JP2001517199A

JP2001517199A - 抗ヘリコバクター活性を有するグリセロールモノラウレートと併用するナイシン

Info

Publication number: JP2001517199A
Application number: JP52534497A
Authority: JP
Inventors: ブラックバーン，ピーター; ゴールドステイン，ベス，ピー．; クック，デブラ，ジェイ．
Original assignee: アンビィーインコーポレイテッド
Priority date: 1996-01-05
Filing date: 1997-01-02
Publication date: 2001-10-02
Also published as: IL124972A0; NO983097D0; EP0871469A1; CZ208598A3; CN1207045A; AU1572197A; CN1117585C; NZ327006A; CA2241464C; US5804549A; AU720568B2; KR19990077069A; BR9706963A; ZA9610945B; SK91498A3; NO983097L; PL327507A1; WO1997025055A1; HUP9900940A2; CA2241464A1

Abstract

(57)【要約】ヘリコバクター属細菌を殺す有効成分としてナイシンとＧＭＬを含む組成物と、ＧＭＬ／ナイシン組成物を用いてヘリコバクター属細菌の定着を根絶し、且つヘリコバクター属細菌の感染を治療する方法が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称抗ヘリコバクター活性を有するグリセロールモノラウレートと併用するナイシン関連出願に関する記載米国特許法第１１９条第ｅ項に基づき、本願は、１９９６年１月５日に出願された先の米国特許出願第６０／００９，８７２号の享受する利益を有することを主張する。発明の技術分野本発明は、ランチオニン含有バクテリオシンであるナイシン（nisin）とグリセロールモノラウレートとの組合せから本質的になる組成物、およびそのような組成物のヘリコバクター属による細菌感染の治療のための使用に関する。発明の背景および概要ＧＭＬまたはナイシンの抗菌活性に関する科学文献の多くが、キレート剤またはその他の強化剤（potentiating agent）の不存在下において、ＧＭＬまたはナイシンがグラム陰性細菌に対して不活性であること、およびそれらがグラム陽性細菌に対して活性であることについて触れている。モノラウリンとも称されるグリセロールモノラウレート（ＧＭＬ）は、グリセロールのラウリルエステルである。ＧＭＬは、化粧品および化粧用クレンザーにおいて界面活性剤、防腐剤および増量剤（refatting agent）として使用されていると共に、食料品においては防腐剤としてだけ使用されている。ＧＭＬは米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって安全であると承認されている。ＣＦＲ（the Code of Federa l Regulations）第２１章パート１８４は、（モノグリセリド類を、安全性が広く認められているとされる化合物（GRAS）に含めている。さらに、２１ＣＦＲのセクション１８４．１５０５は、ＧＭＬを含むモノグリセリド類が食品化学規格の仕様書を満足しており、最新の商品製造実務に則ることの他には何の制限もなく、食料品に使用され得るものであると述べている。飽和または不飽和の脂肪酸を含む、ＧＭＬおよびその他の天然または合成のモノグリセリド類は、抗グラム陽性細菌活性を有している［カバラの文献（Kabara ，J.J.，1986．Dietary lipids as anticariogenic agents．J．Environ．Patho l．Toxicol．Oncol．6:87-113）参照］が、一般的にグラム陰性細菌に対しては不活性であると考えられている［シュライバートらの文献（Schlievert，et al ．1992．Effect of glycerol monolaurate on bacterial growth and toxin pro duction．Antimicrob．Ag．Chemother．36:626-631）参照］。また、糖類等の他の多価アルコールの脂肪酸エステル類が抗グラム陽性細菌活性を有することも報告されている［コンリーとカバラの文献（Conley，A.J．& J .J．Kabara，1973．Antimicrobial action of esters of polyhydric alcohol． Antimicrob．