JP2001515361A

JP2001515361A - 新規な腫瘍抗原

Info

Publication number: JP2001515361A
Application number: JP54857898A
Authority: JP
Inventors: オー．シェパード，ポール; グロスマン，アンジェリカ
Original assignee: ザイモジェネティクス，インコーポレイティド
Priority date: 1997-05-06
Filing date: 1998-05-06
Publication date: 2001-09-18
Also published as: EP0991757A1; WO1998050552A1; AU7480198A; CA2289118A1; US6084088A; AU746956B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、zsig15と表示する分泌されたポリペプチドのためのポリヌクレオチド分子またはポリペプチド分子に関する。それらをコードするポリペプチド、およびポリヌクレオチドは、染色体１９のマッピングおよび腫瘍増殖のマーカーに使用することができる。また、本発明は、zsig15ポリペプチドに対する抗体を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】新規な腫瘍抗原発明の背景前立腺、結腸および乳房組織のすべては癌の高い罹患率のに関連し、そして、事実、肺癌に関連し、肺癌は今日米国における最も致命的な形態である。前立腺癌は米国の男性における癌の最も優勢な形態である。前立腺癌の推定33 4,500の新しい症例が1997年において診断されることが予測される(Cancer Facts and Figures ：1997 ，American Cancer Society，Atlanta，1997)。前立腺癌の発生率は1989〜1993の間に５０％増加した。初期の診断は生存のために重大である、例えば、腫瘍が局在化している間に発見される場合、５年の生存率は９９％である。しかしながら、現時点における初期の診断は比較的信頼できない方法に制限される。これらの方法はディジタル直腸検査および前立腺特異的抗原(PSA)試験を包含する。しかしながら、ディジタル検査は、腫瘍が非常に大きくなっていることを必要とし、そして癌はいっそう進行した段階にあることがある。超音波検査法は、この方法を使用して検出される癌の２０％〜３０％がPSAを使用して検出不可能であることを証明した。さらに、その上誤った陽性の結果は重大な問題である(Cancer ：Principles and Prac tice of Oncology， DeVita，HellmanおよびRosenberg(編)，J．B．Lippincott C ompany，Philadelphia，pp：538-589，1993)。乳癌は女性における癌による死亡の第２の主要な原因である。ほぼ110／100,0 00の女性が毎年乳癌であると診断され、そして、19 97年において、乳癌に関係する死亡は43,900例であろうことが予測される(Cance r Facts and Figures ：1997 ，American Cancer Society，Atlanta，1997)。初期の検出は生存に対して重要であり、そして乳房造影図は初期の検出に利用可能な、最も価値ある道具として一般に受け入れる。いったん腫瘍が肉体的症状により認識可能であると、腫瘍は一般に進行している。推定94,100の結腸癌の症例が1977年において同定され、そしてすべての癌の１０％が結腸直腸癌に関係づけられるであろう(Cancer Facts and Figures ：1997 ，American Cancer Society，Atlanta，1997)。診断および治療は絶えず改良されてきているが、初期の検出は生存のために重要である。さらに、これらの組織における細胞は高い割合のターンオーバーおよび代謝活性を有し、したがって、一般に広範囲のタンパク質を生成する。分泌機能を有するタンパク質が含まれ、そしてこれは物質を体の外側に輸送することに関係する組織において特に普通である。分泌組織により生産される物質の１つの型は、抗微生物因子、特に抗微生物性タンパク質である。これらのタンパク質は下記のメカニズムを包含する、いくつかのメカニズムを介して作用することができる：酵素的メカニズム、例えば、微生物の保護物質または微生物の細胞壁／膜の破壊。あるいは、タンパク質は非常に粘着性であり、微生物を捕捉することができる。分泌組織により生産される抗微生物性タンパク質は、一般に免疫系の成分に関連するよりも、いっそう特異的な方法において、感染を防止する体の能力の維持において重要な役割を演ずる。こうして、本発明は、癌の増殖に対して高度に感受性の代謝の変化のマーカーとして、ならびに本明細書における教示から当業者にとって明らかな他の用途において、価値があるタンパク質を提供する。発明の要約本発明は、（ａ）配列番号：１に示すヌクレオチド９７〜ヌクレオチド1215のヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド分子；（ｂ）前記（ａ）のオーソログ（ortholog）；（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）のアレル変異型；（ｄ）配列番号：２のアミノ酸残基２２(Leu)〜アミノ酸残基394（Glu）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子；および（ｅ）（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）の縮重ヌクレオチド配列；から成る群より選択される単離されたポリヌクレオチド分子を提供する。他の態様において、ポリヌクレオチド分子は、配列番号：１に示すヌクレオチド９７〜1344、７９〜1344、３４〜1344、９７〜582、６５〜1215、または６５〜1344；および配列番号：２の、それぞれ、残基２２〜437、16〜437、または１〜３４の７アミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるポリペプチドをコードする対応するポリヌクレオチド分子から選択される。ある面において、本発明は、配列番号：１のヌクレオチド９７〜582、655〜12 15、または655〜1344のヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチドを提供する。他の面において、本発明は、第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドを含んでなる融合タンパク質をコードし、前記第１ポリペプチドが配列番号：１に示すヌクレオチド９７〜ヌクレオチド582のヌクレオチド配列によりコードされ、そして前記第２ポリペプチドが配列番号：１に示すヌクレオチド655〜ヌクレオチド1215のヌクレオチド配列によりコードされる、単離されたポリヌクレオチド分子を提供する。他の面において、本発明は、下記の作用可能に連結された因子を含んでなる発現ベクターを提供する：転写プロモーター；下記の（ａ）〜（ｅ）から成る群より選択されるDNAセグメント：（ａ）配列番号：１に示すヌクレオチド９７〜ヌクレオチド1215のヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド分子；（ｂ）前記（ａ）のオーソログ；（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）のアレル変異型；（ｄ）配列番号：２のアミノ酸残基２２(Leu)〜アミノ酸残基394（Glu ）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子；および（ｅ）前記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）の縮重ヌクレオチド配列；並びに転写ターミネーター。他の面において、本発明は、前述の発現ベクターが導入されており、前記DNA セグメンとによりコードされるペプチドを発現する、培養された細胞を提供する。他の面において、本発明は、（ａ）配列番号：２に示すアミノ酸残基２２(Leu )〜アミノ酸残基394（Glu）のアミノ酸配を含んでなるポリペプチド分子分子；（ｂ）前記（ａ）のオーソログ；（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）のアレル変異型；および（ｄ）配列番号：２のアミノ酸残基２２(Leu)〜アミノ酸残基394（Glu ）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるポリペプチド分子；から成る群より選択される単離されたポリペプチドを提供する。他の態様において、本発明は、前記ポリペプチド分子が配列番号：２に示す残基２２〜437、１６〜437および１〜437のアミノ酸配列を含んでなる、単離されたポリペプチドを提供する。他の面において、本発明は、配列番号：２に示す残基２２〜183、208〜394および208〜437のアミノ酸配を含んでなる単離されたポリペプチドを提供する。他の面において、本発明は、第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドを含んでなる融合タンパク質をコードし、前記第１ポリペプチドが配列番号：２に示す残基２２〜183のアミノ酸残基の配列を含んでなり、そして前記第２ポリペプチドが配列番号．２に示す残基208〜394のアミノ酸残基の配列を含んでなる、単離された融合タンパク質を提供する。他の態様において、本発明は、親和性標識、トキシン、放射性ヌクレオチド、酵素または蛍光体から成る群より選択される成分がＮ末端またはＣ末端において共有結合した、単離されたポリペプチドを提供する。他の面において、本発明は、配列番号：２に示す残基１〜437のアミノ酸配を含んでなるポリペプチドのエピトープに特異的に結合する抗体を提供する。他の面において、本発明は、工程：前述の発現ベクターが導入されており、且つ前記DNAセグメントによりコードされるポリペプチドを発現する細胞を培養し；そして前記ポリペプチドを回収する；を含んでなるポリペプチドを生産する方法を提供する。他の面において、本発明は、配列番号：１のヌクレオチド３４〜ヌクレオチド 1344のポリヌクレオチドの少なくとも１４の隣接ヌクレオチドを含んでなるオリゴヌクレオチドのプローブまたはプライマーを提供する。発明の詳細な説明本発明を詳細に説明する前に、下記の用語を定義することはそれらの理解の助けとなるであろう：用語「親和性標識」は、本明細書において、第２ポリペプチドの精製または検出を提供するか、あるいは基質への第２ポリペプチドの結合部位を提供するために、第２ポリペプチドに結合させることができるポリペプチドのセグメントを表すために使用される。原理的には、抗体または他の特異的な結合因子が利用可能な任意のペプチドまたはタンパク質を親和標識として使用することができる。親和標識は下記のものを包含する：ポリヒスチジントラクト、プロテインＡ(Nilsson et al.，EMBO J ．4：1075，1985；Ni lsson et al.，Methods Enzymol ．198：3，1991)、グルタチオンＳトランスフェラーゼ(SmithおよびJohnson，Gene 67：31，1988)、Glu−Glu親和標識(Grussenm eyer et al.，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 82：7952-4，1985)、サブスタンスＰ、Ｆｌａｇ^TMペプチド(Hopp et al.，Biotechnology 6：1204-1210，1988)、ストレプチアビジン結合ペプチド、または他の抗原性エピトープまたは結合ドメイン。一般に、Ford et al.，Protein Expression and Purification 2：95-107 ，1991、参照。親和性標識をコードするDNAは、商業的供給会社から入手可能である（例えば、Pharmacia Biotech、ニュージャージイ州ピスカタウェイ）。用語「アレル変異型」は、本明細書において、同一染色体遺伝子座を占有する遺伝子の２またはそれより多くのいずれか１つの形態の任意のものを表すために使用される。アレルの変動は突然変異により天然に起こり、そして集団内に表現型の多形性を生じさせることがある。遺伝子の突然変異はサイレント（コードされたポリペプチドの非変化）であるか、あるいは変更されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。アレル変異型という用語は、また、本明細書において遺伝子のアレル変異型によりコードされるタンパク質を表すために使用される。用語「アミノ末端」または「カルボキシル末端」は、本明細書において、ポリペプチド内の位置を表すために使用される。この関係が許す場合、これらの用語は近接性または相対的位置を表すためにポリペプチドの特定の配列または部分を参照して使用される。例えば、ペプチド内の参照配列に対してカルボキシル末端に位置するある種の配列は、参照配列のカルボキシル末端に対して近接して位置するが、完全なポリペプチドのカルボキシル末端に必ずしも存在しない。用語「相補体／抗相補体の対」は、適当な条件下に非共有結合的に関連した安定な対を形成する、非同一部分を表す。例えば、ビオチンおよびアビジン（またはストレプトアビジン）は、相補体／抗相補体の対のプロトタイプのメンバーである。他の典型的な相補体／抗相補体の対は、レセプター／リガンドの対、抗体／抗原（またはハプテンまたはエピトープ）の対、センス／アンチセンスポリヌクレオチドの対、およびその他を包含する。相補体／抗相補体の対の引き続く解離を望む場合、相補体／抗相補体の対は好ましくは＜１０⁹／Ｍの結合アフィニティーを有する。用語「ポリヌクレオチド分子の相補体」は、相補的塩基配列を有しかつ参照配列に比較して逆の向きを有するポリヌクレオチド分子である。例えば、配列5'AT GCACGGG3’は5'CCCGTGCAT3’に対して相補的である。用語「contig」は、他のポリヌクレオチドに対して同一であるか、あるいは相補的な配列の隣接するストレッチを有するポリヌクレオチドを表す。隣接する配列は、それらの全体においてあるいはポリヌクレオチドの部分的ストレッチに沿って、ポリヌクレオチド配列の所定のストレッチを「オーバーラップ」させると言われる。例えば、ポリヌクレオチド配列5'-ATGGCTTAGCTT-3'に対する代表的な contigは、5'-TAGCTTgagtct-3'および3'-gtcgacTACCGA-5'である。用語「縮重ヌクレオチド配列」は、１またはそれより多くの縮重コドンを含むヌクレオチド配列（ポリペプチドをコードする参照ポリヌクレオチド分子に比較して）を表す。縮重コドンはヌクレオチドの異なるトリプレットを含有するが、同一アミノ酸残基をコードする（すなわち、GAUおよびGACのトリプレットの各々はAspをコードする）。用語「発現ベクター」は、その転写を提供する追加のセグメントに作用可能に連結された、注目のポリペプチドをコードするセグメントを含んでなる、線状または円形のDNA分子を表すために使用される。このような追加のセグメントは、プロモーターおよびターミネーターの配列を包含し、そして、また、１またはそれより多くの複製起点、１またはそれより多くの選択マーカー、エンハンサー、ポリアデニル化シグナル、およびその他を包含することができる。発現ベクターは、一般に、プラスミドまたはウイルスDNAから誘導されるか、あるいは双方の因子を含有するすることができる。用語「単離された」は、ポリヌクレオチドに適用されるとき、ポリヌクレオチドがその自然の遺伝的環境から取出され、こうして、他の余分または望ましくないコーディング配列を含まず、そして遺伝子操作されたタンパク質の産生系内で使用するために適当な形態であることを表す。このような単離された分子は、それらの自然の環境から分離されたものであり、そしてcDNAおよびゲノムのクローンを包含する。本発明の単離されたDNA分子は、それらが通常関連する他の遺伝子を含まないが、天然に存在する５’および３’の非翻訳領域、例えば、プロモーターおよびターミネーター、並びにその他を包含することができる。関連する領域の同定は、当業者にとって明らかであろう（例えば、DynanおよびTijan，Na ture 316：774-78，1985、参照）。「単離された」ポリペプチドまたはタンパク質は、その自然環境、例えば、血液および動物の組織以外の条件において見出されるポリペプチドまたはタンパク質である。好ましい形態において、単離されたポリペプチドは他のポリペプチド、特に動物由来の他のポリペプチドを実質的に含まない。高度に精製された形態、すなわち、９５％より高い純度、より好ましくは９９％より高い純度のポリペプチドを提供することは好ましい。この関係において使用するとき、用語「単離された」は別の物理的形態、例えば、二量体、あるいはグリコシル化または誘導化された形態の同一のポリペプチドの存在を排除しない。用語「作用可能に連結された」は、DNAセグメントについて言及するとき、セグメントがそれらの意図する目的のために調和して機能するように、例えば、転写がプロモーターにおいて開始し、コーディングセグメントを通してターミネーターに進むように、セグメントが配置されていることを示す。用語「オーソログ」は、異なる種からのポリペプチドまたはタンパク質の機能的対応物である、１つの種から得られたポリペプチドまたはタンパク質を表す。オーソログの間の配列の差は種形成の結果である。「パラログ」(paralog)は、生物により作られた、別個の、構造的に関係するタンパク質である。パラログは遺伝子の重複(duplication)を通して生ずると考えられる。例えば、α−グロビン、β−グロビン、およびミオグロビンは互いにパラログである。「ポリヌクレオチド」は、５’→３’末端の方向に読んだ、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド塩基の一本鎖または二本鎖のポリマーである。ポリヌクレオチドはRNAおよびDNAを包含し、天然源から単離され、in vitroで合成されるか、あるいは天然の分子と合成の分子との組合わせから製造することができる。ポリヌクレオチドは、塩基対（略号「ｂｐ」）、ヌクレオチド（「ｎｔ」）、またはキロ塩基（「ｋｂ」）として表される。この関係が許す場合、後者の２つの用語は一本鎖または二本鎖であるポリヌクレオチドを記載することができる。この用語を二本鎖の分子に適用するとき、それは全体の長さを表すために使用され、そして用語「塩基対」に等しいと理解されるであろう。当業者は認識するように、二本鎖ポリヌクレオチドの２つの鎖は長さが異なることがあり、そして酵素の切断の結果その末端は食い違うことがある；こうして、二本鎖ポリヌクレオチド内のすべてのヌクレオチドは対合していなことがある。このような不対末端は、一般に、２０ｎｔを超えない長さであろう。「ポリペプチド」は、自然にまたは合成的に生産された、ペプチド結合により結合されたアミノ酸残基のポリマーである。約１０アミノ酸残基より小さいポリペプチドは普通に「ペプチド」と呼ばれる。用語「プロモーター」は、本明細書において、RNAポリメラーゼを結合しかつ転写を開始するDNA配列を含有する遺伝子の部分を表す、この分野において認識されている意味において使用される。プロモーター配列は普通に、しかし常にではないが、遺伝子の５’非コーディング領域の中に見出される。「レセプター」は、生物活性分子（すなわち、リガンド）に結合し、細胞上のリガンドの作用を伝達する、細胞関連タンパク質を表す。膜に結合したレセプターは、細胞外リガンド結合ドメインと、典型的にはシグナル伝達に関係する細胞内エフェクタードメインとを含んでなる、多ドメイン構造物により特徴づけられる。レセプターへのリガンドの結合は、エフェクタードメインと、細胞中の１またはそれより多くの他の分子との間の相互作用を引き起こす、レセプターにおけるコンフォメーションの変化を生ずる。この相互作用は、引き続いて、細胞の代謝の変更に導く。レセプター−リガンドの相互作用に関係する代謝の事象は、遺伝子の転写、リン酸化、脱リン酸化、サイクル的AMP 産生の増加、細胞のカルシウムの移動化、膜脂質の移動化、細胞の接着、イノシトール脂質の加水分解、およびリン脂質の加水分解を包含する。大部分の核レセプターはまた、多ドメインの構造を示し、この構造はアミノ末端、トランス作用性ドメイン、DNA結合ドメイン、およびリガンド結合ドメインを含む。一般に、レセプターは、膜結合、細胞質ゾルまたは核レセプター；モノマーのレセプター（例えば、甲状腺刺激ホルモンのレセプター、ベータ−アドレナリン作動性レセプター）またはマルチマーのレセプター（例えば、PDGFレセプター、Ｇ−CSFレセプター、エリトロポイエチンレセプターおよびＩＬ−６レセプター）であることができる。用語「分泌シグナル配列」は、ポリペプチド（「分泌ペプチド」）をコードするDNA配列を表し、それは、より大きいポリペプチドの１成分として、より大きいポリペプチドが合成される細胞の分泌経路にそのポリペプチドを向ける。通常、より大きいポリペプチドは、分泌経路を通る移行の間に切断されて、分泌ペプチドが除去される。用語「スプライス変異型」（splice variant）は、本明細書において、遺伝子から転写されたRNAの別の形態を表すために使用される。