JP2001513561A - プレニル蛋白トランスフェラーゼ阻害薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、プレニル蛋白トランスフェラーゼ類であるファルネシル蛋白トランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニル蛋白トランスフェラーゼＩ型を阻害し、癌遺伝子蛋白Ｒａｓのプレニル化を阻害する化合物に関する。本発明はさらに、本発明の化合物を含有する化学療法用組成物ならびにファルネシル蛋白トランスフェラーゼとゲラニルゲラニル蛋白トランスフェラーゼＩ型および癌遺伝子蛋白ＲＡＳのプレニル化を阻害する方法に関するものでもある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （技術分野） 本発明は、プレニル蛋白トランスフェラーゼの阻害および癌治療に有用なある
種の化合物に関する。詳細には本発明は、in vivoでゲラニルゲラニル蛋白トラ ンスフェラーゼＩ型（ＧＧＴａｓｅ−Ｉ）の阻害薬として有効であって、Ｈ−Ｒ
ａｓ蛋白およびＫ４Ｂ−Ｒａｓ蛋白の両方の細胞プロセシングを阻害するプレニ
ル蛋白トランスフェラーゼ阻害薬に関する。

【０００２】 （背景技術） プレニル蛋白トランスフェラーゼによる蛋白のプレニル化は、ある種の翻訳後
修飾を代表するものである（Glomset, J.A., Gelb, M.H., and Farnsworth, C.C
. (1990), Trends Biochem.Sci., 15, 139-142; Maltese, W.A. (1990), FASEB
J., 4, 3319-3328）。この修飾は代表的には、膜局在化およびこれら蛋白の機能
に必要である。プレニル化された蛋白には、ＣＡＡＸ（Ｃ、Ｃｙｓ；Ａ、脂肪族
アミノ酸；Ｘ、別のアミノ酸）、ＸＸＣＣまたはＸＣＸＣなどの特徴的なＣ末端
配列が共通に存在する。Ｃ末端ＣＡＡＸ配列を有する蛋白については、３種類の
翻訳後プロセシング段階が報告されており、それらは、炭素数１５（ファルネシ
ル）もしくは炭素数２０（ゲラニルゲラニル）イソプレノイドのＣｙｓ残基への
付加、最後のアミノ酸３個の蛋白分解的開裂、新たなＣ末端カルボキシレートの
メチル化である（Cox, A.D. and Der, C.J. (1992a), Critical Rev. Oncogenes
is 3: 365-400; Newman, C.M.H. and Magee, A.I. (1993), Biochim.Biophys.Ac
ta, 1155:79-96）。一部の蛋白には、第４の修飾、すなわち１個もしくは２個の
Ｃｙｓ残基Ｎ末端のファルネシル化Ｃｙｓへのパルミトイル化を有するものもあ
り得る。ＸＣＸＣを末端とする一部の哺乳動物蛋白はカルボキシメチル化されて
いるが、カルボキシメチル化が、ＸＸＣＣ単位を末端とする蛋白のプレニル化の
後に行われるか否かは不明である（Clarke, S. (1992), Annu.Rev.Biochem., 61
, 355-386）。いずれのプレニル化蛋白の場合でも、イソプレノイドの付加が第 １段階であり、その付加がその後の段階に必要である（Cox, A.D. and Der, C.J
. (1992a), Critical Rev. Oncogenesis 3: 365-400; Cox, A.D. and Der, C.J.
(1992b), Current Opinion Cell Biol., 4: 1008-1016）。

【０００３】 蛋白プレニル化を触媒する酵素には３種類が報告されており、それらはファル
ネシル蛋白トランスフェラーゼ（ＦＰＴａｓｅ）、ゲラニルゲラニル蛋白トラン
スフェラーゼＩ型（ＧＧＰＴａｓｅ−Ｉ）およびゲラニルゲラニル蛋白トランス
フェラーゼＩＩ型（ＧＧＰＴａｓｅ−ＩＩ；ＲａｂＧＧＰＴａｓｅとも称される
）である。これらの酵素は、酵母および哺乳動物細胞のいずれにおいても認めら
れている（Clarke, 1992; Schafer, W.R. and Rine, J., (1992), Annu.Rev.Gen
et., 30: 209-237）。これらの各酵素は、イソプレノイド供与体としてファルネ
シル二リン酸またはゲラニル−ゲラニル二リン酸を選択的に使用し、蛋白基質を
選択的に認識する。ＦＰＴａｓｅは、Ｓｅｒ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、ＧｌｎまたはＡ
ｌａを末端とする含ＣａａＸ蛋白をファルネシル化する。ＦＰＴａｓｅの場合、
ＣａａＸテトラペプチドが、蛋白基質と酵素との相互作用に必要な最低限の領域
を有する。これら３種類の酵素の酵素学的特性決定から、他のものに対してはほ
とんど阻害効果を与えずに、１種類を選択的に阻害できることが明らかになって
いる（Moores, S.L., Schaber, M.D., Mosser, S.D., Rands, E., O'Hara, M.B.
, Garsky, V.M., Marshall, M.S., Pompliano, D.L., and Gibbs, J.B., J.Biol
.Chem., 266: 17438 (1991)、米国特許５４７０８３２号）。

【０００４】 各種蛋白の機能には、プレニル化反応が必須であることが遺伝学的に明らかに
なっている（Clarke, 1992; Cox and Der, 1992a; Gibbs, J.B. (1991), Cell,
65: 1-4; Newman and Magee, 1993; Schafer and Rine, 1992）。この必要条件 は多くの場合、ＣａａＸ Ｃｙｓ受容体を突然変異させることで蛋白がプレニル 化できないようにすることによって示される。得られる蛋白には、それの中心的
な生理活性がない。それらの研究から、プレニル化蛋白によって調節される生理
的応答をプレニル化阻害薬が変化させ得ることを示す遺伝的な「原理の証拠」が
提供される。

【０００５】 Ｒａｓ蛋白は、細胞表面成長因子受容体を細胞増殖開始核信号に連結する信号
経路の一部である。Ｒａｓの作用に関する生物学的研究および生化学的研究から
、ＲａｓがＧ調節蛋白のような機能を有することが示されている。不活状態のＲ
ａｓはＧＤＰに結合している。成長因子受容体活性化時にはＲａｓはＧＤＰから
ＧＴＰへの交換を誘発され、配座の変化を受ける。ＧＴＰ結合型のＲａｓは、信
号がＲａｓの固有ＧＴＰａｓｅ活性によって不活性なＧＤＰ結合型に戻るまで、
成長刺激信号を伝達する（D.R.Lowy and D.M.Willumsen, Ann.Rev.Biochem.62:8
51-891(1993)）。Ｒａｓの活性化によって、ＭＡＰキナーゼ経路およびＲｈｏ／
Ｒａｃ経路などの複数の細胞内信号導入経路が活性化される（Joneson et al.,
Science 271: 810-812）。

【０００６】 結腸直腸癌、外分泌性膵臓癌および骨髄性白血病などの多くのヒトの癌におい
て、突然変異ｒａｓ遺伝子が認められる。これらの遺伝子の蛋白産物はそのＧＴ
Ｐａｓｅ活性に欠陥があり、構成的に（constitutively）成長刺激信号を伝達す
る。

【０００７】 Ｒａｓ蛋白は、翻訳後修飾を受けることが知られているいくつかの蛋白の一つ
である。ファルネシル蛋白トランスフェラーゼは、ファルネシルピロリン酸を利
用して、ＲａｓＣＡＡＸボックスのＣｙｓチオール基をファルネシル基によって
共有結合的に修飾する（Reiss, et al., Cell, 62: 81-88 (1990); Schaber et
al., J.Biol.Chem., 265: 14701-14704 (1990); Schafer et al., Science, 249
: 1133-1139 (1990); Manne et al., Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 87: 7541-7545
(1990)）。

【０００８】 Ｒａｓは、正常機能および腫瘍形成機能のいずれの場合も細胞質膜に局在して
いなければならない。Ｒａｓの膜局在には少なくとも３つの翻訳後修飾が関与し
、３つの修飾はいずれも、ＲａｓのＣ末端で起こる。ＲａｓのＣ末端には「ＣＡ
ＡＸ」すなわち「Cys-Aaa¹-Aaa²-Xaa」ボックス（Cysはシステイン、Aaaは脂肪 族アミノ酸、Xaaはアミノ酸である）を末端とする配列単位がある（Willumsen e
t al., Nature 310:583-586(1984)）。具体的な配列に応じてこの単位は、それ ぞれＣ_１５またはＣ_２０イソプレノイドによるＣＡＡＸ単位のシステイン残基の
アルキル化を触媒する酵素ファルネシル蛋白トランスフェラーゼまたはゲラニル
ゲラニル蛋白トランスフェラーゼに対する信号配列として機能する（S.Clarke,
Ann.Rev.Biochem. 61:355-386(1992); W.R.Schafer and J.Rine, Ann.Rev. Gene
tics 30;209-237(1992)）。ファルネシル蛋白トランスフェラーゼの直接阻害は より特異的であり、一般的なイソプレン生合成阻害薬の必要な用量で起こると考
えられる副作用が低減されると考えられる。

【０００９】 他のファルネシル化蛋白には、ＲｈｏＢ、真菌交配因子、核ラミンおよびトラ
ンスジューシンのγ−サブユニットなどのＲａｓ関連ＧＴＰ結合蛋白などがある
。ジェームスら（James et al., J.Biol.Chem.269, 14182(1994)）は、やはりフ
ァルネシル化されたペルオキシソーム会合蛋白Ｐｘｆを確認している。ジェーム
スらはさらに、上記のものに加えて、未知の構造および機能のファルネシル化蛋
白があることも示唆している。

【００１０】 ファルネシル蛋白トランスフェラーゼ（ＦＰＴａｓｅ）阻害薬では大別して２
種類が報告されている。第１の種類はファルネシル二リン酸（ＦＰＰ）の類縁体
であり、第２の種類はその酵素の蛋白基質（例：Ｒａｓ）に関係するものである
。これまで報告されているペプチド由来の阻害薬は、蛋白プレニル化の信号であ
るＣＡＡＸ単位に関係する分子を有するシステインである（Schaber et al., ib
id; Reiss et al., ibid; Reiss et al., PNAS, 88:732-736(1991)）。そのよう
な阻害薬は、ファルネシル蛋白トランスフェラーゼ酵素に対する代替基質として
働きながら、蛋白プレニル化を阻害し得るか、あるいは純粋に競合的な阻害薬で
あり得る（米国特許５１４１８５１号、テキサス州立大学; N.E.Kohl et al., S
cience, 260: 1934-1937(1993); Graham et al., J.Med.Chem., 37: 725(1994) ）。

【００１１】 哺乳動物細胞は４種類のＲａｓ蛋白（Ｈ−、Ｎ−、Ｋ４Ａ−およびＫ４Ｂ−Ｒ
ａｓ）を発現し、その中でＫ４Ｂ−Ｒａｓがヒトの癌において最も高頻度で突然
変異を受ける形のＲａｓである。これらの蛋白をコードする遺伝子はそれぞれ、
Ｈ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、Ｋ４Ａ−ｒａｓおよびＫ４Ｂ−ｒａｓと略される。Ｈ
−ｒａｓは、ハーベー−ｒａｓ（Harvey-ras）の略である。Ｋ４Ａ−ｒａｓおよ
びＫ４Ｂ−ｒａｓはそれぞれ、４Ａおよび４Ｂエキソンを有するｒａｓのキルス
テンスプライシング（Kirsten splice）変種についての略称である。ファルネシ
ル蛋白トランスフェラーゼの阻害は、軟寒天でのＨ−Ｒａｓ形質転換細胞の成長
を阻害し、それらの形質転換した表現型の他の側面を変えることが明らかになっ
ている。さらに、ある種のファルネシル蛋白トランスフェラーゼ阻害薬は、細胞
内でＨ−Ｒａｓ腫瘍性蛋白のプロセシングを選択的に遮断することも明らかにな
っている（N.E.Kohl et al., Science, 260: 1934-1937(1993)およびG.L.James
et al., Science, 260: 1937-1942(1993)）。最近、ファルネシル蛋白トランス フェラーゼ阻害薬がヌードマウスにおけるＨ−ｒａｓ依存性腫瘍の成長を阻害し
（N.E.Kohl et al., Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A., 91:9141-9145(1994)）、Ｈ−
ｒａｓトランスジェニックマウスにおける乳癌および唾液癌の緩解を誘発する（
N.E.Kohl et al., Nature Medicine, 1:792-797(1995)）ことが明らかになって いる。

【００１２】 in vivoでのファルネシル蛋白トランスフェラーゼの間接的阻害が、ロバスタ チン（lovastatin；Merck & Co., Rahway, NJ）およびコンパクチンで示されて いる（Hancock et al., ibid; Casey et al., ibid; Schafer et al., Science
25:379(1989)）。これらの薬剤は、ファルネシルピロリン酸などのポリイソプレ
ノイド類の産生における律速酵素であるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼを阻害する
。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの阻害によるファルネシルピロリン酸生合成の阻
害は、培養細胞におけるＲａｓの膜局在を遮断する。

【００１３】 Ｋ−ＲａｓＢのＣ末端のリジン豊富領域および末端ＣＶＩＭ配列が、ある種の
選択的ＦＰＴａｓｅ阻害薬による該蛋白の細胞プロセシング阻害に対して耐性を
与えることが開示されている（James et al., J.Biol.Chem., 270, 6221 (1995)
）。これらのＦＰＴａｓｅ阻害薬は、Ｈ−Ｒａｓ蛋白のプロセシングを阻害する
上で有効であった。ジェームズら（James et al.）は、ＧＧＴａｓｅによるＫ４
Ｂ−Ｒａｓ蛋白のプレニル化が選択的ＦＰＴａｓｅ阻害薬に対する耐性に寄与す
ることを示唆している。

【００１４】 いくつかの科学者グループが最近、非選択的ＦＰＴａｓｅ／ＧＧＴａｓｅ阻害
薬である化合物を開示している（Nagasu et al., Cancer Research, 55: 5310-5
314 (1995); ＰＣＴ出願ＷＯ ９５／２５０８６）。

【００１５】 本発明の目的は、ＣＡＡＸ ＧＧＴａｓｅとも称されるゲラニルゲラニル蛋白 トランスフェラーゼＩ型（ＧＧＴａｓｅ−Ｉ）の阻害薬としてin vivoで有効な プレニル蛋白トランスフェラーゼ阻害薬を提供することにある。

【００１６】 本発明の別の目的は、Ｈ−Ｒａｓ蛋白およびＫ４Ｂ−Ｒａｓ蛋白の両方の細胞
プロセシングを阻害する化合物を提供することにある。

【００１７】 本発明のさらに別の目的は、突然変異Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ蛋白を特徴とする癌細胞
の成長阻害薬としてin vivoで有効な化合物を提供することにある。

【００１８】 本発明では、そのような阻害薬化合物を含む組成物を用いて癌の治療を行う。

【００１９】 （発明の開示） 本発明は、プレニル蛋白トランスフェラーゼ類、すなわちファルネシル蛋白ト
ランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニル蛋白トランスフェラーゼＩ型を阻害す
るペプチド様作用性含ピペラジノン化合物を含むものである。本発明にはさらに
、上記のプレニルトランスフェラーゼ阻害薬を含む化学療法組成物およびそれら
の製造方法も含まれる。

【００２０】 本発明の化合物は下記式Ｉによって表される。

【００２１】

【化３】 （発明を実施するための最良の形態） 本発明の化合物は、プレニル蛋白トランスフェラーゼの阻害および癌遺伝子蛋
白Ｒａｓのプレニル化において有用である。本発明の第１の実施態様では、プレ
ニル蛋白トランスフェラーゼの阻害薬は、下記式Ｉによって表される化合物また
は該化合物の医薬的に許容される塩である。

【００２２】

【化４】 ［式中、 Ｒ^１ａは、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され； Ｒ^１ｂは独立に、 ａ）水素、 ｂ）アリール、複素環、シクロアルキル、Ｒ^１０Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^１０）_２また
はＣ_２〜Ｃ_６アルケニル ｃ）未置換またはアリール、複素環、シクロアルキル、アルケニル、Ｒ^１０Ｏ
−もしくは−Ｎ（Ｒ^１０）_２によって置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキル から選択され； Ｒ^３およびＲ^４はＨおよびＣＨ_３から選択され； Ｒ^２は、Ｈ；未置換もしくは置換アリール、未置換もしくは置換ヘテロアリー
ル、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７；または未置換もしくは１以上の １）アリール、 ２）複素環、 ３）ＯＲ^６、 ４）ＳＲ^６ａ、ＳＯ_２Ｒ^６ａもしくは ５）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７ によって置換されたＣ_１−５アルキルから選択され；Ｒ^２とＲ^３は同一の炭素原
子に結合していても良く； Ｒ^６およびＲ^７は独立に、 Ｈ；未置換もしくは ａ）Ｃ_１−４アルコキシ ｂ）ハロゲン、 ｃ）パーフルオロ−Ｃ_１−４アルキルもしくは ｄ）アリールもしくは複素環 で置換されたＣ_１−４アルキル、Ｃ_３−６シクロアルキル、アリール、複素環 から選択され； Ｒ^６ａは、 ａ）Ｃ_１−４アルコキシ ｂ）ハロゲンもしくは ｃ）アリールもしくは複素環 で置換されたＣ_１−４アルキルまたはＣ_３−６シクロアルキルから選択され； Ｒ^８は独立に、 ａ）水素、 ｂ）Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、Ｃ _１ 〜Ｃ_６パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ^１０Ｏ−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^{１ ０} −、ＣＮ、ＮＯ_２、（Ｒ^１０）_２Ｎ−Ｃ（ＮＲ^１０）−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
−Ｎ（Ｒ^１０）_２もしくはＲ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−および ｃ）Ｃ_１〜Ｃ_６パーフルオロアルキル、Ｒ^１０Ｏ−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０ −、（Ｒ^１０）_２Ｎ−Ｃ（ＮＲ^１０）−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ^１０）_２ もしくはＲ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−によって置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキル から選択され； Ｒ^９ａは水素もしくはメチルであり； Ｒ^１０は独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６パーフルオロアルキ
ル、２，２，２−トリフルオロエチル、ベンジルおよびアリールから選択され；
Ｒ^１１は独立に、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルおよびアリールから選択され； Ａ^１およびＡ^２は独立に、結合、−ＣＨ＝ＣＨ−、−C≡Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）− 、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、Ｏ、−Ｎ（Ｒ^１０）−またはＳ（Ｏ）_ｍから選択され
； Ｖは、 ａ）水素、 ｂ）ピロリジニル、イミダゾリル、ピリジニル、チアゾリル、ピリドニル、２
−オキソピペリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニルおよびチエニ
ルから選択される複素環、 ｃ）アリール、 ｄ）０〜４個の炭素原子がＯ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子に置き換
わったＣ_１〜Ｃ_２０アルキル、および ｅ）Ｃ_２〜Ｃ_２０アルケニル から選択され；ただし、Ａ^１がＳ（Ｏ）_ｍの場合にはＶは水素ではなく、Ａ^１が
結合、ｎが０、Ａ^２がＳ（Ｏ）_ｍの場合にはＶは水素ではなく、 Ｘは−ＣＨ_２−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり； Ｚは、 １）アリール、ヘテロアリール、アリールメチル、ヘテロアリールメチル、ア
リールスルホニル、ヘテロアリールスルホニルから選択される未置換もしくは置
換の基（該基が置換されている場合、該基は１以上の ａ）未置換あるいはＣ_１−４アルコキシ、ＮＲ^６Ｒ^７、Ｃ_３−６シクロアルキ
ル、未置換もしくは置換アリール、複素環、ＨＯ、−Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^６ａまたは−
Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７で置換されたＣ_１−４アルキル、 ｂ）アリールもしくは複素環、 ｃ）ハロゲン、 ｄ）ＯＲ^６、 ｅ）ＮＲ^６Ｒ^７、 ｆ）ＣＮ、 ｇ）ＮＯ_２、 ｈ）ＣＦ_３、 ｉ）−Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^６ａ、 ｊ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７または ｋ）Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル で置換されている）あるいは ２）未置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、未置換Ｃ_３〜Ｃ_６ シクロアルキルまたは置換Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル（置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル
および置換Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキルは、１個もしくは２個の ａ）Ｃ_１−４アルコキシ、 ｂ）ＮＲ^６Ｒ^７、 ｃ）Ｃ_３−６シクロアルキル、 ｄ）−ＮＲ^６Ｃ（Ｏ）Ｒ^７、 ｅ）ＨＯ、 ｆ）−Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^６ａ、 ｇ）ハロゲンまたは ｈ）パーフルオロアルキル で置換されている） から選択され； ｍは０、１もしくは２であり； ｎは０、１、２、３もしくは４であり； ｐは０、１、２、３もしくは４であり； ｒは０〜５であり；ただし、Ｖが水素の場合ｒは０であり； ただし、置換基（Ｒ^８）_ｒ−Ｖ−Ａ^１（ＣＲ^１ａ _２）_ｎＡ^２（ＣＲ^１ａ _２）_ｎ −は水素ではない。］ ただし、該化合物は、 １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
ルメチル］−２−ピペラジノン； ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）−１−［１−（２−ナフチル
メチル）イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン； ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５
−イルメチル］−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−［１−（４−ブロモベンジル）イミダゾール−５−イルメチル］−２（Ｓ
）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］アセ
チル｝−２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−フェニル−４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５
−イルエチル］−ピペラジン−２−オン； １−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（３−ブロモフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イ
ミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； ５（Ｓ）−（２−［２，２，２−トリフルオロエトキシエチル）−１−（３−
トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−４−イミ
ダゾリルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（５，６，７，８−テトラヒドロナフチル）−４−［１−（４−シアノベ
ンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（２−メチル−３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
）−４−イミダゾリルメチル）］−ピペラジン−２−オン からは選択されない。

