JP2001511644A

JP2001511644A - 核酸を精製するための方法および装置

Info

Publication number: JP2001511644A
Application number: JP53160798A
Authority: JP
Inventors: ウォルター，トーマス
Original assignee: ロシュダイアグノスティックスゲーエムベーハー
Priority date: 1997-01-28
Filing date: 1998-01-26
Publication date: 2001-08-14
Also published as: EP0964934A1; AU6213298A; DE19702907A1; US20040166524A1; WO1998032877A1; US6720417B1

Abstract

(57)【要約】核酸を結合する材料が配置された密閉部材によって連結された２つの容器から構成され、核酸単離法中の不純物の移動を低減する、核酸を単離するための装置。核酸は、例えば、装置を傾けることによって材料に結合させ得る。

Description

【発明の詳細な説明】核酸を精製するための方法および装置本発明は、試料からの核酸の単離方法およびこの方法に適した装置に関する。核酸についてのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）およびそれに続く代替増幅システムの採用により、この遺伝子材料を診断試験による検査用の材料として使用することが可能になった。このことにより、遺伝病、特定の病気の素因および感染症の診断に対するとりわけ新規の分析的機会が得られ、特に症状の早期発見を可能にした。遺伝子材料を酵素増幅に適した状態に変化させるためには、生物学的試料材料からその遺伝子材料を放出させることが常に必要である。さらに、核酸を生物学的材料または周囲環境におけるヌクレアーゼによる分解ならびに化学反応条件（ Fe⁺⁺／ＤＴＴまたはβ−メルカプトエタノール；NaOH；熱）による分解から保護しなければならない。生物学的試料およびそれから単離される核酸の汚染が無いということが最も要求される。特に、研究室スタッフおよび試料間の相互汚染による周囲環境からの移動を防止することが必要である。核酸は、増幅のための緩衝化された、実質的に塩類を含まない水溶液中に存在するべきである。ＰＣＲには非常に少量の分析物（pg／ngの範囲）が常に用いられるが、特殊な問題では大量の試料の処理が要求され得る。例えば、10⁷〜10⁸正常細胞のバックグラウンドにおいて１腫瘍細胞という感度で循環腫瘍細胞を同定するためには、核酸を、例えば10〜20mlの血液試料から単離しなければならない。試料をホモジナイズした後、単離されたＲＮＡのアリコートを腫瘍関連遺伝子の発現について検査することができる。試料材料の酵素的、機械的または化学的溶解、その後のフェノールおよびフェノール／CHCl₃によるタンパク質および脂質の抽出、ならびにエタノールまたはi -プロパノールによる水相からの核酸の沈殿による核酸単離の古典的方法（Sambr ook，J.，Fritsch E.F.およびT.Maniatis，Molecular Cloning，Cold Spring Ha rbor Laboratory Press，1989，第２版，9.16-9.23;Ausubel F.M．ら，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，1987，2.1.1-2.4.5）に加えて、近年、特に、70年代の終わりから知られている、核酸がカオトロピックな塩条件下でガラス表面に結合するという特性を利用するＰＣＲ試料調製のためのいくつかの市販のキットが開発された(Vogelstein B．ら，Proc．Natl．Aca d．Sci:USA，76 pp.615-619(1979))。タンパク質、脂質または塩のような生物学的材料のその他の構成成分は結合せず、したがって分離される。バッチプロセスが可能な200μｌ以下の試料容量に対するガラスフリース挿入物またはシリカゲル懸濁液を含む遠心分離容器が公知である。さらに、下に取り付けられている減圧チャンバーを利用して、ならびに遠心分離によって操作することができる、底部にガラスフリースが挿入されているストリップおよび96-ウェルマイクロタイタープレート型の多重装置(multiple devices)が公知である。