JP2001519650A

JP2001519650A - 可溶性７回貫膜ドメインｇタンパク質共役受容体、組成物及び方法

Info

Publication number: JP2001519650A
Application number: JP53726297A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．ダブリュー．シュエン，アロン; ケイ．コベルカ，ブライアン; クドウ，マサタカ
Original assignee: Leland Stanford Junior University
Current assignee: Leland Stanford Junior University
Priority date: 1996-04-15
Filing date: 1997-04-14
Publication date: 2001-10-23
Also published as: EP0910648A1; CA2250975A1; AU2728297A; WO1997039131A1; US5925549A

Abstract

(57)【要約】糖タンパク質ホルモン受容体ポリペプチドを含むＮ−末端アミノ酸配列と膜アンカーポリペプチドとを含み、その二つの間にプロテアーゼ認識部位が位置しているキメラポリペプチドが開示されている。また、このようなポリペプチドをエンコードする核酸、このような核酸を含む発現ベクター、およびこのような組換えキメラポリペプチドを産生する方法、さらにそれらの使用方法についてももちろん開示されている。このキメラポリペプチドは、可溶性糖タンパク質ホルモン受容体ポリペプチドを製造するのに特に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】可溶性７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体、組成物及び方法この出願は、１９９６年４月１５日に提出され、この明細書に参照として組み入れられる米国特許仮出願第６０／０１５，４５０号に対し、３５ＵＳＣ１２０に基づいた優先権を主張する。発明の分野本発明は一般に、膜アンカーと、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体の細胞外リガンド結合ドメインとを含む融合タンパク質に関する。更に詳しく述べると本発明は、糖タンパク質ホルモン受容体の細胞外リガンド結合ドメインを含む融合タンパク質、そのような可溶性糖タンパク質ホルモン受容体を効率よく製造する方法、及びそれらの使用方法に関する。発明の背景糖タンパク質ホルモン受容体（ＧｈＲ）は、脳下垂体前葉によって分泌される糖タンパク質ホルモンに対する受容体のファミリーである。これらのホルモンには、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ：チロトロピン）だけでなく、黄体形成ホルモン（ＬＨ：ルトロピン）および卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ：フィリトロピン）のような性腺刺激ホルモン、ならびに胎盤から産生する絨毛性腺刺激ホルモン（ＣＧ）が含まれる。それぞれのホルモンは選択的にＧｈＲファミリーのうちのどれかに結合する。即ちＬＨ及びヒトＣＧ（ｈＣＧ）はＬＨ受容体（ＬＨＲ）に結合し、ＦＳＨはＦＳＨ受容体（ＦＳＨＲ）に結合し、そしてＴＳＨはＴＳＨ受容体（ＴＳＨＲ）に結合する。リガンドがＧｈＲに結合するという生物学的な過程は通常、ｃＡＭＰの細胞内濃度の増加によって仲介されるのであるが、それによって標的細胞の活性化及び分化が引き起こされるのはもちろんのこと、ステロイドの合成や分泌が起こる。選択されたＧｈＲのリガンド結合部位のみ効率よく発現することが望まれる場合がある。しかしながらこのような発現を起こそうというこれまでの試みは再現性のないものであるか、あるいは最良の場合であっても発現レベルの効率が良くなかったり予測できないものであったりといった結果であった（Xie他、1990;Ts ai-Mprris他、1990年参照）。例えば完全な長さのヒトＦＳＨ、ＬＨおよびＴＳＨの受容体はバキュロウイルス発現系を用いてうまく発現させることができるが、ブタＬＨ受容体とヒトＴＳＨ受容体の両者の細胞外領域を発現させると、宿主細胞の内側にこのドメインがトラップされてしまう（Pajot-Augy他、1995年；Se etharamaith他、1994年；Cha zenbalkおよびRapoport、1995年参照）。リガンド結合は観察することができたものの、そのタンパク質の大部分は変性していたり、不活性であったり、また未処理の形態であったりした。ある最近の研究（Bozon他、1995年）では、低発現プロモーター／シグナルペプチドの組合せを用いた場合に、適度な量（１００，０００部位／細胞）のブタＬＨ受容体細胞外領域が培地中に分泌された。しかしながら発現レベルが高いと細胞内のタンパク質凝集が常に生じてしまうため、適度なレベルで発現する場合のみ、受容体の生物活性なエクトドメインを産生することと両立するという結論に達した。著者ら（Bozon他、1995年）は、その組換えタンパク質をイムノアフィニティー法で精製し、次にＴＳＨ受容体に対して行ったのと同様に、シスチンとシステインの存在下でグアニジンＨＣｌを用いて凝集受容体を再生することを提案した（Bobovnikova他、1997年）。イー・コリ（E.coli）においてラットＬＨ受容体の細胞外領域を発現させても、封入体中に自己関連タンパク質の凝集体が生成した（ChenおよびBahl、1993年）。そのタンパク質を再生させることはできるが、その再生工程は非効率的で安定して実施することは困難であった。それはおそらく、原核細胞から誘導されたタンパク質が、適当なタンパク質を折り畳みやすくするのに必要な炭化水素側鎖を持っていないためであろう。本発明は、上記に記載した困難性によって妨害されることがなく、このような「可溶性糖タンパク質ホルモン受容体（ｓＧｈＲ）」を効率的かつ高い信頼性で発現させるための簡便な方法を提供する。この方法はまた、受容体の細胞外部分にリガンド結合活性の実質的大部分を有する別の７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体の細胞外リガンド結合ドメインを発現させるのに利用できる。発明の概要一態様で、本発明は、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体のポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）をエンコードする５’末端セグメントと、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメントと、その５’ 末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラ核酸分子を含む。一実施態様で、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドはカルシトニン受容体である。これと関連する実施態様で、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドはカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）受容体である。別の実施態様では７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドはグルカゴン受容体である。これと関連する実施態様においては、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドはグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）受容体である。更に別の実施態様では７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドは代謝物産生グルタメート受容体である。別の実施態様では７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドは上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）受容体である。更に別の実施態様では７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドはバソアクティブインテスティナルペプチド（ＶＩＰ）受容体である。更に別の実施態様では７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドはセクレチン受容体である。付加的な実施態様では、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドは成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）受容体である。一般的な実施態様において、前記プロテアーゼ認識部位はトロンビン認識部位である。別の一般的な実施態様において、３’末端セグメントはＣＤ８分子の貫膜部分をエンコードする。好ましい一般的な実施態様において、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドは糖タンパク質ホルモン受容体である。別の好ましい一般的な実施態様においては、３’及び５’の末端セグメントが互いに異種である。ある実施態様においては、５’末端セグメントはヒト黄体ホルモン受容体結合タンパク質（ＬＢＰ）をエンコードする。別の実施態様では５’末端セグメントは、ヒト卵胞刺激ホルモン受容体結合タンパク質（ＦＢＰ）をエンコードする。更に別の実施態様においては５’末端セグメントは、ヒト甲状腺刺激ホルモン受容体結合タンパク質（ＴＢＰ）をエンコードする。また本発明には、（ａ）さきに記載したようなキメラ核酸分子と、（ｂ）宿主細胞内で上記キメラ核酸分子のオープンリーディングフレームを発現させるのに有効な調節配列とを含む発現ベクターも含まれる。別の態様で、本発明には、さきに記載したキメラ核酸分子がエンコードする融合タンパク質を組換え法により製造する方法が含まれる。この方法は、（ｉ）前記発現ベクターを適切な宿主細胞内に導入する工程、及び（ｉｉ）融合ポリペプチドの発現が起こる条件下でその宿主を培養する工程を含む。一般的な実施態様で、この方法は、プロテアーゼ認識部位を認識するプロテアーゼの存在下でその宿主細胞をインキュベートし、キメラポリペプチドの第１セグメントを放出させる工程をさらに含む。また本発明には、上記のような発現ベクターを用いてトランスフェクトした宿主細胞も含まれる。別の態様において本発明は、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）を含む第１セグメントと、膜アンカーポリペプチドを含む第２セグメントと、その第１セグメントと第２セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラポリペプチドを含む。特別な実施態様ではこれらのセグメントには、上述したキメラ核酸分子によってエンコードされる対応するポリペプチドの実在物を含んでいてもよい。好ましい態様では第１セグメントと第２セグメントとは互いに異種である。７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドは、例えばカルシトニン受容体、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）受容体、グルカゴン受容体、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）受容体、代謝物産生グルタメート受容体、上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）受容体、バソアクティブインテスティナルペプチド（ＶＩＰ）受容体、セクレチン受容体、または成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）受容体であってもよい。好ましい一般的な実施態様においては７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体ポリペプチドは、糖タンパク質ホルモン受容体である。本発明のこれらの、および他の目的や特徴は、添付した図面と関連させて次の詳細な説明を読めばより充分に明らかとなるであろう。図面の簡単な説明図１Ａ、１Ｂおよび１Ｃは、野生型（図１Ａ）の図、およびアンカーされた受容体、即ちＦｔＣＤ８（図１Ｂ）とＬｔＣＤ８（図１Ｃ）の図である。図１Ｂ及び図１Ｃの矢印は、プロテアーゼ認識部位の通常の位置を示している。図１Ｂ及び図１Ｃで概略図示されたこれら受容体の細胞外部分は、四角枠で示されている。