JP2001515063A

JP2001515063A - Ｈｉｖマトリックスタンパク質チロシン２９位ポケットバインダー

Info

Publication number: JP2001515063A
Application number: JP2000509689A
Authority: JP
Inventors: パン，センリアン; バクリンスキ，マイケル; ケー．ハッファー，オマー
Original assignee: ザピコワーインスティテュートフォーメディカルリサーチ
Priority date: 1997-08-15
Filing date: 1998-08-14
Publication date: 2001-09-18
Also published as: US5849793A; EP1015422A1; EP1015422A4; CA2300876C; WO1999009005A1; AU9020198A; CA2300876A1; AU759210B2

Abstract

(57)【要約】ＨＩＶ統合前複合体（ＰＩＣ）のマトリックスタンパク質成分のチロシン残基29ポケット中の隣接リジン残基上のアミノ成分を結合する、三次元空間での座標に従って限定された、化合物の１つの構造群が開示される。本発明の化合物および医薬組成物は、ＰＩＣがカリオフェリンαに結合するのを防止し、且つ宿主細胞ＤＮＡ中へのＨＩＶウイルスゲノムの核内侵入と組み込みを防止する。よって、本発明の化合物および医薬組成物はＨＩＶウイルス感染を防止する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の技術分野本発明は、ＨＩＶ統合前複合体（preintegration complex；ＰＩＣ）のマトリ
ックスタンパク質のチロシン残基29位ポケット中の近隣リジン残基上のアミノ成
分を結合する、三次元空間の座標に従って限定された、化合物の１つの構造群を
提供する。これらの化合物および医薬組成物は、ＰＩＣがカリオフェリンαに結
合するのを防止しそして宿主細胞ＤＮＡ中へのＨＩＶウイルスゲノムの核侵入と
統合を抑制する。よって、本発明の化合物および医薬組成物はＨＩＶウイルス感
染を防止する。

【０００２】発明の背景過去十年間で、ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）による感染は汎発流
行の割合に達した。サハラ砂漠近郊アフリカにおけるＨＩＶ−１感染者の数の圧
倒的な増加に加えて、ヨーロッパや北アメリカ諸国において新たな感染が増加し
ている。台湾やマレーシアのような南東アジア諸国におけるＨＩＶ−１の出現も
同じように懸念される。現在の感染率に基づくと、南東アジアは近い将来、世界
一のホットスポットとしてアフリカを越えるかもしれないと推測される。従って
、ＨＩＶ−１感染とエイズ（AIDS）の発症はおとえることなく進む。防御ワクチ
ンがないので、感染後治療が健康管理提供者に利用できる唯一の管理手段である
。

【０００３】長期非進行性患者の同定は、ＨＩＶ−１感染の治療は感染後の発病を遅らせる
ことができることを強く示唆した。今日まで、ＨＩＶ−１療法の主な標的は、ウ
イルス生活環に重要であるウイルス酵素の逆転写酵素とプロテアーゼであった。
それらの酵素のいずれの阻害剤も、患者のウイルス負荷量を好結果に減少させそ
してＣＤ４⁺Ｔリンパ球亜集団の増加を引き起こし、その結果ＨＩＶ感染の治療
薬が商業的に入手できるようになった。それらの両方の終末点は、陽性の予後に
対して優れた相関物であることを示した。重要なのは、様々な摂生でＲＴ阻害剤
をプロテアーゼ阻害剤と一緒に使用する組合せ療法が、検出可能なレベル以下に
血中の循環ウイルスを減少させたことである。それらの臨床結果は、ＨＩＶ−１
感染とエイズの維持療法が獲得できることを示した。

【０００４】しかしながら、使用した抗ウイルス薬に耐性であるウイルス分離株の発生、並
びに或るクラスの阻害剤の中の複数の薬に対する交差耐性が、組合せ療法の適用
を制限すると予想される。それらの結果は、新規薬剤開発の続行と、ウイルス酵
素以外の新たな標的の同定の続行を示唆した。

