を有する薬剤の用量は、インビボで神経再生を
行うことが示された濃度と類似した、作用部位における組織濃度を達成するため
に十分な用量である。薬学的処方は、例えば、被験者が約0.01から100μg/kg体 重/日の間の用量を受容するような量のNGFを含みうる。NGF（又は他の補助剤） は、別々に、同時に、連続的に、又は互いに約5時間未満以内に投与されうる。

【０１１２】 本組成物は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、ロゼンジ、または経口、局所、も
しくは非経口用の溶液もしくは懸濁液のような液体又はゲルの調製物（例えば、
眼もしくは耳用滴剤、咽頭もしくは鼻用スプレーなど）、経皮貼付剤、並びに当
技術分野において既知の他の形態でありうる。

【０１１３】 そのような薬学的組成物は、特定の状態の治療にとって適当な任意の方式で、
例えば経口により、非経口により、直腸に、鼻腔内に、頬に、膣内に、局所に、
眼に、吸入スプレーにより、又は埋め込み型レザバーを介して、全身又は局所に
投与される。本明細書において用いられるように「非経口的に」という用語は、
例えば注射又は点滴による、皮下投与、静脈投与、筋肉内投与、胸骨内投与、滑
液内投与、包膜内投与、肝臓内投与、病巣内投与、及び頭蓋内投与を含むが、こ
れらに限定されない。中枢神経系の治療には、薬学的組成物は、好ましくは、末
梢に投与された場合血液脳関門を容易に透過するものであるか、又は脳室内に投
与される。

【０１１４】 薬学的に許容される担体には、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミ
ニウム、レシチン、（ヒト血清アルブミンのような）血清タンパク質、（リン酸
塩のような）緩衝剤、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性
脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、硫酸プロタミンのような塩もしくは電解質
、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コ
ロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースを
基本とした物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ポリアクリレート、ロウ、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロッ
ク重合体、ポリエチレングリコール、及び羊毛脂が含まれるが、これらに限定さ
れない。

【０１１５】 経口投与用の錠剤及びカプセルは、単位用量提示に適した形態であってよく、
通常の薬学的に許容される賦形剤を含みうる。これらの例には、シロップ、アラ
ビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントゴム、及びポリビニルピロリ
ドン；ラクトース、糖、コーンスターチ、リン酸カルシウム、ソルビトール、又
はグリシンのような充填剤；ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレン
グリコール、又はシリカのような打錠用滑沢剤；ジャガイモデンプンのような崩
壊剤；並びにラウリル硫酸ナトリウムのような分散剤又は湿潤剤が含まれる。経
口用液体調製物は、例えば水性もしくは油性の懸濁液、溶液、乳液、シロップ、
もしくはエリキシルの形態であってもよく、又は使用前に水もしくは他の適当な
媒体で再生するための乾燥生成物として提示されてもよい。

【０１１６】 薬学的組成物は、無菌の水性又は油性の媒体に含まれて非経口投与されてもよ
い。組成物は、非毒性の非経口的に許容される希釈剤又は溶媒に、例えば1,3-ブ
タンジオール溶液として溶解又は懸濁されうる。一般的に用いられる媒体及び溶
媒には、水、生理食塩水、ハンクス液、リンゲル溶液、及び合成のモノグリセリ
ドもしくはジグリセリドを含む無菌固定油などが含まれる。局所適用の場合、薬
物は、適当な水性又は非水性の媒体中の溶液、懸濁液、クリーム、ローション、
又は軟膏へと製造される。例えば、メタバイスファイトナトリウム又はエデン酸
ニナトリウムのような緩衝液、酢酸フェニル水銀もしくは硝酸フェニル水銀、塩
化ベンザルコニウム、又はクロルヘキシジンを含む殺菌剤及び殺真菌剤のような
保存剤、ヒプロメロース（hypromellose）のような濃化剤などの添加剤が含まれ
ていてもよい。