図２Ａは、野生型のＦＳＨ受容体とＦｔＣＤ８の結合動態をプロットした図である。図２Ｂは、野生型のＬＨ受容体とＬｔＣＤ８の結合動態をプロットした図である。図２Ｃは、アンカーされた受容体をトロンビンで開裂することによって可溶化されたＦＳＨＲ／ＣＤ８融合体（ＦｔＣＤ８）の細胞外ドメインに、標識化したリガンドが架橋したことを示すゲルのコンピュータにより作成した画像である。図２Ｄは、アンカーされた受容体をトロンビンで開裂することによって可溶化されたＬＨＲ／ＣＤ８融合体（ＬｔＣＤ８）の細胞外ドメインに、標識化したリガンドが架橋したことを示すゲルのコンピュータにより作成した画像である。図３Ａは、ＦＳＨ受容体に結合する標識化したＦＳＨと、（ｉ）ＦＳＨ結合タンパク質（ＦＢＰ；ＦＳＨ受容体の可溶性リガンド結合細胞外ドメイン）および（ii）ＬＨ／ｈＣＧ結合タンパク質（ＬＢＰ；ＬＨ受容体の可溶性リガンド結合細胞外ドメイン）との競合を示すグラフである。図３Ｂは、ＬＨ受容体に結合する標識化したｈＣＧと、ＦＢＰおよびＬＢＰとの競合を示すグラフである。図３Ｃは、ｃＡＭＰを産生するＦＳＨ刺激がＦＢＰによって拮抗されるがＬＢＰによっては拮抗されないことを示すグラフである。図３Ｄは、ｃＡＭＰを産生するｈＣＧ刺激がＬＢＰによって拮抗されるがＦＢＰによっては拮抗されないことを示すグラフである。図３Ｅは、ｃＡＭＰを産生するＴＳＨ刺激がＴＢＰによって拮抗されるがＬＢＰによっては拮抗されないことを示すグラフである。図３Ｆは、ｃＡＭＰを産生するｈＣＧ刺激がＬＢＰによって拮抗されるがＴＢＰによっては拮抗されないことを示すグラフである。図４は、示した条件下におけるラットの精巣細胞のアポプトーシス（apoptosi s）アッセイでＤＮＡ断片化のパターンを示すゲルについてコンピュータにより作成した画像である。図５Ａ、５Ｂ及び５Ｃは、対照のラットの精巣細胞（図５Ａ）、ＦＢＰで処理したラットの精巣細胞（図５Ｂ）、及びOrg30850で処理されたラットの精巣細胞（図５Ｃ）の、ＤＮＡ断片化のin situ分析の結果を示すコンピュータによる画像である。バーの長さは２５μｍである。発明の詳細な説明Ｉ．定義第１のポリヌクレオチドフラグメントまたはポリペプチドフラグメントがそれぞれ、第２のポリヌクレオチドフラグメントまたはポリペプチドフラグメントに対応すると言われるのは、それらのフラグメントを表示する配列が、例えば「ＭＡＣＶＥＣＴＯＲ」（IBI，New Haven，CT）のようなシーケンス配列プログラムを用いて配列された場合、それらのフラグメントまたは領域が互いにほぼ同じ範囲を占めるときである。「対応する」ポリヌクレオチドまたはポリペプチドフラグメントは通常、同数ではないが類似の数の残基を含んでいる。しかしながら対応するフラグメントには、それらの配列中にいくつかの差異が含まれるのはもちろんのこと、互いに残基の挿入や欠失が含まれていてもよいと解することができる。ポリペプチド配列またはフラグメントは、別のポリペプチド配列またはフラグメント「から誘導される」のであるが、その別のポリペプチド配列またはフラグメントが、それが誘導される配列またはフラグメント中に存在しているアミノ酸の配列と同じ配列または実質的に同じ配列を含んでいる場合に誘導されるのである。例えばＳＥＤは特定の７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体（例えば、ＴＳＨ受容体）「から誘導される」のであるが、その特定の受容体が、その受容体の細胞外ドメインから得られる対応する領域の配列と同じかもしくは実質的に同じ配列を有している場合に誘導される。「可溶性細胞外ドメイン」（ＳＥＤ）という用語は、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体の細胞外部分の全部または一部を含むポリペプチドを意味し、この場合の一部には、前記の細胞外部分から誘導される少なくとも約１０個、好ましくは少なくとも約１５個、より好ましくは少なくとも約２０個の連続したアミノ酸からなる配列が含まれる。「可溶性糖タンパク質ホルモン受容体」（ｓＧｈＲ）という用語は、例えばＬＨ、ＦＳＨまたはＴＳＨの受容体のような糖タンパク質ホルモン受容体から誘導されるＳＥＤを意味し、この場合のＳＥＤは、そのままの受容体とだいたい同程度の大きさのリガンド結合特性を備えている。「可溶性結合タンパク質」（ｓＢＰ）という用語は、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体の細胞外部分を含むポリペプチドを意味し、この場合のポリペプチドは、そのままの受容体とだいたい同程度の大きさのリガンド結合特性を備えている。「可溶性糖タンパク質ホルモン結合タンパク質」（ｓＧｈＢＰ）という用語は、例えばＬＨ、ＦＳＨまたはＴＳＨの受容体のような糖タンパク質ホルモン受容体の細胞外部分を含むポリペプチドのことを言い、この場合のポリペプチドは、そのままの受容体とだいたい同程度の大きさのリガンド結合特性を備えている。ｓＧｈＢＰの例としては、ＬＢＰ（ＬＨ受容体の細胞外部分を含む）、ＦＢＰ（ＦＳＨ受容体の細胞外部分を含む）、およびＴＢＰ（ＴＳＨ受容体の細胞外部分を含む）が挙げられる。「細胞外リガンド結合領域」（ＥＬＢＲ）という用語と「可溶化リガンド結合領域」（ＳＬＢＲ）という用語は、そのままの受容体とだいたい同程度の大きさのリガンド結合特性を備えたＳＥＤのことを言う。ｓＧｈＢＰ、ＥＬＢＲまたはＳＬＢＲは、修飾されたｓＧｈＢＰ、ＥＬＢＲまたはＳＬＢＲのリガンドに対する結合動態や親和性が未変性の受容体の結合動態や親和性よりも実質的に大きくなるように、または小さくなるように、対応する未変性のフラグメントと比べて修飾されていてもよいし、突然変異していてもよいことが理解できるであろう。このような修飾されたｓＧｈＢＰ、ＥＬＢＲまたはＳＬＢＲの応用については以下に説明する。「可溶性抗原ドメイン」という用語は、（ｉ）そのままの選択された受容体、または（ii）その選択された受容体の完全な細胞外ドメインと特異的に免疫反応するか、あるいはそれらに対抗して生じてくる抗体と、特異的に免疫反応を行うＳＥＤのことを言う。二つのポリヌクレオチドまたはポリペプチドフラグメントは、各フラグメントの配列が異なる遺伝子から誘導される場合に「互いに異種」であると言われる。例えばＴＳＨ受容体から誘導されたフラグメントはＣＤ８分子から誘導されたフラグメントと異種である。抗体または抗体組成物（例えば、ポリクローナル抗体）は、特定の抗原（例えばＴＳＨ受容体の細胞外ドメイン）と「特異的免疫反応性」であるか、「選択的免疫反応性」であるが、この場合の抗体または抗体組成物は、その抗原とは免疫反応性であるが、他の７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体中に存在する抗原とは免疫反応性でない。「実質的に精製した」という用語及び「実質的に単離した」という用語は、ポリヌクレオチド、ポリペプチドまたは抗体組成物を記述するために用いられる場合には、これらの産物が、通常自然に一緒に見いだされる物質を実質的に含まない組成物もしくは製剤物のことを言う。「有意の」という用語は、「有意に異なる」、「有意に阻害する」または「有意に刺激する」という意味で用いられる場合、比較されている二つのグループの間の定量可能なパラメータの差が、標準の統計的検定法を用いて統計的に有意であることを意味する。例えば、タンパク質結合性アッセイにおいて結合性の程度は標準法を用いて定量することができ、また異なる条件の下での結合性の程度は統計的に有意な差で比較することができる。疾患または症状を「治療すること」とは、その疾患の兆候の重症度を減じさせたり、その疾患の元となる病原体や病理学的プロセスを阻害したりする作用のことを言う。 II．７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体本発明は、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体（７−ＴＤＧＲ）スーパーファミリーに属する受容体のサブセットの可溶性細胞外ドメイン、及びこのようなリガンド結合ドメインの効率的な製造法または発現法に関する。７−ＴＤＧＲスーパーファミリーに属する受容体は原形質膜中に存在する貫膜タンパク質であって、膜のスパニング領域を形成すると予測される７個の疎水性ドメインを含むアミノ酸配列に特徴がある。それらはヘテロダイマーのＧタンパク質と相互作用することにより、細胞外の刺激を細胞の内部に伝達する。スーパーファミリーに含まれる異なる受容体に対する刺激には、光、味、臭気、小さなペプチド、アミノ酸誘導体、及び脂質の類似体などが含まれる（例えば、Watson およびArkinstall、1994年参照）。７−ＴＤＧＲスーパーファミリーのメンバーの多くには、本発明が利用する受容体のサブセットが含まれていて、その受容体が活性化されると細胞内ｃＡＭＰの生成を引き起こすアデニリルサイクラーゼを順次活性化するＧｓ、即ちＧタンパク質の刺激性サブユニットが刺激される。当業技術分野で一般に考えられていたことは、短いＮ−末端細胞外領域を備えた７−ＴＤＧＲのリガンド結合部位は、その受容体の貫膜領域に主に含まれているということであった。しかしながら特定のタイプの７−ＴＤＧＲ（本発明が利用するサブセット）ではその細胞外部分は貫膜ドメインが存在しておらず、そのままの受容体のリガンド結合活性に匹敵するリガンド結合活性を備えていることが発見されたのである。即ち、細胞外部分に対するリガンドの親和性はそのままの受容体に対するその親和性とだいたい同程度の大きさである。この現象は実験によってこの明細書において例示されているが、その実験は、糖タンパク質ホルモンＧタンパク質共役受容体の細胞外部分が、貫膜ドメインおよび細胞内ドメインのないその対応するシグナリング分子に、無傷で未変性の受容体に観察されたのと同じくらいの親和性で結合できることを示す実験である。これらの受容体の７回貫膜ドメインが程度の高い相同性を示すため、このスーパーファミリーの新規な膜を確認することは、このような新規な膜の細胞外部分の確認を行うのと同様、当業者であれば容易に成し得ることである。実施例により、この明細書に参照として組み入れられるWatsonおよびArkinstall（1994年）の著書には、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体スーパーファミリーの５０個以上のメンバーの配列が提供されている。この著書にはさらに、各配列について、貫膜ドメインを構成する正確な残基が記載されている。これらの受容体（他の７−ＴＤＧＲを含む）の「細胞外部分」は、Ｎ−末端と第１貫膜ドメイン（「ＴＭ１」として示される）の開始部との間の領域である。 III．発明の全体像ここで詳述した実験は、トランスフェクトされた宿主細胞において７−ＴＤＧＲの細胞外部分を安定した高いレベルで発現させることは、その細胞外部分を膜アンカータンパク質との融合体として産生させれば著しく容易になることを証明している。この細胞外部分と膜アンカー部分とは、プロテアーゼ開裂部位を持っている領域内で結合させるか、あるいはその領域によって結合させるのが好ましく、そうすることで他の細胞成分から受容体の細胞外部分を簡単に放出させることや精製することが可能になる。本発明は糖タンパク質ホルモン受容体（MacFarland他、1989年；NagayamaおよびRapoport、1992年参照）に関して下記に詳細に説明する。しかしながら、本発明が７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体スーパーファミリーの他のサブクラスから誘導されたり、またはそのようなサブクラスと関連する類似の組成物や方法を包含することは分かるであろう。特に、この発見は、細胞内に病原体（例えばウイルス）が容易に入るように作用する７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体（Feng他、1996年）に適用可能であることはもちろんのこと、主要な特異的リガンドとしてのペプチド（Fong他、 1993年）および／または糖タンパク質ホルモン（Reichert他、1991年）に主として応答する少なくともすべての７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体に適用可能であると考えられる。 IV．本発明で使用する典型的な７−ＴＤＧＲＡ．糖タンパク質ホルモン受容体ＧｈＲ受容体は、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体のスーパーファミリーのうちの一つである（Reichert他、1991年）。それらは一次配列と、他の７回貫膜Ｇタンパク質共役受容体との類似性に基づいて独特な「ドメイン」に分割することができる。そのＮ−末端の、即ち細胞外のドメインには約３３０個から４２０個の間のアミノ酸が含まれていて、リガンド結合に対して主として応答可能である。