Ag．Chemother．4:501-506）参照］。ＧＭＬを含むこれらの化合物の幾つかは、キレート剤のような強化剤の存在下においては、大腸菌（Escheric hia coli ）およびその他の腸内細菌科に属する細菌（Enterobacteriaceae）ならびに緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）等の幾つかの一般的な種類のグラム陰性細菌（これらは強化剤の不存在下ではエステル類の影響を受けない）に対して阻害活性を有していることが報告されている［シバサキとカトウの文献（Shibasaki，I．& N．Kato，1978．C ombined effects on antibacterial activity of fatty acids and their ester s against Gramnegative bacteria．In Kabara，J.J.，ed．Symposium on the P harmacological Effect of Lipids．The American 0il Chemists'Society Champ aign，Illinois，p.p．15-24）参照］。上記文献の著者らは、キレート剤としてのシトレートの存在下、水中でインキュベートしたときの、大腸菌に対するＧＭＬの殺菌活性を報告している。カトウらの米国特許第４，４８５，０２９号明細書は、組成物においてグリセロールモノラウレートを、パラヒドロキシ安息香酸のエステル類のような抗菌剤の１種類以上および付加的に有機界面活性剤と組合せて使用することが、コンタクトレンズの洗浄、除菌および保存に有用であることを開示している。しかし、カトウらは、ＧＭＬ組成物がグラム陰性細菌による感染の治療において有用であり得ること、あるいはＧＭＬがランチオニン含有バクテリオシン、例えばナイシンと組合せて使用され得ることは開示していない。１次宿主が哺乳類であるグラム陰性病原菌類に対し、強化剤と協働しない抗菌剤としてＧＭＬを使用することは、従来実際に試みられていなかった。ＧＭＬは極めて親油性であり、水には難溶である。そのために、ＧＭＬの抗菌活性の研究には、通常、ある種の薬理的適用には受け入れ難い濃度のエタノールの使用を必要とする。ナイシンは、抗菌特性を備えたポリペプチドであり、ラクトコッカス（スプレプトコッカス）・ラクチス（Lactococcus （Strepto- coccus ）lactis ）という細菌の種々の菌株によって自然界で産生されている。ナイシンは、幾つかの種類のグラム陽性細菌（bacilli）の細菌生育および胞子形成を抑制する食料品防腐剤（保存剤）として使用されている。ナイシンは、ミルクおよびチーズに低濃度で自然に産生することが知られており、ヒトに対しては完全に無毒性かつ非アレルゲン性であると信じられている。ナイシンは、ＦＤＡによって、低温殺菌チーズスプレッド、低温殺菌プロセスチーズスプレッド、および果実、野菜または肉類に塗布した低温殺菌チーズまたは低温殺菌プロセスチーズ中に直に含まれる食品成分であり、安全であると承認されている。ナイシンはポリペプチドであるので、食料品中に留まっているナイシン残留物は、小腸内に入るなり素早く消化される。従来技術は、ナイシンがグラム陰性細菌に対して無効であること、およびグラム陽性細菌の非常に限られたグループに対してのみ有効であることを教示していたが、ナイシンを含有する組成物、特に種々の非抗菌剤と組合せてナイシンを含有する組成物が、様々な種類のグラム陽性およびグラム陰性の細菌類に対して高い活性があることが示されつつある（米国特許第５，１３５，９１０号明細書、第５，２１７，９５０号明細書および第５，２６０，２７１号明細書参照）。さらに最近なって、ナイシンの抗菌活性が、キレート剤の存在下では、他のグラム陰性細菌、即ちヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter Pylori）を含むグラム陰性細菌に対しても記載されている（米国特許第５，３０４，５４０号明細書および第５，３３４，５８２号明細書参照）。共願米国特許第４，９８０，１６３号明細書、第５，１３５，９１０号明細書、第５，２１７，９５０号明細書、第５，２６０，２７１号明細書、第５，３３４，５８２号明細書および第５，３０４，５４０号明細書は、ランチオニン含有バクテリオシン類の抗菌活性増強剤としてグリセリド類を含む界面活性剤を開示している。