【００２３】 本発明の化合物の好ましい実施態様は、下記式Ｉ−ａによって表される化合物
または該化合物の医薬的に許容される塩である。

【００２４】

【化５】 ［式中、 Ｒ^１ｂは独立に、 ａ）水素、 ｂ）アリール、複素環、シクロアルキル、Ｒ^１０Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^１０）_２また
はＣ_２〜Ｃ_６アルケニル ｃ）未置換またはアリール、複素環、シクロアルキル、アルケニル、Ｒ^１０Ｏ
−もしくは−Ｎ（Ｒ^１０）_２によって置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキル から選択され； Ｒ^２は、Ｈ；未置換もしくは置換アリール；または未置換もしくは１以上の １）アリール、 ２）ヘテロアリール、 ３）ＯＲ^６もしくは ４）ＳＲ^６ａ によって置換された未分岐もしくは分岐のＣ_１−５アルキルから選択され； Ｒ^６およびＲ^７は独立に、未置換もしくは ａ）Ｃ_１−４アルコキシ ｂ）ハロゲン、 ｃ）パーフルオロ−Ｃ_１−４アルキルもしくは ｄ）アリールもしくはヘテロアリール で置換されたＣ_１−４アルキル、アリールおよびヘテロアリール から選択され； Ｒ^６ａは、 ａ）Ｃ_１−４アルコキシもしくは ｂ）アリールもしくはヘテロアリール で置換されたＣ_１−４アルキルから選択され； Ｒ^８は独立に、 ａ）水素、 ｂ）Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、Ｃ _１ 〜Ｃ_６パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ^１０Ｏ−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^{１ ０} −、ＣＮ、ＮＯ_２、（Ｒ^１０）_２Ｎ−Ｃ（ＮＲ^１０）−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
−Ｎ（Ｒ^１０）_２もしくはＲ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−および ｃ）Ｃ_１〜Ｃ_６パーフルオロアルキル、Ｒ^１０Ｏ−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０ −、（Ｒ^１０）_２Ｎ−Ｃ（ＮＲ^１０）−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ^１０）_２ もしくはＲ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−によって置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキル から選択され； Ｒ^１０は独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、ベンジルおよびアリールから選
択され； Ｒ^１１は独立に、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルおよびアリールから選択され； Ｘは−ＣＨ_２−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり； Ｚは、アリール、アリールメチルおよびアリールスルホニルから選択される未
置換もしくは置換の基であり；該基が置換されている場合、該基は１以上の ａ）未置換あるいはＣ_１−４アルコキシ、ＮＲ^６Ｒ^７、Ｃ_３−６シクロアルキ
ル、未置換もしくは置換アリール、複素環、ＨＯ、−Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^６ａまたは−
Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７で置換されたＣ_１−４アルキル、 ｂ）アリールもしくは複素環、 ｃ）ハロゲン、 ｄ）ＯＲ^６、 ｅ）ＮＲ^６Ｒ^７、 ｆ）ＣＮ、 ｇ）ＮＯ_２、 ｈ）ＣＦ_３、 ｉ）−Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^６ａ、 ｊ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７または ｋ）Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル で置換されており； ｍは０、１もしくは２であり； ｐは０、１、２、３もしくは４であり； ｒは０〜３である。］ ただし、該化合物は、 １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
ルメチル］−２−ピペラジノン； ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）−１−［１−（２−ナフチル
メチル）イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン； ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５
−イルメチル］−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−［１−（４−ブロモベンジル）イミダゾール−５−イルメチル］−２（Ｓ
）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］アセ
チル｝−２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−フェニル−４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５
−イルエチル］−ピペラジン−２−オン； １−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（３−ブロモフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イ
ミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； ５（Ｓ）−（２−［２，２，２−トリフルオロエトキシエチル）−１−（３−
トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−４−イミ
ダゾリルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（５，６，７，８−テトラヒドロナフチル）−４−［１−（４−シアノベ
ンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（２−メチル−３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
）−４−イミダゾリルメチル）］−ピペラジン−２−オン からは選択されない。

【００２５】 本発明の好ましい化合物は、 １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジ
ル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン：

【００２６】

【化６】 １−（２，５−ジメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミ
ダゾリルメチル］−２−ピペラジノン：

【００２７】

【化７】 １−（３−メチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
ルメチル］−２−ピペラジノン：

【００２８】

【化８】 １−（３−ヨードフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
ルメチル］−２−ピペラジノン：

【００２９】

【化９】 １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（３−メトキシ−４−シアノベンジ
ル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン：

【００３０】

【化１０】 １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３−メトキシ−４
−シアノベンジル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン：

【００３１】

【化１１】 （Ｒ）−５−［（ベンジルオキシ）メチル］−１−（３−クロロフェニル）−
４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン：

【００３２】

【化１２】 またはこれら化合物の医薬的に許容される塩もしくは光学異性体である。

【００３３】 本発明の化合物の他の具体的な例としては、 １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（２−フルオロ−４−シアノベンジ
ル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン； ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］
−１−（３−メチルチオフェニル）ピペラジン−２−オン； ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］
−１−（３，５−ジクロロフェニル）ピペラジン−２−オン； １−（３−クロロフェニル）−４−｛［１−（４−シアノフェニル）−１−エ
チル］−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン； １−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジ
ル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン； ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］
１−（３，５−ジメチルフェニル）ピペラジン−２−オン； （Ｓ）−５−ベンジル−４−［３−（４−シアノベンジル−１−イミダゾール
−５−イル）プロプ−１−イル］−１−フェニル−２−ピペラジノン； １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−ニトロベンジル）−１Ｈ−イ
ミダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン； ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］
１−（３，５−ジフルオロフェニル）ピペラジン−２−オン； ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］
１−（３，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−２−オン； またはこれら化合物の医薬的に許容される塩もしくは光学異性体がある。

【００３４】 本発明の化合物は、該化合物がファルネシル蛋白トランスフェラーゼとゲラニ
ルゲラニル蛋白トランスフェラーゼＩ型（ＧＧＴａｓｅ−Ｉ）の二重阻害剤であ
るという点で、以前に開示された含ピペラジノン化合物（１９９６年１０月３日
のＰＣＴ公開ＷＯ ９７／３０３４３；１９９７年１０月９日のＰＣＴ公開ＷＯ
９７／３６５９３；１９９７年１０月９日のＰＣＴ公開ＷＯ ９７／３６５９２ ）とは異なっている。好ましくは、本発明の化合物は、１ｍＭ未満のＩＣ_５０で
in vitroにてＦＰＴａｓｅを阻害し（実施例１５）、１ｍＭ未満のＩＣ_５０でin
vitroにてＧＧＴａｓｅを阻害し（実施例１６）、１ｍＭ未満のＩＣ_５０でＨ−
Ｒａｓの細胞プロセシング（ファルネシル化）阻害する（実施例１７）。

【００３５】 本発明の化合物は不斉中心を持って、ラセミ体、ラセミ混合物として、さらに
は個々のジアステレオマーとして他の可能な全ての異性体（光学異性体など）と
ともに得られる場合があって、それらは本発明に含まれるものである。いずれか
の部分（例：アリール、複素環、Ｒ^１、Ｒ^２など）が一つの構成部分中に複数存
在する場合、各場合についての定義は他のいずれのものからも独立である。さら
に、置換基もしくは部分の組み合わせは、そのような組み合わせが安定な化合物
を与える場合にのみ許容されるものである。

【００３６】 本明細書で使用する場合、「アルキル」は、指定された数の炭素原子を有する
分岐および直鎖の両方の飽和脂肪族炭化水素基を含むものであり、「アルコキシ
」という用語は、酸素架橋を介して結合した指定炭素原子数のアルキル基を表す
。本明細書で使用される「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、フッ素、塩
素、臭素およびヨウ素を表す。

【００３７】 本明細書で使用する場合「アリール」という用語は、少なくとも１個の環が芳
香環である各環７員以下の安定な単環式もしくは二環式炭素環を意味するもので
ある。そのようなアリール部分の例としては、フェニル、ナフチル、テトラヒド
ロナフチル、インダニル、ビフェニル、フェナントリル、アントリルまたはアセ
ナフチルなどがある。

【００３８】 本明細書で使用される複素環という用語は、安定な５〜７員の単環式複素環ま
たは安定な８〜１１員の二環式複素環であって、飽和もしくは不飽和であり、炭
素原子とＮ、ＯおよびＳから成る群から選択される１〜４個のヘテロ原子とから
成るものであり、上記で定義の複素環のいずれかがベンゼン環に融合している二
環式の基を含むものである。その複素環は、いずれかのヘテロ原子または炭素原
子で結合して、安定な構造を生じることができる。そのような複素環要素の例と
しては、アゼピニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾフ
ラアザニル、ベンゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフリル、ベンゾチア
ゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾオキサゾリル、クロマニル、シノリニル、ジヒ
ドロベンゾフリル、ジヒドロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、ジ
ヒドロベンゾチオピラニル・スルホン、フリル、イミダゾリジニル、イミダゾリ
ニル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソクロマニル、イソインド
リニル、イソキノリニル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリ
ジニル、モルホリニル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキソアゼピ
ニル、オキサゾリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−
オキソピロリジニル、ピペリジル、ピペラジニル、ピリジル、ピラジニル、ピラ
ゾリジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリ
ル、キナゾリニル、キノリニル、キノキザリニル、テトラヒドロフリル、テトラ
ヒドロイソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアモルホリニル、チアモル
ホリニル・スルホキシド、チアゾリル、チアゾリニル、チエノフリル、チエノチ
エニルおよびチエニルなどがあるが、これらに限定されるものではない。

【００３９】 本明細書で使用される場合、「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１
個の環が芳香環であって１〜４個の炭素原子がＮ、ＯおよびＳからなる群から選
択されるヘテロ原子によって置換された、各環７員以下の安定な単環式もしくは
二環式炭素環を意味するものである。そのような複素環要素の例としては、ベン
ゾイミダゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾフラアザニル、ベンゾピラニ
ル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチエニル、
ベンゾオキサゾリル、クロマニル、シノリニル、ジヒドロベンゾフリル、ジヒド
ロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、ジヒドロベンゾチオピラニル
・スルホン、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソクロマニ
ル、イソインドリニル、イソキノリニル、イソチアゾリル、ナフチリジニル、オ
キサジアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリダジニル、ピリミジ
ニル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、キノキザリニル、テトラヒドロイ
ソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、チアゾリル、チエノフリル、チエノチ
エニルおよびチエニルなどがあるが、これらに限定されるものではない。

【００４０】 本明細書においてＲ^２およびＲ^４の定義で使用する場合の「置換された基」と
いう用語は、置換基Ｒ^２およびＲ^３が選択される置換Ｃ_１−８アルキル、置換Ｃ _２−８ アルケニル、置換Ｃ_２−８アルキニル、置換アリールまたは置換複素環を
意味するものである。

【００４１】 本明細書においてＲ^６、Ｒ^６ａ、Ｒ^７およびＲ^７ａの定義で使用する場合、置
換Ｃ_１−８アルキル、置換Ｃ_３−６シクロアルキル、置換アロイル、置換アリー
ル、置換ヘテロアロイル、置換アリールスルホニル、置換ヘテロアリールスルホ
ニルおよび置換複素環は、その化合物の残りの部分への結合箇所に加えて、１〜
３個の置換基を有する部分を含むものである。好ましくは、そのような置換基は
、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ_３、ＮＨ_２、Ｎ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）_２、ＮＯ_２、Ｃ
Ｎ、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｏ−、−ＯＨ、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｓ（Ｏ）_ｍ −、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、Ｈ_２Ｎ−Ｃ（ＮＨ）−、（Ｃ_１〜
Ｃ_６アルキル）Ｃ（Ｏ）−、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）ＯＣ（Ｏ）−、Ｎ_３、（Ｃ _１ 〜Ｃ_６アルキル）ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、フェニル、ピリジル、イミダゾリル、オ
キサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チエニル、フリル、イソチアゾリ
ルおよびＣ_１〜Ｃ_２０アルキルを含む（これらに限定されるものではないが）群
から選択される。

【００４２】 置換基から（Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４などから）環系中に引かれている線は、示され
た結合が置換可能な環炭素原子のいずれに結合していても良いことを示している
。

【００４３】 好ましくは、Ｒ^１ａとＲ^１ｂは独立に、水素、−Ｎ（Ｒ^１０）_２、Ｒ^１０Ｃ（
Ｏ）ＮＲ^１０−または未置換もしくは置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され；置
換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル上の置換基は、未置換もしくは置換フェニル、−Ｎ（Ｒ^{１ ０} ）_２、Ｒ^１０Ｏ−およびＲ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−から選択される。

【００４４】 好ましくはＲ^２は、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７ならびにＣ_１−８アルキル、
Ｃ_２−８アルケニルおよびＣ_２−８アルキニルから選択される未置換の基もしく
は置換された基から選択され；該置換された基は、１以上の １）アリールもしくは複素環、 ２）ＯＲ^６、 ３）ＳＲ^６ａ、ＳＯ_２Ｒ^６ａで置換されている。

【００４５】 好ましくはＲ^４は水素である。

【００４６】 好ましくは、Ｒ^６およびＲ^７は、水素、未置換もしくは置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキ
ル、未置換もしくは置換アリールおよび未置換もしくは置換Ｃ_３〜Ｃ_６シクロア
ルキルから選択される。

【００４７】 好ましくはＲ^６ａは、未置換もしくは置換Ｃ_１〜Ｃ_６である。

【００４８】 好ましくはＲ^９は水素である。

【００４９】 好ましくはＲ^１０は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルおよびベンジルから選択される
。

【００５０】 好ましくはＡ^１およびＡ^２は独立に、結合、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、−ＮＲ^{１ ０} Ｃ（Ｏ）−、Ｏ、−Ｎ（Ｒ^１０）−、−Ｓ（Ｏ）_２Ｎ（Ｒ^１０）−および−Ｎ
（Ｒ^１０）Ｓ（Ｏ）_２−から選択される。最も好ましくは、Ａ^１およびＡ^２は結
合である。

【００５１】 好ましくはＶは、水素、複素環およびアリールから選択される。より好ましく
はＶはフェニルである。

【００５２】 好ましくはＺは、未置換もしくは置換フェニル、未置換もしくは置換ナフチル
、未置換もしくは置換ピリジル、未置換もしくは置換フラニルおよび未置換もし
くは置換チエニルから選択される。より好ましくは、Ｚは未置換もしくは置換フ
ェニルである。

【００５３】 好ましくは、ｎおよびｒは独立に、０、１もしくは２である。

【００５４】 好ましくは、ｐは１、２もしくは３である。

【００５５】 好ましくは、部分

【００５６】

【化１３】 は、

【００５７】

【化１４】 から選択される。

【００５８】 ある分子中の特定位置での置換基もしくは変数（例：Ｒ^１ａ、Ｒ^９、ｎなど）
の定義は、その分子中の別の箇所での定義とは独立である。従って−Ｎ（Ｒ^１０ ）_２は、−ＮＨＨ、−ＮＨＣＨ_３、−ＮＨＣ_２Ｈ_５などを表す。当業者であれば
、本発明の化合物上の置換基および置換パターンを選択することで、化学的に安
定であって、容易に入手可能な原料から当業界で公知の方法や以下に記述する方
法によって合成することができる化合物を提供できることは明らかである。

【００５９】 本発明の化合物の医薬的に許容される塩には、例えば無毒性の無機酸もしくは
有機酸から形成されるような、本発明の化合物の従来の無毒性塩などがある。例
えばそのような従来の無毒性塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸
、リン酸、硝酸などの無機酸から誘導される塩；酢酸、プロピオン酸、コハク酸
、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコル
ビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミ
ン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマ
ル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸
、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸などの有機酸から製造される塩などがある。

【００６０】 本発明の化合物の医薬的に許容される塩は、従来の化学的方法によって塩基部
分を有する本発明の化合物から合成することができる。一般にそれらの塩は、イ
オン交換クロマトグラフィーによって、あるいは遊離塩基を化学量論量もしくは
過剰量の所望の塩を形成する無機酸もしくは有機酸と、好適な溶媒もしくは各種
混合溶媒中で反応させることで製造される。

【００６１】 本発明の化合物を生成するのに使用される反応は、文献で知ることができるか
、または実験手順で例示されるようなエステル加水分解、保護基開裂などの他の
標準的操作に加えて、図式１〜１１に示したような反応を行うことで得られる。
図式中に示した置換基Ｒは、置換基Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４およびＲ^５を表す。しかし
ながら、環への結合箇所は例示のみを目的として示したものであって、示したも
のに限定されるものではない。

【００６２】 これらの反応を直列で行って本発明の化合物を得ることができるか、あるいは
それらの反応を用いて複数の断片を合成してから、次に図式に記述した還元的ア
ルキル化反応によってそれらを結合させることができる。

【００６３】図式１〜１１の概要 必要な中間体は、場合によっては市販品で入手でき、あるいはほとんどの場合
には文献法に従って製造することができる。

【００６４】 ピペラジン−５−オン類は、図式１に示した方法に従って製造することができ
る。そこで、好適に置換された保護アミノ酸ＩＶについて、最初にアミドを形成
し、次にそれをＬＡＨで還元することで、相当するアルデヒドＶに変換すること
ができる。Ｂｏｃ保護アミノアルデヒドＶの還元的アミノ化によって、化合物Ｖ
Ｉが得られる。中間体ＶＩをクロロアセチルクロライドでアシル化してＶＩＩと
し、次に塩基誘発の環化によってＶＩＩＩとすることで、ピペラジノンに変換す
ることができる。脱保護を行い、次に保護イミダゾールカルボキシアルデヒドで
還元的アルキル化を行うことによってＩＸが得られ、それをアリールメチルハラ
イドでアルキル化することで、イミダゾリウム塩Ｘを得ることができる。メタノ
ールなどの低級アルキルアルコールによる溶媒和分解あるいはトリフルオロ酢酸
存在下での塩化メチレン中でのトリエチルシラン処理のいずれかによって、最後
に保護基を脱離させることで最終生成物ＸＩが得られる。

【００６５】 中間体ＶＩＩＩは、ＸＩＩなどの各種アルデヒドで還元的にアルキル化するこ
とができる。該アルデヒドは、ゲールらの著作（O.P.Goel, U.Krolls, M.Stier
and S.Kesten, Organic Syntheses, 1988, 67, 69-75）に記載のものなどの標準
的な手順によって、適切なアミノ酸から製造することができる。還元的アルキル
化は、ジクロロエタン、メタノールもしくはジメチルホルムアミドなどの溶媒中
、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムまたは水素化シアノホウ素ナトリウム
などの各種還元剤を用いて、ｐＨ５〜７で行うことができる。生成物ＸＩＩＩは
、塩化メチレン中トリフルオロ酢酸で脱保護することで、最終化合物ＸＩＶを得
ることができる。最終生成物ＸＩＶは、例えば特にトリフルオロ酢酸塩、塩酸塩
または酢酸塩のような塩の形で単離される。生成物のジアミンＸＩＶをさらに選
択的に保護してＸＶを得て、それを次に、第２のアルデヒドで還元的にアルキル
化してＸＶＩを得ることができる。保護基の脱離およびジヒドロイミダゾールＸ
ＶＩＩなどの環化生成物への変換は、文献の手順によって行うことができる。

【００６６】 別法として、標準的な手順によってイミダゾール酢酸ＸＶＩＩＩを酢酸エステ
ルＸＩＸに変換することができ、ＸＩＸを最初にハロゲン化アルキルと反応させ
、次に還流メタノールで処理することで、位置特異的にアルキル化されたイミダ
ゾール酢酸エステルＸＸを得ることができる（図式３）。加水分解および１−（
３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）などの縮
合試薬存在下でのピペラジノンＶＩＩＩとの反応によって、ＸＸＩなどのアシル
化生成物が得られる。

【００６７】 ピペラジノンＶＩＩＩを、図式４におけるＸＸＩＩのような保護水酸基も有す
るアルデヒドで還元的にアルキル化する場合、次に保護基を脱離させて、水酸基
を露出させることができる（図式４、５）。得られるアルコールを標準的な条件
下で酸化してアルデヒドなどに変換することができ、次にそれを、グリニャール
試薬などの各種有機金属試薬と反応させることで、ＸＸＩＶなどの２級アルコー
ルを得ることができる。さらに、完全に脱保護されたアミノアルコールＸＸＶを
各種アルデヒドで還元的にアルキル化（前述の条件下で）することで、ＸＸＶＩ
（図式５）などの２級アミンまたは３級アミンを得ることができる。

【００６８】 さらに、Ｂｏｃ保護アミノアルコールＸＸＩＩＩを利用して、ＸＸＶＩＩなど
の２−アジリジニルメチルピペラジノン類を合成することができる（図式６）。
ジメチルホルムアミドなどの溶媒中、１，１’−スルホニルジイミダゾールおよ
び水素化ナトリウムでＸＸＩＩＩを処理することで、アジリジンＸＸＶＩＩが形
成される。塩基存在下、チオールなどの求核剤の存在下にアジリジンを反応させ
ることで、開環生成物ＸＸＶＩＩＩが得られる。

【００６９】 さらに、標準的な手順に従って、ピペラジノンＶＩＩＩを、Ｏ−アルキル化チ
ロシン類などのアミノ酸から誘導されるアルデヒドと反応させて、ＸＸＸなどの
化合物を得ることができる（図式７）。Ｒ’がアリール基の場合、最初にＸＸＸ
を水素化してフェノールを露出させ、アミン基を酸で脱保護することで、ＸＸＸ
Ｉを得ることができる。別法として、ＸＸＸ中のアミン保護基を脱離させ、ＸＸ
ＸＩＩなどのＯ−アルキル化フェノール性アミン類を得ることができる。

