JP2001514749A

JP2001514749A - Ｈｉｖ抗原及びｈｉｖ抗体の同時決定方法

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Publication number: JP2001514749A
Application number: JP53917798A
Authority: JP
Inventors: ドニー，フレデリック; ファアッツ，エルケ; バーバラアップマイエル; ホース，エヴァ; バイス，マリー−アンジ; サーマン，エリック
Original assignee: ロシュダイアグノスティックスゲーエムベーハー
Priority date: 1997-03-10
Filing date: 1998-03-05
Publication date: 2001-09-11
Anticipated expiration: 2018-03-05
Also published as: WO1998040744A1; EP0972198A1; ES2187947T5; AU6727798A; ATE228248T1; EP0972198B1; CA2283058A1; CA2283058C; JP3534417B2; ES2187947T3; US6593079B1; EP0972198B2

Abstract

(57)【要約】本発明は、ＨＩＶ感染を診断するための方法であって、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２のｅｎｖ領域に対する少なくとも１種類の抗体、並びにＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２に由来するｐｏｌ及び／又はｇａｇ領域に対する少なくとも１種類の抗体を特異的に検出するイムノアッセイによる方法に関する。本発明は、さらに、前記診断方法に適する診断キット及び試験片、並びにｐ２４に対するモノクローナル抗体及びそれらの使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】ＨＩＶ抗原及びＨＩＶ抗体の同時決定方法本発明は、ＨＩＶ抗原及びＨＩＶ抗体の特異的検出を用いるイムノアッセイによるＨＩＶ感染の診断方法に関する。ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）はＨＩＶウイルスによって引き起こされる後天性免疫不全症である。これまでに知られる病原体はＨＩＶ１及びＨＩＶ２株である。両株は形態、細胞親和性、Ｔ細胞のＣＤ４受容体との相互作用、ＣＤ４細胞に対するそれらのin vitroでの細胞変性効果、それらの一般的なゲノム構造及び疾患ＡＩＤＳを引き起こす能力において類似する(Clavel，1987，AIDS 1，1 35-140)。しかしながら、免疫学的な関係の程度はごく小さいものであり、一般に、ＨＩＶ１特異的抗体はＨＩＶ２といかなる交差反応も示さない。最も一般的なＨＩＶ１グループＭサブタイプに加えて、さらなるＨＩＶ１サブタイプ、サブタイプ０が知られている(Myersら，Los Alamos data bank，1994；Sharpら，AID S Suppl.8,pp.27-42,1994)。ＨＩＶ１−ＳｕｂＯとＨＩＶ１との関係の程度はＨＩＶ１−ＳｕｂＯとＨＩＶ２とのものよりもかなり高い。しかしながら、ＨＩＶ１に対する抗体はＨＩＶ１−ＳｕｂＯの対応する抗原とはある程度しか交差反応しない。ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ特異的抗体の大部分はＨＩＶ１グループＭ抗原とも反応しない。ＨＩＶ感染の過程は幾つかの診断上関連する段階に分割することができる。感染の早期において、ＨＩＶ抗体に適合しないＨＩＶ抗原を既に検出することができる。抗体陽転期においては、ＨＩＶ抗原は僅かに陽性又は陰性であり得、すなわち検出することができない。ＩｇＭクラスのＨＩＶ抗体はこの段階で検出可能であるのに対して、ＩｇＧクラスのＨＩＶ抗体は検出することができないか、又は僅かに陽性であるだけである。次の段階においては、症状はないが、主としてＩｇＧ型のＨＩＶ抗体が検出可能であり、これに対してＨＩＶ抗原は一般に生じない。同じことが臨床期の疾患の進行過程に当てはまる。疾患の後期段階において、ＨＩＶ抗体は最終的に僅かに陽性又は陰性になる可能性があり、これに対してＨＩＶ抗原は陰性のままであるか、又は患者の免疫系の崩壊を伴うウイルスの攻撃の増加のために再度陽性として検出される可能性がある。したがって、(患者に応じて)過程が非常に異なるものであり得るこれらの異なる段階の間、抗原又は抗体の検出が誤って陰性の結果を示し得る瞬間が常に存在する。ＨＩＶ１を検出するためには、ＨＩＶ２又はＨＩＶ１−ＳｕｂＯ感染抗体試験（IgG及びIgM）を、例えばEP−A−0 280 211に記載されるブリッジ試験様式で頻繁に行う。抗原は、一般には、ＨＩＶ１／ＨＩＶ１−ＳｕｂＯについてはｇｐ１６０、ｇｐ１２０、ｇｐ４１であり、かつＨＩＶ２についてはｇｐ１４０、ｇｐ１１０、ｇｐ３６であるいわゆるエンベロープ領域（ｅｎｖ）の抗原が、それぞれウイルスのコアを形成する抗原ｐ２４（ＨＩＶ１）及びｐ２６（ＨＩＶ２）と共に用いられる。抗原ｐ２４及びｐ２６は、いわゆるｇａｇ領域がコードする。これらの試験は、列挙された抗原に対する抗体が存在する場合に陽性信号を示す。疾患の早期及び後期段階において、すなわち、遊離ｐ２４及びｐ２６抗原が存在するときに、患者の免疫系が未だに十分な抗体を産生しないでいるか、又は患者の免疫系が消耗して構築される抗体の数が検出されるのに十分なものではないために、しばしば抗体を検出することができない。ｐ２４抗原を検出するための抗原試験及び他の抗体試験は、一般には別々に行われる。患者の抗原力価は感染の早期段階及びＡＩＤＳの最終段階においてのみ増加し、そのためｐ２４はこれらの段階においてのみ確実に検出することができる。これまでに公知の試験の不都合な点は、ＨＩＶ感染の診断上関連する期間全体を単独で網羅することができる試験がないことである。組み合わせ試験を用いると、特定の病原体の抗原及びこの病原体に対する抗体を同時に検出することができる。このような抗原及び抗体を同時に検出するための手順はDE 42 36 189 A1に開示されている。しかしながら、ＨＩＶ感染の全ての段階を診断の上で完全に網羅しようとする試みは記載されていない。 WO 93／21346においては、不均一イムノアッセイによりＨＩＶｐ２４抗原、ＨＩＶ１ｇｐ４１抗体及びＨＩＶ２ｇｐ３６抗体（いずれの場合も、ｅｎｖ遺伝子のタンパク質に対する抗体）を同時に検出するための組み合わせ試験が記載されている。しかしながら、この試験では、ｐ２４又はｅｎｖタンパク質に対する抗体を含まないＨＩＶ陽性サンプルは陽性として検出されない。全ての抗体ではなくｇｐ４１を単独で用いることで陽性ＨＩＶ１サンプルを検出することができ、これはウエスタンブロット法において不完全なバンドパターンを示し、かつｇｐ４１バンドの染色がないことを特徴とするサンプルが広範囲に及ぶためである。 Hashidaら（1996,J.Clin.Lab.Anal.10,213-219）はＨＩＶ１感染を検出するための診断試験を記載している。この試験で、ｐ２４抗原、（ｇａｇ領域に由来する）ｐ１７に対するＩｇＧ抗体及びｐｏｌ遺伝子によってコードされる逆転写酵素（ＲＴ）に対するＩｇＧ抗体を検出することができる。しかしながら、この手順はＨＩＶ１感染の検出のみを可能にし、上で用いられる２種類の抗原に対する低アフィン（low-affine）ＩｇＭ抗体のみを含む抗体陽転血清は検出されない。ｅｎｖタンパク質に対する抗体を含む抗体陽転血清も検出されない。感染の早期においてＨＩＶ抗原力価が減少した後には、しばしばｅｎｖタンパク質ｇｐ４１に対するＩｇＭ抗体のみが生じる。この場合、Hashidaらの試験は偽陰性結果を示す。全ての感染段階について、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及びＨＩＶ２の完全な同時検出を確実に可能にする最新の診断試験系は存在しない。したがって、本発明の目的は、ＨＩＶ感染の診断上検出可能な全ての段階の正確で、信頼の置ける完全な検出を単一の試験として可能にするＨＩＶ感染の改善された試験を開発することにある。また、この試験はＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及びＨＩＶ２の同時測定をも可能にする。この目的は、本発明によるＨＩＶ感染を診断するための方法であって、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２のｅｎｖ領域に対する少なくとも１種類の抗体、並びにＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２に由来するｐｏｌ及び／又はｇａｇ領域に対する少なくとも１種類の抗体の特異的検出を用いるイムノアッセイによる方法によって達成される。本発明による方法を用いることで、上記検体のうちの１つだけが既に現れているＨＩＶ感染を確実に検出することが可能である。驚くべきことに、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原の検出並びにＨＩＶ−ｅｎｖ領域に対する少なくとも１種類の抗体の検出と組み合わせた、特にはＨＩＶのｐｏｌ領域の、遺伝子産物に対する抗体の検出により、これまでの残念な診断上のギャップを埋めることができることが示されている。驚くべきことに、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原の検出並びにＨＩＶ−ｅｎｖ領域に対する少なくとも１種類の抗体の検出と組み合わせた、ＨＩＶの逆転写酵素（ＲＴ）に対する抗体を検出するＨＩＶ感染の検出方法が特に適することが立証されている。既述の単一パラメータの決定を用いる本発明による組み合わせ試験によるＨＩＶ感染の検出は同時に行われる。組み合わせ試験（combination test）という用語は、ＨＩＶ抗原及びＨＩＶ抗原に対する抗体を同時に検出できることを意味する。この試験を用いることで、全てのＨＩＶ感染の段階を確実に網羅することができる。抗原又は抗体及びそれらの対応する特異的受容体結合を本発明に従って選択することにより、本発明による方法を実施することができる。さらに、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及びＨＩＶ２の検出を１つの単一試験を用いて達成することができる。加えて、受容体を適切に選択することによりＨＩＶ１グループＭのＨＩＶ１サブタイプの広範な検出が可能である。この試験は、好ましくは、不均一イムノアッセイの原理に基づくものである。しかしながら、液相及び固相を分離しない濁度試験のような均一法を考えることもできる。本発明による検出法において用いられる受容体Ｒ１及びＲ２は、測定しようとするＨＩＶ１−ｐ２４及び／又はＨＩＶ２−ｐ２６に特異的に結合する受容体である。Ｒ３及びＲ４受容体として用いられる受容体はＨＩＶ１、ＨＩＶ２又はＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｅｎｖ領域の１つもしくは幾つかの抗原である(ＨＩＶ１／ＨＩＶ１−ＳｕｂＯについてはｇｐ１６０、ｇｐ１２０、ｇｐ４１、ＨＩＶ２についてはｇｐ１４０、ｇｐ１１０、ｇｐ３６)。