例えば、米国特許第５，１３５，９１０号明細書、第５，２１７，９５０号明細書および第５，２６０，２７１号明細書は、ナイシンのようなラチオニン含有バクテリオシンと組合せたモノラウリンまたはモノオレエートが、グラム陽性細菌であるスプレプトコッカス・アガラクチア（Streptococ cus agalactiae ）およびリステリア・モノサイトジンズ（Listeria monocytogen es ）の殺菌に有効であることを開示している。米国特許第４，９８０，１６３号明細書は、ライソスタフィン、ナイシンのようなランチオニン含有バクテリオシンおよびキレート剤であるＥＤＴＡと組合せたモノグリセリド類がスタフィロコッカス・オウレウス（Staphylococcus aureus）およびストレプトコッカス・アガラクチアに対する組成物の抗菌活性を増強することを開示している。しかしながら、米国特許第４，９８０，１６３号明細書、第５，１３５，９１０号明細書、第５，２１７，９５０号明細書および第５，２６０，２７１号明細書には、ナイシンとグリセリドを含有する組成物が、ヘリコバクター属細菌等のグラム陰性細菌に対して活性であり得ることを全く示唆していない。胃腸管系病原菌類の多くは、グラム陰性細菌である。先行技術の教示からは、誰でも、ＧＭＬまたは界面活性剤は単独ではそのような生物に対して不活性であると予測するであろう。そのような病原体の例が、胃粘膜に定着するグラム陰性微好気性細菌に属する［先行技術においてはカンピロバクター・ピロリ（Campyl obacter pylori ）とも同定されている］ヘリコバクター・ピロリ（Helicobacter pylori ）である。ヘリコバクター・ピロリは非常に変わった生物であり、厳しい酸性環境であるヒトの胃内で生育する［ハゼルらの文献（Hazell，et al.，1986．Camp ylobacter pyloris and gastritis:association with intracellular spaces an d adaptation to an environment of mucus as important factors in coloniza tion of the gastric epithelium．J．Infect．Dis．153:658-663）参照］。ヘリコバクター属細菌の他の種は、様々な哺乳類の胃に内寄生する。ヘリコバクター・ピロリが、胃炎、潰瘍およびある種の胃癌を含む様々な胃腸管疾患の病因に関係しているということは広く認められており、この知見は、これらの病気を治療するためのアプローチを大きく変革させた［マーシャルの文献（Marshall，*1988．The Campylobacter pylori story．Scand.J.Gastroenterol ．146(Suppl.):58-66）；グリスの文献（Glise，1990．Epidemiology in peptic ulcer disease．Current status and future aspects．Scand．J．Gastroenter ol．25:13-18）；クラークソンらの文献(Clarkson，et al.，1993.Gastric canc er and Helicobacter pylori infection．J.Clin.Pat hol．46:997-999)；ヤマダらの文献（Yamada，et al.，1994．Helicobacter pylori peptic ulcer disea se．JAMA 272:65-69）参照］。また、ヘリコバクター属細菌の定着は、個々の患者を冠状動脈および脈拍の疾患に罹り易くすることにも関係している。ヘリコバクター・ピロリは抗菌剤に感受性ではあるが、単剤治療が臨床的に有効であるとはいまだ証明されていない。さらに、メトロニダゾルとクラリスロマイシン（clarithromycin）の２つの抗菌剤に対して抵抗性である系統が既に現れている［ボロンらの文献（Boron，et al.，1994．Hel icobacter pylori binds to blood group antigens．Scientific Amer．Science & Med．1:28-37）参照］。現時点で好ましい胃潰瘍の治療は、３種類の抗菌剤を用いた治療であるが、抗菌剤の幾つかは殆ど無効である可能性がある［マーシャルの文献（Marshall，1993．Treatment strategies for Helicobacter pylori infection．Gastroenterol．Clin．North Am．22:183-198）参照］。ヘリコバクター・ピロリの根絶に絶対的に有効な治療法はなく、治療効果が乏しいために、多くの患者が治療の途中で挫折している［ベルらの文献（Bell，et al.