これらの方法では、全ての容器が空気層を介して減圧吸引ならびに遠心分離と接触しているので、汚染の危険が大きく、エーロゾルによる汚染が発生し得る。改良方法（Millerら，Nucl．Acids Res．16:1215）では、試料材料を溶解した後、タンパク質およびその他の付随する物質を沈殿させるために濃縮塩溶液が使用されている。次いで、エタノールによって上清中の核酸を沈殿させ、遠心分離によって回収する。核酸を溶解した後、それらを増幅に使用し得る。最新のアプローチは、処理し得る容量の大きさが限定されるか、より時間がかかるか、または核酸を沈殿させるための追加の工程が必要である。複合的使用は時間がかかり、汚染および間違いの危険が増大する。バッチプロセスは基本的にスケールアップされ得るが、その場合でさえ汚染の危険を有している。したがって、本発明の目的は、大容量の試料から核酸を単離するための簡単な方法を提供することであった。よって、本発明は、試料を開口部から第１の容器内に入れ、核酸結合性の液体浸透性材料を内包する密閉部材であって前記開口部に面する側に第１の容器に該部材を取り付けるための手段を含み、前記材料の別の側には該部材を第２の容器に取り付けるための手段を含む前記密閉部材で第１の容器の前記開口部を密閉し、試料を前記材料を通して別の側に取り付けられた容器内に移すことによって試料から核酸を単離する方法に関する。また、本発明は、この方法を実施するための装置にも関する。本発明の装置の構成部材および本発明の方法の個々の段階を、図１に概略的に一例として示す。核酸を単離する方法は、試料中の核酸をその他の試料成分から分離する方法として理解される。これは、核酸を核酸結合性材料に結合させることによって行われる。結合させた後、液体は核酸を含む材料から分離され得る。特に純粋な核酸を単離するために、材料を液体で洗浄することによって依然として付着している可能性のある物質を除去することができる。所望により、核酸を核酸結合性材料から再び分離させることができる。核酸は、使用される材料に依存する条件下で材料に結合したり、分離される。核酸結合性材料は当業者には公知である。かかる材料は、粒状であり、また繊維状でもあり得る。材料が粒子から構成される場合、これらの粒子を、例えば、小さい液体浸透性プレート、例えば、粒子がプレート間に保持されるくらい孔が狭いセルロースまたはプラスチックなどの繊維状材料製の織布またはフリースの間に入れることによって固定するのが都合がよいことが判明した。しかしながら、核酸結合性材料は、好ましくは、例えば織布またはフリースの状態の繊維状材料である。適当な材料は、例えば、ストリップ型の遠心管または多重装置を利用して核酸を単離する方法から公知である。核酸結合性材料は、さらなる力の作用無しに、または圧力をかけたり減圧(underpressure)することにより力を加えることによって試料液が該材料を通過し得るという特性を有する。しかしながら、本発明の方法では、核酸は試料からの該核酸の濾過によって結合されるのではなく、核酸の表面に対する親和性を利用する方法によって結合されるので、比較的粗い多孔質材料を使用することができる。これは、比較的粘稠な試料液の流れさえ促進する。液体浸透性材料は核酸を結合することができるが、タンパク質などのそこに溶解したその他の成分は通過させる。第１の変形においては、核酸は、その材料の表面に結合した捕獲プローブによって配列特異的に結合され得る。捕獲プローブは、単離される核酸の相補的塩基配列にハイブリダイゼーション条件下で結合することができる塩基配列を有する。配列特異的材料を使用することにより、特定の配列を有する核酸の選択的単離が可能になる。核酸を固体表面のペプチド核酸に結合させる方法は、例えばWO95/14708に記載されている。好ましい場合においては、液体浸透性材料はガラス含有表面を有する。核酸を結合させることができるという特性は、粒状および繊維状材料に関してすでに長い間知られている。したがって、核酸の単離に対するガラスフリースの使用は、例えば、DE-A-1951236 9に記載されている。本発明の概念に含まれる核酸は、任意の起源の核酸、例えば、ウイロイド、ウイルス、細菌または細胞起源の核酸と理解される。試料中の核酸がアクセスしにくいものである場合、適当な試薬を用いてアクセスしやすくするのが好ましい。