Ｒ３及びＲ４として好ましく用いられる受容体はｇｐ４１及び／又はｇｐ３６又はそれらの断片である。Ｒ５及びＲ６として用いられる受容体はＨＩＶ１、ＨＩＶ２、又はＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する１つもしくは幾つかの抗原であるが、受容体Ｒ１又はＲ２と反応する可能性があるｐ２４又はｐ２６のエピトープ又は配列であってはならない。ＨＩＶ１、ＨＩＶ２又はＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐｏｌ領域の抗原が受容体Ｒ５又はＲ６として好ましく用いられる。逆転写酵素（ＲＴ）が受容体Ｒ５及びＲ６として特に好ましく用いられる。本発明による受容体の組み合わせはＨＩＶ感染の全ての段階を確実に検出することを可能にする。これは、感染の早期又は後期段階にのみ存在するＨＩＶの特定の検体（例えば、それぞれ、ｐ２４及びｐ２６抗原）はもちろん、無症候段階に生じる検体及びより長期間にわたって検出可能な検体、例えば、ｅｎｖ遺伝子産物ｇｐ１６０、ｇｐ１２０もしくはｇｐ４１に対する抗体及びｐｏｌ遺伝子産物逆転写酵素、インテグラーゼもしくはプロテアーゼに対する抗体、又はｇａｇ遺伝子産物ｐ１７もしくはｐ１５に対する抗体の検出を可能にする。受容体を適切に選択することにより、ＨＩＶ１、ＨＩＶ２、及びグループＭの全てのＨＩＶ１サブタイプを含むＨＩＶ１−ＳｕｂＯによる感染を任意に検出することができる。このような手順のためには、Ｒ１及びＲ２として選択された受容体がＨＩＶ１のｐ２４抗原に特異的に結合する。この場合、Ｒ１及びＲ２の選択は、ＨＩＶ１−ｐ２４及びＨＩＶ１−ＳｕｂＯ−ｐ２４の認識及び結合を可能にするものでなければならない。これには、全てのＨＩＶ１グループＭサブタイプ及びＨＩＶ１サブタイプ０が検出されるようにＲ１及びＲ２に数種類の受容体を用いることが必要となることがある。加えて、ＨＩＶ１、ＨＩＶ２及びＨＩＶ１−ＳｕｂＯを同時に検出するため、ＨＩＶ２のｐ２６抗原をも特異的に認識する、対応する交差反応性受容体又はさらなる受容体Ｒ１及びＲ２のいずれかが用いられる。用いられる受容体Ｒ１及びＲ２の総数は選択されるエピトープの交差反応性又は相同性に依存する。うまく選択した場合、用いられる受容体の数を減少させることが可能である。ＨＩＶ１及びＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｅｎｖ遺伝子産物に対する抗体に特異的に結合する受容体はＲ３及びＲ４受容体として用いることができる。ｇｐ４１抗原（それぞれ、ＨＩＶ１及びＨＩＶ１−ＳｕｂＯ）又はそれらの断片もしくはエピトープが特に適する。Ｒ３及びＲ４として用いられるさらなる受容体はＨＩＶ２のｅｎｖ遺伝子産物に対する抗体を特異的に認識するものである。ｇｐ３６抗原又はそれらの断片もしくはエピトープが特に適する。ＨＩＶ１及びＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｇａｇ又はｐｏｌ遺伝子産物に対する抗体を特異的に認識する受容体−受容体Ｒ１及びＲ２と反応し得るｐ２４のエピトープは除く−がＲ５及びＲ６受容体として適する。ＨＩＶ２を認識するため、ＨＩＶ２のｇａｇ又はｐｏｌ遺伝子産物に対する抗体に特異的に結合するさらなるＲ５及びＲ６受容体をさらに用いることができる。Ｒ５及びＲ６に好ましい受容体は、それぞれ、ＨＩＶ１及びＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐｏｌ遺伝子産物、並びにＨＩＶ２のｐｏｌ遺伝子産物に対する抗体を認識する受容体である。３種類の可能性のあるｐｏｌ遺伝子産物逆転写酵素、インテグラーゼ及びプロテアーゼに対する受容体Ｒ５及びＲ６のうち、該逆転写酵素に対する抗体を認識する受容体が特に好ましい。本発明のさらなる主題は、受容体Ｒ１及びＲ２を各々単一の受容体として、又は様々な受容体の混合物の形態で用いる上記ＨＩＶ感染の検出方法である。混合物が用いられる場合、それらの受容体は、好ましくは、それぞれｐ２４及びｐ２６の異なるエピトープを認識する。受容体混合物を用いるのは、１つの単一試験組成物を用いて異なるＨＩＶサブタイプを確実に認識する−ｐ２４抗原の場合にはＨＩＶ１グループＭサブタイプ及びＨＩＶ１−ＳｕｂＯを認識する−ためである。本発明によると、この検出方法はＨＩＶ１サブタイプ０の感染にも適する。さらに、本発明による検出方法はグループＭのＨＩＶ１サブタイプの感染に用いることもできる。本発明によると、受容体Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及びＨＩＶ２陽性サンプルを１つの試験調製物で確実に認識することを保証するため、各々異なる受容体の混合物の形態で用いることもできる。しかしながら、これらの異なる受容体が検出しようとする抗原又は検出しようとする抗体に結合する際に互いを大きく妨害することがないことを常に確実なものとしなければならない。Ｒ３及びＲ４として好ましい受容体は各々が同じエピトープを提示するものである。これは、検出しようとする抗体の抗原結合部分が受容体Ｒ３及びＲ４の両者に連結することを確実なものとする。要求に応じて、異なるエピトープの組み合わせを用いることもできる。例えば、組換えｇｐ４１をＲ３として用いることができ、ｇｐ４１から誘導されるペプチド又はポリハプテン−WO 96／03652に記載されるようなもの−をＲ４として用いることができる。これは受容体Ｒ５及びＲ６に当てはめることもできる。要求に応じて、異なるエピトープの組み合わせを用いることができる。しかしながら、同じエピトープを有する受容体が好ましい。本発明による方法は、一般には、湿式試験として適用される。液相中で試験試薬を用いるいわゆる湿式試験に加えて、タンパク質又は抗体の検出に適する全ての通常の乾式試験様式を用いることもできる。これらの乾式試験又は、例えばEP −A−0 186 799に記載されるような試験片では、全ての試験成分を単一の担体上に結合させる。本発明による方法は、好ましくは、不均一イムノアッセイとして行い、受容体Ｒ１及びＲ２で抗原を検出する際にはサンドイッチ原理に従う。検出しようとする抗原（ここでは、それぞれｐ２４及びｐ２６）はＲ１及びＲ２によりサンドイッチのように両面に結合される。受容体Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６による抗体の結合は架橋試験原理に従う。検出しようとする抗体は受容体Ｒ３及びＲ４を架橋する。同じことが受容体Ｒ５及びＲ６に当てはまる。両試験手順、サンドイッチ及び架橋試験、は同じ試験調製物内で互いを妨害することなく同時に行うことができる。したがって、全ての受容体をサンプルと共にインキュベートし、その手順を数工程で行うことも可能である。検出反応に先立つ、未結合受容体及びサンプル成分を単離するための洗浄工程は有利ではあるが、必須のものではない。固相への結合に適する受容体Ｒ１、Ｒ３及びＲ５は液相において結合させることが可能であり、又は予め固相に結合させることもできる。受容体Ｒ１ないしＲ６全ての全体インキュベーションが好ましい。Ｒ１、Ｒ３及びＲ５が結合し得る固相は予め存在していてもよく、又は後に添加し、あるいは拡散もしくは搬送により後に到達してもよい。インキュベーションの間に、固相Ｒ１・ｐ２４(ｐ２６)・Ｒ２の間にサンドイッチが、固相・Ｒ３・ＨＩＶ抗ｅｎｖ抗体・Ｒ４の間に架橋が、及び固相・Ｒ５・ＨＩＶ抗ｇａｇ／ｐｏｌ抗体・Ｒ６の間に架橋が形成される。続いて、不均一イムノアッセイの場合には固相を液相から分離し、必要であれば固相を洗浄し、Ｒ２、Ｒ４及びＲ６の標識を測定する。標識は大部分が固相で測定されるが、液相において測定することもできる。受容体Ｒ１、Ｒ３及びＲ５のうちの１つもしくは幾つかが予め固相に結合している場合、サンプル及び対応する受容体、すなわちＲ２、Ｒ４及びＲ６を固相結合受容体Ｒ１、Ｒ３及びＲ５に添加し、一緒にインキュベートする。最初に固相の存在下もしくは非存在下においてサンプルを受容体Ｒ１、Ｒ３及びＲ５と接触させ、次工程で受容体Ｒ２、Ｒ４及びＲ６を添加することもできる。本発明のさらなる主題は、受容体Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６を用いるイムノアッセイによる、ＨＩＶに対する抗体の検出方法である。受容体Ｒ１及びＲ２はこの純粋な抗体の試験では用いない。Ｒ３及びＲ４として用いられる受容体は、前に組み合わせ試験において記述したようなＨＩＶ１、ＨＩＶ２又はＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｅｎｖ範囲の１つもしくは幾つかの抗原（ＨＩＶ１／ＨＩＶ１−ＳｕｂＯについてはｇｐ１６０、ｇｐ１２０、ｇｐ４ＬＨＩＶ２についてはｇｐ１４０、ｇｐ１１０、ｇｐ３６）である。ｇｐ４１及び／又はｇｐ３６又はそれらの断片が受容体Ｒ３及びＲ４として好ましく用いられる。Ｒ５及びＲ６として用いられる受容体は−前に組み合わせ試験において記述したように−ＨＩＶ１、ＨＩＶ２又はＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐｏｌもしくはｇａｇ領域に由来する１つもしくは幾つかの抗原である。Ｒ５及びＲ６として用いられる受容体は、好ましくは、ＨＩＶ１、ＨＩＶ２又はＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐｏｌ領域に由来するものである。逆転写酵素（ＲＴ）が受容体Ｒ５及びＲ６として用いるのに特に好ましい。この抗体検出の手順、その試験形式に加えて用いられる受容体の特性は組み合わせ試験のものに類似し、そのためここでは別々に述べることはしない。以下に示される受容体Ｒ１及びＲ２に関する詳細は、上述のＨＩＶ抗体及びＨＩＶ抗原の組み合わせ試験に当てはまる。受容体Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６に関する詳細は、組み合わせ試験はもちろんのこと、ＨＩＶ抗体の検出方法にも当てはまる。受容体Ｒ１の必須成分は、ＨＩＶ１の、及び任意にＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原に、又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合する抗体である。ｐ２４又はｐ２６への特異的な結合に適する全てのサブクラスの抗体を用いることができる。完全な抗体の代わりに、Ｆａｂ、Ｆａｂ’又はＦ（ａｂ'）₂断片のような断片を用いることももちろん可能である。これらの抗体は、残りの試験成分に対する交差反応性を示さない限り、ポリクローナルであってもよい。しかしながら、抗ｐ２４及び抗ｐ２６抗体の特異性に対してなされる要求がＨＩＶサブタイプの認識に関して大きいはずであることから、モノクローナル抗体が好ましく用いられる。したがって、本発明の主題はｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体にも関する。これらの抗体の特性は以下の段落のうちの１つにより詳細に記載される。Ｒ１は固相に直接結合しても、又は固相への結合が特異的結合系を介した間接的なものであってもよい。固相へのＲ１の直接結合は専門家に公知の方法に従う。