，1993 ．Helicobacter pylori eradication:efficacy and side effect profile of a combination of omeprazole，amoxycillin and metronidazole compared with f our alternative regimens．Quart．J．Med．86:743-750）参照］。従って、新規な薬剤が必要とされている。この疾患状態を単一の抗菌剤により屈服させ得ない可能性があり、従って、良好な効果（tolerability）とコンプリアンスをもって長期間確実に撲滅するためには、既存のまたは新規な薬剤を用いた複数の新たな治療を併用することが必要であろう。本発明者らは、それぞれ単独では最適ではない（suboptimal）濃度のＧＭＬとナイシンが、それらを組合せたときに、ヘリコバクター属の種々の菌株に対する抗菌活性を互いに増強することを見出した。ナイシンは、ＧＭＬの不存在下での試験において、ヘリコバクター・ピロリおよび他の多くのグラム陰性細菌に対して抗菌活性を有効に発揮するためにキレート剤のような強化剤が存在することを必要とするが、ＧＭＬとナイシンとの相乗効果の発揮には、キレート剤やその他の強化的非抗菌剤の存在を必要としない。従って、キレート剤の不存在下における、ヘリコバクター・ピロリに対する低濃度のＧＭＬとナイシンとの強い相乗効果は驚くべきことである。ヘリコバクター属細菌および他の胃腸管細菌類は、粘膜環境内に存在する。粘液は粘膜上皮により分泌された粘弾性の層であって、上皮とその周辺環境との間で保護バリアを形成する。粘液層の成分の１つがムチンであるが、このムチンは、複雑な、ジスルフィド架橋されたポリスルフォン化糖タンパク質の複雑なマトリックスである。ムチンは、その下部の上皮へ達するために分子が通り抜けなければならないバリアである、半液体（semi-liquid）層を形成する。そのような高度に荷電されたポリスルフォネートのバリアを横切って医薬学的に活性な薬剤を配送することは難しく、負に荷電した分子は粘膜によって拒絶されるであろうし、一方、正に荷電した分子は、粘膜に引きつけられ、そして飽和層の形成によって分離されることになるかもしれない。つまり、胃腸管の粘膜上皮を裏打ちする粘液層が、抗菌剤の効力に対するバリアとなる可能性がある。胃内において、ヘリコバクター属の細菌は粘液層内に定着する。粘液層内のヘリコバクター属細菌は、生物の生存に対して有毒性であり得る胃内容物から保護されている。胃内のヘリコバクター・ピロリを撲滅するために、局所作用性の抗ヘリコバクター剤は、粘液により齎されるバリアを透通または克服し得なければならない。そのような感染を治療するその他のアプローチは、ムコリチック剤と一緒に粘液を分裂させる（disrupting）ことによって粘液微環境からヘリコバクター属細菌を放出する結果となるであろう。粘液の分裂は、抗菌剤を含む胃内腔の内容物に細菌を暴露し、細菌を局所作用性抗菌剤によって殺し易くする。ムチンに対して活性であることが知られている薬剤にはライティック（lytic ）酵素が含まれているが、そのような酵素は、例えば、米国特許第５，３２８，８４６号明細書に開示されているα−アミラーゼ等のグリコヒドロラーゼ類やプロナーゼ（Kimura et al．Am．J．Gastroenterol．90:60-63，1995）等のプロテナーゼ類、ならびにＮ−アルキルシステイン、ＷＲ２７２１およびＮ−（２−メルカプトプロピオニル）−グリシン（ＭＰＧ）等のスルフィドリル化合物である。本発明は、胃の粘液環境を分裂させ、そして胃内のヘリコバクター属細菌を有効量のナイシンとＧＭＬの組成物に暴露させることにより被曝細菌を殺す方法に関する。本発明は、それぞれの薬剤単独では最適ではないが、組合せたときにはヘリコバクター属のグラム陰性細菌、より具体的にはヘリコバクター・ピロリ、に対して殺菌性である濃度でナイシンとＧＭＬから本質的になる組成物に関する。ナイシンとＧＭＬの組成物は、哺乳類への内的投与に適しており、そしてヘリコバクター・ピロリの定着の根絶、およびヘリコバクター・ピロリの定着に起因する感染症その他の病状の治療に有効である。さらに本発明は、ヘリコバクター・ピロリの定着の根絶、およびヘリコバクター・ピロリの定着に起因する感染症その他の病状の治療に有効な方法であって、新規なＧＭＬ−ナイシン組成物を単独で、あるいはムコリチック剤と組合せて投与することを含む方法を提供する。哺乳類の細菌感染に対する活性物質としてナイシンとＧＭＬまたは類似の化合物を使用することには、投与製剤配送の容易性、および許容性（tolerability）の観点で有利である。