【００７０】 図式８には、置換されていても良いホモセリンラクトンＸＸＸＩＩＩを使用し
たＢｏｃ保護ピペラジノンＸＸＸＶＩＩの製造を示してある。前記の図式に示し
た方法に従って、中間体ＸＸＸＶＩＩの脱保護および還元的アルキル化もしくは
アシル化を行うことができる。別法として、中間体ＸＸＸＶＩＩの水酸基部分を
メシル化し、エタンチオールのナトリウム塩などの好適な求核剤で置き換えるこ
とで、中間体ＸＸＸＶＩＩＩを得ることができる。さらに、中間体ＸＸＸＶＩＩ
を酸化することで、中間体ＩＸＬ上のカルボン酸を得ることができ、それを用い
て、エステル部分もしくはアミド部分を形成することができる。

【００７１】 Ｎ−アラルキル−ピペラジン−５−オン類は、図式９に示した方法に従って製
造することができる。Ｂｏｃ保護アミノアルデヒド類Ｖ（前述の方法に従ってＩ
ＩＩから製造）の還元的アミノ化によって、化合物ＸＬが得られる。次にそれを
、ショッテン-バウマン条件下でブロモアセチルブロマイドと反応させ、ジメチ ルホルムアミドなどの極性非プロトン溶媒中、水素化ナトリウムなどの塩基を用
いて閉環を行ってＸＬＩを得る。塩化メチレン中トリフルオロ酢酸またはメタノ
ールもしくは酢酸エチル中塩化水素ガスなどの酸性条件下でカーバメート保護基
を脱離させ、得られるピペラジンを図式１〜７に記載の方法に従って最終生成物
とすることができる。

【００７２】 異性体のピペラジン−３−オン類は、図式１０に記載の方法に従って製造する
ことができる。アリールカルボキサミドＸＬＩＩおよび２−アミノグリシナール
ジエチルアセタール（ＸＬＩＩＩ）から得られるイミンを、ジクロロエタン中で
の水素化トリアセトキシホウ素ナトリウムなどの各種条件下で還元して、アミン
ＸＬＩＶを得ることができる。標準的条件下でアミノ酸ＩをアミンＸＬＩＶにカ
ップリングさせ、テトラヒドロフラン中の酸水溶液で処理して得られるアミドＸ
ＬＶを環化させて、不飽和のＸＬＶＩとすることができる。標準的条件下での接
触水素化によって必要な中間体ＸＬＶＩＩが得られ、それを図式１〜７に記載の
方法に従って処理して最終生成物とする。

【００７３】 天然アミノ酸には認められない側鎖を有する一般式ＩＬのアミノ酸は、容易に
製造されるイミンＸＬＶＩＩＩを原料として、図式１１に示した反応によって製
造することができる。

【００７４】

【化１５】

【００７５】

【化１６】

【００７６】

【化１７】

【００７７】

【化１８】

【００７８】

【化１９】

【００７９】

【化２０】

【００８０】

【化２１】

【００８１】

【化２２】

【００８２】

【化２３】

【００８３】

【化２４】

【００８４】

【化２５】

【００８５】

【化２６】

【００８６】

【化２７】

【００８７】

【化２８】

【００８８】

【化２９】

【００８９】

【化３０】 本発明の化合物は、哺乳動物、特にヒトに対する医薬として有用である。これ
らの化合物は患者に投与して、癌の治療に用いることができる。本発明の化合物
によって治療することが可能な癌の種類の例としては、結腸直腸癌、外分泌性膵
臓癌、骨髄性白血病および神経腫瘍などがあるが、これらに限定されるものでは
ない。そのような腫瘍は、ｒａｓ遺伝子自体における突然変異、Ｒａｓ活性を調
節できる蛋白（すなわち、ニューロフィブロミン（neurofibromin；ＮＦ−１） 、ｎｅｕ、ｓｒｃ、ａｂ１、ｌｃｋ、ｆｙｎ）における突然変異、または他の機
序によって生じ得るものである。

【００９０】 本発明の化合物は、ファルネシル蛋白トランスフェラーゼおよび癌遺伝子蛋白
Ｒａｓのファルネシル化を阻害する。本発明の化合物はさらに、腫瘍の脈管形成
を阻害することで、腫瘍の成長に影響を与えることもできる（J.Rak et al., Ca
ncer Research, 55:4575-4580(1995)）。本発明の化合物のそのような抗脈管形 成性も、網膜血管新生に関係するある種の視覚消失の治療において有用なものと
なり得る。

【００９１】 本発明の化合物はさらに、他の遺伝子での腫瘍形成性突然変異の結果としてＲ
ａｓ蛋白が異常に活性化される（すなわち、Ｒａｓ遺伝子自体は腫瘍形成型への
突然変異によっては活性化されない）、良性および悪性の両方の他の増殖性疾患
を阻害する上でも有用であり、そのような阻害は、そのような治療を必要とする
哺乳動物に対して有効量の本発明の化合物を投与することで行われる。例えばＮ
Ｆ−１の構成要素（component）は良性増殖性障害である。

【００９２】 本発明の化合物は、ある種のウィルス感染、特にはデルタ型肝炎ウィルスおよ
び関連ウィルス感染の治療においても有用であり得る（J.S.Glenn et al., Scie
nce, 256:1331-1333(1992)）。

【００９３】 本発明の化合物はさらに、新たな脈管内膜形成を阻害することで、経皮的経腔
的冠動脈血管形成術後の再狭窄の予防においても有用である（C.Indolfi et al.
, Nature medicine, 1:541-545(1995)）。

【００９４】 本発明の化合物はさらに、多嚢胞性腎臓疾患の治療および予防において有用な
ものともなり得る（D.L.Schaffner et al., American Journal of Pathology, 1
42:1051-1060(1993)およびB.Cowley, Jr. et al., FASEB Journal, 2:A3160(198
8)）。

【００９５】 本発明の化合物はさらに、真菌感染の治療にも有用となり得る。

【００９６】 本発明の化合物はさらに、血管平滑筋細胞の増殖阻害薬としても有用であり得
ることから、動脈硬化症および糖尿病性の血管障害の予防および治療に有用なも
のとなり得る。

【００９７】 本発明の化合物は哺乳動物、好ましくはヒトに対して、標準的な製薬上の実務
に従って、単独であるいは好ましくは医薬的に許容される担体、賦形剤または希
釈剤と併用して、医薬組成物にて投与することができる。本発明の化合物は、経
口的に投与するか、または静脈投与、筋肉投与、腹腔内投与、皮下投与、直腸投
与および局所投与などのように非経口的に投与することができる。

【００９８】 有効成分を含む医薬組成物は、例えば錠剤、トローチ、ロゼンジ剤、水系もし
くは油系の懸濁液、分散性粉体もしくは粒剤、乳濁液、硬もしくは軟カプセルま
たはシロップもしくはエリキシル剤などの経口用に適した剤型とすることができ
る。経口投与用組成物は、医薬組成物の製造に関して当業界で公知のいずれかの
方法に従って製造することができ、そのような組成物には、甘味剤、香味剤、着
色剤および保存剤から成る群から選択される１以上の薬剤を含有させて、医薬的
に見た目および風味が良い製剤を提供することができる。錠剤は、錠剤製造に好
適な無毒性の医薬的に許容される賦形剤との混合で有効成分を含有する。これら
の賦形剤には例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カ
ルシウムもしくはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；微結晶セルロース、ク
ロスカルメロースナトリウム（sodium crosscarmellose）、コーンスターチもし
くはアルギン酸などの造粒剤および崩壊剤；デンプン、ゼラチン、ポリビニルピ
ロリドンもしくはアカシアなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリ
ン酸もしくはタルクなどの潤滑剤などがあり得る。錠剤は未コーティングとする
ことができるか、あるいは公知の方法によってコーティングを施して、薬剤の好
ましくない味覚を隠蔽したり、あるいは消化管での崩壊および吸収を遅延させ、
それによって比較的長期間にわたって持続的作用を提供するようにすることがで
きる。例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースもしくはヒドロキシプロピ
ルセルロースなどの水溶性味覚隠蔽材料またはエチルセルロース、酢酸酪酸セル
ロースなどの時間遅延材料を用いることができる。

【００９９】 経口投与用製剤は、有効成分を例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウムもし
くはカオリンなどの不活性固体希釈剤と混和した硬ゼラチンカプセルとして、あ
るいは有効成分をポリエチレングリコールなどの水溶性担体または例えば落花生
油、液体パラフィンもしくはオリーブ油などの油系媒体と混和した軟ゼラチンカ
プセルとして提供することもできる。

【０１００】 水系懸濁液は、水系懸濁液の製造に好適な賦形剤と混和した形で活性材料を含
む。そのような賦形剤には、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセ
ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリ
ビニルピロリドン、トラガカントガムおよびアカシアガムなどの懸濁剤がある。
分散剤または湿展剤には、レシチンなどの天然ホスファチド、あるいは例えばポ
リオキシエチレンステアレートなどのアルキレンオキサイドと脂肪酸との縮合生
成物、またはヘプタデカエチレンオキシセタノールなどのエチレンオキサイドと
長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、またはポリオキシエチレンソルビトール
モノオレエートなどのエチレンオキサイドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導
される部分エステルとの縮合生成物、または例えばポリエチレンソルビタンモノ
オレエートなどのエチレンオキサイドと脂肪酸およびヘキシトール無水物から誘
導される部分エステルとの縮合生成物があり得る。水系懸濁液には、例えばｐ−
ヒドロキシ安息香酸のエチルもしくはｎ−プロピルエステルなどの１以上の保存
剤、１以上の着色剤、１以上の香味剤、ショ糖、サッカリンもしくはアスパルテ
ームなどの１以上の甘味剤を含有させることもできる。

【０１０１】 油系懸濁液は、例えば落花生油、オリーブ油、ゴマ油もしくはヤシ油などの植
物油または液体パラフィンなどの鉱油中に有効成分を懸濁させることで製剤する
ことができる。油系懸濁液には、蜜蝋、硬パラフィンもしくはセチルアルコール
などの増粘剤を含有させることができる。上記のような甘味剤および香味剤を加
えて、風味の良い経口製剤を得ることができる。これらの組成物は、ブチルヒド
ロキシアニソールまたはアルファトコフェロールなどの酸化防止剤を加えること
で保存することができる。

【０１０２】 水を加えることで水系懸濁液を調製する上で好適な分散性粉体および粒剤では
、有効成分を、分散剤もしくは湿展剤、懸濁剤および１以上の保存剤と混合する
。好適な分散剤もしくは湿展剤および懸濁剤の例としては、前述したものがある
。例えば甘味剤、香味剤および着色剤などの別の賦形剤を存在させることもでき
る。これらの組成物は、アスコルビン酸などの酸化防止剤を加えることで保存す
ることができる。

【０１０３】 本発明の医薬組成物はまた、水中油型乳濁液の形とすることもできる。油相は
、オリーブ油もしくは落花生油などの植物油または液体パラフィンなどの鉱油、
あるいはそれらの混合物とすることができる。好適な乳化剤には、例えば大豆レ
シチンなどの天然ホスファチド；ならびに、ソルビタンモノオレエートなどの脂
肪酸とヘキシトール無水物から誘導されるエステルもしくは部分エステル、およ
び例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなどのエチレンオキサイ
ドと前記部分エステルとの縮合生成物があり得る。乳濁液にはさらに、甘味剤、
香味剤、保存剤および酸化防止剤を含有させることもできる。

【０１０４】 シロップおよびエリキシル剤は、例えばグリセリン、プロピレングリコール、
ソルビトールまたはショ糖などの甘味剤を加えて製剤することができる。そのよ
うな製剤には、粘滑剤、保存剤、香味剤および着色剤、ならびに酸化防止剤を含
有させることもできる。

【０１０５】 医薬組成物は、無菌の注射用水溶液の形とすることができる。使用可能な許容
される担体および溶媒には、水、リンゲル液および等張塩化ナトリウム溶液があ
る。

【０１０６】 無菌の注射用製剤は、有効成分を油相に溶かした無菌注射用水中油型微粒子乳
濁液とすることもできる。例えば、有効成分を、最初に大豆油とレシチンの混合
液に溶かすことができる。次に、得られたオイル溶液を水とグリセリンの混合液
に入れ、処理して、微粒子乳濁液を形成する。

【０１０７】 注射用の液剤または微粒子乳濁液は、局所大量注射によって患者の血流中に入
れることができる。別法として、本発明の化合物の血液循環濃度を一定に維持す
るような形で、液剤もしくは微粒子乳濁液を投与するのが有利な場合がある。そ
のような一定濃度を維持するため、連続静脈注入装置を利用することができる。
そのような装置の例としては、デルテック（Deltec）ＣＡＤＤ−ＰＬＵＳ（登録
商標）５４００型静脈ポンプがある。

【０１０８】 医薬組成物は、筋肉投与および皮下投与用に、無菌の注射用水系もしくは油脂
系懸濁液の形とすることができる。その懸濁液は、上記の好適な分散剤もしくは
湿展剤および懸濁剤を用いて、公知の方法に従って製剤することができる。無菌
注射製剤は、例えば１，３−ブタンジオール溶液のように、無毒性の非経口的に
許容される希釈剤もしくは溶媒中の無菌注射用液剤または懸濁液とすることもで
きる。さらに、従来から溶媒または懸濁媒体として、無菌の固定油が使用されて
いる。それに関しては、合成モノもしくはジグリセリドなどのいかなる種類の固
定油も使用可能である。さらに、オレイン酸などの脂肪酸を注射剤の製剤に使用
することができる。

【０１０９】 式Ａの化合物は、薬剤の直腸投与用の坐剤の形で投与することもできる。その
ような組成物は、常温では固体であるが直腸体温では液体となることで、直腸で
融解して薬剤を放出する好適な無刺激性賦形剤と該薬剤とを混和することで製剤
することができる。そのような材料には、カカオ脂、グリセロゼラチン、硬化植
物油、各種分子量のポリエチレングリコールの混合物およびポリエチレングリコ
ールの脂肪酸エステル類がある。

【０１１０】 局所用には、式Ａの化合物を含むクリーム、軟膏、ゼリー、液剤または懸濁液
などを用いる（この投与法に関して、局所投与には含嗽液およびうがい剤が含ま
れる）。

【０１１１】 本発明の化合物は、好適な経鼻媒体および投与機器を介して経鼻投与用製剤で
投与することができるか、あるいは当業者には公知の経皮膏薬の形を用いた経皮
経路を介して投与することができる。経皮経路系の形で投与する場合には当然の
ことながら、薬剤投与は、投与法を通じて間歇的ではなく連続的となる。

【０１１２】 本明細書で使用する場合、「組成物」という用語は、所定量で所定の成分を含
むもの、ならびに直接または間接に、所定量での所定の成分の組み合わせによっ
て得られるものを包含するものである。

【０１１３】 本発明による化合物をヒト患者に投与する場合、１日用量は処方医が決定する
のが普通であり、その用量は通常、個々の患者の年齢、体重、性別および応答や
、患者の症状の重度に応じて変わるものである。

【０１１４】 一つの投与例においては、好適な量の化合物を、癌治療を受ける哺乳動物に投
与する。投与は、１日当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約６０ｍｇ／ｋｇ、好ましく
は１日当たり０．５ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇの量で行う。

【０１１５】 本発明の化合物はさらに、治療の対象となる状態に対して特に有用であること
から選択される他の公知の治療薬との併用で投与することもできる。例えば本発
明の化合物は、治療の対象となる状態に対して特に有用であることから選択され
る他の公知の抗癌剤との併用で投与することもできる。そのような治療薬併用の
例としては、本発明のファルネシル蛋白トランスフェラーゼ阻害薬と抗新生物剤
との併用がある。そのような抗新生物剤とファルネシル蛋白トランスフェラーゼ
阻害薬との併用は、放射線療法および外科手術のような他の癌および／または腫
瘍の治療方法と組み合わせて用いることができる。

【０１１６】 抗新生物剤の例としては、微小管安定化剤（例えば、パクリタクセル（paclit
axel；タキソール（登録商標）とも称される）、ドセタキソセル（docetaxel； タキソテル（Taxotere；登録商標）とも称される）、エポチロン（epothilone）
Ａ、エポチロンＢ、デスオキシエポチロンＡ、デスオキシエポチロンＢまたはそ
れらの誘導体）；微小管破壊剤；アルキル化剤、代謝拮抗剤；エピドフィロトキ
シン（epidophyllotoxin）；抗新生物酵素；トポイソメラーゼ阻害薬；プロカル
バジン；ミトキサントロン；白金配位錯体；生理応答調節剤および成長阻害剤；
ホルモン性／抗ホルモン性治療薬および造血成長因子などがある。

【０１１７】 抗新生物薬の種類としては、例えばアントラサイクリン系薬剤、ビンカ系薬剤
、マイトマイシン類、ブレオマイシン類、細胞毒性ヌクレオシド類、タキサン類
、エポチロン類、ディスコダーモライド（discodermolide）、プレリジン系薬剤
、ジイネン類（diynenes）およびポドフィロトキシン類などがある。これらの郡
の中で特に有用なものとしては例えば、ドキソルビシン、カルミノマイシン、ダ
ウノルビシン、アミノプテリン、メトトレキセート、メトプテリン、ジクロロメ
トトレキセート、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン、５−フルオロウラシ
ル、６−メルカプトプリン、ゲムシタビン（gemcitabine）、シトシンアラビノ シド、ポドフィロトキシンまたはエトポシド、リン酸エトポシドもしくはテニポ
シドなどのポドフィロトキシン誘導体、メルファラン、ビンブラスチン、ビンク
リスチン、ロイロシジン（leurosidine）、ビンデシン、ロイロシン、パクリタ クセル（paclitaxel）などがある。他の有用な抗新生物薬には、エストラムスチ
ン、シスプラチン、カルボプラチン、シクロフォスファミド、ブレオマイシン、
タモキシフェン、イホスファミド、メルファラン、ヘキサメチルメルファラン、
チオテパ、シタラビン、イダトレキサート（idatrexate）、トリメトレキサート
、ダカルバジン、Ｌ−アスパラギナーゼ、カンプトテシン、ＣＰＴ−１１、トポ
テカン（topotecan）、アラ−Ｃ（ara-C）、ビカルタミド（bicalutamide）、フ
ルタミド（flutamide）、ロイプロリド、ピリドベンゾインドール誘導体、イン ターフェロン類およびインターロイキン類などがある。

【０１１８】 好ましい種類の抗新生物薬はタキサン類であり、好ましい抗新生物薬はパクリ
タクセルである。

【０１１９】 外部照射光からまたは微小な放射能源の埋め込みによって加えられるＸ線また
はγ線などの放射線療法も、本発明のファルネシル蛋白トランスフェラーゼ阻害
薬と併用して、癌治療を行うことができる。

【０１２０】 さらに、本発明の化合物は、１９９７年１０月２３日公開のＷＯ ９７／３８ ６９７（引用によって本明細書に含まれるものとする）に記載のように、放射線
増感剤として有用なものとなり得る。

【０１２１】 本発明の化合物はまた、細胞表面成長因子受容体を核信号に連結して細胞増殖
を開始するシグナリング経路の一部についての阻害薬との併用で有用なものとも
なり得る。そこで本発明の化合物を、ファルネシル蛋白トランスフェラーゼ活性
のファルネシルピロリン酸系拮抗阻害薬と併用、あるいはＲａｆ拮抗薬活性を有
する化合物と併用することができる。本発明の化合物はまた、ゲラニルゲラニル
蛋白トランスフェラーゼまたはファルネシル蛋白トランスフェラーゼの選択的阻
害薬である化合物と併用することもできる。

【０１２２】 特に、米国特許出願０８／２５４２２８号および０８／４３５０４７号のよう
な特許および刊行物に開示の化合物は、本発明の組成物のファルネシルピロリン
酸系拮抗阻害薬成分として有用なものとなり得る。これらの特許および刊行物は
、引用によって本明細書に含まれるものとする。

【０１２３】 ２種類以上の蛋白基質拮抗阻害薬と１種類のファルネシルピロリン酸拮抗阻害
薬とを、同時もしくは順次またはいずれかの順序で投与する段階を有する本発明
の方法を実施するにおいて、そのような投与は、経口投与あるいは静脈投与、筋
肉投与、腹腔内投与、皮下投与、直腸投与および局所投与などの非経口投与とす
ることができる。そのような投与は経口投与とすることが好ましい。そのような
投与は経口投与で同時投与とすることがさらに好ましい。蛋白基質拮抗阻害薬と
ファルネシルピロリン酸拮抗阻害薬とを順次投与する場合、それぞれの投与は、
同一の方法または異なる方法で行うことができる。

【０１２４】 本発明の化合物はまた、１９９８年４月６日出願の米国特許出願０９／０５５
４８７号（引用によって本明細書に含まれるものとする）に記載のような癌治療
用のインテグリン拮抗薬との併用に有用なものとなり得る。

【０１２５】 本明細書で使用する場合、インテグリン拮抗薬という用語は、脈管形成の調節
または腫瘍細胞の成長および侵襲性に関与するインテグリンに対する生理的リガ
ンドの結合を選択的に拮抗、阻害または妨害する化合物を指す。詳細にはその用
語は、ａｖｂ３インテグリンに対する生理的リガンドの結合を選択的に拮抗、阻
害または妨害する化合物；ａｖｂ５インテグリンに対する生理的リガンドの結合
を選択的に拮抗、阻害または妨害する化合物；ａｖｂ３インテグリンとａｖｂ５
インテグリンの両方に対する生理的リガンドの結合を拮抗、阻害または妨害する
化合物；あるいは毛細管内皮細胞上で発現される特定のインテグリンの活性を拮
抗、阻害または妨害する化合物を指す。その用語はまた、ａｖｂ６、ａｖｂ８、
ａ１ｂ１、ａ２ｂ１、ａ５ｂ１、ａ６ｂ１およびａ６ｂ４インテグリンの拮抗薬
も指す。その用語はまた、ａｖｂ３、ａｖｂ５、ａｖｂ６、ａｖｂ８、ａ１ｂ１
、ａ２ｂ１、ａ５ｂ１、ａ６ｂ１およびａ６ｂ４インテグリンのいずれかの組み
合わせの拮抗薬も指す。本発明の化合物はまた、アンギオスタチン（angiostati
n）およびエンドスタチン（endostatin）など（これらに限定されるものではな いが）の、脈管形成を阻害することで腫瘍細胞の成長および侵襲性を阻害する他
の薬剤との併用にも有用なものとなり得る。

