JP2001508425A

JP2001508425A - 均質に荷電した粒状ベクターおよびそれを含有する製薬学的もしくは化粧用組成物

Info

Publication number: JP2001508425A
Application number: JP52968298A
Authority: JP
Inventors: ベトブデ，デイデイエ; マジヨール，ミシエル
Original assignee: バイオベクター・セラピユーテイクス・ソシエテ・アノニム
Priority date: 1996-12-27
Filing date: 1997-12-23
Publication date: 2001-06-26
Also published as: FR2757768A1; WO1998029102A1; EP0946153A1; AU5668898A; FR2757768B1; CA2276692A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、核が包括的な陽イオン性、陰イオン性もしくは中性の電荷を運搬すること、および、両親媒性ラメラが核により運搬されるものと同一の極性の包括的な電荷を運搬することを特徴とする非液状親水性の核、両親媒性ラメラを含む粒状ベクターに関する。本発明はまた、こうした媒介体を含有する製薬学的もしくは化粧用組成物または栄養添加物にも関する。

Description

【発明の詳細な説明】均質に荷電した粒状ベクターおよびそれを含有する製薬学的もしくは化粧用組成物本発明は有効成分を輸送しかつ標的に向けるのに有用である複合体粒子に関し、これらは身体および細胞の生物学的機能と適合性である。粒状ベクター(particulate vectors)はEP 344,040に記述されており；これらのベクターは、第一脂質層次いでその外側の、疎水性相互作用を介して第一脂質層に結合された両親媒性化合物の第二層により取り囲まれた親水性コア(core)を含んで成る。特許出願第WO 94/20078号は、親水性Ｉコア、および、イオン結合もしくは疎水性相互作用を介してコアと直接会合する両親媒性化合物から少なくとも部分的に構成された外層から成る、別の世代の粒状ベクターまたは「ＢＶＳＭ−Ｌ」について出願された。これらのベクターのコアは、イオン性、酸性もしくは塩基性のリガンドによりグラフトされていてもよく、それがある有効成分を変化させるために活用できる電荷を与える。本発明者は、今や、意外にも、コアおよび外側葉状物(leaflet)の双方がィオン性の電荷をもつ粒状ベクターを安定な様式で得ることができることを見出した。さらに、全体として中性であるコアを荷電していない外側葉状物と組み合わせることができる。これの理由は、観察結果および従来技術において一般に容認された知識と対照的に、同一の符号の電荷がベクターの多様な成分上に存在し得ることである。従って、本発明の主題は、 −非液状親水性コア −両親媒性の葉状物を含んで成る粒状ベクターであり、コアが陽イオン性、陰イオン性もしくは全体として中性の電荷を担持すること、および両親媒性の葉状物がコアによりもたれるものと全体として同一の極性の電荷をもっことを特徴とする。親水性の荷電した内側構造を類似の電荷および両親媒性の性質の外側構造と組み合わせるこうしたベクターは、本明細書において、以下、「ホメオバイオベクター(homeobiovector)」もしくは「ホメオ荷電バイオベクター(homeocharged bi ovector)」と称されるであろう。両親媒性化合物の層はホメオバイオベクターのコアに関して外側の位置にあり；それは不連続的もしくは連続的であることができ、そして／またはコアの構成要素との相互嵌合を有ることができる。両親媒性の葉状物とコアとの間の静電的反発がこの型の組み合わせと対立するであろうと予期されうるとは言え、ホメオバイオベクターは、経時的に超分子会合の顕著な安定性を特徴とする。それらはまた、脂質の分子充填の増大と高度の協同性を伴う両親媒性膜の特定の組織も示す。この組織は親水性のコアのイオン性電荷により修飾される。それはとりわけ相転移温度を測定することにより具象化され得る。陽イオン性もしくは陰イオン性のホメオバイオベクターは目的の分子の輸送に役に立ち得る。本発明の好ましい局面の一に従えば、これらのベクターは、コアおよび／もしくは両親媒性の葉状物と組み合わさって最低１種の有効成分を含有することができる。コアおよび／もしくは両親媒性の葉状物の組成物は、それと組み合わせられることを必要とする分子の型および予見される応用に依存して当業者により適合されることができる。本発明の態様の一において、粒状ベクターは、少なくとも −陽イオン性もしくは陰イオン性の電荷を担持する１個の非液状親水性コア、 −コアによりもたれるものと同一の極性の陽イオン性もしくは陰イオン性の電荷を担持する両親媒性の葉状物、を含有することができる。本発明にまた含まれる別の態様においては、当該ベクターは、 −非液状の電気的に中性の親水性コア、 −双性イオン性のリン脂質を含む包括的に中性の両親媒性の葉状物を包含する。とりわけ、両親媒性の葉状物は、有効成分および所望の機能に適合された物理化学的環境を創製するために１種もしくはそれ以上の成分から成り得る。好ましくは、両親媒性の葉状物の最低１種の構成要素は、コア上のものと同一の極性の電荷をもつ、天然もしくは合成の、陰ィオン性、陽イオン性もしくは双性イオン性のリン脂質、セラミド、脂肪酸、ステロイド、脂質、糖脂質、リポタンパク質および界面活性剤から成る群から選ばれる。ホメオバイオベクターの製造にとりわけ適する構成要素のなかでも、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトールおよびコレステロール、ならびにそれらの誘導体を挙げることができる。これらの構成要素は、単独で、もしくは場合によっては他の荷電していない構成要素と組み合わせられた混合物として存在できる。本発明の局面に一に従えば、両親媒性の葉状物の最低１種の構成要素は、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルオキシプロピルトリメチルアンモニウム、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジルセリンおよびステアリルアミンから選ばれる。