これには、pH（アルカリ性）の変更、熱、温度の極端な変化の繰り返し（凍結／解凍）、生理学的増殖条件（浸透圧）の変更、界面活性剤の作用、カオトロピック塩または酵素（例えば、プロテアーゼおよびリパーゼ）が含まれる。核酸がこの様式で放出され得る試料材料は、特に、細胞含有媒体、細胞塗抹(smear)および組織切片である。核酸は、ＲＮＡおよびＤＮＡであり得る。適当な容器は、特に、プラスチック容器である。そのような容器は、例えば、ポリスチレン、ポリエチレンまたはルラン(luran)から製造される。これらは、多段射出成形プロセスで製造することが容易であるという利点を有し、それと同時に本発明の単離方法の条件下で高い機械的安定度を有する。まず、試料を第１の容器に入れる。この目的のために、この容器は、全試料、および任意に、例えば、核酸の核酸結合性材料への結合を促進するためのその他の試薬を収容することができる容量を有する。容量は、好ましくは１〜100mlであり、より好ましくは５〜50mlである。この容器は、好ましくは、片側が閉じた本質的に円柱状の基本形を有している。開口部は、試料の取り込みに適した容器の別の側に位置している。さらに、この容器は、好ましくは開口部付近の領域に密閉部材に該容器を取り付けるための手段を有する。この手段は、例えば、外部または内部のねじ山であり得る。容器は、好ましくは、別途開口部を有する（例えば、圧力均等化開口部）。試料を第１の容器に入れた後、試料は第１の容器内に存在するが、核酸結合性材料とは接触していない。本発明のその他の重要な部材は、核酸結合性の液体浸透性材料を内包する密閉部材である。第１の容器から第２の容器に通過する試料液が核酸結合性材料を通過しなければならないようにその核酸結合性材料は密閉部材内に配置されている。このプロセスにおいて核酸は材料に結合する。したがって、密閉部材は第１の容器の開口部と第２の容器の開口部を接続するものであり、核酸結合性材料はこれらの開口部の間に位置する。核酸結合性材料の片側に、密閉部材は第１の容器上に該部材を取り付けるための手段を有する。この手段は、開口部の部分の第１の容器の形状に依存する。例えば、第１の容器がねじ山を有する場合、密閉部材の手段は適合する対のねじ山である。密閉部材の第１の容器の開口部に面していない側は、第２の容器に該密閉部材を取り付けるための手段を有する。ここもねじ山を設けることが都合がよいことが判明した。第２の容器のデザインおよび材料は、第１の容器と同様であり得る。しかしながら、第２の容器は、少なくとも試料液の容量を収容することができることが特に必要である。第２の容器の大きさは、好ましくは第１の容器の大きさと等しいか、または試料液に加えて洗浄液をさらに収容することができるように第１の容器のよりもかなり大きい容量を有する。密閉部材は容器と同一の材料から製造することができ、この場合、射出成形可能なプラスチックの使用が特に好ましい。というのは、これらのプラスチックにより密閉部材の製造中に液体浸透性材料を導入することが可能になるからである。特に、ガラス繊維フリースの場合、射出成形プロセス中に前記材料を密閉部材に永久に包埋することができる。しかしながら、前記材料を後で導入し、例えば接着剤または溶接によって密閉部材内に該材料を固定することも可能である。密閉部材は、さらに便利な部材、例えば、減圧するための接続部分を含むことができる。この接続部分は、好ましくは、密閉部材の第２の容器に面する側に位置する。さらに、密閉部材は、圧力平衡化コネクターを含むことができる。これは、密閉部材の第１の容器に面している部分または吸引コネクターに面していない側にあるのが好ましい。圧力平衡化コネクターは、好ましくは、標準条件下で試料液をそこから周囲環境に逃がさないように設計される。このコネクターは、例えば、核酸結合性材料のすぐ近くにある、高密度フリースによって密閉された開口部であり得る。さらに、密閉部材は、核酸結合性材料を制御しながら均一に流通させる構成部材も含むことができる。これは、特に、前記材料の利用可能な表面全体への液体の流れの分配、ならびに液体が第２の容器に入る場合の液体の飛び散りおよび吸引コネクターによる予想される損失を防止するための液体の流れの収集を含む。本発明の方法の実施に非常に適したシステムは、Millipore Companyから市販されているSteriflip^TM減圧濾過システムの構成部材に基づくものであるが、滅菌濾過膜の代わりにガラス繊維フリースが用いられる。この装置に基づいた本発明の方法の好ましい実施態様を以下に記載する。