【０１２６】 同様に、本発明の化合物は、ＮＦ−１、再狭窄、多嚢胞性腎疾患、デルタ型肝
炎ウィルスおよび関連ウィルスの感染、ならびに真菌感染の治療および予防にお
いて有効な薬剤との併用において有用なものとなり得る。

【０１２７】 固定用量として製剤する場合、そのような併用製剤では、本発明の化合物を以
下に記載の用量範囲内で用い、他の医薬活性剤をそれの承認された用量範囲内で
用いる。複数薬剤併用製剤が不適切である場合には、別法として、本発明の化合
物を、公知の医薬的に許容される薬剤とともに順次使用することができる。

【０１２８】 （実施例） 以下の実施例は、本発明についての理解をさらに深めるためのものである。特
定の使用材料、化学種および条件は、本発明をさらに詳細に説明するためのもの
であって、本発明の妥当な範囲を制限するものでない。実施例１ １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−５−イミダ ゾリルメチル］−２−ピペラジノン・２塩酸塩（化合物１） 段階Ａ：１−トリフェニルメチル−４−（ヒドロキシメチル）イミダゾールの製 造 ４−（ヒドロキシメチル）イミダゾール塩酸塩（３５．０ｇ、２６０ｍｍｏｌ
）の脱水ＤＭＦ（２５０ｍＬ）溶液に、室温でトリエチルアミン（９０．６ｍＬ
、６５０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液から白色固体が沈殿した。クロロトリフェニ
ルメタン（７６．１ｇ、２７３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（５００ｍＬ）溶液を滴下し
た。反応混合物を２０時間攪拌し、氷に投入し、濾過し、氷水で洗浄した。得ら
れた生成物を冷ジオキサンでスラリー状とし、濾過し、減圧乾燥して、標題化合
物を白色固体として得た。その固体は、次の段階で使用できるだけの純度を有し
ていた。

【０１２９】段階Ｂ：１−トリフェニルメチル−４−（アセトキシメチル）イミダゾールの製 造 段階Ａからのアルコール（２６０ｍｍｏｌ、上記で製造）をピリジン５００ｍ
Ｌに懸濁させた。無水酢酸（７４ｍＬ、７８０ｍｍｏｌ）を滴下し、反応液を均
一になるまで４８時間攪拌した。溶液をＥｔＯＡｃ（２リットル）に投入し、水
（１リットルで３回）、５％ＨＣｌ水溶液（１リットルで２回）、飽和ＮａＨＣ
Ｏ_３水溶液およびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧下
に濃縮して、粗生成物を得た。得られた酢酸エステルを白色粉末として単離した
が、それは次の反応で使用できるだけの純度を有していた。

【０１３０】段階Ｃ：１−（４−シアノベンジル）−５−（アセトキシメチル）イミダゾール 臭化水素酸塩の製造 段階Ｂからの生成物（８５．８ｇ、２２５ｍｍｏｌ）およびａ−ブロモ−ｐ−
トルニトリル（５０．１ｇ、２３２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）溶液
を６０℃で２０時間攪拌したところ、その間に淡黄色沈殿物が生成した。反応液
を冷却して室温とし、濾過して、固体のイミダゾリウムブロマイド塩を得た。濾
液を減圧下に濃縮して容量２００ｍＬとし、６０℃で２時間再加熱し、冷却して
室温とし、再度濾過した。濾液を減圧下に濃縮して容量１００ｍＬとし、６０℃
でさらに２時間再加熱し、冷却して室温とし、減圧下に濃縮して淡黄色固体を得
た。得られた固体全てを合わせ、メタノール５００ｍＬに溶かし、６０℃まで昇
温した。２時間後、溶液を減圧下に再度濃縮して白色固体を得て、それをヘキサ
ンと磨砕して、可溶物を除去した。減圧下に残留溶媒を除去することで、標題の
生成物である臭化水素酸塩を白色固体として得た。その塩を、それ以上精製せず
に次に段階で用いた。

【０１３１】段階Ｄ：１−（４−シアノベンジル）−５−（ヒドロキシメチル）イミダゾール の製造 段階Ｃからの酢酸エステル（５０．４ｇ、１５０ｍｍｏｌ）の３：１ＴＨＦ：
水（１．５リットル）溶液に０℃で、水酸化リチウム・１水和物（１８．９ｇ、
４５０ｍｍｏｌ）を加えた。１時間後、反応液を減圧下に濃縮し、ＥｔＯＡｃ（
３リットル）で希釈し、水、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液およびブラインで洗浄した
。次に、溶液を脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧下に濃縮して、粗生成物
を淡黄色綿毛状固体として得た。その固体は、それ以上精製せずに次の段階で使
用できるだけの純度を有していた。

【０１３２】段階Ｅ：１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾールカルボキシアルデヒド の製造 段階Ｄからのアルコール（２１．５ｇ、１０１ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５００
ｍＬ）溶液に室温で、トリエチルアミン（５６ｍＬ、４０２ｍｍｏｌ）、次にＳ
Ｏ_３−ピリジン錯体（４０．５ｇ、２５４ｍｍｏｌ）を加えた。４５分後、反応
液をＥｔＯＡｃ２．５リットルに投入し、水（１リットルで４回）およびブライ
ンで洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧下に濃縮して、標題のアル
デヒドを白色粉末として得た。その取得物は、それ以上精製せずに次の段階で使
用できるだけの純度を有していた。

【０１３３】段階Ｆ：Ｎ−（３−クロロフェニル）エチレンジアミン塩酸塩の製造 ３−クロロアニリン（３０．０ｍＬ、２８４ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（５０
０ｍＬ）溶液に０℃で、４Ｎ ＨＣｌの１，４−ジオキサン溶液（８０ｍＬ、Ｈ Ｃｌが３２０ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を昇温させて室温とし、減圧下に濃縮
・乾固させて、白色粉末を得た。この粉末と２−オキサゾリジノン（２４．６ｇ
、２８２ｍｍｏｌ）との混合物を、窒素雰囲気下、１６０℃で１０時間加熱した
ところ、その間に固体が溶融し、ガスの発生が認められた。反応液を放冷したと
ころ、粗ジアミン塩酸塩が淡褐色固体として生成した。

【０１３４】段階Ｇ：Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ’−（３−クロロフェニル ）エチレンジアミンの製造 段階Ｆからのアミン塩酸塩（約２８２ｍｍｏｌ、上記で製造した粗取得物）を
ＴＨＦ５００ｍＬおよび飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液５００ｍＬに取り、冷却して０
℃とし、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカーボネート（６１．６ｇ、２８２ｍｍｏｌ
）を加えた。３０時間後、反応液をＥｔＯＡｃに投入し、水およびブラインで洗
浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧下に濃縮して、標題のカーバメー
トを褐色油状物として得た。それをそれ以上精製せずに次の段階で用いた。

【０１３５】段階Ｈ：Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルバモイル）エチル］−Ｎ−（３− クロロフェニル）−２−クロロアセトアミドの製造 段階Ｇからの生成物（７７ｇ、約２８２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（
６７ｍＬ、４８０ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（５００ｍＬ）溶液を冷却して０℃
とした。クロロアセチルクロライド（２５．５ｍＬ、３２０ｍｍｏｌ）を滴下し
、反応液を攪拌しながら０℃に維持した。３時間後、追加のクロロアセチルクロ
ライド（３．０ｍＬ）を滴下した。３０分後、反応液をＥｔＯＡｃ（２リットル
）に投入し、水、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液およびブライ
ンで洗浄した。溶液を脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧下に濃縮して、ク
ロロアセトアミドを褐色油状物として得た。それをそれ以上精製せずに次の段階
で用いた。

【０１３６】段階Ｉ：４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−１−（３−クロロフェニル） −２−ピペラジノンの製造 段階Ｈからのクロロアセトアミド（約２８２ｍｍｏｌ）の脱水ＤＭＦ（７００
ｍＬ）溶液に、Ｋ_２ＣＯ_３（８８ｇ、０．６４ｍｏｌ）を加えた。溶液を７０〜
７５℃の油浴で２０時間加熱し、冷却して室温とし、減圧下に濃縮してＤＭＦ約
５００ｍＬを除去した。残留物を３３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンに投入し、水およ
びブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧下に濃縮して、生
成物を褐色油状物として得た。その取得物を、シリカゲルクロマトグラフィー（
２５から５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、純粋な生成物と、そ
れより極性の低い不純物を含む生成物サンプル（ＨＰＬＣで純度約６５％）を得
た。

【０１３７】段階Ｊ：１−（３−クロロフェニル）−２−ピペラジノンの製造 段階ＩからのＢｏｃ保護ピペラジノン（１７．１９ｇ、５５．４ｍｍｏｌ）の
ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）溶液に、−７８℃で、無水ＨＣｌガスを吹き込んだ。
飽和溶液を昇温させて０℃とし、１２時間攪拌した。反応液に窒素ガスを吹き込
んで過剰のＨＣｌを除去し、混合物を昇温させて室温とした。溶液を減圧下に濃
縮して、塩酸塩を白色粉末として得た。その取得物をＣＨ_２Ｃｌ_２３００ｍＬに
取り、希ＮａＨＣＯ_３水溶液で処理した。水相を、分析によって完全に抽出され
ていることが示されるまで、ＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した（３００ｍＬで８回）。合
わせた有機混合液を脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾過し、減圧下に濃縮して、標題
の遊離アミンを淡褐色油状物として得た。

【０１３８】段階Ｋ：１−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−５ −イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン・２塩酸塩の製造 段階Ｊからのアミン（５５．４ｍｍｏｌ、上記で製造）の１，２−ジクロロエ
タン（２００ｍＬ）溶液に０℃で、４Å粉砕モレキュラーシーブス（１０ｇ）を
加え、次に水素化ホウ素トリアセトキシナトリウム（１７．７ｇ、８３．３ｍｍ
ｏｌ）を加えた。実施例１の段階Ｅからのイミダゾールカルボキシアルデヒド（
１１．９ｇ、５６．４ｍｍｏｌ）を加え、反応液を０℃で攪拌した。２６時間後
、反応液をＥｔＯＡｃに投入し、希ＮａＨＣＯ_３で洗浄し、水層をＥｔＯＡｃで
逆抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濾
過し、減圧下に濃縮した。得られた生成物を５：１ベンゼン：ＣＨ_２Ｃｌ_２（５
００ｍＬ）に取り、プロピルアミン（２０ｍＬ）を加えた。混合物を１２時間攪
拌し、減圧下に濃縮して、淡黄色泡状物を得た。その取得物をシリカゲルクロマ
トグラフィー（２から７％ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２）によって精製し、得られた
白色泡状物をＣＨ_２Ｃｌ_２に取り、２．１当量の１Ｍ ＨＣｌ／エーテル溶液で 処理した。減圧下に濃縮後、生成物である２塩酸塩を白色粉末として単離した。

【０１３９】 実施例２および３の化合物（表１）を、構造的に関連のある化合物の合成につ
いて記載した上記の方法を用いて製造した。表１には、実施例１に記載の手順を
用いて製造した本発明の他の化合物を挙げてある。段階Ｆで、３−クロロアニリ
ンに代えて、適切に置換されたアニリンを用いた。

【０１４０】

【化３１】

【０１４１】実施例６ １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−メトキシベンジル ）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン・２塩酸塩 段階Ａ：４−アミノ−３−ヒドロキシ安息香酸メチルの製造 ４−アミノ−３−ヒドロキシ安息香酸（７５ｇ、０．４９ｍｏｌ）の脱水メタ
ノール（２．０リットル）溶液に、室温で無水ＨＣｌガスを吹き込んで、溶液を
飽和させた。溶液を４８時間攪拌してから、減圧下に濃縮した。生成物をＥｔＯ
Ａｃと飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液との間で分配し、有機層をブラインで洗浄し、脱
水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下に濃縮して、標題化合物を得た。

【０１４２】段階Ｂ：３−ヒドロキシ−４−ヨード安息香酸メチルの製造 段階Ａからの生成物（７９ｇ、０．４７ｍｏｌ）、３Ｎ ＨＣｌ（７５０ｍＬ ）およびＴＨＦ（２５０ｍＬ）の不透明暗色溶液を冷却して０℃とした。ＮａＮ
Ｏ_２（３５．９ｇ、０．５２ｍｏｌ）の水溶液（水１１５ｍＬ）を５分間かけて
加え、溶液をさらに２５分間攪拌した。ヨウ化カリウム（３１２ｇ、１．８８ｍ
ｏｌ）の水溶液（水２３５ｍＬ）を一気に加え、反応液をさらに１５分間攪拌し
た。、混合物をＥｔＯＡｃに投入し、振盪し、分液を行った。有機相を水および
ブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下に濃縮して、粗生成物（１
４８ｇ）を得た。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（０％から５０％Ｅ
ｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、標題生成物を得た。

【０１４３】段階Ｃ：４−シアノ−３−ヒドロキシ安息香酸メチルの製造 段階Ｂからのヨージド生成物（１０１ｇ、０．３６ｍｏｌ）およびシアン化亜
鉛（ＩＩ）（３０ｇ、０．２５ｍｏｌ）の脱水ＤＭＦ（４００ｍＬ）中混合物を
、該液に２０分間にわたってアルゴンを吹き込むことで脱気した。テトラキス（
トリフェニルホスフィン）パラジウム（８．５ｇ、７．２ｍｍｏｌ）を加え、溶
液を加熱して８０℃とし、４時間経過させた。溶液を冷却して室温とし、さらに
３６時間攪拌した。反応液をＥｔＯＡｃ／水に投入し、有機層をブラインで洗浄
し（４回）、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下に濃縮して、粗生成物を得た。シ
リカゲルでのカラムクロマトグラフィー精製（３０％から５０％ＥｔＯＡｃ／ヘ
キサン）によって、標題生成物を得た。

【０１４４】段階Ｄ：４−シアノ−３−メトキシ安息香酸メチルの製造 水素化ナトリウム（６０重量％鉱油分散品として９ｇ、０．２４ｍｏｌ）を、
段階Ｃからのフェノール（３６．１ｇ、２０４ｍｍｏｌ）の脱水ＤＭＦ（４００
ｍＬ）溶液に室温で加えた。ヨウ化メチル（１４ｍＬ、０．２２ｍｏｌ）を加え
、反応液を２時間攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃ／水に投入し、有機層を水およ
びブライン（４回）で洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下に濃縮して、標
題化合物を得た。

【０１４５】段階Ｅ：４−シアノ−３−メトキシベンジルアルコールの製造 段階Ｄからのエステル（４８．８ｇ、２５５ｍｍｏｌ）の脱水ＴＨＦ（４００
ｍＬ）溶液に、アルゴン下室温で、水素化ホウ素リチウム（２５５ｍＬ、５１０
ｍｍｏｌ、２Ｍ ＴＨＦ）を５分間かけて加えた。１．５時間後、反応液を０． ５時間にわたって加熱還流させ、冷却して室温とした。溶液をＥｔＯＡｃ／１Ｎ
ＨＣｌ溶液に投入し（注意！）、分液を行った。有機層を水、飽和Ｎａ_２ＣＯ _３ およびブライン（４回）で洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下に濃縮し
て、標題生成物を得た。

【０１４６】段階Ｆ：４−シアノ−３−メトキシベンジルブロマイドの製造 段階Ｅからのアルコール（３５．５ｇ、２１８ｍｍｏｌ）の脱水ＴＨＦ（５０
０ｍＬ）溶液を冷却して０℃とした。トリフェニルホスフィン（８５．７ｇ、３
２７ｍｍｏｌ）を加え、次に四臭化炭素（１０８．５ｇ、３２７ｍｍｏｌ）を加
えた。反応液を０℃で３０分間攪拌し、室温で２１時間攪拌した。シリカゲルを
加え（約３００ｇ）、懸濁液を減圧下に濃縮した。得られた固体をシリカゲルク
ロマトグラフィーカラムに負荷した。フラッシュクロマトグラフィー（３０％か
ら５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製を行って、標題化合物を得た。

【０１４７】段階Ｇ：１−（４−シアノ−３−メトキシベンジル）−５−（アセトキシメチル ）−イミダゾール臭化水素酸塩の製造 実施例１の段階Ｃに記載の手順を用いて、実施例１の段階Ｂからのイミダゾー
ル生成物（３４．９ｇ、９１ｍｍｏｌ）と段階Ｆからのブロマイド（２１．７ｇ
、９６ｍｍｏｌ）を反応させることで、標題生成物を製造した。粗生成物をヘキ
サンと磨砕することで、標題生成物である臭化水素酸塩を得た。

【０１４８】段階Ｈ：１−（４−シアノ−３−メトキシベンジル）−５−（ヒドロキシメチル ）−イミダゾールの製造 実施例１の段階Ｄに記載の手順を用いて、段階Ｇからの酢酸エステル（１９．
４３ｇ、６８．１ｍｍｏｌ）を加水分解することで、標題生成物を製造した。粗
標題生成物を低い収率で単離した（１１ｇ、収率６６％）。水系抽出液を濃縮す
ることで固体（約１００ｇ）を得たが、それには^１Ｈ ＮＭＲスペクトル測定で の判断で、かなりの量の標題生成物が含まれていた。

【０１４９】段階Ｉ：１−（４−シアノ−３−メトキシベンジル）−５−イミダゾールカルボ キシアルデヒドの製造 実施例１の段階Ｅに記載の手順を用いて、段階Ｈからのアルコール（１１ｇ、
４５ｍｍｏｌ）を酸化することで、標題生成物を製造した。標題のアルデヒドを
白色粉末として単離したが、それはそれ以上精製せずに次の段階で使用できるだ
けの純度を有していた。

【０１５０】段階Ｊ：１−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−メトキシ ベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン・２塩酸塩の製造 実施例１の段階Ｈに記載の手順を用いて、段階Ｉからのアルデヒド（８５９ｍ
ｇ、３．５６ｍｍｏｌ）および実施例１の段階Ｋからのアミン（塩酸塩）（８０
０ｍｇ、３．２４ｍｍｏｌ）の還元的アルキル化を行うことで、標題生成物を製
造した。シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（５０％から７５
％アセトン／ＣＨ_２Ｃｌ_２）による精製を行い、得られた白色泡状物をそれの２
塩酸塩に変換することで、標題生成物を白色粉末として得た。

【０１５１】 ＦＡＢ ｍｓ（ｍ＋１）：４３７ 元素分析：Ｃ_２３Ｈ_２３ＣｌＮ_５Ｏ_２・２．０ＨＣｌ・０．３５ＣＨ_２Ｃｌ_２ 計算値：Ｃ、５１．９７；Ｈ、４．８０；Ｎ、１２．９８ 実測値：Ｃ、５２．１１；Ｈ、４．８０；Ｎ、１２．２１

【０１５２】実施例７ １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−メ トキシベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン・２塩酸塩 実施例１の段階Ｆ〜Ｊの方法を用いて、３−トリフルオロメトキシアニリンか
ら、１−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−２−ピペラジノン塩酸塩を製
造した。このアミン（１．７５ｇ、５．９３ｍｍｏｌ）を、実施例１の段階Ｈに
記載の手順を用いて、実施例６の段階Ｉからのアルデヒド（１．５７ｇ、６．５
２ｍｍｏｌ）にカップリングさせた。シリカゲルでのフラッシュカラムクロマト
グラフィー（６０％から１００％アセトン／ＣＨ_２Ｃｌ_２）精製を行い、得られ
た白色泡状物をそれの２塩酸塩に変換することで、標題生成物を白色粉末として
得た。

【０１５３】 ＦＡＢ ｍｓ（ｍ＋１）：４８６ 元素分析：Ｃ_２４Ｈ_２３Ｆ_３Ｎ_５Ｏ_３・２．０ＨＣｌ・０．６０Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、５０．６４；Ｈ、４．４６；Ｎ、１２．３０ 実測値：Ｃ、５０．６９；Ｈ、４．５２；Ｎ、１２．１３

【０１５４】実施例８ （Ｒ）−５−［（ベンジルオキシ）メチル］−１−（３−クロロフェニル）−４
−［１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノ
ン・２塩酸塩段階Ａ〜Ｅ：（Ｒ）−５−［（ベンジルオキシ）メチル］−１−（３−クロロフ ェニル）−２−ピペラジノン塩酸塩の製造 構造的に関連する化合物５（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−（２，３−ジメチルフェ
ニル）−２−ピペラジノン塩酸塩の合成について説明した、以下の方法に変更を
加えることで、標題化合物を製造した。段階Ａで、２（Ｓ）−（ブトキシカルボ
ニルアミノ）ヘキサン酸に代えてＮ−Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（ＯＢｎ）−ＯＨを用いた
。 段階Ａ：Ｎ−メトキシ−Ｎ−メチル ２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニ
ルアミノ）−ヘキサンアミド ２（Ｓ）−（ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサン酸（２４．６ｇ、０．１０
６ｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（１５．５ｇ、０．１
５ｍｏｌ）、ＥＤＣ塩酸塩（２２．３ｇ、０．１１７ｍｏｌ）およびＨＯＢＴ（
１４．３ｇ、０．１０６ｍｏｌ）を、窒素下２０℃で、脱水・脱気ＤＭＦ（３０
０ｍＬ）中にて攪拌した。Ｎ−メチルモルホリンを加えてｐＨ７とした。反応液
を終夜攪拌し、ＤＭＦを高真空下に蒸留し、残留物を酢酸エチルと２％硫酸水素
カリウムとの間で分配した。有機相を飽和重炭酸ナトリウム、水および飽和ブラ
インで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。溶媒を減圧下に除去して、標題化
合物を得た。