発明の詳細な説明本発明は、ヘリコバクター属細菌、特にはヘリコバクター・ピロリによる胃腸管感染の治療のための医薬学的組成物および方法に関する。本発明の治療方法に感受性を有するその他の細菌類は、カンピロバクター（Campylobacter）属細菌のようにヘリコバクター属に非常に近縁な細菌類である。ヘリコバクター属細菌は、これに限定されるものではないが、Ｈ．ピロリ（ヒト）、Ｈ．カニス（H．c anis；イヌ）、Ｈ．アキノニス（H．acinonyx）、Ｈ．プロラム（H．pullorum）、Ｈ．マリダラム（H．muridarum）、Ｈ．シナディ（H．cinaedi）、Ｈ．フェンネリア（H．fennelliae）、Ｈ．ネメストリナ（H．nemestrinae）、Ｈ．プメテンシス（H．pumetensis）、Ｈ．ビゾゼロニ（H．bizzozeronii）、Ｈ．ムステラ（H．mustelae；クロアシイタチ）およびＨ．フェリス（H．felis；ネコ）を含む。上記の最後の２種類のヘリコバクター属細菌は、ヘリコバクター感染のクロアシイタチとマウスのモデルにおいて頻繁に用いられている。本発明の組成物は、口腔に定着したヘリコバクター・ピロリの殺菌にも採用されることができ、従って、細菌巣の根絶または口腔内のヘリコバクター・ピロリ感染の治療のための方法にも採用されることができる。３０−１００μｇ／ｍｌのナイシン濃度または１０μｇ／ｍｌのＧＭＬ濃度は、組合せずに単独で投与されたときには、ヘリコバクター・ピロリの生存性に対してあまり効果がない。しかし、１０μｇ／ｍｌのＧＭＬと３０−１００μｇ／ｍｌのナイシンとの組合せは、この微生物の生存性の有意な減少を急速に引き起こす。生存性の減少割合は、ＧＭＬと組合せたナイシンの濃度に比例する。それらが単独で投与されたときには最適ではない濃度でＧＭＬと組合せたナイシンの相乗効果は、先行技術からは予見し得なかったが、それは、ナイシン単独でははそのような濃度においてヘリコバクター・ピロリに対して活性ではないことが以前に示されていたからである。ナイシンに類似の特性を有する他のランチオニン含有バクテリオシンが使用されることもできる。本発明のさらなる実施態様は、ナイシンと組合せて使用するために、ＧＭＬに化学的に類似した分子を活性成分として含む組成物および該組成物の使用方法に関する。そのような分子は、グリセロール（またはその他のポリヒドロキシレート化化合物、例えば糖類）の誘導体および脂肪酸の誘導体である。ヘリコバクター・ピロリの定着の根絶およびヘリコバクター・ピロリの定着に起因する感染症やその他の病状の治療のために、ＧＭＬとナイシンは、別の組成物として同時投与または連続投与により投与されることも、単一の製剤組成物の成分として投与されることも、そして例えばビスマスサブシトレート（subcitra te）やビスマスサブサリシレート（subsalicylate）等のビスマス塩のような胃腸障害治療用の医薬学的活性物質と共に投与されることもできる。本発明の組成物は、胃腸管内におけるヘリコバクター・ピロリの存在に関連する幾つかの病気および症状を治療するために、シメチジン（cimetidine）、ラニチジン（raniti dine）、オメプラゾル（omeprazole）、ランソプラゾル（lansoprazole）、アンタシド（antacids）、ウレアーゼ阻害剤またはそれらの組合せのような他の薬剤と共に投与されることができる。これらの治療において、追加的な医薬学的に活性な薬剤はＧＭＬ-ナイシン組成物と同時にまたは別々に（intermittentl y）投与されることができ、そして投与形態は必要に応じて治療中に変り得ることが、計画されている。本発明の特定の実施態様は、ムコリチック剤との３剤混合としてＧＭＬ−ナイシン組成物を投与することを含む治療方法に関する。ムコリチック剤は、抗菌剤の作用における粘液の影響を減少させるか、あるいは取り除く。粘液は、粘膜上皮内に存在する感染サイトへの薬剤の到達を遅らせるように働く可能性がある。ムコリチック剤は粘稠度を減少させ、そして種々の機構による粘液の団結性を分裂させる。Ｎ−アルキル−システイン、ペニシラミン（Penicillamine）、Ｎ− （２−メルカプトプロピオニル）−グリシンおよびＷＲ２７２１（メルカプトエチル−１，３−ジアミノプロパンのチオフォスフェート誘導体）のようなムコリチックスルフヒドリル化合物がムチンマトリックスのジスルフィド架橋を減少させる。粘液は、ムチンを消化するグリコヒドロラーゼおよびプロテナーゼ、ならびにヌクレアーゼのような加水分解酵素への暴露によっても分裂され得る。