本発明によると、この細胞外ドメインのみを含んでいる先端が切り取られた「受容体」はリガンドを結合する能力を保持していて、これまで「可溶性受容体」または「可溶性糖タンパク質ホルモン結合タンパク質」（ｓＧｈＢＰ）と呼ばれている。７回貫膜αヘリックスを有する貫膜ドメインは通常、約２８０−２９０個のアミノ酸に亙っている。Ｃ−末端の細胞内ドメインは一般に約６０個から８０個の範囲のアミノ酸からなる長さである。ヒトＦＳＨ受容体（GenBankの受託番号：Ｍ６５０８５、Ｍ９５４８９）は約６９５個のアミノ酸を含んでいて、そのうち３６６個が細胞外ドメインを構成している（そのうち１７個のアミノ酸はＮ−末端のシグナル配列を構成している）。ヒトＬＨ／ＣＧ受容体（GenBankの受託番号：Ｍ６３１０８）は約６９９個のアミノ酸を含んでいて、そのうち３４１個が細胞外ドメインを構成している。ヒトＴＳＨ受容体（GenBankの受託番号：Ｍ３１７７４とＭ３２２１５）は約７６４個のアミノ酸を含んでいて、そのうち約４１０個が細胞外ドメインを構成している。一態様で本発明はキメラＧｈＲに関し、それらの受容体細胞外ドメインまたはそのタンパク質は、適切な貫膜アンカーに、受容体の細胞膜ドメインが貫膜アンカーから開裂されることを可能にする配列または部分を介して結合されている。具体的に述べると、キメラ受容体は、糖タンパク質ホルモン受容体ポリペプチドのＮ−末端アミノ酸配列を含む第１セグメントと、膜アンカーポリペプチドを含む第２セグメントと、その第１セグメントと第２セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位のような開裂可能な部位とから構成されたキメラポリペプチドである。第１セグメントはＧｈＲの細胞外ドメインのすべてまたは一部分であって、約２８０個から４２０個の範囲内のアミノ酸残基を含んでおり、その数は受容体のタイプによって決まる。第２セグメントは膜アンカーを含んでおり、宿主細胞内で発現した場合に貫膜配向を決めることができる配列である。通常の実施例では、第２セグメントは、単に第１セグメントが得られた受容体の残りの部分である。この実施態様での本発明のキメラポリペプチドは、Ｎ−末端細胞外ドメインと貫膜ドメインとの間に配置された開裂部位を有するＧｈＲ（例えばＦＳＨＲ）である。他の態様で、第２セグメントは、貫膜ドメインを有する他のタンパク質から誘導される。例えば下記の実施例に詳細に記載した実施態様では、第２セグメントはＣＤ８分子の貫膜部分である。他のタンパク質の貫膜部分も同様に用いることができる。第１セグメントと第２セグメントとの間に位置している開裂部位によって、「可溶性受容体」の放出が可能になる。一般的な実施態様においてその開裂部位は、選択されたプロテアーゼによって認識されるアミノ酸配列（即ちプロテアーゼ認識部位）である。選択されたプロテアーゼは好ましくは、細胞外ドメイン内に存在する他の配列とは対応しない外延（extended）基質認識配列を備えていることが好ましい。潜在的に有用なプロテアーゼの中には、因子Ｘａ、トロンビン（ SmithおよびJohnson、1998年；Gearing他、1989年）、エンテロキナーゼ、レニン、およびコラゲナーゼがある。下記の実施例で記載された本発明の一実施態様では、キメラペプチドにトロンビン認識配列が組み入れられている。本発明のプロテアーゼ開裂部位は通常、第１セグメントと第２セグメントを分離配列を含んでいる。しかしながらこのような部位は、プロテアーゼ認識部位に対応するようにその連結領域の配列を変化させることによって、例えばその連結領域で第１セグメントおよび／または第２セグメントのアミノ酸配列に同類置換を行うことによって作ることができると考えられる。このような実施態様における開裂認識配列は別個のフラグメントではなくむしろ、第１セグメント及び第２セグメントの部分で構成されている。当然のことであるが、上記の組合せを用いることもできる。さきに記載したようなキメラ受容体はキメラ核酸分子によってエンコードされ、その核酸分子は、糖タンパク質ホルモン受容体ポリペプチドのＮ−末端アミノ酸配列をエンコードする５’末端セグメントと、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメントと、その５’末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入された（またはこれらセグメントの隣接部分から形成された）プロテアーゼ認識部位のような開裂可能な部位をエンコードするセグメントとから構成されている。このキメラ核酸分子はヒト配列から誘導することが好ましく、そうするとヒトに用いる場合、免疫原性の反応を最小限にできる。また、そのキメラ核酸分子は、それがエンコードする核酸分子または受容体の特徴を改良しおよび／または可溶性受容体の精製を容易にすることができる既知の配列を任意で含んでいてもよい。例えば、タグ（例えばポリ−ヒスチジン（Ｈｉｓタグ）、Ｍ１またはＨＡ）をエンコードする配列が、例えばシグナルペプチドの下流側またはタンパク質分解開裂部位の上流側に含まれていてもよく、その結果、アフィニティー法（Ｈｉｓタグに対してはニッケルカラム、Ｍ１及びＨＡに対してはモノクローナル抗体）を用いて可溶性結合タンパク質がより容易に精製できる。また本発明は、さきに記載したような可溶性受容体、即ちキメラポリペプチドを組換え法によって製造する方法で用いるのに適切な発現ベクターも含んでいる。このベクターは、前記キメラポリペプチドをエンコードするオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチドと、選択された宿主細胞中でそのオープンリーディングフレームを発現させるのに有効な調節配列とを含んでいる。この調節配列は、キメラポリペプチドの標的指向または分泌の際に有用な配列を含んでいてもよい。このような配列は内因性（例えば通常存在しているＧｈＲリーダー配列など）であってもよいし、あるいは異種（例えば酵母、哺乳動物細胞、昆虫細胞、組織培養物または細菌発現系で認識された分泌シグナルなど）であってもよい。発現ベクター内にはまた、調節配列が、前記核酸配列の５’側に、プロモーター領域およびキメラポリペプチドのコード配列とインフレーム（in frame）のＡＴＧ開始コドンを含んでいてもよいし、前記のコード配列の３’側に、翻訳終結シグナルとそれに続く転写終結シグナルを含んでいてもよい。二つの具体的な発現ベクターである、ｐｃＤＮＡ３ＬＣＤ８およびｐｃＤＮＡ３ＦＣＤ８の構築については実施例１に記載されている。ｐｃＤＮＡ３ＬＣＤ８を作るために、ＬＨ受容体の細胞外領域をエンコードする第１セグメントと、ＣＤ８の細胞質のテイル部と３’非翻訳領域にわたっている貫膜領域をエンコードする第２セグメントとを、商業的に入手できる哺乳動物の発現ベクターｐｃＤＮＡ３（Invitrogen Corp.，米国カリフォルニア州サンディエゴ所在）にクローン化した。プラスミドｐｃＤＮＡ３ＦＣＤ８も同様に、ヒトＦＳＨ受容体から得られる細胞外ドメインとＣＤ８ｃＤＮＡを用いて構築した。実施例５には、バキュロウイルス発現ベクターの構築について記載されている。数多くのベクターおよびそれらの対応する宿主が、本発明のこの方法を実施するにあたって有用である。それには酵母、哺乳動物の細胞、昆虫細胞、組織培養物、植物細胞培養物、形質転換した微生物または細菌発現系が含まれる。真核細胞発現系は、通常、発現したタンパク質をグリコシル化できるため好ましい。さらに本発明は、上述したキメラポリペプチドを発現する細胞を生成させるそのポリペプチドの組換え法による製造方法を含み、そしてキメラポリペプチドを次に開裂部位でキメラポリペプチドを開裂できる因子とともにインキュベートして、可溶性受容体を放出させる。この方法は次の工程を含む。第１工程では、キメラポリペプチドをエンコードするポリヌクレオチド配列を有するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を含む発現ベクター（例えば上記ベクター）を適切な宿主細胞に導入する。このベクターは宿主細胞においてＯＲＦを発現するように設計されている。このベクターは何らかの適切な形質転換法を用いて、例えばエレクトロポレーション法（Ausubel他、1988年）を用いて細胞に導入すればよい。本発明にはまた、ここに記載された構築物を用いて形質転換した宿主細胞が含まれる。この宿主細胞は通常、用いた発現ベクター（上記参照）のタイプに基づいて選択する。形質転換された宿主細胞は、ＯＲＦ配列の発現を引き起こす条件下で培養する。その細胞の表面にキメラポリペプチドを発現させてから（例えば実施例１に記載されたように）、その細胞を、前記構築物に導入されたプロテアーゼ認識部位を認識するプロテアーゼが存在するところでインキュベートすることによって、可溶性受容体を含有する細胞外ドメインをうまく開裂させることができる。それらの膜アンカーから開裂させた後、本発明の可溶性受容体分子またはそれらの抱合体は、一般に、例えば実施例５に記載されたように精製するかまたは他の細胞不純物から分離する。その可溶性受容体ポリペプチドは、標準的な既知のタンパク質精製法、即ち分別沈降法、モレキュラーシーブクロマトグラフィー法、イオン交換クロマトグラフィー法、等電点電気泳動法、ゲル電気泳動法及び親和性クロマトグラフィー法などの精製法によってさらに精製できる。タンパク質の製剤は、例えば濾過（Amicon，米国マサチューセッツ州ダンバーズ所在）によって濃縮することもできる。実施例３は、本発明のこのような応用法について記載している。ここではプラスミド、ｐｃＤＮＡ３ＬＣＤ８及びｐｃＤＮＡ３ＦＣＤ８を、発現したキメラポリペプチドの先端を切ったＧｈＲ部分と貫膜アンカー部分との間にトロンビン開列部位を持つように修飾した。その修飾ベクターを用いて上記のように細胞をトランスフェクトし、タンパク質を発現させた。続いてこの細胞をトロンビンを用いて処理することによって、先端の切れたＬＨとＦＳＨの可溶性受容体を放出させた。その可溶性受容体を、架橋分析やＳＤＳＰＡＧＥで分析するのはもちろん、実施例２に記載された結合アッセイを用いても分析した。これらの実験結果は、可溶性受容体がリガンド結合能力を保持していて、予想された大きさであることを示している。あるいは、発現した融合タンパク質は、それらを発現した宿主細胞に残したままで、その細胞を例えば結合アッセイに用いることができる。例えば実施例２は、標識を施したＬＨおよびＦＳＨがそれぞれの受容体を用いてトランスフェクトした細胞に結合することについて記載している。これらのアッセイの結果は、トランスフェクトを行ってから約８時間後に、高レベルの結合部位が原形質膜に現れることを示唆している。糖タンパク質ホルモン受容体に加えて、本発明の好ましい実施態様には、実質的な細胞外ドメインを持つ他の受容体から誘導されるものが含まれる。特に、密接に関連したリガンド分子、例えば受容体のバソアクティブインテスティナルポリペプチド（ＶＩＰ）ファミリーを識別するものが含まれる。本発明の特定の実施態様で用いやすい数種の代表的な受容体及びリガンドを以下に説明する。そこでこれらの他の受容体の細胞外部分は、例えば特異的リガンド、抗体またはウイルスタンパク質に対する可溶性結合タンパク質の誘導を行わせるために、ここに記載したとおり（例えばＧｈＲに関して）に使用し利用することができる。Ｂ．カルシトニン受容体ファミリーカルシトニンは骨吸収を阻害して、血しょう［Ｃａ⁺⁺］を低下させるペプチドである。またカルシトニンは腎臓でのイオンの排泄を高め、腸管でのイオンの吸収を抑制するとともに、例えば膵臓や下垂体内にあるような内分泌細胞での分泌を阻害する。中枢神経系（ＣＮＳ）では、カルシトニンは鎮痛作用を持ち、また摂食や胃酸の分泌を抑制すると報告されている。脳では、カルシトニン遺伝子転写物は、あるいはスプライスされて、カルシトニン遺伝子が関連するペプチド（ＣＧＲＰ）（EpandおよびCaulfield、1990年）をエンコードするｍＲＮＡを生成する。ＣＧＲＰは強い血管作用性と強心性を持つペプチドであり、胃酸分泌の刺激剤である（Brain & Cambridge、1998年）。カルシトニン受容体（Lin他、1991年）は破骨細胞で、またこの細胞由来の不死細胞系で目立って見られる。脳内、例えば視床下部や下垂体および末梢組織、例えば精巣、腎臓、肝臓及びリンパ球の中には少量存在している。またこの受容体は、肺癌や乳癌の細胞系にも存在しているとの記載がある。ブタのカルシトニン受容体の配列は、GenBankの受託番号Ｍ７４４２０で入手できる。第１貫膜ドメインはアミノ酸番号１４８でだいたい始まり、そのため細胞外ドメインはアミノ酸１−１４７を含んでいる。二つのサブタイプのＣＧＲＰ受容体が、類似体とＣＧＲＰフラグメントの強度の違いに基づいて提案されている（Dennis他、1989年a、1989年b）。ＣＧＲＰは、大脳、冠動脈及び末梢の脈管構造における効力が強く、作用時間の長い血管拡張薬である（BrainおよびCambridge、19 96年；Feuerstein他、1995年）。本発明によって、ＣＧＲＰ受容体の可溶性リガンド結合ドメインを用いて、例えば内因性ＣＧＲＰを中和し、片頭痛及び血管れん縮などの血管疾患を治療することができる。