【０１１７】 含まれる用量単位は、例えば、治療を受ける状態、処方の性質、状態の性質、
請求の範囲に記載された薬学的組成物の態様、投与の方式、並びに患者の状態及
び体重により変化する。用量レベルは、典型的には、インビトロで神経栄養性で
あることが示された濃度と少なくとも同一の、作用部位における組織濃度を達成
するために十分なものである。例えば、1日当たり約0.1から約400mg/kgの用量の
活性成分が、前記の状態の治療において有用でありうる。

【０１１８】 本化合物は、好ましくは、これらに限定されないが、酢酸塩、アジピン酸塩、
アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸
塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウ硫酸塩、シクロペンタン
プロピオン酸塩、二グルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマ
ル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、
ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンス
ルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホ
ン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモエート（pamoate）、ペクチン酸塩、 過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン
酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラート、及びウンデカン酸
塩を含む、無機又は有機の酸及び塩基に由来する塩の形態で用いられうる。塩基
性塩には、アンモニウム塩、（ナトリウム塩及びカリウム塩のような）アルカリ
金属塩、（カルシウム塩及びマグネシウム塩のような）アルカリ土類金属塩、（
ジシクロヘキシルアミン塩のような）有機塩基を有する塩、N-メチル-D-グルカ ミン、及び（アルギニン、リジンなどのような）アミノ酸を有する塩が含まれる
が、これらに限定されない。塩基性窒素含有基は、例えば（メチル、エチル、プ
ロピル、及びブチルの塩化物、臭化物、及びヨウ化物のような）低級ハロゲン化
アルキル、（硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、硫酸ジアミルのよう
な）硫酸ジアルキル、（デシル、ラウリル、ミリスチル、及びステアリルの塩化
物、臭化物、及びヨウ化物のような）長鎖ハロゲン化物、（臭化ベンジル及び臭
化フェネチルのような）アラルキルハロゲン化物などの薬剤により第四級化され
うる。それにより水溶性又は油溶性又は分散可能な生成物が生成する。

【０１１９】 薬学的組成物は、目的とする使用のための指示、例えば米国の食品医薬品局の
ような薬学的規制機関により要求される指示が添付されたキットに含まれうる。

【０１２０】 要約 前述の実施例は、ニューロイムノフィリン・リガンド（FK506）及びステロイ ド・ホルモンの神経栄養特性が、ステロイド受容体複合体の物理的又は機能的な
破壊により媒介されることを例示するものである。破壊の標的として作用しうる
複合体の構成要素のいくつかには、いずれもゲルダナマイシンにより破壊されう
る成熟ステロイド受容体複合体中に共に存在する、FKBP-52、hsp-90、及びp23が
含まれる。FKBP-52は微小管及びダイニンと会合し、そのTPRモチーフを介してキ
ネシンとも会合しうるため、細胞骨格要素の移動（軸索輸送）において、そして
その結果軸索伸長においても直接的な役割を果たしているかもしれない。

【０１２１】 本発明者らの発明の原理が適用されうる多くの可能な態様を考慮して、例示さ
れた態様は、本発明の単なる例であることが認識されるべきであり、本発明の範
囲を制限するものと見なされるべきではない。そうではなく、本発明の範囲は、
以下の特許請求の範囲及びそれらの等価物により定義される。従って、本発明者
らは、本発明者らの発明として、その等価物を含む、これらの特許請求の範囲及
び精神に含まれる全てのものを請求する。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図1は、ステロイド受容体複合体における受容体−hsp-90ヘテロ複合体組立て を例示する概略図である。