【０００５】ヒト免疫不全ウイルス１型（ＨＩＶ−１）および他のレンチウイルス類は、一
次マクロファージ（Gendelman 他, J. Virol. 58:67-74, 1986 ; Gartner他, Sc
ience 233: 215-219）、一次樹枝状血液細胞（Langhoff他, Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 88:998-8002, 1991）および表皮ランゲルハンス細胞（Ramazzotti他,
Immunology 85:94-98, 1995 ）のような非分裂最終分化細胞に感染する。これは
、非分裂細胞の完全な核エンベロープを横切ってウイルスゲノムを組み込むＨＩ
Ｖ−１統合前複合体（ＰＩＣ）の能動輸送により促進される（Bukrinsky 他, Pr
oc. Natl. Acad. Sci. USA 89:6580-6584, 1992 ; Bukrinsky 他, Nature 365:6
66-669, 1993 ; von Schwedler他, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:6992-6996, 1994 ）。その上、ＨＩＶ−１はＭ期の前とＭ期を含む細胞周期のどの段階でも
活性化一次Ｔ細胞において生産的感染を樹立することができる。よって、能動的
核侵入は細胞分裂の必要条件を不要にし、かくしてＨＩＶ−１を、レトロウイル
スの通常の標的である（Roe 他, EMBO J. 12:2099-2108, 1993 ; Lewis & Emerm
an, J. Virol. 68:510-516, 1994）増殖性細胞だけでなく、非増殖性細胞にも感
染できるようにする（Lewis 他, EMBO J. 11:3053-3058, 1992）。

【０００６】ウイルスゲノムＲＮＡに加えて、ＰＩＣはgag 由来マトリックスタンパク質（
ＭＡ）とヌクレオキャプシドタンパク質（ＮＣ）、逆転写酵素（ＲＩ）、インテ
グラーゼ（ＩＮ）およびvpr から構成される。発生期ｃＤＮＡの逆転写と生産は
、核侵入前に、標的細胞の細胞質中でのＰＩＣの状況で完結される。ＨＩＶ−１
のＰＩＣは、能動的核侵入に関与する細胞性タンパク質であるカリオフェリン（
Adam, Trends Cell Biol. 5:189-191, 1995 に概説されている）と会合すること
が示された（Gallay他, J. Virol. 70:1027-1032, 1996 ; Popov他, Proc. Natl
. Acad. Sci. USA 93:11859-11864, 1996 ）。カリオフェリンαはそれらの核限
局化配列（ＮＬＳ）によって標的タンパク質に結合し、一方カリオフェリンβは
核の孔構造へのカリオフェリンα−標的タンパク質複合体のドッキングを媒介す
る（Radu他, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:2002-2011, 1995 ; Gorlich 他,
Nature (London) 377:246-248, 1995 ; Adam & Gerace, Cell 66:837-847, 1991 ; Gorlich & Mattaj, Science 271:1513-1518, 1996 ; Hurt, Cell 84:509-515
, 1996）。

【０００７】ＨＩＶ−１マトリックスタンパク質（ＭＡ）は１つの限定されたＮＬＳ（Ｋ²⁶ ＫＫＹＫ）と１つの推定ＮＬＳ（Ｋ¹⁰ＳＫＫＫ）を含み、そしてＰＩＣ内の主要
な親核（カリオフィリック）構造を表す（Bukrinsky 他, Nature 365:666-669,
1993 ; von Schwedler他, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:6992-6996, 1994 ;
Gallay他, J. Virol. 70:1027-1032, 1996 ; Bukrinsky他, Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 90:6125-6129, 1993 ）。２つのＭＡＮＬＳのいずれかを包含する合
成ペプチドは共に、Ｂ細胞溶解物とＴ細胞溶解物中に存在する同定されたヒトカ
リオフェリンαを結合した（Nadler他, J. Biol. Chem. 272;4310-4315, 1997）
。単独でまたはＶｐｒの欠失と組み合わせたＭＡのＫＫＫＹＳＮＬＳ中の突然
変異は、ＨＩＶ−１ＰＩＣの核侵入を減少させ、且つ初代マクロファージ培養
物（von Schwedler 他, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:6992-6996, 1994 ; He
izinger 他, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:7311-7315, 1992 ）、並びに増殖
静止Ｔ細胞（Bukrinsky 他, Nature 365:666-669, 1993）およびCD⁴⁺−HeLa細胞
培養物（Emmerman他, Nature (London) 369:107-108, 1994 ）の感染を抑制した
。ＫＫＫＹＳＮＬＳ中の一アミノ酸置換も、試験管内で酵母カリオフェリンα
へのＨＩＶ−１ＰＩＣの結合を減少させ（Popov 他, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:11859-11864, 1996 ）、よって非分裂細胞におけるカリオフェリンαへ
のＰＩＣの結合、核侵入およびウイルス複製の間での関連性を提供する。