ＣＧＲＰ拮抗薬もまた、インシュリン非依存性糖尿病のインシュリン感受性を改善することがわかっている（Feue rstein他、1995年）が、それはＣＧＲＰがインシュリンに対する組織グルコースの応答を減少させるためである。本発明によって、ＣＧＲＰの可溶性リガンド結合ドメインを用いて、インシュリン非依存性糖尿病のインシュリン感受性を改善することができる。Ｃ．グルカゴン受容体グルカゴンは、グルコースの血中濃度を制御するために必要である。このペプチドは肝臓での糖原分解と糖新生を刺激してグルコースを産生し、血流中に放出する。それはまた、肝臓と脂肪細胞で脂肪分解を引き起こす。したがってその主要な作用はインシュリンの作用に対抗するものであり、また糖尿病の病原機序で主要な役割を果たす。グルカゴンはまた、急性の心不全の際に心収縮力と心拍数を増加させるために時折用いられてきた。グルカゴンの配列は全ての哺乳動物種にわたって保存されており、ＶＩＰファミリーのメンバーと限定された配列類似性を共有している（例えば、グルカゴン中のアミノ酸の１５個はセクレチンにも存在している）。グルカゴン受容体（Jelinek他、1993年）は肝臓で目立って発現する。それは脂肪組織や心臓にも見られる。ラットのグルカゴン受容体の配列は、GenBankの受託番号Ｌ０４７９６およびＭ９６６７４により入手できる。第１貫膜ドメインはアミノ酸番号１４４でだいたい始まり、そのため細胞外ドメインはアミノ酸１−１４３を含んでいる。グルカゴン受容体に対抗する臨床上有用な拮抗薬は現時点ではない。本発明によれば、例えばここに記載されたように製造された受容体の可溶性リガンド結合ドメインは、遊離のグルカゴンと結合してその濃度を減少させることによって、グルカゴン受容体に対抗する機能的な拮抗薬として投与することができる。このようなグルカゴン拮抗薬は、例えばII型糖尿病のグルコース血中濃度を低下させるために利用することができる（Vantine他、1996年）。Ｄ．グルカゴン様ペプチド（ＧＬＰ−１）受容体ＧＬＰ−１はグルコース誘導性インシュリンの分泌を高めるように調節するとともに、胃酸の分泌を抑制する（Goke他、1991年）。ＧＬＰ−１はグルカゴンと同じ前駆体から誘導されるがそれは異なる構造をしており、グルカゴン受容体では作用しない。インシュリン非依存性糖尿病は、グルコース−誘導性のインシュリン分泌に対するＧＬＰ−１の刺激作用の減少に関連がある。ラットのＧＬＰ−１受容体の配列（Thorens、1992年）は、GenBankの受託番号Ｍ９７７９７により入手できる。第１貫膜ドメインはアミノ酸番号１４６でだいたい始まり、そのため細胞外ドメインはアミノ酸１−１４５を含んでいる。ＧＬＰ−１受容体の細胞外領域はＧＬＰ−１と結合することが示された（Wilmen他、 1996年）。また、ＧＬＰ−１が食物消費の調節に関与していること（Thiele他、 1997年）、およびＧＬＰ−１のラットへの中枢投与により食物と水の摂取が阻害されること（Tanchristensen他、1996年）が認められている。本発明によると、ＧＬＰ−１受容体の可溶性リガンド結合ドメインを、例えば神経性食欲不振症のような摂食疾患にかかっている患者を治療するために用いることができる。Ｅ．代謝物産生グルタメート受容体ファミリーグルタメートはＣＮＳでの主要興奮性神経伝達物質であり、認識、記憶、ニューロンの柔軟性、学習、ならびにてんかん発作および神経変性などの神経学上のいくつかの疾患で重要な役割を持っていると考えられる（SchoeppおよびConn.、 1993年）。その作用は、親イオン性（ionotropic）受容体や代謝物産生（metabo tyopic）受容体と言われる二つの異なるクラスの受容体により仲介される。親イオン性受容体は、グルタメートの「迅速な」興奮性作用を仲介するグルタメート −活性化イオンチャンネルである。代謝物産生グルタメート受容体は７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体のファミリーに属し、Ｇタンパク質との相互作用でその機能を発揮する。少なくとも５個のこのような代謝物産生グルタメート受容体が確認されており（Masu他、 1991年；Tanabe他、1992年；Abe他、1992年；Takahashi他、1993年）、それらはＣａ²⁺依存性Ｋ⁺コンダクタンスを阻害することによってニューロンの膜興奮性を大きくしたり、イオン親和性のグルタメート受容体によって支持されている興奮性伝達の阻害および増強を行ったり、および海馬内の歯状回およびＣＡ１ニューロンの作用ポテンシャルの激発に続く後過分極を阻害したりといった、ある範囲の生理作用を有している。それらはまた、長期間の相乗作用に関与している。しかしながらそれらの生理的役割を充分に理解することは、選択的な作用薬及び拮抗薬が欠如しているために妨げられている。異なるグルタメート受容体の配列は、例えばGenBankから受託番号Ｍ６１０９９（ラットのｍＧｌｕＲ１）、Ｍ９２０７５（ラットのｍＧｌｕＲ２）、Ｍ９２０７６（ラットのｍＧｌｕＲ３）、Ｍ９２０７７（ラットのｍＧｌｕＲ４）、およびＤ１０８９１（ラットのｍＧｌｕＲ５）として入手可能である。ｍＧｌｕＲ１の第１貫膜ドメインはだいたいアミノ酸番号５９３で始まり、そのため細胞外ドメインはアミノ酸１−５９２（初めから２０番目までのアミノ酸はシグナル配列であると考えられているが）を含んでいる。ｍＧｌｕＲ２の第１貫膜ドメインはだいたいアミノ酸番号５６８で始まり、そのため細胞外ドメインはアミノ酸１ −５６７（初めから１８番目までのアミノ酸はシグナル配列であると考えられているが）を含んでいる。ｍＧｌｕＲ３の第１貫膜ドメインはだいたいアミノ酸番号５７７で始まり、そのため細胞外ドメインはアミノ酸１−５７６（初めから２２番目までのアミノ酸はシグナル配列であると考えられているが）を含んでいる。ｍＧｌｕＲ４の第１貫膜ドメインはだいたいアミノ酸番号５８８で始まり、そのため細胞外ドメインはアミノ酸１−５８７（初めから３２番目までのアミノ酸はシグナル配列であると考えられているが）を含んでいる。ｍＧｌｕＲ５の第１貫膜ドメインはだいたいアミノ酸番号５７９で始まり、そのため細胞外ドメインはアミノ酸１−５７８（初めから２０番目までのアミノ酸はシグナル配列であると考えられているが）を含んでいる。本発明によると種々のグルタメート受容体の可溶性リガンド結合ドメインは、例えば異なる受容体の選択的な作用薬および／または拮抗薬についてスクリーニングを行うための結合アッセイなどに用いることができる。Ｆ．上皮小体ホルモン受容体ファミリー上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）は生体内におけるカルシウムのホメオスタシスに関与している。それはカルシウムとビタミンＤとの組み合わせで作用する（Epan dおよびCaulfield、1990年；Muff他、1992年）。ＰＴＨは低カルシウム血症に直接応答して放出され、血液カルシウム上昇を刺激する。このような場合その作用はカルシトニンの作用に対抗する。ＰＴＨはおもに骨（骨芽細胞）や腎臓で作用する。骨芽細胞ではＰＴＨは、マトリックスの生成を減少させるとともに、破骨細胞の補充と活性化に関与するサイトカインを放出させると考えられている。腎臓ではＰＴＨはリン酸塩の再吸収を減少させるとともに、腎臓細管でのカルシウムの再吸収を増加させる。それはまた、１，２５ジヒドロキシビタミンＤ₃の産生増加を促進し、それによって腸管でのカルシウムの吸収を増加させることになる。ＰＴＨ受容体（Juppner他、1991年；Abou-Samra他、1992年）は骨と腎臓に見られ、血管では小量見られるが、そこではＰＴＨ受容体は血管拡張を仲介している。この受容体はまた、ＰＴＨ活性化に必要とされる濃度（サブナノモルの範囲）と同じくらいの濃度のＰＴＨ関連ペプチドによっても活性化される。ＰＴＨ受容体の配列は、例えばGenBankから受託番号Ｍ７７１８４として入手可能である。第１貫膜ドメインはだいたいアミノ酸番号１８２で始まり、そのため細胞外ドメインはアミノ酸１−１８１（初めから２２番目までのアミノ酸はシグナル配列であると考えられているが）を含んでいる。本発明によるとＰＴＨ受容体の可溶性リガンド結合ドメインは、ＰＴＨ受容体の機能的拮抗薬として用いることができる。このような拮抗薬は例えば、上皮小体機能こう進症や短期間の高カルシウム血状態を治療するために用いることができる。具体的に述べると、上皮小体の拡大とＰＴＨの過剰分泌（Indridason他、1996年）が関連して起こる尿毒症性の上皮小体機能こう進症が見られる患者の場合、内因性ＰＴＨの作用を中和する目的で可溶性ＰＴＨ受容体細胞外領域を用いることができる。同じ結合タンパク質を用いて、例えば扁平上皮癌や腎臓癌のような充実性腫瘍を患っている患者で高カルシウム血症の共通の原因となっている、正規の場所以外でのＰＴＨ関連タンパク質の産生を中和することができる（Nelsen他、1996年）。Ｇ．ＶＩＰ受容体ファミリーバソアクティブインテスティナルペプチド（ＶＩＰ）は、生物活性の部分的に一致するプロフィールを共有する構造的に関連するペプチドのファミリー（ SaidおよびMutt.1988年）、即ちＶＩＰ、セクレチン、成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）、下垂体のアデニルサイクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）、およびペプチドヒスチジンメチオナミド（ＰＨＭ）などを含むファミリーのうちの一つである。これらのペプチドは一般に、他の関連するペプチドに対する受容体を活性化することができるが、その関連する受容体に対するそのペプチドの親和性は通常、そのペプチドの対応する受容体に対する親和性に比べて同等の大きさであるかもっと小さい親和性である。ＶＩＰは多くの生理的活性を有している。例えば末梢においてそれは、（ｉ）平滑筋（例えば、血管、腸管、および気管）の弛緩をもたらし、（ii）特定組織（例えば、胃）での分泌を阻害し、そして他の組織（例えば、膵臓、腸管の上皮、及び胆嚢）での分泌を刺激し、さらに（iii）免疫系の細胞の活性を調節する。ＣＮＳで、ＶＩＰは同様に、広い範囲の興奮活性と阻害活性とを有している。セクレチンは腸管や膵臓でイオン及び酵素の分泌を刺激するが、視床下部、脳幹、及び大脳皮質などを含む脳の特定領域には比較的少量存在している。ＧＲＦは、下垂体前葉から出る成長ホルモンの合成と放出を調節する重要な神経内分泌因子である。それは主として視床下部に見られる。このファミリーの代表的な受容体はＶＩＰとセクレチンの受容体である。ＶＩＰ受容体は、末梢、胃腸管、尿生殖系、および他の平滑筋（例えば、気管、血管）全体にわたって、ならびに分泌腺（例えば、膵臓、胆嚢）内に分布している。ＣＮＳにおいてＶＩＰ受容体は、海馬組織、大脳皮質、視床、および線条体に高いレベルで存在している。ＶＩＰ受容体の配列（Ishihara他、1992年）は、例えばGenBankから受託番号Ｍ８６８３５として入手可能である。その第１貫膜ドメインはだいたいアミノ酸番号１４６で始まり、そのためその細胞外ドメインはアミノ酸１−１４５（初めから３０番目までのアミノ酸はシグナル配列であると考えられているが）を含んでいる。セクレチン受容体の配列（Ishihara他、1991年）は、GenBankから受託番号Ｘ５９１３２として入手可能である。その第１貫膜ドメインはだいたいアミノ酸番号１４４で始まり、そのためその細胞外ドメインはアミノ酸１−１４３（初めから２２番目までのアミノ酸はシグナル配列であると考えられているが）を含んでいる。ＶＩＰのペプチド拮抗薬は、実験動物に迷走神経で誘導された頻脈を減弱すること（HillおよびWallick、1995年）がわかっているため、ＶＩＰ受容体から誘導され、内因性のＶＩＰを効率的に中和することのできる可溶性リガンド結合領域は迷走神経誘導性の頻脈に対する拮抗薬として用いることができると考えられる。ヒトＧＲＦ受容体はクローン化されている（Mayo、1992年）。その配列は、Ge nBankの受託番号Ｌ０１４０６で見つけることができる。その初めの１３３個のアミノ酸は細胞外領域（シグナルペプチドを含んでいる）をエンコードしている。本発明により製造されたアンカーされているＧＲＦの代表的用途は、選択的なＧＲＦ受容体作用薬と拮抗薬を単離するためのスクリーンである（下記のスクリーニングの項を参照のこと）。ＧＨの下垂体からの放出を効率的に刺激するＧＲＦ作用薬は、高齢者の筋緊張や一般的な福祉を高めるための薬剤として特に有用であろう。Ｖ．本発明により製造した可溶性糖タンパク質ホルモン受容体の用途Ａ．可溶性受容体の有効な発現さきに詳細に記載したように本発明は、組換え糖タンパク質ホルモン受容体細胞外ドメインを有効に製造することができる。このような可溶性受容体を製造しようとする以前の試みでは、細胞内に受容体が封鎖されてしまって受容体の精製を行う前に細胞抽出を行う必要が生じたり、または受容体が自己凝集してしまうので過酷な部分的変性を行って再生する必要が生じる。