結合が特異的結合系を介して間接的に行われる場合、Ｒ１はｐ２４又はｐ２６に対する抗体及び特異的結合系の反応パートナーからなるコンジュゲートである。この場合、特異的結合系は互いに特異的に反応することが可能な２つの反応パートナーからなる。それらの結合能力は免疫学的反応又は異なる特異的反応に基づくものであり得る。好ましく用いられる特異的結合系はビオチン及びアビジン又はビオチン及びストレプトアビジンの組み合わせである。好ましいさらなる組み合わせは、ビオチン及び抗ビオチン、ハプテン及び抗ハプテン、抗体のＦｃ断片及びこのＦｃ断片に対する抗体又は炭水化物及びレクチンである。したがって、特異的結合に適するこの対の反応パートナーの一方はＲ１受容体を形成するコンジュゲートの一部である。Ｒ１の特異的結合系の他方の反応パートナーは固相のコーティングである。この特異的結合系の他方の反応パートナーの不溶性担体物質への結合は、専門家に公知の通常の方法に従って行うことができる。この場合、共有結合はもちろんのこと、吸着性結合が適切である。ポリスチレン又は類似のプラスチックから作製された試験管又はマイクロタイタープレートであって、その内面に特異的結合系の反応体がコートされているものが固相としての使用に適する。特に好ましい他の適切な物質は粒子サイズの物質、例えば、ラテックス粒子、磁性粒子、モレキュラーシーブ材料、ガラス体、プラスチック管等である。紙のような多孔性の層状担体を担体として用いることもできる。特に好ましいものは、同様に上述の特異的結合系の対応する結合パートナーをコートした磁性ビーズである。検出反応のため、試験反応が完了した後、これらの微粒子を液相から、例えば濾過、遠心により、又は、磁性粒子の場合には、磁石により分離することができる。Ｒ２受容体は、ＨＩＶ１の、及び任意にＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原にそれぞれ、又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合する１種類の抗体、並びに標識からなる。Ｒ１受容体の場合と同様に、ｐ２４又はｐ２６に特異的に結合するのに適する全てのサブクラスの抗体を用いることができる。完全な抗体の代わりに、Ｆａｂ、Ｆａｂ’又はＦ（ａｂ'）₂断片のようなそれらの断片ももちろん用いることができる。これらの抗体はポリクローナルであってもモノクローナルであってもよい。Ｒ１の場合と同様に、モノクローナル抗体が好ましく用いられる。以下の段落のうちの１つに記載されるようなｐ２４抗原に対する本発明によるモノクローナル抗体がＲ２については特に好ましい。Ｒ１及びＲ２において用いられる抗体が、それぞれ、ｐ２４及びｐ２６抗原の少なくとも２つの異なるエピトープを認識することが重要である。受容体Ｒ１及びＲ２の両者は、ｐ２４及びｐ２６に特異的かつ同時に結合してサンドイッチを形成するのに適するものでなければならない。したがって、Ｒ１及びＲ２における抗体成分によって認識されるエピトープは空間的に切り離されていなければならない。これは、Ｒ１及びＲ２によって認識されるエピトープが重複していてもよいが、両受容体がｐ２４又はｐ２６抗原に同時に結合することができることを確実にするものでなければならないということを意味する。両受容体がｐ２４又はｐ２６に結合する際に互いを大きく妨害するものではないという条件が常に満たされていなければならない。Ｒ１及びＲ２用の受容体混合物を選択する際には、Ｒ１及びＲ２用の受容体と同じものを用いることもできる。特定数のＲ１受容体は固相への結合に適するものであり、残りのＲ１受容体は固相への結合に適するものではなく、代わりに標識を担持する。同じことがＲ２にも通用する。サンドイッチは、固相・Ｒ１・ｐ２４・Ｒ２及び固相・Ｒ１(Ｒ２エピトープ)・ｐ２４・Ｒ２（Ｒ１−エピトープ）の方向で形成することができる。Ｒ２受容体のさらなる成分は標識である。標識として、直接検出可能な物質、例えば、化学発光、電気化学発光、蛍光もしくは放射性物質、又は金属ゾル、ラテックスもしくは金粒子が用いられる。酵素又はハプテン（例えば、ジゴキシゲニン）のような他の分子又は蛍光染色、例えばフルオレセイン、も標識として好ましい。特に好ましい標識は、WO96／03651に記載されるような電気化学発光金属キレートである。ルテニウム錯体が金属キレートとして好ましく用いられ、これもまたWO96／03651に開示されている。標識方法は専門家に公知であり、ここでさらに説明する必要はない。標識は−一般に公知であるように−化学発光、蛍光もしくは放射性物質又は金属ゾル、ラテックスもしくは金属粒子を測定することにより、又は酵素によって変換された基質を測定することにより検出する。また、標識はさらなる受容体によって間接的に検出することもでき、このさらなる受容体はシグナル生成基とカップリングし、Ｒ２の標識、例えばジゴキシゲニンのようなハプテン、と特異的に結合する。ハプテン標識、特にジゴキシゲニン標識受容体の生成はWO96／03423に記載されている。シグナル生成基、例えば、電気化学発光、蛍光もしくは放射性物質又は酵素又は金粒子の検出は専門家に公知の方法に従って行う。例えば、Ｒ２の標識に特異的に結合する抗体又は抗体断片をさらなる受容体として用いることができる。この間接標識検出を適用する場合、Ｒ２の標識は好ましくはジゴキシゲニン又は異なるハプテンである；この検出は、ペルオキシダーゼ又は上述のような異なる標識で標識した、ジゴキシゲニン又はそのハプテンに対する抗体を用いて行う。受容体Ｒ１及びＲ２の成分として、モノクローナル抗体又はそれらの断片が好ましく用いられる。したがって、本発明の主題は、ＨＩＶ１のｐ２４抗原に特異的に結合し、かつそれに対してサンドイッチを形成するのに十分な親和性を有するモノクローナル抗体にも関する。モノクローナル抗体は、専門家に公知のタンパク質を検出するための全ての試験、例えば、サンドイッチ試験において用いることができる。本発明によるモノクローナル抗体は多くの免疫グロブリンクラス（Ｉｇ）に属し得る。これらのモノクローナル抗体は、好ましくは、ＩｇＧ１クラスに属する。さらなる成分、例えば、酵素もしくはハプテンのような標識又は不均一イムノアッセイにおいて固相への抗体の結合に必要な結合パートナーのカップリングは、ＩｇＧ１抗体で好ましく行うことができる。抗体断片、例えば、Ｆ（ａｂ'）₂ 、Ｆａｂ’又はＦａｂ断片の産生はＩｇＧ１クラスでは問題にならない。本発明によると、「モノクローナル抗体」という用語は、完全な抗体並びに免疫試験及び他の手順において通常適用されるそれらの断片、例えば、Ｆ（ａｂ' ）₂、Ｆａｂ’又はＦａｂ断片を意味する。また、抗原結合特性が明らかに影響を受けることがない限り、モノクローナル抗体の修飾によって産生される抗体も含まれる。遺伝子工学の手段により、例えば、マウスにおいて通常産生されるモノクローナル抗体の一部を適切なヒト抗体配列で置換してイムノアッセイにおける非特異的結合を最小にすることができる。このようなキメラモノクローナル抗体の産生手順は、例えばAntibody Engineering，J．McCafferty，H．R．Hoogenb oom and D．J．Chiswell，The Practical Approach Series，Series Editor:B． D．Hames，Oxford University Press，1996から、専門家に公知である。抗体の適合性のためには、これらの抗体によって認識されるｐ２４のエピトープが必須であり、これはそれらが全てのサブタイプの認識に必須であるためである。ｐ２４エピトープについては、Gittiら（Science 1996，Vol 273，p.231-23 5）からの構造情報を基礎として用いることができる。したがって、以下に記載される抗体のような、同じエピトープ−又はこれらのエピトープと重複するエピトープ−を認識する、異なった様式で産生される抗体も本発明によるものである。このようなエピトープは、例えば、ペップスキャン（Pepscan）法により特徴付けることができる。本願の実施例４には、本発明による抗体のエピトープマッピングの正確な手順が記載されている。本発明による抗体が結合するｐ２４のエピトープ領域は、好ましくは、以下のアミノ酸配列の群から選択される。これらの配列は配列決定プロトコルにも記載されており、配列番号１−３６を参照されたい。本発明の主題は、配列番号１〜３６によるｐ２４エピトープに特異的に結合する、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体に関する。本発明のさらなる主題は、配列番号３、９、１７、３１又は３４によるｐ２４エピトープに特異的に結合する、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体である。これらの配列は上記リストにおいて太字で示されている。配列番号３、９、１７、３１又は３４によるｐ２４エピトープは本発明のさらなる主題を表す。本発明によるモノクローナル抗体は、例えば、細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ６Ａ９／５から産生させることができる。モノクローナル抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４（寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２３００）及びｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４（寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２３００）及びｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２３０１）はGerman collection of microorganism and cell culture(“De utsche Sammulung von Mikroorganismen und Zellkulturen（DSMZ）GmbH，Masc heroder Weg 1b，D-38124 Braunschweig)に１９９７年２月２６日に寄託された。モノクローナル抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ６Ａ９／５はＤＳＭＡＣＣ２３１０（寄託番号）としてＤＳＭＺに１９９７年６月１１日に寄託された。実施例４に記載されるエピトープマッピング手順により、細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５から産生される抗体が系列（sequential）エピトープは認識しないが、ｐ２４の原体（conformation）エピトープには結合することが示された。同じ手順により、細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（ＤＳＭＡＣＣ２３０１）から産生される抗体が配列番号９によるペプチドに相当するエピトープに結合することが示された(Gittiら1996，Science 273，231-235によるｐ２４構造情報)。関わる実際のエピトープはさらに小さいことも示すことができた。ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３がｐ２４に特異的に結合するためには、１１個のアミノ酸のみを含む配列番号３４によるエピトープで十分である。