【０００８】発明の要約本発明は、式Ｉ：

【化６】〔上式中、Ｒは−Ｘ−ＣＯ−Ｚであり、ここでＺはＣ_4-6直鎖または分岐鎖アル
コキシであり、そしてＸは（ＣＨ₂ ）_nまたは−Ｓ−（ＣＨ₂）_nであり、ここ
でｎは０〜６の整数でありそしてＹはＨまたはＣ_1-6直鎖もしくは分岐鎖アルキ
ルである〕を有する化合物を提供する。好ましくは、Ｘが（ＣＨ₂ ）_nであり、ｎが２であ
り、Ｚがメトキシであり、そしてＹがＨである。

【０００９】本発明は更に、式Ｉの化合物と医薬上許容される担体とを含んで成る医薬組成
物も提供する。本発明は、式Ｉの化合物の有効量を投与することを含んで成る、ＨＩＶ感染の
治療方法も提供する。

【００１０】本発明は更に、ＨＩＶ感染の治療のための組合せ治療用組成物であって、式Ｉ
：

【化７】〔上式中、Ｒは−Ｘ−ＣＯ−Ｚであり、ここでＺはＣ_4-6直鎖または分岐鎖アル
コキシであり、そしてＸは（ＣＨ₂ ）_nまたは−Ｓ−（ＣＨ₂）_nであり、ここ
でｎは０〜６の整数でありそしてＹはＨまたはＣ_1-6直鎖もしくは分岐鎖アルキ
ルである〕の化合物と、逆転写酵素阻害剤とを含んで成る組合せ組成物を提供する。好まし
くは、逆転写酵素阻害剤が３ＴＣ，ＡＺＴ，ｄｄＩ，ｄ４Ｔ，ｄｄＣおよびそれ
らの組合せから成る群より選ばれる。好ましくは、式Ｉ中、Ｘが（ＣＨ₂ ）_nで
あり、ｎが２であり、Ｚがメトキシであり、そしてＹがＨである。好ましくは、
該組合せ組成物はＨＩＶプロテアーゼ阻害剤を更に含んで成る。ＨＩＶプロテア
ーゼ阻害剤はリトナビル、ネルフィナビル、サクイナビル、インジナビルおよび
それらの組合せから成る群より選ばれる。

【００１１】発明の具体的説明本発明は、式Ｉ：

【化８】〔上式中、Ｒは−Ｘ−ＣＯ−Ｚであり、ここでＺはＣ_4-6直鎖または分岐鎖アル
コキシであり、そしてＸは（ＣＨ₂ ）_nまたは−Ｓ−（ＣＨ₂）_nであり、ここ
でｎは０〜６の整数でありそしてＹはＨまたはＣ_1-6直鎖もしくは分岐鎖アルキ
ルである〕を有する化合物を提供する。好ましくは、Ｘが（ＣＨ₂ ）_nであり、ｎが２であ
り、Ｚがメトキシであり、そしてＹがＨである。

【００１２】本発明は更に、式Ｉの化合物と医薬上許容される担体とを含んで成る医薬組成
物も提供する。本発明は、式Ｉの化合物の有効量を投与することを含んで成る、ＨＩＶ感染の
治療方法も提供する。

【００１３】化合物の合成代表化合物は一般的な有機合成技術により合成することができる。代表化合物
55は１，４−ナフトキノン−２−プロピオン酸である。化合物55は、ナフトキノ
ン（6.32 g）、コハク酸（14.2 g）および硝酸銀（2 g ）を水−アセトニトリル
（重量で３：１）の溶液中に添加することにより合成した。混合物を65〜75℃に
加熱しそして攪拌し、水（50ml）中の過硫酸アンモニウム（12 g）を25分間に渡
り滴下添加した。添加後、反応液を60℃で15分間維持し、次いで氷冷した。反応
生成物を次いでエーテル（２×100 ml）で抽出し、エーテル層を２×100 mlの５
％水性炭酸水素ナトリウムで抽出した（発泡する）。エーテル層を捨てた。生成
物の炭酸アニオン形は不安定であるため、各炭酸水素ナトリウム抽出物をpH 3.5
リン酸緩衝液にすばやく添加した（急速に濃色になる）。次いでpH 3.5混合物を
エーテルで抽出し、抽出物をブラインで洗浄し、そして真空中で濃縮すると褐色
固体が得られた。この固体を30 ml のベンゼン中で攪拌し、濾過した。濾過ケー
クを温ベンゼン中に取り、次いで濾過した。冷却すると、濾液から138 ℃の融点
を有する黄色針状晶として2.5 g の１，４−ナフトキノン−２−プロピオン酸が
沈澱した。