特に、米国特許第４，４４０，７４９号明細書および第４，４８５，０９５号明細書に開示されているように、プロテナーゼ（プロナーゼ）はムチンマトリックスの分裂に有用であり、これら２つの米国特許明細書の教示がここに参考として取り入れられる。個別的または集合的に、局所で作用するナイシンとＧＭＬの効能は、平常よりも減少した粘液層の粘稠度またはムコリチック剤により分裂させられた粘液層から潜在的に利益を得る。しかしながら、ムコリチック剤による粘液層の分裂に最適な条件は、しばしばある種の抗ヘリコバクター剤の作用にとって不都合である。特に、ナイシンはプロナーゼ消化により不活性化され、そしてこれらのムッコリチック剤の最適ｐＨである中性または弱塩基性のｐＨにおいてスルフヒドリル化合物と反応する。一方、ナイシン、またはナイシンと組合せたその他の感受性抗菌剤が、ムコリチック剤が作用した後で胃内腔のｐＨを下げるために適当な酸性ベヒクルに入れて投与されたら、ある場合にはスルフヒドリル基の活性が、また別の場合には酵素の活性が、低いｐＨおよび胃ペプシンの不活性化によって胃内で阻害されるかあるいは不活性化される。酸またはペプシンによって不活性化または阻害されない抗菌剤およびその組合せは、ヘリコバクター属細菌に対してより効果的に作用して、ヘリコバクター属細菌感染のより有効な治療を齎す。実際、細菌の微小環境の分裂と酸性ｐＨへの暴露は、それ自体部分的に、酸−感受性ヘリコバクター属細菌の生存にとって有害であり、さらに抗菌剤の効能に寄与する。さらに、キムラらにより開示されたようなプロナーゼの使用は、そのようにして使用される抗生物質が副作用を引き起こすのを防止するために、経鼻胃管を用いて胃から取り除かれることを必要とする。モノグリセリドの場合にはその後で吸収により腸管から排除されるか、あるいはナイシンの場合には膵臓酵素により破壊される酸性安定性抗菌剤を含む本発明の実施態様は、自然に胃が空になる以外は、胃からの抗菌剤の除去を必要としない。本発明は、患者にとって不愉快で、高価で、そして潜在的に不適格な方法である経鼻胃管によって胃から抗ヘイコバクター剤を除去する必要を排除するので、非常に有利である。ムコリチックスルフヒドリル化合物は、理想的には、７．０またはより高いｐＨ値においてジスルフィドを減少させる。中性から塩基性の胃環境は、バイカーボネートのような適切な緩衝液と共にスルフヒドリル化合物を同時投与するか、あるいは胃酸抑制剤と共に同時投与することにより与えられることができる。少数のムコリチック酵素しか、胃ペプシンによる酸性中の消化に晒される胃の厳しい酸性環境において作用したり残ったりできないので、ムコリチック酵素も、胃内容物のｐＨを上昇させる薬剤と共に投与されなければならない。従って、プロナーゼのようなプロテナーゼとを用いたヘリコバクター・ピロリの治療においては、Ｈ２−拮抗剤またはプロトンポンプ阻害剤のような抗分泌剤（antisecretor y agent）を同時投与して酸の分泌を抑制することによりプロテナーゼを中性または弱塩基性の環境内に配送するようにすることができる。その代わりに、あるいはそのような治療と一緒に、プロテナーゼをバイカーボネートのような穏やかな塩基性緩衝液中に配送して胃酸を中性化することもできる。また、１つの代替案として、ｐＨ−上昇緩衝液または抗分泌剤を、ムコリチック剤の投与に先立って別々に投与することもできる。ナイシンはスルフヒドリル含有ポリペプチドであるので、スルフヒドリル化合物またはプロテナーゼであるムコリチック剤はナイシン−ＧＭＬ組成物に先立って、ナイシン−ＧＭＬ組成物とは同時ではないように投与されなければならない。本発明の他の実施態様において、ＧＭＬ−ナイシン治療およびムコリチック剤を用いた治療を併用する療法は、他の抗菌剤を用いた治療を包含するように拡張され得る。胃内で急速かつ局所的に作用してヘリコバクター属細菌を殺す抗菌剤は、全身の循環系内に吸収されたり、腸管内へ通り抜ける抗生物質のような薬剤による副作用よりも、少ない副作用を示すことが期待される。そのような抗生物質は逆に、通常の腸管内微生物相に影響を与え、それによって、腸管内に日和見性病原菌が定着することを可能にしてしまうかもしれない。従って、抗生物質との同時投与は、その環境条件下で感染を取り除くための最も効果的な手段である場合以外は、採用しないことが好ましい。本発明の組成物の活性成分の典型的な１日投与量は、治療すべき感染症、感染部位および治療すべき疾患の症状に応じて変り得る。ナイシン成分の有効経口投与量は、０．５ｍｇから５０００ｍｇの範囲であり、ＧＭＬ成分の有効経口投与量は０．１ｍｇから２０００ｍｇの範囲である。ナイシンおよびＧＭＬの好ましい投与量範囲は、それぞれ、１０ｍｇから２０００ｍｇ、および１０ｍｇから１０００ｍｇである。