同じ手順により、細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４（ＤＳＭＡＣＣ２３００）から産生される抗体が配列番号３によるペプチドに相当するエピトープに結合することが示された。特異的結合に必要なエピトープはさらに小さいことも示されている：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４がｐ２４に特異的に結合するためには、１５個のアミノ酸を含む配列番号３１によるエピトープで十分である。同じ手順により、細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１（ＤＳＭＡＣＣ２２９９）が配列番号１７によるエピトープに相当するエピトープに結合することが示された。細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１及びｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４から産生される抗体は、従来特徴付けられているＨＩＶ１のｐ２４エピトープだけではなくＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４エピトープにも結合する。ＨＩＶ１及びＨＩＶ１−サブタイプ０のｐ２４抗原を同時に認識するためには、これらの細胞系から産生される抗体が特に適する。実施例５では、本発明による抗体のｐ２４サブタイプ認識に関する試験が示されている。これらの２つの抗体のうち、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１は固相側で、すなわち、受容体Ｒ１として好ましく用いられ、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４は受容体Ｒ２として好ましく用いられる。ＨＩＶ１及びＨＩＶ１−ＳｕｂＯを効率的に同時に認識するためには、抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞４Ｂ１／１及びｍＡｂ＜ｐ２４＞６Ａ９がＲ１として、並びにｍＡｂ＜ｐ２４＞２Ｅ７／３及びｍＡｂ＜ｐ２４＞６Ｄ９／４がＲ２として好ましく用いられるが、これは、この組み合わせが異なるＨＩＶ１及びＨＩＶ１−サブタイプ０ウイルス単離体の最も包括的な認識を保証するためである(実施例５を参照されたい)。本発明のさらなる主題は、等しい様式でｐ２４に結合する抗体、好ましくはモノクローナル抗体、例えば、モノクローナル抗体抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５(ＤＳＭＡＣＣ２３１０)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４（ＤＳＭＡＣＣ２３００）又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（ＤＳＭＡＣＣ２３０１）である。「等しい様式で結合する」とは、ここでは、これらの抗体が寄託されたモノクローナル抗体と同じ親和性で、又はそれに匹敵するほど高い親和性でｐ２４に結合するこンドイッチＥＬＩＳＡで適切な試験を行う際に検出することができる。本発明のさらなる主題は等しい様式でｐ２４に結合する抗体、好ましくはモノクローナル抗体、例えば、寄託された抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５(ＤＳＭＡＣＣ２３１０)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４（ＤＳＭＡＣＣ２３００）又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（ＤＳＭＡＣＣ２３０１）である。これは、例えば、試験により、測定することで検出することができる。好ましくは、これらの抗体はｐ２４に対する高親和性を有する。本発明のさらなる主題は、上記段落に記載される抗体のうちの少なくとも１種類の、ＨＩＶ感染を検出するための診断試験における使用である。本発明のさらなる主題は、同様に上に記載される、ＨＩＶ感染を検出するための本発明による組み合わせ試験における前述の抗体の使用である。本発明によるモノクローナル抗体は−既に公知であるように−適切な試験動物、例えば、マウス、ラット、ウサギを単離ｐ２４（ヒト組織から単離したもの又は組換体）で免役し、続いて免役した動物の脾臓細胞をミエローマ細胞と融合させることにより産生させることができる。脾臓細胞に加えて、リンパ球源として、免役した動物（好ましくは、マウス又はラット）に由来する末梢血リンパ球（ＰＢＬ）又はリンパ腺の細胞を用いることができる。免役については、ｐ２４から誘導される合成ペプチドを、これは単独で用いることも担体に結合させることもできるが、所望の抗体を産生させるために単離ｐ２４の代わりに用いることができる。その代わりに、ｐ２４に対して生じた抗体を有するヒト提供者からのリンパ球を不死化することができる。抗ｐ２４抗体を産生するこのようなリンパ球は、ヒトミエローマ細胞系との融合、又は抗体産生ハイブリドーマ細胞へのエプシュタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）形質転換のいずれかにより不死化することができる(Monoclonal Antibody and Immunosensor Technology,A．M．Campbell， rten，Springer Verlag 1990；Monoclonal Antibody Production Techniques an d Applications，ed．Lawrence B．Schook，Marcel Dekker Verlag 1987)。Ｒ３の必須成分は、検出しようとする、ＨＩＶ１もしくはＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２−ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する抗体に特異的に結合させるのに適する抗原である。この抗原は、好ましくはｇｐ４１又はｇｐ１２０( ＨＩＶ１)及びｇｐ３６又はｇｐ１１０（ＨＩＶ２）に対する抗体への結合に適するものであり、特に好ましくはそれぞれｇｐ４１及びｇｐ３６に対する抗体への結合に適するものである。「抗原」という用語は、ＨＩＶ−ｅｎｖ遺伝子産物に対する抗体に特異的に結合することが可能な分子である。関わる抗原は天然抗原に相当し得る。したがって、ウイルスからの単離又は組換えによる方法で産生させることができる。検出しようとする抗体に特異的に結合させるのに適する、合成又は組換えで産生させたペプチドを用いることもできる。また、この抗原は他のリガンド、例えば、脂質又は糖によって誘導体化することもできる。アミノ酸交換（Ｄ及びＬアミノ酸又は同類分子）又はアミノ酸の欠失もしくは挿入も可能である。試験手順に有利なさらなる抗原修飾、例えば、WO96／03652に記載されるポリハプテンの産生は専門家が容易に見出すことができる。唯一の条件は、修飾に関わらず、測定しようとする抗体が修飾抗原への特異的な結合に依然として適するものであるということである。これは、Ｒ３に属する抗原上の抗体の結合部位が保存されなければならないことを意味する。Ｒ３は固相に直接結合させることが可能であり、又は固相への結合は特異的結合系を介した間接的なものである。固相へのＲ３の直接的及び間接的結合は、上述の受容体Ｒ１のものと同様である。受容体Ｒ４は、ＨＩＶ１もしくはＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２−ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する抗体に特異的に結合させるのに適する抗原、並びに標識からなる。この抗原は、好ましくはｇｐ４１又はｇｐ１２０及びｇｐ３６又はｇｐ１１０に対する抗体への結合に適するものであり、特に好ましくは、それぞれｇｐ４１及びｇｐ３６に対する抗体への結合に適するものである。抗原の定義に加えて抗原の条件はＲ３受容体について記述したものと同じである。好ましくは、同じ抗原が受容体Ｒ３及びＲ４の「抗原成分」として用いられる。しかしながら、異なる抗原を用いることも可能である。しかしながら、Ｒ３及びＲ４の抗原成分の両者が測定しようとする同じ抗原に結合させるのに適するものであることは確実なものとしなければならない。１つの条件は、測定しようとする抗体が２つの受容体Ｒ３及びＲ４を常に架橋するということである。受容体Ｒ４のさらなる成分は標識である。Ｒ４の標識の条件は上述のＲ２の標識のものと同じである。好ましくは、同じ標識がＲ２及びＲ４に用いられる。受容体Ｒ５は、主として、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２のｐｏｌ又はｇａｇ領域の抗原ではあるが、受容体Ｒ１又はＲ２と反応する可能性のあるｐ２４又はｐ２６のエピトープ又は配列ではない抗原に対する、測定しようとする抗体に特異的に結合させるのに適する抗原からなる。この抗原は、好ましくはｐｏｌ領域の遺伝子産物に対する抗体、特に好ましくは逆転写酵素（ＲＴ）に対する抗体に結合させるのに適するものである。比較的本来の構造を有する、ヘテロ二量体である（５１及び６６ｋＤａの２つのサブユニットからなる）天然逆転写酵素（ＲＴ）が特に適切である。しかしながら、これらのサブユニッ 3975-13978(1989)に記載したような発現クローンによって発現された組換え産生精製ＲＴが特に好ましく用いられる。ＨＩＶ１及びＨＩＶ２−ＲＴの間の、これらの２つのタンパク質の約６０％、部分的には１００％の一致という高程度のアミノ酸相同性のため、一般には、ＨＩＶ２抗体によっても認識される十分なＨＩＶ１−ＲＴが存在する。ＨＩＶ２−ＲＴは、任意に、単独で、又は追加的に用いることができる。ＲＴの代わりに、受容体Ｒ１又はＲ２と反応するｐ２４又はｐ２６のエピトープは除くｇａｇ領域の遺伝子産物に対する抗体に結合させるのに適する抗原を用いることができる。この抗原は、好ましくは、ｇａｇ−ｐ１７に対する抗体に結合させるのに適するものである。受容体Ｒ３及びＲ４に対して示される「抗原」という用語の定義が、特異性を除いて、Ｒ５にも当てはまる：受容体Ｒ５の場合、この抗原は確かに、ＨＩＶ−ｇａｇ又はｐｏｌ遺伝子産物に対する抗体に特異的に結合させるのに適する分子である。Ｒ５は固相に直接結合させることができ、又はその結合は特異的結合系を介した間接的なものである。固相へのＲ５の直接的又は間接的結合は上述の受容体Ｒ１及びＲ３のものと同様である。受容体Ｒ６は、主として、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２のｐｏｌ又はｇａｇ領域の抗原に対する、測定しようとする抗体に特異的に結合させるのに適する抗原からなる。この抗原は、好ましくはｐｏｌ領域の遺伝子産物に対する抗体、特に好ましくは逆転写酵素（ＲＴ）に対する抗体に結合させるのに適するものである。Ｒ５に対して上に示される抗原の特性に関する詳細がＲ６にも当てはまる。受容体Ｒ５に対して示される「抗原」という用語の定義がＲ６にも当てはまる。