【００１４】代表化合物59は１，４−ナフトキノン−２−プロピオン酸メチルエステルであ
る。この化合物は、ナフトキノン（15.8 g, Aldrich ）とコハク酸モノメチルエ
ステル（31 g）を３：１水−アセトニトリル（500 ml）中に添加し、そしてその
混合物を約80℃に加熱することにより合成した。硝酸銀（5 g ）を加え、次いで
温度をゆっくりと約65℃に下げながら、水（120 ml）中の過硫酸アンモニウム（
30 g）の溶液を約80分間に渡り滴下添加した。混合物を65℃で更に20分間攪拌し
、次いで約10℃に冷却した。混合物を２×300 mlのエーテルと100 mlのジクロロ
メタンで抽出した。合わせた抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥し、活性炭で脱
色した。濾過し更に濃縮した後、生成物は約20 gであり赤褐色油状物であった。
この生成物を、０〜100 ％クロロホルム／ベンゼンの勾配に続いて５％テトラヒ
ドロフラン／クロロホルムを使って200 g のシリカゲル上でのクロマトグラフィ
ーにかけた。大部分が所望の生成物を含む画分を一緒にし、メタノールから再結
晶すると、Ｒf 0.2 （１：１クロロホルム：ベンゼン）を有し、79.5℃の融点
を有する純粋な化合物が得られた。

【００１５】医薬製剤本発明の医薬用複合体または本発明の医薬用組合せ物は、単独で（複合体また
は組合せ物として）またはそれを適当な担体および賦形剤と混合した医薬組成物
において患者に投与することができる。本発明の化合物または医薬組成物は、非
経口で、例えば静脈注射もしくは輸液、腹腔内注射、皮下注射、または筋肉内注
射により投与することができる。本発明の化合物または医薬組成物は、担体およ
び賦形剤を使って錠剤、ピル、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリ
ー、懸濁液剤などに製剤することにより、経口投与または直腸投与することがで
きる。本発明の化合物または医薬組成物は、例えば皮膚パッチにより局所投与し
て一貫した全身活性物質レベルを達成することができる。本発明の化合物または
医薬組成物は、皮膚または粘膜表面への局所適用に適した局所クリーム、皮膚ま
たは粘膜パッチ、液体もしくはゲルに製剤化される。本発明の化合物または医薬
組成物はＨＩＶ感染の局所または全身処置のために気道への吸引器により投与す
ることができる。

【００１６】当業者は、本発明における使用に適した本発明の化合物または医薬組成物の用
量を本開示から決定することができる。医薬組成物は、本発明の化合物または医
薬組成物の有効量（活性物質の投与経路または薬物速度論に依存する）、並びに
製剤の特定投与経路（即ち経口、非経口、局所または吸引による）に適した適当
な医薬担体および賦形剤を含むであろう。活性化合物は、混合、溶解、造粒、糖
衣錠製造、乳化、カプセル封入、閉じ込めまたは凍結乾燥方法を使って医薬製剤
中に混合される。非経口用医薬製剤としては、水溶性形態の活性複合体または組
合せ物の水性溶液が挙げられる。更に、油性注射懸濁液剤として活性化合物の懸
濁液を調製することができる。適当な親油性溶剤または賦形剤としては、脂肪油
、例えばゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルもしくは
トリグリセリド、またはリポソームが挙げられる。水性注射懸濁液剤は、懸濁液
の粘度を増加させる物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソル
ビトールまたはデキストランを含むことができる。懸濁液剤は所望により安定剤
、またはより濃厚な溶液とするために複合体もしくは組合せ物の溶解性を高める
剤を含むことができる。

【００１７】経口投与用の医薬製剤は、活性化合物を固形賦形剤、例えば糖（例えば乳糖、
ショ糖、マンニトールまたはソルビトール）、セルロース製剤（例えばデンプン
、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースおよびカルボキシメ
チルセルロースナトリウム）、ゼラチン、ゴムまたはポリビニルピロリドンと混
合することにより得ることができる。