【０１５５】段階Ｂ：２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）ヘキサナール 水素化リチウムアルミニウム（５．００ｇ、０．１３１ｍｏｌ）のエーテル（
２５０ｍＬ）懸濁液を攪拌機で攪拌しながら、窒素下で冷却して−４５℃とした
。温度を−３５℃以下に維持しながら、段階Ａからの生成物（２８．３ｇ、０．
１０３ｍｏｌ）のエーテル（１２５ｍＬ）溶液を加えた。添加終了後、反応液を
昇温させて５℃とし、再度冷却して−４５℃とした。温度を−５℃以下に維持し
ながら、硫酸水素カリウム（２７．３ｇ、０．２００ｍｏｌ）の水溶液をゆっく
り加えた。反応停止後、反応液を室温で１時間攪拌した。混合物をセライト濾過
し、エーテルを留去し、残留物を酢酸エチルと２％硫酸水素カリウムとの間で分
配した。飽和ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水し、溶媒を除去した後
、標題化合物を得た。

【０１５６】段階Ｃ：Ｎ−（２，３−ジメチルフェニル）−２（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブトキシ カルボニルアミノ）−ヘキサンアミン 窒素下で、２，３−ジメチルアニリン（８．３２ｍＬ、６８．３ｍｍｏｌ）を
ジクロロエタンに溶かした。酢酸を加えてｐＨを５とし、水素化ホウ素トリアセ
トキシナトリウム（１７．２ｇ、８０．８ｍｍｏｌ）および粉砕モレキュラーシ
ーブス（４ｇ）を加えた。段階Ｂからの生成物（１３．３ｇ、６２．１ｍｍｏｌ
）のジクロロエタン（８０ｍＬ）溶液を、２０℃でゆっくり滴下した。反応液を
終夜攪拌し、飽和重炭酸ナトリウム溶液で反応停止した。水層を除去し、有機相
を飽和ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。ヘキサンからの結晶化
によって、標題化合物を得た。

【０１５７】段階Ｄ：４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−５（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−（２ ，３−ジメチルフェニル）−２−ピペラジノン 段階Ｃからの生成物（８．５０ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（２５０
ｍＬ）溶液を、飽和重炭酸ナトリウム（１５０ｍＬ）とともに０℃で高攪拌した
。クロロアセチルクロライド（２．３３ｍＬ、２９．１ｍｍｏｌ）を加え、反応
液を０℃で１時間攪拌した。分液を行い、酢酸エチル層を飽和ブラインで洗浄し
、硫酸マグネシウムで脱水した。粗生成物をＤＭＦ（３００ｍＬ）に溶かし、窒
素下に冷却して０℃とした。水素化ナトリウム（６０％オイル分散品１．７９ｇ
、４４．９ｍｍｏｌ）を少量ずつ加えて、水素の発生を中等度に維持した。３０
分後、追加の水素化ナトリウムを加えた（０．８ｇ）。反応液をさらに３０分間
攪拌し、飽和塩化アンモニウムで反応停止した。ＤＭＦを減圧下に留去し、残留
物を酢酸エチルと水との間で分配した。有機相を水、飽和ブラインで洗浄し、硫
酸マグネシウムで脱水した。粗生成物について、溶離液を２０％から３０％酢酸
エチル／ヘキサンとするシリカゲルでのクロマトグラフィー精製を行って、標題
化合物を得た。

【０１５８】段階Ｅ：５（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−（２，３−ジメチルフェニル）−２−ピペ ラジノン 段階Ｄからの生成物（０．５７０ｇ、１．５８ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（５０
ｍＬ）溶液を、窒素下に冷却して−１５℃とした。ＨＣガスを１５分間吹き込み
、反応液を昇温させて０℃とし、２時間経過させた。溶媒を減圧下に除去して、
標題生成物を得た。

【０１５９】段階Ｆ：（Ｒ）−５−［（ベンジルオキシ）メチル］−１−（３−クロロフェニ ル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピ ペラジノン・２塩酸塩 実施例１の段階Ｋに記載の手順を用いて、実施例１の段階Ｅからのアルデヒド
（１８１ｍｇ、０．８５８ｍｍｏｌ）および本実施例からの（Ｒ）−５−［（ベ
ンジルオキシ）メチル］−１−（３−クロロフェニル）−２−ピペラジノン塩酸
塩（２０５ｍｇ、０．５５８ｍｍｏｌ）の還元的アルキル化を行うことで、標題
生成物を製造した。シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（アセ
トン／ＣＨ_２Ｃｌ_２）精製を行い、２塩酸塩に変換することで、標題生成物を白
色粉末として得た。

【０１６０】 ＦＡＢ ｍｓ（ｍ＋１）：５２６ 元素分析：Ｃ_３０Ｈ_２８ＣｌＮ_５Ｏ_２・２．１５ＨＣｌ・０．５５Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、５８．６５；Ｈ、５．１３；Ｎ、１１．４０ 実測値：Ｃ、５８．６３；Ｈ、５．１３；Ｎ、１１．１８

【０１６１】実施例９ １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−（トリフルオロメ
トキシ）ベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン・２塩酸塩
段階Ａ：４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ベンゾニトリルの製造 ４−ブロモ−２−（トリフルオロメトキシ）ヨードベンゼン（２５ｇ、６８ｍ
ｍｏｌ）およびシアン化亜鉛（ＩＩ）（４．０ｇ、３４ｍｍｏｌ）の脱気ジメチ
ルホルムアミド（１５０ｍＬ）溶液に、テトラキス（トリフェニルホスフィン）
パラジウム（３．１ｇ、４モル％）を加えた。溶液を８０℃で１時間攪拌し、冷
却して室温とした。追加のシアン化亜鉛（ＩＩ）（８００ｍｇ）およびテトラキ
ス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（７００ｍｇ）を加え、溶液を８０℃
で３時間加熱した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液とブラ
インで抽出し、硫酸ナトリウムで脱水し、減圧下に濃縮した。シリカゲルカラム
クロマトグラフィー精製（０％から５％エーテル／ヘキサン）によって、標題生
成物を得た。

【０１６２】段階Ｂ：４−シアノ−３−（トリフルオロメトキシ）安息香酸メチルの製造 段階Ａからの生成物（３．８２ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（Ｉ
Ｉ）（１５０ｍｇ、０．４重量％）、１，３−ビス（ジフェニルホスフィノ）プ
ロパン（３００ｍｇ）およびトリエチルアミン（３．５ｍＬ）のＭｅＯＨ（３０
ｍＬ）およびＤＭＳＯ（１５ｍＬ）溶液に、一酸化炭素ガスを６時間吹き込んだ
。一酸化炭素風船下で、反応液を加熱して８０℃とし、攪拌した。約１６時間後
、追加の酢酸パラジウム（ＩＩ）（１００ｍｇ）および１，３−ビス（ジフェニ
ルホスフィノ）プロパン（２００ｍｇ）を加え、溶液をさらに２０時間攪拌した
。混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、水およびブラインで抽出し、硫酸ナトリウムで
脱水し、濾過し、減圧下に濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２
０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製を行って、標題生成物を得た。

【０１６３】段階Ｃ：４−シアノ−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジルアルコールの製造 段階Ｂからの生成物（４．２９ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）のメタノール（１００
ｍＬ）溶液に０℃で、水素化ホウ素ナトリウム（１．３ｇ、３５ｍｍｏｌ）を加
えた。溶液を２時間かけて昇温させて室温とした。追加の水素化ホウ素ナトリウ
ム（５００ｍｇ）を加え、溶液を３０分間攪拌した。混合物をＥｔＯＡｃで希釈
し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで抽出し、硫酸ナトリウムで脱水し、
濾過し、減圧下に濃縮して、標題生成物を得た。

【０１６４】段階Ｄ：１−［４−シアノ−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−５−（ アセトキシメチル）−イミダゾールの製造 段階Ｃからの生成物（１．５ｇ、６．９ｍｍｏｌ）および実施例１の段階Ｂか
らの生成物（２．６ｇ、６．９ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１０ｍＬ）溶液を−
７８℃とし、それにジイソプロピルエチルアミン（２．４ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）
を加え、次に無水トリフルオロメタンスルホン酸（１．２６ｍＬ、７．５ｍｍｏ
ｌ）を加えた。溶液を１５分間攪拌してから、昇温させて室温とした。２時間後
、メタノール（１０ｍＬ）を加え、溶液を４８時間攪拌した。反応液を減圧下に
濃縮し、ＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブラインで抽出し、
硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下に濃縮した。シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（５％から１０％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ）による精製を行って、標
題生成物を得た。

【０１６５】段階Ｅ：１−［４−シアノ−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−５−（ ヒドロキシメチル）−イミダゾールの製造 実施例１の段階Ｄに記載の手順を用いて、段階Ｄの生成物（１．９４ｇ、５．
７２ｍｍｏｌ）から、標題化合物を製造した。

【０１６６】段階Ｆ：１−［４−シアノ−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］−イミダ ゾール−５−カルボキシアルデヒドの製造 実施例１の段階Ｅに記載の手順を用いて、段階Ｅの生成物（１．３１ｇ、４．
４１ｍｍｏｌ）から、標題化合物を製造した。それによって、標題化合物を得た
。

【０１６７】段階Ｇ：１−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−（トリフ ルオロメトキシ）ベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン・ ２塩酸塩の製造 実施例１の段階Ｋに記載の手順を用いて、段階Ｆの生成物（２６４ｍｇ、０．
８９ｍｍｏｌ）および実施例１の段階Ｊの生成物から、標題生成物を製造した。
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０％から６５％アセトン／塩化メチレ
ン）精製を行い、過剰のＨＣｌエーテル溶液を用いて２塩酸塩に変換することで
、標題生成物を白色粉末として得た。

【０１６８】 ＦＡＢ ｍｓ（ｍ＋１）：４９０．１ 元素分析：Ｃ_２３Ｈ_１９ＣｌＦ_３Ｎ_５Ｏ_２・２．００ＨＣｌ・１．０Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、４７．５６；Ｈ、３．９９；Ｎ、１２．０６ 実測値：Ｃ、４７．５８；Ｈ、４．０２；Ｎ、１１．９１

【０１６９】実施例１０ ４−［１−（４−シアノ−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）−５−イミ
ダゾリルメチル］−１−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−２−ピペ
ラジノン・２塩酸塩段階Ａ：１−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−２−ピペラジノン塩 酸塩の製造 実施例１の段階Ｅ〜Ｊに記載の手順を用いて、３−（トリフルオロメトキシ）
アニリンから標題化合物を製造した。

【０１７０】段階Ｂ：４−［１−（４−シアノ−３−（トリフルオロメトキシ）ベンジル）− ５−イミダゾリルメチル］−１−［３−（トリフルオロメトキシ）フェニル］− ２−ピペラジノン・２塩酸塩の製造 実施例１の段階Ｋに記載の手順を用いて、段階Ａの生成物および実施例９の段
階Ｆの生成物から、標題生成物を製造した。シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（５０％から６５％アセトン／塩化メチレン）精製を行い、過剰のＨＣｌエー
テル溶液を用いて２塩酸塩に変換することで、標題生成物を白色粉末として得た
。

【０１７１】 ＦＡＢ ｍｓ（ｍ＋１）：５４０．２ 元素分析：Ｃ_２４Ｈ_１９Ｆ_６Ｎ_５Ｏ_２・２．００ＨＣｌ・１．１５Ｈ_２Ｏ・０．
５０ＣＨ_２Ｃｌ_２ 計算値：Ｃ、４４．６１；Ｈ、３．７１；Ｎ、１０．６２ 実測値：Ｃ、４４．６３；Ｈ、３．７０；Ｎ、１０．５６

【０１７２】実施例１１ １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−フルオロベンジル ）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン・２塩酸塩 段階Ａ：４−シアノ−３−フルオロトルエンの製造 ４−ブロモ−３−フルオロトルエン（５０．０ｇ、２６４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ
（５００ｍＬ）溶液を脱気したものに、Ｚｎ（ＣＮ）_２（１８．６ｇ、１５９ｍ
ｍｏｌ）およびＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（６．１ｇ、５．３ｍｍｏｌ）を加えた。反
応液を８０℃で６時間攪拌し、室温まで冷却した。溶液をＥｔＯＡｃに投入し、
水、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液およびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）
、濾過し、減圧下に濃縮して、粗生成物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー
（０％から５％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製を行って、標題生成物を得た
。

【０１７３】段階Ｂ：４−シアノ−３−フルオロベンジルブロマイドの製造 段階Ａからの生成物（２２．２ｇ、１６５ｍｍｏｌ）の四塩化炭素（２２０ｍ
Ｌ）溶液に、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（２９．２ｇ、１６４ｍｍｏｌ）および
過酸化ベンゾイル（１．１ｇ）を加えた。反応液を３０分間加熱還流し、冷却し
て室温とした。溶液を減圧下に濃縮して最初の容量の１／３とし、ＥｔＯＡｃに
投入し、水、飽和ＮａＨＣＯ_３およびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４ ）、濾過し、減圧下に濃縮して、粗生成物を得た。^１Ｈ ＮＭＲによる分析で、 部分的にしか変換が進行していないことが示されたことから、Ｎ−ブロモコハク
酸イミド１８ｇ（１０２ｍｍｏｌ）を用いて、その粗生成物を２．５時間にわた
って再度同じ反応条件で処理した。後処理後、粗取得物をシリカゲルクロマトグ
ラフィー（０％から１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製して、所望の生
成物を得た。

【０１７４】段階Ｃ：１−（４−シアノ−３−フルオロベンジル）−５−（アセトキシメチル ）イミダゾール臭化水素酸塩の製造 段階Ｂからの生成物（２０．６７ｇ、９６．１７ｍｍｏｌ）および実施例１の
段階Ｂからの生成物（３６．７２ｇ、９６．１４ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ（２５
０ｍＬ）溶液を６０℃で２０時間攪拌したところ、その間に白色沈殿が生成した
。反応液を冷却して室温とし、濾過して、固体のイミダゾリウムブロマイド塩を
得た。濾液を減圧下に濃縮して容量１００ｍＬとし、６０℃で２時間再加熱し、
冷却して室温とし、再度濾過した。濾液を減圧下に濃縮して容量４０ｍＬとし、
６０℃でさらに２時間再加熱し、冷却して室温とし、減圧下に濃縮して淡黄色固
体を得た。得られた固体全てを合わせ、メタノール３００ｍＬに溶かし、６０℃
まで昇温した。２時間後、溶液を減圧下に再度濃縮して白色固体を得て、それを
ヘキサンと磨砕して、可溶物を除去した。減圧下に残留溶媒を除去することで、
標題の生成物である臭化水素酸塩を白色固体として得た。その塩を、それ以上精
製せずに次に段階で用いた。

【０１７５】段階Ｄ：１−（４−シアノ−３−フルオロベンジル）−５−（ヒドロキシメチル ）イミダゾールの製造 段階Ｃからの酢酸エステル（３１．８７ｇ、８９．７７ｍｍｏｌ）の２：１Ｔ
ＨＦ／水（３００ｍＬ）溶液に０℃で、水酸化リチウム・１水和物（７．５３ｇ
、１７９ｍｍｏｌ）を加えた。２時間後、反応液を減圧下に濃縮して容量１００
ｍＬとし、０℃で３０分間保管し、濾過し、冷水７００ｍＬで洗浄して、褐色固
体を得た。その取得物を、Ｐ_２Ｏ_５の近くで減圧下に乾燥して、標題生成物を淡
褐色粉末として得た。その粉末は、それ以上精製せずに次の段階で使用できるだ
けの純度を有していた。

【０１７６】段階Ｅ：１−（４−シアノ−３−フルオロベンジル）−５−イミダゾールカルボ キシアルデヒドの製造 段階Ｄからのアルコール（２．３１ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２０
ｍＬ）溶液に０℃で、トリエチルアミン（５．６ｍＬ、４０ｍｍｏｌ）、次にＳ
Ｏ_３−ピリジン錯体（３．８９ｇ、２５ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、反応液
をＥｔＯＡｃに投入し、水およびブラインで洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、
濾過し、減圧下に濃縮して、標題のアルデヒドを淡黄色粉末として得た。その取
得物は、それ以上精製せずに次の段階で使用できるだけの純度を有していた。

【０１７７】段階Ｆ：１−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−フルオロ ベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン・２塩酸塩の製造 実施例１の段階Ｋに記載の手順を用いて、段階Ａの生成物および実施例９の段
階Ｆの生成物から、標題生成物を製造した。シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（５０％から６０％アセトン／塩化メチレン）精製を行い、過剰のＨＣｌエー
テル溶液を用いて２塩酸塩に変換することで、標題生成物を白色粉末として得た
。

【０１７８】 ＦＡＢ ｍｓ（ｍ＋１）：４２４．２ 元素分析：Ｃ_２２Ｈ_１９ＣｌＦＮ_５Ｏ_２・２．００ＨＣｌ・１．１５Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、５１．０５；Ｈ、４．５４；Ｎ、１３．５３ 実測値：Ｃ、５１．０８；Ｈ、４．６２；Ｎ、１３．４４

【０１７９】実施例１２ １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−（メチルチオ）ベ ンジル）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン・２塩酸塩 実施例１１の生成物（５２ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液
に、ナトリウムチオメトキシド（１７ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を加えた。約１
６時間後、反応液をＥｔＯＡｃで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液およびブライン
で抽出し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧下に濃縮した。シリカゲル分
取薄層クロマトグラフィー（２×０．５ｍｍ、１０％ＣＨＣｌ_３／メタノール）
によって精製し、過剰のＨＣｌエーテル溶液を用いて２塩酸塩に変換することで
、標題生成物を白色粉末として得た。

【０１８０】 ＨＰＬＣ：２２０ｎｍで純度１００％；保持時間＝８．２４分；１５分間かけ
ての５％から９５％への勾配：アセトニトリル／０．１％ＴＦＡ−水 元素分析：Ｃ_２３Ｈ_２２ＣｌＮ_５ＯＳ・２．００ＨＣｌ・０．１５Ｈ_２Ｏ・０．
３０ＣＨ_２Ｃｌ_２ 計算値：Ｃ、５０．５９；Ｈ、４．５４；Ｎ、１２．６６ 実測値：Ｃ、５１．２１；Ｈ、５．０８；Ｎ、１１．８８

【０１８１】実施例１３ １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−（フェノキシ）ベ ンジル）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン・２塩酸塩 実施例１１の生成物（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）溶
液に、フェノール（３３ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を加え、次に炭酸セシウム（
１１４ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を加えた。約１６時間後、反応液をＥｔＯＡｃ
で希釈し、水およびブラインで抽出し、硫酸ナトリウムで脱水し、濾過し、減圧
下に濃縮した。シリカゲル分取薄層クロマトグラフィー（２×０．５ｍｍ、９０
：１０：１ＣＨＣｌ_３／メタノール／ＮＨ_４ＯＨ）によって精製し、過剰のＨＣ
ｌエーテル溶液を用いて２塩酸塩に変換することで、標題生成物を白色粉末とし
て得た。

【０１８２】 ＦＡＢ ｍｓ（ｍ＋１）：４９８．２ 元素分析：Ｃ_２８Ｈ_２４ＣｌＮ_５Ｏ_２・２．００ＨＣｌ・０．５０Ｈ_２Ｏ・０．
１０ＣＨ_２Ｃｌ_２ 計算値：Ｃ、５７．３５；Ｈ、４．６６；Ｎ、１１．９０ 実測値：Ｃ、５７．３７；Ｈ、４．６７；Ｎ、１１．１３

【０１８３】実施例１４ 実施例１〜１３に記載の手順と同様にして、以下の化合物も製造した。 １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（２−フルオロ−４−シアノベンジル
）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン・２塩酸塩 元素分析：Ｃ_２２Ｈ_１９ＣｌＦＮ_５Ｏ・２ＨＣｌ・１Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、５１．３３；Ｈ、４．５０；Ｎ、１３．６０ 実測値：Ｃ、５１．４１；Ｈ、４．４９；Ｎ、１３．１６ ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−
１−（３−メチルチオフェニル）ピペラジン−２−オン・２塩酸塩 元素分析：Ｃ_２３Ｈ_２３Ｎ_５ＯＳ・２．５ＨＣｌ 計算値：Ｃ、５４．３３；Ｈ、５．０６；Ｎ、１３．７７ 実測値：Ｃ、５４．３７；Ｈ、４．７５；Ｎ、１３．１３ ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−
１−（３，５−ジクロロフェニル）ピペラジン−２−オン・２塩酸塩 元素分析：Ｃ_２２Ｈ_１９Ｃｌ_２Ｎ_５Ｏ・２．５５ＨＣｌ・１Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、４７．９２；Ｈ、４．３１；Ｎ、１２．７０ 実測値：Ｃ、４７．９５；Ｈ、４．３１；Ｎ、１２．６５ １−（３−クロロフェニル）−４−｛［１−（４−シアノフェニル）−１−エチ
ル］−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル｝ピペラジン−２−オン・２塩酸塩
元素分析：Ｃ_２３Ｈ_２２ＣｌＮ_５Ｏ・２ＨＣｌ・１．３Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、５３．５１；Ｈ、５．１９；Ｎ、１３．５７ 実測値：Ｃ、５３．５９；Ｈ、５．３９；Ｎ、１３．４４ １−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン・２塩酸塩 元素分析：Ｃ_２２Ｈ_１９ＣｌＦＮ_５Ｏ・２ＨＣｌ 計算値：Ｃ、５３．１９；Ｈ、４．２６；Ｎ、１４．１０ 実測値：Ｃ、５２．８４；Ｈ、４．３７；Ｎ、１３．７６ ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−
１−（３，５−ジメチルフェニル）ピペラジン−２−オン・２塩酸塩 元素分析：Ｃ_２４Ｈ_２５Ｎ_５Ｏ・２ＨＣｌ・０．１Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、６０．７９；Ｈ、５．７８；Ｎ、１４．７７ 実測値：Ｃ、６０．７９；Ｈ、６．３２；Ｎ、１４．３４ （Ｓ）−５−ベンジル−４−［３−（４−シアノベンジル−１−イミダゾール−
５−イル）プロプ−１−イル］−１−フェニル−２−ピペラジノン・２塩酸塩 ＦＡＢ ｍｓ：ｍ／ｅ４９０（ｍ＋１） 元素分析：Ｃ_３１Ｈ_３１Ｎ_５Ｏ・２ＨＣｌ・１．４５Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、６３．２５；Ｈ、６．１５；Ｎ、１１．９０ 実測値：Ｃ、６３．２２；Ｈ、５．９８；Ｎ、１１．６４ １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−ニトロベンジル）−１Ｈ−イミ
ダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン 元素分析：Ｃ_２１Ｈ_２０ＣｌＮ_５Ｏ_３・０．１５Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、５８．８５；Ｈ、４．７７；Ｎ、１６．３４ 実測値：Ｃ、５８．８２；Ｈ、４．５５；Ｎ、１６．３５ ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−
１−（３，５−ジフルオロフェニル）ピペラジン−２−オン・２塩酸塩 元素分析：Ｃ_２２Ｈ_１９Ｆ_２Ｎ_５Ｏ・２ＨＣｌ・０．２５ＥｔＯＡｃ 計算値：Ｃ、５４．９８；Ｈ、４．６１；Ｎ、１３．９４ 実測値：Ｃ、５４．７２；Ｈ、４．６８；Ｎ、１３．８０ ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−
１−（３，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−２−オン・２トリフルオロ酢
酸塩 元素分析：Ｃ_２２Ｈ_１９Ｆ_２Ｎ_５Ｏ・２ＴＦＡ・０．３５Ｈ_２Ｏ 計算値：Ｃ、４８．６６；Ｈ、３．４１；Ｎ、１０．９１ 実測値：Ｃ、４８．２９；Ｈ、３．４４；Ｎ、１１．３０