対照的に本発明の方法は、大量の組換え可溶性受容体タンパク質を産生しかつ単離することが可能であり、この受容体タンパク質は、宿主細胞を可溶化することなく、または正確な折り畳みを誘発させるため予測できない処理に頼ることなく収穫して精製できる。それらの膜アンカーから開裂を行った後で、本発明の可溶性受容体分子またはそれらの抱合体を通常は精製し、即ち例えば実施例５に記載したように他の細胞不純物から分離を行う。この可溶性受容体ポリペプチドは、標準的な既知のタンパク質精製法、即ち分別沈降法、モレキュラーシーブクロマトグラフィー法、イオン交換クロマトグラフィー法、等電点電気泳動法、ゲル電気泳動法及びアフィニティークロマトグラフィー法などの精製法によってさらに精製を行ってもよい。またタンパク質の製剤は、例えば濾過（Amicon，米国マサチューセッツ州ダンバーズ所在）によって濃縮することもできる。Ｂ．抗−ＧｈＲ抗体の生成この明細書に記載された方法により産生したＧｈＲの可溶性リガンド結合領域は、特定の選択された受容体リガンド結合領域に対する抗体を生じさせるために用いることができる。通常抗体を得るためには、ウサギのような宿主の動物を精製抗原か融合タンパク質抗原で、既知の方法を用いて免疫感作させる（例えば、 Harlow他、1988年）。宿主の血清、または血漿を適当な時間間隔で収集し、その血清を抗原に対して特異的な抗体についてテストする。免疫感作した動物のガンマグロブリンフラクション、即ちＩｇＧ抗体を、例えば飽和硫酸アンモニウムまたはＤＥＡＥセファデックスを用いることによって、あるいはポリクローナル抗体を産生するための当業者に既知の他の方法によって得ることができる。あるいは精製したｓＧｈＢＰ、特にＧｈＲの可溶性抗原性ドメインを、モノクローナル抗体を産生するために用いてもよい。ここでは免疫感作した動物から脾臓またはリンパ球を取り出し、当業者に既知の方法（例えば、Halow他）によってハイブリドーマを調製するために不滅化して用いる。不滅化した細胞によって分泌される抗体は、例えば既知の方法であるウエスターンブロット分析法（例えば、Ausubel他、1988年）を用いてスクリーニングして、望ましい特異性を持つ抗体を分泌するクローンを確認する。Ｃ．避妊用への応用精製した可溶性ＬＨ及びＦＳＨ結合タンパク質（即ち、リガンド−結合活性を保持している可溶性受容体）は、数多くの用途で、特に受精および避妊の用途に利用することができる。本発明の方法により産生させた可溶性ＬＨ、ＦＳおよびＣＧのリガンド結合ドメインはそれぞれの作用性ホルモンに結合できるため、それらを個体に治療用として投与して標的細胞の表面に存在する受容体に結合する選択された性腺刺激ホルモンの利用度を減少させることにより、個体の性腺刺激ホルモンの作用を優先的に中和することができる。ＦＳＨは、性腺刺激ホルモン放出ホルモンおよびＣＧに応答して下垂体から放出されるとともに、妊娠中に胎盤から放出される。男性ではＦＳＨは精子形成のために重要である。女性ではＦＳＨは卵胞の成長を促進するとともに、エストロゲン類の分泌を調節する。男性と女性にＦＳＨ受容体の細胞外リガンド結合領域を投与すると不妊となり、可逆的な避妊方法として利用することができると考えられる。また避妊効果は、ＬＨ受容体のリガンド結合領域を投与してＬＨまたはＣＧの作用を遮断することによっても達成できる。したがって上記のことに関連して、本発明は避妊方法も含んでいる。一実施態様において本発明の方法は、ヒトＦＳＨ受容体の細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）を薬学的に有効量で投与する方法を含む。別の実施態様では本発明の方法は、ヒトＬＨ受容体のＥＬＢＲを薬学的有効量で投与する方法を含む。Ｄ．多嚢胞性卵巣疾患多嚢胞性卵巣（ＰＣＯ）疾患（Petersdorf他、1983年）は高いＬＨレベルと低いＦＳＨレベルに特徴がある。ＰＣＯ患者は通常、ＬＨとＦＳＨの両方を抑制するＧｎＲＨ類似体を用いて治療し、続いてＦＳＨの投与が行われる。本発明によるとＰＣＯ疾患は、卵巣の包膜細胞にあるＬＨ／ＣＧ受容体に結合させるために利用できるＬＨの量を減少させる目的で、ＬＨ／ＣＧ受容体作用のリガンド結合ドメインを投与して、合成されるアンドロゲンの量を減少させるとともに内因性のＦＳＨに卵胞の成長を促進させることによって治療することができる。同様の治療は、例えば早発思春期および／または卵巣過刺激症候群（Fauser、 1996年）の患者に適用できる。卵巣過剰刺激症候群は、下垂体によって過剰なＬＨ／ＦＳＨ分泌が起こるために、性腺刺激ホルモン治療を行っている患者に有害である。性腺刺激ホルモンの投与を中止するのに加えて、ＬＨとＦＳＨ結合タンパク質を投与することによって、循環している性腺刺激ホルモンを中和できるであろう。Ｅ．乳ガン、前立腺ガン及び甲状腺ガンなどのステロイド依存性腫瘍の治療ＦＳＨ及びＬＨの受容体のリガンド結合ドメイン（例えば、ＦＢＰおよびＬＢＰ）は、乳ガン、前立腺ガン、及び甲状腺ガンのような性腺刺激ホルモン依存性、ステロイド依存性またはＴＳＨ依存性の腫瘍を治療するためにもちいることができる。このような腫瘍は通常、成長したり生き残ったりするために性腺刺激ホルモンやＴＳＨの存在が必要である。本発明のｓＧｈＲによって循環している性腺刺激ホルモンまたはＴＳＨを涸渇させることは、類似の処理を行わなかった腫瘍の成長に比較してこのような腫瘍の成長を阻害するために利用できる。またＧｈＲは、性腺刺激ホルモンおよび／またはＴＳＨを産生する腫瘍を患っている患者の循環している性腺刺激ホルモンおよび／またはＴＳＨのレベルを測定するために利用できる。乳ガンは３５才〜４５才の間の年齢の女性に死を引き起こす主原因である。特定の女性が乳ガンになる可能性に、多くの因子が影響を与えるが、エストロゲン受容体（ＥＲ）タンパク質が存在するか存在しないかがその疾患の予後を決定するのに特に重要であると一般には考えられている。具体的に言うと、ＥＲレベルの高い女性は、ＥＲレベルが正常に比べて中間か低い女性よりも予後がより順調である。この知見を観察して乳ガン患者には、エストロゲンまたはエストロゲン前駆体の作用を完全になくすために、ときおりエストロゲン類似体が与えられる。より極端な場合には、副腎摘出および／または下垂体切除（hyphosectomy）を行ってもよい。本発明によると、乳ガン患者にＦＳＨ受容体の細胞外リガンド結合ドメインを投与することによって、その患者のＦＳＨ分子に結合させて、ＦＳＨ分子の卵巣細胞にエストロゲンを産生させる性能を抑制または減弱させることができる。また、ＦＳＨ及びＬＨの受容体のリガンド結合ドメイン（例えば、ＦＢＰおよびＬＢＰ）は、ステロイド依存性前立腺ガンを治療するために用いることもできる。女性の乳ガンと同様に、前立腺ガンは男性にガンによる死を引き起こす主原因である。この疾患は通常、前立腺の外科的除去法、化学療法、及び放射線療法によって治療する。前立腺の成長は精巣のアンドロゲン（主に、テストステロン）に依存している。したがって上記に列挙した治療は、去勢または抗−アンドロゲン治療法のような、テストステロンのレベルを減少させるように計画された治療法が通常は付随して行われる。本発明によればテストステロンレベルを下げることは、ＬＨ受容体の細胞外リガンド結合ドメインを投与することによっても達成できる。男性のＬＨの主たる作用は、ライジッヒ細胞にテストステロンを産生させる作用である。したがってこのＬＨ／ＣＧ受容体の可溶性リガンド結合ドメインを個体に投与することによって、テストステロンの生合成を誘導するのに利用可能な血清中のＬＨの量を減少させることができる。可溶性受容体を投与するとこのようにテストステロンの合成が減少し、結果的に前立腺の成長速度が小さくなる。このような治療法は、骨の痛み（疾患の進行段階を示す、ほとんどの患者で通常起こる症状である）を緩和するために用いられるのはもちろんのこと、腫瘍の成長を抑制したり腫瘍の緩解を起こさせたりするために用いることができる。Ｆ．リガンド結合親和性を変化させたｓＧｈＢＰの用途それぞれの糖タンパク質ホルモンに対する結合親和性を変化させた本発明の可溶性糖タンパク質ホルモン結合タンパク質（ｓＧｈＢＰ）は多くの用途に用いることができ、そのうちのいくつかを以下に詳細に述べる。例えばそれぞれの糖タンパク質ホルモンに対する結合親和性を低下させたｓＧｈＢＰは、内因性の糖タンパク質ホルモンの循環半減期を延長させるように「補−ホルモン（co-hormone）」として用いることができる。この方法の具体的応用例は、性腺刺激ホルモン低下による性機能不全の治療法である。ここでは、それぞれのリガンドへの親和性が低くなるように、ｓＧｈＢＰのリガンド結合領域を変化させることができる。その変化させたｓＧｈＢＰを特定の糖タンパク質ホルモンとともに投与することによって、ホルモンの代謝を減少させて生体内での半減期と効力を延長できる。関連した用途では、その態様が上記に記載した治療法（例えば、抗癌治療）のうちのいくつかで具体化されているが、ｓＧｈＢＰは内因性のＧｈＲに対する「おとり」として用いることができる。このような「おとり」としてのＧｈＢＰは、遊離のＧｈを束ねている内因性のＧｈＲと同じくらいかそのＧｈＲよりもずっと良好にそれぞれのＧｈに結合するように設計することができる。「非結合」可溶性ＧｈＲ、例えばＴＳＨに対してほどんど親和性がないか全く親和性のない可溶性ＴＳＨ受容体などは、例えば、自己免疫疾患の治療に用いることができる。例を挙げるとＴＳＨ受容体に対する刺激性抗体と阻害性抗体は、甲状腺の機能不全を引き起こす（NagayamaおよびRapoport、1992年；TomerおよびDavies、1993年）。グレーブス病はＴＳＨ受容体の細胞外領域に対する刺激性の自己免疫抗体によって引き起こされる形式甲状腺機能こう進症であり、これに対してハシモト病は阻害性の自己免疫抗体によって引き起こされる（Magner他、 1990年）。同様に早発性卵巣機能不全には、ＦＳＨ受容体に対する循環抗体が関連している（Chiauzzi他、1982年；Dias他、1982年）。本発明によると、７−ＴＤＧＲの内因性細胞外リガンド結合ドメインが患者自身の抗体の標的となってしまう自己免疫疾患、例えばグレーブス病や早発性卵巣機能不全は、抗体に結合する可溶性リガンド結合領域の能力に実質的に影響を与えることなく、糖タンパク質ホルモンの結合を遮断するように変性させた可溶性リガンド結合領域、例えばＴＳＨ受容体またはＦＳＨ受容体から誘導される領域を投与することによって治療できる。そこでこれらの変性したｓＧｈＲは、ＧｈＲのシグナリング（signalling）を実質的に妨害することなく自己免疫抗体に結合する。Ｇ．Ｇｈペプチド擬態物のためのスクリーン本発明の方法および組成物は、７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体に結合する化合物またはペプチドを確認するスクリーンに用いることができる。このような化合物またはペプチドは、内因性リガンドの擬態物、作用薬または拮抗薬であるとよい。例えばこのようなスクリーンは、ＦＳＨ、ＬＨ、またはＴＳＨのそれぞれの受容体に対する作用を擬態する化合物またはペプチドを確認するために用いることができる。一実施態様においてこのスクリーンは、対応する７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体へのリガンド（例えば、ペプチドリガンド）の結合に影響を与える能力のある化合物を確認する方法である。このスクリーニング法に利用し易い代表的受容体はさきに定義した。この方法は、対応する受容体から誘導したアンカーされている受容体構築物を、テスト化合物の存在および非存在下でリガンドと接触させる工程、そのリガンドとアンカーされている受容体との間の結合の程度でテスト化合物の効果を測定する工程、および結合の程度に基づき測定した化合物の効果がしきい値レベルを越えたとき、対応する７回貫膜ドメインＧタンパク質共役受容体へのそのリガンドの結合性を効果的に変えることのできる化合物を確認する工程を含んでいる。上記の方法を、それぞれのウェルごとに異なるテスト化合物を入れた多ウェルプレート（例えば、９６ウェルプレート）で、化合物のライブラリーをスクリーニングするために用いることができる。特に、この方法は、コンビナトリアルライブラリーに使用することができる。ランダム配列のオリゴヌクレオチド、ポリペプチド、または合成オリゴマーの種々のコンビナトリアルライブラリーが提供されている（例えば、Houghten、1985年、1994年；Houghten他、1986年、1991年、1992年）。たくさんの小分子のライブラリーも開発されている（例えば、Buni n他、1994年；VirgilioおよびEllman、1994年）。オリゴマーのコンビナトリアルライブラリーは、異なるサブユニットの混合物を成長しつつあるオリゴマーまたは親化合物に、望ましいオリゴマーの大きさになるまで（通常はヘキサペプチドまたはヘプタペプチドである）順次添加する種々の液相または固相の方法で形成することができる。