【００１８】実施例１この実施例は、本発明の化合物の治療有用性を示すためのＨＩＶ感染の推定治
療モデルにおける試験管内実験を例証する。Ficoll−Hypaque (Pharmacia) 上で
の分離により単離された末梢血単核細胞（正常または未感染ヒト提供者から）よ
り初代マクロファージ培養物を得、そしてそれを10％熱不活性化正常ヒト血清（
ＮＨＳ）が補足されたダルベッコ改良イーグル培地（DMEM）中に８×10⁶細胞／
mlの密度で塗抹した。37℃で２時間付着させた後、非付着細胞を捨て、付着性マ
クロファージを収集し、そしてマクロファージコロニー刺激因子（MCSF）が補足
されたDMEM中で１×10⁶細胞／mlにおいて７日間培養した。次いで、様々な濃度
の試験薬剤の存在下で、マクロファージ向性臨床分離株ＨＩＶ−１_ADAを200 ×
10³cpm／10⁶細胞のＭＯＩで細胞に感染させた。具体的には、化合物59を指摘の
通りにDMSO中に溶解した。37℃で２時間後、遊離ウイルスを洗い流し、細胞を試
験薬剤の存在下で新鮮なDMEM／10％NHS 中で培養した。培地の容積の半分を３〜
４日毎に交換し、そしてDubrovsky 他, Molec. Med. 1:217-230, 1995 に記載さ
れた手順に従ってウイルス関連逆転写酵素のレベルを定量することにより、培地
中のウイルスのレベルを感染後第７日と第11日目にアッセイした。

【００１９】初代マクロファージ培養物にＨＩＶ−１を感染させた。化合物（図１中の55と
図２中の59）を様々な濃度で添加した。更に、陽性対照化合物（"cni-h0294" と
称する）を指摘の濃度で添加した。２時間吸着させた後、過剰のウイルスまたは
偽ウイルスを洗い流し、そして細胞を指摘の時間に渡りインキュベートした後分
析した。逆転写酵素活性（またはＲＴ）を標準技術により測定した。

【００２０】図１は、本発明の化合物55の抗ＨＩＶ治療活性を、ピリミジン成分中に正電荷
を有する、統合前複合体に結合することにより作用する別の核侵入阻害剤（米国
特許第5,574,040 号明細書に開示された"cni-h0294" ；この開示は参考として本
明細書中に組み込まれる）と比較したグラフを示す。このアッセイは、ウイルス
生産の尺度として、感染したマクロファージ培養上清中の逆転写酵素活性を測定
する。それらのデータはＨＩＶ感染の治療効力と直接相関性がある。それらのデ
ータは、化合物55が抗ＨＩＶ抗感染性活性の推定モデルにおいて治療活性を有す
ることを証明する。

【００２１】図２は、本発明の化合物59の抗ＨＩＶ治療活性を、マクロファージ培養物の抗
ＨＩＶ活性のアッセイにおいて、ピリミジン成分中に正電荷を有する別の統合前
複合体阻害剤（"cni-h0294" ）と比較したグラフを示す。このアッセイは、ウイ
ルス生産の尺度として、感染したマクロファージ培養上清中の逆転写酵素活性を
測定する。それらのデータはＨＩＶ感染の治療効力と直接相関させることができ
る。それらのデータは、化合物59が抗ＨＩＶ抗感染性活性の推定モデルにおいて
治療活性を有することを証明する。

【００２２】実施例２この実施例は、本発明の式１の化合物（化合物59）と代表的逆転写酵素阻害剤
（３ＴＣ）の組合せ物の治療活性を例証する。Ficoll−Hypaque (Pharmacia) 上
での分離により末梢血単核細胞（正常または未感染ヒト提供者から）を単離し、
そてそれを10％熱不活性化正常ヒト血清（ＮＨＳ）が補足されたダルベッコ改良
イーグル培地（DMEM）中に８×10⁶細胞／mlの密度で塗抹した。37℃で２時間付
着させた後、非付着細胞を捨て、付着性マクロファージを収集し、そしてマクロ
ファージコロニー刺激因子（MCSF）が補足されたDMEM中で１×10⁶細胞／mlにお
いて７日間培養した。次いで、様々な濃度の試験薬剤の存在下で、マクロファー
ジ向性臨床分離株ＨＩＶ−１_ADAを200 ×10³cpm／10⁶細胞のＭＯＩで細胞に感
染させた。具体的には、化合物59を指摘の通りにDMSO中に溶かした。37℃で２時
間後、遊離ウイルスを洗い流し、細胞を試験薬剤の存在下で新鮮なDMEM／10％NH
S 中で培養した。培地の容積の半分を３〜４日毎に交換し、そしてDubrovsky 他
, Molec. Med. 1:217-230, 1995 に記載された手順に従ってウイルス関連逆転写
酵素のレベルを定量することにより、培地中のウイルスのレベルを感染後第７日
と第11日目にアッセイした。