【０１８４】実施例１５ ｒａｓファルネシルトランスフェラーゼのin vitroでの阻害 トランスフェラーゼアッセイ 別段の断りがない限り、イソプレニル蛋白トランスフェラーゼ活性アッセイを
３０℃で行う。代表的な反応液には、［^３Ｈ］ファルネシルジホスフェート、Ｒ
ａｓ蛋白、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、５ｍＭジ
チオトレイトール、１０ｍＭ ＺｎＣｌ_２、０．１％ポリエチレングリコール（ ＰＥＧ）（分子量１５０００〜２００００）およびイソプレニル蛋白トランスフ
ェラーゼが含まれる（最終容量５０ｍＬで）。アッセイで用いるＦＰＴａｓｅは
、オマーらの報告（Omer, C.A., Kral, A.M., Diehl, R.E., Prendergast, G.C.
, Powers, S., Allen, C.M., Gibbs, J.B. and Kohl, N.E. (1993) Biochemistr
y 32: 5167-5176）に記載の方法に従って、組換え発現によって得られる。酵素 非存在下で、アッセイ混合物を熱的に予め平衡状態とした後、イソプレニル蛋白
トランスフェラーゼを加えることで反応を開始し、１Ｍ ＨＣｌのエタノール溶 液（１ｍＬ）を加えることで、所定の時間で（代表的には１５分）反応を停止す
る。反応停止した反応液を１５分間静置する（沈殿プロセスを完了させるため）
。１００％エタノール２ｍＬを加えた後、ワットマン（Whatman）ＧＦ／Ｃフィ ルターを用いて、反応液を減圧濾過する。フィルターを１００％エタノール２ｍ
Ｌずつで４回洗浄し、シンチレーション液（１０ｍＬ）と混和し、ベックマン（
Beckman）ＬＳ３８０１シンチレーションカウンタでカウンティングを行う。

【０１８５】 阻害試験の場合には、阻害剤を、１００％ジメチルスルホキシド中の濃厚溶液
として調製してから、酵素アッセイ混合物中で２０倍希釈する以外、上記の方法
に従ってアッセイを行う。阻害剤ＩＣ_５０測定のための基質濃度は、ＦＴａｓｅ
、６５０ｎＭ Ｒａｓ−ＣＶＬＳ（配列番号１）、１００ｎＭファルネシルジホ スフェートである。

【０１８６】 上記の実施例１〜１４に記載の本発明の化合物について、上記のアッセイによ
って、ヒトＦＰＴａｓｅに対する阻害活性の試験を行ったところ、ＩＣ_５０が≦
５０ｍＭであることが認められた。

【０１８７】実施例１６ in vitroＧＧＴａｓｅ阻害アッセイの変法 ゲラニルゲラニル蛋白トランスフェラーゼ阻害アッセイの変法を、室温で行う
。代表的な反応液には、［^３Ｈ］ゲラニルゲラニルジホスフェート、ビオチン化
Ｒａｓペプチド、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、調節用アニオン（例え ば、１０ｍＭグリセロリン酸塩または５ｍＭ ＡＴＰ）、５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１
０ｍＭ ＺｎＣｌ_２、０．１％ＰＥＧ（分子量１５０００〜２００００）、２ｍ Ｍジチオトレイトールおよびゲラニルゲラニル蛋白トランスフェラーゼＩ型（Ｇ
ＧＴａｓｅ）が含まれる（最終容量５０ｍＬで）。アッセイで用いるＧＧＴａｓ
ｅ−Ｉ酵素は、米国特許５４７０８３２号（引用によって本明細書に含まれるも
のとする）に記載の方法に従って得られる。ＲａｓペプチドはＫ４Ｂ−Ｒａｓ蛋
白由来のものであり、ビオチニル−GKKKKKKSKTKCVIM（単一アミノ酸コード）（ 配列番号２）の配列を有する。反応は、ＧＧＴａｓｅを加えることで開始し、５
０ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．５％ＢＳＡを含む、３ｍｇ／ｍＬのストレプトアビ ジンＳＰＡビーズ（Scintillation Proximity Assay beads, Amersham）の０． ２Ｍリン酸ナトリウム（ｐＨ４）懸濁液２００ｍＬを加えることで、所定時間で
（代表的には１５分間）停止する。反応停止した反応液を２時間静置してから、
シンチレーションカウンタ（Packard TopCount）での分析を行う。

【０１８８】 阻害試験の場合には、阻害剤を、１００％ジメチルスルホキシド中の濃厚溶液
として調製してから、酵素アッセイ混合物中で２０倍希釈する以外、上記の方法
に従ってアッセイを行う。ＩＣ_５０は、Ｋ_Ｍ濃度に近いＲａｓペプチドを用いて
測定する。阻害剤ＩＣ_５０測定のための酵素および基質濃度は、７５ｐＭ ＧＧ Ｔａｓｅ−Ｉ、１．６ｍＭ Ｒａｓペプチド、１００ｎＭゲラニルゲラニルジホ スフェートである。

【０１８９】実施例１７ 細胞に基づくin vitroのｒａｓファルネシル化アッセイ 本アッセイで使用する細胞系は、ウイルスＨａ−ｒａｓ ｐ２１を発現したＲ ａｔ１細胞またはＮＩＨ３Ｔ３のいずれかに由来のｖ−ｒａｓ系である。アッセ
イは、ほぼデクルーらの報告（DeClue, J.E. et al., Cancer Research 51: 712
-717 (1991)）に記載の方法に従って行う。集密度５０〜７５％で１０ｃｍシャ ーレに入っている細胞を、被験化合物（溶媒（メタノールもしくはジメチルスル
ホキシド）の最終濃度は０．１％）で処理する。３７℃で４時間後、１０％通常
ＤＭＥＭ、２％ウシ胎仔血清および４００ｍＣｉ［^３５Ｓ］メチオニン（１００
０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）を補給したメチオニンを含まないＤＭＥＭ（３ｍＬ）で、細
胞を標識する。さらに２０時間後、細胞溶解緩衝液（１％ ＮＰ４０；２０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）；５ｍＭ ＭｇＣｌ_２；１ｍＭ ＤＴＴ；１０ｍｇ／ｍ
Ｌアプロチネン（aprotinen）；２ｍｇ／ｍＬロイペプチン；２ｍｇ／ｍＬアン チパイン；０．５ｍＭ ＰＭＳＦ）１ｍＬ中で細胞を溶解させ、溶解物を、１０ ００００×ｇで４５分間遠心することで透明とする。酸沈殿可能カウントが同数
となるよう小分けした溶解物を、ＩＰ緩衝液（ＤＴＴを含まない細胞溶解緩衝液
）１ｍＬに入れ、ｒａｓ特異的モノクローナル抗体Ｙ１３−２５９（Furth, M.E
. et al., J.Virol., 43: 294-304 (1982)）で免疫沈殿させる。４℃での２時間
の抗体インキュベーション後、ウサギ抗ウサギＩｇＧでコーティングした蛋白Ａ
−セファロースの２５％懸濁液２００ｍＬを加えて４５分間経過させる。免疫沈
殿物をＩＰ緩衝液（２０ｎＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）；１ｍＭ ＥＤＴＡ；１
％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００；０．５％デオキシコール酸；０．１％ＳＤＳ；０．
１Ｍ ＮａＣｌ）で４回洗浄し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプル緩衝液中で煮沸し、 １３％アクリルアミドゲルに負荷する。染料先端が底に到達した時点で、ゲルを
固定し、エンライトニング（Enlightening）に浸漬し、乾燥し、オートラジオグ
ラフィーを行う。ファルネシル化ｒａｓ蛋白および非ファルネシル化ｒａｓ蛋白
に相当する帯域の強度を比較して、蛋白へのファルネシル転写阻害パーセントを
求める。

【０１９０】実施例１８ 細胞に基づくin vitro成長阻害アッセイ ＦＰＴａｓｅ阻害の生物学的結果を明らかにするため、ｖ−ｒａｓ、ｖ−ｒａ
ｆまたはｖ−ｍｏｓ癌遺伝子によって形質転換されたＲａｔ１細胞の足場依存性
成長に対する本発明の化合物の効果を調べる。Ｒａｓ誘発細胞形質転換に対する
本発明の化合物の特異性を評価するための分析では、ｖ−Ｒａｆおよびｖ−Ｍｏ
ｓによって形質転換された細胞を用いることができる。

【０１９１】 ｖ−ｒａｓ、ｖ−ｒａｆまたはｖ−ｍｏｓによって形質転換されたＲａｔ１細
胞を、下層のアガロース層（０．６％）の上の培地Ａ（１０％ウシ胎仔血清を補
給したダルベッコの調製イーグル培地）における０．３％アガロース上層に、平
板（直径３５ｍｍ）当たり細胞１×１０^４個の密度で接種する。いずれの層にも
、０．１％メタノールまたは適切な濃度の本発明の化合物（アッセイで使用され
る最終濃度の１０００倍の濃度でメタノールに溶かしたもの）を含有させる。培
地への接種から１６日後に顕微鏡写真を撮り、比較を行う。

【０１９２】実施例１９ ＳＥＡＰレポータープラスミドｐＤＳＥ１００の構築 ＳＥＡＰをコードする配列を有する制限断片をプラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−Ａ
ＫＩに連結することで、ＳＥＡＰレポータープラスミドｐＤＳＥ１００を構築し
た。ＳＥＡＰ遺伝子は、プラスミドｐＳＥＡＰ２−Ｂａｓｉｃ（Clontech, Palo
Alto, CA）に由来するものである。プラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩはデボ ラ・ジョーンズ（Deborah Jones, Merck）が構築したものであり、サイトメガロ
ウイルスの直前（immediate early）プロモーター由来の「ＣＡＴ−ＴＡＴＡ」 配列の上流でクローニングされた「二分子（dyad）対称応答要素」の５連続コピ
ーを有する。該プラスミドはまた、ウシ成長ホルモンポリＡ配列も有する。

【０１９３】 プラスミドｐＤＳＥ１００は、以下のように構築した。ＳＥＡＰコード配列を
コードする制限断片を、制限酵素ＥｃｏＲ１およびＨｐａＩを用いて、プラスミ
ドｐＳＥＡＰ２−Ｂａｓｉｃから切り取った。線状ＤＮＡ断片の末端を、大腸菌
ＤＮＡポリメラーゼＩのクレノウ断片で埋めた。消化物についてアガロースゲル
中での電気泳動を行い、１６９４塩基対断片を切り取ることで、ＳＥＡＰ遺伝子
を有する「平滑末端ＤＭＡ」を単離した。ベクタープラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−
ＡＫＩを制限酵素Ｂｇｌ−ＩＩで線状とし、クレノウＤＮＡポリメラーゼＩで末
端を埋めた。ＳＥＡＰ ＤＮＡ断片をｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩベクターに平滑末 端連結し、連結生成物をＤＨ５−α大腸菌細胞（Gibco-BRL）に形質転換した。 形質転換体について、適当な挿入物についてスクリーニングを行い、制限断片配
置のマッピングを行った。クローニング接合点で、適切に配置された組換え構築
物の配列決定を行って、正確な配列を確認した。得られたプラスミドには、ＤＳ
ＥおよびＣＡＴ−ＴＡＴＡプロモーター要素の下流ならびにＢＧＨポリＡ配列の
上流にＳＥＡＰコード配列を有する。

【０１９４】ＳＥＡＰレポータープラスミドｐＤＳＥ１０１の別途構築 ＳＥＡＰレポータープラスミドｐＤＳＥ１０１は、ＳＥＡＰコード配列を有す
る制限断片をプラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩに連結することによっても構築
される。ＳＥＡＰ遺伝子は、プラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰに由来
するものである。

【０１９５】 プラスミドｐＤＳＥ１０１を以下のようにして構築した。ＳＥＡＰ遺伝子をコ
ードする配列の一部を有する制限断片を、制限酵素ＡｐａＩおよびＫｐｎＩを用
いて、プラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰから切り取った。線状ＤＮＡ
断片の末端を、大腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩのクレノウ断片によって再度かみ砕
いた（chewed）。消化物をアガロースゲル中で電気泳動させ、１９１０塩基対の
断片を切り取ることで、切断ＳＥＡＰ遺伝子を有する「平滑末端」ＤＮＡを単離
した。Ｂｇｌ−ＩＩによって切断し、大腸菌クレノウ断片ＤＮＡポリメラーゼで
埋めておいたプラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩに、その１９１０塩基対断片を
連結した。組換えプラスミドについて、挿入物配置のスクリーニングを行い、連
結接合点で配列決定を行った。プラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩは、ＤＨＦＲ
マーカーおよびネオマイシンマーカーを含むＥｃｏＲＩ断片を除去することで、
プラスミドｐＣＭＶＩＥ−ＡＫＩ−ＤＨＦＲ（Whang, Y., Silberklang, M., Mo
rgan, A., Munshi, S., Lenny, A.B., Ellis, R.W., and Kieff, E. (1987) J.V
irol., 61, 1796-1807）から得られたものである。既報の方法（Jones, R.E., D
efeo-Jones, D., McAvoy, E.M., Vuocolo, G.A., Wegrzyn, R.J., Haskell, K.M
. and Oliff, A., (1991), Oncogene, 6, 745-751）に従って、ｆｏｓプロモー ター血清応答要素のコピー５個を挿入して、プラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩ
を得た。

【０１９６】 プラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰは、次のように構築した。以下の
オリゴ類を用いて、ヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリ（Clontech）からの２種類の部
分で、ＳＥＡＰ遺伝子のＰＣＲを行った。 センス鎖Ｎ末端ＳＥＡＰ：5' GAGAGGGAATTCGGGCCCTTCCTGCAT GCTGCTGCTGCTGCTGCTGCTGGGC 3'（配列番号３） アンチセンス鎖Ｎ末端ＳＥＡＰ：5' GAGAGAGCTCGAGGTTAACCCGGGT GCGCGGCGTCGGTGGT 3'（配列番号４） センス鎖Ｃ末端ＳＥＡＰ：5' GAGAGAGTCTAGAGTTAACCCGTGGTCC CCGCGTTGCTTCCT 3'（配列番号５） アンチセンス鎖Ｃ末端ＳＥＡＰ：5' GAAGAGGAAGCTTGGTACCGCCACTG GGCTGTAGGTGGTGGCT 3'（配列番号６） Ｎ末端オリゴ類（配列番号４および配列番号５）を用いて、末端にＥｃｏＲＩ
およびＨｐａＩ制限部位を有する１５６０ｂｐのＮ末端ＰＣＲ産生物を得た。ア
ンチセンスＮ末端オリゴ（配列番号４）により、ＨｐａＩ部位とともに、ＳＥＡ
Ｐ遺伝子内に、内部翻訳終止コドンが導入される。Ｃ末端オリゴ類（配列番号５
および配列番号６）を用いて、ＨｐａＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ制限部位を有する
４１２ｂｐのＣ末端ＰＣＲ産生物を増幅した。センス鎖Ｃ末端オリゴ（配列番号
５）は、ＨａｐＩ部位だけでなく、内部終止コドンも導入する。次に、Ｎ末端ア
ンプリコンをＥｃｏＲＩおよびＨｐａＩで消化させ、Ｃ末端アンプリコンをＨａ
ｐＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化させた。消化物をアガロースゲル中で電気泳動
させ、１５６０塩基対および４１２塩基対の断片を単離することで、ＳＥＡＰ遺
伝子の各末端を有する２種類の断片を単離した。次に、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎ
ｄＩＩＩで制限消化させ、アガロースゲルで単離しておいたベクターｐＧＥＭ７
ｚｆ（−）（Promega）に、これら２種類の断片を同時連結した。得られたクロ ーンｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰには、アミノ酸からのＳＥＡＰ遺伝子のコ
ード配列を有している。

【０１９７】構成的に（constitutively）ＳＥＡＰ発現性のプラスミドｐＣＭＶ−ＳＥＡＰの 構築 サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）ＩＥ−１プロモーターの下流に切断ＳＥＡＰ
遺伝子をコードする配列を置くことで、構成的にＳＥＡＰ蛋白を発現する発現プ
ラスミドを得た。該発現プラスミドには、ＳＥＡＰ遺伝子に対するＣＭＶイント
ロンＡ領域５’とＳＥＡＰ遺伝子に対するウシ成長ホルモン遺伝子３’の３’非
翻訳領域もある。

【０１９８】 ＣＭＶ直前（immediate early）プロモーターを有するプラスミドｐＣＭＶＩ Ｅ−ＡＫＩ−ＤＨＦＲ（Whang et al., 1987）をＥｃｏＲＩで切断して、２個の
フラグメントを得た。アガロース電気泳動によってベクター断片を単離し、それ
を再連結した。得られたプラスミドは、ｐＣＭＶ−ＡＫＩと称される。次に、サ
イトメガロウィルスイントロンＡヌクレオチド配列を、ｐＣＭＶ−ＡＫＩでＣＭ
Ｖ ＩＥ１プロモーターの下流に挿入した。該イントロンＡをゲノムクローンバ ンクから単離し、ｐＢＲ３２２にサブクローニングして、プラスミドｐ１６Ｔ−
２８６を得た。部位指向性突然変異誘発を用いて、ヌクレオチド１８５６（Chap
man, B.S., Thayer, R.M., Vincent, K.A., and Haigwood, N.L., Nuc. Acids R
es., 19, 3979-3986に記載の方法によるヌクレオチドの番号割り付け）でイント
ロンＡ配列を突然変異させて、ＳａｃＩ制限部位を除去した。以下のオリゴ類を
用いて、突然変異イントロンＡ配列について、プラスミドｐ１６Ｔ−２８７から
のＰＣＲを行った。 センス鎖：5' GGCAGAGCTCGTTTAGTGAACCGTCAG 3'（配列番号７） アンチセンス鎖：5' GAGAGATCTCAAGGACGGTGACTGCAG 3'（配列番号８） これら２個のオリゴから、センスオリゴによって組み込まれたＳａｃＩ部位を
有する９９１塩基対断片とアンチセンスオリゴによって組み込まれたＢｇｌ−Ｉ
Ｉ断片が得られる。ＰＣＲ断片をＳａｃＩおよびＢｇｌ−ＩＩでトリミングし、
アガロースゲルで単離する。ベクターｐＣＭＶ−ＡＫＩをＳａｃＩおよびＢｇｌ
−ＩＩで切断し、大きい方のベクター断片をアガロースゲル電気泳動によって単
離した。２個のゲル単離断片を、それらの個々のＳａｃＩおよびＢｇｌ−ＩＩ部
位で連結して、プラスミドｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡを形成する。

【０１９９】 切断ＳＥＡＰ遺伝子をコードするＤＮＡ配列を、ベクターのＢｇｌ−ＩＩ部位
でｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡプラスミドに挿入する。ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄ
ＩＩＩを用いて、プラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰ（前述）からＳＥ
ＡＰ遺伝子を切り取る。該断片をクレノウＤＮＡポリメラーゼで埋め、アガロー
スゲル電気泳動によってベクター断片から１９７０塩基対断片を単離する。Ｂｇ
ｌ−ＩＩで消化し、末端をクレノウＤＮＡポリメラーゼで埋めることで、ｐＣＭ
Ｖ−ＡＫＩ−ＩｎＡベクターを得る。ＳＥＡＰ断片をｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡ
ベクターに平滑末端連結することで、最終構築物を形成する。軽質転換体につい
て適切な挿入物のスクリーニングを行い、次に制限断片配置のマッピングを行う
。クローニング接合点で、適切に配置された組換え構築物の配列決定を行って、
正確な配列を確認した。得られたプラスミド（名称：ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰ）には
、サイトメガロウィルス直前（immediately early）プロモーターＩＥ−１およ びイントロンＡ配列の下流ならびにウシ成長ホルモンポリＡ配列の上流に修飾Ｓ
ＥＡＰ配列を有する。該プラスミドは、哺乳動物細胞中にトランスフェクション
されると、構成的にＳＥＡＰを発現する。