複雑さを増大したライブラリーはこの方法で、例えば追加して行うそれぞれのサブユニット工程で多数の選択した試薬をプールすることによって形成することが可能である（Houghten他、 1991年）。あるいはこのライブラリーは固相合成法で製造することができる。この合成法では、そのライブラリーを形成する異なる配列のオリゴマーを含有するビーズが交互に混合され分離され、選択された数のサブユニットの１種が各ステップで分離されたビーズの各群に添加される。アンカーされている受容体へのリガンドの結合に望ましい影響を与えるライブラリーの化合物の確認は、例えば一つのサブユニットの位置にのみ既知の残基を含んでいるサブライブラリーを活性化合物を含んでいると確認できる反復合成法のような従来の方法によって実施することができる。別の実施態様ではこのスクリーンは、アンカーされている受容体に対して高い親和性を有する化合物を直接単離するのに用いられる。例えばある特定の実施態様では、スクリーンはコンビナトリアルペプチドのファージ表示ライブラリーを用いて行われ（Cwirla他、1990年；Devlin他、1990年；ScottおよびSmith、1990 年）、そこで発現されるペプチドはファージコートタンパク質への融合物として表示される。標的タンパク質上のファージ粒子の集団の親和性精製法を利用することによって、結合親和性を備えたペプチドを回収することができる。この場合に適用されると、選択された可溶性糖タンパク質ホルモン受容体は例えば上記に記載したように選択された宿主細胞において融合物として発現する。そこで可溶性受容体は膜アンカーから開裂され、例えば作用薬結合性を妨害しない抗体を通じてアッセイプレートのウェルの内側に付着する。またその細胞をアッセイ用ウェル中に平板培養を行い、抗体（例えば「パニング精製法（panning purifications）」または他の方法によってウェルに固定化し、そしてアンカーされた受容体をそれらを発現した細胞表面に残す。それから上記固定化した受容体または細胞を、記載されたようにファージ表示ライブラリーをスクリーニングするために使用し（Wrighton他、1996年）、続いて受容体に結合しているファージを受容体のアフィニティー精製法を行って単離する（Wrighton他、1996年）。そのスクリーンに細胞を用いた場合、選択された受容体は通常、アフィニティー精製法を行う前に適当なプロテアーゼで開裂することによってその細胞から分離する。プロテアーゼによる開裂部位が含まれていると、トロンビン処理を行った後に、特異的に結合している化合物のみが開裂（細胞外ドメインに沿って）するため、候補となる分子の特異的相互作用と非特異的相互作用との間の識別が可能となることに注目すべきである。このアプローチによれば、スクリーニング法の選択性を実質的に高めることができる。上述したアンカーされているグルタメート受容体とともに使用しやすくなる。種々の異なる化合物が本発明の方法を用いてスクリーニングできる。これらの化合物としては、ペプチド、巨大分子、小分子、化学上および／または生物学上の混合物、及び真菌、細菌、または藻類の抽出物が含まれる。このような化合物、または分子は、生物学上化合物、合成の有機化合物、または無機化合物でもよいし、また、製薬会社や化合物のライブラリー（例えばコンビナトリアルライブラリー）の専門の提供者などの数多くの供給者から得ることができる。確認した活性化合物がペプチドである場合には、そのペプチドは、ペプチド様の擬態物を設計し、そして経口で活性の小分子擬態物の発見を手助けするために用いることができる。またそのペプチド自体を治療薬として用いることもできる。さらに生物活性のポリペプチドの構造は、例えばＮＭＲを用いて決定することができ、また、スクリーニングした小分子のタイプを選択するために用いることができる。受容体の作用薬または拮抗薬となる可能性のある薬物として、ある種のテスト化合物を確認したあとで、スクリーニングアッセイの実施者は通常、引続いて、その選択された化合物の効力と特異性を生体外と生体内の両方でテストすると解される。続いて、生体内テストを行う場合であろうと、承認済みの薬物として動物に投与する場合であろうと、そのスクリーニングアッセイで確認された薬物は、動物に、好ましくはヒトに生体内投与するための医薬製剤中に配合することができる。この状況でのスクリーニング法の一実施態様には、アンカーされている受容体に対するリガンドの結合性を変える効果のある薬物であると確認された化合物の医薬製剤を調製する工程がさらに含まれる。スクリーニングアッセイで選択された化合物、または薬学上許容できるそれらの塩を、例えば水、緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコールなど）またはそれらの適当な混合物のような生物に許容される媒体とともに、投与用に配合することができる。選択した媒体中での活性成分の最適濃度は、医療化学者に充分に知られている方法により経験的に決定することができる。ここで用いたように「生物学上許容できる媒体」には、医薬製剤を投与する望ましい経路に適切なあるゆる溶媒、分散媒体などが含まれる。薬学上活性な物質のためにこのような媒体を使用することは当業者には公知である。従来の媒体または試薬は、化合物の活性と両立しない場合を除いて、本発明の医薬製剤に使用できると考えられる。適切なビヒクルと他のタンパク質を含んだその配合剤が、例えばGennaro、199 0年に記載されている。これらのビヒクルには、注射用の「デポジット配合剤」が含まれる。上記に基づくとこれらの薬学上配合剤としては、限定的ではないが、一種以上の薬学的に許容されるビヒクルまたは希釈剤と組み合わせて適切なｐＨを有し生理液と等張の緩衝媒体中に含有されている化合物の溶液または凍結乾燥粉末がある。好ましい実施態様では、その化合物は局所投与や全身投与が行えるように、滅菌製剤として配合できる。凍結乾燥した製剤の場合には、限定するわけではないが、マンニトールやグリシンのような支持用の賦形剤を用いて、ちょうど良い容量の適当な緩衝溶液が得られ、望ましいｐＨであって適当な等張性の緩衝溶液を得ることができる。また同様の溶液を用いて所望の容量の等張溶液の医薬組成物を得ることができ、限定するわけではないが、適当な濃度の燐酸塩やクエン酸塩を入れた緩衝食塩溶液を用いて、望ましいｐＨ（例えば、ｐＨが中性である）になっている等張性の医薬製剤を常に得ることができる。Ｈ．利点糖タンパク質ホルモン受容体から誘導された可溶性リガンド結合領域は、他のタイプの受容体拮抗薬よりもたくさんの利点を備えている。例えばこのようなＳＬＢＲは特定のホルモンと結合するように設計されているが、作用薬のような活性を示すわけではなく、それは標的器官の受容体と相互作用し、高濃度で通常は作用薬の活性を示すホルモン拮抗薬とはまさに対照的である。したがってそれらは、密接に関連する分子（例えば、ＬＨおよびＦＳＨ）によって仲介されるシグナリング経路（signalling pathways）に選択的で特異的に影響を与えるべく使用することができる。さらに受容体拮抗薬は標的組織に送達する必要がなく、またそれらが野生型受容体に類似しているために抗原性は小さい。 VI．本発明の可溶性受容体の投与本発明は、少なくとも一つの可溶性受容体またはその活性なフラグメントの有効量を、通常は適当なビヒクルまたは担体に懸濁するかまたは抱合させて含有させた治療用または予防用の組成物を投与する方法を含む。予防的に用いられる場合、本発明の化合物は疾患の何らかの兆候、即ち症状のサインが現れる前に提供される（例えば、避妊用）。対照的に治療用では、現在の疾患の兆候が現れた後にその疾患を治療するために与えられる。この化合物の治療薬としての投与により、症状やこのような疾患または病状が緩和される。Ａ．治療用／予防用組成物の調製可溶性受容体、その治療上活性のあるフラグメントまたは抱合体は、治療用として利用するために生理学的に許容されるキャリアに配合して滅菌濾過するとよい。組成物の投与を受ける患者にとってその投与が耐えられるものであるならば、組成物は「薬学的に許容」されると言われる。投与量が生理学的に意味のある量であるとき、このような薬剤は「治療上有効な量」で投与されたと言われる。薬剤が存在することによって、その薬剤を受け入れる患者の生理に検出できるほどの変化が生じる場合、薬剤は生理学的に有意である。これらの分子は、タンパク質の医薬組成物を調製しかつ投与するための既知の方法にしたがって配合しかつ投与することができる（例えば、Banga、1995年参照）。例えば、分子またはそれらの機能的誘導体を、薬学的に許容されるキャリアや賦形剤や他のビヒクルと組み合わせてもよい。適当なビヒクルおよびそれらの配合剤としては、例えばGennaro(1990年)やBanga(1995年)に記載されており、それらは例えばトウィーン２０または８０といった界面活性剤、塩、緩衝剤、および他の賦形剤がある。治療用組成物は水溶液として保存するかまたは凍結乾燥される。放出制御製剤は、本発明の分子を複合化するか吸収するポリマーを用いて製造できる。このようなポリマーは、例えば本発明の治療用化合物の放出速度または作用持続期間をコントロールするために用いられる。適当なポリマーの例としては、ポリエステル類、ポリアミノ酸類、ハイドロゲル類、ポリ乳酸及びエチレン −酢酸ビニル共重合体が挙げられる。あるいはまたさらに、本発明の治療用化合物は、例えばコアセルベーション法や界面重合反応によって調製されるマイクロカプセル、例えばヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンのマイクロカプセルおよびポリ（メチルメタクリレート）のマイクロカプセルに包括させることもできるし、あるいはアルブミンミクロスフェア、ナノ粒子、ナノカプセルとともに、例えば脂質またはリン脂質の懸濁液のコロイド医薬送達系リポソームの懸濁液水性エマルジョン（ミクロエマルジョンまたはマクロエマルジョン）中に包括することもできる。これらのアプローチや他のアプローチについては、例えば Gennaro、1990年に開示されている。本発明の治療用組成物や予防用組成物は、皮下、筋肉内、静脈内、または脳脊髄内への注射、肺内か鼻腔内へのエアロゾル、皮膚への貼着、小胞内への注入などによって投与することができる。注射によって投与する場合、その投与を連続的に注入することで行ってもよいし、または一回または多数回注入することで行ってもよい。Ｂ．投与量投与される治療用化合物の投与量は臨床経験により決定され、患者の年齢、身長、体重、性別、いままでの医療履歴、及び全身の医学的症状のようなファクターに応じて変わる。通常は、毎日か１週間に数回（例えば３回）、当初の用量は約３００μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ（患者の体重）で、患者に投与することが望ましいが、もっと低用量かもっと高用量で投与することもできる。この用量は、投与した受容体のクリアランスの薬物動態か、あるいは当業技術界では既知の薬物動態原理を利用するＳＢＰに部分的に基づいて決定する。このような用量を調製する方法は既知であるか、当業者には明白となるであろう。例えば、Gennaro(1990)参照。治療用配合剤に含まれる本発明の分子の濃度は決定的ではないが、通常は約１ μｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌの範囲である。例えば実施例５では、投与濃度は約３０μｇ／ｍｌである。次の実施例は例示であり、本発明を決して限定するものではない。材料及び方法他に指示されていない限り、制限酵素およびＤＮＡ修飾酵素はNew England Bi olabs(米国マサチューセッツ州ビバリー所在)またはBoehringer Mannheim(米国インディアナ州インディアナポリス所在)より入手し、また他の化学物質はSigma (米国ミズーリ州セントルイス)またはUnited States Biochemical(米国オハイオ州クリーブランド)から購入した。Ａ．緩衝剤燐酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）１０％の貯蔵溶液、１リットル：８０ｇのＮａＣｌ２ｇのＫＣｌ１１．５ｇのＮａ₂ＨＰＯ₄・７Ｈ₂Ｏ２ｇのＫＨ₂ＰＯ₄ 使用溶液、ｐＨ７．３：１３７ｍＭのＮａＣｌ２．７ｍＭのＫＣｌ４．３ｍＭのＮａ₂ＨＰＯ₄・７Ｈ₂Ｏ１．４ｍＭのＫＨ₂ＰＯ₄ Ｂ．放射線標識化結合アッセイヒトの絨毛性性腺刺激ホルモン（ＣＲ１２９）とヒトのＦＳＨ（ＮＩＤＤＫ− Ｉ−１）は、National Hormon and Pituitary Agency(米国メリーランド州バルチモア)より入手し、ラクトペルオキシダーゼ法（Thorell及びJohansson、1971 年）を用いてヨウ素化した。このトレーサーの特異的活性は、Ｉ¹²⁵−ＦＳＨの場合約１００，０００ｃｐｍ／ｎｇ、そしてＩ¹²⁵−ｈＣＧの場合約５０，０００ｃｐｍ／ｎｇであった。一時的にトランスフェクトされた細胞を、０．１％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳ、３００μｌに入れた放射性リガンドとともに、２３℃で１８時間インキュベートした。