好ましくは、同じ抗原が受容体Ｒ５及びＲ６の「抗原成分」として用いられる。しかしながら、異なる抗原を用いることも可能である。しかしながら、Ｒ５及びＲ６の抗原成分の両者が測定しようとする同じ抗体への結合に適するものであることを確実なものとしなければならない。測定しようとする抗体がこれらの２つの受容体Ｒ５及びＲ６に連結するという条件が常に存在する。受容体Ｒ６のさらなる成分は標識である。Ｒ６の標識の条件は上述の受容体Ｒ２及びＲ４の標識のものに類似する。好ましくは、同じ標識がＲ２、Ｒ４及びＲ６に用いられる。受容体Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６として用いられる全ての抗原は別々に用いることができ、又は、好ましくは、架橋オリゴマーもしくはWO96／03652によるポリハプテン（これらの抗原を有する担体分子もしくは粒子）として用いることもできる。これはＩｇＭの認識を改善する。専門家に公知の全ての生物学的液体をサンプルとして用いることができる。好ましいサンプルは、全血、血清、血漿、尿、唾液等の体液である。サンプル、固相及び受容体に加えて、試験調製品は−用途に応じて−さらなる添加物、例えば、バッファー、塩、界面活性剤、タンパク質添加物、例えば、ＲＳＡ及びタンパク質断片、例えば、ペプトンを含んでいてもよい。必要とされる添加物は専門家に公知であり、又は専門家が容易に見出すことができる。本発明のさらなる主題はＨＩＶ感染を検出するための試薬キットであり、これは、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合させるのに適しており、かつ固相に結合し、又はそれに結合させるのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ１を含み、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合させるのに適しており、かつ標識を担持する少なくとも１種類の受容体R2を含み、ここでＲ１及びＲ２によって認識されるエピトープは異なり、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−Ｓｕｂ０及び／又はＨＩＶ２抗体に結合させるのに適しており、かつ固相に結合し、又はそれに結合させるのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ３を含み、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−Ｓｕｂ０及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合させるのに適しており、かつ標識を担持する少なくとも１種類の受容体Ｒ４を含み、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−Ｓｕｂ０及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合させるのに適しており、かつ固相に結合し、又はそれに結合させるのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ５を含み、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−Ｓｕｂ０及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合させるのに適しており、かつ標識を担持する少なくとも１種類の受容体Ｒ６を含み、これに加えて必要であれば他の通常の添加剤を含む。本発明のさらなる主題は、細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４及び／又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３から産生される抗体が受容体Ｒ１及びＲ２として用いられる、上述の試薬キットである。加えて、本発明のさらなる主題は、受容体Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６に加えて必要であればさらなる通常の添加物を含む、上述のＨＩＶ抗体に対する抗体を検出するための試薬キットである。受容体Ｒ１及びＲ２は含まれない。本発明のさらなる主題はＨＩＶ感染を検出するための試験片であり、これは、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−Ｓｕｂ０のｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合させるのに適しており、かつ固相に結合し、又はそれに結合させるのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ１を含み、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−Ｓｕｂ０のｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合させるのに適しており、かつ標識を担持する少なくとも１種類の受容体Ｒ２を含み、ここでＲ１及びＲ２によって認識されるエピトープは異なり、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−Ｓｕｂ０及び／又はＨＩＶ２抗体に対して特異的であるのに適しており、かつ固相に結合し、又はそれに結合させるのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ３を含み、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−Ｓｕｂ０及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合させるのに適しており、かつ標識を担持する少なくとも１種類の受容体Ｒ４を含み、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−Ｓｕｂ０及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合させるのに適しており、かつ固相に結合し、又はそれに結合させるのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ５を含み、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−Ｓｕｂ０及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合させるのに適しており、かつ標識を担持する少なくとも１種類の受容体Ｒ６を含み、これらに加えて必要であれば他の通常の添加剤を含む。本発明のさらなる主題は、受容体Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６を含むことに加えてさらなる通常の添加物を必要とする、ＨＩＶに対する抗体を検出するための試験片である。受容体Ｒｌ及びＲ２は含まれない。図１〜５は以下のものを示す：図１：モノクローナル抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５のプラトー測定：エピトープマッピングに最適のｍＡｂ試験濃度の決定は実施例４．２に記載される手順に従って行う。図２：モノクローナル抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１のプラトー測定。図３：モノクローナル抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４のプラトー測定。図４：モノクローナル抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３のプラトー測定。図５：ｐ２４エピトープマッピング；実施例４．２．３に従う＜ｐ２４＞モノクローナル抗体と幾つかのペプチド混合物との反応。本発明を以下の例においてさらに説明する。実施例実施例１：組み合わせ試験の実施７３１９、Boehringer Mannheim GmbH、ドイツ）の使用説明書に記載される手順と同様に行う。受容体Ｒ１ないしＲ６を除いて、Boehringer Mannheim co バッファーを用いる。この試験は、機器ＥＳ７００（製造者：Boehringer Mannh eim GmbH、ドイツ）を用いて２５℃、１００μlのサンプル容積で、ストレプトアビジン被覆試験管内において、２段階サンドイッチＥＬＩＳＡの原理に従って行う。以下の試薬を用いる：・インキュベーションバッファー：トリス２５ｍＭｐＨ７．５；ウシ血清成分・結合バッファー：トリス２５ｍＭｐＨ７．５；ウシ血清成分・結合体：ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）標識ヒツジ抗ジゴキシゲニン抗体ｐＨ４．４中の２．２’アジノ−ジ［３−エチルベンズチアゾリンスルホネート］１．９ミリモル／ｌ、過ホウ酸ナトリウム３．２ミリモル／ｌ）以下の物質を受容体Ｒ１ないしＲ６として用いる(Ｂｉ＝ビオチンの略語、Ｄｉｇ＝ジゴキシゲニンの略語)：・Ｒ１：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５−ＩｇＧ−Ｂｉ、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ −４Ｂ１／１−ＩｇＧ−Ｂｉ・Ｒ２：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４−ＩｇＧ−Ｄｉｇ、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３−ＩｇＧ−Ｄｉｇ９、Boehringer Mannheim Germanyにおいて用いられるペプチドに従うｇｐ３６ −、ｇｐ４１−ペプチド−Ｂｉ及びポリハプテン−Ｂｉ９、Boehringer Mannheim Germanyにおいて用いられるペプチドに従うｇｐ３６ −、ｇｐ４１−ペプチド−Ｄｉｇ及びポリハプテン−Ｄｉｇ・Ｒ５：ＲＴ、参照番号１４６５３３３、Boehringer Mannheim Germanyから生成したＲＴ−Ｂｉ・Ｒ６：ＲＴ、参照番号１４６５３３３、Boehringer Mannheim Germanyから生成したＲＴ−Ｄｉｇ活性化ビオチン及びジゴキシゲニン誘導体を用いる必要な誘導体化は、教科書から採用され、かつ専門家に公知の手順に従って行った。ＲＴ又は抗体の誘導体化のために好ましく用いられる物質は、Ｄ−ビオチン−ε−アミノヘキサノイル −Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド及びジゴキシゲニン−３−カルボキシメチルエーテル−ε−アミノヘキサノイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドである。受容体Ｒ１ないしＲ６（抗体、ポリハプテン及びＲＴ各々５０−３００ｎｇ／ｍｌ、ペプチド５−５０ｎｇ／ｍｌ）をインキュベーションバッファーと共にストレプトアビジン被覆管に移し、１２０分間インキュベートする。