【０２００】ミリスチル化ウィルス−Ｈ−ｒａｓ発現プラスミドのクローニング ウィルス−Ｈ−ｒａｓを有するＤＮＡ断片は、以下のオリゴを用いて、プラス
ミド「Ｈ−１」（Ellis R. et al., J.Virol., 36, 408, 1980）または「ＨＢ−
１１（１９９７年８月２７日、ブダペスト条約下にＡＴＣＣで寄託；名称はＡＴ
ＣＣ２０９２１８）」からＰＣＲすることができる。 センス鎖： 5' TCTCCTCGAGGCCACCATGGGGAGTAGCAAGAGCAAGCCTAA GGACCCCAGCCAGCGCCGGATGACAGAATACAAGCTTGTGGTGG 3'（配列番号９） アンチセンス鎖： 5' CACATCTAGATCAGGACAGCACAGACTTGCAGC 3'（配列番号１０） ミリスチル化部位を含むｖ−ｓｒｃ遺伝子の最初の１５アミノ酸をコードする
配列を、センス鎖オリゴに組み込む。該センス鎖オリゴはまた、ＡＴＧ開始部位
に対して５’で直ちに「コザック（Kozak）」翻訳開始配列を至適化する。ウィ ルス−ｒａｓＣ末端でのプレニル化を防止するため、Ｃ末端アンチセンスオリゴ
においてＣ残基に代えてＧ残基とすることで、システイン１８６をセリンに突然
変異させることが考えられる。ＰＣＲプライマーオリゴは、５’末端でＸｈｏＩ
部位を、３’末端でＸｂａＩ部位を導入する。そのＸｈｏＩ−ＸｂａＩ断片は、
ＸｈｏＩおよびＸｂａＩで切断した哺乳動物発現プラスミドｐＣＩ（Promega） に連結することができる。それによって、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーター
から、組換えｍｙｒ−ウィルス−Ｈ−ｒａｓ遺伝子を構成的に転写したプラスミ
ドが得られる。

【０２０１】ウィルス−Ｈ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ発現プラスミドのクローニング アミノ酸ＣＶＬＬをコードするＣ末端配列を有するウィルス−Ｈ−ｒａｓクロ
ーンは、以下のオリゴを用いたＰＣＲによって、プラスミド「Ｈ−１」（Ellis
R. et al., J.Virol., 36, 408, 1980）または「ＨＢ−１１（１９９７年８月２
７日、ブダペスト条約下にＡＴＣＣで寄託；名称はＡＴＣＣ２０９２１８）」か
らクローニングすることができる。 センス鎖： 5' TCTCCTCGAGGCCACCATGACAGAATACAAGCTTGTGGTGG-3'（配列番号１１） アンチセンス鎖： 5' CACTCTAGACTGGTGTCAGAGCAGCACACACTTGCAGC-3'（配列番号１２） センス鎖オリゴは、「コザック」配列を至適化し、ＸｈｏＩ部位を加える。該
アンチセンス鎖は、セリン１８９をロイシンに突然変異させ、ＸｂａＩ部位を加
える。該ＰＣＲ断片は、ＸｈｏＩおよびＸｂａＩによってトリミングし、Ｘｈｏ
Ｉ−ＸｂａＩ切断ベクターｐＣＩ（Promega）に連結することができる。それに よって、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターから、突然変異ウィルス−Ｈ−ｒ
ａｓ−ＣＶＬＬ遺伝子を構成的に転写したプラスミドが得られる。

【０２０２】ｃ−Ｈ−ｒａｓ−Ｌｅｕ６１発現プラスミドのクローニング 以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、ヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブ
ラリ（Clontech）から、ヒトｃ−Ｈ−ｒａｓ遺伝子のＰＣＲを行うことができる
。 センス鎖： 5'-GAGAGAATTCGCCACCATGACGGAATATAAGCTGGTGG-3'（配列番号１３） アンチセンス鎖： 5'-GAGAGTCGACGCGTCAGGAGAGCACACACTTGC-3'（配列番号１４） これらのプライマーは、至適化「コザック」翻訳開始配列、Ｎ末端のＥｃｏＲ
Ｉ部位およびＣ末端のＳａｌＩ部位に寄与するプライマーを用いて、ｃ−Ｈ−ｒ
ａｓをコードするＤＮＡ断片を増幅するものである。ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩ
によってＰＣＲ産生物の末端をトリミングした後、ＥｃｏＲＩ−ＳａｌＩ切断突
然変異誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１（Promega）にｃ−Ｈ−ｒａｓ断片を連結 することができる。グルタミン−６１のロイシンへの突然変異を、メーカーの推
奨法および以下のオリゴヌクレオチドを用いて行うことができる。 5'-CCGCCGGCCTGGAGGAGTACAG-3'（配列番号１５） 正確なヌクレオチド置換の選択および配列決定を行った後、ＥｃｏＲＩおよび
ＳａｌＩを用いて、突然変異ｃ−Ｈ−ｒａｓ−Ｌｅｕ６１をｐＡｌｔｅｒ−１ベ
クターから切り取り、ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩで消化しておいたベクターｐＣ
Ｉ（Promega）に直接連結することができる。新たな組換えプラスミドは、ｐＣ ＩベクターのＣＭＶプロモーターからｃ−Ｈ−ｒａｓ−Ｌｅｕ６１を構成的に転
写するものである。

【０２０３】ｃ−Ｎ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２発現プラスミドのクローニング 以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、ヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブ
ラリ（Clontech）から、ヒトｃ−Ｎ−ｒａｓ遺伝子のＰＣＲを行うことができる
。 センス鎖： 5'-GAGAGAATTCGCCACCATGACTGAGTACAAACTGGTGG-3'（配列番号１６） アンチセンス鎖： 5'-GAGAGTCGACTTGTTACATCACCACACATGGC-3'（配列番号１７） これらのプライマーは、至適化「コザック」翻訳開始配列、Ｎ末端のＥｃｏＲ
Ｉ部位およびＣ末端のＳａｌＩ部位に寄与するプライマーを用いて、ｃ−Ｎ−ｒ
ａｓをコードするＤＮＡ断片を増幅するものである。ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩ
によってＰＣＲ産生物の末端をトリミングした後、ＥｃｏＲＩ−ＳａｌＩ切断突
然変異誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１（Promega）にｃ−Ｎ−ｒａｓ断片を連結 することができる。グリシン−１２のバリンへの突然変異を、メーカーの推奨法
および以下のオリゴヌクレオチドを用いて行うことができる。 5'-GTTGGAGCAGTTGGTGTTGGG-3'（配列番号１８） 正確なヌクレオチド置換の選択および配列決定を行った後、ＥｃｏＲＩおよび
ＳａｌＩを用いて、突然変異ｃ−Ｎ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２をｐＡｌｔｅｒ−１
ベクターから切り取り、ＥｃｏＲＩおよびＳａｌＩで消化しておいたベクターｐ
ＣＩ（Promega）に直接連結することができる。新たな組換えプラスミドは、ｐ ＣＩベクターのＣＭＶプロモーターからｃ−Ｎ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を構成的
に転写するものである。

【０２０４】ｃ−Ｋ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２発現プラスミドのクローニング 以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて、ヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブ
ラリ（Clontech）から、ヒトｃ−Ｋ−ｒａｓ遺伝子のＰＣＲを行うことができる
。 センス鎖： 5'-GAGAGGTACCGCCACCATGACTGAATATAAACTTGTGG-3'（配列番号１９） アンチセンス鎖： 5'-CTCTGTCGACGTATTTACATAATTACACACTTTGTC-3'（配列番号２０） これらのプライマーは、至適化「コザック」翻訳開始配列、Ｎ末端のＫｐｎＩ
部位およびＣ末端のＳａｌＩ部位に寄与するプライマーを用いて、ｃ−Ｋ−ｒａ
ｓをコードするＤＮＡ断片を増幅するものである。ＫｐｎＩおよびＳａｌＩによ
ってＰＣＲ産生物の末端をトリミングした後、ＫｐｎＩ−ＳａｌＩ切断突然変異
誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１（Promega）にｃ−Ｋ−ｒａｓ断片を連結するこ とができる。システイン−１２のバリンへの突然変異を、メーカーの推奨法およ
び以下のオリゴヌクレオチドを用いて行うことができる。 5'-GTAGTTGGAGCTGTTGGCGTAGGC-3'（配列番号２１） 正確なヌクレオチド置換の選択および配列決定を行った後、ＫｐｎＩおよびＳ
ａｌＩを用いて、突然変異ｃ−Ｋ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２をｐＡｌｔｅｒ−１ベ
クターから切り取り、ＫｐｎＩおよびＳａｌＩで消化しておいたベクターｐＣＩ
（Promega）に直接連結することができる。新たな組換えプラスミドは、ｐＣＩ ベクターのＣＭＶプロモーターからｃ−Ｋ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を構成的に転
写するものである。

【０２０５】ＳＥＡＰアッセイ ヒトＣ３３Ａ細胞（ヒト上皮癌−ＡＴＴＣ収集物）を、１０ｃｍ組織培養平板
で、ＤＭＥＭ＋１０％ウシ胎仔血清＋１ＸＰｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋１Ｘグルタミン
＋１Ｘ ＮＥＡＡに接種する。５％ＣＯ_２雰囲気下に３７℃で細胞を成長させて 、集密度を５０〜８０％とする。

【０２０６】 ＣａＰＯ_４法（Sambrook et al., 1989）によって、一時的トランスフェクシ ョンを行う。そうして、Ｈ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、Ｋ−ｒａｓ、Ｍｙｒ−ｒａｓ
またはＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬを、ＤＳＥ−ＳＥＡＰレポーター構築物と同時沈殿
させる。１０ｃｍ平板の場合、２Ｘ ＨＢＳ緩衝液６００ｍＬを渦攪拌しながら 、それにＣａＣｌ_２−ＤＮＡ溶液６００ｍＬを滴下して、沈殿液１．２ｍＬを得
る（以下の処方参照）。これを室温で２０〜３０分間静置する。沈殿を形成させ
ながら、Ｃ３３Ａ細胞での培地をＤＭＥＭ（フェノールレッドのないもの；Gibc
oカタログ番号＃３１０５３−０２８）＋０．５％活性炭ストリッピングウシ血 清＋１Ｘ（Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、グルタミンおよび可欠アミノ酸）に代える。Ｃ
ａＰＯ_４−ＤＮＡ沈殿物を細胞に滴下し、平板を緩やかに揺らして分散させる。
５％ＣＯ_２雰囲気下、３７℃でＤＮＡ取り込みを５〜６時間進行させる。

【０２０７】 ＤＮＡインキュベーション期間後、細胞をＰＢＳで洗浄し、０．０５％トリプ
シン１ｍＬでトリプシン処理する。トリプシン処理細胞１ｍＬを、フェノールレ
ッドを含まないＤＭＥＭ＋０．５％活性炭ストリッピングウシ血清＋１Ｘ（Ｐｅ
ｎ／Ｓｔｒｅｐ、グルタミンおよびＮＥＡＡ）１０ｍＬで希釈する。培地で希釈
した薬剤を容量１００ｍＬで加えてある９６ウェル微量定量プレート（１００ｍ
Ｌ／ウェル）でトランスフェクション細胞を平板培養する。ウェル当たりの最終
容量は２００ｍＬとし、１／２対数間隔の範囲で、各薬剤濃度を３連で繰り返す
。

【０２０８】 細胞と薬剤のインキュベーションを、ＣＯ_２下、３７℃で３６時間行う。イン
キュベーション期間終了後、細胞について、顕微鏡で細胞損傷を調べる。次に、
分泌されたアルカリホスファターゼを含む培地１００ｍＬを各ウェルから取り、
微小管列に移し入れ、６５℃で１時間熱処理することで、内因性アルカリホスフ
ァターゼを失活させる（ただし、熱安定性分泌ホスファターゼは失活しない）。

【０２０９】 ルミネセンス試薬ＣＳＰＤ（登録商標）（Tropix, Bedford, Mass.）を用いる
ルミネセンスアッセイによって、熱処理培地について、アルカリホスファターゼ
の評価を行う。培地５０ｍＬをＣＳＰＤカクテル２００ｍＬと混合し、室温で６
０分間インキュベートする。ＭＬ２２００マイクロプレート光度計（Dynatech）
を用いて、ルミネセンスをモニタリングする。ルミネセンスは、一時的に発現さ
れる蛋白によって刺激されたｆｏｓレポーター構築物の活性化レベルを反映した
ものである。１０ｃｍ平板の細胞についてのＤＮＡ−ＣａＰＯ_４沈殿物 Ｒａｓ発現プラスミド（１ｍｇ／ｍＬ）：１０ｍＬ ＤＥＳＥ−ＳＥＡＰプラスミド（１ｍｇ／ｍＬ）：２ｍＬ 剪断ウシ胸腺ＤＮＡ（１ｍｇ／ｍＬ）：８ｍＬ ２ＭＣａＣｌ_２：７４ｍＬ ｄＨ_２Ｏ：５０６ｍＬ２Ｘ ＨＢＳ緩衝液 ２８０ｍＭ ＮａＣｌ １０ｍＭ ＫＣｌ １．５ｍＭ Ｎａ_２ＨＰＯ_４・２Ｈ_２Ｏ １２ｍＭブドウ糖 ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ 最終ｐＨ＝７．０５ルミネセンス緩衝液（２６ｍＬ） アッセイ緩衝液：２０ｍＬ エメラルド(Emerald)試薬（登録商標）（Tropix）：２．５ｍＬ １００ｍＭホモアルギニン：２．５ｍＬ ＣＳＰＤ試薬（登録商標）（Tropix）：１．０ｍＬアッセイ緩衝液 ０．０５Ｍ ＮａＨＣＯ_３に０．０５Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３を加えて、ｐＨ９．５と
する。ＭｇＣｌ_２を１ｍＭとする。

【０２１０】実施例２０ 使用したプロセシングアッセイは、デクルーらの報告（DeClue et al., Cance
r Research, 51, 712-717 (1991)）に記載の方法の変法である。Ｋ４Ｂ−Ｒａｓプロセシング阻害アッセイ 蛋白プロセシングの分析には、ＰＳＮ−１（ヒト膵臓癌）またはウィルス−Ｋ
４Ｂ−ｒａｓ−形質転換Ｒａｔ１細胞を用いる。１００ｍｍシャーレで半集密状
態の細胞に、所望の濃度の被験化合物、ロバスタチンまたは溶媒のみを含む培地
（２％ウシ胎仔血清を補給したメチオニンを含まないＲＰＭＩあるいはそれぞれ
２００ｍＭグルタミン（Gibco）０．０３５ｍＬ、２％ウシ胎仔血清を補給した システインを含まない／メチオニンを含まないＤＭＥＭ）３．５ｍＬを加える。
イソプレノイド生合成経路における律速段階を阻害することで細胞におけるＲａ
ｓプロセシングを遮断する化合物であるロバスタチン（５〜１０μＭ）で処理し
た細胞は、陽性対照として使える。被験化合物は、１０００倍のＤＭＳＯ濃厚溶
液として調製して、最終溶媒濃度を０．１％とする。３７℃で２時間のインキュ
ベーション後、２０４μＣｉ／ｍＬ［^３５Ｓ］Ｐｒｏ−Ｍｉｘ（Amersham、細胞
標識用）を加える。

【０２１１】 標識アミノ酸混合物を入れた後、細胞をさらに（代表的には６〜２４時間）３
７℃でインキュベートする。次に、培地を除去し、細胞を冷ＰＢＳで１回洗浄す
る。細胞を掻き取って、冷ＰＢＳ（１ｍＬ）に入れ、遠心（室温で１０秒間の１
００００×ｇでの遠心）によって回収し、細胞溶解緩衝液（１％ ノニデット（N
onidet）P−４０；２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）；１５０ｍＭ ＮａＣｌ ；１ｍＭ ＥＤＴＡ；０．５％デオキシコール酸；０．１％ＳＤＳ；１ｍＭ ＤＴ
Ｔ；１０μｇ／ｍＬ ＡＥＢＳＦ；１０μｇ／ｍＬアプロチニン；２μｇ／ｍＬ ロイペプチン；２μｇ／ｍＬアンチパイン）１ｍＬ中で渦攪拌することで溶解さ
せる。次に、溶解物を、４℃で１５０００×ｇにて１０分間遠心し、上清を保存
する。

【０２１２】 Ｋｉ４Ｂ−Ｒａｓの免疫沈殿には、等量の蛋白を含む溶解物上清のサンプルを
用いる。標準としてウシ血清アルブミンを用いるブラッドフォード法によって、
蛋白濃度を求める。適切な容量の細胞溶解物を、ＤＴＴを含まない細胞溶解緩衝
液で１ｍＬとし、ｐａｎ Ｒａｓモノクローナル抗体Ｙ１３−２５９（８μｇ） を加える。得られる蛋白／抗体混合物を、氷上で、４℃にて２４時間インキュベ
ートする。免疫複合体を、４℃で４５分間振盪することで、ウサギＩｇＧに対す
るウサギ抗血清（Cappel）でコーティングしたパンソルビン（pansorbin）（Cal
biochem）に回収する。得られたペレットを、ＤＴＴおよびプロテアーゼ阻害薬 を含まない細胞溶解緩衝液１ｍＬで３回洗浄し、溶出緩衝液（１０ｍＭトリス（
ｐＨ７．４）、１％ＳＤＳ）１００ｍＬに再懸濁させる。９５℃で５分間加熱す
ることで、ビーズからＲａｓを溶出させ、次に該ビーズを短時間の遠心（室温で
１５０００×ｇでの３０秒間の遠心）によってペレットとする。

【０２１３】 上清を、キルステン（Kirsten）−ｒａｓ特異的モノクローナル抗体ｃ−Ｋ− ｒａｓ Ａｂ−１（Calbiochem）２ｍｇを加えた希釈緩衝液（０．１％Ｔｒｉｔ ｏｎ Ｘ−１００；５ｍＭ ＥＤＴＡ；５０ｍＭ ＮａＣｌ；１０ｍＭトリス（ｐ Ｈ７．４））１ｍＬに加える。第２の蛋白／抗体混合物を氷上、４℃で１〜２時
間インキュベートする。免疫複合体を、４℃で４５分間振盪することで、ウサギ
ＩｇＧに対するウサギ抗血清（Cappel）でコーティングしたパンソルビン（Calb
iochem）に回収する。得られたペレットを、ＤＴＴおよびプロテアーゼ阻害薬を
含まない細胞溶解緩衝液１ｍＬで３回洗浄し、レムリ（Laemmli）サンプル緩衝 液に再懸濁させる。９５℃で５分間加熱することで、ビーズからＲａｓを溶出さ
せ、次に該ビーズを短時間の遠心によってペレットとする。上清について、１２
％アクリルアミドゲル（ビスアクリルアミド：アクリルアミド１：１００）での
ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、蛍光写真撮影法によって、Ｒａｓを肉眼で観察できる
ようにする。

【０２１４】実施例２１ Ｒａｐ１プロセシング阻害アッセイ 方法Ａ 実施例２０に記載の方法に従って、細胞を標識、インキュベートおよび溶解さ
せる。

【０２１５】 Ｒａｐ１の免疫沈殿には、等量の蛋白を含む溶解物上清のサンプルを用いる。
標準としてウシ血清アルブミンを用いるブラッドフォード法によって、蛋白濃度
を求める。適切な容量の細胞溶解物を、ＤＴＴを含まない細胞溶解緩衝液で１ｍ
Ｌとし、Ｒａｐ１抗体Ｒａｐ１／Ｋｒｅｖ１（１２１）（Santa Cruz Biotech）
（２μｇ）を加える。得られる蛋白／抗体混合物を、氷上で、４℃にて１時間イ
ンキュベートする。免疫複合体を、４℃で４５分間振盪することで、パンソルビ
ン（Calbiochem）に回収する。得られたペレットを、ＤＴＴおよびプロテアーゼ
阻害薬を含まない細胞溶解緩衝液１ｍＬで３回洗浄し、溶出緩衝液（１０ｍＭト
リス（ｐＨ７．４）、１％ＳＤＳ）１００ｍＬに再懸濁させる。９５℃で５分間
加熱することで、ビーズからＲａｐ１を溶出させ、次に該ビーズを短時間の遠心
（室温で１５０００×ｇでの３０秒間の遠心）によってペレットとする。

【０２１６】 上清を、Ｒａｐ１抗体であるＲａｐ１／Ｋｒｅｖ１（１２１）（Santa Cruz B
iochem）２ｍｇを加えた希釈緩衝液（０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００；５ｍ Ｍ ＥＤＴＡ；５０ｍＭ ＮａＣｌ；１０ｍＭトリス（ｐＨ７．４））１ｍＬに加
える。第２の蛋白／抗体混合物を氷上、４℃で１〜２時間インキュベートする。
免疫複合体を、４℃で４５分間振盪することで、パンソルビン（Calbiochem）に
回収する。得られたペレットを、ＤＴＴおよびプロテアーゼ阻害薬を含まない細
胞溶解緩衝液１ｍＬで３回洗浄し、レムリサンプル緩衝液に再懸濁させる。９５
℃で５分間加熱することで、ビーズからＲａｐ１を溶出させ、次に該ビーズを短
時間の遠心によってペレットとする。上清について、１２％アクリルアミドゲル
（ビスアクリルアミド：アクリルアミド１：１００）でのＳＤＳ−ＰＡＧＥを行
い、蛍光写真撮影法によって、Ｒａｐ１を肉眼で観察できるようにする。

【０２１７】方法Ｂ ほぼ集密状態の平板を１：２０および１：４０に分けながら、ＰＳＮ−１細胞
を１０ｃｍ平板で３〜４日ごとに継代培養する。アッセイを開始する前日に、１
５ｃｍ平板に５×１０^６個の細胞を入れて、各アッセイで同じ集密段階となるよ
うにする。その細胞の培地は、１５％ウシ胎仔血清および１×Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅ
ｐ抗生物質混合物を加えたＲＰＭ１ １６４０（Gibco）である。

【０２１８】 アッセイ当日、トリプシンを加えることで細胞を１５ｃｍ平板から回収し、培
地中で４０００００個／ｍＬまで希釈する。その希釈細胞０．５ｍＬずつを２４
ウェル平板の各ウェルに加え、ウェル当たりの最終細胞数を２０００００個とす
る。次に、細胞を３７℃で終夜成長させる。

【０２１９】 アッセイ対象の化合物をＤＭＳＯで１／２対数希釈にて希釈する。アッセイを
行う最終濃度の範囲は、０．１〜１００μＭとする。代表的には、化合物当たり
４種類の濃度とする。該化合物を希釈して、各濃度が最終濃度の１０００倍とな
るようにする（すなわち、１０μＭのデータ点には、１０ｍＭの化合物ストック
液が必要である）。