スプライス変異型は転写されたRNA分子内の、あるいはそれ程普通ではないが別々に転写されたRNA分子の間の、いずれか１つのスプライス部位の使用により自然に発生し、そして同一遺伝子から転写されたいくつかのmRNAを生ずることがある。スプライス変異型は、変更されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。また、スプライス変異型という用語は、本明細書において、ある遺伝子から転写されたmRNAのスプライス変異型によりコードされるタンパク質を表すために使用される。不正確な分析法（例えば、ゲル電気泳動）により決定されたポリマーの分子量および長さは、近似値であると理解されるであろう。このような値を「約」Ｘまたは「ほぼ」Ｘとして表すとき、Ｘの記載する値は±１０％の正確さであると理解されるであろう。本明細書において引用するすべての参考文献の教示は、それらの全体において引用することによって本明細書の一部とされる。本発明は、一部分、分泌されるポリペプチドをコードする新規なDNA配列の発見に基づく。この新規なDNAに対応するmRNAの組織の分布の分析は、mRNAの発現が精巣および骨髄において最高であり、次いで脊髄、結腸および膵臓において、明らかであるが、減少した発現レベルであることを明らかにした。1.7および2.5 ｋｂの大きさの転写物はノザン分析により同定された。このポリペプチドをzsig 15と表示した。さらに、腫瘍および正常組織のノザンブロットは、腫瘍の種々の発生段階および／または正常組織における結腸および乳房のmRNAの発現を明らかにした。本発明の新規なzsig15ポリペプチドは、ESTデータベースを推定上の分泌シグナルを有する配列について検索することによって、最初に同定された。EST配列が発見され、引き続いてｃ１9；ｑ13.1−913.2にマッピングされた。EST配列は本来結腸腫瘍ライブラリーから誘導された。 zsig15のヌクレオチド配列は配列番号：１に記載されており、そしてその推定されたアミノ酸配列は配列番号：２に記載されている。zsig15ポリペプチド（配列番号：１）をコードするDNAの分析は、１５〜２１アミノ酸残基のシグナルペプチド（配列番号：２の残基１〜残基１５〜２１）からなり、そして416〜422の成熟ポリペプチド(配列番号：２の残基１５〜２１〜残基437)を含んでなる、437アミノ酸（配列番号：２）をコードするオープンリーディングフレームを明らかにした。本発明のポリペプチドは少なくとも４つの別個の領域を含有する。これらの領域のうちの２つは互いの直接の反復である。成熟ペプチドのアミノ末端（残基１６または２２）から出発して、領域１は配列番号：２に示すアミノ酸残基２２(L eu)〜残基183（Pro）の第１の反復するドメインであり、１２のシステイン残基を含有する。領域２(配列番号：２の残基184（Gly）〜残基207(Asp))はリンカー領域であるように思われ、１対のシステインを含有する。領域３(配列番号：２のアミノ酸残基208（Phe）〜残基376(Pro))は第２の反復するドメインであり、１２のシステインを含有する。双方の反復するドメインのすべてはベータ−鎖であると予測され、ＩＧドメインおよびシステインレセプターのドメインとの第３の類似性をするする。第４のドメインはポリペプチドのＣ末端であり(配列番号：２の残基377〜437)であり、そしてポリペプチドのための二量体化、膜会合または疎水性マトリックスの結合のための可能なアンカーである疎水性ストレッチを含有し、そして１対のシステインを含有する。Arg−Lysは、配列番号：２の残基205〜206に示されており、普通のプロセシング部位である。他の推定上のプロセシング部位は、配列番号：２の残基395〜396(Lys−Arg)に見出される。この切断部位は、タンパク質の膜結合形態からの遊離の分泌成分として、ポリペプチドを解放する働きをすることができる。膜結合タンパク質からの遊離分泌成分の発生はTNF−αについて示唆された(Rosendahl et al.，J ．Biol．Chem．272（39）：24588-24593，1997)。本発明はまた、本明細書において開示するzsig15ポリペプチドをコードする、DNAおよびRNA分子を包含する、ポリヌクレオチド分子を提供する。当業者は容易に認識するように、遺伝子コドンの縮重にかんがみて、これらのポリヌクレオチド分子の間で、かなりの配列の変動が可能である。配列番号：４は、配列番号：２のzsig15ポリペプチドをコードする、すべてのDNAを包含する縮重DNA配列である。当業者は認識するように、配列番号：４の縮重配列は、また、ＴをＵで置換することによって、配列番号：２をコードするすべてのDNA配列を提供する。したがって、配列番号：４のヌクレオチド１〜ヌクレオチド1311を含んでなる、zsig15ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよびそれらの RNA同等物は本発明に包含される。縮重ヌクレオチドの位置を表すために配列番号：４内で使用した１文字コードを表１に記載する。「レゾリューション」（re solution）はコード文字により表されるヌクレオチドである。「相捕体」は１またはそれより多くの相補的ヌクレオチドのコードである。例えば、コードＹはＣまたはＴを表し、そしてその相補体ＲはＡまたはＧを表し、ＡはＴに対して相補的であり、そしてＧはＣに対して相補的である。所定のアミノ酸についてすべての可能なコドンを包含する、配列番号：４において使用する縮重コドンを、表２に記載する。当業者は理解するように、各アミノ酸をコードするすべての可能なコドンを代表する、縮重コドンを決定するとき、多少の不明確さが導入される。例えば、セリン(WSN)の縮重コドンは、ある環境において、アルギニン(AGR)をコードすることができ、そしてアルギニン(MGN)の縮重コドンは、ある環境において、セリン( AGY)をコードするすることができる。同様な関係はフェニルアラニンおよびロイシンをコードするコドンの間に存在する。したがって、縮重配列に包含される、いくつかのポリヌクレオチドは変異型アミノ酸配列をコードすることができるが、当業者は、配列番号：２のアミノ酸配列を参照することによって、このような変異型配列を容易に同定することができる。変異型配列は、本明細書において記載するように、機能性について容易に試験することができる。また、当業者は理解するように、異なる種は「優先的コドンの使用」を示すことができる。一般に、下記の文献を参照のこと：Grantham，et al.，Nucl ．Acid s Res．8 ：1893-912，1980；Haas，et al.，Curr ．Biol．6：315-24，1996；Wai n-Hobson，et al.，Gene 13：355-64，1981；GrosjeanおよびFiers，Gene 18：1 99-209，1982；Holm，Nucl ．Acids Res．14：3075-87，1986；Ikemura，J ．Mol ．Biol．158 ：573-97，1982。本発明において使用するとき、用語「優先的コドンの使用」または「優先的コドン」は、ある種の細胞において最も頻繁に使用され、こうして各アミノ酸をコードする可能なコドンの１つまたはわずかの代表的なものに好んで使用される、タンパク質翻訳コドンを呼ぶ、この分野の用語である（表２参照）。例えば、アミノ酸のスレオニン(Thr)はACA、ACC、ACG、または ACTによりコードされることができるが、哺乳動物細胞において、ACCは最も普通に使用されるコドンである；他の種、例えば、昆虫細胞、酵母、ウイルスまたは細菌において、異なる Thrコドンは優先的であることができる。特定の種の優先的コドンを、この分野において知られている種々の技術により、本発明のポリヌクレオチドの中に導入することができる。組換えDNAの中への優先的コドンの導入は、例えば、特定の細胞の型または種内のタンパク質の翻訳を効率よくすることによって、タンパク質の産生を増強することができる。したがって、配列番号：４に記載されている縮重コドンの配列は、この分野において普通に使用されかつ本明細書において開示する、種々の細胞の型および種におけるポリヌクレオチドの発現を最適化するための鋳型として働く。優先的コドンを、本明細書において開示するように、種々の種における発現について試験し、発現のために最適化し、そして機能性について試験することができる。本発明の好ましい態様の範囲内において、単離されたポリヌクレオチドは、ストリンジェント条件下に、配列番号：１、またはそれに対して相補的な配列の同様な大きさの領域にハイブリダイゼーションするであろう。一般に、ストリンジェント条件は、規定されたイオン強度およびｐＨにおいて、特定の配列の融点（Ｔｍ）よりも約５℃低いように選択される。Ｔｍは、標的配列の５０％が完全に合致するプローブにハイブリダイズする温度（規定されたイオン強度およびｐＨにおいて）である。典型的にはストリンジェント条件は、NaCl濃度がｐＨ７において約0.03Ｍまでであり、かつ温度が少なくとも約６０℃である条件である。前述したように、本発明の単離されたポリヌクレオチドはDNAおよびRNAを包含する。DNAおよびRNAを製造する方法は、この分野においてよく知られている。一般に、RNAは大量のzsig15 RNAを産生する組織または細胞から単離される。このような組織および細胞はノザンブロッティングにより同定され(Thomas，Proc ．N atl．Aca d ．Sci．USA 77：5201，1980)、そして前立腺、骨髄、結腸、乳房、および脊髄を包含する。全体のRNAは、グアニジンHCl抽出および引き続くCsCl勾配における遠心による単離により製造することができる(Chirgwin et al.，Biochemistry 1 8 ：52-94，1979)。ポリ（Ａ）+RNAは、AvivおよびLeder，Proc ．Natl．Acad．Sc i．USA 69：1408-12，1972)の方法に従い、全RNAから製造される。相補的DNA(cD NA)は、既知の方法により、ポリ（Ａ）+RNAから製造される。別法において、ゲノムDNAを単離することができる。次いで、zsig15ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、例えば、ハイブリダイゼーションまたはPCRにより、同定および単離する。 zsig15をコードする全長クローンを、慣用のクローニング手順により得ることができる。相補的DNA(cDNA)が好ましいが、ある用途（例えば、トランスジェニック動物における発現）のために、ゲノムのクローンを使用するか、あるいは少なくとも１つのゲノムのイントロンを含むようにcDNAクローンを修飾することが好ましいことがある。cDNAおよびゲノムのクローンを製造する方法はよく知られておりかつ当業者のレベルの範囲内であり、そして、ライブラリーのプロービングまたはプライミングのための、本明細書において開示する配列およびその一部分の使用を包含する。zsig15、レセプターフラグメントまたは他の特異的結合相手に対する抗体で、発現ライブラリーをプロービングすることができる。本発明はさらに、他の種から対応物のポリペプチドおよびポリヌクレオチド（オーソログ）を提供する。これらの種は下記のものを包含するが、これらに限定されない：哺乳動物、トリ、両生類、爬虫類、魚類、昆虫および他の脊椎動物および無脊椎動物。特に興味あるものは、他の哺乳動物種、例えば、ネズミ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、および他の霊長類からのzsig15ポリペプチドである。ヒトzsig15のオーソログは、本発明により提供される情報および組成物を慣用のクローニング技術と組み合わせて使用して、クローニングすることができる。例えば、本明細書において開示するように、zsig15を発現する組織および細胞のタイプから得られるmRNAを使用して、cDNAをクローニングすることができる。本明細書において開示する配列から設計されたプローブでノザンブロットをプロービングすることによって、mRNAの適当な源を同定することができる。次いで、陽性の組織または細胞系統のmRNAからライブラリーを調製することができる。次いで、種々の方法により、例えば、完全なまたは部分的ヒトcDNAでプロービングするか、あるいは開示された配列をベースとする縮重プローブの１またはそれ以上の組でプロービングすることによって、zsig15をコードするcDNAを単離することができる。また、ポリメラーゼ連鎖反応、すなわち、PCR（Mullis、米国特許第4,683,202号）により、本明細書において開示する、代表的なヒトzsig15配列から設計されたプライマーを使用して、cDNAをクローニングすることができる。追加の方法において、cDNAライブラリーを使用して宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることができ、そして注目のcDNAの発現をzsig15ポリペプチドに対する抗体で検出することができる。また、同様な技術をゲノムのクローンの単離に適用することができる。当業者は認識するように、配列番号：１に記載する配列はヒトzsig15の単一のアレルを表し、そしてアレル変異型およびいずれか１つのスプライシングが起こることが期待される。アレル変異型は、標準的手順に従い、異なる個体からcDNA ライブラリーまたはゲノムのライブラリーをプロービングすることによって、クローニングすることができる。配列番号：１に示すDNA配列のアレル変異型は、サイレント突然変異体を含有するものおよび突然変異がアミノ酸配列を変化させるものを包含し、配列番号：２のアレル変異型であるタンパク質と同様に、本発明の範囲内に入る。交互にスプライスされたmRNAから発生するcDNA は、zsig15ポリペプチドの性質を保持し、このようなcDNAおよびmRNAをコードするポリペプチドと同様に、本発明の範囲内に入る。これらの配列のスプライス変異型およびスプライス変異型は、この分野において知られている標準的手順に従い、異なる個体からのcDNAまたはゲノムのライブラリーをプロービングすることによって、クローニングすることができる。 zsig15において高度に保存されるアミノ酸は、新しいファミリーのメンバーを同定するための道具として使用することができる。例えば、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応(ＲＴ−PCR)を使用して、種々の組織源または細胞系統から得られたR NAから保存された領域をコードする配列を増幅することができる。特に、zsig15 配列から設計された高度に縮重したプライマーはこの目的に有用である。本発明は、また、配列番号：２のポリペプチドおよびそれらのオーソログに対して実質的に相同である、単離されたzsig15ポリペプチドを提供する。用語「実質的に相同」は、本明細書において、配列番号：２に示す配列またはそれらのオーソログに対して６０％、好ましくは８０％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％の配列の同一性を有するポリペプチドを表すために使用される。配列の同一性の百分率は慣用法により決定される。例えば、下記の文献を参照のこと：Altschul et al.，Bull ．Math．Bio．48：603-616，1 986、並びにHenikoffおよびHenikoff，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 89：10915- 10919，1992。簡単に述べると、表３（アミノ酸は標準的１文字コードにより示されている）に示すように１０のギャップオープニングペナルティー、１のギャップエクステンションペナルティー、およびHenikoffおよびHeni koff(ibid.)の「ブロサム６２」スコアリングマトリックスを使用して、２つのアミノ酸配列を整列させて整列スコアを最適化する。次いで、最適な整列の同一性百分率は、次のようにして計算される：ポリヌクレオチド分子の配列の同一性は、前述した比を使用する同様な方法により、決定される。変異型zsig15ポリペプチドまたは実質的に相同のzsig15ポリペプチドは、１またはそれより多くのアミノ酸の置換、欠失または付加を有するとして特徴付けられる。これらの変化は好ましくは小さい特質を有する、すなわち、保存的アミノ酸置換（表４参照）およびポリペプチドのフォルディングまたは活性に影響を実質的に与えない他の置換；小さい欠失、典型的には１〜約３０アミノ酸の欠失；および小さいアミノ末端およびカルボキシル末端のエクステンション、例えば、アミノ末端のメチオニン残基、約２０〜２５残基までの小さいリンカーペプチド、または親和標識を有する。前述したように、本発明のポリペプチドは少なくとも４つの別個の領域を有する。それらの領域(配列番号：２の残基２２〜183、残基184〜207、残基208〜376 および残基377〜437)は、独立に使用するか、あるいは本発明のポリペプチドまたはどこかからの他の領域と組み合わせた融合タンパク質として使用することができる。こうして、本発明は、配列番号：２の対応する領域と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％同一である配列を含んでなる、６１〜437アミノ酸残基のポリペプチドを包含する。本発明の他の面において、ポリペプチド（またはそれらをコードするポリヌクレオチド）を組合わせるとき、融合タンパク質は第１ポリペプチド及び第２ポリペプチドを含んでなり、前記第１ポリペプチドはアミノ酸残基２２(Leu)〜183（Pro）、または前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んでなり、そして前記第２ポリペプチドはアミノ酸残基208（Phe）〜394（Glu）または前記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んでなる。共有結合した部分、例えば、親和性標識を含んでなるポリペプチドは、さらに、ａ５ｐと親和性標識との間にタンパク質分解切断部位を含むことができる。好ましいこのような部位は、トロンビン切断部位および因子Ｘａ切断部位を包含する。さらに、本発明は、種々の他のポリペプチドの融合物、および１またはそれより多くのポリペプチドの融合物を含んでなるマルチマーのタンパク質を提供する。例えば、zsig15ポリペプチドは、米国特許第5,155,027号および米国特許第5,5 67,584号に開示されているように、二量体化性タンパク質への融合物として製造することができる。これに関して好ましい二量体化性タンパク質は、免疫グロブリン定常領域のドメインを含む。免疫グロブリン−zsig15ポリペプチドの融合物を遺伝子操作された細胞において発現させて、種々のマルチマーのzsig15類似体を製造することができる。補助的ドメインをzsig15ポリペプチドに融合させて、それらを特定の細胞、組織、または高分子（例えば、コラーゲン）に標的化することができる。例えば、標的細胞の表面上のレセプターに特異的に結合するリガンドにzsig15ポリペプチドを融合させることによって、zsig15ポリペプチドまたはタンパク質を前以て決定した細胞の型に標的化することができる。このようにして、治療または診断の目的でポリペプチドまたはタンパク質を標的化することができる。zsig15ポリペプチドを２またはそれ以上の部分、例えば、精製のために親和標識、および標的化ドメインに融合させることができる。ポリペプチドの融合物は、また、１またはそれより多くの切断部位、特にドメインの間の切断部位を含むことができる。部分との融合は、zsig15ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端においてであることができる。Tuan et al.，Connectve Tissues Researc h 34：1-9，1996、参照。本発明のタンパク質はまた、天然に存在しないアミノ酸残基を含むことができる。天然に存在しないアミノ酸は、限定的ではないが、下記のものを包含する：トランス−３−メチルプロリン、２，４−メタノプロリン、シス−４−ヒドロキシプロリン、トランス−４−ヒドロキシプロリン、Ｎ−メチルグリシン、アロ− スレオニン、メチルスレオニン、ヒドロキシエチルシステイン、ヒドロキシエチルホモシステイン、ニトログルタミン、ホモグルタミン、ピペコリン酸、チアゾリジンカルボン酸、デヒドロプロリン、３−および４−メチルプロリン、３，３ −ジメチルプロリン、tert−ロイシン、ノルバリン、２−アザフェニルアラニン、３−アザフェニルアラニン、４−アザフェニルアラニン、および４−フルオロフェニルアラニン。天然に存在しないアミノ酸残基をタンパク質の中に組込む、いくつかの方法はこの分野において知られている。例えば、化学的にアミノアシル化されたサプレッサーtRNAを使用してナンセンス突然変異を抑制する、in vitro系を使用することができる。アミノ酸を合成し、tRNAをアミノアシル化する方法はこの分野において知られている。大腸菌(E．coli)Ｓ３０抽出物および商業的に入手可能な酵素および他の試薬からなる、無細胞系において、ナンセンス突然変異を含有するプラスミドの転写および翻訳は実施される。タンパク質をクロマトグラフィーにより精製する。例えば、下記の文献を参照のこと：Robertson et al.，J ．A m．Chem．Soc．113 ：2722，1991；Ellman et al.，Methods Enzymol ．