数回の洗浄工程及び結合体との６０分間のインキュベートの後、基質溶液を添加し、６０分後に生じた染料溶液の吸光値を４２２ｎｍで測光することで決定する。実施例２：異なる組み合わせ試験の比較本発明を当該技術分野の状況と比較するため、Boston Biomedica Inc.、ブリッジウォーター、ＵＳＡ（ＢＢＩ）からの市販されているＨＩＶ抗体陽転パネルを測定し、ＢＢＩが配布するデータと比較した(表１)。ＢＢＩパネルＮ：参照番号ＰＲＢ９１４ＢＢＩパネルＷ：参照番号ＰＲＢ９２３ＢＢＩパネルＡＧ：参照番号ＰＲＢ９３２ＨＩＶ−Ａｇ試験：Abbott Monoclonal HIV Ag、製品番号２Ａ８１（ＢＢＩデータ）抗ＨＩＶ試験１：Abbott HIV1/2、製品番号３Ａ７７（ＢＢＩデータ）抗ＨＩＶ試験２：Gen.Sys.HIV1/2、製品番号０２３０（ＢＢＩデータ）組み合わせ試験１：抗ｐ２４抗体、ｇｐ４１及びｇｐ３６（説明は以下を参照）組み合わせ試験２：抗ｐ２４抗体及びＲＴ（説明は以下を参照）組み合わせ試験３：抗ｐ２４抗体、ｇｐ４１、ｇｐ３６及びＲＴ（説明は以下を参照）３つの組み合わせ試験は、用いられる個々の抗原以外は同じ試薬を用いる同一の条件下で行った。試験手順は実施例１と同様である。基本的な物質は（実施例 (参照番号１５５７３１９、Boehringer Mannheim、ドイツ)の試薬及び２５℃での適用であった。以下の抗体又は抗原を組み合わせ試験１ないし３に用いた。・組み合わせ試験１：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５−ＩｇＧ−Ｂｉ、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂのビオチン化合成ペプチド及びポリハプテン(ｇｐ４１及びｇｐ３６)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４−ＩｇＧ−Ｄｉｇ、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３− キシゲニン化合成ペプチド及びポリハプテン（ｇｐ４１及びｇｐ３６）・組み合わせ試験２：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５−ＩｇＧ−Ｂｉ、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１−ＩｇＧ−Ｂｉ及びビオチン化組換えＨＩＶ逆転写酵素ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４−ＩｇＧ−Ｄｉｇ、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３−ＩｇＧ−Ｄｉｇ及びジゴキシゲニン化組換えＨＩＶ逆転写酵素・組換え試験３（本発明によるもの）Ｒ１：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５−ＩｇＧ−Ｂｉ、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ −４Ｂ１／１−ＩｇＧ−Ｂｉプチド及びポリハプテン（ｇｐ４１及びｇｐ３６）Ｒ５：ビオチン化組換えＨＩＶ逆転写酵素Ｒ２：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４−ＩｇＧ−Ｄｉｇ、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３−ＩｇＧ−Ｄｉｇ合成ペプチド及びポリハプテン（ｇｐ４１及びｇｐ３６）Ｒ６：ジゴキシゲニン化組換えＨＩＶ逆転写酵素全ての試験について信号／カットオフ比を示す(カットオフ指数、ｃｏｉ)。これらのデータは以下のように解釈する：０．９未満の値は陰性、０．９と１．０との間の値は移行領域及び値≧１．０は陽性。カラム“日”は最初の血液採取が登録されてからの経過日数を示す。用いられるパネルは異なる検体（抗原及び抗体）を含み、これらは“日”の下に示される期間の後の抗体陽転期に生じる。表１：異なるＨＩＶ検出試験の比較比較試験とは対照的に、本発明による組み合わせ試験（組み合わせ試験３）が感染の全ての段階を完全に検出することがわかる。実施例３：異なるサブタイプのＨＩＶ１ウイルス単離体の認識本発明による４種類の抗体を用いることで、広範なＨＩＶ１サブタイプの認識が確実なものとなる。試験手順、試薬組成及び評価は、実施例２に記載される本発明による組み合わせ試験３におけるものと同じである。サンプルとして、以下に列挙される全てのＨＩＶ１ウイルス単離体（グループＭ及びサブタイプ０）を希釈したが、これは全ての非希釈単離体が同じ最大信号を生じ、したがって差異を示さなかったためである。表２：本発明による組み合わせ試験が全てのＨＩＶ１サブタイプの抗原及び抗体を確実に検出することがわかる。実施例４：ｐ２４に対するモノクローナル抗体のエピトープマッピング４．１ペプチド合成ＨＩＶ−ｐ２４ウイルスタンパク質のアミノ酸配列の関連部分配列を、バッチペプチド合成機、例えば、Applied Biosystems Ａ４３１又はＡ４３３を用いるフルオレニル−メチル−オキシカルボニル−（Ｆｍｏｃ）−固相ペプチド合成により生成させた。このために、各々４．０当量の以下のＦｍｏｃアミノ酸誘導体を用いる：表３：これらのアミノ酸又はアミノ酸誘導体をＮ−メチルピロリドンに溶解する。ペプチドを４００〜５００ｍｇの４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノキシ樹脂（Tetrahedron Letters 28(1987)，2107）上に０．４−０．７ミリモル／ｇの負荷（JACS 95(1973)，1328）で積み重ねる。Ｆｍｏｃ−アミノ酸誘導体のカップリング反応は、２０分の間に、４ジシクロヘキシルカルボジイミド当量及び４Ｎ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール当量で、反応媒体としてのジメチルホルムアミド中で行う。各々の合成工程の後、Ｆｍｏｃ基をジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンを用いて２０分以内に分離する。これらのペプチドが分子内ジスルフィド架橋を含む場合、そのＦｍｏｃ保護ペプチド配列を固相上で酸化した後、ヘキサフルオロイソプロパノール／ジクロロメタン中で人工スペーサーをヨウ素とカップリングさせる(Kober et al. ，The Peptide Academic Press，New York，1981，pp.145-47);続いて、Ｎ末端Ｆｍｏｃ保護基を分離し、スペーサーに加えてＮ末端ビオチンをカップリングさせる。合成樹脂からのペプチドの放出及び酸−不安定保護基の開裂−リジンのフェニルアセチル保護基は除く−を、２０ｍｌのトリフルオロ酢酸、０．５ｍｌのエタンジチオール、１ｍｌのチオアニソール、１．５のフェノール及び１ｍｌの水を用いて４０分で室温で行う。続いて、この反応溶液を３００ｍｌの冷却ジイソプロピルエーテルと混合し、ペプチドを完全に沈殿させるために０℃で４０分間保存する。沈殿を濾過し、ジイソプロピルエーテルで洗浄し、少量の５０％酢酸で溶解した後、凍結乾燥する。得られた物質を、Delta-PAK RP C18材料を用いて対応する勾配（溶出液Ａ：水、０．１％トリフルオロ酢酸、溶出液Ｂ：アセトニトリル、０．１％トリフルオロ酢酸）を上回る分離用ＨＰＬＣ（カラム５０×３００ｍｍ、１００Å、１５μ）により、１２０分で精製する。溶出した物質の正体をイオンスプレー（ionic spray）質量分析によりチェックする。表４：ｐ２４エピトープのペプチド配列４．２エピトープマッピング４．２．１一般的な免疫学的試験1+2（BM 1 165 062）と同様に行った。試験原理はストレプトアビジン技術を用いる２段階サンドイッチＥＬＩＳＡに従う。しかしながら、ヒト血清の代わりに異なるモノクローナル＜ｐ４＞抗体を用い、ビオチン化ペプチド又は組換えｐ２４で測定した。検出は＜マウスＩｇＧ＞−ＰＯＤ（BM 1 431 323）を用いて行う。残りのさらなる試薬、例えば、洗浄液、ストレプトアビジン管、ＡＢＴ析機ＥＳ２２又はＥＳ６００で行った。４．２．２プラトー測定エピトープマッピングに最適なｍＡｂ初期濃度の決定は上述の試験概念で行った。ビオチン化組換えｐ２４（２００ｎｇ／ｍｌの初期量）を抗原として用いた。表５：このプラトー測定は図１ないし４に図式的に表されている。４．２．３エピトープマッピングマッピングは、ｐ２４のＨＩＶ１コンセンサスＢ配列を１０上回るパターンで合成した２５個のアミノ酸を有するＮ末端ビオチン化ペプチド（配列番号１−３０のペプチド）で行った。まず最初に、各々５種類の異なるビオチン化ペプチドを含む６種類の異なるペプチド混合物Ａ−Ｆ（ペプチド当たりの使用量：６０ｎｇ／ｍｌ）で大まかなマッピングを間接的試験概念を用いて測定した。混合物Ａ：１混合物Ｂ：６混合物Ｃ：１１２７１２３８１３４９１４５１０１５混合物Ｄ：１６混合物Ｅ：２１混合物Ｆ：２６１７２２２７１８２３２８１９２４２９２０２５３０表６：ペプチド混合物Ａ−Ｆとの抗体の反応性大まかなマッピングの結果：３種類の抗体が各々１種類のペプチド混合物と特異的に結合する(図式的な表示は図５を参照)。４．２．４精細マッピング精細マッピングのため、これらの反応性混合物からのペプチド（使用量：１００ｎｇ／ｍｌ）を間接的試験概念で別々に用いた。表７：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１と混合物Ｄからの単一抗原表８：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３と混合物Ｂからの単一抗原表９：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４と混合物Ａからの単一抗原表１０：反応性ペプチドの配列表１１：ｐ２４ＨＩＶ１コンセンサスＢ及びサブタイプ０のエピトープの配列の比較配列比較によれば、ｍＡｂ６Ｄ９及び４Ｂ１は、その配列中に最も多くの広範囲にわたる相同性があるため、ｐ２４（Ｓｕｂ０）と交差反応するであろう。エピトープをさらに絞り込むため、第２の精細マッピングをペプチド３(＝配列番号３)、３Ａ(＝配列番号３１)、３Ｂ（配列番号３２）及びｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４；ペプチド９(配列番号９)、９Ａ(＝配列番号３３)、９Ｂ（＝配列番号３４）及びｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３；これに加えて、ペプチド１７(＝配列番号１７)、１７Ａ(＝配列番号３５)、１７Ｂ（＝配列番号３６）及びｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１で行った。表１２：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１と単一抗原１７、１７Ａ及び１７Ｂ表１３：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３と単一抗原９、９Ａ及び９Ｂ表１４：ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４と単一抗原３、３Ａ及び３Ｂこれから、抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１のエピトープをさらに絞り込むことはできないことがわかる。ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３のエピトープは以下の配列に最小化することができる：９Ｂ（配列番号３４）ＥＥＡＡＥＷＤＲＶＨＰｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４のエピトープは−重要なシグナルを失うことなく−以下の配列まで短くすることができる：３Ａ（配列番号３１）ＱＡＩＳＰＲＴＬＮＡＷＶＫＶＩ実施例５：モノクローナル抗ｐ２４抗体によるＨＩＶサブタイブの認識この試験は、Enzymuntest゜anti-HIV1+２＋Subtype0(参照番号１５５７３１９、Boehringer Mannheim、ドイツ）の原理に従う実施例１及び２に従って行った。しかしながら、ＨＩＶサブタイプの認識を試験するため、受容体Ｒ１及びＲ２、すなわち、ｐ２４に対するモノクローナル抗体のみを用いた。使用量は各々２５０ｎｇｍＡｂ／ｍｌであった。表１５：ｍＡｂによるｐ２４（ＨＩＶ１及びＨＩＶ１−Ｓｕｂ０）の認識モノクローナル抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１及びモノクローナル抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５が各々Ｒ１として、すなわち、固相側での使用に適することが示される。モノクローナル抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４及びｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４は、Ｒ２としての、すなわち検出側での使用に好ましく適する。ＨＩＶ１及びＨＩＶ１−Ｓｕｂ０のｐ２４の効率的な同時認識のためには、４種類全ての抗体が一緒に好ましく用いられる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１１年３月１２日（１９９９．３．１２）【補正内容】請求の範囲１．ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２のｅｎｖ領域に対する少なくとも１種類の抗体、並びにＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２のｐｏｌ及び／又はｇａｇ領域に対する少なくとも１種類の抗体の特異的検出を用いるイムノアッセイによりＨＩＶ感染を診断するための方法であって、前記ｇａｇ領域がｐ２４／ｐ２６の配列を含まない、前記方法。２．ＨＩＶ感染の検出を不均一イムノアッセイにより行う、請求項１記載の方法。３．検出のために、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合でき、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ１、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２により認識されるエピトープは異なるものである、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ３、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ４、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ５、及びｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ６を用い、必要により液相から固相を分離して該２つの相のうちの一方で標識の測定を行う、請求項１又は２記載の方法。４．受容体Ｒ１及びＲ２がＨＩＶ１のｐ２４抗原に特異的に結合でき、受容体Ｒ３及びＲ４がｅｎｖ領域の抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１抗体に特異的に結合でき、かつ受容体Ｒ５及びＲ６がｇａｇ又はｐｏｌ領域の抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１抗体に特異的に結合できる、請求項２又は３記載の方法。５．受容体Ｒ５及びＲ６がｐｏｌ領域の抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１抗体に特異的に結合できる、請求項３又は４記載の方法。６．受容体Ｒ５及びＲ６がＨＩＶ逆転写酵素に対する抗体に特異的に結合できる、請求項３〜５のいずれかに記載の方法。７．受容体Ｒ５及びＲ６がｇａｇ−ｐ１７抗原に対する抗体に特異的に結合できる、請求項３〜５のいずれかに記載の方法。８．ＨＩＶ１−ＳｕｂＯの感染も検出される、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。９．グループＭの全てのＨＩＶ１サブタイプの感染も検出される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。１０．受容体Ｒ１及びＲ２が、各々、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原の異なるエピトープ及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原の異なるエピトープを認識する幾つかの受容体の混合物である、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。１１．ＨＩＶに対する抗体を検出するための方法であって、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ３、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ４、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ５、及びｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ６を用い、必要により液相から固相を分離して該２つの相のうちの一方で標識の測定を行う、ここで、前記ｇａｇ領域はｐ２４／ｐ２６の配列を含まない、前記方法。１２．配列番号３、９、１７、３１又は３４記載のｐ２４エピトープに特異的に結合する、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体。１３．細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５(寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２３１０)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４（寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２３００）又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２３０１）から産生される、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体。１４．細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５(ＤＳＭＡＣＣ２３１０)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ −６Ｄ９／４（ＤＳＭＡＣＣ２３００）又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（ＤＳＭＡＣＣ２３０１）から産生されるモノクローナル抗体と同じ様式でｐ２４に結合する、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体。１５．細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５(ＤＳＭＡＣＣ２３１０)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ −６Ｄ９／４（ＤＳＭＡＣＣ２３００）又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（ＤＳＭＡＣＣ２３０１）から産生されるモノクローナル抗体と同じエピトープに結合する、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体。１６．ＨＩＶ感染を検出するための診断試験における、請求項１３〜１５のいずれかに記載の少なくとも１種類のモノクローナル抗体の使用。１７．ＨＩＶ感染を検出するための、請求項１〜１０記載の方法の診断試験における、請求項１３〜１５のいずれかに記載の少なくとも１種類のモノクローナル抗体の使用。１８．モノクローナル抗体ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５（寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２３１０）と組み合わせた、請求項１２記載の少なくとも１種類のモノクローナル抗体の使用。１９．ＨＩＶ感染を検出するための試薬キットであって、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ１、ＨＩＶ１，，ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２により認識されるエピトープは異なるものである、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ３、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ４、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ５、及びｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ６を含み、これらに加えて必要であれば他の通常の添加物を含む、ここで、前記ｇａｇ領域はｐ２４／ｐ２６の配列を含まない、試薬キット。２０．細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５(ＤＳＭＡＣＣ２３１０)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ −６Ｄ９／４（ＤＳＭＡＣＣ２３００）又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（ＤＳＭＡＣＣ２３０１）から産生される抗体を受容体Ｒ１及びＲ２として用いる、請求項１９記載の試薬キット。２１．ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ１、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２により認識されるエピトープは異なるものである、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ３、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ４、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ５、及びｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ６を含み、これらに加えて必要であれば他の通常の添加剤を含む、ここで、前記ｇａｇ領域はｐ２４／ｐ２６の配列を含まない、試験片。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＨＵ，ＩＬ，ＪＰ，ＫＲ，ＭＸ，ＰＬ，ＵＳ (72)発明者アップマイエルバーバラドイツ連邦共和国ディー―82393 イッフェルドルフ，イゲールランデルストラーセ 12シー (72)発明者ホース，エヴァドイツ連邦共和国ディー―81476 ミュンヘン，ズィッツェルスベルゲルストラーセ 13エー (72)発明者バイス，マリー−アンジベルギー国ビー―9820 メルセン，ブルグ．エドモンドロンセストラット 23 (72)発明者サーマン，エリックベルギー国ビー―2880 ボルネン，12, ナッテガレンラーン