５〜30mlの全血を第１の容器にピペットで移す。細胞は第１の工程で溶解され、破壊される。これに必要な試薬、例えばカオトロピック塩および／またはプロテアーゼを試料液に加える。第１の容器をキャップでしっかりと密閉し、混合するのが好ましい。その後、キャップを外して、本発明の密閉部材を回して取り付ける。第２の容器は、すでに密閉部材に取り付けられているか、後で、密閉部材の、核酸結合性材料の第１の容器の開口部に面していない側に取り付けられる。次いで、試料液を核酸結合性材料に通す。一方、これは組み立てた装置（第１の容器、密閉部材、第２の容器）を傾けることによって行うか、密閉部材のコネクターをさらに減圧することによって促進することができる。試料液を核酸結合性材料に通している間、目下アクセス可能な試料中に存在する核酸は核酸結合性材料に結合し、一方、その他の試料成分は液体とともに第２の容器に移る。外の空気が第２のコネクターを通って第１の容器に入り、よって第１の容器に生じた減圧が平衡化される。したがって、今や単離された核酸は液体浸透性材料に結合されて密閉部材内に位置する。核酸は、任意の所望の方法でさらに処理され得るものである。空気が吸い込まれた後でさえ通常一定量の試料液が液体浸透性材料に付着しているので、これらの付着残渣を洗浄するのが好ましい。この目的のために、第１の容器は例えば第１の密閉部材から分離され得るものであり、例えば、密閉部材をねじってはずして、洗浄液を核酸が結合している材料にかける、すなわち、滴下する。大量の洗浄液を用いる場合、密閉部材に第１の容器を取り付けるために用いた手段を利用して充填接続を取り付けることもできる。減圧することによって洗浄液は材料を通って第２の容器に吸い込まれ得る。核酸を液体浸透性材料から分離させたい場合、第２の容器を密閉部材から取り外して、新たな第３の容器に交換し得る。第３の容器は、第２の容器を密閉部材に取り付けるための手段を利用して取り付けることができる。続いて、溶離液を、好ましくは第１の容器が取り付けられていた側にかけて、所望により減圧して材料を通して第３の容器に引き込ませる。溶離液は、核酸の液体浸透性材料への結合を破壊するように設計される。今や、非常に少量の溶離液に核酸を溶解させることができる。したがって、第３の容器は第２および第１の容器よりも小さい容量を有し得るものである。よって、本発明の装置は、核酸の単離に加えて、核酸を大容量から小容量に移すことにも適している。図１Ａは、第１のねじ山（２）および第２のねじ山（７）を有する密閉部材（１）を示す。高密度フリースによって気密に密閉されているが、液体不浸透性ではない圧力平衡化コネクター（８）がねじ山（２）の側に設けられている。減圧するための吸引口（３）および飛び跳ね保護（５）が第２のねじ山の側に配置されている。核酸結合性材料（４）はねじ山間に配置されている。図１Ｂは、ねじ山（２）に対応するねじ山（１１）および核酸を含む試料液（１２）を有する第１の容器（１０）を示す。図１Ｃにおいては、吸引口（３）が材料（４）によって試料液から分離されるようにして、密閉部材（１）が試料液を含む第１の容器をねじ回し式で密閉している。ねじ山（７）に対応するねじ山（２１）を有する第２の容器（２０）が示されている。図１Ｄは、すでに減圧されており、試料液の一部が核酸結合性材料（４）を通過している状態にある組み立てられた装置を示すものである。通過した液体（２２）は第２の容器（２０）に集まる。装置は、第２の容器をねじってはずした後（図１Ｃ参照）、向きが変えられることが分かり得る（図１Ｄ）。また、本発明は、開口部および核酸結合性の液体浸透性材料を有する密閉部材を備えた試料を収容することができる第１の容器を含んでなり、密閉部材が該部材を第１の容器に面していない側の第２の容器に取り付けるための手段を有するものである、試料から核酸を単離するための装置にも関する。第１の容器と密閉部材間の接続は、液体が外部に浸透せず、密閉部材と第１の容器間で気体が内部に入り込まないくらい非常にきっちりしているべきである。本発明のさらなる主題は、核酸試験用の試料を調製する場合に汚染を回避するための、第１および第２の容器ならびにこれらの容器をしっかりと接続するための核酸結合性材料を内包する密閉部材を有する装置の使用である。単離後、液体浸透性材料から溶離させた核酸は、試料から個々の核酸またはこれらの核酸のいくつかを検出するのに都合がよい手法で用いることができる。