202：301 ，1991；Chung et al.，Science 259：806-809，1993;およびChung et al.，Pro c．Natl．Acad．Sci．USA 90：10145-10149，1993)。第２の方法において、突然変異されたmRNAおよび化学的にアミノアシル化されたサプレッサーtRNAのマイクロインジェクションにより、キセノプス卵母細胞(Xenopus oocytes)中で翻訳を実施する(Turcatti et al.，J ．Biol．Chem．271：19991-19998，1996)。第３の方法において、置換すべき天然のアミノ酸（例えば、フェニルアラニン）の非存在においてかつ所望の天然に存在しない１またはそれより多くのアミノ酸（例えば、２−アザフェニルアラニン、３−アザフェニルアラニン、４−アザフェニルアラニンまたは４−フルオロフェニルアラニン）の存在において、大腸菌(E．co li)細胞を培養する。天然に存在しないアミノ酸をその天然の対応物の代わりにタンパク質の中に組込む。Koide et al.，Biochem ．33：7470-7476，1994、参照。in vitro化学的修飾により、天然に存在するアミノ酸残基を天然に存在しない種に変換することができる。化学的修飾を部位特異的突然変異誘発と組合わせて、置換の範囲をさらに拡張することができる（WynnおよびRichards，Protein Sci ．2：395-403，1993）。制限された数の非保存的アミノ酸、遺伝子コドンによりコードされないアミノ酸、天然に存在しないアミノ酸、および非天然のアミノ酸をzsig15アミノ酸残基と置換することができる。本発明のポリペプチドにおける必須アミノ酸は、この分野において知られている手順、例えば、部位特異的突然変異誘発またはアラニン走査突然変異誘発に従い同定することができる(CunninghamおよびWells，Science 244：1081-1085，19 89；Bass et al.，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 88：4498-4502，1991)。後者の技術において、単一のアラニンの突然変異を分子中のすべての残基において導入し、そして、後述するように、生ずる突然変異体分子を生物学的活性について試験して、分子の活性に対して決定的であるアミノ酸残基を同定する。また、Hilt on et al.，J ．Biol．Chem．271：4699-4708，1996。また、核磁気共鳴、結晶学、電子回折またはホトアフィニティーラベリングのような技術と、推定上の接触部位のアミノ酸の突然変異との組合わせにより決定した、構造の物理的分析により、リガンド−レセプターの相互作用の部位を決定することができる。例えば、下記の文献を参照のこと：de Vos et al.，Science 255：306-312，1992；Smith et al.，J ．Mol．Biol．224：899-904，1992；Wlodaver et al.，FEBS Lett ．3 09 ：59-64，1992。既知の突然変異誘発およびスクリーニングの方法、例えば、下記の文献に記載されている方法により、多数のアミノ酸の置換を行い、試験することができる： Reidhaar-OlsonおよびSauer，Science 241：53-57，1988またはBowieおよびSaue r，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 86：2152-2156，1989。簡単に述べると、これらの著者らは、ポリペプチド中の２またはそれより多くの位置を同時にランダム化し、機能的ポリペプチドについて選択し、次いで突然変異したポリペプチドを配列決定して、各位置において許容可能な置換のスペクトルを決定する方法を開示している。使用できる他の方法は、ファージディスプレイ（例えば、Lowman et al.，Bio chem ．30 ：10832-10837，1991；Ladner et al.，米国特許第5,223,409号；Huse ，WIPO公開WO92／06204号）および領域特異的突然変異誘発（Derbyshire et al. ，Gene 46：145，1986；Ner et al.，DNA 7：127，1988）を包含する。アミノ酸配列をzsig15ポリペプチドにおいて変化させて、生物学的活性に対して必須の高次構造の崩壊を最小にする。これに関して、一般に、自然の配列の全体の親水性プロフィルを保持することが好ましい。配列番号：２に示す配列の親水性プロフィルを第１図に示す。開示されたzsig15 DNAおよびポリペプチド配列の変異型は、下記の文献に開示されているように、DNAシャフリングにより発生させることができる：Stemmer，Nature 370：389-91，1994；Stemmer，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 91：10747- 51，1994；およびWIPO公開WO97／20078号。簡単に述べると、親DNAのランダムフラグメント化によるin vitro相同組換えおよび引き続くPCRを使用するリアセンブリーによって、ランダムに導入された点突然変異を生成することによって、変異型DNAを発生させる。１ファミリーの親DNA、例えば、異なる種からのアレレ変異型またはDNAを使用して、追加の変動性をこの方法に導入することによって、この技術を変更することができる。所望の活性についての選択またはスクリーニング、および引き続く突然変異誘発の追加の反復およびアッセイは、所望の突然変異体についての選択および同時の有害な変化に対する選択により、配列の急速な「進化」を提供する。本明細書において開示するような突然変異誘発法を、高い処理量の、自動化されたスクリーニング方法と組合わせて、宿主細胞におけるクローニングされた、突然変異化されたポリペプチドの活性を検出することができる。活性ポリペプチドをコードする突然変異化DNA分子を宿主細胞から回収し、そして現代的装置により急速に配列決定することができる。これらの方法は注目のポリペプチド中の個々のアミノ酸残基の重要性の急速な決定を可能とし、そして未知の構造のポリペプチドに適用することができる。前述の方法を使用して、当業者は、配列番号：２の種々のポリペプチドのフラグメントまたは変異型、あるいはは野生型タンパク質の活性を保持する種々のポリペプチドのフラグメントまたは変異型を同定および／または製造することができる。全長のポリペプチド、生物学的に活性なフラグメント、および融合ポリペプチドを包含する、本発明のポリペプチドを、慣用の技術に従い、遺伝子操作された宿主細胞において製造することができる。適当な宿主細胞は、外因的DNAで形質転換またはトランスフェクトすることができ、培養により増殖させることができる細胞の型であり、そして細菌、真菌細胞、および培養された高等真核細胞を包含する。真核細胞、特に多細胞の微生物の培養された細胞は好ましい。クローニングされたDNA分子を操作し、外因的DNAを種々の宿主細胞の中に導入する技術は、下記の文献に記載されている：Sambrook et al.，Molecular Cloning ：A Labo ratory Manual 、第２版、Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1989、およびAusubel et al.編，Current Protocols in Molecular Biology ，John Wiley and Sons，Inc.，NY，1987。一般に、zsig15ポリペプチドをコードするDNA配列は、発現ベクター内に一般に転写プロモーターおよびターミネーターを含む、その発現のための必要な他の遺伝因子に作用可能に連結される。ベクターはまた、１またはそれより多くの選択可能なマーカーおよび１またはそれより多くの複製起点を普通に含有するが、当業者は認識するように、ある種の系内で選択マーカーを別々のベクター上に提供し、そして宿主細胞のゲノムの中への組込みにより外因的DNAの複製を得ることができる。プロモーター、ターミネーター、選択マーカー、ベクターおよび他の因子の選択は、当業者のレベル内の日常的設計事項である。多数のこのような因子は文献に記載されており、そして商業的供給会社から入手可能である。 zsig15ポリペプチドを宿主細胞の分泌経路の中に向けるために、分泌シグナル配列（また、リーダー配列、プレプロ配列または前配列として知られている）を発現ベクターの中に準備する。分泌シグナル配列はzsig15のそれであることができるか、あるいは他の分泌されたタンパク質（例えば、ｔ−ＰＡ）から誘導するか、あるいは新規に合成することができる。分泌シグナル配列をzsig15 DNA配列に作用可能に連結して、すなわち、２つの配列を正しいリーディングフレームで結合して、新しく合成されたポリペプチドを宿主細胞の分泌経路に向けるように位置させる。分泌シグナル配列は普通に問題のポリペプチドをコードするDNA配列に対して５’に配置されるが、ある種の分泌シグナル配列は注目のDNA配列の中のどこかに位置決定することができる（例えば、Welch et al.，米国特許第5, 037,743号；Holland et al.，米国特許第5,143,830号、参照）。あるいは、本発明のポリペプチドの中に含有される分泌シグナル配列を使用して、他のポリペプチドを分泌経路に向けることができる。本発明は、このような融合ポリペプチドを提供する。配列番号：２のアミノ酸残基１〜１５〜２１から誘導された分泌シグナル配列が他のポリペプチドに作用可能に連結された、シグナル融合ポリペプチドを、この分野において知られておりかつ本明細書に開示されている方法により作ることができる。好ましくは、本発明の融合ポリペプチドの中に含有される分泌シグナル配列を追加のペプチドのアミノ末端に融合させて、追加のペプチドを分泌経路に向ける。このような構築物はこの分野において知られている多数の用途を有する。例えば、これらの新規な分泌シグナル配列の融合構築物は、例えば、常態で分泌されないタンパク質の活性成分、例えば、レセプターの分泌を指令することができる。このような融合をin vivoまたはin vitroにおいて使用して、ペプチドを分泌経路を通して向けることができる。培養された哺乳動物細胞は、本発明において適当な宿主である。外因的DNAを哺乳動物の宿主細胞の中に導入する方法は下記の方法を包含する：リン酸カルシウム仲介トランスフェクション(Wigler et al.，Cell 14:725，1978；CorsaroおよびPearson，Somatic Cell Genetics 7：603，1981；GrahamおよびVan der Eb ，Virology 52：456，1973)、エレクトロポレーション(Neumann et al.，EMBO J ．1 ：841-845，1982)，DEAE−デキストリン仲介トランスフェクション(Ausubel et al.，ibid.)、およびリポソーム仲介トランスフェクション(Hawley-Nelson e t al.，Focus 15：73，1993；Ciccarone et al.，Focus 15：80，1993)、並びにウイルスベクター（MillerおよびRosman，BioTechniques 7：980-90，1989；Wan gおよびFiner，Nature Med ．2：714-6，1996）。培養された哺乳動物細胞における組換えポリペプチドの産生は、例えば、下記の特許文献に記載されている：Le vinson et al.,米国特許第4,713,339号；Hagen et al.，米国特許第4,784,950号；Palmiter et al.，米国特許第4,579,821号；およびRingold,米国特許第4,656, 134号。適当な培養された哺乳動物細胞は下記のものを包含する：COS-1（ATCC No．CR L 1650）、COS-7（ATCC No．CRL 1651）、BHK(ATCC No．CRL 1632)、BHK570（AT CC No．CRL 10314）、293(ATCC No．CRL 1573；Graham et al.，J ．Gen．Virol ．36 ：59-72，1977)、並びにチャイニーズハムスター卵巣（例えば、CHO-K1；AT CC No．CRL 61）細胞系統。追加の適当な細胞系統はこの分野において知られており、そして公共の寄託機関、例えば、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（マリイランド州ロックビレ）から入手可能である。一般に、強い転写プロモーター、例えば、ＳＶ−４０またはサイトメガロウイルスからのプロモーターが好ましい。例えば、米国特許第4,956,288号参照。他の適当なプロモーターは、メタロチオネイン遺伝子からプロモーター（米国特許第4,579,821号および米国特許第4,601,978号）およびアデノウイルスの主要な後期プロモーターを包含する。薬剤選択を一般に使用して、外来DNAが挿入された、培養された哺乳動物細胞について選択する。このような細胞は通常「トランスフェクタント」と呼ばれる。選択因子の存在中で培養され、問題の遺伝子をそれらの子孫に移行させることができる細胞は、「安定なトランスフェクタント」と呼ばれる。好ましい選択マーカーは、抗生物質のネオマイシンに対する耐性をコードする遺伝子である。選択はネオマイシン型薬剤、例えば、Ｇ−418またはその他の存在において実施される。また、選択系を使用して、注目の遺伝子の発現レベルを増加することができる、「増幅」と呼ぶ方法。低いレベルの選択因子の存在においてトランスフェクタントを培養し、次いで選択因子の量を増加して、導入された遺伝子の産物を高いレベルで産生する細胞について選択することによって、増幅は実施される。好ましい増幅可能な選択可能なマーカーは、メトトレキセートに対する耐性を付与するジヒドロフォレートリダクターゼである。他の薬剤耐性遺伝子（例えば、ヒグロマイシン耐性、多薬剤耐性、プロマイシンアセチルトランスフェラーゼ）を使用することもできる。変更された表現型を導入するオールタネイティブマーカー、例えば、緑色蛍光タンパク質、または細胞表面のタンパク質、例えば、ＣＤ4、ＣＤ８、クラスＩのMHC、胎盤アルカリ性ホスファターゼを使用して、FACSソーティングまたは磁気ビーズ分離技術のような手段により、非形質転換細胞からトランスフェクテッド細胞を選別することができる。植物細胞、昆虫細胞およびトリの細胞を包含する、他の高等真核細胞を宿主細胞として使用することもできる。植物細胞中で遺伝子を発現するのためのベクターとしてアグロバクテリウム・リゾゲネス（Agrobacterium rhizogenes）を使用することは、Sinkar et al .，J ．Biosci．（Bangalore）11：47-58，1987において概観されている。昆虫細胞の形質転換およびその中の外来ポリペプチドの産生は、Guarino et al.，米国特許第5,162,222号およびWIPO公開WO94／06463号に記載されている。オートグラファト・カリフォルニカ（Autographa californica ）核多角体病ウイルス(AcNPV)から普通に誘導される組換えバキュロウイルスで昆虫細胞を感染させることができる。２つの方法の１つにより、zsig15ポリペプチドをコードするDNAをAcNPVポリヘドリン遺伝子のコーディング配列の代わりにバキュロウイルスのゲノムの中に挿入する。第１は、野生型AcNPVとAcNPV配列により挟まれたzsig15を含有する転移ベクターとの間の相同的DNA組換えの伝統的方法である。適当な昆虫細胞、例えばＳＦ９細胞を野生型AcNPVで感染させ、そしてAcNPVポリヘドリン遺伝子プロモーター、ターミネーター、およびフランキング配列に作用可能に連結されたzsig15ポリペプチドからなる転移ベクターでトランスフェクトする。下記の文献を参照のこと：King，L．A．およびPossee ，R．D．The Baculovirus Expression System ：A Laboratory Guide，London，C hapman & Hall，O'Reilly，D．R．et al.，Baculovirus Expression Vectors ：A Laboratory Manual ，New York，Oxford University Press，1994；およびRicha rdson，C．D．編、Baculovirus Expression Protocols ．Methods in Molecular Biology ，Totowa，NJ，Humana Press，1995。昆虫細胞内の自然の組換えは、ポリヘドリンプロモーターにより推進されたzsig15を含有する組換えバキュロウイルスを生ずるであろう。組換えウイルスの系統は、この分野において普通に使用されている方法により作られる。組換えバキュロウイルスを作る第２の方法は、Luckowが記載するトランスポゾンをベースとする系を利用する(Luckow，V．A.，et al.，J ．Virol．67：4566-7 9，1993)。この系はBac−ｔｏ−Bacキット（Life Technologies,マリイランド州ロックビレ）で販売されている。この系は転移ベクター、pFastBacl^TMLife Tech nologies）を利用し、ここでpFastBacl^TMは「バクミド」（bacmid）と呼ばれる大きいプラスミドとして大腸菌(E．coli)の中に維持されるバキュロウイルスのゲノムの中にzsig15ポリペプチドをコードするDNAを動かすために、Ｔｎ７トランスポゾンを含有する。pFastBacl^TM転移ベクターは、AcNPVポリヘドリンプロモーターを利用して、注目の遺伝子、この場合においてzsig15、の発現を推進する。しかしながら、pFastBacl^TMはかなりな程度に修飾可能である。ポリヘドリンプロモーターを除去し、バキュロウイルスをベースとするタンパク質プロモーター（また、Pcor、ｐ6.9またはＭＰプロモーターとして知られている）で置換し、ここでこのプロモーターはバキュロウイルスの感染において発現され、そして分泌されるタンパク質の発現に好都合であることが以前に示されている。下記の文献を参照のこと：Hill-Perkins，M．S．およびPossee，R．D.，J ．Gen．Virol．71：971-6，199 0；Bonning，B．C.，et al.，J ．Gen．Virol．75：1551-6，1994；および、Chaz enbalk，G．D．およびRapoport，B.，J ．Biol．Chem．270：1543-9，1995。このような転移ベクター構築物において、基本的タンパク質プロモーターの短いまたは長いバージョンを使用することができる。そのうえ、天然zsig15分泌シグナル配列を昆虫タンパク質から誘導された分泌シグナル配列で置換する、転移ベクターを構築することができる。例えば、エクジステロイドグルコシルトランスフェラーゼ(EGT)、蜜蜂のメリチン（Invitrogen）カリフォルニア州カールスバッド）、またはバキュロウイルスｇｐ６７（PharMingen、カリフォルニア州サンディエゴ）からの分泌シグナル配列を構築物において使用して、天然zsig15分泌シグナル配列を置換することができる。さらに、転移ベクターは、発現されたzsig15 ポリペプチドのＣ末端またはＮ末端におけるエピトープ標識、例えば、Glu−Glu エピトープ標識をコードするDNAとのインフレーム融合物を含むことができる（G russenmeyer，T.，et al.，Proc ．Natl．Acad．Sci．82：7952-4，1985）。この分野において知られている技術を使用して、zsig15を含有する転移ベクターを大腸菌(E．coli)に形質転換し、そして組換えバキュロウイルスを示す中断されたl acZ遺伝子を含有するバクミドについてスクリーニングする。組換えバキュロウイルスのゲノムを含有するバクミドDNAを普通の技術に従い単離し、そしてスポドプテラ・フルギペルダ(Spodoptera frugiperda)細胞、例えば、Ｓｆ９細胞をトランスフェクトする。zsig15を発現する組換えベクターを引き続いて生成させる。この分野において普通に使用されている方法により、組換えウイルスの系統を作る。宿主細胞、典型的にはヨトウガ、スポドプテラ・フルギペルダ(Spodoptera fr ugiperda)から誘導された細胞系統を感染させるために、組換えウイルスを使用する。一般に、下記の文献を参照のこと：GlickおよびPasternak，Molecular Bi otechnology ：Principle and Applications of Recombinant DNA ，ASM Press，W ashington，D．C.，1994。他の適当な細胞系統は、トリコデルマ・ニ（Trichode rma ni）から誘導されたHigh FiveO^TM細胞系統（Invitrogen）である（米国特許第5,300,435号）。商業的に入手可能な無血清培地を使用して、細胞を増殖させかつ維持する。適当な培地はＳｆ９細胞についてＳｆ900 ＩＩ^TM(Life Technolo gies)またはESF921^TM(Expression System)；およびトリコデルマ・ニ（Ｔ．ｎｉ）細胞についてＥｘ−cellO450^TM（JRH Bioscience、カンサス州レネクサ）またはExpress FiveO^TM(Life Technologies)である。