コア上のものと同一の極性の電荷を担持する両親媒性の葉状物の構成要素の比率は、全ての場合において０％より大きく、とりわけ0.001％より大きく、かつ1 00％より小さいかもしくはこれに等しい。それは、とりわけ、親水性コアによりもたれる電荷に依存して、これらの構成要素の約５％と約30％との間であり得る。このコアは、好ましくは、天然にもしくは化学的に架橋された親水性のオリゴマーおよびポリマーから選ばれる化合物から本質的に成る。より具体的には、コアは、多様な分子量の糖誘導体、とりわけ陽イオン性もしくは陰イオン性の電荷をもつ天然にもしくは化学的に架橋された多糖もしくはオリゴ糖から成る。従って、デンプン、デキストランもしくはセルロースおよびそれらの置換された誘導体、ならびに、とりわけデキストリンおよびマルトデキストリンのようなそれらの加水分解生成物を使用することが可能である。これらのポリマーもしくはオリゴマーの塩およびエステル（天然にヒドロキシル官能基を含有する）もまた本発明を実施するのに適するであろう。この架橋は当業者に既知の多様な技術により得ることができる。当該ホメオバイオベクターの組成物に包含され得るコアの製造方法は、とりわけWO 94/20078 およびWO 92/21329に記述される。有利には、酸性もしくは塩基性のイオン性リガンドがコアに結合され得る。イオン性リガンドは、この架橋段階後、もしくはある態様においては同時にコアに結合されることができる。この第二の可能性は、とりわけ架橋およびリガンドのグラフトを同時に確実にする試薬を使用することにより、とりわけ「酸性の」コアに適用可能であり；この点に関して、低温（約０℃ないし約10℃の、好ましくは約４℃で）で使用されるオキシ塩化リンのような試薬がとりわけ適する。一般に、オリゴ糖もしくは多糖のヒドロキシルによる求核攻撃に感受性のいずれの化合物もマトリックス上にグラフトでき、こうしてエポキシド、酸塩化物、無水物、アルキルハロゲン化物、イソチオシアネート、クロロトリアジンなどを挙げることができる。好ましくは、イオン性リガンドは、ホスフェート、スルフェート、カルボン酸、第四級アンモニウム、一級アミン、二級アミンを含む群から選ばれる最低１個の官能基をもつ。当該試薬は、例えば、コハク酸、リン酸、クエン酸、グリシン、アラニン、グルタミン酸、アスパラギン酸もしくはそれらの誘導体、コリン、ヒドロキシコリン、２−（ジメチルアミノ）エタノール、２−（ジメチルアミノ）エチルアミンおよび塩化グリシジルトリメチルアンモニウムから選ばれ得る。最初の多糖濃度は、好ましくは、所望のグラフトおよび架橋の収率に依存して、ならびに所望の型のゲルの関数(function)（硬さ、均質性、メッシュの大きさ）として、100と500g/lとの間である。いずれの場合にも、コアを機能化する段階は、制御された大きさおよび硬さの粒子を得るためのゲルの粉砕および均質化の前に有利に実施されることができ、ここで電荷が均質にかつ均一に分布される。この均質化は、高圧（700ないし1200bar）および次いで１回もしくはそれ以上の濾過により実施され得る。好ましくは、親水性コアは、とりわけ水素結合型のものであることができる相互作用により両親媒性の葉状物と直接組み合わせられる。当該ホメオバイオベクターは、水性溶媒中に分散された核を葉状物の構成要素（１種もしくは複数）と混合することにより製造される。この合成は、とりわけ、両親媒性の構成要素のゲル−液相転移温度より上の温度での攪拌を用い、または、両親媒性の構成要素のゲル−液相転移温度より上の温度ての加圧下の均質化、もしくはいずれかの他の適する方法により実施され得る。残余の有機溶媒を除去した後に、ホメオバイオベクターは、とりわけ濾過により滅菌され、そして滅菌条件下で保存される。当該ホメオバイオベクターの平均直径は10nmから100μmまで変動し得る。製薬学的用途にとりわけ適する本発明の態様の一において、この直径は10nmと５μmとの間、とりわけ約15nmから約80nmまでである。多様な型の分子が当該ホメオバイオベクター、およびとりわけ全体として陰イオン性、陽イオン性もしくは双性イオン性の電荷を担持する有効成分と組み合わせられ得る。これらの分子は、とりわけ、ペプチド、タンパク質、リポタンパク質、プロテオグリカン、リポ多糖、脂肪酸、トリグリセリド、リン脂質、糖脂質、ステロイド、オリゴ糖、ヌクレオチド配列、ヌクレオシド配列、核酸、ビタミンおよびポルフィリンから選ばれてよい。それらは多様な分野で有用であることができ、また、当該ホメオバイオベクターは、本発明の多様な態様において、以下の群、すなわち抗生物質、殺菌剤、鎮痛薬、麻酔薬、抗炎症薬、抗ウイルス薬、抗癌剤、免疫調節薬および細胞媒介物 (cell mediator)、抗ヒスタミン薬、抗ムスカリン薬、抗貧血薬、止血薬、抗糖尿病薬、心血管系薬、抗うつ薬、抗てんかん薬、抗不安薬、催眠薬、鎮静薬、抗精神病薬、食欲抑制薬、ワクチン、天然もしくは合成のホルモンおよびそれらの誘導体、殺虫剤、殺真菌剤、抗マラリア薬、抗喘息薬、抗体、抗原およびそれらの断片、診断薬、ＮＭＲ診断薬ならびに放射活性マーカーから選ばれる最低１個の有効成分と組み合わせられ得る。細胞媒介物のなかでは、インターロイキン、インターフェロン、ＴＮＦ、Ｇ− ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＭＩＦを含む群から選ばれるサイトカインを挙げることができる。当該ホメオバイオベクターの構造および電荷は有効成分の性質に従って適合されてよく、その効能は、とりわけ、基礎となる類似の電荷のコアの存在のため増大された膜表面電位により向上され得る。こうしたベクターは、それらがとりわけ親水性のコア、および両親媒性の膜、とりわけリン脂質膜の特異的な細胞相互作用により確実にされる、標的に向ける特徴を組み合わせることを可能にするため、とりわけ有利である。加えて、脂質膜構造がコアの存在により安定化される。ホメオバイオベクター間の反発力は微粒子間の相互作用を制限するのでそれらの寿命を増大させる。最後に、輸送される分子の物理化学的性質に依存して、それは、ホメオバイオベクターの一種のおよび／もしくは他の構造物と組み合わせられてよい。