プロナーゼのようなムコリチック剤は、キムラらの文献（Kimura et al.，Am ．J．Gastroenterol．90:60-63，1995）に開示されているように、１回投与当り１８，０００から３６，０００トリプシン単位の投与量範囲で投与されることができ、この文献の教示がここに参考として取り入れられる。Ｎ−アルキルシステインは、１回投与当り０．１ｇから１．０ｇの投与量で投与されることができる。ヘリコバクター属細菌による感染の治療および定着の根絶のための本発明の方法は、そのような治療を必要とする患者に有効量のＧＭＬ−ナイシン組成物を投与することを含む。ある実施態様において、本発明の方法は、ムコリチック剤を用いた治療の１〜４時間後にＧＭＬ−ナイシン組成物を投与することを含むが、このムコリチック剤は、制酸剤またはバイカーボネートのような僅かに塩基性の緩衝液と組合せて投与される。別の実施態様において、ムコリチック剤として加水分解酵素またはスルフヒドリル化合物を利用する本発明の方法は、ムコリチック剤の投与前に胃内容物のｐＨを上昇させるために、塩基性緩衝液または胃酸分泌抑制剤を用いて患者を前処理することを含むが、後者の投与がナイシン−ＧＭＬ組成物の投与に先んじて行われる。実施例１キレート剤の不存在下における、ヘリコバクター・ピロリに対するナイシンおよびＧＭＬの相乗的な抗菌活性本実施例における抗菌活性試験の全ては、３７℃で３０分間に亘って実施された。測定パラメータは、標準希釈および平板法により測定された生存数（１ｍｌ当りのコロニー形成単位数［ＣＦＵ／ｍｌ］）による測定としての、ＧＭＬおよび／またはナイシンに暴露された細菌の生存であった。培地、生育および試験条件は次の通りであった：ヘリコバクター属細菌の全ての培養は、ＧａｓＰａＫ内で微好気性条件下に行った。ヘリコバクター・ピロリは、トリプチケース（Tryp ticase）ソイアーガに５％の脱繊維化（defibrinated）ヒツジ血を加えた培地上で２〜４日間培養し、その後ＮＹＣＩＩＩ液体培地内に接種し、穏やかに撹拌しながら一晩生育させた［ＮＹＣＩＩＩ液体培地は、１リットル当り、１ｇの可溶性スターチ（Difco）、１５ｇのプロテオースペプトン＃３（Difco）、５ｇのＮａＣｌ、４ｇのＫ₂ＨＰＯ₄、１ｇのＫＨ₂ＰＯ₄、５ｇのグルコース、２５ｍｌの新鮮なイースト抽出物（Gibco）、１２０ｍｌのガンマグロブリン除去ウマ血清（Sigma）を含む］。ＧＭＬとナイシンの活性の試験に用いた懸濁液は、１０％スクロース内に入れた。生存計測数は、トリプチケースソイアーガに５％のヒツジ血を加えた培地上で３〜５日間培養した後に測定した。図１は、ヘリコバクター・ピロリ株ＡＴＣＣ４３５０４の生存性における異なる濃度のＧＭＬと異なる濃度のナイシンとの組合せの効果を示している。細菌の懸濁液を分割し、単独または組合せた薬剤の異なる濃度に暴露した。細菌の生存は、未（０時間）培養の対照懸濁液に対して相対的に表されている。３０〜３００μｇ／ｍｌの濃度において、ナイシン単独ではヘリコバクター・ピロリの生存に関して僅かしか効果がないか、あるいは全く効果がなかった（生存は１０％未満）。１〜３μｇ／ｍｌの濃度のＧＭＬでは、ナイシンの不存在下に、接種体の生存の減少は僅かであるかまたは全く無かった（生存は１０％未満）。これらの濃度のＧＭＬに３００μｇ／ｍｌのナイシンを添加したものに暴露したときには、培養物の非常に僅かな落ち込みが観察された。細菌が１０μｇ／ｍｌのＧＭＬ単独に暴露されたときには、再び、１０％を越える細菌が生存した。しかしながら、１０μｇ／ｍｌのＧＭＬにナイシンを（３０、１００または３００μｇ／ｍｌと）量を増やしながら添加することにより、培養体の生存に非常に顕著な落ち込みが生じ、この効果の程度は、ナイシン濃度の増加に連れて増大した。ＧＭＬ単独のより高い濃度（３０または１００μｇ／ｍｌ）が、細菌懸濁液を滅菌した。本発明のＧＭＬ−ナイシン含有組成物は、有効量の２つの活性薬剤と医薬学的に許容され得る担体を含む製剤型で経口的に投与されることが好ましい。有効量のムコリチック剤と医薬学的に許容され得る担体を含む医薬学的ムコリチック製剤が、ＧＭＬ−ナイシン組成物に先立って投与されることができる。また、本発明の組成物は、制酸剤組成物として製剤されることも、例えば投与前よりも高い胃ｐＨ環境を齎すように制酸剤と組合せて投与されることもできる。ＧＭＬ−ナイシン組成物は、そのような条件下でも病原性細菌に対して有効である。さらに制酸剤を含むＧＭＬ−ナイシン含有製剤も、有効量のムコリチック剤と医薬学的に許容され得る担体を含む医薬学的ムコリチック製剤に引き続いて投与されることができる。