細胞をほぼ２〜５×１０⁵細胞の接種密度から１〜２×１０⁶細胞の密度に増殖させ、この時組換えウイルスの系統を０．１〜１０、より典型的には約３の感染多重度で添加する。組換えウイルスが感染した細胞は典型的には感染後１２〜７５時間で組換えzsig15ポリペプチドを産生し、そしてそれを変化する効率で培地の中に分泌する。培養物を通常感染後４８時間に収集する。遠心を使用して培地（上清）から細胞を分離する。 zsig15ポリペプチドを含有する上清を、微小孔フィルター、通常0.45μｍの孔大きさのフィルターを通して濾過する。使用する手順は一般に入手可能な実験室のマニュアルに記載されている（King，L．A．およびPossee，R．D.，ibid ．；O'R eilly，D．R.，et al.，ibid ．；Richardson，C．D.，ibid.）。本明細書に記載する方法に従い、上清からのzsig15ポリペプチドの引き続く精製を実施する。酵母細胞を包含する真菌細胞を本発明において使用することもできる。これに関して特に興味ある酵母種は、サッカロミセス・セレビシエ（Sacc haromyces cerevisiae）、ピキア．パストリス(Pichia pastoris)、およびピキア・メタノリカ(Pichia metanolica)を包含する。外因的DNAでサッカロミセス・セレビシエ(S．cerevisiae)を形質転換し、それから組換えポリペプチドを生産する方法は、例えば、下記の特許文献に記載されている：Kawasaki，米国特許第 4,599,311号；Kawasaki et al.,米国特許第4,931,373号；Brake,米国特許第4,87 0,008号；Welch et al.，米国特許第5,037,743号；およびMurry et al.，米国特許第4,845,075号。選択マーカーにより決定された表現型、普通の薬剤耐性または特定の栄養（例えば、ロイシン）の非存在において増殖する能力により、形質転換された細胞を選択する。サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cere visiae)において使用するために好ましいベクター系は、Kawasaki et al．（米国特許第4,931,373号）により開示されているPOT １ベクター系であり、これによりグルコース含有培地中の増殖により形質転換細胞を選択することができる。酵母において使用するために適当なプロモーターおよびターミネーターは、解糖酵素遺伝子（例えば、Kawasaki，米国特許第4,599,311号；Ingsman et al.，米国特許第4,615,974号；およびBitter，米国特許第4,977,092号、参照）およびアルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子からのものを包含する。また、米国特許第4,99 0,446号；米国特許第5,063,154号；米国特許第5,139,936号および米国特許第4,6 61,454号、参照。ハンゼヌラ・ポリモルファ（Hansenula polymorpha）、シゾサッカラロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)、クルイベロマイセス・ラクチス（Kluyveromyces lactis）、クルイベロマイセス・フラギリス(Kluyver omyces frgilis)、ウスチラゴ・マイディス(Ustilago maydis)、ピキア・パストリス(Pichia pastoris) 、ピキア・メタノリカ(Pichia metanolica)、ピキア・グイレルモンディイ（Pic hia guillermondii）およびカンジダ・マルトサ(Candida maltosa)を包含する、他の酵母のための形質転換系はこの分野において知られている。例えば、Gleeso n et al.，J ．Gen．Microbiol．132：3459-3465，1986およびCregg,米国特許第4 ,882,279号を参照のこと。McKnight et al.,米国特許第4,935,349号の方法に従い、アスペルギルス(Aspergillus)細胞を利用することができる。アクレモニウム・クリソゲヌム（Acremonium chrysogenum）は、Sumino et al.,米国特許第5, 162,228号に開示されている。ニューロスポラ（Neurospora）を形質転換する方法は、Lambowitz,米国特許第4,486,533号に開示されている。組換えタンパク質の生産のための宿主としてピキア・メタノリカ（Pichia met anolica）を使用することは、WIPO公開WO97／17450号、WO97／17451号、WO98／0 2536号、およびWO98／02565号に開示されている。ピキア・メタノリカ(P．metan olica)の形質転換において使用するためのDNA分子は二本鎖、円形のプラスミドとして普通に製造され、これらは好ましくは形質転換の前に線状化される。ピキア・メタノリカ(P．metanolica)におけるタンパク質の生産のために、プラスミド中のプロモーターおよびターミネーターはピキア・メタノリカ(P．metanolica )の遺伝子、例えば、ピキア・メタノリカ(P．metanolica)のアルコール利用遺伝子(AUG１またはAUG２)のそれであることが好ましい。他の有用なプロモーターは、ジヒドロキシアセトンシンターゼ（DHAS）、ホルメートデヒドロゲナーゼ(FMD )、およびカタラーゼ(CAT)遺伝子のプロモーターを包含する。宿主染色体の中へのDNAの組込みを促進するために、宿主DNA配列により双方の末端においてフランクされたプラスミドの全体の発現セグメントを有することが好ましい。ピキア・メタノリカ(P ichia metanolica)において使用するために好ましい選択可能なマーカーはピキア・メタノリカ(P．metanolica)のADE２遺伝子であり、これはホスホリボシル− ５−アミノイミダゾールカルボキシラーゼ(AIRC;EC 4.1.1.21)であり、これはアデニンの非存在においてade ２宿主細胞を増殖させる。メタノールの使用を最小としようとする、大規模の工業的方法のために、双方のメタノール利用遺伝子(A UG１およびAUG２)が欠失されている、宿主細胞を使用することが好ましい。分泌されたタンパク質の生産のために、液胞プロテアーゼ遺伝子(PEP４およびPRB１) を欠如する宿主細胞は好ましい。問題のポリペプチドをコードするDNAを含有するプラスミドをピキア・メタノリカ(P．metanolica)細胞の中に導入することを促進するために、エレクトロポレーションを使用する。2.5〜4.5ｋＶ／ｃｍ、好ましくは約3.75ｋＶ／ｃｍの電界強度を有する、指数的に減衰する、パルス電界、および１〜４０ミリセカント、最も好ましくは約２０ミリセカントの時間定数（τ）を使用する、エレクトロポレーションにより、ピキア・メタノリカ(P．me tanolica)細胞を形質転換することが好ましい。細菌大腸菌（Escherichia coli）、バシラス（Bacillus）および他の属の株を包含する、原核宿主細胞は、また、本発明において有用である。これらの宿主を発現し、その中にクローニングされた外来DNA配列を発現する技術はこの分野においてよく知られている（例えば、Sambrook et al.，ibid.)。大腸菌(E．coli) のような細菌においてzsig15ポリペプチドを発現させるとき、ポリペプチドを、典型的には不溶性粒子として、細胞質の中に保持させることができるか、あるいは細菌の分泌配列によりペリプラスミック空間の中に向けることができる。前者の場合において、細胞を溶解し、粒子を回収し、例えば、グアニジンイソチオシアネートまたは尿素を使用して、変性する。次いで変性されたポリペプチドをリフォルディングさせ、変性物の希釈により、例えば、尿素の溶液および還元されたグルタチオンおよび酸化されたグルタチオンとの組合わせに対する透析、および引き続く緩衝化生理食塩水に対する透析により、二量体化させることができる。後者の場合において、細胞を崩壊させて（例えば、超音波処理または浸透圧ショックにより）ペリプラスミック空間の含量を解放し、これにより変性およびリフォルディングの必要性を排除することによって、ポリペプチドをペリプラスミック空間から可溶性の、機能的形態で回収することができる。形質転換またはトランスフェクトされた宿主細胞を、慣用手順に従い、栄養素および選択した宿主細胞の成長に必要な培地中で培養する。規定された培地および複合培地を包含する、種々の適当な培地は、この分野において知られており、そして一般に炭素源、窒素源、必須アミノ酸、ビタミンおよび無機質を含む。培地は、また、必要に応じて、成長因子のような成分を含有することができる。一般に、外因的に添加されたDNAを含有する細胞について成長培地を選択する。この選択は、例えば、薬剤選択または必須栄養素の欠如により実施され、必須栄養素は発現ベクター上に担体されるか、あるいは宿主細胞の中に共トランスフェクトされた選択可能なマーカーにより補足される。炭素、窒素および微量栄養素の適切な源を含む培地中で約２５℃〜３５℃の温度において、ピキア・メタノリカ(P．metanolica)細胞を培養する。慣用の手段、例えば、小さいフラスコの震盪または発酵槽のスパージにより、液体培地を十分にエアレーションする。ピキア・メタノリカ(P．metanolica)のために好ましい培地は、YEPD（２％のＤ−グルコース、２％のBacto^TMペプトン（Difco Labor atories、ミシガン州デトロイト）、１％のBacto^TM酵母エキス（ Difco Laboratories）、0.004％のアデニンおよび0.006％のＬ−ロイシン）である。 zsig15ポリペプチドまたはそれらのフラグメントは、また、化学的合成により製造することができる。zsig15ポリペプチドは、モノマーまたはマルチマーであることができ；グリコシル化または非グリコシル化することができ；ペギル化または非ペギル化することができ；そして初期のメチオニンアミノ酸残基を含まないことができる。本発明のポリペプチドは、発現するzsig15ポリペプチドのレベルの変化を測定するために有用である。zsig15の発現は特定の組織（すなわち、前立腺、結腸および乳房）および骨髄に制限されるので、発現レベルの変化を使用して、これらの組織内の代謝をモニターすることができる。例えば、zsig15のポリペプチドおよびポリヌクレオチドの発現および／または転写の増加は、腫瘍細胞の細胞増殖の増加を予言することができる。さらに、常態でzsig15を発現しない組織中のzs ig15の発現は、腫瘍細胞の転移を示すことができる。 zsig15は、ある種の上皮組織および癌腫において、特に結腸および乳房において、分別的に発現されることが証明された。分別的発現は、細胞または組織における成熟の進行の間に起こる、特定の遺伝子、タンパク質または他の表現型の性質（識別マーカーとして知られている）の一時的発現、またはその欠如である。１組の識別マーカーは、同定することができかつ特定の細胞型に対して特異的である、１またはそれ以上の表現型の性質として定義される。したがって、系統に付されていないで再生することができる、多能性幹細胞は、細胞系統に付されたとき失われる、１組の識別マーカーを発現する。前駆体細胞は、細胞が細胞の系統経路を通して成熟に向かうときに発現され続けることができるかあるいはできない１組の識別マーカーを発現する。成熟細胞によりもっぱら発現される識別マーカーは、通常、細胞の産物、細胞の産物を生成する酵素およびレセプターのような機能的性質である。 zsig15の発現を正常組織および腫瘍組織において識別マーカーとして使用して、細胞の腫瘍または成熟の段階を決定することができる。zsig15は上皮細胞および上皮由来の腫瘍、そして特に上皮結腸、乳房または前立腺組織からの細胞および上皮細胞由来腫瘍のマーカーとして特に価値がある。１組の識別マーカーは、同定することができかつ特定の細胞型に対して特異的である、１またはそれ以上の表現型の性質として定義される。識別マーカーは、細胞系統の種々の段階において一時的に表示される。系統に付されないで再生することができる多能性幹細胞は、細胞の系統に付されたとき失われる１組の識別マーカーを発現する。前駆体細胞は、細胞が細胞の系列経路を通して成熟に向かうとき、発現され続けることができるか、あるいはできない、１組の識別マーカーを発現する。成熟細胞によりもっぱら発現される識別マーカーは、通常、細胞の産物、細胞の産物を生成する酵素およびレセプターのような機能的性質である。本発明の分子の活性は、特定の細胞のタイプの増殖および／または分化、化学走性、接着性、イオンチャンネルの流入の変化、第２メッセンジャーの調節および神経伝達物質の解放を測定する種々のアッセイにより、測定することができる。このようなアッセイはこの分野においてよく知られている。例えば、”Basic & Clinical Endocrinology Ser.，Vol．Vol.3,”Cytochemical Bioassays ：Tech niques & Applications ，Chayen；Chayen，Bitensky編，Dekker，New York、198 3参照。増殖および分化は、培養した細胞を使用するか、あるいはin vit roにおいて請求の範囲に記載されている本発明の分子を適当な動物モデルに投与することによって、測定することができる。細胞の増殖または分化を測定するアッセイは、この分野においてよく知られている。例えば、増殖を測定するアッセイは、下記のようなアッセイを包含する：中性赤色色素の化学感受性（Cavanaug h et al.，Investigation New Drug ，8：347-354，1990、引用することによって本明細書の一部とされる）、放射能標識化ヌクレオチドの組込み（Cook et al. ，Analytical Biochem. ，179：1-7，1989、引用することによって本明細書の一部とされる）、増殖する細胞のDNA中の５−ブロモ−２’−デオキシウリジン(Br dU)の組込み（Porstmann et al.，J ．Immunol．Methods，82：169-179，1985、引用することによって本明細書の一部とされる）、およびテトラゾリウム塩の使用（Mosmann，J ．Immunol．Methods，65：55-63，1983；Alley et al.，Cancer Res. ，48 ：589-601，1988；Marshall et al.，Growth Reg. ，5：69-84，1995;およびScudiero et al.，Cancer Res. ，48：4827-4833，1988；すべては引用することによって本明細書の一部とされる）。分化を測定するアッセイは下記のアッセイを包含する：例えば、組織の段階特異的発現に関連する細胞表面のマーカー、酵素活性、機能的活性または形態学的変化の測定（Watt，FASEB ，5：281-284 ，1991；Francis，Differentiation ，57：63-75，1994；Raes，Adv ．Anim．Cell Biol．Technol．Bioprocesses， 161-171，1989；すべては引用することによって本明細書の一部とされる）。本発明のポリペプチドは、培養した細胞を使用するか、あるいはin vitroにおいて請求の範囲に記載されている本発明の分子を適当な動物モデルに投与することによって、測定することができる。例えば、BHKトランスフェクトされた発現宿主細胞をアルギネート環境の中に埋め込み、レシピエント動物に注入（移植）することができる。アルギネート−ポリ−Ｌ−リジンのマイクロカプセル化、透過選択的膜のカプセル封入および拡散チャンバーは、トランスフェクトされた哺乳動物細胞または一次哺乳動物細胞を捕捉する手段として記載されてきている。これらの型の非免疫原性「カプセル封入」または微小環境の中への栄養素の転移を可能とし、そしてまた、捕捉された細胞が分泌または解放するタンパク質および他の高分子が環境のバリヤーを横切ってレシピエント動物に拡散するのを可能とする。最も重要なことには、カプセルまたは微小環境は、外来の埋め込まれた細胞をレシピエント動物の免疫応答からマスクしかつ遮断する。このような微小環境は、注入された細胞の寿命を数時間または数日（裸の細胞）から数週（埋め込まれた細胞）に延長させることができる。アルギネートのスレッド(threads)は、埋め込まれた細胞を発生させるための簡単かつ迅速な手段を提供する。アルギネートのスレッドを発生させる材料は容易に入手可能であり、比較的安価である。アルギネートのスレッドは、いったん作られると、in vitroおよび、スレッドを使用して得られたデータに基づいて、 in vivoの双方において、比較的強く、耐久性がある。アルギネートのスレッドは操作が容易であり、そしてこの方法は多数のスレッドを製造するために調節可能である。典型的な手順において、３％のアルギネートを無菌のＨ₂Ｏ中で調製し、滅菌濾過する。アルギネートのスレッドの製造の直前に、アルギネート溶液を再び濾過する。ほぼ５０％の細胞懸濁液（約５×１０⁵〜約５×１０⁶細胞／ｍｌを含有する）を、３％のアルギネート溶液と混合する。１ｍｌのアルギネート／細胞懸濁液を約１５分かけて100ｍＭの滅菌濾過したCaCl₂溶液の中に押出し、「スレッド」を形成する。次いで押出されたスレッドを５０ｍＭのCaCl₂の溶液の中に移し、次いで２５ｍＭのCaCl₂の溶液の中に移す。次いでこのスレッドを脱イオン水ですすいだ後、スレッドを0.01％のポリ −Ｌ−リジンの溶液中のインキュベーションによりコーティングする。最後に、スレッドを乳酸加リンガー溶液ですすぎ、溶液から注射器のバレル（針を取付ける必要はない）の中に吸込む。次いで大きい孔の針を注射器に取付け、そしてスレッドを最小体積の乳酸加リンガー溶液中でレシピエントに腹腔内注射する。本発明のタンパク質をアッセイする別のin vivoアプローチは、ウイルス供給系を含む。この目的に典型的なウイルスは、アデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルスおよびアデノ関連ウイルス(AAV)を包含する。アデノウイルス、二本鎖DNAウイルスは、異種核酸供給のための、現在最もよく研究されている遺伝子転移ベクターである(総説については、下記の文献を参照のこと：T． C．Becker et al.，Meth ．Cell．Biol.，43：161-89，1994；並びにJ．T．Dougl asおよびD．T．Curiel，Science & Medicene ，4：44-51，1997)。アデノウイルスの系はいくつかの利点を提供する：アデノウイルスは（ｉ）比較的大きいDNA インサートを収容することができる；（ｉｉ）高い力価に増殖することができる；(iii)広い範囲の哺乳動物細胞の型を感染することができる；および（ｉｖ）多数の異なるプロモーターを含有する入手可能なベクターとともに使用することができる。また、アデノウイルスは血流中で安定であるので、静脈内注射により投与することができる。アデノウイルスのゲノムの一部分を欠失させることによって、異種DNAのより大きいインサート（７ｋｂまで）を収容させることができる。これらのインサートは、直接的結合によるか、あるいは共トランスフェクトされたプラスミドを使用する相同組換えにより、ウイルスDNAの中に組込むことができる。典型的な系において、ウイルスのベクターから必須Ｅ１遺伝子が欠失されてきており、そしてＥ１遺伝子が宿主細胞（ヒト293細胞系統は典型的である）により提供されないかぎり、ウイルスは複製しないであろう。アデノウイルスは、無傷の動物に静脈内投与されるとき、主として肝臓をターゲットする。アデノウイルスの送出し系がＥ１遺伝子の欠失を有する場合、ウイルスは宿主細胞中で複製することができない。しかしながら、宿主の組織（例えば、肝臓）は異種タンパク質を発現し、プロセスする（そして、分泌シグナル配列が存在する場合、分泌する）であろう。分泌されたタンパク質は高度に血管化された肝臓の中の循環の中に入り、そして感染した動物に対する作用を測定することができる。アデノウイルス系は、また、in vitroにおけるタンパク質の生産のために使用することができる。アデノウイルスが感染した非293細胞を、細胞が急速に分裂しない条件下に、培養することによって、細胞は延長した期間の間タンパク質を産生することができる。例えば、BHK細胞を細胞ファクトリー中でコンフルエンスに増殖させ、次いで問題の分泌されたタンパク質をコードするアデノウイルスのベクターに暴露させる。次いで細胞を無血清条件下に増殖させ、これにより、細胞を有意に分裂させずに、感染した細胞を数週間生存させることができる。また、アデノウイルスのベクターが感染した293S細胞を懸濁培養において比較的高い細胞密度に増殖させて、有意な量のタンパク質を生産することができる（Garn ier et al.，Cytotechnol. ，15：145-55，1994参照）。いずれのプロトコールを使用しても、分泌された異種タンパク質を細胞培養の上清から反復的に単離することができる。感染した293S細胞の生産のプロトコールにおいて、非分泌タンパク質を効果的に得ることもできる。分画および／または慣用の精製方法および培地を使用して、発現された組換え zsig15ポリペプチド（またはキメラzsig15ポリペプチド）を精製することができる。試料の分画のために、硫酸アンモニウム沈降および酸またはカオトロープ抽出を使用することができる。典型的な精製工程は、ヒドロキシアパタイト、サイズ排除クロマトグラフィー、FPLCおよび逆相高性能液体クロマトグラフィーを包含することができる。