【図２】 図2は、成熟ステロイド受容体複合体、及び神経成長を促進する本発明の薬剤 のいくつかの結合部位を例示する概略図である。

【図３〜１７】 図3〜17は、神経成長因子NGF単独（10ng/ml）の存在下、並びにNGF（10ng/ml ）及び各ヒストグラムに示された各濃度の他の薬剤の存在下における、SH-SY5Y 細胞の神経突起伸展長を示す累積ヒストグラムである。右方向にシフトした曲線
は、より長い突起、及びより大きい神経突起長伸展を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｓ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims (62)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ステロイド受容体複合体の組立てを破壊する化合物を被験者
   に投与することを含む、被験者において神経細胞成長を刺激する方法であって、
   該化合物が、 エストロゲン又はアンドロゲン、 FKBP-12に結合する認識された化合物 以外である方法。
2. 【請求項２】 化合物が、ステロイド受容体複合体のステロイド・ホルモン
   結合部位に対する認識されたリガンド以外である、請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 化合物が、FKBP-12に高親和性で結合することが報告されて いる認識されたFK506又はラパマイシンのアナログ以外である、請求項１記載の 方法。
4. 【請求項４】 化合物が低いロータマーゼ阻害を有する、請求項１記載の方
   法。
5. 【請求項５】 低いロータマーゼ阻害を有する化合物が、シス・トランス異
   性化に関して2500又はそれ以上の見かけKiを有する、請求項４記載の方法。
6. 【請求項６】 化合物が、シス・トランス異性化に関して5000又はそれ以上
   の見かけKiを有する、請求項５記載の方法。
7. 【請求項７】 化合物の投与段階が、ステロイド受容体複合体の会合を阻害
   し、解離を促進し、又は機能を妨害する化合物を投与することを含む、請求項１
   記載の方法。
8. 【請求項８】 化合物の投与段階が、ステロイド受容体複合体のp23構成要 素とhsp-90構成要素との会合を破壊する化合物を投与することを含む、請求項１
   記載の方法。
9. 【請求項９】 化合物の投与段階が、FKBP-52とhsp-90との会合を破壊する 化合物を投与することを含む、請求項１記載の方法。
10. 【請求項１０】 化合物の投与段階が、ATPと競合してhsp-90のアミノ末端A
    TP結合部位に結合する化合物を投与することを含む、請求項１記載の方法。
11. 【請求項１１】 化合物の投与段階が、ステロイド受容体複合体のゲルダナ
    マイシン結合部位に結合する化合物を投与することを含む、請求項１０記載の方
    法。
12. 【請求項１２】 化合物の投与段階が、hsp-90のゲルダナマイシン結合部位
    に結合するベンゾキノン・アンサマイシンを投与することを含む、請求項１０記
    載の方法。
13. 【請求項１３】 化合物の投与段階が、ゲルダナマイシン又はその構造的な
    アナログもしくは疑似体を投与することを含む、請求項１２記載の方法。
14. 【請求項１４】 化合物の投与段階が、ステロイド受容体複合体の構成要素
    と相互作用する抗体を投与することを含む、請求項７記載の方法。
15. 【請求項１５】 化合物の投与段階が、抗FKBP-52抗体を投与することを含 む、請求項１記載の方法。
16. 【請求項１６】 成熟ステロイド受容体複合体の会合を破壊する化合物以外
    の神経栄養因子を投与する段階をさらに含む、請求項１記載の方法。
17. 【請求項１７】 成熟ステロイド受容体複合体の会合を破壊する化合物以外
    の神経栄養因子を投与する段階が、NGF、IGF-1、αFGF、βFGF、PDGF、BDNF、CN
    TF、GDNF、NT-3、NT4/5、及びそれらの混合物からなる群より選択される神経栄 養因子を投与することを含む、請求項１６記載の方法。
18. 【請求項１８】 ステロイド受容体複合体のリガンドであるステロイド・ホ
    ルモンを投与する段階もさらに含む、請求項１記載の方法。
19. 【請求項１９】 ニューロンに対する疾患又は損傷により引き起こされるニ