例えば、タンパク質のような目的の分子を組み合わせる場合には、文献に記述されるモデル膜系（リン脂質単層、リポソーム）は、膜とタンパク質との間の相互作用が、膜が大きな表面電位で荷電されかつ高度の分子充填を有する場合に促進され得ることを示す。とりわけ、陰イオン性のホメオバイオベクターは、コアおよび膜の双方で陽イオン性の薬物と組み合わせられ得る（ＴＮＦ、ＩＬ２）。陰イオン性の膜が膜タンパク質（チトクロームｃ、ヘマグルチニン）の組み合わせ、安定性および細胞滲透に有利であることが文献に幅広く記述されている。コアの陰イオン性の電荷が細胞膜との相互作用において重要な役割を演ずる。治療上の応用の情況におけるこれら２因子の組み合わせ（陰イオン性の膜と組み合わせられた陰イオン性のコア）は、好都合な薬物送達のための作用の相乗効果を与えるはずである。この効果は、個々に利用される各系（陰イオン性のコアもしくは陰イオン性のリポソーム）を使用することでは、観察できないであろう。 89、243-248）は、脂質膜への膜タンパク質の取り込みが高度の分子充填を含有する陰イオン性の膜で至適化されることを示した。モデル膜とのチトクローム（Ｃｙｔ．）の相互作用を報告する多くの出版物は、 −Ｃｙｔ．ｃの単層への結合は脂質薄膜の電荷密度に依存する。膜中への滲透は表面電荷の存在により促進される。 −リン脂質混合物から成る膜の場合には、Ｃｙｔ．ｃオキシダーゼは、それらの極性の頭部の機能（陰イオン性の電荷に対する好みをもつ）および膜の相状態の機能（高度の分子充填を伴う膜に対する好み）として、多様な膜構成要素を識別する（デ・クイパー(de Cuyper)、Eur．J．Bio chem.、1980、104、397-405）。 −膜とＣｙｔ．ｂ５との間の相互作用は陰イオン性の脂質の存在下で強化される（静電的相互作用）。これらの相互作用は膜の挿入を促進するという効果（変性に対する保護）を有する（デュフルク・フォコ(Dufourcq-Faucon)、FEBS Letter s、1975、57(1)、112-116）。飽和脂質の存在（高い分子充填を伴う膜）が推奨される（デュフルク・ベルノン(Dufourcq-Bernon)、Biochem．Biophys．Acta、1 976、433、252-263）。これらの再構成された系においては、陰イオン性の極性の頭部をもつ脂質が、組み合わせを助長しかつヘム基の良好な配向(orientation )を可能にするのに必要とされるようである（チェスター(Chester)、Biophys．J ．1992、61、1224-1243）。ことを示している。環状ソマトスタチンの場合には、膜中での陰イオン性の電荷の存在がペプチドの組み合わせおよび挿入を促進するという効果を有する。この挿入には隣接する極性の頭部の再組織化(reorganization)が伴う（ベシアシュヴィリ(Beschiaschvili)Biochem．Biophys．Acta、1991、1061、78-84）。ホスファチジルコリンおよびホスファチジルグリセロールの脂質混合物（ＤＰＰＣ／ＤＰＰＧ）は陰イオン性の膜をもたらし、これは再構成された系の膜に挿入される肺の界面活性剤タンパク質の安定化および配向に関与する（シファー(S chiffer)、Biochemistry 1993、32、590-597）。コリシンＡのような細菌性トキシンは陰イオン性の膜と組み合わさり、そしてその後それに挿入されたようになる。さらに、膜電位はタンパク質の正しい配置を可能にし、これはその後活性の膜貫通チャンネルを構成する（マソット(Masso tte)、Biochemistry 1993、32、13787-13794）、（シュトロウド(Stroud)、Curr ．Opinion Struct．Biol．1995、5、511 ＡＤＰ／ＡＴＰ膜輸送体の例をとれば、陰イオン性の脂質により生じる表面電位が、膜タンパク質の親和性パラメータを調節し、そして再構成された系でのそれらの生物学的活性を回復させるための支配的なパラ ogy、1989、171、387-384）。抗生物質アドリアマイシンは、リン脂質の極性の頭部（リン酸基）とペプチドのアミノグリコシル基との間の相互作用によって脂質二重層中に滲透する。この膜滲透は分子充填に大きく依存する（デュプ(Dupou)、Eur．J．Biochem．1989、 181、695-702）。陰イオン性のリン脂質が多様な場合にタンパク質の膜との相互作用を決定することが示されている。これらの相互作用はタンパク質の挿入もしくはトランスロケーションをもたらす。プロテオリポソーム型の再構成系は一般に膜中の特定のリン脂質の存在に依存する（極性の頭部への電荷の供給、分子の圧縮および凝集）。陽イオン性のホメオバイオベクターの場合には、核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド）、脂質もしくはタンパク質のような陰イオン性の薬物もしくはプロドラッグがコアおよび／もしくは両親媒性の葉状物と組み合わせられ得る。これの理由は、陽イオン性のリポソームがとりわけ遺伝子治療でこの型の分子に使用されていることである。とりわけそれらは細胞質中へのＤＮＡの送達を可能にする。しかしながらこれらの研究はある数の制限を示す。その遺伝子発現は通常低くかつ一過性である。加えて、ＤＮＡ／リポソーム複合体は身体によりあまりに容易に分解かつ排除される。ある場合には、遺伝子プロモーターのアクチベーターの同時注入(co-injection)がタンパク質の産生を得るために必要である。最後に、融合原性の(fusogenic)プロテオリポソームに関しては、結果はとくに再現可能であるわけでない。本発明の文脈上、ホメオバイオベクター中に存在する組み合わせの型がリン脂質膜を硬質化しかつ安定化することが示されている。この型の安定化はインビボで重要な役割を演じうる。なぜなら、陽イオン性の膜はそれらの環境と強く相互作用して、（１）細胞表面への生物接着および（２）組み合わせられた有効成分を一緒に細胞質中へ送達することを促進するからである。陽イオン性のホメオバイオベクターは、リポソームのもしくは融合原性プロテオリポソームの構造、ウイルスベクターもしくは可溶性のＤＮＡ複合体と異なる超分子構造である（レジェンドル・スコザ(Legendre-Skoza)、Proc．Na tl．Sci．