適当なクロマトグラフィーの媒質は、誘導化デキストラン、アガロース、セルロース、ポリアクリルアミド、特製のシリカ、およびその他を包含する。PEI、DEAE、QAEおよびＱ誘導体は好ましい。典型的なクロマトグラフィー媒質は、フェニル、ブチル、またはオクチル基で誘導化された媒質、例えば、フェニル−セファローズＦＦ(Pharmacia)、トヨパールブチル650（Toso Haa s、ペンシルベニア州モントゴメリヴィレ）、オクチル−セファローズ(Pharmaci a)およびその他；またはポリアクリル樹脂、例えば、Amberchrom CG 71(Toso Ha as)およびその他を包含する。適当な固体の支持体は、ガラスビーズ、シリカをベースとする樹脂、セルロース樹脂、アガロースビーズ、架橋アガロースビーズ、ポリスチレンビーズ、架橋ポリアクリルアミド樹脂、およびその他を包含し、これらはこれらを使用する条件下に不溶性である。これらの支持体は、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基および／または炭水化物部分によるタンパク質の結合を可能とする反応性基で修飾することができる。化学的カップリングの例は、臭化シアンの活性化、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドの活性化、エポキシドの活性化、スルフヒドリルの活性化、ヒドラジドの活性化、およびカーボジイミドの化学的カップリングのためのカルボキシルおよびアミノ誘導体を包含する。これらおよび他の固体の媒質はこの分野においてよく知られており、かつ広く使用されており、そして商業的供給会社から入手可能である。レセプターのポリペプチドを固体の媒質に結合する方法は、この分野においてよく知られている。特定の方法の選択は日常的設計事項であり、そして一部分選択した支持体の性質により決定される。例えば、Affinity Chromatography ：Principle & Methods，Pharmacia LKB Biotechnology、スイス国ウップサラ、1988、参照。本発明のポリペプチドは、特定の性質を利用することによって単離することができる。例えば、固定化金属イオン吸着（IMAC）クロマトグラフィーを使用して、ポリヒスチジン標識からなるものを包含する、ヒスチジンに富んだタンパク質を精製することができる。簡単に述べると、ゲルにまず２価の金属イオンを負荷してキレート化剤を形成する（Sulkowsiki，Trends in Biochem ．3：1-7，1985 ）。ヒスチジンに富んだタンパクは、使用する金属イオンに依存して、このマトリックスに異なるアフィニティーで吸着され、そして競合溶離、ｐＨの低下、または強いキレート化剤の使用により溶離されるであろう。他の精製法は、レクチンアフィニティークロマトグラフィーおよびイオン交換クロマトグラフィーによるグリコシル化製造の精製を包含する(Methods in Enzymol.，Vol．182,”Guide to Protein Purification”，M．Deutscher(編)，Academic Press,サンディエゴ，1990，pp.529-39)。本発明の追加の態様の範囲内において、問題のポリペプチドと親和標識（例えば、マルトース結合タンパク質、免疫グロブリンドメイン）との融合物を構築して、精製を促進することができる。この分野において記載されている方法により、本発明のzsig15の領域またはドメインを他の異種タンパク質のそれらと組み合わせてを使用して、ポリペプチドの融合物、またはハイブリッドzsig15タンパク質を構築する（Sambrook et al. ，ibid.；Altschul et al. ，ibid.，Picard，Cur ．Opin．Biology，5：511-5、1994、およびその中の参考文献）。これらの方法は、問題のポリペプチド中のより大きいドメインまたは領域の生物学的重要性の決定を可能とする。このようなハイブリッドは、反応速度論、結合を変更し、基質の特異的を拘束または拡張するか、あるいはポリペプチドの組織および細胞の局在化を変更することができ、そして未知の構造のポリペプチドに適用することができる。この分野において知られている方法により、融合タンパク質の各成分を製造し、それらを複合化することによって、融合タンパク質を製造することができる。また、適切なリーディングフレームにおいて融合タンパク質の双方の成分をコードするポリヌクレオチドを既知の技術により発生させ、本明細書において記載する方法により発現させることができる。例えば、生物学的機能を与える１またはそれ以上のドメインの一部分またはすべてを、本発明のzsig15の間で、他のファミリーのメンバーからの機能的に同等の１またはそれ以上のドメインと交換することができる。このようなドメインは、分泌シグナル配列および保存されたモチーフを包含するが、これらに限定されない。このような融合タンパク質は、構築された融合物に依存して、本発明または他のファミリーのポリペプチドと同一であるか、あるいはそれに類似する、生物学的機能的プロフィルを有することが期待されるであろう。そのうえ、このような融合タンパク質は、本明細書において開示するように、他の性質を示すことができる。本発明の分子の遺伝子は、染色体の位置19Q13.1−13.2にマッピングされた。この染色体の位置は、多数の遺伝子のクラスターにより区別され、これらの遺伝子は、高度にレベルで発現されるとき、癌腫に関係づけられる。カリクレイン／前立腺特異的抗原(PSA)は染色体19Q13.12−13.4に局在化され、そして前立腺癌において過度に発現されることが示された(Winderickx et al.，Mol ．Cell．Endocrinol.，62：217-226，1 989)。PSAは３３kDaの一本鎖の糖タンパク質である。染色体19Q13.1−13.3に局在化される遺伝子の他のクラスターは、妊娠特異的ベータ糖タンパク質のファミリー(PSBGs)である。PSBGsは妊娠、胞状奇胎および絨毛膜癌の診断に使用されてきている（McLenachan et al.，Genomics ，22：356-363，1994）。PSBGsは免疫グロブリンの糖のファミリーのメンバーであり、そしてこのクラスターの中に見出される他の遺伝子のファミリー、癌胎児性抗原(CEA)に関係づけられる。CEA遺伝子のファミリーは染色体１９の長いアーム上に位置し、そして結腸直腸、胃および膵臓の癌のマーカーとして同定された（Hodge，Cancer Imunol ．Immunother ．43 :127-143，1996）。こうして、本発明の遺伝子は、種々の癌の診断において重要であると考えられる、染色体の位置のそれ以上の解明のための追加の道具を提供する。さらに、zsig15の遺伝子が突然変異され、したがって、疾患の遺伝された形態を示すかどうかを同定するために、ファミリーの研究を実施することができる。遺伝子の突然変異は、当業者によく知られている方法により同定することができる。例えば、核酸（すなわち、ゲノムのDNA、cDNAまたはmRNA）を組織の試料または生物学的流体から抽出し、そして本発明の核酸に対して相補的なPCRプライマーを使用するPCRにより分析する。分析は、挿入、欠失および置換の同定を包含し、ここで挿入、欠失および置換は、例えば、ゲル電気泳動に付すときの移動度が異なることがあるか、あるいはRNA−DNA異種二重らせんの単一の塩基のミスマッチにおいてリボヌクレアーゼにより切断することができる(Meyers et al.，Science ，230 ：1242-1246，1985)。 zsig15ポリペプチドはまた、zsig15のエピトープ、ペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合する抗体を製造するために使用することができる。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を製造する方法は、この分野においてよく知られている。 zsig15について観測される組織の分布にかんがみて、アゴニスト（天然のリガンド／基質／コファクター／およびその他を包含する）およびアンタゴニストは in vitroおよびin vivoの双方の用途において可能性を有する。例えば、zsig15 およびアゴニスト化合物は規定された細胞培地の成分として有用であり、そして単独で、あるいは他のサイトカインおよびホルモンと組み合わせて使用して、細胞培養において普通に使用されている血清を置換することができる。こうして、アゴニストは上皮細胞、特に結腸または乳房の組織由来の上皮細胞の増殖および／または発生を特異的に促進するとき有用である。アンタゴニストは、また、リガンド−レセプターの相互作用の部位を特性決定するための研究試薬として有用である。zsig15活性のインヒビター（zsig15のアンタゴニスト）は、抗zsig15抗体および可溶性zsig15レセプター、ならびに他のペプチドおよび非ペプチドの因子（リボザイムを包含する）を包含する。 zsig15はまた、その活性のインヒビター（アンタゴニスト）を同定するために使用することができる。被験化合物を本明細書において開示するアッセイに添加して、zsig15の活性を阻害する化合物を同定する。本明細書において開示するアッセイに加えて、レセプターの結合またはzsig15依存性細胞の応答の刺激／阻害を測定するように設計された、種々のアッセイにおいて、試料をzsig15活性の阻害について試験することができる。例えば、zsig15刺激された細胞の経路に対して応答性であるリポーター遺伝子構築物で、zsig15応答性細胞系統を形質転換することができる。この型のリポーター遺伝子構築物はこの分野において知られており、そして一般にアッセイ可能なタンパク質、例えば、ルシフェラーゼをコードする遺伝子に作用可能に連鎖された、zsig15−DNA 応答因子からなるであろう。DNA応答因子は下記のものを包含するが、これらに限定されない：環状AMP応答因子(CRE)、ホルモン応答因子(HRE)、インスリン応答因子(IRE)(Nasrin et al.，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA，87：5273-7，1990) および血清応答因子(SRE)(Shaw et al.，Cell ，56：563-72，1989)。環状AMP応答因子は、Roester et al.，J ．Biol．Chem．263（19）：9063-6，1988およびHa bener，Molec ．Endocrinol．4（8）：1078-94，1990において概観されている。ホルモン応答因子は、Beato，Cell 56：335-44，1989、において概観されている。リポーター遺伝子の発現のzsig15刺激の減少により証明されるように、標的細胞に対するzsig15活性を阻害する能力について、候補の化合物、溶液、混合物または抽出物を試験する。この型のアッセイは、細胞表面のレセプターに対するzs ig15の結合を直接ブロックする化合物、ならびにレセプター−リガンドの結合に引き続く細胞の経路におけるプロセスをブロックする化合物を検出するであろう。別の方法において、検出可能な標識（例えば、¹²⁵Ｉ、ビオチン、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、FITC、およびその他）で標識化されたzsig15を使用して、化合物または他の試料をレセプターに対するzsig15の結合のブロッキングについて試験することができる。このタイプのアッセイにおいて、レセプターに対する標識化zsig15の結合を阻害する被験試料の能力は阻害活性を示し、これは二次的アッセイにより確証することができる。結合アッセイにおいて使用するレセプターは、環状レセプターまたは単離され、固定化されたレセプターであることができる。 zsig15ポリペプチド、またはその一部分は、２つの定常領域のドメインを含有しかつ可変領域を欠如する、免疫グロブリンの重鎖の定常領域、典型的にはＦｃフラグメントとの融合物として発現させることができる。このような融合物を製造する方法は、米国特許第5,155,027号および米国特許第5,567,584号に開示されている。このような融合物は典型的にはマルチマー分子として分泌され、ここでＦｃ部分は互いにジサルファイド結合しており、そして２つの非Ｉｇポリペプチドは互いに密接に近接して配列されている。この型の融合物を、in vitroアッセイ道具、またはアンタゴニストとして、リガンドのアフィニティー精製のために使用することができる。アッセイにおいて使用するために、キメラを支持体にＦｃ領域を介して結合させ、ELISAフォーマットにおいて使用する。 zsig15リガンド結合性ポリペプチドを、リガンドの精製に使用することもできる。ポリペプチドを、使用条件下に安定である、固体の支持体、例えば、アガロース、架橋アガロー、ガラス、セルロース樹脂、シリカをベースとする樹脂、ポリスチレン、架橋ポリアクリルアミド樹脂、およびその他の材料のビーズ上に固定化する。固体の支持体にポリペプチドを結合する方法は、この分野において知られており、そしてアミン化学、臭化シアンの活性化、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドの活性化、エポキシドの活性化、スルフヒドリルの活性化およびヒドラジドの活性化を包含する。得られる媒質は一般にカラムの形態に形造られ、そしてリガンドを含有する流体をカラムに１回またはそれ以上の回数通過させて、リガンドをレセプターのポリペプチドに結合させる。次いで塩濃度の変化、カオトロープ剤(グアニジンHCl)、またはリガンド−レセプターの結合を崩壊させるｐＨを使用して、リガンドを溶離する。リガンド結合性レセプター（または抗体、相補体／抗相補体の対の一方のメンバー）またはその結合性フラグメント、および商業的に入手可能なバイオセンサー計器（BIAcore，Pharmacia Biosensor、ニュージャージイ州ピスカタウェイ）を使用してアッセイシステムを好都合に使用することができる。このようなレセプター、抗体、相補体／抗相補体の対のメンバーまたはフラグメントをレセプターのチップの表面上に固定化する。このフラグメントの使用は、Ka rlsson，J ．Immunol．Methods 145：229-40，1991、およびCunninghamおよびWel ls，J ．Mol．Biol．234：554-63，1993に開示されている。レセプター、抗体、メンバーまたはフラグメントを、アミンまたはスルフヒドリルの化学を使用して、フローセル内の金薄膜に結合させたデキストラン繊維に共有結合させる。被験試料をセルに通過させる。リガンド、エピトープ、または相補体／抗相補体の反対のメンバーが試料の中に存在する場合、それは、それぞれ、固定化されたレセプター、抗体またはメンバーに結合し、媒質の屈折率を変化させ、これは金薄膜の表面のプラズモンの共鳴の変化として検出される。このシステムは、オンおよびオフの割合の測定（これから結合アフィニティーを計算することができる）および結合の化学量論的評価を可能とする。リガンド結合性レセプターのポリペプチドをまた、この分野において知られている他のアッセイシステムにおいて使用することができる。このようなシステムは、結合アフィニティーを測定するスキャッチャード分析（Scatchard，Ann ．NY Acad．Sci．51 ：660-72，1949、参照）および比色アッセイ（Cunningham et al .，Science 253：545-48，1991；Cunningham et al.，Science 245：821-25，19 91参照）。 zsig15ポリペプチドを使用して、zsig15のエピトープ、ペプチドまたはポリペプチドに特異的に結合する抗体を製造することもできる。zsig15ポリペプチドまたはそのフラグメントは、動物に接種し、免疫応答を引き出すための抗原（免疫原）として働く。この免疫応答から発生する抗体を本明細書において記載するように単離し、精製することができる。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を製造し、単離する方法は、この分野においてよく知られている。例えば、下記の文献を参照のこと：Current Protocols in Imu nology ，Cooligan，et al.（編），National Institutes of Health，John Wile y & Sons，Inc.，1995；Sambrook et al.，Molecular Cloning ：A Laboratory M anual ,第２版、Cold Spring Harbor，NY，1989；およびHurrel，J．G．R.編、Mo noclonal Hybridoma Antibodies ：Techniques and Applications ，CRC Press，I nc.，フロリダ州ボカレイトン，1982。当業者にとって容易に明らかなように、種々の温血動物、例えば、ウマ、雌牛、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ニワトリ、ウサギ、マウス、およびラットにzsig15ポリペプチドまたはそのフラグメントを接種することによって、ポリクローナル抗体を発生させることができる。アジュバント、例えば、明礬（水酸化アルミニウム）またはフロインド完全アジュバントまたはフロインド不完全アジュバントを使用して、zsig15ポリペプチドの免疫原性を増加させることができる。免疫化に有用なポリペプチドは、また、融合ポリペプチド、例えば、zsig15またはその一部分と免疫グロブリンポリペプチドまたはマルトース結合性タンパク質との融合物を包含する。ポリペプチドの免疫原は全長の分子またはその一部分であることができる。ポリペプチドの一部分が「ハプテン様」である場合、このような一部分は好都合には免疫化のために高分子の担体（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン(KLH)、ウシ血清アルブミン(BSA)または破傷風トキソイド）に結合させることができる。本明細書において使用するとき、用語「抗体」はポリクローナル抗体、アフィニティー精製されたポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、および抗原結合性フラグメント、例えば、F(ab')₂およびFab'タンパク質分解フラグメントを包含する。遺伝子操作された無傷の抗体またはフラグメント、例えば、キメラ抗体、Ｆｖフラグメント、一本鎖抗体およびその他、ならびに合成抗原結合性ペプチドおよびポリペプチドもまた包含される。非ヒトCDRをヒトフレームワークおよび定常領域の上にグラフト化するか、あるいは全体の非ヒト可変ドメインを組込む（必要に応じて暴露した残基を置換することによって、前記ドメインをヒト様表面で「クローキング（cloaking）」する、ここで「ベニヤ化された」抗体が生ずる）ことによって、非ヒト抗体をヒト化することができる。いくつかの例において、ヒト化抗体はヒト可変領域のフレームワーク内に非ヒト残基を保持して、適切な結合特性を増強することができる。抗体をヒト化することによって、生物学的半減期を増加することができ、そしてヒトへの投与のときの悪い免疫反応の可能性が減少する。本発明において有用な抗体を発生させるか、あるいは選択する別の技術は、zs ig15タンパク質またはペプチドに対するリンパ球のin vitro暴露、およびファージまたは同様なベクター中の抗体ディスプレイライブラリーの選択（例えば、固定化または標識化されたzsig15タンパク質またはペプチドの使用による）を包含する。ファージ上にディスプレイされた（ファージディスプレイ）、あるいは細菌、例えば大腸菌(E．coli)上にディスプレイされた、ランダムペプチドライブラリーをスクリーニングすることによって、潜在的zsig15ポリペプチド結合性ドメインを有するポリペプチドをコードする遺伝子を得ることができる。ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、多数の方法、例えば、ランダム突然変異誘発およびランダムポリヌクレオチド合成により、得ることができる。これらのランダムペプチドディスプレイライブラリーを使用して、ペプチドまたはポリペプチドであることができる既知の標的、例えば、リガンドまたはレセプター、生物学的または合成の高分子、または有機または無機の物質と相互作用するペプチドをスクリーニングすることができる。このようなランダムペプチドディスプレイライブラリーをつくり、スクリーニングする技術はこの分野において知られており（Ladner et al.,米国特許第5,223,409号；Ladner et al.,米国特許第4,946,778号；Ladn er et al.,米国特許第5,403,484号；およびLadner et al.,米国特許第5,571,698 号）そしてランダムペプチドディスプレイライブラリーおよびこのようなライブラリーをスクリーニングするキットは、例えば、クロンテク(Clontech)(カリフォルニア州パロアルト)、インビトロゲン・インコーポレーテッド(Invitrogen I nc.)(カリフォルニア州サンディエゴ)、ニュー・イングランド・バイラブズ・インコーポレーテッド(New England Biolabs Inc.)(マサチュセッツ州ベバーリイ) およびファーマシア(Pharmacia LKB Biotechnology Inc.)