【００２３】様々な濃度の化合物59を単独でまたは２つの濃度の逆転写酵素阻害剤３ＴＣ
（BioChem Pharma, Laval, Quebec ）と一緒に試験した。図３に報告するデータ
は、本発明の統合前複合体阻害剤である化合物59と典型的な逆転写酵素（ＲＴ）
阻害剤との重要な組合せの付加活性または相乗活性を示す。また、それらのデー
タは更に、本発明の統合前複合体阻害剤とＲＴ阻害剤の組合せ療法の有効性を示
す。

【００２４】実施例３この実施例は、化合物59が、抗ＣＤ３および抗ＣＤ28モノクローナル抗体によ
り活性化された急性感染PBMC培養物中でのＨＩＶ−１ウイルス複製を阻害したこ
とを例証する（図４および５）。未感染個体から末梢血単核細胞を単離し、そし
てSmithgall 他, J. Immunol. 156:2324-2330, 1996 により記載された手順に従
って、ＣＤ８特異的モノクローナル抗体を使ってＣＤ８⁺Ｔリンパ球を涸渇させ
た。簡単に言えば、この手順は抗体結合細胞の補体媒介溶解の代わりに磁性ビー
ズによる分離を使った。残りのPBMC画分を、10％熱不活性化ヒト血清が補足され
たRPMI培地中に２×10⁶細胞／200 μl の割合で懸濁させた。様々な濃度の化合
物59の存在下で抗ＣＤ３モノクローナル抗体（mAb)（１μg/ml）と抗ＣＤ28 mAb
（１μg/ml）により細胞を活性化した。この細胞活性化方法は細胞集団中のＣＤ
４⁺Ｔリンパ球を特異的に標的とする。

【００２５】細胞を抗体と試験化合物で２〜３時間前処理した後にウイルス接種材料を添加
した。この実験で使用するウイルスＨＩＶ−１_M1は患者由来の分離株であり、そ
れを約ＭＯＩ＝５ TICD₅₀で使用した。ウイルス吸着のため２時間のインキュベ
ーション後、細胞を洗浄して接種材料を除去し、次いで様々な濃度の化合物59（
用量応答関係を示すため）と共に抗ＣＤ３ mAbと抗ＣＤ28 mAbが補足された培地 200μl 中に再懸濁した。次いで細胞をＵ字底の96ウエル培養プレート中に４〜
６反復複製物として1.5 ×10⁵細胞／複製物／ウエルにおいて接種した。終末点
として感染後６〜10日目にｐ24集団を使ってウイルス生産を測定した。製造業者
の推奨に従ってｐ24抗原捕捉アッセイを実施した。

【００２６】図４と図５に与えられるデータは、ウイルス濃度の尺度としてｐ24を使った場
合の０，0.01μＭ，1.0 μＭおよび10μＭ濃度での化合物59（"CNI-H5997" ）の
用量応答関係を示す。

【００２７】ＨＩＶ−１感染個体から単離したPBMCを抗ＣＤ３ mAbにより試験管内で活性化
した時、化合物59は該PBMCにおいてウイルス複製を阻害した（図６）。血清陽性
個体からPBMCを収集し、そして上述した通りにＣＤ８⁺Ｔリンパ球を涸渇させた
。細胞を培地中に懸濁させ、抗ＣＤ３ mAb（１μg/ml）を使って活性化した。６
〜10日後、培養上清中のｐ24レベルを測定しそして処理した培養物と未処理の培
養物を比較することにより、ウイルス生産を評価した。図６は、上記の実験条件
下で、ＨＩＶ抗感染性の推定アッセイにおける化合物59（"CNI-H5997" ）につい
ての用量応答関係を示す。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、本発明の化合物55（１，４−ナフトキノン−２−プロピオン酸）とピ
リミジン環成分中に正電荷を有する構造的に相違している化合物（"cni-h0294"
）とを比較したグラフを示す。このアッセイは、ウイルス生産の尺度として感染
マクロファージ培養上清中の逆転写酵素活性を測定する。これらのデータはＨＩ
Ｖ感染の治療効力に直接相関させることができる。これらのデータは、本発明の
化合物55が有効であり且つ用量応答関係を示すことを証明する。しかしながら、
cni-h0294 は、第７日と第11日測定においては0.1 μＭ薬物濃度でより有力な活
性を示した。