    ューロン機能異常に関連した神経学的状態を有する動物に化合物が投与される、
    請求項１記載の方法。
20. 【請求項２０】 中枢神経系又は末梢神経系のニューロンに対する損傷を有
    する動物に化合物を投与する段階を含む、請求項１９記載の方法。
21. 【請求項２１】 ニューロンに対する疾患又は損傷に関連した状態を有する
    被験者を治療する方法であって、hsp-90のゲルダナマイシン結合部位に結合し、
    成熟ステロイド受容体複合体の会合を破壊し、かつニューロンからの神経突起伸
    展を促進する化合物を治療に有効な神経栄養的な量、被験者に投与する段階を含
    む方法。
22. 【請求項２２】 成熟ステロイド受容体複合体の会合を破壊しない神経栄養
    因子を投与する段階もさらに含む、請求項２１記載の方法。
23. 【請求項２３】 付加的な神経栄養因子が、化合物と協同して神経突起伸展
    を促進する神経成長因子である、請求項２２記載の方法。
24. 【請求項２４】 化合物がベンゾキノン・アンサマイシン又はその構造的ア
    ナログである、請求項２１記載の方法。
25. 【請求項２５】 ベンゾキノン・アンサマイシンがゲルダナマイシンである
    、請求項２４記載の方法。
26. 【請求項２６】 外科的神経移植に関連して末梢神経系又は中枢神経系に損
    傷を受けた神経を有する被験者に化合物を投与する段階をさらに含む、請求項２
    １記載の方法。
27. 【請求項２７】 神経細胞成長を刺激する化合物をスクリーニングする方法
    であって、ステロイド・リガンド以外の被検化合物がステロイド受容体複合体の
    組立て又は機能を破壊するか否かを決定する段階、及びステロイド受容体複合体
    の組立て又は機能を破壊する化合物を選択する段階を含む方法。
28. 【請求項２８】 化合物により誘導された神経突起伸展を測定することによ
    って、付加的なアッセイ法において選択された化合物を試験する段階をさらに含
    む、請求項２７記載の方法。
29. 【請求項２９】 化合物がステロイド受容体複合体の組立てを破壊するか否
    かを決定する段階に、化合物が会合を阻害するか否か、又はhsp-90からのp23の 解離を促進するか否かを決定することが含まれる、請求項２７記載の方法。
30. 【請求項３０】 化合物がステロイド受容体複合体の組立て又は機能を破壊
    するか否かを決定する段階に、化合物がゲルダナマイシン結合部位に結合するか
    否かを決定することが含まれる、請求項２７記載の方法。
31. 【請求項３１】 化合物がステロイド受容体複合体の組立て又は機能を破壊
    するか否かを決定する段階に、化合物が会合を阻害するか否か、又はhsp-90から
    のFKBP-52の解離を促進するか否かを決定することが含まれる、請求項２７記載 の方法。
32. 【請求項３２】 請求項２７記載の方法により選択された化合物。
33. 【請求項３３】 請求項２８記載の方法により選択された化合物。
34. 【請求項３４】 請求項２７記載の方法により選択された化合物を被験者に
    投与することを含む、被験者において神経成長を刺激する方法。
35. 【請求項３５】 請求項２８記載の方法により選択された化合物を被験者に
    投与することを含む、被験者において神経成長を刺激する方法。
36. 【請求項３６】 被検化合物がゲルダナマイシンのアナログである、請求項
    ２７記載の方法。
37. 【請求項３７】 被検化合物がFK506又はラパマイシンのアナログである、 請求項２７記載の方法。
38. 【請求項３８】 薬剤がステロイド受容体複合体の構成要素に特異的な抗体
    である、請求項２７記載の方法。
39. 【請求項３９】 薬剤が成熟ステロイド受容体複合体の機能又は物理的組立
    てを妨害するペプチドである、請求項２７記載の方法。
40. 【請求項４０】 ステロイド受容体複合体の組立て又は機能を破壊する化合
    物を含む、神経成長の刺激における使用のための薬学的組成物。
41. 【請求項４１】 成熟ステロイド受容体複合体の組立てを破壊する、神経成
    長を刺激する量の化合物を含む薬学的組成物であって、該化合物がステロイド受
    容体複合体のステロイド・ホルモン結合部位に対するリガンド以外であり、かつ
    認識されたFK-506又はラパマイシンのアナログ以外である、薬学的組成物。
42. 【請求項４２】 化合物が低親和性でFKBP-12と結合する、請求項４１記載 の薬学的組成物。