USA、1993、90、893-397）、(フェルグナー・ローズ(Felgner-Rhodes) 、Nature、1991、349、351-382)。すなわち、これらのホメオバイオベクターは、表面（膜レベル）およびそれらが酵素的分解に対し安定化かつ保護されることができるより深い下位(deeper down)（陽ィオン性の多糖のコア中）の双方で、分子（オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ）を組み合わせることを可能にすることができる。陽イオン性のホメオバイオベクターの表面での融合原性のタンパク質の存在が予見され得る。すなわち、それらは電荷の効果との相乗効果で作用して活性分子を細胞の細胞質中に送達させることがてきる。陽イオン性のバイオベクターを用いてインビボで得られた非免疫原性の結果および生物分布の結果を考えれば、ホメオバイオベクターの組織間滞留時間は、遺伝子治療（例：「ホメオバイオベクター／ホルモンタンパク質を産生するＤＮＡ」複合体を欠陥のある組織中に注入することによりホルモン欠乏を克服するための）の情況における外因性遺伝子物質の送達を局所的に予見するのに十分長い。本発明の主題はまた、それが上述されたような粒状ベクターを含有することを特徴とする製薬学的組成物でもある。別の局面に従えば、本発明の一目的は、それが上述されたような粒状ベクターおよび化粧品学的に許容できる賦形剤を含有することを特徴とする化粧用組成物である。ホメオバイオベクターはまた食品添加物として、もしくは水処理の分野にも用途を有する。本発明は後述する実施例により具体的に説明されるであろう。これらの例においては以下の図が参照されることであろう。図１：ショ糖密度勾配（０％〜35％）でのリポソームおよびバイオベクターからの多糖コア（ＰＳＣ）の分離。（Ａ）：フルオレセイン（○）で標識されたＰＳＣおよびＤＰＨ（◇）で標識されたリポソームの分離。（Ｂ）：そのＰＳＣがフルオレセイン（●）で標識されかつその膜がＤＰＨ（◆）で標識されるバイオベクターの分離。図２：リポソームもしくはホメオバイオベクターの形態で組織化される脂質相の転移。プロフィルは、水中で用意されたサンプル１mlあたりの温度の関数としてのＤＰＨの蛍光偏光ｐを測定することにより得た。（Ａ）：ＤＰＰＣリポソームおよび中性のホメオバイオベクター。（Ｂ）：ＤＰＰＣ／ＤＰＰＧリポソームおよび陰イオン性のホメオバイオベクター。（Ｃ）：ＤＰＰＣ／ステアリルアミンリポソームおよび陽イオン性のホメオバイオベクター。図３：リポソーム膜（◇）およびバイオベクターの膜（●）中に挿入されたＮＢＤ−ＰＣプローブの蛍光に対するコバルトイオンの影響。脂質濃度は27.2μMであり、また、温度は20℃である。実施例１：陰イオン性のホメオバイオベクターの製造陰イオン性のホメオバイオベクターの製造は２つの主な段階で起こる。すなわち（１）陰イオン性の多糖コアの合成、（２）脂質の陰イオン性のＰＳＣとの組み合わせ。１．陰イオン性のＰＳＣの合成 500gのグルシデックス(Glucidex)マルトデキストリン（ロケット(Roquette)、フランス・レストレム）を、２リットルの脱イオン水を含む10リットル反応器（トライミックス(Trimix)）中に導入する。４℃で溶解した後に、500mlの10M水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）を機械的に攪拌しながら添加する。溶液の温度が４℃で安定化した場合に、1700mlの10M水酸化ナトリウムおよび2 83.3mlのオキシ塩化リン（ＰＯＣｌ₃）を制御された流速で導入する。架橋反応が20時間にわたる機械的攪拌により起こる。試薬の添加終了時に反応混合物を15 分間攪拌する。５リットルの量の脱イオン水をその後添加する。ｐＨを氷酢酸での中和により7.0にもたらす。得られるヒドロゲルを高圧ホモジェナイザー（ラニーラブ(Rannie Lab)）を使用して粉砕する。及ぼされる圧は500barである。この段階の後、分散されたマトリックスは60nmの平均直径を有する。精製は、（１）大きすぎる粒子を除去するための0.45μmのミクロフィルトレーション、（２）小分子（塩、多糖の断片）を除去するための不変体積までのダイアフィルトレーションの連続的段階によって起こる。最後に、陰イオン性のＰＳＣを濃縮し、滅菌瓶中に回収しそして−20℃で保存する。２．陰イオン性のホメオバイオベクターの合成融解された陰イオン性の多糖コアを、ガラス容器中で、浸透された水で１mg／１mlの比率（例：250mgのＰＳＣ／250ml）で希釈する。この分散系を磁気攪拌し（５〜10分）そしてその後400barで３分間均質化する（ラニーミニラブ(Ranni e Minilab)）。ＰＳＣの分散系を80℃の水浴中に置く。粉末の形態の脂質（例：ＤＰＰＣのＤＰＰＧとの混合物）を、総量がＰＳＣの量の例えば30％（ｗ／ｗ）に相当するように(250mgのＰＳＣあたり75mgの脂質）重量を測る。膜を構成する脂質を混合し、そして２mlの95％エタノール（ｖ／ｖ）で溶解する。荷電した脂質が総脂質の例えば５％（ｗ／ｗ）に相当する場合は、3.75mgの陰イオン性の脂質および71.25mgのＤＰＰＣが重量を測られることが必要である。ホモジェナイザーを、閉回路中の水の循環により最低60℃の温度にもたらす。付随して、80℃で分散されたＰＳＣをマグネチック攪拌にかけ、そして脂質のエタノール性溶液をＰＳＣ分散系中に注入する。 80℃の「ＰＳＣ／脂質」分散系をその後ホモジェナイザー中に導入し、そして最低60℃で閉回路中で450barで25分間均質化する。この段階の後に、調製物をガラス製丸底フラスコ中に導入し、次いで、溶液中に残存するエタノールを除去するため60℃で低圧にさらす。こうして得られる陰イオン性のホメオバイオベクターをその後、0.2μmフィルターを通しての濾過後に滅菌条件下に保存する。実施例２：陽イオン性のホメオバイオベクターの製造陽イオン性のホメオバイオベクターを２個の主段階で製造する。すなわち（１）陽イオン性多糖コア（ＰＳＣ）の合成、（２）陽イオン性のＰＳＣとの陽イオン性の脂質の組み合わせ。１．陽イオン性のＰＳＣの合成 500gのグルシデックス(Glucidex)マルトデキストリン（ロケット(Roquette)）を、攪拌しながら、20℃にサーモスタットで維持される反応器中の0.880リットルの水で溶解する。