【０２２０】 各１０００倍化合物ストック液２μＬを培地１ｍＬで希釈して、化合物の２倍
ストック液を得る。媒体対照液（ＤＭＳＯ２μＬを培地１ｍＬに加えたもの）を
用いる。化合物の２倍ストック液０．５ｍＬを細胞に加える。

【０２２１】 ２４時間後、培地をアッセイ平板から吸引によって取る。各ウェルをＰＢＳ１
ｍＬで洗浄し、そのＰＢＳを吸引によって取る。５％の２−メルカプトエタノー
ルを含むＳＤＳ−ＰＡＧＥサンプル緩衝液（Novex）１８０μＬを各ウェルに加 える。アッセイ平板用のアダプタを有する加熱ブロックを用いて、平板を１００
℃で５分間加熱する。平板を氷上に乗せる。１０分後、各ウェル当たりＲＮＡｓ
ｅ／ＤＮａｓｅ混合液２０μＬを加える。この混合液は、１ｍｇ／ｍＬ ＤＮａ ｓｅＩ（Worthington Enzymes）、０．２５ｍｇ／ｍＬ ＲｎａｓｅＡ（Worthing
ton Enzymes）、０．５Ｍトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）および５０ｍＭ ＭｇＣ
ｌ_２である。平板を氷上に１０分間放置する。次に、サンプルをゲルに負荷する
か、あるいは用時まで−７０℃で保存する。

【０２２２】 各アッセイ平板（通常、４点力価測定でそれぞれ３種類の化合物と対照）には
、１５ウェルの１４％ノベックス（Novex）ゲルが必要である。各サンプル２５ μＬをゲルに負荷する。該ゲルを１５ｍＡで約３．５時間経過させる。ゲル分離
を十分な時間行って、２１ｋｄ（Ｒａｐ１）と２９ｋｄ（Ｒａｂ６）とが十分に
分離するようにすることが重要である。

【０２２３】 次に、３０Ｖ（定電圧）で１．５時間にわたって、ゲルをノベックスプレカッ
トＰＶＤＦ膜に移動させる。移動直後に、膜をウェスタン遮断緩衝液（ウェスタ
ン洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０）中に２％脱脂粉乳）２０ｍ
Ｌ中で終夜遮断する。遮断を週末の期間で行う場合には、０．０２％のアジ化ナ
トリウムを加える。膜は、ゆっくり揺らしながら４℃で遮断する。

【０２２４】 遮断液を捨て、１：１０００（ウェスタン遮断緩衝液で希釈）の抗Ｒａｐ１ａ
抗体（Santa Cruz Biochemical SC1482）および１：５０００（ウェスタン遮断 緩衝液で希釈）の抗Ｒａｂ６抗体（Santa Cruz Biochemical SC310）を含む新鮮
な遮断液２０ｍＬを加える。緩やかに揺らしながら、膜を室温で１時間インキュ
ベートする。次に、遮断液を捨て、膜をウェスタン洗浄緩衝液にて、１回当たり
１５分間で３回洗浄する。次に、２種類のアルカリホスファターゼ接合抗体（ア
ルカリホスファターゼ接合抗ヤギＩｇＧおよびアルカリホスファターゼ接合抗ウ
サギＩｇＧ［Santa Cruz Biochemical］）の一方を１：１０００（ウェスタン遮
断緩衝液で希釈）で含有する遮断液２０ｍＬを加える。膜を１時間インキュベー
トし、前記のように３回洗浄する。

【０２２５】 ゲル当たりアマシャム（Amersham）ＥＣＦ検出試薬約２ｍＬを、オーバーヘッ
ド透明材（overhead transparency）（ECF）に乗せ、検出試薬上にＰＶＤＦ膜を
面を下にして置く。それを１分間インキュベートし、その膜を新鮮な透明シート
に乗せる。

【０２２６】 現像した透明シートを燐光撮像装置で走査し、検出可能なＲａｐ１ａウェスタ
ン信号を生じる最低化合物濃度から、Ｒａｐ１ａ最小阻害濃度を求める。使用す
るＲａｐ１ａ抗体は、未プレニル化／未プロセシングＲａｐ１ａのみを識別する
ことから、検出可能なＲａｐ１ａウェスタン信号が存在するということは、Ｒａ
ｐ１ａプレニル化の阻害を示すものである。

【０２２７】実施例２２ in vivo腫瘍成長阻害アッセイ（ヌードマウス） 癌細胞成長の阻害薬としてのin vivoでの効力は、当業界で公知のいくつかの 方法によって確認することができる。そのようなin vivo効力試験の例は、コー ルらの文献に記載されている（N.E.Kohl et al., Nature Medicine, 1: 792-797
(1995)およびN.E.Kohl et al., Proc.Nat.Acad.Sci., U.S.A., 91: 9141-9145
(1994)）。

【０２２８】 癌遺伝子で突然変異させたヒトＨａ−ｒａｓまたはＫｉ−ｒａｓで形質転換さ
せた齧歯動物線維芽細胞（ＤＭＥＭ塩１ｍＬ中、細胞１０^６個／動物）を、第０
日に、８〜１２週齢雌ヌードマウス（Harlan）の左脇腹に皮下注射する。各癌遺
伝子群のマウスを無作為に、媒体群、化合物群または併用投与群に割り付ける。
動物には、第１日から開始して実験期間中毎日、皮下投与を行う。別法として、
連続注入ポンプによって、ファルネシル蛋白トランスフェラーゼ阻害薬を投与す
ることができる。化合物、併用化合物または媒体を、総容量０．１ｍＬで投与す
る。全ての媒体投与動物が直径０．５〜１．０ｃｍの病変を示した時点で、代表
的には細胞を注射してから１１〜１５日後に、腫瘍を切除し、秤量する。各細胞
系についての各投与群における腫瘍の平均重量を計算する。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/12 Ａ６１Ｐ 31/12 35/00 35/00 43/00 １１１ 43/00 １１１ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＲ，Ｈ Ｕ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者 ハツチンスン，ジヨン・エイチ アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカー ン・アベニユー・126 (72)発明者 ウイリアムズ，タリーサ・エム アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカー ン・アベニユー・126 Ｆターム(参考） 4C063 AA01 AA03 BB02 BB03 CC34 CC92 DD25 DD34 EE01 4C086 AA01 AA02 AA03 BC50 GA04 GA07 MA01 MA04 NA14 ZA33 ZA39 ZA66 ZA81 ZB21 ZB26 ZB33 ZC20

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式Ｉによって表されるファルネシル蛋白トランスフェラ
   ーゼおよびゲラニルゲラニル蛋白トランスフェラーゼＩ型の二重阻害薬である化
   合物または該化合物の医薬的に許容される塩。 【化１】 ［式中、 Ｒ^１ａは、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルから選択され； Ｒ^１ｂは独立に、 ａ）水素、 ｂ）アリール、複素環、シクロアルキル、Ｒ^１０Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^１０）_２また
   はＣ_２〜Ｃ_６アルケニル ｃ）未置換またはアリール、複素環、シクロアルキル、アルケニル、Ｒ^１０Ｏ
   −もしくは−Ｎ（Ｒ^１０）_２によって置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキル から選択され； Ｒ^３およびＲ^４はＨおよびＣＨ_３から選択され； Ｒ^２は、Ｈ；未置換もしくは置換アリール、未置換もしくは置換ヘテロアリー
   ル、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７；または未置換もしくは１以上の １）アリール、 ２）複素環、 ３）ＯＲ^６、 ４）ＳＲ^６ａ、ＳＯ_２Ｒ^６ａもしくは ５）−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７ によって置換されたＣ_１−５アルキルから選択され；Ｒ^２とＲ^３は同一の炭素原
   子に結合していても良く； Ｒ^６およびＲ^７は独立に、 Ｈ；未置換もしくは ａ）Ｃ_１−４アルコキシ ｂ）ハロゲン、 ｃ）パーフルオロ−Ｃ_１−４アルキルもしくは ｄ）アリールもしくは複素環 で置換されたＣ_１−４アルキル、Ｃ_３−６シクロアルキル、アリール、複素環 から選択され； Ｒ^６ａは、 ａ）Ｃ_１−４アルコキシ ｂ）ハロゲンもしくは ｃ）アリールもしくは複素環 で置換されたＣ_１−４アルキルまたはＣ_３−６シクロアルキルから選択され； Ｒ^８は独立に、 ａ）水素、 ｂ）Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、Ｃ _１ 〜Ｃ_６パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ^１０Ｏ−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^{１ ０} −、ＣＮ、ＮＯ_２、（Ｒ^１０）_２Ｎ−Ｃ（ＮＲ^１０）−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
   −Ｎ（Ｒ^１０）_２もしくはＲ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−および ｃ）Ｃ_１〜Ｃ_６パーフルオロアルキル、Ｒ^１０Ｏ−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０ −、（Ｒ^１０）_２Ｎ−Ｃ（ＮＲ^１０）−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ^１０）_２ もしくはＲ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−によって置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキル から選択され； Ｒ^９ａは水素もしくはメチルであり； Ｒ^１０は独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６パーフルオロアルキ
   ル、２，２，２−トリフルオロエチル、ベンジルおよびアリールから選択され；
   Ｒ^１１は独立に、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルおよびアリールから選択され； Ａ^１およびＡ^２は独立に、結合、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）−
   、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０−、Ｏ、−Ｎ（Ｒ^１０）−またはＳ（Ｏ）_ｍから選択され
   ； Ｖは、 ａ）水素、 ｂ）ピロリジニル、イミダゾリル、ピリジニル、チアゾリル、ピリドニル、２
   −オキソピペリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニルおよびチエニ
   ルから選択される複素環、 ｃ）アリール、 ｄ）０〜４個の炭素原子がＯ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子に置き換
   わったＣ_１〜Ｃ_２０アルキル、および ｅ）Ｃ_２〜Ｃ_２０アルケニル から選択され；ただし、Ａ^１がＳ（Ｏ）_ｍの場合にはＶは水素ではなく、Ａ^１が
   結合、ｎが０、Ａ^２がＳ（Ｏ）_ｍの場合にはＶは水素ではなく、 Ｘは−ＣＨ_２−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり； Ｚは、 １）アリール、ヘテロアリール、アリールメチル、ヘテロアリールメチル、ア
   リールスルホニル、ヘテロアリールスルホニルから選択される未置換もしくは置
   換の基（該基が置換されている場合、該基は１以上の ａ）未置換あるいはＣ_１−４アルコキシ、ＮＲ^６Ｒ^７、Ｃ_３−６シクロアルキ
   ル、未置換もしくは置換アリール、複素環、ＨＯ、−Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^６ａまたは−
   Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７で置換されたＣ_１−４アルキル、 ｂ）アリールもしくは複素環、 ｃ）ハロゲン、 ｄ）ＯＲ^６、 ｅ）ＮＲ^６Ｒ^７、 ｆ）ＣＮ、 ｇ）ＮＯ_２、 ｈ）ＣＦ_３、 ｉ）−Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^６ａ、 ｊ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７または ｋ）Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル で置換されている）あるいは ２）未置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、未置換Ｃ_３〜Ｃ_６ シクロアルキルまたは置換Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル（置換Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル
   および置換Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキルは、１個もしくは２個の ａ）Ｃ_１−４アルコキシ、 ｂ）ＮＲ^６Ｒ^７、 ｃ）Ｃ_３−６シクロアルキル、 ｄ）−ＮＲ^６Ｃ（Ｏ）Ｒ^７、 ｅ）ＨＯ、 ｆ）−Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^６ａ、 ｇ）ハロゲンまたは ｈ）パーフルオロアルキル で置換されている） から選択され； ｍは０、１もしくは２であり； ｎは０、１、２、３もしくは４であり； ｐは０、１、２、３もしくは４であり； ｒは０〜５であり；ただし、Ｖが水素の場合ｒは０であり； ただし、置換基（Ｒ^８）_ｒ−Ｖ−Ａ^１（ＣＲ^１ａ _２）_ｎＡ^２（ＣＲ^１ａ _２）_ｎ −は水素ではなく； ただし、該化合物は、 １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
   ルメチル］−２−ピペラジノン； ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）−１−［１−（２−ナフチル
   メチル）イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン； ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５
   −イルメチル］−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−［１−（４−ブロモベンジル）イミダゾール−５−イルメチル］−２（Ｓ
   ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］アセ
   チル｝−２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−フェニル−４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５
   −イルエチル］−ピペラジン−２−オン； １−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
   ）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（３−ブロモフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イ
   ミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； ５（Ｓ）−（２−［２，２，２−トリフルオロエトキシ］エチル）−１−（３
   −トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−４−イ
   ミダゾリルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（５，６，７，８−テトラヒドロナフチル）−４−［１−（４−シアノベ
   ンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（２−メチル−３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
   ）−４−イミダゾリルメチル）］−ピペラジン−２−オン からは選択されない。］
2. 【請求項２】 下記式Ｉ−ａによって表される請求項１に記載の化合物また
   は該化合物の医薬的に許容される塩。 【化２】 ［式中、 Ｒ^１ｂは独立に、 ａ）水素、 ｂ）アリール、複素環、シクロアルキル、Ｒ^１０Ｏ−、−Ｎ（Ｒ^１０）_２また
   はＣ_２〜Ｃ_６アルケニル ｃ）未置換またはアリール、複素環、シクロアルキル、アルケニル、Ｒ^１０Ｏ
   −もしくは−Ｎ（Ｒ^１０）_２によって置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキル から選択され； Ｒ^２は、Ｈ；未置換もしくは置換アリール；または未置換もしくは１以上の １）アリール、 ２）ヘテロアリール、 ３）ＯＲ^６もしくは ４）ＳＲ^６ａ によって置換された未分岐もしくは分岐のＣ_１−５アルキルから選択され； Ｒ^６およびＲ^７は独立に、未置換もしくは ａ）Ｃ_１−４アルコキシ ｂ）ハロゲン、 ｃ）パーフルオロ−Ｃ_１−４アルキルもしくは ｄ）アリールもしくはヘテロアリール で置換されたＣ_１−４アルキル、アリールおよびヘテロアリール から選択され； Ｒ^６ａは、 ａ）Ｃ_１−４アルコキシもしくは ｂ）アリールもしくはヘテロアリール で置換されたＣ_１−４アルキルから選択され； Ｒ^８は独立に、 ａ）水素、 ｂ）Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル、Ｃ_２〜Ｃ_６アルキニル、Ｃ _１ 〜Ｃ_６パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ^１０Ｏ−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^{１ ０} −、ＣＮ、ＮＯ_２、（Ｒ^１０）_２Ｎ−Ｃ（ＮＲ^１０）−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、
   −Ｎ（Ｒ^１０）_２もしくはＲ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−および ｃ）Ｃ_１〜Ｃ_６パーフルオロアルキル、Ｒ^１０Ｏ−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１０ −、（Ｒ^１０）_２Ｎ−Ｃ（ＮＲ^１０）−、Ｒ^１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ^１０）_２ もしくはＲ^１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^１０−によって置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキル から選択され； Ｒ^１０は独立に、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、ベンジルおよびアリールから選
   択され； Ｒ^１１は独立に、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルおよびアリールから選択され； Ｘは−ＣＨ_２−または−Ｃ（＝Ｏ）−であり； Ｚは、アリール、アリールメチルおよびアリールスルホニルから選択される未
   置換もしくは置換の基であり；該基が置換されている場合、該基は１以上の ａ）未置換あるいはＣ_１−４アルコキシ、ＮＲ^６Ｒ^７、Ｃ_３−６シクロアルキ
   ル、未置換もしくは置換アリール、複素環、ＨＯ、−Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^６ａまたは−
   Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７で置換されたＣ_１−４アルキル、 ｂ）アリールもしくは複素環、 ｃ）ハロゲン、 ｄ）ＯＲ^６、 ｅ）ＮＲ^６Ｒ^７、 ｆ）ＣＮ、 ｇ）ＮＯ_２、 ｈ）ＣＦ_３、 ｉ）−Ｓ（Ｏ）_ｍＲ^６ａ、 ｊ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６Ｒ^７または ｋ）Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル で置換されており； ｍは０、１もしくは２であり； ｐは０、１、２、３もしくは４であり； ｒは０〜３であり； ただし、該化合物は、 １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
   ルメチル］−２−ピペラジノン； ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）−１−［１−（２−ナフチル
   メチル）イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン； ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５
   −イルメチル］−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−［１−（４−ブロモベンジル）イミダゾール−５−イルメチル］−２（Ｓ
   ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］アセ
   チル｝−２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン； １−フェニル−４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５
   −イルエチル］−ピペラジン−２−オン； １−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
   ）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（３−ブロモフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イ
   ミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； ５（Ｓ）−（２−［２，２，２−トリフルオロエトキシエチル）−１−（３−
   トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−４−イミ
   ダゾリルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（５，６，７，８−テトラヒドロナフチル）−４−［１−（４−シアノベ
   ンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン； １−（２−メチル−３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
   ）−４−イミダゾリルメチル）］−ピペラジン−２−オン からは選択されない。］
3. 【請求項３】 １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（
   ４−シアノベンジル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン； １−（２，５−ジメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミ
   ダゾリルメチル］−２−ピペラジノン； １−（３−メチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
   ルメチル］−２−ピペラジノン； １−（３−ヨードフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
   ルメチル］−２−ピペラジノン； １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（３−メトキシ−４−シアノベンジ
   ル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン； １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（３−メトキシ−４
   −シアノベンジル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン； （Ｒ）−５−［（ベンジルオキシ）メチル］−１−（３−クロロフェニル）−
   ４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン；
   １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（２−フルオロ−４−シアノベンジ
   ル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン； ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］
   −１−（３−メチルチオフェニル）ピペラジン−２−オン； ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］
   −１−（３，５−ジクロロフェニル）ピペラジン−２−オン； １−（３−クロロフェニル）−４−｛［１−（４−シアノフェニル）−１−エ
   チル］−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン； １−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジ
   ル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン； ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］
   １−（３，５−ジメチルフェニル）ピペラジン−２−オン； （Ｓ）−５−ベンジル−４−［３−（４−シアノベンジル−１−イミダゾール
   −５−イル）プロプ−１−イル］−１−フェニル−２−ピペラジノン； １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−ニトロベンジル）−１Ｈ−イ
   ミダゾール−５−イルメチル］ピペラジン−２−オン； ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］
   １−（３，５−ジフルオロフェニル）ピペラジン−２−オンまたは ４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］
   １−（３，４−ジフルオロフェニル）ピペラジン−２−オンあるいは 上記化合物の医薬的に許容される塩もしくは光学異性体である、ファルネシル蛋
   白トランスフェラーゼを阻害する化合物。
4. 【請求項４】 医薬用担体および該担体中に分散した治療上有効量の請求項
   １に記載の化合物を含有する医薬組成物。
5. 【請求項５】 医薬用担体および該担体中に分散した治療上有効量の請求項
   ２に記載の化合物を含有する医薬組成物。
6. 【請求項６】 医薬用担体および該担体中に分散した治療上有効量の請求項
   ３に記載の化合物を含有する医薬組成物。
7. 【請求項７】 処置を必要とする哺乳動物に対して治療上有効量の請求項４
   に記載の組成物を投与する段階を有する、ファルネシル蛋白トランスフェラーゼ
   およびゲラニルゲラニル蛋白トランスフェラーゼＩ型の阻害方法。
8. 【請求項８】 処置を必要とする哺乳動物に対して治療上有効量の請求項５
   に記載の組成物を投与する段階を有する、ファルネシル蛋白トランスフェラーゼ
   およびゲラニルゲラニル蛋白トランスフェラーゼＩ型の阻害方法。
9. 【請求項９】 処置を必要とする哺乳動物に対して治療上有効量の請求項６
   に記載の組成物を投与する段階を有する、ファルネシル蛋白トランスフェラーゼ
   およびゲラニルゲラニル蛋白トランスフェラーゼＩ型の阻害方法。
10. 【請求項１０】 癌治療を必要とする哺乳動物に対して請求項４に記載の組
    成物を投与する段階を有する癌治療方法。
11. 【請求項１１】 癌が突然変異Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ蛋白を特徴とするものである
    請求項１０に記載の方法。
12. 【請求項１２】 癌治療を必要とする哺乳動物に対して請求項５に記載の組
    成物を投与する段階を有する癌治療方法。
13. 【請求項１３】 癌が突然変異Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ蛋白を特徴とするものである
    請求項１２に記載の方法。
14. 【請求項１４】 癌治療を必要とする哺乳動物に対して請求項６に記載の組
    成物を投与する段階を有する癌治療方法。
15. 【請求項１５】 癌が突然変異Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ蛋白を特徴とするものである
    請求項１４に記載の方法。
16. 【請求項１６】 処置を必要とする哺乳動物に対して請求項４に記載の組成
    物を投与する段階を有する、ニューロフィブロミン（neurofibromin）良性増殖 性障害の治療方法。
17. 【請求項１７】 処置を必要とする哺乳動物に対して請求項４に記載の組成
    物を投与する段階を有する、網膜血管新生に関係する視覚消失の治療方法。
18. 【請求項１８】 処置を必要とする哺乳動物に対して請求項４に記載の組成
    物を投与する段階を有する、デルタ型肝炎ウィルスおよび関連ウィルス感染の治
    療方法。
19. 【請求項１９】 処置を必要とする哺乳動物に対して請求項４に記載の組成
    物を投与する段階を有する、再狭窄の予防方法。
20. 【請求項２０】 処置を必要とする哺乳動物に対して請求項４に記載の組成
    物を投与する段階を有する、多嚢胞性腎臓疾患の治療方法。
21. 【請求項２１】 請求項１に記載の化合物と医薬的に許容される担体とを組
    み合わせることで製造される医薬組成物。
22. 【請求項２２】 請求項１に記載の化合物と医薬的に許容される担体とを組
    み合わせる段階を有する医薬組成物の製造方法。