(ニュージャージイ州ピスカタウェイ)から商業的に入手可能である。本明細書に開示するzsig15配列を使用して、ランダムペプチドディスプレイライブラリーをスクリーニングして、zsig15に結合するタンパク質を同定することができる。これらの「結合性タンパク質」は、zsig15ポリペプチドと相互作用し、細胞の標識化、アフィニティー精製による相同体ポリペプチドの単離に使用することができ；それらを直接的または間接的に薬剤、トキシン、放射性核種およびその他に結合させることができる。これらの結合性タンパク質は、また、分析方法において、例えば、発現ライブラリーのスクリーニングおよび活性の中和に使用することができる。また、結合性タンパク質は、組織中のポリペプチドの循環レベルを測定し、そして根元的な病理学または疾患のマーカーとしてポリペプチドを検出または定量する診断アッセイに使用することができる。これらの結合性タンパク質は、また、zsig15「アンタゴニスト」として作用して、in vitroおよびin vivoにおいてzsig15の結合およびシグナルトランスダクションをブロックすることができる。抗体は、１）それらが限界のレベルの結合活性を示す場合、および／または２）それらが関係するポリペプチド分子と有意に交差反応しない場合、特異的に結合すると決定される。第１に、本発明における抗体がzsig15ポリペプチド、ペプチドまたはエピトープと、１０⁶Ｍ^-1またはそれより大きい、好ましくは１０⁷Ｍ^-1 またはそれより大きい、より好ましくは１０⁸Ｍ^-1またはそれより大きい、最も好ましくは１０⁹Ｍ^-1またはそれより大きい、結合アフィニティー（Ｋａ）で結合する場合、特異的に結合する。抗体の結合アフィニティーは、当業者により、例えば、スキャッチャード分析(Scatchard，G.，Ann ．NY Acad.Sci．51：660- 672，1949)により容易に測定することができる。第２に、抗体が関係するポリペプチドと有意に交差反応しない場合、抗体は特異的に結合すると決定される。例えば、標準的ウェスタンブロット分析を使用して、抗体がzsig15を検出するが、既知の関係するポリペプチドを検出しない場合、抗体は関係するポリペプチド分子と有意に交差反応しない（Ausubelet al.，i bid. ）。既知の関係するポリペプチドの例は、オーソログ、タンパク質のファミリーのメンバー（例えば、ＩＬ−１６）である同一種からのタンパク質、zsig15 ポリペプチド、および非ヒトzsig15である。そのうえ、抗体を既知の関係するポリペプチド「に対してスクリーニング」して、本発明のポリペプチドに特異的に結合する集団を単離することができる。例えば、zsig15に対して発生させた抗体は不溶性マトリックスに付着した関係するポリペプチドに吸着される；zsig15に対して特異的な抗体は適切な緩衝条件下にマトリックスを通して流れるであろう。このようなスクリーニングは、密接に関係するポリペプチドに対して非交差反応性のポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の単離を可能とする（Antibodies ：A Laboratory Man ual ，HarlowおよびLane（編），Cold Spring Harbor Laboratory Press，1988；Current Protocols in Imunology ，Cooligan，et al.，（編）、National Insti tutes of Health，John Wiley & Sons，Inc.，1995）。特異的抗体のスクリーニングおよび単離は、この分野においてよく知られている。下記の文献を参照のこと：Fundamental Immunology，Paul（編），Raven Press，1993；Getzoff et al .，Adv ．in Immunol.，43：1-98，1988；Monoclonal Antibodies ：Principle an d Practice ，Goding，J．W.(編)，Academic Press Ltd.，1996；Benjamin et al .，Ann ．Rev．Immunol．2：67-101，1984。この分野において知られている種々のアッセイを利用して、zsig15タンパク質またはペプチドに特異的に結合する抗体を検出し、精製することができる。典型的なアッセイは、Antibodies ：A Laboratory Manual，HarlowおよびLane(編)，C old Spring Harbor Laboratory Press，1988に詳細に記載されている。このようなアッセイの代表的な例は下記のものを包含する：並流免疫電気泳動、ラジオイムノアッセイ、放射線免疫沈降、酵素結合イムノアッセイ(ELISA)、ドットブロットまたはウェスタンブロットアッセイ、阻害または競合アッセイ、およびサンドイッチアッセイ。さらに、抗体を野生型／突然変異のzsig15ポリペプチドに対する結合についてスクリーニングすることができる。 zsig15を発現する細胞の標識化；アフィニティー精製によるzsig15の単離；zs ig15ポリペプチドの循環レベルを測定する診断アッセイ；根元的な病理学または疾患のマーカーとしてのzsig15タンパク質の検出または定量；FACSを使用する分析方法；発現ライブラリーのスクリーニング；抗イディオタイプ抗体の発生；のために、そして中和性抗体；またはin vitroおよびin vivoにおいてzsig15触媒活性をブロックするアンタゴニスト；として、zsig15に対する抗体を使用することができる。適当な直接的標識は下記のものを包含する：放射性核種、酵素、基質、コファクター、インヒビター、蛍光マーカー、化学発光マーカー、磁気粒子およびその他；間接的標識は、中間体としてビオチン−アビジンまたは他の補体／抗補体の対の使用を特徴とすることができる。本発明における抗体は、また、薬剤、トキシン、放射性核種およびその他と直接的または間接的に複合化することができ、そしてこれらの複合体はin vivoの診断または療法の用途において使用することができる。そのうえ、zsig15またはそのフラグメントに対する抗体を in vitroにおいて使用して、アッセイ、例えば、ウェスタンブロットアッセイまたはこの分野において知られている他のアッセイにおいて、変性されたzsig15またはそのフラグメントを検出することができる。本発明における抗体またはポリペプチドはまた、他の部分、例えば、薬剤、トキシン、放射性核種およびその他と直接的または間接的に複合化することができ、そしてこれらの複合体はin vivoの診断または療法の用途において使用することができる。例えば、本発明のポリペプチドまたは抗体を使用して、対応する抗相補的分子（例えば、それぞれ、レセプターまたは抗原）を発現する組織または器官を同定または治療することができる。さらに詳しくは、zsig15ポリペプチドまたは抗zsig15抗体、またはそれらの生物活性フラグメントまたは部分を検出可能なまたは細胞障害性分子にカップリングさせ、そして抗相補的分子を発現する細胞、組織または器官を有する哺乳動物に送出すことができる。適当な検出可能な部分をポリペプチドまたは抗体に直接的または間接的に結合させることができ、そしてこのような部分は放射性核種、酵素、基質、コファクター、インヒビター、蛍光マーカー、化学発光マーカー、磁気粒子、およびその他を包含する。適当な細胞障害分子をポリペプチドまたは抗体に直接的または間接的に結合させることができ、そしてこのような分子は細菌または植物のトキシン（例えば、ジフテリアのトキシン、シュードモナス・エキソトキシン（Pseudo monas exotoxin）、リシン、アブリンおよびその他）、ならびに治療用放射性核種、例えば、ヨウ素−131、レニウム−188またはイットリウム−９０（ポリペプチドまたは抗体に直接的に結合されているか、あるいは、例えば、キレート化部分の手段により間接的に結合されている）を包含する。また、ポリペプチドまたは抗体を細胞障害性薬剤、例えば、アドリアマイシンに結合させることができる。検出可能なまたは細胞障害性分子の間接的結合のために、検出可能なまたは細胞障害性分子を相補体／抗相補体の対の１メンバーに結合することができ、ここで他方のメンバーをポリペプチドまたは抗体の部分に結合させる。これらの目的に対して、ビオチン／ストレプトアビジンは典型的な相補体／抗相補体の対である。他の態様において、ポリペプチド−トキシン融合タンパク質または抗体−トキシン融合タンパク質を、ターゲッテッド細胞または組織の阻害または切除のために（例えば、癌細胞または組織を処置するために）使用することができる。また、ポリペプチドは多数の機能的ドメイン（例えば、活性化ドメインまたはリガンド結合性ドメイン、＋ターゲッティングドメイン）を有する場合、ターゲッティングドメインのみを含む融合タンパク質は、検出可能な分子、細胞障害性分子または相補的分子を問題の細胞または組織の型に向けるために適当であろう。そのドメインのみの融合タンパク質が相補的分子を含む場合、抗相補的分子を検出可能なまたは細胞障害性分子に結合させることができる。したがって、このようなドメイン−相補的分子の融合タンパク質は、遺伝的抗相補的−検出可能な／細胞障害性分子の複合体の細胞／組織特異的送達のための、遺伝的ターゲッティングビヒクルを表す。他の態様において、zsig15−サイトカインの融合タンパク質または抗体−サイトカインの融合タンパク質は、zsig15ポリペプチドまたは抗zsig15抗体が超増殖性細胞をターゲットする場合、標的組織（例えば、血液、結腸、乳房および骨髄の癌）のin vivo死滅を増強するために使用することができる（一般に、Hornick et al.，Blood 89：4437-47，1977参照）。記載されている融合タンパク質は、サイトカインを所望の作用部位にターゲッティングし、これによりサイトカインの局所濃度を増加させることができる。適当なzsig15ポリペプチドまたは抗zsig 15抗体は、望ましくない細胞または組織（例えば、腫瘍または白血病）をターゲットし、そして仲介された融合サイトカインはエフェクター細胞による標的細胞の溶解を改良する。この目的に適当なサイトカインは、例えば、インターロイキン−２および顆粒球−マクロファージのコロニー刺激因子(ＧＭ−CSF)を包含する。本明細書において記載する生物活性ポリペプチドまたは抗体の複合体は、静脈内、動脈内または導管内に送出すか、あるいは意図する作用部位において局所的に導入することができる。本発明の分子は、癌転移に関係するレセプターを同定し、単離することができるために、使用することができる。例えば、本発明のタンパク質およびペプチドをカラム上に固定化し、そして膜調製物をカラムの上に展開させることができる(Immobilized Affinity Ligand Techniques，Hermanson et al.編、Academic Press、カリフォルニア州サンディエゴ，1992，pp．195-202)。タンパク質およびペプチドをまた、放射能標識化する(Methods in Enzymol. ，vol．1 82，”Guide to Protein Purification”，M．Deutcsher編，Academic Press、カリフォルニア州サンディエゴ、1990，721-737)か、あるいはフォトアフィニティー標識化し（Brunner et al.，Ann ．Rev．Biochem．62：483-514，1993および Fedan et al.，Biochem ．Pharmacol．33：1167-1180，1984）そして特異的細胞表面のタンパク質を同定することができる。本発明のポリペプチド、核酸および／または抗体を、前立腺、結腸または乳房の癌に関連する疾患の治療において使用することができる。本発明の分子を使用して、病理的症状をモジュレートするか、あるいは治療または予防することができる、特に、このような診断、治療または予防を、ある種の癌、炎症および過形成性疾患に適用することができる。 zsig15ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、zsig15活性を増加させるか、あるいは阻害する遺伝子治療において有用である。哺乳動物が突然変異したzsig15遺伝子をもつか、あるいは前記遺伝子をもたない場合、zsig15遺伝子を哺乳動物の細胞の中に導入することができる。１つの態様において、zsig15ポリペプチドをコードする遺伝子をin vivoにおいてウイルスのベクターの中に導入する。このようなベクターは、弱毒化または欠陥DNAウイルス、例えば、単純ヘルペスウイルス(HSV)、肺炎ウイルス、ＥＢウイルス(EBV)、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス(AAV)、およびその他を包含するが、これらに限定されない。欠陥ウイルスは、ウイルス遺伝子を完全にまたはほとんど完全に欠如し、このようなウイルスは好ましい。欠陥ウイルスは、細胞の中に導入された後、感染性ではない。欠陥ウイルスのベクターを使用すると、ベクターが他の細胞を感染することができるということことを無視して、特定の局在化区域における細胞への投与が可能となる。特定のベクターの例は下記のものを包含するが、これらに限定されない：欠陥単純ヘルペスウイルス１(HSV１)のベクター(Kaplitt et al.，Molec ．Cell．Neurosci．2：320-30，19 91)；弱毒化アデノウイルス、例えば、Stratford-Perricaudet et al.，J ．Clin ．Invest．90 ：626-30，1992、に記載されているベクター；および欠陥アデノ関連ウイルスのベクター(Samulski et al.，J ．Virol．61：3096-101，1987；Samu lski et al.，J ．Virol．63：3822-8，1989)。他の態様において、zsig15遺伝子を、例えば、下記の文献に記載されているように、レトロウイルスのベクターの中に導入することができる：Anderson et al .,米国特許第5,399,346号；Mann et al.，Cell 33：153，1983；Temin et al., 米国特許第4,650,764号；Temin et al.，米国特許第4,980,289号；Markwoitz et al.，J ．Virol．62：1120，1988；Temin et al.,米国特許第5,124,263号；Doug herty et al.，国際特許公開Ｎｏ．WO95／07358号、公開1995年３月１６日；およびKuo et al.，Blood 82：845，1993。あるいは、ベクターはリポソームを使用するin vivoにおけるリポフェクションにより導入することができる。合成カチオン性脂質を使用して、マーカーをコードする遺伝子バンクのin vivoトランスフェクションのためのリポソームを調製する(Felgner et al.，Proc ．Natl．A cad．Sci．USA 84：7413-7，1987；Mackey et al.，Proc ．Natl．Acad．Sci．US A 85：8027-31，1988)。外因的遺伝子を特定の器官の中にin vivoにおいて導入するリポフェクションを使用すると、ある種の実際的利点が得られる。特定の細胞に対するリポソームの分子のターゲッティングは、１つの範囲の利益を表す。さらに詳しくは、トランスフェクションを特定の細胞に向けることは、１つの範囲の利益を表す。例えば、特定の細胞の型にトランスフェクションを向けることは、細胞の異種性を有する組織、例えば、膵臓、肝臓、腎臓、および脳において特に好都合である。脂質をターゲッティングの目的で他の分子に化学的にカップリングさせることができる。ターゲッテッドペプチド（例えば、ホルモンまたは神経伝達物質）、タンパク質、例えば、抗体、または非ペプチド分子をリポソームの化学的にカップリングすることができる。標的細胞を体から取出し、裸のDNAプラスミドとしてベクターを導入し、次いで形質転換された細胞を体の中に再移植することができる。遺伝子治療のための裸のDNAベクターを、この分野において知られている方法、例えば、トランスフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、トランスダクション、細胞融合、DEAEデキストリン、リン酸カルシウム沈澱法、遺伝子ガンの使用またはDNAベクターのトランスポーターの使用により、所望の宿主細胞の中に導入することができる。例えば、下記の文献を参照のこと：Wu et al.，J ． Biol．Chem．267 ：963-7，1992；Wu et al.，J ．Biol．Chem．263：14621-4，19 88。アンチセンスの方法を使用して、zsig15遺伝子の転写を阻害すること、例えば、in vivoにおいて細胞の増殖を阻害することができる。zsig15をコードするポリヌクレオチド（例えば、配列番号：１に記載するポリヌクレオチド）のセグメントに対して相補的であるポリヌクレオチドを設計して、zsig15をコードするmR NAに結合させ、かつこのようなmRNAの翻訳を阻害する。細胞培養において、または被検者において、このようなアンチセンスのポリヌクレオチドを使用して、zs ig15ポリペプチドをコードする遺伝子の発現を阻害する。本発明は、また、診断用途において使用する試薬を提供する。例えば、zsig15 遺伝子、zsig15 DNAまたはRNAからなるプローブ、またはそれらのサブ配列を使用して、zsig15遺伝子が染色体１９上に存在するかどうか、あるいは突然変異が起こったかどうかを決定することができる。zsig15遺伝子座における検出可能な染色体の異常は、異数性、遺伝子コピー数の変化、挿入、欠失、制限部位の変化および再配列を包含するが、これらに限定されない。このような異常は、分子遺伝的技術、例えば、制限フラグメントの長さの多形性（RFLP）分析、PCR技術を用いる短い直列反復(STR)分析、およびこの分野において知られている他の遺伝的連鎖分析技術(Sambrook et al.，ibid ．；Ausubel，et al.，ibid ．；Marian ，Chest 108：255-265，1995)を使用することによって、検出することができる。 zsig15遺伝子を発現するように操作された、トランスジェニックマウス、およびzsig15遺伝子機能の完全な非存在を示すマウス、「ノックアウトマウス」と呼ぶ(Snouwaert et al.，Science ，257：1083，1992)を発生させることもできる（ Lowell et al.，Nature 366：740-42，1993）。これらのマウスを使用して、in vivo系においてzsig15遺伝子およびそれによりコードされるタンパク質を研究することができる。放射性ハイブリッドマッピングは、哺乳動物の染色体の高い分解能の、隣接する地図を構築するために開発された、幹細胞の遺伝的技術である（Cox et al.，Science 250：245-50，1990）。遺伝子の配列の部分的または完全な知識は、染色体の放射性ハイブリッドマッピングパネルとともに使用するために適当なPCRプライマーの設計を可能とする。全体のヒトゲノムをカバーする、放射性ハイブリッドマッピングパネル、例えばStanford G3 PanelおよびGeneBridge 4 RH Panelは商業的に入手可能である（Research Genetics，Inc.,アラバマ州ハンツヴィレ）。これらのパネルは、急速な、PCRをベースとする染色体の局在化および遺伝子、配列標識化部位（STS s）、および問題の領域内の他の非多形性および多形性マーカーの順序決定を可能とする。これは、問題の新しく発見された遺伝子と前にマッピングされたマーカーとの間の、直接的に比例する物理的距離の確立を包含する。遺伝子の位置の正確な知識は、下記の目的を包含する、多数の目的に有用である：１）配列が存在するcontigの一部分であるかどうかを決定し、そして追加の取り囲む遺伝的配列を種々の形態、例えば、YACs、BACsまたはcDNAクローンで得ること；２）同一染色体領域に対する連鎖を示す、遺伝性疾患の可能な候補の遺伝子を準備すること；および３）特定の遺伝子がどんな機能を有することができるかの決定を促進することができる、交差参照モデルの生物、例えば、マウス。配列標識化部位（STSs）を、また、染色体の局在化に独立に使用することができる。STSは、ヒトゲノムにおいてユニークであり、そして特定の染色体または染色体の領域のための参照点として使用することができる、DNA配列である。STS は１対のオリゴヌクレオチドのプライマーにより規定され、これらのプライマーは、ポリメラーゼ連鎖反応において、すべての他のゲノム配列の存在下にこの部位を特異的に検出するために使用される。STSsはDNA配列のみをベースとするので、それらは電子データベース、例えば、配列標識化部位のデータベース（Data base of Sequence Tagged Sites）(dbSTS)，GenBank（National Center for Bio logical Information，N ational Institutes of Health、マリイランド州ベセスダ、http：//www．ncbi ．nlm．nih．gov）内に完全に記載されることができ、そして問題の遺伝子配列を使用して、これらの短いゲノムのランドマークSTS配列内に含有されるマッピングデータについて、検索することができる。