次に、約７gのホウ水素化ナトリウムを導入し、そして混合物を１時間攪拌しておく。 200mlの10M水酸化ナトリウム、次いで30.25mlのエピクロロヒドリン（フルカ( Fluka)）を添加する。12時間の反応後に382.3gの塩化グリシジルトリメチルアンモニウム（フルカ(Fluka)）を導入し、そして混合物を10時間攪拌し続ける。ゲルを８リットルの脱イオン水で希釈し、そして氷酢酸で中和する。得られたヒドロゲルを高圧ホモジェナイザー（ラニーラブ(Rannie Lab)）を使用して粉砕する。印加する圧は400barである。この段階の後、分散されたマトリックスは60nmの平均直径を有する。精製は、（１）大きすぎる粒子を除去するための0.45μmのミクロフィルトレーション、（２）小分子（塩、多糖の断片）を除去するための不変体積までのダイアフィルトレーションの連続的段階によって起こる。最後に、陽イオン性のＰＳＣを濃縮し、滅菌瓶中に回収しそして−20℃で保存する。２．陽イオン性のホメオバイオベクターの合成融解された陽イオン性の多糖コアを、ガラス容器中で、１mlの水あたり１mgのＰＳＣの比率で浸透された水で希釈する。この分散系を、第一段階で磁気攪拌下に置き（５〜10分）、そしてその後400barで３分間均質化する（ラニーミニラブ(Rannie Minilab)）。ＰＳＣ分散系を80℃の水浴中に置く。粉末の形態の脂質（例：ＤＰＰＣのステアリルアミンとの混合物）を、総量がＰＳＣの量の例えば30％（ｗ／ｗ）に相当するように（250mgのＰＳＣあたり75m gの脂質）重量を測る。膜を構成する脂質を混合し、そして２mlの95％エタノール（ｖ／ｖ）で溶解する。荷電した脂質が総脂質の例えば５％（ｗ／ｗ）に相当する場合は、3.75mgの陽イオン性の脂質および71.25mgのＤＰＰＣが重量を測られることが必要である。ホモジェナイザーを、閉回路中の水の循環により最低60℃の温度にもたらす。付随して、80℃で分散されたＰＳＣを磁気攪拌にかけ、そしてエタノール性の脂質溶液をＰＳＣ分散系中に注入する。ホモジェナイザー回路を加熱するための水を排出し、そして80℃の「ＰＳＣ／脂質」分散系で置き換える。新たな分散系を最低60℃で閉回路中で450barで25分間均質化する。この段階の後に調製物をガラス製丸底フラスコ中に導入し、そしてその後、溶液中に残存するエタノールを除去するため60℃で低圧にさらす。かように得られる陽イオン性のホメオバイオベクターをその後、0.2μmフィルターを通しての濾過後に滅菌条件下で保存する。実施例３：中性のホメオバイオベクターの製造中性のホメオバイオベクターを２個の主段階で製造する。すなわち（１）中性の多糖コア（ＰＳＣ）の合成、（２）双性イオン性の脂質の中性のＰＳＣとの組み合わせ。１．中性のＰＳＣの合成 500gのグルシデックス(Glucidex)マルトデキストリン（ロケット(Roquette)）を、攪拌を伴い、サーモスタットで20℃に維持される反応器中の0.880リットルの水で溶解する。約７gのホウ水素化ナトリウムを導入し、そして混合物を１時間攪拌しておく。220mlの10M水酸化ナトリウム、次いで30.25mlのエピクロロヒドリン（フルカ(Fluka)）を添加する。12時間の反応後にゲルを８リットルの脱イオン水で希釈し、そして氷酢酸の添加により中和する。得られたヒドロゲルを高圧ホモジェナイザー（ラニーラブ(Rannie Lab)）を使用して粉砕する。印加圧は400barである。この段階後、分散されたマトリックスは60nmの平均直径を有する。精製は、（１）大きすぎる粒子を除去するための0.45μmのミクロフィルトレーション、（２）小分子（塩、多糖の断片）を除去するための不変体積までのダイアフィルトレーションの連続的段階によって起こる。最後に、ＰＳＣを濃縮し、滅菌瓶中に回収しそして−20℃で保存する。２．中性のホメオバイオベクターの合成融解された中性の多糖コアを、ガラス容器中で、浸透された水で希釈する（25 0mgのＰＳＣ／250ml）。この分散系を、第一段階で磁気攪拌下に置き（５〜10分）、そしてその後400barで３分間均質化する（ラニーミニラブ(Rannie Minila b)）。ＰＳＣ分散系を80℃の水浴中に置く。粉末の形態の脂質（例：ＤＰＰＣ）を、総量がＰＳＣの量の例えば30％（ｗ／ｗ）に相当するように重量を測る。膜を構成する脂質を２mlの95％エタノール（ｖ／ｖ）で溶解する。ホモジェナイザーを、閉回路中の水の循環により最低60℃の温度にもたらす。 80℃で分散されたＰＳＣを磁気攪拌にかけ、そしてエタノール性の脂質溶液をＰＳＣ分散系中に注入する。ホモジェナイザー回路を加熱するための水を、80℃の「ＰＳＣ／脂質」分散系で置き換える。この新たな分散系を、最低60℃で閉回路中で450barで25分間均質化する。この段階の後に、調製物をガラス製丸底フラスコ中に導入し、そしてその後、溶液中に残存するエタノールを除去するために60℃で低圧にさらす。かように得られる中性のホメオバイオベクターをその後、0.2μmフィルターを通しての濾過後に滅菌条件下で保存する。実施例４：粒状ベクターの特徴づけ当該ホメオバイオベクターは、 −脂質分子との多糖コア（ＰＳＣ）の組み合わせ −脂質（ＰＳＣと組み合わせられた）のそれら自身の間の組織化 −ＰＳＣを取り囲む脂質層を特徴とした。この超分子構造は時間にわたる安定性の顕著な特性を有する。１．材料および方法陰イオン性および陽イオン性の粒状ベクターを、実施例１および２で記述された技術に従って製造する。リポソームを、バツリ(Batzri)ら（Biochem．Biophys．Acta、1973、298、101 5-1019）およびクレマー(Kremer)ら（Biochemistry、1977、16、3932-3935）に記述されたように、エタノール性の脂質溶液の水中への注入により製造した。製造されたサンプルの全部を、0.2μmフィルターを通しての滅菌濾過後に滅菌チューブ中に保存する。１．１．ナノ粒子の大きさの測定多糖コア、リポソームおよび粒状ベクターの平均直径を、コールターＮ４ＭＤナノ粒子分析器（コールトロニクス(Coultronics)、フランス・マルジェンシー）により測定する。