非特異的結合は、過剰の標識を施していないホルモン（１００ＩＵのｈＣＧ／チューブまたは４ＩＵのＦＳＨ／チューブ）を添加することによって測定した。最適の結合条件を判断してから、ＦＴＣＤ８とＬｔＣＤ８を用いてトランスフェクトした細胞に対する放射線リガンド受容体アッセイを、２２℃でそれぞれ５時間と、２時間とで行った。インキュベートの後、細胞を二度洗浄し、続いて遠心分離を行ってからガンマ−カウンターを用いて放射能を測定した。実施例１プラスミド構築物の構築と発現プラスミドｐｃＤＮＡ３ＬＣＤ８は、ヒトＬＨ受容体（Jia他、1991年）の細胞外ドメインとＣＤ８の一つの貫膜ドメインとの融合体をエンコードしており、それは以下のようにポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ；Mullis、1987年；Mullis他、1987年）を用いることで構築した。ＣＤ８貫膜領域（アミノ酸１６２からＣ末端まで(Littman他、1985年)）をエンコードするＥｃｏＲＶ−ＸｂａＩフラグメントをプラスミドｐＳＫ−ＡＴＥ−ＣＤ８（Chen他、1994年；Dr．Shaun Coughl in，UCSF，米国カリフォルニア州サンフランシスコ所在より提供された）から単離した。そのＥｃｏＲＶ−ＸｂａＩフラグメントを、ＬＨ受容体の細胞外領域（ＬＨ受容体のアミノ酸１−３５５(Jie他、1991年)）をエンコードする別のポリヌクレオチドフラグメントにトロンビン開裂部位（トロンビン受容体のアミノ酸３６〜６６(Vu他、1991年；Chen他、1994年)）を介して連結し、発現ベクターｐｃＤＮＡ３（Invitrogen Corp.，米国カリフォルニア州サンディエゴ所在）にサブクローニングした。ＬＨ受容体とトロンビン受容体の間の得られた連結部は、 ....ＮＰＣＥＤ／ＡＴＬＤＰ....（配列番号１）をエンコードしており、これに対してトロンビン受容体とＣＤ８との間の連結部は、配列....ＮＥＳＧＬ／ＩＹＩＷＡ....（配列番号２）をエンコードしていた。この構築物によってエンコードされた融合ペプチドをＬｔＣＤ８と名付けた。プラスミドｐｃＤＮＡ３ＦＣＤ８は、ヒトＦＳＨ受容体から得られる細胞外ドメインとＣＤ８の貫膜ドメインとの融合体をエンコードしており、それはヒトＦＳＨ受容体の細胞外ドメイン（アミノ酸１−３５８(T illy他、1992年)）をＣＤ８の貫膜領域と細胞質領域に、先に述べたトロンビン受容体配列を介して融合させることによって構築した。ＦＳＨ受容体とトロンビン受容体配列との間の得られた連結部は、配列....ＮＰＣＥＤ／ＡＴＬＤＰ.... （配列番号３）を含んでいて、これに対してトロンビン受容体とＣＤ８との間の連結部は、ＬｔＣＤ８で得られたのと同じ配列であった。プラスミドｐｃＤＮＡ３ＴＣＤ８は、ヒトＴＳＨ受容体から得られる細胞外ドメイン（アミノ酸１〜４１０；NagayamaおよびRapoport、1992年）をＣＤ８の貫膜ドメインと、前記トロンビン受容体配列を介して融合させた融合体をエンコードしており、それは上記に記載したようにして構築した。ＴＳＨ受容体とトロンビン受容体配列との間の連結部は、配列....ＮＰＣＥＤ／ＡＴＬＤＰ....（配列番号４）を含んでいた。得られた構築物はＴｔＣＤ８と名付けた。ヒト胎児の腎２９３細胞において野生型とキメラの受容体を発現させるために、受容体のｃＤＮＡをｐｃＤＮＡ３（Invitrogen，米国カリフォルニア州サンディエゴ）にサブクローニングした。細胞培養と一時的発現は、以前に記載されているように（Kudo他、1996年）行った。簡単に述べると、２９３細胞を、１０％の血清と抗体を補充したＤＭＥＭ／Ｆ１２媒体中で培養した。１０％の血清と抗体を補充したＤＭＥＭでその媒体を置き換えた後で２９３細胞を、野生型及びキメラの受容体のｃＤＮＡを含む１０μｇの発現ベクターを用い、燐酸カルシウム沈降法（Tilly他、1992年）によってトランスフェクトした。実施例２トランスフェクトした細胞へのリガンドの結合上記野生型またはキメラの受容体を用いてトランスフェクトしたヒト胎児の腎２９３細胞を、それらをトランスフェクトさせた受容体のリガンドに結合する能力について検定した。その細胞を、標識化したリガンド（ＦＳＨまたはｈＣＧ）とともにインキュベートし、平衡結合定数をスキャッチャードプロット分析（Sc atchard、1949年）を用いて測定した。放射能標識と結合は、上記に記載したように行った。その結果は、野生型ＦＳＨ受容体とＦｔＣＤ８の結合動態（図２Ａ）、および野生型ＬＨ受容体とＬｔＣＤ８の結合動態（図２Ｂ）として、図２Ａおよび図２Ｂに示されている。Ｋｄ値は次の通りである。即ち、ＦｔＣＤ８は０．３１ｎＭ、野生型ＦＳＨ受容体は１．０３ｎＭ、ＬｔＣＤ８は０．６１ｎＭ、野生型ＬＨ受容体は０．２８ｎＭである。アンカーされているＦｔＣＤ８では、放射能標識を施したＦＳＨに対する結合親和性は野生型の受容体の結合親和性よりも３倍も高く、細胞一個あたりの受容体の数はＦｔＣＤ８では約１７，０００、またＦＳＨＲでは約３０，０００と推定された。アンカーされたＬｔＣＤ８は野生型受容体の結合親和性に匹敵するほどの結合親和性を示した。これらの結果は、性腺刺激ホルモン受容体の細胞外領域をトランスフェクトした細胞の細胞表面に、７つの貫膜領域とは関係なく野生型受容体のレベルに匹敵するほどのレベルで発現させることができ、またその細胞外領域が特異的リガンドに対して高い親和性を保持している点を証明している。またこの細胞を、標識を施した適当なリガンドとともに４℃、２２℃そして３７℃にて、０．５時間〜４８時間の範囲内の時間でインキュベートすることにより、それぞれの受容体に対する最適なリガンド結合条件を評価した。これらの実験の結果は、トランスフェクトを行ってから８時間後に原形質膜上に結合部位が高いレベルで現れることを示唆した。実施例３可溶化したリガンド結合領域の開裂及び分析上記に記載したアンカーされた受容体のリガンド結合領域を、野生型またはアンカーされた（ＦｔＣＤ８またはＬｔＣＤ８）受容体を発現するトランスフェククされた２９３細胞を、１０ＩＵ／ｍｌのα−トロンビンで処理することによって可溶化して、受容体細胞外領域を放出させた。それからならし培地（Centrico n 30，Amicon，Bedford，米国マサチューセッツ州ベッドフォード所在を用いて１０倍濃縮した）を、標識をつけたリガンドとともに、２３℃で５時間（ＦｔＣＤ８でトランスフェクトした細胞から得た培地）、または４℃で１６−１８時間（ＬｔＣＤ８でトランスフェクトした細胞から得た培地）インキュベートし、続いてジスクシンイミジルスベレート（２ｍＭ）を用いて１時間、架橋処理した。この架橋反応は３．６ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４を添加することによって終結させた。トロンビン処理は対照グループに対しては省略したが、これに対していくつかのグループは結合親和性を証明するために過剰量の非標識化リガンドとともにインキュベートした。還元剤なしでLaemmeli緩衝液を添加した後、標識化したホルモンと可溶化した受容体フラグメントとの間で形成された架橋複合体を、ポリアクリルアミド（１０％）ゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）を用いて分画して、特性解析を行った。その結果は図２Ｃおよび図２Ｄに示されている。略号はｗｔＦＳＨＲが野生型ＦＳＨ受容体、ｗｔＬＨＲが野生型ＬＨ受容体である。分子量マーカーと標識化したリガンドの泳動パターンが示されている。ゲル電気泳動を行った後、標識化したＦＳＨは４５Ｋｄのバンドとして泳動し、一方、トロンビンで前処理をしたＦｔＣＤ８発現細胞から得られたならし培地は、もっと高い分子量のバンド（９０Ｋｄ）を示したが、このことは標識化したＦＳＨとＦＳＨ受容体の細胞外領域との間に複合体が形成されたことを示している（図２Ｃ）。複合体の形成は過剰の非標識化ＦＳＨを含有させることで阻害され、野生型の受容体を発現する細胞においてまたはトロンビンによる前処理を行わなかった場合には見られなかった。同様に、トロンビンで前処理を行うと、標識化したｈＣＧとＬＨ受容体の細胞外領域との間に１０５Ｋｄの複合体が形成された（図２Ｄ）。これらの結果は、性腺刺激ホルモン受容体の機能的リガンド結合ドメインをアンカーされた受容体アプローチを用いることで生じさせることができること、および可溶性受容体がそれらのリガンド結合能力を保持していて、予測された大きさであることを証明している。可溶性の受容体フラグメントは、それぞれＦＢＰ（ＦＳＨ結合タンパク質）及びＬＢＰ（ＬＨ／ｈＣＧ−結合タンパク質）と命名した。実施例４生体内での性腺刺激ホルモンの作用の阻害Ａ．競合結合アッセイ結合アッセイを行って、ＦＳＨおよびＬＨの受容体の可溶化されたリガンド結合領域が生体外で性腺刺激ホルモンの作用をブロックするかどうかを調べた。放射性リガンド結合アッセイでは、野生型のヒトＦＳＨまたはＬＨ受容体を発現する２９３細胞を、それぞれ標識化したＦＳＨまたはｈＣＧとともに、濃度を増加させたＦＳＨ受容体およびＬＨ受容体それぞれの可溶化細胞外領域ＦＢＰとＬＢＰの存在下または非存在下でインキュベートした。続いてその細胞に結合して残った標識化したＦＳＨの量を測定した。その結果が図３Ａと図３Ｂに示されている。図３Ａから分かるように、ＦＢＰを添加すると、用量依存性の様式で、標識化したＦＳＨの野生型受容体との結合が抑制され、非特異的結合に匹敵するほどのレベルに到達した。対照的にＬＢＰを含有させても効果はなかった。この結果は、ＦＳＨ受容体の可溶化細胞外領域（ＦＢＰ）が、野生型ＦＳＨ受容体に対して標識化したＦＳＨと競合することを示している。同様に、野生型のヒトＬＨ受容体を発現する２９３細胞への標識化したｈＣＧの結合は、用量依存性の様式でＬＢＰとは競合するが、ＦＢＰとは競合しなかった（図３Ｂ）。この結果は、ＦＢＰおよびＬＢＰがそれぞれ、それぞれの野生型受容体にＦＳＨおよびＬＨが結合するのを特異的に妨害することを示している。Ｂ．ｃＡＭＰの産生更なる実験で、性腺刺激ホルモンによって誘導されたシグナルトランスダクショクを妨害する可溶化リガンド結合領域の能力を評価した。ヒトＦＳＨ受容体またはＬＨ受容体を発現する２９３細胞をＤＭＥＭ／Ｆ１２、０．１％ＢＳＡ中、濃度を増加させたＦＳＨまたはｈＣＧとともに、ＦＢＰまたはＬＢＰ（１０⁷細胞等量／ウェル）の存在下または非存在下３７℃にて３時間、インキュベートしてｃＡＭＰの産生を刺激した。それからｃＡＭＰのレベルをラジオイムノアッセイによって検出した（DavorenおよびHsueh、1985年）。結合タンパク質の濃度を、それぞれの標識化したリガンドが野生型受容体に結合するのを阻害するそれらの能力に基づいて測定した。図３Ｃに示されているように、ＦＢＰを添加すると、ＦＳＨ受容体発現細胞においてＦＳＨによって誘導されるｃＡＭＰの産生は完全にブロックされたが、これに対してＬＢＰでは効果がなかった。ヒトＬＨ受容体を発現する細胞を、ｈＣＧとともに、ＬＢＰまたはＦＢＰありでインキュベートするか、またはＬＢＰまたはＦＢＰなしでインキュベートした実験から得られた結果が図３Ｄに示されている。ＬＢＰを添加すると、ＬＨ受容体発現細胞でのｈＣＧによるｃＡＭＰの刺激は阻害されたが、これに対してＦＢＰを添加しても効果はなかった。同様のアプローチを用いることによって、可溶化ＴＳＨ受容体フラグメントの能力、即ちヒトＴＳＨ受容体を一時的に発現する２９３細胞においてヒトの組換えＴＳＨ（Genzyme，Cambridge，米国マサチューセッツ州ケンブリッジ所在）によって誘導されるｃＡＭＰの産生を妨害する能力を評価した。ヒトＴＳＨ受容体の細胞外領域はＴＳＨ結合タンパク質（ＴＢＰ）と名付けられており、それは同じアンカーされた受容体の方法を用い、続いてトロンビン処理を行って製造した。図３Ｅは、ＴＢＰを添加すると、ＴＳＨ受容体発現細胞においてＴＳＨによって濃度依存性の様式で誘導されるｃＡＭＰの産生がブロックされたが、これに対してＬＢＰを添加しても効果がなかったことを示している。図３Ｆは、ヒトＬＨ受容体を発現する細胞を、ｈＣＧとともに、ＬＢＰまたはＴＢＰありでインキュベートするか、あるいはＬＢＰまたはＦＢＰなしでインキュベートした実験の結果を示している。ＬＢＰを添加すると、ＬＨ受容体発現細胞におけるｈＣＧによるｃＡＭＰの刺激は阻害されたが、これに対してＴＢＰを添加しても効果はなかった。上記にまとめた結果は、ここに記載された性腺刺激ホルモン結合タンパク質（ＦＢＰ、ＬＢＰおよびＴＢＰ）が、性腺刺激ホルモン及びＴＳＨ−誘導性のシグナルトランスダクションを生体外で選択的に阻害するかまたはブロックする能力があることを示している。実施例５生体内での性腺刺激ホルモンの作用の阻害Ａ．バキュロウイルスにおけるＦＢＰの発現ＦＢＰを生体内で機能的拮抗薬として用いることができるかどうかをテストするために、ＦｔＣＤ８ｃＤＮＡを「ｐＦＡＳＴＢＡＣ」ベクターにサブクローニングし、また組換えバキュロウイルスを「ＢＡＣ−ＴＯ−ＢＡＣ」バキュロウイルス発現系（GIBCO-BRL，Gaithersburg，米国メリーランド州ガイサーズブルグ所在）を用い製造者によって提供されたプロトコールに従って調製した。