薬学的に使用するために、本発明のタンパク質は、慣用法に従い、非経口的、特に静脈内または皮下の送出のために処方される。静脈内投与は、１〜数時間の典型的な期間にわたる、ボーラス注射または注入によるであろう。一般に、医薬処方物はzsig15タンパク質と、薬学上許容されるビヒクル、例えば、生理食塩水、緩衝化生理食塩水、水中の５％デキストロースまたはその他との組合わせを包含するであろう。処方物は、さらに、１または２以上の賦形剤、保存剤、可溶化剤、緩衝化剤、バイアル表面上のタンパク質の損失を防止するためのアルブミン、およびその他を含むことができる。処方法はこの分野においてよく知られており、そして、例えば、下記の文献に開示されている：The Science and Practice of Pharmacy ，Gennaro,編、Mack Publshing Company、ペンシルベニア州イーストン，第１９版，1995。治療的投与量は一般に0.1〜100μｇ／ｋｇの患者体重／日、好ましくは0.5〜２０μｇ／ｋｇ／日の範囲であり、正確な投与量は、承認された標準に従い、治療すべき症状の特質および苛酷性、患者の体質、およびその他を考慮して、臨床医により決定される。投与量の決定は当業者のレベルの範囲内である。タンパク質は、急性治療のために、１週またはそれより短い期間にわたって、しばしば１〜３日の期間にわたって投与することができるか、あるいは慢性的治療において、数カ月または数年間にわたって使用することができる。下記の非限定的実施例により、本発明をさらに例示する。実施例実施例１分泌配列を含有するcDNAのcDNAデータベースの走査は、新規でありかついかなる既知のタンパク質に対しても相同性をもたない、発現された配列標識(EST)を明らかにした。cDNAはヒト結腸cDNAライブラリーからのものである。 cDNAをそのプラスミドからSal Ｉ（配列番号：１のヌクレオチド１）〜Not Ｉ（配列番号：１のヌクレオチド1726）で切除し、そしてESTが由来するcDNAの配列を分析することによって、EST配列は確証された。分析により、cDNAはzsig15 をコードするDNAの全体のコーディング領域を含むことが明らかにされた。実施例２クロンテク（Clontech、カリフォルニア州パロアルト）からのヒト多組織ブロットおよびヒトRNAマスタードットブロットを使用して、ノザンを実施した。プローブはほぼ３０ｂｐのオリゴヌクレオチドZC11366(配列番号：３)であった。Ｔ４ポリヌクレオチドキナーゼ（Life Technologies，Inc.,マリイランド州ガイサーバーグ）およびＴ４ポリヌクレオチドキナーゼ・フォワード緩衝液(Life Te chnologies，Inc.)を使用して、プローブを末端標識化した。NUCTRAPプッシュカラム（Stratagene、カリフォルニア州ラジョラ）を使用して、プローブを精製した。EXPRESSHYB（Clontech）溶液を、プレハイブリダイゼーションのために、そしてノザンブロットのハイブリダイゼーション溶液として使用した。ハイブリダイゼーションを４２℃において実施し、ブロットを室温において２×SSCおよび0 .1％SDSで洗浄し、次いで５０℃において１×SSCおよび0.1％SDSで洗浄した。一夜暴露した後、第３回の洗浄を６５℃において１×SSC、0.1％SDS中で実施した。２つの転写物が1.7および 2.5ｋｂにおいて観察され、強いシグナルが前立腺において見られ、より弱いシグナルが骨髄および膵臓、細胞粘膜内層および脊髄において見られた。ドットブロットは前立腺および骨髄について陽性のシグナルを示した。腫瘍ブロットを前述のクローンからのインサートでプロービングした。プローブを前述したように標識化し、腫瘍ブロットを室温において２×SSC、0.1％SDS で洗浄し、次いで６５℃において１×SSC、0.1％SDSで洗浄した。ヒト結腸腫瘍ブロット（Invitrogen、カリフォルニア州カールスバッド）は４人の異なるドナーからのヒト腫瘍組織および正常組織から単離された、完全なRNAを含有し、ここで正常／腫瘍の対を同一操作部位から切除した。結果を表５に要約する。ヒト乳房腫瘍ブロット（Invitrogen）は４人の異なるドナーからのヒト腫瘍組織および正常組織から単離された、完全なRNAを含有し、ここで正常／腫瘍の対を同一操作部位から切除した。結果を表６に要約する。これらのデータが示唆するように、細胞または腫瘍の分化した状態とともに変化するレベルで、zsig15 mRNAは発現される。実施例３商業的に入手可能な「GeneBridge 4 Radiation Hybrid Panel」（Research Ge netics，Inc.，アラバマ州ハンツヴィレ）を使用して、zsig15は染色体１９にマッピングされた。GeneBridge 4 Radiation Hybrid Panelは、９３の放射性ハイブリッドクローンの各々からのDNA、＋２つの対照DNA（HFLドナーおよびＡ２３レシピエント）を含有する。公衆に入手可能なWWWサーバー(http://www-genome ．wi．mit．edu/cgibin/cntig/rhmapper．pl)は、GeneBridge 4 Radiation Hybr id Panelで構築された、ヒトゲノムのゲノム研究の放射性ハイブリッド地図（「 WICGR」放射性ハイブリッド地図）のホワイトヘッド研究所／MITセンター（Whit ehead Institute/MIT Center）に関するマッピングを可能とする。 GeneBridge 4 RH Panelを使用するZsig15のマッピングのために、９６ウェルのマイクロタイタープレート（Stratagene、カリフォルニア州ラジョラ）中で２５μｌの反応物を構成し、「RoboCycler Gradient 96」サーマルサイクラー（St ratagene）において使用した。９５のPCR反応物の各々は、2.5μｌの「１０×Kl enTaq反応緩衝液」（Clontech Laboratories，Inc.,カリフォルニア州パロアルト）、２μｌのdNTP混合物(2.5ｍＭの各々、Perkin Elmer、フォスターシティー、カリフォルニア州)、1.25μｌのセンスプライマー、ZC11,369、5’CGG CAA TGG ACC CCT AAG AA 3'、1.25μｌのアンチセンスプライマー、ZC12,162、（配列番号：）5'TCC TCC TGG CGG CAC ACG AA 3’、2.5μｌの「RadiLoad」（Resea rch Genetics，Inc.,アラバマ州ハンツヴィレ）、0.5μｌの「５０×Advantage KlenTaq Polymerase Mix」(Clontech Laboratories，Inc.)、２５ｎｇの個々のハイブリッドクローンまたは対照からのDNAおよび全体の体積を２５μｌとするためのddH₂Oから成っていた。反応物を等しい量の鉱油でオーバーレイし、密閉した。PCRサイクラーの条件は次の通りであった：初期の１サイクル、５分の変性、９５℃、３５サイクルの１分の変性、９５℃、１分のアニーリング、７０℃ および1.5分のエクステンション、７２℃、次いで最後の１サイクルの７分のエクステンション、７２℃。反応物を３％NuSieve GTGアガロースゲル（FMC Biopr oducts、メイン州ロックランド）上の電気泳動により分離した。 Zsig15はWICGR放射性ハイブリッド地図上のヒト染色体１９連鎖グループの上部から323.29cR_3000にマッピングされることを、結果は示した。近接および遠位のフレームワークのマーカーは、それぞれ、D19S827およびD19S420であった。これらのマーカーは組込まれたLDB染色体１９地図上の19q13.2領域にZsig15を位置決定する(The Genetic Location Database，University of Southhampton，WW Wサーバー：http：//cedar．genetics．soton．ac．uk/public_html/)。実施例４哺乳動物の発現ベクターzsig15NF／pZP9、zsig15CF／pZP9、可溶性zsig15ｓNF ／pZP9、可溶性zsig15sCF／pZP9およびzsig15／pZP9 の発生５つの発現ベクターをzsig15ポリペプチドについて調製し、Ｃ末端またはＮ末端のFLAG標識をもつ全長のzsig15ポリペプチド（配列番号：５）を発現するように、zsig15CF／pZP9およびzsig15NF／pZP9を設計し、Ｎ末端またはＣ末端のFLAG 標識を有する可溶性zsig15ポリペプチドを発現するように、zsig15sNF／pZP9、z sig15sCF／pZP9を設計し、そして非標識化zsig15ポリペプチドを発現するように、zsig15／pZP9を設計した。 ZSIG15／pZP9 前述の実施例１に記載するクローンから、酵素Sal ＩおよびNot Ｉを使用する制限消化により、zsig−15 DNAのほぼ1276ｂｐの制限消化フラグメントを誘導した。得られる制限フラグメントをアガロースゲル電気泳動により可視化した。予測される大きさのバンドを切除し、製造業者のインストラクションに従いQIAQUI CK^Rカラム（Qiagen)を使用して、DNAをゲルから精製した。切除され制限消化されたzsig15 DNAフラグメントを、Xho ＩおよびNot Ｉで切断されたプラスミドpZP9の中にサブクローニングした。プラスミドpZP9（Americ an Type Culture Collection、マリイランド州ロックビレ、パークローンドライブ12301、に受託された）は、マウスメタロチオネイン−１プロモーターを有する発現カセット、コーディング配列の挿入のための多重制限部位、停止コドンおよびヒト成長ホルモンのターミネーターを含有する哺乳動物の発現ベクターである。このプラスミドは、また、大腸菌(E．coli)の複製起点、ＳＶ４０プロモーター、エンハンサーおよび複製起点を有する哺乳動物の選択可能なマーカーの発現ユニット、DHFR遺伝子およびＳＶ４０ターミネーターを有する。インサートおよび発現ベクターを１６℃において一夜結合し、次いで製造業者の指示に従いDH10Bコンピテント細胞(GIBCO BRL、マリイランド州ガイサーバーグ)の中にエレクトロポレーションした。５０ｍｇ／ｍｌのアンピシリンを含有するＬＢプレート上に細胞をプレートし、３７℃において一夜インキュベートした。オリゴヌクレオチドのプライマーを使用するPCRにより、コロニーをベクターZC13006(配列番号：６)およびZC13007(配列番号：７)に対してスクリーニングした。陽性のクローンのインサート配列を配列の分析により確認した。製造業者のインストラクションに従いQIAGEN^RMaxiプレプキット（Qiagen）を使用して、大規模のプラスミドの製造を実施した。 zSIG15CF／pZP9 ２ラウンドのPCRを使用してBamHI部位を除去することによって、1.3ｋｂのPCR 発生zsig15 DNAフラグメントをつくった（配列番号：１のヌクレオチド423はＣからＡに変化した）。オリゴヌクレオチドのプライマーZC13809(配列番号：８) およびZC13812(配列番号：９)を使用して、約392ｂｐの５’フラグメントを発生させた。オリゴヌクレオチドのプライマーZC13804(配列番号：１０)およびZC138 15(配列番号：１１)を使用して、約925ｂｐのオーバーラップする３’フラグメントを発生させた。前述のzsig15／pZP9を鋳型として使用した；初期の変性、９４℃、１分３０秒、１２サイクルの９４℃、１０秒、７６℃、２０秒、７２℃、１分３０秒、次いで１０分のエクステンション、７２℃。製造業者のインストラクションに従いＳ−300MircroSpinカラム（Pharmacia LKB Biotechnology，Inc. ,ニュージャージイ州ピスカタウェイ）を使用して、生ずるフラグメントを精製した。オリゴヌクレオチドのプライマーZC13809(配列番号：８)およびZC13815( 配列番号：１１)を使用して第２ラウンドのPCRを実施して、５’フラグメントおよび３’フラグメントを結合させた。５’および３’の第１ラウンドのフラグメントを第２ラウンドのPCRのための鋳型として使用した；初期の変性、９４℃、１分３０秒、１２サイクルの９４℃、１０秒、７６℃、２０秒、７２℃、１分３０秒、次いで１０分のエクステンション、７２℃。生ずる1.3ｋｂの第２ラウンドのフラグメントをアガロースゲル電気泳動により可視化し、切除し、製造業者のインストラクションに従いQIAQUICK^Rカラム（Qiagen，Inc.，カリフォルニア州カールスバッド）を使用して精製した。精製されたPCRフラグメントを制限酵素BamHIおよびEcoRIで消化し、アガロースゲル電気泳動により可視化し、切除し、前述のQIAQUICK^Rカラム（Qiagen）でゲル精製した。制限フラグメントをEcoRI−BamHI制限消化したＣＦ／pZP9発現ベクターの中に結合した。zsig15／pZP9発現ベクターは自然zsig15シグナルペプチドを使用し、そしてFLAGエピトープ（配列番号：５）を精製促進因子としてＣ末端に結合させた。プラスミドＣＦ／pZP9（American Type Culture Collection、マリイランド州ロックビレ、パークローンドライブ12301、に受託された）は、マウスメタロチオネイン−１プロモーターを有する発現カセット、コーディング配列の挿入のための多重制限部位、FLAG標識（配列番号：５）をコードする配列、停止コドンおよびヒト成長ホルモンのターミネーターを含有する哺乳動物の発現ベクターである。このプラスミドは、また、大腸菌(E．coli)の複製起点、ＳＶ４０プロモーター、エンハンサーおよび複製起点を有する哺乳動物の選択可能なマーカー発現ユニット、DHFR遺伝子およびＳＶ４０ターミネーターを有する。 zSIG15NF／pZP9 前述したように、２ラウンドのPCRにより、配列番号：１のヌクレオチド423をＣからＡに変化させてBamHI部位を除去し、停止コドンを３’末端に付加することによって、ZSIG−15 DNAのほぼ1.26ｋｂのフラグメントを誘導した。第１ラウンドにおいて、オリゴヌクレオチドZC13811(配列番号：１２)およびZC13812(配列番号：９)を使用し、zsig15／pZP9を鋳型として使用して、ほぼ345ｂｐの５’フラグメントを発生させた。オリゴヌクレオチドのプライマーZC13804(配列番号：１０)およびZC13810(配列番号：１３)を使用して、ほぼ925ｂｐのオーバーラップする３’フラグメントを発生させた。５’および３’の第１ラウンドのフラグメントを、オリゴヌクレオチドのプライマーZC13 811(配列番号：１２)およびZC13810(配列番号：１３)を使用する第２ラウンドの PCRのための鋳型として使用した。生ずる1.26ｋｂの第２ラウンドのフラグメントをアガロースゲル電気泳動により可視化し、切除し、製造業者のインストラクションに従いQIAQUICK^Rカラム（Qiagen，Inc.，カリフォルニア州カールスバッド）を使用して精製した。精製されたPCRフラグメントを制限酵素BamHIおよびXbaIで消化し、BamHI／Xba I制限消化されたNFpZP9発現ベクターの中に前述したように結合させた。zsig15N F／pZP9ベクターはTPAリーダー組込み、FLAG標識（配列番号：５）をzsig15ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列のＮ末端に結合させる。プラスミドＮＦ／pZP9（American Type Culture Collection、マリイランド州ロックビレ、パークローンドライブ12301、に受託された）は、マウスメタロチオネイン−１プロモーターを有する発現カセット、TPAリーダーペプチド、次いでFLAG標識（配列番号：５）をコードする配列、コーディング配列の挿入のための多重制限部位、およびヒト成長ホルモンのターミネーターを含有する哺乳動物の発現ベクターである。このプラスミドは、また、大腸菌(E．coli)の複製起点、ＳＶ４０プロモーター、エンハンサーおよび複製起点を有する哺乳動物の選択可能なマーカー発現ユニット、DHFR遺伝子およびＳＶ４０ターミネーターを有する。 zsig15sCF／pZP9 前述したように、２ラウンドのPCRにより、配列番号：１のヌクレオチド423をＣからＡに変化させてBamHI部位を除去し、疎水性領域の直前の配列番号：２のアミノ酸残基394（Glu）において配列をトランケートすることによって、ほぼ1. 18ｋｂの可溶性ZSIG−15 DNAのフラグメントを誘導した。第１ラウンドにおいて、オリゴヌクレオチドZC13809(配列番号：８)およびZC13812(配列番号：９)を使用し、zsig15／pZP9を鋳型として使用して、ほぼ392ｂｐの５’フラグメントを発生させた。オリゴヌクレオチドのプライマーZC13804(配列番号：１０)およびZ C13814(配列番号：１４)を使用して、ほぼ780ｂｐのオーバーラップする３’フラグメントを発生させた。５’および３’の第１ラウンドのフラグメントを、オリゴヌクレオチドのプライマーZC13809(配列番号：８)およびZC13814(配列番号：１４)を使用する第２ラウンドのPCRのための鋳型として使用した。生ずる1.18 ｋｂの第２ラウンドのフラグメントをアガロースゲル電気泳動により可視化し、切除し、製造業者のインストラクションに従いQIAQUICK^Rカラム（Qiagen，Inc. ，カリフォルニア州カールスバッド）を使用して精製した。 zsig15sNF／pZP9 前述したように、２ラウンドのPCRにより、配列番号：１のヌクレオチド423をＣからＡに変化させてBamHI部位を除去し、疎水性領域の直前の配列番号：２のアミノ酸残基394（Glu）において配列をトランケートし、そして３’末端に停止コドンを付加することによって、ほぼ1.14ｋｂの可溶性ZSIG−15 DNAのフラグメントを誘導した。第１ラウンドにおいて、オリゴヌクレオチドZC13811(配列番号：１２)およびZC13812(配列番号：９)を使用し、zsig15／pZP9を鋳型として使用して、ほぼ345ｂｐの５’フラグメントを発生させた。オリゴヌクレオチドのプライマーZC13804(配列番号：１０)およびZC13813(配列番号：１５)を使用して、ほぼ780ｂｐのオーバーラップする３’フラグメントを発生させた。５’および３’の第１ラウンドのフラグメントを、オリゴヌクレオチドのプライマーZC13 813(配列番号：１５)およびZC13811(配列番号：１２)を使用する第２ラウンドの PCRのための鋳型として使用した。生ずる1.14ｋｂの第２ラウンドのフラグメントをアガロースゲル電気泳動により可視化し、切除し、製造業者のインストラクションに従いQIAQUICK^Rカラム（Qiagen，Inc.，カリフォルニア州カールスバッド）を使用して精製した。ほぼ２０〜３０ｎｇの制限消化したインサートの各々および0.05〜0.06ｐｍの対応するベクターを独立して１６℃において一夜結合させた。1.2μｌの各結合反応を製造業者の指示に従い３８μｌのDH10Bコンピテント細胞(GIBCO BRL、マリイランド州ガイサーバーグ)の中にエレクトロポレーションし、そして５０ｍｇ／ｍｌのアンピシリンを含有するＬＢプレート上に細胞をプレートし、一夜インキュベートした。オリゴヌクレオチドのプライマーを使用するPCRにより、コロニーをベクターZC13006(配列番号：６)およびZC13007(配列番号：７)に対してスクリーニングした。陽性のクローンのインサート配列を配列の分析により確認した。製造業者のインストラクションに従いQIAGEN^RMaxiプレプキット（Qiagen ）を使用して、大規模のプラスミドの製造を実施した。実施例５ zsig15の哺乳動物での発現 BHK570細胞(ATCC NO：CRL−10314)を１０ｃｍの組織培養皿の中にプレートし、DMEM／FBS培地（DMEM，Gibco/BRL High Glucose（Gibco BRL、マリイランド州ガイサーバーグ）、５％の胎仔ウシ血清（Hyclone、ユタ州ロウガン）、１μＭのＬ−グルタミン(JRH Biosciences、カンサス州レネクサ)、１ μＭのピルビン酸ナトリウム(Gibco BRL)中で、３７℃、５％のＣＯ₂において、ほぼ５０〜７０％のコンフルエンシーに一夜増殖させた。次いでLipofectamine^T ^M (Gibco BRL)を使用して、無血清（ＳＦ）培地処方物（DMEM、１０ｍｇ／ｍｌのトランスフェリン、５ｍｇ／ｍｌのインスリン、２ｍｇ／ｍｌのフェツイン、１％のＬ−グルタミンおよび１％のピルビン酸ナトリウム）中において、プラスミドzsig15NF／pZP9（全長のＮ末端のFLAG標識）、zsig15CF／pZP9（全長のＣ末端のFLAG標識）、zsig15sNF／pZP9（可溶性Ｎ末端のFLAG標識）およびzsig15sCF／ pZP9（可溶性Ｃ末端のFLAG標識）で、細胞をトランスフェクトした。１６μｇの各発現構築物を別々に１５ｍｌの管の中にＳＦ培地で640μｌの最終体積に希釈した。別々の管において、３５μｌのLipofectamine^TM(Gibco BRL)を605μｌのＳＦ培地と混合した。Lipofectamine^TM混合を発現構築物の混合物に添加し、室温においてほぼ３０分間インキュベートした。５ｍｌのＳＦ培地をDNA：Lipofec tamine^TM混合物に添加した。細胞の３つのプレートを５ｍｌのＳＦ培地で１回すすぎ、吸引し、DNA：Lipofectamine^TM混合物を添加した。細胞を３７℃において５時間インキュベートし、次いで6.4ｍｌのDMEM／１０％のFBS、１％のPSN培地を各プレートに添加した。