43. 【請求項４３】 化合物が低いロータマーゼ酵素活性を有する、請求項４１
    記載の薬学的組成物。
44. 【請求項４４】 化合物が、ロータマーゼのシス・トランス異性化の阻害に
    関して約2500nMより大きい見かけKiを有する、請求項４３記載の薬学的組成物。
45. 【請求項４５】 化合物が、成熟ステロイド受容体複合体の会合を阻害する
    か又は解離を促進する、請求項４０記載の薬学的組成物。
46. 【請求項４６】 低親和性でFKBP-12と結合する化合物が、ロータマーゼの シス・トランス異性化活性の阻害に関して約2500nMより大きい見かけKiを有し、
    かつステロイド受容体複合体のp23構成要素とhsp-90構成要素との会合を破壊す るか、FKBP-52とhsp-90との会合を破壊するか、又はステロイド受容体複合体の ゲルダナマイシン結合部位に結合する、請求項４０記載の薬学的組成物。
47. 【請求項４７】 化合物が、ステロイド受容体複合体のp23構成要素とhsp-9
    0構成要素との会合を破壊する、請求項４６記載の薬学的組成物。
48. 【請求項４８】 化合物が、FKBP-52とhsp-90との会合を破壊する、請求項 ４５記載の薬学的組成物。
49. 【請求項４９】 化合物が、ATPと競合してhsp-90のアミノ末端ATP結合部位
    に結合する、請求項４０記載の薬学的組成物。
50. 【請求項５０】 化合物が、ステロイド受容体複合体のゲルダナマイシン結
    合部位に結合する、請求項４０記載の薬学的組成物。
51. 【請求項５１】 化合物が、hsp-90のゲルダナマイシン結合部位に結合する
    ベンゾキノン・アンサマイシンである、請求項４０記載の薬学的組成物。
52. 【請求項５２】 化合物が、ゲルダナマイシン又はその構造的なアナログも
    しくは疑似体である、請求項５１記載の薬学的組成物。
53. 【請求項５３】 化合物が抗FKBP-52抗体である、請求項４０記載の薬学的 組成物。
54. 【請求項５４】 薬剤以外の第二の神経栄養因子をさらに含む、請求項４０
    記載の組成物。
55. 【請求項５５】 第二の神経栄養因子が、NGF、IGF-1、αFGF、βFGF、PDGF
    、BDNF、CNTF、GDNF、NT-3、NT4/5、及びそれらの混合物からなる群より選択さ れる、請求項５４記載の組成物。
56. 【請求項５６】 ステロイド受容体複合体のリガンドであるステロイド・ホ
    ルモンをさらに含む、請求項４０記載の組成物。
57. 【請求項５７】 ステロイド・ホルモンがアンドロゲン又はエストロゲンで
    ある、請求項５６記載の組成物。
58. 【請求項５８】 複合体のステロイド・ホルモン結合部位以外のステロイド
    受容体複合体のポリペプチドに結合する、神経成長を刺激する量の薬剤と、（ｉ
    ｉ）薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物であって、該薬剤が、低いFK
    BP-12結合親和性、低いカルシニューリンの阻害、及び低いロータマーゼ活性を 有するFK506アナログからなる群より選択され、 （ｉ）ベンゾキノン・アンサマイシン及びそれらの構造的アナログ、 （ｉｉ）複合体の選択されたポリペプチド構成要素ともう一つのポリペプチド構
    成要素との相互作用部位に、複合体の該選択されたポリペプチド構成要素の配列
    を含むペプチド、 （ｉｉｉ）ステロイド受容体複合体の一つもしくは複数の構成要素に対する抗体
    、又は （ｉｖ）（ｉ）、（ｉｉ）及び／もしくは（ｉｉｉ）の組み合わせ のいずれかであり、複合体からのp23もしくはFKBP-52の解離を引き起こすこと、
    p23もしくはFKBP-52と複合体との会合を阻害すること、又はp23、FKBP-52もしく
    はhsp-90と複合体との相互作用を阻害することにより成熟ステロイド受容体複合
    体の組立てを破壊する薬学的組成物。
59. 【請求項５９】 請求項１３記載の因子以外の付加的な神経栄養因子をさら
    に含む、請求項５８記載の組成物。
60. 【請求項６０】 付加的な神経栄養因子が神経成長因子である、請求項５９
    記載の組成物。
61. 【請求項６１】 薬剤がベンゾキノン・アンサマイシンである、請求項５８
    記載の組成物。
62. 【請求項６２】 ベンゾキノン・アンサマイシンがゲルダナマイシンである
    、請求項６１記載の組成物。