医薬学的に許容され得る担体は、固体、半固体（semi-solid）または希釈液体の形態であることができる。医薬学的に許容され得る担体は、セルロース誘導体、ゼラチン、ラクトース、スターチ、その他を含むことができる。製剤は、溶液、コロイドまたはエマルジョン、粉末、タブレットカプセルまたはゲルの形態であることができる。乾式形態の製剤は、糖等の医薬学的に許容され得る不活性成分を用いて被覆されることができ、アラビアガム、ゼラチン、タルクまたは２酸化チタニウムのようなその他の医薬学的に許容され得る置換体を含むことができ、且つ種々の染料でも被覆され得るタブレットであることができる。活性薬剤の粒を、ラクトース、ポテトスターチ、コーンスターチ、セルロース誘導体またはゼラチンのような固体担体と組合せて含有する硬質のゼラチンカプセルを調製することもできる。経口投与のための液体製剤は、ＧＭＬ−ナイシン含有組成物に加えて糖、水およびグリセロールまたはプロピレングリコールを含むシロップまたは懸濁液の形態で調製することができる。所望であれば、そのような液体製剤は、着色剤、香料、サッカリンのような甘味剤およびセルロース誘導体のような増粘剤を含有することができる。投与量の配送は、コロイド懸濁液を得るために増粘剤、乳化剤または粒剤の封入による単純な水性処方の改変により明らかに達成され得る。レシチンのような乳化剤の使用は特別であり、細菌定着部位への配送により適した安定な乳剤の形成に特に使用される。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１０年３月２３日（１９９８．３．２３）【補正内容】請求の範囲１．ヘリコバクター・ピロリによる哺乳類の胃腸管への定着に起因する病状の治療のための製剤の調製における抗菌剤としてナイシンとグルセロールモノラウレートを含む組成物の使用であって、ナイシンおよびグリセロールモノラウレートが治療用に処方されて、前記病状の治療に単独で投与されたときには最適ではない濃度を胃腸管内のヘリコバクター・ピロリの定着部位の近傍で提供することを特徴とする使用。２．前記処方が、胃腸管内のヘリコバクター・ピロリの定着部位近傍で１００〜３００μｇ／ｍｌのナイシン濃度、および３〜１０μｇ／ｍｌのグリセロールモノラウレート濃度を提供する治療用処方であることを特徴とする請求項１に記載の使用。３．前記治療が、抗菌剤の作用に対する粘液の影響を減少させるかまたは排除するために、哺乳類に対してムコリチック剤が先に投与されることを特徴とする請求項１または２に記載の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者クック，デブラ，ジェイ. アメリカ合衆国，10014，ニューヨーク州, ニューヨーク，グローブストリート 42，アパートメント１

Claims

【特許請求の範囲】１．キレート剤の不存在下に、有効量のＧＭＬ、有効量のナイシンおよび医薬学的に許容され得る担体とから本質的になる組成物。２．哺乳類の胃腸管内のヘリコバクター属細菌による定着に起因する感染症またはその他の病状の治療および定着の根絶のための方法であって、そのような治療を必要とする哺乳類に有効量のＧＭＬ−ナイシン組成物を投与することを含むことを特徴とする方法。３．哺乳類の口腔内のヘリコバクター属細菌による定着に起因する感染症またはその他の病状の治療および定着の根絶のための方法であって、そのような治療を必要とする哺乳類に有効量のＧＭＬ−ナイシン組成物を投与することを含むことを特徴とする方法。４．ＧＭＬが０．１ｍｇ〜２０００ｍｇの投与量範囲で投与され、そしてナイシンが０．５ｍｇ〜５０００ｍｇの投与量範囲で投与されることを特徴とする請求項２または３に記載の方法。５．ＧＭＬが１０ｍｇ〜１０００ｍｇの投与量範囲で投与され、そしてナイシンが１０ｍｇ〜２０００ｍｇの投与量範囲で投与されることを特徴とする請求項４に記載の方法。６．ＧＭＬ−ナイシン組成物の投与が哺乳類に有効量のムコリチック剤を投与した後に行われることを特徴とする請求項２に記載の方法。７．前記ムコリチック剤がスルフヒドリル化合物であることを特徴とする請求項６に記載の方法。８．前記ムコリチック剤が、加水分解酵素である請求項６に記載の方法。９．前記酵素がプロナーゼであることを特徴とする請求項８に記載の方法。１０．前記ムコリチック剤が、投与部位のｐＨを７またはそれより高くに上昇させるに有効な量の制酸剤または緩衝液と組合せて投与されることを特徴とする請求項６に記載の方法。１１．前記ムコリチック剤作の投与が、投与部位のｐＨを７またはそれより高くに上昇させるに有効な量の制酸剤または緩衝液の投与の後に行われることを特徴とする請求項６に記載の方法。