プレートを３７℃において一夜インキュベートし、次の日にDNA：Lipofectamine^TM混合物を新鮮なFBS／DMEM培地と置換した。トランスフェクション後第２日に、細胞を選択培地（前述からのDMEM／FBS培地＋１μ Ｍのメトトレキセート（Sigma Chemical Co.，ミゾリー州セントルイス））の中に150ｍｍのプレート中で１：１０、１：２０および１：５０で分割した。細胞にトランスフェクション後第５日に新鮮な選択培地を再供給した。トランスフェクション後ほぼ第１０〜１２日に、２つの150ｍｍの培養皿のメトトレキセート耐性コロニーを選択し、培地を吸引し、プレートを１０ｍｌの無血清ESTEP2培地(668.7g／５０リットルのDMEM(Gibco)、5.5ｇ／５０リットルのピルビン酸、ナトリウム塩９６％（Mallinckrodt）、185.0ｇ／５０リットルのN aHCO₃（Mallinckrodt）、5.0ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｌ／５０リットルのインスリン、10.0ｍｇ／ｍｌおよび２５ｍｌ／５０リットルのトランスフェリン)で洗浄した。洗浄培地を吸引し、５ｍｌの無血清ESTEP2で置換した。次いで、無血清ESTE P2中で前ソーキングした無菌のテフロンメッシュ（Spctrum Medical Industries 、カリフォルニア州ロサンジェルス）を細胞の上に配置した。次いで、無血清ES TEP2中で前ソーキングした無菌のニトロセルロースフィルターをメッシュの上に配置した。ニトロセルロース上の配向マークを培養皿に移した。次いでプレートを３７℃、５％ＣＯ₂のインキュベーター中で５〜６時間インキュベートした。インキュベーション後、フィルターを除去し、培地を吸引し、DMEM／５％のFBS 、１×PSN（Gibco）培地と置換した。フィルターを2.5％無脂肪ミルク／ウェスタンＡ緩衝液（Western Ａ：５０ｍＭのTris ｐＨ7.4、５ｍＭのEDTA、0.05％のＮＰ−４０、150ｍＭのNaClおよび0.25％のゼラチン）中で４℃において回転震盪培養機上で一夜ブロックした。次いで、フィルターをヤギ抗ヒトFLAG−HRP 複合体と、１：4000希釈（２０ｍｌの緩衝液中の５μｌの抗体）において2.5％無脂肪ミルク／ウェスタンＡ緩衝液（Western Ａ：５0ｍＭのTris ｐＨ7.4、５ｍＭのEDTA、0.05％のＮＰ−４０、150ｍＭのNaClおよび0.25％のゼラチン）中で室温において回転震盪培養機上で１時間インキュベートした。次いで、フィルターを室温においてPBS＋0.1％のTween 20中で１５分／洗浄の間３回洗浄した。フィルターをECL試薬（Amersham Corp.，イリノイ州アーリントンハイツ）で製造業者の指示に従い展開させ、フィルム(Hyperfilm RCL，Am ersham)にほぼ５分間暴露した。フィルムをコロニーを含有するプレートと整列させた。フィルムをガイドとして使用して、適当なコロニーを選択した。無菌の、３ｍｍのクローニング皿（PG C Scientific Corp.，マリイランド州フレデリック）をトリプシン中でソーキングし、コロニー上に配置した。コロニーを９６ウェルのプレート中の200μｌの選択培地の中に移した。１系列の７つの、２倍の希釈を各コロニーについて実施した。次いで150ｍｍの培養皿をトリプシン処理し、細胞の残部をプールし、DME M／５％FBSおよび１μＭのMTX培地を含有する、２つのＴ162フラスコの中に分割した。細胞を３７℃において１週間増殖させ、この時細胞に現在最適の密度にある細胞の最低の希釈物を供給し、細胞を選択し、トリプシン処理し、選択培地を含有する１２ウェルのプレートに移した。クローンを１２ウェルのプレートから２つのＴ−７５フラスコに直接拡張させた。各クローンからの１つのフラスコを無血清ESTEP2中で増殖させ、培地をウェスタンブロットアッセイのために収集した。発現構築物の各々のクローンを、ウェスタンブロットアッセイに基づいて、選択し、一緒にプールし、大規模培養に移した。実施例６ zsig15の大規模の哺乳動物の発現前述の発現手順から得られた、zsig15ｓ／ＮＦを発現するコンフルエント細胞を含有する１つのＴ−162フラスコ、およびzsig15ｓ／ＣＦを含有する１つのフラスコを、５つのＴ−162フラスコの中に拡張した。５つの得られるフラスコの１つを使用して４つのクライオバイアルを凍結させ、そして他の４つのフラスコを使用してNunc細胞ファクトリーを発生させた。 zsig15ｓ／ＮＦおよびzsig15ｓ／ＣＦの４つのＴ−162フラスコからの細胞を一緒にし、２つのNunc細胞ファクトリー（１０層、VWRから商業的に入手可能である）の播種に使用した。簡単に述べると、前述のＴ−162フラスコからの細胞をトリプシンで分離し、プールし、1.5リットルのESTEP1培地(668.7ｇ／５０リットルのDMEM(Gibco)、5.5ｇ／５０リットルのピルビン酸、ナトリウム塩９６％（Mallinckrodt）、185.0ｇ／５０リットルのNaHCO₃（Mallinckrodt）、5.0ｍｇ／ｍｌおよび２５ｍｌ／５０リットルのインスリン(JHR Biosciences)、10.0ｍｇ／ｍｌおよび２５ｍｌ／５０リットルのトランスフェリン(JHR Biosciences) 、2.5リットル／５０リットルの胎仔ウシ血清(特性決定された)(Hyclone)、１μ ＭのMTX、ｐＨは7.05＋／−0.05に調節されている）（３７℃に前もって温かいされた）に添加した。次いで、細胞を含有する培地を漏斗を介してNunc細胞ファクトリーの中に注いだ。細胞ファクトリーを３７℃／5.0％ＣＯ₂のインキュベーターの中に入れた。８０〜100％のコンフルエンスにおいて、視的汚染試験（フェノールレッドの色変化）をNunc細胞ファクトリー上で実施した。汚染は観測されなかったので、コンフルエントファクトリーからの上清を小型の収集容器の中に注ぎ、採取し、廃棄した。次いで付着性細胞を400ｍｌのPBSで１回洗浄した。ファクトリーから細胞を分離するために、100ｍｌのトリプシンを各々に添加し、除去し、次いで細胞を残留トリプシン中で５〜１０分間インキュベートした。２×200ｍｌのEST EP1培地の洗浄後に、細胞を収集した。１０のESTEP1培地を含有するびん（各々1 .5リットル、３７℃）の各々に、４０ｍｌの収集した細胞を添加した。次いで１つの1.5リットルのびんを使用して、１つのNuncファクトリーを充填した。各細胞ファクトリーを３７℃／5.0％ＣＯ₂のインキュベーターの中に入れた。８０〜９０％のコンフルエンスにおいて、視的汚染試験（フェノールレッドの色変化）をNunc細胞ファクトリー上で実施した。汚染は観測されなかったので、コンフルエントファクトリーからの上清を小型の収集容器の中に注ぎ、採取し、廃棄した。次いで細胞を40０ｍｌのPBSで１回洗浄した。1.5リットルのESTEP2培地(668.7ｇ／５０リットルのDMEM(Gibco)、5.5ｇ／５０リットルのピルビン酸、ナトリウム塩９６％（Mallinckrodt）、185.0ｇ／５０リットルのNaHCO₃（Malli nckrodt）、5.0ｍｇ／ｍｌ、２５ｍｌ／５０リットルのインスリン、10.0ｍｇ／ｍｌおよび２５ｍｌ／５０リットルのトランスフェリン)を各Nunc細胞ファクトリーに添加した。細胞ファクトリーを３７℃／5.0％ＣＯ₂のインキュベーターの中に入れた。ほぼ４０時間において、視的汚染試験（フェノールレッドの色変化）をNunc細胞ファクトリー上で実施した。各ファクトリーからの上清を小型の収集容器の中に注いだ。合計１５リットルがすべての１０のファクトリーから収集された。新鮮な無血清培地(1.5リットル)を各Nunc細胞ファクトリーの中に注ぎ、ファクトリーを３７℃／5.0％ＣＯ₂においてインキュベートした。１ｍｌの上清収集物を顕微鏡のスライドに移し、汚染について顕微鏡分析した。各ファクトリーの小型収集容器をプールし、直ちに濾過した。次いで、実質的に前述したように５０時間において、第２の収集を実施し（１５リットルが得られた）その後、細胞ファクトリーを廃棄した。収集上清（培地を含有した）の無菌的濾過のために、無菌的に組立てられたフィルタートレイン装置を使用した。組立ては次の通りであった：Opti−Capフィルター（Millipore Corp、マサチュセッツ州ベッドフォード）およびGelman Supercap 50フィルター(Gelman Sciences、ミシガン州アンアーバー)に管を針金で結びつけた。また、Supercap 50フィルターをフード内に位置する無菌のキャップ付き容器に取付けた；Millipore Opti−capフィルターから上流に位置する管を蠕動ポンプの中に挿入した；そして管の自由端を大型収集容器の中に入れた。コンディショニングされた培地のすべてが0.22μｍの最終フィルターを通過して無菌の収集容器の中に入るまで、蠕動ポンプを200〜300rpm で運転した。精製まで貫流を４℃の冷たい部屋の中に入れた。培地をミリポア(M illipore)５kDAカットオフ濃縮装置（Millipore Corp、マサチュセッツ州ベッドフォード）で製造業者の指示に従い濃縮し、そして抗FLAG標識抗体(Kodak)を使用してウェスタンブロット分析した。実施例７特記しない限り、すべての操作は４℃において実施した。下記の手順を使用して、Ｎ末端またはＣ末端のフラッグ標識を含有するzsig15を精製する。ベイビーハムスター腎(BHK)細胞からの合計２５リットルのコンディショニングされた培地を順次に４インチの、0.2ｍＭのMillipore（マサチュセッツ州ベッドフォード）OptiCapカプセルフィルターおよび0.2ｍＭのGelman（ミシガン州アンアーバー）Supercap 50を通して濾過する。3000kDaカットオフ膜を装備するAmicon（マサチュセッツ州ベバーリイ）DC10L濃縮装置を使用して、前記物質を約1.3リットルに濃縮する。濃縮された物質を再び滅菌濾過し、これを濃縮しコンディショニングした培地に2.5ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（EDTA，Sigma Chemical Co.，ミゾリー州セントルイス）、0.001ｍＭのロイペプチン(Boehringer Mannheim、インジアナ州インジアナポリス)、0.001ｍＭのペプスタチン(Boehringer Mannheim)および0.4ｍＭのPefabloc(Boehringer Mannheim) の最終濃度に添加する。抗フラッグセファローズ(Eastman Kodak、ニューヨーク州ロチェスター)の25.0ｍｌの試料をバッチ吸着のために試料に添加し、この混合物をWeaton（ニュージャージイ州ミリヴィレ）ローラー培養装置上で18.0時間４℃においておだやかに撹拌する。次いで混合物を5.0×20.0ｃｍのEcono−Colum（Bio−Rad Laboratories、カリフォルニア州ハーキュレス）の中に注ぎ、ゲルを３０カラム体積のリン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)で洗浄する。保持されない貫流画分を廃棄する。いったん280ｎＭにおける流出液の吸収が0.05より小さくなると、カラムの貫流はゼロに減少し、そして抗フラッグセファローズゲルを0.2ｍｇ／ｍｌのフラッグペプチド、Ｎ −AspTyrLysAspAspAspAspLys−Ｃ(配列番号：５；Eastman Kodak)を含有する、2 .0カラム体積のPBSでバッチ式に洗浄する。４℃において1.0時間後、流れを回復させ、溶離されたタンパク質を収集する。この画分をペプチド溶離物と呼ぶ。抗フラッグセファローズゲルを2.0カラム体積の0.1Ｍのグリシン、ｐＨ2.5で洗浄し、グリシン洗浄液を別に収集する。グリシン溶離された画分のｐＨを小さい体積の１０×PBSの添加により7.0に調節し、必要に応じてさらに分析するために、４℃において貯蔵する。製造業者のインストラクションに従い5,000分子量のカットオフの膜濃縮装置( Millipore、マサチュセッツ州ベッドフォード)を使用して、ペプチド溶離物を5. 0ｍｌに濃縮する。BioCad Sprint HPLCシステム（PerSeptive BioSystem、マサチュセッツ州フラミンガム）を使用して、PBS中で平衡化された1.5×５０ｃｍのセファデックスＧ−５０(Pharmacia、ニュージャージイ州ピスカタウェイ)上で1 .0ｍｌ／分の流速においてクロマトグラフィーにかけることによって、濃縮されたペプチド溶離物を遊離タンパク質から分離する。２ｍｌの画分を収集し、280ｎＭにおける吸収をモニターする。280ｎＭにおいて吸収し、カラムの空隙体積付近で溶出する物質の第１ピークを収集する。SDS−PAGEおよび抗フラッグＭ２抗体(Kodak)を使用するウェスタン分析により、zsig15NFおよびzsig15CFの純度をモニターする。精製されたタンパク質のタンパク質濃縮をBCA分析（Pierce、イリノイ州ロックフォード）により実施し、この物質のアリコートを取り、−８０℃において貯蔵する。以上から理解されるように、本発明の特定の態様を例示の目的で説明したが、本発明の精神および範囲から逸脱しないで種々の変更が可能である。したがって、本発明は添付された請求の範囲による以外限定されない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 19/00 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＣ１２Ｎ 5/10 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＺＷ (72)発明者グロスマン，アンジェリカアメリカ合衆国，ワシントン 98115，シアトル，ノースイーストシックスティース 2809

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）配列番号：１に示すヌクレオチド９７〜ヌクレオチド1215のヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド分子；（ｂ）前記（ａ）のオーソログ(orthlog)；（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）のアレル変異型；（ｄ）配列番号：２のアミノ酸残基２２(Leu)〜アミノ酸残基394（Glu）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子；および（ｅ）前記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）の縮重ヌクレオチド配列；から成る群より選択される単離されたポリヌクレオチド分子。２．前記ポリヌクレオチド分子が、配列番号：１に示すヌクレオチド９７〜ヌクレオチド1344のヌクレオチド配列、または配列番号：２の残基２２〜437のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子を含んでなる、請求項１に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。３．前記ポリヌクレオチド分子が、配列番号：１に示すヌクレオチド７９〜ヌクレオチド1344のヌクレオチド配列、または配列番号：２の残基１６〜437のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子を含んでなる、請求項１に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。４．前記ポリヌクレオチド分子が、配列番号：１に示すヌクレオチド３４〜ヌクレオチド1344のヌクレオチド配列、または配列番号：２の残基１〜347のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子を含んでなる、請求項１に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。５．配列番号：１に示すヌクレオチド９７〜ヌクレオチド582のヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド分子。６．配列番号：１に示すヌクレオチド655〜ヌクレオチド1215のヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド分子。７．前記ポリヌクレオチド分子が配列番号．１のヌクレオチド655〜ヌクレオチド1344のヌクレオチド配列を含んでなる、請求項６に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。８．第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドを含んでなる融合タンパク質をコードし、前記第１ポリペプチドが配列番号：１に示すヌクレオチド９７〜ヌクレオチド582のヌクレオチド配列によりコードされ、そして前記第２ポリペプチドが配列番号．１に示すヌクレオチド655〜ヌクレオチド1215のヌクレオチド配列によりコードされる、単離されたポリヌクレオチド分子。９．ポリヌクレオチドがDNAである、請求項１に記載の単離されたポリヌクレオチド分子。１０．下記の作用可能に連結された因子からなる発現ベクター：転写プロモーター；下記の（ａ）〜（ｅ）から成る群より選択されるDNAセグメント（ａ）配列番号：１に示すヌクレオチド９７〜ヌクレオチド1215のヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド分子；（ｂ）前記（ａ）のオーソログ；（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）のアレル変異型；（ｄ）配列番号：２のアミノ酸残基２２(Leu)〜アミノ酸残基394（Glu）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド分子；および（ｅ）前記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）の縮重ヌクレオチド配列；および転写ターミネーター。１１．請求項１０に記載の発現ベクターが導入されており、前記DNAセグメントによりコードされるポリペプチドを発現する、培養された細胞。１２．請求項１０に記載の発現ベクターが導入されており、前記DNAセグメントによりコードされるポリペプチドを発現する細胞を培養し；そして前記ポリペプチドを回収する；ことを含んでなるポリペプチドの生産方法。１３．（ａ）配列番号：２に示すアミノ酸残基２２(Leu)〜アミノ酸残基394（ Glu）のアミノ酸配からなるポリペプチド分子；（ｂ）前記（ａ）のオーソログ；（ｃ）前記（ａ）または（ｂ）のアレル変異型；および（ｄ）配列番号：２のアミノ酸残基２２(Leu)〜アミノ酸残基394（Glu）のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％同一であるポリペプチド分子；から成る群より選択される単離されたポリペプチド。１４．前記ポリペプチド分子が配列番号：２に示すアミノ酸残基２２(Leu)〜アミノ酸残基437（Cys）のアミノ酸配からなる、請求項１３に記載の単離されたポリペプチド。１５．前記ポリペプチド分子が配列番号：２に示すアミノ酸残基１６(Leu)〜アミノ酸残基437（Cys）のアミノ酸配からなる、請求項１３に記載の単離されたポリペプチド。１６．前記ポリペプチド分子が配列番号：２に示すアミノ酸残基１(Met)〜アミノ酸残基437（Cys）のアミノ酸配からなる、請求項１３に記載の単離されたポリペプチド。１７．配列番号：２に示すアミノ酸残基２２(Leu)〜アミノ酸残基183（Pro）のアミノ酸配を含んでなる単離されたポリペプチド。１８．配列番号：２に示すアミノ酸残基208（Phe）〜アミノ酸残基394（Glu）のアミノ酸配を含んでなる単離されたポリペプチド。１９．前記ポリペプチドが配列番号：２に示すアミノ酸残基208（Phe）〜アミノ酸残基437（Cys）のアミノ酸配を含んでなる、請求項１８に記載の単離されたポリペプチド。２０．第１ポリペプチドおよび第２ポリペプチドを含んでなる融合タンパク質をコードし、前記第１ポリペプチドが配列番号：２に示すアミノ酸２２(Leu)〜アミノ酸183（Pro）のアミノ酸残基の配列からなり、そして前記第２ポリペプチドが配列番号．２に示すアミノ酸208（Phe）〜アミノ酸394（Glu）のアミノ酸残基の配列からなる、単離された融合タンパク質。２１．親和性標識、トキシン、放射性ヌクレオチド、酵素または蛍光体から成る群より選択される部分がＮ末端またはＣ末端において共有結合されている、請求項１３に記載の単離されたポリペプチド。２２．前記アミノ酸残基の配列と前記親和性標識との間のタンパク質分解切断をさらに含む、請求項２１に記載の単離されたポリペプチド。２３．配列番号：２に示すアミノ酸残基１(Met)〜アミノ酸残基437（Cys）のアミノ酸配を含んでなるポリペプチドのエピトープに特異的に結合する抗体。２４．配列番号．１のヌクレオチド３４〜ヌクレオチド1344のポリヌクレオチドの少なくとも１４の連結するヌクレオチドを含んでなるオリゴヌクレオチドのプローブまたはプライマー。２５．請求項１３に記載のポリペプチドと、薬学上許容されるビヒクルとを含んでなる医薬組成物。