【図２】図２は、本発明の化合物59（１，４−ナフトキノン−２−プロピオン酸メチル
エステル）とピリミジン成分中に正電荷を有する構造的に相違している化合物（
"cni-h0294" ）とを比較したグラフを示す。このアッセイは、ウイルス生産の尺
度として感染マクロファージ培養上清中の逆転写酵素活性を測定する。これらの
データはＨＩＶ感染の治療効力に直接相関させることができる。これらのデータ
は、本発明の化合物59が有効であり且つ用量応答関係を示すことを証明する。し
かしながら、cni-h0294 は、第11日測定においては0.1 μＭ薬物濃度でより有力
な活性を示した。

【図３】図３は、抗ＨＩＶ抗感染性組合せ療法のための推定アッセイにおいて単独の本
発明の化合物59と逆転写酵素阻害剤３ＴＣと組み合わせた本発明の化合物59とを
比較したグラフを示す。このアッセイはウイルス生産の尺度として初代マクロフ
ァージ培養物において逆転写酵素活性を測定する。これらのデータはＨＩＶ感染
の治療効力に直接相関させることができる。これらのデータは、本発明の化合物
59が有効であり且つ用量応答関係を示すことを証明する。これらのデータはまた
、化合物59の抗感染性性が逆転写酵素阻害剤３ＴＣの活性に少なくとも付加的で
ありそしておそらく相乗的であることを示す。

【図４】図４は、ＨＩＶ−１ウイルス感染前に化合物の存在下で抗ＣＤ３ mAbまたは抗
ＣＤ28 mAbにより活性化された未感染提供者からのヒトPBMCにおいて抗感染性治
療活性を有する化合物についての用量応答関係を示す。化合物59は、ＨＩＶ抗感
染性治療活性のこの推定モデルにおいて治療活性と用量応答関係を示した。

【図５】図５は、ＨＩＶ−１ウイルス感染前に化合物の存在下で抗ＣＤ３ mAbまたは抗
ＣＤ28 mAbにより活性化された未感染提供者からのヒトPBMCにおいて抗感染性治
療活性を有する化合物についての用量応答関係を示す。化合物59は、ＨＩＶ抗感
染性治療活性のこの推定モデルにおいて治療活性と用量応答関係を示した。

【図６】図６は、化合物の存在下で抗ＣＤ３ mAbだけで活性化されたＨＩＶ−１血清陽
性提供者からの内因性感染PBMCにおいて抗感染性治療活性を有する化合物59につ
いての用量応答関係を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 31/18 Ａ６１Ｐ 31/18 37/04 37/04 43/00 １２１ 43/00 １２１Ｃ０７Ｃ 69/76 Ｃ０７Ｃ 69/76 Ｚ 321/00 321/00 323/00 323/00 //(Ａ６１Ｋ 31/216 (Ａ６１Ｋ 31/216 31:7064） 31:7064） (72)発明者バクリンスキ，マイケルアメリカ合衆国，ニューヨーク 11547, グレンウッドランディング，グレンレーン８ (72)発明者ハッファー，オマーケー. アメリカ合衆国，ワシントン 98105，シアトル，ノースイーストフォーティサードストリート 1120 ＃407 Ｆターム(参考） 4C084 AA19 AA22 AA23 ZB331 ZC202 ZC551 ZC552 4C086 AA01 AA02 BC30 BC50 BC82 GA10 MA01 MA02 MA03 MA04 MA07 MA08 MA09 ZB33 ZC55 4C206 AA01 AA02 DB20 DB43 MA01 MA02 MA03 MA04 MA12 MA17 ZB33 ZC55 4H006 AA01 AB29 BJ50 BR80 BS10 TA04 TB52