ＦｔＣＤ８をエンコードする組換えバキュロウイルスを製造者の指示書を利用して調製し、そして５％の血清を含むＳＦ９００ＩＩ培地に入れたＳＦ９細胞（３×１０⁶／ｍｌ）を、前記組換えウイルスを用いて感染させた。５％の血清とトロンビン（１０ＩＵ／ｍｌ）を含む培地中で２７ ℃で７２時間培養した後、その細胞を遠心分離して細胞の破片を取り除いた。そのならし培地を、ＤＩＡＦＬＯ限外濾過膜ＸＭ５０（Amicon）を用いて３０倍に濃縮し、０．２μｍフィルター（UNIFLO，Schieicher and Schuell，米国ニューハンプシャー州キーン所在）を用いて濾過した。ＦｔＣＤ８−発現昆虫細胞によって産生したＦＢＰを、上述したように生体外における標識化したＦＳＨの野生型ＦＳＨ受容体への結合を阻害する能力についてアッセイした。その結果は、トランスフェクトした２９３細胞を用いて得られた結果とほぼ同一であった。Ｂ．ＦＢＰ投与に続いて起こる生体内での精巣細胞アポトーシスの誘発未成熟の雄ラット（２１日齢、体重約４５ｇ〜５０ｇ）に、上述したように調製した可溶化ＦＳＨ受容体フラグメントを含むＳＦ９細胞のならし培地１ｍｌを用いて２日間、６時間ごと（１０⁸細胞当量／注射）に皮下注射（ｓ．ｃ．）した。その注射容量に含まれる可溶性受容体タンパク質の濃度は、約３０μｇ／ｍｌと１００μｇ／ｍｌの間であった。したがって６時間毎に投与される有効投与量は、約６ｍｇ／ｋｇと２０ｍｇ／ｋｇとの間であった。最初の注射から２日後、精巣の重さを量り、精巣細胞のアポトーシスを３’末端−標識化法（Tapanainen他、1993年）により定量した。また、ＦＢＰの効果を、以前に記載された（Billig他、1995年）ように「ＡＰＯＴＡＧ」キット（Onco r，米国メリーランド州ガイサーズブルク所在）を用いてアポトーシスとなっている特定の細胞型をin situで分析する方法によっても検定した。何頭の動物は、下垂体がＬＨ及びＦＳＨを放出するのを抑制するために、強力なゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）拮抗薬［Ｏｒｇ３０８５０：アセチル−Ｄ−パラクロロ−Ｐｈｅ（ＡｃＤｐＣｌ−Ｐｈｅ）、Ｄ−パラクロロ−Ｐｈｅ（ＤｐＣｌ−Ｐｈｅ）、Ｄ−Ｂａｌ、ＤＬｙｓ、ＤＡｌａ−アミド；（ＡｃＤｐＣｌ）Ｐｈｅ１−（ＤｐＣｌ）Ｐｈｅ２−ＤＢａｌ３−ＤＬｙｓ６−ＤＡｌａ１０（アミド）（配列番号５：ＤはＤ型（Ｌ型でない）アミノ酸を意味する）；５０μｇ／ラット、図５Ｃ（ＡＮＴ）；Decker他、1992年］を用いて処理し（De cker他、1992年）、これに対して残りの動物には、野生型バキュロウイルスを用いて感染させたＳＦ９細胞のならし培地を用いて処理した。アポトーシスに陥っている特定の細胞型についてのin situでの分析は、以前に記載された（Billig 他、1995年）ようにＡＰＯＴＡＧキット（Oncor，米国メリーゴランド州ガイザースブルグ所在）を用いて行った。動物のケアは医療機関のガイドラインに従った。後でゲル電気泳動が行われる３’末端−標識化法を用いて精巣ＤＮＡの断片化を分析すると、ヌクレオソーム間のＤＮＡ断片化の出現によって明かであるように、ＦＢＰ−処理を行ったグループでは精巣細胞のアポトーシスが大きく増加していることが示された（図４）。 in situでの分析結果は図５Ａ−Ｃに図示されており、それは精巣細胞に対する処理の効果を示している。この図から分かるように、ＦＢＳを用いて２日間処理を行ったところ（図５Ｂ）ＤＮＡ断片化が大きく増加した。またＦＢＰ処理によって精巣の成長が３３％抑えられた（未処理：１９２±２８ｍｇ、ＦＢＰ−処理：１２８±３０ｍｇ、ｎ＝１４）。比較できるほどの精巣重量（１４０±１８ｍｇ）の減少とアポトーシスＤＮＡ断片化反応の増加は、ＬＨとＦＳＨの両方の分泌を抑制するためにＧｎＲＨ拮抗薬（ＡＮＴ：図５Ｃ）を用いて処理したラットで見られた。対照的に、精巣成長（２０１±２６ｍｇ）遅延または精巣細胞アポトーシスの変化は、野生型のバキュロウイルスを用いてトランスフェクトした昆虫細胞のならし培地で処理を行ったラットには全く見られなかった（対照：図５Ａ）。これらの上記の結果は、ＦＢＰが、精巣の生殖細胞の生存に必須の内因性ＦＳＨの作用を中和する能力があることを証明している（Tapanainen他、1993年）。本発明は特定の方法及び実施態様を参照して説明したが、種々の修飾及び変更を本発明から逸脱することなくなし得ることは分かるであろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者クドウ，マサタカアメリカ合衆国 94025 カリフォルニア州メンローパークロブレイアベニュー 850 ナンバーシー

Claims

【特許請求の範囲】１．糖タンパク質ホルモン受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）をエンコードする５’末端セグメント、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメント、および前記５’末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラ核酸分子。２．前記プロテアーゼ認識部位が、トロンビン認識部位である請求項１に記載の分子。３．前記５’末端セグメントが、ヒト黄体ホルモン結合タンパク質（ＬＢＰ）をエンコードする請求項１に記載の分子。４．前記５’末端セグメントが、ヒト卵胞刺激ホルモン結合タンパク質（ＦＢＰ）をエンコードする請求項１に記載の分子。５．前記５’末端セグメントが、ヒト甲状腺刺激ホルモン結合タンパク質（ＴＢＰ）をエンコードする請求項１に記載の分子。６．前記３’末端セグメントが、ＣＤ８分子の貫膜部分をエンコードする請求項１に記載の分子。７．前記３’および５’末端セグメントが、互いに異種である請求項１に記載の分子。８．（ａ）請求項１に記載のキメラ核酸分子、および（ｂ）宿主細胞内に前記キメラ核酸分子を発現させるのに有効な調節配列を含む発現ベクター。９．前記キメラ核酸分子のプロテアーゼ認識部位が、トロンビン認識部位である請求項８に記載のベクター。１０．前記キメラ核酸分子の３’末端セグメントが、ＣＤ８分子の貫膜部分をエンコードする請求項８に記載のベクター。１１．前記キメラ核酸分子の５’末端セグメントが、ヒト黄体ホルモン結合タンパク質（ＬＢＰ）、ヒト卵胞刺激ホルモン結合タンパク質（ＦＢＰ）、およびヒト甲状腺刺激ホルモン結合タンパク質（ＴＢＰ）からなるグループより選択される可溶性糖タンパク質ホルモン結合タンパク質をエンコードする請求項８に記載のベクター。１２．糖タンパク質ホルモン受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）を含む融合タンパク質を組換え法により製造する方法であって、選択した宿主細胞中に請求項８に記載の発現ベクターを導入し、そしてそのベクターの調節配列が、前記キメラ核酸分子を前記宿主細胞内で発現させるのに有効であり、次いでそのキメラ核酸分子の発現が起こる条件下で前記宿主を培養することからなる方法。１３．前記宿主細胞を、前記プロテアーゼ認識部位を認識するプロテアーゼの存在下でインキュベートして、前記ＥＬＢＲを、前記融合タンパク質の残りの部分から開裂させる工程をさらに含む請求項１２に記載の方法。１４．請求項８に記載のベクターでトランスフェクトした宿主細胞。１５．糖タンパク質ホルモン受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）を含む第１セグメント、膜アンカーポリペプチドを含む第２セグメント、および前記第１セグメントと第２セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラポリペプチド。１６．前記プロテアーゼ認識部位が、トロンビン認識部位である請求項１５に記載のポリペプチド。１７．前記第１セグメントが、ヒト黄体ホルモン結合タンパク質（ＬＢＰ）である請求項１５に記載のポリペプチド。１８．前記第１セグメントが、ヒト卵胞刺激ホルモン結合タンパク質（ＦＢＰ）である請求項１５に記載のポリペプチド。１９．前記第１セグメントが、ヒト甲状腺刺激ホルモン結合タンパク質（ＴＢＰ）である請求項１５に記載のポリペプチド。２０．前記第２セグメントが、ＣＤ８分子の貫膜部分である請求項１５に記載のポリペプチド。２１．前記第１及び第２セグメントが、互いに異種である請求項１５に記載のポリペプチド。２２．カルシトニン受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）をエンコードする５’末端セグメント、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメント、および前記５’末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラ核酸分子。２３．請求項２２に記載のキメラ核酸分子によってエンコードされるポリペプチド。２４．グルカゴン受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）をエンコードする５’末端セグメント、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメント、および前記５’末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラ核酸分子。２５．請求項２４に記載のキメラ核酸分子によってエンコードされるポリペプチド。２６．グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）をエンコードする５’末端セグメント、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメント、および前記５’末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラ核酸分子。２７．請求項２６に記載のキメラ核酸分子によってエンコードされるポリペプチド。２８．代謝物産生グルタメート受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）をエンコードする５’末端セグメント、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメント、および前記５’末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラ核酸分子。２９．請求項２８に記載のキメラ核酸分子によってエンコードされるポリペプチド。３０．上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）をエンコードする５’末端セグメント、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメント、および前記５’末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラ核酸分子。３１．請求項３０に記載のキメラ核酸分子によってエンコードされるポリペプチド。３２．バソアクティブインテスティナルペプチド（ＶＩＰ）受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）をエンコードする５’末端セグメント、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメント、および前記５’末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラ核酸分子。３３．請求項３２に記載のキメラ核酸分子によってエンコードされるポリペプチド。３４．セクレチン受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）をエンコードする５’末端セグメント、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメント、および前記５’末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラ核酸分子。３５．請求項３４に記載のキメラ核酸分子によってエンコードされるポリペプチド。３６．成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）受容体ポリペプチドの細胞外リガンド結合領域（ＥＬＢＲ）をエンコードする５’末端セグメント、膜アンカーポリペプチドをエンコードする３’末端セグメント、および前記５’末端セグメントと３’末端セグメントとの間に挿入されたプロテアーゼ認識部位とから構成されたキメラ核酸分子。３７．請求項３６に記載のキメラ核酸分子によってエンコードされるポリペプチド。