Claims

【特許請求の範囲】１．ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２のｅｎｖ領域に対する少なくとも１種類の抗体、並びにＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２のｐｏｌ及び／又はｇａｇ領域に対する少なくとも１種類の抗体の特異的検出を用いるイムノアッセイによりＨＩＶ感染を診断するための方法。２．ＨＩＶ感染の検出を不均一イムノアッセイにより行う、請求項１記載の方法。３．検出のために、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合でき、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ１、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２により認識されるエピトープは異なるものである、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ３、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ４、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ５、及びｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ６を用い、必要により液相から固相を分離して該２つの相のうちの一方で標識の測定を行う、請求項１又は２記載の方法。４．受容体Ｒ１及びＲ２がＨＩＶ１のｐ２４抗原に特異的に結合でき、受容体Ｒ３及びＲ４がｅｎｖ領域の抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１抗体に特異的に結合でき、かつ受容体Ｒ５及びＲ６がｇａｇ又はｐｏｌ領域の抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１抗体に特異的に結合できる、請求項２又は３記載の方法。５．受容体Ｒ５及びＲ６がｐｏｌ領域の抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１抗体に特異的に結合できる、請求項３又は４記載の方法。６．受容体Ｒ５及びＲ６がＨＩＶ逆転写酵素に対する抗体に特異的に結合できる、請求項３〜５のいずれかに記載の方法。７．受容体Ｒ５及びＲ６がｇａｇ−ｐ１７抗原に対する抗体に特異的に結合できる、請求項３〜５のいずれかに記載の方法。８．ＨＩＶ１−ＳｕｂＯの感染も検出される、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。９．グループＭの全てのＨＩＶ１サブタイプの感染も検出される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。１０．受容体Ｒ１及びＲ２が、各々、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原の異なるエピトープ及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原の異なるエピトープを認識する幾つかの受容体の混合物である、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。１１．ＨＩＶに対する抗体を検出するための方法であって、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ３、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ４、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ５、及びｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ６を用い、必要により液相から固相を分離して該２つの相のうちの一方で標識の測定を行う、前記方法。１２．配列番号１〜３６記載のｐ２４エピトープに特異的に結合する、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体。１３．配列番号３、９、１７、３１又は３４記載のｐ２４エピトープに特異的に結合する、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体。１４．細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５(寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２３１０)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ｄ９／４（寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２３００）又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（寄託番号ＤＳＭＡＣＣ２３０１）から産生される、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体。１５．細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５(ＤＳＭＡＣＣ２３１０)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ −６Ｄ９／４（ＤＳＭＡＣＣ２３００）又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（ＤＳＭＡＣＣ２３０１）から産生されるモノクローナル抗体と同じ様式でｐ２４に結合する、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体。１６．細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５(ＤＳＭＡＣＣ２３１０)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ −６Ｄ９／４（ＤＳＭＡＣＣ２３００）又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（ＤＳＭＡＣＣ２３０１）から産生されるモノクローナル抗体と同じエピトープに結合する、ＨＩＶ１ｐ２４抗原に対するモノクローナル抗体。１７．ＨＩＶ感染を検出するための診断試験における、請求項１２〜１６のいずれかに記載の少なくとも１種類のモノクローナル抗体の使用。１８．ＨＩＶ感染を検出するための、請求項１〜１０記載の方法の診断試験における、請求項１２〜１６のいずれかに記載の少なくとも１種類のモノクローナル抗体の使用。１９．ＨＩＶ感染を検出するための試薬キットであって、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ１、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２により認識されるエピトープは異なるものである、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ３、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ４、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ５、及びｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ６を含み、これらに加えて必要であれば他の通常の添加物を含む、試薬キット。２０．細胞系ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−６Ａ９／５(ＤＳＭＡＣＣ２３１０)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−４Ｂ１／１(ＤＳＭＡＣＣ２２９９)、ｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ −６Ｄ９／４（ＤＳＭＡＣＣ２３００）又はｍＡｂ＜ｐ２４＞Ｍ−２Ｅ７／３（ＤＳＭＡＣＣ２３０１）から産生される抗体を受容体Ｒ１及びＲ２として用いる、請求項１９記載の試薬キット。２１．ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ１、ＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯのｐ２４抗原及び／又はＨＩＶ２のｐ２６抗原に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ２、ここで、Ｒ１及びＲ２により認識されるエピトープは異なるものである、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ３、ｅｎｖ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１− ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ４、ｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ固相に結合しているか又はそれに結合するのに適する少なくとも１種類の受容体Ｒ５、及びｐｏｌ又はｇａｇ領域に由来する抗原に対する、測定しようとするＨＩＶ１、ＨＩＶ１−ＳｕｂＯ及び／又はＨＩＶ２抗体に特異的に結合するのに適し、かつ標識を有する少なくとも１種類の受容体Ｒ６を含み、これらに加えて必要であれば他の通常の添加剤を含む、試験片。