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式Ｉ：【化１】〔上式中、Ｒは−Ｘ−ＣＯ−Ｚであり、ここでＺはＣ_4-6直鎖または分岐鎖アル
コキシであり、そしてＸは（ＣＨ₂ ）_nまたは−Ｓ−（ＣＨ₂）_nであり、ここ
でｎは０〜６の整数でありそしてＹはＨまたはＣ_1-6直鎖もしくは分岐鎖アルキ
ルである〕を有する化合物。
【請求項２】Ｘが（ＣＨ₂ ）_nであり、ｎが２であり、Ｚがメトキシであ
り、そしてＹがＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】ＨＩＶ感染の治療用医薬組成物であって、式Ｉ：【化２】〔上式中、Ｒは−Ｘ−ＣＯ−Ｚであり、ここでＺはＣ_4-6直鎖または分岐鎖アル
コキシであり、そしてＸは（ＣＨ₂ ）_nまたは−Ｓ−（ＣＨ₂）_nであり、ここ
でｎは０〜６の整数でありそしてＹはＨまたはＣ_1-6直鎖もしくは分岐鎖アルキ
ルである〕の化合物と医薬上許容される担体とを含んで成る医薬組成物。
【請求項４】Ｘが（ＣＨ₂ ）_nであり、ｎが２であり、Ｚがメトキシであ
り、そしてＹがＨである、請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】ＨＩＶ感染の治療方法であって、式Ｉ：【化３】〔上式中、Ｒは−Ｘ−ＣＯ−Ｚであり、ここでＺはＣ_4-6直鎖または分岐鎖アル
コキシであり、そしてＸは（ＣＨ₂ ）_nまたは−Ｓ−（ＣＨ₂）_nであり、ここ
でｎは０〜６の整数でありそしてＹはＨまたはＣ_1-6直鎖もしくは分岐鎖アルキ
ルである〕の化合物の有効量を投与することを含んで成る方法。
【請求項６】Ｘが（ＣＨ₂ ）_nであり、ｎが２であり、Ｚがメトキシであ
り、そしてＹがＨである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】ＨＩＶ感染の治療のための組合せ療法であって、式Ｉ：【化４】〔上式中、Ｒは−Ｘ−ＣＯ−Ｚであり、ここでＺはＣ_4-6直鎖または分岐鎖アル
コキシであり、そしてＸは（ＣＨ₂ ）_nまたは−Ｓ−（ＣＨ₂）_nであり、ここ
でｎは０〜６の整数でありそしてＹはＨまたはＣ_1-6直鎖もしくは分岐鎖アルキ
ルである〕の化合物と逆転写酵素阻害剤とを含んで成る組合せ療法。
【請求項８】前記逆転写酵素阻害剤が３ＴＣ，ＡＺＴ，ｄｄＩ，ｄ４Ｔ，
ｄｄＣおよびそれらの組合せから成る群より選ばれる、請求項７に記載の組合せ
。
【請求項９】Ｘが（ＣＨ₂ ）_nであり、ｎが２であり、Ｚがメトキシであ
り、そしてＹがＨである、請求項７に記載の組合せ。
【請求項１０】ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤を更に含んで成る、請求項７に
記載の組合せ。
【請求項１１】前記ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤がリトナビル、ネルフィナ
ビル、サクイナビル、インジナビルおよびそれらの組合せから成る群より選ばれ
る、請求項１０に記載の組合せ。
【請求項１２】ＨＩＶ感染の治療方法であって、式Ｉ：【化５】〔上式中、Ｒは−Ｘ−ＣＯ−Ｚであり、ここでＺはＣ_4-6直鎖または分岐鎖アル
コキシであり、そしてＸは（ＣＨ₂ ）_nまたは−Ｓ−（ＣＨ₂）_nであり、ここ
でｎは０〜６の整数でありそしてＹはＨまたはＣ_1-6直鎖もしくは分岐鎖アルキ
ルである〕の化合物の有効量と、逆転写酵素阻害剤の有効量とを投与することを含んで成る
方法。
【請求項１３】前記逆転写酵素阻害剤が３ＴＣ，ＡＺＴ，ｄｄＩ，ｄ４Ｔ
，ｄｄＣおよびそれらの組合せから成る群より選ばれる、請求項１２に記載の方
法。
【請求項１４】Ｘが（ＣＨ₂ ）_nであり、ｎが２であり、Ｚがメトキシで
あり、そしてＹがＨである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤の有効量を更に含んで成る、請
求項１２に記載の方法。
【請求項１６】前記ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤がリトナビル、ネルフィナ
ビル、サクイナビル、インジナビルおよびそれらの組合せから成る群より選ばれ
る、請求項１５に記載の方法。