測定は、サンプルを50mMＰＢＳ中で希釈した後に25℃の温度で三重に(triplicate)実施した。１．２．バイオベクターの蛍光標識フルオレセインでの多糖コアの標識を、磁気攪拌しながら、ｐＨ10での10mgのＤＴＡＦ（５−（［４，６−ジクロロトリアジン−２λＬ］アミノ）フルオレセイン、２mg/ml）の水性溶液の100mgの多糖粒子への添加により実施した。室温で２時間後に、反応混合物を、フルオレセインがもはや限外濾過物中に検出され得なくなるまで、最初に１M塩化ナトリウムで、そしてその後脱イオン水で限外濾過により洗浄する。フルオレセイン（１mg/ml）で標識された多糖コアをその後、0.2μmフィルターを通しての滅菌濾過後に滅菌チューブ中に保存する。ＤＰＨ（１，６−ジフェニル−１，３，５−ヘキサトリエン）でのリン脂質層の標識を、プローブ（テトラヒドロフラン中10^-3M）をホメオバイオベクターもしくはリポソームの水性懸濁液に添加することにより実施する。温度を60℃で30 分間維持する。リン脂質に対するＤＰＨの最終比は0.5％である。フルオレセインおよびＤＰＨでのホメオバイオベクターの二重標識のため、ホメオバイオベクターを、最初に、フルオレセインで標識された多糖コアを用いて製造し、そしてその後外側脂質層を上述されたようにＤＰＨで標識した。蛍光調製物の全部を暗所に保存した。１．３．蛍光分光学蛍光の励起および発光スペクトルをＳＬＭ−アミンコ(SLM-Aminco)、モデル５００分光蛍光計を用いて記録した。これらの実験では、後に記述される蛍光偏光実験でのように、ホメオバイオベクターおよびリポソームの懸濁液の吸光度は決して0.1より大きくなかった。蛍光発光スペクトルに関しては、波長はＤＰＨについて360nm、およびフルオレセインについて490nmであった。励起スペクトルに関しては、発光波長はＤＰＨについて426nm、およびフルオレセィンにっいて522nmであった。１．４．蛍光偏光法この実験は、マイクロプロセッサに接続されたフォーマットされた(formatted )自動機械で実施した。１．５．蛍光消光実験ホメオバイオベクターもしくはリポソームを、添加されたＮＢＤ−ＰＣ（１− アシル−２−［12−［（７−ニトロ−２−１，３−ベンゾキサジアゾル−４−イル）アミノ］ドデカノイル］−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）（２モル％）を伴うＤＰＰＣ（１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）を用いて製造し、そして1.5Ｍ塩化ナトリウム中に分散した。ホメオバイオベクターもしくはリポソームの懸濁液のアリコートを石英キュベット中に置き（リン脂質濃度：27.2μM）、そして蛍光を測定して値Ｆ₀を与えた。次に、所定の体積の塩化コバルト消光溶液（水中0.3M）を所望の濃度を得るために添加する。試薬を一緒に15秒間混合し、そして蛍光を直ちに測定して値Ｆ₁を与える。消光効率を（１−Ｆ₁／Ｆ₀）×100として算出する。消光および発光波長はそれぞれ4 74nmおよび535nmであり、また、温度は20℃であった。１．６．ショ糖密度勾配での密度勾配分離ショ糖密度勾配を、室温で９mlの20％（ｗ／ｗ）ショ糖溶液を溶解する(melti ng)ことにより調製した。１mlのサンプルをチューブの上面に置き、そして遠心分離を250,000×g、８℃で４時間実施する。遠心分離後に0.5mlの画分をピペットでチューブの上面から底部まで収穫し、そして蛍光分光器の使用により分析する。２．結果２．１．リン脂質との多糖コア（ＰＳＣ）の組み合わせ図１Ａに示されるように、脂質を含まないＰＳＣ（１mg/ml）は大きな領域の密度勾配（２から20％ショ糖まで、ピークが７％）にわたって沈降し、これらのＰＳＣの不均一性を示す。リポソーム（0.2mg/ml）はＰＳＣより高密度かつより均質である（18％と20％ショ糖との間の狭い密度勾配位置）。ＰＳＣに対しフルオレセインおよび膜に対しＤＰＨの双方で標識されたバイオベクターに関しては（図１Ｂ）、それらはそれら自身を14と19％ショ糖との間（ 17％のピーク）に位置を定める。２種の蛍光体が同一の画分中に見出されるため、脂質とのＰＳＣの組み合わせがかように立証される。それは構成要素ＰＳＣの密度および均質性の増大をもたらす。対照は、バイオベクターの合成が純粋な生成物をもたらすことを示す。実際は、遊離のＰＳＣおよび遊離のリポソームの存在はバイオベクターの調製物中で検出されない。さらに、バイオベクターを合成するのに適用される手順は、リポソームの形成を引き起こすことなく、脂質／ＰＳＣの重量比を20から100％まで変動させることを可能にする。２．２．ホメオバイオベクターの大きさの測定対照ＰＳＣ、対照リポソームおよびホメオバイオベクターで実施された測定を表１に報告する。中性、陽イオン性および陰イオン性のホメオバイオベクターの大きさはそれらの構成要素ＰＳＣの大きさに依存するようである（例：約80nmの陽イオン性のＰＳＣについては、生じる陽イオン性のホメオバイオベクターは直径が約80nmを示す）。他方、対照リポソームの大きさはより小さい。リポソーム中のリン脂質は、その構造が熱力学的に安定であるようにそれら自身の間で組織化されたようになる。ホメオバイオベクターのＰＳＣコアは脂質系のより良好な安定性を促進する。これらの大きさ測定は、ホメオバイオベクターの調製物の高度の純度を示す密度勾配での研究と相関して、単一の均質な集団を示す。脂質単独は、混合物のＤＰＰＣおよびＤＰＰＣ／ＤＰＰＧについてそれぞれ40 nmおよび20nmの組成物に依存する平均の大きさを伴う、比較的単分散されたリポソーム懸濁液を与える。２．３．脂質の組織化に対する多糖コアの影響脂質がＰＳＣと組み合わせられることを立証したため、これらの両親媒性分子がそれら自身のなかで組織化されてホメオバイオベクターの構成要素膜を形成することは表示(showing)の問題にすぎない。脂質の相挙動はこの組織化を研究することを可能にする。ＰＳＣの周囲で組織化される脂質冠(lipid crown)の相挙動を、膜の疎水性領域に挿入されたＤＰＨプローブの蛍光偏光解消を測定することによる温度の関数として脂質のゲル−液相転移を可視化することにより研究する。