適当な検出方法は、当業者には公知である。そのような方法は、特に、単離された核酸の増幅および標識核酸プローブを用いるそれらの検出を含む。記載された方法により、試料、オペレーターおよび作業場所を汚染する危険を低減しながら比較的大容量の試料（≧10ml）から核酸を簡単に単離することができる。エーロゾルの広がりは、試料容器および濾過ユニットの配置によって防止される。溶解および試料のさらなる処理は、容器の交換の必要がない別の時および場所で行われるのが都合がよくあり得る（例えば、分散した試料の回収および溶解／安定化）。下記の実施例は、本発明をさらに説明するためのものである。実施例一例として20mlの全血からの核酸分析、例えば、逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）による腫瘍関連遺伝子発現に基づいた白血病または前立腺膜抗原（ＰＭＡ）における９：22トランスロケーションについての試験を用いて本発明を記載するものである。図１は説明に役立つものである。全ての操作は潜在的に病原性のヒト材料を取り扱うための通常の実験室条件下で行う。10mlの溶解緩衝液（６ＭグアニジニウムHCl、10ml尿素、10mMトリス-HC l、20％トリトンX-100(v/v)、pH4.4（25℃））を50mlのポリプロピレン容器（Mi llipore SC 50 TB1 00）内の10mlの全血に加える。２mlのプロテイナーゼＫ溶液（20mg/ml、Boehringer Mannheim、カタログNo..1000 144）を加えて、容器を密閉してすぐにボルテックスミキサーで入念に混合する。次いで、70℃で10分間インキュベートする。容器を冷却し、手短に遠心分離し（Heraeus Sepatech Varif uge 3.0R）、開封して５mlのi-プロパノールを加えて十分混合する。Millipore Express^TM膜の代わりに２層のガラスフリース（例えば、接着または溶接されたG elman S80100 A/Eガラス繊維、S80352 A/Fガラス繊維、S80348 A/Cガラス繊維、 S80038特別密なガラス繊維）を含むSteriflip^TM（Millipore）濾過ユニットをキャップのねじ山に回して取り付ける。濾過ユニットの出口には、ガラスフリースの、濾過ユニット上に配置した接続を介して減圧下に置かれ得る第１の容器に面していない側にさらなる50mlの試料容器が設けられている。かかる試料溶液は、例えば、Steriflip^TMフィルターユニット（Mlllipore、カタログNo.SCGP 005 25）から採用され得る。組み立てられたユニットを、溶解した試料材料が上方の容器内に位置するような方向に向け、減圧する（例えば、水流減圧）。真空管路は、通常、適当なフィルター（例えば、MilliporeカタログNo.SLFG 050 10）によって汚染から保護される。試料がガラスフリースを通過すると、核酸がガラスフリースの表面に結合され、一方試料材料中のタンパク質、脂質およびその他の成分の大部分はフリースを通過する（溶出液）。上方の（第１の）容器を取り外し、シリンダー（例えば、Millipor e Steriflip漏斗トップカタログNo.SC05 FL025）に交換する。２×10mlの洗浄緩衝液（20mlのNaCl、２mMのトリス-HCl、80％エタノール(v/v)、pH7.5（25℃））は減圧するとガラスフリースを通過する。最後に、シリンダーをキャップに交換して、ユニットを遠心分離してガラスフリースから残留洗浄緩衝液を除去する。また、フリースに無菌空気を通すことによってフリースを乾燥することもできる。溶出液を含む容器を取り外し、新たな滅菌容器に交換する。予め70℃に加熱した１〜２mlの溶出緩衝液（10mMのトリス-HCl、pH8.5）をフリースにかけて、減圧で吸引する。最適収量を得るために、その後、ユニットを約8000×ｇで遠心分離する。単離された核酸は溶出液中にあり、ＤＮＡおよびＲＮＡを含み、ＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲにおける使用に適している。参照の数字のリスト１密閉部材２第１のねじ山３減圧用吸引口４核酸結合性材料（フリース）５飛び跳ね保護６ねじ山止め７第２のねじ山８圧力平衡化口１０第１の容器１１２に対応するねじ山１２核酸含有試料液２０第２の容器２１７に対応するねじ山２２通過した液体