ホメオバイオベクターおよび同一の脂質組成の対照リポソームについて得られたプロフィル（図２）は、ゲル−液相転移温度（Ｔm）を読み取ることを可能にする（表２）。得られた結果は、脂質の組織化に対する水相のＰＳＣおよび生理的食塩水の組成物の影響を知ることを可能にする。ホメオバイオベクターの形態で組織化される脂質のゲル−液相転移は非常に十分に定義される。この観察結果は、高度の分子間協同性、そして従って、リポソーム膜のものと完全に比較できるホメオバイオベクター膜の組織化の程度により説明される。中性のホメオバイオベクターおよび対照リポソームが図２Ａで分析され、これはリポソームの形態で組織化されるＤＰＰＣの相転移の特徴的プロフィルを示し、40℃のＴm値が読み取られることを可能にする。中性のホメオバイオベクターは、その相転移がリポソームのものと同じくらい急激であるがしかしより高温に向かってずれている膜を有する。陰イオン性のホメオバイオベクター（図２Ｂ）は、非常に際立ったかつ対照リポソームより高温に向かってずれている相転移を有する。陽イオン性のホメオバイオベクター（図２Ｃ）は類似の特徴を提供する。すなわち、組み合わせられた陽イオン性膜に対する陽イオン性のＰＳＣの影響は、脂質の相転移が対照リポソームのものより高温に向かってずれているようである。従って、当該ホメオバイオベクターは対照リポソームより高い相転移を示す。比較の目的上、陽イオン性のＰＳＣおよび陰イオン性の膜から成る軽いバイオベクターは対照リポソームのものより低い相転移を有する（−１℃の温度差）。この場合、ＰＳＣのコアはその膜に対してホメオバイオベクターのものの正反対のものである影響を有する。各系についての温度の読みＴm（表２）は、相転移のずれを特徴づけることを可能にする。水もしくはあるイオン強度（50mMＰＢＳ）の存在下に分散されたサンプルについてのこれらの温度Ｔmは、類似のイオン性の電荷のＰＳＣと組み合わせられた膜が、分子充填がホメオバイオベクターの型と無関係により大きいような脂質構成を有することを示す（対照リポソームの温度より大きなホメオバイオベクターのＴm）。ホメオバイオベクターの分散系への塩の添加は、それら自身の間の脂質の組織化に対するＰＳＣの影響を低減するという効果を有する。この観察結果は、ＰＳＣはリン脂質の極性の頭部との静電的相互作用および水素型の相互作用によって脂質の分子充填に対する影響を有すると結論することを可能にする。従って、予見されるホメオバイオベクターの型に無関係に、この超分子構造は、脂質の相互との分子充填の増大をもたらす、リポソームのものより良好な膜の組織化を促進する。２．４．多糖のコアを取り囲む脂質二重層の数ＰＳＣと組み合わせられた脂質はそれら自身の間で組織化されて膜を形成する。それはここではこの膜の構造の特徴づけの問題である。蛍光消光実験をＮＢＤ−ＰＣプローブを使用して実施し、これについて、ＮＢＤ基が脂質二重層のグリセロリン酸領域に局在化されることが示された。コバルトイオンを蛍光消滅剤(extinguisher)として使用した。バイオベクターを、水相への消滅剤の添加後のイオン濃度の過度の変化を回避するため1.5M塩化ナトリウムの存在下で製造した。ＤＰＰＣリポソームおよびＤＰＰＣ陰イオン性バイオベクターそれぞれについて得られた蛍光曲線を図３に示す。曲線中の変化は約50〜55％消光で検出される。外側脂質層に局在化される分子プローブが最初に影響を及ぼされるものであるという事実は、ホメオバイオベクターおよびＤＰＰＣリポソーム双方が単一の脂質二重層から成ることを示唆する。結果、ゲル相中の5.5nmという二重層厚さおよび0.4 7nm²という分子表面積を基礎とした算出に関して、直径が40nmおよび80nmの単層状小胞についてそれぞれ脂質分子の約65％および55％が外側層に存在することを示す。２．５．ホメオバイオベクターの時間にわたる安定性ホメオバイオベクターの微粒子構造（二重層として組織化される脂質膜から成りかつ根底にある類似の電荷のＰＳＣにより支持されるナノ粒子）は時間にわたって安定であるか？ナノ粒子の大きさの安定性を、４℃で滅菌条件下で保存される調製物について一定の時間間隔でモニターする。測定値を表３に与える。陰イオン性のホメオバイオベクターおよび陽イオン性のホメオバイオベクターの大きさの有意な変化は９ヶ月を越えて検出されない。これらの構造は時間にわたる顕著な安定性を有する。実施例５：ＤＮＡとの陽イオン性のホメオバイオベクターの組み合わせ１．陽イオン性のホメオバイオベクターの製造実施例２におけるように製造された陽イオン性のホメオバイオベクターを使用するが、しかし、この場合、膜を構成する脂質は、35／35／30の重量比のＤＰＰＣ（ジパルミトイルホスファチジルコリン）、ＤＯＴＡＰ（ジオレイルオキシプロピルトリメチルアンモニウム）およびコレステロールの混合物であり、正に荷電した脂質はＤＯＴＡＰである。脂質はＰＳＣの量の30重量％に相当する総量を有する。陽イオン性のコアは乾燥ＰＳＣ１gあたり0.8mEqの全体の電荷および110 nmの平均直径を有する。得られた完全な陽イオン性のホメオバイオベクターは130nmの平均直径を有する。２．ＤＮＡの調製使用されるＤＮＡは6.7kbのプラスミドＤＮＡ（プラスミド１６３３）である。それをＰＢＳ中で用意しそして４℃で保存する。３．バイオベクター／ＤＮＡの組み合わせの製造その濃度が、それを得ることが望ましいＤＮＡ／ＰＳＣ比の関数として算出される１体積のＤＮＡ溶液（例えば1.1ないし5.5％）、および１体積のＰＢＳ中1. 8mg/mlのホメオバイオベクター分散系を、試験管中で一緒に混合する。例えば、 5.5％に等しいＤＮＡ／ＰＳＣ比を得るために、１体積の1.8mg/mlの陽イオン性のホメオバイオベクターを、１体積のＰＢＳ中100μg/mlのＤＮＡと混合することができる。この混合物をマグネチック攪拌を伴い１時間維持し、そして４℃で保存する。４．同質に荷電した(homeocharged)バイオベクター／ＤＮＡ処方の特徴づけバイオベクター／ＤＮＡ調製物を特徴づけるため測定されたパラメータを下の表４に要約する。５．結果 −生じるナノ粒子の大きさは、凝集が存在しないことを確認することを可能にする（使用される技術は光散乱である）。処方の方法は均質なナノ粒子の分散系を可能にする。 −同質に荷電したバイオベクターとのＤＮＡの組み合わせの程度（ショ糖密度勾配での密度勾配分離および１％アガロースゲル上での電気泳動により測定される）は95％より大きい。 −ホメオバイオベクターは、外的エネルギーの供給を伴わない静電的相互作用によるＤＮＡとの自発的組み合わせを促進する。アガロースゲルでの電気泳動の間に電場にさらされる「同質に荷電したバイオベクター／ＤＮＡ」処方がそれらの組み合わせられたＤＮＡを保持することを示すことは注目すべきである。実際は、遊離のＤＮＡは電気泳動後に検出可能でない。ＤＮＡと陽イオン性のホメオバイオベクターとの間の相互作用は非常に安定である。さらに、処方後のＤＮＡ構造の保存を試験した。すなわち、バイオベクターと組み合わせられたＤＮＡはイオンの競争により遊離される。１％アガロースゲルでの電気泳動により分析される場合、ＤＮＡが実際そのプラスミド構造を保持していることが見出される。従って、使用される処方工程は、ＤＮＡの構造の保全性を維持することを可能にする。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims

【特許請求の範囲】１．−非液状親水性コア −両親媒性の葉状物を含み、コアが、陽イオン性、陰イオン性もしくは中性の全体の電荷を担持すること、および両親媒性の葉状物がコアによりもたれるものと同一の極性の全体の電荷を担持することを特徴とする粒状ベクター。２．それが、コアおよび／もしくは両親媒性の葉状物と組み合わせられた最低１種の有効成分もまた含有することを特徴とする、請求の範囲１に記載の粒状ベクター。３．それが少なくとも −コアによりもたれるものと同一の極性の陽イオン性もしくは陰イオン性の電荷をもつ１種の非液状親水性コアを包含することを特徴とする、請求の範囲１および２のいずれかに記載の粒状ベクター。４．それが −非液状電気的に中性の親水性コア −双性イオン性のリン脂質を含む包括的に中性の両親媒性の葉状物を包含することを特徴とする、請求の範囲１および２のいずれかに記載の粒状ベクター。５．両親媒性の葉状物の最低１種の構成要素が、コア上のものと同一の極性の電荷をもつ、天然もしくは合成の、陰イオン性、陽イオン性もしくは双性イオン性のリン脂質、セラミド、脂肪酸、ステロイド、脂質、糖脂質、リポタンパク質および界面活性剤から成る群から選ばれることを特徴とする、請求の範囲１ないし４の一に記載の粒状ベクター。６．コア上のものと同一の極性の電荷を担持する両親媒性の葉状物の構成要素の比率が０％より大きくかつ100％より小さいかもしくはこれに等しいことを特徴とする、請求の範囲１ないし５の一に記載の粒状ベクター。７．コアが、天然にもしくは化学的に架橋された親水性のオリゴマーおよびポリマーから選ばれる化合物から成ることを特徴とする、請求の範囲１ないし６の一に記載の粒状ベクター。８．コアが、陽イオン性もしくは陰イオン性の電荷を担持する天然にもしくは化学的に架橋された多糖もしくはオリゴ糖から成ることを特徴とする、請求の範囲１ないし７の一に記載の粒状ベクター。９．コアが、デキストラン、デンプン、セルロース、それらの置換された誘導体、それらの加水分解生成物、これらの化合物の塩およびエステルから選ばれる構成要素を含むことを特徴とする、請求の範囲１ないし８の一に記載の粒状ベクター。１０．酸性もしくは塩基性のイオン性リガンドがコアに結合されることを特徴とする、請求の範囲７ないし９の一に記載の粒状ベクター。１１．イオン性リガンドが、ホスフェート、スルフェート、カルボン酸、四級アンモニウム、一級アミン、二級アミンを含む群から選ばれる最低１個の官能基をもつことを特徴とする、請求の範囲１０に記載の粒状ベクター。１２．両親媒性の葉状物の最低１種の構成要素が、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロールおよびコレステロール、ならびにそれらの誘導体から選ばれることを特徴とする、請求の範囲１ないし１１の一に記載の粒状ベクター。１３．両親媒性の葉状物の最低１種の構成要素が、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、ジオレイルオキシプロピルトリメチルアンモニウム、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジン酸、ジパルミトイルホスファチジルセリンおよびステアリルアミンから選ばれることを特徴とする、請求の範囲１ないし１２の一に記載のベクター。１４．両親媒性の葉状物が最低２種の異なる脂質化合物を含むことを特徴とする、請求の範囲１ないし１３の一に記載の粒状ベクター。１５．両親媒性の葉状物がコアと直接組み合わせられることを特徴とする、請求の範囲１ないし１４の一に記載の粒状ベクター。１６．その平均直径が約10nmと約100μmとの間であることを特徴とする、請求の範囲１ないし１５の一に記載の粒状ベクター。１７．有効成分もまた全体として電荷を担持するか、もしくは親油性であることを特徴とする、請求の範囲２ないし１６の一に記載の粒状ベクター。１８．最低１種の有効成分が、ペプチド、タンパク質、リポタンパク質、プロテオグリカン、リポ多糖、脂肪酸、トリグリセリド、リン脂質、糖脂質、ステロイド、オリゴ糖、ヌクレオチド配列、ヌクレオシド配列、核酸、ビタミンおよびポルフィリンから選ばれることを特徴とする、請求の範囲２ないし１７の一に記載の粒状ベクター。１９．最低１種の有効成分が、以下の群すなわち抗生物質、殺菌剤、鎮痛薬、麻酔薬、抗炎症薬、抗ウイルス薬、抗癌剤、免疫調節薬および細胞媒介物、抗ヒスタミン薬、抗ムスカリン薬、抗貧血薬、止血薬、抗糖尿病薬、心血管系薬、抗うつ薬、抗てんかん薬、抗不安薬、催眠薬、鎮静薬、抗精神病薬、食欲抑制薬、ワクチン、天然もしくは合成のホルモンおよびそれらの誘導体、殺虫剤、殺真菌剤、抗マラリア薬、抗喘息薬、抗体、抗原およびそれらの断片、診断薬、ＮＭＲ診断薬ならびに放射活性マーカーから選ばれることを特徴とする、請求の範囲２ないし１８の一に記載の粒状ベクター。２０．それが請求の範囲１ないし１９の一に記載の粒状ベクターを含有することを特徴とする製薬学的組成物。２１．それが請求の範囲１ないし１９の一に記載の粒状ベクターおよび化粧品学的に許容できる賦形剤を含有することを特徴とする化粧用組成物。２２．それが請求の範囲１ないし１９の一に記載の粒状ベクターを含むことを特徴とする食品添加物。