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１１年２月９日（１９９９．２．９）【補正内容】請求の範囲１．ａ）試料を開口部から第１の容器に入れ、ｂ）核酸結合性の液体浸透性材料を内包する密閉部材であって前記開口部に面する側に第１の容器に該部材を取り付けるための手段を含み、前記材料の別の側には該部材を第２の容器に取り付けるための手段を含む前記密閉部材で第１の容器の前記開口部を密閉し、ｃ）試料を前記材料を通して別の側に取り付けられた容器内に移し、ここで該試料は第２の容器を減圧することによって移される、ことによって試料から核酸を単離する方法。２．試料を第１の容器に入れた後、核酸が溶解により細胞から放出される、請求項１に記載の方法。３．ｄ）核酸結合性材料から核酸を溶出するさらなる工程を特徴とする、請求項１または２に記載の方法。４．試料を材料を通して移動させる前に、容器を回転させることによって第１の容器内の試料を材料と接触させるものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。５．第１の容器が５mlよりも大きい容量を有するものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。６．核酸結合性材料が繊維または粒子状の金属酸化物、金属混合酸化物、シリカゲル、酸化アルミニウム、ゼオライト、酸化チタンまたは酸化ジルコニウムを含むガラスフリースまたは膜である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。７．開口部を備えた試料を収容することができる第１の容器、および核酸結合性の液体浸透性材料を内包する密閉部材を含み、密閉部材が該部材を第１の容器に面していない側の第２の容器に取り付けるための手段を有するものであり、そして減圧することができる第２の容器を含むものである、試料から核酸を単離するための装置。８．核酸試験用の試料を調製する場合に汚染を回避するための、第１および第２の容器、ならびに核酸結合性材料を内包するこれらの容器間のしっかりとした接続を含む装置の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．ａ）試料を開口部から第１の容器に入れ、ｂ）核酸結合性の液体浸透性材料を内包する密閉部材であって前記開口部に面する側に第１の容器に該部材を取り付けるための手段を含み、前記材料の別の側には該部材を第２の容器に取り付けるための手段を含む前記密閉部材で第１の容器の前記開口部を密閉し、ｃ）試料を前記材料を通して別の側に取り付けられた容器内に移すことによって試料から核酸を単離する方法。２．試料を第１の容器に入れた後、核酸が溶解により細胞から放出される、請求項１に記載の方法。３．ｄ）核酸結合性材料から核酸を溶出するさらなる工程を特徴とする、請求項１または２に記載の方法。４．試料を材料を通して移動させる前に、容器を回転させることによって第１の容器内の試料を材料と接触させるものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。５．第２の容器を減圧することによって試料が移されるものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。６．第１の容器が５mlよりも大きい容量を有するものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。７．核酸結合性材料が繊維または粒子状の金属酸化物、金属混合酸化物、シリカゲル、酸化アルミニウム、ゼオライト、酸化チタンまたは酸化ジルコニウムを含むガラスフリースまたは膜である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。８．開口部を備えた試料を収容することができる第１の容器、および核酸結合性の液体浸透性材料を内包する密閉部材を含み、密閉部材が該部材を第１の容器に面していない側の第２の容器に取り付けるための手段を有するものである、試料から核酸を単離するための装置。９．装置が第２の容器を含む、請求項８に記載の装置。１０．核酸試験用の試料を調製する場合に汚染を回避するための、第１および第２の容器、ならびに核酸結合性材料を内包するこれらの容器間のしっかりとした接続を有する装置の使用。